JP2024044958A

JP2024044958A - 口腔・咽頭粘膜保護剤および抗炎症剤

Info

Publication number: JP2024044958A
Application number: JP2022185309A
Authority: JP
Inventors: 祐一黒野; 友美子笹木; 真佐夫原
Original assignee: CEOLIA Pharma Co., Ltd.; NOF Corp
Current assignee: CEOLIA Pharma Co., Ltd.; NOF Corp
Priority date: 2022-09-21
Filing date: 2022-11-18
Publication date: 2024-04-02

Abstract

【課題】刺激性の少ない口腔・咽頭粘膜保護剤および抗炎症剤を提供すること。【解決手段】２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位２０～７０モル％と、アルキル基の炭素数が４～１８であるアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位３０～８０モル％とを含有する共重合体を含有する、口腔・咽頭粘膜保護剤または抗炎症剤。【選択図】図４

Description

本発明は、口腔・咽頭粘膜保護剤および抗炎症剤に関する。

口腔・咽頭内には７００種類以上の微生物が存在し、清掃不良等により口腔や咽頭粘膜上皮細胞に感染増殖することにより、口腔・咽頭のみならず全身に影響を及ぼすことが知られている。

ホスホリルコリン基含有重合体を、微生物の粘膜上皮細胞への付着防止等に使用する技術が知られている。例えば、特許文献１には、ホスホリルコリン基含有重合体を含有する口腔用微生物付着防止剤を用いて、口腔粘膜上皮細胞への微生物の付着を防止する技術が開示されている。また、特許文献２には、ホスホリルコリン基含有重合体を含有する歯肉炎予防剤を用いて、細菌の内毒素による口腔粘膜上皮細胞からの炎症性サイトカイン産生を抑制し、歯肉炎の発症および炎症を抑える技術が開示されている。

特開２０１１－１５３１０１号公報特開２０１５－０００８５３号公報

口腔・咽頭粘膜上皮細胞に対する細菌感染の予防と治療のために、殺菌剤または菌付着防止剤が開発されているが、その多くは強力な殺菌・抗菌作用を示すため、口腔・咽頭粘膜上皮細胞に対して高い刺激性を示すことが多々ある。

本発明は上記課題に鑑みなされたものであって、その目的は、刺激性の少ない口腔・咽頭粘膜保護剤および抗炎症剤を提供することにある。

本発明者らが鋭意検討した結果、２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位と、特定のアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位とを所定のモル比で含有する共重合体（以下、「共重合体（Ｐ）」と記載することがある）を用いれば、刺激性の少ない口腔・咽頭粘膜保護剤および抗炎症剤が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。

上記知見に基づく本発明は、以下の通りである。
［１］下記式（１）：

（式（１）中、Ｒ^１は、水素原子またはメチル基を示す。）
で表される２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位２０～７０モル％と、
下記式（２）：

（式（２）中、Ｒ^２は、水素原子またはメチル基を示し、およびＲ^３は、炭素数４～１８の直鎖または分岐鎖のアルキル基を示す。）
で表されるアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位３０～８０モル％と
を含有する共重合体を含有する口腔・咽頭粘膜保護剤。
［２］さらに、ポビドンヨード、アズレンスルホン酸およびアズレンスルホン酸塩からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する前記［１］に記載の口腔・咽頭粘膜保護剤。
［３］さらに、基剤、湿潤剤、甘味剤、香料、防腐剤および保存剤からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する前記［１］または［２］に記載の口腔・咽頭粘膜保護剤。
［４］下記式（１）：

（式（２）中、Ｒ^２は、水素原子またはメチル基を示し、およびＲ^３は、炭素数４～１８の直鎖または分岐鎖のアルキル基を示す。）
で表されるアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位３０～８０モル％と
を含有する共重合体を含有する抗炎症剤。

本発明によれば、口腔・咽頭粘膜上皮細胞への細菌感染を抑制することができ、且つ刺激性の少ない口腔・咽頭粘膜保護剤を得ることができる。
また、本発明によれば、口腔・咽頭粘膜上皮細胞の炎症を抑制することができ、且つ刺激性の少ない抗炎症剤を得ることができる。

図１は、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤を用いて得られた試験例１の蛍光顕微鏡画像である。図２は、比較例２の口腔・咽頭粘膜保護剤を用いて得られた試験例１の蛍光顕微鏡画像である。図３は、試験例２で計測したコロニー数を示す棒グラフである。図４は、試験例３で計測したコロニー数を示す棒グラフである。図５は、試験例４で算出した平均付着細菌数の差を示す棒グラフである。図６は、試験例５で算出した水分量Ｎｏ．２および水分量Ｎｏ．１の差を示す棒グラフである。図７は、試験例９で計測した平均ＩＬ－８濃度を示す棒グラフである。

本発明は、口腔・咽頭粘膜保護剤および抗炎症剤（以下、これらをまとめて「本発明の剤」と記載することがある）を提供する。ここで、「口腔・咽頭粘膜保護剤」とは、口腔・咽頭粘膜上皮細胞への細菌感染を抑制するために用いられる剤を意味する。言い換えると、「口腔・咽頭粘膜保護剤」とは、口腔・咽頭粘膜上皮細胞を、細菌感染から保護するために用いられる剤を意味する。また、「抗炎症剤」とは、炎症を抑制するために用いられる剤を意味する。本発明の抗炎症剤は、好ましくは口腔・咽頭粘膜上皮細胞の炎症を抑制するために用いられる。

本発明の剤は、
下記式（１）で表される２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位（以下「構成単位（１）」と記載することがある）２０～７０モル％と、
下記式（２）で表されるアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位（以下「構成単位（２）」と記載することがある）３０～８０モル％と
を含有する共重合体（以下「共重合体（Ｐ）」と記載することがある）を含有する。

なお、本明細書中、「（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン」とは、「アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンまたはメタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン」を意味する。また、本明細書中、「アルキル（メタ）アクリレート」とは「アルキルアクリレートまたはアルキルメタクリレート」を意味する。

上記式（１）中、Ｒ^１は、水素原子またはメチル基、好ましくはメチル基を示す。
上記式（２）中、Ｒ^２は、水素原子またはメチル基、好ましくはメチル基を示す。

式（２）中、Ｒ^３は、炭素数４～１８の直鎖または分岐鎖のアルキル基を示す。前記アルキル基としては、例えば、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、２－エチルヘキシル基、デシル基、ドデシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基等が挙げられる。Ｒ^３は、好ましくはブチル基である。

共重合体（Ｐ）は、構成単位（１）として、１種の構成単位（１）（即ち、２－アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位または２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位）のみを含有していてもよく、２種の構成単位（１）（即ち、２－アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位および２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位）を含有していてもよい。また、共重合体（Ｐ）は、構成単位（２）として、１種の構成単位（２）のみを含有していてもよく、２種以上の構成単位（２）を含有していてもよい。

共重合体（Ｐ）中の構成単位（１）の含有量は、２０～７０モル％、好ましくは３０～６０モル％、より好ましくは３０～５５モル％である。構成単位（１）の含有量が２０モル％未満であると、口腔・咽頭粘膜上皮細胞を保護する効果（以下「口腔・咽頭粘膜保護効果」と記載することがある）および抗炎症効果（以下、口腔・咽頭粘膜保護効果および抗炎症効果を、まとめて「本発明の効果」と記載することがある）が期待できず、構成単位（１）の含有量が７０モル％より多いと、構成単位（１）が有する超親水性のために、共重合体（Ｐ）の口腔・咽頭粘膜上皮細胞への接着性が低下し、本発明の効果が望めなくなる。なお、本明細書中、共重合体（Ｐ）中の各構成単位の含有量の値は、共重合体（Ｐ）中の全構成単位（即ち、全繰り返し単位）に対する値である。また、共重合体（Ｐ）中の各構成単位の含有量は、共重合体（Ｐ）の製造時の各単量体の使用量から算出することができる。

共重合体（Ｐ）中の構成単位（２）の含有量は、３０～８０モル％、好ましくは４０～７０モル％、より好ましくは４５～７０％である。構成単位（２）の含有量が３０モル％未満であると、共重合体（Ｐ）の口腔・咽頭粘膜上皮細胞への接着性が期待できず、構成単位（２）の含有量が８０モル％より多いと、構成単位（２）に由来する共重合体（Ｐ）の細胞毒性が高まり、低刺激性の効果が望めなくなる。

共重合体（Ｐ）は、構成単位（１）および構成単位（２）以外の構成単位（以下「他の構成単位」と記載することがある）を含有していてもよいが、共重合体（Ｐ）は、他の構成単位を含有しないことが好ましい。即ち、共重合体（Ｐ）は、好ましくは、構成単位（１）および構成単位（２）からなる共重合体である。ここで、「構成単位（１）および構成単位（２）からなる共重合体」とは、全構成単位（即ち、全繰り返し単位）が、構成単位（１）および構成単位（２）からなる共重合体を意味する。共重合体（Ｐ）は、より好ましくは２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（以下「ＭＰＣ」と記載することがある）およびメタクリル酸ブチルの共重合体（即ち、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がメチル基であり、およびＲ^３がブチル基である共重合体（Ｐ））である。

共重合体（Ｐ）の重合形態は特に限定されず、共重合体（Ｐ）は、ランダム共重合体、ブロック共重合体、または交互共重合体のいずれでもよい。共重合体（Ｐ）は、好ましくはランダム共重合体である。

共重合体（Ｐ）の重量平均分子量は、好ましくは１０，０００～１０，０００，０００である。この重量平均分子量が１０，０００未満であると口腔・咽頭粘膜上皮細胞への共重合体（Ｐ）の接着性が低下し、本発明の効果が望めなくなる場合があり、この重量平均分子量が１０，０００，０００より大きいと、共重合体（Ｐ）溶液の粘度が急激に上昇し、本発明の剤を製造することが困難となる場合がある。また、本発明の剤の製造時の混合のしやすさから、共重合体（Ｐ）の重量平均分子量は、より好ましくは１２，０００～５，０００，０００、さらに好ましくは１５，０００～１，０００，０００である。なお、前記重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定することができる。

共重合体（Ｐ）は、公知の製造方法（例えば、特開平１１－０３５６０５または特開２００４－１９６８６８に記載の方法）により製造することができる。例えば、２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン、アルキル（メタ）アクリレート、および必要に応じて他の構成単位に相当する単量体を含む単量体混合物を、ラジカル重合開始剤の存在下かつ窒素等の不活性ガス雰囲気下において、溶液重合等の公知の方法により重合させて共重合体（Ｐ）を製造することができる。単量体混合物中の各単量体の含有量比は、共重合体（Ｐ）中における各構成単位の含有量比に相当する比に設定すればよい。
共重合体（Ｐ）として、上記方法により製造したものを用いることができるが、市販品を用いることもできる。

本発明の剤中の共重合体（Ｐ）の含有量は、好ましくは０．０１～１．０質量％である。共重合体（Ｐ）の含有量が０．０１質量％未満であると、本発明の効果が十分でない場合があり、共重合体（Ｐ）の含有量が１．０質量％を超えると、その含有量に見合った本発明の効果が得られない場合がある。本発明の効果の観点から、共重合体（Ｐ）の含有量は、より好ましくは０．１～０．８質量％、さらに好ましくは０．２５～０．７５質量％である。なお、本明細書中、本発明の剤中の各含有量の値は、本発明の剤全体に対する値である。

本発明の剤は、さらに、ポビドンヨード、アズレンスルホン酸およびアズレンスルホン酸塩からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有していてもよい。前記「アズレンスルホン酸およびアズレンスルホン酸塩」の中で、アズレンスルホン酸塩が好ましく、アズレンスルホン酸ナトリウムがより好ましい。

本発明の剤は、さらに、ポビドンヨードを含有していてもよい。本発明の剤がポビドンヨードを含有する場合、その含有量は、好ましくは０．０１～６．０質量％であり、より好ましくは０．０５～５．０質量％、さらに好ましくは０．１～１．０質量％である。ポビドンヨードの含有量が０．０１質量％未満であると、ポビドンヨードによる殺菌効果のさらなる向上が期待できず、ポビドンヨードの含有量が６．０質量％より多いと、ポビドンヨードに由来する本発明の剤の細胞毒性が高まり、低刺激性の効果が得られない場合がある。

本発明の剤は、さらに、アズレンスルホン酸および／またはその塩（好ましくはアズレンスルホン酸塩、より好ましくはアズレンスルホン酸ナトリウム）を含有していてもよい。本発明の剤がアズレンスルホン酸および／またはその塩を含有する場合、アズレンスルホン酸および／またはその塩の含有量の合計（アズレンスルホン酸またはその塩のいずれか一つのみを含有する場合は、その含有量）は、好ましくは０．００１～１．０質量％、より好ましくは０．００１～０．１質量％である。前記合計が０．００１質量％より少ないと、アズレンスルホン酸および／またはその塩による抗炎症効果が期待できず、前記合計が１．０質量％より多いと、アズレンスルホン酸および／またはその塩が析出して、本発明の剤の安定性が低下する場合がある。

本発明の剤は、さらに、基剤、湿潤剤、甘味剤、香料、防腐剤および保存剤からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有していてもよい。基剤、湿潤剤、甘味剤、香料、防腐剤および保存剤は、いずれも、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの含有量は、当業者であれば、適宜設定することができる。

基剤としては、例えば、水、ブドウ水、ヘチマ水、ボダイジュ水、ヤグルマギク水、ユーカリ水、ヨモギ水、リンゴ水、ローズマリー水などの植物関連の水、エタノール、ブタノール、プロピレングリコールなどのアルコール類等が挙げられる。

本発明の剤は、基剤として、水を含有することが好ましい。水としては、医薬品用または化粧品用等として一般的に用いられる水であれば特に限定はなく、例えば、イオン交換水、精製水、注射用水等が挙げられる。

湿潤剤としては、例えば、エタノール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１,３－ブチレングリコール、イソプレングリコール、ジグリセリン、ポリエチレングリコール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、トルナーレ、トレハロース、トレハロース硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸等が挙げられる。

甘味剤としては、例えば、サッカリン、サッカリンナトリウム、アセスルファムカリウム、ステビアエキス、ステビオサイド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、グリチルリチン、ペリラルチン、ソウマチン、アスパルチルフェニルアラニンメチルエステル（アスパルテーム）、スクラロース、アドバンテーム、メトキシシンナミックアルデヒド、パラチノース、パラチニット、エリスリトール、マルチトール、キシリトール、ラクチトール等が挙げられる。

香料としては、例えば、サリチル酸メチル、バニリン、ベンジルサクシネート、アネトール、リモネン、オシメン、ｎ－デシルアルコール、メチルアセタート、シトロネニルアセテート、エチルリナロール、ナツメグ、シンナミックアルデヒド、ベンズアルデヒド、スペアミント油、ペパーミント油、レモン油、オレンジ油、セージ油、シソ油、冬緑油、ティーツリー油、タバナ油、スターアニス油、フェンネル油、珪藻油、バジル油、ハッカ油、ウイキョウ油等が挙げられる。

防腐剤または保存剤としては、例えば、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン等のパラベン類、安息香酸ナトリウム、フェノキシエタノール、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン等が挙げられる。

本発明の剤の形態は特に限定されず、例えば、液状、粘性液体、ジェル状、乳化状などの形態が挙げられる。

本発明の剤は、界面活性剤、緩衝剤、抗炎症剤、着色剤および粘稠化剤からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有していてもよい。界面活性剤、緩衝剤、抗炎症剤、着色剤および粘稠化剤は、いずれも、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの含有量は、当業者であれば、適宜設定することができる。

界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ソルビタン脂肪酸エチレン付加物、ポリグリセリン脂肪酸エステル、アシルアミノ酸塩、脂肪酸アミノプロピルベタイン、脂肪酸アミドベタイン等が挙げられる。

緩衝剤として、例えば、クエン酸、リン酸、リンゴ酸、グルコン酸およびこれらの塩等が挙げられる。

抗炎症剤としては、例えば、グリチルリチン酸およびこの塩、グリチルレチン、アズレン、イプシロン－アミノアプロン酸、アラントイン等が挙げられる。

着色剤としては、例えば、青色１号、黄色４号、赤色２０２号、緑３号等の法定色素、群青、強化群青、紺青等の鉱物系色素、酸化チタン等が挙げられる。

粘稠化剤としては、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース系粘稠化剤、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの合成高分子系粘稠化剤、キサンタンガムなどの多糖類等が挙げられる。

本発明の剤の簡便な使用、安全性等の観点からは、液状の本発明の剤を、キャップ付き容器、ポンプ付き容器または個包装容器に充填することが好ましい。

本発明の剤を、適量（０．５ｍＬ～２０ｍＬ程度）、口に含み、咽頭および口腔内を洗浄後、吐き出すことによって、本発明の剤を使用することができる。また、本発明の剤を、適量（０．１ｍＬ～５ｍＬ程度）、咽頭に塗布または噴霧することによって、本発明の剤を使用することができる。このような使用によって、本発明の口腔・咽頭粘膜保護剤は、口腔・咽頭粘膜上皮細胞への細菌感染を抑制しつつ、口腔・咽頭粘膜上皮細胞を保護することができ、また、本発明の抗炎症剤は、口腔・咽頭粘膜上皮細胞の炎症を抑制することができる。

以下に実施例等を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例等に限定されない。

［共重合体および単独重合体］
以下の実施例または比較例で使用した共重合体および単独重合体は、以下の通りである。
共重合体（Ｐ１）：２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）およびメタクリル酸ブチルの共重合体（ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合組成比［ＭＰＣ／メタクリル酸ブチル］（モル比）＝３０／７０、重量平均分子量：１４２，０００）
共重合体（Ｐ２）：ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合体（ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合組成比［ＭＰＣ／メタクリル酸ブチル］（モル比）＝５０／５０、重量平均分子量：１９，０００）
共重合体（Ｐ３）：ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合体（ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合組成比［ＭＰＣ／メタクリル酸ブチル］（モル比）＝４０／６０、重量平均分子量：１００，０００）
共重合体（Ｑ１）：ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合体（ＭＰＣおよびメタクリル酸ブチルの共重合組成比［ＭＰＣ／メタクリル酸ブチル］（モル比）＝８０／２０、重量平均分子量：６００，０００）
単独重合体（Ｑ２）：ＭＰＣの単独重合体（重量平均分子量：２００，０００）
単独重合体（Ｑ３）：富士フイルム和光純薬株式会社より購入したメタクリル酸ブチルの単独重合体（重量平均分子量：１８０，０００、製品名：ポリ（メタクリル酸ｎ－ブチル））

［口腔・咽頭粘膜保護剤の調製］
（実施例１）
共重合体（Ｐ１）に水を配合して、共重合体（Ｐ１）を０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（実施例２）
共重合体（Ｐ１）およびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、共重合体（Ｐ１）を０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（実施例３）
共重合体（Ｐ２）およびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、共重合体（Ｐ２）を０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（実施例４）
共重合体（Ｐ３）およびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、共重合体（Ｐ３）を０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（比較例１）
口腔・咽頭粘膜保護剤のプラセボとして水を使用した。

（比較例２）
共重合体（Ｑ１）に水を配合して均一になるまで撹拌し、共重合体（Ｑ１）を０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（比較例３）
ポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、ポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（比較例４）
共重合体（Ｑ１）およびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、共重合体（Ｑ１）を０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（比較例５）
単独重合体（Ｑ２）およびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、重合体（Ｑ２）を０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（比較例６）
単独重合体（Ｑ３）およびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、重合体（Ｑ３）を０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

（比較例７）
ヒアルロン酸ナトリウムおよびポビドンヨードに水を配合して均一になるまで撹拌し、ヒアルロン酸ナトリウムを０．５質量％、およびポビドンヨードを０．５質量％含有する口腔・咽頭粘膜保護剤を調製した。

［口腔・咽頭粘膜保護剤の評価］
（試験例１）頬粘膜上皮細胞への接着性
頬粘膜を擦過して採取した上皮細胞を集細胞遠心装置（サイトスピン３、ライフサイエンスインターナショナルジャパン）を用いてスライドガラス表面に付着させ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＦＩＴＣ）で標識した実施例１または比較例２の口腔・咽頭粘膜保護剤を滴下し、室温で５分間静置したのちに３回生理食塩水で洗浄し、洗浄の回数による上皮細胞表面の口腔・咽頭粘膜保護剤の輝度の変化を蛍光顕微鏡で観察した。

図１に実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤を用いて得られた蛍光顕微鏡画像を示し、図２に比較例２の口腔・咽頭粘膜保護剤を用いて得られた蛍光顕微鏡画像を示す。図１および図２に示す結果から、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤は、比較例２の口腔・咽頭粘膜保護剤に比べ、３回洗浄後も頬粘膜上皮細胞へ付着することが確認された。

（試験例２）殺菌力
肺炎球菌臨床分離株２菌種（以下、それぞれを「肺炎球菌Ｎｏ．６」または「肺炎球菌Ｎｏ．８」と記載することがある）を１０^４ｃｆｕ／ｍｌの濃度に調整した菌液と、実施例１または比較例１のプラセボとを、試験管内で（菌液）：（口腔・咽頭粘膜保護剤またはプラセボ）＝１：９（体積比）の割合で混合して、混合液を調製した。混合１分後に、混合液の０．１ｍＬを血液寒天平板に塗布し、３７℃の５体積％ＣＯ_２インキュベーター内で２４時間培養した後に、コロニー数を計測した。

図３に、コロニー数の計測結果を示す。なお、図３の縦軸は、コロニー数（単位：個／ｃｅｌｌ）である。また、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤または比較例１のプラセボのそれぞれにおいて、左側の棒グラフが肺炎球菌Ｎｏ．６を用いた結果を示し、右側の棒グラフが肺炎球菌Ｎｏ．８を用いた結果を示す。図３に示す結果から、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤の殺菌力は、比較例１のプラセボと同程度であったことが確認された。即ち、共重合体（Ｐ１）は殺菌力を有さないということが確認された。

（試験例３）Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞への肺炎球菌の接着抑制
咽頭癌由来ヒト上皮細胞Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞（ＡＴＣＣ、ＶＡ、ＵＳＡ）を用い、これを９６穴のプレートで培養し、コンフルエントになったところで実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤または比較例１のプラセボを添加し、３７℃で５分間培養した。その後、被験液を吸引除去し生理食塩水で３回洗浄したのちに、１０^６ｃｆｕ／ｍＬの肺炎球菌Ｎｏ．６または肺炎球菌Ｎｏ．８を１００μＬ加えて３７℃で１時間培養後、生理食塩水で５回洗浄して上皮細胞に付着していない細菌を除去した。そして，１％サポニンを１００μＬ添加後、１５分間静置して細胞を溶解したのちに、得られた溶液を血液寒天培地に塗布し、３７℃で２４時間培養後にコロニー数を計測した。

図４に、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞に接着した肺炎球菌のコロニー数の計測結果を示す。なお、図４の縦軸は、コロニー数（単位：ｃｆｕ／１００μＬ／ｗｅｌｌ）である。また、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤または比較例１のプラセボのそれぞれにおいて、左側の棒グラフが肺炎球菌Ｎｏ．６を用いた結果を示し、右側の棒グラフが肺炎球菌Ｎｏ．８を用いた結果を示す。図４に示す結果から、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤は、比較例１のプラセボに対し、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞への肺炎球菌の付着を、肺炎球菌Ｎｏ．８では約６０％、肺炎球菌Ｎｏ．６では約４０％抑制したことが確認された。

（試験例４）含嗽後の頬粘膜擦過上皮細胞への付着細菌数
喫煙歴のない健常成人１５名を対象とし、水道水２０ｍＬで口腔型含嗽を１５秒間３回行ったあと、片側の頬粘膜を綿棒で軽く擦過して表層の上皮細胞を除去した。その後、もう１回水道水２０ｍＬで１５秒間口腔型含嗽を行った後、同じ部位の頬粘膜を再度綿棒で擦過して上皮細胞を採取し、それを１ｍＬの生理食塩水に添加および撹拌して上皮細胞浮遊液Ｎｏ．１を作製した。

次いで２０ｍＬの実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤または比較例１のプラセボのそれぞれで、口腔型含嗽を１５秒間１回行った。その３時間後に２０ｍＬの水道水で１回軽く口を漱いだのちに、含嗽前に粘膜上皮細胞を採取した部位と同じ箇所を綿棒で擦過して上皮細胞を採取し、それを１ｍＬの生理食塩水に添加および撹拌して、上皮細胞浮遊液Ｎｏ．２を作製した。

上皮細胞浮遊液Ｎｏ．１およびＮｏ．２のそれぞれを集細胞遠心装置で遠心して、上皮細胞の塗抹標本を作製し、グラム染色後に２０個の上皮細胞に付着する細菌数を計測し、上皮細胞浮遊液Ｎｏ．１の平均付着細菌数および上皮細胞浮遊液Ｎｏ．２の平均付着細菌数の差（即ち、「上皮細胞浮遊液Ｎｏ．１の平均付着細菌数－上皮細胞浮遊液Ｎｏ．２の平均付着細菌数の差」、本明細書中「平均付着細菌数の差」と記載することがある）を算出した。

図５に、平均付着細菌数の差を示す。なお、図５の縦軸は、平均付着細菌数の差（単位：個／ｃｅｌｌ）である。図５に示す結果から、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤は、比較例１のプラセボに比べ、頬粘膜擦過上皮細胞への細菌付着を約６０％抑制した。

（試験例５）乾燥抑制効果
口腔・咽頭粘膜保護効果の１つである、口腔・咽頭粘膜保護剤の乾燥抑制効果を調査した。本試験例では、喫煙歴のない健常成人３名を対象とした。まず水道水２０ｍＬで口腔型含嗽を１５秒間１回行ったあと、２０ｍＬの実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤または比較例１のプラセボで口腔型含嗽を１５秒間１回行い、その直後に舌尖から約１０ｍｍ後方の舌背中央部の水分量Ｎｏ．１を口腔水分計ムーカス（登録商標）（株式会社ライフ）で計測した。その後、舌表面に４つ折りにしたティッシュペーパーを軽く乗せ５秒間静置して、舌表面の水分を吸収し、ティッシュペーパーを除去した直後に、再度、舌の同じ部位の水分量Ｎｏ．２を計測し、水分量Ｎｏ．２および水分量Ｎｏ．１の差（即ち、「水分量Ｎｏ．２－水分量Ｎｏ．１」）を算出した。なお、口腔水分計ムーカスによる測定値は、相対値であるため、無単位である。

図６に、水分量Ｎｏ．２および水分量Ｎｏ．１の差を示す。なお、図６の縦軸は、水分量Ｎｏ．２および水分量Ｎｏ．１の差である。図６の結果から示されるように、実施例１の口腔・咽頭粘膜保護剤は、比較例１のプラセボに比べ、水分量Ｎｏ．２および水分量Ｎｏ．１の差を約８０％改善し、舌表面の乾燥を抑制した。

（試験例６）希釈時の殺菌力
唾液等の分泌物によって、口腔・咽頭中の保護剤は絶えず希釈されるため、保護剤が、その製品設計における推奨濃度よりも低濃度で口腔・咽頭へ適用される場合、その効果を長時間保つことができない場合がある。そこで、口腔・咽頭粘膜保護剤について、希釈の影響を調査した。

詳しくは、生理食塩水で段階希釈した実施例２～４または比較例３～７の口腔・咽頭粘膜保護剤（各１５０μＬ）に、菌液（生理食塩水中の６．４×１０^７ｃｆｕ／ｍＬのミュータンスレンサ球菌（ＮＢＲＣ１３９５５））５０μＬを接種して、混合物を調製した。接種から１５秒後に各混合物から２０μＬの試料を採取し、採取した試料をＢｒａｉｎＨｅａｒｔＩｎｆｕｓｉｏｎ培地で１０倍希釈し、口腔・咽頭粘膜保護剤と菌液との反応を停止した。この希釈液を１７時間嫌気培養し、希釈液の濁りの有無を目視で確認することによって、菌の増殖の有無を判断した。詳しくは、希釈液に濁りが確認された場合、菌の増殖が有ったと判断し、希釈液に濁りが確認されなかった場合、菌の増殖が無かったと判断した。

比較例３の口腔・咽頭粘膜保護剤で菌の増殖が無かった希釈倍率に対する、実施例２～４または比較例４～７の腔咽頭粘膜保護剤で菌の増殖が無かった希釈倍率の比（即ち、「実施例２～４または比較例４～７の腔咽頭粘膜保護剤で菌の増殖が無かった希釈倍／比較例３の口腔・咽頭粘膜保護剤で菌の増殖が無かった希釈倍率」）を算出した。実施例２～４または比較例４～７の腔咽頭粘膜保護剤について、前記比が２以上の場合は、希釈時の殺菌力が優れる（〇）と評価し、前記比が２未満の場合は、希釈時の殺菌力が優れない（×）と評価した。また、比較例３の口腔・咽頭粘膜保護剤は、希釈時の殺菌力が優れない（×）と評価した。結果を、下記表１および２に示す。

（試験例７）殺菌に要する時間
口腔・咽頭粘膜保護剤について、殺菌に要する時間を調査した。本試験例では、生理食塩水で８倍に希釈した実施例２～４または比較例３～７の口腔・咽頭粘膜保護剤（各１５０μＬ）に、菌液（生理食塩水中の６．４×１０^７ｃｆｕ／ｍＬのミュータンスレンサ球菌（ＮＢＲＣ１３９５５））５０μＬを接種して、混合物を調製した。接種から所定時間経過後に、各混合物から２０μＬの試料を採取し、採取した試料をＢｒａｉｎＨｅａｒｔＩｎｆｕｓｉｏｎ培地で１０倍希釈した。この希釈液を１７時間嫌気培養し、希釈液の濁りの有無を目視で確認することによって、菌の増殖の有無を判断した。詳しくは、希釈液に濁りが確認された場合、菌の増殖が有ったと判断し、希釈液に濁りが確認されなかった場合、菌の増殖が無かったと判断した。

接種から１５秒以下で菌の増殖が無かった場合は殺菌に要する時間が短い（◎）と評価し、接種から３０秒以下で菌の増殖が無かった場合は殺菌に要する時間がやや短い（〇）と評価し、接種から３０秒よりも長くても、菌の増殖が有った場合は殺菌に要する時間が長い（×）と評価した。結果を、下記表１および２に示す。

（試験例８）刺激性
口腔・咽頭粘膜保護剤の刺激性を調査した。１０質量％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）添加ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地にて予め培養したヒト頬粘膜由来癌細胞ＨＯ－１－Ｎ－１をトリプシン処理し、１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。９６ｗｅｌｌプレートに細胞懸濁液を０．１ｍＬ（１．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）ずつ添加し、２４時間培養を継続し、細胞を接着させた後、実施例２～４または比較例３～７の口腔・咽頭粘膜保護剤（各０．１ｍＬ）を添加した。前記添加から２４時間培養後、培地を除去し、５０μｇ／ｍＬのニュートラルレッド溶液を添加することにより生細胞にニュートラルレッドを取り込ませた。前記添加から３時間後、細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄し、１体積％酢酸／５０体積％エタノール水溶液にてニュートラルレッドを抽出し、抽出液の５５０ｎｍの吸光度を測定した。口腔・咽頭粘膜保護剤を無添加の場合の吸光度を細胞生存率１００％として、各口腔・咽頭粘膜保護剤を使用した場合の細胞生存率を算出し、５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）を計算した。

前記ＩＣ_５０が０．１質量％以上の場合は刺激性が低い（〇）と評価し、前記ＩＣ_５０が０．１質量％未満の場合は刺激性が高い（×）と評価した。結果を、下記表１および２に示す。

以上の結果から、本発明の口腔・咽頭粘膜保護剤は、口腔・咽頭粘膜上皮細胞への細菌感染を抑制しつつ、口腔・咽頭粘膜上皮細胞を保護することができることが分かる。

［抗炎症剤の調製］
（実施例５）
共重合体（Ｐ１）に水を配合して、共重合体（Ｐ１）を０．５質量％含有する抗炎症剤を調製した。

（比較例８）
抗炎症剤のプラセボとして水を使用した。

［抗炎症剤の評価］
（試験例９）抗炎症作用
抗炎症剤の抗炎症作用を調査した。本試験例では、咽頭癌由来ヒト上皮細胞Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞（ＡＴＣＣ、ＶＡ、ＵＳＡ）を２４穴のプレートで培養し、コンフルエントになったところで、実施例５の抗炎症剤または比較例８のプラセボを５００μＬ添加し、３７℃で５分間培養した。その後、実施例５の抗炎症剤または比較例８のプラセボを吸引除去し、吸引除去後に残った細胞を３回生理食塩水で洗浄し、洗浄後の細胞に、培養液で１μｇ／ｍＬに調整したＰａｍ３ＣＳＫ４（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を１ｍＬ添加し、３７℃で２４時間培養した。そして培養上清を－８０℃に保存し、後日ヒトＩＬ－８測定用ＥＬＩＳＡキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＩＬ－８の濃度を計測した。なお、このような実験を本試験例では５回行い、ＩＬ－８の濃度の平均値を算出した。

上記のようにして得られた結果（平均ＩＬ－８濃度）を図７に示す。図７の結果から示されるように、実施例５の抗炎症剤は、比較例８のプラセボに比べ、ＩＬ－８の産生を４５％抑制し、抗炎症作用を示した。
以上の結果から、本発明の抗炎症剤は、口腔・咽頭粘膜上皮細胞の炎症を抑制できることが分かる。

Claims

下記式（１）：

（式（１）中、Ｒ^１は、水素原子またはメチル基を示す。）
で表される２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位２０～７０モル％と、
下記式（２）：

（式（２）中、Ｒ^２は、水素原子またはメチル基を示し、およびＲ^３は、炭素数４～１８の直鎖または分岐鎖のアルキル基を示す。）
で表されるアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位３０～８０モル％と
を含有する共重合体を含有する口腔・咽頭粘膜保護剤。
さらに、ポビドンヨード、アズレンスルホン酸およびアズレンスルホン酸塩からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する請求項１に記載の口腔・咽頭粘膜保護剤。
さらに、基剤、湿潤剤、甘味剤、香料、防腐剤および保存剤からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する請求項１または２に記載の口腔・咽頭粘膜保護剤。
下記式（１）：

（式（１）中、Ｒ^１は、水素原子またはメチル基を示す。）
で表される２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリンに基づく構成単位２０～７０モル％と、
下記式（２）：

（式（２）中、Ｒ^２は、水素原子またはメチル基を示し、およびＲ^３は、炭素数４～１８の直鎖または分岐鎖のアルキル基を示す。）
で表されるアルキル（メタ）アクリレートに基づく構成単位３０～８０モル％と
を含有する共重合体を含有する抗炎症剤。