JP2023551281A - シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を有効成分として含む組成物 - Google Patents
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Abstract
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を有効成分として含む組成物に関し、一態様に係るシジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む組成物によれば、炎症性サイトカインの発現を抑制することで、炎症疾患の予防、改善または治療に有用に使用されることができ、これを含む化粧品の安定性の高いという効果がある。【選択図】なし
Description
シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む組成物に関する。
炎症は、物理的な外傷、有害な化学物質、バクテリア、かび、ウイルスによる感染や生体内代謝産物中の刺激性物質によって惹起される病理的状態に対応して現われる局所的な生体の防御反応である。炎症は、損傷した組職及び移動する細胞から生産される多様な炎症媒介因子によって触発される。炎症反応時には、炎症部位に血漿が蓄積されて細菌が分泌した毒性を希釈させ、血流が増加して、紅斑、痛症、むくみ、発熱などの症状が伴うようになる。正常な場合に、生体は炎症反応を通じて発病要因を中和させたり除去したりして、損傷した組職を再生させることで正常な構造と機能を回復させるが、そうではない場合には湾性炎症のような疾病状態に進められることもある。
マクロファージは、先天免疫を担う主要な細胞であって、サイトカイン及びバクテリアのリポ多糖内毒素(lipopolysaccharide、LPS)のような多くの因子によって活性化され、活性化されたマクロファージは、酸化窒素(nitricoxide、NO)及びプロスタグランジンE2(prostaglandin E2、PGE2)のような炎症因子はもちろん、TNF-α(tumor necrosis factor-α)、IL-6(interleukin-6)、IL-1(interleukin-1)のような伝染症性サイトカインを生産する。
また、シクロオキシゲナーゼ(cyclooxygenase、COX)は、COXの機能とともにヒドロペルオキシダーゼ(hydroperoxidase、HOX)活性を有し、アラキドン酸から中間体であるPGG2とPGG2とを合成し、これらの化合物として、PGE2、PGF2、PGD2、プロスタシクリン及びトロンボキサンA2(thromboxane A2、TxA2)を生成する。COXの2種のイソ型の中でCOX-2は、炎症反応時に迅速にその発現が誘導されてPGE2などを生成することで、炎症反応を起こすのに重要な役割を果たす(Weisz A., Biochem. J., 316:209-215, 1996;(Miller M. J. et al., Mediators of inflammation, 4:387-396, 1995: Appleton L. et al., Adv. Pharmacol., 35:27-28, 1996)。PGE2は、既によく知られた炎症反応の媒介体としての役割だけではなく、マクロファージにおけるTNF-α、IL-1β、IL-8、IL-12などの炎症性サイトカインの生成を抑制する。
シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)は、バングラデシュ、インド、ミャンマー、タイ、ラオス、ベトナムなどのような東南アジアで棲息する常緑樹であって、10mの高さまで成長する。ベトナムとラオスではシジギウムフォルモーサムを栽培して、該木の果物を食用として利用している。
しかし、本発明のようにシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が炎症抑剤に効果があるということは開示されたことがない。
一態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む化粧料組成物を提供することである。
他の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む皮膚炎症改善用皮膚外用剤組成物を提供することである。
また他の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む皮膚炎症改善用健康機能食品を提供することである。
また別の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む皮膚炎症性疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することである。
また別の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を、これを必要とする個体に投与する工程を含む皮膚炎症を予防または治療する方法を提供することである。
一態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む化粧料組成物を提供する。
前記シジギウムフォルモーサムは、全体、根、幹、枝、葉、種子または実からなる群から選ばれた一つ以上であってもよい。一具体例によるシジギウムフォルモーサム抽出物は、シジギウムフォルモーサムの葉を利用して抽出したものであってもよい。
本明細書における用語「有効成分」または「有効量」は、疾患、障害または病態、またはその一以上の症状の軽減、進行抑制または予防に十分な、本願で提供される発明を実施する過程で用いられる組成物の任意の量を意味することができる。
本明細書における用語「分画物」は、種々様々の構成成分を含む混合物から特定の成分または特定の成分群を分離するために分画を行うことで得られた結果物を意味することができる。
前記分画物を得る分画方法は、特に制限されなく、当該技術分野で通常使用する方法によって行われることができる。前記分画方法の非制限的な例としては、シジギウムフォルモーサムを抽出して得た抽出物に所定の溶媒を処理することで前記抽出物から分画物を得る方法が挙げられる。
前記分画物を得るのに用いられる分画溶媒の種類は、特に制限されなく、当該技術分野で公知された任意の溶媒を使用することができる。前記分画溶媒の非制限的な例としては、水、ブタノールのようなアルコールなどの極性溶媒、ヘキサン(Hexane)、酢酸エチル(Ethyl acetate)、クロロホルム(Chloroform)、ジクロロメタン(Dichloromethane)などの非極性溶媒などが挙げられる。これらは、単独で用いられてもよく、2種以上混合して用いられてもよい。前記分画溶媒の中でアルコールを使用する場合は、具体的にC1~C4のアルコールを使用することができる。
前記シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物は、前記シジギウムフォルモーサム抽出物のヘキサン分画物、酢酸エチル分画物、ブタノール分画物または水分画物のものであってもよく、1回~5回、例えば、2回~5回、3回~5回若しくは2回~4回分画を繰り返し行って得られたものであってもよい。一具体例による分画物において、前記分画物は水分画物であることができ、前記分画は、分画を3回繰り返し行ったものであってもよい。
前記分画は、シジギウムフォルモーサム抽出物に対して前記分画溶媒を1~30(体積/重量)倍、例えば、5~30(体積/重量)倍、5~20(体積/重量)倍、10~30(体積/重量)倍、あるいは10~20倍添加することを含むことができる。例えば、前記シジギウムフォルモーサム抽出物100gに対して前記分画溶媒を100ml~3000ml添加することを含むことができる。
前記シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物は、シジギウムフォルモーサム抽出物に比べて、トリテルペン(triterpene)系化合物であるアジア酸(asiatic acid)、マデカッソ酸(madecassic acid)、コロソリン酸(colosolic acid)、マスリン酸(maslinic acid)、ベツリン酸(betulinic acid)、ウルソール酸(ursolic acid)またはオレアノール酸(oleanolic acid)を高濃度で含有しているため、シジギウムフォルモーサム抽出物に比べて抗炎症、抗アレルギーまたは皮膚再生の効果に一層優れている効果がある。これによって、前記化粧料組成物は、皮膚炎症改善用のものであってもよい。
本明細書における用語「皮膚炎症」は、炎症誘発因子または放射線照射など有害な刺激によって人体免疫体系を過度に亢進させてマクロファージのような兔疫細胞から分泌するIL-6(Interleukin-6)またはTNF-α(Tumor necrosis factor-α)のような炎症誘発物質(炎症性サイトカイン)によって誘発される疾患を意味することができる。一具体例による前記組成物は、炎症性サイトカインの活性を減少させて抗炎症、抗アレルギーまたは皮膚再生の効果がある。
一具体例において、前記化粧料組成物は、軟化剤、湿潤剤、及び増粘剤をさらに含むことであってもよい。
前記軟化剤は、セテアリルアルコール、パルミチン酸セチル、蜜蝋、スクアラン、ヘキサン酸セチルエチル及びトリ(カプリル酸/カプリン酸)グリセリルからなる群から選ばれるものであることができ、前記湿潤剤は、1,2-ヘキサンジオール、ジプロピレングリコール及びグリセリンからなる群から選ばれるものであることができ、前記増粘剤は、キサンタンガム及びアクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマーからなる群から選ばれるものであってもよい。
シジギウムフォルモーサム抽出物は、トリテルペン系化合物だけでなく、アミノ酸及び糖のような植物代謝体を多量含有しており、これを含む化粧品の場合、色変化、粘度の不安定さ及び乳化の不安定化のような問題点がある。これと異なり、前記シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物は、トリテルペン系化合物を高濃度で含有しているため、これを含む化粧品の場合、色変化が少なく、粘度が安定しており、安定性がより優れているという効果がある。
前記組成物は、組成物の総重量に対して、0.001重量%~80重量%、例えば、0.01重量%~60重量%、0.01重量%~40重量%、0.01重量%~30重量%、0.01重量%~20重量%、0.01重量%~10重量%、0.01重量%~5重量%、0.05重量%~60重量%、0.05重量%~40重量%、0.05重量%~30重量%、0.05重量%~20重量%、0.05重量%~10重量%、0.05重量%~5重量%、0.1重量%~60重量%、0.1重量%~40重量%、0.1重量%~30重量%、0.1重量%~20重量%、0.1重量%~10重量%、または0.1重量%~5重量%のシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を含むことができる。
前記化粧用組成物は、柔軟化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、水分クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アンプル、ゲル、アイクリーム、クレンジングクリーム、クルレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、スプレー、パウダー、ゲル、ローション、及び軟膏で構成された群から選ばれる剤形を有するものであってもよい。前記化粧用組成物は、一般皮膚化粧料に配合される化粧品学的に許容可能な担体を1種以上さらに含むことができ、通常の成分として、例えば、油分、水、界面活性剤、保湿剤、低級アルコール、増粘剤、キレート剤、色素、防腐剤、香料などを適宜配合することができるが、これらに限定されるものではない。
他の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む皮膚炎症改善用皮膚外用剤組成物を提供する。
前記皮膚外用剤は、クリーム、ゲル、軟膏、皮膚乳化剤、皮膚懸濁液、経皮伝達パッチ、薬物含有包帯、ローション、またはその組み合わせであってもよい。
前記皮膚外用剤は、通常の化粧品や医薬品などの皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、水性成分、油性成分、粉末成分、アルコール類、保湿剤、増粘剤、紫外線吸収剤、美白剤、防腐剤、酸化防止剤、界面活性剤、香料、着色剤、各種皮膚営養剤等を、必要に応じて適宜配合することができる。
前記皮膚外用剤は、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸などのキレート剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、甘草抽出物、グラブリジン、カリン果実の熱水抽出物、各種生薬、トコフェロール酢酸エステル、グリチリチン酸、トラネキサム酸及びその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンC、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コジ酸、グルコース、フルクトース、トレハロースなどの糖類等も適宜配合してもよい。
また他の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む皮膚炎症改善用健康機能食品を提供する。
前記健康機能性食品は、日常食事で欠乏されやすい栄養素や人体に有用な機能を持つ原料や成分(以下、「機能性原料」という)を使用して製造した食品であって、健康を維持するか、所定の疾病または症状を予防及び/または改善するのに役立つすべての食品を意味し、最終製品の形態には特別な制限がない。例えば、前記健康機能食品は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、ゲル、ゼリー、懸濁液、エマルジョン、シロップ剤、ティーバッグ剤、浸出茶、または健康飲料からなる群から選ばれる剤形を有するものであってもよい。
前記健康機能性食品に含有された有効成分(すなわち、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物)の含量は、食品の形態、所望する用途などによって適宜選択可能であり、特別な制限がなく、例えば、全体食品重量の0.1~50重量%であってもよい。
前記健康機能性食品は、様々な営養剤、ビタミン、鉱物(電解質)、合成風味剤または天然風味剤などの風味剤、着色剤、増進剤(チーズ、チョコレート等)、ペクチン酸またはその塩、アルギン酸またはその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、pH調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などからなる群から選ばれた1種以上をさらに含むことができる。このような添加剤の割合は、全体健康機能性食品100重量部当たり0.001~約20重量部の範囲内で選択されることが一般的であるが、これに限定されるものではない。
また他の態様は、シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む皮膚炎症性疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
また別の態様はシジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を、これを必要とする個体に投与する工程を含む皮膚炎症を予防または治療する方法を提供する。
前記皮膚炎症性疾患は、皮膚傷、皮膚炎、アトピー皮膚炎、掻痒症、湿疹性皮膚疾患、乾性湿疹、紅斑、じんま疹、乾癬、薬疹、及びにきびからなる群から選ばれるものであってもよい。
本明細書における用語「予防(prevention)」は、疾患、障害、またはその付随的症状の発病または再発を部分的に若しくは完全に遅延又は防止したり、疾患または障害の獲得または再獲得を防止したり、疾患または障害の獲得の危険を減少させたりする方法を言う。例えば、前記予防は、本発明による組成物の投与によって炎症または炎症関連疾患、障害、または症状の発生を抑制または遅延させるすべての行為を言う。
本明細書における用語「改善」とは、状態の緩和又は治療に係わるパラメーター、例えば症状の程度を少なくとも減少させるすべての行為を意味することができる。
本明細書における用語「治療」は、病的症状の軽減または改善、疾患の部位の減少、疾患の進行の遅延又は緩和、疾患の状態または症状の改善、軽減又は安定化、部分的若しくは完全な回復、生存の延長、その他有益な治療の結果などをすべて含む意味で使われる。
本明細書における用語「薬学的組成物」は、客体への投与時に幾つかの有利な効果を与える分子または化合物を指すことができる。有利な効果は、診断的決定を可能にすること;疾病、症状、障害または病態の改善;疾病、症状、障害または疾患の発病の減少または予防;及び一般的に疾病、症状、障害または病態への対応を含むことができる。
前記薬学的組成物は、臨床投与時、非経口で投与を行うことができ、一般的な医薬品製剤の形態で用いられることができる。非経口投与は、直腸、静脈、腹膜、筋肉、動脈、経皮、鼻腔(Nasal)、吸入、眼球及び皮下のような経口以外の投与経路を介した投与を意味することができる。本発明の前記薬学的組成物を医薬品として使用する場合、さらに、同一または類似した機能を示す有効成分を1種以上含むことができる。
前記薬学的組成物は、水性または油性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤または乳化液の形態であるか、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤などの形態で製剤化でき、製剤化のために分散剤または安定化剤をさらに含むことができる。前記薬学的組成物を製剤化する場合に、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調剤されることができる。非経口投与のための製剤には、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれることができる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール(Propylene glycol)、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが使われることができる。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール(Witepsol)、マクロゴ-ル、ツイン(Tween)61、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使われることができる。
前記薬学的組成物は、生理食塩水または有機溶媒のように薬剤として許容された多くの担体(Carrier)と混合して使われることができ、安定性や吸水性を増加させるために、グルコース、スクロスまたはデキストランのような炭水化物、アルコルビン酸(Ascorbic acid)またはグルタチオン(Glutathione)のような抗酸化剤(Antioxidants)、キレート化剤(Chelating agents)、低分子タンパク質または他の安定化剤(Stabilizers)が薬剤として使用されてもよい。
また、前記薬学的組成物の薬学的有効量、有効投与量は、薬学的組成物の製剤化方法、投与方式、投与時間及び/または投与経路などによって多様であってもよい。また、前記薬学組成物の投与で達成しようとする反応の種類と程度、投与対象となる個体の種類、年齢、体重、一般的な健康状態、疾病の症状や程度、性別、食餌、排泄、当該個体に同時または異時に一緒に使われる薬物、その他組成物の成分などをはじめ多くの因子、及び医薬分野でよく知られた類似因子に応じて多様になることができる。当該技術分野における通常の知識を持つ者は、目的する治療に効果的な投与量を容易に決めて処方することができる。本発明による薬学組成物の投与は、一日1回投与されてもよく、数回に分けて投与されてもよい。したがって、前記投与量は、いずれもの面でも本発明の範囲を限定するものではない。薬学的組成物の投与量は、1日1μg/kg/日乃至1,000mg/kg/日であってもよい。
前記個体は、哺乳動物、例えば、ヒト、牛、馬、豚、犬、羊、ヤギ、または猫であってもよい。前記個体は、皮膚炎症の治癒を要する個体であってもよい。
前記発明に対して記述した用語及び方法などは、これらの各発明間に同様に適用される。
一態様に係るシジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む組成物によれば、炎症性サイトカインの発現を抑制することで炎症疾患の予防、改善または治療に有用に使用されることができ、これを含む化粧品の安定性が高いという効果がある。
以下では、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これは例示的なものに過ぎず、本発明の範囲を限定しようとするものではない。下記記載した実施例は、発明の本質的な要旨を逸脱しない範囲内で変形され得ることは当業者にとって自明である。
実施例1
シジギウムフォルモーサム抽出物の製造
ベトナムのハノイ市のNguyen Van Loung氏から収穫されて乾燥されたシジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)の葉を購入して乾燥シジギウムフォルモーサム葉50kgに70%(v/v)のエタノール水溶液600Lを加えて50℃で24時間の間抽出し、これを濾過して1次抽出液を得た。濾過されたシジギウムフォルモーサムに95%(v/v)のエタノール水溶液600Lを加えて50℃で24時間の間抽出し、これを濾過して2次抽出液を得た。前記抽出液を濃縮後凍結乾燥して最終抽出物を得た。
シジギウムフォルモーサム抽出物の製造
ベトナムのハノイ市のNguyen Van Loung氏から収穫されて乾燥されたシジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)の葉を購入して乾燥シジギウムフォルモーサム葉50kgに70%(v/v)のエタノール水溶液600Lを加えて50℃で24時間の間抽出し、これを濾過して1次抽出液を得た。濾過されたシジギウムフォルモーサムに95%(v/v)のエタノール水溶液600Lを加えて50℃で24時間の間抽出し、これを濾過して2次抽出液を得た。前記抽出液を濃縮後凍結乾燥して最終抽出物を得た。
実施例2-1
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の製造のための、蒸留水で追加精製した1次洗浄液の製造
前記実施例1で得られた抽出物100gに蒸留水2000mlを添加して1分間混ぜ合わせた後、遠心分離して洗浄液を回収した。
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の製造のための、蒸留水で追加精製した1次洗浄液の製造
前記実施例1で得られた抽出物100gに蒸留水2000mlを添加して1分間混ぜ合わせた後、遠心分離して洗浄液を回収した。
実施例2-2
シジギウムフォルモーサム抽出物を蒸留水で追加精製した2次洗浄液の製造
前記実施例2-1で遠心分離して分離された沈殿物に蒸留水2000mlを添加して1分間混ぜ合わせた後、遠心分離して洗浄液を回収した。
シジギウムフォルモーサム抽出物を蒸留水で追加精製した2次洗浄液の製造
前記実施例2-1で遠心分離して分離された沈殿物に蒸留水2000mlを添加して1分間混ぜ合わせた後、遠心分離して洗浄液を回収した。
実施例2-3
シジギウムフォルモーサム抽出物を蒸留水で追加精製した3次洗浄液の製造
前記実施例2-2で遠心分離して分離された沈殿物に蒸留水2000mlを添加して1分間混ぜ合わせた後、遠心分離して洗浄液を回収した。
シジギウムフォルモーサム抽出物を蒸留水で追加精製した3次洗浄液の製造
前記実施例2-2で遠心分離して分離された沈殿物に蒸留水2000mlを添加して1分間混ぜ合わせた後、遠心分離して洗浄液を回収した。
実施例2-4
蒸留水で追加精製されたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の製造
前記実施例2-3で遠心分離して分離された沈殿物を凍結乾燥してトリテルペン(triterpene)が高含量で含有されたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を得た。
蒸留水で追加精製されたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の製造
前記実施例2-3で遠心分離して分離された沈殿物を凍結乾燥してトリテルペン(triterpene)が高含量で含有されたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を得た。
実験例1
蒸留水追加精製後の収率の確認
蒸留水追加精製後、収率を確認した結果を表1に示した。
蒸留水追加精製後の収率の確認
蒸留水追加精製後、収率を確認した結果を表1に示した。
実験例2
LC-MS/MSを利用した蒸留水で追加精製されたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の有効成分の含量変化の確認
(1)LC-MS/MS分析条件
下記表2及び表3の条件下でLC-MS/MS分析を行った。
LC-MS/MSを利用した蒸留水で追加精製されたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の有効成分の含量変化の確認
(1)LC-MS/MS分析条件
下記表2及び表3の条件下でLC-MS/MS分析を行った。
(2)分析結果
実施例1で得られた抽出物及び実施例2-1~2-4で得られた浄液及び分画物の9種の有効成分を定量してppm単位で下記表4に示し、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物がシジギウムフォルモーサム抽出物よりも有効成分の含量がより高いことを確認した。
実施例1で得られた抽出物及び実施例2-1~2-4で得られた浄液及び分画物の9種の有効成分を定量してppm単位で下記表4に示し、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物がシジギウムフォルモーサム抽出物よりも有効成分の含量がより高いことを確認した。
実験例3
シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物の細胞毒性の確認
ケラチノサイト(keratinocyte)細胞株であるHaCaT細胞に前記実施例1及び実施例2-4で得られた抽出物及び分画物をそれぞれ処理して、24時間後にMTT溶液で各々の細胞毒性を確認した。
シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物の細胞毒性の確認
ケラチノサイト(keratinocyte)細胞株であるHaCaT細胞に前記実施例1及び実施例2-4で得られた抽出物及び分画物をそれぞれ処理して、24時間後にMTT溶液で各々の細胞毒性を確認した。
具体的に、HaCaT細胞を6~11回継代培養して48ウェルプレートに200μl培地(5%のFBS、DMEM)中に0.05×106細胞/ウェルで播種して一晩中培養した。培養された細胞にシジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物を濃度別にそれぞれ処理した後、37℃で24時間の間培養した。MTT溶液(DPBS中5mg/ml)をそれぞれ10μl処理後、3時間の間反応させた。MTT溶液が含有された培地を除去した後、DMSOを300μl入れて5分間混ぜ合わせた。ピペッティングしながら96ウェルプレートに100μlずつそのまま移して分注した上、540nmで測定して細胞生存率(%)を計算した。
その結果、図1に示したように、シジギウムフォルモーサム抽出物の場合、50μg/ml濃度では、80%以上の細胞生存率を確認したし、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の場合、25μg/ml濃度で約80%の細胞生存率を確認した。
実験例4
シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物の炎症抑制効果の比較
UVBを照射して酸化ストレスを与えた時に発生する細胞の炎症反応に対して、炎症性サイトカイン発現を確認することで、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の抗炎症効果を確認した。
シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物の炎症抑制効果の比較
UVBを照射して酸化ストレスを与えた時に発生する細胞の炎症反応に対して、炎症性サイトカイン発現を確認することで、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の抗炎症効果を確認した。
具体的に、4回継代培養されたHaCaT細胞を6ウェルプレートに培地2ml中に0.5×106細胞/mlで播種して、シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物をそれぞれ濃度別に6時間前処理した。陽性対照群ではビタミンCを処理した。培地を除去した後、DPBSで2回洗浄した。DPBS500μlを入れた状態で30秒間UVB20mJを照射した。DPBSを除去してそれぞれ15μg/mlずつ溶解されているDMEM無血清培地2mlを入れて18時間の間培養した。次に、RNAを抽出して重合酵素連鎖反応(PCR)試験で炎症性サイトカイン発現を確認した。
その結果、図2~図6に示したように、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物がビタミンC及び抽出物よりも炎症性サイトカイン発現をさらに効果的に抑制することを確認した。
実験例5
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物及びツボクサ抽出物の有効成分含量の比較
前記シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物と2種のツボクサの抽出物の有効成分を比較した。
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物及びツボクサ抽出物の有効成分含量の比較
前記シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物と2種のツボクサの抽出物の有効成分を比較した。
具体的に、乾燥されたシジギウムフォルモーサム葉2gに70%のエタノール40mlを添加して実施例1及び実施例2-1~2-4と同様な方法で抽出物及び分画物を製造し、2gの2種の各ツボクサに、70%のエタノール40mlを添加後50℃で24時間の間抽出して抽出液を回収した。次に、表2及び表3の条件下でLC-MS/MS分析を行って9種の有効成分を定量したし、有効成分の含量はppm単位で表5に示した。
その結果、ツボクサ抽出物と比較してシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が有効成分の含量がより高いことを確認した。
実験例6
ツボクサ抽出物、シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物の炎症抑制効果の比較
UVBを照射して酸化ストレスを与えた時に発生する細胞の炎症反応に対して、炎症性サイトカイン発現を確認することで、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の抗炎症の効果を確認した。
ツボクサ抽出物、シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物の炎症抑制効果の比較
UVBを照射して酸化ストレスを与えた時に発生する細胞の炎症反応に対して、炎症性サイトカイン発現を確認することで、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の抗炎症の効果を確認した。
具体的に、16回継代培養されたHaCaT細胞を6ウェルプレートに培地2ml中に0.5×106細胞/mlで播種し、ツボクサ抽出物、シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物をそれぞれ6時間前処理した。培地を除去後、DPBSで2回洗浄した。DPBS500μlを入れた状態で30秒間UVB20mJを照射した。DPBSを除去してビタミンCは8.8ppm、シジギウムフォルモーサム抽出物及び分画物は、0.43及び2.14ppmの濃度別にそれぞれ溶解されているDMEM無血清培地2mlを入れて18時間の間培養した。次いで、RNAを抽出して重合酵素連鎖反応(PCR)試験で炎症性サイトカイン発現を確認した。
その結果、図7~図10に示したように、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が、ツボクサ抽出物及びシジギウムフォルモーサム抽出物よりも炎症性サイトカイン発現を一層効果的に抑制することを確認した。このような結果は、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が、ツボクサ抽出物及びシジギウムフォルモーサム抽出物に比して炎症抑制効果がより高いことを示す。
製造例1
シジギウムフォルモーサム抽出物が含有されたクリームの製造
シジギウムフォルモーサム抽出物の化粧品の素材特性の確認のために、実施例1で得られた抽出物を利用して下記表5に記載した組成によって通常の方法でクリームを製造し、実施例1及び実施例2-4で得られた抽出物及び分画物の有効成分の含量差によってクリーム製造時の含量を異にした。
シジギウムフォルモーサム抽出物が含有されたクリームの製造
シジギウムフォルモーサム抽出物の化粧品の素材特性の確認のために、実施例1で得られた抽出物を利用して下記表5に記載した組成によって通常の方法でクリームを製造し、実施例1及び実施例2-4で得られた抽出物及び分画物の有効成分の含量差によってクリーム製造時の含量を異にした。
製造例2
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が含有されたクリームの製造
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の化粧品の素材特性の確認のために、実施例2-4で得られた分画物を利用して下記表6に記載した組成によって通常の方法でクリームを製造したし実施例1及び実施例2-4で得られた抽出物及び分画物の有効成分の含量差によってクリーム製造時の含量を異にした。
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が含有されたクリームの製造
シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の化粧品の素材特性の確認のために、実施例2-4で得られた分画物を利用して下記表6に記載した組成によって通常の方法でクリームを製造したし実施例1及び実施例2-4で得られた抽出物及び分画物の有効成分の含量差によってクリーム製造時の含量を異にした。
実験例3
加速試験を通じたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の化粧品の素材特性の確認
製造例1で製造されたクリームを45℃で6週間保管しながら1週間ごとにpHと色度を測定して表7及び図11~図13に示し、図11~図13は、明度(L)、色相(a)、彩度(b)値の0週次の測定値を基準として百分率(%)で示した。粘度の測定結果は図14に示しており、赤い線で一般的なクリームの粘度を表示した。
加速試験を通じたシジギウムフォルモーサム抽出物の分画物の化粧品の素材特性の確認
製造例1で製造されたクリームを45℃で6週間保管しながら1週間ごとにpHと色度を測定して表7及び図11~図13に示し、図11~図13は、明度(L)、色相(a)、彩度(b)値の0週次の測定値を基準として百分率(%)で示した。粘度の測定結果は図14に示しており、赤い線で一般的なクリームの粘度を表示した。
その結果、図11~図14に示したように、シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物が含有されたクリームが、シジギウムフォルモーサム抽出物が含有されたクリームよりも約5000cP高い粘度を維持したし、明度(L)がより高かったし、変化の程度も少なかった。また、色相(a)及び彩度(b)変化もより少ないことを確認して、剤形がより安定していることを確認した。
Claims (14)
- シジギウムフォルモーサム(Syzygium formosum)抽出物の分画物を有効成分として含む、化粧料組成物。
- 皮膚炎症改善用である、請求項1に記載の化粧料組成物。
- 前記分画物が、前記抽出物のヘキサン分画物、酢酸エチル分画物、ブタノール分画物または水分画物である、請求項1に記載の化粧料組成物。
- 前記分画物が、分画を1回~5回繰り返し行うことで得られる、請求項1に記載の化粧料組成物。
- 軟化剤、湿潤剤、及び増粘剤をさらに含む、請求項1に記載の化粧料組成物。
- 前記軟化剤が、セテアリルアルコール、パルミチン酸セチル、蜜蝋、スクアラン、ヘキサン酸セチルエチル及びトリ(カプリル酸/カプリン酸)グリセリルからなる群から選択されるものである、請求項5に記載の化粧料組成物。
- 前記湿潤剤が、1,2-ヘキサンジオール、ジプロピレングリコール及びグリセリンからなる群から選択されるものである、請求項5に記載の化粧料組成物。
- 前記増粘剤が、キサンタンガム及びアクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマーからなる群から選択されるものである、請求項5に記載の化粧料組成物。
- シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を有効成分として含む、皮膚炎症改善用皮膚外用剤組成物。
- シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を有効成分として含む、皮膚炎症改善用健康機能食品。
- シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を有効成分として含む、皮膚炎症性疾患の予防または治療用薬学的組成物。
- 前記皮膚炎症性疾患が、皮膚傷、皮膚炎、アトピー皮膚炎、掻痒症、湿疹性皮膚疾患、乾性湿疹、紅斑、じんま疹、乾癬、薬疹、及びにきびからなる群から選択されるものである、請求項11に記載の薬学的組成物。
- シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を、これを必要とする個体に投与する工程を含む、皮膚炎症を予防または治療する方法。
- シジギウムフォルモーサム抽出物の分画物を皮膚炎症の予防または治療用組成物の製造に使用するための用途。
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