KR20220074362A - 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물 - Google Patents
시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 일 양상에 따른 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 의하면, 염증성 사이토카인의 발현을 억제함으로써 염증 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있고, 이를 포함한 화장품의 안정성이 높은 효과가 있다.
Description
시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
염증은 물리적인 외상, 유해한 화학물질, 박테리아, 곰팡이, 바이러스에 의한 감염이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 의하여 야기되는 병리적 상태에 대응하여 나타나는 국소적인 생체의 방어 반응이다. 염증은 손상된 조직과 이동하는 세포로부터 생산되는 다양한 염증 매개 인자에 의하여 촉발된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다. 정상적인 경우에 생체는 염증 반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키지만, 그렇지 못한 경우에는 만성 염증과 같은 질병 상태로 진행되기도 한다.
대식세포는 선천면역을 담당하는 주요 세포로, 사이토카인 및 박테리아 지질다당류 내독소(lipopolysaccharide, LPS) 같은 수많은 인자에 의해 활성화되고, 활성화된 대식세포는 산화질소(nitric oxide, NO) 및 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2, PGE2) 같은 염증 인자는 물론 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6(interleukin-6), IL-1(interleukin-1) 같은 전염증성 사이토카인을 생산한다.
또한 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)는 COX의 기능과 함께 하이드로퍼옥시다제(hydroperoxidase, HOX) 활성을 가지고 아라키돈산으로부터 중간체인 PGG₂와 PGG₂를 합성하며, 이들 화합물로 PGE₂, PGF₂, PGD₂, 프로스타시클린 및 트롬복산A2(thromboxane A2, TxA2)를 생성한다. COX의 2 종류의 이소 형태 중 COX-2는 염증 반응 시 신속히 그 발현이 유도되어 PGE₂등을 생성함으로써 염증 반응을 일으키는 데 중요한 역할을 수행한다(Weisz A., Biochem. J., 316:209-215, 1996;(Miller M. J. et al., Mediators of inflammation, 4:387-396, 1995: Appleton L. et al., Adv. Pharmacol., 35:27-28, 1996). PGE₂는 이미 잘 알려진 염증 반응의 매개체로서의 역할뿐만 아니라, 대식세포에서 TNF-α, IL-1β, IL-8, IL-12 등의 염증성 사이토카인의 생성을 억제한다.
시지지움 포르모슘(Syzygium formosum)은 방글라데시, 인도, 미얀마, 태국, 라오스, 베트남 등과 같은 동남아시아에서 서식하는 상록수로 10m 높이까지 성장한다. 베트남과 라오스에서는 시지지움 포르모슘을 재배하여 이 나무의 과일을 식용으로 이용하고 있다.
그러나, 본 발명과 같이 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 염증 억제에 효과가 있다는 것은 개시된 바 없다.
일 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 시지지움 포르모슘은 전체, 뿌리, 줄기, 가지, 잎, 종자 또는 열매로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다. 일 구체예에 따른 시지지움 포르모슘 추출물은 시지지움 포르모슘의 잎을 이용하여 추출한 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "유효성분" 또는 "유효량"은 질환, 장애 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방에 충분한 본원에서 제공되는 발명을 실시하는 과정에서 이용되는 조성물의 임의의 양을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미할 수 있다.
상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 시지지움 포르모슘을 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 부탄올과 같은 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexan), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 분획 용매 중 알코올을 사용하는 경우에는 구체적으로 C1 내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다.
상기 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물은 상기 시지지움 포르모슘 추출물의 헥산 분획물, 에틸 아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 또는 물 분획물인 것일 수 있으며, 1 회 내지 5회, 예를 들면, 2회 내지 5회, 3회 내지 5회 또는 2회 내지 4회 분획을 반복 수행하여 얻어진 것일 수 있다. 일 구체예에 따른 분획물에서, 상기 분획물은 물 분획물일 수 있으며, 상기 분획은 분획을 3회 반복 수행한 것일 수 있다.
상기 분획은 시지지움 포르모슘 추출물에 대하여 상기 분획 용매를 1 내지 30 (부피/중량)배, 예를 들면, 5 내지 30 (부피/중량)배, 5 내지 20 (부피/중량)배, 10 내지 30 (부피/중량)배, 또는 10 내지 20배 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 시지지움 포르모슘 추출물 100 g에 대하여 상기 분획 용매를 100 ml 내지 3000 ml 첨가하는 것을 포함할 수 있다.
상기 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물은 시지지움 포르모슘 추출물에 비해 트리테르펜(triterpene) 계열의 화합물인 아시아틱산(asiatic acid), 마데카식산(madecassic acid), 콜로소릭산(colosolic acid), 마슬리닉산(maslinic acid), 베툴리닉산(betulinic acid), 우르솔릭산(ursolic acid) 또는 올레아놀릭산(oleanolic acid)을 고농도로 함유하고 있어, 시지지움 포르모슘 추출물에 비해 항염증, 항알레르기 또는 피부 재생 효과가 더욱 우수한 효과가 있다. 이에 따라, 상기 화장료 조성물은 피부 염증 개선용인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 염증"은 염증유발인자 또는 방사선조사 등 유해한 자극으로 인해 인체 면역체계를 과도하게 항진시켜 대식세포와 같은 면역세포에서 분비되는 IL-6(Interleukin-6) 또는 TNF-α(Tumor necrosis factor-α)과 같은 염증유발 물질(염증성 사이토카인)에 의해 유발되는 질환을 의미할 수 있다. 일 구체예에 따른 상기 조성물은 염증성 사이토카인의 활성을 감소시켜 항염증, 항알레르기 또는 피부 재생 효과가 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 연화제, 습윤제, 및 점증제를 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 연화제는 세테아릴알코올, 세틸팔미테이트, 밀납, 스쿠알란, 세틸에틸헥사노에이트 및 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있고, 상기 습윤제는 1,2-헥산다이올, 다이프로필렌글라이콜 및 글리세린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있으며, 상기 점증제는 잔탄검 및 암모늄아크릴로일다이메틸타우레이트/브이피코폴리머로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
시지지움 포르모슘 추출물은 트리테르펜 계열의 화합물 뿐만 아니라 아미노산 및 당과 같은 식물대사체를 다량 함유하고 있어, 이를 포함한 화장품의 경우 색변화, 점도 불안정 및 유화 안정성과 같은 문제점이 있다. 이와 달리, 상기 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물은 트리테르펜 계열의 화합물을 고농도로 함유하고 있어, 이를 포함한 화장품의 경우 색변화가 적고 점도가 안정되어 안정성이 더욱 우수한 효과가 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 포함할 수 있다.
상기 화장용 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 수분 크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이, 파우더, 젤, 로션 및 연고로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장용 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 피부외용제 조성물을 제공한다.
상기 피부 외용제는, 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 피부 외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.
상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
또 다른 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 건강 기능성 식품은 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분 (이하, '기능성 원료')을 사용하여 제조한 식품으로, 건강을 유지하거나 소정의 질병 또는 증상을 예방 및/또는 개선하는데 도움을 주는 모든 식품을 의미하며, 최종 제품 형태에는 특별한 제한이 없다. 예컨대, 상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 겔, 젤리, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차, 또는 건강 음료로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 건강 기능성 식품에 함유된 유효성분 (즉, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물)의 함량은 식품의 형태, 소망하는 용도 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없으며, 예컨대, 전체 식품 중량의 0.1 내지 50 중량%일 수 있다.
상기 건강 기능성 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 또는 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 중진제 (치즈, 초콜릿등), 펙트산 또는 그의 염, 알긴산 또는 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 함유할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 전체 건강 기능성 식품 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 양상은 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 피부 염증성 질환은 피부 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "예방(prevention)"은 질환, 장애, 또는 그의 부수적 증상의 발병 또는 재발을 부분적으로 또는 완전히 지연시키거나 방지하거나, 질환 또는 장애의 획득 또는 재획득을 막거나, 질환 또는 장애의 획득의 위험을 감소시키는 방법을 말한다. 예를 들어, 상기 예방은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 염증 또는 염증 관련 질환, 장애, 또는 증상의 발생을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.
본 명세서에서 용어 "개선"이란 상태의 완화 도는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "치료"는 병적 증상의 경감 또는 개선, 질환의 부위의 감소, 질환 진행의 지연 또는 완화, 질환 상태 또는 증상의 개선, 경감 또는 안정화, 부분적 또는 완전한 회복, 생존의 연장, 기타 다른 이로운 치료 결과 등을 모두 포함하는 의미로 사용된다.
본 명세서에서 용어 "약학적 조성물"은, 대상체로의 투여 시에 몇몇 유리한 효과를 부여하는 분자 또는 화합물을 지칭할 수 있다. 유리한 효과는 진단적 결정을 가능하게 하는 것; 질병, 증상, 장애 또는 병태의 개선; 질병, 증상, 장애 또는 질환의 발병의 감소 또는 예방; 및 일반적으로 질병, 증상, 장애 또는 병태의 대응을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 임상투여시 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 비경구 투여는 직장, 정맥, 복막, 근육, 동맥, 경피, 비강(Nasal), 흡입, 안구 및 피하와 같은 경구 이외의 투여경로를 통한 투여를 의미할 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 수성 또는 유성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 등의 형태로 제제화될 수 있으며, 제제화를 위하여 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 약학적 조성물을 제제화할 경우에 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 마크로골, 트윈(Tween) 61, 카카오지, 리우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(Carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 탄수화물, 아스코르브산(Ascorbic acid) 또는 글루타치온(Glutathione)과 같은 항산화제(Antioxidants), 킬레이트화제(Chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(Stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양할 수 있다. 또한, 상기 약학 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있다. 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 약학적 조성물의 투여량은 1일 1 ug/kg/일 내지 1,OOO mg/kg/일일 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 염증의 치유를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 발명에 대해 기술한 용어 및 방법 등은 각 발명들 간에 동일하게 적용된다.
일 양상에 따른 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 의하면, 염증성 사이토카인의 발현을 억제함으로써 염증 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있고, 이를 포함한 화장품의 안정성이 높은 효과가 있다.
도 1은 세포독성을 확인한 결과 그래프이다:
도 1a는 시지지움 포르모슘 추출물의 세포독성을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 2b는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 세포독성을 확인한 결과 그래프이다.
도 2는 UVB 조사 후, COX-2의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 2a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 COX-2의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 2b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 COX-2의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 3은 UVB 조사 후, IL-1β의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 3a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 IL-1β의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 3b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-1β의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 4는 UVB 조사 후, IL-6의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 4a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 IL-6의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 4b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-6의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 5는 UVB 조사 후, IL-8의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 5a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 IL-8의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 5b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-8의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 6은 UVB 조사 후, TNF-α의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 6a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 TNF-α의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 6b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 TNF-α의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 7은 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-6의 발현을 비교한 그래프이다.
도 8은 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-1β의 발현을 비교한 그래프이다.
도 9는 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-8의 발현을 비교한 그래프이다.
도 10은 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 COX-2의 발현을 비교한 그래프이다.
도 11은 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 명도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 12는 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 색상 변화를 나타낸 그래프이다.
도 13은 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 채도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 14는 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 점도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 1a는 시지지움 포르모슘 추출물의 세포독성을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 2b는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 세포독성을 확인한 결과 그래프이다.
도 2는 UVB 조사 후, COX-2의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 2a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 COX-2의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 2b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 COX-2의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 3은 UVB 조사 후, IL-1β의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 3a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 IL-1β의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 3b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-1β의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 4는 UVB 조사 후, IL-6의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 4a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 IL-6의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 4b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-6의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 5는 UVB 조사 후, IL-8의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 5a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 IL-8의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 5b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-8의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 6은 UVB 조사 후, TNF-α의 발현을 확인한 결과 그래프이다:
도 6a는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물을 처리하여 TNF-α의 발현을 확인한 결과 그래프이고; 및 도 6b는 UVB 조사 후, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 TNF-α의 발현을 확인한 결과 그래프이다.
도 7은 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-6의 발현을 비교한 그래프이다.
도 8은 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-1β의 발현을 비교한 그래프이다.
도 9는 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 IL-8의 발현을 비교한 그래프이다.
도 10은 UVB 조사 후, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 처리하여 COX-2의 발현을 비교한 그래프이다.
도 11은 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 명도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 12는 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 색상 변화를 나타낸 그래프이다.
도 13은 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 채도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 14는 시지지움 포르모슘 추출물 또는 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 점도 변화를 나타낸 그래프이다.
이하에서는 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하고자 하나, 이는 예시적인 것에 불과할 뿐 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 아래 기재된 실시예들은 발명의 본질적인 요지를 벗어나지 않는 범위에서 변형될 수 있음은 당업자들에게 있어 자명하다.
실시예 1. 시지지움 포르모슘 추출물의 제조
베트남 하노이시의 Nguyen Van Loung씨로부터 수확되어 건조된 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 잎을 구입하여 건조 시지지움 포르모슘 잎 50 kg에 70 %(v/v) 에탄올 수용액 600 L를 더하여 50 ℃에서 24시간 동안 추출하였고, 이를 여과하여 1차 추출액을 얻었다. 여과된 시지지움 포르모슘에 95 %(v/v) 에탄올 수용액 600 L을 더하여 50 ℃에서 24시간 동안 추출하였고, 이를 여과하여 2차 추출액을 얻었다. 상기 추출액을 농축 후 동결 건조하여 최종 추출물을 수득하였다.
실시예 2-1. 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물 제조를 위한 증류수 추가 정제 1차 세척액의 제조
상기 실시예 1에서 수득한 추출물 100 g에 증류수 2000 ml를 첨가하여 1분간 섞어준 후 원심분리 하여 세척액을 회수하였다.
실시예 2-2. 시지지움 포르모슘 추출물 증류수 추가 정제 2차 세척액의 제조
상기 실시예 2-1에서 원심분리하여 분리된 침전물에 증류수 2000 ml를 첨가하여 1분간 섞어준 후 원심분리 하여 세척액을 회수하였다.
실시예 2-3. 시지지움 포르모슘 추출물 증류수 추가 정제 3차 세척액의 제조
상기 실시예 2-2에서 원심분리하여 분리된 침전물에 증류수 2000 ml를 첨가하여 1분간 섞어준 후 원심분리 하여 세척액을 회수하였다.
실시예 2-4. 증류수 추가 정제된 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물 제조
상기 실시예 2-3에서 원심분리하여 분리된 침전물을 동결 건조하여 트리테르펜(triterpene) 고함량으로 함유된 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물을 수득하였다.
실험예 1. 증류수 추가 정제 후 수율 확인
증류수 추가 정제 후 수율 확인 결과를 표 1에 나타내었다.
| 추가 정제 전 무게 (g) | 추가 정제 후 무게 (g) | 수율 (%) |
| 100.0 | 38.6 | 38.6 |
실험예 2. LC-MS/MS를 이용한 증류수 추가 정제된 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 유효성분 함량 변화 확인
(1) LC-MS/MS 분석 조건
하기 표 2 및 표 3의 조건으로 LC-MS/MS 분석을 진행하였다.
| 기구 | Agilent 6470 Triple quadrupole (QQQ) |
| 컬럼 | Agilent Zorbax Eclipse plus C18 (2.1Х100 mm) |
| 흐름 | 0.2 mL/분 |
| 용매 | (A) 물 중 5mM 암모늄 포르메이트 (B) 메탄올 중 5mM 암모늄 포르메이트 |
| 시간 (분) | A (%) | B (%) |
| 0 | 30 | 70 |
| 1 | 30 | 70 |
| 3 | 20 | 80 |
| 8 | 18 | 82 |
| 20 | 16 | 84 |
| 20.5 | 0 | 100 |
| 25.5 | 0 | 100 |
| 26 | 30 | 70 |
| 35 | 30 | 70 |
(2) 분석 결과
실시예 1에서 수득된 추출물 및 실시예 2-1 내지 2-4에서 수득된 세척액 및 분획물의 유효성분 9가지를 정량하여 ppm 단위로 하기 표 4에 나타내었고, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 시지지움 포르모슘 추출물보다 유효성분 함량이 더 높은 것을 확인하였다.
| Madecassic acid |
Asiatic acid |
Maslinic acid |
Corosolic acid |
Betulinic acid |
Oleanolic acid |
Ursolic acid |
Total | |
| 실시예 1 (추출물) |
4100 | 30900 | 7500 | 17600 | 19900 | 1400 | 4100 | 85500 |
| 실시예 2-1 | 0.3 | 9.2 | 3.1 | 11.0 | 7.8 | 0.6 | 2.1 | 34.1 |
| 실시예 2-2 | 1.0 | 11.8 | 4.7 | 8.2 | 9.5 | 0.5 | 1.1 | 36.8 |
| 실시예 2-3 | 0.7 | 10.2 | 4.5 | 8.6 | 8.8 | 0.6 | 1.3 | 34.7 |
| 실시예 2-4 (분획물) |
11600 | 106200 | 21300 | 49400 | 51600 | 4100 | 11400 | 255600 |
실험예 3. 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물의 세포 독성 확인
케라티노사이트(keratinocyte) 세포주인 HaCaT 세포에 상기 실시예 1 및 실시예 2-4에서 수득된 추출물 및 분획물을 각각 처리하여 각 24 시간 후에 MTT 용액으로 세포독성을 확인하였다.
구체적으로, HaCaT 세포를 6 내지 11회 계대배양하고 48 웰 플레이트에 200 ul 배지(5 % FBS, DMEM) 중 0.05 X 106cells/well로 파종하여 밤새 배양하였다. 배양된 세포에 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물을 농도별로 각각 처리한 후 37 ℃에서 24시간 동안 배양하였다. MTT 용액 (DPBS 중 5 mg/ml)을 각각 10 ul 처리한 후 3 시간 동안 반응시켰다. MTT 용액이 함유된 배지를 제거한 후, DMSO를 300 ul 넣어 5 분간 섞어 주었다. 피펫팅하면서 96 웰 플레이트에 100 ul씩 그대로 옮겨서 분주한 뒤, 540 nm에서 측정하여 세포 생존율 (%)을 계산하였다.
그 결과, 도 1에서 나타낸 바와 같이 시지지움 포르모슘 추출물의 경우 50 ug/ml 농도에서는 80 % 이상의 세포 생존율을 확인하였고, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 경우 25 ug/ml 농도에서 약 80 %의 세포 생존율을 확인하였다.
실험예 4. 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물의 염증 억제 효과 비교
UVB를 조사하여 산화스트레스를 주었을 때 발생하는 세포의 염증반응에 대하여 염증성 사이토카인 발현을 확인함으로써 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 항염증 효과를 확인하였다.
구체적으로, 4회 계대배양된 HaCaT 세포를 6 웰 플레이트에 배지 2 ml 중 0.5 X 106 cells/ml로 파종하고, 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물을 각각 농도별로 6 시간 전처리하였다. 양성 대조군으로는 비타민 C를 처리하였다. 배지를 제거한 뒤, DPBS로 2회 세척하였다. DPBS 500 ul를 넣은 상태에서 30초간 UVB 20 mJ를 조사하였다. DPBS를 제거하고 각각 15 ug/ml씩 용해되어 있는 DMEM 무혈청 배지 2 ml을 넣고 18 시간 동안 배양하였다. 그 다음, RNA를 추출하여 중합 효소 연쇄 반응 시험(PCR)으로 염증성 사이토카인 발현을 확인하였다.
그 결과, 도 2 내지 도 6에 나타낸 바와 같이 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 비타민 C 및 추출물보다 염증성 사이토카인 발현을 더 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다.
실험예 5. 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물 및 병풀 추출물의 유효성분 함량 비교
상기 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물과 병풀 2 종류의 추출물의 유효성분을 비교하였다.
구체적으로, 건조된 시지지움 포르모슘 잎 2 g에 70 % 에탄올 40 ml을 첨가하여 실시예 1 및 실시예 2-1 내지 2-4와 같은 방법으로 추출물 및 분획물을 제조하고, 2 종류의 병풀을 각각 2 g에 70% 에탄올 40 ml을 첨가 후 50 ℃에서 24시간 동안 추출하여 추출액을 회수하였다. 그 다음, 표 2 및 표 3의 조건으로 LC-MS/MS 분석을 진행하여 유효성분 9가지를 정량하였고 유효성분의 함량은 ppm 단위로 하기 표 5에 나타내었다.
그 결과, 병풀 추출물과 비교하여 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 유효성분 함량이 더 높은 것을 확인하였다.
| Madecassic acid |
Asiatic acid |
Maslinic acid |
Corosolic acid |
Betulinic acid |
Oleanolic acid |
Ursolic acid |
Total | |
| 시지지움 포르모슘 추출물 | 49.1±3 | 629.5±35.5 | 51.9±3.4 | 117±2.9 | 263.5±25.4 | 16.2±1 | 40.6±2.7 | 1235.2 |
| 시지지움 포르모슘 추출물 1차 세척액 | 14.4±0.2 | 340.6±32.5 | 47.4±1.7 | 191.3±21.1 | 153.3±31.5 | 11.1±0.1 | 32.7±1.6 | 801.2 |
| 시지지움 포르모슘 추출물 2차 세척액 | 19.4±1.7 | 225.2±56.1 | 41.8±3.2 | 200.7±49.5 | 294.3±55 | 9.4±1 | 30.1±2.3 | 829.4 |
| 시지지움 포르모슘 추출물 3차 세척액 | 13.2±1.1 | 387.6±42.7 | 43±0.4 | 183±33.4 | 134.8±17.7 | 9.4±0.2 | 27.9±0 | 806 |
| 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물 | 41±0.8 | 503.1±6 | 107.9±1.1 | 310.5±1 | 302.4±15.6 | 26.5±0.2 | 67.6±1.1 | 1376.6 |
| 병풀 1 | 102.0±22.4 | 190.4±59.7 | N/D | N/D | N/D | N/D | N/D | 292.9 |
| 병풀 2 | 22.3±0.6 | 38.4±1.1 | N/D | N/D | N/D | N/D | N/D | 60.7 |
실험예 6. 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물의 염증 억제 효과 비교
UVB를 조사하여 산화스트레스를 주었을 때 발생하는 세포의 염증반응에 대하여 염증성 사이토카인 발현을 확인함으로써 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 항염증 효과를 확인하였다.
구체적으로, 16회 계대배양된 HaCaT 세포를 6 웰 플레이트에 배지 2 ml 중 0.5 X 106 cells/ml로 파종하고, 병풀 추출물, 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물을 각각 6 시간 전처리하였다. 배지를 제거한 뒤, DPBS로 2회 세척하였다. DPBS 500 ul를 넣은 상태에서 30초간 UVB 20 mJ를 조사하였다. DPBS를 제거하고 비타민 C는 8.8 ppm, 시지지움 포르모슘 추출물 및 분획물은 0.43 및 2.14 ppm의 농도별로 각각 용해되어 있는 DMEM 무혈청 배지 2 ml을 넣고 18 시간 동안 배양하였다. 그 다음, RNA를 추출하여 중합 효소 연쇄 반응 시험(PCR)으로 염증성 사이토카인 발현을 확인하였다.
그 결과, 도 7 내지 도 10에 나타낸 바와 같이 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 병풀 추출물 및 시지지움 포르모슘 추출물보다 염증성 사이토카인 발현을 더 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 병풀 추출물 및 시지지움 포르모슘 추출물보다 염증 억제 효과가 더 높음을 나타낸다.
제조예 1. 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림의 제조
시지지움 포르모슘 추출물의 화장품 소재 특성 확인을 위해 실시예 1에서 수득된 추출물을 이용하여 하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상의 방법으로 크림을 제조하였고 실시예 1 및 실시예 2-4에서 수득된 추출물 및 분획물의 유효성분 함량 차이로 인해 크림 제조 시 함량을 달리하였다.
| 원료명 | 기능 | 함량(중량%) |
| 실시예 1에서 수득된 추출물 | 기능성 성분 | 0.3 |
| 세테아릴알코올 | 연화제 | 5.00 |
| 세틸팔미테이트 | 연화제 | 2.00 |
| 글리세릴스테아레이트 | 유화제 | 2.00 |
| 밀납 | 연화제 | 1.00 |
| 폴리글리세릴-3메틸글루코오스다이스테아레이트 | 유화제 | 2.00 |
| 스쿠알란 | 연화제 | 5.00 |
| 세틸에틸헥사노에이트 | 연화제 | 3.00 |
| 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 | 연화제 | 3.00 |
| 1,2-헥산다이올 | 습윤제 | 3.00 |
| 다이프로필렌글라이콜 | 습윤제 | 3.00 |
| 글리세린 | 습윤제 | 5.00 |
| 잔탄검 | 점증제 | 0.10 |
| 암모늄아크릴로일다이메틸타우레이트/브이피코폴리머 | 점증제 | 0.30 |
| 향료 | 향료 | 적량 |
| 정제수 | 용제 | to 100 |
제조예 2. 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 함유된 크림의 제조
시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 화장품 소재 특성 확인을 위해 실시예 2-4에서 수득된 분획물을 이용하여 하기 표 6에 기재된 조성에 따라 통상의 방법으로 크림을 제조하였고 실시예 1 및 실시예 2-4에서 수득된 추출물 및 분획물의 유효성분 함량 차이로 인해 크림 제조 시 함량을 달리하였다.
| 원료명 | 기능 | 함량(중량%) |
| 실시예 2 내지 4에서 수득된 세척액 또는 분획물 | 기능성 성분 | 0.1 |
| 세테아릴알코올 | 연화제 | 5.00 |
| 세틸팔미테이트 | 연화제 | 2.00 |
| 글리세릴스테아레이트 | 유화제 | 2.00 |
| 밀납 | 연화제 | 1.00 |
| 폴리글리세릴-3메틸글루코오스다이스테아레이트 | 유화제 | 2.00 |
| 스쿠알란 | 연화제 | 5.00 |
| 세틸에틸헥사노에이트 | 연화제 | 3.00 |
| 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 | 연화제 | 3.00 |
| 1,2-헥산다이올 | 습윤제 | 3.00 |
| 다이프로필렌글라이콜 | 습윤제 | 3.00 |
| 글리세린 | 습윤제 | 5.00 |
| 잔탄검 | 점증제 | 0.10 |
| 암모늄아크릴로일다이메틸타우레이트/브이피코폴리머 | 점증제 | 0.30 |
| 향료 | 향료 | 적량 |
| 정제수 | 용제 | to 100 |
실험예 3. 가속 시험을 통한 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물의 화장품 소재 특성 확인
제조예 1에서 제조된 크림을 45 ℃에서 6주간 보관하면서 1주일마다 pH와 색도를 측정하여 표 7과 도 11 내지 13으로 나타내었고 도 11 내지 13은 명도(L), 색상(a), 채도(b)값의 0주차 측정치를 기준으로 백분율(%)로 나타내었다. 점도 측정 결과는 도 14에 나타내었으며 빨간 선으로 일반적인 크림의 점도를 표시하였다.
그 결과, 도 11 내지 도 14에 나타낸 바와 같이, 시지지움 포르모슘 추출물의 분획물이 함유된 크림이 시지지움 포르모슘 추출물이 함유된 크림보다 약 5000cP 높은 점도를 유지하였고, 명도(L)가 더 높았으며 변화의 정도도 적었다. 또한, 색상(a) 및 채도(b) 변화도 더 적음을 확인하여, 제형이 더 안정적임을 확인하였다.
| 0주차 | 1주차 | 2주차 | 3주차 | 4주차 | 5주차 | 6주차 | |
| 제조예 1에서 수득된 추출물이 함유된 크림의 pH | 6.35 | 6.24 | 6.04 | 6.05 | 6.02 | 6.01 | 5.96 |
| 제조예 1에서 수득된 분획물이 함유된 크림의 pH | 6.64 | 6.47 | 6.27 | 6.29 | 6.27 | 6.21 | 6.15 |
Claims (12)
- 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 피부 염증 개선용인 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 분획물은 상기 추출물의 헥산 분획물, 에틸 아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 또는 물 분획물인 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 분획물은 분획을 1회 내지 5회 반복 수행하여 얻어진 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 연화제, 습윤제, 및 점증제를 더 포함하는 것인 화장료 조성물.
- 청구항 5에 있어서, 상기 연화제는 세테아릴알코올, 세틸팔미테이트, 밀납, 스쿠알란, 세틸에틸헥사노에이트 및 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화장료 조성물.
- 청구항 5에 있어서, 상기 습윤제는 1,2-헥산다이올, 다이프로필렌글라이콜 및 글리세린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화장료 조성물.
- 청구항 5에 있어서, 상기 점증제는 잔탄검 및 암모늄아크릴로일다이메틸타우레이트/브이피코폴리머로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화장료 조성물.
- 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 피부외용제 조성물.
- 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 건강기능식품.
- 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 청구항 11에 있어서, 상기 피부 염증성 질환은 피부 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
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|---|---|---|---|
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| KR101704996B1 (ko) * | 2016-06-08 | 2017-02-09 | 충남대학교산학협력단 | 시지지움 포르모슘(Syzygium formosum) 추출물을 포함하는 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
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| Thi Minh Nguyet Nguyen 외 6명. Anti-allergic effects of the ethanol extract of Syzygium formosum (Wall.) Masam leaves and its immunoregulatory mechanisms. Journal of Ethnopharmacology, 2018 * |
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