KR20230036753A

KR20230036753A - 아토피 피부염 개선 및 보습 증진용 효소 추출액의 나노에멀젼

Info

Publication number: KR20230036753A
Application number: KR1020210119610A
Authority: KR
Inventors: 최미정
Original assignee: 주식회사 바이오의생명공학연구소
Priority date: 2021-09-08
Filing date: 2021-09-08
Publication date: 2023-03-15
Also published as: KR102670380B1

Abstract

본 발명은 아토피 피부염 개선 및 보습 증진용 효소 추출액의 나노에멀젼 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 구두치 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 발현하는 효과가 있다.

Description

아토피 피부염 개선 및 보습 증진용 효소 추출액의 나노에멀젼 {NANOEMULSION OF ENZYME EXTRACTION LIQUID FOR IMPROVING ATOPIC DERMATITIS AND MOISTURIZING}

본 발명은 아토피 피부염 개선 및 보습 증진용 효소 추출액의 나노에멀젼 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 구두치(Tinospora cordifolia)를 포함하는 추출물을 유효성분으로 하여 아토피질환을 치료 또는 예방하고, 피부보습과 피부노화를 방지하는 화장료, 약학적 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.

피부 건강은 건강한 삶을 길게 유지하는데 중요하며, 아름다움과 젊음의 표현이기도 한 것으로, 다양한 피부 상태를 치료 및/또는 예방하기 위한 다양한 제품 및 치료 방법이 있다.

그러나, 이러한 치료법 중 대다수는 부작용이 있는 가혹한 처방이나 시술을 사용하고 있으며, 자극이 적은 치료법들은 모든 사람들에 효과적인 것은 아니다.

일반적인 피부 질환의 예로, 아토피 피부염이 있으며, 피부의 땀샘과 모낭에서 호르몬 및 기타 불순물의 작용으로 발생한다. 이러한 질환과 관련하여, 사람들이 약 85%가 일생 동안 어느 정도 영향을 받는다. 아토피 피부염은 피지선과 모낭의 막힘으로 발생하는 염증성 질환으로 특정 박테리아의 감염에 의한 것일 수 있다. 피지는 해당 박테리아의 영양소 공급원을 제공하여 박테리아가 증식하고 면포반 또는 "뾰루지"가 생성될 수 있는 이상적인 환경을 만든다.

면포반은 전형적으로 피지 분비 억제제, 각질화 억제제, 항균제 및/또는 항염증제와 같은 활성 약물 물질을 함유하는 크림 또는 연고를 사용하여 치료한다. 그러나, 이들 약물 물질 중 대다수는 부작용을 나타낸다. 예를 들어, 약한 염증성 염증은 일반적으로 벤조일 퍼옥사이드(benzoyl peroxide), 살리실산(salicylic acid), 또는 레티노이드(retinoids) 포함하고, 처방전 없이 구입할 수 있는 국소 약물로 치료한다. 벤조일 퍼옥사이드는 불투명하거나 하얀색으로 피부에 잔여할 수 있고, 피부를 매우 건조하게 할 수 있다. 또한, 벤조일 퍼옥사이드에 의해서 치료 부위에 접촉하는 의복과 리넨이 표백될 수 있다. 더욱이, 세계 여러 나라는 정부 규제를 통해 벤조일 퍼옥사이드의 잠재적 독성을 이유로 이의 사용을 배제하거나 제한한다. 벤조일 퍼옥사이드의 대체제가 알려져 있지만, 이들 대체제 또한 특정 부작용을 나타낸다. 예를 들어, 종종 에스트로겐(estrogen) 및 에티닐 에스트라디올(ethinyl estradiol)과 같은 에스트로겐 유사 화합물이 처방될 수 있는데, 이러한 약물은 일반적으로 피지 분비 억제제로 효과를 나타내지만, 메스꺼움, 두통, 체중 증가, 기분 변화, 우울증 및 기타 부작용과 관련이 있다.

또한, 일부 아토피 치료제는 클로르헥시딘 글루코네이트 및 벤즈알코늄 클로라이드를 포함하는 항균성분을 함유한다. 이러한 항균제는 피부 자극과 피부 균열을 유발할 수 있다. 또한, 항균제는 야생형 동물군에서 발생하는 내성 균주로 이어질 수 있다.

또한, 살리실산, 이들의 염과 같은 치료제는 죽은 피부 세포를 벗겨내고 모공을 열고 배출하는데 널리 사용된다. 치료제는 한계가 있는데, 고 산성의 pH에서 고농도일 때, 심각한 자극을 유발할 수 있다. 또한, 치료제는 직접적으로 염증을 감소시키는데 제한된 영향을 보였다.

따라서, 예를 들어 아토피질환을 치료 또는 예방하고, 피부보습과 피부노화를 방지할 수 있는 안전하고 효과적인 기술 개발이 필요한 실정이다.

한편, 구두치(Tinospora cordifolia)는 새모래덩굴과(Menispermaceae)에 속하는 초본 덩굴이다. 이 식물의 잎 및 줄기를 비롯한 여러 부분들의 추출물은 전통적인 의약 제제에 사용된다. 그 줄기는 쓰고, 구충작용, 지혈작용, 변경작용(alterant), 항경련성, 해열성이고, 구토억제작용, 소화작용, 건위작용, 변비해소 작용, 적혈구 생성 촉진 작용 또는 혈중 헤모글로빈 양의 증가 작용(haematinic), 거담작용, 강장작용이 있는 것으로 알려져 있다(한국공개특허 제2019-0132420호). 그러나, 아토피질환을 치료 또는 예방하고, 피부보습과 피부노화 방지와 관련하여 구두치(Tinospora cordifolia)에 대해 개시되거나 공개된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 피부 건강을 위한 조성물에 대한 연구를 하던 중, 구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 사용한 혼합물로부터 아토피질환을 치료 또는 예방하고, 피부보습과 피부노화를 방지할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 구두치(Tinospora cordifolia)를 포함하는 추출물을 유효성분으로 하는 효소 추출액의 나노에멀젼을 이용한 아토피질환을 치료 또는 예방하고, 피부보습과 피부노화를 방지하는 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 상기 목적 및 기타 목적들은 하기 설명된 본 발명에 의하여 모두 달성될 수 있다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은

구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 이용한 고상의 건조물에 추출용매와 다당류 분해효소 및 섬유소 분해효소를 이용하여 얻어진 효소 추출액의 나노에멀젼을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물을 제공한다.

상기 구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)는 구두치(a) : 님(b) : 홍화(c)가 1:0.5~1.5:0.5~1.5 중량비를 만족할 수 있다.

상기 추출용매는 상기 고상의 건조물 중량 대비 5 내지 20 배의 중량, 그리고 상기 다당류 분해효소와 섬유소 분해효소는, 상기 고상의 건조물과 추출용매의 총 합량 대비 0.01 내지 0.5 배의 부피비일 수 있다.

상기 다당류 분해효소 및 섬유소 분해효소는 1: 0.5~1.5의 부피비로 포함할 수 있다.

상기 효소 처리는 80 내지 140 ℃ 하에, 0.1 내지 5시간 동안 수행할 수 있다.

상기 나노에멀젼은 상기 효소 추출액을 포함하는 유상성분과 폴리올을 80 내지 140 ℃ 하에 500 내지 5000 rpm 교반하여 수득한 유중수(W/O)형 에멀젼을 정제수로 급냉시킨 수중수(O/W)형 에멀젼일 수 있다.

본 발명에 따르면, 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 발현하는 구두치 유래 효소 추출액의 나노에멀젼을 유효성분으로 하는 아토피 피부염을 예방 및 치료하고 피부보습과 노화 방지하기 위한 조성물을 제공할 수 있다.

도 1은 실시예 1에서 수득된 샘플(TAC-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(TAC-1 내지 TAC-3)의 4종에 대한 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거활성을 대비한 그래프이다.
도 2는 실시예 1에서 수득된 샘플(TAC-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(TAC-1 내지 TAC-3)의 4종에 대한 세포독성을 대비한 그래프이다.
도 3은 실시예 1에서 수득된 샘플(TAC-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(TAC-1 내지 TAC-3)의 4종에 대한 히알루론산 생성량 평가결과를 대비한 그래프이다.

이하 본 발명에 대한 이해를 돕기 위하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니되며, 발명자는 발명을 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 점을 감안하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야 한다.

본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 이용한 고상(solid phase)의 건조물을 제조하고 여기에 추출용매와 효소를 이용하여 얻어진 효소 추출액을 나노에멀젼화하는 방식으로 추출물을 제조할 경우 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 발현함으로써, 아토피 피부염을 예방 및 치료하고 피부보습과 노화 방지하기 위한 조성물을 제공할 수 있다.

열수 추출물 나노에멀젼, 에탄올 추출물 나노에멀젼, 혹은 열수 효소추출액의 나노에멀젼 등은 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 나타내지 않았으며, 또한 아래의 실험예에서 제시되어 있지 않지만, 구두치(Tinospora cordifolia)의 함량, 님(Azadirachta)의 함량, 및 홍화(Carthamus tinctorius L)의 합량이 1:0.5~1.5:0.5~1.5의 중량비를 만족하지 못하는 경우에도 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 나타내지 않거나 효과가 감소하였다.

본 발명의 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 구현하는 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물은 구두치(Tinospora cordifolia)에 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)의 1:0.5~1.5:0.5~1.5의 중량비로 혼합한 다음 수득한 고상물(solid phase product)에 추출용매와 효소를 이용하여 얻어진 효소 추출액의 나노에멀젼을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 발명의 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물은 바람직하게는 구두치(Tinospora cordifolia)에 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 1:0.5~1.5:0.5~1.5의 중량비로 혼합한 다음 수득한 고상물(solid phase product)에 추출용매와 다당류 분해효소 및 섬유소 분해효소를 이용하여 효소 처리하여 얻어진 효소 추출액의 나노에멀젼을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 기재에서 유효성분은 달리 특정하지 않는 한, 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 기재에서 추출물은 달리 특정하지 않는 한, 추출 대상인 그 고상물 자체를 추출용매 및 효소를 이용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출, 초고압 추출, 발효, 효수분해 등의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합, 정치시켜 얻은 분획물, 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다.

본 기재에서, 상기 고상물의 형상은 특별히 제한하지 않으며, 환(pills) 형태, 과립 형태, 가루 형태 등일 수 있다.

상기 고상물은 구두치(Tinospora cordifolia)와, 님(Azadirachta) 그리고 홍화(Carthamus tinctorius L)을 깨끗이 세정한 다음 고상물 형태로 얻어질 수 있다. 깨끗이 세정한 후에는 자연건조(음건), 열풍건조 등 임의의 방식으로 건조됨으로써 수분의 일부가 제거된 후에 파쇄한 다음 추출용매를 이용한 일차적인 추출 처리에 사용될 수 있다.

본 발명에서, 구두치, 님 및 홍화는 달리 특정하지 않는 한, 다양한 기관 또는 부분(예 잎, 가지, 꽃, 뿌리, 줄기, 열매 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 각각의 잎 또는 열매로부터 얻은 추출물을 의미한다.

님(Azadirachta)은 'Neem' 또는 'Nim tree' 라고 불리며 멀구슬 나무과와 비슷한 종이다. 인도와 네팔, 파키스탄, 방글라데시, 스리랑카, 몰디브와 같은 열대 및 아열대 지역에서 서식하고 높이가 15-20m로 급성장 하는 특징을 가지고 있다. 인도에서 해충 방지제, 치과위생 및 전통의학으로 사용되고 있다.

또한, 홍화는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 두해살이풀이다. 국화과(Compositae)에 속하는 식물로서, 그의 꽃잎은 부인병에 사용되는 약제로, 현대적인 약리작용으로는 대퇴동맥 혈류량을 중가시키고, 심근경색증을 감소시키며, 혈소판 응집을 저해하고, 항암작용, 항염증 및 진통작용에 쓰이고 있다.

또한, 분쇄물 형태 그대로, 또는 단계별 증숙한 후 건조시킨 상태로 사용될 수 있으며, 단계별 증숙한 후 건조시킨 상태로 사용할 경우 보관의 유용성 및 유효성분의 증대 효과를 제공할 수 있다.

상기 고상의 건조물을 추출용매로 희석한 다음 50 내지 85℃에서 24시간 이하로 환류 추출 등 임의의 방법을 제공할 수 있다.

상기 추출용매는 예를 들어, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있고, 추출효율을 고려하여 알코올을 사용하는 것이 바람직하다.

상기 알코올로는 50 내지 90%(v/v) 에탄올을 사용하는 것이, 높은 항균력과 극성을 제공할 수 있어 바람직하며, 특히 70%(v/v) 에탄올의 경우에 농도가 더 높은 에탄올을 사용하는 것보다 살균력이 개선될 수 있다.

즉, 상기 추출물은 나팔꽃씨(Ipomoea nil), 월귤나무(Arctostaphylos uva-ursi) 및 사리카(Ashoka)를 이용한 고상의 건조물의 70% 에탄올 추출물일 수 있다.

상기 추출용매는 고상의 건조물 중량 기준으로 5 내지 20 배, 구체적인 예로 5 내지 15배일 수 있다. 이 경우에 후속 효소처리공정을 효과적으로 수행할 수 있다.

상기 추출용매를 이용한 처리는 60 내지 140 ℃ 하에, 0.1 내지 5시간 동안 수행할 수 있다. 이 경우에 유효물질 추출효율 증대를 제공할 수 있다. 구체적으로, 60 내지 90 ℃ 하에, 2 내지 4시간 동안 수행할 수 있다.

상기 추출용매를 이용한 처리는 리플럭스 하에 환류 추출용매를 사용하여 환류 냉각 추출을 반복할 수 있다. 상기 반복 추출 횟수는 5회 이하, 구체적인 예로 2 내지 3회일 수 있다.

수득된 환류 추출액에서 유리지방산은 제거하되 유효성분 손실은 없으며 효능에 영향을 주지 않는 정제 공정이 필요하며, 이를 위하여 미세 여과막을 사용하여 여과한 다음 감압 농축하여 유리지방산을 제거하는 방법이 바람직하고, 보다 우수한 효능효과를 제공하도록 미세 여과막은 1.0 ㎛ 이하, 바람직하게는 0.45 ㎛ 이하의 여과막을 사용하는 것이 더욱 바람직하다.

전술한 정제 공정을 거쳐 유효 추출물을 수득할 수 있다.

본 기재에서 유효 추출물은 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압농축 등의 방식으로 초음파 추출에 앞서 투입된 추출용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고상의 추출물이 포함된다.

또한, 상기 효소 처리는 다당류 분해효소와 섬유소 분해효소를 함께 사용하여 효소분해를 함으로써 기능성분을 더욱 증대시킬 수 있다.

상기 다당류 분해효소는 펙티넥스(Pectinex) 및 비스코자임(Viscozyme) 등의 상용 효소를 사용할 수 있다.

상기 펙티넥스(Pectinex)는 펙티나아제, 및 헤미셀룰라아제(hemicellulase)의 활성을 가지는 효소이다.

상기 비스코자임(Viscozyme)은 상용효소로서, 아스퍼질러스 아큘레아투스(Aspergillus aculeatus) 유래 아라바나아제, 셀룰라아제, β-글루카나아제, 헤미셀룰라아제, 자일라나아제를 포함하는 복합 효소(Beta-Glucanase)이다.

상기 섬유소 분해효소는 셀룰라아제(Cellulase)와 펙티나아제(Pectinase) 등의 상용 효소를 사용할 수 있다.

상기 셀룰라아제 효소는 셀룰로오스를 분해하고, 펙티나아제 효소는 펙탄질을 분해하는 효소이다. 식물세포의 각종 영양성분은 세포벽 안에 포함되어 있는데, 세포벽은 셀룰로오스, 펙틴질 등의 성분들이 단단하게 교차 연결을 하여 식물세포 형태를 잡아주고 있다.

상기 다당류 분해효소와 섬유소 분해효소는, 상기 고상의 건조물과 추출용매의 총 합량 대비 0.02 내지 0.5 배의 부피비, 또는 0.02 내지 0.1 배의 부피비로 사용될 수 있다. 상기 범위를 만족하면, 구두치와 님, 홍화의 효소분해를 최적화할 수 있다.

구체적으로, 상기 다당류 분해효소와 섬유소 분해효소는 1: 0.5~1.5의 부피비, 또는 1: 0.8~1.2의 부피비로 포함할 수 있다.

상기 효소 처리는 80 내지 140 ℃ 하에, 0.1 내지 5시간 동안 수행할 수 있다. 이 경우에 유효물질 추출효율 증대를 제공할 수 있다. 구체적으로, 상기 효소 처리는 80 내지 110 ℃ 하에, 1 내지 4시간 동안 50 내지 500 rpm으로 교반하며 수행할 수 있다.

상기 효소 처리에 의해 수득된 효소 추출액에 대해 나노에멀젼화 처리를 수행한다.

상기 나노에멀젼화 처리는 수득된 효소 추출액을 오일성분 등과 혼합한 유상성분과 수상성분을 배합하여 유화하여 유중수(W/O) 형 에멀젼을 제조한 다음 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인하고, 급냉시켜 수중수(O/W)형 나노에멀젼을 제조하는 처리법으로, 유화에 분산되는 상을 기준으로 하여 수중유형 수용성 상에 물에 섞이지 않는 통상 오일로 불리는 액체가 분산되어 가볍고 산뜩하며 수분감이 우수할 뿐 아니라 오일성분의 탈리현상을 방지하여 사용감이 끈적이고 무거워지지 않아 안정성과 사용감이 우수한 에멀젼을 제공할 수 있다.

구체적으로, 수득된 효소 추출액을 오일성분 등과 혼합하여 유상성분을 제공할 때, 가용화제를 포함할 수 있다.

상기 효소 추출액은 후술하는 수중수(O/W)형 나노에멀젼을 제공하는데 필요한 유상성분, 수성성분 및 냉각수의 총 100 중량% 중에 0.1 내지 10 중량%, 구체적인 예로 0.5 내지 5 중량%로 사용할 수 있다. 상기 범위를 만족하면 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는 효과와 더불어 피부 보습, 피부노화 방지 효과를 충분히 효과적으로 발휘할 수 있다.

상기 유상성분은 전술한 효소 추출액과 오일성분, 가용화제 등을 포함할 수 있다.

상기 오일성분은 일례로 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride), 에칠헥실팔미테이트(Ethylhexyl Palmitate), 세테아릴 올리베이트, 소르비탄올리베이트(Cetearyl Olivate, sorbitan olivate), 글리세릴 모노스테아레이트(Glyceryl Mono-Stearate), 비즈 왁스 (Bees wax), 카프릴하이드록사믹애씨드 (Caprylhydroxamic Acid), 옥탄다이올(Octanediol) 을 1종 이상 포함할 수 있다.

일례로 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드는 보습 기능, 피부컨디셔닝 기능, 피부유연화제 기능을 수행할 수 있다.

상기 오일성분은 후술하는 수중수(O/W)형 나노에멀젼을 제공하는데 필요한 유상성분, 수성성분 및 냉각수의 총 100 중량% 중에 10 내지 40 중량%, 구체적인 예로 10 내지 30 중량%로 사용할 수 있다. 상기 범위를 만족하면 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는 효과와 더불어 피부 보습, 피부노화 방지 효과를 충분히 효과적으로 발휘할 수 있다.

상기 가용화제는 일례로 자당에스테르계 물질들을 사용할 수 있다. 상기 가용화제는 본 발명에 악영향을 미치지 않는 범위 내에서 시판되는 제품들을 사용할 수 있으며, 구체적인 예로, TWEEN20, 40, 60, 80, SPAN 20, 40, 60, 80 등을 사용할 수 있다.

상기 가용화제는 후술하는 수중수(O/W)형 나노에멀젼을 제공하는데 필요한 유상성분, 수성성분 및 냉각수의 총 100 중량% 중에 1 내지 30 중량%, 구체적인 예로 5 내지 20 중량%로 사용할 수 있다. 상기 범위를 만족하면 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는 효과와 더불어 피부 보습, 피부노화 방지 효과를 충분히 효과적으로 발휘할 수 있다.

최적의 효과를 발휘하기 위하여, 상기 가용화제는 TWEEN계열과 SPAN계열을 1:0.1~0.5의 중량비, 또는 1:0.1~0.3의 중량비로 사용할 수 있다.

상기 유상성분은 80 내지 120℃에서 가온하여 액상용액으로 제조하며, 이 범위 내에서 가용화제와 계면활성제의 용해특성이 최적화될 수 있다.

상기 수상성분은 폴리올 성분과 수상용매를, 후술하는 수중수(O/W)형 나노에멀젼을 제공하는데 필요한 유상성분, 수성성분 및 냉각수의 총 100 중량% 중에 1 내지 30 중량%, 구체적인 예로 5 내지 25 중량%로 사용할 수 있다. 상기 범위를 만족하면 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는 효과와 더불어 피부 보습, 피부노화 방지 효과를 충분히 효과적으로 발휘할 수 있다.

최적의 효과를 발휘하기 위하여, 상기 수상성분은 폴리올 성분과 수상 용매를 1:0.5~1.5의 중량비, 또는 1:0.8~1.2의 중량비로 사용할 수 있다.

상기 수상용매로는 달리 특정하지 않는 한, 물, 탄소수 1 내지 3의 알코올 성분을 사용할 수 있으며, 폴리올 성분의 용해성을 최적화하고 오일의 탈리를 방지하기 위하여 물을 사용하는 것이 바람직하다.

상기 폴리올 성분은 일례로 글리세린, 1,6-헥산다이올, 에틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 1,3-부틸렌글라이콜, 이소프렌글라이콜, 다이에틸렌글라이콜, 디프로필렌글라이콜, 다이글리세롤, 폴리에틸렌글라이콜, 에틸렌글리콜모노에틸에테르, 다이에틸렌글리콜모노에틸에테르, 다이에틸렌글리콜모노메틸에테르 중에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 예를 들어 글리세린의 경우 보습 기능과, 친수성 기능, 점증제 기능, 피부유연화 기능을 수행할 수 있다.

상기 수상성분은 80 내지 120℃에서 가온하여 액상용액으로 제조하며, 이 범위 내에서 폴리올성분과 수상 용매의 용해특성이 최적화될 수 있다.

유중수형(W/O)형 에멀젼은 전술한 유상성분과 수상성분을 교반 혼합하여 제조된다.

상기 유상성분과 수상성분은 1:0.5~1의 중량비, 또는 1:0.6~0.8의 혼합비로 배합되며, 80 내지 140 ℃, 또는 80 내지 110 ℃의 온도범위에서 500 내지 5000 rpm, 또는 3000 내지 5000 rpm 범위의 교반회전수로 교반 혼합하여 제조될 수 있다.

상기 온도 범위와 교반 회전수 범위를 만족할 경우 전단력이 충반하여 유중수형(W/O형)의 유화가 진행되게 되며, 제시된 범위를 벗어날 경우 수중유형(O/W형)의 유화가 진행된다.

상기 유중수형(W/O형) 에멀젼은 방냉 후 필요에 따라 교반 작업과 함께 서냉 처리하여 미세입자의 수중유형(O/W형) 에멀젼으로 형성된다.

상기 서냉 처리는 미세입자의 수중유형(O/W형) 에멀젼을 제조하기에 앞서 전기전도계를 이용하여 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인한 다음 수행되는 것이 오일의 탈리를 방지하고 안정성과 사용감을 제공할 수 있어 바람직하다.

이때 상기 서냉 처리는 정제수를 이용하여 수행할 수 있다.

상기 정제수는 후술하는 수중수(O/W)형 나노에멀젼을 제공하는데 필요한 유상성분, 수성성분 및 냉각수의 총 100 중량% 중에 30 내지 80 중량%, 구체적인 예로 40 내지 70 중량%로 사용할 수 있다. 상기 범위를 만족하면 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는 효과와 더불어 피부 보습, 피부노화 방지 효과를 충분히 효과적으로 발휘할 수 있다.

본 기재에 따른 추출물 제조방법은, 일례로 구두치(Tinospora cordifolia)와, 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 깨끗이 세정한 다음 수득된 고상물 또는 그 건조물에 추출용매로 환류 추출하는 단계; 환류 추출액을 효소 처리하는 단계; 효소 처리액을 포함하는 유중수형(W/O형) 에멀젼을 제조하는 단계; 및 상기 유중수형(W/O형) 에멀젼을 바이-컨티뉴어스상 상태에서 서냉시켜 수중유형(O/W형) 에멀젼을 제조하는 단계;를 포함할 수 있다.

본 기재에서 에멀젼은 달리 특정하지 않는 한, 나노 사이즈의 에멀젼을 지칭한다.

본 기재에서 상기 구두치(Tinospora cordifolia)와, 님(Azadirachta) 그리고 홍화(Carthamus tinctorius L)은 깨끗이 세정한 다음 고상물 형태로 얻어질 수 있다. 깨끗이 세정한 후에는 자연건조(음건), 열풍건조 등 임의의 방식으로 건조됨으로써 수분의 일부가 제거된 후에(고상물의 수분 함량이 10%(w/w) 이하가 되도록 분쇄물 형태로) 10 내지 50 메쉬, 구체적으로는 30 내지 50 메쉬로 파쇄하여 표면적을 높인 다음 초음파 전처리에 사용될 수 있다.

필요에 따라서는 95℃ 이하, 또는 50 내지 90℃에서 36시간 이상, 또는 48시간 이상 건조한 다음 분쇄할 수 있다.

상기 고상물은 효소 처리에 앞서 추출용매를 이용한 환류추출 단계를 수행할 수 있다.

본 기재에서 사용되는 고상물에는 특별한 제한이 없으며, 해당 추출용매를 이용한 환류추출 단계는 고상물 또는 그 건조물('고상의 건조물'이라고도 함)의 표면에 있는 미생물, 잔류농약, 보존제 등의 유해물질을 제거하기 위한 처리, 초음파의 접촉 면적을 증가시키기 위한 처리 등을 포함할 수 있다.

이때 사용가능한 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다. 이때 추출용매를 상기 고상의 건조물의 무게 대비 5 내지 20배로 포함할 수 있다.

이때 60 내지 140 ℃ 하에, 0.1 내지 5시간 동안 반복 추출할 수 있다. 상기 반복 추출 횟수는 5회 이하, 구체적인 예로 2 내지 3회일 수 있다.

본 발명에서, 상기 효소는 아래의 실시예에서 사용된 비스코자임(Vicsozyme L) 및 셀룰라아제(Cellulase)의 혼합물인 것인 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 안티에이징 조성물을 제공하기에 바람직하며, 이외에도 펙티넥스(Pectinex), 펙티나아제(Pectinase) 등도 대체 혹은 배합하여 사용할 수 있다.

본 발명에서, 상기 효소 처리는 80 내지 140 ℃에서 수행될 수 있다. 처리온도가 상기 범위보다 낮을 경우 처리 속도가 느려지거나 원치않는 부산물이 생겨날 수 있으며, 처리 온도가 상기 범위보다 높은 경우에도 효소의 사멸로 인해 처리 속도가 느려지거나 원치않는 부산물이 생겨날 수 있다. 처리 시간은 0.1 내지 5 시간 정도 수행될 수 있다.

상기 효소 처리는 필요에 따라 50 내지 500 rpm 교반하는 것이 처리효율을 증대시킬 수 있어 바람직하다.

효소처리에 의해 추출한 다음 에멀젼화할 수 있다.

본 발명에서 에멀젼화는 전술한 바와 같이, 유중수형(W/O형) 에멀젼을 위해 유상성분과 수상성분을 각각 준비하여 이들을 가열한 다음 혼합하고 유화하게 된다.

그런 다음 상기 유중수형(W/O형) 에멀젼을 전기 전도계를 이용하여 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인한 다음 정제수를 이용하여 급냉시켜 수중수형(O/W형) 에멀젼을 제조하게 된다.

상기 수중수형(O/W형) 에멀젼은 순환식 냉각 챔버에 투입되어 -1℃/min 의 냉각 속도로 20℃까지 급냉시켜 겔화성 입자들의 결정화 속도를 급속화하는 급냉식 에멀젼 안정화 과정에 의해 콜로이드성 물질들의 응집에 의한 백탁 변성을 방지할 수 있다.

수득된 수중수형(O/W형) 에멀젼은 나노사이즈를 가질 수 있으며, 일례로 20 내지 200 nm 내일 수 있다

상기 유중수형(W/O형) 에멀젼과 수중수형(O/W형) 에멀젼은 앞서 살펴본 해당 에멀젼의 제조에 따라 제조할 수 있다.

상기 제조방법을 설명함에 있어서, 명시적으로 기재하지 않은 다른 조건이나 장비 등은 당업계에서 통상적으로 실시되는 범위 내에서 적절히 선택할 수 있고, 특별히 제한되지 않음을 명시한다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분 이외에 피부 관련 활성을 보강 또는 추가하기 위하여 당업계에 공지된 피부 미백 성분, 피부 주름 개선 성분, 피부 탄력 개선 성분, 자외선 보호 성분, 피부 보습 성분 등을 포함하여 제조될 수 있다.

상기 피부 미백 성분으로 알부틴, 나이아신아마이드, 아스코빌글루코사이드, 알파-비사보롤, 유용성 감초 추출물 등을 들 수 있다.

상기 피부 주름 개선 성분으로 레티놀, 레티닐 팔미테이트, 아데노신, 폴리에톡실레이티드아마이드 등을 들 수 있다.

상기 자외선 보호 성분으로서는 드로메트리졸, 드로메트리졸트리실록산, 디갈로일트리올리에이트, 디메치코디에칠벤잘말로네이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 소나무 껍질 추출물 등의 복합물, 포스파티딜세린, 핑거루트 추출 분말, 홍삼과 산수유 등의 복합 추출물 등을 들 수 있다.

상기 보습 성분으로 AP 콜라겐 효소 분해 펩타이드, 콜라겐 펩타이드, N-아세틸글루코사민, 곤약 감자 추출물, 민들레 등의 복합 추출물, 쌀겨 추출물, 옥수수 배아 추출물, 저분자 콜라겐 펩타이드, 지초 추출 분말, 포스파티딜세린, 히알루론산 등을 들 수 있다.

기타 피부 미백 성분, 주름 개선 성분, 자외선 보호 성분, 피부 보습 성분들에 대해서는 화장품법에 따른 기능성화장품공전(식약처고시 "기능성화장품 기준 및 시험방법"), 건강기능식품에 관한 법률의 건강기능식품공전(식약처고시 "건강기능식품 기준 및 규격)을 참조할 수 있다. 이러한 성분들은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분을 제품 유형, 제품의 제형 등에 따라 항산화 효과, 항주름 효과, 히알루론산 생성 효과 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 함량 (유효량)으로 포함할 수 있는데, 해당 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 15 wt% 범위 내에서 결정될 수 있다.

본 발명에서 유효량은, 달리 특정하지 않는 한 그 적용 대상인 포유동물, 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 항산화 효과, 항주름 효과, 히알루론산 생성 효과 등 의도한 의료적/화장품학적 효과 등을 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 아토피 치료 또는 예방 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다.

제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 항산화 활성, 항주름 활성, 히알루론산 생성 등을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 수행되는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 식품 조성물은 기능상의 구분에 있어서 제조/유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 건강기능식품에 관한 법률에 따른 건강기능 식품이거나, 식품위생법의 식품공전(식약처 고시, 식품의 기준 및 규격)상 각 식품유형에 따른 두유류, 발효음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해되는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 복용되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품위생법에 따른 식품첨가물공전(식약처 고시, 식품첨가물 기준 및 규격)에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 화학적 합성품, 천연 첨가물, 혼합 제제류로 구분하여 한정적으로 규정되어 있다.

이들 식품첨가물은 기능적 측면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분될 수 있다.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수도 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다.

합성 풍미제도 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.

산미료로는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

점증제로는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타 식품첨가물과 관련하여서는 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 약제학적 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명에서 약제학적으로 허용이란, 달리 특정하지 않는 한 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 것을 의미한다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다.

약제학적으로 허용되는 적합한 담체로는, 일례로 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다.

주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다.

경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다.

비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있다.

좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.

약제학적 조성물의 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 구체적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001 mg/kg 내지 10 g/kg 범위, 바람직하게는 0.001 mg/kg 내지 1 g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

본 발명의 화장료 조성물, 식품 조성물, 약제학적 조성물은 해당 분야에 공지된 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에서 통상적으로 행하여지는 해당 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

본 기재의 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 안티에이징 조성물을 설명함에 있어서, 명시적으로 기재하지 않은 다른 조건이나 장비 등은 당업계에서 통상적으로 실시되는 범위 내에서 적절히 선택할 수 있고, 특별히 제한되지 않음을 명시한다.

이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정하는 것은 아니다.

[실시예]

<실시예 1> 에탄올 효소가수분해 구두치 추출물의 제조

(1) 구두치(Tinospora cordifolia) 잎, 님(Azadirachta) 잎 및 홍화(Carthamus tinctorius L) 열매를 깨끗이 세정한 후 70 ℃에서 48 시간 건조하여 40 mesh 이하 사이즈로 분쇄하였다. 분쇄한 원료를 일정한 중량(100 g : 100 g : 100 g)으로 혼합하였다.

(2) 상기 혼합한 고상 건조물 총 무게의 10배의 70% 에탄올을 넣고 리플럭스 하에 80 ℃에서 3시간 동안 3회 반복 추출하였다.

(3) 수득된 환류 추출액 100 g 당 비스코자임(Viscozyme L)과 셀룰라아제(Cellulase)를 각각 5mL씩 첨가하고 100 ℃에서 1 시간 동안 처리하였다.

(4) 수득된 효소 처리액을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 에탄올을 제거하였다.

(5) 상기 추출물 1 중량%, 오일로써 카플릴릭/카프릭 트리글리세리드 20 중량%, Tween 80의 가용화제 7.2 중량%, Span 80의 가용화제 1.8 중량%를 배합하여 유상성분을 준비하였고, 폴리올로서 글리세린 10 중량%와 증류수 10 중량%를 배합하여 수성성분을 준비한 다음 각각 100℃로 가열하였다.

(6) 가열된 유상성분에 가열된 수상성분을 첨가한 다음 호모믹서를 이용하여 4000 rpm으로 유화하여 유중수형(W/O형) 에멀젼을 제조한 다음 온도를 70℃ 부근까지 서냉하였다.

(7) 상기 유중수형(W/O형) 에멀젼을 전기전도계를 이용하여 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인하고 정제수 50 중량%를 이용하여 급냉시켜 수중수형(O/W형) 나노에멀젼을 제조하여 에탄올 효소가수분해 추출물(샘플 TAC-4)을 제조하였다.

<비교예>

<비교예 1> 열수 구두치 추출물의 제조

(2') 상기 혼합한 고상 건조물 총 무게의 10배의 증류수를 넣고 리플럭스 하에 80 ℃에서 3시간 동안 3회 반복 추출하였다.

(4') 수득된 환류 추출액을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 물을 제거하였다.

(7) 상기 유중수형(W/O형) 에멀젼을 전기전도계를 이용하여 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인하고 정제수 50 중량%를 이용하여 급냉시켜 수중수형(O/W형) 나노에멀젼을 제조하여 열수 구두치 추출물(샘플 TAC-1)을 제조하였다.

<비교예 2> 에탄올 구두치 추출물의 제조

(4') 수득된 환류 추출액을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 에탄올을 제거하였다.

(7) 상기 유중수형(W/O형) 에멀젼을 전기전도계를 이용하여 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인하고 정제수 50 중량%를 이용하여 급냉시켜 수중수형(O/W형) 나노에멀젼을 제조하여 에탄올 구두치 추출물(샘플 TAC-2)을 제조하였다.

<비교예 3> 열수 효소가수분해 구두치 추출물의 제조

(2') 상기 혼합한 고상 건조물 총 무게의 10배의 열수를 넣고 리플럭스 하에 80 ℃에서 3시간 동안 3회 반복 추출하였다.

(4) 수득된 효소 처리액을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 물을 제거하였다.

(7) 상기 유중수형(W/O형) 에멀젼을 전기전도계를 이용하여 바이-컨티뉴어스상(bi-continuous phase)이 되는 투명한 액 상태를 확인하고 정제수 50 중량%를 이용하여 급냉시켜 수중수형(O/W형) 나노에멀젼을 제조하여 열수 효소가수분해 구두치 추출물(샘플 TAC-3)을 제조하였다.

<실험예>

<실험예 1> 항산화활성 시험1

상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(TAC-1~4)에 대한 항산화 시험으로 시료의 라디칼 소거능을 평가할 수 있는 ABTS법 및 DPPH법 radical 소거능 실험을 수행하였다.

(1-1) ABTS 라디칼 소거활성

샘플들(TAC-1 내지 TAC-4)을 각각 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL, 1000 ㎍/mL 농도의 검액을 조제한다. 7 mM ABTS와 2.45 mM potassium persulfate를 혼합하여 암실에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 ABTS 양이온을 형성시킨다. 이후 734 nm에서 흡광도 값이 0.70 ± 0.02가 되도록 에탄올을 넣어 조절하였다.

96 웰 플레이트에 검액 100 ㎕와 조제한 ABTS 용액 100 ㎕를 가하여 7 분간 실온에서 반응하여 734 nm에서 측정한다. 공시험액과 비교하여 ABTS 소거율을 다음과 같이 백분율(%)로 구하고 하기 도 1에 나타내었다.

ABTS radical 소거능 (%) = [Control - (Sample - Blank)]/Control Х 100

(단, Control : ABTS reagent의 흡광도, Sample : Sample + ABTS reagent의 흡광도, Blank : Sample + Blank의 흡광도)

(1-2) DPPH 라디칼 소거활성

샘플들(TAC-1 내지 TAC-4)을 각각 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL, 1000 ㎍/mL 농도의 검액을 조제한다. 96 웰 플레이트에 검액 100 ㎕와 0.2 mM DPPH 100 ㎕를 넣고 30분 후 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정한다. 공시험액과 비교하여 DPPH radical 소거율을 다음과 같이 백분율(%)로 구하고 하기 도 1에 나타내었다.

DPPH radical 소거능 (%) = [Control - (Sample - Blank)]/Control Х 100

(Control : DPPH reagent의 흡광도, Sample : Sample + DPPH reagent의 흡광도, Blank : Sample + Blank의 흡광도)

하기 도 1에서 보듯이, ABTS radical 분석 결과 대조군인 아스코르브산이 1000 ㎍/mL에서 98.2%로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 74.0%로 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 각각 70.6%, 61.5%, 59.0%를 나타내었다.

또한, DPPH radical 분석 결과, 전술한 ABTS 분석결과와 같은 경향을 나타내었다. 구체적으로, 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4), 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 각각 84.5%, 75.4%, 69.8%, 67.0%를 나타내었다. 이때 대조군인 아스코르브산은 500 ㎍/mL에서 98.2%로 분석되었다.

<실험예 2> 항산화활성 시험2

상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(TAC-1~4)에 대한 항산화 시험으로 SOD 유사활성 및 크산틴 산화효소(Xanthine oxidase) 저해 활성 실험을 수행하였다.

(2-1) SOD 유사활성

샘플들(TAC-1 내지 TAC-4)을 각각 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL 농도의 검액을 조제한다. 검액 0.2 mL에 pH 8.5로 보정한 tris-HCl buffer 2.6 mL와 7.2 mM pyrogallol 0.2 mL를 첨가하여 25 ℃에서 10분간 반응한다. 1 N HCl 0.1 mL를 반응시킨 액에 가하여 정지시킨다. 산화된 pyrogallol의 양을 420 nm에서 흡광도를 측정하여 구한다. 공시험액과 비교하여 SOD 유사활성을 백분율(%)로 구하고 하기 표 1에 나타내었다.

(2-2) 크산틴 산화효소 저해활성

샘플들(TAC-1 내지 TAC-4)을 각각 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL 농도의 검색을 조제한다. 검액 1.0 mL에 0.1 M potassium phosphate buffer(pH 7.5) 0.6 mL, 1 mM xanthine 0.2 mL를 첨가한다. 이후 0.2 U/mL xanthine oxidase 0.1 mL를 가하여 반응을 정지시킨다. 생성된 uric acid를 292 nm에서 흡광도를 측정하여 구한다. 공시험액과 비교하여 Xanthine oxidase 저해활성을 백분율(%)로 구하고 하기 표 1에 함께 나타내었다.

Extract	SOD-like activity(%)			Xanthin oxidase Inhibition(%)
Extract	100 μg/mL	250 μg/mL	500 μg/mL	100 μg/mL	250 μg/mL	500 μg/mL
Control	96.9±4.2	95.8±5.9	97.8±4.1	97.3±5.9	98.5±4.2	99.4±3.6
TAC-1	12.5±3.3	18.4±3.0	24.5±1.5	16.8±2.1	23.4±2.8	32.4±2.6
TAC-2	15.0±1.5	20.6±2.7	25.5±3.1	19.3±1.4	23.4±2.4	35.7±2.7
TAC-3	19.8±2.4	22.3±1.1	32.7±1.5	22.4±1.8	28.1±2.4	38.1±2.6
TAC-4	21.9±3.6	27.2±3.3	35.4±2.5	25.4±3.7	30.8±3.8	40.7±3.4

*대조군: 아스코르브산

상기 표 1에서 보듯이, SOD 유사활성 분석결과, 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 35.4 %로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 32.7 %, 25.5 %, 24.5 %를 나타내었다. 모든 실험물질은 농도의존성으로 소거활성이 분석되었으며, 대조군인 ascorbic acid보다는 모두 낮은 것으로 분석되었다.

또한, 크산틴 산화효소 저해활성 분석결과, 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 40.7 %로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 38.1 %, 35.7 %, 32.4 %를 나타내는 것으로 분석되어, 전술한SOD 유사활성의 분석 결과와 동일한 경향성을 확인할 수 있었다.

<실험예 3> 안전성 시험

세포독성평가

상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(TAC-1~4)의 세포독성을 확인하기 위하여 피부각질세포인 HaCaT 세포를 배양하여 MTS 분석을 진행하였다.

구체적으로, HaCaT 세포를 1Х10⁴ cell/ml 씩 분주하여 24시간 배양 후 100~500 μg/mL의 농도로 실험물질을 첨가하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 이후 MTS 시약 20 μL를 넣고 2시간 동안 배양 후, microplate reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였고, 세포생존율(cell viability)은 아래의 식으로 계산되었으며, 결과를 하기 도 2에 나타내었다.

Cell viability (%) = [(Exp. - Blank)/Control] Х 100

(Exp: 세포를 포함한 추출물의 흡광도, Blank: 세포를 포함하지 않은 추출물의 흡광도, Control: 세포를 포함한 증류수의 흡광도)

하기 도 2에서 보듯이, RAW 264.7 cell에서 실험물질(TAC-1~4)의 세포독성 결과, 모든 농도에서 세포생존율이 95 % 이상임을 확인하였다. 따라서, 실험물질(TAC-1~4)은 세포독성이 없는 것으로 확인되었다.

<실험예 4> 항주름 평가

(1)콜라게나제 저해활성

상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(TAC-1~4)을 물에 희석하여 100 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL 농도의 검액을 조제 한다. 0.1 M tris-HCl buffer(pH 7.5)에 4 mM calcium chloride를 첨가하고 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-DArg(0.3 mg/mL)를 녹인 액 0.5 mL에 검액 0.2 mL를 넣는다. 이후 200 U/mL collagnease type I 0.3 mL를 첨가하여 실온에서 20분간 반응한다. 반응정지액으로 5 % citric acid 0.5 mL을 넣고 ethyl acetate 1 mL를 첨가하여 320 nm에서 흡광도를 측정하여 구한다. 공시험액과 비교하여 collagenase 저해율을 백분율(%)로 구하고, 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

(2)엘라스타제 저해활성

상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(TAC-1~4)을 물에 희석하여 100 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL 농도의 검액을 조제 한다. pancreatic solution 50 μg/mL을 가한 후 50 mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(LAla)3-p-nitroanilide(1 mg/mL)을 100 μg/mL을 첨가하여 30분간 반응시키고 410 nm에서 흡광도를 측정한다. 공시험액과 비교하여 elastase 저해율을 백분율(%)로 구하고, 결과를 하기 표 2에 함께 나타내었다.

Extract	Collagenase inhibition(%)			Elastate inhibition(%)
Extract	100 μg/mL	250 μg/mL	500 μg/mL	100 μg/mL	250 μg/mL	500 μg/mL
Control	35.5±3.9	47.7±4.6	53.7±5.4	36.7±4.2	48.3±4.6	63.1±5.3
TAC-1	15.4±2.0	19.5±1.9	22.5±2.1	12.6±2.8	13.7±1.5	15.9±1.2
TAC-2	17.3±2.6	20.4±1.3	23.7±2.1	17.4±3.0	19.5±1.8	22.4±2.1
TAC-3	21.2±1.1	25.9±1.6	31.8±3.0	22.7±2.2	25.1±2.7	30.8±3.7
TAC-4	24.5±2.6	32.6±2.4	37.0±3.9	25.2±2.0	30.7±3.9	44.5±4.2

*대조군 아스코르브산

상기 표 2에서 보듯이, Collagenase 활성 분석결과, 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 37.0 %로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 31.8 %, 23.7 %, 22.5 %를 나타내었다. 모든 실험물질은 농도의존성으로 소거활성이 분석되었으며, 대조군인 ascorbic acid보다는 모두 낮은 것으로 분석되었다.

또한, Elastase 활성 분석결과, 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 44.5 %로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 30.8 %, 22.4 %, 15.9 %를 나타내는 것으로 분석되어, 전술한SOD 유사활성의 분석 결과와 동일한 경향성을 확인할 수 있었다.

<실험예 5> 히알루론산 함량 시험

상기 실시예 1에서 수득된 샘플(TAC-4)와 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(TAC-1~3)에서 히알루론산 함량을 평가하였다. 히알루론산은 표피의 수분증발을 막아 피부의 탄력성을 유지할 뿐만 아니라 보습, 항산화, 항염, 항균 등 다양한 기능을 갖고 있어, 히알루론산의 감소는 피부 수분 함량 및 탄력의 감소와 주름 등의 원인이 된다.

구체적으로, 실험물질(TAC-1~4)을 물에 희석하여 100 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL 농도의 검액을 조제 한다. HaCaT 세포를 1Х10⁴ cell/ml 씩 분주하여 24시간 배양 후 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지로 2회 세척한다. 다시 DMEM 배지로 교체하고 실험물질(AB-1~4)과 대조군(물)을 처리하고 48시간 동안 배양한다. 이후 배지를 걷어내고 12,000 rpm에서 5분간 원심분리하고 상층액을 걷어내어 Hyaluronan Quantikine ELISA Kit(R&D systems®, USA)를 이용하여 제조사에서 제공한 방법에 의해 진행하고, 평가 결과를 하기 도 3에 나타내었다.

상기 도 3에서 보듯이, 실시예 1에 따른 샘플(TAC-4)의 경우 히알루론산 함량이 252.5 ng/mL로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(TAC-3), 비교예 2에 따른 샘플(TAC-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(TAC-1)의 순서로 각각 214.7 ng/mL, 197.7 ng/mL, 182.3 ng/mL를 나타내었다. 대조군은 114.4 ng/mL로 분석되었다.

결론적으로, 구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 이용한 고상의 건조물에 추출용매와 효소를 이용하여 얻어진 효소 추출액의 나노에멀젼을 유효성분으로 포함하는 경우, 수득된 조성물은 라디칼 소거활성, SOD(superoxide dismutase) 유사활성, 크산틴 산화효소 저해활성에 의한 항산화 효과, 그리고 항주름 저해활성과 히알루론산 생성 효과를 동시에 발현하여 아토피 치료 또는 예방, 피부보습, 피부노화 방지를 필요로 하는 적용처에 적합함을 확인할 수 있었다.

Claims

구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)를 이용한 고상의 건조물에 추출용매와 다당류 분해효소 및 섬유소 분해효소를 이용하여 얻어진 효소 추출액의 나노에멀젼을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 구두치(Tinospora cordifolia), 님(Azadirachta) 및 홍화(Carthamus tinctorius L)는 구두치(a) : 님(b) : 홍화(c)가 1:0.5~1.5:0.5~1.5 중량비를 만족하는 것인 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출용매는 상기 고상의 건조물 중량 대비 5 내지 20 배의 중량, 그리고 상기 다당류 분해효소와 섬유소 분해효소는, 상기 고상의 건조물과 추출용매의 총 합량 대비 0.01 내지 0.5 배의 부피비인 것인 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 다당류 분해효소 및 섬유소 분해효소는 1: 0.5~1.5의 부피비로 포함하는 것인 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 효소 처리는 80 내지 140 ℃ 하에, 0.1 내지 5시간 동안 수행하는 것인 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 나노에멀젼은 상기 효소 추출액을 포함하는 유상성분과 폴리올을 80 내지 140 ℃ 하에 500 내지 5000 rpm 교반하여 수득한 유중수(W/O)형 에멀젼을 정제수로 급냉시킨 수중수(O/W)형 에멀젼인 것인 아토피 피부염 개선 및 보습 증진 효과를 갖는 조성물.