JP2023547633A

JP2023547633A - 脂肪肝の治療及び／又は予防のためのメチルシクロデキストリンを含む組成物

Info

Publication number: JP2023547633A
Application number: JP2023525452A
Authority: JP
Inventors: ウィルス、ダニエル; ペロー、キャロリン
Original assignee: Roquette Freres SA
Current assignee: Roquette Freres SA
Priority date: 2020-11-05
Filing date: 2021-11-04
Publication date: 2023-11-13
Also published as: WO2022096151A1; CN116456991A; US20240000827A1; FR3115682A1; KR20230093516A; MX2023005255A; CA3197127A1; AU2021374726A1; EP4240371A1; FR3115682B1

Abstract

本発明は、脂肪肝及び関連する疾患の治療及び／又は予防における少なくとも１種のメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物の新規な使用に関する。本発明はまた、肝臓における脂質の蓄積を減少させるためのメチルシクロデキストリンの使用に関する。【選択図】図１

Description

本発明は、個体の肝臓における脂質の貯蔵を減少させるための医薬組成物に関する。より具体的には、本発明は、脂肪肝及び脂肪肝に関連する疾患又は病状の治療及び／又は予防における医薬組成物の使用に関する。

非アルコール性ステアトパチー（非アルコール性脂肪肝疾患（non-alcoholic fatty liver disease）又はＮＡＦＬＤ）は、アルコールの過剰摂取がない場合の肝臓内脂肪の異常な蓄積を特徴とする。

ＮＡＦＬＤは、以下の２つの主要なエンティティ：単独の、又は最小の小葉炎症を伴う脂肪肝（非アルコール性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver）又はＮＡＦＬ）と非アルコール性脂肪性肝炎（（non-alcoholic steatohepatitis）又はＮＡＳＨ）とに区別することができる広い範囲の肝臓の病態を包含する。ＮＡＳＨは、小葉炎症及び肝細胞のバルーニングを伴う脂肪肝の存在によって定義される。それは、肝実質における線維症の蓄積を促進し、肝硬変及びその合併症（肝不全、腹水、静脈瘤破裂、肝細胞癌）に進行する疾患の攻撃的形態に相当する。

ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの社会的及び医療的ケアの影響は非常に大きく、常に増え続けている。米国の人口の約３０％がＮＡＦＬＤに罹患していると推定されている。米国においてＮＡＳＨの有病率は８％である。

ＮＡＦＬＤ及びその重症度の素因となるいくつかの遺伝因子が同定されている。ＮＡＦＬＤは代謝異常及びインスリン抵抗性の状況で発生する。メタボリックシンドロームの基準（ウエストサイズ、動脈圧、空腹時グルコースレベル、トリグリセリド、ＨＤＬ－コレステロール）の累積及びインスリン抵抗性の程度は、ＮＡＦＬＤの有病率及びその重症度（ＮＡＳＨ、線維症）の増悪に関連する。

環境因子（バランスの悪い食事、スポーツ活動の欠如）もまた重要な危険因子である。

ＮＡＦＬＤは一般にゆっくりと進行する疾患であるが、その自然経過は依然としてほとんど分かっていない。ＮＡＳＨはこの疾患の攻撃的形態であり、単にＮＡＦＬを有する患者と比較して、ＮＡＳＨを有する患者では、線維症の進行速度がより速く、より肝硬変になりやすく、肝合併症の発症がより多く、死亡率がより高い。

この疾患の発症に関与するメカニズムには、肝臓における脂質の蓄積、それに続く炎症及び瘢痕化のプロセスが含まれる。最も進行した段階（肝硬変）では、肝組織は徐々に瘢痕組織に置き換わる。

現在までに考えられている治療は不十分であり、ほとんどの場合、病理学的プロセスの下流で作用する。例えば、炎症を引き起こす細胞死プロセスに作用するカスパーゼ又はＡＳＫ１阻害剤を挙げることができる。

最後に、肝臓における脂質の蓄積を制限するために上流で作用することができる医薬品市場にはまだ薬剤が存在しない。さらに、脂肪肝及び脂肪肝に関連する疾患又は病状を制御することができる薬物が常に必要とされている。

メチルシクロデキストリンをベースとした医薬組成物が、肝臓における脂質の貯蔵を減少させることができ、したがって脂肪肝の治療及び／又は予防に有用であることを発見したことは、本出願人の功績である。

したがって、本発明は、脂肪肝及び脂肪肝に関連する疾患の治療及び／又は予防に使用するための少なくとも１種のメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物に関する。

本発明はまた、脂肪肝の治療及び／又は予防に使用するための医薬の製造のためのメチルシクロデキストリンの使用に関する。

さらに、本発明は、治療上有効な量のメチルシクロデキストリンを患者に投与することを含む脂肪肝を治療及び／又は予防する方法を提供する。

本発明者らは、脂肪肝及び脂肪肝に関連する疾患の治療及び／又は予防における少なくとも１種のメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物の新規な用途を特定した。

本発明の意味において、「脂肪肝」という用語は、アルコールの過剰摂取に関連するアルコール性脂肪肝、及び非アルコール性脂肪肝の両方を包含する。好ましくは、それは非アルコール性脂肪肝を含む。

「非アルコール性脂肪肝」という用語は、肝臓が罹患し、脂質の過剰な蓄積を特徴とする病状の進展の全ての段階を包含する。それは、非アルコール性脂肪肝（「非アルコール性脂肪肝疾患」を表すＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であってもよい。

本発明はまた、急性又は慢性の肝炎、肝線維症、腹部肥満、肝不全及び肝硬変などの脂肪肝に関連する疾患又は病状の治療及び／又は予防に関する。

本発明の一実施形態において、脂肪肝に関連する疾患は糖尿病ではない。

シクロデキストリンは、デンプンの酵素分解に由来する環状オリゴ糖である。３つの最も一般的な天然シクロデキストリンは、α－１，４結合によって互いに連結された椅子型立体配置の６、７、又は８個のα－Ｄ－グルコピラノースユニットからなる。それらは、より一般的には、それぞれα、β、又はγシクロデキストリンと呼ばれる。それらの三次元構造は、円錐台の形態であり、その外側は、シクロデキストリンの高度に親水性の部分であるヒドロキシル基である。シクロデキストリンの円錐又は空洞の内部は、Ｃ３及びＣ５炭素に結合した水素原子、並びにグリコシド結合に関与する酸素原子からなり、したがって、それらに非極性の特性を与える。親水性の外側部分と疎水性の空洞を有するシクロデキストリンは、一般に、疎水性化合物をカプセル化するそれらの能力のために、したがって、疎水性の活性成分の保護剤及び可溶化剤としてのそれらの役割のために使用される。それらは典型的には食品産業において見られるが、経口投与される医薬製剤又は局所投与される化粧品製剤における賦形剤として使用される医薬の形態においても見られる。

天然シクロデキストリンの水溶性を改善するために、ヒドロキシル官能基上に様々な基をグラフトすることによって多くの誘導体が合成された。すなわち、シクロデキストリンのグルコピラノースユニットはそれぞれ、Ｃ２、Ｃ３及びＣ６炭素上に結合した３つの反応性ヒドロキシル基を含む。

誘導体の例としては、ヒドロキシプロピル－シクロデキストリン、メチルシクロデキストリン及びシクロデキストリンの「硫酸化」誘導体が挙げられる。

本出願人は、驚くべきことに、メチルシクロデキストリンが脂肪肝の治療及び／又は予防にも使用できることを実証した。さらに驚くべきことに、本出願人は、メチルシクロデキストリン、より具体的には０．０５～１．５のモル置換値を有するメチルシクロデキストリンが、肝臓における脂質の蓄積を減少させるために、他のシクロデキストリン誘導体よりもさらに有効であることを発見した。

さらに、本出願人は、０．０５～１．５のモル置換値を有するメチルシクロデキストリンがコレステロールの除去の増加を促進できることを実証した。

「モル置換値（ＭＳ）」という用語は、各グルコピラノースユニットの、特にメチル基によって置換されたヒドロキシルの数を意味すると理解される。モル置換値（ＭＳ）は、シクロデキストリン１分子当たりのメチル基によって置換されたヒドロキシルの数に対応するものである、したがってメチルシクロデキストリンを構成するグルコピラノースユニットの数を考慮に入れたものである分子置換度（ＤＳ）とは異なることに留意する。

本発明において、ＭＳは、プロトン核磁気共鳴（Nuclear Magnetic Resonance、ＮＭＲ）によって、又は質量分析（エレクトロスプレーイオン化質量分析（electrospray ionization mass spectrometry、ＥＳＩ－ＭＳ）若しくはマトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ））によって決定することができる。これらの技術は当業者に公知であるが、本発明のメチルシクロデキストリンを決定するための最適条件は、ｈｔｔｐ：／／ｔｅｌ．ａｒｃｈｉｖｅｓ－ｏｕｖｅｒｔｅｓ．ｆｒ／ｄｏｃｓ／００／１８／５５／４２／ＰＤＦ／ｊａｃｑｕｅｔ．ｐｄｆ（２０１３年１１月２７日にアクセス）で入手できるＲｏｍａｉｎＪＡＣＱＵＥＴの参照論文：”Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｉｒｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｕｓｅｏｆｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ”ＴｈｅｓｉｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＣｏｍｐｏｕｎｄｓｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＯｒｌｅａｎｓ，２００６，”の特に第２章、パートＢ（５９～８３頁）に特によく記載されている。

好ましくは、ＭＳは、以下の方法に従ってＮＭＲによって決定され、すなわち、測定はＤＰＸ２５０ＭＨｚＡｄｖａｎｃｅ型装置（Ｂｒｕｋｅｒ，Ｒｈｅｉｎｓｔｅｔｔｅｎ，ドイツ）で２５℃で行う。キャリブレーションはＤ２Ｏシグナルを用いて行う。本発明のメチルシクロデキストリン及び天然（すなわち、非メチル化）シクロデキストリンの試料を、０．７５ｍＬのＤ２Ｏ中５ｍｇの濃度で調製する。溶液を窒素流下で蒸発させて乾固し、次いで０．７５ｍＬのＤ２Ｏ中で再構成する。この操作を２回繰り返して、ヒドロキシル官能基のプロトン全ての交換を確実にする。

本発明で使用されるメチルシクロデキストリンは、純粋な生成物に相当し得るが、一般には、異なる構造のメチルシクロデキストリンの混合物に相当することに留意すべきである。これは、例えば、特に、前述のＲｏｍａｉｎＪＡＣＱＵＥＴの論文、特に第２章、パートＢ（５９～８３頁）で決定されるような物理的／化学的特性を有する本出願人が所有する製品ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）Ｃｒｙｓｍｅｂの場合である。

結果として、この場合の測定されたＭＳは、メチルシクロデキストリンの混合物全体の全てのグルコピラノースユニットで生じる置換の平均である。

この混合物は、特に、残存する天然の、すなわちメチル化されていないシクロデキストリンを含有し得るが、一般に無視できる量、特にメチルシクロデキストリンの総乾燥重量に対して乾燥重量で１％未満、好ましくは０．５％未満、さらにより優先的には０．１％未満の量で含有し得る。

本発明の文脈において、組成物は、０．０５～１．５のモル置換値を有する少なくとも１種のメチルシクロデキストリンを含む。有利には、メチルシクロデキストリンは、０．１～１．４、優先的には０．１～１．３、優先的には０．２～１．２、優先的には０．３～１．１、優先的には０．３～１、優先的には０．５～０．９、優先的には０．６～０．８、例えば０．７、特に０．６７のＭＳを有する。例えば、メチルシクロデキストリンは、０．１０～１．４０、０．１０～１．３０、０．１０～１．２０、０．１５～１．４０、０．１５～１．３０、０．１５～１．２０、０．２０～１．４０、０．２０～１．３０、０．２０～１．２０、０．２０～１．１０、０．２５～１．４０、０．２５～１．３０、０．２５～１．２０、０．２５～１．１０、０．１５～０．９０、０．１５～０．８０、０．２５～１．００、０．２５～０．９０、０．２５～０．８０、０．３０～１．４０、０．３０～１．３０、０．３０～１．２０、０．３０～１．００、０．５０～０．９０、０．６０～０．８０のＭＳを有してもよい。

好ましくは、本発明の文脈で使用されるメチルシクロデキストリンのメチル基の少なくとも５０％、好ましくは６０～８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシルに位置する。

同時に、他のメチル基は、一般に、グルコピラノースユニットのＣ３及び／又はＣ６炭素に結合したヒドロキシルに主に位置する。

当業者には、メチルシクロデキストリンのグルコピラノースユニットのヒドロキシル上のメチル基の分布を、例えばＮＭＲによって決定する方法が知られている。

有利には、本発明の文脈で使用されるメチルシクロデキストリンは、７個のα－Ｄ－グルコピラノースユニットを含む。したがって、それはメチル－β－シクロデキストリンである。

特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンはメチル－β－シクロデキストリンであり、０．０５～１．５、優先的には０．１～１．４、優先的には０．１～１．３、優先的には０．２～１．２、優先的には０．３～１．１、優先的には０．４～１、優先的には０．５～０．９、優先的には０．６～０．８、例えば０．７、特に０．６７のＭＳを有する。例えば、メチルシクロデキストリンは、０．１０～１．４０、０．１０～１．３０、０．１０～１．２０、０．１５～１．４０、０．１５～１．３０、０．１５～１．２０、０．２０～１．４０、０．２０～１．３０、０．２０～１．２０、０．２０～１．１０、０．２５～１．４０、０．２５～１．３０、０．２５～１．２０、０．２５～１．１０、０．２５～１．００、０．２５～０．９０、０．２５～０．８０、０．３０～１．４０、０．３０～１．３０、０．３０～１．２０、０．３０～１．００、０．５０～０．９０、０．６０～０．８０のＭＳを有してもよい。

メチルシクロデキストリンは、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシル上で、又はグルコピラノースユニットのＣ３及び／若しくはＣ６炭素に結合したヒドロキシル上で、又はグルコピラノースユニットのＣ２、Ｃ３及び／若しくはＣ６炭素、好ましくはＣ２及びＣ６炭素の組合せに結合したヒドロキシル上で置換されていてもよい。

別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンは、１種のメチルシクロデキストリン、好ましくはメチル－β－シクロデキストリンであり、そのメチル基の少なくとも５０％、優先的には６０～８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシルに位置し、０．０５～１．５、優先的には０．１～１．４、優先的には０．１～１．３、優先的には０．２～１．２、優先的には０．３～１．１、優先的には０．４～１、優先的には０．５～０．９、優先的には０．６～０．８、例えば０．７、特に０．６７のＭＳを有する。例えば、メチルシクロデキストリンは、０．１０～１．４０、０．１０～１．３０、０．１０～１．２０、０．１５～１．４０、０．１５～１．３０、０．１５～１．２０、０．２０～１．４０、０．２０～１．３０、０．２０～１．２０、０．２０～１．１０、０．２５～１．４０、０．２５～１．３０、０．２５～１．２０、０．２５～１．１０、０．２５～１．００、０．２５～０．９０、０．２５～０．８０、０．３０～１．４０、０．３０～１．３０、０．３０～１．２０、０．３０～１．００、０．５０～０．９０、０．６０～０．８０のＭＳを有してもよい。

好ましい実施形態において、メチルシクロデキストリン組成物は、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシル上で置換されたメチル－β－シクロデキストリン、グルコピラノースユニットのＣ３及び／又はＣ６炭素に結合したヒドロキシル上で置換されたメチル－β－シクロデキストリン、グルコピラノースユニットのＣ２、Ｃ３及び／又はＣ６炭素、好ましくはＣ２及びＣ６炭素に結合したヒドロキシル上で置換されたメチル－β－シクロデキストリンからなる群から選択され、０．０５～１．５、優先的には０．１～１．４、優先的には０．１～１．３、優先的には０．２～１．２、優先的には０．３～１．１、優先的には０．４～１、優先的には０．５～０．９、優先的には０．６～０．８、例えば０．７、特に０．６７のＭＳを有する、１種以上のメチル－β－シクロデキストリンを含む。例えば、メチルシクロデキストリンは、０．１０～１．４０、０．１０～１．３０、０．１０～１．２０、０．１５～１．４０、０．１５～１．３０、０．１５～１．２０、０．２０～１．４０、０．２０～１．３０、０．２０～１．２０、０．２０～１．１０、０．２５～１．４０、０．２５～１．３０、０．２５～１．２０、０．２５～１．１０、０．２５～１．００、０．２５～０．９０、０．２５～０．８０、０．３０～１．４０、０．３０～１．３０、０．３０～１．２０、０．３０～１．００、０．５０～０．９０、０．６０～０．８０のＭＳを有してもよい。好ましくは、メチルシクロデキストリン組成物は、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシル上で置換された少なくとも５０、６０、又は７５％のメチルを有する。

上述したように、本発明のメチルシクロデキストリンは混合物であってもよい。メチル－β－シクロデキストリンである製品ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢの質量分析から、特に、それが、それらのＤＳによって区別される７つの主要なメチルシクロデキストリンのグループを含む多分散生成物であることが明らかである。理論上、メチル－β－シクロデキストリンでは０から２１まで変化し得るこのＤＳは、製品ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢでは２から８まで変化する。

有利には、本発明の組成物は、０．２～１．２のＭＳを有するメチルシクロデキストリンを少なくとも５０、６０、７０、８０又は９０％含むメチルシクロデキストリンの混合物を含む。好ましくは、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０又は９０％のメチルシクロデキストリンが０．３～１．１のＭＳを有する。好ましくは、メチルシクロデキストリンの少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０又は９０％が０．５～０．９のＭＳを有する。さらにより優先的には、メチルシクロデキストリンの少なくとも２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０又は９０％が０．６～０．８のＭＳを有する。

メチルシクロデキストリン組成物は、任意で、本発明において定義される組成物を得るために定められたＭＳを有する様々なメチルシクロデキストリンを添加して調製してもよく、又はそれらはその合成の結果として得てもよい。

したがって、別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン組成物、好ましくはメチル－β－シクロデキストリン組成物は、モル百分率で表される以下に対応する置換プロファイルを有する。
－２個のメチル基（ＤＳが２）を含む０～５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－３個のメチル基（ＤＳが３）を含む５～１５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－４個のメチル基（ＤＳが４）を含む２０～２５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－５個のメチル基（ＤＳが５）を含む２５～４０％のメチル－β－シクロデキストリン、
－６個のメチル基（ＤＳが６）を含む１５～２５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－７個のメチル基（ＤＳが７）を含む５～１５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－８個のメチル基（ＤＳが８）を含む０～５％のメチル－β－シクロデキストリンである。

ここで、組成物は任意で、微量の異なるＤＳのメチルシクロデキストリン、並びに微量の、天然の、すなわちメチル化されていないシクロデキストリンを含有してもよいが、合計は一般に約１００％である。

置換プロファイルは、当業者に公知の任意の技術によって、例えば、ＥＳＩ－ＭＳ又はＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳによって決定することができる。これらの２つの方法によって置換プロファイルを決定するための最適条件は、特に、ＲｏｍａｉｎＪＡＣＱＵＥＴの前述の論文の第２章、パートＢ、ポイントＩＩ．３及びＩＩ．２（６７～８２頁）並びに付録ＩＩに詳細に論じられている。

好ましい実施形態において、メチルシクロデキストリン、好ましくはメチル－β－シクロデキストリンの組成は、メチル基の少なくとも５０％、好ましくは６０～８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシルに位置するものであり、モル百分率で表される以下の置換プロファイルを有する。
－２個のメチル基（ＤＳが２）を含む０～５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－３個のメチル基（ＤＳが３）を含む５～１５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－４個のメチル基（ＤＳが４）を含む２０～２５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－５個のメチル基（ＤＳが５）を含む２５～４０％のメチル－β－シクロデキストリン、
－６個のメチル基（ＤＳが６）を含む１５～２５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－７個のメチル基（ＤＳが７）を含む５～１５％のメチル－β－シクロデキストリン、
－８個のメチル基（ＤＳが８）を含む０～５％のメチル－β－シクロデキストリンであり、
ここで、組成物は任意で、微量の異なるＤＳのメチルシクロデキストリン、並びに微量の、天然の、すなわちメチル化されていないシクロデキストリンを含有してもよいが、合計は一般に約１００％である。

さらに、特にそれらのＤＳに応じて、メチルシクロデキストリン分子の分子又はグループの割合を変化させることの検討、あるいはメチルシクロデキストリン分子の分子又はグループの分離が十分に可能である。

したがって、別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンは、２～８の範囲の整数、特に２、３、４、５、６、７又は８から選択されるＤＳを示すメチル－β－シクロデキストリンである。

別の好ましい実施形態において、メチルシクロデキストリンは、メチル基の少なくとも５０％、好ましくは６０～８０％、典型的には約７５％がグルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシルに位置し、２～８の範囲の整数、特に２、３、４、５、６、７又は８から選択されるＤＳを有するメチル－β－シクロデキストリンである。

別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．１～０．３、特に０．２～０．３、特に０．２０～０．３０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．３～０．５、特に０．３０～０．５０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．５～０．６、特に０．５０～０．６０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．６～０．７、特に０．６０～０．７０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．７～０．８、特に０．７０～０．８０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．８～０．９、特に０．８０～０．９０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、０．９～１．１、特に０．９０～１．１０のＭＳを有する。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、１．１～１．２、特に１．１０～１．２０のＭＳを有する。

一般に、本発明で使用されるメチルシクロデキストリンの還元糖のレベルは、乾燥重量で１％未満、優先的には０．５％未満である。

本発明のメチル－β－シクロデキストリン組成物は、米国特許第６，６０２，８６０（Ｂ１）号に記載されている方法によって得ることができる。そのような組成物の例は、グルコースユニット当たり０．７、より正確には０．６７のモル置換値でメチル化された製品ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢである。

任意で、本発明の組成物は、無置換の１種のシクロデキストリン、特にβ－シクロデキストリン、並びに／又はスルホブチルエーテル（sulfobutylether、ＳＢＥ－）、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル（hydroxypropyl、ＨＰ－）、カルボキシメチル、カルボキシエチル、アセチル、トリアセチル、スクシニル、エチル、プロピル、ブチル、スルフェート基、好ましくはスルホブチル及びヒドロキシプロピルで置換され、好ましくは０．０５～１．５のモル置換値を有する１種のシクロデキストリン、特にβ－シクロデキストリンをさらに含んでもよい。

しかしながら、好ましくは、本発明の組成物は、本発明に有用なメチルシクロデキストリン（及び任意で、上記のように微量の天然のシクロデキストリン）以外のシクロデキストリンを含まない。

任意で、本発明のメチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、特に先に列記したものから選択される追加の基によって置換されていてもよい。したがって、例えば、硫酸化メチル－β－シクロデキストリンであってもよい。

しかしながら、好ましくは、本発明に有用なメチルシクロデキストリン、特にメチル－β－シクロデキストリンは、メチル基以外の基で置換されていない。

本発明の別の実施形態において、本出願において定義され、α－１，４結合によって互いに連結されたα－Ｄ－グルコピラノースユニットから構成されるメチルシクロデキストリンは、本発明の医薬組成物において、α－１，６結合によって互いに連結されたα－Ｄ－グルコピラノースユニットによって部分的に又は完全に置き換えられていてもよい。

本発明の好ましい実施形態において、メチルシクロデキストリンは医薬組成物の唯一の活性成分である。

別の実施形態において、医薬組成物は、脂肪肝に関連する症状及び／又は病態の予防及び／又は治療に有用なものから典型的には選択される１つ以上の活性成分をさらに含む。

本発明の組成物はまた、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。当業者に知られているガレヌス形態に適した全ての賦形剤を、特に全身投与、優先的には経口投与、非経口投与、皮膚又は粘膜投与に使用することができ、特に皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経鼻、肺、直腸、皮膚、髄腔内又は脊髄、好ましくは経口に使用することができる。

例えば、医薬用途に適合し、当業者に知られている生理食塩水、生理溶液、等張溶液、緩衝溶液などの溶液を挙げることができる。組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、保存剤などから選択される１つ以上の薬剤又はビヒクルを含有してもよい。製剤（液体及び／又は注射用）中に使用できる薬剤又はビヒクルは、特にメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油、アカシア、リポソームなどである。組成物は、注射用懸濁液、ゲル、油、錠剤、坐剤、散剤、ゲルカプセル、カプセル、エアロゾルなどの形態で、任意で、持続放出及び／又は遅延放出を確実にするガレヌス形態又はデバイスを用いて製剤化することができる。このタイプの製剤では、セルロース、炭酸塩又はデンプンなどの薬剤が有益に使用される。

本発明の文脈において、個体に注射によって投与することができる組成物は、個体の総体重に対して、１～１００ｍｇ／ｋｇ、優先的には２０～７０ｍｇ／ｋｇ、さらにより優先的には３０～５０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは４０ｍｇ／ｋｇの本発明で定義されたメチルシクロデキストリンを含む。もちろん、当業者は、治療する個体の体重及び投与様式に応じて、本出願で定義されたメチルシクロデキストリンの用量を合わせることができる。

本発明の好ましい実施形態では、医薬組成物は経口の形態で投与することができる。

本発明の医薬組成物が経口の形態で使用される場合、投与されるメチルシクロデキストリンの量は、患者の肝臓における脂質の貯蔵を減少させることができる量である。経口投与量は、例えば、１０ｍｇ／ｋｇ／日～１０，０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ／日～７０００ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日～５０００ｍｇ／ｋｇ／日、７５ｍｇ／ｋｇ／日～４０００ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日～３０００ｍｇ／ｋｇ／日、２００ｍｇ／ｋｇ／日～２０００ｍｇ／ｋｇ／日、３００ｍｇ／ｋｇ／日～１０００ｍｇ／ｋｇ／日、さらにより好ましくは４００ｍｇ／ｋｇ／日～８００ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。

以下の実施例は、本発明の他の態様及び利点を例示し示すために使用され、非限定なものと見なされるべきである。
図１は、実施例２の４群の動物の経時的な体重の推移を示す。図２は、デノボでの脂質生合成及びこの生合成経路に関与する様々な遺伝子の概略図である。図３は、実施例２の４群の動物におけるデノボでの脂質生合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図３は、実施例２の４群の動物におけるデノボでの脂質生合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図３は、実施例２の４群の動物におけるデノボでの脂質生合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図３は、実施例２の４群の動物におけるデノボでの脂質生合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図４は、デノボでのコレステロール合成と関与する様々な酵素の概略図である。図５は、実施例２の４群の動物におけるデノボでのコレステロール合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図５は、実施例２の４群の動物におけるデノボでのコレステロール合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図５は、実施例２の４群の動物におけるデノボでのコレステロール合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図５は、実施例２の４群の動物におけるデノボでのコレステロール合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図５は、実施例２の４群の動物におけるデノボでのコレステロール合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図５は、実施例２の４群の動物におけるデノボでのコレステロール合成に関与する様々な遺伝子の発現レベルを示す。図７は、実施例３の４群の動物の経時的な体重の推移を示す。図８は、実施例３の４群の動物における試験終了時の肝臓及び脂肪組織の重量を示す。図９は、実施例３の４群の動物における経時的な血清コレステロールレベル、トリグリセリド、不飽和脂肪酸及びＬＤＬｃを示す。図９は、実施例３の４群の動物における経時的な血清コレステロールレベル、トリグリセリド、不飽和脂肪酸及びＬＤＬｃを示す。図１０は、実施例３の４群の動物における肝臓内脂質の百分率及び肝臓内に貯蔵されたコレステロールの量の測定結果を示す。

実施例１：材料及び方法
雄性ＬＶＧゴールデンシリアンハムスターを下の試験に使用した。基礎飼料は、ＳＡＦＥｄｉｅｔ社から販売されている飼料ＡＯ４Ｃからなっていた。高コレステロール食では、コレステロールを添加した（ＭＰＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓから入手）。

様々なシクロデキストリンを試験した。
－第１は、本出願人によって「ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰＢ」（経口グレード）の名称で販売されているヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）、
－第２は、出願人が所有するメチル－β－シクロデキストリン（ＭＣＤ）「ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢ」。

実施例２：高コレステロール血症に関連する肝臓の病態に対するメチル－β－シクロデキストリンの予防効果
この試験では、４０匹のゴールデンシリアン由来のＬＶＧハムスターを１０匹ずつの４群に分けて、以下の食餌を６週間与えた。
－「対照」群：通常食
－「対照ＨＣ」群：高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）
－「ＨＣ＋Ｃｒｙｓｍｅｂ」群：高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）＋３重量％のＣｒｙｓｍｅｂ（ＭＣＤ）
－「ＨＣ＋ＨＰＢＣＤ」群：高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）＋３重量％のＨＰＢＣＤ

生理学的マーカー
図１に試験中の動物の体重の推移を示す。高コレステロール食が体重に影響を及ぼさなかったことが分かる。逆に、シクロデキストリンを追加した２群は成長が遅かった。

４２日間の試験終了時に、動物を屠殺し、様々な器官の重量を測定した。

表１に様々な処置群における大動脈、脳、肝臓、小腸及び精巣上体の脂肪組織の重量を記載する。

表１に示されるように、シクロデキストリンによる処置によって最も影響を受けた組織は、油の貯蔵に関与する組織：肝臓及び精巣上体の脂肪組織（個体の総脂肪量と強く相関する）である。脂肪量の減少効果は、ＭＣＤＣｒｙｓｍｅｂで最も顕著であった。

表２に、様々な時点：試験の開始時（０日目、Ｄ０）、１４日目（Ｄ１４）、２８日目（Ｄ２８）及び試験終了時（４３日目、Ｄ４３）における様々な群の血漿トリグリセリドレベルを示す。

ＨＣ食では、対照群と比較して、血中トリグリセリドのレベルの激しい増加が誘導されることが分かる。この増加はシクロデキストリンの添加によって正常化され、ＭＣＤＣｒｙｓｍｅｂの効果はより顕著であった。

表３に４２日間の処置の終了時に動物の肝臓において測定された生化学データを示す。

表３に示されるように、ＨＣ食は、主にコレステロールの形態であるがトリグリセリドの形態でもある、肝臓に貯蔵された脂質の量の激しい増加を引き起こす。飼料中へのシクロデキストリンの添加は、この貯蔵を減少させる効果を有した。この効果はＭＣＤでさらにより顕著であり、正常レベルの％脂質、コレステロール及びトリグリセリドの貯蔵が測定された。

バイオマーカー（肝臓で発現されたメッセンジャーＲＮＡの量）
デノボでの脂質生合成（図３）及びデノボでのコレステロール合成（図５）並びにコレステロール除去（図６）に関与する様々な遺伝子の発現レベルを、試験終了時に４群の動物の肝臓で測定した。

コレステロールに富む食餌はＳＣＤ１の発現の増加を誘導し、それはトリグリセリドなどの不飽和脂肪酸の産生の増加につながるはずである。飼料中へのＨＰＢＣＤの添加によって、対照群と比較して、ＳＣＤ１及びＡＣＣ遺伝子の発現の阻害が生じ、それがトリグリセリドなどの脂肪酸の合成及び貯蔵の減少に関連している可能性がある。飼料中へのＭＣＤの添加はＨＰＢＣＤの添加よりもさらに顕著な効果をもたらし、ＦＡＳ、ＡＣＣ、ＳＣＤ１及びＳＲＥＢＰ１遺伝子の発現の全体的な阻害が生じた（図３）。

図５に示されるように、ＨＣ食では対照群と比較して、ＣＹＰ５１遺伝子の発現の減少が生じ、したがってコレステロールの合成が減少する。ＨＰＢＣＤの添加はほとんど効果がなかった。対照的に、ＣｒｙｓｍｅｂＭＣＢの添加は、ＳＲＥＢ２、ＣＹＰ５１ａ１、及びＨＭＧＣＲ遺伝子の発現を増加させ、したがって、脂肪酸合成の代わりにコレステロールの合成を増加させた。

図６に示されるように、ＭＣＤの添加は、ＨＣ群と比較して、コレステロールの除去に関与する遺伝子の発現を正常化させる。この正常化は、ＨＰＢＣＤよりもＭＣＤの方が大きい。

結論として、様々な測定したパラメータは、本発明のメチルシクロデキストリンが、高コレステロール食に起因する障害（肝臓における脂肪酸の貯蔵の増加及び脂肪酸の増加）を効果的に抑制できることを示している。

本発明のメチルシクロデキストリンの使用によって、肝臓における脂質の蓄積の減少及びコレステロールの除去の増加が促進される。

別のシクロデキストリンであるＨＰＢＣＤよりも、本発明のＭＣＤのこれらの効果の方が大きい。

実施例３：高コレステロール血症に関連する肝臓の病態に対するメチル－β－シクロデキストリンの治療効果
実施例２と同じプロトコールを実施したが、ここでは、高コレステロール血症の誘導の第１段階を２週間行い、続いて治療の第２段階を行い、その間はシクロデキストリンを「ＨＣ＋Ｃｒｙｓｍｅｂ」及び「ＨＣ＋ＨＰＢＣＤ」群の食餌に添加した。

この試験では、４０匹のゴールデンシリアン由来のＬＶＧハムスターを１０匹ずつの４群に分けて、以下の食餌を６週間与えた。
－「対照」群：通常食
－「対照ＨＣ」群：高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）
－「ＨＣ＋Ｃｒｙｓｍｅｂ」群：Ｄ１～Ｄ１４の高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）、次いでＤ１５～Ｄ４２の高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）＋３重量％のＣｒｙｓｍｅｂ（ＭＣＤ）
－「ＨＣ＋ＨＰＢＣＤ」群：Ｄ１～Ｄ１４の高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）、次いでＤ１５～Ｄ４２の高コレステロール食（２．５重量％のコレステロールを含有）＋３重量％のＨＰＢＣＤ

生理学的マーカー
図７に試験中の動物の体重の推移を示す。高コレステロール食が体重に影響を及ぼさなかったことが分かる。逆に、シクロデキストリンを追加した２群は成長が遅かった。

様々な処置群における肝臓及び精巣上体の脂肪組織の重量を記載する図８は、シクロデキストリンによる処置によって最も影響を受けた組織が、油の貯蔵に関与する組織：肝臓及び精巣上体の脂肪組織（個体の総脂肪量と強く相関する）であることを示している。脂肪量の減少効果は、ＭＣＤＣｒｙｓｍｅｂで最も顕著であった。

図９に、経時的な様々な処置群におけるコレステロール、不飽和脂肪酸、トリグリセリド及びＬＤＬｃの血清濃度を示す。

ＨＣ食は、対照群と比較して、血中のトリグリセリド及びコレステロールのレベルの激しい増加を引き起こすことが分かる。ＨＣ食の１４日後のＭＣＤＣｒｙｓｍｅｂの添加によって、これらの濃度を有意に低下させることができ、それらは対照群の濃度に近い。

図１０に示されるように、ＨＣ食は、特にコレステロールの形態で肝臓に貯蔵される脂質の量の大幅な増加を引き起こす。誘導期後の食餌へのシクロデキストリンの添加は、この貯蔵を減少させる効果を有した。

ＨＣ群において、組織学的には微小胞液胞の出現及び炎症細胞による浸潤が観察された。ＭＣＤへの曝露によって、ＨＣ＋Ｃｒｙｓｍｅｂ群では、これらの組織学的徴候の重症度を低下させることができた（データは示さず）。

結論として、様々な測定したパラメータは、本発明のメチルシクロデキストリンが、高コレステロール食に起因する障害（肝臓における脂肪酸の貯蔵の増加及び脂肪酸の増加）を、これらの障害の誘導期の後にＭＣＤを投与した場合であっても、効果的に抑制できることを示している。

本発明のメチルシクロデキストリンの使用は、肝臓における脂質の蓄積の減少及びコレステロールの除去の増加を促進し、実施例２で実証された予防効果に加えて治療効果を有する。

別のシクロデキストリンであるＨＰＢＣＤよりも、本発明のＭＣＤによるこれらの効果の方が大きい。

したがって、本出願人は、本発明のメチルシクロデキストリンにより、
－体内、特に肝臓における脂質の貯蔵を減少させること、
－代謝及びコレステロールの除去を増加させること、
－肝臓の組織構造を改善すること
が可能であることを実証した。

これらの効果は、高コレステロール血症の誘導中（予防効果モデル）又は高コレステロール血症の誘導の発症後（治療効果モデル）に本発明のメチルシクロデキストリンを投与した場合に観察された。

観察された効果は、別のシクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンで観察されたものよりも大きかった。

Claims

脂肪肝及び脂肪肝に関連する疾患の治療及び／又は予防に使用するための、少なくとも１種のメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物。
前記脂肪肝が、非アルコール性脂肪肝（「非アルコール性脂肪肝疾患」ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
前記メチルシクロデキストリンが、０．０５～１．５、優先的には０．２～１．２、さらにより優先的には０．４～０．９、最も好ましくは０．６～０．８のモル置換値を有することを特徴とする、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
前記メチルシクロデキストリンがメチル－β－シクロデキストリンであることを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
前記メチルシクロデキストリンが、グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシル上で、又は前記グルコピラノースユニットのＣ３及び／若しくはＣ６炭素に結合したヒドロキシル上で、又は前記グルコピラノースユニットのＣ２、Ｃ３及び／若しくはＣ６炭素の組合せ、好ましくは前記グルコピラノースユニットのＣ２及びＣ６炭素の組合せに結合したヒドロキシル上で置換されていることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
前記メチルシクロデキストリン組成物が、前記グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシル上で置換されたメチル－β－シクロデキストリン、前記グルコピラノースユニットのＣ３及び／又はＣ６炭素に結合したヒドロキシル上で置換されたメチル－β－シクロデキストリン、前記グルコピラノースユニットのＣ２、Ｃ３及び／又はＣ６炭素、好ましくはＣ２及びＣ６炭素に結合したヒドロキシル上で置換されたメチル－β－シクロデキストリンからなる群から選択される１種以上のメチル－β－シクロデキストリンを含み、前記メチル－β－シクロデキストリンが０．６～０．８のモル置換値を有することを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
前記メチルシクロデキストリン組成物が、前記グルコピラノースユニットのＣ２炭素に結合したヒドロキシル上で置換された少なくとも５０、６０、又は７５％のメチルを含むことを特徴とする、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
前記組成物が経口投与可能であることを特徴とする、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
脂質の貯蔵の減少、好ましくは肝臓における脂質の蓄積の減少をさらに促進する、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
コレステロールの除去の増加をさらに促進する、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。