JP2023537499A - オリゴヌクレオチドの全身送達 - Google Patents

オリゴヌクレオチドの全身送達 Download PDF

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Abstract

本開示は、組成物、ｍＲＮＡ分子の発現を予防、制限又は調節すべく設計されたオリゴヌクレオチドの全身送達を容易にするためのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を合成及び使用する方法を提供する。

Description

関連出願の相互参照
この出願は、２０２０年８月４日に出願された米国仮特許出願第６３／０６０，７１５号、及び２０２１年２月２日に出願された米国仮特許出願第６３／１４４，６０３号に基づく優先権を主張するものであり、参照によりそれらの内容全体を本明細書に援用する。
本開示は、核酸－疎水性リガンド結合体、及びオリゴヌクレオチド－疎水性リガンド結合体に関する。詳細には、本開示は、核酸－脂質結合体、及びオリゴヌクレオチド－脂質結合体、それらの調製方法、それらの化学配置、並びに本明細書に提供される記載による結合体化核酸及びオリゴヌクレオチドを使用して細胞における標的遺伝子の発現を調節するのに有用な方法に関する。本開示はまた、本記載の結合体を含む薬学的に許容される組成物、及び様々な障害の治療における上記組成物の使用方法も提供する。
修飾核酸による遺伝子発現の調整は、研究所での研究ツールとしても、臨床での治療手法としても、大きな可能性を示す。いくつかの種類のオリゴヌクレオチド系又は核酸系治療薬が臨床試験下にあり、これには、アンチセンスオリゴ（ＡＳＯ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）、アプタマー、リボザイム、エクソンスキップ又はスプライシング改変オリゴ、ｍＲＮＡ及びＣＲＩＳＰＲが含まれる。化学修飾は、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ安定性、ＲＮＡ結合親和性及び薬物動態特性を向上させることを含めた、オリゴヌクレオチド治療薬が直面する障壁を乗り越える上で肝要な役割を果たす。過去３０年間でオリゴヌクレオチドのための様々な化学修飾方策が開発されており、これには、糖、核酸塩基及びホスホジエステル主鎖の修飾が含まれる（Ｄｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｒｍａ，ＣＨＥＭ．ＢＩＯＬ．２０１２，１９（８）：９３７－５４、Ｗａｎ ａｎｄ Ｓｅｔｈ，Ｊ．ＭＥＤ．ＣＨＥＭ．２０１６，５９（２１）：９６４５－６７、及びＥｇｌｉ ａｎｄ Ｍａｎｏｈａｒａｎ，ＡＣＣ．ＣＨＥＭ．ＲＥＳ．２０１９，５４（４）：１０３６－４７）。
ｓｉＲＮＡ系又は二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）系治療薬は、肝臓における特定の標的遺伝子の発現を低減する効果的な手段として首尾よく使用されてきた。このように、これらのＲＮＡｉ剤は、いくつかの治療用途、診断用途及び研究用途において標的遺伝子発現を調節するのに比類なく有用である。
広範な臨床的使用を妨げている障害の１つは、完全なｓｉＲＮＡ効率を肝臓以外へ送達する能力である。このように、当技術分野では、様々な組織における標的遺伝子の発現を調節するために新しくかつ効果的なＲＮＡｉ剤を肝臓の外側へ首尾よく送達することが必要とされ続けている。
本開示は、全身送達のための疎水性リガンドを含む新規オリゴヌクレオチド結合体を設計することによってこの障害を乗り越えることを狙いとする。
本出願は、アダマンチル及び脂質結合体を含むがこれらに限定されない疎水性リガンドを含む、新規な核酸、オリゴヌクレオチド又はその類縁体に関する。本開示は、細胞における標的遺伝子の発現を調節するように機能する、核酸－脂質結合体、及びオリゴヌクレオチド－脂質結合体、並びにそれを調製及び使用する方法に関する。親油性／疎水性部分、例えば、脂肪酸及びアダマンチル基は、これらの高親水性核酸／オリゴヌクレオチドに結合している場合、血漿タンパク質結合を大幅に増強し得、結果的に循環中半減期を大幅に延ばし得る。本明細書に提供される結合体化核酸、オリゴヌクレオチド及びその類縁体は、安定しており、ＲＮＡ標的に結合して幅広い肝外ＲＮアーゼＨ活性を誘発し、また、スプライシング切替え及びＲＮＡｉにおいても有用である。脂質などの疎水性部分を組み込むことによって、ＣＮＳ、筋肉、脂肪及び副腎を含むがこれらに限定されないいくつかの組織の中への新規核酸、オリゴヌクレオチド又はその類縁体の全身送達が容易になる。
好適な核酸－疎水性リガンド結合体、及びオリゴヌクレオチド－疎水性リガンド結合体は、核酸阻害剤分子、例えば、ｄｓＲＮＡ阻害剤分子、ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、アンタゴミール、アプタマー、及び一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子を含む。特に、本開示は、細胞内ＲＮＡレベルの調節剤として有用性が確認される、核酸－脂質結合体、オリゴヌクレオチド－脂質結合体、及びその類縁体を提供する。核酸阻害剤分子は、様々な機序一式を経て、例えばＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によって、ＲＮＡ発現を調節し得る。本明細書に提供される核酸－疎水性リガンド結合体、オリゴヌクレオチド－疎水性リガンド結合体及びその類縁体の長所は、細胞内ＲＮＡレベルの調節と合致して広範な薬理活性が可能であることである。加えて、本記載は、細胞内ＲＮＡレベルを調節することによって疾患状態を治療又は改善するために有効量の本明細書に記載の結合体を使用する方法を提供する。
本開示の核酸－疎水性リガンド結合体、及びその薬学的に許容される組成物が細胞内ＲＮＡレベルの調節剤として有効であることが今や見出された。そのような、１つ以上の脂質結合体を含むその核酸－脂質結合体は、式ＩもしくはＩａ：
Figure 2023537499000001
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、式中の各変数は本明細書で定義及び記載されるとおりである。
いくつかの実施形態では、核酸－脂質結合体は、式Ｉ－ｂ、Ｉ－ｃ、Ｉ－Ｉｂ、Ｉ－Ｉｃ、Ｉ－ｄ、もしくはＩ－ｅ、Ｉ－Ｉｄ、もしくはＩ－Ｉｅ：
Figure 2023537499000002
Figure 2023537499000003
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、式中の各変数は本明細書で定義及び記載されるとおりである。
別の態様では、本開示は、式ＩＩもしくはＩＩ－ａ：
Figure 2023537499000004
 で表されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を提供し、式中の各変数は本明細書で定義及び記載されるとおりである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド－脂質結合体は、式ＩＩ－ｂ、ＩＩ－ｃ、ＩＩ－Ｉｂ、ＩＩ－Ｉｃ、ＩＩ－ｄ、ＩＩ－ｅ、ＩＩ－Ｉｄ、もしくはＩＩ－Ｉｅ：
Figure 2023537499000005
Figure 2023537499000006
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、式中の各変数は本明細書で定義及び記載されるとおりである。
本開示のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、式Ｉ、Ｉ－ａ、Ｉ－ｂ、Ｉ－ｃ、Ｉ－Ｉｂ、ＩＩ－Ｉｃ、Ｉ－ｄ、Ｉ－ｅ、Ｉ－Ｉｄ、Ｉ－Ｉｅ、ＩＩ、ＩＩ－ａ、ＩＩ－ｂ、ＩＩ－ｃ、ＩＩ－Ｉｂ、ＩＩ－Ｉｃ、ＩＩ－ｄ、ＩＩ－ｅ、ＩＩ－Ｉｄ又はＩＩ－Ｉｅのいずれかで表される核酸－リガンド結合体単位を１つ以上含む。
本開示の核酸－リガンド結合体及びオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、並びにその薬学的に許容される組成物は、細胞内ＲＮＡレベルの調整に関連する様々な疾患、障害又は病状を治療する上で有用である。そのような疾患、障害又は病状には、本明細書に記載されているものが含まれる。これらの核酸－リガンド結合体及びオリゴヌクレオチド－脂質結合体を作る方法及び送達する方法は本明細書に開示される。
本開示によって提供される核酸－リガンド結合体、及びオリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、生物学的及び病理学的現象の遺伝子発現の研究、体組織におけるＲＮＡレベルの研究、並びに新しいＲＮＡ干渉剤のｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏでの比較評価のためにも有用である。本明細書に開示される核酸－リガンド結合体及びオリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、標的遺伝子の発現を低減するのに役立つ。
単回の１５ｍｇ／ｋｇのＧａｌＸＣ脂質結合体の静脈内注射から５日目の種々の組織におけるＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの遺伝子サイレンシングを示す。 投薬後６日目及び１４日目での、二重鎖１ｃ（Ｃ２２）の単回静脈内注射による肝外組織におけるＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの遺伝子サイレンシングの用量－応答効果を示す。 １回の１５ｍｇ／ｋｇの単回皮下投薬の後での種々の組織における二重鎖１ｃ（Ｃ２２）の長持ちするＡＬＤＨ２サイレンシング活性を示す。 １回の１５ｍｇ／ｋｇの単回皮下投薬の後での肝外組織におけるＧａｌＸＣジアシル脂質結合体二重鎖１ｈ（ジアシルＣ１６）、１ｉ（ジアシルＣ１８：１）、１ｊ（ＰＥＧ２Ｋ－ジアシルＣ１８）及び単脂質結合体二重鎖１ｂ（Ｃ１８）の遺伝子サイレンシング活性を示す。 １５ｍｇ／ｋｇの単回皮下投薬から７日目及び１４日目での種々の組織におけるＧａｌＸＣ長鎖脂質結合体二重鎖１ｄ（Ｃ２４）、１ｅ（Ｃ２６）、１ｇ（Ｃ２４：１）及びアダマンタン結合体二重鎖５ｂ（３Ｘアセチルアダマンタン）の遺伝子サイレンシング活性を示す。 １５ｍｇ／ｋｇのこれらのＧａｌＸＣ脂質結合体の単回皮下投薬から７日目及び１４日目での種々の組織におけるＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡレベルの遺伝子サイレンシングを示す。
１．核酸－リガンド結合体：
本開示の新規な核酸－リガンド結合体は、広範な肝外ＲＮＡｉ活性を誘発する。脂質部分を組み込むことによって、いくつかの組織、例えば、ＣＮＳ、筋肉、脂肪及び副腎の中への核酸又はその類縁体の全身送達が容易になる。
本開示のその核酸－リガンド結合体及びその組成物は、ＲＮＡ干渉剤として有用である。いくつかの実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体又はその類縁体は、細胞における遺伝子発現を阻害する。
第１の実施形態では、本開示は、式Ｉで表される核酸－脂質結合体：
Figure 2023537499000007
 〔式中、
Ｂは核酸塩基又は水素であり；
Ｒ1及びＲ2は、
独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか、又は
同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３員の飽和もしくは部分不飽和環を形成しており；
各ＲAは、独立して、Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
各Ｒは、
独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である、あるいは
同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成しており；
ＬAは独立してＰＧ1又はＬ－リガンドであり；
ＰＧ1は水素又は好適なヒドロキシル保護基であり；
各リガンドは、独立して、－（ＬＣ）n、又はアダマンチル基であり；
各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
各－Ｃｙ－は、独立して、フェニレニル、８～１０員二環式アリーレニル、４～７員の飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロカルボシクリレニル、８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、アダマンタンニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリーレニル、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１～５個のヘテロ原子を有する８～１０員二環式ヘテロアリーレニルから選択される二価の環であって任意選択的に置換された当該環であり；
ｎは１～１０であり；
Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｎ（Ｒ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、－Ｖ1ＣＲ2Ｗ1－、又は
Figure 2023537499000008
 に置き換わっており；
ｍは１～５０であり；
Ｘ1、Ｖ1及びＷ1は、独立して、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－であり；
ＰＧ2は、水素、ホスホロアミダイト類縁体又は好適な保護基である〕
、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
第２の実施形態では、第１の実施形態の核酸－リガンド結合体が、式Ｉ－ａ：
Figure 2023537499000009
 で表される。
第３の実施形態では、第１の実施形態の核酸－リガンド結合体が、式Ｉ－ｂもしくはＩ－ｃ：
Figure 2023537499000010
 〔式中、
Ｌ1は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000011
 に置き換わっており；
Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
で表されるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第４の実施形態では、核酸－リガンド結合体は、式Ｉ－ｄもしくはＩ－ｅ：
Figure 2023537499000012
 〔式中、
Ｂは核酸塩基又は水素であり；
ＰＧ1及びＰＧ2は、独立して、水素、ホスホロアミダイト類縁体又は好適な保護基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている。
Ｖは、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－ＮＲ－から選択される二価の基であり；
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－、
Figure 2023537499000013
 から選択される二価の基であり；
Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000014
 に置き換わっており；
ｍは１～５０であり；
Ｘ1は、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
各ＲAは、独立して、Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環
から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
各Ｒは、独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である〕
で表されるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第５の実施形態では、第４の実施形態の核酸－リガンド結合体において、
Ｖが－Ｏ－であり；
Ｌ2が、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位が、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、
Figure 2023537499000015
 に置き換わっており；
Ｒ4が水素であり；
ｗが、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ、
Figure 2023537499000016
 であり；
Ｒ5が、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位が、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、又はＣ（Ｏ）Ｏ－に置き換わっている。
第６の実施形態では、核酸－リガンド結合体は、式Ｉ－ＩｂもしくはＩ－Ｉｃ：
Figure 2023537499000017
〔式中、
Ｂは核酸塩基又は水素であり；
ｍは１～５０であり；
ＰＧ1及びＰＧ2は、独立して、水素、ホスホロアミダイト類縁体又は好適な保護基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
各Ｒは、独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である〕
で表されるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第７の実施形態では、第６の実施形態の核酸－リガンドにおいて、
Ｒ5が、
Figure 2023537499000018
 から選択される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、式Ｉ、Ｉ－ａ、Ｉ－ｂ、Ｉ－ｃ、Ｉ－ｄ、Ｉ－ｅ、Ｉ－Ｉｂ又はＩ－Ｉｃのいずれか１つで表される、上記に開示される実施形態１～７のいずれか１つの核酸－結合体単位を１つ以上含む。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の核酸－リガンド結合体単位を含む。いくつかの実施形態では、結合体は、１つの核酸－リガンド結合体単位を含む。いくつかの実施形態では、結合体は、２つの核酸－リガンド結合体単位を含む。いくつかの実施形態では、結合体は、３つの核酸－リガンド結合体単位を含む。
２．オリゴヌクレオチド－リガンド結合体：
本開示の新規オリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、広範な肝外ＲＮアーゼＨ活性を誘発する。疎水性部分、例えばアダマンチル又は脂質部分を組み込むことによって、いくつかの組織、例えば、ＣＮＳ、筋肉、脂肪及び副腎の中へのオリゴヌクレオチド又はその類縁体の全身送達が容易になる。
本開示のそのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体及びその組成物は、ＲＮＡ干渉剤として有用である。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体又はその類縁体は、細胞における遺伝子発現を阻害する。
本開示の別の態様は、核酸－リガンド結合体を含むオリゴヌクレオチドであって、１５～３０ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖、及び１つ以上のリガンド部分を含む、当該オリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、リガンド部分は独立してアダマンチル又は脂質部分である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、標的遺伝子配列に対する相補性の領域を有する。いくつかの実施形態では、相補性の領域の長さは、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０又は少なくとも２１連続ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは１９～２７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは２１～２７ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０～５３ヌクレオチドの長さのセンス鎖をさらに含み、センス鎖はアンチセンス鎖と二重鎖領域を形成し、脂質部分はセンス鎖に結合している。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは１２～４０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖の長さは１５～４０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、二重鎖領域の長さは、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０又は少なくとも２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、標的配列に対する相補性の領域の長さは、少なくとも１９連続ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス鎖はその３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１はＳ２に対して相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチドの長さのループを形成する。いくつかの実施形態では、脂質部分はループＬに結合している。
本開示の第８の実施形態は、式ＩＩ
Figure 2023537499000019
 〔式中、
Ｂは核酸塩基又は水素であり；
Ｒ1及びＲ2は、
独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか；又は
同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和もしくは部分不飽和環を形成しており；
各ＲAは、独立して、Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
各Ｒは、
独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である；あるいは
同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成しており；
リガンドは、独立して、－（ＬＣ）n、又はアダマンチル基であり；
各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
各－Ｃｙ－は、独立して、フェニレニル、８～１０員二環式アリーレニル、４～７員の飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロカルボシクリレニル、８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリーレニル、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１～５個のヘテロ原子を有する８～１０員二環式ヘテロアリーレニルから選択される二価の環であって任意選択的に置換された当該環であり；
ｎは１～１０であり；
Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｎ（Ｒ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、－Ｖ1ＣＲ2Ｗ1－、又は
Figure 2023537499000020
 に置き換わっており；
ｍは１～５０であり；
Ｘ1、Ｖ1及びＷ1は、独立して、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
Ｙは、水素、好適なヒドロキシル保護基、
Figure 2023537499000021
 であり；
Ｒ3は、水素であるか、好適な保護基であるか、好適なプロドラッグであるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
Ｘ2は、Ｏ、Ｓ又はＮＲであり；
Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＢＨ2－、又は共有結合であり；
Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
Ｙ2は、水素であるか、好適な保護基であるか、ホスホロアミダイト類縁体であるか、ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は固体担体に結合している連結基であり；
Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－である〕
で表される核酸－リガンド結合体を１つ以上の含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示する。
第９の実施形態は、第８の実施形態の結合体が式ＩＩ－ａもしくはＩＩ－ａ－１
Figure 2023537499000022
 で表された、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示し、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｙ、Ｌ、ＬＣ、ｎ及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
いくつかの実施形態は、Ｘ1が－Ｏ－であり、Ｙ2がホスホロアミダイト
Figure 2023537499000023
 であり、連結状態及び立体化学が、式ＩＩ－ａ１：
Figure 2023537499000024
 に示されるとおりである、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示し、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｙ、Ｌ、ＬＣ、ｎ及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
いくつかの実施形態は、Ｘ1が－Ｏ－であり、Ｙ2がホスフェート相互連結基であり、連結状態及び立体化学が、式ＩＩ－ａ２：
Figure 2023537499000025
 に示されるとおりである、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示し、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｙ、Ｌ、ＬＣ、ｎ及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
第１０の実施形態は、上記に開示されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態のいずれか１つのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体であって、式ＩＩ－ｂもしくはＩＩ－ｃ：
Figure 2023537499000026
 〔式中、
Ｌ1は、共有結合、一価又は二価の飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000027
 に置き換わっており；
Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲに置き換わっている〕
で表される、当該結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示する。
第１１の実施形態は、第８の実施形態のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体であって、式ＩＩ－ｄもしくはＩＩ－ｅ：
Figure 2023537499000028
 〔式中、
Ｖは、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－ＮＲ－から選択される二価の基であり；
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－、
Figure 2023537499000029
 から選択される二価の基であり；
Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000030
 に置き換わっており；
Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
Ｒ5は、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
で表される、当該結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示する。
第１２の実施形態は、式ＩＩ－ＩｄもしくはＩＩ－Ｉｅで表されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体：
Figure 2023537499000031
 〔式中、
ｍは１～５０であり；
ＢはＨ又は核酸塩基であり；
Ｘ1は、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、又はＮＲ－であり；
各Ｒは、独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、
Figure 2023537499000032
 から選択される二価の基であり；
Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000033
 に置き換わっており；
Ｙは、水素、
Figure 2023537499000034
 であり；
Ｒ3は、水素であるか、又は好適な保護基であるか、好適なプロドラッグであるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
Ｘ2はＯ又はＳであり；
Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、又は共有結合であり；
Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
Ｙ2は、水素であるか、ホスホロアミダイト類縁体であるか、ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は固体担体に結合している連結基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
、又はその薬学的に許容される塩を開示する。
第１３の実施形態は、
Ｒ5が、
Figure 2023537499000035
 から選択される、第１１の実施形態のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を開示する。
第１４の実施形態は、式ＩＩ－ＩｂもしくはＩＩ－Ｉｃで表されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体：
Figure 2023537499000036
 〔式中、
Ｂは核酸塩基又は水素であり；
ｍは１～５０であり；
Ｘ1は、－Ｏ－、又はＳ－であり；
Ｙは、水素、
Figure 2023537499000037
 であり；
Ｒ3は水素又は好適な保護基であり；
Ｘ2はＯ又はＳであり；
Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、又は共有結合であり；
Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
Ｙ2は、水素であるか、ホスホロアミダイト類縁体であるか、ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は固体担体に結合している連結基であり；
Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
Ｒは、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である〕
、又はその薬学的に許容される塩を開示する。
第１５の実施形態は、
Ｒ5が、
Figure 2023537499000038
 から選択される、第１４の実施形態のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を開示する。
いくつかの実施形態では、Ｘ1が－Ｏ－であり、Ｙ2がホスホロアミダイト
Figure 2023537499000039
 であり、連結状態及び立体化学が、式ＩＩ－ｂ－１もしくはＩＩ－ｃ－１：
Figure 2023537499000040
 に示されるとおりであるか、又はその薬学的に許容される塩であり、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、Ｌ1及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、Ｘ1は－Ｏ－であり、Ｙ2はホスフェート相互連結基であり、連結状態及び立体化学は、式ＩＩ－ｂ－２もしくはＩＩ－ｃ－２：
Figure 2023537499000041
 に示されるとおりであるか、又はその薬学的に許容される塩であり、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｌ1及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
いくつかの実施形態では、結合体が、式ＩＩ－ｄもしくはＩＩ－ｅ：
Figure 2023537499000042
 〔式中、
Ｖは、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－ＮＲ－から選択される二価の基であり；
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－、
Figure 2023537499000043
 から選択される二価の基であり；
Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000044
 に置き換わっており；
Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
Ｒ5は、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
で表される、第８の実施形態のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、Ｘ1は－Ｏ－であり、Ｙ2はホスホロアミダイト
Figure 2023537499000045
 であり、連結状態及び立体化学は、式ＩＩ－ｄ－１もしくはＩＩ－ｅ－１：
Figure 2023537499000046
 に示されるとおりであるか、又はその薬学的に許容される塩であり、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、Ｌ2、Ｖ、Ｗ及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、Ｘ1は－Ｏ－であり、Ｙ2はホスフェート相互連結基であり、連結状態及び立体化学は、示されているとおりであり、それによって、式ＩＩ－ｄ－２又はＩＩ－ｅ－２の単位：
Figure 2023537499000047
 を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を形成しており、式中のＢ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｙ、Ｌ2、Ｖ、Ｗ及びＺの各々は、上記に定義されるとおりである。
第１６の実施形態では、結合体が１～１０個の核酸－リガンド結合体単位を含む、第８～第１５の実施形態のうちのいずれか１つのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。いくつかの実施形態では、結合体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の核酸－リガンド結合体単位を含む。いくつかの実施形態では、結合体は１つの核酸－リガンド結合体単位を含む。いくつかの実施形態では、結合体は２つの核酸－リガンド結合体単位を含む。いくつかの実施形態では、結合体は３つの核酸－リガンド結合体単位を含む。
上記に開示される態様又は実施形態のいずれかの、ある特定の実施形態では、各ＬＣは、Ｃ８：０、Ｃ１０：０、Ｃ１１：０、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０、Ｃ１７：０、Ｃ１８：０、Ｃ２２：０、Ｃ２４：０、Ｃ２６：０、Ｃ２２：６、Ｃ２４：１、ジアシルＣ１６：０、ジアシルＣ１８：１、及びアダマンタンカルボン酸から選択される脂肪酸である。ある特定の実施形態では、アダマンタンカルボン酸はアダマンタン酢酸である。
上記に開示される態様又は実施形態のいずれかの、ある特定の実施形態では、ｎは１又は２である。
いくつかの実施形態では、Ｂは核酸塩基又は水素である。いくつかの実施形態では、Ｂは核酸塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂは核酸塩基類縁体である。いくつかの実施形態では、Ｂは修飾核酸塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂはユニバーサル核酸塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂは水素である。
いくつかの実施形態では、Ｂは、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）、
Figure 2023537499000048
 から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｂは、表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｒ1及びＲ2は、独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか、又は同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和もしくは部分不飽和環を形成している。
いくつかの実施形態では、Ｒ1及びＲ2は、独立して、水素、重水素又はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ1及びＲ2は、独立して、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、又はＳ（Ｏ）2Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ1及びＲ2は、独立して、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、又はＳｉＲ3である。いくつかの実施形態では、同一炭素上のＲ1及びＲ2は、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和もしくは部分不飽和環を形成している。
いくつかの実施形態では、Ｒ1はメチルであり、Ｒ2は水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒ1及びＲ2は、表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、各Ｒは、独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である、あるいは同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成している。
いくつかの実施形態では、Ｒは好適な保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒは、水素、Ｃ1-6脂肪族、又は任意選択的に置換されたフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、任意選択的に置換された、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式である、又はＲは、任意選択的に置換された、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環である。いくつかの実施形態では、同一原子上の２つのＲ基は、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成している。
いくつかの実施形態では、Ｒは水素である。いくつかの実施形態では、Ｒは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、各ＲAは、独立して、Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である。
いくつかの実施形態では、ＲAは、任意選択的に置換されたＣ1-6脂肪族、又は任意選択的に置換されたフェニルである。いくつかの実施形態では、ＲAは、任意選択的に置換された、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環であるか、又は任意選択的に置換された、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環である。
いくつかの実施形態では、ＲAは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、各リガンドは、独立して、水素、又はアダマンチル基及び脂質部分から選択される疎水性部分である。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている。
いくつかの実施形態では、ＬＣは、飽和又は部分不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている。
本明細書で使用される場合、脂質結合体部分は、本明細書に記載の核酸又はその類縁体と、親油性化合物とのカップリングによって形成される。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化された飽和直鎖脂肪酸を含む脂質結合体部分である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）ＣＨ3又はＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ3である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ2Ｈ5又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ2Ｈ5である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ3Ｈ7又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ3Ｈ7である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ4Ｈ9又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ4Ｈ9である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ5Ｈ11又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ5Ｈ11である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ6Ｈ13又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ6Ｈ13である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ7Ｈ15又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ7Ｈ15である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ8Ｈ17又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ8Ｈ17である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ9Ｈ19又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ9Ｈ19である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ10Ｈ21又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ10Ｈ21である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ11Ｈ23又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ11Ｈ23である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ12Ｈ25又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ12Ｈ25である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ13Ｈ27又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ13Ｈ27である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ14Ｈ29又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ14Ｈ29である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ15Ｈ31又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ15Ｈ31である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ16Ｈ33又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ16Ｈ33である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ17Ｈ35又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ17Ｈ35である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ18Ｈ37又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ18Ｈ37である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ19Ｈ39又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ19Ｈ39である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ20Ｈ41又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ20Ｈ41である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ21Ｈ43又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ21Ｈ43である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ22Ｈ45又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ22Ｈ45である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ23Ｈ47又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ23Ｈ47である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ24Ｈ29又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ24Ｈ29である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ25Ｈ51又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ25Ｈ51である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ26Ｈ53又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ26Ｈ53である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ27Ｈ55又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ27Ｈ55である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ28Ｈ57又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ28Ｈ57である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ29Ｈ59又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ29Ｈ59である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ30Ｈ61又はＮＨＣ（Ｏ）Ｃ30Ｈ61である。
いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化された部分不飽和直鎖脂肪酸を含む脂質結合体部分である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたミリストレイン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたパルミトレイン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたサピエン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたオレイン酸、すなわち、
Figure 2023537499000049
 である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたエライジン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたバクセン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたリノール酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたリノールエライジン酸（ｌｉｍｏｅｌａｉｄｉｃ ａｃｉｄ）である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたα－リノール酸、すなわち、
Figure 2023537499000050
 である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたアラキドン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたエイコサペンタエン酸、すなわち、
Figure 2023537499000051
 である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたエルカ酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたドコサヘキサエン酸、すなわち、
Figure 2023537499000052
 である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたアダマンタンカルボン酸である。いくつかの実施形態では、ＬＣは、エステル化又はアミド化されたアダマンタン酢酸である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）1-10アダマンタンである。
いくつかの実施形態では、ＬＣは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、ｎは、１、２、３、４又は５である。いくつかの実施形態では、ｎは１又は２である。いくつかの実施形態では、ｎは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000053
 に置き換わっている。
いくつかの実施形態では、Ｌは共有結合である。いくつかの実施形態では、Ｌは
Figure 2023537499000054
 である。
いくつかの実施形態では、Ｌは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｌ1は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000055
 に置き換わっている。
いくつかの実施形態では、Ｌ1は共有結合である。いくつかの実施形態では、Ｌ1は
Figure 2023537499000056
 である。
いくつかの実施形態では、Ｌ1は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
Figure 2023537499000057
 に置き換わっている。
いくつかの実施形態では、Ｌ2は共有結合である。いくつかの実施形態では、Ｌ2は
Figure 2023537499000058
 である。
いくつかの実施形態では、Ｌ2は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、ｍは１～５０である。
いくつかの実施形態では、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０である。
いくつかの実施形態では、ｍは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｒ3は、水素であるか、好適な保護基であるか、好適なプロドラッグであるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ3は水素又は好適な保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒ3は好適なプロドラッグである。いくつかの実施形態では、Ｒ3は、グルタチオン感受性部分である好適なホスフェート／ホスホナートプロドラッグである。いくつかの実施形態では、Ｒ3は、本明細書で参照によりその全体を援用する国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４８２３９号に記載されているものから選択されるグルタチオン感受性部分である。
いくつかの実施形態では、Ｒ3は、任意選択的に置換されたＣ1-6脂肪族、任意選択的に置換されたフェニル、任意選択的に置換された、１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、又は任意選択的に置換された、１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環であり、ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素及び硫黄から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ3はメチル又はエチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ3は、
Figure 2023537499000059
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ3は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ4は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ4はＲAである。いくつかの実施形態では、Ｒ4は好適なアミン保護基である。
好適なアミン保護基、並びにそれらを使用してアミン基を保護及び脱保護するのに適する試薬及び反応条件は、当技術分野でよく知られており、参照によりこの全体を本明細書に援用する、ＰＲＯＴＥＣＴＩＮＧ ＧＲＯＵＰＳ ＩＮ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３rd ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に詳しく記載されているものを含む。好適なアミン保護基としては、それに結合している窒素と合わせて見て、アラルキルアミン、カルバメート、アリルアミン、アミドなどが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される式の化合物のアミン保護基の例としては、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、エチルオキシカルボニル、メチルオキシカルボニル、トリクロロエチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、ベンジルオキソカルボニル（Ｃｂｚ）、アリル、ベンジル（Ｂｎ）、フルオレニルメチルカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、フェニルアセチル、ベンゾイルなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｒ4は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、各Ｒ5は、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている。
いくつかの実施形態では、Ｒ5は－ＣＨ3である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ2Ｈ5である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ3Ｈ7である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ4Ｈ9である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ5Ｈ11である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ6Ｈ13である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ7Ｈ15である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ8Ｈ17である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ9Ｈ19である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ10Ｈ21である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ11Ｈ23である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ12Ｈ25である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ13Ｈ27である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ14Ｈ29である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ15Ｈ31である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ16Ｈ33である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ17Ｈ35である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ18Ｈ37である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ19Ｈ39である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ20Ｈ41である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ21Ｈ43である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ22Ｈ45である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ23Ｈ47である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ24Ｈ29である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ25Ｈ51である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ26Ｈ53である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ27Ｈ55である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ28Ｈ57である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ29Ｈ59である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ30Ｈ61である。
いくつかの実施形態では、Ｒ5は、部分不飽和直鎖Ｃ1-50炭化水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ13Ｈ25である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ15Ｈ29である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ17Ｈ33である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ19Ｈ37である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ21Ｈ41である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ17Ｈ31である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ17Ｈ29である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ19Ｈ31である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ19Ｈ29である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ21Ｈ41である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は－Ｃ21Ｈ31である。
いくつかの実施形態では、Ｒ5は、－アダマンタンである。いくつかの実施形態では、Ｒ5は、－ＣＨ2アダマンタンである。いくつかの実施形態では、Ｒ5は、－（ＣＨ2）1-10アダマンタンである。
いくつかの実施形態では、Ｒ5は
Figure 2023537499000060
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は
Figure 2023537499000061
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は
Figure 2023537499000062
 である。いくつかの実施形態では、Ｒ5は
Figure 2023537499000063
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ5は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｖは、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－ＮＲ－から選択される二価の基である。
いくつかの実施形態では、Ｖは－Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｖは－Ｓ－である。いくつかの実施形態では、Ｖは－ＮＲ－である。
いくつかの実施形態では、Ｖは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－、
Figure 2023537499000064
 から選択される二価の基である。
本開示の脂質結合体を含む核酸又はその類縁体の組立ては、本開示に限定されるわけではなく、様々な架橋技術を用いて容易になり得る。上記Ｗ、又は親油性化合物と本明細書に記載の核酸もしくはその類縁体とのカップリングが、互いに反応して共有結合で結び付く好適なカップリング部分によって容易になることもあり得ることは、当業者の技量の範囲内である。本開示で用いられることが想定される例示的な架橋技術には、表Ａに列挙されるものも含まれる。
Figure 2023537499000065
Figure 2023537499000066
いくつかの実施形態では、Ｗは－Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｗは、－Ｓ－、－ＮＲ－である。いくつかの実施形態では、Ｗは－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－である。いくつかの実施形態では、Ｗは－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－である。いくつかの実施形態では、Ｗは－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000067
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000068
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000069
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000070
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000071
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000072
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000073
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000074
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000075
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000076
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000077
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000078
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000079
 である。いくつかの実施形態では、Ｗは
Figure 2023537499000080
 である。
いくつかの実施形態では、Ｗは、以下の表１に描かれているものから選択される。
以下に定義され、本明細書に記載されるように、Ｘは、水素、好適な保護基、又は架橋基である。
いくつかの実施形態では、Ｘは水素である。いくつかの実施形態では、Ｘは好適な保護基である。いくつかの実施形態では、Ｘは架橋基である。いくつかの実施形態では、架橋基は、表Ａの中で言及されている架橋基のいずれかを含めた－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨＲ、－ＣＯＨ、－ＣＯ2Ｈ、－Ｎ3、アルキン、アルケンである。
いくつかの実施形態では、Ｘは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｘ1は、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－である。
いくつかの実施形態では、Ｘ1は－Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｘ1は－Ｓ－である。いくつかの実施形態では、Ｘ1は－Ｓｅ－である。いくつかの実施形態では、Ｘ1は－ＮＲ－である。
いくつかの実施形態では、Ｘ1は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｘ2は、Ｏ、Ｓ又はＮＲである。
いくつかの実施形態では、Ｘ2はＯである。いくつかの実施形態では、Ｘ2はＳである。いくつかの実施形態では、Ｘ2はＮＲである。
いくつかの実施形態では、Ｘ2は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＢＨ2－、又は共有結合である。
いくつかの実施形態では、Ｘ3は－Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｘ3は－Ｓ－である。いくつかの実施形態では、Ｘ3は－ＢＨ2－である。いくつかの実施形態では、Ｘ3及びＲ4は、－ＢＨ3を形成する。いくつかの実施形態では、Ｘ3は共有結合である。いくつかの実施形態では、Ｘ3は、ボラノホスフェート骨格を構成する共有結合である。
いくつかの実施形態では、Ｘ3は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｙは、水素、好適なヒドロキシル保護基、
Figure 2023537499000081
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙは水素である。いくつかの実施形態では、Ｙは、好適なヒドロキシル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｙは
Figure 2023537499000082
 である。いくつかの実施形態では、Ｙは
Figure 2023537499000083
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’末端側に結合している連結基である。いくつかの実施形態では、Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの３’末端側に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ1は
Figure 2023537499000084
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ1は
Figure 2023537499000085
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ1は
Figure 2023537499000086
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ1は
Figure 2023537499000087
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙ1は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｙ2は、水素であるか、好適な保護基であるか、ホスホロアミダイト類縁体であるか、ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は固体担体に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ2は水素である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は、好適な保護基である。いくつかの実施形態では、Ｙ2はホスホロアミダイト類縁体である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は、式：
Figure 2023537499000088
 のホスホロアミダイト類縁体であり、式中のＲ3及びＸ3の各々は、独立して、本明細書に記載されるとおりであり、Ｅはハロゲン又はＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は、固体担体に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ2はベンゾイルである。いくつかの実施形態では、Ｙ2は、ｔ－ブチルジメチルシリルである。いくつかの実施形態では、Ｙ2は
Figure 2023537499000089
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は
Figure 2023537499000090
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は
Figure 2023537499000091
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は
Figure 2023537499000092
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ2は
Figure 2023537499000093
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙ2は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に一実施形態で示されるように、Ｅはハロゲン又はＮＲ2である。
いくつかの実施形態では、Ｅはハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｅは－ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｅはクロロである。いくつかの実施形態では、Ｅは－Ｎ（ｉＰｒ）2である。
いくつかの実施形態では、Ｅは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記にＹ1のいくつかの実施形態で示されるように、Ｙ3は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ3は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’末端側に結合している連結基である。いくつかの実施形態では、Ｙ3は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの３’末端側に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ3は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記にＹ2のいくつかの実施形態で示されるように、Ｙ4は、水素であるか、保護基であるか、ホスホロアミダイト類縁体であるか、ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの４’もしくは５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は固体担体に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ4は水素である。いくつかの実施形態では、Ｙ4は保護基である。いくつかの実施形態では、Ｙ4はホスホロアミダイト類縁体である。いくつかの実施形態では、Ｙ4は、式：
Figure 2023537499000094
 のホスホロアミダイト類縁体であり、式中のＲ3、Ｘ3及びＥの各々は、独立して、本明細書に記載されるとおりである。いくつかの実施形態では、Ｙ4は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの４’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基である。いくつかの実施形態では、Ｙ4は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基である。いくつかの実施形態では、Ｙ4は、固体担体に結合している連結基である。
いくつかの実施形態では、Ｙ4はベンゾイルである。いくつかの実施形態では、Ｙ4は、ｔ－ブチルジメチルシリルである。いくつかの実施形態では、Ｙ4は
Figure 2023537499000095
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ4は
Figure 2023537499000096
 である。いくつかの実施形態では、Ｙ4は
Figure 2023537499000097
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙ4は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、各Ｒ6は、独立して、水素、好適なプロドラッグ、ＲA、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ2、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2ＮＲ2、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ2、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ2、－ＯＰ（Ｏ）Ｒ2、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）2、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）ＮＲ2、－ＯＰ（Ｏ）（ＮＲ2）2－、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ2、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）Ｒ2、－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）2、－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）ＮＲ2、－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）（ＮＲ2）2、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、又はＳｉＲ3である。
いくつかの実施形態では、Ｒ6は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は重水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は、好適なプロドラッグである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は、グルタチオン感受性部分である好適なホスフェート／ホスホナートプロドラッグである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は、本明細書で参照によりその全体を援用する、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０７２５３６号に記載されているものから選択されるグルタチオン感受性部分である。いくつかの実施形態では、Ｒ6はＲAである。いくつかの実施形態では、Ｒ6はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＣＮである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＮＯ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＳＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｓ（Ｏ）2Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｓ（Ｏ）2ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｓ（Ｏ）Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｃ（Ｏ）Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｃ（Ｏ）ＯＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｃ（Ｏ）ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｃ（Ｒ）2Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｃ（Ｒ）2Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＣ（Ｏ）Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＰ（Ｏ）Ｒ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＯＰ（Ｏ）（ＮＲ2）2－である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）Ｒ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）ＮＲ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｐ（Ｏ）（ＮＲ2）2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）2Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2である。いくつかの実施形態では、Ｒ6は－ＳｉＲ3である。
いくつかの実施形態では、Ｒ6はヒドロキシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ6はフルオロである。いくつかの実施形態では、Ｒ6はメトキシである。いくつかの実施形態では、Ｒ6は
Figure 2023537499000098
 である。
いくつかの実施形態では、Ｒ6は、表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｅは、ハロゲン又はＮＲ2である。
いくつかの実施形態では、Ｅはハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｅは－ＮＲ2である。
いくつかの実施形態では、Ｅは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－である。
いくつかの実施形態では、Ｚは－Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｚは－Ｓ－である。いくつかの実施形態では、Ｚは－ＮＲ－である。いくつかの実施形態では、Ｚは－ＣＲ2－である。
いくつかの実施形態では、Ｚは、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、ＰＧ1は、水素、又は好適なヒドロキシル保護基である。
いくつかの実施形態では、ＰＧ1は水素である。いくつかの実施形態では、ＰＧ1は、好適なヒドロキシル保護基である。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、ＰＧ2は、水素、ホスホロアミダイト類縁体、又は好適な保護基である。
いくつかの実施形態では、ＰＧ2は水素である。いくつかの実施形態では、ＰＧ1はホスホロアミダイト類縁体である。いくつかの実施形態では、ＰＧ2はヒドロキシル保護基である。
いくつかの実施形態では、ＰＧ1及びＰＧ2の各々は、それに結合している酸素と合わせて見て、上記にＹについて記載される好適なヒドロキシル保護基から独立して選択される。いくつかの実施形態では、ＰＧ1及びＰＧ2は、それらの間に介在する原子と一緒になって、環状ジオール保護基、例えば環状アセタール又はケタールを形成する。そのような基としては、メチレン、エチリデン、ベンジリデン、イソプロピリデン、シクロヘキシリデン、及びシクロペンチリデン、シリレン誘導体、例えば、ジ－ｔ－ブチルシリレン及び１，１，３，３－テトライソプロピリジシロキサニリデン、環状カーボネート、環状ボロネート、及び環状アデノシンモノホスフェート（すなわち、ｃＡＭＰ）をベースとする環状モノホスフェート誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態では、環状ジオール保護基は、１，１，３，３－テトライソプロピリジシロキサニリデンである。
いくつかの実施形態では、ＰＧ1及びＰＧ2は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、ＰＧ3は、水素、又は好適なアミン保護基である。
いくつかの実施形態では、ＰＧ3は水素である。いくつかの実施形態では、ＰＧ3は、好適なアミン保護基である。いくつかの実施形態では、ＰＧ3及びＲ4は、環状アミン保護基のためのものである（例えば、フタルイミド）。
いくつかの実施形態では、ＰＧ3は、以下の表１に描かれているものから選択される。
上記に定義され、本明細書に記載されるように、ＰＧ4は、水素、又は好適なヒドロキシル保護基である。
いくつかの実施形態では、ＰＧ4は水素である。いくつかの実施形態では、ＰＧ4は、好適なヒドロキシル保護基である。
いくつかの実施形態では、ＰＧ4は、以下の表１に描かれているものから選択される。
Figure 2023537499000099
Figure 2023537499000100
Figure 2023537499000101
Figure 2023537499000102
いくつかの実施形態では、本開示は、上記表１に示される本開示の脂質結合体を含む核酸もしくはその類縁体、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、実施例に記載されるような、本開示の１つ以上の核酸－脂質結合体を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
３．定義：
本開示の化合物（すなわち、核酸－リガンド結合体、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体、及びその類縁体）は、本明細書に概略的に記載されているものを含み、本明細書に開示されるクラス、サブクラス及び種によってさらに例示される。本明細書で使用される場合、特に指示がなされていない限り以下の定義が適用されるものとする。本開示の目的のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５th Ｅｄ．のＣＡＳ方式の元素周期表に従って特定される。加えて、有機化学の一般原理は、“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、及び“Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５th Ｅｄ．，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：２００１に記載されており、本明細書は参照によりそれらの内容全体を援用する。
本明細書で使用される場合、「脂肪族」又は「脂肪族基」という用語は、分子の残部に対する単一の結合点を有する、完全に飽和しているかもしくは１つ以上の不飽和単位を含有する直鎖（つまり、分岐していない）もしくは分岐状の置換もしくは非置換炭化水素鎖、又は完全に飽和しているかもしくは１つ以上の不飽和単位を含有するが芳香族ではない単環式炭化水素もしくは二環式炭化水素（本明細書では「炭素環」、「脂環式」又は「シクロアルキル」とも呼称される）を意味する。特に明記されていない限り、脂肪族基は１～６個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態では、脂肪族基は１～５個の脂肪族炭素原子を含有する。他の実施形態では、脂肪族基は１～４個の脂肪族炭素原子を含有する。さらに他の実施形態では、脂肪族基は１～３個の脂肪族炭素原子を含有し、さらに他の実施形態では、脂肪族基は１～２個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態では、「脂環式」（又は「炭素環」もしくは「シクロアルキル」）は、分子の残部に対する単一の結合点を有する、完全に飽和しているか又は１つ以上の不飽和単位を含有するが芳香族ではない単環式のＣ3－Ｃ6炭化水素を指す。好適な脂肪族基としては、直鎖状又は分岐状の置換又は非置換アルキル、アルケニル、アルキニル基及びそれらのハイブリッド、例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、又は（シクロアルキル）アルケニルが挙げられるが、これらに限定されない。カルボシクリル基は、単環式、二環式、架橋二環式、スピロ環式又はアダマンタンであり得る。
本明細書で使用される場合、「架橋二環式」という用語は、任意の二環式の環系、すなわち、少なくとも１つの架橋を有する飽和又は部分不飽和の炭素環式又は複素環式を指す。ＩＵＰＡＣによって定義されているように、「架橋」は、２つの橋頭を連結している、非分岐原子鎖、又は原子、もしくは原子価結合であり、「橋頭」は、３つ以上の骨格原子（水素を除く）に結合している、環系の任意の骨格原子である。いくつかの実施形態では、架橋二環式基は、７～１２個の環構成員、並びに窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する。そのような架橋二環式基は当技術分野でよく知られており、以下に示される基を含むが、この場合、各基は、任意の置換可能な炭素又は窒素原子において分子の残部に結合している。特に明記されていない限り、架橋二環式基は、１つ以上の、脂肪族基について示されている置換基で任意選択的に置換されている。さらに、又はあるいは、架橋二環式基の任意の置換可能な窒素は任意選択的に置換されている。例示的な架橋二環式としては：
Figure 2023537499000103
 が挙げられる。
「低級アルキル」という用語は、Ｃ1-4直鎖状又は分岐状アルキル基を指す。例示的な低級アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ－ブチルである。
「低級ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲン原子で置換されたＣ1-4直鎖状又は分岐状アルキル基を指す。
「ヘテロ原子」という用語は、酸素、硫黄、窒素、リン又はケイ素のうちの１つ以上を意味する（窒素、硫黄、リンもしくはケイ素の任意の酸化形態；任意の塩基性窒素の四級化形態；又は複素環の置換可能な窒素、例えば、（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロリルの中にあるような）Ｎ、（ピロリジニルの中にあるような）ＮＨ、もしくは（Ｎ置換ピロリジニルの中にあるような）ＮＲ+を含む）。
「不飽和」という用語は、本明細書で使用される場合、部分が１つ以上の不飽和単位を有することを意味する。
本明細書で使用される場合、「二価Ｃ1-8（又はＣ1-6）飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状炭化水素鎖」という用語は、本明細書で定義される直鎖状又は分岐状である二価のアルキレン、アルケニレン及びアルキニレン鎖を指す。
「アルキレン」という用語は、二価のアルキル基を指す。「アルキレン鎖」は、ポリメチレン基、すなわち、－（ＣＨ2）n－であり、式中のｎは、正の整数、好ましくは１～６、１～４、１～３、１～２、又は２～３である。置換アルキレン鎖は、１つ以上のメチレン水素原子が置換基に置き換わっているポリメチレン基である。好適な置換基としては、置換脂肪族基について以下に記載されるものが挙げられる。
「アルケニレン」という用語は、二価のアルケニル基を指す。置換アルケニレン鎖は、１つ以上の水素原子が置換基に置き換わっている少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチレン基である。好適な置換基としては、置換脂肪族基について以下に記載されるものが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「シクロプロピレニル」という用語は、以下の構造の二価のシクロプロピル基：
Figure 2023537499000104
 を指す。
「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを意味する。
単独で使用されるか又は、「アラルキル」、「アラルコキシ」もしくは「アリールオキシアルキル」の場合のように、より大きな部分の一部として使用される、「アリール」という用語は、合計５～１４個の環構成員を有する単環式又は二環式の環系であって、系内の少なくとも１つの環が芳香族であり、系内の各環が３～７個の環構成員を含有する、当該環系を指す。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と互換的に使用され得る。本開示のある特定の実施形態では、「アリール」は、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシル及び類似するものを含むがこれらに限定されない芳香環系を指し、これらは、１つ以上の置換基を有するものであってもよい。本明細書で使用される場合に「アリール」という用語の範囲に同様に含まれるのは、芳香環が１つ以上の非芳香環と縮合している基、例えば、インダニル、フタルイミジル、ナフチミジル、フェナントリジニル又はテトラヒドロナフチルなどである。
単独で使用されるか又は、より大きな部分、例えば「ヘテロアラルキル」もしくは「ヘテロアラルコキシ」の一部として使用される、「ヘテロアリール」及び「ヘテロアラ－」という用語は、５～１０個の環原子、好ましくは５、６又は９個の環原子を有する；環式アレイ中で共有される６、１０又は１４個の電子を有する；及び炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を有する、基を指す。「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素又は硫黄を指し、窒素又は硫黄の任意の酸化形態、及び塩基性窒素の任意の四級化形態を含む。ヘテロアリール基としては、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル及びプテリジニルが挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロアリール」及び「ヘテロアラ－」という用語は、本明細書で使用される場合、ヘテロ芳香環が１つ以上のアリール、脂環式又はヘテロシクリル環と縮合した基も含み、この場合、ラジカル又は結合点はヘテロ芳香環上にある。非限定的な例としては、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ－キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、及びピリド［２，３－ｂ］－１，４－オキサジン－３（４Ｈ）－オンが挙げられる。ヘテロアリール基は、単環式又は二環式であり得る。「ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」又は「複素芳香族」という用語と互換的に使用され得、これらの用語のいずれかには、任意選択的に置換された環が含まれる。「ヘテロアラルキル」という用語は、ヘテロアリールで置換されたアルキル基を指し、アルキル及びヘテロアリール部分は、独立して、任意選択的に置換されている。
本明細書で使用される場合、「複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」、「ヘテロシクリル」、「複素環式ラジカル」及び「複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ｒｉｎｇ）」という用語は互換的に使用され、飽和か部分不飽和かのどちらかであり、炭素原子以外に上記に定義されるヘテロ原子を１個以上、好ましくは１～４個有する、安定した５～７員単環式又は７～１０員二環式の複素環式部分を指す。複素環の環原子に関して使用される場合、「窒素」という用語は、置換された窒素を含む。一例を挙げると、酸素、硫黄又は窒素から選択される０～３個のヘテロ原子を有する飽和又は部分不飽和環において、窒素は、（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロリルの中にあるような）Ｎ、（ピロリジニルの中にあるような）ＮＨ、もしくは（Ｎ置換ピロリジニルの中にあるような）ＮＲ+であり得る。
複素環は、安定した構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子においてその従属基に結合し得、環原子のいずれかが任意選択的に置換されていてもよい。そのような飽和又は部分不飽和の複素環式ラジカルの例としては、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル及びキヌクリジニルが挙げられるが、これらに限定されない。「複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクリル環」、「複素環基」、「複素環式部分」及び「複素環式ラジカル」という用語は、本明細書において互換的に使用され、ヘテロシクリル環が１つ以上のアリール、ヘテロアリール又は脂環式の環と縮合した基、例えば、インドリニル、３Ｈ－インドリル、クロマニル、フェナントリジニル又はテトラヒドロキノリニルも含む。ヘテロシクリル基は、単環式、二環式、架橋二環式又はスピロ環式であり得る。「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、ヘテロシクリルで置換されたアルキル基を指し、アルキル及びヘテロシクリル部分は、独立して、任意選択的に置換される。
本明細書で使用される場合、「部分不飽和」という用語は、少なくとも１つの二重又は三重結合を含む環部分を指す。「部分不飽和」という用語は、複数の不飽和部位を有する環を包含することを意図しているが、本明細書で定義されるアリール又はヘテロアリール部分を含むことを意図していない。
本明細書に記載されるように、本開示の化合物は、「任意選択的に置換された」部分を含有し得る。一般に、「置換された」という用語は、「任意選択的に」という用語が先行しているか否かにかかわらず、指定された部分の１つ以上の水素が好適な置換基に置き換わっていることを意味する。特に指示がなされていない限り、「任意選択的に置換された」基は、基の各置換可能位置に好適な置換基を有し得、任意の所与の構造において１つよりも多い位置が、明記された基から選択される１つよりも多い置換基で置換され得る場合、どの位置の置換基も、同じであるか異なっているかのどちらかであり得る。本開示によって企図される置換基の組合せは、好ましくは、安定した、又は化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。「安定した」という用語は、本明細書で使用される場合、化合物が、その製造、検出、並びにある特定の実施形態でのその回収、精製及び本明細書に開示される目的の１つ以上のための使用を可能にする条件に曝されたときに、実質的に変化しないことを意味する。
「任意選択的に置換された」基の置換可能な炭素原子の上の好適な一価の置換基は、独立して、ハロゲン；－（ＣＨ2）0-4Ｒ○；－（ＣＨ2）0-4ＯＲ○；－Ｏ（ＣＨ2）0-4Ｒ○；－Ｏ－（ＣＨ2）0-4Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；－（ＣＨ2）0-4ＣＨ（ＯＲ○）2；－（ＣＨ2）0-4ＳＲ○；Ｒ○で置換されていてもよい－（ＣＨ2）0-4Ｐｈ；Ｒ○で置換されていてもよい－（ＣＨ2）0-4Ｏ（ＣＨ2）0-1Ｐｈ；Ｒ○で置換されていてもよい－ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ○で置換されていてもよい－（ＣＨ2）0-4Ｏ（ＣＨ2）0-1－ピリジル；－ＮＯ2；－ＣＮ；－Ｎ3；－（ＣＨ2）0-4Ｎ（Ｒ○）2；－（ＣＨ2）0-4Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；－Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｓ）Ｒ○；－（ＣＨ2）0-4Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＮＲ○ 2；－Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｓ）ＮＲ○ 2；－（ＣＨ2）0-4Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；－Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；－Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＮＲ○ 2；－Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；－（ＣＨ2）0-4Ｃ（Ｏ）Ｒ○；－Ｃ（Ｓ）Ｒ○；－（ＣＨ2）0-4Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；－（ＣＨ2）0-4Ｃ（Ｏ）ＳＲ○；－（ＣＨ2）0-4Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ○ 3；－（ＣＨ2）0-4ＯＣ（Ｏ）Ｒ○；－ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ2）0-4ＳＲ－、ＳＣ（Ｓ）ＳＲ○；－（ＣＨ2）0-4ＳＣ（Ｏ）Ｒ○；－（ＣＨ2）0-4Ｃ（Ｏ）ＮＲ○ 2；－Ｃ（Ｓ）ＮＲ○ 2；－Ｃ（Ｓ）ＳＲ○；－ＳＣ（Ｓ）ＳＲ○、－（ＣＨ2）0-4ＯＣ（Ｏ）ＮＲ○ 2；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ○）Ｒ○；－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；－Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ○；－Ｃ（ＮＯＲ○）Ｒ○；－（ＣＨ2）0-4ＳＳＲ○；－（ＣＨ2）0-4Ｓ（Ｏ）2Ｒ○；－（ＣＨ2）0-4Ｓ（Ｏ）2ＯＲ○；－（ＣＨ2）0-4ＯＳ（Ｏ）2Ｒ○；－Ｓ（Ｏ）2ＮＲ○ 2；－（ＣＨ2）0-4Ｓ（Ｏ）Ｒ○；－Ｎ（Ｒ○）Ｓ（Ｏ）2ＮＲ○ 2；－Ｎ（Ｒ○）Ｓ（Ｏ）2Ｒ○；－Ｎ（ＯＲ○）Ｒ○；－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ○ 2；－Ｐ（Ｏ）2Ｒ○；－Ｐ（Ｏ）Ｒ○ 2；－ＯＰ（Ｏ）Ｒ○ 2；－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ○）2；ＳｉＲ○ 3；－（Ｃ1-4直鎖状又は分岐状アルキレン）Ｏ－Ｎ（Ｒ○）2；又は（Ｃ1-4直鎖状又は分岐状アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｎ（Ｒ○）2であり、式中の各Ｒ○は、以下に定義されるように置換されていてもよく、独立して、水素、Ｃ1-6脂肪族、－ＣＨ2Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ2）0-1Ｐｈ、－ＣＨ2－（５～６員ヘテロアリール環）、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環であるか、あるいは上記定義にもかかわらず、独立して出現する２つのＲ○が、それらの間に介在する原子（複数可）と一緒になって、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する３～１２員の飽和、部分不飽和又はアリール単環又は二環を形成しており、これは以下に定義されるように置換されていてもよい。
Ｒ○（又は独立して出現する２つのＲ○とそれらの間に介在する原子とが一緒になることによって形成された環）上の好適な一価の置換基は、独立して、ハロゲン、－（ＣＨ2）0-2Ｒ●、－（ハロＲ●）、－（ＣＨ2）0-2ＯＨ、－（ＣＨ2）0-2ＯＲ●、－（ＣＨ2）0-2ＣＨ（ＯＲ●）2、－Ｏ（ハロＲ●）、－ＣＮ、－Ｎ3、－（ＣＨ2）0-2Ｃ（Ｏ）Ｒ●、－（ＣＨ2）0-2Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－（ＣＨ2）0-2Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、－（ＣＨ2）0-2ＳＲ●、－（ＣＨ2）0-2ＳＨ、－（ＣＨ2）0-2ＮＨ2、－（ＣＨ2）0-2ＮＨＲ●、－（ＣＨ2）0-2ＮＲ● 2、－ＮＯ2、－ＳｉＲ● 3、－ＯＳｉＲ● 3、－Ｃ（Ｏ）ＳＲ● 、－（Ｃ1-4直鎖状又は分岐状アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、又はＳＳＲ●であり、各Ｒ●は、置換されていないか、又は「ハロ」が先行している場合に１つ以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ1-4脂肪族、－ＣＨ2Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ2）0-1Ｐｈ、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。Ｒ○の飽和炭素原子の上の好適な二価の置換基には、＝Ｏ、及び＝Ｓが含まれる。
「任意選択的に置換された」基の飽和炭素原子の上の好適な二価の置換基としては、以下：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ* 2、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ*、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ*、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）2Ｒ*、＝ＮＲ*、＝ＮＯＲ*、－Ｏ（Ｃ（Ｒ* 2））2-3Ｏ－、又はＳ（Ｃ（Ｒ* 2））2-3Ｓ－が挙げられ、独立して出現する各Ｒ*は、水素、以下に定義されるように置換されていてもよいＣ1-6脂肪族、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する置換されていない５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。「任意選択的に置換された」基の置換可能なビシナル炭素に結合している好適な二価の置換基としては、－Ｏ（ＣＲ* 2）2-3Ｏ－が挙げられ、独立して出現する各Ｒ*は、水素、以下に定義されるように置換されていてもよいＣ1-6脂肪族、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する置換されていない５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。
Ｒ*の脂肪族基の上の好適な置換基としては、ハロゲン、－Ｒ●、－（ハロＲ●）、－ＯＨ、－ＯＲ●、－Ｏ（ハロＲ●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、－ＮＨ2、－ＮＨＲ●、－ＮＲ● 2、又はＮＯ2が挙げられ、各Ｒ●は、置換されていないか、又は「ハロ」が先行している場合に１つ以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ1-4脂肪族、－ＣＨ2Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ2）0-1Ｐｈ、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環である。
「任意選択的に置換された」基の置換可能な窒素の上の好適な置換基としては、－Ｒ†、－ＮＲ† 2、－Ｃ（Ｏ）Ｒ†、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ†、-Ｓ（Ｏ）2Ｒ†、-Ｓ（Ｏ）2ＮＲ† 2、－Ｃ（Ｓ）ＮＲ† 2、－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ† 2、又はＮ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）2Ｒ†が挙げられ、各Ｒ†は、独立して、水素、以下に定義されるように置換されていてもよいＣ1-6脂肪族、置換されていない－ＯＰｈ、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する置換されていない５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環である、あるいは上記定義にもかかわらず、独立して出現する２つのＲ†が、それらの間に介在する原子（複数可）と一緒になって、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する３～１２員の飽和、部分不飽和又はアリール単環又は二環を形成している。
Ｒ†の脂肪族基の上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、－Ｒ●、－（ハロＲ●）、－ＯＨ、－ＯＲ●、－Ｏ（ハロＲ●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、－ＮＨ2、－ＮＨＲ●、－ＮＲ● 2、又はＮＯ2であり、各Ｒ●は、置換されていないか、又は「ハロ」が先行している場合に１つ以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ1-4脂肪族、－ＣＨ2Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ2）0-1Ｐｈ、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分不飽和もしくはアリール環である。
特に示されていない限り、本明細書に描かれている構造は、当該構造のあらゆる異性体（例えば、エナンチオ異性、ジアステレオ異性及び幾何（又は配座））形態、例えば、各不斉中心のＲ及びＳ配置、Ｚ及びＥ二重結合異性体、並びにＺ及びＥ配座異性体を含むことも意図している。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学異性体、並びにエナンチオ異性、ジアステレオ異性及び幾何（又は配座）混合物は、本開示の範囲に含まれる。特に示されていない限り、本開示の化合物のあらゆる互変異性形態が本開示の範囲に含まれる。加えて、特に示されていない限り、本明細書に描かれている構造は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在のみが異なっている化合物を含むことも意図している。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置換え、又は13Ｃもしくは14Ｃ濃縮炭素による炭素の置換えを含む本発明の構造を有する化合物は、本開示の範囲に含まれる。そのような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして、又は本開示に係る治療剤として有用である。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は複数形の意味を含んでおり、但し、そうでないことが文脈から明らかに読み取れる場合を除く。例えば、「方法」に対する言及は、本明細書に記載されている類の、及び／又は本開示などを読むことで当業者にとって明らかとなるであろう１つ以上の方法及び／又はステップを含む。
本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語は、特に指示がなされていない限り、「及び」又は「又は」という意味で本開示で使用される。
４．遺伝子発現を低減するためのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体
別の態様は、標的遺伝子の発現を低減するためのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体であって、核酸－結合体単位が、式ＩＩ：
Figure 2023537499000105
 〔式中、
Ｂは核酸塩基又は水素であり；
Ｒ1及びＲ2は、
独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか；又は
同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和もしくは部分不飽和環を形成しており；
各ＲAは、独立して、Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
各Ｒは、
独立して、水素であるか、好適な保護基であるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基である；あるいは
同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成しており；
リガンドは、独立して、－（ＬＣ）n、又はアダマンチル基であり；
各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
各－Ｃｙ－は、独立して、フェニレニル、８～１０員二環式アリーレニル、４～７員の飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロカルボシクリレニル、８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリーレニル、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１～５個のヘテロ原子を有する８～１０員二環式ヘテロアリーレニルから選択される二価の環であって任意選択的に置換された当該環であり；
ｎは１～１０であり；
Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｎ（Ｒ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、－Ｖ1ＣＲ2Ｗ1－、又は
Figure 2023537499000106
 に置き換わっており；
ｍは１～５０であり；
Ｘ1、Ｖ1及びＷ1は、独立して、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
Ｙは、水素、好適なヒドロキシル保護基、
Figure 2023537499000107
 であり；
Ｒ3は、水素であるか、好適な保護基であるか、好適なプロドラッグであるか、又はＣ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された当該基であり；
Ｘ2は、Ｏ、Ｓ又はＮＲであり；
Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＢＨ2－、又は共有結合であり；
Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
Ｙ2は、水素であるか、好適な保護基であるか、ホスホロアミダイト類縁体であるか、ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は固体担体に結合している連結基であり；
Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－である〕
で表され、
オリゴヌクレオチドが、１５～５３ヌクレオチドの長さのセンス鎖、及び１９～５３ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖が、標的遺伝子配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して相補的である配列を有しており、
アンチセンス鎖とセンス鎖とが、二重鎖構造を形成するが、共有結合で連結されていない、
当該オリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を開示する。
いくつかの実施形態では、上記に言及される態様又は実施形態のいずれか１つの、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、式Ｉ、Ｉ－ａ、Ｉ－ｂ、Ｉ－ｃ、Ｉ－ｄ、Ｉ－ｅ、Ｉ－Ｉａ、Ｉ－Ｉｂ、Ｉ－Ｉｃ、Ｉ－Ｉｄ、Ｉ－Ｉｅ、ＩＩ、ＩＩ－ａ、ＩＩ－ｂ、ＩＩ－ｃ、ＩＩ－ｄ、ＩＩ－ｅ、ＩＩ－Ｉａ、ＩＩ－Ｉｂ、ＩＩ－Ｉｃ、ＩＩ－Ｉｄ及びＩＩ－Ｉｅから選択される１つ以上の核酸－リガンド結合体単位、又はその薬学的に許容される塩を含む。
ある特定の実施形態では、上記に言及される態様又は実施形態のいずれか１つの、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体において、オリゴヌクレオチドは、１５～５３ヌクレオチドの長さのセンス鎖、及び１９～５３ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖は、標的遺伝子配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して相補的である配列を有しており、哺乳動物細胞にオリゴヌクレオチド－結合体が導入されたときに遺伝子発現を低減する。
いくつかの実施形態では、相補性の領域は、標的ｍＲＮＡの少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０又は少なくとも２１連続ヌクレオチドに対して完全に相補的である。いくつかの実施形態では、Ｌはテトラループである。いくつかの実施形態では、Ｌの長さは４ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、Ｌは、ＧＡＡＡとして示される配列を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の長さは２１～２７ヌクレオチドであり、センス鎖の長さは、１２、１５、２０又は２５ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖及びセンス鎖は２５ヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成する。いくつかの実施形態では、二重鎖は平滑末端を有する。ある特定の実施形態では、二重鎖はテトラループを有する。
ある特定のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、核酸－リガンド結合体単位はセンス鎖中に存在する。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、アンチセンス鎖の長さは１９～２７ヌクレオチドである。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、センス鎖の長さは１２～４０ヌクレオチドである。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、センス鎖はアンチセンス鎖と二重鎖領域を形成する。ある特定の実施形態では、二重鎖は平滑末端を有する。いくつかの実施形態では、センス鎖は短縮型である。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、相補性の領域は標的配列に対して完全に相補的である。
ある特定の実施形態では、センス鎖は、配列
５’ＧＧＵＧＧＡＵＧＡＡＡＣＵＣＡＧＵＵＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号１）
を有する。
ある特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列
３’ＧＧＣＣＡＣＣＵＡＣＵＵＵＧＡＧＵＣＡＡＡＵ（配列番号２）
を有する。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、センス鎖はその３’末端にＳ1－Ｌ－Ｓ2として示されるステム－ループを含み、Ｓ1はＳ2に対して相補的であり、ＬはＳ1とＳ2との間に３～５ヌクレオチドの長さのループを形成する。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、Ｌはテトラループである。ある特定の実施形態では、Ｌは、ＧＡＡＡとして示される配列を含む。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、結合体は、アンチセンス鎖上に２ヌクレオチドの長さの３’オーバーハング配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは１ヌクレオチド以上の長さの３’オーバーハング配列をさらに含み、３’オーバーハング配列は、アンチセンス鎖上、センス鎖上、又はアンチセンス鎖上及びセンス鎖上に存在する。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは２’修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチドが修飾されている。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間リンケージを含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間リンケージはホスホロチオエートリンケージである。
いくつかのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体実施形態では、アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドの糖の４’炭素はホスフェート類縁体を含む。ある特定の実施形態では、ホスフェート類縁体は、オキシメチルホスホナート、ビニルホスホナート又はマロニルホスホナートである。
本明細書で使用される場合、「４’－Ｏ－メチレンホスホナート」という用語は、本明細書に記載されているすべての置換メチレン類縁体（例えば、メチル、ジメチル、エチル、フルオロ、シクロプロピルなどで置換されたメチレン）、及びすべてのホスホナート類縁体（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホジエステルなど）を指す。
本明細書で使用される場合、「５’末端側ヌクレオチド」という用語は、オリゴヌクレオチドの５’末端に位置するヌクレオチドを指す。５’末端側ヌクレオチドは、本出願において「Ｎ１ヌクレオチド」と呼称されることもある。
本明細書で使用される場合、「アルコール中毒」という用語は、個体が再発性の有害な成り行きにもかかわらずエタノールを反復使用することを指し、これには、寛容性、離脱症状、及び／又は制御不可能なアルコール摂取衝動が併発することもあれば、併発しないこともある。アルコール中毒は、アルコール乱用、アルコール使用障害、又はアルコール依存症に分類され得る。アルコール中毒を患っている個体を同定するために様々な手法が用いられ得る。例えば、世界保健機関は、依存症を含めた潜在的なアルコール乱用を同定するためのツールとしてのアルコール使用障害同定テスト（ＡＵＤＩＴ）を確立したが、他の類似するテストは、ミシガンアルコールスクリーニングテスト（ＭＡＳＴ）を含めて開発されている。アルコール飲用の慢性的利用及び／又は再開を検出するために研究所検査を用いて血中マーカーが評価されることがあり、これには、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、平均赤血球容積（赤血球サイズ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、炭水化物欠乏性トランスフェリン（ＣＤＴ）、エチルグルクロニド（ＥｔＧ）、硫酸エチル（ＥｔＳ）及び／又はホスファチジルエタノール（ＰＥｔｈ）のレベルを検出する検査が含まれる。
アルコール中毒の動物モデル（例えばマウスモデル）は確立されている（例えば、Ｒｉｊｋ Ｈ，Ｃｒａｂｂｅ ＪＣ，Ｒｉｇｔｅｒ Ｈ．，Ａ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ，ＰＨＹＳＩＯＬ ＢＥＨＡＶ．（１９８２）Ｎｏｖ；２９（５）：８３３－３９、Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ｂｒａｎｄｏｎ－Ｗａｒｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｏｄｅｎｔ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ：ｏｆ Ｍｉｃｅ ａｎｄ Ｍｅｎ，ＡＬＣＯＨＯＬ．２０１２ Ｄｅｃ；４６（８）：７１５－２５（２０１２ Ｄｅｃ；４６（８））、及びＡｄｅｌｉｎｅ Ｂｅｒｔｏｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ ａｎｄ Ｂｉｎｇｅ Ｅｔｈａｎｏｌ Ｆｅｅｄｉｎｇ（ｔｈｅ ＮＩＡＡＡ ｍｏｄｅｌ）．ＮＡＴＵＲＥ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ８，６２７－３７（２０１３）を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「ＡＬＤＨ２」という用語は、アルデヒド脱水素酵素２ファミリー（ミトコンドリア）遺伝子を指す。ＡＬＤＨ２は、エタノールからアセテート（酢酸）を合成するアルコール代謝の酸化的経路の第２酵素として機能する、タンパク質のアルデヒド脱水素酵素ファミリーに属するタンパク質をコードする。ＡＬＤＨ２の相同体は、ヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長類種などを含めた様々な種にわたって保存されている（例えば、ＮＣＢＩ ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：５５４８０を参照されたい）。ＡＬＤＨ２は、例えばＡＬＤＨ１Ａ１を含めた他のアルデヒド脱水素酵素コード遺伝子とも相同性を有している。ヒトにおいて、ＡＬＤＨ２は、少なくとも２つの転写産物、すなわち、ＮＭ＿０００６９０．３（多様体１）及びＮＭ＿００１２０４８８９．１（多様体２）をコードし、これらは各々、異なるアイソフォーム、ＮＰ＿０００６８１．２（アイソフォーム１）及びＮＰ＿００１１９１８１８．１（アイソフォーム２）をそれぞれコードする。転写産物多様体２は、転写産物多様体１と比較して５’コード領域内にインフレームエクソンが欠けており、アイソフォーム１に比べてより短いアイソフォーム（２）をコードする。ＡＬＤＨ２における多型性が同定されている（例えば、Ｃｈａｎｇ ＪＳ，Ｈｓｉａｏ ＪＲ，Ｃｈｅｎ ＣＨ．，ＡＬＤＨ２ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒｓ ｉｎ Ａｓｉａｎｓ：ａ ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，Ｊ ＢＩＯＭＥＤ ＳＣＩ．（２０１７ Ｍａｒ ３）；２４（１）：１９ Ｒｅｖｉｅｗを参照されたい）。
本明細書で使用される場合、関心対象の１つ以上の値に適用される「およそ」又は「約」という用語は、示された基準値と同程度である値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」又は「約」という用語は、特に示されておらず文脈から明らかでない限り、両側の（より大きくなる、又はより小さくなる）方向に、示された基準値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又はそれ未満の範囲内に入っている値の範囲を指す（そのような数値が、可能な値の１００％を超えることになる場合を除く）。
本明細書で使用される場合、「投与すること」又は「投与」という用語は、薬理学的に有用となるように（例えば対象における病状を治療するために）物質（例えばオリゴヌクレオチド）を対象に提供すること意味する。
本明細書で使用される場合、「アシアロ糖タンパク質受容体」又は「ＡＳＧＰＲ」という用語は、より大きい４８ｋＤａ（ＡＳＧＰＲ－１）とより小さい４０ｋＤａサブユニット（ＡＳＧＰＲ－２）とによって形成された、２部分からなるＣ型レクチンを指す。ＡＳＧＰＲは主に肝細胞の類洞側表面上に発現し、末端側にガラクトース又はＮ－アセチルガラクトサミン残基を含有する循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化及びその後のクリアランスにおいて主要な役割を有する。
本明細書で使用される場合、「アプタマー」という用語は、核酸、タンパク質、特定の全細胞又は特定の組織を含めた特定の標的に対して結合親和性を有するオリゴヌクレオチドを指す。アプタマーは、当技術分野で知られている方法を用いて、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの核酸の雑多な配列の大きなプールからの選択によって得られ得る。Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤ ＲＥＳ．，２００４，３２：Ｄ９５－Ｄ１００。
本明細書で使用される場合、「アンタゴミール」という用語は、外来ＲＮＡｉ阻害剤分子のガイド鎖又は天然ｍｉＲＮＡを含めた特定の標的に対して結合親和性を有するオリゴヌクレオチドを指す（Ｋｒｕｔｚｆｅｌｄｔ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ ２００５，４３８（７０６８）：６８５－８９）。
二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子は、２本のオリゴヌクレオチド鎖：アンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。アンチセンス鎖又はその領域は、標的核酸の対応する領域に対して部分的、実質的又は完全に相補的である。加えて、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖又はその領域は、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のセンス鎖又はその領域に対して部分的、実質的又は完全に相補的である。ある特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、標的核酸配列に対して非相補的であるヌクレオチドも含有し得る。非相補ヌクレオチドは、相補配列のどちらかの側にあってもよいし、又は相補配列の両側にあってもよい。ある特定の実施形態では、アンチセンス鎖又はその領域がセンス鎖又はその領域に対して部分的又は実質的に相補的である場合、非相補ヌクレオチドが１つ以上の相補性の領域の間に位置し得る（例えば、１つ以上のミスマッチ）。二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖は、ガイド鎖とも呼称される。
本明細書で使用される場合、「古典的ＲＮＡ阻害剤分子」という用語は、核酸の２本の鎖であって、各々の長さが２１ヌクレオチドであり、二本鎖核酸の形成のための１９塩基対の長さの相補性の領域を中央に有し、各３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを有する、当該２本の鎖を指す。
本明細書で使用される場合、「相補的」という用語は、２つのヌクレオチドが互いとの塩基対を形成するのを可能にする、（例えば、対向する２つの核酸における、又は単一の核酸鎖の対向領域における）２つのヌクレオチドの間の構造的関係性を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに対して相補的な、ある核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することによって一緒に塩基対合し得る。いくつかの実施形態では、相補ヌクレオチドは、ワトソン－クリック様式で、又は安定した二重鎖の形成を可能にする他の任意の様式で塩基対合し得る。「完全に相補性」又は１００％の相補性は、第１オリゴヌクレオチド鎖の、又は第１オリゴヌクレオチド鎖のセグメントの各ヌクレオチドモノマーが、第２オリゴヌクレオチド鎖の、又は第２オリゴヌクレオチド鎖のセグメントの各ヌクレオチドモノマーと塩基対を形成し得る状況を指す。１００％未満の相補性は、２本のオリゴヌクレオチド鎖（又は２本のオリゴヌクレオチド鎖の２つのセグメント）のすべてではないがいくつかのヌクレオチドモノマーが互いに塩基対を形成し得る状況を指す。「実質的な相補性」は、互いに対する９０％以上の相補性を呈する２本のオリゴヌクレオチド鎖（又は２本のオリゴヌクレオチド鎖のセグメント）を指す。「十分に相補的」は、標的ｍＲＮＡにコードされるタンパク質の量が減少するような、標的ｍＲＮＡと核酸阻害剤分子との間の相補性を指す。
本明細書で使用される場合、「相補鎖」という用語は、二本鎖核酸阻害剤分子の鎖であって他方の鎖に対して部分的、実質的又は完全に相補的である当該鎖を指す。
本明細書で使用される場合、「従来型アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、以下の機序のうちの１つによって標的遺伝子の発現を阻害する一本鎖オリゴヌクレオチドを指す：（１）立体障害、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、例えば遺伝子の転写、プレｍＲＮＡのスプライシング及びｍＲＮＡの翻訳に直接干渉することによって、遺伝子発現及び／又はコードされるタンパク質の産生に関与する一連の事象の中のいくつかのステップに干渉する；（２）ＲＮアーゼＨによる標的遺伝子のＲＮＡ転写産物の酵素的消化の誘導；（３）ＲＮアーゼＬによる標的遺伝子のＲＮＡ転写産物の酵素的消化の誘導；（４）ＲＮアーゼＰによる標的遺伝子のＲＮＡ転写産物の酵素的消化の誘導；（５）二本鎖ＲＮアーゼによる標的遺伝子のＲＮＡ転写産物の酵素的消化の誘導；並びに（６）同じアンチセンスオリゴにおける立体障害と酵素的消化活性の誘導との組合せ。従来型アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ阻害剤分子のようなＲＮＡｉ作用機序を有していない。ＲＮＡｉ阻害剤分子は、アンチセンス鎖がＡｇｏ２タンパク質を意図した標的（複数可）に導いてそこでＡｇｏ２が標的のサイレンシングに必要とされるといった具合にＲＮＡｉアンチセンス鎖と結び付くＡｇｏ２を必要としていることを含めたいくつかの点において、従来型アンチセンスオリゴヌクレオチドとは区別され得る。
規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（「ＣＲＩＳＰＲ」）は、侵入してくるファージ及びプラスミドに対する防御に関与する細菌性ヌクレアーゼシステムである。Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１６，１６４：２９－４４。この原核生物システムは、真核細胞のゲノムの中の関心対象の標的核酸配列の編集に使用するために適合されている。Ｃｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＳＣＩＥＮＣＥ，２０１３，３３９：８１９－２３、Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，ＳＣＩＥＮＣＥ，２０１３，３３９：８２３－２６、Ｗｏｏ Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴ．ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，２０１３，３１（３）：２３０－２３２。本明細書で使用される場合、「ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ」という用語は、「ＣＲＩＳＰＲ」ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）部分及び／又はトランス活性化型ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）部分を含む核酸を指し、当該ＣＲＩＳＰＲ部分は、標的核酸に対して部分的、実質的又は完全に相補的である第１配列と、ｔｒａｃｒＲＮＡ部分に対して十分に相補的である第２配列（トレーサーメイト配列とも呼ばれる）とを有するものであり、トレーサーメイト配列がｔｒａｃｒＲＮＡ部分とハイブリダイズしてガイドＲＮＡを形成するようになっている。ガイドＲＮＡは、エンドヌクレアーゼ、例えばＣａｓエンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ９）と複合体を形成し、ヌクレアーゼを、標的核酸の切断を媒介するように導く。ある特定の実施形態では、ｃｒＲＮＡ部分は、ｔｒａｃｒＲＮＡ部分と融合してキメラガイドＲＮＡを形成している。Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，ＳＣＩＥＮＣＥ，２０１２，３３７：８１６－２１。ある特定の実施形態では、ｃｒＲＮＡ部分の第１配列は、標的核酸にハイブリダイズする約１６～約２４ヌクレオチド、好ましくは約２０ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、ガイドＲＮＡは約１０～５００ヌクレオチドである。他の実施形態では、ガイドＲＮＡは約２０～１００ヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「送達剤」という用語は、オリゴヌクレオチドとの複合体を形成するかもしくはそれに結合し、細胞内へのその進入を媒介する、トランスフェクション剤又はリガンドを指す。当該用語は、カチオン性リポソーム、例えば、オリゴヌクレオチドの負電荷に結合する正味の正電荷を有するものを包含する。この用語は、共有結合でオリゴヌクレオチドに結合されて特定の組織への送達を担い得るＧａｌＮＡｃ及びコレステロールなどの本明細書に記載の結合体を包含する。本明細書にはさらなる特異的な好適な送達剤も記載されている。
本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、糖部分の２’位に水素基を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、糖、リン酸基又は塩基における、又はそれの修飾又は置換を含めた、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するデオキシリボヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「ジスルフィド」という用語は、基
Figure 2023537499000108
 を含有する化学化合物を指す。典型的には、各硫黄原子は、共有結合で炭化水素基に結合している。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの硫黄原子は、共有結合で炭化水素以外の基に結合している。リンケージはＳＳ結合又はジスルフィド架橋とも呼ばれる。
本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」又は「二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）」という用語は、実質的に二重鎖形態であるオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的な塩基対合は、共有結合的に分離した核酸鎖の逆平行なヌクレオチドの配列の間で形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的な塩基対合は、共有結合的に繋がっている核酸鎖の逆平行なヌクレオチドの配列の間で形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的な塩基対合は、（例えばヘアピンループによって）折りたたまれて相補的な逆平行な塩基対合し合うヌクレオチドの配列をもたらす一本の核酸鎖から形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、完全に互いと二重鎖形成する２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含む。他方、いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に二重鎖形成する、例えば、片方又は両方の末端にオーバーハングを有する、２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に相補的である逆平行なヌクレオチドの配列を含み、それゆえ、内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含み得る１つ以上のミスマッチを有し得る。
本明細書で使用される場合、「二重鎖」という用語は、核酸（例えばオリゴヌクレオチド）に関して使用され、具体的には、２つの逆平行なヌクレオチドの配列の相補的な塩基対合によって形成された二重螺旋構造を指す。
本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、例えば所望の稠度又は安定化作用を提供するか又はそれに寄与するために、組成物中に含ませられ得る非治療剤を指す。
本明細書で使用される場合、「フラノース」という用語は、５員環構造を有する炭化水素を指し、この場合、環構造は、
Figure 2023537499000109
で表される４つの炭素原子と１つの酸素原子とを有するものであり、式中の数字は５員環構造中の４つの炭素原子の位置を表す。
本明細書で使用される場合、「肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）」又は「肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ）」という用語は、肝臓の実質組織の細胞を指す。これらの細胞は、肝臓の質量のおよそ７０～８５％を構成し、血清アルブミン、フィブリノゲン及びプロトロンビン群の凝固因子（第３及び第４因子を除く）を生産する。肝細胞系統の細胞のマーカーには、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミン合成酵素（Ｇｌｕｌ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）、及び肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が含まれ得るが、これらに限定されない。成熟肝細胞のマーカーには、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、フマリルアセト酢酸加水分解酵素（Ｆａｈ）、グルコース６－ホスフェート（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）及びＯＣ２－２Ｆ８が含まれ得るが、これらに限定されない。例えば、参照により、肝細胞マーカーに関するその内容を本明細書に援用する、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），ＮＡＴＵＲＥ，４９４（７４３６）：２４７－５０を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「グルタチオン」（ＧＳＨ）という用語は、構造
Figure 2023537499000110
 を有するトリペプチドを指す。ＧＳＨは細胞内におよそ１～１０ｍＭの濃度で存在する。ＧＳＨは、ジスルフィド結合を含めたグルタチオン感受性結合を還元する。その過程でグルタチオンは、その酸化形態であるグルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）に変換される。グルタチオンは、一旦酸化されると、電子供与体としてのＮＡＤＰＨを使用してグルタチオン還元酵素によって元通りに還元され得る。
本明細書で使用される場合、「グルタチオン感受性化合物」又は「グルタチオン感受性部分」という用語は、互換的に使用され、少なくとも１つのグルタチオン感受性結合、例えばジスルフィド架橋又はスルホニル基を含有する任意の化学化合物（例えば、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド又はヌクレオシド）又は部分を指す。本明細書で使用される場合、「グルタチオン感受性オリゴヌクレオチド」は、グルタチオン感受性結合を含有する少なくとも１つのヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドである。グルタチオン感受性部分は、糖部分の２’炭素又は３’炭素に位置し得、スルホニル基又はジスルフィド架橋を含む。ある特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、例えば、本明細書で参照によりその全体を援用する国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４８２３９号に記載されているような、ホスホロアミダイトオリゴヌクレオチド合成に関して適合性である。グルタチオン感受性部分は、リン含有ヌクレオチド間リンケージに位置する場合もある。ある特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、本明細書で参照によりその全体を援用するＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０７２５３６に記載されているものから選択される。
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド間連結基」又は「ヌクレオチド間リンケージ」という用語は、２つのヌクレオシド部分を共有結合で繋ぐことができる化学基を指す。典型的には、化学基は、ホスホ又はホスファイト基を含有するリン含有リンケージ基である。ホスホ連結基には、ホスホジエステルリンケージ、ホスホロジチオエートリンケージ、ホスホロチオエートリンケージ、ホスホトリエステルリンケージ、チオノアルキルホスホナートリンケージ、チオノアルキルホスホトリエステル（ｔｈｉｏｎａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｔｒｉｅｓｔｅｒ）リンケージ、ホスホロアミダイトリンケージ、ホスホナートリンケージ及び／又はボラノホスフェートリンケージが含まれることを意図する。多くのリン含有リンケージは、例えば米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，４６９，８６３号、同第４，４７６，３０１号、同第５，０２３，２４３号、同第５，１７７，１９６号、同第５，１８８，８９７号、同第５，２６４，４２３号、同第５，２７６，０１９号、同第５，２７８，３０２号、同第５，２８６，７１７号、同第５，３２１，１３１号、同第５，３９９，６７６号、同第５，４０５，９３９号、同第５，４５３，４９６号、同第５，４５５，２３３号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７６，９２５号、同第５，５１９，１２６号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，５５０，１１１号、同第５，５６３，２５３号、同第５，５７１，７９９号、同第５，５８７，３６１号、同第５，１９４，５９９号、同第５，５６５，５５５号、同第５，５２７，８９９号、同第５，７２１，２１８号、同第５，６７２，６９７号及び同第５，６２５，０５０号に開示されているように、当技術分野でよく知られている。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン原子を含有しない１つ以上のヌクレオチド間連結基、例えば、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオチド間リンケージ、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルとの混合型のヌクレオチド間リンケージ、又は１つ以上の短鎖複素芳香族もしくは複素環式ヌクレオチド間リンケージ、例えば、限定はされないが、シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシド及びスルホン骨格；ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格；リボアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格；スルホナート及びスルホンアミド骨格；並びにアミド骨格を有するものを含有する。非リン含有リンケージは、例えば米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０号、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、同第５，７９２，６０８号、同第５，６４６，２６９号及び同第５，６７７，４３９号に開示されているように、当技術分野でよく知られている。
本明細書で使用される場合、「ループ」という用語は、特定の一本鎖ヌクレオチド領域の両側にある相補性領域が、二重鎖形成又はワトソン－クリック型塩基対合から相補性領域間の一本鎖ヌクレオチド領域を除外するようにハイブリダイズする、一本の核酸の鎖によって形成された構造を指す。ループは、任意の長さの一本鎖ヌクレオチド領域である。ループの例としては、ヘアピン及びテトラループなどの構造の中に存在する非対合ヌクレオチドが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「マイクロＲＮＡ」、「成熟マイクロＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」及び「ｍｉＲ」という用語は相互交換可能であり、植物及び動物のゲノムの中にコードされている非コードＲＮＡ分子を指す。典型的には、成熟マイクロＲＮＡの長さは約１８～２５ヌクレオチドである。ある場合には、高度に保存された内因的に発現するマイクロＲＮＡは、特定のｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）に結合することによって遺伝子の発現を調整する。ある特定の成熟マイクロＲＮＡは、しばしば数百ヌクレオチドの長さである長い内因性一次マイクロＲＮＡ転写産物（プレマイクロＲＮＡ、プリマイクロＲＮＡ、プリｍｉｒ、プリｍｉＲ、又はプリプレマイクロＲＮＡとしても知られる）に由来しているようである（Ｌｅｅ、ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ １，２００２，２１（１７），４６６３－７０）。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオシド」という用語は、修飾もしくはユニバーサル核酸塩基又は修飾糖の１つ以上を含有するヌクレオシドを指す。修飾又はユニバーサル核酸塩基（本明細書では塩基類縁体とも呼称される）は、一般的にはヌクレオシド糖部分の１’位に位置しており、１’位にあるアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を指す。ある特定の実施形態では、修飾又はユニバーサル核酸塩基は含窒素塩基である。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素原子を含有しない。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号を参照されたい。ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含有しない（脱塩基型）。修飾糖（本明細書では糖類縁体とも呼称される）には、例えば糖の２’、３’、４’又は５’炭素位置において修飾が起こる場合の、修飾デオキシリボース又はリボース部分が含まれる。修飾糖にはまた、非天然の代替炭素構造、例えば、ロック核酸（「ＬＮＡ」）（例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８），ＴＥＴＲＡＨＥＤＲＯＮ，５４，３６０７－３０を参照されたい）；架橋核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．（２００９），ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，３７（４）：１２２５－３８を参照されたい）；及びアンロック核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３），ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＹ－ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ，２を参照されたい）の中に存在するものも含まれ得る。本開示に関して好適な修飾もしくはユニバーサル核酸塩基、又は修飾糖は、本明細書に記載されている。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」という用語は、修飾もしくはユニバーサル核酸塩基、修飾糖、又は修飾ホスフェートの１つ以上を含有するヌクレオチドを指す。修飾又はユニバーサル核酸塩基（本明細書では総合的に核酸塩基とも呼称される）は、一般的にはヌクレオシド糖部分の１’位に位置しており、１’位にあるアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル以外の核酸塩基を指す。ある特定の実施形態では、修飾又はユニバーサル核酸塩基は含窒素塩基である。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素原子を含有しない。例えば、米国公開特許出願第２００８０２７４４６２号を参照されたい。ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含有しない（脱塩基型）。修飾糖（本明細書では糖類縁体とも呼称される）には、例えば糖の２’、３’、４’又は５’炭素位置において修飾が起こる場合の、修飾デオキシリボース又はリボース部分が含まれる。修飾糖にはまた、非天然の代替炭素構造、例えば、ロック核酸（「ＬＮＡ」）（例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８），ＴＥＴＲＡＨＥＤＲＯＮ，５４，３６０７－３６３０を参照されたい）、架橋核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．（２００９），ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，３７（４）：１２２５－３８を参照されたい）；及びアンロック核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３），ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＹ－ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ，２を参照されたい）の中に存在するものも含まれ得る。修飾ホスフェート基は、天然ヌクレオチドには起こらないホスフェート基の修飾を指し、本明細書に記載される天然に存在しないホスフェート模倣体を含む。修飾ホスフェート基にはまた、本明細書に記載されるリン含有ヌクレオチド間連結基及び非リン含有連結基を両方とも含めた天然に存在しないヌクレオチド間連結基も含まれる。本開示に関して好適な修飾もしくはユニバーサル核酸塩基、修飾糖、又は修飾ホスフェートは、本明細書に記載されている。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド間リンケージ」という用語は、ホスホジエステル結合を含む基準ヌクレオチド間リンケージと比較して１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間リンケージを指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないリンケージである。典型的には、修飾ヌクレオチド間リンケージは、修飾ヌクレオチド間リンケージが存在している核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解性、生物学的利用能、生物活性、低減された免疫原性などを改善し得る。
本明細書で使用される場合、「裸の核酸」という用語は、保護的脂質ナノ粒子などの保護的製剤に製剤化されていない、かつそれゆえに、ｉｎ ｖｉｖｏに投与された場合に血液及びエンドソーム／リソソームコンパートメントに曝露される、核酸を指す。
本明細書で使用される場合、「天然ヌクレオシド」という用語は、糖（例えば、デオキシリボースもしくはリボース、又はその類縁体）とＮ－グリコシド結合している複素環式含窒素塩基を指す。天然複素環式含窒素塩基には、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル及びチミンが含まれる。
本明細書で使用される場合、「天然ヌクレオチド」という用語は、ホスフェート基に連結された糖（例えば、リボースもしくはデオキシリボース、又はその類縁体）とＮ－グリコシド結合している複素環式含窒素塩基を指す。天然複素環式含窒素塩基には、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル及びチミンが含まれる。
「ニック型テトラループ構造」は、別個なセンス（パッセンジャー）及びアンチセンス（ガイド）鎖の存在を特徴とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造であり、センス鎖は、２つの鎖が二重鎖を形成するような、アンチセンス鎖に対する相補性の領域を有し、鎖の少なくとも一方、一般的にはセンス鎖は、二重鎖から伸長しており、伸長部は、テトラループ、及びテトラループに隣接してステム領域を形成している２つの自己相補性配列を含有し、テトラループは、少なくとも一本の鎖の自己相補性配列によって形成された隣接するステム領域を安定化させるように構成されている。
本明細書で使用される場合、「核酸又はその類縁体」という用語は、任意の天然又は修飾ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、従来型アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡｉ阻害剤分子、アンチセンスオリゴ（ＡＳＯ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、古典的ＲＮＡ阻害剤分子、アプタマー、アンタゴミール、エクソンスキップもしくはスプライス改変オリゴ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、又は本明細書に記載の脂質結合体の１つ以上を含むＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼシステムを指す。ある特定の実施形態では、提供される核酸又はその類縁体は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、及びダイサー基質ｓｉＲＮＡに使用され、これには、参照により各々の全体を本明細書に援用する、Ｕ．Ｓ．２０１０／３３１３８９、Ｕ．Ｓ．８，５１３，２０７、Ｕ．Ｓ．１０，１３１，９１２、Ｕ．Ｓ８，９２７，７０５、ＣＡ２，７３８，６２５、ＥＰ２，３７９，０８３及びＥＰ３，２３４，１３２に記載されているものが含まれる。
本明細書で使用される場合、「核酸阻害剤分子」という用語は、標的遺伝子の発現を低減又は排除するオリゴヌクレオチド分子であって、標的遺伝子ｍＲＮＡ中の配列を特異的に指向する領域を含有する、当該オリゴヌクレオチド分子を指す。典型的には、核酸阻害剤分子の標的指向性領域は、核酸阻害剤分子の作用を指定の標的遺伝子へと差し向けるのに十分に標的遺伝子ｍＲＮＡ上の配列に対して相補的である配列を含む。核酸阻害剤分子は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含み得る。
本明細書で使用される場合、「核酸塩基」という用語は、天然核酸塩基、修飾核酸塩基又はユニバーサル核酸塩基を指す。核酸塩基は、核酸二重鎖に組み込まれ得る修飾ヌクレオチドにおいてヌクレオチド糖部分の１’位（又は、核酸二重鎖に組み込まれ得るヌクレオチド糖部分置換体の中の等価な位置）に位置している複素環式部分である。したがって、本開示は、脂質結合体が式Ｉ又はＩＩで表され、核酸塩基が概してプリン又はピリミジン塩基のどちらかである、脂質結合体を含む核酸及びその類縁体を提供する。いくつかの実施形態では、核酸塩基は、一般的な塩基グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）もしくはウラシル（Ｕ）、又はその誘導体、例えば、オリゴヌクレオチドの調製における使用に適した保護された誘導体も含み得る。いくつかの実施形態では、核酸塩基Ｇ、Ａ及びＣの各々は、独立して、イソブチリル、アセチル、ジフルオロアセチル、トリフルオロアセチル、フェノキシアセチル、イソプロピルフェノキシアセチル、ベンゾイル、９－フルオレニルメトキシカルボニル、フェノキシアセチル、ジメチルホルムアミジン、ジブチルホルムアミジン及びＮ，Ｎ－ジフェニルカルバメートから選択される保護基を含む。核酸塩基類縁体は、ｄｓＲＮＡ中の他の塩基又は塩基類縁体と二重鎖形成し得る。核酸塩基類縁体には、本開示の核酸及びその類縁体、並びに方法において有用となるもの、例えば、参照により本明細書に援用するＢｅｎｎｅｒによる米国特許第５，４３２，２７２号及び第６，００１，９８３号、並びにＭａｎｏｈａｒａｎによる米国特許公開第２００８０２１３８９１号に開示されるものが含まれる。核酸塩基の非限定的な例としては、ヒポキサンチン（Ｉ）、キサンチン（Ｘ）、３β－Ｄ－リボフラノシル－（２，６－ジアミノピリミジン）（Ｋ）、３－Ｏ－Ｄ－リボフラノシル－（１－メチル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７（４Ｈ，６Ｈ）－ジオン）（Ｐ）、イソシトシン（ｉｓｏ－Ｃ）、イソグアニン（ｉｓｏ－Ｇ）、１－β－Ｄ－リボフラノシル－（５－ニトロインドール）、１－β－Ｄ－リボフラノシル－（３－ニトロピロール）、５－ブロモウラシル、２－アミノプリン、４－チオ－ｄＴ、７－（２－チエニル）－イミダゾ［４，５－ｂ］ピリジン（Ｄｓ）及びピロール－２－カルボアルデヒド（Ｐａ）、２－アミノ－６－（２－チエニル）プリン（Ｓ）、２－オキソピリジン（Ｙ）、ジフルオロトリル、４－フルオロ－６－メチルベンゾイミダゾール、４－メチルベンゾイミダゾール、３－メチルイソカルボスチリリル、５－メチルイソカルボスチリリル、及び３－メチル－７－プロピニルイソカルボスチリリル、７－アザインドリル、６－メチル－７－アザインドリル、イミジゾピリジニル、９－メチル－イミジゾピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリリル、７－プロピニルイソカルボスチリリル、プロピニル－７－アザインドリル、２，４，５－トリメチルフェニル、４－メチルインドリル、４，６－ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニル、及びそれらの構造誘導体が挙げられる（Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＯＲＧ．ＣＨＥＭ．，５９：７２３８－７２４２（１９９４）、Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，２８（１５）：２９１１－２９１４（２０００）、Ｍｏｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１１９：２０５６－２０５７（１９９７）、Ｍｏｒａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１２１：２３２３－２３２４（１９９９）、Ｇｕｃｋｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１１８：８１８２－８１８３（１９９６）、Ｍｏｒａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１２２（６）：１００１－１００７（２０００）、ＭｃＭｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１２１：１１５８５－１１５８６（１９９９）、Ｇｕｃｋｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＯＲＧ．ＣＨＥＭ．，６３：９６５２－９６５６（１９９８）、Ｍｏｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．，９４：１０５０６－１０５１１（１９９７）、Ｄａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，ＰＥＲＫＩＮ ＴＲＡＮＳ．，１：１９７－２０６（２００２）、Ｓｈｉｂａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．，１：１６０５－１６１１（２００１）、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１２２（３２）：７６２１－７６３２（２０００）、Ｏ’Ｎｅｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＯＲＧ．ＣＨＥＭ．，６７：５８６９－５８７５（２００２）、Ｃｈａｕｄｈｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．，１１７：１０４３４－１０４４２（１９９５）、及び米国特許第６，２１８，１０８号）。塩基類縁体はまた、ユニバーサル塩基であってもよい。
本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」という用語は、天然ヌクレオシド又は修飾ヌクレオシドを指す。
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、天然ヌクレオチド又は修飾ヌクレオチドを指す。
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド位置」という用語は、オリゴヌクレオチド中で５’末端側にあるヌクレオチドから数えたヌクレオチドの位置を指す。例えば、ヌクレオチド位置１は、オリゴヌクレオチドの５’末端側ヌクレオチドを指す。
本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、２～２５００ヌクレオチドの範囲の、ヌクレオチドのポリマー形態を指す。オリゴヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖であり得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、典型的には例えば遺伝子療法にオリゴヌクレオチドが使用される場合、５００～１５００個のヌクレオチドを有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖であり、７～１００個のヌクレオチドを有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖であり、１５～１００個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、典型的には例えばオリゴヌクレオチドが核酸阻害剤分子である場合、一本鎖又は二本鎖であり、１５～５０個のヌクレオチドを有する。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、典型的には例えばオリゴヌクレオチドが核酸阻害剤分子である場合、一本鎖又は二本鎖であり、２５～４０個のヌクレオチドを有する。さらに別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、典型的には例えばオリゴヌクレオチドが二本鎖核酸阻害剤分子であり、かつ少なくとも１８～２５塩基対の二重鎖を形成する場合、一本鎖又は二本鎖であり、１９～４０個又は１９～２５個のヌクレオチドを有する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、典型的には例えばオリゴヌクレオチドヌクレオチドが一本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子である場合、一本鎖であり、１５～２５個のヌクレオチドを有する。典型的には、オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載されるリン含有ヌクレオチド間連結基を１つ以上含有する。他の実施形態では、ヌクレオチド間連結基は、本明細書に記載の非リン含有リンケージである。オリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、及び／又は例えば修飾リボヌクレオチドを含めた修飾ヌクレオチドを含み得る。オリゴヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは、二重鎖領域を有することもあるし、又は有していないこともある。非限定的な一連の例を挙げると、オリゴヌクレオチドは、限定はされないが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短鎖ｓｉＲＮＡ、又は一本鎖ｓｉＲＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「オーバーハング」という用語は、二本鎖核酸阻害剤分子のどちらかの鎖のどちらかの末端にある末端側非塩基対合ヌクレオチド（複数可）を指す。ある特定の実施形態では、オーバーハングは、第１の鎖又は領域との二重鎖を形成する相補鎖の末端側を越えて伸長した１つの鎖又は領域から生まれる。塩基対の水素結合によって二重鎖を形成することができる２つのオリゴヌクレオチド領域の片方又は両方は、２つのポリヌクレオチド又は領域が共有している相補性の３’及び／又は５’末端を越えて伸長した５’及び／又は３’末端を有し得る。二重鎖の３’及び／又は５’末端を越えて伸長した一本鎖領域はオーバーハングと呼称される。
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、薬理学的有効量のホスフェート類縁体修飾オリゴヌクレオチド、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。本明細書で使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療的有効量」又は「有効量」は、意図した薬理学的、治療的又は予防的結果をもたらすのに効果的な、本開示のホスフェート類縁体修飾オリゴヌクレオチドのその量を指す。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、賦形剤が、妥当な利益／リスク比に見合って過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激及びアレルギー反応）を伴わずにヒト及び／又は動物に関して使用するのに適していることを意味する。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴うことなくヒト及び下等動物の組織との接触に使用するのに適し、妥当な利益／リスク比に見合う塩を指す。薬学的に許容される塩は当技術分野でよく知られている。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．は、参照により本明細書に援用されるＪ．ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９７７，（６６）；１－１９の中で、薬学的に許容される塩について詳しく記載している。本開示の核酸及びその類縁体の薬学的に許容される塩には、好適な無機及び有機の酸及び塩基から得られるものが含まれる。薬学的に許容される無毒の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸などの無機酸によって、又は酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸又はマロン酸などの有機酸によって、又は当技術分野で用いられる他の方法、例えばイオン交換を用いることによって形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。
適切な塩基から得られる塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩及びＮ+（Ｃ1-4アルキル）4塩が挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む。さらなる薬学的に許容される塩は、適する場合に、対イオン、例えば、ハライド、ヒドロキシド、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ナイトレート、低級アルキルスルホナート及びアリールスルホナートを使用して形成される無毒のアンモニウム、第四級アンモニウム及びアミンカチオンを含む。
本明細書で使用される場合、「ホスフェート類縁体」という用語は、ホスフェート基の静電的及び／又は立体的特性を模倣した化学部分を指す。いくつかの実施形態では、ホスフェート類縁体は、しばしば酵素的除去を受けやすいものである５’ホスフェートの代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端側ヌクレオチドに位置している。いくつかの実施形態では、５’ホスフェート類縁体は、ホスファターゼ耐性リンケージを含有する。ホスフェート類縁体の例としては、５’ホスホナート、例えば、５’メチレンホスホナート（５’－ＭＰ）、及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホナート（５’－ＶＰ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、５’末端側ヌクレオチドにおいて、糖の４’炭素位置にホスフェート類縁体を有する（「４’ホスフェート類縁体」と呼称される）。４’ホスフェート類縁体の一例は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えばその４’炭素）又はその類縁体に結合した、オキシメチルホスホナートである。例えば、参照により、ホスフェート類縁体に関する各々の内容を本明細書に援用する、２０１７年９月１日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４９９０９、２０１６年９月２日に出願された米国仮出願第６２／３８３，２０７号、及び２０１６年９月１２日に出願された同第６２／３９３，４０１号を参照されたい。オリゴヌクレオチドの５’末端に対する他の修飾が開発された（例えば、参照により、ホスフェート類縁体に関する各々の内容を本明細書に援用する、ＷＯ２０１１／１３３８７１、米国特許第８，９２７，５１３号、及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５），ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、遺伝子の「低減された発現」という用語は、適切な基準細胞又は対象と比較したときの、遺伝子にコードされるＲＮＡ転写産物もしくはタンパク質の量の減少、及び／又は細胞もしくは対象における遺伝子の活性の量の減少を指す。例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡ配列に対して相補的なアンチセンス鎖を有するもの）で細胞を処理する行為によって、（例えばＡＬＤＨ２遺伝子にコードされる）ＲＮＡ転写産物、タンパク質及び／又は酵素活性の量が、二本鎖オリゴヌクレオチドで処置されていない細胞と比較して減少し得る。同様に、本明細書で使用される「発現を低減すること」は、遺伝子（例えばＡＬＤＨ２）の発現の低減をもたらす行為を指す。
本明細書で使用される場合、「相補性の領域」という用語は、適切なハイブリダイゼーション条件の下、例えばホスフェート緩衝液中又は細胞内などにおいて、ヌクレオチドの２つの配列の間でのハイブリダイゼーションを可能にするのに十分にヌクレオチドの逆平行配列（例えば、ｍＲＮＡ中の標的ヌクレオチド配列）に対して相補的である、核酸（例えば二本鎖オリゴヌクレオチド）のヌクレオチドの配列を指す。相補性の領域は、ヌクレオチド配列（例えば、ｍＲＮＡ又はその一部の中に存在する標的ヌクレオチド配列）に対して完全に相補的であってもよい。例えば、ｍＲＮＡ中に存在するヌクレオチド配列に対して完全に相補的である相補性の領域は、ミスマッチ又はギャップを何ら有することなくｍＲＮＡ中の対応する配列に対して相補的であるヌクレオチドの連続配列を有する。あるいは、相補性の領域は、ヌクレオチド配列（例えば、ｍＲＮＡ又はその一部の中に存在するヌクレオチド配列）に対して部分的に相補的であり得る。例えば、ｍＲＮＡ中に存在するヌクレオチド配列に対して部分的に相補的である相補性の領域は、ｍＲＮＡ中の対応する配列に対して相補的であるが、ｍＲＮＡ中の対応する配列と比較して１つ以上のミスマッチ又はギャップ（例えば、１、２、３個又はそれ以上のミスマッチ又はギャップ）を含有し、但し、適切なハイブリダイゼーション条件下で相補性の領域がｍＲＮＡとハイブリダイズすることができるままである、ヌクレオチドの連続配列を有する。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、長さが少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５ヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「鎖」という用語は、ヌクレオチド間リンケージ（例えば、ホスホジエステルリンケージ、ホスホロチオエートリンケージ）によって繋がり合ったヌクレオチドの単一の連続配列を指す。いくつかの実施形態では、鎖は、２つの自由末端、例えば、５’末端及び３’末端を有する。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、マウス、ウサギ及びヒトを含めた任意の哺乳動物を意味する。一実施形態では、対象はヒト又は非ヒト霊長類である。「個体」又は「患者」という用語は、「対象」と互換的に使用され得る。
本明細書で使用される場合、「合成の」という用語は、核酸などの分子であって、人工的に（例えば、機械（例えば固体核酸合成装置）を使用して）合成されたものであるか、あるいは当該分子を通常産生する天然供給源（例えば細胞又は生物）から得られたものでない、当該分子を指す。
本明細書で使用される場合、「好適なプロドラッグ」という用語は、生理学的条件下で、又は加溶媒分解によって本明細書に記載の生物活性核酸又はその類縁体に変換され得る化合物を表すことを意図している。したがって、「プロドラッグ」という用語は、薬学的に許容される、生物活性核酸又はその類縁体の前駆体を指す。プロドラッグは、対象に投与されたときには不活性であり得るが、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば加水分解によって活性化合物に変換される。プロドラッグ化合物は、哺乳類生物において溶解性、組織適合性又は遅延放出の利点を提供することが多い（例えば、Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｈ．，ＤＥＳＩＧＮ ＯＦ ＰＲＯＤＲＵＧＳ（１９８５），ｐｐ．７－９，２１－２４（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を参照されたい）。プロドラッグについての論述は、参照によりこれらの両方の全体を本明細書に援用する、Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏ－ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，”Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌ．１４、及びＢＩＯＲＥＶＥＲＳＩＢＬＥ ＣＡＲＲＩＥＲＳ ＩＮ ＤＲＵＧ ＤＥＳＩＧＮ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８７の中で提供されている。「プロドラッグ」という用語は、哺乳動物対象にそのようなプロドラッグが投与されたときにｉｎ ｖｉｖｏで活性化合物を遊離させる、共有結合で結合した任意の担体を含むことも意図している。本明細書に記載される活性化合物のプロドラッグは、慣例的な操作で、あるいはｉｎ ｖｉｖｏで修飾部が開裂して親活性化合物となるような方法で、活性化合物中に存在する官能基を修飾することによって、調製され得る。プロドラッグとしては、任意の基にヒドロキシ、アミノ又はメルカプト基が結合しており、哺乳動物対象に活性化合物のプロドラッグが投与されたときに当該任意の基が開裂してそれぞれ遊離ヒドロキシ、遊離アミノ又は遊離メルカプト基を形成する、化合物が挙げられる。好適なプロドラッグの例としては、リン原子修飾核酸の、グルタチオン、アシルオキシ、チオアシルオキシ、２－カルボアルコキシエチル、ジスルフィド、チアミナル及びエノールエステル誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。「プロオリゴヌクレオチド」又は「プロヌクレオチド」又は「核酸プロドラッグ」という用語は、オリゴヌクレオチドのプロドラッグとなるように修飾されたオリゴヌクレオチドを指す。ホスホナート及びホスフェートプロドラッグは、例えば、参照によりその全体を本明細書に援用する、Ｗｉｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｏｒ ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ：ｃｒｏｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ”ＴＯＰ．ＣＵＲＲ．ＣＨＥＭ．２０１５，３６０：１１５－１６０の中に見つけることができる。
本明細書で使用される場合、「好適なヒドロキシル保護基」という語句は、当技術分野でよく知られており、それに結合している酸素原子と合わせて見たとき、独立して、エステル、エーテル、シリルエーテル、アルキルエーテル、アリールアルキルエーテル及びアルコキシアルキルエーテルから選択される。そのようなエステルの例としては、ホルメート、アセテート、カーボネート及びスルホナートが挙げられる。具体的な例としては、ホルメート、ベンゾイルホルメート、クロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、ｐ－クロロフェノキシアセテート、３－フェニルプロピオネート、４－オキソペンタノエート、４，４－（エチレンジチオ）ペンタノエート、ピバロエート（トリメチルアセチル）、クロトナート、４－メトキシ－クロトナート、ベンゾエート、ｐ－ベンジルベンゾエート、２，４，６－トリメチルベンゾエート、カーボネート、例えば、メチル、９－フルオレニルメチル、エチル、２，２，２－トリクロロエチル、２－（トリメチルシリル）エチル、２－（フェニルスルホニル）エチル、ビニル、アリル及びｐ－ニトロベンジルが挙げられる。そのようなシリルエーテルの例としては、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル、ｔ－ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリル、及び他のトリアルキルシリルエーテルが挙げられる。アルキルエーテルとしては、メチル、ベンジル、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、トリチル、ｔ－ブチル、アリル、及びアリルオキシカルボニルエーテル、又は誘導体が挙げられる。アルコキシアルキルエーテルとしては、アセタール、例えば、メトキシメチル、メチルチオメチル、（２－メトキシエトキシ）メチル、ベンジルオキシメチル、ベータ－（トリメチルシリル）エトキシメチル、及びテトラヒドロピラニルエーテルが挙げられる。アリールアルキルエーテルの例としては、ベンジル、ｐ－メトキシベンジル、３，４－ジメトキシベンジル、Ｏ－ニトロベンジル、ｐ－ニトロベンジル、ｐ－ハロベンジル、２，６－ジクロロベンジル、ｐ－シアノベンジル、並びに２－及び４－ピコリルが挙げられる。いくつかの実施形態では、好適なヒドロキシル保護基は、例えばジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸又は酢酸を使用して酸感受性オリゴヌクレオチドの液相及び固相合成のどちらの間に脱保護されるのにも適している酸不安定基、例えば、トリチル、４－メトキシトリチル、４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、４，４’，４’’－トリメトキシトリチル、９－フェニル－キサンテン－９－イル、９－（ｐ－トリル）－キサンテン－９－イル、ピキシル、２，７－ジメチルピキシルなどである。ｔ－ブチルジメチルシリル基は、合成中にＤＭＴｒ基を除去するために用いられる酸性条件の下で安定しているが、フッ化物供給源、例えばテトラブチルアンモニウムフルオリド又はピリジンフッ化水素によってＲＮＡオリゴマーの切断及び脱保護の後に除去され得る。
本明細書で使用される場合、「好適なアミノ保護基」という語句は、当技術分野でよく知られており、それに結合している窒素と合わせて見たとき、限定はされないが、アラルキルアミン、カルバメート、アリルアミン、アミドなどを含む。アミンのための一価保護基の例としては、ｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、エチルオキシカルボニル、メチルオキシカルボニル、トリクロロエチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、ベンジルオキソカルボニル（ＣＢＺ）、アリル、ベンジル（Ｂｎ）、フルオレニルメチルカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、フェニルアセチル、ベンゾイルなどが挙げられる。アミンのための二価保護基の例としては、上記に一価保護基として記載されているものから独立して選択される２つの置換基で置換されるアミンが挙げられ、さらには、環状イミン、例えば、フタルイミド、マレイミド、スクシンイミド、２，２，５，５－テトラメチル－１，２，５－アザジシロリジン、アジドなどが挙げられる。アミノ保護基の酸加水分解によってその塩化合物が形成されることは理解されよう。例えば、アミノ保護基が塩酸などの酸による処理によって除去されると、得られるアミン化合物はその塩酸塩として形成されるであろう。当業者であれば、多様な酸が、酸不安定性のアミノ保護基の除去のために有用であり、それゆえに多様な塩形態が考えられることを認識するであろう。
本明細書で使用される場合、「ホスホロアミダイト」という用語は、窒素含有三価リン誘導体を指す。好適なホスホロアミダイトの例は本明細書に記載されている。
本明細書で使用される場合、「力価」は、細胞内の意図した標的に対する特定のレベルの活性を得るためにｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで投与されなければならないオリゴヌクレオチドなどの薬物の量を指す。例えば、１ｍｇ／ｋｇの投薬量で対象において標的の発現を９０％抑制するオリゴヌクレオチドは、１００ｍｇ／ｋｇの投薬量で対象において標的の発現を９０％抑制するオリゴヌクレオチドよりも大きな力価を有する。
本明細書で使用される場合、「保護基」という用語は、従来の化学的意味において、所望の反応の特定の条件の下で官能基を可逆的に非反応性にする基として使用される。所望の反応の後、保護基は、保護されていた官能基を脱保護するために除去され得る。すべての保護基は、合成されようとしている分子をあまり大きな割合で分解しない条件の下で除去可能でなければならない。
本明細書で使用される場合、「提供される核酸」という用語は、本明細書において示される任意の属、亜属及び／又は種に関する。
本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」という用語は、リボースを、その２’位にヒドロキシル基を含有するものであるそのペントース糖として有する、ヌクレオチドを指す。修飾リボヌクレオチドは、２’位以外にある原子の１つ以上の修飾又は置換を有するリボヌクレオチドであり、これには、リボース、ホスフェート基又は塩基における、又はそれの修飾又は置換が含まれる。
本明細書で使用される場合、「リボザイム」という用語は、ＤＮＡかＲＮＡかのどちらかであり得る別個の標的核酸配列を特異的に認識及び切断する触媒核酸分子を指す。各リボザイムは、触媒性構成部分（「触媒ドメイン」とも呼称される）、及び触媒ドメインの両側に１つずつ存在する２つの結合ドメインからなる標的配列結合性構成部分を有する。
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ阻害剤分子」という用語は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）及びアンチセンス鎖（ガイド）を有し、アンチセンス鎖又はアンチセンス鎖の一部が、標的ｍＲＮＡの切断においてＡｒｇｏｎａｕｔｅ２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって使用されるものである、二本鎖核酸阻害剤分子（「ｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子」）か、（ｂ）単一のアンチセンス鎖を有し、そのアンチセンス鎖（又はそのアンチセンス鎖の一部）が、標的ｍＲＮＡの切断においてＡｇｏ２エンドヌクレアーゼによって使用されるものである、一本鎖核酸阻害剤分子（「ｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子」）かのどちらかを指す。
二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子は、２本のオリゴヌクレオチド鎖、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。センス鎖又はその領域は、二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤分子のアンチセンス鎖又はその領域に対して部分的、実質的又は完全に相補的である。ある特定の実施形態では、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して非相補的であるヌクレオチドも含有し得る。非相補ヌクレオチドは、相補配列の片側にある場合もあるし、又は相補配列の両側にある場合もある。ある特定の実施形態では、センス鎖又はその領域がアンチセンス鎖又はその領域に対して部分的又は実質的に相補的である場合、非相補ヌクレオチドは、１つ以上の相補性の領域の間に位置し得る（例えば、１つ以上のミスマッチ）。センス鎖はパッセンジャー鎖とも呼ばれる。
本明細書で使用される場合、「全身投与」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏでの薬剤の血流における全身的な吸収又は蓄積、及びその後の全身にわたる分配を意味する。
本明細書で使用される場合、「標的部位」、「標的配列」、「標的核酸」、「標的領域」、「標的遺伝子」という用語は、互換的に使用され、例えば、その標的配列に対して部分的に、実質的に、又は完全に、もしくは十分に相補的である配列をガイド／アンチセンス領域内に含有するＲＮＡｉ阻害剤分子によって媒介される切断の「標的となる」ＲＮＡ又はＤＮＡ配列を指す。
本明細書で使用される場合、「標的指向性リガンド」という用語は、関心対象の組織又は細胞の同族分子（例えば受容体）に選択的に結合する分子（例えば、炭化水素、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド又は脂質）であって、関心対象の組織又は細胞に他の物質を指向する目的のために別の物質に結合体化され得る、当該分子を指す。例えば、いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドは、関心対象の特定の組織又は細胞にオリゴヌクレオチドを指向する目的のために、オリゴヌクレオチドに結合体化され得る。いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドは細胞表面受容体に選択的に結合する。かくして、いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドは、オリゴヌクレオチドに結合体化されている場合、細胞の表面に発現した受容体に対する選択的結合、並びに細胞によるオリゴヌクレオチド、標的指向性リガンド及び受容体を含む複合体のエンドソーム内在化によって、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を容易にする。いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドは、細胞内で標的指向性リガンドからオリゴヌクレオチドが遊離するような、細胞内在化の後又は間に切断されるリンカーを介して、オリゴヌクレオチドに結合体化される。
本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、既存の病状（例えば、疾患、障害）に関して対象の健康状態及び／又は体調を改善する目的のために、又は病状の出現の可能性を予防もしくは低減するために、例えば対象への治療剤（例えばオリゴヌクレオチド）の投与によって、ケアをそれを必要とする対象に提供する行為を指す。いくつかの実施形態では、治療は、対象が被っている病状（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの兆候、症候又は原因因子の頻度又は重症度を低減することを伴う。
本明細書で使用される場合、「テトラループ」という用語は、ワトソン－クリック型でハイブリダイズした隣接ヌクレオチドの安定性に寄与する安定した二次構造を形成するループ（一本鎖領域）を指す。理論に制約されるわけではないが、テトラループは、隣接するワトソン－クリック型塩基対をスタッキング相互作用によって安定化させ得る。加えて、テトラループ内のヌクレオチド同士の相互作用としては、非ワトソン－クリック型塩基対合、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が挙げられるが、これらに限定されない（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ １９９０；３４６（６２８５）：６８０－２、Ｈｅｕｓ ａｎｄ Ｐａｒｄｉ，ＳＣＩＥＮＣＥ １９９１；２５３（５０１６）：１９１－４）。テトラループは、雑多な塩基からなる単純なモデルループ配列から予測されるよりも高い、融解温度（Ｔｍ）の上昇を隣接二重鎖にもたらす。例えば、テトラループは、１０ｍＭのＮａＨＰＯ4で少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃又は少なくとも７５℃の融解温度を、少なくとも２塩基対の長さの二重鎖を含むヘアピンに付与する。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びそれらの組合せを含有し得る。ある特定の実施形態では、テトラループは４つのヌクレオチドからなる。ある特定の実施形態では、テトラループは５つのヌクレオチドからなる。
ＲＮＡテトラループの例としては、ＵＮＣＧファミリーのテトラループ（例えば、ＵＵＣＧ）、ＧＮＲＡファミリーのテトラループ（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループが挙げられる（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９９０，８７（２１）：８４６７－７１、Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，１９９１，１９（２１）：５９０１－５）。ＤＮＡテトラループの例としては、ｄ（ＧＮＮＡ）ファミリーのテトラループ（例えばｄ（ＧＴＴＡ）、ｄ（ＧＮＲＡ））ファミリーのテトラループ、ｄ（ＧＮＡＢ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＣＮＮＧ）ファミリーのテトラループ、及びｄ（ＴＮＣＧ）ファミリーのテトラループ（例えばｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる。（Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．，ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，２００２，４１（４８）：１４２８１－１４２９２。Ｓｈｉｎｊｉ ｅｔ ａｌ．，ＮＩＰＰＯＮ ＫＡＧＡＫＫＡＩ ＫＯＥＮ ＹＯＫＯＳＨＵ，２０００，７８（２）：７３１）、参照によりこれらを関連する開示内容に関して本明細書に援用する。いくつかの実施形態では、テトラループは、ニック型テトラループ構造中に含有されている。
本明細書で使用される場合、「ユニバーサル塩基」は、核酸二重鎖内に存在する場合に二重螺旋構造（例えばホスフェート骨格の構造）を変化させることなく１つよりも多い種類の塩基に対向して配置され得る、修飾ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部分の１’位、又はヌクレオチド糖部分置換体中の等価な位置に位置する複素環式部分を指す。加えて、ユニバーサル塩基は、それが存在している一本鎖核酸が標的核酸と二重鎖形成する能力を失わせない。ユニバーサル塩基を含有する一本鎖核酸が標的核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）と二重鎖形成する能力は、当業者にとって明らかな方法（例えば、ＵＶ吸光度、円二色性、ゲルシフト、一本鎖ヌクレアーゼ感受性など）によって検査され得る。加えて、二重鎖の安定性又は形成を判定するために、二重鎖形成を観察する条件を変化させてもよく、例えば、融解温度（Ｔｍ）が核酸二重鎖の安定性と相関することから、温度を変化させてもよい。標的核酸に対して厳密に相補的である基準一本鎖核酸と比較すると、ユニバーサル塩基を含有する一本鎖核酸は、相補核酸と一緒に形成する二重鎖に比べてより低いＴｍを有する二重鎖を標的核酸と一緒に形成する。他方、ユニバーサル塩基が塩基に置き換わって単一のミスマッチを生じている基準一本鎖核酸と比較すると、ユニバーサル塩基を含有する一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を有する核酸と一緒に形成する二重鎖に比べてより高いＴｍを有する二重鎖を標的核酸と一緒に形成する。
いくつかのユニバーサル塩基は、塩基対形成条件下でユニバーサル塩基と塩基グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）のすべてとの間に水素結合を形成することによって塩基対合することができる。ユニバーサル塩基は、たった１つの相補塩基としか塩基対を形成しない塩基ではない。二重鎖において、ユニバーサル塩基は、二重鎖の対向鎖上でそれに対向しているＧ、Ｃ、Ａ、Ｔ及びＵの各々と水素結合を形成しない場合もあるし、１つの水素結合を形成する場合もあるし、又は１つよりも多い水素結合を形成する場合もある。好ましくは、ユニバーサル塩基は、二重鎖の対向鎖上でそれに対向する塩基と相互作用しない。二重鎖において、ユニバーサル塩基との間での塩基対合は、ホスフェート骨格の二重螺旋構造を変化させることなく起こる。ユニバーサル塩基は、スタッキング相互作用によって、同一核酸鎖上の隣接ヌクレオチドの中の塩基とも相互作用し得る。そのようなスタッキング相互作用は、特に、ユニバーサル塩基が、二重鎖の対向鎖上でそれに対向して配置されている塩基と水素結合を何ら形成しない状況で、二重鎖を安定化させる。ユニバーサル結合性ヌクレオチドの非限定的な例としては、イノシン、１－Ｏ－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられる（Ｑｕａｙ ｅｔ ａｌ．による米国特許出願公開第２００７０２５４３６２号、Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ａｃｙｃｌｉｃ ５－ｎｉｔｒｏｉｎｄａｚｏｌｅ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ａｓ ａｍｂｉｇｕｏｕｓ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９９５ Ｎｏｖ．１１；２３（２１）：４３６３－７０、Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，３－Ｎｉｔｒｏｐｙｒｒｏｌｅ ａｎｄ ５－ｎｉｔｒｏｉｎｄｏｌｅ ａｓ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅｓ ｉｎ ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ ＰＣＲ，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９９５ Ｊｕｌ．１１；２３（１３）：２３６１－６６、Ｌｏａｋｅｓ ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，５－Ｎｉｔｒｏｉｎｄｏｌｅ ａｓ ａ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ ａｎａｌｏｇｕｅ，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９９４ Ｏｃｔ．１１；２２（２０）：４０３９－４３））。
本開示の１つ以上の脂質結合体を含む核酸又はその類縁体は、複数の異なるオリゴヌクレオチド構造（又は型）に組み込まれ得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の核酸は、長さが共に１７～３６ヌクレオチドの範囲であるセンス及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’伸長部内にテトラループ構造を有し、アンチセンス鎖の３’末端に２つの末端側オーバーハングヌクレオチドを有する、本開示の核酸が組み込まれたオリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、２つの末端側オーバーハングヌクレオチドはＧＧである。典型的には、アンチセンス鎖の２つの末端側ＧＧヌクレオチドのうちの一方又は両方は、標的に対して相補的でない。
いくつかの実施形態では、長さが共に２１～２３ヌクレオチドの範囲であるセンス及びアンチセンス鎖を有する、本開示の１つ以上の脂質結合体を含む核酸又はその類縁体が組み込まれたオリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、センス鎖、アンチセンス鎖、又はセンス及びアンチセンス鎖の両方に、１又は２ヌクレオチドの長さの３’オーバーハングが設けられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２３ヌクレオチドのガイド鎖、及び２１ヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有し、パッセンジャー鎖の３’末端及びガイド鎖の５’末端は平滑末端を形成し、ガイド鎖は２ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、平滑末端を有する二重鎖構造である。いくつかの実施形態では、結合体は、短縮型パッセンジャー／センス鎖を有する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５又は６個の）ヌクレオチドは、脂質結合体を含む。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドの２～４個のヌクレオチドは各々、別個の脂質結合体に結合体化されている。いくつかの実施形態では、センス又はアンチセンス鎖のどちらかの末端において２～４個のヌクレオチドは脂質結合体を含み（例えば、脂質は、センス又はアンチセンス鎖の５’又は３’末端にある２～４ヌクレオチドのオーバーハング又は伸長部に結合体化されており）、その結果、脂質部分は歯ブラシの毛に類似し、オリゴヌクレオチドは歯ブラシに類似している。例えば、提供されるオリゴヌクレオチドはセンス鎖の５’末端か３’末端かのどちらかにステム－ループを含み得、ステムのループの１、２、３又は４個のヌクレオチドは個別に脂質結合体化され得る。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、一価脂質結合体に結合体化されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つよりも多い一価脂質結合体に結合体化されている（つまり、２、３又は４個の一価脂質結合体に結合体化されており、典型的には、３又は４個の一価脂質結合体に結合体化されている）。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価脂質結合体、三価脂質結合体又は四価脂質結合体部分に結合体化されている。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドの２’又は３’位においてアダマンチル又は脂質部分に結合体化されている。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドの５’末端においてアダマンチル又は脂質部分に結合体化されている。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５又は６個）のヌクレオチドは各々、１つ以上の脂質結合体に結合体化されている。いくつかの実施形態では、ステム－ループのループの２～４個のヌクレオチドは各々、別個の脂質結合体に結合体化されている。いくつかの実施形態では、脂質は、センス又はアンチセンス鎖のどちらかの末端において２～４個のヌクレオチドに結合体化されており（例えば、脂質は、センス又はアンチセンス鎖の５’又は３’末端にある２～４ヌクレオチドのオーバーハング又は伸長部に結合体化されており）、その結果、脂質部分は歯ブラシの毛に類似し、オリゴヌクレオチドは歯ブラシに類似している。例えば、オリゴヌクレオチドはセンス鎖の５’末端か３’末端かのどちらかにステム－ループを含み得、ステムのループの１、２、３又は４個のヌクレオチドは個別に脂質部分に結合体化され得る。いくつかの実施形態では、脂質部分はセンス鎖のヌクレオチドに結合体化されている。例えば、センス鎖のテトラループの中のヌクレオチドに４つの脂質部分が結合体化され得、各脂質部分は１つのヌクレオチドに結合体化されている。
ｉ．オリゴヌクレオチド構造
ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡなどを含めた本開示の方法においてＲＮＡを標的とするのに有用となるオリゴヌクレオチドの様々な構造が存在する。本明細書に記載の１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ配列を組み込むか又は標的とするためのフレームワークとして使用され得る。（例えばＲＮＡｉ経路によって）ＲＮＡ発現を標的とするための二本鎖オリゴヌクレオチドは、総じて、互いとの二重鎖を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖は共有結合で連結されていない。他方、いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖は共有結合で連結されている。
いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ発現の発現を低減するために提供され、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を採用する。例えば、各鎖が１９～２５ヌクレオチドの大きさを有し、少なくとも１つの１～５ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが開発されている（例えば米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。Ｄｉｃｅｒによってプロセシングされて活性ＲＮＡｉ生成物を生成する、より長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば米国特許第８，８８３，９９６号を参照されたい）。さらなる研究によって、少なくとも一方の鎖の少なくとも一方の末端が標的指向性二本鎖領域を越えて伸長した伸長型二本鎖オリゴヌクレオチドが生み出され、これには、熱力学的安定化テトラループ構造を一方の鎖に含む構造が含まれる（例えば、参照により、これらのヌクレオチドの開示に関して本明細書に援用する米国特許第８，５１３，２０７号及び同第８，９２７，７０５号、並びにＷ０２０１０／０３３２２５を参照されたい）。そのような構造は、一本鎖伸長部を（分子の片側又は両側に）、及び二本鎖伸長部を含み得る。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、長さが２１～２３ヌクレオチドの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、（例えば、１、２又は３ヌクレオチドの長さの）オーバーハングをセンス及び／又はアンチセンス鎖の３’末端に有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）は、標的ＲＮＡに対してアンチセンスである２１ヌクレオチドのガイド鎖、及び相補的なパッセンジャー鎖を含み得、両鎖はアニーリングして、１９ｂｐの二重鎖と、片方又は両方の３’末端にある２ヌクレオチドのオーバーハングとを形成する。例えば、各々の内容を関連する開示内容に関して本明細書に援用する、ＵＳ９０１２１３８、ＵＳ９０１２６２１及びＵＳ９１９３７５３を参照されたい。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、アンチセンス－センス二重鎖を越えて伸長した領域を含む３６ヌクレオチドのセンス鎖を有し、伸長領域は、ステムが６塩基対の二重鎖であり、テトラループが４つのヌクレオチドを有する、ステム－テトラループ構造を有する。これらの実施形態のうち、ある特定のものは、１つ以上の脂質結合体に加えてテトラループヌクレオチドの１つ以上が各々、一価ＧａｌＮａｃリガンドに結合体化されている。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１２～２５ヌクレオチドのセンス鎖、及びＤｉｃｅｒ酵素の作用を受けたときに成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖となる１９～２７ヌクレオチドのアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、２５ヌクレオチドのセンス鎖、及びＤｉｃｅｒ酵素の作用を受けたときに成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖となる２７ヌクレオチドのアンチセンス鎖を含む。
本明細書に開示される組成物及び方法に関する使用のための他のオリゴヌクレオチドデザインとしては、１６－ｍｅｒのｓｉＲＮＡ（例えば、ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＩＮ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＢＩＯＬＯＧＹ．Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），ＲＯＹＡＬ ＳＯＣＩＥＴＹ ＯＦ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，２００６を参照されたい）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ以下のステムを有するもの；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．ＭＥＴＨＯＤＳ ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２０１０；６２９：１４１－５８を参照されたい）、平滑ｓｉＲＮＡ（例えば、１９ｂｐの長さのもの；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＲＮＡ Ｖｏｌ．１２，ｒ１６３－１７６（２００６）を参照されたい）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴ．ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ．２６，１３７９－１３８２（２００８）を参照されたい）、非対称短鎖二本鎖ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，ＭＯＬ ＴＨＥＲ．２００９ Ａｐｒ；１７（４）：７２５－３２を参照されたい）、フォーク型ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ，ＦＥＢＳ ＬＥＴＴＥＲＳ，Ｖｏｌ ５５７，ｉｓｓｕｅｓ １－３；（Ｊａｎ ２００４），ｐ１９３－９８を参照されたい）、一本鎖ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ；ＮＡＴＵＲＥ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ３０，１０６３（２０１２）を参照されたい）、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ ＡＭ ＣＨＥＭ ＳＯＣ １２９：１５１０８－１５１０９（２００７）を参照されたい）、及び低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ（ｓｉｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．２００７ Ｓｅｐ；３５（１７）：５８８６－９７を参照されたい）が挙げられる。参照により、上記参考文献の各々の全体を、その中の関連開示内容に関して援用する。遺伝子発現を低減又は阻害するためにいくつかの実施形態で使用され得るオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）及び短鎖ｓｉＲＮＡである（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯ Ｊ．，２００２，２１（１７）：４６７１－４６７９を参照されたく、また、米国出願第２００９００９９１１５号も参照されたい）。
本開示の中で示されたように、ＲＮＡ干渉機序によって作用するｓｉＲＮＡは、標的となるｍＲＮＡ配列の認識及び分解において有用である。従来技術における主な難点は、肝臓外の標的細胞へのｓｉＲＮＡ送達の効率の低さ、及び様々な生体流体の中のヌクレアーゼによるｓｉＲＮＡの分解であったが、これらの難点は、様々な組織へのｓｉＲＮＡの有用な全身送達を妨げるのに十分なものであった。他方、本発明によれば、本明細書に提供される化学構造に関連して、様々な結合体は、哺乳類宿主内の様々な器官系及び組織への送達を増強する及び可能にするためにも使用され得る。そのような結合体は、従来技術によれば、カチオン性脂質溶液、ポリマー及びナノ粒子の形態をとっていた。本発明によれば、本明細書に提供される構造は、様々な生物由来分子を含むように結合体化され得る。そのような分子としては、様々な大きさを各々有する、小型親油性分子もしくは鎖、抗体、アプタマー、リガンド、ペプチド又はポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。そのような結合体は、複合体を形成するのに正電荷を必要とせず、毒性が限られており、免疫原性がより低いため、好適である。
そのような結合体はまた、パッセンジャー鎖及び／又はガイド鎖上で様々な位置及び集合パターンも有し得る。そのような配置は、ｓｉＲＮＡが標的ｍＲＮＡを分解する効率及び能力に寄与するのに役立ち得る。知られているように、ｓｉＲＮＡはポリアニオンであり、それゆえ、疎水性細胞膜を直接透過することができず、エンドサイトーシス又はピノサイトーシスによってのみ細胞に進入し得る。同様に、本明細書に記載される化学修飾は、本発明のｓｉＲＮＡ分子の特性、例えば、リボヌクレアーゼに対するそれらの感受性、ＲＮＡｉシステムによる認識、疎水性、毒性、二重鎖融解温度、及びＲＮＡ螺旋の立体配座に対して影響を与え得る。典型的には、修飾は、リボース、ホスフェート及び核酸塩基の修飾に類別され得る。全体的な二重鎖の融点がｓｉＲＮＡ干渉活性の効率に寄与し得ることが想定される（Ｐａｒｋ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，２０１５）。それゆえ、本発明によれば、ステムループ以外のヘアピンの種々の場所に配置された結合体もｓｉＲＮＡ分子の有効性に影響を与えるであろう。ｓｉＲＮＡヘアピン分子に結合させる複数の結合体の使用は、ｄｓＲＮＡの１つの区域又は末端に集中し得るか、オリゴヌクレオチド鎖の長さにわたって広がり得るかのどちらかである。そのような複数の結合体は、典型的には短い脂肪鎖とされ、大幅に短くされたパッセンジャー鎖を有する分子をもたらすであろう。
そのようなオリゴヌクレオチド修飾の別の実施形態では、二環式誘導体（ＬＮＡ）を付加して、より短いパッセンジャー鎖を安定状態に保つと共に、得られるｓｉＲＮＡの融点を大幅に上昇させることがある。ＬＮＡの場合、３’エンド型リボース立体配座を固定する２’及び４’炭素の間の環が余分にあることによって、相補鎖の親和性がヌクレオチド１個あたり２～８℃上昇する（Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００８）。しかしながら、ｓｉＲＮＡへのこの修飾の導入はその干渉活性に強く影響し、アンチセンス鎖はこの修飾に対して特に敏感である。
二重鎖の熱的非対称性は「ガイド」鎖選択に大きく寄与するため、アンチセンス鎖の３’末端とセンス鎖の５’末端とによって形成される二重鎖を安定化させる修飾、及び逆に、センス鎖の３’末端とアンチセンス鎖の５’末端とによって形成される二重鎖を不安定化させる修飾は、有利な二重鎖熱的非対称性を提供することによってＲＮＡｉの効率が向上し得る。したがって、二重鎖の異なる末端へのＬＮＡ、ＵＮＡ又はＧＮＡの導入は、ＲＩＳＣにアンチセンス鎖が組み込まれる可能性を向上させることによって、ｓｉＲＮＡ効率の向上をもたらし得る（Ｖａｉｓｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。細胞にｓｉＲＮＡを送達する方法としての結合体化の利用は、当技術分野において古くは様々な分子とのｓｉＲＮＡ結合体を形成することを必要とする。そのような結合体化は、フォレート又はコレステロール（Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．，２００９、及びＬｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９）、抗体（Ｄａｓｓｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００９）アプタマー（Ａｒｏｎｉｎ，２００６）、小ペプチド（Ｃｅｓａｒｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００７）及び炭水化物（Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４）の使用を含むものであった。参照によりそのような参考文献を本明細書に援用する。本発明によれば、結合体分子は、標的細胞への分子の送達を補助するために使用され、既知の生理学的輸送機序によって細胞を透過する（例：コレステロール（Ｌｏｒｅｎｚ ｅｔ ａｌ．，２００４））。そのような短鎖結合体は、エチル又はプロピル結合体でさえも、それらが１つよりも多く存在する場合には本発明のオリゴヌクレオチドの挙動を変化させるであろう。
ａ．アンチセンス鎖
いくつかの実施形態では、１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡを標的とするために提供され、アンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２（例えば、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２又は少なくとも２３）連続ヌクレオチドの配列を含むか又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、提供される二本鎖オリゴヌクレオチドは、４０ヌクレオチド以下の長さ（例えば、４０個以下、３５個以下、３０個以下、２７個以下、２５個以下、２１個以下、１９個以下、１７個以下又は１２個以下のヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２ヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３５又は少なくとも３８ヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１２～４０個の範囲（例えば、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２１、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０又は３２～４０個）のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を有し得る。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は「ガイド鎖」と呼称され得る。例えば、アンチセンス鎖がＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と係合してＡｒｇｏｎａｕｔタンパク質に結合し得るか、又は１つ以上の類似する因子に係合もしくは結合し得、そして標的遺伝子のサイレンシングを担い得る場合、それはガイド鎖と呼称され得る。いくつかの実施形態では、ガイド鎖に対して相補的なセンス鎖は、「パッセンジャー鎖」と呼称され得る。
ｂ．センス鎖
いくつかの実施形態では、１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡを標的とするために提供され、センス鎖を含む。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２又は少なくとも２３）連続ヌクレオチドの配列を含むか又はそれからなるセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、４０ヌクレオチド以下の長さ（例えば、４０個以下、３５個以下、３０個以下、２７個以下、２５個以下、２１個以下、１９個以下、１７個以下又は１２個以下のヌクレオチドの長さ）のセンス鎖（又はパッセンジャー鎖）を有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２ヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３５又は少なくとも３８ヌクレオチドの長さ）のセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１２～４０個の範囲（例えば、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２１、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０又は３２～４０個）のヌクレオチドの長さのセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチドの長さのセンス鎖を有し得る。
いくつかの実施形態では、提供されるセンス鎖は、その３’末端にステム－ループ構造を含む。いくつかの実施形態では、提供されるセンス鎖は、その５’末端にステム－ループ構造を含む。いくつかの実施形態では、提供されるステムは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４ヌクレオチドの長さの二重鎖である。いくつかの実施形態では、提供されるステム－ループは、分解（例えば酵素的分解）からのよりよい保護を分子に提供し、標的細胞への送達のための標的指向特質を増進する。例えば、いくつかの実施形態では、ループは、オリゴヌクレオチドの遺伝子発現阻害活性にあまり影響を与えずに修飾が行われ得る追加のヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、センス鎖が（例えばその３’末端に）Ｓ1－Ｌ－Ｓ2として示されるステム－ループを含んでいるオリゴヌクレオチドが本明細書に提供され、Ｓ1はＳ2に対して相補的であり、ＬはＳ1とＳ2との間に１０ヌクレオチド以下の長さ（例えば、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヌクレオチドの長さ）のループを形成する。
いくつかの実施形態では、提供されるステム－ループのループは、（例えば、ニック型テトラループ構造中の）テトラループである。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びその組合せを含有し得る。典型的には、テトラループは４～５ヌクレオチドを有する。
ｃ．二重鎖の長さ
いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間で形成された二重鎖は、長さが少なくとも１２（例えば、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０又は少なくとも２１）ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間で形成された二重鎖は、長さが１２～３０ヌクレオチドの範囲（例えば、長さが１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０又は２１～３０ヌクレオチド）である。いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間で形成される二重鎖は、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間で形成される二重鎖は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長にわたっていない。いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間での二重鎖は、センス又はアンチセンス鎖のどちらかの全長にわたっている。ある特定の実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間での二重鎖は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の全長にわたっている。
ｄ．オリゴヌクレオチドの末端
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドは、センス鎖かアンチセンス鎖かのどちらか、又はセンス及びアンチセンス鎖の両方に３’オーバーハングが存在するような、センス及びアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、片方の５’末端が他方の５’末端に比べて熱力学的に安定していない。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端に平滑末端を含み、アンチセンス鎖の３’末端にオーバーハングを含む、非対称オリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、長さが１～８ヌクレオチド（例えば、長さが１、２、３、４、５、６、７又は８ヌクレオチド）である。
典型的には、ＲＮＡｉのための提供されるオリゴヌクレオチドは、アンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを有する。但し、他のオーバーハングは可能である。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択的に、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５もしくは６ヌクレオチドの長さを含む３’オーバーハングである。他方、いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択的に、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５もしくは６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングである。
いくつかの実施形態では、センス及び／又はアンチセンス鎖の３’末端又は５’末端の１つ以上（例えば、２つ、３、４つ）の末端側ヌクレオチドは修飾されている。例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の１つ又は２つの末端側ヌクレオチドは修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある最後のヌクレオチドは修飾されており、例えば、２’修飾、例えば２’－Ｏ－メトキシエチルを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある最後の１つ又は２つの末端側ヌクレオチドは、標的に対して相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある最後の１つ又は２つのヌクレオチドは、標的に対して相補的でない。いくつかの実施形態では、センス又はアンチセンス鎖の５’末端及び／又は３’末端は逆位キャップヌクレオチドを有する。
ｅ．ミスマッチ
いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス鎖の間に１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ）のミスマッチが存在する。センス及びアンチセンス鎖の間に１つより多いミスマッチが存在する場合、それらは、連続的に（例えば、２つ、３つ又はそれより多く連なって）配置されていてもよいし、又は相補性の領域の全体にわたって間隔を空けて配置されていてもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端側は１つ以上のミスマッチを含有する。一実施形態では、センス鎖の３’末端側に２つのミスマッチが組み込まれている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端にあるセグメントの塩基ミスマッチ又は不安定化は、ＲＮＡｉにおいて、おそらくはＤｉｃｅｒによるプロセシングを容易にすることによって、合成二重鎖の力価を改善した。
ｉｉ．一本鎖オリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、脂質結合体を含む、ＲＮＡ発現を低減するための提供されるオリゴヌクレオチドは、一本鎖である。そのような構造には、一本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが含まれ得るが、これに限定されない。近年の取組みによって、一本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの活性が実証された（例えば、Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．（Ｍａｙ ２０１６），ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ｖｏｌ．２４（５），９４６－５５を参照されたい）。他方、いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’への方向に書かれた場合に特定の核酸の標的セグメントの逆相補体を含み、（例えばギャップマーとして）細胞におけるその標的ＲＮＡのＲＮアーゼＨ媒介切断を誘導するように、又は（例えばミクスマーとして）細胞における標的ｍＲＮＡの翻訳を阻害するように好適に修飾された、核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドである。本開示に使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、参照により、アンチセンスオリゴヌクレオチドの修飾（例えば、長さ、核酸塩基（ピリミジン、プリン）の糖部分、及び核酸塩基の複素環部分の改変を含む）に関するその開示内容を本明細書に援用する、米国特許第９，５６７，５８７号に示されているような、当技術分野で知られている任意の好適な様式で修飾され得る。さらには、アンチセンス分子は、数十年間にわたって、特定の標的遺伝子の発現を低減するために使用されてきた（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．；Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇｓ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５７：８１－１０５を参照されたい）。
ｉｉｉ．オリゴヌクレオチド修飾
提供される、脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドは、特異性、安定性、送達、生物学的利用能、ヌクレアーゼ分解に対する耐性、免疫原性、塩基対合特性、ＲＮＡ分配及び細胞内取込み、並びに治療又は研究での使用に関係する他の特徴を改善又は制御するために様々な方法で修飾され得る。例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，２００９，３７，２８６７－８１、Ｂｒａｍｓｅｎ ａｎｄ Ｋｊｅｍｓ（ＦＲＯＮＴＩＥＲＳ ＩＮ ＧＥＮＥＴＩＣＳ，３（２０１２）：１－２２）を参照されたい。したがって、いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の好適な修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その塩基（又は核酸塩基）、糖（例えば、リボース、デオキシリボース）又はホスフェート基における修飾を有する。
オリゴヌクレオチドに対する複数の修飾、及びそれらのヌクレオチド修飾の位置は、オリゴヌクレオチドの特性に影響を及ぼし得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、それを脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）又は類似する担体の中に包み込むことによって、ｉｎ ｖｉｖｏに送達され得る。しかしながら、オリゴヌクレオチドがＬＮＰ又は類似する担体で保護されていない場合（例えば、「裸の送達」）、そのヌクレオチドの少なくともいくつかを修飾する上でそれは好都合となり得る。したがって、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドのいずれかのある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドのすべて又は実質的にすべてが修飾されている。ある特定の実施形態では、半分よりも多いヌクレオチドが修飾されている。ある特定の実施形態では、半分未満のヌクレオチドが修飾されている。典型的には、裸の送達の場合、各糖は２’位において修飾されている。これらの修飾は可逆又は不可逆なものであり得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、所望の特質（例えば、酵素的分解からの保護、ｉｎ ｖｉｖｏ投与後に所望の細胞を指向する能力、及び／又は熱力学的安定性）をもたらすのに十分な数及び種類の修飾ヌクレオチドを有する。
ａ．糖修飾
いくつかの実施形態では、修飾糖（本明細書では糖類縁体とも呼称される）は、例えば１つ以上の修飾が糖の２’、３’、４’及び／又は５’炭素位置で起こる、修飾デオキシリボース又はリボース部分を含む。いくつかの実施形態では、修飾糖は、非天然の代替炭素構造、例えば、ロック核酸（「ＬＮＡ」）（例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８），ＴＥＴＲＡＨＥＤＲＯＮ ５４，３６０７－３６３０を参照されたい）、アンロック核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３），ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＹ－ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ，２，ｅｌ０３を参照されたい）、及び架橋核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ａｎｄ Ｏｂｉｋａ（２００２），ＴＨＥ ＲＯＹＡＬ ＳＯＣＩＥＴＹ ＯＦ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，ＣＨＥＭ．ＣＯＭＭＵＮ．，１６５３－１６５９を参照されたい）の中に存在するものも含み得る。参照により、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ、及びＩｍａｎｉｓｈｉ ａｎｄ Ｏｂｉｋａを、糖修飾に関するそれらの開示内容について本明細書に援用する。
いくつかの実施形態では、糖におけるヌクレオチド修飾は２’修飾を含む。ある特定の実施形態では、２’修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、又は２’－デオキシ－２’－フルオロ－Ｐ－ｄ－アラビノ核酸であり得る。典型的には、修飾は、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、又は２’－Ｏ－メトキシエチルである。しかしながら、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドには、オリゴヌクレオチドに使用するために開発された多様な２’位修飾が採用され得る。例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，２００９，３７，２８６７－２８８１を参照されたい。いくつかの実施形態では、糖における修飾は、糖環の１つ以上の炭素の修飾を含み得るものである糖環の修飾を含む。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の２’炭素と、１’炭素又は４’炭素との間でのリンケージを含み得る。例えば、リンケージは、エチレン又はメチレン架橋を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’炭素から３’炭素への結合がない非環状糖を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、例えば糖の４’位に、チオール基を有する。
いくつかの実施形態では、末端側にある３’末端基（例えば、３’－ヒドロキシル）は、例えば、リンカー、アダプターもしくは標識を結合させるために、又はオリゴヌクレオチドを別の核酸に直接ライゲートするために使用され得るホスフェート基などの基である。
ｂ．５’末端側ホスフェート
オリゴヌクレオチドの５’末端側ホスフェート基は、Ａｒｇｏｎａｕｔｅ２と相互作用し得るか、又はいくつかの状況において当該相互作用を増強し得る。しかしながら、５’ホスフェート基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼなどの酵素による分解を受けやすい場合があり、これによってｉｎ ｖｉｖｏでのそれらの生物学的利用能が制限され得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、そのような分解に対する耐性を有する５’ホスフェートの類縁体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類縁体は、オキシメチルホスホナート、ビニルホスホナート又はマロニルホスホナートであり得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端は、天然５’ホスフェート基の静電的及び立体特性を模倣した化学部分（「ホスフェート模倣体」）に結合している（例えば、参照により、ホスフェート類縁体に関するその内容を本明細書に援用するＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５），ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．，Ｍａｒ ３１；４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたい）。５’末端に結合され得る多くのホスフェート模倣体が開発されている（例えば、参照によりホスフェート類縁体に関するその内容を本明細書に援用する米国特許第８，９２７，５１３号を参照されたい）。オリゴヌクレオチドの５’末端のための他の修飾が開発されている（例えば、参照により、ホスフェート類縁体に関するその内容を本明細書に援用するＷＯ２０１１／１３３８７１を参照されたい）。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端にヒドロキシル基が結合している。
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、糖の４’炭素位にホスフェート類縁体（「４’ホスフェート類縁体」と呼称される）を有する。例えば、参照により、ホスフェート類縁体に関する各々の内容を本明細書に援用するＷＯ２０１８／０４５３１７及びＵＳ２０１９／１７７７２９を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端側ヌクレオチドに４’ホスフェート類縁体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類縁体はオキシメチルホスホナートであり、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えばその４’炭素）又はその類縁体に結合している。他の実施形態では、４’ホスフェート類縁体はチオメチルホスホナート又はアミノメチルホスホナートであり、チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子が糖部分又はその類縁体の４’炭素に結合している。ある特定の実施形態では、４’ホスフェート類縁体はオキシメチルホスホナートである。いくつかの実施形態では、オキシメチルホスホナートは、式－Ｏ－ＣＨ2－ＰＯ（ＯＨ）2、又はＯ－ＣＨ2－ＰＯ（ＯＲ）2で表され、式中のＲは、独立して、Ｈ、－ＣＨ3、アルキル基、－ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、－ＣＨ2ＯＣＯＣ（ＣＨ3）3、－ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2Ｓｉ（ＣＨ）、又は保護基から選択される。ある特定の実施形態では、アルキル基は－ＣＨ2ＣＨ3である。より典型的には、Ｒは、独立して、Ｈ、－ＣＨ3又はＣＨ2ＣＨ3から選択される。
ｃ．修飾ヌクレオシド間リンケージ
いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間リンケージを含み得る。いくつかの実施形態では、ホスフェート修飾又は置換によって、少なくとも１つ（例えば、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ又は少なくとも５つ）の修飾ヌクレオチド間リンケージを含むオリゴヌクレオチドがもたらされ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１～１０個（例えば、１～１０、２～８、４～６、３～１０、５～１０、１～５、１～３又は１～２個）の修飾ヌクレオチド間リンケージを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の修飾ヌクレオチド間リンケージを含む。
修飾ヌクレオチド間リンケージは、ホスホロジチオエートリンケージ、ホスホロチオエートリンケージ、ホスホトリエステルリンケージ、チオアルキルホスホナートリンケージ、チオノアルキルホスホトリエステルリンケージ、ホスホロアミダイトリンケージ、ホスホナートリンケージ又はボラノホスフェートリンケージであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間リンケージは、オキシメチルホスホナート又はホスホロチオエートリンケージである。
ｄ．塩基修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは１つ以上の修飾核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基（本明細書では塩基類縁体とも呼称される）は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結されている。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は含窒素塩基である。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素原子を含有しない。例えば、ＵＳ２００８／２７４４６２を参照されたい。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む。いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基は、二重鎖内に存在している場合に二重鎖の構造を実質的に変化させずに１つよりも多い種類の塩基に対向して配置され得る、修飾ヌクレオチドのヌクレオチド糖部分の１’位、又はヌクレオチド糖部分置換体の等価な位置に位置している、複素環式部分である。いくつかの実施形態では、標的核酸に対して完全に相補的である基準一本鎖核酸（例えばオリゴヌクレオチド）と比較すると、ユニバーサル塩基を含有する一本鎖核酸は、相補核酸と一緒に形成する二重鎖に比べてより低いＴmを有する二重鎖を標的核酸と一緒に形成する。他方、いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基が塩基に置き換わって単一のミスマッチを生じている基準一本鎖核酸と比較すると、ユニバーサル塩基を含有する一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸と一緒に形成する二重鎖に比べてより高いＴmを有する二重鎖を標的核酸と一緒に形成する。
ユニバーサル結合性ヌクレオチドの非限定的な例としては、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられる。例えば、本明細書が参照によりそれらの各々の全体を援用する、ＵＳ２００７／２５４３６２、Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９９５ Ｎｏｖ １１；２３（２１）：４３６３－７０、Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９９５ Ｊｕｌ １１；２３（１３）：２３６１－６６、及びＬｏａｋｅｓ ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９９４ Ｏｃｔ １１；２２（２０）：４０３９－４３を参照されたい。
ｅ．可逆的修飾
標的細胞に到達する前のオリゴヌクレオチドをｉｎ ｖｉｖｏ環境から保護するためのある特定の修飾がなされ得るとはいえ、それは、標的細胞のサイトゾルに到達した時点でのオリゴヌクレオチドの力価又は活性を低下させることがある。分子が細胞外では所望の特性を保持しているが、後に細胞のサイトゾル環境に進入した時点でそれが除去されるような、可逆的修飾がなされ得る。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用によって、又は細胞の内部の化学的条件によって（例えば、細胞内グルタチオンによる還元によって）除去され得る。
いくつかの実施形態では、可逆的修飾ヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含む。典型的には、核酸分子は、ヌクレオチド間ジホスフェートリンケージによって生み出される負電荷をマスキングして細胞内取込み及びヌクレアーゼ耐性を改善するための環状ジスルフィド部分で化学修飾されている。本明細書で参照により、そのような修飾に関する各々の開示内容全体を援用する、ＵＳ２０１１／０２９４８６９、ＷＯ２０１５／１８８１９７、Ｍｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，２０１４，３２：１２５６－６３、及びＷＯ２０１４／０８８９２０を参照されたい。ヌクレオチド間ジホスフェートリンケージのこの可逆的修飾は、サイトゾルの還元性環境（例えばグルタチオン）によって細胞内で切断されるように設計されている。従前の例としては、細胞の内部で切断可能であることが報告された中和ホスホトリエステル修飾が挙げられる（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．２００３，１２５：９４０－９５０）。
いくつかの実施形態では、そのような可逆的修飾は、ヌクレアーゼ及び他の厳しい環境条件（例えばｐＨ）にオリゴヌクレオチドが曝露されることになるｉｎ ｖｉｖｏ投与の間（例えば、血中及び／又は細胞のリソソーム／エンドソームコンパートメント内を通過する間）の保護を可能にする。グルタチオンのレベルが細胞外空間に比べて高い、細胞のサイトゾルの中に放出されると、修飾部は逆転し、その結果、切断されたオリゴヌクレオチドとなる。可逆的なグルタチオン感受性部分を使用することによって、不可逆的化学修飾を用いて利用可能となる選択肢に比べて立体的により大きな化学基を関心対象のオリゴヌクレオチドに導入することが可能である。これはなぜなら、これらのより大きな化学基がサイトゾル中で除去されるものであり、それゆえ、細胞のサイトゾル中でオリゴヌクレオチドの生物活性に干渉するはずがないからである。結果として、これらのより大きな化学基は、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに様々な利点、例えば、ヌクレアーゼ耐性、親油性、電荷、熱安定性、特異性、及び低減された免疫原性を付与するように設計され得る。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分の構造は、その放出の速度論を調節するように設計され得る。
いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’炭素に結合している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端側ヌクレオチドである場合、糖の５’炭素に位置している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端側ヌクレオチドである場合、糖の３’炭素に位置している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。例えば、本明細書で参照によりその全体を援用するＷＯ２０１８／０３９３６４を参照されたい。
ｖ．標的指向性リガンド
いくつかの実施形態では、提供される、脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドは、１つ以上の細胞又は１つ以上の器官を標的とする。そのような標的指向方策は、他の器官における望ましくない影響を回避するのに役立ち得、又はオリゴヌクレオチドによる利益が得られないであろう細胞、組織もしくは器官にオリゴヌクレオチドが過度に失われることを回避し得る。したがって、いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、組織、細胞又は器官への改善された標的指向を容易にするためにさらに修飾され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、広範囲の組織、例えば、ＣＮＳ、筋肉、脂肪又は副腎へのオリゴヌクレオチドの送達を容易にし得る。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、１つ以上の標的指向性リガンドに結合体化されているヌクレオチドを含む。標的指向性リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質又はタンパク質の一部（例えば、抗体又は抗体断片）を含み得る。いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドはアプタマーである。例えば、標的指向性リガンドは、腫瘍脈管構造もしくは神経膠腫細胞を標的とするために使用され得るＲＧＤペプチド、腫瘍脈管構造もしくは瘻孔を標的とするためのＣＲＥＫＡペプチド（配列番号３）、トランスフェリン、ラクトフェリン、又はＣＮＳ脈管構造上に発現したトランスフェリン受容体を標的とするためのアプタマー、又は神経膠腫細胞上のＥＧＦＲを標的とするための抗ＥＧＦＲ抗体であり得る。
標的指向性リガンドをヌクレオチドに連結するために適切な方法又は化学（例えばクリックケミストリー）が用いられ得る。いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドに結合体化される。いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドを本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドに結合体化するためにアセタール系リンカーを使用する。アセタール系リンカーは、例えば、本明細書で参照によりその全体を援用するＷＯ２０１６／１００４０１に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは不安定なリンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは、安定しているものである。いくつかの実施形態では、標的指向性リガンドと二重鎖オリゴヌクレオチドとの間に二重鎖伸長部（３、４、５又は６塩基対以下の長さ）が提供される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１、２、３又は４単位の式ＩＩ－ｂ－２を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１単位以上の式ＩＩ－ｂ－２を含み、式中のＢはグアニン（Ｇ）又はアデニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１、２、３又は４単位の式ＩＩ－ｂ－２を含むＧＡＡＡテトラループを含む。
例示的な本開示の脂質結合体を含むその核酸－リガンド結合体を表１に示す。
例示的な１つ以上のアダマンチル又は脂質部分を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体又はその類縁体は表２に開示される。
Figure 2023537499000111
Figure 2023537499000112
Figure 2023537499000113
Figure 2023537499000114
Figure 2023537499000115
いくつかの実施形態では、本開示は、表２、説明及び実施例に記載されているような、１つ以上のアダマンチルもしくは脂質部分を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、表２、説明及び実施例の中にあるような、本開示のリガンド結合体を１つ以上含む二本鎖オリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
５．核酸及びその類縁体をもたらす一般的方法
本明細書に記載の脂質結合体を含む核酸及びその類縁体は、標準的なホスホロアミダイト法を含めた当技術分野で知られている様々な合成方法を用いて作られ得る。提供される本開示の核酸を合成するために任意のホスホロアミダイト合成法が用いられ得る。ある特定の実施形態では、ホスホロアミダイトを固相合成法で使用して反応性中間体ホスファイト化合物を得、次いでこれを既知の方法を用いて酸化して、ホスホジエステル又はホスホロチオエートヌクレオチド間リンケージを有するのが典型的であるホスホナート修飾オリゴヌクレオチドを生成する。本開示のオリゴヌクレオチド合成は、当技術分野で知られている方法を用いて５’から３’、又は３’から５’のどちらの方向にも実施され得る。
ある特定の実施形態では、提供される核酸を合成する方法は、（ａ）ヌクレオシド又はその類縁体を共有結合リンケージを介して固体担体に結合させること；（ｂ）ヌクレオシドホスホロアミダイト又はその類縁体をステップ（ａ）のヌクレオシド又はその類縁体の反応性ヒドロキシル基にカップリングさせてそれらの間にヌクレオチド間結合を形成させるが、その際、固体担体上のカップリングされない任意のヌクレオシド又はその類縁体はキャッピング試薬でキャッピングされていること；（ｃ）上記ヌクレオチド間結合を酸化剤で酸化すること；及び（ｄ）後続するヌクレオシドホスホロアミダイト又はその類縁体を使用してステップ（ｂ）～（ｃ）を反復的に繰り返して核酸又はその類縁体を形成すること、を含み、少なくとも、ステップ（ａ）のヌクレオシドもしくはその類縁体、ステップ（ｂ）のヌクレオシドホスホロアミダイトもしくはその類縁体、又はステップ（ｄ）の後続するヌクレオシドホスホロアミダイトもしくはその類縁体の少なくとも１つは、本明細書に記載の脂質結合体部分を含んでいる。典型的には、カップリング、キャッピング／酸化ステップ、及び任意選択的に脱保護ステップは、オリゴヌクレオチドが所望の長さ及び／又は配列に達するまで繰り返され、その後、固体担体からそれが切り離される。ある特定の実施形態では、テトラループ上に脂質結合体単位を含む核酸又はその類縁体を１～３個含むオリゴヌクレオチドが調製される。
特定の保護基、脱離基又は変換条件が描かれている以下のスキームＡにおいて、当業者であれば、他の保護基、脱離基及び変換条件も好適であり、企図されることを理解するであろう。付加的な保護基方策を必要とするスキームＡ中の部類において予想されるある特定の反応性官能基（例えば、－Ｎ（Ｈ）－、－ＯＨなど）も企図され、当業者によって理解される。そのような基及び変換は、本明細書で参照により各々の全体を本明細書に援用する、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｂ．Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊ．Ｍａｒｃｈ，５th Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２００１、ＣＯＭＰＲＥＨＥＮＳＩＶＥ ＯＲＧＡＮＩＣ ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＳ，（Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，２nd Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）、及びＰＲＯＴＥＣＴＩＮＧ ＧＲＯＵＰＳ ＩＮ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３rd ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）の中で詳しく記載されている。
ある特定の実施形態では、本開示の核酸及びその類縁体は、総じて、以下に示されるスキームＡ、スキームＡ１及びスキームＢに従って調製される：
Figure 2023537499000116
Figure 2023537499000117
上記スキームＡ及びスキームＡ１に描かれているように、式Ｉ－１の核酸又はその類縁体は１つ以上のリガンド／親油性化合物と結合体化されて、もう１つのリガンド／脂質結合体を含む式Ｉ又はＩａの化合物を形成する。典型的には、結合体化は、当技術分野で知られている技術によって、式Ｉ－１又はＩ－１ａの核酸又はその類縁体と１つ以上のアダマンチル及び／又は親油性化合物（例えば脂肪酸）との間でのエステル化又はアミド化反応によって連続又は並行して実施される。式Ｉ又はＩａの核酸又はその類縁体はその後、脱保護されて式Ｉ－２又はＩ－２ａの化合物を形成し得、好適なヒドロキシル保護基（例えば、ＤＭＴｒ）で保護されて式Ｉ－３又はＩ－３ａの化合物を形成し得る。一態様では、式Ｉ－３又はＩ－３ａの核酸－リガンド結合体は、（例えばコハク酸連結基を介して）共有結合で固体担体に結合されて、１つ以上のアダマンチル及び／又は脂質結合体を含む式Ｉ－４又はＩ－４ａの固体担体核酸－リガンド結合体又はその類縁体を形成し得る。別の態様では、式Ｉ－３又はＩ－３ａの核酸－リガンド結合体は、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬（例えば、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト）と反応して、Ｐ（ＩＩＩ）基を含む式Ｉ－５又はＩ－５ａの核酸又はその類縁体を形成し得る。式Ｉ－５又はＩ－５ａの核酸－リガンド結合体又はその類縁体は、その後、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いて実施されるオリゴマー化形成条件に供され得る。例えば、式Ｉ－５又はＩ－５ａの化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸－リガンド結合体又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び／又は固体担体からの切り離しを含んで、式ＩＩ－１又はＩＩ－１ａの化合物で表される脂質結合体ヌクレオチド単位を１つ以上含む様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドをもたらし得る。Ｂ、Ｅ、Ｌ、リガンド、ＬＣ、ｎ、ＰＧ1、ＰＧ2、ＰＧ4、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＺの各々は、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである。
Figure 2023537499000118
上記スキームＢに描かれているように、式Ｉ－１の核酸又はその類縁体は脱保護されて式Ｉ－６の化合物を形成し得、好適なヒドロキシル保護基（例えばＤＭＴｒ）で保護されて式Ｉ－７の化合物を形成し得、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬（例えば、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト）と反応して、Ｐ（ＩＩＩ）基を含む式Ｉ－８の核酸又はその類縁体を形成し得る。次に、式Ｉ－８の核酸又はその類縁体は、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いて実施されるオリゴマー化形成条件に供される。例えば、式Ｉ－８の化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び／又は固体担体からの切り離しを含んで、式ＩＩ－２の化合物で表される様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドをもたらし得る。式ＩＩ－２のオリゴヌクレオチドは、その後、１つ以上のリガンド、例えばアダマンチル又は親油性化合物（例えば脂肪酸）と結合体化されて、１つ以上のリガンド結合体を含む式ＩＩ－１の化合物を形成し得る。典型的には、結合体化は、当技術分野で知られている技術によって、式ＩＩ－２の核酸又はその類縁体と１つ以上のアダマンチル又は脂肪酸との間でのエステル化又はアミド化反応によって連続又は並行して実施される。Ｂ、Ｅ、Ｌ、リガンド、ＬＣ、ｎ、ＰＧ1、ＰＧ2、ＰＧ4、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＺの各々は、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである。
ある特定の実施形態では、本開示の核酸及びその類縁体は、以下に示されるスキームＣ及びスキームＤに従って調製される：
Figure 2023537499000119
上記スキームＣに描かれているように、式Ｃ１の核酸又はその類縁体は保護されて式Ｃ２の化合物を形成する。式Ｃ２の核酸又はその類縁体はその後、（例えば、ＤＭＳＯ及び酢酸を使用してプメラー転位によって）アルキル化されて式Ｃ３のモノチオアセタール化合物を形成する。次に、式Ｃ３の核酸又はその類縁体は、適切な条件（例えば、温和な酸化的条件）の下でＣ４とカップリングされて式Ｃ５の核酸又はその類縁体を形成する。式Ｃ５の核酸又はその類縁体は、その後、脱保護されて式Ｃ６の化合物を形成し得、適切なアミド形成条件（例えば、ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ）の下で式Ｃ７のリガンド（アダマンチル又は親油性化合物（例えば脂肪酸））とカップリングされて、本開示の脂質結合体を含む式Ｉ－ｂの核酸－リガンド結合体又はその類縁体を形成し得る。式Ｉ－ｂの核酸－リガンド結合体又はその類縁体は、その後、脱保護されて式Ｃ８の化合物を形成し得、好適なヒドロキシル保護基（例えば、ＤＭＴｒ）で保護されて式Ｃ９の化合物を形成し得る。一態様では、式Ｃ９の核酸又はその類縁体は、（例えばコハク酸連結基を介して）共有結合で固体担体に結合されて、本開示のリガンド結合体（アダマンチル又は脂質部分）を含む式Ｃ１０の固体担体核酸－リガンド結合体又はその類縁体を形成し得る。別の態様では、式Ｃ９の核酸－リガンド結合体又はその類縁体は、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬（例えば、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト）と反応して、Ｐ（ＩＩＩ）基を含む式Ｃ１１の核酸－リガンド結合体又はその類縁体を形成し得る。式Ｃ１１の核酸－リガンド結合体又はその類縁体は、その後、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いて実施されるオリゴマー化形成条件に供され得る。例えば、式Ｃ１１の化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸－リガンド結合体又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び／又は固体担体からの切り離しを含んで、式ＩＩ－ｂ－３の化合物で表されるアダマンチル及び／又は脂質結合体ヌクレオチド単位を１つ以上含む様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドをもたらし得る。Ｂ、Ｅ、Ｌ2、ＰＧ1、ＰＧ2、ＰＧ3、ＰＧ4、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｖ、Ｗ及びＺの各々は、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである。
Figure 2023537499000120
Ｂ、Ｅ、Ｌ2、ＰＧ1、ＰＧ2、ＰＧ3、ＰＧ4、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｖ、Ｗ及びＺの各々は、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである。上記スキームＤに描かれているように、式Ｃ５の核酸又はその類縁体は、選択的に脱保護されて式Ｄ１の化合物を形成し得、好適なヒドロキシル保護基（例えばＤＭＴｒ）で保護されて式Ｄ２の化合物を形成し得、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬（例えば、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト）と反応して式Ｄ３の核酸又はその類縁体を形成し得る。次に、式Ｄ３の核酸又はその類縁体は、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いて実施されるオリゴマー化形成条件に供される。例えば、式Ｄ３の化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び／又は固体担体からの切り離しを含んで、式Ｄ４の化合物で表される様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドをもたらし得る。式Ｄ４のオリゴヌクレオチドは、その後、脱保護されて式Ｄ５の化合物を形成し得、適切なアミド形成条件（例えば、ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ）の下で疎水性リガンド（例えばアダマンチル又は親油性部分）とカップリングされて式Ｃ７の化合物（例えばアダマンチル又は脂肪酸）を形成し得、本開示のリガンド（例えばアダマンチル又は脂肪酸）結合体を含む式ＩＩ－ｂ－３のオリゴヌクレオチドを形成し得る。
当業者であれば、本開示の核酸又はその類縁体の中に存在している様々な官能基、例えば、脂肪族基、アルコール、カルボン酸、エステル、アミド、アルデヒド、ハロゲン及びニトリルが、還元、酸化、エステル化、加水分解、部分的酸化、部分的還元、ハロゲン化、脱水、部分的脱水、及び水和を含むがこれらに限定されない当技術分野でよく知られている技術によって相互変換され得ることを理解するであろう。例えば、参照により各々の全体を本明細書に援用する“ＭＡＲＣＨ’Ｓ ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＯＲＧＡＮＩＣ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ”，（５th Ｅｄ．，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：２００１）を参照されたい。そのような相互変換は、上記に言及されている技術の１つ以上を必要とし得、本開示の提供される核酸を合成するためのある特定の方法は以下に実施例の中で記載されている。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドを調製する方法であって、上記脂質結合体単位が、式ＩＩ－ａ－１：
Figure 2023537499000121
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、
（ａ）式Ｉ－５ａの核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000122
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）上記式Ｉ－５ａの化合物をオリゴマー化して式ＩＩ－１ａの化合物を形成するステップ
を含み、Ｂ、Ｅ、Ｌ、ＬＣ、ｎ、ＰＧ4、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｅ及びＺの各々が、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである、当該方法を提供する。
上記ステップ（ｂ）において、オリゴマー化することは、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いてオリゴマー化形成条件を実施することを意味する。例えば、式Ｉ－５ａの化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び固体担体からの切り離しを含んで、本開示の脂質結合体を含む式ＩＩ－１ａの化合物で表される様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドをもたらし得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドを調製する方法であって、式Ｉ－５ａの核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000123
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｉａの核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000124
 、又はその塩を提供するステップ、
（ｂ）上記式Ｉａの核酸又はその類縁体を脱保護して、式Ｉ－２ａの化合物：
Figure 2023537499000125
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｃ）上記式Ｉ－２の核酸又はその類縁体を保護して、式Ｉ－３ａの化合物：
Figure 2023537499000126
 、又はその塩を形成するステップ、及び
（ｄ）上記式Ｉ－３ａの核酸又はその類縁体をＰ（ＩＩＩ）形成試薬で処理して式Ｉ－５ａの核酸又はその類縁体を形成するステップ
を含み、Ｂ、Ｅ、Ｌ、ＬＣ、ｎ、ＰＧ4、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｅ及びＺの各々が、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである、当該方法を提供する。
上記ステップ（ｂ）において、式Ｉａの化合物のＰＧ1及びＰＧ2は、酸性条件下で、又はフッ化物アニオンによって除去され得るシリルエーテル又は環状シリレン誘導体を含む。ケイ素系保護基の除去のためのフッ化物アニオンを提供する試薬の例としては、フッ化水素酸、ピリジンフッ化水素酸塩、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩、テトラ－Ｎ－ブチルアンモニウムフルオリドなどが挙げられる。
上記ステップ（ｃ）において、式Ｉ－２ａの化合物は、好適なヒドロキシル保護基で保護される。ある特定の実施形態では、式Ｉ－２ａの化合物の５’ヒドロキシル基の保護のために使用される保護基ＰＧ4は、酸不安定保護基、例えば、トリチル、４－メトキシトリチル、４，４’－ジメトキシトリチル、４，４’，４’’－トリメトキシトリチル、９－フェニル－キサンテン－９－イル、９－（ｐ－トリル）－キサンテン－９－イル、ピキシル、２，７－ジメチルピキシルなどを含む。ある特定の実施形態では、酸不安定保護基は、例えばジクロロ酢酸又はトリクロロ酢酸を使用して酸感受性核酸又はその類縁体の液相及び固相合成のどちらの間に脱保護されるのにも適している。
上記ステップ（ｄ）において、式Ｉ－３ａの化合物は、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬で処理されて式Ｉ－５ａの化合物を得る。本開示の文脈において、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、リン（ＩＩＩ）化合物を得るために反応させるリン試薬である。いくつかの実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト、又はホスホロジクロリド酸２－シアノエチルである。ある特定の実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイトである。当業者であれば、式Ｉ－３ａの化合物のＸ1によるＰ（ＩＩＩ）形成試薬中の脱離基の置換えが、好適な塩基の存在下あるいは非存在下で成し遂げられることを認識するであろう。そのような好適な塩基は、当技術分野でよく知られており、有機及び無機塩基を含む。ある特定の実施形態では、塩基は第三級アミン、例えばトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンである。他の実施形態では、上記ステップ（ｄ）は、Ｐ（Ｖ）形成試薬としてのＮ，Ｎ－ジメチルホスホロアミド酸ジクロリドを使用して実施される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドを調製する方法であって、式Ｉａの核酸－脂質結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000127
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｉ－１の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000128
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）１つ以上の親油性化合物を式Ｉ－１の核酸又はその類縁体に結合体化して、１つ以上の脂質結合体を含む式Ｉａの核酸又はその類縁体を形成するステップ
を含み、Ｂ、Ｅ、Ｌ、ＬＣ、ｎ、ＰＧ1、ＰＧ2、Ｒ１、Ｒ2、Ｘ、Ｘ1及びＺの各々が、上記に定義され、本明細書に記載されているとおりである、当該方法を提供する。
上記ステップ（ｂ）において、式Ｉ－１ａの核酸又はその類縁体は、１つ以上の親油性化合物と結合体化されて、本開示のもう１つの脂質結合体を含む式Ｉａの化合物を形成する。典型的には、結合体化は、当技術分野で知られている技術によって、式Ｉ－１ａの核酸又はその類縁体と１つ以上の脂肪酸との間でのエステル化又はアミド化反応によって連続又は並行して実施される。ある特定の実施形態では、結合体化は、もう１つの脂質結合体を含む式Ｉの化合物を得るのに適したアミド形成条件の下で実施される。好適なアミド形成条件は、当技術分野で知られているアミドカップリング試薬、例えば、限定されないが、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣ、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＢＯＰ、ＢＯＰ－Ｃｌ、ＤＥＰＢＴ、Ｔ３Ｐ、ＴＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＮＴＵ、ＴＯＴＵ、ＴＰＴＵ、ＴＳＴＵ又はＴＤＢＴＵの使用を含み得る。あるいは、親油性化合物の結合体化は、本明細書中の表Ａに記載されるクロスカップリング技術のいずれか１つによって成し遂げられ得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の脂質結合体を含むオリゴヌクレオチドを調製する方法であって、上記脂質結合体単位が、式ＩＩ－１：
Figure 2023537499000129
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、
（ａ）式ＩＩ－２のオリゴヌクレオチド：
Figure 2023537499000130
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）１つ以上の親油性化合物を式ＩＩ－２のオリゴヌクレオチドに結合体化して、１つ以上の脂質結合体を含む式ＩＩ－１のオリゴヌクレオチドを形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、式ＩＩ－２のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の親油性化合物と結合体化されて、本開示のもう１つの脂質結合体を含む式ＩＩ－１のオリゴヌクレオチドを形成する。典型的には、結合体化は、当技術分野で知られている技術によって、式ＩＩ－２のオリゴヌクレオチドと１つ以上の脂肪酸との間でのエステル化又はアミド化反応によって連続又は並行して実施される。ある特定の実施形態では、結合体化は、もう１つの脂質結合体を含む式ＩＩ－１のオリゴヌクレオチドを得るのに適したアミド形成条件の下で実施される。好適なアミド形成条件は、当技術分野で知られているアミドカップリング試薬、例えば、限定されないが、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣ、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＢＯＰ、ＢＯＰ－Ｃｌ、ＤＥＰＢＴ、Ｔ３Ｐ、ＴＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＮＴＵ、ＴＯＴＵ、ＴＰＴＵ、ＴＳＴＵ又はＴＤＢＴＵの使用を含み得る。あるいは、親油性化合物の結合体化は、本明細書中の表Ａに記載されるクロスカップリング技術のいずれか１つによって成し遂げられ得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、式ＩＩ－２で表される単位：
Figure 2023537499000131
 、又はその薬学的に許容される塩を含むオリゴヌクレオチドを調製する方法であって、
（ａ）式Ｉ－８の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000132
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）上記式Ｉ－８の化合物をオリゴマー化して式ＩＩ－２の化合物を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。
上記ステップ（ｂ）において、オリゴマー化することは、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いてオリゴマー化形成条件を実施することを意味する。例えば、式Ｉ－８の化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び固体担体からの切り離しを含んで、式ＩＩ－２の化合物で表される様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドを提供し得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の脂質結合体を含む核酸又はその類縁体を調製する方法であって、式Ｉ－８の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000133
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｉ－１の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000134
 、又はその塩を提供するステップ、
（ｂ）上記式Ｉ－１の核酸又はその類縁体を脱保護して、式Ｉ－６の化合物：
Figure 2023537499000135
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｃ）上記式Ｉ－６の核酸又はその類縁体を保護して、式Ｉ－７の化合物：
Figure 2023537499000136
 、又はその塩を形成するステップ、及び
（ｄ）上記式Ｉ－７の核酸又はその類縁体をＰ（ＩＩＩ）形成試薬で処理して式Ｉ－８の核酸又はその類縁体を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、式Ｉ－１の化合物のＰＧ1及びＰＧ2は、酸性条件下で、又はフッ化物アニオンによって除去され得るシリルエーテル又は環状シリレン誘導体を含む。ケイ素系保護基の除去のためのフッ化物アニオンを提供する試薬の例としては、フッ化水素酸、ピリジンフッ化水素酸塩、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩、テトラ－Ｎ－ブチルアンモニウムフルオリドなどが挙げられる。
上記ステップ（ｃ）において、式Ｉ－６の化合物は、好適なヒドロキシル保護基で保護される。ある特定の実施形態では、式Ｉ－６の化合物の５’ヒドロキシル基の保護のために使用される保護基ＰＧ4は、酸不安定保護基、例えば、トリチル、４－メトキシトリチル、４，４’－ジメトキシトリチル、４，４’，４’’－トリメトキシトリチル、９－フェニル－キサンテン－９－イル、９－（ｐ－トリル）－キサンテン－９－イル、ピキシル、２，７－ジメチルピキシルなどを含む。ある特定の実施形態では、酸不安定保護基は、例えばジクロロ酢酸又はトリクロロ酢酸を使用して酸感受性核酸又はその類縁体の液相及び固相合成のどちらの間に脱保護されるのにも適している。
上記ステップ（ｄ）において、式Ｉ－７の化合物は、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬で処理されて式Ｉ－８の化合物を得る。本開示の文脈において、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、リン（ＩＩＩ）化合物を得るために反応させるリン試薬である。いくつかの実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト、又はホスホロジクロリド酸２－シアノエチルである。ある特定の実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイトである。当業者であれば、式Ｉ－７の化合物のＸ1によるＰ（ＩＩＩ）形成試薬中の脱離基の置換えが、好適な塩基の存在下あるいは非存在下で成し遂げられることを認識するであろう。そのような好適な塩基は、当技術分野でよく知られており、有機及び無機塩基を含む。ある特定の実施形態では、塩基は第三級アミン、例えばトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンである。他の実施形態では、上記ステップ（ｄ）は、Ｐ（Ｖ）形成試薬としてのＮ，Ｎ－ジメチルホスホロアミド酸ジクロリドを使用して実施される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のアダマンチル及び／又は脂質部分を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を調製する方法であって、上記結合体単位が、式ＩＩ－ｂ－３：
Figure 2023537499000137
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、
（ａ）式Ｃ１１の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000138
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）上記式Ｃ１１の化合物をオリゴマー化して式ＩＩ－ｂ－３の化合物を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、オリゴマー化することは、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いてオリゴマー化形成条件を実施することを意味する。例えば、式Ｃ１１の化合物は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び固体担体からの切り離しを含んで、本開示のアダマンチル又は脂質部分を含む式ＩＩ－ｂ－３の化合物で各単位が表される１つ以上の核酸－リガンド結合体単位を有する様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の脂質結合体を含む式ＩＩ－ｂ－３のオリゴヌクレオチドを調製する方法は、式Ｃ１１の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000139
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｉ－ｂの核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000140
 、又はその塩を提供するステップ、
（ｂ）上記式Ｉ－ｂの核酸－リガンド結合体又はその類縁体を脱保護して、式Ｃ８の化合物：
Figure 2023537499000141
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｃ）上記式Ｃ８の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体を保護して、式Ｃ９の化合物：
Figure 2023537499000142
 、又はその塩を形成するステップ、及び
（ｄ）上記式Ｃ９の核酸－リガンド結合体又はその類縁体をＰ（ＩＩＩ）形成試薬で処理して式Ｃ１１の核酸又はその類縁体を形成するステップ
を含む。上記ステップ（ｂ）において、式Ｉ－ｂの化合物のＰＧ1及びＰＧ2は、酸性条件下で、又はフッ化物アニオンによって除去され得るシリルエーテル又は環状シリレン誘導体を含む。ケイ素系保護基の除去のためのフッ化物アニオンを提供する試薬の例としては、フッ化水素酸、ピリジンフッ化水素酸塩、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩、テトラ－Ｎ－ブチルアンモニウムフルオリドなどが挙げられる。
上記ステップ（ｃ）において、式Ｃ８の化合物は、好適なヒドロキシル保護基で保護される。ある特定の実施形態では、式Ｃ８の化合物の５’ヒドロキシル基の保護のために使用される保護基ＰＧ4は、酸不安定保護基、例えば、トリチル、４－メトキシトリチル、４，４’－ジメトキシトリチル、４，４’，４’’－トリメトキシトリチル、９－フェニル－キサンテン－９－イル、９－（ｐ－トリル）－キサンテン－９－イル、ピキシル、２，７－ジメチルピキシルなどを含む。ある特定の実施形態では、酸不安定保護基は、例えばジクロロ酢酸又はトリクロロ酢酸を使用して酸感受性核酸又はその類縁体の液相及び固相合成のどちらの間に脱保護されるのにも適している。
上記ステップ（ｄ）において、式Ｃ９の化合物は、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬で処理されて式Ｃ１１の化合物を得る。本開示の文脈において、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、リン（ＩＩＩ）化合物を得るために反応させるリン試薬である。いくつかの実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト、又はホスホロジクロリド酸２－シアノエチルである。ある特定の実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイトである。当業者であれば、式Ｃ９の化合物のＸ1によるＰ（ＩＩＩ）形成試薬中の脱離基の置換えが、好適な塩基の存在下あるいは非存在下で成し遂げられることを認識するであろう。そのような好適な塩基は、当技術分野でよく知られており、有機及び無機塩基を含む。ある特定の実施形態では、塩基は第三級アミン、例えばトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンである。他の実施形態では、上記ステップ（ｄ）は、Ｐ（Ｖ）形成試薬としてのＮ，Ｎ－ジメチルホスホロアミド酸ジクロリドを使用して実施される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のアダマンチル又は脂質部分を含む１つ以上の核酸－リガンド結合体単位を含む式ＩＩ－ｂ－３のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を調製する方法であって、式Ｉ－ｂの核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000143
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｃ６の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000144
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）親油性化合物を式Ｃ６の核酸又はその類縁体に結合体化して、１つ以上のアダマンチル及び／又は脂質結合体を含む式Ｉ－ｂの核酸－リガンド結合体又はその類縁体を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、結合体化は、アダマンチル及び／又は脂質結合体を含む式Ｉ－ｂの化合物を得るのに適したアミド形成条件の下で実施される。好適なアミド形成条件は、当技術分野で知られているアミドカップリング試薬、例えば、限定されないが、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣ、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＢＯＰ、ＢＯＰ－Ｃｌ、ＤＥＰＢＴ、Ｔ３Ｐ、ＴＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＮＴＵ、ＴＯＴＵ、ＴＰＴＵ、ＴＳＴＵ又はＴＤＢＴＵの使用を含み得る。ある特定の実施形態では、アミド形成条件は、ＨＡＴＵ、及びＤＩＰＥＡ又はＴＥＡを含む。
ある特定の実施形態では、式Ｃ６の核酸－リガンド結合体又はその類縁体は塩形態（例えばフマル酸塩）で提供され、（例えば炭酸水素ナトリウムを使用して）まず遊離塩基に変換されてから結合体化ステップが実施される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の核酸－リガンド結合体単位を含む式ＩＩ－ｂ－３のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を調製する方法であって、式Ｃ６の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000145
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｃ１の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000146
 、又はその塩を提供するステップ、
（ｂ）上記式Ｃ１の核酸もしくはその類縁体を保護して、式Ｃ２の化合物：
Figure 2023537499000147
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｃ）上記式Ｃ２の核酸又はその類縁体をアルキル化して、式Ｃ３の化合物：
Figure 2023537499000148
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｄ）上記式Ｃ３の核酸又はその類縁体を式Ｃ４の化合物：
Figure 2023537499000149
 、又はその塩で置換して、式Ｃ５の化合物：
Figure 2023537499000150
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｅ）上記式Ｃ５の核酸又はその類縁体を脱保護して、式Ｃ６の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、式Ｃ２のＰＧ1及びＰＧ2は、それらの間に介在する原子と一緒になって環状ジオール保護基、例えば環状アセタール又はケタールを形成する。そのような基としては、メチレン、エチリデン、ベンジリデン、イソプロピリデン、シクロヘキシリデン、及びシクロペンチリデン、シリレン誘導体、例えば、ジ－ｔ－ブチルシリレン、及び１，１，３，３－テトライソプロピリジシロキサニリデン、環状カーボネート、環状ボロネート、及び環状アデノシンモノホスフェート（すなわち、ｃＡＭＰ）をベースとする環状モノホスフェート誘導体が挙げられる。ある特定の実施形態では、環状ジオール保護基は、塩基性条件下での式Ｃ１のジオールと１，３－ジクロロ－１，１，３，３－テトライソプロピリジシロキサンとの反応によって調製される１，１，３，３－テトライソプロピリジシロキサニリデンである。
上記ステップ（ｃ）において、式Ｃ２の核酸又はその類縁体は、酸性条件下でＤＭＳＯと無水酢酸との混合物によってアルキル化される。ある特定の実施形態では、－Ｖ－Ｈがヒドロキシル基である場合、酢酸の存在下でＤＭＳＯと無水酢酸との混合物はｉｎ ｓｉｔｕでプメラー転位によって酢酸（メチルチオ）メチルを形成し、次いでこれが式Ｃ２の核酸又はその類縁体のヒドロキシル基と反応して式Ｃ３のモノチオアセタール官能化断片核酸又はその類縁体をもたらす。
上記ステップ（ｄ）において、式Ｃ４の核酸又はその類縁体を使用する式Ｃ３の核酸又はその類縁体のチオメチル基の置換によって、式Ｃ４の核酸又はその類縁体が得られる。ある特定の実施形態では、置換は、温和な酸化的及び／又は酸性条件の下で起こる。いくつかの実施形態では、Ｖは酸素である。いくつかの実施形態では、温和な酸化試薬は、ヨウ素元素と過酸化水素との混合物、尿素過酸化水素複合体、硝酸銀／硫酸銀、臭素酸ナトリウム、ペルオキソ二硫酸アンモニウム、ペルオキシ二硫酸テトラブチルアンモニウム、Ｏｘｏｎｅ（登録商標）、クロラミンＴ、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（登録商標）、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（登録商標）ＩＩ、次亜塩素酸ナトリウム、又はヨウ素酸カリウム／過ヨウ素酸ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、温和な酸化試薬は、Ｎ－ヨードスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－クロロスクシンイミド、１，３－ジヨード－５，５－ジメチルヒドラントイン、ピリジニウムトリブロミド、一塩化ヨウ素又はその複合体などを含む。温和な酸化的条件の下で典型的に使用される酸としては、硫酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、メタンスルホン酸、及びトリフルオロ酢酸が挙げられる。ある特定の実施形態では、温和な酸化試薬は、Ｎ－ヨードスクシンイミドとトリフルオロメタンスルホン酸との混合物を含む。
上記ステップ（ｅ）において、式Ｃ５の核酸－リガンド結合体又はその類縁体のＰＧ3及び任意選択的に（Ｒ4が好適なアミン保護基である場合に）Ｒ4を除去することによって、式Ｃ６の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体、又はその塩が得られる。いくつかの実施形態では、ＰＧ3及び／又はＲ4は、酸性又は塩基性条件下で除去され得るカルバメート誘導体を含む。ある特定の実施形態では、式Ｃ５の核酸－リガンド結合体又はその類縁体の保護基（例えば、ＰＧ3及びＲ4の両方、又は独立してＰＧ3かＲ4かのどちらか）は、酸加水分解によって除去される。式Ｃ５の核酸－リガンド結合体又はその類縁体の保護基の酸加水分解によってそれの式Ｃ６の塩が形成されることは、理解されよう。例えば、式Ｃ５の核酸－リガンド結合体又はその類縁体の酸不安定保護基が塩酸などの酸による処理によって除去されると、得られるアミン化合物はその塩酸塩として形成されるであろう。当業者であれば、酸に対して不安定であるアミノ保護基を除去するのに多様な酸が有用であり、それゆえに式Ｃ６の核酸又はその類縁体の多様な塩形態が企図されることを認識するであろう。
他の実施形態では、式Ｃ５の核酸又はその類縁体の保護基（例えば、ＰＧ3及びＲ4の両方、又は独立してＰＧ3かＲ4かのどちらか）は、塩基加水分解によって除去される。例えば、Ｆｍｏｃ及びトリフルオロアセチル保護基は、塩基による処理によって除去され得る。当業者であれば、塩基に対して不安定であるアミノ保護基を除去するのに多様な塩基が有用であることを認識するであろう。いくつかの実施形態では、塩基はピペリジンである。いくつかの実施形態では、塩基は、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）である。ある特定の実施形態では、式Ｃ５の核酸－リガンド結合体又はその類縁体は、塩基性条件下で脱保護され、その後、酸で処理されて式Ｃ６の塩を形成する。ある特定の実施形態では、酸はフマル酸であり、式Ｃ６の塩はフマル酸塩である。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の核酸－リガンド結合体を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を調製する方法であって、上記核酸－リガンド結合体単位が、式ＩＩ－ｂ－３：
Figure 2023537499000151
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、
（ａ）式Ｄ５のオリゴヌクレオチド：
Figure 2023537499000152
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）１つ以上のアダマンチル又は親油性化合物を式Ｄ５のオリゴヌクレオチドに結合体化して、１つ以上の核酸－リガンド結合体単位を含む式ＩＩ－ｂ－３のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、結合体化は、アダマンチル又は脂質結合体を含む式Ｄ５の化合物を得るのに適したアミド形成条件の下で実施される。好適なアミド形成条件は、当技術分野で知られているアミドカップリング試薬、例えば、限定されないが、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣ、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、ＰｙＡＯＰ、ＰｙＢｒＯＰ、ＢＯＰ、ＢＯＰ－Ｃｌ、ＤＥＰＢＴ、Ｔ３Ｐ、ＴＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＮＴＵ、ＴＯＴＵ、ＴＰＴＵ、ＴＳＴＵ又はＴＤＢＴＵの使用を含み得る。ある特定の実施形態では、アミド形成条件は、ＨＡＴＵ、及びＤＩＰＥＡ又はＴＥＡを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、式Ｄ５で表される単位：
Figure 2023537499000153
 、又はその塩を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を調製する方法であって、
（ａ）式Ｄ４の核酸－リガンド結合体もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000154
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）上記式Ｄ４の化合物を脱保護して式Ｄ５の化合物を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、式Ｄ４のオリゴヌクレオチドのＰＧ3及び任意選択的に（Ｒ4が好適なアミン保護基である場合に）Ｒ4を除去することによって、式Ｄ５のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体又はその塩が得られる。いくつかの実施形態では、ＰＧ3及び／又はＲ4は、酸性又は塩基性条件下で除去され得るカルバメート誘導体を含む。ある特定の実施形態では、式Ｄ４のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体の保護基（例えば、ＰＧ3及びＲ4の両方、又は独立してＰＧ3かＲ4かのどちらか）は、酸加水分解によって除去される。式Ｄ４のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体の保護基の酸加水分解によってそれの式Ｄ５の塩が形成されることは、理解されよう。例えば、式Ｄ４のオリゴヌクレオチドの酸不安定保護基が塩酸などの酸による処理によって除去されると、得られるアミン化合物はその塩酸塩として形成されるであろう。当業者であれば、酸に対して不安定であるアミノ保護基を除去するのに多様な酸が有用であり、それゆえに式Ｄ５の核酸－リガンド結合体単位又はその類縁体の多様な塩形態が企図されることを認識するであろう。
他の実施形態では、式Ｄ４のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体の保護基（例えば、ＰＧ3及びＲ4の両方、又は独立してＰＧ3かＲ4かのどちらか）は、塩基加水分解によって除去される。例えば、Ｆｍｏｃ及びトリフルオロアセチル保護基は、塩基による処理によって除去され得る。当業者であれば、塩基に対して不安定であるアミノ保護基を除去するのに多様な塩基が有用であることを認識するであろう。いくつかの実施形態では、塩基はピペリジンである。いくつかの実施形態では、塩基は、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）である。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のアダマンチル及び／又は脂質部分を有する１つ以上の核酸－リガンド結合体単位を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体を調製する方法であって、上記結合体単位が、式Ｄ４：
Figure 2023537499000155
 で表されるか、又はその薬学的に許容される塩であり、
（ａ）式Ｄ３の核酸又はその類縁体：
Figure 2023537499000156
 、又はその塩を提供するステップ、及び
（ｂ）上記式Ｄ３の化合物をオリゴマー化して式Ｄ４の化合物を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。
上記ステップ（ｂ）において、オリゴマー化することは、当技術分野でオリゴヌクレオチドを調製するために既知であり一般的に適用されるプロセスを用いてオリゴマー化形成条件を実施することを指す。例えば、式Ｄ３の核酸又はその類縁体は、５’ヒドロキシル基を保有する固体担持核酸又はその類縁体にカップリングされる。さらなるステップは、１回以上の脱保護、カップリング、ホスファイト酸化及び固体担体からの切り離しを含んで、本開示のアダマンチル又は脂質結合体を含む式Ｄ４の化合物で表される様々なヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドをもたらし得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の脂質結合体を含む核酸又はその類縁体を調製する方法であって、式Ｄ３の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000157
 、又はその塩を調製することをさらに含み、
（ａ）式Ｃ５の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000158
 、又はその塩を提供するステップ、
（ｂ）上記式Ｃ５の核酸又はその類縁体を脱保護して、式Ｄ１の化合物：
Figure 2023537499000159
 、又はその塩を形成するステップ、
（ｃ）上記式Ｄ１の核酸又はその類縁体を保護して、式Ｄ２の核酸もしくはその類縁体：
Figure 2023537499000160
 、又はその塩を形成するステップ、及び
（ｄ）上記式Ｄ２の核酸又はその類縁体をＰ（ＩＩＩ）形成試薬で処理して式Ｄ３の核酸又はその類縁体を形成するステップ
を含む、当該方法を提供する。上記ステップ（ｂ）において、式Ｃ５の核酸又はその類縁体のＰＧ1及びＰＧ2は、酸性条件下で、又はフッ化物アニオンによって除去され得るシリルエーテル又は環状シリレン誘導体を含む。ケイ素系保護基の除去のためのフッ化物アニオンを提供する試薬の例としては、フッ化水素酸、ピリジンフッ化水素酸塩、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩、テトラ－Ｎ－ブチルアンモニウムフルオリドなどが挙げられる。
上記ステップ（ｃ）において、式Ｄ１の核酸又はその類縁体は、好適なヒドロキシル保護基で保護される。ある特定の実施形態では、式Ｄ１の化合物の５’ヒドロキシル基の保護のために使用される保護基ＰＧ4は、酸不安定保護基、例えば、トリチル、４－メトキシトリチル、４，４’－ジメトキシトリチル、４，４’，４’’－トリメトキシトリチル、９－フェニル－キサンテン－９－イル、９－（ｐ－トリル）－キサンテン－９－イル、ピキシル、２，７－ジメチルピキシルなどを含む。ある特定の実施形態では、酸不安定保護基は、例えばジクロロ酢酸又はトリクロロ酢酸を使用して酸感受性核酸又はその類縁体の液相及び固相合成のどちらの間に脱保護されるのにも適している。
上記ステップ（ｄ）において、式Ｄ２の核酸又はその類縁体は、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬で処理されて式Ｄ３の化合物を得る。本開示の文脈において、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、リン（ＩＩＩ）化合物を得るために反応させるリン試薬である。いくつかの実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト、又はホスホロジクロリド酸２－シアノエチルである。ある特定の実施形態では、Ｐ（ＩＩＩ）形成試薬は、２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイトである。当業者であれば、式Ｄ２の化合物のＸ1によるＰ（ＩＩＩ）形成試薬中の脱離基の置換えが、好適な塩基の存在下あるいは非存在下で成し遂げられることを認識するであろう。そのような好適な塩基は、当技術分野でよく知られており、有機及び無機塩基を含む。ある特定の実施形態では、塩基は第三級アミン、例えばトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンである。他の実施形態では、上記ステップ（ｄ）は、Ｐ（Ｖ）形成試薬としてのＮ，Ｎ－ジメチルホスホロアミド酸ジクロリドを使用して実施される。
６．用途、製剤及び投与
薬学的に許容される組成物
別の実施形態によれば、本開示は、核酸－リガンド結合体又はその類縁体を含む組成物を提供する。別の実施形態では、本開示は、リガンドとしてのアダマンチル又は脂質基を有する１つ以上の核酸－リガンド結合体単位を含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、及び薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクルを提供する。本開示の組成物の中のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体の量は、生体試料又は患者における標的遺伝子の発現を測定できるほどに調節するのに有効である。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、そのような組成物を必要とする患者への投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、患者への非経口又は経口投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクル、及び核酸阻害剤分子を含み、核酸阻害剤分子は、本明細書に記載の脂質結合体を含むヌクレオチドを少なくとも１つ含む。
「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
「薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクル」という用語は、一緒に製剤化されている提供される核酸の薬理活性を失わせない無毒の単体、アジュバント又はビヒクルを指す。本開示の組成物に使用され得る薬学的に許容される担体、アジュバント又はビヒクルとしては、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、プロタミンスルフェート、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。
「薬学的に許容される誘導体」は、レシピエントに投与された際に直接的あるいは間接的に、提供される本開示の核酸又はその阻害活性代謝産物もしくは残基をもたらすことができる、提供される本開示の核酸の任意の無毒の塩、エステル、エステルの塩などの誘導体を意味する。
本明細書で使用される場合、「その阻害活性代謝産物又は残基」という用語は、その代謝産物又は残基もまた、生体試料又は患者における標的遺伝子の発現を調節するのに有用であることを意味する。
本開示の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸に、鼻腔内に、頬側に、膣内に、又は埋植リザーバを介して投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、粘膜内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、クモ膜下腔内、肝臓内、病巣内及び頭蓋内への注射又は輸注技術を含む。好ましくは、組成物は、非経口投与を例えば皮下、筋肉内、静脈内又は硬膜外注射によって行うための液体形態に製剤化される。非経口投与に適する剤形は、典型的には、非経口投与に適するビヒクルを１つ以上含み、これには、例えば、無菌水溶液、生理食塩水、低分子量アルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物性油、ゼラチン、脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルなどが挙げられる。非経口製剤は、糖、アルコール、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図したレシピエントの血液と等張にする溶質、又は懸濁化もしくは増粘剤を含有し得る。適度な流動性は、例えば界面活性剤の使用によって維持され得る。液体製剤は、無菌注射用液で再構成することによって後に使用するために、凍結乾燥及び保存され得る。
無菌注射可能形態の本開示の組成物は、水性又は油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、当技術分野で知られている技術に従って、好適な分散又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して製剤化され得る。無菌注射用調合剤は、無毒の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒で作った無菌注射用溶液又は懸濁液、例えば、１．３－ブタンジオールで作った溶液であってもよい。採用され得る許容可能なビヒクル及び溶媒としては、とりわけ、水、リンガー液及び等張塩化ナトリウム溶液が挙げられる。加えて、無菌の固定油は、溶媒又は懸濁化媒体として従来から採用されている。
この目的のために、合成のモノグリセリド又はジグリセリドを含めた任意の非刺激性固定油が採用され得る。脂肪酸、例えばオレイン酸、及びそのグリセリド誘導体は、オリーブ油又はヒマシ油、特にそれらのポリオキシエチル化型などの天然の薬学的に許容される油同様、注射剤を調製するのに有用である。これらの油性溶液又は懸濁液は、乳剤及び懸濁剤を含めた薬学的に許容される剤形の製剤化において一般的に使用される長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えばカルボキシメチルセルロース又は類似する分散剤も含有し得る。薬学的に許容される固体、液体などの剤形の製造において一般的に使用されている他の一般的に使用される界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ、及び他の乳化剤又は生物学的利用能増強剤も、製剤化の目的のために使用され得る。
本開示の薬学的に許容される組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤又は液剤を含むがこれらに限定されない任意の経口的に許容される剤形で経口投与され得る。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムも、典型的に添加される。カプセル形態での経口投与の場合、有用な希釈剤としてはラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁液が必要とされる場合、有効成分は乳化及び懸濁化剤と組み合わされる。所望により、ある特定の甘味、着香又は着色剤も添加され得る。経口投与のために製剤化された本開示の組成物は、食品を伴うか又は伴わずに投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の薬学的に許容される組成物は、食品を伴わずに投与される。他の実施形態では、本開示の薬学的に許容される組成物は、食品を伴って投与される。
あるいは、本開示の薬学的に許容される組成物は、直腸投与のための坐剤の形態で投与され得る。これらは、薬剤を、室温では固体であるが直腸内温度では液体であり、それゆえに直腸内で融解して薬物を遊離させることになる好適な無刺激性賦形剤と混合することによって、調製され得る。そのような材料としては、ココアバター、蜜蝋及びポリエチレングリコールが挙げられる。
本開示の薬学的に許容される組成物は、特に治療の標的が、眼、皮膚又は下部消化管の疾患を含めた局所塗布によって容易に到達できる領域又は器官を含んでいる場合、局所にも投与され得る。これらの領域又は器官の各々に適した局所製剤は容易に調製される。
下部消化管への局所塗布は、直腸坐薬製剤（上記参照）又は好適な注腸製剤で成し遂げられ得る。局所経皮パッチが使用されることもある。
局所塗布のためには、提供される薬学的に許容される組成物は、１つ以上の担体の中に懸濁又は溶解した活性成分を含有する好適な膏剤に製剤化され得る。本開示の核酸又はその類縁体の局所投与のための担体としては、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化性蝋、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、提供される薬学的に許容される組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体の中に懸濁又は溶解した活性成分を含有する好適なローション剤又はクリーム剤に製剤化され得る。好適な担体としては、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルズワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が挙げられるが、これらに限定されない。
眼に使用するためには、提供される薬学的に許容される組成物は、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存剤を含んで、あるいは含まずに、等張のｐＨ調整された無菌生理食塩水で作った微粉化懸濁剤として、又は好ましくは等張のｐＨ調整された無菌生理食塩水で作った液剤として、製剤化され得る。あるいは、眼に使用するためには、薬学的に許容される組成物は、ワセリンなどの膏剤に製剤化され得る。
本開示の薬学的に許容される組成物はまた、鼻腔へのエアゾール又は吸入によって投与されてもよい。そのような組成物は、医薬組成物の分野でよく知られている技術に従って調製され、ベンジルアルコールなどの好適な保存剤、生物学的利用能を増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は他の従来の可溶化もしくは分散剤を採用しつつ、生理食塩水で作った液剤として調製され得る。
ある特定の実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体、又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）は、例えば、参照により各々の全体を本明細書に援用する、米国特許第６，８１５，４３２号、同第６，５８６，４１０号、同第６，８５８，２２５号、同第７，８１１，６０２号、同第７，２４４，４４８号及び同第８，１５８，６０１号に開示されているようなリポソーム及び脂質；米国特許第６，８３５，３９３号、同第７，３７４，７７８号、同第７，７３７，１０８号、同第７，７１８，１９３号、同第８，１３７，６９５号、及び米国公開特許出願第２０１１／０１４３４３４号、同第２０１１／０１２９９２１号、同第２０１１／０１２３６３６号、同第２０１１／０１４３４３５号、同第２０１１／０１４２９５１号、同第２０１２／００２１５１４号、同第２０１１／０２８１９３４号、同第２０１１／０２８６９５７号及び同第２００８／０１５２６６１号に開示されているようなポリマー材料；カプシド、カプソイド、又は取込み、分配もしくは吸収を支援するための受容体標的分子を含めた、他の分子、分子構造、又は化合物の混合物を使用して、混合、カプセル封入、結合体化、あるいは会合に供され得る。
ある特定の実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体、又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化される。脂質－核酸ナノ粒子（例えば、脂質－オリゴヌクレオチド－リガンド結合体ナノ粒子）は、典型的には、複合体を形成するために脂質と核酸とを混合するとすぐに自発的に形成される。所望の粒径分布に応じて、得られるナノ粒子混合物は、任意選択的に、例えばＬＩＰＥＸ（登録商標）押出機（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ）などのサーモバレル押出機を使用して、ポリカーボネート膜（例えば１００ｎｍのカットオフ）から押出され得る。治療的使用のための脂質ナノ粒子を調製するためには、ナノ粒子を形成させるため及び／又は緩衝液を交換するために使用された溶媒（例えばエタノール）を除去することが望ましいが、これは、例えば、透析又はタンジェンシャルフロー濾過によって成し遂げられ得る。核酸阻害剤分子を含有する脂質ナノ粒子を作る方法は、例えば、参照により各々の全体を本明細書に援用する、米国公開特許出願第２０１５／０３７４８４２号及び同第２０１４／０１０７１７８号に開示されているように、当技術分野で知られている。
ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性リポソーム及びペグ化脂質を含む脂質コアを含む。ＬＮＰは、１つ以上のエンベロープ脂質、例えば、カチオン性脂質、構造もしくは中性脂質、ステロール、ペグ化脂質、又はそれらの混合物をさらに含み得る。
ある特定の実施形態では、提供される核酸は、関心対象の組織への核酸の送達を担うリガンドに共有結合で結合体化されている。多くのそのようなリガンドが探索されてきた。例えば、Ｗｉｎｋｌｅｒ，ＴＨＥＲ．ＤＥＬＩＶ．，２０１３，４（７）：７９１－８０９を参照されたい。例えば、提供される核酸は、肝臓内への核酸の取込みを担う複数の糖リガンド部分（例えば、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ））に結合体化され得る。例えば、ＷＯ２０１６／１００４０１を参照されたい。使用され得る他のリガンドとしては、マンノース－６－ホスフェート、コレステロール、フォレート、トランスフェリン及びガラクトースが挙げられるが、これらに限定されない（他の具体的なリガンドの例については、例えばＷＯ２０１２／０８９３５２を参照されたい）。典型的には、提供される核酸がリガンドに結合体化されている場合、核酸は裸の核酸として投与され、オリゴヌクレオチドも、ＬＮＰなどの保護的コーティングに製剤化されていない。ある特定の実施形態では、裸の核酸の中の各ヌクレオチドは、糖部分の２’位において、典型的には２’－Ｆ又は２’－ＯＭｅで修飾されている。
これらの医薬組成物は、従来の滅菌技術によって無菌化される場合もあるし、又は無菌濾過される場合もある。得られる水性液剤は、そのまま使用するために包装される場合もあるし、又は凍結乾燥される場合もあり、凍結乾燥された調合剤は、無菌水性賦形剤と合わされた後に投与される。調合剤のｐＨは、典型的には３～１１、より好ましくは５～９又は６～８、最も好ましくは７～８、例えば７～７．５であろう。固体形態の医薬組成物は、固定量の上記薬剤又は複数の薬剤を各々が含有している複数の単回用量単位として、例えば錠剤又はカプセル剤の密閉包装として包装され得る。固体形態の医薬組成物はまた、量に柔軟性をもたせて、容器、例えば局所塗布できるクリーム剤又は膏剤のために設計された絞り出し型チューブで包装されてもよい。
単回剤形としての組成物を生産するために担体材料と合わせられ得る本開示の核酸－リガンド結合体、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体又はその類縁体の量は、治療される宿主、特定の投与様式に応じて様々であろう。好ましくは、提供される組成物は、これらの組成物を受けようとする患者に核酸又はその類縁体の０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投薬量が投与され得るように製剤化されなければならない。
任意の特定患者のための特定の投薬量及び治療計画が、採用される特定の核酸又はその類縁体の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与の時間、排泄の速度、薬物併用、並びに治療している医師の判断、及び治療される特定の疾患の重症度を含めた様々な因子によって決まるであろうことは、理解されるべきである。組成物中の本開示の核酸又はその類縁体の量も、組成物中の特定の核酸又はその類縁体によって決まるであろう。
核酸及びその類縁体並びに薬学的に許容される組成物の使用
本明細書に記載の核酸－リガンド結合体、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体及びその類縁体、並びに組成物は総じて、細胞内ＲＮＡレベルの調節のために有用である。提供される核酸－リガンド結合体、もしくはオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその類縁体は、細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法において使用され得る。典型的には、そのような方法は、提供される核酸阻害剤分子（例えば、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体）を、標的遺伝子の発現を調節するのに十分な量で、細胞に導入することを含む。ある特定の実施形態では、方法はｉｎ ｖｉｖｏで行われる。方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏで行われることもある。ある特定の実施形態では、細胞は哺乳動物細胞であり、これには、限定はされないが、ヒト細胞が含まれる。
ある特定の実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体、もしくはオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその類縁体（例えば核酸阻害剤分子）は、治療をそれを必要とする患者に対して行う方法において使用され得る。典型的には、そのような方法は、本明細書に記載されるような、提供される核酸阻害剤分子を含む治療的有効量の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む。
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」及び「治療すること」という用語は、本明細書に記載されるような、疾患もしくは障害、又はその１つ以上の症候を逆行させる、緩和する、その発症を遅らせる、又はその進行を抑制することを指す。いくつかの実施形態では、治療は、１つ以上の症候が進展した後に施与され得る。他の実施形態では、治療は、症候の非存在下で施与され得る。例えば、治療は、症候が発症する前の（例えば、症候歴に鑑みて、及び／又は遺伝学的因子もしくは他の罹病性因子に鑑みて）罹患しやすい個体に施与され得る。治療は、症候が消散した後も、例えばその再発を予防する又は遅らせるために、継続されることがある。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、ウイルス感染に関係する症候の治療又は予防を、それを必要とする患者において行うのに有用であり得る。一実施形態は、ウイルス感染症を治療する方法であって、治療的有効量の本明細書に記載されるような、提供される脂質結合体を含む核酸又はその類縁体（例えば核酸阻害剤分子）を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む、当該方法に関する。そのようなウイルス感染症の非限定的な例としては、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＨＤＶ、ＨＥＶ又はＨＩＶ感染症が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、がんに関係する症候の治療又は予防を、それを必要とする患者において行うために有用であり得る。一実施形態は、がんを治療する方法であって、治療的有効量の本明細書に記載されるような、提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、当該方法に関する。そのようながんの非限定的な例としては、胆道癌、膀胱癌、移行上皮癌腫、尿路上皮癌腫、脳腫瘍、神経膠腫、星細胞腫、乳房癌腫、転移性癌腫、子宮頸癌、子宮頚部扁平上皮癌腫、直腸癌、大腸癌腫、結腸癌、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、大腸腺癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮内膜癌腫、子宮内膜間質肉腫、食道癌、食道扁平上皮癌腫、食道腺癌、眼内メラノーマ、ぶどう膜メラノーマ、胆嚢癌腫、胆嚢腺癌、腎細胞癌腫、淡明細胞型腎細胞癌腫、移行上皮癌腫、尿路上皮癌腫、ウィルムス腫瘍、白血病、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性（ＣＭＭＬ）、肝臓癌、肝臓癌腫、肝細胞腫、肝細胞癌、胆管癌腫、肝芽腫、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌腫（ＮＰＣ）、神経芽腫、中咽頭癌、口腔扁平上皮癌腫、骨肉腫、卵巣癌腫、膵臓癌、膵管腺癌、偽乳頭状新生物、腺房細胞癌腫、前立腺癌、前立腺腺癌、皮膚癌、メラノーマ、悪性黒色腫、皮膚メラノーマ、小腸癌腫、胃癌、胃癌腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮癌又は子宮肉腫が挙げられる。典型的には、本開示は、治療的有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与することによって肝臓癌、肝臓癌腫、肝細胞腫、肝細胞癌、胆管癌腫及び肝芽腫を治療する方法を特徴とする。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、増殖性、炎症性、自己免疫性、神経学的、眼、呼吸器、代謝性、皮膚学的、耳、肝臓、腎臓又は感染性疾患に関係する症候の治療又は予防に有用であり得る。一実施形態は、増殖性、炎症性、自己免疫性、神経学的、眼、呼吸器、代謝性、皮膚学的、耳、肝臓、腎臓又は感染性疾患を治療する方法であって、治療的有効量の本明細書に記載される提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、当該方法に関する。典型的には、疾患又は病状は、肝臓の疾患である。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象における標的遺伝子の発現を低減する方法であって、それを必要とする対象に医薬組成物を、標的遺伝子の発現を低減するのに十分な量で投与することを含み、医薬組成物が、本明細書に記載される提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）、及び同じく本明細書に記載される薬学的に許容される賦形剤を含む、当該方法を提供する。
いくつかの実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）は、本明細書に記載のＲＮＡｉ阻害剤分子であり、これにはｄｓＲＮＡｉ阻害剤分子又はｓｓＲＮＡｉ阻害剤分子が含まれる。
標的遺伝子は、任意の哺乳動物からの標的遺伝子、例えばヒト標的遺伝子であり得る。任意の遺伝子が本発明の方法に従ってサイレンシングされ得る。例示的な標的遺伝子としては、第ＶＩＩ因子、Ｅｇ５、ＰＣＳＫ９、ＴＰＸ２、ａｐｏＢ、ＳＡＡ、ＴＴＲ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＲＳＶ、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ－Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ－２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ－１遺伝子、ベータ－カテニン遺伝子、ｃ－ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サバイビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼＩＩアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、カベオリンＩ遺伝子、ＭＩＢ Ｉ遺伝子、ＭＴＡＩ遺伝子、Ｍ６８遺伝子、腫瘍抑制遺伝子の変異体、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子、ＬＤＨＡ、及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）は、標的遺伝子をサイレンシングし、それゆえ、標的遺伝子の不要な発現を特徴とする障害を有するか又はそのリスクを有する対象を治療するために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）は、ベータ－カテニン遺伝子をサイレンシング、それゆえ、不要なベータ－カテニン発現を特徴とする障害、例えば腺癌又は肝細胞癌腫を有するか又はそのリスクを有する対象を治療するために使用され得る。
典型的には、提供される本開示の核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体（例えば核酸阻害剤分子）は、静脈内又は皮下投与される。しかしながら、本明細書に開示される医薬組成物は、当技術分野で知られている任意の方法によって、例えば、経口的に、頬側に、舌下に、直腸内に、膣内に、尿道内に、局所に、眼内に、鼻腔内に及び／又は耳内にも投与され得、この投与には、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、水性懸濁液剤、ゲル剤、スプレー剤、坐剤、軟膏、膏剤などが含まれ得る。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、全身投与によって（例えば静脈内又は皮下投与によって）対象又は生物の該当組織又は細胞、例えば肝臓へ送達される。他の実施形態では、医薬組成物は、局所投与又は全身投与によって送達される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、該当組織又は細胞、例えば肺細胞及び組織への局所投与によって、例えば経肺送達によって送達される。
本明細書に開示される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体の治療的有効量は、投与経路及び患者の身体特徴、例えば対象のサイズ及び体重、疾患の進行又は浸透の程度、対象の年齢、健康状態及び性別によって決まり得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される提供される核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体は、１日にレシピエントの体重１キログラムあたり２０マイクログラム～１０ミリグラム、１日にレシピエントの体重１キログラムあたり１００マイクログラム～５ミリグラム、又は１日にレシピエントの体重１キログラムあたり０．５～２．０ミリグラムの投薬量で投与される。
本開示の医薬組成物は、毎日、又は断続的に投与され得る。例えば、本開示の核酸－リガンド結合体又はオリゴヌクレオチド－リガンド結合体の断続的投与は、１週間に１～６日、１ヶ月に１～６日、週１回、１週間おきに１回、月１回、１ヶ月おきに１回、又は１年に１回もしくは２回であり得るか、又は複数回の年１回、月１回、週１回もしくは１日１回用量に分割され得る。いくつかの実施形態では、断続的投薬は、周期的な投与（例えば、１日間、１週間又は２～８連続週間にわたって１日１回の投与とし、その後、残りの期間は最長１週間、最長１ヶ月、最長２ヶ月、最長３ヶ月、又は最長６ヶ月もしくはそれ以上にわたって無投与とすること）を意味する場合もあるし、又はそれは、隔日、隔週、隔月もしくは隔年の投与を意味する場合もある。
本開示の治療の方法のいずれかにおいて、核酸－リガンド結合体、もしくはオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその類縁体は、単剤療法として単独で、又は当技術分野で知られている付加的な療法と組み合わせて対象に投与され得る。
略語
Ａｃ：アセチル
ＡｃＯＨ：酢酸
ＡＣＮ：アセトニトリル
Ａｄ：アダマンチル
ＡＩＢＮ：２，２’－アゾビスイソブチロニトリル
Ａｎｈｙｄ：無水
Ａｑ：水溶液
Ｂ2Ｐｉｎ2：ビス（ピナコラト）ジボロン－４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）
ＢＩＮＡＰ：２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル
ＢＨ3：ボラン
Ｂｎ：ベンジル
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ2Ｏ：二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル
ＢＰＯ：ベンゾイルペルオキシド
nＢｕＯＨ：ｎ－ブタノール
ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾール
ＣＯＤ：シクロオクタジエン
ｄ：日
ＤＡＢＣＯ：１，４－ジアゾビシクロ［２．２．２］オクタン
ＤＡＳＴ：三フッ化ジエチルアミノ硫黄
ｄｂａ：ジベンジリデンアセトン
ＤＢＵ：１，８－ジアゾビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン
ＤＣＥ：１，２－ジクロロエタン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＥＡ：ジエチルアミン
ＤＨＰ：ジヒドロピラン
ＤＩＢＡＬ－Ｈ：水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＰＡ：ジイソプロピルアミン
ＤＩＰＥＡ又はＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド
ＤＭＥ：１，２－ジメトキシエタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＰ：デス－マーチンペルヨージナン
ＤＭＳＯ－ジメチルスルホキシド
ＤＭＴｒ：４，４’－ジメトキシトリチル
ＤＰＰＡ：ジフェニルホスホリルアジド
ｄｐｐｆ：１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
ＥＤＣ又はＥＤＣＩ：１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩
ｅｅ：鏡像体過剰率
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化
ＥＡ：酢酸エチル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＦＡ：ギ酸
ｈ又はｈｒｓ：時間
ＨＡＴＵ：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ：塩酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＨＯＡｃ：酢酸
ＩＢＸ：２－ヨードキシ安息香酸
ＩＰＡ：イソプロピルアルコール
ＫＨＭＤＳ：カリウムヘキサメチルジシラジド
Ｋ2ＣＯ3：炭酸カリウム
ＬＡＨ：水素化アルミニウムリチウム
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド
Ｌ－ＤＢＴＡ：ジベンゾイル－Ｌ－酒石酸
ｍ－ＣＰＢＡ：メタ－クロロ過安息香酸
Ｍ：モーラー
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＭｅＯＨ：メタノール
Ｍｅ2Ｓ：ジメチルスルフィド
ＭｅＯＮａ：ナトリウムメチラート
ＭｅＩ：ヨードメタン
ｍｉｎ：分
ｍＬ：ミリリットル
ｍＭ：ミリモーラー
ｍｍｏｌ：ミリモル
ＭＰａ：メガパスカル
ＭＯＭＣｌ：メチルクロロメチルエーテル
ＭｓＣｌ：メタンスルホニルクロリド
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ｎＢｕＬｉ：ｎ－ブチルリチウム
ＮａＮＯ2：亜硝酸ナトリウム
ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム
Ｎａ2ＳＯ4：硫酸ナトリウム
ＮＢＳ：Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＮＣＳ：Ｎ－クロロスクシンイミド
ＮＦＳＩ：Ｎ－フルオロベンゼンスルホンイミド
ＮＭＯ：Ｎ－メチルモルホリン Ｎ－オキシド
ＮＭＰ：Ｎ－メチルピロリジン
ＮＭＲ：核磁気共鳴
℃：摂氏度
Ｐｄ／Ｃ：パラジウムカーボン
Ｐｄ（ＯＡｃ）2：酢酸パラジウム
ＰＢＳ：ホスフェート緩衝生理食塩水
ＰＥ：石油エーテル
ＰＯＣｌ3：オキシ塩化リン
ＰＰｈ3：トリフェニルホスフィン
ＰｙＢＯＰ：（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｒｅｌ：相対
Ｒ．Ｔ．又はｒｔ：室温
ｓ又はｓｅｃ：秒
ｓａｔ：飽和
ＳＥＭＣｌ：クロロメチル－２－トリメチルシリルエチルエーテル
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＳＯＣｌ2：二塩化硫黄
ｔＢｕＯＫ：ｔｅｒｔ－ブトキシカリウム
ＴＢＡＢ：テトラブチルアンモニウムブロミド
ＴＢＡＦ：テトラブチルアンモニウムフルオリド
ＴＢＡＩ： テトラブチルアンモニウムヨージド
ＴＥＡ：トリエチルアミン
Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホナート
ＴｆＡＡ、ＴＦＭＳＡ又はＴｆ2Ｏ：トリフルオロメタンスルホン酸無水物
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＩＢＳＣｌ：２，４，６－トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド
ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシリル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＨＰ：テトラヒドロピラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＥＤＡ：テトラメチルエチレンジアミン
ｐＴＳＡ：パラトルエンスルホン酸
ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー
ｗｔ：重量
Ｘａｎｔｐｈｏｓ：４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン
一般的合成方法
以下の実施例は、本開示を例示することを意図したものであり、それに対する限定であると解釈されるべきでない。温度は摂氏で示す。特に言及されていない場合、すべての蒸発は減圧下、好ましくは約１５ｍｍＨｇ～１００ｍｍＨｇ（＝２０～１３３ｍｂａｒ）で実施される。最終生成物、中間体及び出発物質の構造は標準的な分析方法、例えば、微量分析及び分光学的特性評価、例えば、ＭＳ、ＩＲ、ＮＭＲによって確認される。使用されている略語は当技術分野で慣用的なものである。
本開示の核酸又はその類縁体を合成するために利用されているすべての出発物質、構築ブロック、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒及び触媒は、商業的に入手可能であるか、当業者に知られている有機合成方法（ＭＥＴＨＯＤＳ ＯＦ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，Ｔｈｉｅｍｅ，Ｖｏｌｕｍｅ ２１（Ｈｏｕｂｅｎ－Ｗｅｙｌ ４ｔｈ Ｅｄ．１９５２））によって生産され得るかのどちらかである。さらには、本開示の核酸又はその類縁体は、以下の実施例に示されるような、当業者に知られている有機合成方法によって生産され得る。
特に示されていない限り、すべての反応は窒素又はアルゴン下で行われる。
プロトンＮＭＲ（1Ｈ ＮＭＲ）は重水素化溶媒中で行われる。本明細書に開示されるある特定の核酸又はその類縁体では１つ以上の1Ｈシフトが残存非重水素化溶媒シグナルと重複するが、以下に提供される実験項ではこれらのシグナルについて報告していない。
以下の実施例において描かれているように、ある特定の例示的な実施形態では、核酸又はその類縁体を以下の一般手順に従って調製した。一般的方法には本開示のある特定の核酸又はその類縁体の合成が描かれているとはいえ、以下の一般的方法、及び当業者に知られている他の方法が、本明細書に記載されるすべての核酸又はその類縁体、並びにこれらの核酸又はその類縁体の各々のサブクラス及び種に適用され得ることは、理解されよう。
実施例１．２－（２－（（（（６ａＲ，８Ｒ，９Ｒ，９ａＲ）－８－（６－ベンズアミド－９Ｈ－プリン－９－イル）－２，２，４，４－テトライソプロピルテトラヒドロ－６Ｈ－フロ［３，２－ｆ］［１，３，５，２，４］トリオキサジシロシン－９－イル）オキシ）メトキシ）エトキシ）エタン－１－アンモニウムホルメート（１－６）の合成
Figure 2023537499000161
 ２０ｍＬのＤＭＦの中に化合物１－１（２５．００ｇ、６７．３８ｍｍｏｌ）を含む溶液を、１０℃でピリジン（１１ｍＬ、１３４．６７ｍｍｏｌ）及びテトライソプロピルジシロキサンジクロリド（２２．６３ｍＬ、７０．７５ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を２５℃で３時間撹拌し、２０％のクエン酸（５０ｍＬ）で失活させた。水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を真空下で濃縮した。粗残渣をＭＴＢＥとｎ－ヘプタンとの混合物（１：１５、３２０ｍＬ）から再結晶して化合物１－２（３７．２０ｇ、９０％）を白色の油性固体として得た。
２０ｍＬのＤＭＳＯの中に化合物１－２（３７．００ｇ、６０．３３ｍｍｏｌ）を含む溶液を、ＡｃＯＨ（２０ｍＬ、３１７．２０ｍｍｏｌ）及びＡｃ2Ｏ（１５ｍＬ、１５６．６８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を２５℃で１５時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和Ｋ2ＣＯ3（５０ｍＬ）で失活させた。水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、ＡＣＮ（３０ｍＬ）で再結晶して化合物１－３（１５．６５ｇ、３８．４％）を白色の固体として得た。
１２０ｍＬのＤＣＭの中に化合物１－３（２０．００ｇ、２９．７２ｍｍｏｌ）を含む溶液を、２５℃でＦｍｏｃ－アミノ－エトキシエタノール（１１．６７ｇ、３５．６６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を撹拌して透明な溶液を得、その後、４Åのモレキュラーシーブ（２０．０ｇ）、Ｎ－ヨードスクシンイミド（８．０２ｇ、３５．６６ｍｍｏｌ）及びＴｆＯＨ（５．２５ｍＬ、５９．４４ｍｍｏｌ）で処理した。９５％超の化合物１－３が消費されたことがＨＰＬＣ分析で示されるまで、混合物を３０℃で撹拌した。反応物をＴＥＡ（６ｍＬ）で失活させ、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3（２×１００ｍＬ）、飽和Ｎａ2ＳＯ3（２×１００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、真空下で濃縮して粗製化合物１－４（２６．３４ｇ、９３．９％）を黄色の固体として得、これをさらに精製することなく次のステップにそのまま使用した。
ＤＣＭ／水（１０：７、１７０ｍＬ）の混合物の中に化合物１－４（２６．３４ｇ、２７．６２ｍｍｏｌ）を含む溶液を、５℃でＤＢＵ（７．００ｍＬ、４５．０８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を５～２５℃で１時間撹拌した。その後、有機層を分離し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、ＤＣＭ（１３０ｍＬ）で希釈した。溶液をフマル酸（７．０５ｇ、６０．７６ｍｍｏｌ）及び４Åのモレキュラーシーブ（２６．３４ｇ）で４回に分けて処理した。混合物を１時間撹拌し、濃縮し、ＭＴＢＥとＤＣＭ（５：１）との混合物から再結晶して化合物１－６（１４．７４ｇ、６２．９％）を白色の固体として得た：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）８．７３（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），８．１５－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．６５－７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，２Ｈ），６．５２（ｓ，２Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），５．０８－４．９０（ｍ，３Ｈ），４．８３－４．７８（ｍ，１Ｈ），４．１５－３．９０（ｍ，３Ｈ），３．７９－３．６５（ｍ，２Ｈ），２．９８－２．８５（ｍ，６Ｈ），１．２０－０．９５（ｍ，２８Ｈ）。
実施例２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（６－ベンズアミド－９Ｈ－プリン－９－イル）－２－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（（２－（２－［脂質］－アミドエトキシ）エトキシ）メトキシ）テトラヒドロフラン－３－イル（２－シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（２－４ａ～２－４ｅ）の合成
Figure 2023537499000162
 １５０ｍＬの２－メチルテトラヒドロフランの中に化合物１－６（５０．００ｇ、５９．０１ｍｍｏｌ）を含む溶液を、氷冷されたＫ2ＨＰＯ4水溶液（６％、１００ｍＬ）及びブライン（２０％、２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、０℃でヘキサン酸（１０．３３ｍＬ、８２．６１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３３．６６ｇ、８８．５２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１０．８１ｇ、１４７．５２ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を２５℃に温め、１時間撹拌した。溶液を、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、真空下で濃縮して粗残渣を得た。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（１：１のヘキサン／アセトン）によって化合物２－１ａ（３４．９５ｇ、７１．５％）を白色の固体として得た。
化合物２－１ａ（３４．９５ｇ、４２．１９ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（９．２８ｍＬ、１２６．５８ｍｍｏｌ）とを８０ｍＬのＴＨＦの中に含む混合物を１０℃でトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（２０．６１ｍＬ、１２６．５８ｍｍｏｌ）の滴加によって処理した。混合物を２５℃に温め、２時間撹拌した。反応物を濃縮し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ3（５×２０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空下で濃縮して粗製化合物２－２ａ（２４．７２ｇ、９９％）を得、これをさらに精製することなく次のステップにそのまま使用した。
５０ｍＬのＤＣＭの中に化合物２－２ａ（２４．７２ｇ、４２．１８ｍｍｏｌ）を含む溶液をＮ－メチルモルホリン（１８．５４ｍＬ、１６８．６７ｍｍｏｌ）及びＤＭＴｒ－Ｃｌ（１５．６９ｇ、４６．３８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を２５℃で２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ3（５０ｍＬ）で失活させた。有機層を分離し、水で洗浄し、濃縮してスラリー粗製物を得た。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（１：１のヘキサン／アセトン）によって化合物２－３ａ（３０．０５ｇ、３３．８ｍｍｏｌ、７９．９％）を白色の固体として得た。
５０ｍＬのＤＣＭの中に化合物２－３ａ（２５．００ｇ、２８．１７ｍｍｏｌ）を含む溶液を、窒素雰囲気下でＮ－メチルモルホリン（３．１０ｍＬ、２８．１７ｍｍｏｌ）及びテトラゾール（０．６７ｍＬ、１４．０９ｍｍｏｌ）で処理した。ビス（ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（９．０２ｇ、３３．８０ｍｍｏｌ）を溶液に滴加し、得られた混合物を２５℃で４時間撹拌した。反応物を水（１５ｍＬ）で失活させ、水層をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（５０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して粗製固体を得、これをＤＣＭ／ＭＴＢＥ／ｎ－ヘキサン（１：４：４０）の混合物から再結晶して化合物２－４ａ（２５．５２ｇ、８３．４％）を白色の固体として得た：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１１．２５（ｓ，１Ｈ），８．６５－８．６０（ｍ，２Ｈ），８．０９－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．６７－７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３０－７．２５（ｍ，７Ｈ），６．８５－６．７９（ｍ，４Ｈ），６．２３－６．２０（ｍ，１Ｈ），５．２３－５．１４（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．６９（ｍ，３Ｈ），４．３３－４．２３（ｍ，２Ｈ），３．９０－３．７８（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．２０（ｍ，６Ｈ），３．１４－３．０９（ｍ，２Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ），２．８２－２．８０（ｍ，１Ｈ），２．６５－２．６０（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．３９（ｍ，２Ｈ），１．３１－１．１０（ｍ，１４Ｈ），１．０８－１．０５（ｍ，２Ｈ），０．８５－０．７９（ｍ，３Ｈ）；31Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１４９．４３，１４９．１８。
化合物２－４ｂ、２－４ｃ、２－４ｄ、及び２－４ｅは、化合物２－４ａについて上記に記載されているのと類似する手順を用いて調製された。化合物２－４ｂ（２５．５０ｇ、８５．４％）は白色の固体として得られた：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１１．２３（ｓ，１Ｈ），８．６５－８．６０（ｍ，２Ｈ），８．０５－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．７０（ｍ，１Ｈ），７．６７－７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３０－７．２５（ｍ，７Ｈ），６．８９－６．８０（ｍ，４Ｈ），６．２１－６．１５（ｍ，１Ｈ），５．２３－５．１７（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．６９（ｍ，３Ｈ），４．４０－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８０（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．２０（ｍ，６Ｈ），３．１４－３．０９（ｍ，２Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ），２．８３－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．６８－２．６２（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．９７（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．３８（ｍ，２Ｈ），１．３１－１．１０（ｍ，１８Ｈ），１．０８－１．０５（ｍ，２Ｈ），０．８５－０．７８（ｍ，３Ｈ）；31Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１４９．４３，１４９．１９。
化合物２－４ｃ（３６．６０ｇ、６６．３％）は灰白色の固体として得られた：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１１．２２（ｓ，１Ｈ），８．６４－８．５９（ｍ，２Ｈ），８．０５－８．００（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．７０（ｍ，１Ｈ），７．６７－７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３０－７．２５（ｍ，７Ｈ），６．８９－６．８０（ｍ，４Ｈ），６．２１－６．１５（ｍ，１Ｈ），５．２５－５．１７（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．６９（ｍ，３Ｈ），４．４０－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８０（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．５０（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．２０（ｍ，６Ｈ），３．１４－３．０９（ｍ，２Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ），２．８３－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．６８－２．６２（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．９９（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．３８（ｍ，２Ｈ），１．３３－１．１２（ｍ，３８Ｈ），１．０８－１．０５（ｍ，２Ｈ），０．８６－０．８０（ｍ，３Ｈ）；31Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１４９．４２，１４９．１７。
化合物２－４ｄ（２６．６０ｇ、７２．９％）は灰白色の固体として得られた：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１１．２２（ｓ，１Ｈ），８．６４－８．５９（ｍ，２Ｈ），８．０５－８．００（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．７０（ｍ，１Ｈ），７．６７－７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３３（ｍ，２Ｈ），７．３０－７．２５（ｍ，７Ｈ），６．８９－６．８０（ｍ，４Ｈ），６．２１－６．１５（ｍ，１Ｈ），５．２２－５．１７（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．６９（ｍ，３Ｈ），４．４０－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８０（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．２０（ｍ，６Ｈ），３．１４－３．０９（ｍ，２Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ），２．８３－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．６８－２．６２（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．９９（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．３８（ｍ，２Ｈ），１．３５－１．０８（ｍ，３８Ｈ），１．０８－１．０５（ｍ，２Ｈ），０．８５－０．７９（ｍ，３Ｈ）；31Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１４９．４７，１４９．２２。
化合物２－４ｅ（３８．１０ｇ、５４．０％）は白色の固体として得られた：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１１．２１（ｓ，１Ｈ），８．６４－８．５９（ｍ，２Ｈ），８．０５－８．００（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．７０（ｍ，１Ｈ），７．６７－７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５９－７．５１（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３０－７．２５（ｍ，７Ｈ），６．８９－６．８０（ｍ，４Ｈ），６．２１－６．１５（ｍ，１Ｈ），５．２３－５．１７（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．６９（ｍ，３Ｈ），４．４０－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８０（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．４７－３．２２（ｍ，６Ｈ），３．１４－３．０９（ｍ，２Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ），２．８３－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．６８－２．６２（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．９９（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．３８（ｍ，２Ｈ），１．３５－１．０６（ｍ，４６Ｈ），１．０８－１．０６（ｍ，２Ｈ），０．８５－０．７７（ｍ，３Ｈ）；31Ｐ ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6－ＤＭＳＯ）１４９．４１，１４９．１５。
実施例３．脂質ＧａｌＸＣ結合体の合成
スキーム１．ループ上に１脂質（直鎖状及び分岐状）を有するニック型テトラループＧａｌＸＣ結合体の合成。合成後結合体化はアミドカップリング反応によって実現された。
Figure 2023537499000163
 Ｒ1ＣＯＯＨ基は、脂肪酸Ｃ８：０、Ｃ１０：０、Ｃ１１：０、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０、Ｃ１７：０、Ｃ１８：０、Ｃ１８：１、Ｃ１８：２、Ｃ２２：５、Ｃ２２：０、Ｃ２４：０、Ｃ２６：０、Ｃ２２：６、Ｃ２４：１、ジアシルＣ１６：０、又はジアシルＣ１８：１を表す。
Figure 2023537499000164
合成センス１及びアンチセンス１は固相合成によって調製された。
結合体化センス１ａ～１ｉの合成。
結合体化センス１ａは、合成後結合体化手法によって合成された。エッペンドルフチューブ１において、オクタン酸（０．５８ｍｇ、４ｕｍｏｌ）のＤＭＡ（０．７５ｍＬ）溶液を室温でＨＡＴＵ（１．５２ｍｇ、４ｕｍｏｌ）で処理した。エッペンドルフチューブ２において、オリゴセンス１（１０．００ｍｇ、０．８ｕｍｏｌ）のＨ2Ｏ（０．２５ｍＬ）溶液をＤＩＰＥＡ（１．３９ｕＬ、８ｕｍｏｌ）で処理した。エッペンドルフチューブ１内の溶液をエッペンドルフチューブ２に加え、ＴｈｅｒｍｏＭｉｘｅｒを使用して室温で混合した。ＬＣ－ＭＳ分析によって示される反応完了の後、反応混合物を５ｍＬの水で希釈し、１００ｍＭのＴＥＡＡを含むＡＣＮ及びＨ2Ｏの５～９５％の勾配を用いて逆相ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラムで精製した。生成物画分を、Ｇｅｎｅｖａｃを使用して減圧下で濃縮した。合わせた残存溶媒を、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ（３Ｋ）を使用して水（１×）、生理食塩水（１×）及び水（３×）に対して透析した。Ａｍｉｃｏｎ膜を水（３×２ｍＬ）で洗浄し、その後、合わせた溶媒を凍結乾燥して結合体化センス１ａ（６．４３ｍｇ、６４％の収率）の非晶質の白色の固体を得た。
結合体化センス１ｂ～１ｉは、結合体化センス１ａの合成について記載されているのと類似する手順を用いて調製され、４２％～６９％の収率で得られた。
二重鎖１ａ～１ｊのアニーリング。
結合体化センス１ａ（１０ｍｇ、重量によって計量した）を０．５ｍＬの脱イオン水に溶解して２０ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。アンチセンス１（１０ｍｇ、ＯＤによって計量した）を０．５ｍＬの脱イオン水に溶解して２０ｍｇ／ｍＬの溶液を調製し、これを結合体化センスの滴定及び二重鎖量の定量のために使用した。結合体化センス及びアンチセンスの両方のモル量の計算結果に基づいて、必要とされるアンチセンス１の一部を結合体化センス１ａ溶液に添加した。得られた混合物を９５℃で５分間撹拌し、室温まで放冷した。アニーリング進行をイオン交換ＨＰＬＣによって追跡した。アニーリング進行に基づいてアンチセンス１の一部をさらに数回添加してアニーリングを９５％超の純度で完了させた。溶液を凍結乾燥して二重鎖１ａ（Ｃ８）を得、その量を、アニーリング中に消費されたアンチセンスのモル量を基準として算出した。
二重鎖１ｂ～１ｉは、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順で調製された。
以下のスキーム１－２は、ループ上に１脂質を有するニック型テトラループＧａｌＸＣ結合体の合成を描いたものである。合成後結合体化は、Ｃｕによって触媒されるアルキン－アジド環化付加反応によって実現された。
Figure 2023537499000165
センス１Ｂ及びアンチセンス１Ｂは固相合成によって調製された。
結合体化センス１ｊの合成。
エッペンドルフチューブ１において、ＤＭＡ／Ｈ2Ｏの３：１混合物（０．５ｍＬ）の中にオリゴ（１０．００ｍｇ、０．８ｕｍｏｌ）を含む溶液を、脂質リンカーアジド（１１．２６ｍｇ、４ｕｍｏｌ）で処理した。エッペンドルフチューブ２において、ＣｕＢｒジメチルスルフィド（１．６４ｍｇ、８ｕｍｏｌ）をＡＣＮ（０．５ｍＬ）に溶解させた。両方の溶液を、それらの中にＮ2をバブリングすることによって１０分間脱気した。その後、ＣｕＢｒＳＭｅ2のＡＣＮ溶液をチューブ１に加え、得られた混合物を４０℃で撹拌した。ＬＣ－ＭＳ分析によって示される反応完了の後、反応混合物を０．５ＭのＥＤＴＡ（２ｍＬ）で希釈し、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ（３Ｋ）を使用して水（２×）に対して透析した。反応粗製物を、１００ｍＭのＴＥＡＡを含む（３０％のＩＰＡがスパイクされた）ＡＣＮ及びＨ2Ｏの５～９５％の勾配を用いて逆相ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラムで精製した。生成物画分を、Ｇｅｎｅｖａｃを使用して減圧下で濃縮した。合わせた残存溶媒を、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ（３Ｋ）を使用して水（１×）、生理食塩水（１×）及び水（３×）に対して透析した。Ａｍｉｃｏｎ膜を水（３×２ｍＬ）で洗浄し、合わせた溶媒を凍結乾燥して結合体化センス１ｊ（６．９０ｍｇ、５７％の収率）の非晶質の白色の固体を得た。
二重鎖１ｊ（ＰＥＧ２Ｋ－ジアシルＣ１８）は、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順で調製された。
以下のスキーム１－３は、合成後結合体化手法を用いた、ループ上に２脂質を有するニック型テトラループＧａｌＸＣ結合体の合成を描いたものである。
Figure 2023537499000166
 センス２及びアンチセンス２は固相合成によって調製された。
結合体化センス２ａ及び２ｂを、結合体化センス１ａの合成について記載されているのと類似する手順を用いて、但し、脂質を１０当量とし、ＨＡＴＵを１０当量とし、ＤＩＰＥＡを２０当量として、調製した。
二重鎖２ａ（２ＸＣ１１）及び２ｂ（２ＸＣ２２）は、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順を用いて調製された。
以下のスキーム１－４は、合成後結合体化手法を用いて１脂質と結合体化された完全ホスホロチオエート化ステム－ループのＧａｌＸＣの合成を描いたものである。
Figure 2023537499000167
 センス３及びアンチセンス３は固相合成によって調製された。
結合体化センス３ａは、結合体化センス１ａの合成について記載されているのと類似する手順を用いて調製され、６５％の収率で得られた。
二重鎖３ａ（ＰＳ－Ｃ２２）は、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順を用いて調製された。
以下のスキーム１－５は、合成後結合体化手法を用いて１脂質と結合体化された短鎖センスのＧａｌＸＣの合成を描いたものである。
Figure 2023537499000168
 センス４及びアンチセンス４は固相合成によって調製された。
結合体化センス４ａは、結合体化センス１ａの合成について記載されているのと類似する手順を用いて調製され、７４％の収率で得られた。
二重鎖４ａ（ＳＳ－Ｃ２２）は、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順を用いて調製された。
以下のスキーム１－６は、合成後結合体化手法を用いてループ上でトリアダマンタン部分と結合体化されたニック型テトラループＧａｌＸＣの合成を描いたものである。
Figure 2023537499000169
 センス５及びアンチセンス５は固相合成によって調製された。
結合体化センス５ａ及び５ｂは、結合体化センス１ａの合成について記載されているのと類似する手順を用いて調製され、４２％～７３％の収率で得られた。
二重鎖５ａ（３Ｘアダマンタン）及び二重鎖５ｂ（３Ｘアセチルアダマンタン）は、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順を用いて調製された。
以下のスキーム１－７は、ループ上で脂質（複数可）と結合体化されたニック型テトラループＧａｌＸＣの固相合成の例を描いたものである。
Figure 2023537499000170
結合体化センス６の合成。
結合体化センス６は、市販のオリゴ合成装置を使用して固相合成によって調製された。オリゴヌクレオチドは、２’修飾ヌクレオシドホスホロアミダイト、例えば、２’－Ｆ、又は２’－ＯＭｅ、及び２’－ジエトキシメタノール結合脂肪酸アミドヌクレオシドホスホロアミダイトを使用して合成された。オリゴヌクレオチド合成は、標準的なオリゴヌクレオチド合成プロトコールを用いて固体担体上で３’から５’の方向に行われた。５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＥＴＴ）をカップリング反応の活性化剤として使用した。ヨウ素溶液をホスファイトトリエステル酸化のために使用した。３－（ジメチルアミノメチリデン）アミノ－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－３－チオン（ＤＤＴＴ）をホスホロチオエートリンケージの形成のために使用した。合成されたオリゴヌクレオチドを濃アンモニウム水で１０時間で処理した。アンモニアを懸濁液から除去し、固体担体残渣を濾過によって除去した。粗製オリゴヌクレオチドをＴＥＡＡで処理し、分析し、強力なアニオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＳＡＸ－ＨＰＬＣ）によって精製した。画分を合わせ、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ（３Ｋ）を使用して水（３×）、生理食塩水（１×）及び水（３×）に対して透析した。その後、残存溶媒を凍結乾燥して所望の結合体化センス６を得た。
二重鎖６は、二重鎖１ａ（Ｃ８）のアニーリングについて記載されているのと同じ手順を用いて調製された。
スキーム８．合成後結合体化手法によってループ上で１つのアダマンタン単位と結合体化されたニック型テトラループＧａｌＸＣの合成
Figure 2023537499000171
結合体化センス７ａ及び７ｂの合成
結合体化センス７ａ及びセンス７ｂは、結合体化センス５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
二重鎖７ａ及び７ｂの合成例
二重鎖７ａ及び二重鎖７ｂは、二重鎖５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
スキーム９．合成後結合体化手法によってループ上で２つのアダマンタン単位と結合体化されたニック型テトラループＧａｌＸＣの合成。
Figure 2023537499000172
結合体化センス８ａ及び８ｂの合成
結合体化センス８ａ及びセンス８ｂは、結合体化センス５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
二重鎖８ａ及び８ｂの合成例
二重鎖８ａ及び二重鎖８ｂは、二重鎖５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
以下のスキーム１－１０は、合成後結合体化手法を用いた、短鎖センス、及び１脂質と結合体化された短鎖ステムループのＧａｌＸＣの合成を描いたものである。
Figure 2023537499000173
センス９ａの合成
結合体化センス９ａは、結合体化センス５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
二重鎖９ａの合成例
二重鎖９ａは、二重鎖５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
以下のスキーム１－１１は、合成後結合体化手法を用いた、５’末端において１脂質と結合体化されたＧａｌＸＣの合成を描いたものである。
Figure 2023537499000174
結合体化センス１０ａの合成
結合体化センス１０ａは、結合体化センス５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
二重鎖１０ａの合成例
二重鎖１０ａは、二重鎖５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
以下のスキーム１－１２ａ及び１－１２ｂは、合成後結合体化手法を用いた、３’末端又は５’末端において１脂質と結合体化された平滑末端を有するＧａｌＸＣの合成を描いたものである。
Figure 2023537499000175
Figure 2023537499000176
結合体化センス１１ａ及び１２ａの合成
結合体化センス１１ａ及び１２ａは、結合体化センス５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
二重鎖１１ａ及び１２ａの合成例
二重鎖１１ａ及び１２ａは、二重鎖５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
結合体二重鎖８Ｄ及び二重鎖９Ｄは、二重鎖５の合成と同じ方法又は実質的に類似する方法を用いて得られた。
実施例４．ＤＲＮＡ ＧａｌＸＣ脂質結合体の生体内分布及び遺伝子サイレンシング活性
二重鎖１ａ（Ｃ８）、１ｆ（Ｃ２２：６）及び１ｃ（Ｃ２２）を、実施例３に記載されているとおりに調製し、生体内分布及び遺伝子サイレンシング活性について試験した。二重鎖１ｃ（Ｃ２２）は、肺、副腎、脂肪及び骨格筋における広範な肝外分布及び堅牢なノックダウン活性（５０％～７５％）を示す。二重鎖１ｆ（Ｃ２２：６）も、図１に示されるように、これらの肝外組織において５０％～６０％の遺伝子サイレンシング活性を示す。
実施例５．肝外組織におけるＧａｌＸＣ脂質結合体二重鎖１ｃ（Ｃ２２）の用量－応答
二重鎖１ｃ（Ｃ２２）を、実施例３に記載されているとおりに調製し、肝外組織応答について試験した。
ＣＤ－１雌性マウスに１５ｍｇ／ｋｇのＧａｌＸＣ脂質結合体を静脈内投与した。対照群にはホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与した。処置後１２０時間目に動物を屠殺した。肝臓、並びに肺、副腎、骨格筋、脂肪、心臓、腎臓、十二指腸及びリンパ節を含む肝外組織を採取した。ｍＲＮＡ分析のために、各組織から１～４ｍｍ打ち抜いてドライアイス上の９６ウェルプレートに入れた。標的ｍＲＮＡの減少を、ＣＦＸ３８４ ＴＯＵＣＨ（商標）リアルタイムＰＣＲ検出システム（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用してｑＰＣＲによって測定した。すべての試料をＰＢＳ処理対照動物に対して正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を使用してプロットした。
二重鎖１ｃ（Ｃ２２）は、肺、副腎、骨格筋及び脂肪において、３．７５～３０ｍｇ／ｋｇの投薬で投薬後６日目及び１４日目の両日ともにＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの遺伝子サイレンシングの堅牢な用量依存的活性を示す。図２に示されるように、１５ｍｇ／ｋｇの投薬によって両時間点において骨格筋及び脂肪での約７５％の遺伝子サイレンシングが認められる。
実施例６．肝外組織におけるＧａｌＸＣ脂質結合体二重鎖１ｃ（Ｃ２２）の遺伝子サイレンシング活性の持続期間
二重鎖１ｃ（Ｃ２２）を、実施例３に記載されているとおりに調製した。ｉｎ ｖｉｖｏでの二重鎖１ｃ（Ｃ２２）の遺伝子サイレンシング活性を、実施例５に記載されている方法を用いて測定した。
ＣＤ－１雌性マウスに、示されている用量の二重鎖１ｃ（Ｃ２２）を皮下投与した。対照群にはホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を投与した。処置後６日目又は１４日目に動物を屠殺した。肝臓、並びに肺、副腎、骨格筋及び脂肪を含む肝外組織を採取した。各組織中の標的ｍＲＮＡを、実施例４に記載されているように測定した。１５ｍｇ／ｋｇの二重鎖１ｃ（Ｃ２２）の単回皮下投薬を１回行ってから５週間の間、骨格筋及び心臓において持続的なＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡサイレンシング活性（約５０％のノックダウン）が認められる。脂肪及び副腎においても、図３に示されるように、単回投与を１回行ってから４週間の間、顕著な遺伝子サイレンシング（４０～６０％のノックダウン）がみられる。
実施例７．肝外組織におけるＧａｌＸＣジアシル脂質結合体及び１脂質Ｃ１８結合体の遺伝子サイレンシング活性
二重鎖１ｈ（ジアシルＣ１６）、１ｉ（ジアシルＣ１８：１）、１ｊ（ＰＥＧ２Ｋ－ジアシルＣ１８）及び１ｂ（Ｃ１８）を、実施例３に記載されているとおりに調製した。
二重鎖１ｈ（ジアシルＣ１６）、１ｉ（ジアシルＣ１８：１）、１ｊ（ＰＥＧ２Ｋ－ジアシルＣ１８）のｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子サイレンシング活性を、実施例５に記載されている方法を用いて測定した。二重鎖１ｂ（Ｃ１８）は、単回の１５ｍｇ／ｋｇの皮下注射から７日後に副腎、脂肪、心臓及び骨格筋においてＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡの堅牢な遺伝子サイレンシング活性を示す。二重鎖１ｈ（ジアシルＣ１６）、１ｉ（ジアシルＣ１８：１）、１ｊ（ＰＥＧ２Ｋ－ジアシルＣ１８）は、図４に示されるように、皮下投与によってこれらの組織でより少ない遺伝子サイレンシング活性を示す。
実施例８．ＧａｌＸＣ長鎖脂質結合体及びアダマンタン結合体の遺伝子サイレンシング活性
ＧａｌＸＣ長鎖脂質結合体二重鎖１ｄ（Ｃ２４）、１ｅ（Ｃ２６）、１ｇ（Ｃ２４：１）及びアダマンタン結合体二重鎖５ｂ（３Ｘアセチルアダマンタン）を、実施例３に記載されているとおりに調製した。
二重鎖１ｄ（Ｃ２４）、１ｅ（Ｃ２６）、１ｇ（Ｃ２４：１）及びアダマンタン結合体二重鎖５ｂ（３Ｘアセチルアダマンタン）のｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子サイレンシング活性を、実施例５に記載されている方法を用いて測定した。様々な組織において、異なる脂質長さを有するＧａｌＸＣ脂質結合体は、異なる遺伝子サイレンシング活性を示す。二重鎖１ｄ（Ｃ２４）及び１ｇ（Ｃ２４：１）は、二重鎖１ｃ（Ｃ２２）に比べてわずかに改善された遺伝子サイレンシング活性を示し、骨格筋、脂肪、副腎及び心臓におけるＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡのノックダウンが５０％～７５％である。図５に示されるように、１４日目にはより強い遺伝子サイレンシング活性がこれらの組織で認められる。
実施例９．ＧａｌＸＣ脂質結合体の遺伝子サイレンシング活性に対するＲＮＡ化学修飾の影響
図６は、完全ホスホロチオエートステムループの二重鎖３ａ（ＰＳ－Ｃ２２）、及び短鎖センスの二重鎖４ａ（ＳＳ－Ｃ２２）を含む、ＲＮＡ化学修飾を有するＧａｌＸＣ脂質結合体、並びに二重鎖２ａ（２ＸＣ１１）及び二重鎖２ｂ（２ＸＣ２２）を含む２脂質を有するＧａｌＸＣ脂質結合体、並びにＧａｌＸＣトリアダマンタン結合体二重鎖５ａ（３Ｘアダマンタン）の遺伝子サイレンシング活性を示す。
ＧａｌＸＣ脂質結合体二重鎖２ａ（２ＸＣ１１）、２ｂ（２ＸＣ２２）、３ａ（ＰＳ－Ｃ２２）、４ａ（ＳＳ－Ｃ２２）、及びＧａｌＸＣトリアダマンタン結合体二重鎖５ａ（３Ｘアダマンタン）を、実施例３に記載されているとおりに調製した。
二重鎖２ａ（２ＸＣ１１）、２ｂ（２ＸＣ２２）、３ａ（ＰＳ－Ｃ２２）、４ａ（ＳＳ－Ｃ２２）、及びＧａｌＸＣトリアダマンタン結合体二重鎖５ａ（３Ｘアダマンタン）のｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子サイレンシング活性を、実施例５に記載されている方法を用いて測定した。図６に示されるように、二重鎖３ａ（ＰＳ－Ｃ２２）の皮下投薬の後の７日目及び１４日目に、副腎、脂肪、心臓及び骨格筋において、ＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡが４０％～６０％ノックダウンされる顕著な遺伝子サイレンシングが認められる。二重鎖２ａ（２ＸＣ１１）も、これらの肝外組織において同程度の遺伝子サイレンシング活性を示す。二重鎖４ａ（ＳＳ－Ｃ２２）は、１４日目に肝臓（２０％のノックダウン）よりも骨格筋（４５％のノックダウン）においてＡＬＤＨ２をサイレンシングする選択性を示す。
＊＊＊＊＊＊
本発明者らは本開示のいくつかの実施形態を記載しているが、本明細書に提供される基本例が改変されて、本開示の核酸又はその類縁体及び方法を利用した他の実施形態が提供される場合があることは、明らかである。したがって、例として示された具体的な実施形態によってではなく、明細書及び別記の特許請求の範囲によって本開示の範囲が画定されるべきであることは、理解されよう。

Claims (43)

  1. 式Ｉで表される核酸－リガンド結合体：
    Figure 2023537499000177
     〔式中、
    Ｂは核酸塩基又は水素であり；
    Ｒ1及びＲ2は、
    独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか、又は
    同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３員の飽和もしくは部分不飽和環を形成しており；
    各ＲAは、独立して、
    Ｃ1-6脂肪族、
    フェニル、
    窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに
    窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環
    から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    各Ｒは、
    独立して、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基である、あるいは
    同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成しており；
    ＬAは独立してＰＧ1又はＬ－リガンドであり；
    ＰＧ1は水素又は好適なヒドロキシル保護基であり；
    各リガンドは、独立して、－（ＬＣ）n、及び／又はアダマンチル基であり；
    各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
    各－Ｃｙ－は、独立して、
    フェニレニル、８～１０員二環式アリーレニル、４～７員の飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロカルボシクリレニル、８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、アダマンタンニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリーレニル、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１～５個のヘテロ原子を有する８～１０員二環式ヘテロアリーレニル
    から選択される二価の環であって任意選択的に置換された前記環であり；
    ｎは１～１０であり；
    Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｎ（Ｒ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、－Ｖ1ＣＲ2Ｗ1－、又は
    Figure 2023537499000178
     に置き換わっており；
    ｍは１～５０であり；
    Ｘ1、Ｖ1及びＷ1は、独立して、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
    Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－であり；
    ＰＧ2は、水素、ホスホロアミダイト類縁体又は好適な保護基である〕
    、又はその薬学的に許容される塩。
  2. 式Ｉ－ａ：
    Figure 2023537499000179
     で表される、請求項１に記載の核酸－リガンド結合体。
  3. 前記結合体が、式Ｉ－ｂもしくはＩ－ｃ：
    Figure 2023537499000180
     〔式中、
    Ｌ1は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
    Figure 2023537499000181
     に置き換わっており；
    Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
    で表される、請求項１に記載の核酸－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩。
  4. 核酸－リガンド結合体であって、式Ｉ－ｄもしくはＩ－ｅ：
    Figure 2023537499000182
     〔式中、
    Ｂは核酸塩基又は水素であり；
    ＰＧ1及びＰＧ2は、独立して、水素、ホスホロアミダイト類縁体又は好適な保護基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
    Ｖは、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－ＮＲ－から選択される二価の基であり；
    Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－、
    Figure 2023537499000183
     から選択される二価の基であり；
    Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
    Figure 2023537499000184
     に置き換わっており；
    ｍは１～５０であり；
    Ｘ1は、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
    Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
    各ＲAは、独立して、
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環
    から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    各Ｒは、独立して、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基である〕
    で表される、前記結合体、又はその薬学的に許容される塩。
  5. Ｖが－Ｏ－であり；
    Ｌ2が、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位が、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、
    Figure 2023537499000185
     に置き換わっており；
    Ｒ4が水素であり；
    ｗが、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ、
    Figure 2023537499000186
     であり；
    Ｒ5が、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位が、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、又はＣ（Ｏ）Ｏ－に置き換わっている、
    請求項４に記載の核酸－リガンド結合体。
  6. 式Ｉ－ＩｂもしくはＩ－Ｉｃで表される核酸－リガンド結合体：
    Figure 2023537499000187
     〔式中、
    Ｂは核酸塩基又は水素であり；
    ｍは１～５０であり；
    ＰＧ1及びＰＧ2は、独立して、水素、ホスホロアミダイト類縁体又は好適な保護基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
    、又はその薬学的に許容される塩。
  7. Ｒ5が、
    Figure 2023537499000188
     から選択される、請求項６に記載の核酸－リガンド結合体。
  8. 請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸－リガンド結合体単位を１つ以上含む、オリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  9. 前記結合体が、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の前記核酸－リガンド結合体単位を含む、請求項９に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  10. 式ＩＩ：
    Figure 2023537499000189
     〔式中、
    Ｂは核酸塩基又は水素であり；
    Ｒ1及びＲ2は、
    独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか；又は
    同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和もしくは部分不飽和環を形成しており；
    各ＲAは、独立して、
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環
    から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    各Ｒは、
    独立して、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基である；あるいは
    同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成しており；
    リガンドは、独立して、－（ＬＣ）n、又はアダマンチル基であり；
    各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
    各－Ｃｙ－は、独立して、
    フェニレニル、８～１０員二環式アリーレニル、４～７員の飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロカルボシクリレニル、８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリーレニル、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１～５個のヘテロ原子を有する８～１０員二環式ヘテロアリーレニル
    から選択される二価の環であって任意選択的に置換された前記環であり；
    ｎは１～１０であり；
    Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、－Ｖ1ＣＲ2Ｗ1－、又は
    Figure 2023537499000190
     に置き換わっており；
    ｍは１～５０であり；
    Ｘ1、Ｖ1及びＷ1は、独立して、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
    Ｙは、水素、好適なヒドロキシル保護基、
    Figure 2023537499000191
     であり；
    Ｒ3は、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、
    好適なプロドラッグであるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    Ｘ2は、Ｏ、Ｓ又はＮＲであり；
    Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＢＨ2－、又は共有結合であり；
    Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
    Ｙ2は、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、
    ホスホロアミダイト類縁体であるか、
    ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は
    固体担体に結合している連結基であり；
    Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－である〕
    で表される核酸－リガンド結合体を１つ以上含むオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩。
  11. 前記結合体が、式ＩＩ－ａ：
    Figure 2023537499000192
     で表される、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  12. 前記結合体が、式ＩＩ－ｂもしくはＩＩ－ｃ：
    Figure 2023537499000193
     〔式中、
    Ｌ1は、共有結合、一価又は二価の飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
    Figure 2023537499000194
     に置き換わっており；
    Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲに置き換わっている〕
    で表される、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩。
  13. 前記結合体が、式ＩＩ－ｄもしくはＩＩ－ｅ：
    Figure 2023537499000195
     〔式中、
    Ｖは、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－ＮＲ－から選択される二価の基であり；
    Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、－ＳＣ（Ｏ）ＮＲ－、
    Figure 2023537499000196
     から選択される二価の基であり；
    Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
    Figure 2023537499000197
     に置き換わっており；
    Ｒ4は、水素、ＲA又は好適なアミン保護基であり；
    Ｒ5は、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
    で表される、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩。
  14. 式ＩＩ－ＩｄもしくはＩＩ－Ｉｅで表されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体：
    Figure 2023537499000198
     〔式中、
    ｍは１～５０であり；
    ＢはＨ又は核酸塩基であり；
    Ｘ1は、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、又はＮＲ－であり；
    各Ｒは、独立して、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、
    Figure 2023537499000199
     から選択される二価の基であり；
    Ｌ2は、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、又は
    Figure 2023537499000200
     に置き換わっており；
    Ｙは、水素、
    Figure 2023537499000201
     であり；
    Ｒ3は、
    水素であるか、又は
    好適な保護基であるか、
    好適なプロドラッグであるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    Ｘ2はＯ又はＳであり；
    Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、又は共有結合であり；
    Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
    Ｙ2は、
    水素であるか、
    ホスホロアミダイト類縁体であるか、
    ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は
    固体担体に結合している連結基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっている〕
    、又はその薬学的に許容される塩。
  15. Ｒ5が、
    Figure 2023537499000202
     から選択される、請求項１４に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  16. 式ＩＩ－ＩｂもしくはＩＩ－Ｉｃで表されるオリゴヌクレオチド－リガンド結合体：
    Figure 2023537499000203
     〔式中、
    Ｂは核酸塩基又は水素であり；
    ｍは１～５０であり；
    Ｘ1は、－Ｏ－、又はＳ－であり；
    Ｙは、水素、
    Figure 2023537499000204
     であり；
    Ｒ3は水素又は好適な保護基であり；
    Ｘ2はＯ又はＳであり；
    Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、又は共有結合であり；
    Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
    Ｙ2は、
    水素であるか、
    ホスホロアミダイト類縁体であるか、
    ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は
    固体担体に結合している連結基であり；
    Ｒ5は、アダマンチル、又は飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、又はＰ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
    Ｒは、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基である〕
    、又はその薬学的に許容される塩。
  17. Ｒ5が、
    Figure 2023537499000205
     から選択される、請求項１６に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  18. 前記結合体が１～１０個の前記核酸－リガンド結合体単位を含む、請求項１０～１７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  19. 前記結合体が、１、２、３、４、５、６、７、８又は９個の前記核酸－リガンド結合体単位を含む、請求項１０～１７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  20. 前記結合体が、１、２又は３個の前記核酸－リガンド結合体単位を含む、請求項１０～１７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  21. 前記オリゴヌクレオチドが、１０～５３ヌクレオチドの長さのセンス鎖、及び１５～５３ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖が、標的遺伝子配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して相補的である配列を有しており、哺乳動物細胞に前記オリゴヌクレオチド－結合体が導入されたときに前記遺伝子の発現を低減する、請求項８～２０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  22. 標的遺伝子の発現を低減するためのオリゴヌクレオチド－リガンド結合体であって、
    前記核酸－結合体単位が、式ＩＩ：
    Figure 2023537499000206
     〔式中、
    Ｂは核酸塩基又は水素であり；
    Ｒ1及びＲ2は、
    独立して、水素、ハロゲン、ＲA、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）2Ｒ、－Ｓｉ（ＯＲ）Ｒ2、もしくは－ＳｉＲ3であるか；又は
    同一炭素上のＲ1とＲ2とが、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和もしくは部分不飽和環を形成しており；
    各ＲAは、独立して、
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和又は部分不飽和複素環、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環
    から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    各Ｒは、
    独立して、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基である；あるいは
    同一原子上の２つのＲ基が、それらの間に介在する原子と一緒になって、窒素、酸素、ケイ素及び硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和、部分不飽和又はヘテロアリール環を形成しており；
    リガンドは、独立して、－（ＬＣ）n、又はアダマンチル基であり；
    各ＬＣは、独立して、飽和又は不飽和の直鎖状又は分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖を含む脂質結合体部分であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－に置き換わっており；
    各－Ｃｙ－は、独立して、
    フェニレニル、８～１０員二環式アリーレニル、４～７員の飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロカルボシクリレニル、８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和カルボシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～１１員の飽和もしくは部分不飽和スピロヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する８～１０員の二環式飽和もしくは部分不飽和ヘテロシクリレニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリーレニル、又は窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１～５個のヘテロ原子を有する８～１０員二環式ヘテロアリーレニル
    から選択される二価の環であって任意選択的に置換された前記環であり；
    ｎは１～１０であり；
    Ｌは、共有結合、又は二価の飽和もしくは不飽和の直鎖状もしくは分岐状Ｃ1-50炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖の０～１０個のメチレン単位は、独立して、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｎ（Ｒ）－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）2－、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ－、－Ｐ（Ｓ）ＯＲ－、－Ｖ1ＣＲ2Ｗ1－、又は
    Figure 2023537499000207
     に置き換わっており；
    ｍは１～５０であり；
    Ｘ1、Ｖ1及びＷ1は、独立して、－Ｃ（Ｒ）2－、－ＯＲ、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓｅ－、又はＮＲ－であり；
    Ｙは、水素、好適なヒドロキシル保護基、
    Figure 2023537499000208
     であり；
    Ｒ3は、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、
    好適なプロドラッグであるか、又は
    Ｃ1-6脂肪族、フェニル、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～２個のヘテロ原子を有する４～７員の飽和もしくは部分不飽和複素環式、並びに窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～６員ヘテロアリール環から選択される基であって任意選択的に置換された前記基であり；
    Ｘ2は、Ｏ、Ｓ又はＮＲであり；
    Ｘ3は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＢＨ2－、又は共有結合であり；
    Ｙ1は、ヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの２’又は３’末端側に結合している連結基であり；
    Ｙ2は、
    水素であるか、
    好適な保護基であるか、
    ホスホロアミダイト類縁体であるか、
    ヌクレオシド、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの５’末端側に結合しているヌクレオチド間連結基であるか、又は
    固体担体に結合している連結基であり；
    Ｚは、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ－、又はＣＲ2－である〕
    で表され、
    前記オリゴヌクレオチドが、１５～５３ヌクレオチドの長さのセンス鎖、及び１９～５３ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖が、標的遺伝子配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して相補的である配列を有しており、
    前記アンチセンス鎖と前記センス鎖とが、二重鎖構造を形成するが、共有結合で連結されていない、
    前記オリゴヌクレオチド－リガンド結合体、又はその薬学的に許容される塩。
  23. 前記核酸－リガンド結合体単位が前記センス鎖中に存在する、請求項２１又は請求項２２に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  24. 前記アンチセンス鎖の長さが１９～２７ヌクレオチドである、請求項２１又は請求項２２に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  25. 前記センス鎖の長さが１２～４０ヌクレオチドである、請求項２１又は請求項２２に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  26. 前記センス鎖が前記アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成する、請求項２１～２５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  27. 前記相補性の領域が前記標的配列に対して完全に相補的である、請求項２１に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  28. 前記センス鎖がその３’末端に、Ｓ1－Ｌ－Ｓ2として示されるステム－ループを含み、Ｓ1がＳ2に対して相補的であり、ＬがＳ1とＳ2との間に３～５ヌクレオチドの長さのループを形成する、請求項２１～２７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  29. Ｌがテトラループである、請求項２８に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  30. Ｌが、ＧＡＡＡとして示される配列を含む、請求項２８に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  31. 前記アンチセンス鎖上に２ヌクレオチドの長さの３’オーバーハング配列をさらに含む、請求項２１～３０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  32. 前記オリゴヌクレオチドが１ヌクレオチド以上の長さの３’オーバーハング配列をさらに含み、前記３’オーバーハング配列が、前記アンチセンス鎖上、前記センス鎖上、又は前記アンチセンス鎖上及び前記センス鎖上に存在する、請求項２１～３０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  33. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項２１～３２のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  34. 前記修飾ヌクレオチドが２’修飾を含む、請求項３３に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  35. 前記２’修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノから選択される修飾である、請求項３４に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  36. 前記オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチドが修飾されている、請求項２１～３２のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  37. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間リンケージを含む、請求項２１～３６のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  38. 前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間リンケージがホスホロチオエートリンケージである、請求項３７に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  39. 前記アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドの糖の４’炭素がホスフェート類縁体を含む、請求項２１～３６のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  40. 前記ホスフェート類縁体が、オキシメチルホスホナート、ビニルホスホナート又はマロニルホスホナートである、請求項３９に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
  41. 請求項２１～４０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体、及び賦形剤を含む、組成物。
  42. オリゴヌクレオチド－リガンド結合体を対象に送達する方法であって、請求項４１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  43. 標的遺伝子の発現を低減するための、請求項２１～４０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド－リガンド結合体。
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