JP2023524444A

JP2023524444A - 医薬製剤

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Publication number: JP2023524444A
Application number: JP2022565803A
Authority: JP
Inventors: トゥインクルアール．クリスティアン，; バラドワジジャガナサン，; アンドリューダイクストラ，
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2020-04-29
Filing date: 2021-04-28
Publication date: 2023-06-12
Also published as: EP4142790A1; US20230167175A1; AU2021263813A1; WO2021222355A1; CA3173706A1; KR20230004799A; IL297080A; CN115484980A

Abstract

本開示は、例えば、二重特異性抗体コンストラクト、緩衝剤、糖類及び界面活性剤を含む安定性の水性製剤であって、４．８～５．５のｐＨを有する製剤について記載する。

Description

本開示は、安定性の二重特異性抗体コンストラクト製剤の分野に含まれる。

参照による援用
参照によりその全体が組み込まれるのは、本明細書と同時に提出され、下記の：２０２０年４月２８日に作製され、サイズが３４５，２４９バイトの「５４９１０＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と命名された、ＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイルと同定された、コンピュータにより読み込み可能なヌクレオチド／アミノ酸の配列表である。

タンパク質系医薬品は、（前）臨床開発において及び市販製品として最も成長著しい治療薬に含まれる。低分子化学薬剤と比較して、タンパク質医薬品は、比較的低い濃度で高い特異性及び活性を有し、通常、種々の癌、自己免疫疾患、及び代謝障害等の大きい影響のある疾患の治療を提供する（Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４Ｊｕｌ；３２（７）：３７２－８０，Ｗａｎｇ，ＩｎｔＪＰｈａｒｍ．１９９９Ａｕｇ２０；１８５（２）：１２９－８８）。
商業規模での精製プロセスの進歩により、現在、組み換えタンパク質等のタンパク質系医薬品は、最初の製造時に高い純度で得ることができる。しかしながら、タンパク質は、辛うじて安定であるにすぎず、化学的にも物理的にも非常に劣化しやすい。化学的劣化とは、脱アミド、酸化、開裂、クリッピング／断片化、新たなジスルフィド架橋の形成、加水分解、異性化、又は脱グリコシル化等の共有結合を伴う修飾を指す。物理的劣化には、タンパク質のアンフォールディング、表面への望ましくない吸着、及び凝集が含まれる。これらの物理的及び化学的な不安定性への対処は、タンパク質医薬品の開発において最も難しい課題の１つである（Ｃｈｉｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍＲｅｓ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．９，Ｓｅｐｔ２００３，ｐｐ．１３２５－１３３６、Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４Ｊｕｌ；３２（７）：３７２－８０）。

Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４Ｊｕｌ；３２（７）：３７２－８０Ｗａｎｇ，ＩｎｔＪＰｈａｒｍ．１９９９Ａｕｇ２０；１８５（２）：１２９－８８）Ｃｈｉｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍＲｅｓ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．９，Ｓｅｐｔ２００３，ｐｐ．１３２５－１３３６Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４Ｊｕｌ；３２（７）：３７２－８０

タンパク質系医薬品のクリッピング（断片化）は、化学的及び酵素学的原因に起因して製造プロセス及び貯蔵中に発生し得る。クリッピングは、治療用ポリペプチドの場合には、力価における可能性のある低減である親ポリペプチドの分解を表すために、望ましくない。生物学用途及びバイオテクノロジー用途におけるタンパク質の安定性及び活性の維持は、深刻な課題を提起する。治療用タンパク質の安定化を増強し、製剤、充填、輸送、貯蔵、及び投与中の凝集及び変性又は劣化を低減することにより機能喪失及び有害な免疫原性反応を防止する、最適化された医薬組成物が当該技術分野において必要とされている。

二重特異性Ｔ細胞エンゲージング（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体コンストラクト等の２つ（又は以上）の異なる抗原に同時に結合する二重特異性（及び／又は多重特異性）抗体を含むタンパク質系医薬品は、タンパク質不安定性を呈する傾向がある。これは、単鎖Ｆｃ形式（ｓｃＦｃと称される）、ヘテロＦｃ（ｈｅｔＦｃ又はヘテロ二量体Ｆｃ、ｈＦｃとも称される）形式及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ又はｈＡＬＢとも称される）の融合体を含む半減期延長形式（ＨＬＥ形式）を含むそれらの抗体コンストラクトにまで及ぶ。

タンパク質の不安定性、及び特にクリッピング（断片化）は、バイオテクノロジー工業においてますます大きくなりつつある課題である。全ての二重特異性抗体コンストラクトは、液体製剤中ではクリッピングを受け易い。クリッピングは、二重特異性抗体コンストラクトの低分子量（ＬＭＷ）種を生成し、不活性ポリペプチドをもたらす。より低い（即ち、より酸性の）ｐＨの液体製剤では、二重特異性抗体コンストラクトのクリッピングは増加する傾向を示すが、凝集は低下する傾向を示す。より高い（即ち、より塩基性の）ｐＨの液体製剤では、二重特異性抗体コンストラクトの凝集は増加する傾向を示すが、クリッピングは減少する傾向を示す。

予想外にも、本開示は、液体製剤を様々な貯蔵条件下で安定性にさせる液体二重特異性抗体コンストラクトのための最適化ｐＨ範囲を同定する。例えば、本明細書に提供した実施例は、液体製剤中の二重特異性抗体コンストラクト（即ち、低分子量種の％の量）及び二重特異性抗体コンストラクト（即ち、分子量種の％の量）の凝集の両方が、例えば２～８℃又は４０℃の何れかで貯蔵した場合に減少する特定のｐＨ範囲（即ち、ｐＨ４．８～５．５）を同定する。本明細書に記載した実施例において示したように、４．８～５．５の範囲に渡るｐＨを有する液体製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのクリッピング及び凝集のレベルをｐＨ４．８～５．５の範囲外のｐＨでの液体製剤中のクリッピング及び凝集のレベルと比較した（即ち、ｐＨ４．２又はｐＨ７．４）。したがって、二重特異性抗体コンストラクトを含み、約ｐＨ４．８～約５．５（例えば、ｐＨ５．２）のｐＨ範囲を有する液体医薬製剤は、より安定性であり、同一の貯蔵条件下にある場合に、この範囲の外側のｐＨ（例えば、ｐＨ４．２又はｐＨ７．４）で二重特異性抗体コンストラクトを含む液体製剤と比較して改善された構造的完全性を証明する。

一態様では、本明細書では、本明細書に記載した二重特異性抗体コンストラクト、緩衝剤、糖類及び界面活性剤を含む安定性の水性医薬製剤であって、そのｐＨが４．８～５．５の水性医薬製剤について記載される。幾つかの実施形態では、製剤のｐＨは、４．５～５．３の範囲である。幾つかの実施形態では、製剤のｐＨは、５．２である。

幾つかの実施形態では、製剤は、１カ月の約４０℃での貯蔵後に約１０％未満（例えば、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％以下）の低分子量（ＬＭＷ）種の二重特異性抗体コンストラクトを含む。

幾つかの実施形態では、製剤は、１カ月の約２～８℃での貯蔵後に約１０％未満（例えば、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％以下）の低分子量（ＬＭＷ）種の二重特異性抗体コンストラクトを含む。

幾つかの実施形態では、製剤は、１カ月の約４０℃での貯蔵後に約５％未満（例えば、４％、３％、２％、１％以下）の高分子量（ＨＭＷ）種の二重特異性抗体コンストラクトを含む。

幾つかの実施形態では、製剤は、１カ月の約２～８℃での貯蔵後に約５％未満（例えば、４％、３％、２％、１％以下）の高分子量（ＨＭＷ）種の二重特異性抗体コンストラクトを含む。

幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価は、約４０℃での１カ月貯蔵後に約３０％超（例えば、約３５％、４０％、５０％、５５％、６０％以上）である。

幾つかの実施形態では、製剤中のインタクトなＢｉＴＥ（登録商標）分子（即ち、メインピーク種）のパーセントは、製剤中の全タンパク質含量の９５％超である。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、Ｔ細胞の表面上のヒトＣＤ３に結合する第２の結合ドメインである標的細胞表面抗原に結合する第１の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、アミノからカルボキシルの順番で、ヒンジ－ＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメイン－リンカー－ヒンジ－ＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメインを含む第３のドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１及び第２の結合ドメインのそれぞれは、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、単鎖抗体コンストラクトである。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、ＣＤＨ１９、ＭＳＬＮ、ＤＬＬ３、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＬＤＮ１８．２又はＭＵＣ１７等の標的細胞表面抗原に結合する。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号２４～２９、（ｂ）配列番号３４～３９、（ｃ）配列番号７８～８３、（ｄ）配列番号１０～１５、（ｅ）配列番号４６～５１、（ｆ）配列番号８８～９３、（ｇ）配列番号６７～７２、（ｈ）配列番号５６～６１、（ｉ）配列番号１１２～１１７、（ｊ）配列番号１００～１０５、（ｋ）配列番号１４８～１５３、配列番号１５７～１６２、又は配列番号１６６～１７１、若しくは配列番号１７５～１８０、（ｌ）配列番号１３２～１３７、又は（ｍ）配列番号１２３～１２８に示した１セットの６ＣＤＲを含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３０、４０、８４、１６、１７、５２、９４、７３、６２、１１８、１５４、１６３、１７２、１８１、１０６、１３８、１４３、若しくは１２９に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３０、４０、８４、１６、１７、５２、９４、７３、６２、１１８、１５４、１６３、１７２、１８１、１０６、１３８、若しくは１４３、又は１２９に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３１、４１、８５、１８、１９、５３、９５、７４、６３、１１９、１５５、１６４、１７３、１８２、１０７、１３９、１４４、又は１３０に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一）であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３１、４１、８５、１８、１９、５３、９５、７４、６３、１１９、１５５、１６４、１７３、１８２、１０７、１３９、１４４、若しくは１３０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号３０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号３１に示したＶＬ領域；（ｂ）配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｃ）配列番号８４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号８５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｄ）配列番号１６若しくは１７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１８若しくは１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｅ）配列番号５２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号５３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｆ）配列番号９４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号９５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｇ）配列番号７３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号７４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｈ）配列番号６２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号６３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｉ）配列番号１１８に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｊ）配列番号１５４、１６３、１７２若しくは１８１に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１５５、１６４、１７３、若しくは１８２に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｋ）配列番号１０６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１０７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｌ）配列番号１３８若しくは１４３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１３９若しくは１４４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；又は（ｍ）配列番号１２９に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第２の結合ドメインは、配列番号１～６に示した１セットの６ＣＤＲを含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第２の結合ドメインは、配列番号７に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第２の結合ドメインは、配列番号７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第２の結合ドメインは、配列番号８に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第２の結合ドメインは、配列番号８に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号８に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９可変軽鎖ドメイン及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９可変重鎖ドメインを含むＣＤ１９に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号８７に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む抗ＭＳＬＮ可変軽鎖ドメイン及び配列番号４０のアミノ酸配列を含む抗ＭＳＬＮ可変重鎖ドメインを含むＭＳＬＮに結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号４３、４４又は４５に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号７４のアミノ酸配列を含む抗ＤＬＬ３可変軽鎖ドメイン及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む抗ＤＬＬ３可変重鎖ドメインを含むＤＬＬ３に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号７６若しくは７７に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３可変軽鎖ドメイン及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３可変重鎖ドメインを含むＦＬＴ３に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号６５若しくは６６に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号３１のアミノ酸配列を含む抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ可変軽鎖ドメイン及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ可変重鎖ドメインを含むＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗ＢＣＭＡ可変軽鎖ドメイン及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む抗ＢＣＭＡ可変重鎖ドメインを含むＢＣＭＡに結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号９６のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号９８又は配列番号９７に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１１９若しくは１０７のアミノ酸配列を含む抗ＰＳＭＡ可変軽鎖ドメイン及び配列番号１１８若しくは１０６のアミノ酸配列を含む抗ＰＳＭＡ可変重鎖ドメインを含むＰＳＭＡに結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１２０若しくは１０８のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１２１、１２２、１０９、１１０又は１１１に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１８又は１９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３３可変軽鎖ドメイン及び配列番号１６又は１７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３３可変重鎖ドメインを含むＣＤ３３に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１８９又は１９０のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号２０、２１、２２又は２３に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤＨ１９可変軽鎖ドメイン及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤＨ１９可変重鎖ドメインを含むＣＤＨ１９に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号５５に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１５５、１６４、１７３又は１８２のアミノ酸配列を含む抗ＭＵＣ１７可変軽鎖ドメイン及び配列番号１５４、１６３、１７２、又は１８１のアミノ酸配列を含む抗ＭＵＣ１７可変重鎖ドメインを含むＭＵＣ１７に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１５６、１６５、１７４又は１８３に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１３９若しくは１４４のアミノ酸配列を含む抗ｃｌｄｎ１８．２可変軽鎖ドメイン及び配列番号１３８若しくは１４３のアミノ酸配列を含む抗ｃｌｄｎ１８．２可変重鎖ドメインを含むｃｌｄｎ１８．２に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１４０又は１４５のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１４１、１４２、１４６若しくは１４７に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ７０可変軽鎖ドメイン及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ７０可変重鎖ドメインを含むＣＤ７０に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含む。

本開示の医薬製剤は、緩衝剤を含む。幾つかの実施形態では、緩衝剤は、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、及び２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸塩又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、緩衝剤は、製剤中に約５ｍＭ～約２００ｍＭ（又は約１０ｍＭ～約５０ｍＭ）の範囲の濃度で存在する。幾つかの実施形態では、緩衝剤は、製剤中に１０ｍＭの濃度で存在する。

本開示の医薬製剤は、糖類を含む。幾つかの実施形態では、糖類は単糖又は二糖である。幾つかの実施形態では、糖類は、糖アルコール（例えば、ソルビトール）である。幾つかの実施形態では、糖類は、スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール又はそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態では、糖類は、製剤中に約１～約１５（ｗ／ｖ）％（又は約９～約１２（ｗ／ｖ）％又は約７％～約１２（ｗ／ｖ）％）の範囲の濃度で存在する。

本開示の医薬製剤は、界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、トリトンＸ－１００、ポリオキシエチレン、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、又はこれらの組み合わせである。幾つかの実施形態では、界面活性剤は、０．００４～約０．５（ｗ／ｖ）％（又は約０．００１～約０．０１（ｗ／ｖ）％、又は約０．００１％～約０．５（ｗ／ｖ）％又は約０．００４～約０．０１（ｗ／ｖ））％の範囲の濃度で製剤中に存在する。

幾つかの実施形態では、製剤は、約１５０～約５００ｍＯｓｍの範囲のモル浸透圧濃度を有する。幾つかの実施形態では、製剤は、５００ｍＯｓｍ／Ｌ未満、４５０ｍＯｓｍ／Ｌ、４００ｍＯｓｍ／Ｌ、又は３５０ｍＯｓｍ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する。幾つかの実施形態では、製剤は、等張性に近く、例えば、２５０～３５０ｍＯｓｍ／Ｌである。

幾つかの実施形態では、医薬製剤は、１０ｍＭのグルタミン酸塩、９（ｗ／ｖ）％のスクロース及び０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、且つ医薬製剤のｐＨは、５．２である。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、製剤中に約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。幾つかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、製剤中に１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ又は２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体は、製剤中に約１０００μｇ～約２００ｍｇの量で存在する。

幾つかの実施形態では、本開示の医薬製剤は、液体製剤である。

別の態様では、本明細書では、本開示の製剤を必要とする対象に投与することを含む、対象において癌を治療する方法が記載される。

本明細書中の様々な実施形態は、様々な状況下で「含む」という語を使用して提示される一方、関連する実施形態はまた、「～からなる」又は「本質的に～からなる」という語を使用しても説明され得ると理解されるべきである。本開示は、ある特徴を「含む」と記載された実施形態が、その特徴「からなる」実施形態を含むことを意図する。用語「１つの」は、１つ以上を指し、例えば、「１つの免疫グロブリン分子」は、１つ以上の免疫グロブリン分子を表すと理解されることに留意されたい。そのため、用語「１つの」、「１つ以上」、及び「少なくとも１つの」は、本明細書で互換的に使用され得る。

値の範囲を記載するとき、記載されている特徴は、その範囲内に見出される個々の値であり得ることもまた理解されるべきである。例えば、「約ｐＨ４．８～約ｐＨ５．５のｐＨ」は、限定されないが、ｐＨ４．６、５．２、５．５等、及びそのような値の間にある任意の値であり得る。更に、「約ｐＨ４．８～約ｐＨ５．５のｐＨ」は、問題の製剤のｐＨが貯蔵中にｐＨ４．８～ｐＨ５．５の範囲において２ｐＨ単位変動するという意味で解釈されるべきではなく、むしろ溶液のｐＨについてその範囲内で値が選択され得、ｐＨがそのｐＨ付近で緩衝されたままであることを意味すると解釈されるべきである。

用語「約」が使用される場合、列挙された数に対してその列挙された数の５％、１０％、１５％又はそれ以上を加えるか又は減じることを意味する。意図される実際の変動は、文脈から決定可能である。

本明細書に記載される範囲の何れかにおいて、範囲の端点はその範囲に含まれる。しかしながら、この説明はまた、小さい方の端点及び／又は大きい方の端点が除外された同じ範囲も意図する。本発明の追加の特徴及び変形形態は、図面及び詳細な説明を含む本出願の全体から当業者には明らかであろうが、そのような特徴は全て本発明の態様として意図される。同様に、本明細書に記載される本発明の特徴を組み換えて、特徴の組み合わせが本発明の態様又は実施形態として上記に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、本発明の態様としても意図される追加の実施形態にすることができる。また、本発明にとって不可欠なものとして本明細書に記載されるそのような限定のみがそのようにみなされるべきであり；本明細書に不可欠なものとして記載されていない限定を欠く本発明の変形形態は、本発明の態様として意図される。

本明細書に記載の全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。

高ｐＨ製剤での加速安定性試験からのＢｉＴＥ－Ｉ、ＢｉＴＥ－Ｃ、ＢｉＴＥ－Ｄ、及びＢｉＴＥ－Ｇについての還元キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ－ＳＤＳ）による低分子量（ＬＭＷ）率（％）を示しているグラフである。加速及び推奨貯蔵条件下でｐＨ４．２及びｐＨ４．８液体製剤におけるＢｉＴＥ－Ｇについてのクリッピング速度を示しているグラフである。ｐＨ３．８、ｐＨ４．８、ｐＨ５．２及びｐＨ７．４での製剤中のＢｉＴＥ－Ｄ及びＢｉＴＥ－Ｇの％ＬＭＷ（ｒＣＥによって評価）（図３Ａ及び３Ｂ）並びに％ＨＭＷ（ＳＥＣによって評価）（図３Ｃ及び３Ｄ）を示しているグラフである。ｐＨ３．８、ｐＨ４．８、ｐＨ５．２及びｐＨ７．４での製剤中のＢｉＴＥ－Ｄ及びＢｉＴＥ－Ｇの％ＬＭＷ（ｒＣＥによって評価）（図３Ａ及び３Ｂ）並びに％ＨＭＷ（ＳＥＣによって評価）（図３Ｃ及び３Ｄ）を示しているグラフである。ｐＨ３．８、ｐＨ４．８、ｐＨ５．２及びｐＨ７．４での製剤中のＢｉＴＥ－Ｄ及びＢｉＴＥ－Ｇの％ＬＭＷ（ｒＣＥによって評価）（図３Ａ及び３Ｂ）並びに％ＨＭＷ（ＳＥＣによって評価）（図３Ｃ及び３Ｄ）を示しているグラフである。ｐＨ３．８、ｐＨ４．８、ｐＨ５．２及びｐＨ７．４での製剤中のＢｉＴＥ－Ｄ及びＢｉＴＥ－Ｇの％ＬＭＷ（ｒＣＥによって評価）（図３Ａ及び３Ｂ）並びに％ＨＭＷ（ＳＥＣによって評価）（図３Ｃ及び３Ｄ）を示しているグラフである。

現在の治療用バイオテクノロジー製品は、高品質であり、且つ組み換えヒトタンパク質及び抗体は、内在性のヒトタンパク質に類似しているものの、タンパク質の不安定性は、依然として重要な懸念事項である。組み換えタンパク質（例えば、抗体）を生成するためのプロセスは、断片化又はクリッピングに起因して構造的完全性の消失を生じさせ得る（Ｖｌａｓａｋｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ，３：２５３－２６３，２０１１；Ｗｕｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，５８８：９３５－９４１，２０１４）。当技術分野では、治療用タンパク質における安定性及び構造的完全性の増大が極めて必要とされており、最適化された医薬製剤がこれを行うのに役立ち得る。

ＢｉＴＥ（登録商標）抗体コンストラクト分子などの特定のタンパク質系医薬品は、長期間にわたって液体製剤中で安定ではなく、特に加速温度、例えば４℃以上の冷蔵温度では安定ではない。本開示の基礎にある一般的概念は、本明細書に記載した液体医薬製剤中の二重特異性抗体コンストラクトの構造的完全性がより酸性のｐＨ（即ち、４．８未満）又はより塩基性のｐＨ（即ち、５．５超）を有する液体製剤と比較して、４．８～５．５の範囲内のｐＨで改善されているという観察所見である。本明細書に提供した実施例に示したように、４．８～５．５の範囲内のｐＨを有する液体製剤は、液体製剤中の二重特異性抗体コンストラクトの最小からクリッピングなし（並びに最小から凝集なし）を生じさせる。

以前に、二重特異性抗体コンストラクトを含む製剤は、ｐＨ４．８～５．５を有する液体製剤中の本明細書で観察された安定性を示すために凍結乾燥される必要があるであろう（例えば、国際公開第２０１８／１１４１９０号パンフレット及び第２０１８／２０４９０７号パンフレットを参照されたい）。国際公開第２０１８／２０４９０７号パンフレットに記載した凍結乾燥製剤には、二重特異性抗体コンストラクトの安定化に寄与した保存料（例えばクロロブタノール又はメチルパラベン、若しくはベンジルアルコール）が含まれる。幾つかの例では、安定性は、製剤のｐＨを低下させること等の他の追加の手段によっても達成される。例えば、国際公開第２０１８／１４１９１０号パンフレットは、二重特異性抗体コンストラクトを含み、低ｐＨ（即ち、ｐＨ４．０）を有する凍結乾燥製剤が、より塩基性ｐＨ（例えば、ｐＨ６以上）で同一抗体濃度を有する凍結乾燥製剤より安定性であったことを開示している。対照的に、本開示の実施例において記載した最適化されたｐＨ範囲の同定は、様々な時点に４℃以上（４０℃まで）で液体製剤として二重特異性抗体コンストラクトを含む医薬製剤の貯蔵を許容する。

本開示の範囲内で、用語「安定性」、「安定である」又は「安定化」は、医薬製剤全体の構造的安定性に関し、及び特に有効成分（例えば、二重特異性抗体コンストラクト）自体の具体的には製剤、充填、輸送、貯蔵及び投与中の構造的安定性に関する。例えば、本開示の医薬製剤の状況における有効成分の安定性は、有効成分の断片化及び／又はクリッピングの量によって決定される。本明細書で使用する「安定性水性製剤」は、例えば４℃で少なくとも４週間にわたり貯蔵した場合に二重特異性抗体コンストラクトの最小の断片化若しくはクリッピングを有する、又は全く有していない本開示の二重特異性抗体コンストラクトを含む液体（即ち、非凍結乾燥）医薬製剤を指す。典型的な安定性の水性製剤は、ｐＨ４．８～５．５（例えば、ｐＨ５．２）を有する。本明細書で使用する「製剤」及び「組成物」は、同義語である。

本明細書で使用する用語「クリッピング」又は「断片化」は、通常「タンパク質分解」による発現したタンパク質の部分的分割を指す。本明細書で開示した医薬製剤の二重特異性抗体コンストラクトのＣＤＲにおける断片化は、二重特異性抗体が標的に結合する作用、及び結果としてその効力に関する作用を有する可能性が高い。文献においては、ＣＤＲ内で発生した断片化を伴う二重特異性抗体コンストラクトについて標的への変化した親和性について記載している報告は、たとえあったとしても極めて少数である；それはおそらく、ＣＤＲ－クリッピング種が精製及び試験されなければ、ＣＤＲにおける低レベルのクリッピングは効力アッセイによる検出可能な変化を排除するからである。ヒンジ領域内の断片化は、二重特異性抗体コンストラクトの機能により大きな意味を有する可能性がある：生成されたＦａｂ断片は、何らかのＦｃ媒介性エフェクター機能を回避し、減少した循環半減期を有するであろう；Ｆｃ－Ｆａｂ断片は、標的受容体との相互作用が両方のＦａｂアームを必要とする場合は、全く効力がない可能性がある。Ｖｌａｓａｋｅｔａｌ．，ｍＡｂｓ，３：３，２５３－２６３，２０１１を参照されたい。

本明細書で使用する用語「低分子量（ＬＭＷ）」種は、クリッピングの結果として二重特異性抗体コンストラクトの断片を指す。

本明細書で使用する用語「（タンパク質）凝集体」は、通常、所望の既定の種（例えば、単量体）ではなく、「オリゴマー」又は「マルチマー」等の高分子量のタンパク質種を包含する。この用語は、本明細書において用語「高分子量」種及び「ＨＭＷ」と互換的に使用される。タンパク質凝集体は、通常、サイズ（小型の（二量体）から大型の集合体（サブビジブル粒子又はさらに目に見える粒子）の範囲であり、且つナノメートル～マイクロメートルの直径範囲）、形態（ほぼ球状～線維状）、タンパク質構造（天然対非天然／変性）、分子間結合の種類（共有結合性対非共有結合性）、可逆性及び可溶性の点で異なり得る。可溶性凝集体は、およそ１～１００ｎｍのサイズ範囲を占め、タンパク質微粒子は、顕微鏡下でないと見えない（約０．１～１００．ｍ）及び目に見える（＞１００．ｍ）範囲を占める。前述の種類のタンパク質凝集体の全ては、通常、本用語に包含される。したがって、用語「（タンパク質）凝集体」は、２つ以上のタンパク質単量体の物理的に会合した又は化学的に結合したあらゆる種類の非天然種を指す。

本明細書で使用する用語「凝集」は、例えば、ファンデルワールス力又は化学結合を介する分子間の直接的な相互引力を指す。特に、用語「凝集」は、蓄積し、塊になっているタンパク質として理解される。凝集体は、非晶質凝集体、オリゴマーを含む可能性があり、典型的には高分子量（ＨＭＷ）種、即ち、純粋の生成物分子よりも高分子量を有する分子と呼ばれる。

幾つかの実施形態では、本開示は、少なくとも０．１～２０ｍｇ／ｍＬの量で、ヒトＴ細胞上のＣＤ３に結合する二重特異性抗体コンストラクト、緩衝剤、糖類、及び界面活性剤を含み、４．８～５．５（例えば、ｐＨ５．２）の範囲のｐＨを有する製剤について記載する。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、ＣＤ３並びにヒトＣＤＨ１９、ヒトＭＳＬＮ、ヒトＤＬＬ３、ヒトＦＬＴ３、ヒトＥＧＦＲｖｌｌｌ、ヒトＢＣＭＡ、ヒトＰＳＭＡ、ヒトＣＤ３３、ヒトＣＤ１９、ヒトＣＤ７０、ヒトＣＬＤＮ１８．２若しくはＭＵＣ１７の１つに、悪性細胞をＴ細胞と一過性で連結して、それにより結合した悪性細胞のＴ細胞媒介性殺滅を誘導するような方法で、コエンゲージする。

この製剤の様々な態様について下記で説明する。節の見出しの使用は単に読み物の便宜のためであり、それ自体を限定することは意図されない。本明細書全体は、統一された開示として見なされることが意図されており、本明細書で説明されている特徴の全ての組み合わせが企図されることを理解すべきである。

抗原結合タンパク質
「抗原結合タンパク質」は、特異的な標的抗原（ＣＤ３及び／若しくはＣＤＨ１９、ＭＳＬＮ、ＤＬＬ３、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＬＤＮ１８．２又はＭＵＣ１７等）に結合するドメインを含むタンパク質である。抗原結合タンパク質は、抗原結合ドメインが、抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進する立体構造をとることを可能にする骨格又はフレームワーク部分を含む。例示的な態様では、抗原結合タンパク質は、抗体若しくは免疫グロブリン、又は抗原結合抗体断片である。

用語「抗体」は、インタクトな抗原結合免疫グロブリンを指す。「抗体」は、抗原結合タンパク質の一種である。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４の何れか１つを含むＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭの抗体であり得る。様々な実施形態では、インタクトな抗体は、２つの全長重鎖及び２つの全長軽鎖を含む。抗体は、１つの可変領域及び１つの定常領域を有する。ＩｇＧ形式において、１つの可変領域は、一般に、約１００～１１０以上のアミノ酸であり、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、抗原認識に主に関与し、且つ異なる抗原に結合する他の抗体間で実質的に変動する。１つの可変領域は、通常、少なくとも３つの重鎖又は軽鎖のＣＤＲを含み（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅＮ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７－８８３）、それらは、フレームワーク領域（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１によってフレームワーク領域１～４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４と呼ばれている；ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ，１９８７、前掲も参照されたい）中にある。定常領域は、抗体が免疫系の細胞及び分子を動員することを可能にする。

幾つかの実施形態では、製剤の抗体は、二重特異性抗体、即ち、２つの異なる標的（例えば、ＣＤ３及び第２の異なる標的）に結合する１つの抗体である。

本明細書で使用する用語「二重特異性」は、２つの異なる標的抗原に結合する抗体コンストラクトを指し、即ち、それは、第１の結合ドメイン、及び第２の結合ドメインを含むが、ここで第１の結合ドメインは、１つの抗原又は標的（例えば、標的細胞の表面抗原）に結合し、第２の結合ドメインは、別の抗原又は標的（例えば、ＣＤ３）に結合する。したがって、本開示による抗体コンストラクトは、２つの異なる抗原又は標的に対する特異性を含む。用語「標的細胞の表面抗原」は、１つの細胞によって発現され、且つ本明細書に記載される抗体コンストラクトがアクセスできるようにその細胞表面に存在する抗原性構造を指す。それは、タンパク質、好ましくはタンパク質の細胞外部分又は糖質構造、好ましくは糖タンパク質等のタンパク質の糖質構造であり得る。それは、腫瘍抗原であることが好ましい。本発明の用語「二重特異性抗体コンストラクト」は、多重特異性抗体コンストラクト、例えば３つの結合ドメインを含む三重特異性抗体コンストラクト又は３つ超（例えば、４つ、５つ．．．）の特異性を有するコンストラクトも包含する。

本明細書で理解される二重特異性抗体及び／又は抗体コンストラクトとしては、従来型の二重特異性免疫グロブリン（例えば、ＢｓＩｇＧ）、付加された抗原結合ドメイン（例えば、軽鎖又は重鎖のアミノ末端若しくはカルボキシ末端が、単一ドメイン抗体又は対になった抗体可変ドメイン（例えば、Ｆｖ又はｓｃＦｖ）等の追加の抗原結合ドメインに連結される）を含むＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片（例えば、二重特異性単鎖抗体）、二重特異性融合タンパク質（例えば、エフェクター部分に融合された抗原結合ドメイン）、及びＢｓＡｂコンジュゲートが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、様々な二重特異性形式を記載し、参照として本明細書に組み込まれるＳｐｉｅｓｓｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６７（２）ＰａｒｔＡ：９７－１０６（２０１５）を参照されたい。二重特異性コンストラクトの例としては、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムｓｃＦｖ、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））形式（リンカーによって結合される２つの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）からなる融合タンパク質）及びＦａｂ２二重特異性体並びに全長抗体を含む改変されたコンストラクトが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、全てが明示的に本明細書に組み込まれるＣｈａｍｅｓ＆Ｂａｔｙ，２００９，ｍＡｂｓ１［６］：１－９；及びＨｏｌｌｉｇｅｒ＆Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３［９］：１１２６－１１３６；Ｗｕｅｔａｌ．，２００７，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５［１１］：１２９０－１２９７；Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎｅｔａｌ．，２００９，ｍＡｂｓ１［２］：１２８－１４１；国際公開第２００９０３２７８２号パンフレット及び国際公開第２００６０２０２５８号パンフレット；Ｚｕｏｅｔａｌ．，２０００，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１３［５］：３６１－３６７；米国特許出願公開第２００２０１０３３４５号明細書；Ｓｈｅｎｅｔａｌ．，２００６，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２８１［１６］：１０７０６－１０７１４；Ｌｕｅｔａｌ．，２００５，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２８０［２０］：１９６６５－１９６７２；並びにＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２０１２ＭＡｂｓ４（２）：１８２を参照されたい。

幾つかの実施形態では、本明細書に記載した製剤は、標的細胞表面抗原に結合する第１の結合ドメイン、Ｔ細胞の表面上のヒトＣＤ３に結合する第２の結合ドメイン、及び任意選択的にアミノからカルボキシルの順にヒンジ－ＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメイン－リンカー－ヒンジ－ＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメインを含む第３のドメインを含む二重特異性抗体コンストラクトである。幾つかの実施形態では、第１及び第２の結合ドメインのそれぞれは、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。

本明細書で使用する用語「結合ドメイン」は、標的分子（抗原）上の所定の標的エピトープ若しくは所定の標的部位、例えばＣＤＨ１９、ＭＳＬＮ、ＤＬＬ３、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＬＤＮ１８．２若しくはＭＵＣ１７及びＣＤ３にそれぞれに（特異的に）結合する／と相互作用する／を認識するドメインを指す。第１の結合ドメイン（例えばＣＤＨ１９、ＭＳＬＮ、ＤＬＬ３、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＣＬＤＮ１８．２若しくはＭＵＣ１７を認識する）の構造及び機能、及び好ましくは第２の結合ドメイン（ＣＤ３を認識する）の構造及び／又は機能は、抗体の例えば全長又は完全免疫グロブリン分子の構造及び／又は機能に基づき、且つ／又は抗体又はその断片の可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び／又は可変軽鎖（ＶＬ）ドメインに由来する。好ましくは、第１の結合ドメインは、３つの軽鎖ＣＤＲ（即ち、ＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び／又は３つの重鎖ＣＤＲ（即ち、ＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）の存在によって特徴付けられる。第２の結合ドメインは、好ましくは、標的結合を可能にする抗体の最小限の構造要件も含む。より好ましくは、第２の結合ドメインは、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）並びに／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む。第１及び／又は第２の結合ドメインは、既存の（モノクローナル）抗体由来のＣＤＲ配列の足場へのグラフトではなく、ファージディスプレイ法又はライブラリースクリーニング法により作製されるか又は得られることが想定される。

幾つかの実施形態では、標的細胞の表面抗原に結合する第１の結合ドメイン及び／又はＣＤ３εに結合する第２の結合ドメインは、ヒト結合ドメインである。少なくとも１つのヒト結合ドメインを含む抗体及び抗体コンストラクトは、齧歯類（例えばマウス、ラット、ハムスター又はウサギ）等の非ヒト可変及び／又は定常領域を有する抗体又は抗体コンストラクトに伴う問題の幾つかを回避する。このような齧歯類由来タンパク質が存在すると、抗体又は抗体コンストラクトの迅速なクリアランスをもたらす可能性があるか、又は患者による抗体又は抗体コンストラクトに対する免疫反応を発生させる可能性がある。齧歯類由来抗体又は抗体コンストラクトの使用を避けるために、齧歯類が完全ヒト抗体を産生するようにヒト抗体機能を齧歯類に導入することにより、ヒト又は完全ヒト抗体／抗体コンストラクトを生成することができる。

幾つかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、１つの単鎖抗体コンストラクトを含む。ｓｃＦｖは、可変重鎖、ｓｃＦｖリンカー、及び可変軽鎖ドメインを含む。任意選択により、可変軽鎖のＣ末端は、ｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合され、そのＣ末端は、可変重鎖のＮ末端に結合されるが（Ｎ－ｖｈ－リンカー－ｖｌ－Ｃ）、配置は切り換えることができる（Ｎ－ｖｌ－リンカー－ｖｈ－Ｃ）。又は、可変重鎖のＣ末端は、ｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合され、そのＣ末端は、可変軽鎖のＮ末端に結合されるが（Ｎ－ｖｌ－リンカー－ｖｈ－Ｃ）、配置は切り換えることができる（Ｎ－ｖｈ－リンカー－ｖ－Ｃ）。したがって、ｓｃＦｖの描写及び説明において、どちらの向きのｓｃＦｖも特定的に含まれる。

本開示の抗体コンストラクトの少なくとも２つの結合ドメイン及び可変ドメイン（ＶＨ／ＶＬ）は、ペプチドリンカー（スペーサーペプチド）を含んでいても含んでいなくてもよい。用語「ペプチドリンカー」は、本発明によれば、本開示の抗体コンストラクトの一方の（可変及び／又は結合）ドメイン及びもう一方の（可変及び／又は結合）ドメインのアミノ酸配列を相互に連結するアミノ酸配列を含む。ペプチドリンカーは、第３のドメインを本発明の抗体コンストラクトの他のドメインに融合するためにも使用され得る。そのようなペプチドリンカーの必須の技術的特徴は、それがいかなる重合活性も含まないことである。特に好適なペプチドリンカーは、それらの開示が参照により全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第４，７５１，１８０号明細書及び同第４，９３５，２３３号明細書又は国際公開第８８／０９３４４号パンフレットに記載されたペプチドリンカーである。ペプチドリンカーを使用して、本明細書に記載した二重特異性抗体コンストラクトに他のドメイン、又はモジュール、又は領域（例えば、半減期延長ドメイン）を付加することも可能である。

幾つかの実施形態では、第３のドメインは、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除外する抗体の定常領域を含むポリペプチドを指す、「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」を含む。したがって、「Ｆｃドメイン」は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、且つこれらのドメインに対する可撓性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭに関して、Ｆｃは、Ｊ鎖を含んでもよい。ＩｇＧに関して、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３（Ｃγ２及びＣγ３）並びにＣγ１（Ｃγ１）とＣγ２（Ｃγ２）の間の下位のヒンジ領域を含む。二重特異性抗体コンストラクトは、好ましくはＩｇＧ抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、幾つかのサブクラスを含む）である。Ｆｃ領域の境界は、異なる場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６又はＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義され、付番は、Ｋａｂａｔに記載されるようなＥＵインデックスに従う。幾つかの実施形態では、アミノ酸の改変は、Ｆｃ領域に対してなされ、例えば、１つ以上のＦｃγＲ受容体又はＦｃＲｎ受容体への結合を変化させる。

幾つかの実施形態では、本明細書に記載した製剤は、ヒトＣＤ３及びヒトＣＤＨ１９、又はヒトＣＤ３及びヒトＭＳＬＮ、又はヒトＣＤ３及びヒトＤＬＬ３、又はヒトＣＤ３及びヒトＦＬＴ３、又はヒトＣＤ３及びヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ、又はヒトＣＤ３及びヒトＢＣＭＡ、又はヒトＣＤ３及びＰＳＭＡ、又はヒトＣＤ３及びヒトＣＤ３３、又はヒトＣＤ３及びヒトＣＤ１９、ヒトＣＤ３及びヒトＣＤ７０、又はヒトＣＤ３及びヒトＭＵＣ１７、又はヒトＣＤ３及びヒトＣＬＤＮ１８．２に結合する二重特異性抗体を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３０、４０、８４、１６、１７、５２、９４、７３、６２、１１８、１５４、１６３、１７２、１８１、１０６、１３８、１４３、若しくは１２９に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３０、４０、８４、１６、１７、５２、９４、７３、６２、１１８、１５４、１６３、１７２、１８１、１０６、１３８、１４３、若しくは１２９に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３１、４１、８５、１８、１９、５３、９５、７４、６３、１１９、１５５、１６４、１７３、１８２、１０７、１３９、１４４、若しくは１３０に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％同一（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、配列番号３１、４１、８５、１８、１９、５３、９５、７４、６３、１１９、１５５、１６４、１７３、１８２、１０７、１３９、１４４、若しくは１３０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号３０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号３１に示したＶＬ領域；（ｂ）配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｃ）配列番号８４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号８５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｄ）配列番号１６又は１７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１８又は１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｅ）配列番号５２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号５３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｆ）配列番号９４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号９５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｇ）配列番号７３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号７４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｈ）配列番号６２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号６３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｉ）配列番号１１８に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｊ）配列番号１５４、１６３、１７２又は１８１に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１５５、１６４、１７３又は１８２に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｋ）配列番号１０６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１０７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｌ）配列番号１３８又は１４３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１３９又は１４４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；又は（ｍ）配列番号１２９に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む抗ＭＳＬＮ可変軽鎖ドメイン及び配列番号４０のアミノ酸配列を含む抗ＭＳＬＮ可変重鎖ドメインを含むＭＳＬＮに結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号４３、４４又は４５に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号７４のアミノ酸配列を含む抗ＤＬＬ３可変軽鎖ドメイン及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む抗ＤＬＬ３可変重鎖ドメインを含むＤＬＬ３に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号７６又は７７に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３可変軽鎖ドメイン及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３可変重鎖ドメインを含むＦＬＴ３に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号６５又は６６に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１１９若しくは１０７のアミノ酸配列を含む抗ＰＳＭＡ可変軽鎖ドメイン及び配列番号１１８若しくは１０６のアミノ酸配列を含む抗ＰＳＭＡ可変重鎖ドメインを含むＰＳＭＡに結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１２０又は１０８のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１２１、１２２、１０９、１１０又は１１１に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１８若しくは１９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３３可変軽鎖ドメイン及び配列番号１６若しくは１７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３３可変重鎖ドメインを含むＣＤ３３に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１８９又は１９０のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号２０、２１、２２若しくは２３に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１３９若しくは１４４のアミノ酸配列を含む抗ｃｌｄｎ１８．２可変軽鎖ドメイン及び配列番号１３８若しくは１４３のアミノ酸配列を含む抗ｃｌｄｎ１８．２可変重鎖ドメインを含むｃｌｄｎ１８．２に結合する第１の結合ドメイン、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変重鎖ドメインを含む第２の結合ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ３可変軽鎖ドメインを含む。例えば、一実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１４０又は１４５のアミノ酸配列を含む第１の結合ドメイン、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む第２の結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号１４１、１４２、１４６又は１４７に示したアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態では、製剤は、約１０ｍｇ～約５０ｍｇ（又は約１０ｍｇ～約２０ｍｇ、又は約２０ｍｇ～約５０ｍｇ、又は約１５ｍｇ～約２０ｍｇ、又は約２０ｍｇ～約５５ｍｇ）の範囲の量で本明細書に記載した抗原結合タンパク質（例えば、二重特異性抗体コンストラクト）を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、又は約５０ｍｇの量で二重特異性抗体コンストラクトを含む。

幾つかの実施形態では、製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ（又は約１ｍｇ／ｍＬ～約８ｍｇ／ｍＬ又は約１ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬ）の濃度で二重特異性抗体コンストラクトを含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ又は約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で二重特異性抗体コンストラクトを含む。

幾つかの実施形態では、製剤は、約０．１～約８ｍｇ／ｍＬ（又は約０．５～約５ｍｇ／ｍＬ又は約１～約５ｍｇ／ｍＬ、又は約３～約６ｍｇ／ｍＬ）の範囲の濃度で二重特異性抗体コンストラクトを含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、又は約８ｍｇ／ｍＬの濃度で二重特異性抗体コンストラクトを含む。

緩衝剤
本発明の医薬製剤は、任意選択的に、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸塩又はそれらの組み合わせであり得る緩衝剤を含む。

緩衝剤は、製剤のｐＨを制御するために利用されることが多い。幾つかの実施形態では、緩衝剤は、液体製剤のｐＨを製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのクリッピング及び凝集の速度を低減させるｐＨに維持する濃度で添加される。幾つかの実施形態では、液体製剤のｐＨは、約ｐＨ４．８～ｐＨ５．５、又は約ｐＨ４～ｐＨ５．５、又は約ｐＨ５．２である。製剤に対するｐＨの影響は、加速安定性試験及び熱量測定スクリーニング試験等の幾つかの手法のうちの何れか１つ以上を使用して特徴付けられ得る（ＲｅｍｍｅｌｅＲ．Ｌ．Ｊｒ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８（１６）：５２４１－７（１９９９））。

製剤中に存在する緩衝系は、生理的に適合性があり且つ所望のｐＨを維持するように選択される（例えば、４．８～５．５、又は５．２）。

緩衝剤は、既定のレベルで製剤のｐＨを維持するのに好適な任意の量で存在し得る。緩衝剤は、約０．１ｍＭ～約１０００ｍＭ（１Ｍ）、又は約５ｍＭ～約２００ｍＭ、又は約５ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約１０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在し得る。好適な緩衝剤濃度は、約２００ｍＭ以下の濃度を包含する。一部の実施形態では、製剤中の緩衝剤は、約１９０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１００ｍＭ、約８０ｍＭ、約７０ｍＭ、約６０ｍＭ、約５０ｍＭ、約４０ｍＭ、約３０ｍＭ、約２０ｍＭ、約１０ｍＭ、又は約５ｍＭの濃度で存在する。幾つかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、少なくとも０．１、０．５、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、又は９００ｍＭである。幾つかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、１、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０ｍＭと１００ｍＭとの間である。幾つかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、又は４０ｍＭと５０ｍＭとの間である。幾つかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、約１０ｍＭである。

界面活性剤
本明細書に記載した医薬製剤は、界面活性剤を含む。典型的な界面活性剤としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、トリトンＸ－１００、ポリオキシエチレン、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で説明されている医薬製剤は、個別に又は様々な比率の混合物として、少なくとも１種の界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．００１％～約５（ｗ／ｖ）％（又は約０．００１～約０．５（ｗ／ｖ）％、又は約０．００４～約０．５（ｗ／ｖ）％、又は約０．００１～約０．０１（ｗ／ｖ）％又は約０．００４～約０．０１（ｗ／ｖ）％）の濃度で界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、少なくとも０．００１、少なくとも０．００２、少なくとも０．００３、少なくとも０．００４、少なくとも０．００５、少なくとも０．００７、少なくとも０．０１、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．２、少なくとも０．３、少なくとも０．４、少なくとも０．５、少なくとも０．６、少なくとも０．７、少なくとも０．８、少なくとも０．９、少なくとも１．０、少なくとも１．５、少なくとも２．０、少なくとも２．５、少なくとも３．０、少なくとも３．５、少なくとも４．０、又は少なくとも４．５（ｗ／ｖ）％の濃度で界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．５（ｗ／ｖ）％の濃度で界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．００１～約０．０１（ｗ／ｖ）％の濃度で界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．００１～約０．０１（ｗ／ｖ）％の濃度で界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％～約０．５（ｗ／ｖ）％の濃度で界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、製剤は、約０．００１％～約０．０１（ｗ／ｖ）％の濃度で組み入れられた界面活性剤を含む。幾つかの実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０は約０．０１（ｗ／ｖ）％の濃度で存在する。

糖類
本明細書に記載した医薬製剤は、糖類を含む。幾つかの実施形態では、糖類は、単糖又は二糖である。幾つかの実施形態では、糖類は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、キシロース、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール若しくはキシリトール又はそれらの組み合わせである。

幾つかの実施形態では、医薬製剤は、約０．０１％～約４０（ｗ／ｖ）％、又は約００．１％～約２０（ｗ／ｖ）％、又は約１％～約１５（ｗ／ｖ）％、又は約５％～約１２（ｗ／ｖ）％、又は約７％～約１２（ｗ／ｖ）％の濃度で糖類を含む。幾つかの実施形態では、医薬製剤は、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも３０％又は少なくとも４０（ｗ／ｖ）％の濃度で少なくとも１種の糖類を含む。幾つかの実施形態では、医薬製剤は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％又は約１５（ｗ／ｖ）％の濃度で少なくとも１種の糖類を含む。幾つかの実施形態では、医薬製剤は、約１％～約１５（ｗ／ｖ）％の濃度で少なくとも１種の糖類を含む。さらなる別の実施形態では、医薬製剤は、約７％、約７．５％、約８％、約８．５％、約９％、約９．５％、約１０％、約１０．５％、約１１％、約１１．５％、若しくは約１２（ｗ／ｖ）％の濃度で少なくとも１種の糖類を含む。幾つかの実施形態では、医薬製剤は、約７％～約１２（ｗ／ｖ）％の濃度で少なくとも１種の糖類を含む。幾つかの実施形態では、少なくとも１種の糖類は、約９（ｗ／ｖ）％の濃度で製剤中に存在する。幾つかの実施形態では、糖類はスクロースであり、約９％～約１２（ｗ／ｖ）％の範囲で製剤中に存在する。

幾つかの実施形態では、医薬製剤は、１０ｍＭのグルタミン酸塩、９（ｗ／ｖ）％のスクロース及び０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、ここで医薬製剤のｐＨは、５．２である。

幾つかの実施形態では、医薬製剤は、１０ｍＭの酢酸塩、９（ｗ／ｖ）％のスクロース及び０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、ここで医薬製剤のｐＨは、５．２である。

安定性
実施例において記載したように、最適化ｐＨ範囲（ｐＨ４．８～ｐＨ５．２）の同定は、様々な時点に４℃及び４０℃の両方で液体製剤として二重特異性抗体コンストラクトの貯蔵を可能にする。二重特異性抗体コンストラクト製剤の安定性は、幾つかの方法で定量することができる。幾つかの実施形態では、抗体製剤の安定性は、サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）、サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＨＰＬＣ）、カチオン交換高性能液体クロマトグラフィー（ＣＥ－ＨＰＬＣ）、動的光散乱法、分析的遠心分離法（ＡＵＣ）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、等電点電気泳動法及びイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）によって特徴付けられる。幾つかの実施形態では、抗体製剤の安定性は、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動法（ＣＥ－ＳＤＳ）及び／又はドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって測定される部分解離によって特徴付けられる。幾つかの実施形態では、製剤の安定性は、減少したキャピラリー電気泳動法－ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ－ＳＤＳ）によって評価される。ｒＣＥ－ＳＤＳ法は、還元条件下で、重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、非グリコシル化ＨＣ（ＮＧＨＣ）、及びその他の微細なピーク種及び基を分離する。

幾つかの実施形態では、製剤の安定性は、二重特異性抗体コンストラクトの高分子量（ＨＭＷ）種の量又は様々な時点の貯蔵条件下での二重特異性抗体コンストラクトのＨＭＷ種の量の増加速度によって特徴付けられる。幾つかの実施形態では、ＨＭＷ種の量は、およそ２～８℃（例えば、４℃）又は４０℃で貯蔵した場合の１週間後、２週間後、１カ月後、３カ月後、６カ月後、１２カ月後、１８カ月後又は２カ年後に決定される。幾つかの実施形態では、ＨＭＷ種の増加速度は、およそ２～８℃（例えば、４℃）又は４０℃で貯蔵した場合の１週間後、２週間後、１カ月後、３カ月後、６カ月後、１２カ月後、１８カ月後又は２カ年後に決定される。幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのＨＭＷ種は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定される。幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのＨＭＷ種は、ＳＥ－ＵＨＰＬＣによって測定される。

二重特異性抗体コンストラクトの安定性、及び製剤が二重特異性抗体コンストラクトの安定性を維持する能力は、長期間（例えば、数週間又は数カ月間）にわたって評価することができる。製剤の状況では、安定性製剤とは、その中の二重特異性抗体コンストラクトが本質的に、例えば、凍結／解凍、機械的混合及び凍結乾燥等その物理的及び／又は化学的完全性並びに貯蔵後及びプロセス中の生物学的活性を維持する製剤である。二重特異性抗体コンストラクトの安定性は、例えば、高分子量（ＨＭＷ）凝集体の形成のレベル及び／又は速度、電荷プロファイルの変化、及び粒径の変化によって評価することができる。

幾つかの実施形態では、本明細書で記載した、インタクトなＢｉＴＥ（登録商標）分子若しくはメイン種、又は高分子量（ＨＭＷ）種（即ち、凝集体）、又は低分子量（ＬＭＷ）種（即ち、断片）等の二重特異性抗体コンストラクトの任意の特定の種の相対的価値は、全生成物の各数値と関連して表示される。例えば、幾つかの実施形態では、１０％以下（例えば、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下）の二重特異性抗体コンストラクトは、製剤中にＨＭＷ種として存在する。幾つかの実施形態では、製剤中のＨＭＷ種の量は、２～８℃での貯蔵後に１カ月以上（例えば、１カ月、３カ月、６カ月、１２カ月、１８カ月又は２カ年）にわたり１０％未満（例えば、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％以下）増加する。幾つかの実施形態では、製剤中のＨＭＷ種の量は、４０℃での貯蔵後に１カ月以上（例えば、１週間、２週間、１カ月、３カ月、６カ月、又は１カ年）にわたり１０％以下（例えば、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下）増加する。幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのＨＭＷ種は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定される。幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのＨＭＷ種は、ＳＥ－ＵＨＰＬＣによって測定される。

幾つかの実施形態では、製剤の安定性は、二重特異性抗体コンストラクトの低分子量（ＬＭＷ）種の量又は様々な時点の貯蔵条件下での二重特異性抗体コンストラクトのＬＭＷ種の量の増加速度によって特徴付けられる。幾つかの実施形態では、ＬＭＷ種の量は、２～８℃で貯蔵した場合に、１カ月後、３カ月後、６カ月後、１２カ月後、１８カ月後又は２年後に決定される。幾つかの実施形態では、ＬＭＷ種の量は、貯蔵中又は４０℃で１週間後、２週間後、１カ月後、３カ月後、６カ月後、又は１年後に決定される。幾つかの実施形態では、ＬＭＷ種の増加の速度は、およそ２～８℃で貯蔵中に１カ月後、３カ月後、６カ月後、１２カ月後、１８カ月後又は２年後に決定される。幾つかの実施形態では、ＬＭＷ種の増加速度は、貯蔵中又は４０℃で１週間後、２週間後、１カ月後、３カ月後、６カ月後、又は１年後に決定される。幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのＬＭＷ種は、ｒＣＥ－ＳＤＳによって決定される。

幾つかの実施形態では、１０％以下（例えば、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下）の二重特異性抗体コンストラクトは、製剤中にＬＭＷ種として存在する。幾つかの実施形態では、製剤中のＬＭＷ種の量は、２～８℃での貯蔵後に１カ月以上（例えば、１カ月、３カ月、６カ月、１２カ月、１８カ月又は２カ年）にわたり１０％未満（例えば、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％以下）増加する。幾つかの実施形態では、製剤中のＬＭＷ種の量は、４０℃での貯蔵後に１カ月以上（例えば、１週間、２週間、１カ月、３カ月、６カ月、又は１年間）にわたり１０％以下（例えば、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下）増加する。幾つかの実施形態では、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトのＬＭＷ種は、ｒＣＥ－ＳＤＳによって測定される。

幾つかの実施形態では、製剤中のインタクトなＢｉＴＥ（登録商標）分子（即ち、メインピーク種）のパーセントは、製剤中の全タンパク質含量の９０％超（９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）である。

一実施形態では、液体製剤は、１カ月にわたり、約２～８℃で貯蔵後に安定性であり、インタクトなＢｉＴＥ（登録商標）分子（即ち、メインピーク種）のパーセントは、製剤中の全タンパク質含量の９５％超である。別の実施形態では、液体製剤は、１カ月にわたり、約４０℃で貯蔵後に安定性であり、インタクトなＢｉＴＥ（登録商標）分子（即ち、メインピーク種）のパーセントは、製剤中の全タンパク質含量の９５％超である。

本明細書に記載した製剤の安定性は、更に電荷分布、例えば、抗体の電荷変化ピークの量における変化によって特徴付けられる。例えば、幾つかの実施形態では、製剤中の酸性ピーク（例えば、製剤中の相対的に低い等電点（ｐＩ）を有する電荷変化である脱アミド化）の量は、少なくとも１カ月（例えば、１カ月、３カ月、６カ月又は１２カ月）にわたり４℃で貯蔵された場合に、２％未満（例えば、２％、１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％以下）増加する。幾つかの実施形態では、製剤中の塩基性ピーク（例えば、製剤中の相対的に高いｐＩを有する電荷変化）の量は、少なくとも１カ月（例えば、１カ月、３カ月、６カ月又は１２カ月）にわたり４℃で貯蔵された場合に、６％未満（例えば、６％、５％、４％、３％、２％又は１％）増加する。

幾つかの実施形態では、製剤中の酸性ピークの量は、少なくとも１週間（例えば、１週間、２週間、１カ月又は３カ月）にわたり４０℃で貯蔵された場合に、３０％未満（例えば、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下）増加する。幾つかの実施形態では、製剤中の塩基性ピーク（例えば、相対的に高いｐＩを有する電荷変化）の量は、少なくとも１週間（例えば、１週間、２週間、１カ月又は３カ月）にわたり４℃で貯蔵された場合に、１５％未満（例えば、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％以下）増加する。

本明細書に記載した液体製剤の安定性は、更に貯蔵条件下で液体製剤中の二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価のレベルを決定することによって評価され得る。二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価は、癌腫細胞株でのルミネセンスの消失によって細胞死を測定する細胞に基づくバイオアッセイにより決定することができる。試験試料の応答を参照標準物質の応答と比較することにより、試験試料の生物学的活性を決定する（相対的力価）。幾つかの実施形態では、実施例３に記載したように評価して、製剤中の二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価は、約４０℃での１カ月の貯蔵後に約３０％超（例えば、約３５％、４０％、５０％、５５％、６０％）である。

製剤の治療上の使用
本明細書に記載した製剤は、治療、それを必要とする対象における癌を緩和するための治療における医薬製剤として有用である。用語「必要とする対象」又は「治療を必要とする」対象は、既にその障害を有する対象及びその障害を予防しようとする対象を含む。「必要とする対象」又は「患者」は、予防的治療又は治療的治療の何れかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を含む。「治療」という用語は、治療的処置及び予防的又は防止的手段の両方を指す。治療は、疾患、疾患の症状又は疾患素因を治癒する、治す、軽減する、緩和する、変化させる、矯正する、改善する、好転させる又は影響を与えることを目的とした、疾患／障害、疾患／障害の症状又は疾患／障害の素因を有する患者の身体、単離された組織又は細胞に対する製剤の適用又は投与を含む。

本明細書で使用する用語「改善」は、本明細書に記載した抗原結合タンパク質を含む製剤のそれを必要とする対象への投与による、本明細書の以下に示す腫瘍又は癌若しくは転移性癌を有する患者の疾患状態のあらゆる好転を指す。このような好転はまた、患者の腫瘍又は癌又は転移性癌の進行を遅らせるか又は止めることであると見なすこともできる。本明細書で使用する用語「予防」は、本明細書に記載した抗原結合タンパク質（即ち、二重特異性抗体コンストラクト）を含む組成物のそれを必要とする対象への投与による、本明細書の以下に示す腫瘍又は癌若しくは転移性癌を有する患者の発症又は再発の回避を意味する。

本開示は、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の本明細書に記載した組み換えタンパク質又は医薬製剤と投与することを含む方法を提供する。所定の実施形態では、対象は、ヒトである。所定の実施形態では、癌は、固形腫瘍である。

幾つかの実施形態では、癌は、脳腫瘍、膀胱癌、乳癌、明細胞腎臓癌、子宮頸癌、結腸及び直腸癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、口唇及び口腔癌、肝臓癌、肺扁平上皮細胞癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、口腔癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、頭頸部の扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＨＮ）、トリプルネガティブ乳癌、又は甲状腺癌である。

幾つかの実施形態では、癌は、副腎皮質腫瘍、胞巣状軟部肉腫、癌腫、軟骨肉腫、大腸癌、類腱腫、線維形成小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、内胚葉洞腫瘍、類上皮型血管内皮腫、ユーイング肉腫、胚細胞腫瘍、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎腫、神経芽細胞腫、非裂孔性軟部組織肉腫（ＮＲＳＴＳ）、骨肉腫、傍脊椎肉腫、腎細胞癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、骨膜肉腫又はウィルムス腫瘍である。

幾つかの実施形態では、癌は、急性リンパ芽急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。

幾つかの実施形態では、癌は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である。

実際に、治療され得る癌としては、胞巣状軟部肉腫、骨肉腫、肛門、肛門管若しくは肛門直腸の癌、目の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部、胆嚢、若しくは胸膜の癌、鼻、鼻孔、若しくは中耳の癌、口腔の癌、外陰部の癌、食道癌、消化管カルチノイド腫瘍、咽頭癌、鼻咽頭、腹膜、胸膜、及び腸間膜の癌、咽頭癌、小腸癌、軟部組織癌、胃癌、精巣癌、尿管癌並びに膀胱癌が挙げられるが、これらに限定されない。

投与経路
好ましくは、医薬製剤は、非経口、例えば、静脈内、皮下、又は筋肉内投与される。非経口投与は、ボーラス注射等の注射、又は持続注入等の注入によって達成され得る。投与は、長期間放出のためのデポーを介して実現され得る。幾つかの実施形態では、製剤は、初回のボーラス後に持続注入によって静脈内投与されて、薬物製品の治療上の循環レベルを維持する。幾つかの実施形態では、製剤は、１回用量として投与される。医薬製剤は、医療機器を用いて投与され得る。医薬製剤を投与するための医療機器の例は、米国特許第４，４７５，１９６号明細書；同第４，４３９，１９６号明細書；同第４，４４７，２２４号明細書；同第４，４４７，２３３号明細書；同第４，４８６，１９４号明細書；同第４，４８７，６０３号明細書；同第４，５９６，５５６号明細書；同第４，７９０，８２４号明細書；同第４，９４１，８８０号明細書；同第５，０６４，４１３号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３８３，８５１号明細書；及び同第５，３９９，１６３号明細書に記載されている。

本開示は、更に製剤の中断のない投与もまた企図している。非限定的な例として、中断のない又は実質的に中断のない、即ち、連続的な投与は、患者体内への治療薬の流入を調整するための、患者が装着した小型ポンプシステムによって実現され得る。医薬製剤は、前記ポンプシステムを使用することによって投与することができる。そのようなポンプシステムは、一般に当技術分野で知られており、通常、注入する治療薬を含有するカートリッジの定期交換に依拠する。そのようなポンプシステムでカートリッジを交換する際、交換時以外には中断しない患者体内への治療薬の流入に一時的な中断が結果として生じる場合がある。そのような場合でも、カートリッジ交換前の投与段階及びカートリッジ交換後の投与段階は、依然として、ともにこのような治療薬の「中断のない投与」を構成する本発明の医薬的手段及び方法の意味の範囲内と見なされるであろう。

製剤の連続投与又は中断のない投与は、流体をレザバーから送り出すための流体送出機構及び送出機構を駆動するための駆動機構を含む、流体送達デバイス又は小型ポンプシステムによる静脈内又は皮下投与であり得る。皮下投与のためのポンプシステムは、患者の皮膚に穿通し、好適な製剤を患者の体内に送達するための針又はカニューレを含み得る。前記ポンプシステムを、静脈、動脈又は血管を問わず、患者の皮膚に直接固定又は装着することでポンプシステムと患者の皮膚とを直接接触させることが可能になる。このポンプシステムは、患者の皮膚に２４時間～数日間装着することができる。レザバーの容積が小さい小型のポンプシステムの場合もある。非限定的な例として、投与される好適な医薬製剤のためのレザバーの容積は、０．１～５０ｍｌであり得る。

キット
さらなる態様として、本明細書に記載されるのは、対象への投与のためのそれらの使用を容易にする様式でパッケージ化された本明細書に記載される１つ以上の医薬組成物を含むキットである。一実施形態では、そのようなキットは、任意選択により容器に貼付されたラベルを伴って密封ボトル、容器、単回使用若しくは複数回使用用バイアル、プレフィルドシリンジ、又はプレフィルド注射デバイス等の容器にパッケージ化されるか、又は方法を実践する際の化合物又は製剤の使用を記載するパッケージに含まれる、本明細書に記載される化合物又は製剤（例えば、本明細書に記載される抗体を含む製剤）を含む。一態様では、製剤は、単位剤形にパッケージ化される。キットはさらに、特定の投与経路に従って、製剤を投与するのに好適なデバイスを含んでもよい。好ましくは、キットは、本明細書に記載される抗体又は本明細書に記載される製剤の使用を記載するラベルを含有する。

本明細書に記載した医薬製剤は、様々な形態、例えば固体、液体、凍結、気体又は凍結乾燥の形態で製剤化することができ、とりわけ軟膏、クリーム、経皮パッチ、ゲル、粉末、錠剤、溶液、エアロゾル、顆粒剤、丸剤、懸濁液、エマルジョン、カプセル、シロップ剤、液体、エリキシル剤、抽出物、チンキ又は流エキスの形態であり得る。

一般に、本発明の医薬組成物に関して、様々な保管形態及び／又は剤形が、即ち、意図される投与経路、送達形式及び所望の投与量に応じて考えられる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（２０１２）を参照されたい）。当業者であれば、このような特定の剤形の選択は、例えば、抗体の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度及びインビボでのクリアランス速度に影響を及ぼし得ることを認識するであろう。

例えば、医薬製剤中の主なビヒクル又は担体は、本質的に水性又は非水性であり得る。好適なビヒクル又は担体は、注射用水、生理食塩水溶液又は人工脳脊髄液であり得、場合により非経口投与用製剤で一般的な他の材料が補充される。中性緩衝生理食塩水、又は血清アルブミンを混合した生理食塩水が、更なる例示的なビヒクルである。

材料及び方法
安定性試料は、薬物製品の臨界的品質特性を監視するために様々な技術を使用して分析した。下記の安定性を示すアッセイは、加速条件で実施した：凝集を監視するためのＳＥ－ＵＨＰＬＣ（サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー）、クリッピングを監視するためのｒＣＥ－ＳＤＳ及びマルチ特性分析（ＭＡＭ）及び可視粒子分析のための外観検査

サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＨＰＬＣ）は、タンパク質をそれらの流体力学的体積における差に基づいて分離する。より高い流体力学的体積を有する分子は、より小さい体積を有する分子よりも早く溶出する。試料は、ＳＥ－ＵＨＰＬＣカラム（ＢＥＨ２００、４．６ｘ３００ｍｍ、（ＷａｔｅｒｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、１８６００５２２６））上にロードされ、均一濃度で分離され、溶出液はＵＶ吸光度によって監視される。積分された総面積と比較した分離された各成分のパーセンテージを計算することによって純度が決定される。ＳＥ－ＵＨＰＬＣの設定は以下のとおりである：流速：０．４ｍＬ／分、実行時間：１２分、ＵＶ検出：２８０ｎｍ、カラム温度：周囲温度、標的タンパク質負荷：６μｇ、タンパク質適合性フローセル：５ｍｍ。

還元キャピラリー電気泳動－ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ－ＳＤＳ）は、還元及び変性条件下でそれらの流体力学的サイズにおける差に基づいてタンパク質を分離する。タンパク質種は、アニオン性洗剤であるＳＤＳに結合しており、ＳＤＳゲル緩衝剤が充填された裸の溶融石英キャピラリー内に電気動力学的に注入される。電圧は、その下でＳＤＳコーティングされたタンパク質が親水性ポリマーベース溶液中での移行におけるそれらの差によって分離される、キャピラリー全体に印加される。タンパク質は、それらがＵＶ検出窓を通過するにつれて光ダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器によって検出される。純度は、リーチ成分の正確なピーク面積率を決定することによって評価される。ｒＣＥ－ＳＤＳ法は、還元条件下で、重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、非グリコシル化ＨＣ（ＮＧＨＣ）、及びその他の微細なピーク種及び基を分離する。

実施例１－ＣＥ－ＳＤＳによって評価されるＬＭＷ種の増加したｐＨ還元パーセンテージ
下記の製剤中でのＢｉＴＥ（登録商標）－Ｉ、ＢｉＴＥ（登録商標）－Ｃ、ＢｉＴＥ（登録商標）－Ｄ及びＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇのそれぞれの安定性を様々なｐＨ（ｐＨ４．２、４．８及び５．５）での加速安定性試験において評価した。製剤は、４０℃で１カ月貯蔵し、ＬＭＷ種のレベルを次に還元キャピラリー電気泳動－ドデシル硫酸ナトリウム法（ｒＣＥ－ＳＤＳ）によって分析した。

試験した液体製剤：１ｍｇ／ｍＬのＢｉＴＥ分子、１０ｍＭのＬ－グルタミン酸、９（ｗ／ｖ）％のスクロース、０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０。

図１及び下記の表１に示したように、ｐＨ４．８及びｐＨ５．２での液体製剤は、１カ月にわたり４０℃での貯蔵後に、同一貯蔵条件下で貯蔵したｐＨ４．２の液体製剤と比較した場合に、減少したパーセンテージを有していた。

実施例２－ＭＡＭによるＬＭＷ種の評価
４０℃で１カ月の貯蔵後に、ｐＨ４．２、ｐＨ４．８及びｐＨ７．４での液体製剤（実施例１に記載した）中のＢｉＴＥ－Ｇのクリッピング率（％）をＭＡＭ（マルチ特性分析法（ＭＡＭ））によって評価した。手短には、試料を３０ｋＤａのＭＷＣＯスピンフィルター上に捕捉して変性させ、及び次にフィルター上でアルキル化した。引き続いて、試料は、消化用緩衝剤中に緩衝剤交換し、続いてトリプシンを用いて消化した。消化した試料を遠心し、次にトリプティックペプチドを捕捉した。次にヒト好中球エラスターゼを用いた連続的オンフィルター消化を実施し、結果として生じたペプチドを収集し、トリプティックペプチドと合わせた。消化は、酢酸緩衝剤（ｐＨ４．８）中に８Ｍのグアニジンを添加することによってクエンチした。次にペプチドは、Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０ＵＰＬＣ（ＷａｔｅｒｓＢＥＨＣ１８カラム）を使用するＬＣ－ＭＳ及びデータ依存性獲得を使用するＴｈｅｒｍｏＱＥｘａｃｔｉｖｅＢｉｏｐｈａｒｍａを用いて分析した。生じたデータは、配列カバレージを決定するためにＭａｓｓＡｎａｌｙｚｅｒを用いて検索し、Ｓｋｙｌｉｎｅワークブックスを用いて定量を実施した。観察された化学的修飾は、商業的に容認できる範囲内に含まれた（データは示していない）。

実施例３－ＢｉＴＥ分子（登録商標）は、４．２超のｐＨで力価を保持する。
ｐＨ４．２及びｐＨ４．８での液体製剤中のＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇの相対的力価（実施例１に記載）についても２カ年の２～８℃での貯蔵後に評価した。手短には、癌腫細胞株での発光喪失による細胞死を測定する細胞に基づくバイオアッセイにより、ＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇの力価を測定した。試験試料の応答を参照標準物質の応答と比較することにより、試験試料の生物学的活性を決定した（相対的力価）。このアッセイは、ｐＨ４．２及びｐＨ４．８の両方での液体製剤中のＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇが２年にわたり２～８℃での貯蔵後に許容できるレベルの力価を証明した。

実施例４－ＢｉＴＥ（登録商標）分子のクリッピング速度は様々なｐＨで変動する。
ｐＨ４．２及びｐＨ４．８での液体製剤（実施例１に記載）中のＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇのクリッピング速度をｒＣＥ－ＳＤＳによって評価した。図２及び下記の表２に示したように、ｐＨ４．８での液体製剤は、１カ月にわたり４０℃で貯蔵した場合のｐＨ４．２の液体製剤に比較して、クリッピングレベルの２７％の減少を証明した。クリッピングレベルにおける２９％の減少は、更に２カ年にわたり２～８℃で貯蔵した場合にｐＨ４．２の液体製剤と比較して、ｐＨ４．８の液体製剤においても観察された。

実施例５－ＳＥ－ＵＨＬＰＣによるＨＭＷ種の評価
高分子量（ＨＭＷ）種のパーセントは、８℃又は－３０℃の何れかで１カ月、３カ月、６カ月、１２カ月、１８カ月及び２カ年の何れかの貯蔵後にｐＨ４．２及びｐＨ４．８でＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇを含む実施例１に記載した液体製剤中でのサイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＨＬＰＣ）によって評価した。この分析は、ｐＨ４．２製剤及びｐＨ４．８製剤の両方においてＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇに付いて観察されたパーセントが、試験した全時点（データは示していない）で２～８℃での貯蔵条件下で０．３５％未満であることを証明した。この分析は、ｐＨ４．２製剤及びｐＨ４．８製剤の両方においてＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇに付いて観察されたパーセントが、試験した全時点（データは示していない）で－３０℃での貯蔵条件下で１．３％未満であることを証明した。

実施例６－様々な貯蔵条件下でのＬＭＷ種及び低ＨＭＷ種両方についての評価
様々な液体製剤中のＢｉＴＥ（登録商標）－Ｇ及びＢｉＴＥ（登録商標）－ＤのＬＭＷ及びＨＭＷ種のパーセントは、下記に規定した製剤それぞれについて評価した。ＬＭＷのパーセントは、還元キャピラリー電気泳動（ｒＣＥ）によって決定し、ＨＭＷのパーセントは、サイズ排除クロマトグラフ（ＳＥＣ）によって決定した。試験した液体製剤は、下記のとおりであった：
製剤Ａ：１ｍｇ／ｍＬのＢｉＴＥ（登録商標）分子、１０ｍＭのＬ－グルタミン酸、９（ｗ／ｖ）％のスクロース、０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、ｐＨ３．８；
製剤Ｂ：１ｍｇ／ｍＬのＢｉＴＥ（登録商標）分子、１０ｍＭのＬ－グルタミン酸、９重／容量％のスクロース、０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、ｐＨ４．８；
製剤Ｃ：１ｍｇ／ｍＬのＢｉＴＥ（登録商標）分子、１０ｍＭのＬ－グルタミン酸、９重／容量％のスクロース、０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、ｐＨ５．２；
製剤Ｄ：１ｍｇ／ｍＬのＢｉＴＥ（登録商標）分子、１０ｍＭの酢酸塩、９（ｗ／ｖ）％のスクロース、０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、ｐＨ５．２；
製剤Ｅ：１ｍｇ／ｍＬのＢｉＴＥ（登録商標）分子、１０ｍＭのリン酸塩、９（ｗ／ｖ）％のスクロース、０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、ｐＨ７．４。

結果は、図３Ａ～３Ｄ及び下の表３～６に示した：

図３Ａ～３Ｄに示したように、製剤Ｂ（ｐＨ４．８）及び製剤Ｃ（ｐＨ５．２）は、４週間にわたり４℃及び４０℃の両方での貯蔵後に製剤Ａ（ｐＨ３．８）及び製剤Ｅ（ｐＨ７．４）と比較してＬＭＷ及びＨＭＷ種の両方について最低パーセンテージを示していた。製剤Ｄ（ｐＨ５．２）もまた、ＬＭＷ及びＨＭＷの両方の低パーセンテージを示したが、これは製剤における緩衝剤の選択がＢｉＴＥ（登録商標）分子の断片化になんの影響も及ぼさないことを証明した。本実施例において提供したデータは、製剤内の緩衝剤とは無関係に、最適化ｐＨ範囲（ｐＨ４．８～ｐＨ５．５）の同定は、様々な時点に４℃及び４０℃の両方で液体製剤として二重特異性抗体コンストラクトを含む医薬製剤の貯蔵を可能にすることを証明している。

Claims

（ａ）二重特異性抗体コンストラクト、
（ｂ）糖類、
（ｃ）界面活性剤、及び
（ｄ）緩衝剤、を含む安定性水性医薬製剤であって、
前記製剤のｐＨは、約４．８～約５．５である、安定性の水性医薬製剤。
前記製剤のｐＨは、約４．８～約５．３である、請求項１に記載の製剤。
前記製剤のｐＨは、約５．２である、請求項１又は２に記載の製剤。
前記糖類は、単糖又は二糖である、請求項１～３の何れか一項に記載の製剤。
前記糖類は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、キシロース、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール又はキシリトールである、請求項１～４の何れか一項に記載の製剤。
前記界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である、請求項１～５の何れか一項に記載の製剤。
前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、又はトリトンＸ－１００である、請求項１～６の何れか一項に記載の製剤。
前記界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０又はポリソルベート８０である、請求項７に記載の製剤。
前記界面活性剤は、ポロキサマー１８８又はポロキサマー４０７である、請求項７に記載の製剤。
前記緩衝剤は、酢酸緩衝剤、グルタミン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、乳酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、酒石酸緩衝剤、フマル酸緩衝剤、マレイン酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、又はリン酸緩衝剤である、請求項１～９の何れか一項に記載の製剤。
前記製剤は、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記二重特異性抗体コンストラクトを含む、請求項１～１０の何れか１項に記載の製剤。
前記二重特異性抗体コンストラクトは、標的細胞表面抗原に結合する第１の結合ドメイン及びＴ細胞の表面上のヒトＣＤ３に結合する第２の結合ドメインを含む、請求項１～１２の何れか一項に記載の製剤。
アミノからカルボキシルの順で、ヒンジ－ＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメイン－リンカー－ヒンジ－ＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメインを含む第３のドメインを更に含む、請求項１２に記載の製剤。
前記第１及び第２の結合ドメインのそれぞれは、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む、請求項１３に記載の製剤。
前記二重特異性抗体コンストラクトは、単鎖の抗体コンストラクトである、請求項１３又は１４に記載の製剤。
前記標的細胞表面抗原は、ＣＤＨ１９、ＭＳＬＮ、ＤＬＬ３、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ７０、ＭＵＣ１７又はＣＬＤＮ１８．２である、請求項１２～１５の何れか一項に記載の組成物。
前記二重特異性抗体コンストラクトの第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号２４～２９、（ｂ）配列番号３４～３９、（ｃ）配列番号７８～８３、（ｄ）配列番号１０～１５、（ｅ）配列番号４６～５１、（ｆ）配列番号８８～９３、（ｇ）配列番号６７～７２、（ｈ）配列番号５６～６１、（ｉ）配列番号１１２～１１７、（ｊ）配列番号１００～１０５、（ｋ）配列番号１４８～１５３、配列番号１５７～１６２、又は配列番号１６６～１７１、若しくは配列番号１７５～１８０、（ｌ）配列番号１３２～１３７、又は（ｍ）配列番号１２３～１２８に示した１セットの６ＣＤＲを含む、請求項１２～１６の何れか一項に記載の組成物。
前記二重特異性抗体コンストラクトの第２の結合ドメインは、配列番号１～６に示した１セットの６ＣＤＲを含む、請求項１２～１７の何れか一項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが：
（ａ）配列番号３０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号３１に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｂ）配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｃ）配列番号８４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号８５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｄ）配列番号１６若しくは１７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１８若しくは１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｅ）配列番号５２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号５３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｆ）配列番号９４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号９５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｇ）配列番号７３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号７４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｈ）配列番号６２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号６３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｉ）配列番号１１８に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｊ）配列番号１５４、１６３、１７２、若しくは１８１に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１５５、１６４、１７３若しくは１８２に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｋ）配列番号１０６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１０７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；
（ｌ）配列番号１３８若しくは１４３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１３９若しくは１４４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域；又は
（ｍ）配列番号１２９に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域、を含む、請求項１２～１８の何れか一項に記載の組成物。
前記第２の結合ドメインは、配列番号７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ領域及び配列番号８に示したアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む、請求項１２～１９の何れか一項に記載の組成物。
前記二重特異性抗体コンストラクトは、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号３３、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号５５、配列番号６５、配列番号６６、配列番号５５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８７、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１３１、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１５６、配列番号１６５、配列番号１７４、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７又は配列番号１８８に示したアミノ酸配列を含む、請求項１２～２０の何れか一項に記載の製剤。
前記製剤は、１カ月の約４０℃での貯蔵後に前記二重特異性抗体コンストラクトの約１０％未満の低分子量（ＬＭＷ）クリッピング生成物を含む、請求項１～２１の何れか一項に記載の製剤。
前記製剤は、１カ月の約４０℃での貯蔵後に前記二重特異性抗体コンストラクトの約８％未満の低分子量（ＬＭＷ）クリッピング生成物を含む、請求項２２に記載の製剤。
前記製剤は、１カ月の約４０℃での貯蔵後に前記二重特異性抗体コンストラクトの約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）クリッピング生成物を含む、請求項２２又は２３に記載の製剤。
前記製剤は、１カ月の約４０℃での貯蔵後に前記二重特異性抗体コンストラクトの約３％未満の低分子量（ＬＭＷ）クリッピング生成物を含む、請求項２２～２４の何れか一項に記載の製剤。
前記製剤は、約１カ月の約４０℃での貯蔵後に前記二重特異性抗体コンストラクトの約５％未満の高分子量（ＨＭＷ）凝集体を含む、請求項２２～２５の何れか一項に記載の製剤。
前記二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価は、約４０℃での約１カ月後に約３０％超である、請求項２２～２６の何れか一項に記載の製剤。
前記二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価は、約４０℃での約１カ月後に約５０％超である、請求項２２～２６の何れか一項に記載の製剤。
前記二重特異性抗体コンストラクトの相対的力価は、約４０℃での約１カ月後に約６０％超である、請求項２２～２６の何れか一項に記載の製剤。
その必要がある対象において癌を治療する方法であって、請求項１～２９の何れか一項に記載の製剤を前記対象に投与することを含む、方法。
前記対象への前記投与の前に、前記製剤を薬学的に許容される液体で希釈する工程を更に含む、請求項３０に記載の方法。
前記製剤は、静脈内投与によって投与される、請求項３０又は３１に記載の方法。