JP2023513059A - 抗ミューラー管ホルモン受容体２抗体及び使用方法 - Google Patents

Abstract

本明細書において、抗ミューラー管ホルモン受容体２（ＡＭＨＲ２）抗体、及び例えばがんの治療におけるそのような抗体の使用方法を提供する。

Description

発明の詳細な説明

〔技術分野〕
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１月３１日に提出された米国仮出願番号６２／９６８，８４０の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９に基づく利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

〔背景技術〕
上皮性卵巣癌（ＥＯＣ）は、卵巣癌の最も一般的かつ致命的な形態であり、卵巣癌全体の約８５％を占める。ＥＯＣの発症に関連する一連の症状が非決定的であり、早期発見のための効果的なバイオマーカーが存在しないことから、多くの場合、進行した病期になるまで診断が遅れ、その結果、現在の標準治療法によれば、疾患の再発率は高く、予後不良がもたらされる。

ＡＭＨＲ２は、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーＩＩ型受容体に相同なセリン／スレオニンキナーゼ受容体である。抗ミューラー管ホルモン（ＡＭＨ）は、ＡＭＨＲ２の同族リガンドであり、ＡＭＨの細胞外ドメイン（ＡＭＨＲ２－ＥＤ）へのＡＭＨの結合が、細胞周期の停止とプログラム細胞死へのシグナルとなり、男性の発達時のミューラー管の縮退、ならびに成人女性における卵母細胞発達の調節、及び卵巣予備能と妊孕性の制御がもたらされる。ＡＭＨＲ２は、大多数のヒトＥＯＣで過剰発現している。

したがって、ＡＭＨＲ２を標的とする治療法を含む、がん、特にＥＯＣを治療及び管理するための新規かつ効果的な治療法の必要性が緊急に必要とされている。

〔発明の概要〕
本発明は、部分的に、がん、例えば、卵巣癌の治療に有用な抗ＡＭＨＲ２抗体及びＡＭＨＲ２ワクチン製剤の発見に基づいている。

一態様では、ヒト抗ミューラー管ホルモン受容体ＩＩ（ＡＭＨＲ２）に結合する単離された抗体を提供し、この抗体は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基１１～３２（配列番号１２）内に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基２０～２６（配列番号１３）内に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基２２～２６（配列番号１４）内に結合する。

一態様では、ヒトＡＭＨＲ２（配列番号９）に結合する単離された抗体を提供し、この抗体は、ヒトＡＭＨＲ２への結合について、抗ミューラー管ホルモン（ＡＭＨ）と競合する。一態様では、ヒトＡＭＨＲ２（配列番号９）に結合する単離された抗体を提供し、この抗体は、ヒトＡＭＨＲ２への結合について、本明細書に開示する抗体と競合する。

一態様では、３つの重鎖ＣＤＲ配列、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重（ＶＨ）鎖配列を含む重鎖、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ配列、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖配列を含む軽鎖を含む単離された抗体を提供し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は配列番号３に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は配列番号４に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は配列番号５に示す配列を含み、そしてＣＤＲ－Ｌ３は配列番号６に示す配列を含む。

前述の抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、配列番号７に示す配列を含み、及び／またはＶＬ鎖配列は、配列番号８に示す配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、本質的に配列番号７に示す配列からなり、及び／またはＶＬ鎖配列は、本質的に配列番号８に示す配列からなる。いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、配列番号７に示す配列からなり、及び／またはＶＬ鎖配列は、配列番号８に示す配列からなる。

前述の抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、この抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による測定で、約０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、または５×１０－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＡＭＨＲ２に結合する。

前述の抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、この抗体は、ヒト化、ヒト、またはキメラ抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖ＣＤＲは、ヒトまたはヒト化免疫グロブリンフレームワーク領域の間に挿入される。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

前述の抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるクラスの重鎖ヒト定常領域またはヒトＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖ヒト定常領域またはヒトＦｃ領域は、クラスＩｇＧ及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるサブクラスのＦｃ領域であり、例えば、抗体は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖ヒト定常領域またはヒトＦｃ領域は１つ以上のアミノ酸置換を含み、この１つ以上の置換は、１つ以上の置換を含まない定常領域またはＦｃと比較して、抗体半減期の増加、ＡＤＣＣ活性の増加、ＡＤＣＰ活性の増加、またはＣＤＣ活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、重鎖ヒト定常領域またはヒトＦｃ領域は：ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する。

前述の抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、細胞（例えば、ＡＭＨＲ２＋細胞）のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。

一態様では、前述の抗体、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖、またはその抗原結合部分のいずれかをコードする単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを提供する。いくつかの実施形態では、単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットは、ｃＤＮＡを含む。一態様では、前述のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットのいずれかを含むベクターまたはベクターのセットを提供する。一態様では、前述のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットのいずれか、あるいは前述のベクターまたはベクターのセットのいずれかを含む宿主細胞を提供する。一態様では、（ｉ）前述の宿主細胞のいずれかを、宿主細胞が抗体を発現するような条件下でインキュベートし、そして（ｉｉ）抗体を精製することを含む、抗体の産生方法を提供する。

一態様では、前述の抗体のいずれかと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。一態様では、本明細書において、前述の抗体または組成物のいずれかと、使用説明書とを含むキットを提供する。

一態様では、本明細書において、細胞表面上でＡＭＨＲ２を発現する細胞（ＡＭＨＲ２＋細胞）を殺傷、無効化、または枯渇させる方法であって、ＡＭＨＲ２＋細胞を前述の抗体または組成物のいずれかと接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、プログラム細胞死、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体依存性貪食（ＡＤＣＰ）のうちの少なくとも１つによって、ＡＭＨＲ２＋細胞を殺傷、無効化、または枯渇させる。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２＋細胞を抗体または組成物と接触させることにより、ＡＭＨＲ２＋細胞のアポトーシス（例えば、カスパーゼ－３によって媒介される）、溶解、死滅、貪食、または増殖停止を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体は、細胞内でＰＡＲＰ－１の切断を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体は、細胞によって内在化される。いくつかの実施形態では、抗体は、受容体－リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する。

いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２＋細胞はがん細胞である。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２＋細胞を抗体または組成物と接触させることを、ｉｎ ｖｉｔｒｏで実施する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２＋細胞を抗体または組成物と接触させることを、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、対象、例えば、がんを有する対象において実施する。いくつかの実施形態では、がんは、固形癌、例えば、卵巣癌、例えば、ステージＩ、ステージＩＡ、ステージＩＢ、ステージＩＣ、ステージＩＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩＡ１、ステージＩＩＩＡ２、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、ステージＩＶ、ステージＩＶＡ、またはステージＩＶＢの卵巣癌である。いくつかの実施形態では、がんは、転移性及び／または難治性のがんである。

一態様では、本明細書において、前述の抗体または組成物のいずれかを治療を必要とする対象に投与することを含む、対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋癌）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、がんは、固形癌、例えば、卵巣癌、例えば、ステージＩ、ステージＩＡ、ステージＩＢ、ステージＩＣ、ステージＩＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩＡ１、ステージＩＩＩＡ２、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、ステージＩＶ、ステージＩＶＡ、またはステージＩＶＢの卵巣癌である。いくつかの実施形態では、がんは、転移性及び／または難治性のがんである。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体の投与前のがん体積と比較して、がん体積を減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体の投与前のがん増殖速度と比較して、がん増殖速度を減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、抗体は、がんを排除するのに効果的である。

一態様では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を誘導を必要とする対象に投与することを含む、対象における免疫応答の誘導方法を提供する。一態様では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、投与は、対象において免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列、または配列番号１１の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含み、アジュバントは、（ａ）炭水化物、及び（ｂ）代謝性油を含む。

一態様では、治療有効量の（ｉ）抗ＡＭＨＲ２抗体（例えば、本明細書に開示する抗体）及び（ｉｉ）ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列、または配列番号１１の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、抗ＡＭＨＲ２抗体と、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を、同時に投与する（例えば、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物は、抗ＡＭＨＲ２抗体をさらに含む）。いくつかの実施形態では、抗ＡＭＨＲ２抗体と、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を、別々に投与し、例えば、抗ＡＭＨＲ２抗体を最初に投与し、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を次に投与する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインを含む組成物は、アジュバントをさらに含み、アジュバントは、（ａ）炭水化物、及び（ｂ）代謝性油を含む。

一態様では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド及びアジュバントを含む治療有効量の組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法を提供し、アジュバントは、（ａ）炭水化物、及び（ｂ）代謝性油を含む。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列、または配列番号１１の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。

前述の方法のいくつかの実施形態では、方法がアジュバントを含む組成物を投与することを含む場合、アジュバントは、多糖を含む炭水化物を含む。いくつかの実施形態では、多糖は、少なくとも２つまたは３つの多糖の混合物を含む。いくつかの実施形態では、アジュバントは、少なくとも２つまたは３つの多糖の混合物を有する炭水化物を含み、組成物を対象に投与する場合、組成物は、１型及び１７型の両方の炎症誘発性Ｔ細胞応答を含む抗原特異的Ｔ細胞免疫応答を誘導することができる。いくつかの実施形態では、炭水化物は、パターン認識受容体、例えば、ＴＬＲ２またはデクチン－１に結合する。いくつかの実施形態では、多糖、または多糖の混合物中の各多糖は、キチン、デキストラン、グルカン、レンタナン、マンナン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、多糖または多糖の混合物は、グルカン、例えばβ－グルカン、例えば、１－３β－グルカンを含む。いくつかの実施形態では、多糖の混合物は、キチン、グルカン、及びマンナンの混合物を含む。いくつかの実施形態では、アジュバント中の炭水化物の少なくとも５０％は、β－グルカンである。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ザイモサンを含む。

前述の方法のいくつかの実施形態では、方法がアジュバントを含む組成物を投与することを含む場合、アジュバントは、精製された油を含む代謝性油を含む。いくつかの実施形態では、精製された油は、鉱油、例えば、ＤＲＡＫＥＯＬ（商標）６ＶＲである。いくつかの実施形態では、代謝性油は、生分解性油、例えば、ミリスチン酸イソプロピル、スクアレン油、スクアラン油、植物油（例えば、アーモンド油、ヒマシ油、ダイフウシ油、ココナッツ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、ピーナッツ油、パーシック油、ベニバナ油、またはダイズ油）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、代謝性油は、医薬品グレードの油を含む。

方法がアジュバントを含む組成物を投与することを含む、前述の方法のいくつかの実施形態では、アジュバントは、界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、モノオレイン酸マンニド（例えば、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）、例えば、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１ＶＧ）、モノオレイン酸イソマンニド、またはそれらの組み合わせを含む。

前述の方法のいくつかの実施形態では、方法がアジュバントを含む組成物を投与することを含む場合、アジュバントは、水と油のエマルジョン、例えば、油中水型エマルジョンである。いくつかの実施形態では、抗原及び炭水化物は、約１０：１～１：１０（ｗ／ｗ）の比率で存在し、例えば、抗原と炭水化物は、約１：１（ｗ／ｗ）の比率で存在する。

方法がＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を投与することを含む、前述の方法のいくつかの実施形態では、方法は、抗原特異的Ｔ細胞免疫応答、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞免疫応答は、１型及び／または１７型炎症性Ｔ細胞応答を含む。いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、参照レベル、例えば、完全フロイントアジュバントを含む組成物を投与された対象において観察される肉芽腫形成のレベルと比較して、肉芽腫形成の減少が引き起こされる。

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象に、追加の抗がん療法を投与したか、投与する予定であるか、または同時に投与する。いくつかの実施形態では、抗がん療法は、抗がん剤、例えば、ベバシズマブ、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、レトロゾール、オラパリブ、タモキシフェン、トポテカン、トラベクチン、ＣＴＬＡ４抗体、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、及びＴＧＦβ抗体から選択される抗がん剤を含む。

一態様では、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）の油中水型エマルジョンを含む製剤を提供し、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド及びザイモサンは、約１：５（ｗ／ｗ）～５：１（ｗ／ｗ）の比率で製剤中に存在し、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、抗ＡＭＨＲ２抗体（例えば、本明細書に開示する抗ＡＭＨＲ２抗体）をさらに含む。

本発明のこれら及び他の態様及び特徴は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲に記載されている。

〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤに特異的なｍＡｂの生成を示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡは、ＡＭＨＲ２－ＥＤ及び特異性制御抗原である組換えβ－カゼインに対する１２のハイブリドーマの血清希釈度１／１０，０００での応答を示す。（Ｂ）１／１０，０００希釈の４Ｄ１２ハイブリドーマの４Ｄ１２Ｃ６、４Ｄ１２Ｃ７、及び４Ｄ１２Ｇ１サブクローンのアイソタイプ分析。（Ｃ）競合ＥＬＩＳＡによる、及び（Ｄ）ＯＶＣＡＲ８細胞への結合のフローサイトメトリー分析による各サブクローンの抗原特異性の決定。ＡＭＨＲ２－ＥＤ－ＯＶＣＡＲ８細胞の陽性対照染色は、市販の抗ＡＭＨＲ２－ＥＤ ｍＡｂ（Ａｂｃａｍ）を使用して実施したが、無関係な特異性を有するＩｇＧ１アイソタイプ抗体を陰性対照として使用した。すべての場合において、エラーバーは±ＳＤを示し、示されている結果は、同様の結果をもたらす３つの実験を表している。

〔図２〕４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがヒトＥＯＣでＡＭＨＲ２－ＥＤを認識し、ＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合について、ＡＭＨと競合することを示す。（Ａ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂが、検査した２つの主要なＨＧＳＯＣ組織から生成された細胞の大部分に結合することを示すフローサイトメトリー分析。エラーバーは、±ＳＤを示す。（Ｂ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを、若年Ｃ５７ＢＬ／６卵巣癌細胞から生成された陽性対照溶解物及びＣ４－２ヒト前立腺癌細胞から生成された陰性対照溶解物と共に、７つの異なるＨＧＳＯＣ組織溶解物（２５μｇタンパク質／レーン）のウエスタンブロットで使用した。β－アクチン抗体による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。示されているウエスタンブロットは、同様の結果をもたらした３つの実験のうちの代表例である。（Ｃ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、４人のＨＧＳＯＣ患者（左の列）及びそれらの正常な隣接する卵管組織（右の列）由来の組織切片の免疫組織化学的染色（２０×）に使用した。矢印は、腫瘍実質の染色を示す。ＥＯＣ腫瘍の間質領域は免疫染色されておらず、正常な隣接する卵管組織のすべての領域も免疫染色されていない。すべての実験を３回実行し、同様の結果が得られた。（Ｄ）Ｃ４－２前立腺癌細胞由来溶解物を対照として用いたＯＶＣＡＲ８細胞及びＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞由来溶解物のウエスタンブロット分析及びβ－アクチン抗体による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。フローサイトメトリー分析は：（Ｅ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞の９１％に結合し；（Ｆ）ＡＭＨＲ２－ＥＤのＡＭＨ同族リガンドは、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞への結合について、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと用量依存的に効果的に競合し；（Ｇ）組換え卵白アルブミンはＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞への結合について４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと競合できなかったことを示した。データは、同様の結果が得られた３つの独立した実験のうちの代表例である。

〔図３〕４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２－ＥＤ結合部位の同定を示す。（Ａ）ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの１３２アミノ酸配列全体を示す。（Ｂ）一次抗体として４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを使用した直接ＥＬＩＳＡ試験のために、１つのアミノ酸シフトを有するヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの全配列にまたがる重複する一連の１６ｍｅｒペプチドをプレーティングした。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、残基ＡＭＨＲ２－ＥＤ １１－３２を認識した。（Ｃ）ＡＭＨＲ２－ＥＤ １３－３０にまたがる重複ペプチドを、各Ｎ末端残基でのアラニン置換または任意のネイティブＮ末端アラニン残基のグリシン置換で合成した。競合ＥＬＩＳＡの結果は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ２０－２６（^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６）にまたがる残基でのアラニン置換が４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合を減少させることを示した。（Ｄ）ＡＭＨＲ２－ＥＤ ９－４０にまたがる４－１６ｍｅｒペプチドを用いたＳＰＯＴペプチドアレイをセルロース膜に固定化し、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理し、結合した抗体を化学発光で検出した。結果は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ２２－２６ ５ｍｅｒ配列（^２２ＬＧＥＬＬ^２６）が４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合の最小配列を表すことを示した。（Ｅ）ＡＭＨＲ２－ＥＤ １７－３３ドメインにまたがり、各連続アミノ酸にアラニン置換を含む膜結合１７ｍｅｒペプチドを使用して、ＳＰＯＴペプチドアレイを作成した。Ｌｅｕ２２、Ｇｌｙ２３、及びＬｅｕ２６のアラニン置換は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる結合を完全に消失させた。すべてのエラーバーは±ＳＤを示し、すべての実験は同様のデータが得られる３つの実験のうちの代表例を表す。

〔図４〕ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの分子モデリングを示す。同族ＡＭＨリガンドの提案された結合部位には、主要な天然ＡＭＨ結合部位Ｉ、^４ＲＲＴＣＶＦＦＥＡＰＧＶ^１５が含まれ、（Ａ）一次アミノ酸配列において赤色で、（Ｂ）一次配列とリボンモデルにおけるβシートの両方において青色で示される４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位に対して並列だが逆平行のリボンモデルにおいて赤色のβシートとして表した。別の強力なＡＭＨ結合部位ＩＩである^３４ＲＡＩＲＣＬＹＳＲ^４２は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位に隣接する長い黄色のループで表される。対照的に、１２Ｇ４ ｍＡｂとその３Ｃ２３Ｋヒト化及び糖鎖改変バリアント（別名ＧＭ１０２）の^５３ＤＲＡＱＶＥＭ^５９結合部位は、それぞれ、弱い三次及び四次ＡＭＨ結合部位^４６ＧＩＷＮＬ^５０及び^８３ＰＳＰＧＳＴＬＦＴ^９１に近接している。矢印は、（Ｃ）リボンモデルの上面図ならびに（Ｄ）９０°回転図における、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの青色の^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位と、赤色のＡＭＨ Ｉ結合部位^４ＲＲＴＣＶＦＦＥＡＰＧＶ^１５、及び黄色のＡＭＨ結合部位ＩＩ ^３４ＲＡＩＲＣＬＹＳＲ^４２の並置を示す。

〔図５〕４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂが、アポトーシス、ＣＤＣ、及びＡＤＣＰを誘導することによってＥＯＣ細胞を殺傷することを示す。（Ａ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＥＯＣ細胞のアポトーシスを誘導したかどうかを評価するために、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を、熱不活化血清を添加したＤＭＥＭ中で、緑色蛍光色素と４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理し、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３生細胞分析システムを使用したライブイメージングにより、リアルタイムにアポトーシスの誘導を評価した。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで１６時間処理すると、ＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂで処理した場合（Ａ、左パネル）と比較して、実質的なアポトーシスが誘導された（Ａ、右パネル）。（Ｂ）ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を異なる濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで２４時間処理し、細胞溶解物のウエスタンブロットにより、インタクトな１１６ｋＤａ ＰＡＲＰ－１及びその８９ｋＤａ切断バリアント（アポトーシスと一致する）の検出が示された。β－アクチン抗体による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。（Ｃ）ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと共に、３７℃（Ｂ、左の列）または４℃（Ｂ、右の列）のいずれかで様々な時間インキュベートした。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂとＡＭＨＲ２受容体の複合体は、３７℃での処理後１時間までに、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞の細胞質で明らかになり、細胞質での抗体－受容体複合体のクラスター化パターンは、３７℃での処理後２時間及び３時間でますます顕著になったが、これらはすべてアポトーシスの誘導と一致する。４℃での４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処理では、処理の３時間後に細胞質での抗体－受容体複合体はほとんど示されず、二次抗体のみで処理した細胞では染色は生じなかった（Ｃ、右の列、下のパネル）。（Ｄ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＥＯＣ細胞のＣＤＣを誘導したかどうかを判定するために、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を１０％正常ヒト血清中または１０％熱不活化ヒト血清中のいずれかでインキュベートし、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂのいずれかの用量を様々に変えて４時間処理した。細胞溶解は、ＬＤＨ放出活性によって測定され、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した細胞でのみ生じていた。（Ｅ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＥＯＣ細胞のＡＤＣＰを誘導したかどうかを判定するために、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８標的細胞を緑色蛍光色素で標識し、血清の非存在下で２つの異なる濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂと共に３０分間インキュベートした。洗浄した細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス骨髄由来エフェクターマクロファージと、エフェクター対標的細胞比１０：１で混合し、そして標的細胞を３日後にフローサイトメトリーによって分析した。標的細胞死は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した細胞でのみ生じていた。すべてのエラーバーは±ＳＤを示し、すべての実験は同様のデータが得られる３つの実験のうちの代表例を表す。

〔図６〕４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがヒトＥＯＣ異種移植片の成長を阻害することを示す。ヒトＥＯＣ腫瘍を免疫不全マウスに皮下注射した。腫瘍が触知可能になったとき、マウスに２００μｇの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂのいずれかを５週間連続して毎週、腹腔内注射した。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処置は、（Ａ）重度の免疫不全ＮＳＧマウス（Ｐ＜０．００１）及び（Ｂ）Ｔ細胞欠損無胸腺ヌードマウス（Ｐ＜０．０００１）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処置は、最近診断された患者から生成し、（Ｃ）ＰＤＸ－４、（Ｄ）ＰＤＸ－６、及び（Ｅ）ＰＤＸ－９を含む免疫不全ＮＳＧマウスに異種移植した３つの原発性ＨＧＳＯＣ腫瘍の成長を有意に抑制した（すべての場合でＰ＜０．０００１）。（Ｆ）アイソタイプ対照ｍＡｂ（Ｆ、左カラム）で処理したマウスと比較した、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂ（Ｆ、右カラム）で処理したマウスにおける、２０×でのＯＶＣＡＲ８（Ｆ、上段）及びＮＳＧマウス由来ＰＤＸ－４腫瘍（Ｆ、下段）でのカスパーゼ－３陽性細胞の検出を、矢印で示す。示されているカスパーゼ－３データは、同様の結果をもたらす３つの実験のうちの代表例である。すべてのエラーバーは、±ＳＤを示す。

〔発明を実施するための形態〕
Ｉ．定義
便宜上、本明細書、実施例、及び特許請求の範囲で用いられる、特定の用語を本節にまとめる。

冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、本明細書では、冠詞の文法的対象の１つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すように使用される。例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」は、１つの要素または複数の要素を意味する。

本明細書中で使用する場合、「アジュバント」とは、抗原の投与の前、一緒に、または後に投与する場合に、抗原に対する免疫応答の品質及び／または強度を、抗原のみの投与によって誘発される応答と比較して、加速し、延長し、及び／または向上させる物質を意味する。

本明細書中で使用する場合、「抗がん療法」とは、がんまたはがん性状態を治療し、改善し、及び／またはリスクまたは進行を低減する療法を意味する。いくつかの実施形態では、抗がん療法は、がんまたはがん性状態を治療し、改善し、及び／またはリスクまたは進行を低減するために使用される薬剤である抗がん剤を含む。

本明細書中で使用する場合、用語「抗原」とは、当技術分野でその通常の意味を有し、それ自体で、またはアジュバント及び／または薬学的に許容される担体と組み合わせて、免疫応答、例えば抗体及び／またはＴ細胞応答を生成することができる任意の分子または分子の一部を指す。

本明細書中で使用する場合、用語「投与する」とは、薬剤または組成物を対象に提供することを意味し、医療専門家による投与及び自己投与が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書中で使用する場合、「生分解性」とは、材料に関して使用する場合、細胞に導入されると、細胞に重大な毒性作用を与えることなく、細胞が再利用もしくは処分できる成分へ、細胞機構（例えば、酵素分解）によって、または加水分解によって分解される材料を意味する。いくつかの実施形態では、生分解性材料の分解によって生成される成分は、ｉｎ ｖｉｖｏで炎症及び／または他の悪影響を誘発しない。いくつかの実施形態では、生分解性材料は、酵素的に分解される。あるいは、またはさらに、いくつかの実施形態では、生分解性材料は、加水分解によって分解される。

用語「免疫応答」とは、本明細書中では、免疫系による抗原または抗原決定基に対する任意の応答を指す。例示的な免疫応答として、体液性免疫応答（例えば、抗原特異的抗体の産生（中和または他の方法））及び細胞性免疫応答（例えば、リンパ球増殖）が挙げられる。１型炎症性免疫応答は、ＩＦＮγの産生を特徴とする。２型調節免疫応答は、ＩＬ－４またはＩＬ－５の発現を特徴とする。１７型炎症性免疫応答は、ＩＬ－１７の発現を特徴とする。いくつかの例では、混合免疫応答が生成され得る。例えば、いくつかの例では、ＩＦＮγとＩＬ－１７の両方の発現を特徴とする混合１型／１７型炎症性免疫応答が生成される。

本明細書中で使用する場合、語句「代謝性油」とは、生物に導入された場合に、（１）生物によってより多く分解されるか、または生物からより多く排除され得、（２）生物によってより迅速に分解されるか、生物からより迅速に排除され得、及び／または（３）参照レベル、例えば、完全フロイントアジュバントを投与した対象における肉芽腫形成レベルまたは不完全フロイントアジュバントを投与した対象における肉芽腫形成レベルと比較して、肉芽腫形成の減少をもたらす油を意味する。したがって、「代謝性油」は、この語句が本明細書中で使用される場合、完全に代謝可能である必要はない。「肉芽腫形成の減少」は、例えば、形成される肉芽腫の減少、重症度の低下した肉芽腫、重症度がより急速に低下する肉芽腫、及び（部分的または完全に）より迅速に解消する肉芽腫のうちの１つ以上によって特徴付けられ得る。

本明細書中で使用する場合、用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、同じ意味で用いられ、一般的に、少なくとも３つのアミノ酸のポリマーの当技術分野で認識されている意味を有する。用語「ポリペプチド」とは、それらの中性（非荷電）形態または塩としての、そして、非修飾または、例えば、グリコシル化、側鎖酸化、もしくはリン酸化によって修飾されているポリペプチドを指し得る。用語「ポリペプチド」は、ポリペプチドの特定の機能クラスを指すために使用することもできる。ポリペプチドの機能的クラスを指すために使用する場合、この用語は、機能的断片、バリアント（例えば、対立遺伝子バリアント）、及び参照ポリペプチドの誘導体、ならびに参照ポリペプチドの全長の野生型バージョンを含むことを意図する。いくつかの実施形態では、特定の機能クラスのポリペプチドは、参照ポリペプチドの全長バージョンと、アミノ酸レベルで少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７．５％の配列同一性を共有する。

本明細書中で使用する場合、アミノ酸配列間の「パーセント同一性」は、「パーセント相同性」と同義であり、これは、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７，２２６４－２２６８，１９９０）（Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０，５８７３－５８７７，１９９３）で改訂された）アルゴリズムを使用して決定することができる。上記のアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０，１９９０）のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施して、本明細書に記載のポリヌクレオチドに相同なヌクレオチド配列を取得する。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施して、参照ポリペプチドに相同なアミノ酸配列を取得する。比較目的のためのギャップアライメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５，３３８９－３４０２，１９９７）に記載されているように活用する。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）を使用する。

本明細書中で使用する語句「薬学的に許容される担体」とは、主題化合物を身体の１つの器官または部分から身体の別の器官または部分に搬送または輸送することに関与する液体もしくは固体充填材、希釈剤、賦形剤、増量剤、溶媒、またはカプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。用語「担体」は、共有結合していない担体と、それらが輸送する化合物または組成物に共有結合している担体の両方を包含する。

本明細書中で使用する場合、用語「精製された」とは、天然環境における分子、化合物、または組成物に通常関連する他の成分と比較して、分子、化合物、または組成物が濃縮されていることを意味する。用語「精製された」は、必ずしも分子、化合物、または組成物の完全な純度が達成されていることを示すものではない。いくつかの実施形態では、「精製された」分子、化合物、または組成物は、他の成分を、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７．５％含まない。

本明細書中で使用する場合、用語「腫瘍関連抗原」は、その当技術分野で認識されている意味を有し、その発現が腫瘍細胞と高度に相関している抗原を指す。腫瘍関連抗原は、正常細胞内でも発現していてよく、そうでなくてもよい。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞において過剰発現している。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原の発現は、腫瘍細胞の特定のサブタイプと相関している。

本明細書中で使用する場合、用語「対象」と「患者」は同じ意味であり、治療を受ける生物を指す（例えば、本明細書に開示する抗体、組成物または製剤を投与することによって）。対象及び患者の例として、ヒトまたは非ヒト動物などの哺乳動物が挙げられる。

本明細書中で使用する語句「治療有効量」及び「有効量」は、あらゆる医療に適用できる妥当なベネフィット／リスク比で対象の細胞の少なくとも部分集団において所望の治療効果を生み出すのに有効な薬剤の量を意味する。

対象における疾患の「治療」または疾患を有する対象の「治療」とは、疾患の少なくとも１つの症状を軽減するか、または悪化を予防するように、対象を薬物治療、例えば薬物の投与に供することを指す。

用語「参照」とは、比較の目的で使用される任意の試料、標準、またはレベルを指す。語句「参照標準」及び「参照レベル」は、同じ意味で用いられる場合があり、参照試料または対象から得られた値または数を指す。いくつかの実施形態では、参照レベルが導き出される試料または対象は、以下の基準のうちの少なくとも１つで対象の試料と一致させる：年齢、体重、病期、及び全体的な健康。例えば、いくつかの実施形態では、参照レベルは、臨床グレードもしくはスコア、または平均臨床グレードもしくはスコアである。

用語「リタイヤ自己抗原」及び「リタイヤ自己タンパク質」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、自己免疫原性レベルで正常な老化組織においてもはや発現されない自己タンパク質を指す。

本明細書中で使用する用語「界面活性剤」は、当技術分野で認識されている意味を有し、２つの液体間、気体と液体間、または液体と固体間の表面張力を低下させる傾向がある物質を指す。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、エマルジョンを安定化する物質である乳化剤である。

用語「任意選択で」とは、連続的に使用される場合、列挙される組み合わせの１つからすべてを含むことを意味し、すべての部分組み合わせが想定される。

用語「調節する」及び「調節」とは、列挙される変数を減少もしくは阻害するか、または、活性化もしくは増加させることを指す。

用語「増加する」及び「活性化する」とは、記載されている変数における、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはそれ以上の増加を指す。

用語「減少する」及び「阻害する」とは、記載されている変数における、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはそれ以上の減少を指す。

用語「アゴナイズする」とは、受容体の活性化に関連する生物学的応答を誘導するための受容体シグナル伝達の活性化を指す。「アゴニスト」は、受容体に結合してアゴナイズする実体である。

用語「アンタゴナイズする」とは、受容体の活性化に関連する生物学的応答を阻害するための受容体シグナル伝達の阻害を指す。「アンタゴニスト」は、受容体に結合してアンタゴナイズする実体である。

本明細書に記載の構造的及び機能的特徴のいずれかについて、これらの特徴を決定する方法は当技術分野で公知である。

説明全体を通じて、組成物が、特定の構成要素を有する、含む、もしくは備えると記載されるか、またはプロセス及び方法が特定のステップを有する、含む、もしくは備えると記載される場合、それに加えて、記載される構成要素から本質的になるか、もしくはそれからなる本発明の組成物が存在すること、ならびに記載されるプロセスステップから本質的になるか、もしくはそれからなる本発明によるプロセス及び方法が存在することが企図される。

本出願において、要素もしくは構成要素が、列挙される要素もしくは構成要素の一覧に含まれる、及び／またはそこから選択されると言及される場合、その要素もしくは構成要素は、列挙される要素もしくは構成要素のうちのいずれか１つであり得るか、またはその要素もしくは構成要素は、列挙される要素もしくは構成要素のうちの２つ以上からなる群から選択され得ることを理解すべきである。

さらに、本明細書に記載の組成物または方法の要素及び／または特徴は、本明細書において明示的であろうと暗黙的であろうと、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な方法で組み合わせることができる。例えば、特定の化合物に言及する場合、文脈から別の方法で理解されない限り、その化合物は、本発明の組成物の様々な実施形態において、及び／または本発明の方法において使用することができる。言い換えれば、本出願内で、明確で簡潔な出願を記述し、描画することを可能にする方法で実施形態を説明し、記載してきたが、これらの実施形態を、本教示及び発明（複数可）から逸脱することなく、様々に組み合わせ、または分離してもよいことが意図され、理解されよう。例えば、本明細書中で説明し、記載するすべての特徴は、本明細書中で説明し、記載する本発明（複数可）のすべての態様に適用可能であることが理解されよう。

表現「少なくとも１つ」とは、文脈及び使用から別段の理解がない限り、この表現の後に列挙された対象物のそれぞれ、及び２つ以上の列挙された対象物の様々な組み合わせを個別に含むことを理解すべきである。３つ以上の列挙された対象物に関連する表現「及び／または」は、文脈から別の方法で理解されない限り、同じ意味を有すると理解すべきである。

用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、または「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」の使用は、その文法上の同等物を含めて、文脈から特に明記または理解されていない限り、一般的に、例えば、追加の列挙されていない要素またはステップを除外しない開放形式かつ非制限として理解されるべきである。

ステップの順序またはある特定の動作を行うための順序は、本発明が動作可能である限りは、重要でないことを理解すべきである。さらに、２つ以上のステップまたは動作を、同時に実行してもよい。

本明細書中のあらゆる実施例、または例示的な文言の使用、例えば、「～など」または「～を含む」は、単に本発明をよりよく説明することを意図したものに過ぎず、別段の請求がなされていない限り、本発明の範囲を限定することを提示するものではない。本明細書中のいかなる文言も、本発明の実施に不可欠であるとして、非特許請求の要素を示すとして解釈されるべきではない。

ＩＩ．抗ミューラー管ホルモン受容体２抗体
概要
抗ミューラー管ホルモン受容体２（ＡＭＨＲ２）は、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーＩＩ型受容体に相同なセリン／スレオニンキナーゼ受容体である。抗ミューラー管ホルモン（ＡＭＨ）は、ＡＭＨＲ２の同族リガンドであり、ＡＭＨの細胞外ドメイン（ＡＭＨＲ２－ＥＤ）へのＡＭＨの結合が、細胞周期の停止とプログラム細胞死へのシグナルとなり、男性の発達時のミューラー管の縮退、ならびに成人女性における卵母細胞発達の調節、及び卵巣予備能と妊孕性の制御がもたらされる。成人女性では、最長のＡＭＨＲ２転写産物は、卵巣でのみ発現し、卵巣特異的な１２７アミノ酸のＡＭＨＲ２－ＥＤリガンド結合ドメイン、２６アミノ酸の膜貫通ドメイン、及び４０３アミノ酸の細胞質キナーゼドメイン（ＡＭＨＲ２－ＣＤ）（いずれも卵巣外発現を示す）を含む５７３アミノ酸のタンパク質をコードする。

本明細書において、抗ミューラー管ホルモン受容体２に対する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗ミューラー管ホルモン受容体ＩＩ（ＡＭＨＲ２）（配列番号９）に結合する単離抗体を含み、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基１１～３２（配列番号１２）内に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基２０～２６（配列番号１３）内に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基２２～２６（配列番号１４）内に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＡＭＨＲ２（配列番号９）に結合する単離された抗体は、ヒトＡＭＨＲ２への結合について、抗ミューラー管ホルモン（ＡＭＨ）と競合する。いくつかの実施形態では、ヒトＡＭＨＲ２（配列番号９）に結合する単離された抗体は、ヒトＡＭＨＲ２への結合について、本明細書中に開示する抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＦｃ領域を含む。

本明細書ではまた、３つの重鎖ＣＤＲ配列、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重（ＶＨ）鎖配列を含む重鎖、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ配列、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖配列を含む軽鎖を含む単離された抗体を提供し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は配列番号３に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は配列番号４に示す配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は配列番号５に示す配列を含み、そしてＣＤＲ－Ｌ３は配列番号６に示す配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、配列番号７に示すＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ鎖配列は、配列番号８に示すＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７に示すＶＨ配列を含み；ＶＬ鎖配列は、配列番号８に示すＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、配列番号７に示すＶＨ配列を含み；ＶＬ鎖配列は、配列番号８に示すＶＬ配列を含み、ヒトＦｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む。

いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、配列番号７に示すＶＨ配列からなる。いくつかの実施形態では、ＶＬ鎖配列は、配列番号８に示すＶＬ配列からなる。いくつかの実施形態では、配列番号７に示すＶＨ配列からなり；ＶＬ鎖配列は、配列番号８に示すＶＬ配列からなる。いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖配列は、配列番号７に示すＶＨ配列からなり；ＶＬ鎖配列は、配列番号８に示すＶＬ配列からなり、ヒトＦｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む。

用語「抗体」は、本明細書ではその最も広い意味で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含む特定のタイプの免疫グロブリン分子を含む。本明細書中で使用する場合、他に示されない限り、用語「抗体」とは、修飾され、改変され、または化学的にコンジュゲートされたインタクトな抗体、抗原結合断片、またはＦｃフラグメントを含む、インタクトな抗体（例えば、インタクトなモノクローナル抗体）、またはその断片、例えば、抗体のＦｃフラグメント（例えば、モノクローナル抗体のＦｃフラグメント）、または抗体の抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体の抗原結合断片）を意味すると理解される。抗原結合断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、ミニボディ、及びダイアボディが挙げられる。修飾され、または改変された抗体の例として、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）が挙げられる。化学的にコンジュゲートした抗体の例は、毒素部分にコンジュゲートした抗体である。

認識される免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。抗体または免疫グロブリンの「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ_２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。

例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、２対のポリペプチド鎖からなり、各対は１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端ドメインは、抗原認識を主に担う約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域を規定する。用語、可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれ、これらの軽鎖及び重鎖ドメインを指す。ＩｇＧ１重鎖は、それぞれ、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインからなる。軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬドメインとＣＬドメインからなる。ＩｇＧ１重鎖は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間にヒンジを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン構築物は、治療用ポリペプチドに接続されたＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ由来の少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供する抗体に見出される免疫グロブリンドメインは、ダイアボディまたはナノボディなどの免疫グロブリンベースの構築物に由来するか、またはそれから誘導される。特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫グロブリン構築物は、ラクダ科抗体などの重鎖抗体由来の少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。特定の実施形態では、本明細書中で提供する免疫グロブリン構築物は、ウシ抗体、ヒト抗体、ラクダ抗体、マウス抗体または任意のキメラ抗体などの哺乳動物抗体由来の少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供する抗体は、重鎖を含む。一実施形態では、重鎖はＩｇＡである。一実施形態では、重鎖はＩｇＤである。一実施形態では、重鎖はＩｇＥである。一実施形態では、重鎖はＩｇＧである。一実施形態では、重鎖はＩｇＭである。一実施形態では、重鎖はＩｇＧ１である。一実施形態では、重鎖はＩｇＧ２である。一実施形態では、重鎖はＩｇＧ３である。一実施形態では、重鎖はＩｇＧ４である。一実施形態では、重鎖はＩｇＡ１である。一実施形態では、重鎖はＩｇＡ２である。

用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」とは、本明細書中で使用する場合、配列中で超可変であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、天然の４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つはＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）中にあり、３つはＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）中にある。ＨＶＲは、一般的に、超可変ループ由来の及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、このうち後者が、配列可変性が最も高く、及び／または抗原認識に関与する。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般的に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。超可変領域（ＨＶＲ）は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも呼ばれ、これらの用語は、本明細書中では、抗原結合領域を形成する可変領域の部分に関して同じ意味で用いられる。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７（１９８７）に記載されており、定義には、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書中で定義され、使用される用語の範囲内にあることが意図されている。特定のＣＤＲを包含する正確な残基番号は、ＣＤＲの配列及びサイズによって異なる。当業者であれば、どの残基が、抗体の可変領域アミノ酸配列を与えられた特定のＣＤＲを含むかをルーチン的に決定することができる。

ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナンバリングスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５－７７（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）；及びＨｏｎｅｇｇｅ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７－７０（「ＡＨｏ」ナンバリングスキーム）；（それぞれは、その全体が参照により援用される）によって記載されたスキームを含む、いくつかの既知のナンバリングスキームのいずれかを使用して当業者が決定することができる。

表Ａは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａスキームによって同定されたＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３の位置を示す。ＣＤＲ－Ｈ１の場合、残基のナンバリングは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方のナンバリングスキームを用いて示される。

ＣＤＲは、例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍで利用可能であり、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：３８３２－３８３９（その全体が参照により援用される）に記載されているＡｂｎｕｍなどの抗体ナンバリングソフトウェアを使用して割り当ててもよい。

「ＥＵナンバリングスキーム」は、一般的に、抗体重鎖定常領域内の残基に言及する際に使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．で報告されているように）。特に明記しない限り、ＥＵナンバリングスキームは、本明細書に記載の抗体重鎖定常領域の残基を指すために使用される。

本明細書中で使用する場合、用語「一本鎖」とは、ペプチド結合によって直線的に連結されたアミノ酸モノマーを含む分子を指す。特定のそのような実施形態において、Ｆａｂ軽鎖のＣ末端は、一本鎖Ｆａｂ分子におけるＦａｂ重鎖のＮ末端に接続される。本明細書でより詳細に説明するように、ｓｃＦｖは、ポリペプチド鎖によってそのＣ末端から重鎖（ＶＨ）の可変ドメインのＮ末端に接続された軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインを有する。あるいは、ｓｃＦｖはポリペプチド鎖からなり、ＶＨのＣ末端がポリペプチド鎖によってＶＬのＮ末端に接続される。

「Ｆａｂフラグメント」（抗原結合断片とも呼ばれる）は、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を、それぞれ、軽鎖及び重鎖上の可変ドメインＶＬ及びＶＨとともに含む。可変ドメインは、抗原結合に関与する相補性決定ループ（ＣＤＲ、超可変領域とも呼ばれる）を含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での数個の残基の付加だけＦａｂ断片とは異なる。

「Ｆ（ａｂ’）_２」フラグメントは、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によって結合された２つのＦａｂ’フラグメントを含む。Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、例えば、組換え法によって、またはインタクトな抗体のペプシン消化によって生成され得る。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、例えば、β－メルカプトエタノールで処理することにより解離させることができる。

「Ｆｖ」フラグメントは、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合二量体を含む。

「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーにより、ｓｃＦｖは、抗原結合に望ましい構造を形成することができる。ｓｃＦｖに関する概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照のこと。ＨＥＲ２抗体ｓｃＦｖフラグメントは、ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号、及び米国特許第５，５８７，４５８号に記載されている。

「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フラグメントは、Ｆｃドメインに結合したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインを、ｓｃＦｖのＣ末端に結合させてもよい。Ｆｃドメインを、ｓｃＦｖ内の可変ドメインの方向（すなわち、Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）に応じて、Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌの後に配してもよい。当技術分野で公知の、または本明細書に記載されている任意の好適なＦｃドメインを使用してもよい。いくつかの場合では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。

用語「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」とは、抗体の一方の可変ドメインが、他方の可変ドメインの存在を必要とせずに、抗原に特異的に結合する分子を指す。単一ドメイン抗体、及びその断片は、Ａｒａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４１４：５２１－５２６ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２００１，２６：２３０－２４５に記載されており、それぞれはその全体が参照により援用される。単一ドメイン抗体は、ｓｄＡｂｓまたはナノボディとしても知られる。Ｓｄａｂｓはかなり安定しており、抗体のＦｃ鎖との融合パートナーとして容易に発現する（Ｈａｒｍｓｅｎ ＭＭ，Ｄｅ Ｈａａｒｄ ＨＪ（２００７）． “Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃａｍｅｌｉｄ ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ”． Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２）。

用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書中では、天然の抗体構造と実質的に類似する構造を有し、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すために同じ意味で使用される。例えば、ＩｇＧ分子を指すために使用する場合、「全長抗体」は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗体である。

用語「エピトープ」とは、抗体に特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは、多くの場合、表面にアクセス可能なアミノ酸残基及び／または糖側鎖からなり、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有し得る。配座エピトープと非配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合が失われ得るが、後者への結合は失われ得ないという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。抗体が結合するエピトープは、例えば、異なる点変異を有するＡＭＨＲ２バリアント、またはキメラＡＭＨＲ２バリアントへの抗体結合の試験などのエピトープ決定のための既知の技術を使用して決定することができる。

「多重特異性抗体」は、２つ以上の異なるエピトープに集合的に特異的に結合する２つ以上の異なる抗原結合ドメインを含む抗体である。２つ以上の異なるエピトープは、同じ抗原（例えば、細胞が発現する単一のＡＭＨＲ２分子）または異なる抗原（例えば、同じ細胞が発現する異なるＡＭＨＲ２分子、またはＡＭＨＲ２分子及び非ＡＭＨＲ２分子）上のエピトープであり得る。いくつかの態様では、多重特異性抗体は、２つの異なるエピトープ（すなわち、「二重特異性抗体」）に結合する。いくつかの態様では、多重特異性抗体は、３つの異なるエピトープ（すなわち、「三重特異性抗体」）に結合する。

「単一特異性抗体」は、単一のエピトープに特異的に結合する１つ以上の結合部位を含む抗体である。単一特異性抗体の例は、二価（すなわち、２つの抗原結合ドメインを有する）であるが、２つの抗原結合ドメインのそれぞれで同じエピトープを認識する天然のＩｇＧ分子である。結合特異性は、任意の好適な原子価で存在し得る。

用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団に由来する抗体を指す。実質的に均質な抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に通常生じ得るバリアントを除いて、実質的に類似しており、同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。そのようなバリアントは、一般的に少量しか存在しない。モノクローナル抗体は、通常、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって得られる。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからのユニークなクローンの選択であり得る。選択された抗体をさらに改変し、例えば、標的に対する親和性を向上させ（「親和性成熟」）、抗体をヒト化し、細胞培養におけるその産生を向上させ、及び／または対象の免疫原性を低下させることができる。

「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介される生物学的活性を指し、その活性は抗体のアイソタイプに応じて様々に異なり得る。抗体エフェクター機能の例として、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を活性化するＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化するＦｃ受容体結合、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、受容体リガンド遮断、アゴニズム、またはアンタゴニズムが挙げられる。

「ＡＭＨＲ２抗体」、「抗ＡＭＨＲ２抗体」、または「ＡＭＨＲ２特異的抗体」は、本明細書で提供されるような、抗原ＡＭＨＲ２に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＭＨＲ２の細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、本明細書中で提供するＡＭＨＲ２抗体は、異なる種に由来するＡＭＨＲ２タンパク質間で保存されるＡＭＨＲ２のエピトープに結合する。

用語「キメラ」抗体とは、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の供給源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。

非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は、一般的に、１つ以上のＣＤＲ由来の残基が非ヒト抗体（ドナー抗体）の１つ以上のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているヒト抗体（レシピエント抗体）である。ドナー抗体は、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有する非ヒト霊長類抗体などの任意の好適な非ヒト抗体であり得る。ヒト化抗体は、ヒト対象に投与された場合、非ヒト種抗体と比較して、免疫応答を誘発する可能性が低く、及び／またはより軽度の免疫応答を誘導する。いくつかの例では、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域残基を、ドナー抗体由来の対応するフレームワーク領域残基に置き換える。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含み得る。そのような修飾を行って、抗体の機能をさらに洗練させてもよい。ヒト化抗体の作製方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、第５，８８６，１５２号及び第５，８７７，２９３号に見出すことができ、これらのそれぞれは、その全体が参照により援用される。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－３２９；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３－５９６を参照のこと（これらのそれぞれは、その全体が参照により援用される）。

一実施形態では、ヒト抗体由来の定常ドメイン（複数可）を、非ヒト種の可変ドメイン（複数可）に融合させる。別の実施形態では、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列中の１つ以上のアミノ酸残基を変化させて、ヒト対象に投与した場合に非ヒト抗体の可能性のある免疫原性を低下させ、その場合、変化させるアミノ酸残基は、抗体のその抗原への免疫特異的結合に重要ではないか、または行われるアミノ酸配列への変化が保存的変化であり、その結果、ヒト化抗体の抗原への結合が抗原に対する非ヒト抗体の結合に比べて有意に悪化しない。

「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生されたか、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体に対応するアミノ酸配列を保有する抗体である。ヒト抗体からは、特にヒト化抗体は除外される。一実施形態では、すべての可変ドメイン及び定常ドメインは、ヒト免疫グロブリン配列（完全ヒト抗体）に由来する。これらの抗体は、ヒト重鎖及び／または軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝子改変されたマウスの目的の抗原による免疫化を含む様々な方法で調製してもよい。

抗体及び抗体断片の抗原性を低減または排除するための方法は、当技術分野で公知である。抗体をヒトに投与する場合、好ましくは抗体を「ヒト化」して、ヒトにおける抗原性を低減または排除する。好ましくは、各ヒト化抗体は、それが由来する非ヒト化マウス抗体と同じまたは実質的に同じ抗原に対する親和性を有する。

ヒト化アプローチの１つでは、マウス免疫グロブリン定常領域をヒト免疫グロブリン定常領域に置き換えたキメラタンパク質を作成する。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，ＰＲＯＣ．ＮＡＴ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．８１：６８５１－６８５５，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４－６０８；米国特許第６，８９３，６２５号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）；第５，５００，３６２号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）；及び第４，８１６，５６７号（Ｃａｂｉｌｌｙ）を参照のこと。

ＣＤＲ移植法として知られるアプローチでは、軽鎖及び重鎖の可変領域のＣＤＲを別の種のフレームワークに移植する。例えば、マウスのＣＤＲをヒトのＦＲに移植することができる。いくつかの実施形態では、抗体の軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲを、ヒトＦＲまたはコンセンサスヒトＦＲに移植する。コンセンサスヒトＦＲを作成するために、いくつかのヒト重鎖または軽鎖アミノ酸配列由来のＦＲをアラインメントさせて、コンセンサスアミノ酸配列を同定する。ＣＤＲ移植法は、米国特許第７，０２２，５００号（Ｑｕｅｅｎ）；第６，９８２，３２１号（Ｗｉｎｔｅｒ）；第６，１８０，３７０号（Ｑｕｅｅｎ）；第６，０５４，２９７号（Ｃａｒｔｅｒ）；第５，６９３，７６２号（Ｑｕｅｅｎ）；第５，８５９，２０５号（Ａｄａｉｒ）；第５，６９３，７６１号（Ｑｕｅｅｎ）；第５，５６５，３３２号（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ）；第５，５８５，０８９号（Ｑｕｅｅｎ）；第５，５３０，１０１号（Ｑｕｅｅｎ）；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６；及びＷｉｎｔｅｒ（１９９８）Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔ ４３０：９２－９４に記載されている。

「ＳＵＰＥＲＨＵＭＡＮＩＺＡＴＩＯＮ（商標）」と呼ばれるアプローチでは、ヒトＣＤＲ配列は、ヒト化されるマウス抗体の構造的類似性に対するヒトＣＤＲの構造的類似性に基づいて、ヒト生殖細胞系遺伝子から選択される。例えば、米国特許第６，８８１，５５７号（Ｆｏｏｔｅ）；及びＴａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５を参照のこと。

免疫原性を低下させる他の方法として、「再構成」、「超キメラ化」、及び「ベニヤリング／リサーフェイシング」が挙げられる。例えば、Ｖａｓｗａｍｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ａｎｎａｌｓ Ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ，＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８１：１０５；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒ ９：８９５－９０４；及び米国特許第６，０７２，０３５号（Ｈａｒｄｍａｎ）を参照のこと。ベニヤリング／リサーフェイシングアプローチでは、マウス抗体の表面アクセス可能なアミノ酸残基を、ヒト抗体の同じ位置でより高頻度に見出されるアミノ酸残基に置き換える。このタイプの抗体リサーフェイシングは、例えば、米国特許第５，６３９，６４１号（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ）に記載されている。

マウス抗体をヒトでの医療用途に適した形態に変換するための別のアプローチは、ＡＣＴＩＶＭＡＢ（商標）技術（Ｖａｃｃｉｎｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）として知られており、哺乳動物細胞で抗体を発現させるためのワクシニアウイルスベースのベクターを含む。ＩｇＧの重鎖及び軽鎖の高レベルの組み合わせ多様性を生み出すことができる。例えば、米国特許第６，７０６，４７７号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）；第６，８００，４４２号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）；及び第６，８７２，５１８号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）を参照のこと。マウス抗体をヒトでの使用に適した形態に変換するための別のアプローチは、ＫａｌｏＢｉｏｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）によって商業的に実施されている技術である。この技術では、独自のヒト「アクセプター」ライブラリーを使用して、抗体選択用の「エピトープに焦点を合わせた」ライブラリーを作成する。マウス抗体をヒトでの医療用途に適した形に改変するための別のアプローチは、ＸＯＭＡ（ＵＳ）ＬＬＣによって商業的に実施されているＨＵＭＡＮ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ（商標）技術である。例えば、国際（ＰＣＴ）公開第ＷＯ９３／１１７９４号及び米国特許第５，７６６，８８６号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）；第５，７７０，１９６号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）；第５，８２１，１２３号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）；及び第５，８６９，６１９号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）を参照のこと。

上記のアプローチのいずれかを含む任意の好適なアプローチを使用して、抗体のヒト免疫原性を低減または排除することができる。

さらに、マウスで完全なヒト抗体を作成することが可能である。非ヒト配列を欠く完全ヒトｍＡｂは、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ ３６８：８５６－８５９，１９９４；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ １４：８４５－８５１，１９９６；及びＭｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ ＧＥＮＥＴＩＣＳ １５：１４６－１５６，１９９７で参照されている技術により、ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウスから調製することができる。完全ヒトモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２９６：５７－８６，２０００；及びＫｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２５４：６７－８４ ２００１）で参照されている技術によって、ファージディスプレイライブラリーから調製し、最適化することもできる。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、本質的に抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆｖフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗原断片は（Ｆａｂ’）_２フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ’フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖ－Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体断片は、単一ドメイン抗体の断片である。

開示されたポリヌクレオチドまたは抗体をコードするポリヌクレオチドも本発明に含まれる。別段の指示がない限り、特定の核酸配列には、その保存的に修飾されたバリアント（縮重コドン置換を含むがこれに限定されない）及び相補的配列、ならびに明示的に示された配列も暗黙的に包含される。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの第３の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。

「保存的に修飾されたバリアント」は、アミノ酸配列と核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、「保存的に修飾されたバリアント」とは、同一もしくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合は本質的に同一の配列を指す。遺伝暗号の縮退のために、機能的に同一の多数の核酸が任意のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは、すべてアミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって指定されるすべての位置で、コードされたポリペプチドを変更することなく、コドンを記載された対応するコドンのいずれかに変更することができる。このような核酸バリエーションは「サイレントバリエーション」であり、保存的に修飾されたバリエーションの１つの種である。ポリペプチドをコードする本明細書中のすべての核酸配列はまた、核酸のすべての可能なサイレントバリエーションを説明する。当業者であれば、核酸中の各コドン（通常、メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常、トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を改変して、機能的に同一の分子を生成することができることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレントバリエーションは、記載された各配列に暗示されている。

アミノ酸配列に関して、当業者は、コード配列中の単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変更、付加、または欠失させる、核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加が、「保存的に修飾されたバリアント」であり、その変更により、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加、または化学的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換が生じることを認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当業者に公知である。そのような保存的に改変されたバリアントは、本明細書に記載の多型バリアント、種間相同体、及び対立遺伝子に追加され、それらを除外しない。

機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当業者に公知である。以下の８群には、それぞれ互いに保存的な置換であるアミノ酸が含まれている：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び［０１３９］８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ Ｈ Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．；２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９３）を参照のこと。

ＶＨドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号７の配列を含むＶＨ鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号７の配列からなるＶＨ鎖を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号７に示す例示的なＶＨ配列に対して、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する配列を含むＶＨ鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸置換を有する、配列番号７に示すＶＨ配列を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

ＶＬドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号８の配列を含むＶＬ鎖を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号８に示す例示的なＶＬ配列に対して、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する配列を含むＶＬ鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸置換を有する、配列番号８に示すＶＬ配列を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

ＶＨ－ＶＬ組み合わせ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号７の配列を含むＶＨ鎖及び配列番号８の配列を含むＶＬ鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸置換を有する、配列番号７に示す配列を含むＶＨ鎖、及び最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸置換を有する、配列番号８に示す配列を含むＶＬ鎖を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

ＣＤＲ
いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号７から選択されるＶＨドメインの１～３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号７から選択されるＶＨドメインの２～３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号７から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲを含む。

いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、またはＣＤＲ－Ｈ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号７から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号７から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号７から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ３である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、またはＣＤＲ－Ｌ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を含む、配列番号７から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号８から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｌ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号３から選択されるＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３から選択されるＣＤＲ－Ｈ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３及び配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３であり；ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２であり；ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３及び配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３であり；ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１、２、３、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２であり；ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸置換を有する、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１である。いくつか態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１と、少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３であり；ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２であり；ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１であり；ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３であり；ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１、２、３、または４個のアミノ酸置換を有する配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２であり；ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸置換を有する配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１である。いくつか態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は、本明細書中では「バリアント」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来するものではなく、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って新たに単離してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ１を含む。

Ｆｃ領域
本明細書中における用語「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。本明細書において別段明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリング系に従う。本明細書中で使用される二量体Ｆｃの「Ｆｃポリペプチド」は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つ、すなわち、安定した自己会合が可能な免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、二量体ＩｇＧ ＦｃのＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメイン配列を含む。Ｆｃは、クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭで有り得、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２にさらに分類され得る。

用語「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明するために使用される。例えば、ＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲであり得る。一般的に、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（γ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これには、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び選択的スプライシング型が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。他のアイソタイプの免疫グロブリンもまた、特定のＦｃＲによって結合され得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．，ＮＹ）（４ｔｈ ｅｄ．，１９９９）を参照のこと）。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質側ドメイン内に免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）に概説されている）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）に概説されている。将来的に特定されるものも含む他のＦｃＲは、本明細書中における用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語はまた、母体のＩｇＧの胎児への転移を担う新生児受容体である、ＦｃＲｎも包含する（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。

いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ１抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ３抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ２抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ４抗体である。

ＣＨ２ドメインの変更は、ＦｃへのＦｃＲの結合に影響を与え得る。Ｆｃ領域におけるいくつかのアミノ酸修飾は、異なるＦｃ－ガンマ（Ｆｃγ）受容体に対するＦｃの親和性を選択的に変更するために当技術分野で公知である。一実施形態では、Ｆｃは、Ｆｃ－ガンマ受容体の選択的結合を促進するための１つ以上の修飾を含む。

ＦｃへのＦｃＲの結合を変化させる例示的な変異を以下に列挙する：
Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ，Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ／Ｋ３２６Ａ（Ｌｕ Ｙ，Ｖｅｒｎｅｓ ＪＭ，Ｃｈｉａｎｇ Ｎ，ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１１ Ｆｅｂ ２８；３６５（１－２）：１３２－４１）；
Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ，Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｌ２３５Ｖ／Ｐ３９６Ｌ（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ＪＢ，Ｇｏｒｌａｔｏｖ Ｓ，Ｔｕａｉｌｌｏｎ Ｎ，ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７ Ｓｅｐ １５；６７（１８）：８８８２－９０；Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ ＪＬ，Ｇｏｒｌａｔｏｖ Ｓ，Ｚｈａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａｌ． Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１ Ｎｏｖ ３０；１３（６）：Ｒ１２３）；
Ｆ２４３Ｌ（Ｓｔｅｗａｒｔ Ｒ，Ｔｈｏｍ Ｇ，Ｌｅｖｅｎｓ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２０１１ Ｓｅｐ；２４（９）：６７１－８．），Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ，Ｎａｍｅｎｕｋ ＡＫ，Ｈｏｎｇ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１ Ｍａｒ ２；２７６（９）：６５９１－６０４）；
Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ，Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（Ｌａｚａｒ ＧＡ，Ｄａｎｇ Ｗ，Ｋａｒｋｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００６ Ｍａｒ １４；１０３（１１）：４００５－１０）；
Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２６７Ｅ，Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ＳＹ，Ｖｏｓｔｉａｒ Ｉ，Ｋａｒｋｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８ Ｓｅｐ；４５（１５）：３９２６－３３）；
Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｓ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ，Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２９８Ａ／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈ，Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２９８Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ，Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｓ２９８Ａ，Ｓ２３９Ｄ／Ｋ３２６Ｅ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｓ２９８Ａ，Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２７０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ，Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｄ，Ｌ２３４Ｆ／Ｓ２６７Ｅ／Ｎ３２５Ｌ，Ｇ２３７Ｆ／Ｖ２６６Ｌ／Ｓ２６７ＤならびにＷＯ２０１１／１２０１３４及びＷＯ２０１１／１２０１３５に列挙されている他の変異（参照により本明細書に援用される）。Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｗｉｌｌｉａｍ Ｒ．Ｓｔｒｏｈｌ ａｎｄ Ｌｉｌａ Ｍ．Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｓｅｒｉｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｎｏ １１，ＩＳＢＮ １ ９０７５６８ ３７ ９，Ｏｃｔ ２０１２による）は、２８３ページに変異を列挙している。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、エフェクター機能を媒介するその能力を改善するための改変を含む。そのような修飾は当技術分野で公知であり、アフコシル化、または活性化受容体、主にＡＤＣＣの場合はＦＣＧＲ３ａ、及びＣＤＣの場合はＣ１ｑに対するＦｃの親和性の改変を含む。以下の表Ｂは、エフェクター機能改変に関する文献で報告されている様々な設計をまとめたものである。

特定の実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、ＡＤＣＣを向上させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び３３４位のうちの１つ以上における置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：４００５－４０１０（その全体が参照により援用される）に記載されているように、２３９、３３２、及び３３０位で１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｃ１ｑ結合及び／またはＣＤＣを向上または減少させる１つ以上の変化を含む。米国特許第６，１９４，５５１号；ＷＯ９９／５１６４２；及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０００，１６４：４１７８－４１８４を参照のこと；それぞれは、その全体が参照により援用される。

したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、向上したエフェクター機能を付与する、表Ｂに記載の１つ以上のアミノ酸修飾を含む二量体Ｆｃを含み得る。別の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を向上させるためにアフコシル化され得る。

アミノ酸配列を変更せずに、Ｆｃグリコシル化部位（Ａｓｎ２９７ ＥＵナンバリング）上にフコースをほとんどまたは全く含まない抗体を生成する方法は、当技術分野で周知である。ＧｌｙｍａｘＸ（登録商標）技術（ＰｒｏＢｉｏＧｅｎ ＡＧ）は、フコース生合成の細胞経路を抗体産生に使用される細胞に偏向させる酵素の遺伝子の導入に基づいている。これにより、抗体産生細胞によるＮ－結合型抗体炭水化物部分への糖「フコース」の付加が防止される。（ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ． ２０１０ Ｄｅｃ；２０（１２）：１６０７－１８）。脱フコシル化抗体を産生可能な細胞株の例として、細菌オキシドレダクターゼＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキシロースレダクターゼ（ＲＭＤ）の安定した過剰発現を伴うＣＨＯ－ＤＧ４４（Ｈｅｎｎｉｎｇ ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ ２０１０，２０：１６０７－１６１８を参照のこと）またはタンパク質のフコース化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３－５４５；米国特許公開第２００３／０１５７１０８号；第ＷＯ２００４／０５６３１２号を参照のこと；それぞれはその全体が参照により援用される）、及びα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０－６８８；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと；それぞれは、その全体が参照により援用される）が挙げられる。フコース化のレベルが低い抗体を取得するための別のアプローチは、米国特許第８，４０９，５７２号に記載されており、抗体上のフコース化のレベルを下げる能力について抗体産生のための細胞株を選択することを教示している。

抗体は、完全にアフコシル化され得る（検出可能なフコースを含まないことを意味する）か、または部分的にアフコシル化され得、これは単離された抗体が、哺乳類の発現系によって産生される同様の抗体で通常検出されるフコースの量の９５％未満、８５％未満、７５％未満、６５％未満、５５％未満、４５％未満、３５％未満、２５％未満、１５％未満または５％未満を含むことを意味する。

いくつかの態様では、本明細書中で提供される抗体は、天然のＩｇＧ１ドメインと比較して、位置Ａｓｎ ２９７でフコース含有量が減少したＩｇＧ１ドメインを含む。そのようなＦｃドメインは、ＡＤＣＣが向上していることが知られている。Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０を参照のこと（その全体が参照により援用される）。いくつかの態様では、そのような抗体は、Ａｓｎ２９７位にフコースを含まない。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、任意の好適な方法を使用して決定してもよい（その全体が参照により援用される）。

いくつかの実施形態では、本明細書に抗体は、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖を含む。そのような抗体バリアントは、低減されたフコシル化及び／または向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８；米国特許第６，６０２，６８４号；及び米国特許公開第２００５／０１２３５４６号に記載されており；それぞれは、その全体が参照により援用される。

本明細書中に提供される抗体に組み込まれ得る他の例示的なグリコシル化バリアントは、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、第２００４／００９３６２１号、第２００３／０１５７１０８号、第２００３／０１１５６１４号、第２００２／０１６４３２８号、第２００４／００９３６２１号、第２００４／０１３２１４０号、第２００４／０１１０７０４号、第２００４／０１１０２８２号、第２００４／０１０９８６５号；国際特許公開第２０００／６１７３９号、第２００１／２９２４６号、第２００３／０８５１１９号、第２００３／０８４５７０号、第２００５／０３５５８６号、第２００５／０３５７７８号；第２００５／０５３７４２号、第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００４，３３６：１２３９－１２４９；及びＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２に記載されており、それぞれは、その全体が参照により援用される。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。そのような抗体バリアントは、向上したＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７；ＷＯ１９９８／５８９６４；及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載されており；それぞれは、その全体が参照により援用される。

脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例として、細菌オキシドレダクターゼＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキシロースレダクターゼ（ＲＭＤ）の安定した過剰発現を伴うＣＨＯ－ＤＧ４４（Ｈｅｎｎｉｎｇ ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ ２０１０，２０：１６０７－１６１８を参照のこと）またはタンパク質のフコース化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３－５４５；米国特許公開第２００３／０１５７１０８号；第ＷＯ２００４／０５６３１２号を参照のこと；それぞれはその全体が参照により援用される）、及びα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０－６８８；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと；それぞれは、その全体が参照により援用される）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）活性を有する。ＡＤＣＰは、抗体が病原性または腫瘍形成性の標的細胞の表面にある抗原に結合する場合に生じ得る。単球及びマクロファージを含む細胞表面上にＦｃ受容体を有する食細胞は、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識して結合する。抗体に結合した標的細胞にＦｃ受容体が結合すると、標的細胞の貪食を開始することができる。ＡＤＣＰは、ＡＤＣＣの一形態と見なすことができる。

いくつかの実施形態では、抗体は、免疫複合体を形成することができる。例えば、免疫複合体は、抗体で覆われた腫瘍細胞であり得る。

いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体はハイブリドーマによって産生される。他の実施形態では、抗体は、所望の可変ドメイン及び定常ドメインを発現するように改変された組換え細胞によって産生される。

いくつかの実施形態では、抗体は、抗原特異性及び下部ヒンジ領域またはそのバリアントを保持する一本鎖抗体または他の抗体誘導体であり得る。

いくつかの実施形態では、抗体は、多機能性抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、それらの断片またはバリアントであり得る。特定の実施形態では、抗体断片またはその誘導体は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２フラグメント、ＣＤＲ及びＳｃＦｖから選択される。

いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＭＨＲ２タンパク質などの表面抗原に特異的である。いくつかの実施形態では、治療用抗体は、腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞によって特異的に発現する分子）に特異的である。特定の実施形態では、治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ Ｆｃ部分を有し得る。

結合
標的分子への抗体の結合に関して、用語、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープに「結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合する」、「特異的に」、「選択的に結合する」、及び「選択的に」とは、非特異的または非選択的相互作用（例えば、非標的分子との）とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定し、それを非標的分子への結合と比較することによって測定することができる。特異的結合は、標的分子上で認識されるエピトープを模倣する制御分子との競合によっても測定することができる。その場合、標的分子への抗体の結合が対照分子によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。

「親和性」とは、分子（例えば、抗体またはエピトープ）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、非共有性相互作用の合計の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書中で使用される場合、「親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原またはエピトープ）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する速度成分については、以下で詳しく説明する。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））またはバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））などの本明細書に記載の方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。

本明細書中で使用される用語「ｋ_ｄ」（秒^－１）とは、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数を指す。この値は、ｋ_ｏｆｆ値とも呼ばれる。

本明細書中で使用される用語「ｋ_ａ」（Ｍ^－１×秒^－１）とは、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度定数を指す。この値は、ｋ_ｏｎ値とも呼ばれる。

本明細書中で使用される用語「Ｋ_Ｄ」（Ｍ）とは、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指す。Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｄ／ｋ_ａ。いくつかの実施形態では、抗体の親和性は、そのような抗体とその抗原との間の相互作用に対するＫ_Ｄに関して記載される。明確にするために、当技術分野で公知のように、Ｋ_Ｄ値が小さいほど親和性相互作用が高いことを示し、Ｋ_Ｄ値が大きいほど親和性相互作用が低いことを示す。

本明細書中で使用する場合、用語「Ｋ_Ａ」（Ｍ^－１）とは、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指す。Ｋ_Ａ＝ｋ_ａ／ｋ_ｄ。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、約０．００１、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、１．９５、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０×１０^－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＡＭＨＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体のＫ_Ｄは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．０１～０．０５、０．０５～０．１、０．１～０．５、０．５～１、０．２５～０．７５、０．２５～０．５、０．５～０．７５、０．７５～１、０．７５～２、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、１．４～１．５、１．５～１．６、１．６～１．７、１．７～１．８、１．８～１．９、１．９～２、１～２、１～５、２～７、３～８、３～５、４～６、５～７、６～８、７～９、７～１０、または５～１０×１０^－９Ｍである。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、約２、１．９８、１．９５、１．９、１．８５、１．８、１．７５、１．７、１．６５、１．６、１．５５、１．５０、１．４５、または１．４×１０^－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＡＭＨＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、１．９～１．８、１．８～１．７、１．７～１．６、１．６～１．５、または１．９～１．５×１０^－９ＭのＫ_ＤでヒトＡＭＨＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、約１０、９．５６、９．５、９．０、８．８８、８．８４、８．５、８、７．５、７．３２、７、６．５、６、５．５、５、４．５、４、３．５、３、２．５、２、１．５、または１×１０^－４（１／ｓ）以下のＫ_ｄでヒトＡＭＨＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、７～１０、７～８、８～９、９～１０、７～７．５、７．５～８、８．～８．５、８．５～９、９～９，５、または９．５～１０×１０^－４（１／ｓ）のＫ_ｄでヒトＡＭＨＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、約４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、４５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、７、８、９、または１０×１０^５（１／Ｍｓ）以上のＫ_ａでヒトＡＭＨＲ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによる測定で、４～７、４～４．５、４．５～５、５～５．５、５．５～６、６～６．５、または６．５～７、７～８、８～９、または９～１０×１０^５（１／Ｍｓ）のＫ_ａでヒトＡＭＨＲ２に結合する。

目的の抗体によって結合される標的抗原（例えば、ＡＭＨＲ２）上のエピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、通例のクロスブロッキングアッセイ、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載のアッセイを実施することができる。あるいは、またはさらに、エピトープマッピングを、当技術分野で公知の方法によって実施することができる。

本明細書中で２つ以上の抗体との関連で使用される場合、用語「競合する」または「交差競合する」は、２つ以上の抗体が抗原（例えば、ＡＭＨＲ２）への結合について競合することを示す。１つの例示的なアッセイでは、ＡＭＨＲ２またはＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（ＡＭＨＲ２－ＥＤ）を表面にコーティングし、第１のＡＭＨＲ２抗体と接触させ、その後、第２のＡＭＨＲ２抗体を加える。別の例示的なアッセイでは、第１のＡＭＨＲ２抗体を表面にコーティングし、ＡＭＨＲ２またはＡＭＨＲ２－ＥＤと接触させ、次いで、第２のＡＭＨＲ２抗体を加える。いずれかのアッセイにおいて、第１のＡＭＨＲ２抗体が存在することにより、第２のＡＭＨＲ２抗体の結合が減少する場合、抗体は互いに競合する。用語「競合する」はまた、１つの抗体が別の抗体の結合を減少させるが、抗体を逆の順序で加えた場合には競合が観察されない抗体の組み合わせも含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗体は、それらを加える順序に関係なく、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、１つの抗体は、その抗原への別の抗体の結合を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。当業者は、ＡＭＨＲ２に対する抗体の親和性及び抗体の原子価に基づいて、競合アッセイで使用される抗体の濃度を選択することができる。この定義に記載されているアッセイは例示的なものであり、当業者は、任意の好適なアッセイを利用して、抗体が互いに競合するかどうかを決定することができる。好適なアッセイは、例えば、Ｃｏｘ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ，” ｉｎ Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］，Ｕｐｄａｔｅｄ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２４，２０１４（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／；ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２９，２０１５）；Ｓｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００１，４４：３０－３７；及びＦｉｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，２０１１，５４：３５１－３５８に記載されており；それぞれが、その全体が参照により援用される。

抗体間の競合は、試験中の抗体が、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害または遮断するアッセイによって測定することができる（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０；Ｆｅｎｄｌｙ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：１５５０－１５５８；米国６，９４９，２４５を参照のこと）。過剰の試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍）が、競合結合アッセイによる測定で、例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％、参照抗体の結合を阻害または遮断する場合、試験抗体は、参照抗体と競合する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じることにより参照抗体によって結合されるエピトープに十分近位の隣接するエピトープに結合する抗体が含まれる。例えば、ＡＭＨＲ２への結合について、本明細書に記載の第１の抗体と競合する第２の競合抗体を同定することができる。特定の例では、第２の抗体は、例えば、第１の抗体の結合を、競合結合アッセイによる測定で、例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％遮断または阻害することができる。特定の例では、第２の抗体は、第１の抗体を、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％超、置き換えることができる。

機能
いくつかの実施形態では、抗体は、プログラム細胞死を誘導する。いくつかの実施形態では、プログラム細胞死はアポトーシスである。いくつかの実施形態では、プログラム細胞死は、カスパーゼ－３によって媒介される。いくつかの実施形態では、アポトーシスは、カスパーゼ－３によって媒介される。いくつかの実施形態では、抗体は、細胞においてＰＡＲＰ－１の切断を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体は、細胞によって内在化される。

プログラム細胞死は細胞の死であり、細胞内プログラムによって媒介される。アポトーシスとオートファジーは、細胞によって開始されるプログラム細胞死の形態である。ネクローシスは、外傷または感染症などの外的要因によって引き起こされる細胞死の一形態である。アポトーシスは、内因性経路または外因性経路のいずれかを介したカスパーゼ依存性経路を介して開始される。内因性アポトーシスは、通常、細胞外または細胞内の微小環境の摂動によって開始される。外因性アポトーシスは、通常、受容体ベースの検出を介した細胞外微小環境の摂動によって開始される。両方の経路は、カスパーゼ－３（ＣＡＳＰ３）によって促進される。プログラム細胞死を含む細胞死の概要は、Ｇａｌｌｕｚｚｉ Ｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ２５，ｐａｇｅｓ ４８６－５４１（２０１８）に記載されており、その全体が参照により援用される。

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。ＡＤＣＣは、抗体が病原性または腫瘍形成性の標的細胞の表面にある抗原に結合する場合に生じ得る。細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞、または単球を含む、細胞表面にＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲまたはＦＣＧＲ）を有するエフェクター細胞は、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識して結合する。そのような結合は、細胞内シグナル伝達経路の活性化を引き起こして細胞死をもたらし得る。特定の実施形態では、抗体の免疫グロブリンＦｃ領域サブタイプ（アイソタイプ）には、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３が含まれる。本明細書中で使用される場合、ＡＤＣＣとは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞障害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上の結合した抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性を、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて評価してもよい。

いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する。抗体により誘導されるＣＤＣは、古典的補体カスケードのタンパク質を介して媒介され、補体タンパク質Ｃｌｑが抗体に結合することによって引き起こされる。Ｃｌｑに結合する抗体Ｆｃ領域は、補体カスケードの活性化を誘導することができる。特定の実施形態では、抗体の免疫グロブリンＦｃ領域サブタイプ（アイソタイプ）には、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３が含まれる。本明細書中で使用される場合、ＣＤＣとは、補体の存在下で標的を溶解させる分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分の、同種抗原と複合体化した分子（例えば、ポリペプチド（例えば、抗体））への結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイを実施してもよい。

いくつかの実施形態では、抗体は枯渇性抗体である。枯渇性抗体は、分子の他の免疫細胞との抗体の相互作用を介して接触すると、ＡＭＨＲ２を発現するがん細胞を殺傷する抗体である。例えば、抗体は、ＡＭＨＲ２タンパク質を保有する細胞に結合すると、補体タンパク質と結合し、補体依存性細胞溶解を誘導し得る。抗体はまた、ＡＭＨＲ２タンパク質を保有する細胞に結合すると、Ｆｃ受容体を保有する隣接細胞を誘発して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によってそれらを殺傷し得る。

いくつかの実施形態では、抗体はアゴニスト抗体である。アゴニスト抗体は、抗体が細胞上に発現するＡＭＨＲ２タンパク質に結合した後、ＡＭＨＲ２発現細胞の１つ以上の活性または機能を誘導（例えば、増加）させることができる。アゴニスト抗体は、ＡＭＨＲ２発現細胞に結合して活性化し、細胞の増殖に変化を引き起こすか、または抗原提示能力を変化させ得る。アゴニスト抗体は、ＡＭＨＲ２発現細胞に結合して活性化し、細胞内シグナル伝達経路を誘発して、細胞増殖またはアポトーシスの変化を引き起こし得る。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２への抗ＡＭＨＲ２抗体の結合は、細胞周期停止及びプログラム細胞死を誘発し得る。

いくつかの実施形態では、抗体は、アンタゴニスト抗体である。アンタゴニスト抗体は、抗体が細胞上に発現するＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後、ＡＭＨＲ２発現細胞の１つ以上の活性または機能を遮断（例えば、減少）させることができる。例えば、アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＡＭＨＲ２発現細胞タンパク質に結合してリガンド結合を遮断し、細胞の分化及び増殖を防止するか、または抗原提示能力を変化させ得る。アンタゴニスト抗体は、そのリガンドによるＡＭＨＲ２タンパク質に結合してその活性化を防ぎ、細胞の増殖と生存に寄与する細胞内シグナル伝達経路を変化させ得る。

いくつかの実施形態では、抗ＡＭＨＲ２抗体は受容体リガンド遮断抗体である。受容体遮断抗体は、ＡＭＨＲ２の細胞外ドメインに結合し、同族のＡＭＨＲ２リガンドＡＭＨの結合を遮断する。いくつかの実施形態では、リガンド結合の遮断は、ＡＭＨＲ２シグナル伝達経路の活性化を防ぐことができる。

一実施形態では、その標的に結合した抗ＡＭＨＲ２抗体は、それが結合しているがん細胞のｉｎ ｖｉｖｏ枯渇を引き起こすことに関与している。いくつかの実施形態では、クラスター化抗体によって誘導されるエフェクタータンパク質は、炎症性サイトカインの放出、抗原産生の調節、エンドサイトーシス、または細胞死滅を含む、様々な応答を誘発することができる。一実施形態では、抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏで補体（ＣＤＣ）を動員し、活性化するか、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するか、またはｉｎ ｖｉｖｏでＦｃ受容体に結合することによって貪食（ＡＤＣＰ）を媒介することができる。抗体はまた、結合時にＡＭＨＲ２＋がん細胞のアポトーシスまたはネクローシスを誘発することにより、ＡＭＨＲ２＋がん細胞を枯渇させ得る。

ＩＩＩ．ワクチン、アジュバント及び製剤
別の態様では、本明細書において、毒性を限定的に誘発するかまたはまったく誘発せずに、１型及び１７型のＴ細胞の両方を含む免疫応答を誘発する組成物、例えば、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を提供する。

適応免疫応答を媒介するＴ細胞は、それらのサイトカイン特性に従ってサブセットに分類される。１型の炎症誘発性Ｔ細胞はＩＦＮγを産生し、ウイルス及び細菌感染に対する免疫を媒介するが、２型の制御性Ｔ細胞はインターロイキン（ＩＬ）－４、ＩＬ－５、及びＩＬ－１３を産生し、寄生虫感染に対する体液性免疫を媒介する。最近の研究では、ＩＬ－１７を産生する１７型炎症性Ｔ細胞が、炎症においても重要な役割を果たす別個のサブタイプとして確立された。自己タンパク質に対して最適化された組織損傷を誘発するには、１型と１７型の両方のＴ細胞系統が必要である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ Ｍｅｄ １３：１３９－１４５；Ｌｕｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０５：７９９－８１０）。

抗がんワクチンは、免疫系を刺激してがん細胞を攻撃するように設計される。これらのワクチンは通常、がん細胞が優先的に発現する抗原（「腫瘍関連抗原」）を含んでいる。現在のほとんどの臨床ワクチン製剤は、炎症誘発性の１型免疫を誘導するが、１７型免疫はほとんど誘導しない。本発明は、多くの現在の臨床ワクチン製剤が１型及び１７型の両方の免疫応答を誘発しないため、効果的ではないという洞察を包含する。本発明によれば、提供される組成物は、１型及び１７型の両方の炎症誘発性Ｔ細胞を含む免疫応答を誘導する。さらに、本開示の組成物は、動物モデルに注射した場合に毒性を限定的に誘発するか、またはまったく誘発せず、このことは、これらがヒトの臨床使用へ適合することを示唆している。

本発明は、がんの増殖を阻害し、及び／または予防するのに有効な適応免疫応答を誘導するワクチン製剤を包含する。いくつかの実施形態では、がんは卵巣癌である。本開示の組成物は、本明細書中でさらに説明されるように、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド抗原及びアジュバント成分を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＡＭＨＲ２抗体をさらに含む。したがって、本開示のワクチン製剤、組成物、及び方法は、卵巣癌の治療及び／または予防に有用であり得る。

本明細書に記載されるように、本開示は、卵巣癌などのがんの増殖を阻害するための適応免疫応答（例えば、１型及び１７型Ｔ細胞）を誘導する免疫原／アジュバントの組み合わせを含む。いくつかの態様では、組成物は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド及びザイモサンを含む。いくつかの態様では、組成物は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）を含む。いくつかの態様では、組成物は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）を含む。本開示のザイモサン及び／またはＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）と組み合わせたＡＭＨＲ２細胞外ドメインは、「ゴールドスタンダード」アジュバントであるＣＦＡのワクチン接種に関連する未解決の肉芽腫を誘発することなく、効果的な腫瘍免疫に関連する高頻度の１型／１７型Ｔ細胞を誘発する。したがって、ザイモサン及び／またはＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）と組み合わせたＡＭＨＲ２細胞外ドメインによるワクチン接種は、ヒト卵巣癌の増殖に対して安全で効果的な免疫を提供するためのユニークな方法を提供する。いくつかの実施形態では、代謝性油は、生分解性油を含む。例えば、生分解性油は、ミリスチン酸イソプロピル、スクアレン油、スクアラン油、植物油、またはそれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、生分解性油は、植物油、例えば、アーモンド油、ヒマシ油、ダイフウシ油、ココナッツ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、ピーナッツ油、パーシック油、ベニバナ油、及びダイズ油からなる群から選択される植物油である。

いくつかの実施形態では、代謝性油は、医薬品グレードの油である。

いくつかの実施形態では、組成物は、界面活性剤、例えば、モノオレイン酸マンニド、モノオレイン酸イソマンニド、またはそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、モノオレイン酸マンニドを含む。例えば、組成物は、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１ＶＧなどのＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）を含み得る。

いくつかの実施形態では、組成物は、水と油のエマルジョン、例えば、油中水型エマルジョンである。

いくつかの実施形態では、抗原は、ポリペプチド抗原を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド抗原は、リタイヤ自己抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む。

炭水化物
いくつかの実施形態では、炭水化物は、多糖、例えば、キチン、デキストラン、グルカン、レンタナン、マンナン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される多糖を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、多糖の混合物、例えば、少なくとも３つの多糖を含む混合物を含む。

いくつかの実施形態では、多糖、混合物中の各多糖は、キチン、デキストラン、グルカン、レンタナン、マンナン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、多糖または多糖の混合物は、グルカン、例えばβ－グルカン、例えば、限定されないが、１－３β－グルカンを含む。いくつかの実施形態では、組成物中の炭水化物の少なくとも５０％は、β－グルカンである。

いくつかの実施形態では、多糖の混合物は、キチン、グルカン、及びマンナンの混合物を含む。

いくつかの実施形態では、炭水化物は、パターン認識受容体、例えば、ＴＬＲ２及び／またはデクチン－１に結合する。

例えば、いくつかの実施形態では、組成物はザイモサンを含む。ザイモサンは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来のパン酵母抽出物の粗細胞壁成分混合物であり、主にβ－グルカン（５０～５７％）、マンナン、及びキチンからなる。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、酵母エキスに由来するこれらのβ－グルカンにＧＲＡＳ（「一般に安全と認められる」）の評価を与えている。酵母ザイモサンは、β（１，３）グルカンの豊富な供給源として機能する。酵母由来β（１，３）グルカンは、真菌感染に対する身体の基本的な防御の一部として自然免疫系を活性化することにより、免疫系を刺激すると考えられる（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０：１５８５－１５９１）。酵母β（１，３）グルカンは、主にβ（１－３）結合グルコース分子からなり、周期的なβ（１－３）分岐がβ（１－６）結合を介して結合した多糖であり、より正式にはポリ－（１－６）－β－グルコピラノシル－（１－３）－β－Ｄ－グルコピラノースとして知られる。

代謝性油
本明細書中で使用される場合、語句「代謝性油」とは、生物に導入された場合に、（１）生物によってより多く分解されるか、または生物からより多く排除され得；（２）生物によってより迅速に分解されるか、または生物からより迅速に排除され得；及び／または（３）不完全フロイントアジュバントと比較して、肉芽腫形成の減少をもたらす油を意味する。したがって、「代謝性油」は、この語句が本明細書中で使用される場合、完全に代謝可能である必要はない。「肉芽腫形成の減少」は、例えば、形成される肉芽腫の減少、重症度の低下した肉芽腫、及びより迅速に解消する肉芽腫のうちの１つ以上によって特徴付けられ得る。

いくつかの実施形態では、代謝性油は、鉱油を含む。

いくつかの実施形態では、代謝性油は、精製された油、例えば、精製された鉱油（例えば、限定されないが、ＤＲＡＫＥＯＬ（商標）６ＶＲ）を含む。

いくつかの実施形態では、代謝性油は、生分解性油を含む。生分解性油の非限定的な例として、ミリスチン酸イソプロピル、スクアレン油（例えば、ＭＦ５９）、スクアラン油、植物油、またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、生分解性油は、植物油、例えば、アーモンド油、ヒマシ油、ダイフウシ油、ココナッツ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、ピーナッツ油、パーシック油、ベニバナ油、ダイズ油、またはそれらの組み合わせである。

いくつかの実施形態では、代謝性油は、魚油を含む。

特定の実施形態では、代謝性油は、医薬品グレードの油である。

界面活性剤／エマルジョン
いくつかの実施形態では、提供される組成物は、１つ以上の界面活性剤を含む。好適な界面活性剤の非限定的な例として、モノオレイン酸マンニド、モノオレイン酸イソマンニド、及びそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、組成物は、モノオレイン酸マンニドを含む。

いくつかの実施形態では、提供される組成物は、代謝性油を含む、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）、例えば、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡシリーズアジュバントを含む。

ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ（ＩＳＡ＝不完全セピックアジュバント）アジュバント（Ｓｅｐｐｉｃ ＳＡ、パリ、フランス）は、異なる界面活性剤を、非代謝性鉱油、代謝性油、またはその２つの混合物と組み合わせた油／界面活性剤ベースのアジュバントの群である。それらは通常、抗原水溶液とのエマルジョンとして使用するために調製される。アジュバントの様々なＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ群は、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、または水中油中水型エマルジョンとして使用される。

いくつかの実施形態では、組成物は、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１ＶＧ、またはそれに由来する任意の生物学的等価アジュバント（例えば、オリーブから単離されたオレイン酸を、別の供給源から単離されたオレイン酸または合成のオレイン酸で置き換えることによる）を含む。ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１は、高度に精製された鉱油（ＤＲＡＫＥＯＬ（商標）６ＶＲ）と界面活性剤（モノオレイン酸マンニド）の混合物である。ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１ＶＧは、オレイン酸を動物供給源から取得するのではなく、オリーブから取得する同様の組成物である。

いくつかの実施形態では、提供される組成物は、水と油のエマルジョン、例えば、油中水型エマルジョンである。油中水（ｗ／ｏ）型エマルジョンの生成方法は当技術分野で周知である。油中水型エマルジョンは、様々なプロトコル、例えば、高せん断ミキサー、ボルテックスミキサー、及びコネクタ付きまたはコネクタなしのシリンジ（例えば、ＴコネクタまたはＩコネクタ）などの様々な装置を使用するプロトコルのいずれかによって取得することができる。いくつかの実施形態では、提供される組成物は、デポー効果を生み出すアジュバント（例えば、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）アジュバント）、すなわち、同じ組成物中の抗原を体内でゆっくりと放出させ、したがって、免疫細胞の抗原への曝露を延長させるアジュバントを含む。

抗原
一般的に、免疫応答が望まれる任意の分子または分子の一部を抗原として使用してもよい。抗原は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、細胞（またはその成分）、弱毒化された病原体（またはその成分）、及び熱殺菌された病原体（またはその成分）のいずれか１つを含み得るが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、抗原は、非自己抗原であり、すなわち、それらは、抗原を含む組成物を投与することが意図されている生物に対して外来性である。

いくつかの実施形態では、抗原は、抗原を含む組成物を投与することが意図されている生物内の少なくともいくつかの細胞において発現しているか、または発現していたという点で、自己抗原である。いくつかの実施形態では、抗原は、それらがかつて生物において発現していたが、非悪性成熟細胞においてもはや自己免疫原性レベルで発現していないという点で、リタイヤ自己タンパク質である。

いくつかの実施形態では、抗原は腫瘍関連抗原である。

いくつかの実施形態では、提供される組成物または製剤は、異なる抗原の混合物を含む。

抗原は、１つ以上の修飾を含み得る。例えば、抗原またはその断片のプロセシング、細胞取り込み、免疫原性、及び／または安定性に影響を与える１つ以上の修飾（例えば、ペプチド／ＭＨＣ複合体内の）を使用してもよい。

いくつかの実施形態では、抗原は、ポリペプチド抗原を含む。ポリペプチド抗原は、様々な長さのいずれかであってもよく、それらの配列は、天然のタンパク質の配列に対応していてもよく、対応していなくてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、全長またはほぼ全長のタンパク質をポリペプチド抗原として使用してもよい。いくつかの実施形態では、抗原または抗原混合物は、タンパク質の１つ以上の断片またはバリアントを含む。

抗ミューラーホルモン受容体２ポリペプチド
いくつかの実施形態では、抗原は、抗ミューラーホルモン受容体２細胞外ドメイン（ＡＭＨＲ２－ＥＤ）またはその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、抗原は、複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の）異なるＡＭＨＲ２－ＥＤポリペプチドまたは断片を含む。いくつかの実施形態では、提供される組成物は、ＡＭＨＲ２－ＥＤポリペプチドの代わりにまたはそれに加えて、ＡＭＨＲ２－ＥＤポリペプチドをコードする核酸を含む。

成人女性では、最長のＡＭＨＲ２転写産物は、卵巣でのみ発現し、卵巣特異的な１２７アミノ酸のＡＭＨＲ２－ＥＤリガンド結合ドメイン、２６アミノ酸の膜貫通ドメイン、及び４０３アミノ酸の細胞質キナーゼドメイン（ＡＭＨＲ２－ＣＤ）（いずれも卵巣外発現を示す）を含む５７３アミノ酸のタンパク質をコードする。用語「抗ミューラーホルモン受容体２ポリペプチド」、「ＡＭＨＲ２ポリペプチド」、「抗ミューラーホルモン受容体２細胞外ドメインポリペプチド」、または「ＡＭＨＲ２－ＥＤポリペプチド」は、断片、バリアント（例えば、対立遺伝子バリアント）、及びその誘導体を含むことを意図している。代表的なヒトＡＭＨＲ２ ｃＤＮＡ及びヒトＡＭＨＲ２タンパク質配列は、当技術分野で周知であり、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）から公開されている。例えば、少なくとも３つのヒトＡＭＨＲ２アイソフォームが知られている。ヒトＡＭＨＲ２アイソフォーム１（ＮＰ＿０６５４３４．１及びＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ１６６７１－１）は、転写産物バリアント（ＮＭ＿０２０５４７．３）によってコード可能である。ヒト以外の生物におけるＡＭＨＲ２オルソログの核酸及びポリペプチド配列は周知であり、例えば、チンパンジーＡＭＨＲ２（ＸＭ＿０１６９２３３３８．１及びＸＰ＿０１６７７８８２７．１）、アカゲザルＡＭＨＲ２（ＸＭ＿０２８８２９５１９．１及びＸＰ＿０２８６８５３５２．１）、イヌＡＭＨＲ２（ＸＭ＿５４３６３２．６及びＸＰ＿５４３６３２．４）、マウスＡＭＨＲ２（ＮＭ＿１４４５４７．２及びＮＰ＿６５３１３０．２）、及びラットＡＭＨＲ２（ＮＭ＿０３０９９８．１及びＮＰ＿１１２２６０．１）が挙げられる。上記のｍＲＮＡ及びタンパク質配列のそれぞれは、参照により本明細書に援用される。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＡＭＨＲ２ポリペプチド及び／またはＡＭＨＲ２ポリペプチドをコードする核酸を提供する。ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、ＡＭＨＲ２のアミノ酸配列またはその一部と十分な配列同一性を有し、ＡＭＨＲ２特異的免疫応答を誘発するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

特定の実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、または１４０連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、連続アミノ酸は、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列と同一である。

特定の実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、本質的に、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、または１４０連続アミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、連続アミノ酸は、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列のアミノ酸配列と同一である。

特定の実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、ＡＭＨＲ２アミノ酸配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、または１４０連続アミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、連続アミノ酸は、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列と同一である。

いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、または１４０連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、連続アミノ酸は、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列と同一である。

いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１または９の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、本質的に、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、または１４０連続アミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、連続アミノ酸は、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列と同一である。

いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、または１４０連続アミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、連続アミノ酸は、配列番号１１または９に記載のＡＭＨＲ２アミノ酸配列と同一である。

当業者には周知のように、実質的な配列類似性を有するポリペプチドは、宿主生物において同一または非常に類似した免疫反応を引き起こし得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２の誘導体、等価体、バリアント、断片、または変異体であるＡＭＨＲ２ポリペプチドもまた、本明細書中で提供される方法及び組成物での使用に好適であり得る。

いくつかの実施形態では、提供されるＡＭＨＲ２ポリペプチドは、それらがＡＭＨＲ２ポリペプチドの配列に対して（例えば、保存的置換によって）変更されたアミノ酸配列を有するが、それでも免疫応答を誘発するという点で機能的等価体である。本明細書中で使用される場合、用語「保存的置換」とは、アミノ酸残基を別の生物学的に類似した残基で置換することを意味する。同じ保存基内のアミノ酸は、通常、タンパク質の機能または免疫原性に実質的に影響を与えることなく、互いに置換することができることが当技術分野で周知である。

いくつかの実施形態では、本明細書において、本明細書に記載のＡＭＨＲ２ポリペプチドをコードする核酸、例えばＤＮＡ分子を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む発現ベクターを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２核酸は、オープンリーディングフレームの発現を促進する調節エレメントを含む。そのようなエレメントは、例えば、プロモーター、開始コドン、終止コドン、及びポリアデニル化シグナルのうちの１つ以上を含み得る。さらに、１つ以上のエンハンサーを含めることができる。これらのエレメントを、ＡＭＨＲ２ポリペプチドをコードする配列に作動可能に連結することができる。

プロモーターの例として、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、例えば、ＨＩＶ末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、例えば、ＣＭＶ前初期プロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及びヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、及びヒトメタロチオネインなどのヒト遺伝子由来のプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。好適なポリアデニル化シグナルの例として、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル及びＬＴＲポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。

エンハンサーまたはエンハンサー／プロモーターの非限定的な例として、例えば、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン由来のエンハンサー、ならびにウイルスエンハンサー、例えば、ＣＭＶ、ＲＳＶ、及びＥＢＶ由来のエンハンサーが挙げられる。

いくつかの実施形態では、提供される核酸は、担体または送達ベクターに組み込まれる。有用な送達ベクターとして、生分解性マイクロカプセル、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、及びウイルスまたは細菌などの遺伝子改変された弱毒化生物担体が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、その非限定的な例として、レンチウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、鶏痘ウイルス、トリポックスウイルス、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルス、及び他の組換えウイルスが挙げられる。例えば、ワクシニアウイルスベクターを使用して樹状細胞に感染させることができる。

製剤
いくつかの実施形態では、抗原と炭水化物は、約１０：１～約１：１０（ｗ／ｗ）、例えば、約５：１～約１：５（ｗ／ｗ）、約４：１～１：４（ｗ／ｗ）、約３：１～約１：３（ｗ／ｗ）、または約１：２～約２：１（ｗ／ｗ）の比率で存在する。いくつかの実施形態では、抗原と炭水化物は、約１：１（ｗ／ｗ）の比率で存在する。

いくつかの実施形態では、提供される組成物は、抗原、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）を含む。いくつかのそのような実施形態では、抗原はポリペプチド抗原である。

例えば、乳癌の治療及び／または予防に好適であり得る組成物は、ＡＭＨＲ２ポリペプチド、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）を含み得、その場合、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列と１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、提供される組成物は、水と油のエマルジョン、例えば、油中水型エマルジョンとして製剤化される。

いくつかの実施形態では、抗原、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）の油中水型エマルジョンを含む製剤を提供する。いくつかのそのような実施形態では、抗原はポリペプチド抗原である。

例えば、いくつかの実施形態では、製剤は、α－ラクトアルブミンポリペプチド、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）の油中水型エマルジョンを含み、その場合、ＡＭＨＲ２ポリペプチド及びザイモサンは、約１：５（ｗ／ｗ）～５：１（ｗ／ｗ）の比率で製剤中に存在し、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＡＭＨＲ２ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列と１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの態様では、本明細書において、医薬組成物（例えば、ワクチン組成物）を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、提供される組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。

いくつかの実施形態では、組成物は抗生物質をさらに含む。

いくつかの実施形態では、追加の生理学的に許容されるアジュバントを使用する。そのような追加のアジュバントは、（ｉ）抗原（例えば、ポリペプチド抗原）の再構成後に本明細書中で提供される医薬組成物中の他の成分と混合し、任意選択で、上記で定義された代謝性油により乳化し、（ｉｉ）本明細書中で提供される再構成された抗原含有組成物を分離し、（ｉｉｉ）再構成しようとする抗原（複数可）に物理的に結合し；そして（ｉｖ）対象に別々に投与することを含むがこれらに限定されない、いくつかの方法のいずれかに使用されるか、または含まれ得る。追加のアジュバントは、例えば、抗原の放出を遅延させることができ（例えば、追加のアジュバントは、リポソームであり得る）及び／または、それ自体が免疫原性であり、それによって抗原（すなわち、提供された組成物中に存在する抗原）と相乗的に機能するアジュバントであり得る。

例えば、追加のアジュバントは、抗原の取り込みを促進し、免疫系細胞を投与部位に動員し、及び／または応答するリンパ系細胞の免疫活性化を促進する既知のアジュバントまたは他の物質であり得る。好適な追加のアジュバントの例として、免疫調節分子（例えば、サイトカイン）、油と水のエマルジョン、水酸化アルミニウム、グルカン、デキストラン硫酸、酸化鉄、アルギン酸ナトリウム、バクトアジュバント、合成ポリマー、例えば、ポリアミノ酸及びアミノ酸のコポリマー、サポニン、パラフィン油、ならびにムラミルジペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、アジュバント６５、α－ＧａｌＣｅｒ、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸カルシウム、β－グルカンペプチド、ＣｐＧ ＤＮＡ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＰＩ－０１００、ＩＦＡ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７、リピドＡ、リポ多糖、リポバント、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、ｑｕｉｌ Ａ、トレハロースジミコレート、またはザイモサンである。いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、混合１型／１７型免疫応答を誘導する。

いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、免疫応答を増強する免疫調節分子である。例えば、免疫調節分子は、サイトカイン、ケモカイン、もしくは免疫刺激剤、前述のいずれかの組換えバージョン、または前述のいずれかをコードする核酸であり得る。

免疫調節性サイトカインの例として、インターフェロン（例えば、ＩＦＮα、ＩＦＮβ及びＩＦＮγ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７及びＩＬ－２０）、腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦα及びＴＮＦβ）、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、ＦＬＴ－３リガンド、ｇＩｐ１０、ＴＣＡ－３、ＭＣＰ－１、ＭＩＦ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ランテス、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ならびに前述のいずれかの機能的断片が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、提供される組成物は、ケモカイン受容体、例えば、ＣＸＣ、ＣＣ、Ｃ、またはＣＸ３Ｃケモカイン受容体に結合する免疫調節性ケモカインを含む。ケモカインの例として、Ｍｉｐ１α、Ｍｉｐ－１β、Ｍｉｐ－３α（Ｌａｒｃ）、Ｍｉｐ－３β、Ｒａｎｔｅｓ、Ｈｃｃ－１、Ｍｐｉｆ－１、Ｍｐｉｆ－２、Ｍｃｐ－１、Ｍｃｐ－２、Ｍｃｐ－３、Ｍｃｐ－４、Ｍｃｐ－５、イオタキシン、Ｔａｒｃ、Ｅｌｃ、Ｉ３０９、ＩＬ－８、Ｇｃｐ－２ Ｇｒｏ－α、Ｇｒｏ－β、Ｇｒｏ－γ、Ｎａｐ－２、Ｅｎａ－７８、Ｇｃｐ－２、Ｉｐ－１０、Ｍｉｇ、Ｉ－Ｔａｃ、Ｓｄｆ－１、及びＢｃａ－１（Ｂｌｃ）、ならびに前述のいずれかの機能的断片が挙げられるが、これらに限定されない。

核酸
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載のＡＭＨＲ２ポリペプチド抗原または抗ＡＭＨＲ２抗体をコードする核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）を含む。そのような実施形態では、組成物は、抗原及び／または抗体の代わりに、または抗原及び／または抗体に加えて、核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、ポリペプチド、例えば、ＡＭＨＲ２ポリペプチド及び／または抗体をコードするオープンリーディングフレームを含む発現ベクターを含む。

細胞（例えば、筋細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、樹状細胞、マクロファージなど）に取り込まれると、ＤＮＡ分子は、染色体外分子として細胞内に存在することができ、及び／または染色体に組み込まれ得る。ＤＮＡは、別個の遺伝物質として残留し得るプラスミドの形態で細胞に導入することができる。あるいは、染色体に組み込まれ得る直鎖状ＤＮＡを細胞に導入することができる。任意選択で、細胞にＤＮＡを導入する場合、染色体へのＤＮＡの組み込みを促進する試薬を加えることができる。

ＩＶ．方法
ＡＭＨＲ２発現細胞の殺傷、枯渇、または無効化方法
一態様では、本明細書において、ＡＭＨＲ２発現がん細胞を、ヒト化、ヒト、またはキメラ抗体などの抗ミューラーホルモン受容体２（ＡＭＨＲ２）抗体と接触させる方法を提供し、これにより、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の殺傷、無効化、または枯渇がもたらされる。

いくつかの実施形態では、本出願は、ＡＭＨＲ２発現がん細胞をＡＭＨＲ２抗体と接触させ、それによってＡＭＨＲ２発現がん細胞を殺傷することを含む、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化方法を提供する。無効化とは、細胞を部分的または完全に機能しないようにすることである。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２を発現するがん細胞の無効化は、がん細胞における増殖停止の誘導をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、そのがん細胞においてアポトーシスをもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がんの無効化は、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）による、細胞の溶解をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、その細胞においてネクローシスをもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、その細胞において増殖停止の誘導をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、その細胞において不活性化をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、その細胞においてＡＭＨＲ２タンパク質の活性の中和をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、その細胞の増殖の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の無効化は、腫瘍組織または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内の細胞の時間的発現に変化をもたらす。いくつかの実施形態では、この方法は、ＡＭＨＲ２発現がん細胞を除去することをさらに含む。

本明細書に記載のＡＭＨＲ２発現がん細胞を無効化するあらゆる態様において、特徴（複数可）または機能（複数可）の態様の増加または減少または変化を、抗ＡＭＨＲ２抗体と接触させていない細胞と比較する。

いくつかの実施形態では、本出願は、ＡＭＨＲ２発現がん細胞を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させ、それによってＡＭＨＲ２発現がん細胞を殺傷することを含む、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の殺傷（細胞死の誘導とも呼ばれる）方法を提供する。いくつかの実施形では、殺傷は、抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させていないＡＭＨＲ２発現がん細胞と比較して増加する。いくつかの実施形態では、接触は、ＡＭＨＲ２発現がん細胞においてプログラム細胞死を誘導する。いくつかの実施形態では、接触は、ＡＭＨＲ２発現がん細胞においてアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、プログラム細胞死は、カスパーゼ－３によって媒介される。いくつかの実施形態では、アポトーシスは、カスパーゼ－３によって媒介される。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞のうちの１０％～１００％を殺傷する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０、または１００％を殺傷する。

がんの治療方法
別の態様では、本明細書において、抗ミューラーホルモン受容体２（ＡＭＨＲ２）抗体を投与することによるがんの治療方法を提供する。

いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞の数を減少させる。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞を、例えば、ネクローシスまたはアポトーシスによって殺傷する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞を、増殖停止を受けるように誘導する。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２発現がん細胞は、もはや増殖しない。

いくつかの実施形態では、接触を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行う。いくつかの実施形態では、接触を、ｉｎ ｖｉｖｏで行う。いくつかの特定の実施形態では、接触を、ヒトにおいてｉｎ ｖｉｖｏで行う。いくつかの実施形態では、接触を、抗ＡＭＨＲ２抗体を投与することによって行う。いくつかの実施形態では、抗体を投与されている個体（ヒトなど）は、がんに罹患している。

別の態様では、本発明は、抗ＡＭＨＲ２抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体における免疫関連病態（例えば、がん）の治療方法を提供する。別の態様では、本発明は、抗ＡＭＨＲ２抗体を含む有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体における免疫応答の増強方法を提供する。免疫応答は、適応免疫応答または自然免疫応答であり得る。例示的な免疫応答として、体液性免疫応答（例えば、抗原特異的抗体（中和またはその他）の産生）及び細胞性免疫応答（例えば、リンパ球増殖）が挙げられる。１型炎症性免疫応答は、ＩＦＮγの産生を特徴とする。２型調節免疫応答は、ＩＬ－４またはＩＬ－５の発現を特徴とする。１７型炎症性免疫応答は、ＩＬ－１７の発現を特徴とする。いくつかの例では、混合免疫応答が生成され得る。例えば、いくつかの例では、ＩＦＮγとＩＬ－１７の両方の発現を特徴とする混合１型／１７型炎症性免疫応答が生成される。

いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される方法（ＡＭＨＲ２発現細胞の無効化をもたらす方法など）は、がんの治療に有用であり、したがって、抗ＡＭＨＲ２抗体または抗ＡＭＨＲ２抗体を投与される個体は、がんを有する。

任意の好適ながんを、本明細書中で提供される抗体で治療してもよい。がんの例として、固形腫瘍、軟部組織腫瘍、造血腫瘍及び転移性病変が挙げられる。造血器腫瘍の例として、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、例えば、形質転換ＣＬＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、毛状細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、またはリヒター症候群（Ｒｉｃｈｔｅｒ’ｓ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）が挙げられる。固形腫瘍の例として、様々な臓器系の悪性腫瘍、例えば、肉腫、腺癌、及び癌腫、例えば、頭頸部（咽頭を含む）、甲状腺、肺（小細胞または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳房、リンパ球、胃腸（例えば、口腔、食道、胃、肝臓、膵臓、小腸、結腸及び直腸、肛門管）、生殖器及び生殖管（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱、卵巣、子宮、子宮頸部、子宮内膜、前立腺、精巣）、ＣＮＳ（例えば、神経細胞またはグリア細胞、例えば、神経芽細胞腫または神経膠腫）、または皮膚（例えば、メラノーマ）に影響を及ぼす悪性腫瘍が挙げられる。

いくつかの実施形態では、がんは、医療分野で知られている、卵巣癌などのＡＭＨＲ２発現がんである。いくつかの実施形態では、がんは固形癌である。いくつかの実施形態では、がんは免疫回避性である。いくつかの実施形態では、がんは免疫応答性である。いくつかの実施形態では、がんは卵巣癌である。

いくつかの実施形態では、卵巣癌は、ステージＩ、ステージＩＡ、ステージＩＢ、ステージＩＣ、ステージＩＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩＡ１、ステージＩＩＩＡ２、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、ステージＩＶ、ステージＩＶＡ、またはステージＩＶＢの卵巣癌である。がんのステージを決定するための２つの系、ＦＩＧＯ（国際産婦人科連合）系とＡＪＣＣ（米国がん合同委員会）ＴＮＭ病期分類系が広く使用されている。しかしながら、両方の系の卵巣癌の要因と割り当てられるステージはほぼ同じである。したがって、ＦＩＧＯステージ分類でのステージＩＩ２Ｂの卵巣癌は、ＡＪＣＣステージ分類でのステージＩＩ２Ｂの卵巣癌と同じである。いくつかの実施形態では、がんは転移性卵巣癌である。

いくつかの実施形態では、がんは、少なくとも１つの治療に対して難治性である。いくつかの実施形態では、がんは、複数の治療に対して難治性である。いくつかの実施形態では、がんは、少なくとも２つの治療、３つの治療、または４つの治療に対して難治性である。難治性または抵抗性のがんは、治療に応答しないがんである。難治性のがんは、治療の開始時に耐性を示すか、または治療の過程で耐性を獲得し得る。

いくつかの実施形態では、抗体治療は、対象における免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は自然免疫応答である。

いくつかの実施形態では、抗体は、耐久性のある免疫応答を誘導する。耐久性のある免疫応答は、持続性の免疫応答である。いくつかの実施形態では、耐久性のある免疫応答は、６か月より長く持続する免疫応答である。いくつかの実施形態では、耐久性のある免疫応答は、１２か月より長く持続する。耐久性のある免疫応答は、６か月、８か月、１０か月、１２か月、１４か月、１６か月、１８か月、２０か月、２４か月、２６か月、２８か月、３０か月、３２か月、３４か月もしくは３６か月またはそれ以上、長く持続することができる。

いくつかの実施形態では、この方法は、個体由来の生体試料中のＡＭＨＲ２タンパク質の発現レベルを測定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、生体試料は、体液、組織試料、臓器試料、尿、糞便、血液、唾液、ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、生体試料は、腫瘍組織に由来する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＡＭＨＲ２タンパク質をコードするｍＲＮＡのｍＲＮＡ発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＡＭＨＲ２タンパク質の発現レベルを、ＦＡＣＳ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロット法、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光学、質量分光、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、多重ｑＰＣＲまたはＲＴ－ｑＰＣＲ、ＲＮＡ－ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技法、及びＦＩＳＨ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される方法を使用して試料中で検出する。

併用療法
特定の実施形態では、本明細書中で提供される方法は、１つ以上の追加の薬剤、例えば、限定されないが、抗がん剤（例えば、化学療法剤）、免疫療法剤、免疫調節剤及び／または抗血管新生剤を投与することをさらに含み、または本明細書中で提供される組成物は、それらの薬剤をさらに含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、追加の抗がん剤を含む。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、例えば、ベバシズマブ、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、レトロゾール、オラパリブ、タモキシフェン、トポテカン、トラベクチン、ＣＴＬＡ４抗体、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、及びＴＧＦβ抗体からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、天然または合成の抗がん剤、例えば、“Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ，” Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９９５，Ｗ．Ｏ．Ｆｏｙｅ Ｅｄに記載されている抗がん剤である。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、小分子を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、受容体アンタゴニストまたは遮断薬である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト（例えば、バタラニブ（ＰＴＫ－７８７／ＺＫ２２２５８４）など）、ＳＵ－５４１６、ＳＵ－６６６８、ＳＵ－１１２４８、ＳＵ－１４８１３、ＡＺＤ－６４７４、ＡＺＤ－２１７１、ＣＰ－５４７６３２、ＣＥＰ－７０５５、ＡＧ－０１３７３６、ＩＭ－８４２またはＧＷ－７８６０３４）、ＶＥＧＦｔｒａｐ、ＥＧＦＲ及び／またはＨＥＲ２アンタゴニスト（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ＣＩ－１０３３、ＧＷ－２０１６、ハーセプチン、イレッサ（ＺＤ－１８３９）、タルセバ（ＯＳＩ－７７４）、ＰＫＩ－１６６、ＥＫＢ－５６９、またはＨＫＩ－２７２）、インテグリン受容体アンタゴニスト、及びプロテインキナーゼ受容体アンタゴニスト（例えば、アトラセンタン）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＨＥＲ２の発現を阻害する。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、プロテインキナーゼのアンタゴニスト、例えば、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（例えば、ＢＡＹ－４３－９００６またはＢＡＹ－５７－９００６）のアンタゴニストまたはイマチニブを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、チューブリン結合剤を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、抗体を含む。例えば、化学療法抗体には、サイトカイン（例えば、ＴＧＦβ）に対する抗体、がん細胞の表面分子を標的とする抗体、及び成長因子またはそれらの受容体を標的とする抗体が含まれるが、これらに限定されない。抗体化学療法薬の非限定的な例として、アレムツズマブ、アポリズマブ、ベバシズマブ、ダクリズマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ、ミツモマブ、マツズマブ、オレゴボマブ、リツキシマブ、ビタキシン（ビトロネクチン受容体抗体）、ＤＣ１０１（ＶＥＧＦＲ２抗体）、ＩＤ０９Ｃ３（ＭＨＣクラスＩＩモノクローナル抗体）、及びＩＭＣ－１Ｃ１１（キナーゼ挿入ドメイン受容体抗体）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は細胞周期阻害剤である。

いくつかの実施形態では、抗がん剤はサイトカイン阻害剤である。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、低酸素選択的細胞毒素を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＴＮＦα阻害剤、例えば、エタネルセプトを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、インターフェロン、例えば、インターフェロンβを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、インターロイキン、例えば、ＩＬ－１０またはＩＬ－１２を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、免疫調節剤、例えば、レナリドマイドまたはサリドマイドを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４阻害剤、例えば、ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ（ＢＭＳ）、トレメリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及び／またはＫＡＨＲ－１０２（Ｋａｈｒ Ｍｅｄｉｃａｌ））である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、例えば、ＰＤ－１抗体（例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ）、ペンブロリズマブ／ラムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ）、ＡＭＰ－５１４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＳＴＩ－Ａ１１１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）及び／またはＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤、例えば、ＰＤ－Ｌ１抗体及び／またはＰＤ－Ｌ２抗体（例えば、ＲＧ－７４４６（Ｒｏｃｈｅ）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＢＭＳ）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＳＢ－００２０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＡＵＲ－０１２（Ｐｉｅｒｒｅ Ｆａｂｒｅ Ｍｅｄ）、ＳＴＩ－Ａ１０１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ））である。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ロイコトリエンアンタゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタードまたはその誘導体（例えば、ベンダムスチン、クロラムブシル、クロルメチン（メクロレタミン）、オキサザホスホリン（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、及びトロホスファミド）、メルファラン、ニトロミン、ウラムスチン）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、またはストレプトゾシン）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン）、エチレンイミン（アジリジン）（例えば、チオテパまたはヘキサメチルメラミン）、金属塩（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、またはオキサリプラチン）、またはヒドラジン（例えば、アルトレタミン、プロカルバジン、ダカルバジン、またはテモゾロミド）を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、サトラプラチン、テトラプラチン、またはイプロプラチンなどの白金化合物を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＤＮＡインターカレーター、例えば、アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、リポソームドキソルビシン（ドキシル）、エピルビシン、またはイダルビシンを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＤＮＡ副溝結合化合物を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＤＮＡ架橋剤を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、代謝拮抗薬、例えば、ピリミジンもしくはプリン類似体もしくはアンタゴニスト、またはヌクレオシド二リン酸レダクターゼ阻害剤を含む。代謝拮抗薬の非限定的な例として、シタラビン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ペメトレキセド、テガフール／ウラシル、ウラシルマスタード、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、カペシタビン、メルカプトプリン、クラドリビン、チオグアニン、メトトレキサート、ペントスタチン、またはヒドロキシ尿素が挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＤＮＡ転写、ＲＮＡ翻訳、またはタンパク質発現の阻害剤を含む。ＤＮＡ転写阻害剤の非限定的な例として、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤（例えば、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エピポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、または三環式カルボキシミド系薬剤）及び転写因子複合体の阻害剤（例えば、ＥＳＸ／ＤＲＩＰ１３０／Ｓｕｒ－２複合体の阻害剤）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、例えば、ボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、酵素、例えば、アスパラギナーゼまたはペグ化アスパラギナーゼ（ペガスパルガーゼ）を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、例えば、ＳＡＨＡ、ＭＤ－２７５、トリコスタチンＡ、ＣＢＨＡ、ＬＡＱ８２４、またはバルプロ酸などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含む。

いくつかの実施形態では、化学療法剤は、化学放射線増感剤または保護剤を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、がん遺伝子の阻害剤、例えば、Ｐ５３またはＲｂ阻害剤を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、植物由来の薬剤、例えば、タキサン（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）、ビンカアルカロイド（例えば、ナベルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンまたはビノレルビン）、または熱帯アルカロイド（例えば、コルヒチンまたはその誘導体）を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、キナゾリンまたはその誘導体、例えば、アファタニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはラパチニブを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、有糸分裂阻害剤、例えば、有糸分裂阻害ペプチド（例えば、フォモプシン及びドラスタチン）、有糸分裂阻害剤カルバメート誘導体（例えば、コンブレタスタチン（Ａ４）またはアンフェチニル）を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ステガナシンを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ホルモン遮断薬、例えば、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧＮｒＨ）アンタゴニスト（例えば、アバレリックス）、ＧＮｒＨ類似体、及びアロマターゼ阻害剤を含む。そのような抗アンドロゲンの非限定的な例として、アナンドロン、ビカルタミド、カソデックス、酢酸シプロテロン、フルタミド、ミトタン、及びニルタミドが挙げられる。抗エストロゲンの非限定的な例として、ドロロキシフェン、ラロキシフェン、タモキシフェン、トリオキシフェン、及びジンドキシフェンが挙げられる。ＧＮｒＨ類似体の非限定的な例として、リュープロレリン（リュープロリド）、ブセレリン、ゴセレリン及びトリプトレリンが挙げられる。アロマターゼ阻害剤の非限定的な例として、アミノグルテチミド、アナストロゾール、ファドロゾール、フォルメスタンまたはレトロゾール、及びテスタラクトンが挙げられる。ホルモン遮断薬の追加の例として、フィナステリドが挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ホルモンまたはその誘導体、例えば、エストロゲン（例えば、エストラムスチン（Ｔ－６６）、１７－β－エストラジオール（誘導体ＩＣＩ１６４，３８４またはＩＣＩ１８２，７８０を含む）、ゲスターゲン、またはプロゲスチン（例えば、メゲストロール）である。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ピペラジン誘導体、例えば、ピプロブロマンを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、グルタチオン類似体、例えば、ＴＬＫ－２８６を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、生物学的応答修飾剤、例えば、アルデスロイキンまたはデニロイキンジフチトックスを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、例えば、マリマスタット、ＴＩＭＰ－１、またはＴＩＭＰ－２を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、希土類元素の錯体、例えば、ランタニド錯体を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、抗がん効果を有する金属、例えば、亜鉛を含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、光化学的に活性化された薬物、例えば、ポルフィマー、フォトフリン、ベンゾポルフィリン誘導体、フェオホルビド誘導体、メロシアニン５４０（ＭＣ－５４０）またはスズエチオポルプリンを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、光化学療法で使用される薬剤、例えば、紫外線療法で使用されるソラレンを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、芳香族ニトロ化合物、例えば、ＲＳＵ－１０６９、ＲＢ－６１４５、またはＣＢ－１９５４を含む。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、例えば、ＳＲ－４２３３などのニトロキシルまたはＮ－オキシドを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ、例えば、オブリメルセンを含む。

いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ハロゲン化ピリミジン類似体、例えば、ブロモデオキシウリジンまたはヨードデオキシウリジンを含む。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、例えば、ＤＣ－１０１、ネオバスタット、テトラチオモリブデート、チミジンホスホリラーゼ阻害剤、またはＴＮＰ－４７０などの血管新生阻害剤を含む。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、抗生物質（マクロライドを含む）、抗真菌剤、または抗寄生虫剤を含み、これらは、抗がん効果を有していてもよく、有していなくてもよい。追加の薬剤として使用し得る抗生物質の非限定的な例として、アクリジン、アクチノマイシン、アムサクリン、アンサミトシン、アントラマイシン、ブレオマイシン、クロロマイシン、ダクチノマイシン、ジスタマイシン、デュオカルマイシン、ゲルダナマイシン、ケトコナゾール、リブロマイシン、メイタンシン、ミトラマイシン、ミトマイシン、ミトキサントン、ネトロプシン、ニトロイミダゾール（例えば、ベンズニダゾール、メトロニダゾール、ミソニダゾール、ニモラゾール、ＮＬＡ－１、ＮＬＰ－１）、ニトロアクリジン、ニトロキノリン、ニトロピラゾロアクリジン、オリボマイシン、フレオマイシン、フタラニリド（例えば、プロパミジンまたはスチルバミジン）、ピベンジモール、プリカマイシン、リファマイシン、リゾキシン、スクアラミン、タネスピマイシン（１７－アリルアミノゲルダナマイシン）、または前述のいずれかの誘導体または塩が挙げられる。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、アジリドキノン（例えば、マイトマイシンＣ、ＢＭＹ－４２３５５、ＡＺＱまたはＥＯ－９）を含む。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、２－ニトロイミダゾール、例えば、ミソニダゾール、ＮＬＰ－１またはＮＬＡ－１、ニトロアクリジン、ニトロキノリン、ニトロピラゾロアクリジンを含む。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、例えば、ステロイドまたは非ステロイド性抗炎症薬などの抗炎症薬を含む。ステロイドの非限定的な例として、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ブデノシド、フルオコルトロンまたはトリアムシノロンが挙げられる。追加の抗炎症薬の非限定的な例として、アセチルサリチル酸、メサラジン、イブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、インドプロフェン、ピルプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、ミロプロフェン、チオキサプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェン、チアプロフェン酸、フルプロフェン、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、ゾメピラック、ナブメトン、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、アルクロフェナク、ブロムフェナク、イブフェナク、アセクロフェナク、アセメタシン、フェンチアザク、クリダナク、エトドラク、オクスピナク、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルミン酸、トルフェナム酸、ジフルニサル、フルフェニサル、ピロキシカム、テノキシカム、ロモキシカム、ニメスリド、メロキシカム、セレコキシブ、及びロフェコキシブが挙げられる。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ビスホスホネートまたはその誘導体、例えば、ミノドロン酸またはその誘導体（ＹＭ－５２９、Ｏｎｏ－５９２０、ＹＨ－５２９）、ゾレドロン酸一水和物、イバンドロン酸ナトリウム水和物またはクロドロン酸二ナトリウムを含む。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、薬学的に許容される塩、水和物及び／または溶媒和物の形態である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、個々の光学異性体、個々のエナンチオマーの混合物、またはそれらのラセミ体の形態である。

追加の治療薬は、任意の好適な手段によって投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬は、同じ医薬組成物中に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬は、異なる医薬組成物中に含まれる。

本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬が異なる医薬組成物中に含まれる実施形態では、抗体の投与を、追加の治療薬の投与の前に、同時に、及び／または後に行うことができる。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬の投与を、互いに約１か月以内に行う。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬の投与を、互いに約１週間以内に行う。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬の投与を、互いに約１日以内に行う。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬の投与を、互いに約１２時間以内に行う。いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される抗体及び追加の治療薬の投与を、互いに約１時間以内に行う。

用量
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＡＭＨＲ２抗体のｉｎ ｖｉｖｏ投与について、通常の用量は、投与経路に応じて、１日あたり個体の体重１ｋｇあたり約１０ｎｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇもしくはそれ以上、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日～１０ｍｇ／ｋｇ／日で様々に異なり得る。数日間以上にわたる反復投与の場合、治療しようとする疾患または障害の重症度に応じて、症状の所望の抑制が生じるまで治療を継続する。例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの抗ＡＭＨＲ２抗体の初期用量を投与し、続いて隔週で約１ｍｇ／ｋｇの毎週の維持用量を投与することを含む。医師が達成したい薬物動態学的崩壊のパターンに応じて、他の投薬レジメンが有用であり得る。例えば、本明細書では、週に１回～２１回の個体への投薬が企図されている。特定の実施形態では、投薬は、約３μｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、及び約２／ｍｇ／ｋｇ）の範囲で使用してもよい。特定の実施形態では、投与頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、または月１回、２か月に１回、３か月もしくはそれ以上に１回である。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。投与する抗ＡＭＨＲ２抗体を含む投薬レジメンは、使用する用量とは無関係に時間とともに様々に異なり得る。

特定の実施形態では、治療有効量は、複数の用量、例えば、少なくとも２回の用量または少なくとも３回の用量を含む。いくつかの実施形態では、治療有効量は、３回以下の用量、例えば、正確に３回の用量を含む。いくつかの実施形態では、各用量を、１週間以上の間隔で、例えば、少なくとも２週間以上の間隔で、少なくとも３週間以上の間隔で、または少なくとも４週間の間隔で投与する。いくつかの実施形態では、各用量を、約４週間の間隔で投与する。

いくつかの実施形態では、各用量は、ほぼ同じ量の抗原を含む。いくつかの実施形態では、各用量は、ほぼ同じ量の抗原及び同じ量の炭水化物を含む。

いくつかの実施形態では、初期用量を投与し、そして免疫学的応答及び／または臨床応答について対象をモニタリングする。免疫学的モニタリングの好適な手段は、患者の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をレスポンダーとして使用し、腫瘍性細胞または抗原を記憶応答または想起応答を決定するための刺激剤として使用することを含む。免疫学的反応はまた、投与部位での炎症反応の遅延の存在によって決定することができる。所望の効果が達成されるまで、例えば、月次、半月次、または週次ベースで、最初の用量に続く１つ以上の用量を適切に与えることができる。その後、特に免疫学的または臨床的有用性が低下したように思われる場合には、必要に応じて追加のブースター用量または維持用量を与えることができる。

適切な投与量は、例えば、その用量を投与される対象において得られる血漿濃度を参照することによって決定してもよい。例えば、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）及び時間０から無限大までの血漿濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ（０－４））を使用してもよい。投与量には、Ｃｍａｘ及びＡＵＣ（０－４）の特定の所望の値を生成する投与量が含まれる。

投与量は、様々な要因、例えば、特定の抗原または組成物の活性；投与経路；投与時間；使用する特定の組成物中の成分の排泄または代謝の速度；治療期間；特定の抗原組成物と組み合わせて使用する他の薬物、化合物及び／または材料；対象の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態及び以前の病歴；ならびに医療分野で周知の同様の要因に依存し得る。

一般的に、本明細書に記載の組成物の「治療有効量」は、所望の免疫学的、予防的、または治療的効果を生み出すのに有効な最低量の量である。例えば、いくつかの実施形態では、治療有効量は、治療しようとする対象において有効な体液性または細胞性Ｔ細胞応答を誘導することができる量であるか、またはいくつかの実施形態では、有効な全身性免疫応答を誘導することができる量である。そのような有効量は、一般的に上記の要因に依存する。

いくつかの実施形態では、各用量は、約１μｇ～約２０ｍｇ、例えば、約１μｇ～約５ｍｇ、約５０μｇ～約２ｍｇ、または約１００μｇ～約１ｍｇの抗原を含む。例えば、いくつかの実施形態では、各用量は、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μｇ、約１ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．５ｍｇ、約５ｍｇ、約５．５ｍｇ、約６ｍｇ、約６．５ｍｇ、約７ｍｇ、約７．５ｍｇ、約８ｍｇ、約８．５ｍｇ、約９ｍｇ、約９．５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、またはそれらの間の任意の値の抗原を含む。

いくつかの実施形態では、各用量は、約１μｇ～約２０ｍｇ、例えば、約１０μｇ～約１０ｍｇ、約５０μｇ～約５ｍｇ、約１００μｇ～約２ｍｇ、または約１００μｇ～約１ｍｇの炭水化物を含む。例えば、いくつかの実施形態では、各用量は、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μｇ、約１ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．５ｍｇ、約５ｍｇ、約５．５ｍｇ、約６ｍｇ、約６．５ｍｇ、約７ｍｇ、約７．５ｍｇ、約８ｍｇ、約８．５ｍｇ、約９ｍｇ、約９．５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇもしくは約２０ｍｇ、またはそれらの間の任意の値の炭水化物を含む。

いくつかの実施形態では、抗体を、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内、または鼻腔内投与する。抗ＴＲＥＭ２抗体の有効量は、がんの治療のために投与してもよい。抗ＴＲＥＭ２抗体の適切な投与量は、治療しようとするがんの種類、抗ＴＲＥＭ２抗体の種類、がんの重症度及び経過、個体の臨床状態、個体の病歴及び治療への応答、ならびに担当医の裁量に基づいて判定され得る。

本明細書に開示する組成物（医薬組成物を含む）を、経口、非経口、及び「医薬組成物」の節で述べる他の投与経路を含む、任意の好適な投与経路によって投与してもよい。いくつかの実施形態では、治療有効量の組成物を、全身投与経路によって（例えば、経口または非経口投与を介して）投与する。いくつかの実施形態では、組成物の治療有効量を局所的に投与する。いくつかの実施形態では、治療有効量の組成物を、皮下、皮内、真皮下、または筋肉内注射によって投与する。

対象
本明細書に記載の方法を使用して、治療を必要とする任意の対象を治療することができる。

一般的に、現在開示されている組成物または製剤を投与する対象は、適応免疫系を有する。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。対象の例として、ヒト、家畜、イヌ、ネコ、マウス、ラット、及びそれらのトランスジェニック種が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

いくつかの実施形態では、対象は、がんを有するか、またはがんを発症するリスクがある。例えば、対象は、がんと診断されていてもよい。がんは、原発性がんまたは転移性がんであり得る。対象は、リンパ節転移を伴うかまたは伴わない、及び転移を伴うかまたは伴わない、任意のステージ、例えば、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶのがんを有していてもよい。提供された組成物は、がんのさらなる成長を防止または低減し、及び／またはそうでなければ、がんを改善し得る（例えば、転移を予防または軽減する）。

いくつかの実施形態では、対象は、がんを有していないが、例えば、環境曝露、１つ以上の遺伝子変異またはバリアントの存在、家族歴などの１つ以上のリスク因子の存在のために、がんを発症するリスクがあると判定されている。

いくつかの実施形態では、対象は、がんを有すると診断されている。例えば、提供される組成物及び製剤は、例えば、予防が特に効果的であり得るなどの１つ以上の部分集団内の、リスクにさらされていると特定された個体において、予防ワクチンとして使用してもよい。例えば、乳癌に対するワクチンに関して、対象は、例えば、非授乳期の女性であってもよい。

いくつかの実施形態では、がんは、卵巣癌（例えば、原発性卵巣癌、転移性卵巣癌）である。いくつかの実施形態では、乳癌は、ＡＭＨＲ２に陽性であるか、またはＡＭＨＲ２に陽性である細胞を含む。

いくつかの実施形態では、対象は、卵巣腫瘍の少なくとも一部を除去するために手術を受けている。いくつかの実施形態では、対象は、そのようなリスクに関連する変異、例えば、ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２遺伝子の変異を有するために、遺伝的に卵巣癌を発症しやすい。いくつかの実施形態では、対象は、卵巣癌の家族歴を有する。

いくつかの実施形態では、がんは、提供される組成物または製剤において、抗原として使用されるポリペプチド、またはその断片（複数可）及び／またはバリアント（複数可）を抗原として使用されるポリペプチドを発現または過剰発現する。例えば、いくつかの実施形態では、がん（例えば、乳癌）は、ＡＭＨＲ２を発現または過剰発現する。

いくつかの実施形態では、対象は、追加の治療を投与したか、投与する予定であるか、または同時に投与する。追加の治療法は、例えば、外科的切除、放射線療法、化学療法、及び／または免疫療法の他の様式を含み得る。いくつかの実施形態では、追加の療法は、本明細書に記載の追加の薬剤を含む。

例えば、いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載されるような抗がん剤を含む抗がん療法を投与したか、投与する予定であるか、または同時に投与する。

いくつかの実施形態では、投与は、本明細書に記載されるような組成物の免疫原性を妨害することを回避させるような方法で、追加の治療に対してタイミングがとられる。

いくつかの実施形態では、対象は追加の治療を受けており、追加の治療の結果として、対象は、対象が治療されている疾患の臨床症状、例えば、臨床的に測定可能な腫瘍を示さない。しかしながら、いくつかの実施形態では、対象は、疾患の再発または進行のリスクがあると判定される。例えば、疾患ががんである場合、対象は、いくつかの実施形態では、例えば、元の腫瘍部位の近くで、及び／または転移性部位で、がんの再発または進行のリスクがあると判定され得る。そのような対象は、さらにリスクの高い対象とリスクの低い対象に分類することができる。分類は、例えば、以前に観察された特徴及び／または追加療法による治療後に基づいて行うことができる。これらの特徴は臨床技術で知られており、がんの種類ごとに定義され得る。高リスクのサブグループに典型的な特徴には、隣接する組織への浸潤、及び／またはリンパ節の関与が含まれる。したがって、例えば、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与して、抗がん応答を誘発して、がんの再発または進行を予防することができる。

応答
いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、免疫応答を誘導する。

一般的に、免疫応答には、体液性免疫応答、細胞性免疫応答、またはその両方が含まれる。

体液性応答は、例えば、医薬組成物を投与されている対象に由来する血清試料中の抗体レベルの標準的なイムノアッセイによって測定することができる。

細胞性免疫応答は、通常Ｔ細胞が関与する応答であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができる。例えば、一般的な細胞性免疫応答は、薬学的に許容される組成物の投与後の好適な時間に対象からサンプリングされた細胞（例えば、末梢血白血球（ＰＢＬ））におけるＴ細胞増殖活性として測定することができる。例えば、ＰＢＭＣを刺激装置と共に適切な期間インキュベートした後、［３Ｈ］チミジン取り込みを測定することができる。増殖しているＴ細胞の割合は、フローサイトメトリーを使用して測定することができる。細胞性免疫を測定する別の方法は、抗原への応答において１型及び／または炎症性１７型サイトカインを分泌するＴ細胞の循環頻度を測定することを含む。

いくつかの実施形態では、免疫応答は、抗原特異的Ｔ細胞免疫応答を含み、これには、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはその両方が含まれ得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞免疫応答は、１型または１７型炎症性Ｔ細胞応答を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞免疫応答は、１型及び１７型炎症性Ｔ細胞応答の両方を含む。

抗原が細胞上に発現している場合、組成物を投与することにより、その細胞に対する免疫応答が誘発され得る。例えば、抗原が腫瘍関連抗原である場合、組成物を投与することにより、その抗原を発現する腫瘍細胞に対する免疫応答が誘発され得る。

いくつかの実施形態では、投与は、参照レベルと比較して、対象における肉芽腫形成の減少を引き起こす。例えば、参照レベルは、完全フロイントアジュバントを含む組成物を投与された対象において観察される肉芽腫形成のレベルであり得る。いくつかの実施形態では、参照レベルは、不完全フロイントアジュバントを含む組成物を投与された対象において観察される肉芽腫形成のレベルである。「肉芽腫形成の減少」は、例えば、形成される肉芽腫の減少、重症度の低下した肉芽腫、重症度がより急速に低下する肉芽腫、及び（部分的または完全に）より迅速に解消する肉芽腫のうちの１つ以上によって特徴付けられ得る。

細胞治療
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する組成物とｉｎ ｖｉｔｒｏで接触させた対象細胞（例えば、抗原提示細胞またはその前駆体）、またはそのような細胞、例えば、抗原プライミングされた抗原提示細胞または抗原特異的リンパ球から生成された細胞に投与することを含む方法を提供する。

調製方法
本明細書に記載の抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え法及び組成物を使用して産生することができる。

一実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする単離核酸を提供する。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）または単一ドメイン抗体のＶＨＨを含むアミノ酸配列をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。一実施形態では、核酸を、マルチシストロン性ベクターで提供する。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞を提供する。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗原結合ポリペプチド構築物のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗原結合ポリペプチド構築物のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗原結合ポリペプチド構築物のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗体の作製方法を提供し、この方法は、上述される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養すること、及び任意選択で、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することを含む。

抗体の組み換え産生に関しては、例えば、上述の抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離し、配列決定してもよい。

用語「実質的に精製された」とは、その天然の環境、すなわち天然の細胞、または組換え産生される抗体の場合は宿主細胞に認められるタンパク質に通常付随するかまたは相互作用する成分を実質的または本質的に含まない可能性がある、本明細書に記載の構築物またはそのバリアントを指し、特定の実施形態では、細胞物質を実質的に含まず、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満（乾燥重量で）の汚染タンパク質を有するタンパク質の製剤を含む。抗体またはそのバリアントが宿主細胞によって組換え産生される場合、特定の実施形態におけるタンパク質は、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％もしくはそれ未満の細胞の乾燥重量で存在する。抗体またはそのバリアントが宿主細胞によって組換え産生される場合、タンパク質は、特定の実施形態において、培養培地中に約５ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ、約７５０ｍｇ／Ｌ、約５００ｍｇ／Ｌ、約２５０ｍｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ、または約１ｍｇ／Ｌもしくはそれ未満の細胞の乾燥重量で存在する。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法によって産生される「実質的に精製された」抗体は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析、ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、及びキャピラリー電気泳動などの適切な方法による測定で、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％の純度レベル、具体的には、少なくとも約７５％、８０％、８５％の純度レベル、より具体的には、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％の純度レベル、少なくとも約９９％またはそれ以上の純度レベルを有する。

抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。

「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」とは、例えば、直接取り込み、形質導入、ｆ接合、または組換え宿主細胞を作成するための当技術分野で公知の他の方法などの、挿入に用いられる方法に関係なく、外来性ポリヌクレオチドを含む細胞を指す。外来性ポリヌクレオチドは、非組込み型ベクター、例えば、プラスミドとして維持され得るか、あるいは、宿主ゲノムに組み込まれ得る。宿主細胞には、ＣＨＯ、ＣＨＯの誘導株、ＮＳ０、Ｓｐ２Ｏ、ＣＶ－１、ＶＥＲＯ－７６、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、Ｐｅｒ．Ｃ６、またはＢＨＫが含まれ得る。

本明細書中で使用される場合、用語「真核生物（ｅｕｋａｒｙｏｔｅ）」とは、動物（哺乳動物、昆虫、爬虫類、鳥類などを含むがこれらに限定されない）、繊毛虫、植物（単子葉植物、双子葉植物、藻類などを含むがこれらに限定されない）、真菌、酵母、鞭毛虫、爬虫類、原生生物などの真核生物の系統発生ドメインに属する生物を指す。

本明細書中で使用される場合、用語「原核生物（ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅ）」とは、原核生物を指す。例えば、非真核生物は、真正細菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａなどを含むがこれらに限定されない）系統発生ドメイン、または古細菌（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ、Ｈａｌｏｆｅｒａｘ ｖｏｌｃａｎｉｉなどのＨａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ及びＨａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種ＮＲＣ－１、Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ、Ａｅｕｒｏｐｙｒｕｍ ｐｅｒｎｉｘなどを含むがこれらに限定されない）系統発生ドメインに属し得る。

例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌内で産生してもよい。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい）。発現後、抗体を細菌細胞ペーストから可溶性画分に単離してもよく、さらに精製することができる。

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照のこと。

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用し得る多数のバキュロウイルス株が同定されている。

植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するための、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。

脊椎動物細胞もまた、宿主として使用してもよい。例えば、懸濁液中で増殖するように適合される哺乳動物細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児由来腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカングリーンモンキー腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されているＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞を含む）（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照のこと。

一実施形態では、本明細書に記載の抗体を：その抗体をコードする核酸を所定の比率で、少なくとも１つの安定な哺乳動物細胞にトランスフェクトし；そして少なくとも１つの哺乳動物細胞内でその核酸を発現させることを含む方法によって、安定な哺乳動物細胞内で産生する。いくつかの実施形態では、核酸の所定の比率を一過性トランスフェクション実験において決定し、発現させた生成物中の抗体の最高の割合をもたらす入力核酸の相対的比率を決定する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の安定な哺乳動物細胞において抗体を産生する方法で、少なくとも１つの安定な哺乳動物細胞の発現産物が、単量体の重鎖または軽鎖ポリペプチド、または他の抗体と比較して、所望の抗体をより高い割合で含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の安定な哺乳動物細胞において抗体を産生する方法で、前記方法は、所望の抗体を同定し、精製することを含む。いくつかの実施形態では、前記同定は、液体クロマトグラフィー及び質量分析の一方または両方によるものである。

必要に応じて、発現後に抗体を精製または単離することができる。タンパク質は、当業者に公知の様々な方法で単離または精製してもよい。標準的な精製方法として、ＦＰＬＣ及びＨＰＬＣなどのシステムを使用して大気圧または高圧で実行される、イオン交換、疎水性相互作用、親和性、サイジングまたはゲル濾過、及び逆相などのクロマトグラフィー技術が挙げられる。精製方法には、電気泳動、免疫学、沈殿、透析、及びクロマトフォーカシング技術も含まれる。タンパク質濃度と組み合わせた限外濾過及びダイアフィルトレーション技術も有用である。当技術分野で周知のように、様々な天然タンパク質がＦｃ及び抗体に結合し、これらのタンパク質は、抗体の精製のために、本発明で使用することができる。例えば、細菌のプロテインＡ及びＧは、Ｆｃ領域に結合する。同様に、細菌のプロテインＬはいくつかの抗体のＦａｂ領域に結合する。多くの場合、精製は特定の融合パートナーによって可能になる。例えば、ＧＳＴ融合が採用されている場合はグルタチオン樹脂を、Ｈｉｓタグが採用されている場合はＮｉ^＋２アフィニティークロマトグラフィーを、ｆｌａｇタグを使用する場合は固定化抗ｆｌａｇ抗体を使用して、抗体を精製してもよい。好適な精製技術の一般的なガイダンスについては、例えば、全体が参照により援用されるＰｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３^ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｃｏｐｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９９４（全体が参照により援用される）を参照のこと。必要な精製の程度は、抗体の用途によって様々に異なる。いくつかの例では、精製は必要ない。

特定の実施形態では、Ｑ－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＥＡＥ ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ｐｏｒｏｓ ＨＱ、ｐｏｒｏｓ ＤＥＡＦ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｑ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＱＡＥ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＤＥＡＥ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ／Ｓｏｕｒｃｅ Ｑ及びＤＥＡＥ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ Ｑ及びＤＥＡＥカラムを含むがこれらに限定されない陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、抗体を精製する。

特定の実施形態では、ＳＰ－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＣＭ ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ｐｏｒｏｓ ＨＳ、ｐｏｒｏｓ ＣＭ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＳＰ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＣＭ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ／Ｓｏｕｒｃｅ Ｓ及びＣＭ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ Ｓ及びＣＭカラム、ならびにそれらの均等物及び同等品を含むがこれらに限定されない陽イオン交換クロマトグラフィーを使用して、本明細書に記載のタンパク質を精製する。

さらに、当技術分野で公知の技術を使用して、本明細書に記載の抗体を化学的に合成することができる（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ ａｎｄ Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１０：１０５－１１１（１９８４）を参照のこと）。例えば、ペプチドシンセサイザーを使用することによって、ポリペプチドの断片に対応するポリペプチドを合成することができる。さらに、必要に応じて、非古典的アミノ酸または化学的アミノ酸類似体を、ポリペプチド配列への置換または付加として導入することができる。非古典的アミノ酸として、一般的なアミノ酸のＤ－異性体、２，４ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、ｇ－Ａｂｕ、ｅ－Ａｈｘ、６アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、シスチン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、アラニン、フルオロアミノ酸、メチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ－メチルアミノ酸、Ｎ－メチルアミノ酸、及び一般的なアミノ酸類似体が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、アミノ酸は、Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。

Ｖ．医薬組成物
本明細書において、抗ミューラーホルモン受容体２（ＡＭＨＲ２）抗体及び薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本出願は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と共に本明細書に記載の抗体のいずれか１つ以上を含む医薬組成物を含む、抗体を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は無菌である。医薬組成物は、一般的に、有効量の抗体を含む。

これらの組成物は、本明細書に開示する抗体の１つ以上に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、または当業者に周知の他の材料を含み得る。そのような材料は無毒であるべきであり、活性成分の有効性を妨げるべきではない。担体または他の材料の正確な性質は、例えば、経口、静脈内、皮膚または皮下、鼻、筋肉内、腹腔内経路などの投与経路に依存し得る。

本明細書に開示する医薬組成物は、以下に適合されるものを含む、固体または液体形態での投与のために特別に製剤化され得る：（１）経口投与、例えば、ドレンチ（水溶液または非水溶液または懸濁液）、錠剤（例えば、頬側、舌下、または全身吸収を標的とするもの）、ボーラス、散剤、顆粒、またはペースト（例えば、舌への塗布用）；または（２）例えば、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、または硬膜外注射による非経口投与。非経口投与に適した製剤の非限定的な例として、無菌溶液、無菌懸濁液、及び徐放性製剤が挙げられる。

経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、散剤または液体の形態であり得る。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体担体を含み得る。液体医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物油または植物油、鉱油または合成油などの液体担体を含む。生理食塩水、デキストロースもしくは他の糖類溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールなどのグリコールを含めることができる。

非経口投与に適した医薬組成物は、薬学的に許容される無菌の等張水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョンとして提供され得る。あるいは、またはさらに、非経口投与用の医薬組成物は、無菌粉末として提供してもよく、これを、使用直前に無菌注射溶液または分散液に再構成してもよい。そのような注射溶液は、意図されるレシピエントの血液と製剤を等張にする１つ以上の薬剤、１つ以上の懸濁剤、及び／または１つ以上の増粘剤を含み得る。例えば、注射溶液は、１つ以上の糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び溶質を含み得る。

好適な水性及び非水性の薬学的に許容される担体の例として、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物；オリーブオイルなどの植物油；ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられるが、これらに限定されない。適正な流動性は、例えば、コーティング材（レシチンなど）の使用によって、分散液の場合には要求される粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。

本明細書に開示する医薬組成物は、エマルジョンとして製剤化してもよい。例えば、エマルジョンとして製剤化されるワクチン組成物を提供し、これは、アルミニウムベースのワクチンの代替物を提供する。エマルジョン製剤は、本明細書でさらに説明するように、任意の代謝性油などの油を用いて水性緩衝液に溶解した抗原を乳化することによって調製してもよい。エマルジョン製剤は、短命のデポーを形成して、自然免疫細胞によるワクチンの貪食を促進する場合があり、その結果、免疫応答が生じる（Ｌｅｅｎａａｒｓ，Ｋｏｅｄａｍ ｅｔ ａｌ．１９９８）。そのようなエマルジョンに使用される油は、ユニークな免疫刺激を与え、ミョウバンアジュバントを含むワクチンに比べて、より強い免疫応答をもたらすことができる（Ｄｅ Ｇｒｅｇｏｒｉｏ，Ｃａｐｒｏｎｉ ｅｔ ａｌ．２０１３）。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるように、エマルジョン、例えば、抗原及び代謝性油を含む油中水型エマルジョンを含む医薬組成物を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、α－ラクトアルブミンポリペプチド、ザイモサン、及び代謝性油を含む医薬組成物を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、約４０～６０％ｖ／ｖの代謝性油で乳化された約４０～６０％ｖ／ｖの水相抗原を含む（任意選択で、本明細書でさらに記載するように、炭水化物を混合する）医薬組成物を提供する。例えば、医薬組成物は、約５０％ｖ／ｖの代謝性油／炭水化物組成物中の約０．１～２５ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．５～５ｍｇ／ｍＬ）の抗原を含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物のエマルジョンは、水相抗原を、代謝性油と、約１．５：１～約１：１．５、例えば、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１．１：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、もしくは約１：１．５、またはその間の任意の値の比率で混合することによって形成される。いくつかの実施形態では、エマルジョンを形成する前に、炭水化物を代謝性油に懸濁する。いくつかの実施形態では、エマルジョンを形成する前に、ザイモサンを代謝性油に懸濁する。

本明細書に開示する医薬組成物を、当業者に公知の従来の方法によって、医薬的に許容される剤形に製剤化してもよい。

提供される医薬組成物中の代謝性油及び／または炭水化物は、いくつかの実施形態では、医薬組成物の免疫原性を増加させるアジュバントとして作用し得る。

静脈内、皮膚または皮下注射、または苦痛部位での注射の場合、活性成分は、発熱物質フリーで、好適なｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態である。当業者は、例えば、等張性ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、乳酸リンゲル注射を使用して、好適な溶液を十分に調製することができる。必要に応じて、防腐剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤及び／または他の添加剤を含めることができる。

組成物は、単独で、または他の治療と組み合わせて、治療しようとする病態に応じて同時にまたは連続して投与することができる。

これらの製剤または組成物の調製方法は、抗原を、炭水化物、代謝性油、薬学的に許容される担体、及び任意選択で１つ以上の補助成分と結合させるステップを含み得る。一般的に、製剤は、本明細書に記載の１つ以上の組成物成分を、液体の薬学的に許容される担体、微粉化された固体の薬学的に許容される担体、またはその両方と均一かつ密接に会合させ、次いで必要に応じて生成物を成形することによって調製してもよい。

個体に投与されるのがポリペプチド、抗体（例えば、抗ＡＭＨＲ２抗体）、核酸、小分子または他の薬学的に有用な化合物であるかどうかにかかわらず、投与は、好ましくは「治療有効量」または「予防有効量」であり（場合によっては、予防は治療と見なすことができるが）、これはその個体に利益を示すのに十分である。実際に投与される量、ならびに投与の速度及び時間経過は、治療しようとするタンパク質凝集疾患の性質と重症度によって異なる。治療の処方、例えば用量の決定などは、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内であり、通常、治療しようとする障害、個々の対象の状態、送達部位、投与方法及び医師に知られている他の要因を考慮に入れる。上記の技術及びプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０に見出され得る。

ＶＩ．キット及び製品
本出願は、本明細書に記載の抗体及び／またはワクチン組成物のいずれか１つ以上を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、二次抗体のいずれか、免疫組織化学分析用の試薬、薬学的に許容される賦形剤及び取扱説明書、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される成分をさらに含む。特定の一実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗体組成物のいずれか１つ以上と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を含む。

本出願はまた、本明細書に記載の抗体組成物またはキットのいずれか１つを含む製品を提供する。製品の例には、バイアル（密封されたバイアルを含む）が含まれる。

以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の実施例である。実施例は、例証目的で提示されるにすぎず、決して本発明の範囲を限定するようには意図されていない。使用される数値（例えば、量、温度など）に対する正確さを確保する努力がなされているが、当然のことながら、いくらかの実験誤差及び偏差が許容されるべきである。

実施例１：ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤ抗体の生成
材料及び方法
組換えヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの生成
ヒトＡＭＨＲ２の組換え細胞外ドメイン（ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤ；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿０１５９８１．１；Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ１６６７１）を、Ｍａｚｕｍｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ Ｒｅｓ（Ｐｈｉｌａ）１０：６１２－２４に以前に記載されているように、エンドトキシンフリーＣ末端ヘキサヒスチジン（６×Ｈｉｓ）タグ付き融合タンパク質として生成し、精製した。組換え融合タンパク質で使用されるヒトＡＭＨＲ２の細胞外ドメインは、本明細書の配列番号１１に示されている。

ハイブリドーマの免疫化及び生成
雌ＢＡＬＢ／ｃＪマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ストック番号０００６５１；Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入し、７～８週齢において、１００μｌのＵＳＰグレード水中の１００μｇのｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤと１００μｌのＳｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（＃Ｓ６３２２；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）とのエマルジョンを使用して免疫した。各マウスは、２～３週間間隔で４回の同一の免疫化を受け、最初の免疫化は皮下投与（ｓ．ｃ．）し、残りの３回のブースター免疫は腹腔内投与した。最終免疫の３日後、免疫化したマウスの脾臓細胞を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用してマウス骨髄腫細胞株Ｓｐ２／Ｏ－Ａｇ１４（＃ＣＲＬ－１５８１；アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）と融合させた。融合させたハイブリドーマ細胞を、ヒポキサンチン－アミノプテリン－チミジン（ＨＡＴ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を添加したＤＭＥＭ－２０／ＨＥＰＥＳ／ピルベート培地中で、加湿空気中、３７℃、５％ＣＯ２にて培養した。細胞が約２５％コンフルエントに達した１５日目、ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤへの抗原特異的結合について、組換えマウスβ－カゼインを特異性対照として使用して、以下に記載されるようにハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによって試験した。続いて、抗原特異的ハイブリドーマを限界希釈によりサブクローニングし、それらの上清を上記のように精製し、サブクローニングしたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をＭｏｕｓｅＴｙｐｅｒ（登録商標）アイソタイピングパネル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用してアイソタイピングした。ハイブリドーマクローンを、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）またはｕｌｔｒａ－ｌｏｗ ＩｇＧ ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を含むＤＭＥＭ中で、対数増殖期に達するまで増殖させた。Ｐｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ ＩｇＧ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用したプロテインＧクロマトグラフィー（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、続いてＰｉｅｒｃｅ ＩｇＧ Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用した溶出により、ハイブリドーマ上清からｍＡｂを精製した。ｍＡｂは、ｐＨ９．０の１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌに回収した。回収したすべての画分を濃縮し、１ｍｇ／ｍｌの生理食塩水で再構成し、０．２２μｍフィルターを通過させ、必要になるまで－２０℃で保存した。

競合ＥＬＩＳＡ
競合ＥＬＩＳＡによってｍＡｂの特異性を決定した。簡潔に述べると、０．０２％Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含む液相ＰＢＳ中で、ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤの濃度を上げながら、４℃で２４時間、ｍＡｂをインキュベートした。４μｇ／ｍｌ ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤでプレコートし、続いて１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でブロッキングした９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ，ＭＡ）に、抗原－抗体混合物を加えた。組換えマウスβ－カゼインを特異性対照として使用した。次いで、ウェルを、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ；ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）をコンジュゲートした二次抗マウスＩｇＧと共にインキュベートし、続いて２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）基質（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。４０５ｎｍでの吸光度によって光学密度を測定した。

ヒトＥＯＣ細胞株
ヒト卵巣癌８（ＯＶＣＡＲ８）ＥＯＣ細胞株は商業的に入手し（ＡＴＣＣ ＃ＣＶＣＬ－１６２９）、Ｇｅｎｅｔｉｃａ ＤＮＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）によって認証されている。ＯＶＣＡＲ８細胞を、閉経後の女性（ＡＭＨ ｌｏｗ／ｆｒｅｅ；ＢｉｏＩＶＴ，Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）由来の１０％ヒト血清、５％ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を添加したＤＭＥＭ中で増殖させた。ＯＶＣＡＲ８細胞を、マイコプラズマについて定期的に試験し、それらの継代数は１０を超えさせなかった。ヒトＡＭＨＲ２の転写バリアント１（登録番号ＮＭ＿０２０５４７；Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）をｐＥＺ－Ｍ６８ベクター（ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）にクローニングし、この発現ベクターを使用し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）３０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してＯＶＣＡＲ８細胞をトランスフェクトすることによって、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞株を生成した。親ＯＶＣＡＲ８細胞について上記したように、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を増殖させた。

ＥＯＣ細胞溶解物の生成及びウエスタンブロッティング
細胞株、組織、または新鮮なヒト高悪性度漿液性卵巣癌（ＨＧＳＯＣ）由来の溶解物は、ＤＭＥＭ中で細かく砕いて粉砕した後、コラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及びＤＮａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で処理することによって調製した。懸濁液を遠心分離して破片を除去し、溶解物をＰＢＳで洗浄し、各溶解物由来の２５μｇのタンパク質を変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）の各レーンにロードした。ゲルをポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレン（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に転写し、一次抗体として０．００１μｇ／ｍｌの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した。図２Ｄでは、ＡＭＨＲ２－ＥＤを検出するための一次抗体として、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの代わりに市販のＡＭＨＲ２－ＥＤ ｍＡｂ（＃ｓｃ－３７７４１３；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｌｌａｓ，ＴＸ）を１．０μｇ／ｍｌで使用した。溶解物のウエスタンブロットを使用して、漸増濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂ（１．０～１０μｇ／ｍｌ）で処理したＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞内のポリ（ＡＤＰリボ－ス）ポリメラーゼ－１（ＰＡＲＰ－１）のカスパーゼ－３を介した切断を、インタクトな１１６ｋＤａ ＰＡＲＰ－１及びアポトーシスに関連するその８９ｋＤａ切断バリアントの検出に一次ウサギ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）を使用することにより検出した。二次検出抗体は、１：１０，０００希釈のＨＲＰ結合ウサギ抗マウスＩｇＧ（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）または１：５，０００希釈のＨＲＰ結合ヤギ抗ウサギ抗体（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）による処理を含んでいた。すべての場合において、溶解物のローディングはβ－アクチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）に対して一次ｍＡｂを使用して正規化し、陰性対照溶解物はヒト前立腺癌細胞株Ｃ４－２（ＡＴＴＣ（登録商標）＃ＣＲＬ－３３１４）から生成し、ＨｙＧＬＯ（商標）化学発光系（Ｔｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｗｅｄｅｓｂｏｒｏ，ＮＪ）を使用してブロットを現像した。

免疫組織染色
ヒトＨＧＳＯＣ及び正常な隣接組織の免疫染色を、ホルマリン固定し、パラフィン包埋した５μｍ切片上で実施した。一次抗体は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ分布を視覚化するための０．００５μｇ／ｍｌの精製４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを含んでおり、それに続いてＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、及びアポトーシス細胞を検出するためのウサギポリクローナルカスパーゼ－３抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、続いてＨＲＰ結合抗ウサギＩｇＧ（Ａｂｃａｍ）を加えた。

フローサイトメトリー
採取した細胞をＦｃ受容体ブロック（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で処理し、ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤに対して生成された精製ｍＡｂまたはアイソタイプ対照マウスＩｇＧのいずれかと共にインキュベートした。次いで、細胞をＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で処理し、ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩフローサイトメーターとＢＤＦａｃｓＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したフローサイトメトリーによって抗原特異性を分析した。陽性対照染色は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ（Ａｂｃａｍ）に対する市販のｍＡｂを使用して実施し、一方、無関係な特異性を有するマウスＩｇＧ１アイソタイプ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を陰性対照として使用した。組換えヒトＡＭＨ（ＬＳＢｉｏ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）及び組換え卵白アルブミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を競合結合アッセイで使用した。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによって認識されるＡＭＨＲ２－ＥＤ配列の同定
競合ＥＬＩＳＡを使用して、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによって認識されるＡＭＨＲ２－ＥＤ配列を決定した。ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの１３２アミノ酸配列全体にまたがる重複する１６ｍｅｒペプチドのセットを生成した。１アミノ酸をシフトさせた各ペプチド、及びすべてのシステイン残基を、セリンに置き換えて、ジスルフィド結合の形成を回避した（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）。個々の１６ｍｅｒペプチドをマイクロタイターウェルに固相でプレーティングし、各１６ｍｅｒペプチドの濃度を増加させて液相中で４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと共にインキュベートし、ＥＬＩＳＡを上記のように実施した。ＡＭＨＲ２－ＥＤの免疫反応性領域にまたがって各アミノ酸のアラニン置換を含む重複ペプチドを使用した競合ＥＬＩＳＡによって、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合部位を確認した。置換ペプチドを４Ｄ１２Ｇ１ｍＡｂと共に液相中で使用して、固相でのｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合阻害を測定した。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２－ＥＤ結合配列と、そのような結合に重要なＡＭＨＲ２－ＥＤ残基を、ＳＰＯＴペプチドアレイによって確認した。ＡＭＨＲ２－ＥＤ ９－４０免疫反応性領域にまたがり、長さが４～１６ｍｅｒの範囲のペプチドを、セルロースメンブレン（ＪＰＴ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上で９０％超の純度で合成し、ブロッキング緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で一晩処理し、続いて４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを１．０μｇ／ｍｌで室温にて３時間処理し、続いて０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含有するＰＢＳで３回洗浄した。次いで、膜を１：１０，０００希釈のＨＲＰ結合ウサギ抗マウスＩｇＧ（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）で処理した後、０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含有するＰＢＳで３回洗浄した。結合した抗体を、ＨｙＧＬＯ化学発光系（Ｔｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して検出した。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）
Ｂｉａｃｏｒｅ３０００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して２５℃で測定したＳＰＲによるリアルタイム高感度結合によって、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂとｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤの間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を測定した。簡潔に述べると、３００ｎＭの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂをｐＨ５．０の酢酸ナトリウムで希釈し、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）とＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の水溶液を使用して、金表面上のカルボキシメチル化デキストランに共有結合で固定化した。ｐＨ７．４の１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．００５％Ｐ２０界面活性剤を含有するランニング緩衝液中の様々な濃度（１０－１～１０３ｎＭ）のｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤ受容体分析物を、固定化された４Ｄ１２Ｇ１リガンド上に３０ｍｌ／分で流して捕捉した。フローセルの再生は、ｐＨ１．７で１０ｍＭグリシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して実施した。すべてのセンサーグラムを、対照フローセルの低シグナルと４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの解離曲線を差し引くことによって補正した。親和性と結合力を考慮して、Ｌａｎｇｍｕｉｒ １：１フィッティングモデルとＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．２ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＫ_Ｄ値を計算した。

ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの分子モデリング
ＡＭＨＲ２－ＥＤの分子モデリングは、Ｐｈｙｒｅ２及び３ＤＬｉｇａｎｄＳｉｔｅツールを使用して実施した。ヒューリスティックに基づいてＡＭＨＲ２－ＥＤをモデル化するために４つのテンプレートを選択し、信頼度、同一性の割合、及びアラインメントカバー度を最大化した。これらのテンプレートには：１）アクチビン２型受容体（ＡＣＶＲ２）の細胞外ドメインに対する１ｂｔｅ；２）アクチビン受容体様キナーゼ１（ＡＬＫ１）に対する４ｆａｏ；３）骨形成タンパク質受容体２型（ＢＭＰＲ２）に対する２ｈｌｑ；及び４）骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）の三元リガンド－受容体複合体に対する２ｈ６２が含まれていた。その後の分析では、１００％の信頼度で構造モデリングを選択した。ＡＭＨＲ２－ＥＤタンパク質断片を、ＰｙＭＯＬ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍバージョン１．５．０．５を使用して視覚化した。

プログラム細胞死のリアルタイムイメージング
ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を、緑色蛍光色素ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｃｙｔｏｔｏｘ（Ｅｓｓｅｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）と共に、１０μｇ／ｍｌ ４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂのいずれかを含有する補体フリーのＤＭＥＭ中で、３７℃にて１６時間インキュベートした。ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３生細胞分析を使用して細胞死をリアルタイムで画像化した。

ＰＡＲＰ－１切断の検出
ＰＡＲＰ－１は、１１６ｋＤａの核タンパク質であり、カスパーゼ－３の主要な切断標的の１つとして機能し、プログラム細胞死のシグネチャーとして検出可能な８９ｋＤａの断片を生成する。ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を様々な濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで２４時間処理し、インタクトなＰＡＲＰ－１と切断されたＰＡＲＰ－１の両方を認識する抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ；ＰＡＲＰ４６Ｄ１１ウサギｍＡｂ ＃９５３２）を使用して、インタクトなＰＡＲＰ－１とその８９ｋＤａの切断バリアントの存在について、細胞溶解物をウエスタンブロットにより試験した。未処理の細胞由来の溶解物を対照として使用し、βａアクチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）に対する一次ｍＡｂを使用して溶解物のローディングを正規化した。ＨｙＧＬＯ（商標）化学発光系（Ｔｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してブロットを現像した。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの内在化
ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞におけるＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合後の４Ｄ１２Ｇ１ｍＡｂの内在化を、免疫蛍光法によって調べた。対数増殖期のＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を、０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有するＰＢＳ中で、３７℃または４℃のいずれかにて様々な時間、５μｇ／ｍｌの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した。数回洗浄した後、細胞を３．７％ホルムアルデヒドで固定し、０．４％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有するＰＢＳで透過処理した。洗浄後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８結合抗マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ）と共に室温で１時間インキュベートした。核を４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で室温にて３０分間染色し、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ Ａｎｔｉｆａｄｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉａ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用してカバーガラスをスライドにマウントし、細胞を蛍光顕微鏡で視覚化した。

補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイ
ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を洗浄し、様々な濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂで処理した。次いで、細胞を９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で、１０％正常ヒト血清または１０％熱不活化正常ヒト血清のいずれかと共にインキュベートした。４時間後、上清試料を除去し、培養物を溶解緩衝液で処理した。乳酸からピルビン酸へのＬＤＨ触媒変換と、それに続く４９０ｎｍで測定するテトラゾリウム塩の赤色ホルマザン生成物への還元を測定するＣｙＱＵＡＮＴ ＬＤＨ細胞傷害性アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、細胞外及び総乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性を定量化した。ホルマザン形成のレベルは、培地に放出されたＬＤＨ活性の量に正比例しており、培養細胞中で検出される、測定された総ＬＤＨ活性によって、放出されたＬＤＨの割合を決定した。

抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイ
標的ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＣＭＦＤＡ Ｄｙｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で標識し、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ中で様々な濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂと共にインキュベートした。３０分後、Ｃ５７ＢＬ／６骨髄（Ｓｃｉｅｎｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）由来の分化したマクロファージをエフェクター細胞として、エフェクターと標的細胞の比率１０：１で加えた。３日後、生存標的細胞の割合をフローサイトメトリーで測定することにより、ＡＤＣＰを測定した。

ＯＶＣＡＲ８及び患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）
ＯＶＣＡＲ８異種移植片のレシピエントとして使用するために、６～８週齢の雌の無胸腺ヌードマウス（ＮＵ／Ｊ，ＪＡＸストック＃００２０１９）を購入した（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。６～８週齢の雌のＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ２Ｒγ^ｎｕｌｌ（ＮＳＧ）免疫不全マウスを、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｕｎｉｔ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）から購入した。５×１０６ ＯＶＣＡＲ８細胞を、６～８週齢の（Ａ）ＮＳＧマウス及び（Ｂ）無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下注射した。腫瘍が約５０ｍｍ^３で触知可能になった時点で、マウスに２００μｇの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂを週１回、５週間連続して腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。腫瘍が３ｃｍ３に達した時点で実験を終了した。患者由来のＨＧＳＯＣを６～８週齢の雌のＮＳＧマウスに移植することによって、ＰＤＸを生成した。新たに切除した腫瘍をおよそ２ｍｍ^３のサイズの断片に切断し、横腹部に皮下移植した後、４℃で冷却したマトリゲルを１滴滴下した（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。患者の腫瘍試料を直接移植したマウスをＰ１と名付けた。ノギスを使用して腫瘍の成長を定期的にチェックした。Ｐ１エンドポイント腫瘍を解剖し、上記のように、新しい雌のＮＳＧマウスに移植した。Ｐ２以上の継代を使用して、腫瘍が触知可能になった時点から５週間連続して週１回、２００μｇの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂを腹腔内注射して、効力を試験した。

ＥＯＣ細胞表面のＡＭＨＲ２受容体密度の定量化
異なるが明確な量のマウスｍＡｂ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）でコーティングした６つのビーズ集団のＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）シリーズを使用して、ＯＶＣＡＲ８異種移植片及びＰＤＸから得られた腫瘍細胞において、ＡＭＨＲ２受容体密度を測定した。結合した４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂ抗体分子の数が抗原部位の数に対応するように、一次抗体として４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを飽和濃度で用いて標本細胞を標識した。次いで、ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）ビーズと並行して、ＦＩＴＣ結合ポリクローナルヤギ抗マウス免疫グロブリン、及び飽和濃度のヤギＦ（ａｂ’）２と共に細胞をインキュベートした。個々のビーズ集団の平均蛍光強度（ＭＦＩ）をビーズ上のｍＡｂ分子の数に対してプロットすることにより、検量線を作成した。次いで、標本細胞上の抗原部位の数を内挿によって決定し、ＡＭＨＲ２受容体／細胞の数として表した。

生物統計分析
二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、腫瘍サイズ、ＣＤＣアッセイ、及びエピトープマッピングの競合ＥＬＩＳＡ分析における差異を比較した。１つの試料のスチューデントｔ検定を使用して、ＡＤＣＰアッセイ、及びフローサイトメトリーによるヒト細胞へのモノクローナル抗体の結合における差異を比較した。Ｐ≦０．０５（９５％信頼区間）の場合、すべての差異は統計的に有意であると見なした。すべての実験を、独立して３回繰り返した。

結果
ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤに特異的なｍＡｂの生成
特異性対照として組換えマウスβ－カゼインを使用して、ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤに対する特異性について、およそ３００のハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。１２種のハイブリドーマが、高力価のＡＭＨＲ２－ＥＤ特異的応答を示した（図１Ａ）。ＯＶＣＡＲ８細胞へのフローサイトメトリー結合分析に基づいて（データは示さず）、４Ｄ１２親ハイブリドーマを限界希釈によるサブクローニングのために選択した。４Ｄ１２のサブクローニングにより、３つのサブクローン、４Ｄ１２Ｃ６、４Ｄ１２Ｃ７、及び４Ｄ１２Ｇ１が生成され、それぞれがＩｇＧ１／κ鎖アイソタイプを発現し（図１Ｂ）、競合ＥＬＩＳＡ（図１Ｃ）及びＯＶＣＡＲ８細胞のフローサイトメトリー分析（図１Ｄ）において抗原特異性を示した。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂをさらに調べた。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、配列番号７に示すＶＨ配列（配列番号１に示すＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２に示すＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３に示すＣＤＲ－Ｈ３を含む）、及び配列番号８に示すＶＬ配列（配列番号４に示すＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５に示すＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６に示すＣＤＲ－Ｌ３を含む）を含んでいた。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはヒトＥＯＣにおいてＡＭＨＲ２を認識する
４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを使用して、新鮮なＨＧＳＯＣ組織に由来するヒトＥＯＣ細胞の初代培養でＡＭＨＲ２を検出した。フローサイトメトリー分析は、４Ｄ１２Ｇ１が初代ＨＧＳＯＣ－１細胞の５８．２％及び初代ＨＧＳＯＣ－２細胞の９３．７％でＡＭＨＲ２を検出し、アイソタイプ対照ｍＡｂが培養細胞の１．５％及び１．１％にのみ結合したことを示した（図２Ａ）。ウエスタンブロット分析により、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂが、７つの異なる一次ＨＧＳＯＣ組織溶解物、及び正常な若年Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスから採取した卵巣由来の陽性対照溶解物を免疫染色し、それにより、ヒト及びマウスの両方のＡＭＨＲ２－ＥＤを認識する際の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの交差反応性の特徴が示された（図２Ｂ）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、Ｃ４－２ヒト前立腺癌細胞株に由来する陰性対照溶解物を免疫染色しなかった。β－アクチン抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。平均年齢６０．２歳、範囲３８～７６歳の女性に由来する１３の初代ＨＧＳＯＣ組織の免疫組織化学的染色（表１）において、及びＥＯＣ腫瘍に隣接する正常な卵管組織において、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを使用した。平均年齢６４歳、範囲５９～７０歳の患者１～４から得られた結果を示す。矢印は、４つのＨＧＳＯＣ腫瘍実質の染色（図２Ｃ、左の列）を示し、間質領域の染色はなく、正常な隣接する卵管組織の領域の染色もない（図２Ｃ、右の列）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで染色されなかった４つの正常な隣接卵管組織は、５９～７０歳の閉経後の女性由来のものであったため、閉経後の卵巣での発現から「リタイヤ」したタンパク質ドメインであるＡＭＨＲ２－ＥＤの発現は期待されなかった。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはＡＭＨＲ２への結合についてＡＭＨと競合する
初代ヒトＨＧＳＯＣ組織とは異なり、ヒトＥＯＣ細胞株は通常、低いＡＭＨＲ２の発現レベルを示す。したがって、ＯＶＣＡＲ８細胞にヒトＡＭＨＲ２の全配列をトランスフェクトして、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの特徴をさらに分析するための有用な試薬を得た。安定的にトランスフェクトされたＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞株由来の溶解物をウエスタンブロット分析した結果、ヒト前立腺癌細胞株Ｃ４－２由来の溶解物中に検出可能なＡＭＨＲ２がない親ＯＶＣＡＲ８細胞と比較して、ＡＭＨＲ２タンパク質の高レベルの検出が示された（図２Ｄ）。フローサイトメトリー分析により、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞の９１％に結合することが示され（図２Ｅ）、競合結合試験により、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞への結合について、ＡＭＨＲ２に対する同族組換えＡＭＨリガンドが、用量依存的に効果的に、４Ｄ１２Ｇ１ｍＡｂと競合することができることが示された（図２Ｆ）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによるＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞へのこの結合は、組換え卵白アルブミンによる用量反応処理の影響を受けず、それにより、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合と競合するＡＭＨの特異性を示している（図２Ｇ）。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂに対するＡＭＨＲ２－ＥＤ結合部位の同定
一次抗体として４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを使用した直接ＥＬＩＳＡ試験のために、単一アミノ酸シフトを移動させる、ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの全１３２アミノ酸配列（図３Ａ）にまたがる重複する一連の１６ｍｅｒペプチドをプレーティングした。ＥＬＩＳＡ結合の結果は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＡＭＨＲ２－ＥＤの残基１１～３２ ^１１ＥＡＰＧＶＲＧＳＴＫＴＬＧＥＬＬＤＴＧＴＥＬ^３２にまたがるペプチドを認識したことを示した（図３Ｂ）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによって認識されるアミノ酸を決定するために、ＡＭＨＲ２－ＥＤ １３～３０を含む免疫反応性配列にまたがる重複する一連のペプチドを、各Ｎ末端残基でのアラニン置換または任意の天然Ｎ末端アラニンのグリシン置換で合成した。これらのペプチドを競合ＥＬＩＳＡで使用して、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと固相ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤとの結合を阻害する残基を決定した。結果は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ２０～２６ ^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６にまたがるアラニン置換が４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合を劇的に減少させることを示した（図３Ｃ）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合に関与する最小のＡＭＨＲ２－ＥＤ配列を決定するために、ＡＭＨＲ２－ＥＤの免疫反応性領域にまたがるＳＰＯＴペプチドアレイを生成した。長さが４～１６ｍｅｒの範囲のペプチドをセルロースメンブレンに固定化し、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した。結合した抗体を化学発光によって検出した。結果は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ２２～２６ ^２２ＬＧＥＬＬ^２６が、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合に必要な最小配列を表すことを示した（図３Ｄ）。免疫反応性領域にまたがり、各Ｎ末端残基にアラニン置換を含む膜結合１７ｍｅｒペプチドを備えたＳＰＯＴアレイを使用して、追加的な結合の詳細が得られた。結果は、^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６配列のＬｅｕ２２、Ｇｌｙ２３、及びＬｅｕ２６残基のアラニン置換が、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる結合を完全に無効化することを示した（図３Ｅ）。したがって、Ｌ２２、Ｇ２３、及びＬ２６は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合に必須の残基を表す。最後に、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂとＡＭＨＲ２－ＥＤの間の１１９ｐＭでの平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を測定した（データは示さず）。

ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの分子モデリング
ＡＭＨＲ２－ＥＤタンパク質全体に関して、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合部位領域を画像化するために、Ｐｈｙｒｅ２及び３ＤＬｉｇａｎｄＳｉｔｅツールを使用して分子モデリングを実施し、ＰｙＭＯＬ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍバージョン１．５．０．５を使用して最も信頼性の高いモデルを視覚化した。同族リガンドの提案された結合部位には、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ４～１５ ^４ＲＲＴＣＶＦＦＥＡＰＧＶ^１５にまたがる主要な天然ＡＭＨ Ｉ結合部位が含まれ、一次アミノ酸配列において赤色で（図４Ａ）、一次配列（図４Ａ）とリボンモデルにおけるβシート（図４Ｂ）の両方において青色で示される４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位に対して並列だが逆平行のリボンモデルにおいて赤色のβシートとして表した。ＡＭＨＲ２－ＥＤ ３４～４２ ^３４ＲＡＩＲＣＬＹＳＲ^４２にまたがる別の強力なＡＭＨ ＩＩ結合部位は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位に隣接する長い黄色のループで表される（図４Ｂ）。緑色のＡＭＨＲ２－ＥＤ ４６～５０ ^４６ＧＩＷＮＬ^５０にまたがる弱いＡＭＨ ＩＩＩ結合部位と、シアンのＡＭＨＲ２－ＥＤ ８３～９１ ^８３ＰＳＰＧＳＴＬＦＴ^９１にまたがるさらに弱いＡＭＨ ＩＶ結合部位は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位からかなり離れた位置にある（図４Ｂ）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの青色の^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位と、赤色のＡＭＨ Ｉ結合部位^４ＲＲＴＣＶＦＦＥＡＰＧＶ^１５、及び黄色のＡＭＨ ＩＩ結合部位^３４ＲＡＩＲＣＬＹＳＲ^４２の並置は、リボンモデルの上面図（図４Ｃ）及び９０°回転図（図４Ｄ）においても明らかである。したがって、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによって認識されるＡＭＨＲ２－ＥＤ結合部位は、主要な一次及び二次ＡＭＨ結合部位に近接しており、これは、ＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合について、ＡＭＨが４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと競合する能力を説明している可能性がある特徴である（図２Ｆ）。この見解は、ＡＭＨＲ２－ＥＤに対する別の特徴的なｍＡｂである１２Ｇ４ ｍＡｂが、強力なＡＭＨ Ｉ及びＡＭＨ ＩＩ結合部位から遠く、ＡＭＨのＡＭＨＲ２－ＥＤへの弱い結合に関連するＡＭＨ ＩＩＩ及びＡＭＨ ＩＶ結合部位にはるかに近いＡＭＨＲ２－ＥＤの^５３ＤＲＡＱＶＥＭ^５９配列（図４全体を通して紫色）を認識することから、ＡＭＨＲ２－ＥＤ受容体結合についてＡＭＨと競合することができないという事実によって裏付けられる。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはＥＯＣ細胞のプログラム細胞死を誘導する
４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがプログラム細胞死の抗体媒介誘導によってＥＯＣ腫瘍の成長を阻害するかどうかを判定するために、熱不活化血清を添加したＤＭＥＭ中で４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂでｉｎ ｖｉｔｒｏ処理したＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞のライブイメージングにより、アポトーシスのリアルタイム誘導を評価した。結果は、アイソタイプ対照ＩｇＧ１ ｍＡｂによる１６時間の処理（図５Ａ；左パネル）と比較して、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる１６時間の処理が、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞に重大なレベルのアポトーシスを誘導したことを示した（図５Ａ；右パネル）。

ＰＡＲＰ－１切断の検出
ＰＡＲＰ－１は、カスパーゼ－３の主要な切断標的の１つとして機能する１１６ｋＤａの核タンパク質であり、プログラム細胞死のシグネチャーとして検出可能な８９ｋＤａの断片を生成する。したがって、アポトーシスシグナルを誘導した結果として、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＰＡＲＰ－１を切断することができるかどうかを調べた。ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を異なる濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで２４時間処理し、切断された８９ｋＤａのＰＡＲＰ－１断片の存在について、細胞溶解物をウエスタンブロットで調べた。結果は、１．０μｇ／ｍｌという低い４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂ用量で、切断されたＰＡＲＰ－１が溶解物中に検出されたことを示した（図５Ｂ）。β－アクチン抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。

ＡＭＨＲ２－ｍＡｂ複合体の内在化
同族ＡＭＨ／ＡＭＨＲ２シグナル伝達にはエンドサイトーシス受容体の内在化が関与することから、このプロセスが４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理したＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞で生じるかどうかを調べた。ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと共に、３７℃（図５Ｃ；左の列）または４℃（図５Ｃ；右の列）のいずれかで様々な時間インキュベートした。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂとＡＭＨＲ２受容体の複合体は、３７℃で４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理してから１時間後までに、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞の細胞質で明らかであり、細胞質ｍＡｂ－受容体複合体のクラスターパターンは、３７℃で処理してから２及び３時間後、ますます顕著になった。対照的に、４℃での４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処理は、処理後３時間でも細胞質抗体－受容体複合体を実質的に示さなかった（図５Ｃ；右の列、中央パネル）。二次検出抗体のみで処理した細胞では染色は観察されなかった（図５Ｃ；右の列、下部パネル）。筆者らの結果は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２への結合によって誘導されるシグナル伝達が、ｍＡｂ－ＡＭＨＲ２複合体のエンドサイトーシス内在化及びカスパーゼ－３を介したＰＡＲＰ－１の切断を伴うＥＯＣ細胞のアポトーシスをもたらすことを示している。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはＣＤＣによるＥＯＣ細胞溶解を誘導する
ＣＤＣを媒介する４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの能力を測定した。補体を含有する１０％正常ヒト血清または補体を不活性化するために加熱された１０％正常ヒト血清のいずれかの存在下で、様々な用量の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで４時間、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで処理した。追加の対照は、１０％正常ヒト血清または１０％熱不活化ヒト血清のいずれかの存在下で、様々な用量のアイソタイプ対照ｍＡｂで４時間処理したＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を含んでいた。乳酸デヒドロゲナーゼ活性の放出によって、細胞溶解を測定した。結果は、熱不活化ヒト血清の存在下で４Ｄ１２Ｇ１ｍＡｂによって誘導された溶解と比較して、補体を含有する正常なヒト血清の存在下で４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂが有意に増加した細胞溶解を誘導したことを示した（Ｐ＜０．０００１）（図５Ｄ）。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはＡＤＣＰによるＥＯＣ細胞溶解を誘導する
ＡＤＣＰを媒介する４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの能力を測定した。ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８標的細胞を緑色蛍光色素で標識し、血清の非存在下で２つの異なる濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂと共に３０分間インキュベートした。洗浄した細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス骨髄由来エフェクターマクロファージと、エフェクター対標的細胞比１０：１で混合し、そして生存標的細胞の割合を３日後にフローサイトメトリーによって測定した。生存標的細胞の割合は、１００ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＝０．００１）及び１０００ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＝０．０００２；図５Ｅ）の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理したＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞において、アイソタイプ対照ｍＡｂによる同じ処理と比較して有意に低かった。

４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは異種移植されたヒトＥＯＣの増殖を阻害する
ＯＶＣＡＲ８細胞とヒトＨＧＳＯＣ腫瘍を免疫不全マウスの脇腹に皮下注射した。腫瘍が約５０ｍｍ^３で触知可能になった時点で、マウスに２００μｇの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂのいずれかを５週間連続して毎週、腹腔内注射した。結果は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処理が、重度の免疫不全ＮＳＧマウス（Ｐ＜０．００１；図６Ａ）またはＴ細胞欠損無胸腺ヌードマウス（Ｐ＜０．０００１；図６Ｂ）においてＯＶＣＡＲ８の増殖を有意に阻害したことを示した。ＮＳＧマウスと比較した無胸腺ヌードマウスにおける腫瘍増殖の有意な阻害の増加は、溶血性補体系の欠如、樹状細胞機能の低下、及び無胸腺ヌードマウスではなくＮＳＧマウスに特徴的なマクロファージ活性の欠陥を反映したものであり、それによってＮＳＧ抗腫瘍反応におけるＣＤＣ及びＡＤＣＰ免疫機構の寄与が排除され得る。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処理は、最近診断された患者から生成し、ＰＤＸ－４（図６Ｃ）、ＰＤＸ－６（図６Ｄ）、及びＰＤＸ－９（図６Ｅ）を含む免疫不全ＮＳＧマウスに異種移植した３つの原発性ＨＧＳＯＣ腫瘍の成長を有意に抑制した（すべての場合でＰ＜０．０００１）。ＮＳＧマウスで増殖したＯＶＣＡＲ８腫瘍（図６Ｆ、上段）及びＮＳＧマウスで増殖したＰＤＸ－４腫瘍（図６Ｆ、下段）でのカスパーゼ－３陽性細胞の検出は、アイソタイプ対照ｍＡｂで処理したマウス（図６Ｆ、左の列）と比較した、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理したマウス（図６Ｆ、右の列）において、２０倍の矢印によって示されている。示されているカスパーゼ－３データは、同様の結果をもたらす３つの実験を表す。すべてのエラーバーは、±ＳＤを示す。

ＥＯＣ細胞表面のＡＭＨＲ２受容体密度の定量化
ＡＭＨＲ２－ＥＤ特異的ｍＡｂによる異種移植片におけるＥＯＣ増殖の阻害を媒介するのに、わずか４，０００個のＡＭＨＲ２受容体／細胞で十分であり得る。この問題をさらに調べるために、コーティングされたビーズのＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）シリーズ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とフローサイトメトリー分析を使用して、免疫不全マウスに異種移植されたＥＯＣ細胞上のＡＭＨＲ２受容体の細胞表面密度を測定した。ヌードマウスに異種移植したＯＶＣＡＲ８細胞、ＮＳＧマウスに異種移植したＯＶＣＡＲ８細胞、ならびにＮＳＧマウスに異種移植したＰＤＸ－４、ＰＤＸ－６、及びＰＤＸ－９ ＨＧＳＯＣ腫瘍細胞上で測定したＡＭＨＲ２受容体の細胞表面密度は、それぞれ、２，６７４、３，９１７、２，６７４、２２，２８６、８，９０７、及び１０，０６７受容体／細胞であった（データは示さず）。これらの結果は、異種移植片におけるＥＯＣ増殖の阻害を媒介するのに２，６７４受容体／細胞の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで十分であることを示しており、以前に示した４，０００個のＡＭＨＲ２受容体／細胞とはやや異なっている。これらのデータは、ヒトＨＧＳＯＣ腫瘍が、その細胞表面に十分なＡＭＨＲ２分子を有し、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処理によって卵巣癌の免疫療法を媒介するための十分な利用可能な標的を提供することを示している。

まとめると、この実施例の結果は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＩｇＧ１であり、ＥＬＩＳＡ、ヒトＥＯＣ腫瘍の溶解物、及び免疫染色したヒトＥＯＣ組織においてヒトＡＭＨＲ２－ＥＤへの高親和性抗原特異的結合を示すことを示している。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、同族の抗ミューラー管ホルモン（ＡＭＨ）リガンドの一次及び二次結合部位に隣接する７ｍｅｒのＡＭＨＲ２－ＥＤ配列^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６を認識し、それによって４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、ＡＭＨＲ２－ＥＤ同族受容体への結合についてＡＭＨと効果的に競合することができる。４Ｄ１２Ｇ１ ＩｇＧ１ ｍＡｂは、１１９ｐＭの高親和性Ｋ_ＤでＡＭＨＲ２－ＥＤに結合し、受容体－ｍＡｂ複合体のエンドサイトーシス内在化及びカスパーゼ－３媒介ＰＡＲＰ－１切断を伴うＡＭＨＲ２発現ヒトＥＯＣ細胞の実質的なアポトーシスを誘導することにより、ヒトＡＭＨ同族リガンドのように機能する。さらに、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、主なアポトーシス機構を介して免疫不全マウスにおけるヒトＥＯＣ異種移植片の成長を有意に阻害するが、ＥＯＣ細胞に対してＣＤＣ及びＡＤＣＰを誘導することもできる。

参照による援用
本明細書中で言及される特許文書及び学術文書のそれぞれの開示全体が、あらゆる目的のために参照により援用される。

均等物
本発明は、その趣旨または本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化され得る。したがって、前述の実施形態は、本明細書に記載の本発明を限定するのではなく、あらゆる点で例示と見なされるべきである。したがって、本発明の範囲は、前述の説明ではなく添付の特許請求の範囲により示され、特許請求の範囲の等価の意味及び範囲内にあるすべての変更が、そこに包含されることが意図される。

ｒｈＡＭＨＲ２－ＥＤに特異的なｍＡｂの生成を示す。（Ａ）ＥＬＩＳＡは、ＡＭＨＲ２－ＥＤ及び特異性制御抗原である組換えβ－カゼインに対する１２のハイブリドーマの血清希釈度１／１０，０００での応答を示す。（Ｂ）１／１０，０００希釈の４Ｄ１２ハイブリドーマの４Ｄ１２Ｃ６、４Ｄ１２Ｃ７、及び４Ｄ１２Ｇ１サブクローンのアイソタイプ分析。（Ｃ）競合ＥＬＩＳＡによる、及び（Ｄ）ＯＶＣＡＲ８細胞への結合のフローサイトメトリー分析による各サブクローンの抗原特異性の決定。ＡＭＨＲ２－ＥＤ－ＯＶＣＡＲ８細胞の陽性対照染色は、市販の抗ＡＭＨＲ２－ＥＤ ｍＡｂ（Ａｂｃａｍ）を使用して実施したが、無関係な特異性を有するＩｇＧ１アイソタイプ抗体を陰性対照として使用した。すべての場合において、エラーバーは±ＳＤを示し、示されている結果は、同様の結果をもたらす３つの実験を表している。 ４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがヒトＥＯＣでＡＭＨＲ２－ＥＤを認識し、ＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合について、ＡＭＨと競合することを示す。（Ａ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂが、検査した２つの主要なＨＧＳＯＣ組織から生成された細胞の大部分に結合することを示すフローサイトメトリー分析。エラーバーは、±ＳＤを示す。（Ｂ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを、若年Ｃ５７ＢＬ／６卵巣癌細胞から生成された陽性対照溶解物及びＣ４－２ヒト前立腺癌細胞から生成された陰性対照溶解物と共に、７つの異なるＨＧＳＯＣ組織溶解物（２５μｇタンパク質／レーン）のウエスタンブロットで使用した。β－アクチン抗体による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。示されているウエスタンブロットは、同様の結果をもたらした３つの実験のうちの代表例である。（Ｃ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、４人のＨＧＳＯＣ患者（左の列）及びそれらの正常な隣接する卵管組織（右の列）由来の組織切片の免疫組織化学的染色（２０×）に使用した。矢印は、腫瘍実質の染色を示す。ＥＯＣ腫瘍の間質領域は免疫染色されておらず、正常な隣接する卵管組織のすべての領域も免疫染色されていない。すべての実験を３回実行し、同様の結果が得られた。（Ｄ）Ｃ４－２前立腺癌細胞由来溶解物を対照として用いたＯＶＣＡＲ８細胞及びＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞由来溶解物のウエスタンブロット分析及びβ－アクチン抗体による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。フローサイトメトリー分析は：（Ｅ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂはＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞の９１％に結合し；（Ｆ）ＡＭＨＲ２－ＥＤのＡＭＨ同族リガンドは、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞への結合について、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと用量依存的に効果的に競合し；（Ｇ）組換え卵白アルブミンはＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞への結合について４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと競合できなかったことを示した。データは、同様の結果が得られた３つの独立した実験のうちの代表例である。 ４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２－ＥＤ結合部位の同定を示す。（Ａ）ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの１３２アミノ酸配列全体を示す。（Ｂ）一次抗体として４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂを使用した直接ＥＬＩＳＡ試験のために、１つのアミノ酸シフトを有するヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの全配列にまたがる重複する一連の１６ｍｅｒペプチドをプレーティングした。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂは、残基ＡＭＨＲ２－ＥＤ １１－３２を認識した。（Ｃ）ＡＭＨＲ２－ＥＤ １３－３０にまたがる重複ペプチドを、各Ｎ末端残基でのアラニン置換または任意のネイティブＮ末端アラニン残基のグリシン置換で合成した。競合ＥＬＩＳＡの結果は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ２０－２６（^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６）にまたがる残基でのアラニン置換が４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂのＡＭＨＲ２－ＥＤへの結合を減少させることを示した。（Ｄ）ＡＭＨＲ２－ＥＤ ９－４０にまたがる４－１６ｍｅｒペプチドを用いたＳＰＯＴペプチドアレイをセルロース膜に固定化し、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理し、結合した抗体を化学発光で検出した。結果は、ＡＭＨＲ２－ＥＤ ２２－２６ ５ｍｅｒ配列（^２２ＬＧＥＬＬ^２６）が４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの結合の最小配列を表すことを示した。（Ｅ）ＡＭＨＲ２－ＥＤ １７－３３ドメインにまたがり、各連続アミノ酸にアラニン置換を含む膜結合１７ｍｅｒペプチドを使用して、ＳＰＯＴペプチドアレイを作成した。Ｌｅｕ２２、Ｇｌｙ２３、及びＬｅｕ２６のアラニン置換は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる結合を完全に消失させた。すべてのエラーバーは±ＳＤを示し、すべての実験は同様のデータが得られる３つの実験のうちの代表例を表す。 ヒトＡＭＨＲ２－ＥＤの分子モデリングを示す。同族ＡＭＨリガンドの提案された結合部位には、主要な天然ＡＭＨ結合部位Ｉ、^４ＲＲＴＣＶＦＦＥＡＰＧＶ^１５が含まれ、（Ａ）一次アミノ酸配列において赤色で、（Ｂ）一次配列とリボンモデルにおけるβシートの両方において青色で示される４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位に対して並列だが逆平行のリボンモデルにおいて赤色のβシートとして表した。別の強力なＡＭＨ結合部位ＩＩである^３４ＲＡＩＲＣＬＹＳＲ^４２は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位に隣接する長い黄色のループで表される。対照的に、１２Ｇ４ ｍＡｂとその３Ｃ２３Ｋヒト化及び糖鎖改変バリアント（別名ＧＭ１０２）の^５３ＤＲＡＱＶＥＭ^５９結合部位は、それぞれ、弱い三次及び四次ＡＭＨ結合部位^４６ＧＩＷＮＬ^５０及び^８３ＰＳＰＧＳＴＬＦＴ^９１に近接している。矢印は、（Ｃ）リボンモデルの上面図ならびに（Ｄ）９０°回転図における、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂの青色の^２０ＫＴＬＧＥＬＬ^２６結合部位と、赤色のＡＭＨ Ｉ結合部位^４ＲＲＴＣＶＦＦＥＡＰＧＶ^１５、及び黄色のＡＭＨ結合部位ＩＩ ^３４ＲＡＩＲＣＬＹＳＲ^４２の並置を示す。 ４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂが、アポトーシス、ＣＤＣ、及びＡＤＣＰを誘導することによってＥＯＣ細胞を殺傷することを示す。（Ａ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＥＯＣ細胞のアポトーシスを誘導したかどうかを評価するために、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を、熱不活化血清を添加したＤＭＥＭ中で、緑色蛍光色素と４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理し、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３生細胞分析システムを使用したライブイメージングにより、リアルタイムにアポトーシスの誘導を評価した。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで１６時間処理すると、ＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂで処理した場合（Ａ、左パネル）と比較して、実質的なアポトーシスが誘導された（Ａ、右パネル）。（Ｂ）ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を異なる濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで２４時間処理し、細胞溶解物のウエスタンブロットにより、インタクトな１１６ｋＤａ ＰＡＲＰ－１及びその８９ｋＤａ切断バリアント（アポトーシスと一致する）の検出が示された。β－アクチン抗体による免疫染色を使用して、正規化された溶解物のローディングを確認した。（Ｃ）ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂと共に、３７℃（Ｂ、左の列）または４℃（Ｂ、右の列）のいずれかで様々な時間インキュベートした。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂとＡＭＨＲ２受容体の複合体は、３７℃での処理後１時間までに、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞の細胞質で明らかになり、細胞質での抗体－受容体複合体のクラスター化パターンは、３７℃での処理後２時間及び３時間でますます顕著になったが、これらはすべてアポトーシスの誘導と一致する。４℃での４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処理では、処理の３時間後に細胞質での抗体－受容体複合体はほとんど示されず、二次抗体のみで処理した細胞では染色は生じなかった（Ｃ、右の列、下のパネル）。（Ｄ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＥＯＣ細胞のＣＤＣを誘導したかどうかを判定するために、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８細胞を１０％正常ヒト血清中または１０％熱不活化ヒト血清中のいずれかでインキュベートし、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂのいずれかの用量を様々に変えて４時間処理した。細胞溶解は、ＬＤＨ放出活性によって測定され、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した細胞でのみ生じていた。（Ｅ）４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがＥＯＣ細胞のＡＤＣＰを誘導したかどうかを判定するために、ＡＭＨＲ２－ＯＶＣＡＲ８標的細胞を緑色蛍光色素で標識し、血清の非存在下で２つの異なる濃度の４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂと共に３０分間インキュベートした。洗浄した細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス骨髄由来エフェクターマクロファージと、エフェクター対標的細胞比１０：１で混合し、そして標的細胞を３日後にフローサイトメトリーによって分析した。標的細胞死は、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂで処理した細胞でのみ生じていた。すべてのエラーバーは±ＳＤを示し、すべての実験は同様のデータが得られる３つの実験のうちの代表例を表す。 ４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂがヒトＥＯＣ異種移植片の成長を阻害することを示す。ヒトＥＯＣ腫瘍を免疫不全マウスに皮下注射した。腫瘍が触知可能になったとき、マウスに２００μｇの４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂのいずれかを５週間連続して毎週、腹腔内注射した。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処置は、（Ａ）重度の免疫不全ＮＳＧマウス（Ｐ＜０．００１）及び（Ｂ）Ｔ細胞欠損無胸腺ヌードマウス（Ｐ＜０．０００１）。４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂによる処置は、最近診断された患者から生成し、（Ｃ）ＰＤＸ－４、（Ｄ）ＰＤＸ－６、及び（Ｅ）ＰＤＸ－９を含む免疫不全ＮＳＧマウスに異種移植した３つの原発性ＨＧＳＯＣ腫瘍の成長を有意に抑制した（すべての場合でＰ＜０．０００１）。（Ｆ）アイソタイプ対照ｍＡｂ（Ｆ、左カラム）で処理したマウスと比較した、４Ｄ１２Ｇ１ ｍＡｂ（Ｆ、右カラム）で処理したマウスにおける、２０×でのＯＶＣＡＲ８（Ｆ、上段）及びＮＳＧマウス由来ＰＤＸ－４腫瘍（Ｆ、下段）でのカスパーゼ－３陽性細胞の検出を、矢印で示す。示されているカスパーゼ－３データは、同様の結果をもたらす３つの実験のうちの代表例である。すべてのエラーバーは、±ＳＤを示す。

Claims (140)

1. ヒト抗ミューラー管ホルモン受容体ＩＩ（ＡＭＨＲ２）に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基１１～３２（配列番号１２）内に結合する、前記単離された抗体。
2. 前記抗体が、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基２０～２６（配列番号１３）内に結合する、請求項１に記載の単離された抗体。
3. 前記抗体が、ＡＭＨＲ２細胞外ドメイン（配列番号１１）の残基２２～２６（配列番号１４）内に結合する、請求項１または２に記載の単離された抗体。
4. ヒトＡＭＨＲ２（配列番号９）に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＡＭＨＲ２への結合について、抗ミューラー管ホルモン（ＡＭＨ）と競合する、前記単離された抗体。
5. 前記抗体が、ヒトＦｃ領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
6. ３つの重鎖ＣＤＲ配列、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重（ＶＨ）鎖配列を含む重鎖、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ配列、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖配列を含む軽鎖を含む単離された抗体であって、
   ａ． ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に示す配列を含み、
   ｂ． ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２に示す配列を含み、
   ｃ． ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３に示す配列を含み、
   ｄ． ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に示す配列を含み、
   ｅ． ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に示す配列を含み、そして
   ｆ． ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６に示す配列を含む、
   前記単離された抗体。
7. 前記ＶＨ鎖配列が、配列番号７に示す配列を含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
8. 前記ＶＬ鎖配列が、配列番号８に示す配列を含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
9. 前記ＶＨ鎖配列が、配列番号７に示す配列を含み；前記ＶＬ鎖配列が、配列番号８に示す配列を含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
10. 前記ＶＨ鎖配列が、配列番号７に示す配列を含み；前記ＶＬ鎖配列が、配列番号８に示す配列を含み；そして前記ヒトＦｃ領域が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
11. 前記ＶＨ鎖配列が、配列番号７に示す配列からなる、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
12. 前記ＶＬ鎖配列が、配列番号８に示す配列からなる、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
13. 前記ＶＨ鎖配列が、配列番号７に示す配列からなり；前記ＶＬ鎖配列が、配列番号８に示す配列からなる、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
14. 前記ＶＨ鎖配列が、配列番号７に示す配列からなり；前記ＶＬ鎖配列が、配列番号８に示す配列からなり；そして前記ヒトＦｃ領域が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
15. 前記抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による測定で、約０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、または５×１０－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＡＭＨＲ２に結合する、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
16. 前記抗体が、ヒト化、ヒト、またはキメラ抗体である、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
17. 前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるクラスの重鎖ヒト定常領域を含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
18. 前記ヒトＦｃ領域が、クラスＩｇＧならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるサブクラスのヒト重鎖定常領域を含む、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
19. 前記ヒトＦｃ領域が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む、請求項１８に記載の単離された抗体。
20. 前記Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記１つ以上の置換が、１つ以上の置換を含まないＦｃと比較して、抗体半減期の増加、ＡＤＣＣ活性の増加、ＡＤＣＰ活性の増加、またはＣＤＣ活性の増加をもたらす、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
21. 前記Ｆｃ領域が：ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
22. 前記抗体がモノクローナル抗体である、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
23. 前記抗体が、細胞（例えば、ＡＭＨＲ２＋細胞）のアポトーシスを誘導する、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
24. 前記抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
25. 前記抗体が、抗体媒介性細胞貪食（ＡＤＣＰ）活性を有する、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
26. 前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、上記の請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
27. 上記の請求項のいずれか一項に記載の抗体、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖、またはその抗原結合部分、任意選択でｃＤＮＡをコードする、単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット。
28. 請求項２７に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを含むベクターまたはベクターのセット。
29. 請求項２７に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット、または請求項２８に記載のベクターまたはベクターのセットを含む宿主細胞。
30. （ｉ）請求項２９に記載の宿主細胞が抗体を発現するように前記宿主細胞をインキュベートし、及び（ｉｉ）前記抗体を精製することを含む、前記抗体の産生方法。
31. 請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体と薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
32. 請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体または請求項３１に記載の医薬組成物及び使用説明書を含むキット。
33. 細胞表面上でＡＭＨＲ２を発現する細胞（ＡＭＨＲ２＋細胞）の殺傷、無効化、または枯渇方法であって、前記ＡＭＨＲ２＋細胞を、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体または請求項３１に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。
34. 前記抗体が、プログラム細胞死、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体依存性貪食（ＡＤＣＰ）のうちの少なくとも１つによって、前記ＡＭＨＲ２＋細胞を殺傷、無効化、または枯渇させる、請求項３３に記載の方法。
35. 前記抗体が、プログラム細胞死を誘導する、請求項３３～３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記抗体が、抗体依存性貪食（ＡＤＣＰ）活性を有する、請求項３３～３７のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記抗体が、前記ＡＭＨＲ２＋細胞を殺傷する、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記抗体が、前記ＡＭＨＲ２＋細胞を枯渇させる、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記抗体が、前記ＡＭＨＲ２＋細胞を無効化する、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記接触が、前記ＡＭＨＲ２＋細胞のアポトーシス、溶解、死滅、貪食、または増殖停止を誘導する、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記接触が、前記ＡＭＨＲ２＋細胞のアポトーシスを誘導する、請求項４２のいずれか一項に記載の方法。
44. 前記アポトーシスが、カスパーゼ－３によって媒介される、請求項４３に記載の方法。
45. 前記抗体が、前記細胞内でＰＡＲＰ－１の切断を誘導する、請求項３３～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記抗体が、前記細胞によって内在化される、請求項３３～４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記抗体が、受容体－リガンド遮断活性、アゴニスト活性、またはアンタゴニスト活性を有する、請求項３３～４６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記接触が、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏである、請求項３３～４７のいずれか一項に記載の方法。
49. 前記ＡＭＨＲ２＋細胞ががん細胞である、請求項３３～４８のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記接触を、対象においてｉｎ ｖｉｖｏで行い、任意選択で、前記対象ががんを有する、請求項３３～４８のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記対象がヒトである、請求項３３～５０のいずれか一項に記載の方法。
52. 前記がんが固形腫瘍である、請求項３３～５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記がんが卵巣癌である、請求項５２に記載の方法。
54. 前記卵巣癌が、ステージＩ、ステージＩＡ、ステージＩＢ、ステージＩＣ、ステージＩＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩＡ１、ステージＩＩＩＡ２、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、ステージＩＶ、ステージＩＶＡ、またはステージＩＶＢの卵巣癌である、請求項５３に記載の方法。
55. 前記がんが転移性卵巣癌である、請求項５３または５４に記載の方法。
56. 前記がんが、少なくとも１つの治療に対して難治性である、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の方法。
57. 前記抗体が、耐久性のある免疫応答を誘導する、請求項５３～５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗ＡＭＨＲ２抗体または請求項３１に記載の医薬組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、前記対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法。
59. 前記抗体が、がん細胞（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん細胞）のプログラム細胞死を誘導する、請求項５８に記載の方法。
60. 前記抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する、請求項５８に記載の方法。
61. 前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、請求項５８に記載の方法。
62. 前記抗体が、抗体依存性貪食（ＡＤＣＰ）活性を有する、請求項５８に記載の方法。
63. 前記抗体が、がん細胞（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん細胞）のアポトーシス、溶解、死滅、貪食、または増殖停止を誘導する、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 前記抗体が、前記がん細胞のアポトーシスを誘導する、請求項６３に記載の方法。
65. 前記アポトーシスが、カスパーゼ－３によって媒介される、請求項６４に記載の方法。
66. 前記抗体が、前記がん細胞内でＰＡＲＰ－１の切断を誘導する、請求項５８～６５のいずれか一項に記載の方法。
67. 前記対象がヒトである、請求項５８～６６のいずれか一項に記載の方法。
68. 前記がんが固形腫瘍である、請求項５８～６７のいずれか一項に記載の方法。
69. 前記がんが卵巣癌である、請求項５８～６８のいずれか一項に記載の方法。
70. 前記卵巣癌が、ステージＩ、ステージＩＡ、ステージＩＢ、ステージＩＣ、ステージＩＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩ、ステージＩＩＩＡ１、ステージＩＩＩＡ２、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、ステージＩＶ、ステージＩＶＡ、またはステージＩＶＢの卵巣癌である、請求項６９に記載の方法。
71. 前記がんが転移性卵巣癌である、請求項６９または７０に記載の方法。
72. 前記がんが、少なくとも１つの治療に対して難治性である、請求項６９～７１のいずれか一項に記載の方法。
73. 前記抗体が、耐久性のある免疫応答を誘導する、請求項５８～７２のいずれか一項に記載の方法。
74. 前記抗体が、前記抗体の投与前のがんの体積と比較して前記がんの体積を減少させるのに有効である、請求項５８～７３のいずれか一項に記載の方法。
75. 前記抗体が、前記抗体の投与前のがん成長速度と比較して、前記がん成長速度を減少させるのに有効である、請求項５８～７４のいずれか一項に記載の方法。
76. 前記抗体が、前記がんを排除するのに有効である、請求項５８～７５のいずれか一項に記載の方法。
77. ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を誘導を必要とする対象に投与することを含む、前記対象における免疫応答の誘導方法。
78. ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、前記対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法。
79. 前記投与が、前記対象において免疫応答を誘導する、請求項７８に記載の方法。
80. 前記免疫応答が適応免疫応答である、請求項７７または７９に記載の方法。
81. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項７７～８０のいずれか一項に記載の方法。
82. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項８１に記載の方法。
83. 前記組成物がアジュバントをさらに含み、前記アジュバントが（ａ）炭水化物、及び（ｂ）代謝性油を含む、請求項７７～８２のいずれか一項に記載の方法。
84. 治療有効量の（ｉ）抗ＡＭＨＲ２抗体、及び（ｉｉ）ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを含む組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、前記対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法。
85. 前記抗ＡＭＨＲ２抗体が、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体を含む、請求項８４に記載の方法。
86. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項８４または８５に記載の方法。
87. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項８６に記載の方法。
88. 前記抗ＡＭＨＲ２抗体及び前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを同時に投与する、請求項８４～８７のいずれか一項に記載の方法。
89. 前記抗ＡＭＨＲ２抗体及び前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを別々に投与する、請求項８４～８７のいずれか一項に記載の方法。
90. 前記抗ＡＭＨＲ２抗体を最初に投与し、前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドを次に投与する、請求項８９に記載の方法。
91. 前記組成物がアジュバントをさらに含み、前記アジュバントが（ａ）炭水化物、及び（ｂ）代謝性油を含む、請求項８４～９０のいずれか一項に記載の方法。
92. ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド及びアジュバントを含む治療有効量の組成物を治療を必要とする対象に投与することを含む、前記対象におけるがん（例えば、ＡＭＨＲ２＋がん）の治療方法であって、前記アジュバントが、（ａ）炭水化物、及び（ｂ）代謝性油を含む、前記治療方法。
93. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１の少なくとも８連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項９２に記載の方法。
94. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する、請求項９３に記載の方法。
95. 前記炭水化物が、多糖を含む、請求項９１～９４のいずれか一項に記載の方法。
96. 前記多糖が、少なくとも２つの多糖の混合物を含む、請求項９５に記載の方法。
97. 前記アジュバントが、少なくとも２つの多糖の混合物を有する炭水化物を含み、前記組成物を前記対象に投与する場合、前記組成物が、１型及び１７型の両方の炎症誘発性Ｔ細胞応答を含む抗原特異的Ｔ細胞免疫応答を誘導することができる、請求項９１～９６のいずれか一項に記載の方法。
98. 前記炭水化物が、パターン認識受容体に結合する、請求項９１～９７のいずれか一項に記載の方法。
99. 前記パターン認識受容体が、ＴＬＲ２またはデクチン－１である、請求項９８に記載の方法。
100. 前記多糖の混合物が、少なくとも３つの多糖を含む、請求項９５～９９のいずれか一項に記載の方法。
101. 前記多糖、または前記多糖の混合物中の各多糖が、キチン、デキストラン、グルカン、レンタナン、マンナン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９５～１００のいずれか一項に記載の方法。
102. 前記多糖または前記多糖の混合物が、グルカンを含む、請求項９５～１０１のいずれか一項に記載の方法。
103. 前記グルカンがβ－グルカンである、請求項１０２に記載の方法。
104. 前記β－グルカンが１－３β－グルカンである、請求項１０３に記載の方法。
105. 前記多糖の混合物が、キチン、グルカン、及びマンナンの混合物を含む、請求項９５～１０４のいずれか一項に記載の方法。
106. 前記アジュバント中の前記炭水化物の少なくとも５０％がβ－グルカンである、請求項１０３～１０５のいずれか一項に記載の方法。
107. 前記アジュバントが、ザイモサンを含む、請求項１０６に記載の方法。
108. 前記代謝性油が、精製された油を含む、請求項９１～１０７のいずれか一項に記載の方法。
109. 前記精製された油が鉱油である、請求項１０８に記載の方法。
110. 前記精製された鉱油がＤＲＡＫＥＯＬ（商標）６ＶＲである、請求項１０９に記載の方法。
111. 前記代謝性油が、生分解性油を含む、請求項９１～１１０のいずれか一項に記載の方法。
112. 前記生分解性油が、ミリスチン酸イソプロピル、スクアレン油、スクアラン油、植物油、またはそれらの組み合わせである、請求項１１１に記載の方法。
113. 前記生分解性油が植物油である、請求項１１２に記載の方法。
114. 前記植物油が、アーモンド油、ヒマシ油、ダイフウシ油、ココナッツ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、ピーナッツ油、パーシック油、ベニバナ油、及びダイズ油からなる群から選択される植物油である、請求項１１３に記載の方法。
115. 前記代謝性油が、医薬品グレードの油である、請求項９１～１１４のいずれか一項に記載の方法。
116. 前記組成物が、界面活性剤をさらに含む、請求項９１～１１６のいずれか一項に記載の方法。
117. 前記界面活性剤が、モノオレイン酸マンニド、モノオレイン酸イソマンニド、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１１６に記載の方法。
118. 前記界面活性剤が、モノオレイン酸マンニドを含む、請求項１１７に記載の方法。
119. 前記アジュバントが、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）を含む、請求項１１８に記載の方法。
120. 前記ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）がＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ５１ＶＧである、請求項１１９に記載の方法。
121. 前記アジュバントが、水と油のエマルジョンである、請求項９１～１２０のいずれか一項に記載の方法。
122. 前記アジュバントが油中水型エマルジョンである、請求項１２１に記載の方法。
123. 前記抗原及び前記炭水化物が、約１０：１～約１：１０（ｗ／ｗ）の比率で存在する、請求項９１～１２２のいずれか一項に記載の方法。
124. 前記抗原及び前記炭水化物が、約１：１（ｗ／ｗ）の比率で存在する、請求項１２３に記載の方法。
125. 前記組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項８４～１２４のいずれか一項に記載の方法。
126. 前記対象に抗生物質を投与することをさらに含む、請求項８４～１２５のいずれか一項に記載の方法。
127. 前記組成物の投与が、抗原特異的Ｔ細胞免疫応答を誘導する、請求項８４～１２６のいずれか一項に記載の方法。
128. 前記Ｔ細胞免疫応答が、ＣＤ４＋Ｔ細胞を含む、請求項１２７に記載の方法。
129. 前記Ｔ細胞免疫応答が、ＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項１２７または１２８に記載の方法。
130. 前記Ｔ細胞免疫応答が、１型または１７型炎症誘発性Ｔ細胞応答を含む、請求項１２７～１２９のいずれか一項に記載の方法。
131. 前記Ｔ細胞免疫応答が、１型及び１７型炎症性Ｔ細胞応答の両方を含む、請求項１３０に記載の方法。
132. 前記組成物を投与することにより、参照レベルと比較して肉芽腫形成が減少する、請求項８４～１３１のいずれか一項に記載の方法。
133. 前記参照レベルが、完全フロイントアジュバントを含む組成物を投与した対象において観察される肉芽腫形成のレベルである、請求項１３２に記載の方法。
134. 前記対象に、追加の抗がん療法を投与したか、投与する予定であるか、または同時に投与する、請求項８４～１３３のいずれか一項に記載の方法。
135. 前記抗がん療法が、抗がん剤を含む、請求項１３４に記載の方法。
136. 前記追加の抗がん剤が、ベバシズマブ、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、レトロゾール、オラパリブ、タモキシフェン、トポテカン、トラベクチン、ＣＴＬＡ４抗体、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、及びＴＧＦβ抗体からなる群から選択される、請求項１３５に記載の方法。
137. ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド、ザイモサン、及びＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）の油中水型エマルジョンを含む製剤であって、前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチド及びザイモサンが、約１：５（ｗ／ｗ）～５：１（ｗ／ｗ）の比率で前記製剤中に存在し、前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、前記製剤。
138. 前記ＡＭＨＲ２細胞外ドメインポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、請求項１３７に記載の製剤。
139. 抗ＡＭＨＲ２抗体をさらに含む、請求項１３７または１３８に記載の製剤。
140. 前記ＡＭＨＲ２抗体が、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体を含む、請求項１３９に記載の製剤。

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