JP2023510465A

JP2023510465A - Ｃｌｌ１標的キメラ抗原受容体およびその使用

Info

Publication number: JP2023510465A
Application number: JP2022529577A
Authority: JP
Inventors: 光超李; 敏羅; ▲ブン▼ 丁; 兆周; 学俊王
Original assignee: 広州百▲ジ▼基因科技有限公司
Priority date: 2020-12-11
Filing date: 2020-12-22
Publication date: 2023-03-14
Also published as: AU2020480789A1; EP4039712A1; CN113234169A; WO2022120942A1; GB2606869A; CN113234169B; US20220354890A1; KR20220084040A; GB202207722D0

Abstract

本願は、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体およびその使用を提供し、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは抗ＣＬＬ１抗体である。本願は、抗ＣＬＬ１抗体を抗原結合ドメインとして用いてキメラ抗原受容体分子を構築し、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞に対して特異的な標的作用を有し、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の体外・体内殺傷作用が著しく、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞と共培養した後、大量のサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞に対して特異的な除去作用を有する。

Description

本願は、生物医薬の技術分野に関し、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体およびその使用に関する。

Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ１）は、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２のメンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）とも呼ばれ、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。研究によると、ＣＬＬ１は、造血細胞に制限的に発現し、主に、末梢血および骨髄中の骨髄系に由来する細胞を含み、例えば、単核細胞、樹状細胞、顆粒球およびほとんどの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞を含む。なお、ＣＬＬ１が末梢血および骨髄中の骨髄細胞に大量に発現するが、末梢組織中の骨髄系に由来する細胞に発現せず、例えば、組織マクロファージおよび組織樹状細胞にＣＬＬ１がいずれも発見しないことが分かった。研究によると、ＣＬＬ１がＡＭＬ幹細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－）およびごく一部の造血前駆細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３３＋）に発現するが、正常の造血幹細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３３－）に発現しないことが更に分かった。

このような特殊な発現モードにより、ＣＬＬ１は、ＡＭＬを診断して治療する潜在的な標的点になることが期待されている。しかし、現在、ＣＬＬ１を標的とする免疫療法の報告は稀である。

本願は、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体およびその使用を提供し、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＣＬＬ１に対して結合能力を有する抗ＣＬＬ１抗体を抗原結合ドメインとして採用し、精製されたまたは遊離したＣＬＬ１タンパク質と結合することができるだけでなく、更に細胞表面のＣＬＬ１タンパク質と結合することもでき、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞は、腫瘍治療分野で重要な応用の見通しを有する。

態様１において、本願は、
抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含み、
前記抗原結合ドメインは抗ＣＬＬ１抗体である、
ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を提供する。

本願において、ＣＬＬ１に対して結合能力を有する抗ＣＬＬ１抗体をキメラ抗原受容体の抗原結合ドメインとして採用し、キメラ抗原受容体は、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞と特異的に結合してＣＬＬ１陽性腫瘍に対する特異的な標的作用を実現することができる。

いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１およびＳＥＱＩＤＮＯ：２で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：１とＳＥＱＩＤＮＯ：２とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１を形成する。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＦＴＡＤＴＳＳＮＴＡ
ＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＨＹＣＡＲＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。

いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：４で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：３とＳＥＱＩＤＮＯ：４とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７を形成する。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：４：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。

いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：５とＳＥＱＩＤＮＯ：６とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４を形成する。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：５：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：６：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ。

いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：７で示されるアミノ酸配列およびＳＥＱＩＤＮＯ：８～１０の１つで示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：７とＳＥＱＩＤＮＯ：８とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４Ｌ１を形成し、ＳＥＱＩＤＮＯ：７とＳＥＱＩＤＮＯ：９とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４Ｌ２を形成し、あるいは、ＳＥＱＩＤＮＯ：７とＳＥＱＩＤＮＯ：１０とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４Ｌ３を形成する。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：７：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＨＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：８：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ
ＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：９：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。

いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１とＳＥＱＩＤＮＯ：１２とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体１０７５．７を形成する。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１：
ＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２：
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬ。

好ましくは、前記ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジ領域を含む。

好ましくは、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通領域および／またはＣＤ２８膜貫通領域を含み、ＣＤ８α膜貫通領域であることが好ましい。

好ましくは、前記シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζを含む。

好ましくは、前記シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８細胞内領域、ＤＡＰ１０、またはＯＸ４０のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む。

好ましくは、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体はシグナルペプチドを更に含む。

好ましくは、前記シグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドおよび／またはＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチドを含む。

好ましい技術案として、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１抗体、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通領域、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζを含む。

いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は１９Ｃ１－ＣＡＲであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳ
ＶＫＩＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＦＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＨＹＣＡＲＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。

いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は２３Ｄ７－ＣＡＲであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１４：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。

いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は２７Ｈ４－ＣＡＲであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１５：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。

いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体はＨ２７Ｈ４－ＣＡＲであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１６：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡ
ＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＨＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。

いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は１０７５．７－ＣＡＲであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１７：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。

態様２において、本願は、態様１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体のコード遺伝子を含む核酸分子を提供する。

いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８で示される核酸配列を含み、１９Ｃ１－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱＩＤＮＯ：１８：
ａｔｇｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｔｃａｃａｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｃｃｃａｃｔｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃａｃｇｃｃｇｃａｃｇｇｃｃｔｃａｇａｔｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｇｃｃａｔｃａｔｇａｇｃｇｃｃｔｃｔｃｃａｇｇｃｇａｇａａｇｇｔｇａｃａａｔｇａｃｔｔｇｔｔｃｃｇｃａａｇｃａｇｃｔｃａｇｔｔａｇｔｔａｃａｔｇｔａｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｃｔｃｔｔｃｔｃｃａａｇｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔｔｃｇａｃａｃｔｔｃｔａａｃｃｔｇｇｃａｔｃｃｇｇａｇｔｃｃｃａｇｔｇｃｇｇｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａａｃａｔｃｔｔａｔａｇｃｃｔｇａｃｔａｔｔａｇｃｃｇｇａｔｇｇａｇｇｃａｇａａｇａｔｇｃａｇｃｔａｃｃｔａｃｔａｃｔｇｔｃａａｃａｇｔｇｇｔｃｔａｇｔｔａｔｃｃａｃｔｃａｃｔｔｔｔｇｇｔｇｃａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａｇｃｔｃａａａｇｇｔｇｇａｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｇｔｇｇａｇｇａｇｇｃｇｇｃｔｃａｃａｇｇｔｃｃａａｃｔｇｃａｇｃａａｔｃｔｇｇｔｇｃａｇａａｃｔｇａｔｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｃａａｇｃｇｔｔａａａａｔｃｔｃｔｔｇｃａａａｇｃａａｃａｇｇａｔａｃａｃｃｔｔｔｔｃｔｔｃｃｔａｃｔｇｇａｔａｇａｇｔｇｇｇｔｇａａａｃａａａｇａｃｃａｇｇａｃａｃｇｇａｃ
ｔｇｇａａｔｇｇａｔａｇｇａｇａｇａｔｃｔｔｔｃｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｃｔｃａａｔｃａａｇｔａｔａａｃｇａｇａａｇｔｔｃａａａｇｇｇａａａｇｃｃａｃｃｔｔｃａｃａｇｃｃｇａｔａｃｃｔｃｔｔｃｔａａｔａｃａｇｃｃｔａｔａｔｇｃａｇｃｔｇｔｃａｔｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇａａｇａｔｔｃｔｇｃｔｇｔｔｃａｃｔａｃｔｇｔｇｃａｃｇｃｇｇａｇｇａａｃａｔａｃａａｔｇａｃｔａｃｔｃｔｃｔｇｔｔｔｇａｃｔａｔｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃｃａｃａｃｔｇａｃｔｇｔｇａｇｔｔｃｔａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。

いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９で示される核酸配列を含み、２３Ｄ７－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱＩＤＮＯ：１９：
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いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０で示される核酸配列を含み、２７Ｈ４－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２０：
ａｔｇｇｃｔｃｔｇｃｃｔｇｔｔａｃｔｇｃａｃｔｇｃｔｇｃｔｃｃｃｔｃｔｇｇｃｔｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃａｔｇｃｔｇｃｔｃｇｇｃｃｔｇａｔａｔａｇｔｇａｔｇｔｃｃｃａａａｇｃｃｃａｔｃｃａｇｃｃｔｇｇｃｃｇｔｇｔｃｃｇｔｃｇｇｃｇａａａａｇｇｔｇａｃｔａｔｇａｇｔｔｇｃａａａｔｃｃａｇｃｃａａａｇｃｃｔｇｃｔｇｔａｃａｇｔｇａｃａａｃｃａａａａｇａａｃｔａｃｃｔｇｇｃａｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃｔｇｇａｃａｇｔｃａｃｃａａａｇｃｔｃｃｔｃａｔｃｔａｃｔｇｇｇｃｔａｇｃａｃａａｇｇｇａｇａｇｃｇｇｃｇｔｃｃｃａｇａｃａｇｇｔｔｔａｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｇａｇｔｇｇｃａｃｃｇａｔｔｔｃａｃｃｃｔｇａｃａａｔａａｇｃｔｃｔｇｔｃａａｇｇｃｃｇａａｇａｃｃｔｃｇｃｔｇｔｇｔａｃｔａｔｔｇｔｃａｇｃａｇｔａｔｔａｔａｃｃｔａｔｃｃｃｔａｔａｃｔｔｔｃｇｇｔｇｇａｇｇｇａｃｃａａａｃｔｃｇａｇａｔｔａａａｇｇａｇｇｔｇｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇａｇｇｔｇｇａｇｇｔｔｃｃｇｇｃｇｇｔｇｇｃｇｇｔａｇｔｇａａｇｔｇｃａｇｃｔｇｃａｇｃａｇａｇｃｇｇｇｃｃｔｇａａｃｔｃｇｔｇａａａｃｃｔｇｇｔｇｃｃｔｃｃｇｔｔａａａａｔｃｔｃｃｔｇｃａａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔａｃｔｃａｔｔｃａｃａｇｇｇｔａｔｃａｃａｔｇｃａｔｔｇｇｇｔｇａａｇｃａｇａｇｃｃａｃｇｔｃａａａｔｃａｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｃｇｇｃａｇｇａｔｔａａｔｃｃａｔａｃａａｔｇｇｃｇｃｔｇｃｔｔｃａｃａｔａａｃｃａｇａａｇｔｔｃａａｇｇａｃａａａｇｃｃａｃｃｃｔｇａｃｔｇｔｃｇａｔａａｇｔｃａｔｃａａｇｔａｃａｇｃａｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇｃａｔｔｃｃｃｔｇａｃｔａｇｃｇａｇｇａｃａｇｃｇｃｔｇｔｔｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃａｃｇｃｇｇｃｔｇｇｇａｃｔａｃｇａｃｇｇｔｇｇｃｔａｔｔａｃｇｃｃａｔｇｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇａｃａａｇｇｃａｃｃａｇｃｇｔｃａｃａｇｔｔｔｃａａｇｔａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａ
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いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１で示される核酸配列を含み、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２１：
ａｔｇｇａｔａｔｇａｇｇｇｔｔｃｃｔｇｃａｃａａｃｔｃｃｔｇｇｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃａａｇａｔｇｔｇａｔａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｔａｇｔａｇｃｃｔｇｔｃｔｇｃｃｔｃｃｇｔｃｇｇｃｇａｔｃｇｇｇｔｇａｃｃａｔｔａｃｔｔｇｃａａａｔｃｃｔｃａｃａｇａｇｃｃｔｃｃｔｃｔａｃｔｃｃｇａｔａａｔｃａｇａａｇａａｃｔａｃｃｔｃｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａａｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａｇｇｃａｃｃｔａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｔｇｇｇｃｔａｇｔａｃｃｃｇｃｇａａｔｃｃｇｇｃｇｔｃｃｃｔａｇｃａｇｇｔｔｃｔｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｇａｇｃｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃｃｃｔｃａｃｔａｔｃｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａａｇａｃｔｔｃｇｃａａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｔｃａｇｃａｇｔａｔｔａｔａｃｔｔａｃｃｃａｔａｃａｃｔｔｔｃｇｇａｃａｇｇｇａａｃａａａａｃｔｇｇａａａｔｔａａａｇｇｔｇｇａｇｇｔｇｇａｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｇｔｃｔｇａａｇｔｃｃａａｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇｔｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｃａｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｇｔｃｔｔｇｃａａａｇｃｃａｇｔｇｇｃｔａｃａｃａｔｔｃａｃｔｇｇａｔａｔｃａｔａｔｇｃａｔｔｇｇｇｔｔａｇｇｃａｇｇｃａｃｃｃｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａａｇａａｔｃａａｃｃｃｔｔａｔａａｔｇｇｃｇｃｔｇｃｃｔｃｔｃａｃａａｔｃａａａａｇｔｔｔａａｇｇａｔｃｇｇｇｔｃａｃｔａｔｃａｃｔｃｇｇｇａｃａｃｔｔｃｃｇｃａａｇｃａｃｃｇｃｃｔａｔａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｃａｇｃｃｔｇｃｇｇａｇｔｇａａｇａｃａｃａｇｃａｇｔｃｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｔｃｇｃｇｇａｔｇｇｇａｃｔａｔｇａｃｇｇｃｇｇｔｔａｔｔａｔｇｃｃａｔｇｇａｔｔａｃｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃａｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。

いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２
で示される核酸配列を含み、１０７５．７－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２２：
ａｔｇｇｃｔｃｔｇｃｃｔｇｔｔａｃｔｇｃａｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｃａｃｔｇｇｃａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃａｔｇｃａｇｃｃａｇｇｃｃｃｇａｇａａｔｇｔｇｃｔｇａｃａｃａｇｔｃｔｃｃａｇｃｃａｔｃａｔｇａｇｃｇｃｃｔｃｔｃｃｃｇｇｔｇａａａａｇｇｔｔａｃｔａｔｇａｃｃｔｇｔｃｇｇｇｃａａｇｔｔｃａａａｔｇｔｇａｔｃｔｃｃｔｃｔｔａｔｇｔｇｃａｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇｃｇｃｔｃａｇｇｔｇｃａａｇｃｃｃａａａｇｃｔｇｔｇｇａｔｃｔａｔｔｃｃａｃｔｔｃｔａａｃｃｔｇｇｃｃｔｃｃｇｇｔｇｔｃｃｃａｇｃｃｃｇｃｔｔｔｔｃｔｇｇａａｇｃｇｇｇｔｃａｇｇｃａｃｃｔｃａｔａｃｔｃｃｃｔｃａｃｃａｔａｔｃａａｇｔｇｔｇｇａａｇｃｔｇａｇｇａｔｇｃａｇｃｔａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｃｃａａｃａｇｔａｃｔｃｔｇｇｔｔａｃｃｃａｃｔｇａｃｃｔｔｃｇｇａｇｃｃｇｇｇａｃａａａｇｃｔｇｇａａｃｔｇｇｇａｇｇａｇｇｃｇｇｇｔｃｃｇｇｃｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｇｇａｇｇｔｇｇｃｇｇｇｔｃｃｇａｔａｔｃｃａｇｃｔｇｃａａｇａｇｔｃａｇｇｃｃｃａｇｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｃｃｔｔｃｃｃａａａｇｃｃｔｇａｇｔｃｔｃａｃｃｔｇｔｔｃｃｇｔｇａｃａｇｇｔｔａｔｔｃｃａｔｔａｃｔａｇｃｇｃａｔａｔｔａｃｔｇｇａａｃｔｇｇａｔａａｇａｃａａｔｔｃｃｃａｇｇａａａｃａａａｃｔｃｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇｃｔａｃａｔｃｔｃａｔａｃｇａｃｇｇｇｃｇｇａａｃａａｃｔａｔａａｃｃｃａｔｃｃｃｔｇａａｇａａｔｃｇｇａｔｔｔｃｃａｔｃａｃｔａｇａｇａｃａｃａｔｃｃａａｇａａｃｃａｇｔｔｃｔｔｔｃｔｃａａｇｃｔｇａａｔａｇｃｇｔｇａｃａａｃｔｇａｇｇａｔａｃａｇｃａａｃｃｔａｃｔａｔｔｇｃｇｃｃａａｇｇａａｇｇａｇａｃｔａｔｇａｔｇｔｔｇｇｃａａｃｔａｔｔａｔｇｃａａｔｇｇａｃｔａｔｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃａｔｃａｇｔｇａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。

態様３において、本願は、態様２に記載の核酸分子を含む発現ベクターを提供する。

好ましくは、前記発現ベクターは、態様２に記載の核酸分子を含むウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである。

好ましくは、前記ウイルスベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターのいずれか１種を含む。

好ましくは、前記非ウイルスベクターは、Ｐｉｇｇｙｂａｃトランスポゾン系、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾン系、またはナノベクターのいずれか１種を含む
。

態様４において、本願は、態様３に記載の発現ベクターおよびヘルパープラスミドがトランスフェクションされた哺乳細胞で調製される組換えレンチウイルスを提供する。

態様５において、本願は、態様１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現するキメラ抗原受容体の免疫細胞を提供する。

本願において、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞は、キメラ抗原受容体の抗原結合ドメインを用い、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞を標的とし、免疫細胞の殺傷機能を発揮してサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、異なるＥ：Ｔ（Ｅｆｆｅｃｔｏｒｃｅｌｌ：Ｔａｒｇｅｔｃｅｌｌ）でＣＬＬ１腫瘍に対する殺傷作用を実現する。

好ましくは、前記キメラ抗原受容体の免疫細胞のゲノムに態様２に記載の核酸分子が組み込まれる。

好ましくは、前記キメラ抗原受容体の免疫細胞は、態様３に記載の発現ベクターおよび／または態様４に記載の組換えレンチウイルスを含む。

好ましくは、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージのいずれか１種を含む。

好ましくは、前記Ｔ細胞は、αβΤ細胞および／またはγδΤ細胞を含む。

態様６において、本願は、態様５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞を含む医薬組成物を提供する。

好ましくは、前記医薬組成物は、医薬的に許容されるベクター、賦形剤、または希釈剤のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む。

態様７において、本願は、態様１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体、態様２に記載の核酸分子、態様３に記載の発現ベクター、態様４に記載の組換えレンチウイルス、態様５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞、または態様６に記載の医薬組成物の、悪性腫瘍治療薬の調製における使用を提供する。

好ましくは、前記悪性腫瘍は急性骨髄性白血病を含む。

態様８において、本願は、癌の治療方法を提供する、前記方法は、有効用量の態様５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞または態様６に記載の医薬組成物を患者に投与し、且つ、１種または複数種の抗腫瘍薬を同時、別々、または順次投与する。

好ましくは、前記癌症は急性骨髄性白血病を含む。

従来技術と比べ、本願は、以下のような有益な効果を有する。

（１）本願は、抗ＣＬＬ１抗体を抗原結合ドメインとして用いてＣＡＲ分子を構築し、ＣＬＬ１標的ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＡＲ素子に依存して異なるＥ：ＴでＣＬＬ１陽性腫瘍細胞に対して殺傷作用を発揮し、ここで、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔは、最適な殺傷機能を有する。

（２）本願のＣＬＬ１標的ＣＡＲ－Ｔ細胞はＣＬＬ１陽性腫瘍細胞と共培養した後、大量のサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、ＣＡＲ－ＴのＣＬＬ１腫瘍細胞に対する特異的な殺傷効果を証明する。

異なる腫瘍細胞のＣＬＬ１に対する発現状況である。ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体の構造模式図である。図３Ａは、Ｈ２７Ｈ４ＣＡＲ遺伝子を含むレンチウイルス発現ベクターのグラフである。図３Ｂは、Ｈ２７Ｈ４ＣＡＲのレンチウイルス発現ベクターにおける位置である。異なるＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率である。ＣＬＬ１を標的とするＣＡＲ－ＴのＲａｊｉ－ＣＬＬ１細胞に対する殺傷率である。ＣＬＬ１を標的とするＣＡＲ－Ｔの、標的細胞を殺傷したＩＦＮ－γの分泌状況である。

本願が講じた技術的手段およびその効果を更に説明するために、以下、実施例および図面を参照しながら本願について更に説明する。ここで説明する具体的な実施形態は、本願を解釈するためのものに過ぎず、本願を限定するものではないことが理解できる。

実施例に具体的な技術または条件が明記されていないものは、本分野内の文献に記載されている技術もしくは条件、または製品の説明書に従って行われる。使用される試薬または機器におけるメーカーが明記されていないものは、いずれも正規のルートから購入可能な通常の製品である。

実施例１抗ＣＬＬ１抗体の由来
本実施例は、抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１、２３Ｄ７、２７Ｈ４、ヒト化２７Ｈ４（Ｈ２７Ｈ４）および１０７５．７（特許ＵＳ８５３６３１０Ｂ２）を抗原結合ドメインとして選択してＣＡＲ分子を構築することに用い、ここで、１９Ｃ１はＳＥＱＩＤＮＯ：１～２で示される可変領域を含み、２３Ｄ７はＳＥＱＩＤＮＯ：３～４で示される可変領域を含み、２７Ｈ４はＳＥＱＩＤＮＯ：５～６で示される可変領域を含み、Ｈ２７Ｈ４はＳＥＱＩＤＮＯ：７～８で示される可変領域を含み、１０７５．７はＳＥＱＩＤＮＯ：１１～１２で示される可変領域を含んだ。

実施例２腫瘍細胞のＣＬＬ１に対する発現
本実施例は、ＦＩＴＣａｎｔｉ－ｈｕｍａｎＣＤ３７１（ＣＬＬ１）抗体（ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて標的細胞Ｊｕｒｋａｔ、ＫＧ－１ａと共にインキュベートした後、標的細胞のＣＬＬ１に対する発現をフローサイトメーターで検出した。

結果は、図１に示すように、ＴＨＰ－１、Ｕ９３７およびＨＬ－６０はＣＬＬ１陽性細胞であり、ＪｕｒｋａｔおよびＫＧ－１ａはＣＬＬ１陰性細胞であった。

実施例３キメラ抗原受容体の設計
本実施例は、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を設計し、構造模式図は図２に示すように、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＬＬ１抗原に特異的に結合する一本鎖抗体（Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ｓｃＦｖ）、ＣＤ８αヒンジ領域（Ｈｉｎｇｅ）と膜貫通領域（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ）、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを
含み、具体的なＣＡＲ分子は以下のとおりであった。
(1) １９Ｃ１－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ｓｃＦｖ（１９Ｃ１）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(2) ２３Ｄ７－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ｓｃＦｖ（２３Ｄ７）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(3) ２７Ｈ４－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ｓｃＦｖ（２７Ｈ４）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(4) ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ：ＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ｓｃＦｖ（Ｈ２７Ｈ４）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(5) １０７５．７－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ｓｃＦｖ（１０７５．７）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。

ここで、ＣＤ８αシグナルペプチドのアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２３に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２４に示すとおりであり、ＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチドのアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２５に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２６に示すとおりであり、ＣＤ８αｈｉｎｇｅのアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２７に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２８に示すとおりであり、ＣＤ８α ＴＭのアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：２９に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：３０に示すとおりであり、４－１ＢＢのアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：３１に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱＩＤ
ＮＯ：３２に示すとおりであり、ＣＤ３ζのアミノ酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：３３に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱＩＤＮＯ：３４に示すとおりであった。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２３：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２４：
ａｔｇｇｃａｃｔｇｃｃａｇｔｇａｃａｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｃａｃｔｇｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃａｃｇｃａｇｃａｃｇｃｃｃｔ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２５：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２６：
ａｔｇｇａｔａｔｇａｇｇｇｔｔｃｃｔｇｃａｃａａｃｔｃｃｔｇｇｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃａａｇａｔｇｔ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２７：
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２８：
ａｃｃａｃｇａｃｇｃｃａｇｃｇｃｃｇｃｇａｃｃａｃｃａａｃａｃｃｇｇｃｇｃｃｃａｃｃａｔｃｇｃｇｔｃｇｃａｇｃｃｃｃｔｇｔｃｃｃｔｇｃｇｃｃｃａｇａｇｇｃｇｔｇｃｃｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｇｇｇｇｇｇｃｇｃａｇｔｇｃａｃａｃｇａｇｇｇｇｇｃｔｇｇａｃｔｔｃｇｃｃｔｇｔｇａｔ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：２９：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：３０：
ａｔｃｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃｇｃｃｃｔｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｔｔｇｔｇｇｇｇｔｃｃｔｔｃｔｃｃｔｇｔｃａｃｔｇｇｔｔａｔｃａｃｃｃｔｔｔａｃｔｇｃ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：３１：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：３２：
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ＳＥＱＩＤＮＯ：３３：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ。
ＳＥＱＩＤＮＯ：３４：
ａｇｇｇｔｇａａｇｔｔｔｔｃｔｃｇｇａｇｃｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃａｇｃａｔａｔｃａｇｃａｇｇｇａｃａｇａａｔｃａｇｃｔｇｔａｃａａｃｇａｇｃｔｇａａｔｃｔｇｇｇｃａｇｇｃｇｃｇａｇｇａｇｔａｃｇａｃｇｔｇｃｔｇｇａｔａａｇｃｇｇａｇａｇｇｃａｇａｇａｔｃｃｃｇａｇａｔｇｇｇａｇｇｃａａｇｃｃａａｇｇａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａｇｇｇｃｃｔｇｔａｔａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａｇｇａｃａａｇａｔｇｇｃｃｇａｇｇｃｃｔａｃｔｃｔｇａｇａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇａｇａｇｃｇｇａｇａａｇｇｇｇｃａａｇｇｇａｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｇｔａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｔｇｃａｃｔｇｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃｔａｇｇ。

実施例４ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体の発現ベクターの構築
（１）実施例３で設計されたＣＡＲ分子に基づき、ＣＡＲコード遺伝子をコドン最適化し、ヒト由来細胞での効率的な発現を促進し、ＣＡＲコード遺伝子を全遺伝子合成した（広州ＩＧＥバイオテクノロジー有限公司）。

（２）ＥｃｏＲＩとＢａｍＨＩとの２つの酵素で全長ＣＡＲ遺伝子および空ベクターｐＣＤＨ－ＥＦ１－ＭＣＳを切断し、３７℃の水浴で３０ｍｉｎ酵素切断した後、１．５％のアガロースゲルを用いてＤＮＡ電気泳動を行い、アガロースゲルで精製して試薬キット（天根社製）を回収し、酵素切断生成物を精製して回収処理した。

（３）表１で示される連結系を調製し、ＣＡＲ遺伝子断片と線形化ｐＣＤＨ－ＥＦ１－ＭＣＳとを２２℃で１ｈ連結し、連結生成物を直接Ｓｔｂｌ３大腸菌のコンピンテントセルに形質転換し、２００μＬの形質転換生成物をアンピシリン耐性ＬＢプレートに塗布し、３７℃のインキュベーターで上下反転させて一晩培養し、翌朝、３つのモノクローナルをランダムに選択してコロニーＰＣＲ鑑定を行い、陽性クローンをシーケンシング鑑定した。

例示的には、構築された２７Ｈ４ＣＡＲ遺伝子を含むレンチウイルス発現ベクターｐＢＧ－２７Ｈ４は、図３Ａおよび図３Ｂに示すとおりであった。

実施例５レンチウイルス包装
本実施例は、４プラスミド系を採用して実施例４で構築されたレンチウイルス発現ベクターに対してレンチウイルス包装を行い、具体的なステップは、以下のとおりである。

（１）レンチウイルス発現ベクター、ヘルパープラスミドｇａｇ／ｐｏｌ、Ｒｅｖ、ＶＳＶ－Ｇで構成された４プラスミド系とＰＥＩトランスフェクション試薬とを混合させた後、一定の体積の無血清ＤＭＥＭに加え、均一に混合させて１５ｍｉｎ置いた。

（２）上記混合液を２９３Ｔ細胞が敷かれたＴ７５細胞フラスコに入れ、軽く均一に混合させ、３７℃にて５％のＣＯ_２細胞インキュベーターで６ｈ培養した。

（３）６ｈ後に新鮮な培地に交換し、培養し続け、１０ｍＭのブタン酸ナトリウム溶液を加え、７２ｈ後にレンチウイルス培養上清を収集して精製検出を行った。

実施例６Ｔ細胞の取得および増幅
各ボランティアから３０ｍＬの全血を採取し、末梢血と生理食塩水とを１：１で混合させて希釈し、遠心チューブにＦｉｃｏｌｌリンパ球分離液を加え、希釈した末梢血を徐々に加え、１５００ｒｐｍで３０ｍｉｎ遠心し、ＰＢＭＣ層を軽く吸い取って別の遠心チューブに移した。

生理食塩水でＰＢＭＣを複数回洗浄し、Ｘ－ＶＩＶＯ培地（５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む）に移して培養し、ＰＢＭＣ分離後、Ｘ－ＶＩＶＯ（５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む）で活性化させ、２日間後に培地を、３００ＩＵ／ｍＬのＸ－ＶＩＶＯを含む培地に交換して拡大培養し、その後、２日毎にカウントを１回行い、新鮮な３００ＩＵ／ｍＬのＸ－ＶＩＶＯを含む培地に交換し、細胞濃度を（０．５～１）×１０^６個／ｍＬに維持し、１０日間連続して観察した。

実施例７ＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
本実施例は、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを用いてレンチウイルスのＴ細胞に対する感染効率を向上させ、ステップは以下のとおりであった。

３０μｇのＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを６孔プレート内にコーティングし、３７℃の細胞インキュベーターに置いて２ｈ保持した。ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを吸い取り、２．５％のＢＳＡを含むＨａｎｋ’ｓ溶液でコーティングされた６孔プレートをブロッキングし、３７℃の細胞インキュベーターに置いて０．５ｈ保持し、ブロッキング液を吸い取り、２％のｈｅｐｅｓを含むＨａｎｋ’ｓ溶液で６孔プレートを洗浄し、Ｘ－ＶＩＶＯ培地を加え、適量のレンチウイルス溶液を加え、２０００ｇで２ｈ遠心し、上清を捨て、１×１０^６個のＴ細胞（ＣＤ３陽性＞９０％）を加え、１０００ｇで１０ｍｉｎ遠心し、３７℃にて５％のＣＯ_２および一定の湿度の細胞インキュベーター内に置いて培養させ、翌日、上記ステップを繰り返した。

レンチウイルスの添加量は、表２を参照した。

フローサイトメーターを採用してＴ細胞表面のＣＡＲ分子の発現を検出し、ＣＬＬ１－Ｆｃ融合タンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司）でＣＡＲ発現を検出し、二次抗体は、ＦＩＴＣ－Ｌａｂｅｌｅｄａｎｔｉ－ｈｕｍａｎＦｃ、ＣＡＲがトランスフェクションされていないＴ細胞（Ｔｍｏｃｋ）をネガティブコントロールとして採用した。

結果は、図４および表３に示すように、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が１３．２８％であり、２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が３７．４９％であり、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が３９．４４％であり、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が３３．５９％であり、１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が５．０９％であった。

実施例８ＣＡＲ－Ｔ細胞の殺傷機能
本実施例は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイムラベルフリー動的分析技術（ＲｅａｌＴｉｍｅＣｅｌｌＡｎａｌｙｓｉｓ、ＲＴＣＡ）を用いて細胞殺傷効果に対して全過程に亘って自動化検出を行った。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ（登録商標）リアルタイムマーカレス細胞分析装置（ＲＴＣＡ）は、微小電子インピーダンス技術に基づき、Ｅ－ｐｌａｔｅプレートの底部に大量の金属微小電極が組み込まれ、接着細胞が金属微小電極に接着すると、細胞数、直径および接着能力はいずれも金属微小電極間の電流伝導に影響を及ぼし、インピーダンス値の変化を引き起こし、この変化は極めて微細で鋭敏であり、毒効果で、細胞は、インピーダンス値に直接または間接的に影響を及ぼす。そのため、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅは、分子標的による細胞毒性効果を監視することができた。

ステップは以下のとおりであった。

（１）一定の体積の１×ＴｅｔｈｅｒＢｕｆｆｅｒでａｎｔｉ－ＣＤ４０を希釈し、Ｅ－ＰｌａｔｅＶｉｅｗ９６孔プレートの各孔に５０μＬの希釈したａｎｔｉ－ＣＤ
４０を加えてコーティング液とし、室温で遮光して３ｈインキュベートし、各グループに３つの孔を設けた。

（２）コーティング液を捨て、２００μＬのＰＢＳで孔を２回軽く洗浄し、各孔に２％のＦＢＳを含む５０μＬの１６４０培地を入れ、Ｅ－ＰｌａｔｅＶｉｅｗ９６孔プレートをｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ機器に入れ（機器を１ｈ前からインキュベーターに入れた）、３７℃で１ｈバランスさせ、背景値を測定した。

（３）ＣＬＬ１を過剰発現した安定したＲａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１）を標的細胞として採用し、標的細胞懸濁液を調製して細胞密度を測定し、各孔に５００００個の細胞／５０μＬを加え、各孔の最終体積が１００μＬであり、室温で３０ｍｉｎ静置してインキュベートし、Ｅ－ＰｌａｔｅＶｉｅｗ９６孔プレートを再び機器に戻し、ソフトウェアを操作してデータを収集し、５ｍｉｎ毎にインピーダンスを１回検出し、検出時間は２ｈであった。

（４）異なるＥ：Ｔの効果細胞懸濁液（即ち、ＣＡＲ－Ｔ細胞）およびネガティブコントロール細胞懸濁液（即ち、トランスフェクションされていないＴ細胞）をそれぞれ調製し、各孔に５０μＬの希釈した効果細胞懸濁液またはネガティブコントロール細胞懸濁液を加え、ブランクグループに５０μＬの培地を加え、ポジティブコントロールグループに５０μＬの１×ＣｙｔｏｌｙｓｉｓＳｏｌｕｔｉｏｎを加え、室温で３０ｍｉｎ静置してインキュベートし、効果細胞を固定した標的細胞に均一に分布させた。

（５）Ｅ－ＰｌａｔｅＶｉｅｗ９６孔プレートを再び機器に入れ、ソフトウェアを操作してデータを収集し、５ｍｉｎ毎にインピーダンスを１回検出し、検出時間が１６ｈであり、実験が終了した後、データを記憶して分析した。

結果は、図５に示すように、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔ、２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔ、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、または１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔは、異なるＥ：Ｔ（１：１、２：１、４：１）でＲａｊｉ－ＣＬＬ１と共に１６ｈインキュベートした後、いずれもＲａｊｉ－ＣＬＬ１細胞を効果的に殺傷することができ、Ｅ：Ｔが大きければ殺傷能力が強かった。ここで、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔは、最も強い殺傷能力を有し、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔの殺傷能力はＨ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔに類似し、次は２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔであり、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔおよび１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔの殺傷能力は弱く、ＣＡＲがトランスフェクションされていないＴｍｏｃｋはＲａｊｉ－ＣＬＬ１を殺傷することができず、ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ＣＡＲ－Ｔの殺傷活性がＣＡＲ素子に依存することを意味する。

実施例９腫瘍細胞と共培養した後のＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γに対する分泌
本実施例は、ＨｕｍａｎＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ試薬キット（Ｎｅｏｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いてＣＡＲ－Ｔ細胞がＩＦＮ－γサイトカインを放出する濃度を検出し、標的細胞と共培養した後のＣＡＲ－ＴのＩＦＮ－γに対する分泌量を分析し、具体的には、ＣＬＬ１陽性細胞Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１、ＨＬ６０、Ｕ９３７を陽性標的細胞として採用し、ＣＬＬ１陰性細胞Ｒａｊｉを陰性標的細胞として採用した。

ＣＡＲ－Ｔ細胞と異なる標的細胞とをＥ：Ｔ＝１：１で共に１６ｈインキュベートし、上清を取って酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ）で培養液の上清内のＩＦＮ－γの分泌量を検出した。検出原理は、二抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用い、抗ヒトＩＦＮ－γ抗体をＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、実験時に、サンプルまたは標準品内のヒトＩＦＮ－γがコーティング抗体と結合し、遊離した成分が洗浄された。ビオチン化抗ヒトＩＦＮ－γ抗体および西洋ワサビペルオキシダーゼで標識されたアビジンを順次加え、抗ヒトＩＦＮ
－γ抗体は、コーティング抗体に結合されたヒトＩＦＮ－γと結合し、ビオチンがアビジンと特異的に結合して免疫複合体を形成し、遊離した成分が洗浄された。発色基質（ＴＭＢ）を加え、西洋ワサビペルオキシダーゼの触媒で青色を呈し、終了液を加えてから黄色になり、プレートリーダーで波長４５０ｎｍでＯＤ値を測定し、ＩＦＮ－γ濃度はＯＤ４５０に比例し、検量線を描画することでサンプル内のＩＦＮ－γの濃度を計算した。

結果は、図６に示すように、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔ、２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔ、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、または１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔは、Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１、ＨＬ６０、またはＵ９３７と共培養した後、大量のＩＦＮ－γを放出したが、Ｒａｊｉ細胞と共培養した後、大量のＩＦＮ－γの放出が見られず、ＣＬＬ１標的のＣＡＲ－Ｔ細胞の殺傷が特異性を有することを意味する。

上記をまとめ、本願のＣＬＬ１標的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、異なるＥ：ＴでＣＬＬ１陽性腫瘍細胞に対して著しい殺傷作用を有し、腫瘍細胞と共培養した後、大量のサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、ＣＬＬ１陽性腫瘍の治療分野で応用の見通しを有する。

本願は、上記実施例により本願の詳細方法を説明するが、本願は上記詳細方法に限定されるものではなく、即ち、本願は上記詳細方法に依存して実施しなければならないことを意味するものではないことを、出願人より声明する。当業者であれば、本願に対するいかなる改良、本願の製品の各原料に対する等価的な置換および補助成分の追加、具体的な形態の選択等は、全て本願の保護範囲および開示範囲内に含まれることを理解すべきである。

Claims

抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含み、
前記抗原結合ドメインは抗ＣＬＬ１抗体である、
ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１およびＳＥＱＩＤＮＯ：２で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：４で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：７で示されるアミノ酸配列およびＳＥＱＩＤＮＯ：８～１０の１つで示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジ領域を含む、
請求項１または２に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通領域および／またはＣＤ２８膜貫通領域を含む、
請求項１から３のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζを含み、
好ましくは、前記シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８細胞内領域、ＤＡＰ１０、またはＯＸ４０のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む、
請求項１から４のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体はシグナルペプチドを更に含み、
好ましくは、前記シグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドおよび／またはＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチドを含む、
請求項１から５のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１抗体、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通領域、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζを含む、
請求項１から６のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１から７のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
請求項１から８のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体のコード遺伝子を含む、核酸分子。
前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８で示される核酸配列を含み、または
前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９で示される核酸配列を含み、または
前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０で示される核酸配列を含み、または
前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１で示される核酸配列を含み、または
前記核酸分子は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２で示される核酸配列を含む、
請求項９に記載の核酸分子。
請求項９または１０に記載の核酸分子を含む発現ベクターであって、
好ましくは、前記発現ベクターは、請求項９または１０に記載の核酸分子のウイルスベクターまたは非ウイルスベクターを含み、
好ましくは、前記ウイルスベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターのいずれか１種を含み、
好ましくは、前記非ウイルスベクターは、Ｐｉｇｇｙｂａｃトランスポゾン系、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾン系、またはナノベクターのいずれか１種を含む、
発現ベクター。
請求項１１に記載の発現ベクターおよびヘルパープラスミドがトランスフェクションされた哺乳細胞で調製される、
組換えレンチウイルス。
キメラ抗原受容体の免疫細胞であって、
前記キメラ抗原受容体の免疫細胞は、請求項１から８のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現し、
好ましくは、前記キメラ抗原受容体の免疫細胞のゲノムに、請求項９または１０に記載の核酸分子が組み込まれ、
好ましくは、前記キメラ抗原受容体の免疫細胞は、請求項１１に記載の発現ベクターおよび／または請求項１２に記載の組換えレンチウイルスを含み、
好ましくは、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージのいずれか１種を含み、
好ましくは、前記Ｔ細胞は、αβΤ細胞および／またはγδΤ細胞を含む、
キメラ抗原受容体の免疫細胞。
請求項１３に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞を含み、
好ましくは、医薬的に許容されるベクター、賦形剤、または希釈剤のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む、
医薬組成物。
請求項１～８のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体、請求項９または１０に記載の核酸分子、請求項１１に記載の発現ベクター、請求項１２に記載の組換えレンチウイルス、請求項１３に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞、または請求項１４に記載の医薬組成物の、悪性腫瘍治療薬の調製における使用であって、
好ましくは、前記悪性腫瘍は急性骨髄性白血病を含む、
使用。