JP2023510381A

JP2023510381A - 皮膚の外観および再生を改善する新規なペプチドを含む局所投与用の化粧品製剤

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Publication number: JP2023510381A
Application number: JP2022543059A
Authority: JP
Inventors: バッダー・アウガスティヌス
Original assignee: エーエスシー・リジェニティー・リミテッド
Priority date: 2020-01-21
Filing date: 2021-01-18
Publication date: 2023-03-13
Also published as: CN114929192A; US20230135317A1; KR20220130144A; AU2021211840A1; EP4093369A1; BR112022013144A2; CA3162431A1; WO2021148241A1

Abstract

本発明は、ヒト皮膚の化粧品処理のために設計された新規な天然由来および合成の活性ペプチドまたはペプチド由来薬剤、また、それらを含有する化粧品製剤および組成物に関する。活性薬剤は、健康な皮膚の回復、促進および維持に有効である。特に、本発明は、皮膚微小環境を調節し、皮膚幹細胞胞挙動を調節し、ひいては老化または損傷した皮膚の状態を効果的に治癒、再生および改善する、幹細胞因子を含む皮膚有効薬剤の組み合わせまたはセットを開示する。【選択図】図１

Description

本発明は、ヒト皮膚の化粧品処理のために設計された新規な天然由来および合成の活性ペプチドまたはペプチド由来薬剤、ならびにそれらを含有する化粧品製剤および組成物に関する。活性薬剤は、健康な皮膚の回復、促進および維持に有効である。

特に、本発明は、皮膚細胞の修復および再生を誘発し、ひいては相乗作用もしくは望ましくない効果の相互緩和によって老化または損傷した皮膚の状態を効果的に治癒および改善する、幹細胞因子を含む前述の皮膚有効薬剤の組み合わせまたはセットを開示する。これらの新規な薬剤および因子のセットは、本発明によれば「トリガー因子複合体」と呼ばれる。

皮膚の恒常性および創傷治癒
ヒト皮膚は、外界に対する身体の主要なバリアの１つであり、常に有害な傷害にさらされている。皮膚状態の絶え間ない低下を防ぐために、生物学では様々な再生メカニズムを発達させてきた。恒常性維持では、皮膚上皮における細胞の一定の代謝回転により、表面で古い細胞が剥がれ落ち、失われた細胞を置き換えるための新しい細胞が代償的に生成されることになる。外傷（創傷）、放射線照射、化学的損傷または炎症などのより重度の傷害の場合、皮膚における損傷キューが蓄積され、高度な自然修復プログラムが行われるようになる。恒常性細胞代謝回転プログラムおよび専用修復プログラムの両方において、幹細胞および前駆細胞は、皮膚維持の重要な実行因子として作用する。両方の場合において、それらは最終的に、古い細胞および失われた細胞を置き換えるための新しい細胞を提供する。典型的には、専用修復プログラムは以下の４つのフェーズを経て行われる：（Ｉ）止血（開放創の場合）、（ＩＩ）炎症、（ＩＩＩ）増殖および（ＩＶ）組織再モデリング。恒常性細胞代謝回転および専用修復プログラム（それらのサブフェーズを含む）の両方のプロセスは、厳密に調節されなければならない。例えば、恒常性および専用修復プログラムの両方で新しい細胞の生成を制限できないことによる細胞増殖の誤った調節は、がんの発生につながる可能性がある。逆に、十分な新しい細胞を提供できないと、再生プロセスが遅くなり、皮膚のバリア機能が損なわれる。同様に、炎症を制限または遮断できないと、慢性炎症性疾患、局所組織変性、幹細胞プール枯渇または自己免疫疾患が生じる可能性がある。逆に、有害な傷害に対して適切に重大な炎症反応を起こさないと、完全な再生能力を発揮することができず、皮膚のバリア機能が等しく損なわれ、日和見感染症のリスクが生じる。組織再モデリングレベルでは、このフェーズが行われないと、皮膚付属器の欠損および最適以下の細胞外マトリックス組成物などの機能性が損なわれた一時的な組織が皮膚に残る。逆に、組織再モデリングフェーズが終了しないと、不正確な細胞外マトリックス組成物が等しく生じ、線維症の一因となる可能性がある。したがって、身体は、皮膚の維持および修復プログラムを整然と実行するようにするための高度なメカニズムを発達させてきた。しかしながら、組織再生は必ずしも予め定められた一連のステップを経た直線的な経路ではないことが、更なる複雑さの原因となっている。例えば、非常に大きな創傷、老化、または恒常的な傷害とそれに伴う再生能力の枯渇によって、自然修復メカニズムが圧倒されると、機能的修復が損なわれ、最終的に瘢痕化を伴う「損傷制御」プログラムが行われる。

幹細胞
幹細胞および前駆細胞は、新しい細胞を提供することによって皮膚治癒に寄与する。異なる幹細胞集団は、皮膚区画に応じて機能的皮膚細胞を生じる。表皮は皮膚の最外層であり、創傷時の恒常性および再上皮化における細胞代謝回転は、大部分が表皮に存在する幹細胞によって媒介される。表皮表面の大部分は濾胞間上皮（ＩＦＥ）によって覆われており、皮膚上皮の他の上皮構造には、毛包および汗腺が含まれる。異なる幹細胞および前駆細胞の集団が、皮膚上皮内のそれぞれのニッチに存在する：ＩＦＥにおける幹細胞（Ｉｔｇ２α^ｈｉｇｈ、Ｉｔｇ１α^ｈｉｇｈ）、ＩＦＥにおける前駆細胞（Ｉｎｖ^＋、Ｌｇｒ６^＋）、漏斗部における幹細胞（Ｌｒｉｇ１^＋）、皮脂腺管における幹細胞（Ｇａｔａ６^＋）、狭部および皮脂腺における幹細胞（Ｌｒｉｇ１^＋、Ｌｇｒ６^＋、Ｂｌｉｍｐ１^＋、Ｐｌｅｔ１^＋）、ならびにバルジ部における幹細胞（Ｋ１５^＋、Ｋ１９^＋、Ｌｇｒ５^＋、ＣＤ３４^＋、Ｓｏｘ９^＋、Ｔｃｆ３^＋）（Ｄｅｋｏｎｉｎｃｋ＆Ｂｌａｎｐａｉｎ，２０１９，ＮａｔｕｒｅＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，２１（１），１８－２４）。これらの細胞はすべて、創傷部における一時的なＩＦＥ上皮細胞の補充に寄与し得る。さらに、皮膚常在性間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（Ｃｒｉｇｌｅｒｅｔａｌ．，２００７，ＴｈｅＦＡＳＥＢＪｏｕｒｎａｌ，２１（９），２０５０－２０６３）および造血幹細胞（ＨＳＣ）（Ｆａｎｅｔａｌ．，２００６，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，３４（５），６７２－６７９）の両方が、ある程度まで上皮再生に補助的に寄与し得る。しかしながら、これらのすべての供給源の中で、ＩＦＥ幹細胞および前述の細胞は、創傷時の短期および長期の両方の修復の最大の上皮細胞寄与因子である（Ｂｌａｎｐａｉｎ＆Ｆｕｃｈｓ，２０１４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４４（６１８９））。ＭＳＣは、毛包の毛乳頭（ＤＰ）および結合組織鞘（ＣＴＳ）の規定されたニッチに存在することが報告されている（Ｌａｕ，Ｐａｕｓ，Ｔｉｅｄｅ，Ｄａｙ，＆Ｂａｙａｔ，２００９，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１８（１１），９２１－９３３）。さらに、真皮および表皮区画は互いに隔離されておらず、むしろ連通して協働する。例えば、ＭＳＣは、ケラチノサイトおよびその前駆細胞とのパラクリン分泌ループに関与し、それによって再上皮化を刺激する（Ｌａｕｅｔａｌ．，２００９）。

間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、皮膚恒常性、細胞代謝回転、ＥＣＭ動態および組織再生において重要な役割を担っている。ＭＳＣは間葉系細胞プールを補充し、ＥＣＭタンパク質の沈着および分解に関与し、成長因子およびサイトカインの分泌によって組織動態を調節する。ＭＳＣの様々なサブクラスが皮膚における異なるニッチに存在する（Ｈｕ，Ｂｏｒｒｅｌｌｉ，Ｌｏｒｅｎｚ，Ｌｏｎｇａｋｅｒ，＆Ｗａｎ，２０１８，ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１８，１－１３．）。これらは、真皮鞘細胞および真皮乳頭細胞などの毛包（ＨＦ）常在細胞、真皮中の濾胞間ＭＳＣ、血管関連周皮細胞および皮下組織中の脂肪由来ＭＳＣを包含する。さらに、血管系から皮膚内に浸潤する主に骨髄由来のＭＳＣの寄与が報告されている。幹細胞は、一般に、自己再生し、機能的な細胞型に分化する能力によって定義される。通常の線維芽細胞はＭＳＣと形態学的に区別がつかず、形式的に（多能性）幹細胞の定義基準を満たすため、幹細胞の状態に関するＭＳＣ／線維芽細胞の過去の区別は議論中である（Ｓｏｕｎｄａｒａｒａｊａｎ＆Ｋａｎｎａｎ，２０１８，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｅｌｌｕｌａｒＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｗｉｌｅｙ－ＬｉｓｓＩｎｃ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１）。その正式な分類にかかわらず、皮膚恒常性、ＥＣＭ動態および創傷治癒における線維芽細胞の役割は十分に確立されている（Ｒｏｇｎｏｎｉ＆Ｗａｔｔ，２０１８，ＴｒｅｎｄｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，２８（９），７０９－７２２）。それにもかかわらず、間葉系表現型の多様性は、真皮層に関連する系譜、例えば、乳頭状（上部真皮）および網状（下部真皮）線維芽細胞によってさらに詳述される（Ｄｒｉｓｋｅｌｌｅｔａｌ．，２０１３，Ｎａｔｕｒｅ，５０４（７４７９），２７７－２８１）。乳頭系統は「再生促進」表現型を有し、毛包の形成に必要であり、一方、網状系統は迅速な創傷閉鎖に必要であるが、「瘢痕化促進」的に線維症関連ＥＣＭ沈着にも寄与する。間葉系細胞の不均一性も分子レベルで研究されており（Ｐｈｉｌｉｐｐｅｏｓｅｔａｌ．，２０１８，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１３８（４），８１１－８２５；Ｖａｃｕｌｉｋｅｔａｌ．，２０１２，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１３２（３ＰＡＲＴ１），５６３－５７４）、より詳細な系統関係が最近概説された（Ｌｙｎｃｈ＆Ｗａｔｔ，２０１８）。

さらに、間葉細胞における微小環境（真皮層）関連表現型多様性に加えて、細胞固有の不均一性も存在し、再生挙動の支配的な決定因子である。１つの主要な要因は、Ｅｎｇｒａｉｌｅｄ－１（Ｅｎ－１）状態（Ｊｉａｎｇｅｔａｌ．，２０１８，ＮａｔｕｒｅＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，２０（４），４２２－４３１；Ｒｉｎｋｅｖｉｃｈｅｔａｌ．，２０１５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４８（６２３２））である。Ｅｎ－１陰性線維芽細胞（ＥＮＦ）は、胚発生中の瘢痕のない創傷治癒を媒介する。しかしながら、ＥＮＦ数は胚発生後に減少し、Ｅｎ－１陽性線維芽細胞（ＥＰＦ）が優性系統として現れ、瘢痕化を促進する。

老化皮膚の属性
老化した皮膚では、細胞置換が減少し続け、バリア機能および機械的保護が損なわれ、創傷治癒および免疫応答が遅延し、体温調節が損なわれ、汗および皮脂の産生が減少する（Ｆａｒａｇｅ，Ｍｉｌｌｅｒ，＆Ｍａｉｂａｃｈ，２０１０，ＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆＡｇｉｎｇＳｋｉｎ，１－１２２０）。細胞代謝回転速度の低下により、肌荒れ、創傷治癒の遅延および色素のムラが生じる。高齢者は、若年の健康な個体よりも乾燥肌に悩まされることが多い。これは、角質層における天然の保湿因子および脂質の産生における皮脂腺の機能低下に基づいており、それによってラメラ二重膜の減少および保水力の低下がもたらされる。皮膚の老化はまた、真皮層における細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の大規模な再モデリング、皮膚線維芽細胞の老化、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の劇的なアップレギュレーション、およびコラーゲン産生の減少を伴う。その結果、コラーゲン、弾性繊維および他のＥＣＭタンパク質の全体的な不足および断片化が起こり、抗張力が失われて、シワおよびタルミとなって現れる。さらに、真皮乳頭が平坦になることで、水疱形成およびその結果として感染症にかかるリスクがより高くなる。

障害皮膚の再生および瘢痕化はシグナル伝達分子パターンと相関する
生物学的プロセスは、細胞レベルおよび分子レベルを含む様々なレベルで調節される。幹細胞を含む細胞は、内部状態と外部キューとを統合して生物学的意思決定を行っている。同様に、生理学的皮膚恒常性および再生は、規定の場所で規定の時間に作用する規定のシグナル伝達分子セットによって支配される。

トリガー因子による皮膚再生の増強
大部分の機能的皮膚を維持する能力にもかかわらず、身体の恒常性および自己修復メカニズムは完全ではない。これは、例えば、非常に大きな創傷、修復能力の慢的な活性化によって引き起こされる枯渇、老化、エピジェネティックな低下、または別の急性もしくは慢性の疾患もしくはストレス因子の発生によって悪化する可能性がある。

しかしながら、生得的な調節システムの欠点は、外部からの調整によって軽減または克服されたりすることさえできる。機能回復が目的である場合、外部からの調整は、通常、調節デッドロックを克服するためのアプローチを必要とする。次に、これは、多くの場合、複数の調節ハブを標的とする多面的なアプローチを規定する。しかしながら、従来の介入は、多くの場合、「一実体・一標的（ｏｎｅ－ｅｎｔｉｔｙ－ｏｎｅ－ｔａｒｇｅｔ）」戦略を含み、ひいては有効性は限られている。さらに、短期的な改善は、しばしば調節デッドロックの克服と相関せず、それによって短期的な調整に継続的に頼ることになる。例えば、抗炎症薬は、炎症を抑えることによって短期的に大きな緩和をもたらすが、調節デッドロックを克服したり、または機能的回復を可能にしたりすることはできない。したがって、薬物をやめると、炎症が再び起こることが多い。

様々な供給源から皮膚への外部幹細胞の供給に頼る幹細胞の再生能力を利用しようとする以前の取り組みは、限られた成功しか示さなかった。

ＥＰＯＲ－ＣＤ１３１アゴニストペプチド－脂質複合体およびコンジュゲートは、血管弛緩剤と併用することで、当初は洗練された代替物を提示していた（国際公開第２０１８／０８６７３２号、米国特許第１０４５６３４６号明細書）。これらの薬剤は、短期的な適用において化粧品製剤に有益であることが証明されたが、長期投与中にあまり好ましくないか、または有害でさえあることが判明した。

第１の態様では、本発明は、ヒト皮膚の再生および維持に単独でまたは組み合わせて有効な単一の新規なペプチドまたはペプチド由来薬剤に関する。これらの薬剤は、以下の項でより詳細に記載される、配列番号１～１９によって示されるペプチド配列／式によって特徴付けられる。

第２の態様では、本発明は、皮膚の再生または外観を誘発または増強または改善する少なくとも１つのペプチドもしくはペプチド誘導体を含む皮膚への局所投与用の化粧品製剤または組成物に関し、ここで、少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路を刺激し、配列／式：
（ｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号１）
（ｉｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号２）
（ｉｉｉ）Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号３）
（ｉｖ）Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号４）
を含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体からなる群（Ａ）から選択され、Ｚ１は、前記ペプチドのＮ末端に共有結合した担体部分であり、前記ペプチドの組織透過および／または基底膜浸透を減少させる。

本発明の好ましい実施形態では、Ｚ１は、８～６０ｋＤａ、好ましくは２０～４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

第３の態様では、本発明は、皮膚の再生または外観を誘発または増強または改善する少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含む皮膚への局所投与用の化粧品製剤または組成物に関し、ここで、少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のアゴニストであり、配列／式：
（ｖ）ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号５）
（ｖｉ）Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号６）
を含むかまたは有するペプチドおよびペプチド誘導体からなる群（Ｂ）から選択され、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に共有結合された分枝または非分枝脂肪酸のアシル基である。

本発明の好ましい実施形態では、Ｚ２は、５～４２個の炭素原子、好ましくは５～２５個の炭素原子の分岐または非分岐脂肪酸であり、例えば、Ｚ２はミリストリルである。

本発明のさらに好ましい実施形態では、配列番号５または６によって示される前記ペプチド／ペプチド誘導体ベースのアゴニストは、適用中、好ましくはペプチド配列内のメチオニン残基の空気酸化によって、部分的または完全に不活性化される。

本発明のさらに好ましい実施形態では、化粧品製剤または組成物は、適切な量の、組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストをさらに含み、前記アンタゴニストは、配列番号５または６によって示されるアゴニストの生物学的活性を調節または減衰または阻害する。

本発明の好ましい実施形態では、前記アンタゴニストは、配列／式
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）または
Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）
を含むかまたは有し、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝脂肪酸のアシル基である。

本発明のさらに好ましい実施形態では、配列番号１０または１７によって示される前記ペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストは、適用中、好ましくはペプチド配列内のメチオニン残基の空気酸化によって、部分的または完全に不活性化される。

前記薬剤の配列中のメチオニン残基の空気酸素による酸化による前述のＥＰＯＲ／ＣＤ１３１アゴニストおよび／またはアンタゴニストの活性の調節は、本発明の更なる重要な知見である。

第４の態様では、本発明は、皮膚の再生または外観を誘発または増強または改善する少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含む皮膚への局所投与用の化粧品製剤または組成物に関し、ここで、少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、ヒトＴＧＦ－β３のバリアントであり、配列／式
（ｖｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ（配列番号８）
（ｉｘ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－Ｚ３（配列番号９）
を含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体からなる群（Ｃ）から選択され、ＸはＫまたはＥであり、Ｚ３はＣ末端に結合したグリコポリマーである。

本発明の好ましい実施形態では、Ｚ３は、トレハロースまたはトレハロース誘導体の部分を含有する１５～５０個、好ましくは１８～３０個のモノマー単位を含むオリゴマーまたはマルチマーまたはポリマーであるかまたは含む。

ここで、４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロースまたはＱ－６－デオキシ－トレハロース（Ｑ－６ｄｏＴｈ）などのトレハロース誘導体モノマー単位が、好ましくは本発明に従って適切であることを示すことができた。ＴＧＦ－β３ペプチド配列番号７および８のＣ末端にＺ３が結合し、配列番号９のペプチド誘導体が得られることにより、化粧品製剤および皮膚へのそれぞれの適用にとって重要である、得られる融合分子のより長期安定性が引き起こされる。

したがって、ＴＧＦ－β３融合ペプチド、
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－［４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロース］ｎ（配列番号１８）、および
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－［Ｑ－６ｄｏＴｈ］ｎ（配列番号１９）は、本発明の具体的に好ましい実施形態を表し、ＸはＫまたはＥであり、ｎは１５～５０の整数である。

配列番号１～１９のいずれかによって特定されるペプチドまたはペプチド誘導体は、適用中の放出特性を改善するために、リポソームまたはセラミド構造に任意選択的にカプセル化または結合されてもよい。

上述の各ペプチドは、上記および下記により詳細に記載される皮膚の美容処置において単独で有効であり得ることが強調されるべきである。

それにもかかわらず、化粧品の皮膚適用のためのいわゆるトリガー因子複合体を形成する、上記および下記で特定される異なる群（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）からそれぞれ選択される２つまたは３つのペプチドの組み合わせが、それぞれの単剤のみを含有する製剤と比較して、はるかに効果的であり、皮膚治療効果および化粧品製剤の長期安定性に関して相乗的な結果を示すことが本発明の発明者らによって示されることができた。

したがって、第５の重要なキーとなる態様では、本発明は、上記および下記で言及される群（Ａ）（Ｂ）（Ｃ）のいずれかの少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体と、異なる群の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体とを含む、皮膚の局所用化粧品用途に使用するための前述の薬剤のセットまたはトリガー因子複合体を提供する。

換言すれば、本発明は、
（Ｉ）群（Ａ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体と群（Ｂ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体とを含む第１のトリガー因子複合体；
（ＩＩ）群（Ａ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体と群（Ｃ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体とを含む第２のトリガー因子複合体；
（ＩＩＩ）群（Ｂ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体と群（Ｃ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体とを含む第３のトリガー因子複合体；および
（ＩＶ）群（Ａ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体と群（Ｂ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体と群（Ｃ）の１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体とを含む第４のトリガー因子複合体；
を提供する。

各トリガー因子複合体は、群（Ａ）または（Ｂ）または（Ｃ）のいずれかのみからの単一ペプチド成分を含むそれぞれの化粧品製剤または組成物と比較して改善された皮膚治療特性を示す。

しかしながら、本発明によれば、最も効果的であり、したがって好ましいのは、群（Ａ）の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体、および群（Ｂ）の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体、および群（Ｃ）の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含むトリガー因子複合体（ＩＶ）である。

より詳細には、トリガー因子複合体は、
（ｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号１）、
ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号２）、
Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号３）、
Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号４）、
からなる群（Ａ）から選択される１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体：および
（ｉｉ）ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号５）
Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号６）、
からなる群（Ａ）から選択される１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体：および
（ｉｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号７）、
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ（配列番号８）、
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－Ｚ３（配列番号９）、
からなる群（Ａ）から選択される１つまたは複数のペプチドまたはペプチド誘導体：
を含み、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＸは上記で述べた意味を有する、ことが好ましい。

さらに、上述のトリガー因子複合体、ならびに群（Ａ）（Ｂ）または（Ｃ）のいずれかの単一のペプチドまたはペプチド誘導体のみを含む組成物は、化粧品および皮膚治療用途に有効な更なる薬剤および／または成分を含んでいてもよい。

したがって、本発明者らは、上記で開示される配列番号１０および１７を有するアンタゴニストの任意選択的な存在とは別に、本発明によるそれぞれの化粧品製剤は：
（ａ）コラーゲン３型由来のマトリカイン活性を誘発し、
ＬＱＧＬＰＧＴＧＧＰＰＧＥＮＧＫＰＧＥＰＧＰＫＧＤＡＧＡＰＧＡＰＧＧＫＧＤＡＧＡＰＧＥＲＧＰＰＧ（配列番号１１）、
ＶＫＧＥＳＧＫＰＧＡＮＧＬＳＧＥＲＧＰＰＧＰＱＧ（配列番号１２）、
Ｚ２－ＬＱＧＬＰＧＴＧＧＰＰＧＥＮＧＫＰＧＥＰＧＰＫＧＤＡＧＡＰＧＡＰＧＧＫＧＤＡＧＡＰＧＥＲＧＰＰＧ（配列番号１３）、
Ｚ２－ＶＫＧＥＳＧＫＰＧＡＮＧＬＳＧＥＲＧＰＰＧＰＱＧ（配列番号１４）、
からなる群から選択される配列／式の１つを含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体：
および／または
（ｂ）ＣＤ２６／Ｄｐｐ４阻害を惹起し、
ＥＩＨＱＥＥＰＩＧＧＱＳＧＳＧＧ－ＫＰＩ（配列番号１５）、
ＥＩＨＱＥＥＰＩＧＧＫ［Ｚ２］ＳＧＳＧＧ－ＫＰＩ（配列番号１６）
からなる群から選択される配列／式の１つを含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体：
をさらに含んでいてもよく、Ｚ２は、ミリストリルなどの５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基であり、Ｇ－Ｋは、Ｇ（グリシン）のカルボキシ基とＫ（リシン）のε－アミノ基との間のイソペプチド結合を表し、Ｋ［Ｚ２］は、Ｋのε－アミノ官能基と脂肪酸Ｚ２（ミリストリルなど）のカルボキシ官能基との間のアミド結合を表し、好ましくて改善された特性を有することを示した。

まとめると、本発明の知見に関して拘束力を持たないものと明示的にみなされるべき、想定される一般的な作用機序を考慮すると、次のように述べることができる：

本発明は、特定の単一ペプチド薬剤だけでなく、新規なトリガー因子複合体、すなわち新規なペプチドおよび／または化学物質のいくつかのセットを提供し、複数の調節デッドロックを克服することによって身体がその自然再生能力をより大きな可能性で利用することを可能にするものである。

本発明によるトリガー因子複合体の第１の重要な特徴は、広い適用範囲を伴う様々な傷害および皮膚状態に対する適合性である。

本発明のトリガー因子複合体の第２の重要な特徴は、そのすべての成分を、治癒プロセスが一薬剤調節のために規定するように、時間的にも空間的にも連続的に適用するのではなく、１つの製剤で一緒に適用できることである。これは、トリガー因子複合体によって及ぼされる制御調節が局所的な微小環境と協働するためである。結果として、トリガー因子複合体の所与のサブセットの活性は、適時である場合にのみ有効である。例えば、トリガー因子複合体の所与のサブセットの有効性は、治癒プロセスの所与の中間段階で必要とされる。トリガー因子複合体の分子のこのサブセットは、常に活性であり、すなわち、その有効性が必要とされる前、この場合、およびその有効性が必要とされる後でさえも活性である。しかしながら、トリガー因子複合体は、活性の有効性への変換を支配する４つのメカニズムを利用する。第１に、これには、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、損傷関連分子パターン、ニューロン放出分子、ＥＣＭ分子およびマトリカインを含む局所的なタイミング特異的皮膚状態キューとの細胞外および細胞内シグナル伝達の協働および調節が含まれる。第２に、これには、例えば細胞表面受容体発現による、適用されたトリガー因子複合体に対する細胞反応能、すなわち受容性が含まれる。第３に、これは、細胞状態に応じて同じ刺激に対する状況細胞応答を利用することを含む。これは特に、幹細胞および前駆細胞の分化状態と相関するエピジェネティック状態に関連し、これらはまた空間および時間における微小環境と相関する。第４に、プロテアーゼ活性、ｐＨおよび酸化電位の局所的な微小環境は、有孔成分の局所的な利用可能性および活性を調節する。

トリガー因子複合体の第３の重要な特徴は、傷害がない場合の非干渉性である。これは、症状「Ａ」の皮膚に対処するトリガー因子複合体のサブセットは、症状「Ｂ」に罹患した皮膚または健康な皮膚に適用しても有害な作用を引き起こさないことを意味する。

さらに、本発明によるトリガー因子複合体は、自然シグナル伝達経路を利用して細胞挙動を駆動する。本発明のトリガー因子複合体の分子は、幹細胞挙動を再生細胞プログラムに向ける。これは、一般に細胞挙動を決定する自然細胞シグナル伝達経路を調節することによって達成される。

最後に、本発明は、皮膚の修復、皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、シワの減少、皮膚の老化防止、ならびに乾燥した、くすんだ、および破裂しやすい皮膚の回避および改善を含む、ヒト皮膚の局所化粧品処置のための前述の化粧品製剤および単離されたペプチドまたはペプチド誘導体の使用に関する。

発明の詳細な説明

「ペプチド」という用語は、本発明によれば、アミド結合によって互いに共有結合したアミノ酸配列を有する任意のペプチドを意味し、「ペプチド」という用語は、別にポリペプチドと呼ばれる表現可能なペプチドを含む。

「ペプチド誘導体」という用語は、本発明によれば、アミド結合によって互いに共有結合した少なくとも５個のアミノ酸を含むペプチド部分を含む任意の化学分子を意味し、前述のペプチドは非ペプチド部分に共有結合している。そのような非ペプチド部分は、限定されないが、脂肪族、芳香族、同素環式、複素環式、オリゴマーまたはポリマー部分などの有機化学残基を明示的に含む。特に、前述の非ペプチド部分は、脂肪酸、トレハロースまたはトレハロース誘導体含有オリゴマー／ポリマー、およびポリエチレングリコールなどの従来の医薬担体を含む。

本明細書で使用される「Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路」という用語は、細胞質へのβ－カテニンの蓄積および最終的な核内への移行を引き起こして、ＴＣＦ／ＬＥＦファミリーに属する転写因子の転写コアクチベーターとして作用するＷｎｔ経路を意味する。

本明細書で使用される「ＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体」という用語は、１つまたは複数のＥＰＯ受容体サブユニット（ＥＰＯＲ）と、１つまたは複数の分化クラスター１３１タンパク質（ＣＤ１３１）とを含む組織保護ＥＰＯ受容体を意味する。分化クラスター１３１タンパク質は、サイトカイン受容体共通サブユニットβ（ＣＳＦ２ＲＢ）またはインターロイキン－３受容体共通βサブユニット（ＩＬ３ＲＢ）としても知られている。

本明細書で使用される「マトリカイン」という用語は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質の断片化に由来し、特定の受容体と相互作用することによって細胞活性を調節するペプチドを意味する。本発明の文脈において、前述のマトリカインは、皮膚組織における組織再生および細胞外マトリックス材料の合成を刺激および調整するペプチドを含む。

本明細書で使用される「トリガー因子複合体」という用語は、皮膚微小環境を調節し、幹細胞挙動を調節することによって、ヒト皮膚がその自然再生能力をより大きく利用することを可能にするペプチド、ペプチド誘導体および／または他の化学的実体のセットを意味する。

アミノ酸コード：ペプチド配列の開示のために、従来の一文字アミノ酸コードが本明細書で使用される。明確にするために、Ａはアラニン、Ｃはシステイン、Ｄはアスパラギン酸、Ｅはグルタミン酸、Ｆはフェニルアラニン、Ｇはグリシン、Ｈはヒスチジン、Ｉはイソロイシン、Ｋはリシン、Ｌはロイシン、Ｍはメチオニン、Ｎはアスパラギン、Ｐはプロリン、Ｑはグルタミン、Ｒはアルギニン、Ｓはセリン、Ｔはトレオニン、Ｖはバリン、Ｗはトリプトファン、Ｙはチロシンを表す。

ＴＧＦｂｅｔａ３モジュール
ＴＧＦｂｅｔａシグナル伝達は、皮膚の恒常性および再生の主要調節因子である（Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｖｉｃｋａｒｙｏｕｓ，＆Ｖｉｌｏｒｉａ－Ｐｅｔｉｔ，２０１６）。すべてのＴＧＦｂｅｔａアイソフォーム（ＴＧＦｂｅｔａ１、ＴＧＦｂｅｔａ２、ＴＧＦｂｅｔａ３）が、創傷治癒において重要な役割を果たす。しかしながら、簡単に言えば、異なるアイソフォームは天然の対応物として作用する。ＴＧＦｂｅｔａ１および２は、炎症細胞の遊走および活性化、肉芽組織形成および線維芽細胞から筋線維芽細胞への移行を促進し、それによって瘢痕化を促進する。対照的に、ＴＧＦｂｅｔａ３は、炎症プロセス、損傷関連ＥＣＭ再モデリングを弱め、筋線維芽細胞表現型を制限する。さらに、ＴＧＦｂｅｔａ３の適用は、皮膚の巨大損傷に限定されず、微小損傷または環境的ストレスを受けた皮膚における再生促進に向けて細胞挙動を導く。それにもかかわらず、インビボでのＴＧＦｂｅｔａの作用は複雑であり、組換えＴＧＦｂｅｔａ３の投与は、ＴＧＦｂｅｔａ３薬物であるＪｕｖｉｓｔａ（Ｇｕｅｎｔｅｒ＆ＭａｃＨｅｎｓ，２０１２，ＥｕｒｏｐｅａｎＳｕｒｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，４９（１），１６－２３）の臨床第ＩＩＩ相研究の失敗によって示されたように、治療効果が持続しない。

しかしながら、本発明は、化粧品用途のために健康な皮膚を支えるのに適した薬剤として、操作されたヒトＴＧＦ βバリアント、すなわち、ＴＧＦ β３Ｔ５７ＫＬ６８ＨＳ１０２Ｅを開示する。このコンストラクトは、例えば、安定に発現するＣＨＯ細胞から組換え的に産生することができ、アミノ酸配列：
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号７）を有する。

タンパク質安定性は、タンパク質ベースの製品で頻繁な問題になる。化学反応、アンフォールディングおよび凝集を含む多くの分解経路は、活性の喪失ならびにオリゴマーおよび高次集合体のような免疫原性種などの潜在的に有害な副産物の生成に寄与する。化粧品などの生化学的に複雑な混合物におけるタンパク質の意図された使用は、安定性を確保するためのさらに大きな課題を提起する。脂質を含む化粧品に一般的に使用される化学種は、疎水性表面を露出させる折り畳まれていないタンパク質状態に熱力学的に有利である。さらに、化粧品はタンパク質凝集のシードが豊富である。実際、哺乳動物発現宿主由来の組換えＴＧＦ β３Ｔ５７ＫＬ６８ＨＳ０１２Ｅは、標準的な化粧品製剤において、商業的に適合可能な時間にわたって安定ではない。組換えタンパク質は、医薬品添加剤（Ｋａｍｅｒｚｅｌｌ，Ｅｓｆａｎｄｉａｒｙ，Ｊｏｓｈｉ，Ｍｉｄｄａｕｇｈ，＆Ｖｏｌｋｉｎ，２０１１，ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ，６３（１３），１１１８－１１５９）によって安定化されることが多い。しかしながら、これらの医薬品添加剤の多くは、有効なタンパク質安定化濃度で化粧品製剤と干渉するか、または他の化粧品成分と負に相互作用する。タンパク質安定化に対する別の洗練されたアプローチは、発現関連タンパク質グリコシル化とは無関係またはそれに加えて精製後のグリコポリマーコンジュゲーションである（Ｍａｎｃｉｎｉ，Ｌｅｅ，＆Ｍａｙｎａｒｄ，２０１２，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，１３４（２０），８４７４－８４７９）。

しかしながら、チオール反応性コンジュゲーションはシステイン部位に非特異的であり、それによって、標識化多型、さらには標識化誘導非機能性ＴＧＦｂｅｔａ種およびロット間変動の高いリスクをもたらす。この非特異的標識は、タンパク質タグベースの酵素触媒コンジュゲーション（Ｆａｌｃｋ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ，２０１８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，７（１），４．）を利用することによって回避することができる。例えば、ソルターゼＡに基づく戦略を使用することができる。その戦略では、例えばＸがＫまたはＥであるペプチドモチーフＬＰＸＴＧは、ＴＧＦｂｅｔａ３または任意のＴＧＦｂｅｔａ３バリアントにｃ末端融合され、以下の配列を有する：
［ＴＧＦ β３バリアント］－ＬＰＸＴＧＧＧ、または具体的にはＴＧＦ β３Ｔ５７ＫＬ６８ＨＳ１０２Ｅ：
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ（配列番号８）

この融合タンパク質は、組換えにより産生し、精製することができる。タンパク質安定性は、グリコポリマー、例えば、ポリマーに寄与する好ましくは１８個またはそれより多いモノマーを有する４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロースモノマーから作製されるポリビニルによって高めることができる。１つの合成戦略では、例えば、ポリマー末端をアミノ基で化学的に官能化し、Ｃ末端グリシンのカルボキシ末端とアミド結合を形成することによって、１つのグリコポリマー末端をＧＧＧペプチドに化学的にカップリングさせる。この融合コンストラクトＧＧＧ－グリコポリマーは、部位特異的（ＬＰＸＴＧ特異的）様式でソルターゼＡによって組換えＴＧＦｂｅｔａ３またはＴＧＦｂｅｔａ３バリアントのＬＰＸＴＧモチーフへの共有結合を介して酵素的にコンジュゲートすることができる。

これにより、以下の融合分子が得られる：
［ＴＧＦｂｅｔａ３バリアント］－ＬＰＸＴＧＧＧ－グリコポリマー、または具体的にはＴＧＦｂｅｔａ３Ｔ５７ＫＬ６８ＨＳ１０２Ｅ：
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－Ｚ３（配列番号９）、
ＸはＫまたはＥであり、Ｚ３はＣ末端に結合したトレハロースオリゴマーなどのグリコポリマーである。

ＴＧＦｂｅｔａ３Ｔ５７ＫＬ６８ＨＳ１０２Ｅの４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロースのｎ個のモノマーから作製されるポリビニルグリコポリマーの具体的な場合において、配列は以下のとおりである：
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－［４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロース］ｎ（配列番号１８）

さらに、トレハロース部分にコンジュゲートしたアミノ酸モノマーから、固相ペプチド合成によって（ポリ）ペプチドとしてのグリコポリマーを生成することも可能である（ＤｅＢｏｎａｅｔａｌ．，２００９，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｃｉｅｎｃｅ，１５（３），２２０－２２８．）。固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、アミノ酸伸長の段階的な様式で制御することができる。これにより、４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロースの重合によって例示される化学重合よりも最終生成物の長さをより制御することを提供される。結果として、生成物の不均一性は、化学重合に基づく戦略よりもＳＰＰＳに基づく戦略の方がはるかに小さい。そのようなＳＰＰＳベースの戦略を実施するためには、ＳＰＰＳ適合性（例えば、ｆｍｏｃ／Ｂｏｃ保護）トレハロースコンジュゲートアミノ酸を利用しなければならない。当業者は、そのような試薬を生成する多くの方法があることを理解するであろう。１つの可能性は、アミノ官能化トレハロースを化学的アミド化によってｆｍｏｃ保護アミノ酸の側鎖カルボキシル官能基に共有結合させることである。より具体的には、６－アミノ６－デオキシトレハロース（Ｄｕｔｔａｅｔａｌ．，２０１９，ＡＣＳＣｅｎｔｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ａｃｓｃｅｎｔｓｃｉ．８ｂ００９６２）を使用して、αカルボキシ保護αアミノ保護グルタミン酸のγカルボキシル機能を特異的にアミド化することができる。得られた６－デオキシトレハロース官能化アミド、グルタミン誘導体（Ｑ－６ｄｏＴｈ）部分は、ＳＰＰＳの構成要素として使用することができる。これは、αアミノ保護基の保持ではなくそのαカルボキシ保護基の除去を必要とし得るが、これは化学的手段によって達成することができる。結果として、３個のＮ末端グリシン残基がｎ単位の６－デオキシ－トレハロース官能化グルタミンに共有結合しているＧＧＧ－（Ｑ－６ｄｏＴｈ）ｎポリペプチドを産生することができる。ＳＰＰＳは、これらの６－デオキシ－トレハロース官能化グルタミンの数ｎに対する大きな制御を可能にする。ＴＧＦｂｅｔａ３誘導体の安定化のためには、１８またはそれよりも多い数ｎが望ましい。このトレハロース官能化ペプチドは、ソルターゼＡによるＴＧＦｂｅｔａ３バリアント－ＬＰＸＴＧ融合物に共有結合することができる。そのようなＴＧＦｂｅｔａ３バリアント－ＬＰＸＴＧ融合タンパク質は、組換え産生および精製することができる。

前述のソルターゼ媒介コンジュゲーションは、以下の融合分子をもたらす：［ＴＧＦｂｅｔａ３バリアント］－ＬＰＸＴＧＧＧ－［Ｑ－６ｄｏＴｈ］ｎ、または具体的にはＴＧＦｂｅｔａ３Ｔ５７ＫＬ６８ＨＳ１０２Ｅ：
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－［Ｑ－６ｄｏＴｈ］ｎ（配列番号１９）、式中、ｎは１５から５０の整数である。

好ましくは１８個またはそれよりも多いトレハロースバリアント部分を含有する前述の構造にコンジュゲートしたＴＧＦｂｅｔａ３バリアントは、エマルジョンを含む標準的な化粧品製剤中３０℃で少なくとも６ヶ月間安定であり、例えば、耐アンフォールディング性および耐凝集性である。これに関連して、耐アンフォールディング性は、円二色性（ＣＤ）分光法によって測定される折り畳み状態の＞９５％保持と定義される。耐凝集性は、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定してモノマーの分子量の＞４倍またはそれを超えるオリゴマー種の低い（＜１％）相対存在量として定義される。精製されたタンパク質に対してＣＤ分光法およびＤＬＳ測定を行うために、ＴＧＦｂｅｔａ３バリアントを、広範囲のフローチャンバー透析によって化粧品製剤から抽出した。透析膜孔は、ＴＧＦｂｅｔａ３バリアントの膜透過を可能にするのに十分な大きさであった。ＴＧＦｂｅｔａ３バリアントタンパク質を、アフィニティークロマトグラフィーによって希釈溶液から同時に濃縮した。

最終化粧品品のこのような安定化されたＴＧＦｂｅｔａ３バリアントコンジュゲートの好ましい濃度は、８０ｐＭ～５００ｎＭの範囲である。

幹細胞恒常性モジュール
幹細胞は、傷害時の組織発生、恒常性、再生および再生の重要な媒介因子である。それらはまた、シグナル伝達分子、細胞接触および細胞外マトリックスを含む様々な外部因子によって調節される。皮膚を含む様々な組織における１つの中心的な幹細胞調整因子がＷｎｔシグナル伝達である（Ｃｌｅｖｅｒｓ，Ｌｏｈ，＆Ｎｕｓｓｅ，２０１４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４６（６２０５），１２４８０１２）。Ｗｎｔシグナル伝達は、異なるニッチにおける様々な幹細胞集団、例えばＩＦＥ幹細胞およびＨＦ幹細胞に、部分的に異なる役割で作用する（Ｃｈｏｉｅｔａｌ．，２０１３，ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ，１３（６），７２０－７３３）。さらに、それは幹細胞の恒常性増殖にとって重要であるが、炎症中に他の過剰増殖誘導剤によって回避することができる。それにもかかわらず、Ｗｎｔシグナル伝達は、一般に、幹細胞および前駆細胞区画の拡大を促進する。例えば、自己分泌Ｗｎｔシグナル伝達は、濾胞間表皮（Ｌｉｍｅｔａｌ．，２０１３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４２（６１６３），１２２６－１２３０）および毛包隆起（Ｊａｋｓｅｔａｌ．，２００８，ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ，４０（１１），１２９１－１２９９；Ｌｉｍ，Ｔａｎ，Ｙｕ，Ｌｉｍ，＆Ｎｕｓｓｅ，２０１６，ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１１３（１１），Ｅ１４９８－５０５）におけるＡｘｉｎ２陽性基底層幹細胞の自己再生を刺激する。さらに、持続的な表皮Ｗｎｔシグナル伝達は、幹細胞に富んだ異所性毛包を誘導することさえできる。さらに、上皮Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達は、真皮区画に影響を及ぼし、幼若新生児状態（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｋｒｅｔｚｓｃｈｍａｒ，＆Ｗａｔｔ，２０１１，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１３８（２３），５１８９－５１９９；Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍａｓｔｒｏｇｉａｎｎａｋｉ，＆Ｗａｔｔ，２０１６，ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，７，１－１３）に向かう真皮のリプログラミングを促進する。皮膚への影響は、線維芽細胞増殖の増加、ＥＣＭ再モデリング、成熟および脂肪生成の変化である。特に、表皮Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達は、「再生促進性」乳頭状線維芽細胞系統の増殖を推進する（Ｄｒｉｓｋｅｌｌｅｔａｌ．，２０１３，Ｎａｔｕｒｅ，５０４（７４７９），２７７－２８１）。

それにもかかわらず、Ｗｎｔシグナル伝達は状況に応じて変化し、病理組織状態を悪化させる可能性がある。例えば、Ｗｎｔ／β－カテニンは、皮膚を含む様々な組織における線維症の主要な推進因子である（（Ｂｕｒｇｙ＆Ｋｏｅｎｉｇｓｈｏｆｆ，２０１８，ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌｏｇｙ，６８－６９，６７－８０）。Ｗｎｔ／β－カテニンの構成的活性化は、様々なモデルにおいて線維症を誘導するのに十分でさえある（Ｂｕｒｇｙ＆Ｋｏｅｎｉｇｓｈｏｆｆ，２０１８，ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌｏｇｙ，６８－６９，６７－８０）。これは、過去に化粧目的のためのＷｎｔシグナル伝達の単純な外部刺激を妨げてきた。特に、線維症は、線維芽細胞から筋線維芽細胞への遷移の真皮関連の摂動、異常なＥＣＭ沈着および未解決の炎症として現れる。したがって、表皮におけるＷｎｔシグナル伝達の刺激および真皮における刺激の非存在を伴うＷｎｔ経路刺激の空間的分離は、線維症誘導の問題を軽減することができる。この種の空間制御は、Ｗｎｔ経路刺激タンパク質の細胞型特異的遺伝子発現を可能にする実験モデル系において容易に達成することができる（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒｅｔａｌ．，２０１６、同上）。しかしながら、宿主ゲノムの改変によるこのタイプの調節は、医療用または化粧品における日常的な適用には不可能である。対照的に、Ｗｎｔシグナル伝達の薬理学的刺激因子が小分子として入手可能である。しかしながら、局所投与時の皮膚内でのそれらの効率的な拡散およびバイオアベイラビリティは、活性の効率的な空間制御を可能にしない。したがって、現在の小分子Ｗｎｔ刺激剤は、表皮でそれらの活性を発揮し得るが、真皮に効率的な濃度で蓄積し、そこでそれらの活性を発揮する。天然受容体アゴニストまたはその誘導体の使用は、未調査の仮説上の選択肢を提示する。しかしながら、Ｗｎｔアゴニストには少なくとも１０個のＦｚｄ受容体およびＬｒｐ５／６共受容体に交差作用する１９個のヒトＷｎｔタンパク質を包含するという複雑さがあるため、これは複雑な問題である（Ｊａｎｄａｅｔａｌ．，２０１７，Ｎａｔｕｒｅ，５４５（７６５３），２３４－２３７；Ｋａｔｏｈ，２００８，ＣｕｒｒｅｎｔＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ，９（７），５６５－５７０；Ｎｕｓｓｅ＆Ｃｌｅｖｅｒｓ，２０１７，Ｃｅｌｌ，１６９（６），９８５－９９９）。さらに、Ｗｎｔタンパク質は古典的に、活性のために部位特異的パルミトイル化を必要とするが、これは新規な人工融合コンストラクト代用アゴニスト（Ｊａｎｄａｅｔａｌ．，２０１７、同上）では回避することができる。

本発明は、Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達を刺激し、化粧品用途に有用であることが判明している新規な実体を開示する。これらの分子は、従来の化粧品製剤中でのそれらの安定性によって特徴付けられるが、ｉｎｓｉｔｕでの活性、すなわち真皮ではなく表皮における活性バリアントの十分な利用可能性が短い。

これらの実体は：
ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号１）
ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号２）
を含む。

さらに、これらのペプチドは、担体分子Ｚ１を融合することによってＮ末端上で修飾することができ、それによってそれらの組織透過および基底膜浸透を制限する。これにより、基底膜を超えて有効濃度に達することなく、より高濃度の分子の局所適用が可能になる。
（Ｚ１）－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号３）
（Ｚ１）－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号４）

任意のサイズの担体は、ペプチドの組織透過および基底膜浸透を減少させ、それによって利益を提供する。１つの特に適切な担体（Ｚ１）は、８～６０ｋＤａの範囲のポリエチレングリコールである。これは、ＮＨＳ官能化ＰＥＧを使用してペプチドのＮ末端に共有結合され得る。担体の種類にかかわらず、表皮浸透半減期が７４０時間を超える場合、Ｗｎｔ刺激実体（Ｗｎｔ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｅｎｔｉｔｉｅｓｐｅｒｆｏｒｍ）が特に有用であり、それによって、より高用量のそのような物質の適用が可能になる。

そのような実体の表皮浸透半減期は、濃度時間曲線を作成するために、表皮および真皮中でのそのような実体の濃度を経時的に測定することによって研究することができる。測定は、皮膚パンチ生検を経時的にサンプリングし、外科的切開によって表皮と真皮とを分離し、組織標本をホモジナイズおよび溶解し、抗体ベースの親和性濃縮手段によって試料中の目的の実体を濃縮し、濃縮した試料を絶対定量のための質量分析に供することによって行うことができる。

最終化粧品において７４０時間を超える表皮浸透半減期を有するそのような担体結合Ｗｎｔアゴニストの好ましい濃度は、１５０ｎＭ～５００μＭの範囲である。

マトリカインモジュール
マトリカインは、組織再モデリング中の細胞外マトリックスの分解から生じる皮膚中の生物学的に活性な天然に存在する分子である。細胞外マトリックスの役割は、創傷治癒および瘢痕化において広く研究されている（Ｌｏ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ｎａｕｔａ，Ｌｏｎｇａｋｅｒ，＆Ｌｏｒｅｎｚ，２０１２，Ｒｅｖｉｅｗｓ，９６（３），２３７－２４７；Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ．，２０１６，ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＷｏｕｎｄＣａｒｅ，７（２），２９－４５；Ｘｕｅ＆Ｊａｃｋｓｏｎ，２０１５，ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＷｏｕｎｄＣａｒｅ，４（３），１１９－１３６）。マトリカインは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）によって生成することができ、炎症、免疫細胞の走化性、器官発達、創傷治癒、ＥＣＭ合成および血管新生などの様々な生物学的プロセスを同様に調節することができる（Ｂｏｎｎａｎｓ，Ｃｈｏｕ，＆Ｗｅｒｂ，２０１４，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，１５（１２），７８６－８０１；Ｂｕｎｎｅｙ，Ｐ．Ｅ．，Ｚｉｎｋ，Ａ．Ｎ．，Ｈｏｌｍ，Ａ．Ａ．，Ｂｉｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ｃ．Ｊ．，＆Ｋｏｔｚ，２０１７，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ＆Ｂｅｈａｖｉｏｒ，１７６（２０５），１３９－１４８。成長因子およびサイトカインに加えて、マトリカインは、化粧品における皮膚コンディショニングのための活性生物製剤の第３の柱となっている（Ａｌｄａｇ，Ｔｅｉｘｅｉｒａ，＆Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ，２０１６，ＣｏｓｍｅｔｉｃａｎｄＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，９，４１１－４１９）。例えば、市販のマトリカインには、ペプチドＧＨＫ、ＧＥＫＧ、ＫＴＴＫＳおよびそれらのアシル化バージョンが含まれ、これは一般的なＥＣＭ合成またはフィブロネクチンもしくはコラーゲンタンパク質などの特定のＥＣＭタンパク質の合成を刺激することが示されている。しかしながら、様々なＥＣＭタンパク質のより大きな断片を含むより多くのマトリカインが記載されており、創傷治癒においてもある程度研究されている（Ｒｉｃａｒｄ－Ｂｌｕｍ＆Ｓａｌｚａ，２０１４，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２３（７），４５７－４６３）。これらには、アグリカンコアタンパク質、プロテオグリカンリンクタンパク質、線維芽細胞、ラミニン、テネイシン、シンデカン、パールカン、エラスチン、トロポエラスチンおよびコラーゲンＩＶα鎖、コラーゲンＸＩＩＩα鎖、コラーゲンＸＩＩα鎖、コラーゲンＸＸＩＩＩα鎖、コラーゲンＸＩＸα鎖およびコラーゲンＸＸＶα鎖を含む様々なコラーゲン由来の断片が含まれる。コラーゲンタンパク質は、最も豊富なＥＣＭタンパク質の一部であり、生理学的および病理学的プロセスにおけるＥＣＭ状態の中心的な調整因子およびホールマークの両方である。例えば、新生児皮膚および瘢痕化していない創傷治癒皮膚の両方で、コラーゲンＩＩＩ対コラーゲンＩの存在比が高いことが知られているのに対して、老化した皮膚および瘢痕化した創傷の皮膚は、コラーゲンＩＩＩ対コラーゲンＩの存在比が低いことが知られている（Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ．，２０１６，ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＷｏｕｎｄＣａｒｅ，７（２），２９－４５）。さらに、コラーゲンＩＩＩの量の減少は、筋線維芽細胞の分化および線維化を促進することが示されている（Ｖｏｌｋ，Ｗａｎｇ，Ｍａｕｌｄｉｎ，Ｌｉｅｃｈｔｙ，＆Ａｄａｍｓ，２０１１，ＣｅｌｌｓＴｉｓｓｕｅｓＯｒｇａｎｓ，１９４（１），２５－３７）。コラーゲンＩＩＩは、マトリックスメタロプロテアーゼ１、２、３、８、１０、１３、１４、１６よって分解され得る。（Ｓｔｅｒｎｌｉｃｈｔ＆Ｗｅｒｂ，２００１，ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＣｅｌｌａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，４６３－５１６）。マトリックスメタロプロテアーゼ切断モチーフは、様々なＭＭＰについて同定されており、大部分は、おおよそＰＸＸＬ、ＰＸＸＩ、ＰＸＸＶまたはＰＸＸＭモチーフを構成する（Ｅｃｋｈａｒｄｅｔａｌ．，２０１６，ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌｏｇｙ，４９（２０１６），３７－６０）。

本発明は、コラーゲン３型α鎖１（コラーゲン３型α鎖１配列の両末端のＭＭＰ切断部位と一致する）に由来する以下のペプチドがマトリカイン活性を有し、皮膚創傷治癒および化粧品用途に使用することができることを開示する：
ＬＱＧＬＰＧＴＧＧＰＰＧＥＮＧＫＰＧＥＰＧＰＫＧＤＡＧＡＰＧＡＰＧＧＫＧＤＡＧＡＰＧＥＲＧＰＰＧ（配列番号１１）
ＶＫＧＥＳＧＫＰＧＡＮＧＬＳＧＥＲＧＰＰＧＰＱＧ（配列番号１２）

これらのペプチドは、固体ペプチド合成などの化学的手段によって、または組換えコラーゲンタイプ３α１タンパク質をマトリックスメタロプロテアーゼで消化することによって産生することができる。後者の場合、これらの特定の目的のペプチドは、液体クロマトグラフィーまたはキャピラリー電気泳動などの電気泳動によって加水分解物から精製することができる。それにもかかわらず、粗製加水分解物は化粧品にも使用することができる。

さらに、前述のペプチドは、組織送達を増強するためにＮ末端でアシル化され得る：
アシル－ＬＱＧＬＰＧＴＧＧＰＰＧＥＮＧＫＰＧＥＰＧＰＫＧＤＡＧＡＰＧＡＰＧＧＫＧＤＡＧＡＰＧＥＲＧＰＰＧ（配列番号１３）
アシル－ＶＫＧＥＳＧＫＰＧＡＮＧＬＳＧＥＲＧＰＰＧＰＱＧ（配列番号１４）

アシルは、脂肪酸のカルボキシル官能基とペプチドＮ末端のアミノ官能基との間のアミド結合、例えばペプチドＮ末端のミリストイル化を介してペプチドに結合した５～４２個の炭素原子を有する任意の非分枝脂肪酸を指すことができる。

最終化粧品中のこのようなアシル化コラーゲン３型α鎖１由来ペプチドの好ましい濃度は、５０ｐＭ～５００ｎＭの範囲である。

ＥＰＯＲ－ＣＤ１３１ヘテロ受容体アゴニストモジュール
ＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマー受容体のアゴニストは、組織保護剤（Ｌｅｉｓｔ，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０５（５６８１），２３９－２４２）である。この受容体は、エリスロポエチン（ＥＰＯ）受容体およびＣＤ１３１タンパク質（サイトカイン受容体共通サブユニットβもしくは遺伝子名ＣＳＦ２ＲＢの名称でも知られている分化クラスター１３１）を含むヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーとして生じる。しかしながら、この可能性を利用することは困難であることが判明している。天然受容体アゴニストであるエリスロポエチンは、その副作用および他の問題のために治療薬として早期に見送られてきた。さらに、ＥＰＯＲ－ＣＤ１３１アゴニストペプチド－脂質複合体およびコンジュゲートは、血管弛緩剤と併用することで、当初は洗練された代替物を提示していた（Ｂａｄｅｒ，２０１７，ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／００１２８９）。これらの薬剤は、短期間で化粧品製剤に有益であることが証明されたが、長期投与中に有害であることが判明した。これは、主に再生能力の慢性的な過剰刺激に起因する可能性があり、それによってこれらの能力の消耗をもたらす。分子レベルおよび細胞レベルでは、これは、部分的な幹細胞枯渇、エピジェネティック変化、前駆細胞の成熟細胞への分化障害、および幹細胞の「再生刺激」難治性表現型への移行に関連する。結果として、これらの薬剤の使用は、有害な二次的影響を回避するために厳密に制御されなければならない。しかしながら、これは実際には困難である。第１に、これらの薬剤に対する応答性は、集団におけるエフェクターシグナル伝達経路の複数のタンパク質の遺伝子型可変性の根底にあるものである。第２に、望ましくない長期効果への寄与および発現は、既存の組織状態に依存する。第３に、自己投与／消費の個々の遵守および減少効果に対する潜在的な代償反応が大きな問題を提示する。製品試験研究では、一部の試験個体は、より多くの製品を適用するかまたはより高い適用頻度で適用することによって製品性能の低下を補償しようとした。しかしながら、これは却って低下を加速させた。最終的に、最初に製品に満足した試験個体の５８．４％が、９ヶ月以内の個々の時点で有益な効果の低下を経験した。さらに、試験個体の１３．３％が有害作用、すなわち試験開始前と比較して皮膚状態の明らかな悪化すら報告した。

本発明は、ＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロダイマー／ヘテロオリゴマー受容体に対するアゴニストとして作用し、同じクラスの以前の誘発剤で観察された望ましくない長期効果を誘発しない新規な誘発剤を開示する。これは、以前の薬剤に対する２つの改善に基づく。

第１の改善は、ｉｎｓｉｔｕで、すなわち皮膚に適用されたときに活性薬剤を迅速に不活性化する高速不活性化メカニズムの組み込みである。これは、新しい製品が適用されたときに誘発剤活性の短いスパイクをもたらし、すぐに崩壊する。この活性の時間的制限は、誘発剤の即時性能のほんのわずかな低下をもたらすだけでなく、望ましくない長期効果の有意な減少ももたらす。

そのような分解メカニズムを実施するが、製品の貯蔵性を保持するためには、一旦薬剤が適用されたら、分解が開始または劇的に加速しなければならない。通常、適用時点は、貯蔵容器を出る時点と一致する。これは、貯蔵容器中に存在する状態と比較して、例えば皮膚上の適用点の間の物理的、化学的または生物学的状態の差と組み合わせて利用することができる。これは、以下の戦略に従って利用することができる：

本発明は、適切な様式で空気からの分子状酸素を含む環境酸化剤による酸化に感受性であり、それによって適用時に化合物の適切な迅速な酸化誘導不活性化を伴う新規ＥＰＯＲ／ＣＤ１３１受容体アゴニストを開示する。貯蔵容器中に酸化剤がないため、酸化によって誘発される不活性化が貯蔵容器中で起こらない。

このペプチドの配列は以下のとおりである：
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号５）

このペプチドは、そのＮ末端でアシル化されて組織透過性を増加させることができ、以下の構造を生じさせる：
アシル－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号６）

アシルは、脂肪酸のカルボキシル官能基とペプチドＮ末端のアミノ官能基との間のアミド結合、例えばペプチドＮ末端のミリストイル化を介してペプチドに結合した５～４２個の炭素原子を有する任意の非分枝脂肪酸を指すことができる。空気酸素との生成物接触およびその後の抗酸化剤の枯渇の際に、ペプチドメチオニンはメチオニンスルホキシドに酸化され、それによってペプチドを不活性化する。

第２の改善は、同様の分解を受けるアンタゴニストの組み込みである。アンタゴニストがない場合、より多くの製品の適用は、より活性な薬剤の適用を伴い、それによって、より強力でより長い刺激が誘発される。アンタゴニストがある場合、より多くの製品の適用は、一定の比でより活性な薬剤（すなわち、アゴニスト）とより多くのアンタゴニストとの両方の適用を伴う。結果として、受容体活性化およびその下流のシグナル伝達を抑制し、適用される製品の量にあまり依存しないようにすることができる。アゴニストおよびアンタゴニストの絶対量ではなく、それらの受容体親和性とそれらの受容体を活性化または阻害する能力とがそれぞれ、全受容体活性化強度を支配する。それにもかかわらず、アンタゴニストは、アゴニストが行うのと同様の不活性化を受ける必要がある。そうでなければ、アゴニストの不活性化時にアンタゴニストが優勢になるであろう。これは、基底の内因性シグナル伝達も阻害するので望ましくない。さらに、アンタゴニストは、反復製品適用を通して蓄積し、それによって、アゴニストに対する活性アンタゴニストの比（すなわち、この場合には不均衡）をさらに増加させる。

適切なアンタゴニスト化合物の配列は以下のとおりである：
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）

このペプチドは、そのＮ末端でアシル化されて組織透過性を増加させることができ、以下の構造を生じさせる：
アシル－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）

最終化粧品中のそのようなＥＰＯＲ／ＣＤ１３１アゴニストおよびアンタゴニストペプチドの好ましい濃度は、３０ｐＭ～２５０ｎＭの範囲である。

ＣＤ２６／ＤＰＰ４阻害による線維性ＥＣＭ再モデリングの制限
線維化促進ＥＰＦ系統はＣＤ２６発現によって特徴付けられ、ＣＤ２６の阻害は損傷時の瘢痕化を制限し得る（Ｒｉｎｋｅｖｉｃｈｅｔａｌ．，２０１５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４８（６２３２））。細胞レベルおよび分子レベルでは、これは、線維症関連ＥＣＭ変化の減少および筋線維芽細胞分化の減少によって特徴付けられる。しかしながら、ＣＤ２６阻害による天然の瘢痕化プロセスを損なう結果として、創傷を閉じて治癒するのに時間がかかる。これまでＣＤ２６プロテアーゼの基質としてゆっくり加水分解され得るジプロチンＡなどの低力価のＣＤ２６阻害剤が使用されてきた（Ｒｉｎｋｅｖｉｃｈｅｔａｌ．，２０１５）。高効力の経口的に利用可能な小分子ＣＤ２６／Ｄｐｐ４阻害剤がグリプチンとして存在するが、グリプチンは重度の有害作用に関連する（Ａｔｔａｗａｙ，Ｍｅｒｓｆｅｌｄｅｒ，Ｖａｉｓｈｎａｖ，＆Ｂａｋｅｒ，２０１４，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌＣａｓｅＲｅｐｏｒｔｓ，８（１），２４－２８；Ｆｉｓｍａｎ＆Ｔｅｎｅｎｂａｕｍ，２０１５，Ｓｅｐ２９，ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉａｂｅｔｏｌｏｇｙ．ＢｉｏＭｅｄＣｅｎｔｒａｌＬｔｄ．；Ｎａｋａｔａｎｉｅｔａｌ．，２０１２，ＤｉａｂｅｔｅｓＴｈｅｒａｐｙ，３（１），１－５）。

本発明は、化粧品用途に適した新規なＣＤ２６／Ｄｐｐ４阻害剤を開示する。

これらには以下のものが含まれる：
ＥＩＨＱＥＥＰＩＧＧＱＳＧＳＧＧ－ＫＰＩ（配列番号１５）

ＧとＫとの間のダッシュは、Ｇのカルボキシ官能基とリシンのε－アミノ官能基との間のイソペプチド結合を示す。したがって、リシンは遊離α－アミノ機能を有する。

さらに、ペプチドは組織送達を増強するためにアシル化され得る：
ＥＩＨＱＥＥＰＩＧＧＫ［アシル］ＳＧＳＧＧ－ＫＰＩ（配列番号１６）

Ｋ［アシル］は、リシンのε－アミノ官能基と脂肪酸のカルボキシ官能基との間のアミド結合を表す。アシルは、５～４２個の炭素原子を有する任意の非分枝脂肪酸、例えばミリスチン酸を指すことができる。

最終化粧品中のそのようなＣＤ２６／Ｄｐｐ４阻害剤ペプチドの好ましい濃度は、５００ｎＭ～１ｍＭの範囲である。

トリガーファクター複合体へのシグナル伝達モジュールの組み合わせ
本発明によって開示される単一の皮膚再生促進モジュールまたはその特定の分子は、皮膚状態の改善を目的として化粧品に単独で使用することができる。したがって、これらのモジュールは、互いに独立して利益を提供することができる。それにもかかわらず、これらのモジュールを１つの製品に組み合わせ、それによって皮膚状態に対する相乗的なプラスの効果を引き出すことが望ましい。

本発明に開示される分子と従来の化粧品成分との組み合わせ
化粧品製剤に、本発明による分子の記載された効果を拡大または増強するために、更なるアジュバントおよび添加剤を添加することができる。そのような薬剤は、例えば、ピクノジェノール、コエンザイムＱ１０、人参抽出物、ケルセチン抽出物、米ぬか抽出物、大豆抽出物、藻類抽出物、タンニン、茶抽出物、特に緑茶抽出物、マスタード抽出物、カイエンペッパー由来のアルカロイド抽出物、オメガ－３およびオメガ－６脂肪酸、ペプチド、アミノ酸、ビタミン、特にビタミンＥアセテート、スフィンゴ脂質、セラミド、成長因子、サイトカイン、マトリカイン、血管弛緩薬である。

化粧品製剤および分子送達
この発明の製剤は、任意の化粧品製剤、例えば任意のクリーム、ローション、セラムなどと組み合わせることができる。

有効性試験データ
本明細書に開示される発明は、化粧品に使用することができる。

ヒト皮膚の状況における本発明の有効性を評価するために、１ヶ月間の制御された化粧品の皮膚改善研究を行った。このアッセイでは、本発明の成分を含有する化粧品製剤の適用時の化粧品の顔面皮膚外観を監視した。その目的のために、市販の最先端の顔面皮膚の画像化およびデータ分析プラットフォーム、ＣａｎｆｉｅｌｄＢｉｏＶｉｓｉａ（商標）を利用した（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｆｉｅｌｄｓｃｉ．ｃｏｍ／ｉｍａｇｉｎｇ－ｓｙｓｔｅｍｓ／ｖｉｓｉａ－ｃｏｍｐｌｅｘｉｏｎ－ａｎａｌｙｓｉｓ／）。このプラットフォームは、（ｉ）高度に標準化された、（ｉｉ）高度に再現性のある、（ｉｉｉ）定量的な、ｉｖ）非侵襲的な、および（ｖｉ）対象またはテスターの無バイアス皮膚質分析の可能性を提供する。これは、異なる角度からの顔のいくつかの写真を記録し、吸収／反射スペクトルを記録する。これらのデータを使用して、プラットフォームは、「シミ」、「シワ」、「毛穴」、「滑らかさ」、「ＵＶシミ」、および「褐色シミ」を含む皮膚の質のいくつかのパラメータを定量化する。内蔵ソフトウェアは、皮膚特徴記述の大規模なデータベースとの比較によってすべてのパラメータを標準化し、対象間の比較を可能にするためにパーセント値を返す。健康な対象は、トリガー因子複合体を含むかまたは含まない標準的な化粧品基剤製剤を盲検様式で受け、すなわち、対象は、受けた化粧品クリームの同一性を知らなかった。化粧品基剤製剤は、水、カプリル酸トリグリセリド、ペンチレングリコール、プロピレングリコール、水素化ホスファチジルコリン、セラミド、酢酸トコフェリル、アスコルビン酸ナトリウム、血管弛緩剤、マトリカイン、アミノ酸、エタノールおよびグリセリンを含有していた。対象に、１日に２回および適用量でクリームを適用するように指示した。対象の皮膚の質を、適用開始前および１ヶ月後（３０±３日）に評価した。対照として、季節的およびライフスタイルの変化に関連する皮膚の質の変化を記載するために、手の外面の質も監視した。手の外面の皮膚の質は、分析に含まれるいずれの対象においても統計的に有意に変化せず、それによって、アッセイタイムラインが、ライフスタイルまたは季節に関連する全体的な皮膚の質の変化と相関しなかったことが示された。この研究は、「データ１：短期研究」の項に記載されている結果をもたらした。さらに、トリガー因子複合体を含有する化粧品の顔面皮膚に対する長期効果を、製品の投与量および適用頻度を試験対象が商業的現実を反映するように自由に選択した２つの長期９ヶ月の研究で研究した。化粧品基剤製剤は１ヶ月の研究で使用したものと同一であった。研究の参加者は、一定の間隔で研究中の任意の時点および変化に気付いたときに、皮膚の状態、製品の効果、および副作用の主観的印象を報告した。特に、参加者は、化粧品の性能が研究の過程でどのように変化しなかったかまたは変化したかについての印象を報告した。２つの研究は、使用される正確なトリガー因子複合体が異なっており、これは、以下の「データ２：長期研究１」および「データ３：長期研究２」の項の研究結果と共に詳述されている。

制御された１ヶ月の研究で得られた４つのトリガー因子複合体（ＴＦＣ８－Ａ、ＴＦＣ８－Ｂ、ＴＦＣ８－Ｃ、ＴＦＣ８－Ｄ）の化粧品性能情報を開示する。これらのトリガー因子複合体に含まれる分子を表１～４に列挙する。ＴＦＣ８－ＡおよびＴＦＣ８－Ｃは、幹細胞恒常性モジュールの分子の点でのみ異なる。同様に、ＴＦＣ８－ＢおよびＴＦＣ８－Ｄは、幹細胞恒常性モジュールの分子の点でのみ異なる。

実施例１：以下のトリガー因子複合体１（ＴＦＣ８－Ａ）を構成した：

実施例２：以下のトリガー因子複合体２（ＴＦＣ８－Ｂ）を構成した：

実施例３：以下のトリガー因子複合体３（ＴＦＣ８Ｃ）を構成した：

実施例４：以下のトリガー因子複合体４（ＴＦＣ８Ｄ）を構成した：

研究結果（図１および図２に明記）：

短期研究（図１）
上記のように特定されたトリガー因子複合体ＴＦＣ８－Ａ、ＴＦＣ８－Ｂ、ＴＦＣ８－ＣおよびＴＦＣ８－Ｄを、制御された１ヶ月の化粧品投与研究に適用した。条件および実施は、上記の「有効性試験データ」の項に記載されている。

その制御された１ヶ月の研究の結果が図１に示されており、これは、ここではシミ（１）、シワ（２）、ＵＶシミ（３）、褐色シミ（４）、毛穴（５）、赤色血管新生（６）、および滑らかさ（７）である７つのタイプの皮膚外観（ｘ軸）に関連する正規化された「Ｖｉｓｉａ」スコア（ｙ軸）の変化率を示す。皮膚の外観は、特定された４つすべてのトリガー複合体について示されている（「Ｖｉｓｉａ」スコア試験は、上記の有効性試験データの項に記載されている）。変化は、値の正規化された差（適用１ヶ月後の正規化された値－適用開始前の正規化された値）に関する。バーは平均正規化された変化を示し、エラーバーは標準偏差を示す。すべての変化は、０と統計的に有意に異なる（ｐ値＜５％）。さらに、すべての変化は、トリガー因子複合体なしで賦形剤対照化粧品基剤製剤を受け取った対象で観察された変化と統計的に有意に異なる（ｐ値＜５％）。トリガー因子複合体を含有するすべての化粧品製剤は、３０±３日間の試験期間にわたって、ＣａｎｆｉｅｌｄＢｉｏＶｉｓｉａ装置によって報告された皮膚パラメータによって測定される皮膚外観の改善をもたらす。

長期研究
研究１：上記の「実施例」の項で特定したトリガー因子複合体ＴＦＣ８－Ａ、ＴＦＣ８－Ｂ、ＴＦＣ８－Ｃ、およびＴＦＣ８－Ｄも、９ヶ月の化粧品投与研究に適用した。条件および実施は、上記の「有効性試験データ」の項に記載されている。前述のトリガー因子複合体はまた、広範な顧客製品適用性を示す対象を試験することによって自由に選択された製品投与量および適用頻度で、最初の９ヶ月の長期投与試験においても良好に機能した。４つすべてのトリガー因子複合体は、幹細胞再生過剰刺激とその後の枯渇の低いリスクとに関連していた。全体として、試験対象の７．２％のみが製品性能の低下を報告し、試験対象の１．６％のみが試験期間内に主観的に知覚される皮膚状態の明らかな悪化を報告した。重大な有害作用は報告されなかった。

研究２（図２）：皮膚状態に及ぼす長期製品投与の効果に対するトリガー因子複合体の幹細胞恒常性モジュールの分子の役割をさらに調べるために、別の９ヶ月間の長期研究を行った。条件および実施は、上記の「有効性試験データ」の項に記載されている。比較可能性を確実にし、幹細胞恒常性モジュール（配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４）の４つのペプチドを特異的に調べるために、これらの４つのペプチドを、上記の「実施例」の項においてトリガー因子複合体ＴＦＣ８－Ｄによって特定される他のモジュールの同じ分子セットと併せて試験した。従来どおり、配列番号３および配列番号４のペプチド誘導体における担体は、３５ｋＤａの分子量を有するポリエチレングリコールであった。この第２の長期研究は、幹細胞恒常性モジュール分子が、研究の過程にわたって製品性能の低下と異なる関連性を有していることが明らかになった。４つのペプチドのそれぞれに関連する報告された製品性能低下の頻度を図２に示す。エラーバーは、観察された頻度の９５％信頼区間を表す。全体として、配列番号４にも含まれる配列番号２のアミノ酸配列は、配列番号３にも含まれる配列番号１の配列よりも研究期間中の製品性能の低下とより強く関連していた。これらの差は統計学的に有意であった（ｐ値＜５％）。第２に、ポリエチレングリコール担体は、両方のアミノ酸配列の場合に製品性能低下の頻度を適度に減少させた。したがって、この頻度は、配列番号１の場合よりも配列番号３の場合の方が低く、配列番号２の場合よりも配列番号４の場合の方が低かった。

Claims

皮膚の再生または外観を誘発または増強または改善する少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含む、皮膚への局所投与用の化粧品製剤または組成物であって、前記少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、３つの群：
（Ａ）（ｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬＬ（配列番号１）
（ｉｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号２）
（ｉｉｉ）Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号３）
（ｉｖ）Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号４）
の配列／式を含むかまたは有するＷｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路を刺激するペプチドおよびペプチド誘導体であり、Ｚ１は、前記ペプチドのＮ末端に共有結合した、前記ペプチドの組織透過および／または基底膜浸透を減少させる、担体部分である；
（Ｂ）前記組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のアゴニストであるペプチドおよびペプチド誘導体であって、前記ペプチドまたはペプチド誘導体は、配列／式：
（ｖ）ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号５）
（ｖｉ）Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号６）
を含むかまたは有し、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に共有結合した分枝または非分枝脂肪酸のアシル基である；
（Ｃ）配列／式：
（ｖｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ（配列番号８）
（ｉｘ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－Ｚ３（配列番号９）
を含むかまたは有するヒトＴＧＦ－β３変異体であるペプチドおよびペプチド誘導体であり、ＸはＫまたはＥであり、Ｚ３はＣ末端に結合したグリコポリマーである；
のうちの少なくとも１つから選択される、化粧品製剤または組成物。
群（Ａ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号１、２、３または４の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ１は、８～６０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリエチレングリコールである、請求項２の化粧品製剤または組成物。
群（Ｂ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
前記少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号５または６の配列／式を含むかもしくは有し、Ｚ２は、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝脂肪酸である、請求項４の化粧品製剤または組成物。
適切な量の、組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストをさらに含み、前記ペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号５または６によって示されるアゴニストの生物学的活性を調節または減衰または阻害する、請求項４または５の化粧品製剤または組成物。
前記ペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストは、配列／式：
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）または
Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）
を含むかまたは有し、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝脂肪酸のアシル基である、請求項６の化粧品製剤または組成物。
配列番号５または６によって示される前記ペプチド／ペプチド誘導体ベースのアゴニストは、適用中に部分的または完全に不活性化される、請求項４から７までのいずれか１項の化粧品製剤または組成物。
配列番号１０または１７によって示される前記ペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストは、適用中に部分的または完全に不活性化される、請求項６または７の化粧品製剤または組成物。
前記ペプチド／ペプチド誘導体ベースのアゴニストまたはアンタゴニストの前記不活性化は、前記ペプチド／ペプチド誘導体アゴニストまたはアンタゴニストの配列内のメチオニン残基の空気酸化によって誘導される、請求項８または９の化粧品製剤または組成物。
群（Ｃ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体を含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号７、８または９の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ３は、トレハロースまたはトレハロース誘導体の部分を含有する少なくとも１５個のモノマー単位を含むオリゴマーまたはマルチマーまたはポリマーであるかまたは含む、請求項１１の化粧品製剤または組成物。
群（Ａ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体と、群（Ｂ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体とを含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
（ａ）群（Ａ）の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号１、２、３または４の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ１は、８～６０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリエチレングリコールであり、（ｂ）群（Ｂ）の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号５または６の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ２は、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝脂肪酸である、請求項１３の化粧品製剤または組成物。
適切な量の、組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストをさらに含み、前記ペプチド／ペプチド誘導体は、配列番号５または６によって示されるアゴニストの生物学的活性を調節または減衰または阻害する、請求項１３または１４の化粧品製剤または組成物。
前記アンタゴニストは、配列／式：
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）または
Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）
を含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体であり、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基である、
請求項１５の化粧品製剤または組成物。
群（Ａ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体と、群（Ｂ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体と、群（Ｃ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体とを含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
（ａ）群（Ａ）の前記少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号１、２、３または４の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ１は、８～６０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリエチレングリコールであり、（ｂ）群（Ｂ）の少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号５または６の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ２は、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝脂肪酸であり、（ｃ）群（Ｃ）の前記少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号７、８または９を含むかまたは有し、Ｚ３は、トレハロースまたはトレハロース誘導体の部分を含有する少なくとも１５個のモノマー単位を含むオリゴマーまたはマルチマーまたはポリマーであるかまたは含む、請求項１７の化粧品製剤または組成物。
適切な量の、組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストをさらに含み、前記ペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号５または６によって示されるアゴニストの生物学的活性を調節または減衰または阻害する、請求項１７または１８の化粧品製剤または組成物。
前記アンタゴニストは、配列／式：
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）または
Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）
を含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体であり、Ｚ２は、前記Ｎ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基である、請求項１９の化粧品製剤または組成物。
群（Ａ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体と、群（Ｃ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体とを含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
（ａ）群（Ａ）の少なくとも１つのペプチド誘導体は、配列番号３または４の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ１は、８～６０ｋＤａの範囲の分子サイズを有するポリエチレングリコールであり、（ｂ）群（Ｃ）の少なくとも１つのペプチド誘導体は、配列番号７、８または９の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ３は、トレハロースまたはトレハロース誘導体の部分を含有する少なくとも１５個のモノマー単位を含むオリゴマーまたはマルチマーまたはポリマーであるかまたは含む、請求項２１の化粧品製剤または組成物。
群（Ｂ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体と、群（Ｃ）から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体とを含む、請求項１の化粧品製剤または組成物。
（ａ）群（Ｂ）の少なくとも１つのペプチド誘導体は、配列番号５または６の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ２は、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝脂肪酸であり、（ｂ）群（Ｃ）の前記少なくとも１つのペプチド誘導体は、配列番号７、８または９の配列／式を含むかまたは有し、Ｚ３は、トレハロースまたはトレハロース誘導体の部分を含有する少なくとも１５個のモノマー単位を含むオリゴマーまたはマルチマーまたはポリマーであるかまたは含む、請求項２３の化粧品製剤または組成物。
適切な量の、組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のペプチド／ペプチド誘導体ベースのアンタゴニストをさらに含み、前記ペプチドまたはペプチド誘導体は、配列番号５または６によって示されるアゴニストの生物学的活性を調節または減衰または阻害する、請求項２３または２４の化粧品製剤または組成物。
前記アンタゴニストは、配列／式：
ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）または
Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）
を含むかまたは有するペプチドまたはペプチド誘導体であり、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基である、
請求項２５の化粧品製剤または組成物。
コラーゲン３型由来のマトリカイン活性を誘発する少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体をさらに含み、
ＬＱＧＬＰＧＴＧＧＰＰＧＥＮＧＫＰＧＥＰＧＰＫＧＤＡＧＡＰＧＡＰＧＧＫＧＤＡＧＡＰＧＥＲＧＰＰＧ（配列番号１１）
ＶＫＧＥＳＧＫＰＧＡＮＧＬＳＧＥＲＧＰＰＧＰＱＧ（配列番号１２）
Ｚ２－ＬＱＧＬＰＧＴＧＧＰＰＧＥＮＧＫＰＧＥＰＧＰＫＧＤＡＧＡＰＧＡＰＧＧＫＧＤＡＧＡＰＧＥＲＧＰＰＧ（配列番号１３）
Ｚ２－ＶＫＧＥＳＧＫＰＧＡＮＧＬＳＧＥＲＧＰＰＧＰＱＧ（配列番号１４）
からなる群から選択される配列／式のうちの１つを含むかまたは有し、Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基である、請求項１から２６までのいずれか１項の化粧品製剤または組成物。
ＣＤ２６／Ｄｐｐ４阻害を誘発し、
ＥＩＨＱＥＥＰＩＧＧＱＳＧＳＧＧ－ＫＰＩ（配列番号１５）および
ＥＩＨＱＥＥＰＩＧＧＫ［Ｚ２］ＳＧＳＧＧ－ＫＰＩ（配列番号１６）
からなる群から選択される配列／式のうちの１つを含むかまたは有する少なくとも１つのペプチドまたはペプチド誘導体をさらに含み、Ｇ－Ｋは、Ｇのカルボキシ官能基とＫのε－アミノ官能基との間のイソペプチド結合を表し、Ｚ２は、５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基を表し、Ｋ［Ｚ２］は、前記Ｋのε－アミノ官能基と前記脂肪酸Ｚ２のカルボキシ官能基との間のアミド結合を表す、請求項１から２７までのいずれか１項の化粧品製剤または組成物。
前記ペプチドまたはペプチド誘導体は、組織送達を改善または増強するために、リポソームまたはセラミド構造にカプセル化または結合される、請求項１から２８までのいずれか１項の化粧品製剤または組成物。
（ｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号１）
（ｉｉ）ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号２）
（ｉｉｉ）Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＥＹＧＫＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号３）
（ｉｖ）Ｚ１－ＬＮＰＳＥＣＰＫＴＶＬＧＡＳＴＳＴＬＤＡＳＹＳＴＡＥＡＥＮＨＶＲＬ（配列番号４）：
からなる群から選択される配列／式を有するかまたは含むＷｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路を刺激し、Ｚ１は、前記ペプチドのＮ末端に共有結合した、前記ペプチドの組織透過および／または基底膜浸透を減少させる担体部分である、単離されたペプチドまたはペプチド誘導体。
Ｚ１は８～６０ｋＤａの範囲の分子サイズを有するポリエチレングリコールである、請求項３０の単離されたペプチドまたはペプチド誘導体。
組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のアゴニストとして作用する単離されたペプチドまたはペプチド誘導体であって、
（ｉ）ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号５）
（ｉｉ）Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＲＥＷＭＧＬＰＣＱＤＱ（配列番号６）：
からなる群から選択される配列／式を有するかまたは含み、
Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の分枝または非分枝鎖脂肪酸のアシル基である、単離されたペプチドまたはペプチド誘導体。
組織保護ヘテロダイマーまたはヘテロオリゴマーＥＰＯＲ／ＣＤ１３１（エリスロポエチン受容体／分化クラスター１３１）受容体のアンタゴニストとして作用する単離されたペプチドまたはペプチド誘導体であって、
（ｉ）Ｚ２－ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１０）、
（ｉｉ）ＧＧＧＧＥＴＴＮＭＷＡＨＤＷＭＧＬＰＲＡＤＱ（配列番号１７）：
からなる群から選択される配列／式を有するかまたは含み、
Ｚ２は、前記ペプチドのＮ末端に結合した、５～４２個の炭素原子の非分枝または分枝脂肪酸のアシル基である、単離されたペプチドまたはペプチド誘導体。
（ｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号７）
（ｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ（配列番号８）
（ｉｉｉ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－Ｚ３（配列番号９）
（ｉｖ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－［４，６－Ｏ－（４－ビニルベンジリデン）－α，α－Ｄ－トレハロース］ｎ（配列番号１８）、
（ｖ）ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＫＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＨＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＥＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳＬＰＸＴＧＧＧ－［Ｑ－６－デオキシ－トレハロース］ｎ（配列番号１９）：
からなる群から選択される配列／式を有するヒトＴＧＦ－β３の生物学的活性を誘発し、
ＸはＫまたはＥであり、Ｚ３はＣ末端に結合したグリコポリマーであり、ｎは１５～５０の整数、好ましくは１５～３０の整数である、単離されたペプチドまたはペプチド誘導体。
皮膚の修復、皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、シワの減少、皮膚の老化防止、および乾燥した、くすんだ、および破裂しやすい皮膚の回避および改善を含む、皮膚の局所化粧品処置での使用のための、任意選択的にリポソームまたはセラミド構造にカプセル化または結合された、請求項３０から３４までのいずれか１項の単離されたペプチドまたはペプチド誘導体。