JP2023510270A - 進行性骨化性線維異形成症の治療 - Google Patents

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Abstract

ヒト対象において進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を治療するための方法が提供される。かかる方法は、ＦＯＰを有する対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニスト、例えば、アクチビンＡに対する抗体を投与することを伴う。本開示は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を治療する方法であって、ＦＯＰを有する対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含む、方法を提供する。特に、本出願の発明者らは、驚くべきことに、ヒトにおいて第ＩＩ相臨床試験を実施した後にのみ、アクチビンＡアンタゴニストによってＦＯＰ対象を治療すると、新しい異所性骨化（ＨＯ）骨成長の進行を劇的に低減および／または予防し、病変成長および石灰化の平均速度を低減させることを発見した。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年１月８日に出願された米国仮出願第６２／９５８，４４８号、２０２０年９月１０日に出願された米国仮出願第６３／０７６，６９１号、および２０２０年９月２２日に出願された米国仮出願第６３／０８１，４２８号に対する優先権を主張し、それらの各々の全体の内容は、それらの全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）は、ミュンヒマイアー病（Ｍｕｎｃｈｍｅｙｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）としても知られており、骨格筋および関連する結合組織の早期発症型、反復発作性の進行性骨化を特徴とする常染色体優性障害である。ＦＯＰ対象において、正常な骨格の外側の軟組織において骨が形成され、これは異所性骨化（ＨＯ）として知られるプロセスであり、これが二次骨格の発達を引き起こし、患者の移動能力を徐々に制限する可能性がある。新しい骨形成の除去は、効果的ではないことが示されており、さらなる新しい骨成長の進行を引き起こす。
ＦＯＰは、ＡＣＶＲ１（ＡＬＫ２）の細胞内ドメインの変異によって引き起こされ、大半のアルギニン２０６がヒスチジンに変化する（Ｒ２０６Ｈ）（Ｐｉｇｎｏｌｏ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊ．Ｒａｒｅ Ｄｉｓ．６：８０）。ＡＣＶＲ１は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）のＩ型受容体である。Ｒ２０６Ｈ変異は、特に、活性化に対する受容体の感度を高め、サイレンシングに対する抵抗性をさらに高めると考えられている。
特定の種類の薬物は、フレアアップ（ｆｌａｒｅ－ｕｐ）の際にＦＯＰに関連する疼痛および腫れを緩和するために使用されてきたが、ＦＯＰに対する有効な医学的治療は現時点で知られていない。
Ｐｉｇｎｏｌｏ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊ．Ｒａｒｅ Ｄｉｓ．６：８０
本開示は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を治療する方法であって、ＦＯＰを有する対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含む、方法を提供する。特に、本出願の発明者らは、驚くべきことに、ヒトにおいて第ＩＩ相臨床試験を実施した後にのみ、アクチビンＡアンタゴニストによってＦＯＰ対象を治療すると、新しい異所性骨化（ＨＯ）骨成長の進行を劇的に低減および／または予防し、病変成長および石灰化の平均速度を低減させることを発見した。
一態様では、本開示は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を治療する方法であって、本方法が、ＦＯＰを有するヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによってＦＯＰを治療する、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐ、またはＡ１と称される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体との結合と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐ、またはＡ１と称される抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、インタクト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトカッパＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、またはＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメイン－Ｆｃ融合タンパク質との併用療法で投与される。
本開示はさらに、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を治療する方法で使用するためのアクチビンＡのアンタゴニストであって、本方法が、ＦＯＰを有する対象に、治療有効量のアクチビンＡのアンタゴニストを投与することを含む、アンタゴニストを提供する。任意選択的に、アクチビンＡアンタゴニストは、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片である。任意選択的に、本開示は、ＦＯＰを治療するための医薬の製造における、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片の使用を提供する。任意選択的に、抗体は、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。任意選択的に、抗体は、インタクト抗体である。任意選択的に、抗体は、ヒトカッパＩｇＧ１抗体である。任意選択的に、抗体は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、またはＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメイン－Ｆｃ融合タンパク質との併用療法で投与される。
一態様では、本開示は、ＦＯＰを有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を減少させる方法であって、本方法が、ヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによってヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を減少させる、方法を提供する。
一実施形態では、新しい異所性骨化病変の形成は、ヒト対象において予防される。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも５％～９０％、少なくとも１０％～９０％、少なくとも２０％～９０％、少なくとも３０％～９０％、少なくとも４０％～９０％、少なくとも５０％～９０％、少なくとも６０％～９０％、少なくとも７０％～９０％、少なくとも８０％～９０％、少なくとも５％～８０％、少なくとも５％～７０％、少なくとも５％～６０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性（ＴＬＡ）の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも５％～８０％、少なくとも１０％～８０％、少なくとも２０％～８０％、少なくとも３０％～８０％、少なくとも４０％～８０％、少なくとも５０％～８０％、少なくとも６０％～８０％、少なくとも７０％～８０％、少なくとも５％～７０％、少なくとも５％～６０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２倍、０．５倍、１倍、１．５倍、２倍、３倍、０．２～３倍、０．５～３倍、１～３倍、１．５～３倍、２～３倍、２．５～３倍、０．２～２．５倍、０．２～２倍、０．２～１．５倍、０．２～１倍、または０．２～０．５倍の減少を示す。
一実施形態では、対照は、アクチビンＡアンタゴニストを投与されていないＦＯＰを有するヒト対象の集団から集められた平均測定値または値である。
一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストは、対照と比較して、ヒト対象における痛みのあるフレアアップの発生を低減する。
一実施形態では、新しい異所性骨化病変は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、またはそれらの組み合わせによって分析される。一実施形態では、ＰＥＴスキャン分析は、ヒト対象への放射標識１８Ｆフッ化ナトリウム（１８Ｆ－ＮａＦ）の投与によって行われる。
一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストは、ヒト対象に少なくとも８週間投与される。
一実施形態では、本方法は、新しい異所性骨化病変の形成を減少させることから利益を受け得るＦＯＰを有する対象を選択することをさらに含む。一実施形態では、新しい異所性骨化病変の形成を減少させることから利益を受け得る対象は、もうすぐ手術を受けようとしている。
一実施形態では、ヒト対象は、もうすぐＦＯＰの療法的治療を受けようとしている。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、ヒト対象におけるいずれの既存の病変の数、体積、またはサイズも減少させない。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、タンパク質または小分子である。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片である。一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体、またはその抗原結合断片である。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、ヒトカッパＩｇＧ１抗体である。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、以下の６個のＣＤＲ配列：（ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ１、（ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ２、（ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ３、（ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ１、（ｅ）配列ＧＡＳに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、以下の６個のＣＤＲ配列：（ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦを有するＨＣＤＲ１、（ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴを有するＨＣＤＲ２、（ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩを有するＨＣＤＲ３、（ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹを有するＬＣＤＲ１、（ｅ）配列ＧＡＳを有するＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴを有するＬＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１と少なくとも９５％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９５％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１を含む重鎖可変領域と、配列番号５を含む軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２５を含む重鎖と、配列番号２６を含む軽鎖と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、以下の６個のＣＤＲ配列：（ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦを有するＨＣＤＲ１、（ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴを有するＨＣＤＲ２、（ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩを有するＨＣＤＲ３、（ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹを有するＬＣＤＲ１、（ｅ）配列ＧＡＳを有するＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴを有するＬＣＤＲ３を含む抗体との結合と競合する。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、第２の療法と組み合わせて投与される。
別の態様では、本開示は、ＦＯＰを有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を予防する方法であって、本方法が、ヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによってヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を予防する、方法を提供する。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも５％～９０％、少なくとも１０％～９０％、少なくとも２０％～９０％、少なくとも３０％～９０％、少なくとも４０％～９０％、少なくとも５０％～９０％、少なくとも６０％～９０％、少なくとも７０％～９０％、少なくとも８０％～９０％、少なくとも５％～８０％、少なくとも５％～７０％、少なくとも５％～６０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性（ＴＬＡ）の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも５％～８０％、少なくとも１０％～８０％、少なくとも２０％～８０％、少なくとも３０％～８０％、少なくとも４０％～８０％、少なくとも５０％～８０％、少なくとも６０％～８０％、少なくとも７０％～８０％、少なくとも５％～７０％、少なくとも５％～６０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２倍、０．５倍、１倍、１．５倍、２倍、３倍、０．２～３倍、０．５～３倍、１～３倍、１．５～３倍、２～３倍、２．５～３倍、０．２～２．５倍、０．２～２倍、０．２～１．５倍、０．２～１倍、または０．２～０．５倍の減少を示す。
一実施形態では、対照は、アクチビンＡアンタゴニストを投与されていないＦＯＰを有するヒト対象の集団から集められた平均測定値または値である。
一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストは、対照と比較して、ヒト対象における痛みのあるフレアアップの発生を低減する。
一実施形態では、新しい異所性骨化病変は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、またはそれらの組み合わせによって分析される。一実施形態では、ＰＥＴスキャン分析は、ヒト対象への放射標識１８Ｆフッ化ナトリウム（１８Ｆ－ＮａＦ）の投与によって行われる。
一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストは、ヒト対象に少なくとも８週間投与される。
一実施形態では、本方法は、新しい異所性骨化病変の形成を減少させることから利益を受け得るＦＯＰを有する対象を選択することをさらに含む。一実施形態では、新しい異所性骨化病変の形成を減少させることから利益を受け得る対象は、もうすぐ手術を受けようとしている。
一実施形態では、ヒト対象は、もうすぐＦＯＰの療法的治療を受けようとしている。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、ヒト対象におけるいずれの既存の病変の数、体積、またはサイズも減少させない。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、タンパク質または小分子である。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片である。一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体、またはその抗原結合断片である。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、ヒトカッパＩｇＧ１抗体である。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、以下の６個のＣＤＲ配列：（ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ１、（ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ２、（ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ３、（ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ１、（ｅ）配列ＧＡＳに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、以下の６個のＣＤＲ配列：（ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦを有するＨＣＤＲ１、（ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴを有するＨＣＤＲ２、（ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩを有するＨＣＤＲ３、（ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹを有するＬＣＤＲ１、（ｅ）配列ＧＡＳを有するＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴを有するＬＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１と少なくとも９５％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９５％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１を含む重鎖可変領域と、配列番号５を含む軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２５を含む重鎖と、配列番号２６を含む軽鎖と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号１と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む。
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片は、以下の６個のＣＤＲ配列：（ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦを有するＨＣＤＲ１、（ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴを有するＨＣＤＲ２、（ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩを有するＨＣＤＲ３、（ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹを有するＬＣＤＲ１、（ｅ）配列ＧＡＳを有するＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴを有するＬＣＤＲ３を含む抗体との結合と競合する。
一実施形態では、アクチビンＡアンタゴニストは、第２の療法と組み合わせて投与される。
総病変活動性および異所性骨の体積における抗アクチビンＡアンタゴニストの影響を評価するための二重盲検試験の概略図を示す。 ＦＯＰ疾患の進行を示すＰＥＴ画像診断（図２Ａ）、および異所性骨化（ＨＯ）病変に対するアクチビンＡアンタゴニストの効果を示すＰＥＴ画像診断（図２Ｂ）を示す。 ＦＯＰ疾患の進行を示すＰＥＴ画像診断（図２Ａ）、および異所性骨化（ＨＯ）病変に対するアクチビンＡアンタゴニストの効果を示すＰＥＴ画像診断（図２Ｂ）を示す。 アクチビンＡアンタゴニストによる治療が、ＰＥＴ画像診断によって分析されるように、総病変活動性をおおよそ２５％低減したことを示す（ｐ＝０．０７４）。同様の低減が、ＣＴ分析によっても観察された。 既存の（「標的」）病変が、新しい病変とは別個に検査される場合にアクチビンＡアンタゴニストの効果がより明らかであることを示す、ＰＥＴ／ＣＴ画像診断分析からの結果を示す。 既存の（「標的」）病変が、新しい病変とは別個に検査される場合にアクチビンＡアンタゴニストの効果がより明らかであることを示す、ＰＥＴ／ＣＴ画像診断分析からの結果を示す。 活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）における１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる総病変活動性のベースラインからの変化率を示す。 活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）における数値評価尺度（Ｎｕｍｅｒｉｃ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）（ＮＲＳ）による週平均疼痛のベースラインからの変化率を示す。 活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）における二重盲検期間中の新しい病変を有する患者の２８週目の１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる新しい病変の総病変活動性を示す。 活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）における１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる新しいＨＯ病変を有する患者の率を示す。 活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）における二重盲検期間中の新しい病変を有する患者の２８週目のＣＴによる新しい病変の総体積を示す。 活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）におけるＣＴによる新しいＨＯ病変を有する患者の率を示す。 例示的な抗アクチビンＡモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列（それぞれ配列番号２５および２６）を示す。
定義
アンタゴニストは、典型的には、単離した形態で提供される。このことは、アンタゴニストが、典型的には、その産生または精製から生じる干渉タンパク質および他の汚染物質の純度が少なくとも５０％ｗ／ｗであるが、アンタゴニストが、その使用を容易にすることを意図する過剰な薬学的に許容される担体または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しないことを意味している。場合によっては、アンタゴニストは、産生または精製からの干渉タンパク質および汚染物質の純度が、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、または９９％ｗ／ｗである。
アミノ酸置換を保存的または非保存的に分類する目的で、アミノ酸を、以下のようにグループ分けする。グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ、グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ、グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ、グループＶ（鎖の方向に影響を与える残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ、およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラス内のアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを構成する。
配列同一性パーセンテージは、可変領域についてのＫａｂａｔ番号付け規則または定常領域についてのＥＵ番号付けによって最大限にアラインメントされた抗体配列を用いて決定される。他のタンパク質について、配列同一性は、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）において、デフォルトギャップパラメータを使用して、または検査、および最良のアラインメントによって、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡなどのアルゴリズムを使用して配列をアラインメントすることによって決定され得る。アラインメントの後、対象の抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が、参照抗体の同じ領域と比較される場合、対象と参照抗体領域との間の配列同一性パーセンテージは、対象および参照抗体領域の両方で同じアミノ酸によって占められる位置の数を、２つの領域のアラインメントされた位置の総数（ギャップはカウントされない）で割り算し、１００を掛け算してパーセンテージに変換する。
１つ以上の列挙された要素を「含む」組成物または方法は、具体的に列挙されていない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、抗体を単独で、または他の成分と組み合わせて含有し得る。
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体由来のＣＤＲが、ヒト「アクセプター」抗体配列にグラフト接合される、遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ、ＵＳ５，５３０，１０１および５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ、ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ、ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ、ＵＳ５，８５９，２０５および６，８８１，５５７、Ｆｏｏｔｅ、ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、そのような配列のコンポジット、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖細胞系列領域配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、ドナー抗体および可変領域フレームワーク配列および定常領域から（存在する場合、完全にまたは実質的にヒト抗体配列から）の完全にまたは実質的にいくつかのまたはすべてのＣＤＲを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、ドナー抗体重鎖、ならびに重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域から（存在する場合、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列から）少なくとも１つ、２つ、および通常は３つすべてのＣＤＲを完全にまたは実質的に有する。同様に、ヒト化軽鎖は、ドナー抗体軽鎖、ならびに軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域から（存在する場合、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列から）少なくとも１つ、２つ、および通常は３つすべてのＣＤＲを完全にまたは実質的に有する。ナノボディおよびｄＡｂ以外のヒト化抗体は、ヒト化重鎖と、ヒト化軽鎖と、を含む。ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔによって定義されるような）の少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一である場合、非ヒト抗体における対応するＣＤＲと実質的に異なる。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔによって定義される対応する残基の少なくとも８５、９０、９５、または１００％が同一である場合、それぞれ実質的にヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に由来する。
ヒト化抗体は、しばしば、マウス抗体由来の６個のＣＤＲ（好ましくは、Ｋａｂａｔによって定義される）すべてを組み込むが、それらはまた、すべてのＣＤＲより少ない（例えば、マウス抗体由来の少なくとも３、４、または５個のＣＤＲ）で作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２、Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５－４２８，２００２、Ｉｗａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９－１０９１，１９９９、Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２－１４４１，２０００）。
キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖および重鎖の成熟可変領域が、ヒト軽鎖および重鎖の定常領域と組み合わされた抗体である。かかる抗体は、マウス抗体の結合特異性を実質的にまたは完全に保持し、約３分の２のヒト配列である。
ベニヤ化抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲのいくつかおよび通常はすべて、ならびに非ヒト可変領域フレームワーク残基のいくつかを保持するが、Ｂ細胞またはＴ細胞エピトープ、例えば露出した残基に寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基を、ヒト抗体配列の対応する位置からの残基と置き換わったヒト化抗体の一種である（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）。その結果は、ＣＤＲが完全にまたは実質的に非ヒト抗体由来であり、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが置換によって、よりヒト様になる抗体である。
ヒト抗体は、ヒトから単離してもよく、またはそうでなければヒト免疫グロブリン遺伝子の発現から生じてもよい（例えば、トランスジェニックマウス、インビトロ、またはファージディスプレイによる）。ヒト抗体を産生するための方法としては、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｓ ｍｕｏｍａ ２：３６１－３６７（１９８３）、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ，米国特許第４，６３４，６６４号、およびＥｎｇｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，６３４，６６６号のトリオーマ法が挙げられる。モノクローナル抗体はまた、ヒト免疫系遺伝子を保有するトランスジェニックマウス、例えば、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．からのＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウス（Ｍｕｒｐｈｙ，ＰＮＡＳ １１１ ｎｏ．１４，５１５３－５１５８（２０１４）、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２５，１１３４－１１４３（２００７）、またはＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．からのＨｕＭＡｂマウス（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１８１，６９－９７（２００８）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９３／１２２２７（１９９３）、ＵＳ５，８７７，３９７、ＵＳ５，８７４，２９９、ＵＳ５，８１４，３１８、ＵＳ５，７８９，６５０、ＵＳ５，７７０，４２９、ＵＳ５，６６１，０１６、ＵＳ５，６３３，４２５、ＵＳ５，６２５，１２６、ＵＳ５，５６９，８２５、ＵＳ５，５４５，８０６、Ｎａｔｕｒｅ １４８，１５４７－１５５３（１９９４），Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８２６（１９９６），Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，ＷＯ９１／１０７４１（１９９１）によって産生され得る。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイ方法によって産生され得る（例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９１／１７２７１およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、ＷＯ９２／０１０４７、ＵＳ５，８７７，２１８、ＵＳ５，８７１，９０７、ＵＳ５，８５８，６５７、ＵＳ５，８３７，２４２、ＵＳ５，７３３，７４３、およびＵＳ ５，５６５，３３２を参照されたい）。
アンタゴニストが、親抗体に由来する親抗体の特性を保持するといわれる場合、その保持は、完全なものであってもよく、または部分的なものであってもよい。活性の完全な保持は、アンタゴニストの活性が、実験誤差内で同じであるか、またはその由来となる分子の活性よりも大きいことを意味する。活性の部分的保持とは、陰性対照のバックグラウンドレベルを著しく超える（すなわち、実験誤差を超える）活性、好ましくは、その由来となった分子の対応する活性の少なくとも５０％を意味する。
一方の抗体の結合を低減または除外する抗原におけるすべてのアミノ酸変異が、もう一方の結合を低減または除外する場合、２つの抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を減少または除外するいくつかのアミノ酸変異が、もう一方の結合を減少または除外する場合、２つの抗体は、重複エピトープを有する。
抗体間の競合は、試験中の抗体が共通抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照されたい）。過剰量の試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍）が、競合結合アッセイで測定される場合、参照抗体の結合を少なくとも５０％、しかし、好ましくは７５％、９０％、または９９％阻害する場合、試験抗体は、参照抗体と競合する。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および立体障害を生じさせるために参照抗体によって結合されるエピトープに十分に近接する隣接エピトープに結合する抗体を含む。
Ｉ．概要
アクチビンＡ抗体は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）のマウスモデルにおいて以前に試験されている（例えば、その内容全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、２０１５年９月１４日に出願されたＥＰ３１９１５１２Ｂ１を参照されたい）。しかしながら、Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲＴ２／＋マウスモデルなどのＦＯＰのマウスモデルは、その構成的変異体が生存可能でないことが判明したため、すべて条件付きノックアウトである。したがって、ＦＯＰマウスモデルでは、タモキシフェンで疾患を「オンにする（ｔｕｒｎ ｏｎ）」場合があり、これらの現在利用可能なＦＯＰマウスモデルは、変異体タンパク質（例えば、ＡＬＫ２Ｒ２０６Ｈ）の発現が構成的であるヒト疾患を研究するための最適なモデルではない。
本開示は、一部には、アクチビンＡアンタゴニストによってＦＯＰヒト対象を治療すると、新しい異所性骨化（ＨＯ）骨成長の進行を劇的に低減および／または予防し、病変成長および石灰化の平均速度を低減させるという驚くべき発見に基づいている。しかしながら、アクチビンＡアンタゴニストによる治療は、驚くべきことに、既に存在する骨病変には影響を及ぼさなかった。
したがって、本明細書に開示されるのは、ヒトにおいてミュンヒマイアー病としても知られる進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を治療するための方法であり、本明細書で提供される。かかる方法は、ＦＯＰを有するヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを伴う。
ＩＩ．アクチビンＡ
リガンドのトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーとしては、例えば、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）および増殖分化因子（ＧＤＦ）が挙げられる。これらのリガンドのための受容体は、Ｉ型およびＩＩ型膜貫通セリン／トレオニンキナーゼ受容体で構成されるヘテロマー受容体複合体である。Ｉ型受容体の例としては、アクチビン受容体ＩＡ型（ＡＣＴＲＩＡ、ＡＣＶＲ１、またはＡＬＫ２）、ＢＭＰ受容体ＩＡ型およびＢＭＰ受容体ＩＢ型が挙げられる。ＩＩ型受容体の例としては、アクチビン受容体ＩＩＡ型およびＩＩＢ型（ＡＣＴＲＩＩＡまたはＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＴＲＩＩＢまたはＡＣＶＲ２Ｂ）ならびにＢＭＰ受容体ＩＩ型が挙げられる。ＴＧＦβスーパーファミリーのリガンドはそれぞれ、異なるＩ型受容体およびＩＩ型受容体に対して異なる親和性を有する。
ヒトにおけるアクチビンＡは、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質として存在し得る。ホモ二量体タンパク質は、ホモ二量体ベータＡサブユニット対を含有する。ヘテロ二量体タンパク質は、ベータサブユニットおよびベータＢ、ベータＣ、またはベータＥサブユニット（すなわち、ベータＡベータＢ、ベータＡベータＣ、またはベータＡベータＥ）を含有する。このサブユニットは、それぞれ、シグナルペプチド、プロペプチド、および成熟ポリペプチドを含む前駆体ポリペプチドとして発現される。ヒトベータＡサブユニット前駆体の例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ０８４７６と称される長さ４２６アミノ酸のポリペプチドであり、その残基１～２０は、シグナルペプチドであり、残基２１～３１０は、プロペプチドであり、残基３１１～４２６は、成熟ポリペプチドである。ベータＢサブユニット前駆体ポリペプチドの例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ０９５２９と称され、その残基１～２８は、シグナルペプチドであり、残基２９～２９２は、プロペプチドであり、残基２９３～４０７は、成熟ポリペプチドである。ベータＣサブユニットの例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ５５１０３と称され、その残基１～１８は、シグナルペプチドであり、残基１９～２３６は、プロペプチドであり、残基２３７～３５２は、成熟ポリペプチドである。ベータＥサブユニット前駆体の例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ５８１６６と称され、その残基１～１９は、シグナルペプチドであり、残基２０～２３６は、プロペプチドであり、残基２３７～３５０は、成熟ポリペプチドである。これらの配列のいくつかのバリアントは、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｄａｔａ ｂａｓｅに記載されているように、既知である。アクチビンＡとの言及には、ベータＡホモ二量体、ベータＡベータＢ、ベータＡベータＣおよびベータＡベータＥヘテロ二量体形態のいずれか、およびそれらのサブユニット、ならびにサブユニットが提供される例示的なＳｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ配列またはこれらの配列の他の天然に存在するヒト形態によって定義されるプロペプチドおよび／またはシグナルペプチドに接続するそれらの前駆体が含まれる。アクチビンＡは、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂへの結合を介してシグナル伝達するが、ＡＣＶＲ１のためのリガンドであることは知られていない。アクチビンＡは、変異体ＡＣＶＲを介して異常にシグナル伝達し、骨形成シグナルを形質導入し、異所性骨形成を誘発する。
Ｉ型およびＩＩ型受容体の両方が、細胞外リガンド結合ドメイン（ＥＣＤ）と、細胞内セリン／トレオニンキナーゼドメインと、を有する。加えて、Ｉ型受容体は、キナーゼドメインに先行するグリシン／セリンリッチ領域（ＧＳ－ボックス）と、キナーゼドメイン内にＬ４５ループと、を有する。両方の受容体は、リガンドと協力して、Ｓｍａｄおよび非Ｓｍａｄシグナル伝達経路などの下流のシグナル伝達経路を活性化する。活性化は、ＩＩ型受容体キナーゼによるＩ型受容体のＧＳボックスのリガンド結合、リガンド－受容体オリゴマー化、およびトランスリン酸化を伴う。ＩＩ型受容体キナーゼは、構成的に活性であり、Ｉ型受容体のリガンド結合および活性化において役割を有する。
ＡＣＶＲ１は、アクチビン受容体Ｉ型、ＡＣＶＲ１Ａ、ＡＣＶＲＬＫ２、ＡＬＫ２としても知られており、リガンドのＴＧＦβスーパーファミリーのためのＩ型受容体である。ＡＣＶＲ１は、セリン／トレオニンキナーゼ活性を有し、Ｓｍａｄタンパク質をリン酸化し、下流のシグナル伝達経路を活性化する。ＡＣＶＲ１は、骨格筋および軟骨を含む身体の多くの組織にみられ、骨および筋肉の成長および発達を制御するのに役立つ。本明細書の他の箇所に記載されるように、ＡＣＶＲ１遺伝子の特定の変異は、ＦＯＰを引き起こす。ＡＣＶＲ１活性の例としては、リガンドに結合する能力、ＩＩ型受容体と複合体を形成する能力、または下流のシグナル伝達経路（例えば、Ｓｍａｄ経路）を活性化する能力が挙げられる。
ＡＣＶＲ２は、アクチビン受容体ＩＩ型としても知られており、リガンドのＴＧＦβスーパーファミリーのためのＩＩ型受容体である。少なくとも２つのＡＣＶＲ２受容体、例えば、アクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＴＲＩＩＡ）およびアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡＣＶＲ２ＢまたはＡＣＴＲＩＩＢ）が存在する。ＡＣＶＲ２との言及は、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂのいずれかまたは両方を含む。ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂは、骨格筋、胃、心臓、子宮内膜、精巣、前立腺、卵巣、および神経組織を含む、複数の組織で発現され得る。
リガンド結合に関して、ＡＣＶＲ２受容体は、ＡＣＶＲ１などのＩ型受容体と複合体を形成し、Ｉ型受容体のＧＳボックスをリン酸化することにより、Ｉ型受容体のキナーゼ活性を増強する。ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂ活性の例としては、リガンドに結合する能力、Ｉ型受容体と複合体を形成する能力、またはＩ型受容体をリン酸化する能力が挙げられる。
ヒトＡＣＶＲ２Ａの例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２７０３７を有する。残基１～１９は、シグナルペプチドであり、残基２０～１３５は、細胞外ドメインであり、残基５９～１１６は、アクチビンＩ型およびＩＩ型受容体ドメインであり、残基１３６～１６１は、膜貫通ドメインであり、残基１６２～５１３は、細胞質ドメインである。ヒトＡＣＶＲ２Ｂの例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ番号Ｑ１３７０５に割り当てられている。残基１～１８は、シグナル配列であり、残基１９～１３７は、細胞外ドメインであり、残基２７～１１７は、アクチビンＩ型およびＩＩ型受容体ドメインであり、残基１３８～１５８は、膜貫通ドメインであり、残基１５９～５１２は、細胞質ドメインである。ヒトＡＣＶＲ１の例示的な形態は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０４７７１を有する。残基１～２０は、シグナル配列であり、残基２１～１２３は、細胞外ドメインであり、残基３３～１０４は、アクチビンＩ型およびＩＩ型受容体ドメインであり、残基１２４～１４６は、膜貫通ドメインであり、残基１４７～５０９は、細胞質ドメインである。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂのいずれかに対する言及には、これらの例示的な形態、既知のアイソフォームおよびその多型、例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔデータベースに列挙されているもの、他の種由来の同族形態、ならびに例示的な形態と少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、または９９％の配列同一性を有する他のバリアントが含まれる。
上に定義される例示される配列以外のＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２ＢおよびＡＣＶＲ１の形態の残基は、対応する例示される配列との最大アラインメントによって番号が付けられるため、アラインメントされた残基に同じ番号が割り当てられる。例示される配列からの置換は、保存的置換または非保存的置換であり得る。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂとの言及はまた、インタクトな細胞外ドメイン（例えば、それぞれＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２ＢおよびＡＣＶＲ１の残基２０～１３５、１９～１３７または２１～１２３）、あるいは膜貫通部分および細胞質部分を含まないか、または実質的に含まないそれらの一部分も含む。細胞外ドメインの一部分は、インタクトな細胞外ドメインに結合し、それによって関連する受容体に拮抗する少なくとも１つのリガンドまたは対抗受容体に結合するのに十分な、インタクトな細胞外ドメインの残基を保持する（例えば、それぞれ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２ＢおよびＡＣＶＲ１の残基５９～１１６、２７～１１７または３３～１０４）。
ＩＩＩ．アクチビンＡのアンタゴニスト
Ａ．抗体
「抗体」という用語は、重鎖および軽鎖の２つの対を有するインタクト抗体、抗原に結合することができる抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体など）、および前述のものを含む組換えペプチドを包含する。
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、ダイアボディ、線形抗体（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１０：１０５７－１０６２）、一本鎖抗体分子、および抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体であり、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に生じる可能性のある変異を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、多くの場合、高度に特異的であり、単一の抗原部位を指向している。さらに、典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向性を有する異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、典型的に、抗原上の単一の決定基に対して指向性である。「モノクローナル」という修飾語は、Ｂ細胞のクローン集団によって産生されるものなど、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要としない。
本明細書で提供される方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されるハイブリドーマ法、またはその改変法によって作製され得る。典型的には、マウスなどの動物は、抗原（例えば、アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチド、または特に細胞外ドメイン（受容体内）またはその一部）を含有する溶液で免疫化される。
免疫化は、生理食塩水中、好ましくはフロイント完全アジュバントなどのアジュバント中で抗原含有溶液を混合または乳化し、混合物またはエマルションを非経口的に注射することによって実施され得る。動物の免疫化後、脾臓（および任意選択的に、いくつかの大きなリンパ節）を除去し、単一細胞に解離させる。脾臓細胞は、細胞懸濁液を、目的の抗原でコーティングされたプレートまたはウェルに塗布することによってスクリーニングすることができる。抗原に特異的な膜結合免疫グロブリンを発現するＢ細胞は、プレートに結合し、洗い流されない。得られたＢ細胞、またはすべての解離された脾臓細胞は、次いで骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを形成するように誘導され、選択培地中で培養される。得られた細胞を、連続希釈によって播種し、目的の抗原に特異的に結合する（および無関係の抗原に結合しない）抗体の産生についてアッセイする。次いで、選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）分泌ハイブリドーマをインビトロ（例えば、組織培養ボトルまたは中空繊維反応器中）またはインビボ（マウスにおける腹水として）で培養する。
代替的に、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法によって作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。モノクローナル抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７、および米国特許第５，５１４，５４８号に記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離することもできる。
「抗体」は、アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂのいずれかに対する、上に定義される、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体およびヒトモノクローナル抗体を含む。
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには、５つの主要なクラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けられ得る。免疫グロブリンの種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの種々のクラスのサブユニット構造および三次元構造は、周知である。
本発明のモノクローナル抗体またはＦｃ融合タンパク質は、様々な抗体クラスのうちのいずれかであり得る。一実施形態では、モノクローナル抗体は、ＩｇＧクラス抗体である。他の実施形態では、モノクローナル抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＡクラスのものであり得る。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧのアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４、特にヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。
軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端の１つまたは複数のアミノ酸、例えば重鎖のＣ末端リジンは、分子の一部またはすべてで欠損していてもよく、または誘導体化していてもよい。置換は、補体媒介性細胞傷害性またはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低下または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，６２４，８２１号、Ｔｓｏ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，８３４，５９７号、およびＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６）、またはヒトにおける半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）、定常領域内で行うことができる。例示的な置換は、抗体の半減期を増加させるための位置２５０におけるＧｌｎおよび／または位置４２８におけるＬｅｕ（ＥＵ番号付け）を含む。２３４、２３５、２３６、および／または２３７位のいずれかでの置換は、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低下させる（例えば、米国第６，６２４，８２１号を参照されたい）。任意選択的に、ヒトＩｇＧ２中の２３４、２３６、および／または２３７位は、アラニンで置換され、２３５位は、グルタミンで置換されている。（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照されたい。）エフェクター機能はまた、ＰＶＡによる２３２～２３６位のＥＦＬＧの置換によって低減することができる（ＷＯ１４／１２１０８７を参照）。任意選択的に、４２８位のＳは、特にヒトＩｇＧ４においてＰによって置き換えられ、内因性免疫グロブリンと外因性免疫グロブリンとの間の交換を低減することができる。他の変異は、例えばＮ－Ｘ－Ｓ／ＴモチーフでのＮ結合グリコシル化などの翻訳後修飾部位を追加または除去することができる。変異としては、二重特異性抗体の産生のための異なる重鎖間のヘテロ二量体の形成を促進するためのノブ（すなわち、１つ以上のアミノ酸をより大きなアミノ酸に置き換える）またはホール（すなわち、１つ以上のアミノ酸をより小さいアミノ酸に置き換える）の導入も挙げることができる。ノブおよびホールの対を形成するための例示的な置換は、それぞれ、Ｔ３３６ＹおよびＹ４０７Ｔである（Ｒｉｄｇｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｖｏｌ．９ ｎｏ．７ ｐｐ．６１７－６２１，１９９６）。変異はまた、ＥＵ番号付けシステムにおけるタンパク質Ａ相互作用を低減する変異（例えば、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆ）を含み得る。１つの重鎖がそのような変異を有し、別の重鎖がそのような変異を有さない二重特異性抗体は、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって、それらの親抗体から分離することができる。
抗体は、アクチビンＡに特異的に結合する抗体も含み得る。かかる抗体は、アクチビンＡのベータＡベータＡ、ベータＡベータＢ、ベータＡベータＣ、およびベータＡベータＥ形態のいずれかまたはすべてに特異的に結合し得る。いくつかの抗体は、これらの形態のうちの１つのみ（すなわち、ベータＡベータＡ、ベータＡベータＢ、ベータＡベータＣ、またはベータＡベータＥ）に特異的に結合する。ベータＡベータＢ、ベータＡベータＣおよびベータＡベータＥ形態に対する特異性は、それぞれベータＢ、ベータＣもしくはベータＥサブユニット内のエピトープによって、またはヘテロ二量体の両方の構成要素が寄与するエピトープに対して付与することができる。ベータＡベータに対する特異性は、ホモ二量体内の両方の分子によって寄与されるエピトープによって付与され得る（例えば、サブユニットの界面で）。いくつかの抗体は、これらの形態のアクチビンＡのすべてに特異的に結合し、その場合、エピトープは典型的には、ベータＡサブユニット上にある。抗体は、典型的には、前駆体タンパク質の成熟ポリペプチド構成要素内にエピトープを有する。いくつかの抗体は、アルファ（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ０５１１１）ベータＡまたはアルファベータＢヘテロ二量体の形態で存在し、ヒトインヒビンに結合することなく、任意またはすべての形態のアクチビンＡに特異的に結合する。いくつかの抗体は、任意またはすべての形態のアクチビンＡに特異的に結合し、ヒトインヒビンのいずれかまたは両方の形態に結合する。かかる抗体は、その対抗受容体、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂおよび／またはＢＭＰＲ２のうちの１つ以上を介したアクチビンＡのシグナル伝達を阻害すると考えられているが、ＦＯＰを治療する方法におけるそのような抗体の使用には、機構の理解は必要ない。
アクチビンＡに対するかなりの数の抗体が報告されている。例えば、米国特許第９，７１８，８８１号は、Ｈ４Ｈ１０４２３Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４２４Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４２６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４２９Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３３Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４５Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４５２Ｐ２と称されるヒト抗体を開示する。米国特許第８，３０９，０８２号は、ヒト抗体Ａ１～Ａ１４を開示している。アクチビンＡに対するマウス抗体は、いくつかの商業的供給業者、例えば、Ｒ＆Ｄ ＳｙｓｔｅｍｓからのＭＡＢ３３８１またはＮｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓからの９Ｈ１６またはＭＭ００７４－７Ｌ１８（ａｂ８９３０７）ＡｂＣａｍから入手可能である。
好ましい抗体は、少なくとも１０８Ｍ－１、１０９Ｍ－１、１０１０Ｍ－１、１０１１Ｍ－１、１０１２Ｍ－１、または１０１３Ｍ－１のアクチビンＡに対する親和性を有する（ＵＳ２０１５／００３７３３３９の実施例３と同様に２５℃で測定される）。いくつかの抗体は、１０９～１０１２Ｍ－１の範囲内の親和性を有する。好ましい抗体は、４ｎＭ未満、好ましくは４００ｐＭ未満または４０ｐＭ未満のＩＣ５０で、アクチビンＡのシグナル伝達を阻害する。いくつかの抗体は、４ｎＭ～１０ｐＭまたは３．５ｎＭ～３５ｐＭの範囲のＩＣ５０で、シグナル伝達を阻害する。
シグナル伝達阻害は、米国特許第９，７１８，８８１号の実施例６と同様に測定することができ、これは以下のようにまとめられる。ヒトＡ２０４横紋筋肉腫細胞株をＳｍａｄ ２／３－ルシフェラーゼレポータープラスミドでトランスフェクトして、Ａ２０４／ＣＡＧＡｘ１２－Ｌｕｃ細胞株を産生する。Ａ２０４／ＣＡＧＡｘ１２－Ｌｕｃ細胞を、１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、および２５０μｇ／ｍＬのＧ４１８を補充したＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ中で維持した。バイオアッセイについては、Ａ２０４／ＣＡＧＡｘ１２－Ｌｕｃ細胞を、低血清培地、０．５％ＦＢＳおよびＯＰＴＩＭＥＭ中の１０，０００細胞／ウェルで９６ウェルアッセイプレート上に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。アクチビンＡは、１：３で１００～０．００２ｎＭに連続的に希釈され、アクチビンを含有しない対照と共に開始しつつ、細胞に添加される。抗体は、適切なアイソタイプ対照抗体または抗体なしのいずれかを含有する対照試料を含む、１００～０．００２ｎＭ、１０００～０．０２ｎＭ、または３００～０．００５ｎＭから開始する１：３で連続的に希釈され、１００ｐＭの一定濃度のアクチビンＡを有する細胞に添加される。
いくつかの抗体は、受容体が細胞から発現されるとき、または細胞外ドメインが融合タンパク質としてＦｃドメインと融合され、融合タンパク質が支持体（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅセンサーチップ）に固定化されるときに測定される場合、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂおよび／またはＢＭＰＲ２に対するアクチビンＡの結合を少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％阻害する。そのような測定では、抗体およびアクチビンＡは、等モル量で存在し、受容体または細胞外ドメインは過剰であるべきである。
いくつかの抗体は、成熟タンパク質のＣ１１～Ｓ３３およびＣ８１～Ｅ１１１に対応する、全長アクチビンＡの残基３２１～３４３または３９１～４２１内のエピトープに結合する。
本発明の例で使用される例示的な抗体は、米国特許第９，７１８，８８１号においてＨ４Ｈ１０４４６Ｐと称されている。米国特許第９，７１８，８８１号のそれぞれ配列番号１６２、１６４、１６６、および１６８のアミノ酸配列を有する、その重鎖可変領域および重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（それぞれ、本発明の配列番号１、２、３、および４）。米国特許第９，７１８，８８１号のそれぞれ配列番号１４６、１４８、１５０、および１５２のアミノ酸配列を有する、その軽鎖可変領域および軽鎖ＣＤＲであるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３（それぞれ、本発明の配列番号５、６、７、および８）。Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐは、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲＩＩＢを介したアクチビンＡ媒介性シグナル伝達を阻害するが、ＡＣＲＩＩＡまたはＡＣＶＲ２Ｂに対するアクチビンＡの結合を阻害するにしても、強く阻害するわけではない。ヒトアクチビンＡに対する結合、またはＨ４Ｈ１０４４６Ｐと同じヒトアクチビンＡ上のエピトープに対する結合に関してＨ４Ｈ１０４４６Ｐと競合する他の抗体が含まれ、そのシグナル伝達阻害を共有することもまた含まれる。
本発明の方法で使用するための別の例示的な抗体は、米国特許第９，７１８，８８１号でＨ４Ｈ１０４３０Ｐと称されている。米国特許第９，７１８，８８１号のそれぞれ配列番号６６、６８、７０、および７２のアミノ酸配列を有する、その重鎖可変領域および重鎖ＣＤＲであるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３（それぞれ、本発明の配列番号９、１０、１１、および１２）。米国特許第９，７１８，８８１号のそれぞれ配列番号７４、７６、７８、および８０のアミノ酸配列を有する、その軽鎖可変領域および軽鎖ＣＤＲであるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３（それぞれ、本発明の配列番号１３、１４、１５、および１６）。この抗体は、ＡＣＲＶ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２ＢへのアクチビンＡの結合を阻害し、これらの受容体の一方または両方を介したシグナル伝達を阻害する。アクチビンＡに対する結合またはＨ４Ｈ１０４３０Ｐと同じアクチビンＡ上のエピトープに対する結合についてＨ４Ｈ１０４３０Ｐと競合し、それに対するアクチビンＡ結合およびＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂを介するシグナル伝達を阻害するその特性を共有する、他の抗体も含まれる。
本発明の方法で使用するための例示的な抗体は、ガレトスマブである。組換えモノクローナル抗体ガレトスマブは、２つのジスルフィド結合したヒト重鎖（ＩｇＧ４アイソタイプ）からなる共有結合ヘテロ四量体であり、各々は、ヒトカッパ軽鎖に対するジスルフィド結合を介して共有結合される。一次配列に基づいて、グリカンを含まない抗体は、１６個のカノニカルジスルフィド結合の形成および各重鎖Ｃ末端からのＬｙｓ４５３の除去を仮定して、１４５，２３５．３Ｄａの予測分子量を有する。各重鎖は、ＩｇＧ４アイソタイプ抗体が溶液中でハーフ抗体を形成する傾向を低下させるために、Ｆｃドメインのヒンジ領域内のアミノ酸Ｐｒｏ２３４におけるセリンからプロリンへの変異を含有する。各重鎖上に１個のＮ結合グリコシル化部位（Ａｓｎ３０３）が存在し、分子のＦｃドメインの定常領域内に位置している。ガレトスマブ重鎖および軽鎖可変ドメイン内の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、その標的：アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、およびアクチビンＡＣの結合部位を一緒に形成する。重鎖および軽鎖アミノ酸配列、各ポリペプチド鎖内のＣＤＲの位置、重鎖Ｎ結合グリコシル化部位の位置、およびガレトスマブモノクローナル抗体の予測ジスルフィド結合構造を図１０に示す。
本方法で使用するための別の例示的な抗体は、米国特許第８，３０９，０８２号のＡ１と称される抗体であり、米国特許第８，３０９，０８２号の配列番号９および１０（それぞれ本発明の配列番号１７および１８）の配列を有する軽鎖および重鎖の可変領域を特徴とする。米国特許第８，３０９，０８２号における、それぞれ配列番号１１、１２、および１３の配列を有する、その軽鎖ＣＤＲであるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３（それぞれ、本発明の配列番号１９、２０、および２１）、ならびに米国特許第８，３０９，０８２号における、それぞれ配列番号６２、６３、および６４の配列を有する、その重鎖ＣＤＲであるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３（それぞれ、本発明の配列番号２２、２３、および２４）。アクチビンＡに対する結合またはＨ４Ｈ１０４３０Ｐと同じアクチビンＡ上のエピトープに対する結合についてＨ４Ｈ１０４３０Ｐと競合し、それに対するアクチビンＡ結合を阻害し、ＡＣＶＲ２Ａおよび／ＡＣＶＲ２Ｂを介するシグナルを伝達するその特性を共有する、他の抗体も含まれる。
他の抗体は、上述の抗体のいずれかの重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発によって得ることができる。成熟重鎖および／または軽鎖可変領域のアミノ酸配列における上述の抗体のいずれかに対して少なくとも９０％、９５％または９９％同一であり、その機能特性を維持し、かつ／または少数の機能的に重要ではないアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失、または挿入によってそれぞれの抗体と異なるモノクローナル抗体もまた、本開示に含まれる。例示される抗体のいずれかの対応するＣＤＲに対して９０％、９５％、９９％、または１００％同一である、少なくとも１、２、３、４、５、および好ましくは６個すべてのＣＤＲを有するモノクローナル抗体もまた、含まれる。ＣＤＲは、好ましくは、Ｋａｂａｔによって定義される通りであるが、Ｃｈｏｔｈｉａ、複合Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａ、接触定義、またはＡｂＭ定義などの任意の従来の代替定義によって定義することができる（ワールドワイドウェブｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓを参照されたい）。
Ｂ．タンパク質／ペプチド阻害剤
本開示の方法において有用なアクチビンＡのアンタゴニストとしては、種々の分子、例えば、アクチビンＡのペプチド阻害剤、ならびにそれらの種々の阻害性断片、誘導体、および類似体が挙げられる。本開示には、アクチビンＡシグナル伝達の競合阻害剤として機能し得るアクチビンＡのペプチド阻害剤、ならびにそれらの種々の阻害性断片、誘導体、および類似体も含まれる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、アクチビンＡと本明細書に開示されるその受容体のいずれかとの間のシグナル伝達経路を阻害するフォリスタチン（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０６４２９２号を参照されたい）またはその誘導体もしくは類似体である。シグナル伝達阻害は、本明細書に既に開示されたように測定することができる。
アクチビンＡのペプチド阻害剤は、当該技術分野で周知の様々な発現系を使用して核酸の対応する断片から組換え的に産生することができ、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、昆虫（例えば、Ｓｆ９）、および哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳ－７）を含む、様々な宿主系は、産生に好適である。多くの発現ベクターが開発されており、これらの宿主のそれぞれに利用可能である。クローニングおよび発現のためのベクターおよび手順は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８７））、およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９５で議論されている。本開示で有用な標準発現ベクターは、当該技術分野で周知であり、プラスミド、コスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、および酵母人工染色体を含む（これらに限定されない）。ベクター配列は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）における増殖のための複製起点、ＳＶ４０複製起点、宿主細胞における選択のためのアンピシリン、ネオマイシン、またはピューロマイシン抵抗性遺伝子、および／または優勢な選択可能マーカーと目的の遺伝子を増幅する遺伝子（例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子）を含有し得る。
代替的に、アクチビンＡのペプチド阻害剤は、例えば、従来のメリフィールド固相ｆ－Ｍｏｃまたはｔ－Ｂｏｃ化学などの当該該技術分野で既知の技術を使用して化学的に合成することができる。ペプチド合成の方法については、Ｂｏｄａｎｓｋｙ，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（１９９３））、およびＧｒａｎｔ（編集），“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ，”（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２））も参照されたい。加えて、自動ペプチドシンセサイザーが市販されている（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｍｏｄｅｌ ３９６、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ ９６００）。
特定の実施形態では、アクチビンＡの有用なアンタゴニストは、ペプチドおよびペプチド模倣物などの小分子である。本明細書で使用される場合、「ペプチド模倣物」という用語には、天然に存在しないアミノ酸、ペプトイドなどを含有する、化学修飾されたペプチドおよびペプチド様分子が含まれる。ペプチド模倣物は、対象に投与したときの安定性の増強を含め、ペプチドに対する様々な利点を提供する。ペプチド模倣物を特定するための方法は、当該技術分野で周知であり、潜在的なペプチド模倣物のライブラリを含有するデータベースのスクリーニングを含む。例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄａｔａｂａｓｅは、既知の結晶構造を有する３００，０００を超える化合物の集合体を含有する（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｂ ３５：２３３１（１９７９））。標的分子の結晶構造が利用可能でない場合、構造は、例えば、プログラムＣＯＮＣＯＲＤを用いて生成することができる（Ｒｕｓｉｎｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．２９：２５１（１９８９））。別のデータベースであるＡｖａｉｌａｂｌｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ Ｃａｌｉｆ．）は、市販されている約１００，０００個の化合物を含有し、潜在的なペプチド模倣物を特定するために検索することもできる。
特定の実施形態では、アクチビンＡのペプチド阻害剤は、翻訳後修飾をさらに含み得る。かかる修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化が含まれるが、これらに限定されない。結果として、修飾された可溶性ポリペプチドは、ポリエチレングリコール、脂質、多糖または単糖、およびホスフェートなどの非アミノ酸要素を含有し得る。かかる非アミノ酸要素がポリペプチドの機能性に及ぼす影響は、本明細書に記載される機能アッセイを使用して試験することができる。
Ｃ．小分子阻害剤
本開示はまた、アクチビンＡの小分子阻害剤も包含する。小分子は、一般に低分子量（好ましくは、約２０００ダルトン未満、約１０００ダルトン未満、または約５００ダルトン未満）を有する多様な合成物質および天然物質のグループである。小分子は、限定されないが、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド核酸、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質、または他の有機（炭素含有）分子もしくは無機分子であってもよく、合成もしくは天然に存在するか、または任意選択的に誘導体化され得る。かかる小分子は、治療的に送達可能な物質であってもよく、または送達または標的化を容易にするためにさらに誘導体化されてもよい。かかる小分子は、天然源（例えば、植物、真菌、微生物など）から単離することができ、合成化合物または天然化合物のランダムまたはコンビナトリアル化学ライブラリから単離することができ、または合成することができる。Ｗｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｂｒｉｅｆ Ｆｕｎｃｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ ５（１）：３２－６を参照されたい。使用可能な多くのランダムまたはコンビナトリアル化学ライブラリが当該技術分野で既知である。糖、ペプチド、および核酸系の化合物のランダムかつ指向性の合成のために、多数の手段が現在使用されている。合成化合物ライブラリは、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｔｒｅｖｉｌｌｅｔ、Ｃｏｒｎｗａｌｌ、ＵＫ）、Ｃｏｍｇｅｎｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ｂｒａｎｄｏｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ、Ｎ．Ｈ．）、およびＭｉｃｒｏｓｏｕｒｃｅ（Ｎｅｗ Ｍｉｌｆｏｒｄ、Ｃｏｎｎ．）から市販されている。希少な化学ライブラリは、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）から入手可能である。代替的に、細菌、真菌、植物および動物の抽出物の形態の天然化合物のライブラリは、例えば、Ｐａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｏｔｈｅｌｌ、Ｗａｓｈ．）またはＭｙｃｏＳｅａｒｃｈ（Ｎ．Ｃ．）から利用可能であるか、または容易に生成可能である。追加的に、天然および合成によって生成されたライブラリおよび化合物は、従来の化学的、物理的および生化学的手段を介して容易に修正される（Ｂｌｏｎｄｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｔｉｂ Ｔｅｃｈ １４：６０）。
アクチビンＡのアンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤）の特定およびスクリーニングは、例えば、Ｘ線結晶学、中性子回折、核磁気共鳴分光法、および構造決定のための他の技術を使用して、関与するタンパク質の構造的特徴を決定することによってさらに促進され得る。これらの技術は、アクチビンＡのアンタゴニストの合理的な設計または特定を提供する。
Ｄ．アクチビンＡ発現またはアクチビンＡシグナル伝達における下流の分子事象に影響を及ぼす化合物
本開示はまた、アクチビンＡの発現を阻害するか、またはアクチビンＡがその下流のシグナル伝達経路と関わることを防止する、アクチビンＡの阻害剤を包含する。有用な発現阻害剤の非限定的な例としては、例えば、干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）、ｄｓＲＮＡ、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ転写ＤＮＡ、リボザイム、およびアンチセンス核酸が挙げられる。
アンチセンスＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＤＮＡ／ＲＮＡ分子を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡに結合することによってｍＲＮＡの翻訳を直接的に遮断し、タンパク質の翻訳を防止するように作用する。例えば、標的ＤＮＡ配列の固有の領域に相補的な、少なくとも約１５塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、例えば、従来のホスホジエステル技術によって合成することができる（Ｄａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｍｏｎｉｔ．１２（４）：ＲＡ６７－７４、Ｋａｌｏｔａ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：１７３－９６、Ｌｕｔｚｅｌｂｕｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：２４３－５９）。
ｓｉＲＮＡは、典型的には、１５～５０塩基対、好ましくは２１～２５塩基対を含有し、細胞内の発現した標的遺伝子またはＲＮＡと同一またはほぼ同一のヌクレオチド配列を有する二本鎖構造を含む。アンチセンスポリヌクレオチドは、これらに限定されないが、モルホリノ、２’－Ｏ－メチルポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡなどを含む。アクチビンＡ発現を阻害するｓｉＲＮＡの例として、限定されないが、Ｈｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２０１２ Ｄｅｃ ４；１０７（１２）：１９７８－８６に開示される抗アクチビンＡ ｓｉＲＮＡが挙げられる。
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ転写ＤＮＡは、Ｕ６プロモーターなどのプロモーターを含有する。これらのＤＮＡを転写して、ｓｉＲＮＡとして機能することができる細胞内の小さなヘアピンＲＮＡ、またはアンチセンスＲＮＡとして機能することができる線形ＲＮＡを産生することができる。阻害剤は、インビトロで重合されてもよく、組換えＲＮＡであってもよく、キメラ配列を含有してもよく、またはこれらの基の誘導体であってもよい。阻害剤は、標的ＲＮＡおよび／または遺伝子が阻害されるように、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、合成ヌクレオチド、または任意の好適な組み合わせを含有し得る。加えて、これらの形態の核酸は、一本鎖、二本鎖、三本鎖、または四本鎖であり得る。（例えば、Ｂａｓｓ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４２８ ４２９、Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４ ４９８、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ００／４４８９５号、第ＷＯ０１／３６６４６号、第ＷＯ９９／３２６１９号、第ＷＯ００／０１８４６号、第ＷＯ０１／２９０５８号、第ＷＯ９９／０７４０９号、第ＷＯ００／４４９１４号を参照されたい）。
リボザイムは、ＲＮＡの特異的な切断を触媒することができる酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイム作用の機構は、相補標的ＲＮＡに対するリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーション、続いてエンドヌクレオチド分解切断を伴う。ｍＲＮＡ配列のエンドヌクレオチド分解切断を特異的かつ効率的に触媒する操作されたハンマーヘッドモチーフリボザイム分子もまた、本開示の範囲内である。以下の配列、ＧＵＡ、ＧＵＵ、およびＧＵＣを含むリボザイム切断部位について標的分子をスキャンすることで、最初に、任意の潜在的なＲＮＡ標的内の特異的なリボザイム切断部位を特定する。特定されると、切断部位を含有する標的遺伝子の領域に対応する約１５～２０個のリボヌクレオチドの短いＲＮＡ配列を、オリゴヌクレオチド配列を不適切なものにし得る二次構造などの予測される構造的特徴について評価することができる。候補標的の適合性は、例えば、リボヌクレアーゼ保護アッセイを使用して、相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションに対するそれらのアクセス性を試験することによって評価することもできる。
本開示の発現阻害剤は、既知の方法によって調製することができる。これらには、例えば、固相ホスホアマイト（ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｔｅ）化学合成によるものなどの化学合成のための技術が含まれる。代替的に、アンチセンスＲＮＡ分子は、ＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のインビトロまたはインビボ転写によって生成され得る。かかるＤＮＡ配列は、Ｔ７またはＳＰ６ポリメラーゼプロモーターなどの好適なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを組み込む多種多様なベクターに組み込まれ得る。例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｖｉｅｗｓ－－Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．１（１）１９８６を参照されたい。
本開示のオリゴヌクレオチドへの様々な修飾は、細胞内安定性および半減期を増加させる手段として導入することができる。考えられる修飾としては、限定されないが、分子の５’末端および／または３’末端に対するリボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドの隣接配列の付加、またはオリゴヌクレオチド骨格内のホスホジエステラーゼ結合以外のホスホロチオエートもしくは２’－Ｏ－メチルの使用が挙げられる。
多種多様な標的分子に結合するアプタマー核酸配列は、容易に作製される。本開示のアプタマー核酸配列は、完全にＲＮＡまたは部分的にＲＮＡ、または完全にもしくは部分的にＤＮＡおよび／または他のヌクレオチド類似体から構成され得る。アプタマーは、典型的には、ＳＥＬＥＸ（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）として知られる既知のインビボまたはインビトロ（最も典型的には、インビトロ）選択技術を用いることによって、特定のリガンドに結合するように開発される。アプタマーを作製する方法は、例えば、Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４６：８１８，Ｔｕｅｒｋ ａｎｄ Ｇｏｌｄ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：５０５、米国特許第５，５８２，９８１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／２００４０号、米国特許第５，２７０，１６３号、Ｌｏｒｓｃｈ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３３：９７３、Ｍａｎｎｉｒｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３６：９７２６、Ｂｌｉｎｄ（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：３６０６－３６１０、Ｈｕｉｚｅｎｇａ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３４：６５６－６６５、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５４５０６号、第ＷＯ９９／２７１３３号、および第ＷＯ９７／４２３１７号、ならびに米国特許第５，７５６，２９１号に記載される。
ＩＶ．ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂのアンタゴニスト
Ｉ型受容体ＡＣＶＲ１およびＩＩ型受容体ＡＣＶＲ２タンパク質（例えば、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ）のアンタゴニストは、ＦＯＰを治療するために提供される。かかるアンタゴニストは、他の機構の中で特に、（ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡもしくはＡＣＶＲ２Ｂに対する抗体のように）受容体に直接的に結合することによって、または間接的にリガンドもしくは対抗受容体に結合し、リガンドもしくは対抗受容体が（ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡもしくはＡＣＶＲ２Ｂの融合タンパク質のように）ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡもしくはＡＣＶＲ２Ｂに結合することを阻害することによって、受容体に拮抗することができる。ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂのアンタゴニストも、アクチビンＡに結合し得る。
本明細書で提供されるＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、アンタゴニストを受けなかった対照細胞または動物モデルと比較して、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂの活性を少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれより多く阻害または低減することができる。
アクチビンＡの任意のアンタゴニストは、ＦＯＰを治療するための方法において、単独で、またはＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂのうちの１つ以上のアンタゴニストと組み合わせて使用することができる。アンタゴニストは、例えば、細胞外ドメイン、アンタゴニスト抗体、または小分子阻害剤などのアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、またはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドを含むことができる。
Ａ．ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドの細胞外ドメイン
アンタゴニストには、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、およびＡＣＶＲ２Ｂタンパク質、ならびにそれぞれＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、およびＡＣＶＲ２Ｂの少なくとも１つの活性を阻害するのに有効なそれらの断片が含まれる。かかるアンタゴニストとしては、典型的には、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡもしくはＡＣＶＲ２Ｂの細胞外ドメインまたはその一部が挙げられる。好ましくは、かかる細胞外ドメインは、膜貫通領域および細胞質領域を完全にまたは実質的に含まない（すなわち、これらの領域からの任意の残存する残基は、細胞外ドメインの機能に有意な影響を及ぼさない）。言い換えれば、かかるアンタゴニストのＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２ＢまたはＡＣＶＲ１構成要素は、上で定義されるようなＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２ＢまたはＡＣＶＲ１の細胞外ドメイン全体またはそれらの一部からなるか、またはそれらから本質的になる。かかるアンタゴニストは、以下にさらに記載されるようなＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２ＢまたはＡＣＶＲ１とは異なる他の構成要素を含んでいてもよく、または含んでいなくてもよい。かかる細胞外ドメインは、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含まないか、または実質的に含まず、これらは可溶性である。かかる細胞外ドメインは、可溶性リガンドまたは対抗受容体に結合し、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂ細胞表面受容体に結合したリガンドまたは対抗受容体と効果的に競合し、それによってインビボでリガンドまたは対抗受容体の可用性を調節する（低下させる）ことによって、アンタゴニストとして機能し得る。
可溶性細胞外ドメインは、最初に、発現過程で切断されるシグナル配列で発現され得る。シグナル配列は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，７０９，６０５号に記載されるものなどのＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂのネイティブシグナル配列であり得るか、またはミツバチメリチン（ＨＢＭ）または組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）などの異なるタンパク質からのシグナル配列であり得る。代替的に、可溶性細胞外ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドは、シグナル配列なしで合成または発現され得る。
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤまたはリガンド結合ドメインは、マウスおよびヒトを含む種間で高度に保存されている。ＥＣＤは、システインリッチ領域と、Ｃ末端尾部領域と、を含有する。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤは、例えば、アクチビンＡ、ミオスタチン（ＧＤＦ－８）、ＧＤＦ－１１およびＢＭＰを含む、ＴＧＦβファミリーリガンドの多様なグループに結合する。例えば、Ｓｏｕｚａ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ２２（１２）：２６８９－２７０２を参照されたい。
ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドならびに可溶性ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドの例としては、米国特許第７，８４２，６３３号、米国特許第７，９６０，３４３号、ならびに米国特許第７，７０９，６０５号に開示されるものが挙げられ、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２ＢポリペプチドのＥＣＤは、バリアントポリペプチドが、変化したリガンド結合特性（例えば、結合特異性または親和性）を有するように変異させることができる。いくつかのバリアントＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドは、特定のリガンドに対する変化した結合親和性（例えば、上昇または低下）を有する。バリアントは、天然に存在するＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、またはＡＣＶＲ２Ｂ配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、生物学的活性を保持し、したがって、本明細書の他の場所に記載されるＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、またはＡＣＶＲ２Ｂ活性を有する。ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂの活性バリアントおよび断片は、例えば、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，８４２，６３３号、米国特許第７，９６０，３４３号、および米国特許第７，７０９，６０５号に記載されている。
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂ活性を測定するためのアッセイは、例えば、米国特許第７，８４２，６３３号、米国特許第７，９６０，３４３号、および米国特許第７，７０９，６０５号に開示されている。例えば、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドバリアントを、リガンドに結合する能力について、またはＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂ受容体タンパク質に対するリガンドの結合を防止する能力についてスクリーニングすることができる。
Ｂ．融合タンパク質
上述のＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドならびに１つ以上の融合ドメインの少なくとも一部分を有する融合タンパク質として発現することができる。
融合ドメインには、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、または融合タンパク質の安定化、可溶化、単離もしくは多量体化に有用であり得る任意の融合ドメインが含まれる。
免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインは、融合タンパク質のための好ましいドメインである。免疫グロブリンのＦｃ部分との融合は、広範囲のタンパク質に所望の薬物動態特性を付与する（例えば、タンパク質の安定性および／または血清半減期を増加させる）。したがって、本開示は、免疫グロブリンのＦｃドメインに融合されたＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、および／またはＡＣＶＲ２Ｂの少なくとも１つのＥＣＤを含む融合タンパク質を提供する。
本発明の方法で使用するためのＦｃドメインは、任意の免疫グロブリンに由来し得る。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む様々なクラスの免疫グロブリンのいずれかを使用することができる。ＩｇＧクラス内には、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む、異なるサブクラスまたはアイソタイプが存在する。一実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ分子のＦｃドメインを含む。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１分子に由来する。免疫グロブリン分子は、例えば、哺乳動物、げっ歯類、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、またはウサギを含む、任意の動物型であってもよい。一実施形態では、免疫グロブリンＦｃドメインは、哺乳動物由来である。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒト由来である。さらに別の実施形態では、Ｆｃドメインは、マウスまたはラットなどのげっ歯類由来である。特定の実施形態では、融合タンパク質のＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１由来である。
本明細書に提供されるＦｃ融合タンパク質は、当該技術分野で知られる任意の方法によって作製され得る。Ｆｃ融合タンパク質は、少なくともＣＨ２およびＣＨ３領域、典型的にはヒンジ領域の少なくとも一部分を含み得る。ＣＨ１領域は、存在することができるが、典型的には融合タンパク質においては省略される。
融合は、免疫グロブリン定常ドメインのＦｃ部分内の任意の部位で行われ得る。融合は、定常ドメインのＦｃ部分のＣ末端に対して、または重鎖のＣＨ１領域に対してすぐのＮ末端に対して行われ得る。Ｆｃ融合タンパク質の生物学的活性、分泌または結合の特徴を最適化するために特定の部位を選択することができる。
いくつかの場合では、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤをコードする核酸は、免疫グロブリン定常ドメイン配列のＮ末端をコードする核酸に対してＣ末端に融合される。他の場合には、Ｎ末端融合も可能である。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤを、免疫グロブリン定常ドメイン配列のＮ末端およびＣ末端の両方に融合させることも可能である。
免疫グロブリン融合物の産生については、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，４２８，１３０号、米国特許第５，８４３，７２５号、米国特許第６，０１８，０２６号、およびＷＯ２００５／０７０９６６号も参照されたい。
融合タンパク質は、例えば、融合タンパク質をコードする核酸の組換え発現によって生成することができる。例えば、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤをコードする核酸を、Ｆｃドメインをコードする核酸に融合させることによって作製され得る。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤ核酸は、Ｆｃドメインをコードする核酸のＮ末端に融合され得るか、またはＦｃドメインをコードする遺伝子のＣ末端に融合され得る。代替的に、ＥＣＤは、Ｆｃドメイン内の任意の位置で融合され得る。
ＥＣＤ融合タンパク質は、リンカーも含み得る。Ｆｃ融合タンパク質の場合、リンカーは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、またはＡＣＶＲ２ＢＥＣＤとＦｃドメインとの間に位置し、任意選択的に、ヒンジ領域の一部またはすべてを置き換えることができる。リンカーは、比較的二次構造を有しない１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、５０個、またはそれより多いアミノ酸であり得る。リンカーは、グリシンおよびプロリン残基が豊富であってもよく、例えば、トレオニン／セリンおよびグリシンの反復配列（例えば、ＴＧ４またはＳＧ４反復）を含有することができる。
２つ以上のＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによって一緒に接続され得る。かかる場合、リンカーをＥＣＤ間に配置することができるか、またはリンカーをＦｃドメイン間に配置して、融合タンパク質を一緒に接続することができる。例えば、１、２、３、４またはそれよりも多くのＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ Ｆｃ融合タンパク質を一緒に連結することができる。
ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤ融合タンパク質の例は、米国特許第７，８４２，６３３号、米国特許第７，９６０，３４３号、ならびに米国特許第７，７０９，６０５号に開示されるものが記載されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＡＣＶＲ２Ａアンタゴニストの一例は、ソタテルセプト（Ｓｏｔａｔｅｒｃｅｐｔ）として知られている（ＡＣＥ－０１１とも呼ばれる）。ソタテルセプトは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに融合したＡＣＶＲ２ＡのＥＣＤを含有し、Ｃａｒｒａｎｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ．１６５（６）：８７０－８７２に詳細に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの一例は、ＡＣＥ－０３１として知られている。ＡＣＥ－０３１は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに融合したＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤを含有し、Ｓａｋｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２７）：２１０３７－２１０４８に詳細に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＣＶＲ１ ＥＣＤ融合タンパク質の例、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＢｅｒａｓｉ，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ，２９（４）：１２８－１３９に開示されているものは、既知である。
Ｃ．ハイブリッドＥＣＤ融合タンパク質
ハイブリッドまたは多重特異性ＥＣＤ融合タンパク質アンタゴニストも提供される。ハイブリッドＥＣＤ融合タンパク質は、２つ以上のＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤの組み合わせを含み得る。例えば、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤの１、２、３、４個またはそれよりも多くの分子を含み得る。一実施形態では、アンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤに連結されたＡＣＶＲ２Ａ ＥＣＤを含む。さらなる実施形態では、アンタゴニストは、Ｆｃドメインをさらに含む。
一実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ２Ａ ＥＣＤの１つ以上の分子と、ＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤの１つ以上の分子と、を含み得る。別の実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１ ＥＣＤの１つ以上の分子と、ＡＣＶＲ２Ａ ＥＣＤの１つ以上の分子と、を含み得る。別の実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１ ＥＣＤの１つ以上の分子と、ＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤの１つ以上の分子と、を含み得る。
一実施形態では、融合タンパク質は、１つ以上のＡＣＶＲ２Ａ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質と、一緒に複合体化される１つ以上のＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質と、を含む。別の実施形態では、融合タンパク質は、１つ以上のＡＣＶＲ１ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質と、一緒に複合体化される１つ以上のＡＣＶＲ２Ａ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質と、を含む。別の実施形態では、融合タンパク質は、１つ以上のＡＣＶＲ１ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質と、一緒に複合体化される１つ以上のＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質と、を含む。かかる場合、融合タンパク質は、そのＦｃドメインを介して、例えば、少なくとも１つのジスルフィド結合によって、またはリンカー配列によって、一緒に接続され得る。代替的に、融合タンパク質のＥＣＤ部分は、リンカー配列によって一緒に接続され得る。
一実施形態では、アンタゴニストは、第１のＦｃドメインに融合されたＡＣＶＲ２Ａ ＥＣＤと、第２のＦｃドメインに融合されたＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤと、を含む。かかる場合、Ｆｃドメインは、互いに複合体化され得る。別の実施形態では、アンタゴニストは、各々がＦｃドメインに融合された、ＡＣＶＲ２ＡとＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤとの間のリンカーを含む。
融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、および／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストをタンデム形式で生成するように構築され得る。一実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、および／またはＡＣＶＲ２Ｂからの２つ以上のＥＣＤをタンデムに含み、続いてＦｃドメインを含む。いくつかの場合では、タンデムに配置されたＥＣＤは、リンカー配列によって分割されている。かかるタンデム融合タンパク質は、１、２、３、４個またはそれよりも多くのＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂ ＥＣＤを含み得る。
Ｄ．抗体アンタゴニスト
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、これらの受容体のいずれかに対する（言い換えれば、それに特異的に結合する）抗体、好ましくは細胞外ドメイン内のエピトープを有する抗体を含む。抗体または融合タンパク質のその標的抗原に対する特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ－１の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能なほど大きさが大きく、少なくとも１つの非関連標的に生じる非特異的結合と区別可能である。抗体を調製するための方法は、当技術分野で既知である。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７、およびＨａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照されたい。
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、および／またはＡＣＶＲ２Ｂの活性を阻害または低減する任意の抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）を使用することができる。かかるＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂ抗体には、例えば、米国特許第８，４８６，４０３号、米国特許第８，１２８，９３３号、ＷＯ２００９／１３７０７５、およびＬａｃｈ－Ｔｒｉｆｉｌｉｅｆｆ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３４（４）：６０６－６１８に開示されている抗体が含まれ、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの抗体のいずれかのヒト化形態、キメラ形態、およびベニヤ化形態は、それらとの結合と競合する抗体であるため、含まれる。
一実施形態では、抗体は、抗ＡＣＶＲ２Ａ抗体である。別の実施形態では、抗体は、抗ＡＣＶＲ２Ｂ抗体である。他の実施形態では、抗体は、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂの両方に対する二重特異性抗体であり得る。別の実施形態では、抗体は、抗ＡＣＶＲ１抗体である。他の実施形態では、抗体は、ＡＣＶＲ１およびＡＣＶＲ２Ａの両方に対する、またはＡＣＶＲ１およびＡＣＶＲ２Ｂの両方に対する二重特異性抗体であり得る。
Ｅ．小分子アンタゴニスト
アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂのアンタゴニストもまた、低分子アゴニストであり得る。かかる小分子アンタゴニストは、アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂの活性を阻害し得る。ＡＣＶＲ１の小分子アンタゴニストとしては、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＭｏｈｅｄａｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．８：１２９１－１３０２に記載されるＬＤＮ－２１２８５４が挙げられる。
Ｖ．スクリーニングアッセイ
本明細書に提供される様々なアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、およびそれらのバリアントまたは断片の活性は、様々なアッセイでスクリーニングすることができる。例えば、ＡＣＶＲ１および／もしくはＡＣＶＲ２ポリペプチドに対するリガンドの結合を阻害する能力について、かつ／またはＡＣＶＲ１もしくはＡＣＶＲ２受容体の活性を阻害する能力について、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、ならびにそれらのバリアントは、リガンドに結合する能力、またはＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡもしくはＡＣＶＲ２Ｂ受容体に結合する能力についてスクリーニングすることができる。
ＡＣＶＲ１またはＡＣＶＲ２アンタゴニストまたはそのバリアントもしくは断片の活性は、インビトロまたは細胞系アッセイで試験することができる。インビトロ結合アッセイおよび受容体活性の阻害を測定するためのアッセイは、周知である。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの活性を測定するための様々なアッセイが、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，８４２，６６３号に詳細に記載されている。
ＡＣＶＲ１またはＡＣＶＲ２ポリペプチドとその結合タンパク質との間の複合体形成を調節するアンタゴニストの能力は、様々な技術によって検出することができる。例えば、複合体の形成の調節は、例えば、イムノアッセイによって、またはクロマトグラフィー検出によって、放射標識された（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈ）、蛍光標識された（例えば、ＦＩＴＣ）、または酵素的に標識されたＡＣＶＲ１もしくはＡＣＶＲ２ポリペプチドまたはその結合タンパク質などの検出可能な標識されたタンパク質を使用して定量化することができる。
ＡＣＶＲ１またはＡＣＶＲ２アンタゴニストがＡＣＶＲ１またはＡＣＶＲ２受容体媒介性シグナル伝達を阻害する能力を監視することができる。例えば、Ｓｍａｄ活性化などの下流のシグナル伝達の効果は、Ｓｍａｄ応答性レポーター遺伝子を使用して監視することができる。
ＡＣＶＲ１および／またはＡＣＶＲ２アンタゴニストおよびそのバリアントまたは断片は、インビボアッセイにおいて活性についてスクリーニングすることもできる。例えば、ＡＣＶＲ１またはＡＣＶＲ２アンタゴニストまたはそのバリアントを、ＦＯＰのマウスモデルにおいてＦＯＰを治療する能力（例えば、異所性骨形成を減少させる能力）についてスクリーニングすることができる。Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］をコードする条件付き対立遺伝子を保有するトランスジェニックノックインマウスが開発されている。これらのＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋マウスは、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ１４／２０７，３２０およびＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２６５８２に記載されている。この対立遺伝子は、Ｃｒｅリコンビナーゼによる活性化後にのみＲ２０６Ｈバリアントを発現する。これにより、異なる型のＣｒｅドライバーラインを使用することにより、特定の組織で、特定の時間でのＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］発現のＣｒｅ依存的な活性化が可能になる。このようにして、得られたマウスはまた、Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］の非調節ノックイン対立遺伝子で観察された周産期致死率を回避する。若年マウスまたは成人マウスにおけるＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］発現の活性化は、異所性骨形成を引き起こす。例えば、Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）Ｓｏｒ遺伝子座に導入されており、したがって構成的および全世界的に発現されるＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウス（ＣｒｅＥＲｔ２は、タモキシフェン調節性リコンビナーゼである）（Ｆｅｉｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．２３７（３）：７５２－７を参照されたい）は、タモキシフェンに曝露した後にＦＯＰを発現する。簡潔に述べると、タモキシフェンが存在しない状態では、ＣｒｅＥＲｔ２は不活性である。タモキシフェンは、Ｃｒｅの発現を活性化させ、次いでＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋に作用して、これをＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］／＋に変換し、それによってマウスの遺伝子型を変換して、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］であるＦＯＰ患者の遺伝子型を反映する。Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］対立遺伝子は、Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］を発現し、これは、Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスにおけるＦＯＰの進行を引き起こすのに十分である。これは、従来のＡｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］ノックインマウスＡｃｖｒ１ｔｍ１Ｅｍｓｈで経験した胚の致死性を回避する（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｊａｘ．ｏｒｇ／ａｌｌｅｌｅ／ｋｅｙ／８２８１５３）。タモキシフェン治療後、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストまたは対照は、Ａｃｖｒ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスおよび異所性骨形成について監視する動物に投与することができる。Ｃｈａｋｋａｌａｋａｌ ＳＡ，ｅｔ ａｌ．（２０１２０ Ａｎ Ａｃｖｒ１ Ｒ２０６Ｈ ｋｎｏｃｋ－ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｈａｓ ｆｉｂｒｏｄｙｓｐｌａｓｉａ ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖａ．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ．２７（８）：１７４６－５６を参照されたい。このアッセイは、以下の実施例に詳細に記載される。
ＶＩ．進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）
ＦＯＰは、異所性骨化が、骨格外部位（例えば、結合組織）で組織学的および生体力学的に「正常な」骨を形成する、稀な遺伝性障害である。この障害は、反復発作性であるが、累積的であり、重症度が増加していく永久的な障害を引き起こす。ＦＯＰは、苛酷な進行性の非常に稀な遺伝性障害であり、筋肉、腱、および靭帯が、骨によって徐々に置き換わる（異所性骨化（ＨＯ）として知られているプロセス）。顎、脊椎、および胸郭のＨＯは、発話し、食べ、または呼吸することを困難にし、体重減少を引き起こし、運動性の喪失および骨格の変形を悪化させる可能性がある。ＦＯＰを有する人々は、「フレアアップ」として知られる反復発作性の局所的炎症も経験するが、ＨＯは、無症候性で、および症状に関連して起こり得る。ＦＯＰを有する人々のほとんどは、３０歳までに車椅子に束縛され、生存年齢の中央値は、およそ４０歳である。死亡は、ＨＯから生じる肺炎、心不全、および誤嚥などの合併症、ならびに胸部、頸部、および顎の運動性の喪失から生じるものが多い。
ＦＯＰの世界的な有病率は、およそ１／２，０００，０００である。ＦＯＰと診断された患者は、世界中でおよそ８００～１０００人であり、他の多くは未診断または誤診のままであると考えられている。ＦＯＰには、民族的、人種的、性別的、または地理的な偏りはない。ＦＯＰは、極めて障害を引き起こす疾患であるだけではなく、寿命がかなり短い状態でもある。
ＦＯＰの特徴としては、例えば、親指の先天性奇形、軟骨内骨化を介する炎症および異所性骨の進行性の形成を伴う、頭部、頸部、および／または背中の痛みのある軟組織の腫れを特徴とするフレアアップが挙げられる。
ＦＯＰは、親指の奇形の存在に基づいて、臨床的に疑うことができる。Ｘ線または骨スキャンなどの診断テストは、親指の異常を立証し、異所性骨化の存在を確認することができる。ＦＯＰの診断はまた、遺伝子検査によって、例えば、ＡＣＶＲ１遺伝子内の６１７Ｇ～Ａ（Ｒ２０６Ｈ）変異を検出することによって確認することができる。
ＦＯＰは、異所性骨化の他の状態を含む他のいくつかの障害と誤診されるのが一般的である。ＦＯＰは、例えば、孤発性の先天性奇形、リンパ浮腫、軟組織肉腫、デスモイド腫瘍、侵襲性若年性線維腫症、若年性ブニオン、孤発性の短指症、進行性骨異形成および異所性骨化を含む障害からの鑑別診断によって区別されるべきである。親指の先天性奇形および痛みのある軟組織のフレアアップの存在を使用して、ＦＯＰを他の疾患から鑑別することができる。
ＦＯＰを有する患者は、親指の先天性奇形を有するが、それ以外は出生時には正常であるように見える。ＦＯＰに関連するフレアアップは、人生の最初の１０年間に始まる。フレアアップは、例えば、軟部組織損傷、転倒、疲労、ウイルス感染症、または筋肉内注射によって引き起こされ得る。フレアアップの結果は、靭帯、骨格筋、または腱などの軟組織が異所性骨に変化することである。
ＦＯＰに対する以前の療法的治療、またはＦＯＰに関連するＨＯの予防または回復に対する以前の療法的治療は存在しなかった。ＦＯＰは、安全性の向上、および傷害を最小限に抑えるための戦略、筋肉内注射の回避、歯科治療を受ける際の注意などの予防策によって管理された。フレアアップの最初の２４時間以内に開始された高用量コルチコステロイド治療は、フレアアップに関連する炎症および浮腫を低減するのに役立ち得る。異所性骨を除去する手術戦略は、逆効果であり、新しい外傷誘発性異所性骨化を引き起こすため、推奨されない。
「新しい異所性骨化」、「新しい異所性骨化病変」、「新しい骨病変」、または「新しい病変」は、本明細書で互換的に使用される場合、例えば、アクチビンＡアンタゴニストの投与前、またはアクチビンＡアンタゴニストの投与時に、対象において既存ではない異所性骨化を指す。一実施形態では、新しい異所性骨化は、アクチビンＡアンタゴニストの投与後に予防されてもよく、またはその体積が低減してもよい。一実施形態では、新しい異所性骨化は、既存の異所性骨化を除去するための手術を受けた後に、対象において発達し得る（およびアクチビンＡアンタゴニストの投与は、このような発生を予防し得る）。新しい異所性骨化病変の発生は、当該技術分野で標準的な技術を用いて測定／決定することができる。例えば、病変は、本明細書でより詳細に論じられるように、例えば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）の使用によって決定することができる。
新しい異所性骨化病変の「強度」および「重症度」は、例えば、その活動性、強度、体積、１日平均疼痛、成長および石灰化の速度、痛みのあるフレアアップの発生、および／または新しい異所性骨化病変の数の観点で、新しい異所性骨化病変の形成を分析するために使用される有害表現型のいずれか１つ以上を指す。新しい異所性骨化病変の強度、重症度、または活動性は、例えば、１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴを用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）の使用によって決定することができる。例えば、Ｂｏｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１９（Ｂｏｎｅ．２０１９ Ｊｕｌ；１２４：１－６、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、ＦＯＰにおけるＨＯ成長の予測因子としての１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴの使用を記載し、高強度１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴシグナルに特異的に関連する活動性ＨＯ病変の評価の基礎として機能する。一実施形態では、病変活動性（ＬＡ）＝病変における１８Ｆ－ＮａＦの総シグナル。
単一の連続標的または新しい異所性骨化病変の体積は、当該技術分野における１つ以上の既知の方法によって測定され得る。一実施形態では、体積コンピュータ断層撮影（ＣＴ）を使用して、異所性骨形成の変化を測定し、新しい異所性骨化病変の体積を決定することができる。
総病変活動性（ＴＬＡ）は、本明細書で使用される場合、ＴＬＡ＝すべての標的の病変活動性と、所与の時点での患者の新しい病変との患者レベルでの合計として定義され、ＨＯ負荷の成長および石灰化の尺度である。
「骨成長および石灰化活性の速度」は、異所性骨形成の変化を指す。一実施形態では、１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴを使用して、骨成長および石灰化活性の高感度の特異的な全身定量的測定値を提供することができる。別の実施形態では、１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴを用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）およびコンピュータ断層撮影（ＣＴ）を使用して、骨成長および石灰化活性の変化を測定することができる。
「１日平均疼痛－ＮＲＳ」は、疼痛管理のための０～１０の数値評価尺度（ＮＲＳ）の使用によって、各週の１日の疼痛を平均化することを指す。疼痛強度の評価は、臨床疼痛研究におけるコア転帰ドメインの一つと考えられる（Ｄｗｏｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００５、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。数値評価尺度（ＮＲＳ）は、疼痛の強度を推定するために利用可能な最良の単一項目の方法の１つとみなされる（参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれるＪｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９、Ｂｒｅｉｖｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０００）。ＮＲＳは、本明細書に開示されるすべての病変活動性に関連して、０～１０のランキング尺度を使用して疼痛強度を評価し、０は「痛みなし」を表し、１０は「耐えがたい痛み」または匹敵する状況を表す。
「フレアアップ」は、異所性骨化または新しい異所性骨化に先立つか、またはそれに伴い得る、疼痛性および／または浮腫性の腫れを指す。特筆すべきことに、異所性骨化および慢性疾患の進行は、フレアアップが存在しない状態でも報告されている。フレアアップは、ＨＯに関連するかどうかにかかわらず、ＦＯＰを有する患者にとって重大な負担である。アクチビンＡアンタゴニストの投与後のフレアアップの頻度および強度の低減は、ＦＯＰにおけるフレアアップが、アクチビンＡに関連していることを示す。
「既存の病変」は、例えば、投与前および／または投与時に対象に以前から存在し、新しい異所性骨化病変ではない病変を指す。一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストをヒト対象に投与することは、対象の既存の病変に影響を及ぼさない。一実施形態では、ヒト対象への有効量のアクチビンＡアンタゴニストの投与は、投与前の対象における既存の病変の数と比較して、対象における既存の病変の数に影響を及ぼさない。一実施形態では、ヒト対象への有効量のアクチビンＡアンタゴニストの投与は、投与前の対象における既存の病変の体積と比較して、対象における既存の病変の体積に影響を及ぼさない。別の実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することは、投与前の対象における既存の病変の強度または重症度と比較して、既存の病変の強度または重症度を低減しない。一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストをヒト対象に投与することは、対照対象と比較して、既存の病変の異所性骨化病変の成長の速度および／または既存の病変の石灰化を低減しない。一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストをヒト対象に投与することは、対照対象と比較して、既存の病変の数を低減しない。一実施形態では、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストをヒト対象に投与することは、対照対象と比較して、既存の病変の強度または活性を低減しない。
ＶＩＩ．治療の方法
ＦＯＰを治療する方法であって、ＦＯＰを有する対象に、治療有効量のアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、および／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストを投与することを含む、方法が本明細書に提供される。一実施形態では、ＦＯＰは、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することによって治療される。一実施形態では、ＦＯＰは、治療有効量のアクチビンＡに対する抗体を投与することによって治療される。一実施形態では、治療有効量のＡＣＶＲ２ＡアンタゴニストおよびＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストが投与される。さらなる実施形態では、ＡＣＶＲ２Ａアンタゴニストは、Ｆｃ融合タンパク質であり、ＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、Ｆｃ融合タンパク質である。
一態様では、本開示は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の強度または重症度を低減する方法であって、本方法が、ＦＯＰを有する対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、ヒト対象における新しい異所性骨化病変の強度または重症度は、アクチビンＡアンタゴニストを投与されていないヒト対象と比較して、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％低減される。
ＦＯＰを有する対象を「治療すること」は、ＦＯＰを有する対象への治療有効量のアクチビンＡに対する抗体の投与を意味し、その目的は、ＦＯＰの１つ以上の症状の状態を治し、治癒し、軽減し、緩和し、変化させ、矯正し、改善し、向上させるか、または影響を与えることである。
「対象」は、ＦＯＰを治療することを望む任意の動物（すなわち、哺乳動物）、例えば、ヒト、霊長類、げっ歯類、例えば、マウスおよびラット、農業動物および家畜化された動物、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジなどである。本方法のいずれにおいても、対象は哺乳動物であってもよく、好ましくはヒトであってもよい。
「対照」は、対象の試料、測定値、または値と比較するための参照として機能する試料、測定値、または値を指す。例えば、対照は、アクチビンＡアンタゴニストの投与前に対象から採取されるか、または測定することができる。別の実施形態では、対照は、アクチビンＡアンタゴニスの投与時に、対象から測定または採取することができる。対照は、同様の個体の集団から集められた平均測定値または値を表すこともできる。別の実施形態において、対照は、疾患または状態（例えば、ＦＯＰ）を有する個体の集団から集められた平均値または中央値または測定値であり得る。別の実施形態では、対照は、健康な集団、例えば、ＦＯＰを有しない集団から集められた平均値または中央値または測定値であり得る。当業者は、対照が、本明細書に開示される任意の数のパラメータ、例えば、ＨＯ病変体積、新しいＨＯ病変数などの評価のために設計され得ることを認識するであろう。
治療有効量のアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、ＦＯＰの少なくとも１つの症候または症状において陽性応答を引き起こすアンタゴニストの投与の用量、頻度、および投与経路の組み合わせを意味する。陽性応答は、ＦＯＰの少なくとも１つの症候または症状の悪化を低減し、除外し、改善し、阻害するか、または遅らせることを含み得る。陽性応答の対象となり得るＦＯＰの症候または症状としては、例えば、異所性（ｅｃｔｏｐｉｃ）もしくは異所性（ｈｅｔｅｒｏｔｏｐｉｃ）の骨形成、ＦＯＰフレアアップ、またはフレアアップに関連する疼痛および腫れが挙げられる。治療有効量は、治療前後の症候および症状を比較することによって、単一の患者において評価することができる。治療後に少なくとも１つの症候および症状が陽性応答を与える場合、量が有効であるとみなされる。治療有効量は、代替的にまたは追加的に、本開示のアンタゴニストまたは複数のアンタゴニストで治療される対象の集団の症候および症状を、治療を受けていない対象の対照集団と比較することによって評価することができる。かかる比較の対象は、動物モデル、または臨床試験（例えば、第Ｉ相、第ＩＩ相、第ＩＩａ相、第ＩＩｂ相、または第ＩＩＩ相）におけるヒト対象であり得る。少なくとも１つの症候および症状において、集団間に統計的に有意な陽性応答が存在する場合、量が有効であるとみなされる。
一態様では、本開示は、ＦＯＰを有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を予防する方法であって、本方法が、ヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによってヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を予防する、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、ＦＯＰを有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の強度または重症度を低減する方法であって、本方法が、ヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによってヒト対象において新しい異所性骨化病変の強度または重症度を低減する、方法を提供する。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも５～８０％、少なくとも１０～８０％、少なくとも２０～８０％、少なくとも３０～８０％、少なくとも４０～８０％、少なくとも５０～８０％、少なくとも６０～８０％、少なくとも７０～８０％、少なくとも５～７０％、少なくとも５～６０％、少なくとも５～５０％、少なくとも５～４０％、少なくとも５～３０％、少なくとも５～２０％、または少なくとも５～１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも６０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも７０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも１０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも２０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも３０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも４０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも６０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも７０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～７０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～６０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度または重症度の少なくとも５～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも５～８０％、少なくとも１０～８０％、少なくとも２０～８０％、少なくとも３０～８０％、少なくとも４０～８０％、少なくとも５０～８０％、少なくとも６０～８０％、少なくとも７０～８０％、少なくとも５～７０％、少なくとも５～６０％、少なくとも５～５０％、少なくとも５～４０％、少なくとも５～３０％、少なくとも５～２０％、または少なくとも５～１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも１５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも２５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも６０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも７０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも１０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも２０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも３０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも４０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも６０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも７０～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～７０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～６０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、異所性骨化病変の総病変活動性の少なくとも５～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２倍、０．５倍、１倍、１．５倍、２倍、３倍、０．２～３倍、０．５～３倍、１～３倍、１．５～３倍、２～３倍、２．５～３倍、０．２～２．５倍、０．２～２倍、０．２～１．５倍、０．２～１倍、または０．２～０．５倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．５倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約１倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約１．５倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約２倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約２．５倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２～３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．５～３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約１～３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約１．５～３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約２～３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約２．５～３倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２～２．５倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２～２倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２～１．５倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２～１倍の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２～０．５倍の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５～５０％、少なくとも１０～５０％、少なくとも２０～５０％、少なくとも３０～５０％、少なくとも４０～５０％、少なくとも５～４０％、少なくとも５～３０％、少なくとも５～２０％、または少なくとも５～１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも１５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも２５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも１０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも２０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも３０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも４０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５～４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５～３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５～２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５～５０％、少なくとも１０～５０％、少なくとも２０～５０％、少なくとも３０～５０％、少なくとも４０～５０％、少なくとも５～４０％、少なくとも５～３０％、少なくとも５～２０％、または少なくとも５～１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも１０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも２０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも３０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも４０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５～４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５～３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５～２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５～５０％、少なくとも１０～５０％、少なくとも２０～５０％、少なくとも３０～５０％、少なくとも４０～５０％、少なくとも５～４０％、少なくとも５～３０％、少なくとも５～２０％、または少なくとも５～１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも１０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも２０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも３０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも４０～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５～４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５～３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５～２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５～１０％の減少を示す。
一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも５～９０％、少なくとも１０～９０％、少なくとも２０～９０％、少なくとも３０～９０％、少なくとも４０～９０％、少なくとも５０～９０％、少なくとも６０～９０％、少なくとも７０～９０％、少なくとも８０～９０％、少なくとも５～８０％、少なくとも５～７０％、少なくとも５～６０％、少なくとも５～５０％、少なくとも５～４０％、少なくとも５～３０％、少なくとも５～２０％、または少なくとも５～１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも１０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも６０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも７０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも１０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも２０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも３０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも４０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも６０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも７０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも８０～９０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～８０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～７０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～６０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～５０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～４０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～３０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～２０％の減少を示す。一実施形態では、ヒト対象は、対照対象と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５～１０％の減少を示す。
ＦＯＰを治療するためのいくつかの方法では、対象は、アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂに対するアンタゴニストで治療可能な他の状態を有しておらず、その他の状態のリスクがない。例えば、対象は、ＩＩ型糖尿病、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、および骨粗しょう症のうちのいずれかまたはすべてを含まなくてもよい。
Ａ．投与の方法
アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、通常、タンパク質または小分子として直接的に投与されるが、タンパク質の場合には、かかるタンパク質をコードする核酸として投与することもできる。かかるアンタゴニストは、細胞トランスフェクション、遺伝子療法、送達ビヒクルもしくは薬学的に許容される担体による直接投与、アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／もしくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストをコードする核酸、またはアクチビンＡに対する抗体を含む組換え細胞を提供することによる間接的な送達などの様々な方法によって投与され得る。
様々な送達系、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、化合物を発現することができる組換え細胞への封入、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などを使用して、本明細書で提供される、アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、またはアクチビンＡに対する抗体を投与することができる。
投与の方法は、経腸または非経口であってもよく、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、肺経路、鼻腔内経路、眼内経路、硬膜外経路および経口経路を含む。化合物は、例えば、注入もしくはボーラス注射による、上皮もしくは粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収による、任意の好都合な経路によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身または局所であり得る。加えて、本開示の薬学的組成物を、心室内注射および髄腔内注射を含む任意の好適な経路によって中枢神経系に導入することが望ましい場合があり、心室内注射は、例えば、Ｏｍｃａｎａリザーバーなどのリザーバーに接続された心室内カテーテルによって促進され得る。肺投与はまた、例えば、吸入器またはネブライザーの使用、およびエアロゾル化剤を用いた製剤化により使用することができる。
本開示の薬学的組成物は、治療を必要とする領域に局所的に投与することができ、これは、例えば、手術中の局所注入、局所適用、例えば、注射によって、カテーテルによって、またはインプラントによって、達成することができ、上述のインプラントは、シアラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）、繊維、または市販の皮膚代替物などの膜を含む、多孔性、非多孔性、またはゲル状物質である。
別の実施形態では、活性剤は、小胞、特にリポソーム中で送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３を参照されたい）。別の実施形態では、活性剤は、制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（上記のＬａｎｇｅｒ（１９９０）を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる（Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５を参照されたい）。本開示の活性剤が、タンパク質をコードする核酸である別の実施形態では、核酸を、適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、それが細胞内になるように投与することによって、例えば、レトロウイルスベクターの使用によって（例えば、米国特許第４，９８０，２８６号を参照されたい）、または直接注射によって、または微粒子爆撃の使用によって、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクション剤でコーティングすることによって、または核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに結合して投与することによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４－１８６８）などによって、そのコードされたタンパク質の発現を促進するように、インビボで投与することができる。代替的に、相同組換えによって、発現のために核酸を細胞内に導入し、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。
Ｂ．併用療法
本明細書に提供されるアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、またはアクチビンＡに対する抗体は、互いに、または他の治療と組み合わせて投与することができる。一実施形態では、ＦＯＰを治療する方法は、ＡＣＶＲ２ＡアンタゴニストおよびＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの併用投与を伴う。別の実施形態では、ＦＯＰを治療する方法は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、およびＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの併用投与を伴う。他の実施形態では、ＡＣＶＲ１アンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストと併用投与することができる。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、別個の薬学的組成物として投与することができ、またはこれらの薬剤の組み合わせを含む単一の薬学的組成物として投与することができる。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／もしくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、またはアクチビンＡに対する抗体は、単独または組み合わせのいずれかで、１つ以上の追加の治療用化合物と組み合わせて投与することができる。併用療法は、同時の投与または交互の投与を包含し得る。加えて、この併用は、急性投与または慢性投与を包含し得る。
Ｃ．薬学的組成物
本開示はまた、本明細書に提供されるアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、またはアクチビンＡに対する抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。「薬学的に許容される」という用語は、連邦もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または動物、より特定的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されていることを意味する。「担体」という用語は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、無菌液体、例えば、水および油であってもよく、石油、動物、植物または合成由来のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む。好適な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。所望な場合、組成物はまた、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することができる。
これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、徐放性製剤などの形態をとることができる。組成物は、トリグリセリドなどの従来の結合剤および担体と共に、坐剤として製剤化することができる。経口製剤は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの医薬品グレードの標準的な担体を含むことができる。好適な薬学的担体の例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによって記載される。
一実施形態では、本組成物は、ヒトへの静脈内投与に適した薬学的組成物として、通常の手順に従って製剤化される。必要に応じて、本組成物は、注射部位の疼痛を緩和するために、可溶化剤およびリドカインなどの局所麻酔薬を含むこともできる。本組成物が注入によって投与される場合、滅菌医薬品グレードの水または生理食塩水を含有する注入ボトルで分配することができる。本組成物が注射によって投与される場合、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供して、投与前に成分を混合することができるようにすることができる。
本明細書で提供させるアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、および／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、またはアクチビンＡに対する抗体は、中性形態または塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩としては、遊離アミノ基を用いて形成されるもの、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの、および遊離カルボキシル基を用いて形成されるもの、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものが含まれる。
ＦＯＰの治療に有効な特定の経路によって投与されるアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａおよび／またはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、またはアクチビンＡに対する抗体の量および頻度（例えば、治療有効量）を、本説明に基づいた標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、インビトロアッセイを使用して、最適な投薬量範囲を特定するために役立たせることができる。製剤に使用される正確な用量はまた、投与経路、および状態の重症度に依存し、施術者の判断および各対象の状況に応じて決定されるべきである。しかしながら、非経口投与、好ましくは静脈内投与または皮下投与に好適な投薬量範囲は、一般に、体重１キログラム当たり約２０～５００００マイクログラムの活性化合物である。アクチビンＡに対する抗体の場合、好適な投薬量範囲は、１～２５ｍｇ／ｋｇ、２～２０ｍｇ／ｋｇ、５～１５ｍｇ／ｋｇ、８～１２ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇを含む。鼻腔内投与に好適な投薬量範囲は、一般に、約０．０１ｐｇ／ｋｇ体重～１ｍｇ／ｋｇ体重である。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から外挿することができる。
投与頻度はまた、他の因子の中でも特に、状態の重症度および薬剤の半減期に応じて変化するが、典型的には、毎日～四半期の間であり、例えば、週２回、週１回、隔週、月１回、２ヶ月ごとを含む。薬剤は、他の因子でも特に、患者の状態または閾値未満の薬剤の血清レベルの低下に応答して、不規則な間隔で投与することもできる。
上記または下記で引用されているすべての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号などは、各項目が、参照により組み込まれるように具体的にかつ個別に示されているのと同じ程度に、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。異なるバージョンの配列が、異なる時点でアクセッション番号と関連付けられる場合、本願の有効出願日に、そのアクセッション番号と関連付けられたバージョンを意味する。有効出願日とは、該当する場合、アクセッション番号に関する実際の出願日または優先出願の出願日のうち早い方を意味する。同様に、刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時点で公開されている場合、別に指示がない限り、本出願の有効出願日の最も近い時期に公開されたバージョンを意味する。本開示の任意の特徴、ステップ、要素、実施形態、または態様は、別途明記されない限り、任意の他のものと組み合わせて使用することができる。
実施例１：進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を有する患者における新しい骨病変活動性の形成の低減
ＦＯＰを有する対象では、骨は、正常な骨格の外側の軟組織で形成し、これは異所性（間違った場所における）骨化（ＨＯ）として知られるプロセスである。ＦＯＰを有する患者において、アクチビンＡアンタゴニスト（例えば、ガレトスマブ）を評価するために、ピボタル二重盲検プラセボ対照試験を実施した。主要エンドポイントでは、ガレトスマブは、ＣＴスキャンによって測定される場合、新しいＨＯ骨成長をベースラインから２５％低減し、より高感度のＰＥＴ骨スキャンによって測定される場合、病変成長および石灰化の平均速度を２８週間にわたって２５％低減した。ガレトスマブは、２８週間の時点でのみＰＥＴ骨スキャン結果に統計的に有意な５０％の低減を示し（事後分析）、これは主に、新しい病変の発生率および強度の有意な減少によって引き起こされる。ガレトスマブは、ＰＥＴおよびＣＴスキャンの両方によって測定される場合、新しい骨病変の発生率をおよそ９０％低減し、患者が報告したフレアアップの発生率を半分まで低減した。
このプラセボ対照試験の結果は、新しいＨＯ骨形成およびフレアアップをほぼ消滅させることができる有効な治療であり、新しい骨の発生率は９０％近く低減し、ＦＯＰを有する人々にとって画期的な結果である。これらのデータはまた、ＰＥＴ画像診断によって、ＦＯＰを有する未治療の人々が、以前に考えられていたよりもはるかに頻繁かつ広範囲にわたる病変を経験していることを示すことによって、疾患の理解を顕著に向上させる。
この試験には、ＦＯＰの臨床診断を有し、ＡＣＶＲ１遺伝子変異の文書を有する、米国および欧州から４４名の成人患者（１８～６０歳）が登録された。この試験は、ＦＯＰを有する患者におけるＨＯの変化に対するガレトスマブの効果を調査するために、１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴ画像診断およびＣＴスキャンを使用した。１８Ｆ－ＮａＦは、パジェット病および骨に関与するがんなどのいくつかの骨関連疾患における異常な骨成長、ターンオーバー、および石灰化を検出するための、高感度の、広く承認され、広範囲に使用されている骨探索ＰＥＴトレーサーである。本試験は、ランダム化二重盲検プラセボ対照治療期間（６ヶ月間）、非盲検治療期間（その間にプラセボ治療を受けた患者をガレトスマブ治療とクロスオーバーする）（６ヶ月間）、および非盲検フォローアップ治療からなる３期間の試験設計を有する。一次解析を、２８週目に記録した。
この試験からの主要な臨床結果を、以下の表１にまとめている。すべてのエンドポイントは、２８週目であり、盲検化された独立した中央判定によって評価された。
Figure 2023510270000001
Figure 2023510270000002
Figure 2023510270000003
２８週間の治療期間中、ガレトスマブは、一般に十分に忍容性であることが観察された。任意の重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、基礎疾患の重症度に関連しているとみなした。治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）は、プラセボ群および治療群の両方の１００％で発生した。その大部分は、軽度から中程度の重症度であった。ＴＥＡＥにおける顕著な不均衡には、鼻血（５０．０％対１６．７％）、および皮膚事象（脱落症［眉毛の喪失、２５．０％対０％］、ざ瘡［３０．０％対８．３％］、ならびに膿瘍、よう、毛包炎、せつを含む、皮膚感染症の混合）が含まれていた。この試験の非盲検部分における２名の治療された患者は、ドレナージのために入院を必要とする重篤な膿瘍を発症したが、ガレトスマブ治療を継続している間に解消したと報告されている。この試験の非盲検部分において１名の患者が、治療に無関係な外傷により死亡した。
プラセボに対するガレトスマブは、主要エンドポイントである８週目および２８週目の時点のベースライン平均からの総病変活動性変化率が減少し（－２４．６、ｐ ０．０７）、８週目のエンドポイントでは減少はみられなかったが、２８週目のエンドポイント（ＤＢ期間の終了）では、減少は４９％であった（名義ｐ＝０．０４３）。このことは、主に、新しい病変の発生率、強度および病変活動性の劇的な顕著な減少によって引き起こされた。新しい病変における総病変活動性（２８週のＰＥＴによって測定される）は、９７％減少し（ｐ＝０．００９）、一方、新しい病変の総体積（２８週目のＣＴによって測定される）は、９０％減少した（ｐ＝０．０１７）。患者が報告したフレアアップの大幅な減少（５１％）および治験責任医師が報告したＡＥフレアアップの大幅な減少（７６％）がみられた。ガレトスマブによる治療でも、許容可能な安全性プロファイルが示された。
アクチビンＡアンタゴニスト（例えば、ガレトスマブ）によるアクチビンＡの遮断は、新しい異常な骨形成および痛みのあるフレアアップの発生を顕著に低減することができる。これらのデータは、アクチビンＡが、ＦＯＰを有する患者におけるフレアアップおよび新しい骨病変の両方の重要なトリガーであるという仮説を強く裏付ける。
実施例２：アクチビンＡアンタゴニストは、新しい異所性骨化を（ＨＯ）を予防する
２８週間のランダム化二重盲検プラセボ対照試験（第１期間）は、アクチビンＡアンタゴニスト（例えば、ガレトスマブ）が、ＦＯＰを有するヒト対象における異所性骨形成のためのアクチビンＡ依存性シグナルを停止するかどうかを試験するために、実施された。
１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴを用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）および体積コンピュータ断層撮影（ＣＴ）を使用して、異所性骨形成の変化を測定した。１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴは、いくつかの他の疾患設定で示されており、骨石灰化活性の高感度の特異的な全身定量的測定値を提供した。Ｂｏｔｍａｎ，２０１９（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）によって公開されたデータは、ＦＯＰにおけるＨＯ成長の予測因子としての１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴの使用を裏付け、高強度１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴシグナルに特異的に関連する活動性ＨＯ病変の評価の基礎として機能する。さらに、６ヶ月にわたるＣＴによるＨＯ病変の体積評価は、ＨＯ病変の成長およびＰＥＴ検出可能な病変からＣＴ検出可能な成熟ＨＯ病変への移行の評価も可能であった。ガレトスマブは、１８Ｆ－ＮａＦの取り込みを急速に低減させ（ＰＥＴによる）、新しい異所性骨形成を予防する（ＣＴによる）ことが観察された。
この試験は、２８週の平均総病変活動性（ＰＥＴ）における５７％の低減、８週目での１８Ｆ－ＮａＦ ＳＵＶ最大における４０％の低減、およびＣＴによる総体積における６０％の差を検出するために、８０％の検定力で設計された。登録された４４名の患者の１００％が、ＰＥＴによって検出される場合、ベースラインで活動性ＨＯを有していた。この結果は、ガレトスマブが、新しい病変の出現を阻害したが、確立された病変の進行を停止させなかったことを示す（表２）。ガレトスマブは、良好な忍容性を有することも観察された。傾向がなく、疾患の重症度を反映している可能性が高いガレトスマブ治療患者において、ＳＡＥがより頻繁に発生した。ＡＥにおける顕著な不均衡には、鼻血（５０．０％対１６．７％）、および皮膚事象－脱落症（２５．０％対０％）、ざ瘡（３０．０％対８．３％）、ならびに皮膚感染症（膿瘍、よう、毛包炎、せつ）の混合が含まれていた。
研究設計の概略図（図１）に示すように、この試験は、スクリーニング／ベースライン期間（－２８日目～－１日目）、２つの６ヶ月間の治療期間、およびフォローアップ治療期間（第３期間）からなっていた。３つの治療期間は、第１期間：６ヶ月間のランダム化二重盲検プラセボ対照治療期間、第２期間：６ヶ月間の非盲検ガレトスマブ治療期間、第３期間：患者が７６週の来院を完了するまで継続するガレトスマブを用いるフォローアップ治療期間であり、この試験内でランダム化された最後の患者が２８週の来院（第１期間）を完了するまでの時間にわたって、すべてのデータが収集され、検証され、安全性および有効性の一次解析の結果は、治験依頼者にとって利用可能である。
新たなデータ（Ｅｅｋｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＭＲ ２０１７＆Ｂｏｎｅ ２０１７，Ｕｐａｄｈｙａｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＭＲ ２０１７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、ＰＥＴスキャンが、「活動性の」骨病変を特定することができることを示唆していた。新しい病変を予防するための代替物として、これらの「活動性」骨病変に対するガレトスマブの効果を研究した。したがって、主要エンドポイントは、サイズおよび強度によって評価される場合（トレーサーの評価された取り込み）、既存の骨病変および潜在的に新しい骨病変の両方において、ＰＥＴによって測定される「総病変活動性」（ＴＬＡ）を評価した。複数の他のエンドポイントは、ＰＥＴおよびＣＴの両方によって評価されるように、総病変および新しい病変を捕捉し、患者および治験責任医師によって報告されるフレアアップも捕捉した。一次解析（ＰＥＴによるＴＬＡ）、ならびに骨病変の複数の他の解析（ＣＴによるものを含む）は、ガレトスマブによる治療が、プラセボと比較して、全体的な約２５％の減少と関連していることを示した。これらの減少は、２８週目のＰＥＴまたはＣＴによって評価された新しい病変のおよそ９０％の低減によってほぼ完全に促進された。このことは、驚くべきことに、ＦＯＰ患者における新しい病変の頻度が高いことに寄与していた（１１／２４名のプラセボ患者は、各々１つの病変を有していた３／２０名のガレトスマブ患者と比較して、２８週にわたって平均で２．７の新しい病変を有していた）。また、患者が報告したフレアアップの大幅な減少（５０％）および治験責任医師が報告したＡＥフレアアップの大幅な減少（７６％）が存在した。これらのデータは、ＦＯＰ患者における新しい骨病変の形成にアクチビンＡが必要であることを示しているが、既存のＰＥＴ陽性およびＣＴ骨病変には主要な役割を果たしていないようである。
Figure 2023510270000004
画像診断
放射標識１８Ｆフッ化ナトリウムを患者に注射し、各患者の混合ＰＥＴ／ＣＴ画像を撮影した。ＰＥＴ／ＣＴ画像診断解析の詳細は、以下のように示される。
ＰＥＴ：標準化取り込み値（ＳＵＶ）は、スキャンからの放射能の測定値である。ＳＵＶ平均＝異所性骨化（ＨＯ）などの目的の領域（ＲＯＩ）における１８Ｆ－ＮａＦの平均濃度－どのように「ホット」であるかは、平均してＲＯＩである。ＳＵＶ最大＝ＲＯＩ内の最大（「最もホットな」）ピクセル。病変活動性（ＬＡ）＝病変における１８Ｆ－ＮａＦの総シグナル。ＰＥＴでの病変の全代謝体積（ＭＶ）にわたる平均ＳＵＶ。総病変活動性（ＴＬＡ）＝すべての標的のＬＡと、所与の時点での患者の新しい病変との患者レベルでの合計－ＨＯ負荷の成長および石灰化の尺度。ＴＬＡ変化％の時間加重平均（ＴＷＡ）＝複数時点にわたるＨＯの成長および石灰化の負荷における変化を評価するために使用されるＴＬＡ変化％の２８週にわたる平均。ＰＥＴ画像診断は、疾患の進行（図２Ａ）、およびＨＯ病変に対するガレトスマブの効果（図２Ｂ）を明確に示した。
ＣＴ：ＨＯ体積＝単一の連続標的または新しいＨＯ病変の体積。総ＨＯ体積＝所与の時点での患者レベルの標的およびＨＯ病変の体積の合計－測定値がＨＯ負荷を形成した。
画像診断分析からの結果は、既存の（「標的」）病変が新しい病変とは別に検査されるとき、ガレトスマブの効果がより明らかであることを示す（図３Ａ～図３Ｂ）。
有効性
ガレトスマブは、８週目および２８週目の時間点で平均化すると、ベースラインからの総病変活動性（新しいものおよび既存の両方）が減少することが観察された（－２５％、ｐ＝０．０７４）。８週目のエンドポイントでは、減少はなかった（ｐ＝０．５９２）が、２８週目のエンドポイント（ＤＢ期間の終了）では、減少は、４９％であった（名義ｐ＝０．０４３）。このことは、主に、新しい病変の発生率、活動性（ＰＥＴ）および体積（ＣＴ）の劇的な減少によって引き起こされた。新しい病変における総病変活動性（２８週のＰＥＴによって測定される）は、９７％減少し（ｐ＝０．００９）、一方、新しい病変の総体積（２８週目のＣＴによって測定される）は、９０％減少した（ｐ＝０．０１７）。すべてのエンドポイントを、事前に指定し（ＣＴによる新しいＨＯ病変を有する患者の数を除く）、盲検化された独立した中央判定によって評価された。病変を、ＰＥＴ／ＣＴ骨スキャンによって評価した。新しい病変の１００％相関を、ＣＴスキャンの同時評価を伴うＰＥＴスキャンの測定値によって決定した。また、患者が報告したフレアアップの大幅な減少（５１％）および治験責任医師が報告したＡＥフレアアップの大幅な減少（７６％）が存在した。これらのデータは、アクチビンＡが、ＦＯＰを有する患者における新しい病変の形成に必要なリガンドであるという考え方を強く裏付けている。アクチビンＡは、既存のＰＥＴ／ＣＴ病変の進行において重要な役割を果たしていないようである。したがって、アクチビンＡを遮断することで、これらの長期にわたって苦しむ患者の疾患結果を変化させる機会を提供する。
安全性
２８週の治療期間中、治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）は、プラセボ群および治療群の両方の１００％で発生した。その大部分は、軽度から中程度の重症度であった。ＴＥＡＥにおける顕著な不均衡には、鼻血（５０．０％対１６．７％）、および皮膚事象（脱落症［眉毛の喪失、２５．０％対０％］、ざ瘡［３０．０％対８．３％］、ならびに膿瘍、よう、毛包炎、せつを含む、皮膚感染症の混合）が含まれていた。
実施例３：研究設計および解釈
試験設計が他の試験とどのように異なるか
第２相のランダム化二重盲検プラセボ対照試験を実施し、ＦＯＰを有する成人における、安全性、忍容性、および静脈内ガレトスマブ（４週ごとに１０ｍｇ／ｋｇ投与される）の異所性骨形成に対する効果を評価した。これにより、外部の過去の対照と非盲検評価とに関連する潜在的な不均衡および偏りが除外される。
異所性骨化（ＨＯ）体積は、この疾患についてどのようなことを教えてくれるのか
進行性ＨＯは、ＦＯＰの決定的な特徴である。ＨＯ体積は、疾患活動性および関節が固定される可能性を反映し得る。ＨＯの位置は、患者にとって重要であり、臨床的に有意義であり得る。骨の体積は、指向性に関連しているが、病変の数および位置は、疾患活動性の重要な尺度である。この試験では、主要エンドポイントは、プラセボに対する総病変活動性に焦点を当てている。例えば、肘などの関節の新しい病変からの少量の骨は、関節を生涯にわたってロックする可能性があるが、動きの重要性が低い領域または既存のＨＯを有する領域では、顕著な量の骨が追加される場合があり、効果がかなり少ない場合がある。加えて、「平均体積」の変化の解釈は、小さな体積増加または大きな体積増加を伴う１個または２個の外れ値を含むデータセットを分析するときに困難なものになり得る。
画像診断の論理的根拠
画像診断分析
病変は、異常な骨と一致する、その密度および形態、ならびにＣＴスキャンにおいて特定されるような骨格筋、腱または靭帯と一致する位置によって、ＨＯと特定される。試料に対して盲検化された２名の独立したリーダーによって特定され、これも盲検化された独立した審査員によって確認された。彼らは皆、理事会が認定した放射線科医であった。
病変選択の基準、ならびに試験設計および画像診断分析の論理的根拠
病変選択の基準は、画像診断チャーターにおいて明確に定義され、ＦＤＡによって承認された。追加の事後画像分析を実施して、ＦＯＰの自然歴、およびＨＯ形成に対するガレトスマブの影響をよりよく理解する。「最大７病変」は、多くの病変が予想されていなかったことと、この数の病変を超えることはリーダーにとって実用的ではなかったため、明記された。病変は、正所性の骨リモデリングと比較して、ＰＥＴに関して３倍の強度を有することに基づいて選択された。
炎症性の骨軟骨腫または変形性関節症に起因する擬陽性の除外
画像診断チャーターは、理事会が認定した放射線科医であった２名の独立したリーダーおよび独立した審査員に、変性疾患、骨軟骨腫などに一致する場合はいつでも、それらの位置（例えば、関節）、またはＣＴスキャンからのそれらの特徴という観点で、非ＨＯ病変に関連するＰＥＴの領域を慎重に避けるように指示した。すべてのリーダーも、画像診断チャーターに関する訓練を受けた。
骨芽細胞活性を検出するための１８ＦＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴと比較した骨シンチグラフィー
テクネチウム－９９ｍメチレンジホスホネート（９９ｍＴｃＭＤＰ）骨シンチグラフィーは、骨芽細胞活性を検出するために広く使用されている。ＰＥＴ／ＣＴは、診断のための断面機能的画像診断および解剖学的画像診断を組み合わせた分子画像診断技術である。フッ素－１８フッ化物（１８Ｆ－フッ化物）は、骨格異常の検出に使用される高感度の骨探索ＰＥＴトレーサーである。１８Ｆ－フッ化物の取り込み機構は、９９ｍＴｃＭＤＰの取り込み機構に似ている。しかしながら、１８Ｆ－フッ化物は、より迅速な血液クリアランスおよび骨における２倍より高い取り込みを含む、より優れた薬物動態特徴を示す。１８Ｆ－フッ化物の取り込みは、血流および骨リモデリングを反映する。新しいハイブリッドＰＥＴ／ＣＴシステムの使用は、この試験のＣＴ構成要素が、機能病変の形態学的特性決定を可能にし、良性病変と転移との間のより正確な鑑別を可能にするため、１８Ｆ－フッ化物画像診断の特異性を著しく向上させた。
フッ素－１８フッ化ナトリウム陽電子放出断層撮影－コンピュータ断層撮影（１８ＦＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴ）画像診断は、９９ｍＴｃＭＤＰ骨シンチグラフィーと比較して、より高い感度およびより高い空間分解能を有する。加えて、１８ＦＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴ画像の品質がよりよくなり、より正確に定量化することができる。このことは、血漿タンパク質の結合がより低く、骨における取り込みがより高いことに起因する。
１８ＦＮａＦ ＰＥＴは、研究において一般的に使用される、より高感度の技術である。１８ＦＮａＦ ＰＥＴを、この試験におけるベンチマークとして使用して、ＣＴ画像診断が同等の結果を生み出すかどうかを評価した。このデータは、ＣＴを使用して、１８ＦＮａＦ ＰＥＴと同等の感度で疾患の進行を監視することができ、したがって、臨床実践で使用される能力を確認する。
臨床データ
この試験は、アクチビンＡを遮断し、新しい病変形成を予防するという仮説に基づいており、初期の２８週間の結果全体が奨励されている。
より長期間の５６週の試験が実施され、プラセボ患者は、これらの結果をさらに理解し、文脈に組み込むために、ガレトスマブアームに対してクロスオーバーする。ガレトスマブの主な効果は、新しい病変の予防に対する効果である。主要エンドポイントでのデータは、ＴＬＡが、ガレトスマブ群と比較して、プラセボ群においてさらに多くの新しい病変が現れたときに、治療の８週後に明らかに低減したことを優雅に示す。平均して、プラセボ群は、ガレトスマブ群と比較して、２８週の試験期間にわたって、およそ１０ｃｍ３より大きな新しいＨＯを得た（ベースラインからの平均変化１６．７ｃｍ３対６．５ｃｍ３）。
ＦＯＰを有する患者のうち高い割合が、胸部不全の結果として死亡するため、ガレトスマブによる治療が肺機能に与える影響を評価することは、興味深い。このデータは、ガレトスマブが、２８週目で新しいＨＯを予防する手段によって、プラセボと比較して、肺機能を維持することを示す。
ＦＯＰに対するガレトスマブの影響
ガレトスマブの阻害レベルは、確立されたＨＯ病変の進行を予防するか、または新しいＨＯ病変の予防のために、長期間にわたって一貫している必要がある。ＦＯＰは、進行中のＨＯを伴う慢性疾患であり、そのいくつかは無症候性であり、フレアアップとは関連しない。したがって、それを制御するために、投薬は、長期的なものである必要がある。患者の血清中の医薬のレベルは、新しいＨＯの進行または発達を防ぐために、常にアクチビンＡ飽和レベルを超える必要がある。
小児試験
５６週の第２相試験は、小児患者および成人患者の両方での評価のために実施される。
パロバロテンとは異なり、ガレトスマブを用いた前臨床データは、成長板に対する影響を示さなかった。このデータは、成人ＦＯＰ患者の正常な骨における１８ＦＮａＦの取り込みに変化がなかったことを示す。
ＦＯＰを有する成人患者において、４週間ごと（Ｑ４Ｗ）のＩＶ投与による用量レベル１０ｍｇ／ｋｇが試験されてきた。この試験で報告された有害作用（例えば、頭痛、鼻出血、皮膚および軟部組織感染症）は、患者間の薬物曝露（Ｃｍａｘ、Ｃｍｉｎ、またはＡＵＣ）に関連していないようである。小児試験における用量確認コホート（コホートＡ）の組み入れの理由は、安全性の懸念に関連するものではなく、むしろ、この試験における成人患者の有効性に関連するものと同様の小児患者における曝露を達成する各体重群（すなわち、３０ｋｇ未満、または３０ｋｇより多い患者）の用量レジメンを選択することに関連する。
ＦＯＰを有する患者における小児試験には、以下の用量レジメンが提案されている。体重が３０ｋｇ未満の患者では１５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ、体重が３０ｋｇ以上の患者では１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ。初期の試験では、ＦＯＰを有する成人患者において試験された用量であった１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗは、有効性における有益な応答および許容可能な安全性プロファイルが示された。この試験では、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ投与後、定常状態のトラフ濃度の中央値（範囲）は、ＦＯＰを有する成人患者において１２０．７（６８．１～１９９．０）ｍｇ／Ｌであった。初期の試験において、および２つのファースト・イン・ヒューマン（ＦＩＨ）試験で作成されたガレトスマブおよび総アクチビンＡの濃度データに基づいて、約５０ｍｇ／Ｌを超えるガレトスマブの濃度の維持は、ほぼ０．０５～０．０６ｍｇ／Ｌの一定レベルの総アクチビンＡによって示されるように、標的媒介性の除去経路の飽和状態と関連付けられる。１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ用量を用いて成人患者において観察される曝露は、患者の大部分において最大のターゲットエンゲージメントを伴いつつ、標的媒介性の除去経路の飽和状態を維持することによって、顕著な有効性の利益を提供すると考えられる。
ＦＯＰを有する小児患者では、成人の健康な対象およびＦＯＰを有する成人患者からのデータに基づく集団ＰＫモデルを使用したシミュレーションによれば、コホートＡについて提案された用量（体重が３０ｋｇ未満の患者では１５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ、体重が３０ｋｇ以上の患者では１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ）は、初期の試験で研究された１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ Ｑ４Ｗでの成人患者における曝露と適合することが予想される。コホートＡにおいて活性薬物を受けた８名の患者からの分析の結果に基づき、初期の試験における成人に匹敵する薬物曝露を確保するために、用量を、１つ以上の体重群において調整し得る。コホートＢ患者は、コホートＡに登録された患者における１日目～８５日目までのデータに基づいて用量を確認した後にのみ、試験薬物を受け始める。その目的は、有効性を確保するための標的飽和であるため、ＦＯＰにおいて異なる用量が探索される。小児のためのモデリングは、より小さな子供の標的飽和を満たすように、最大１５ｍｇ／ｍｌの用量を導く。子供において安全性リスクの増加を示唆する毒性試験からのデータは存在しない。
ＰＥＴスキャンおよびＣＴスキャン画像診断のための手順の概要
ＰＥＴ／ＣＴスキャンの判定は、事前指定された中央独立盲検として処理される。試験２８週の後、プラセボアームの患者は、ガレトスマブに移行し、それ以降、すべての試験参加者が、活性薬物を受ける。この試験の一次解析を実施するために、二重盲検プラセボ対照期間（第１期間）中の試験治療の割り当ては非盲検であった。しかしながら、第１期間中の個々の治療割り当ては、治験責任医師／施設スタッフに開示されず、独立した画像診断リーダーまたは画像診断審査員にも開示されないことに留意することが重要である。試験依頼者は、画像診断結果に対しても盲検化されており、５６週のデータベースロックまでスキャンにアクセスできない。これにより、画像診断リーダーは、５６週目にＰＥＴ／ＣＴスキャンの盲検分析を行うことができる。また、２８週～５６週の間、さらにその後に（ほとんどの患者は、７６週を超えている）、治験責任医師は、プラセボ対照期間中に何を受けたかについて確信することなく、試験患者の臨床評価を続ける。
実施例４：アクチビンＡアンタゴニストは、新しい異所性骨化を（ＨＯ）を予防する
研究設計
第２相のランダム化二重盲検プラセボ対照試験を、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を有する成人患者において４週ごとに（Ｑ４Ｗ）投与された１０ｍｇ／ｋｇのガレトスマブの安全性、忍容性、薬物動態、および有効性を評価するために設計した。有効性は、異所性（ＨＯ）骨形成の１８Ｆ－ＮａＦ陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）および低用量Ｘ線コンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像診断分析によって評価する。プラセボと比較して、この試験は、ａ）ガレトスマブが良好な忍容性を有し、ｂ）ガレトスマブが、ＰＥＴシグナルの低減および体積ＣＴによるＨＯの成長の阻害を示すことによって、ＨＯを低減し、ｃ）ガレトスマブが、ＰＥＴおよびＣＴによって評価される場合、新しいＨＯ病変の進行を阻害することを示すことが期待された。
この試験は、４週間のスクリーニング／ベースライン期間、６ヶ月間のランダム化二重盲検プラセボ対照治療期間（第１期間）、６ヶ月間の非盲検ガレトスマブ治療期間（第２期間）、および非盲検ガレトスマブを用いるフォローアップ治療期間（第３期間）からなる。一次解析は、すべての患者が二重盲検治療（第１期間）を完了したときに実施した。すべての一次および二次の２８週の有効性エンドポイントを、任意のＦＯＰ関連ＡＣＶＲ１変異を有する患者を含む活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ、ｎ＝４４）について、また、活動性ＨＯ ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］変異セット（ＡＨＯＣ、ｎ＝４２）について分析した。この試験の画像診断チャーターは、活動性患者を、中央判定によって評価されるように、正常な参照骨の少なくとも３倍の１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴの取り込みを示す少なくとも１つの異所性骨化病変を有している患者であると定義した。同様に、ＰＥＴおよびＣＴによる新しいＨＯ病変の特定基準は、画像診断チャーターにおいて事前に指定されていた。安全性分析は、安全性分析セットで実施され、データの締切日の時点で利用可能なすべてのデータが含まれていた。
患者の内訳
合計で４４名の患者をランダム化した（ガレトスマブアームに２０名の患者、およびプラセボアームに２４名の患者）。４３名（９８％）の患者が、二重盲検治療期間を完了した。ガレトスマブ群からの１名の患者は、発熱の有害事象に起因して、二重盲検期間中に試験を中止した（詳細については以下を参照されたい）。二重盲検期間を完了した４３名の患者は全員、非盲検の第２期間に入った。データの締切日の時点で、１２名の患者が、フォローアップ治療の第３期間に入った。第３期間の１名の患者は、転倒後の重度の頭部外傷（治療と無関係）に起因して死亡した。ＡＨＯ、ＡＨＯＣおよびＳＡＦ集団の人口統計学的特徴およびベースライン疾患特徴は、２つの治療群間でバランスをとった。
有効性結果
統計学的階層を使用して試験したすべての主要エンドポイントおよび主要副次エンドポイントの結果を表３に示す（統計学的階層の順序で）。ガレトスマブは、ＡＨＯにおいて、プラセボと比較したベースラインから、２８週にわたるベースラインからの平均総病変活動性（１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる）がおよそ２５％（ＬＳ平均差）低減した（ｐ＝０．０７４１）。事後分析により、総病変活動性の低減が、一定の速度で生じない可能性があることが示された。ベースラインから８週目までの総病変活動性の変化率は、両治療群で同様であり、ベースラインから２８週目までの総病変活動性の変化率は、プラセボと比較して、ガレトスマブ群の方が低かった（事後、ｐ＝０．０４３、図４）。他のエンドポイントに関して、ＡＨＯにおいて、プラセボと比較して、ベースラインからのおよそ２５％の低減（ＬＳ平均差）は、２８週目でのＨＯ病変の総体積（ＣＴによる）においても観察された（ｐ＝０．３７２６）。ＡＨＯＣ集団においても、同様の結果が観察された。ＡＨＯにおいて、プラセボと比較して、ガレトスマブアームにおいて１日平均疼痛の低減について、良好な傾向があった（図５）。ＡＨＯＣにおいても、同様の結果が観察された。ＰＥＴによる総病変活動性において、プラセボと比較したガレトスマブアームにおける低減、およびＣＴによるＨＯ病変の総体積の低減は、主に、新しい病変成長を低減させるガレトスマブの有効性によって促進された。
Figure 2023510270000005
 ＡＨＯ＝少なくとも１つの活動性ＨＯ病変を有する患者、ＡＨＯＣ＝少なくとも１つの活動性ＨＯ病変および古典的なＡＣＶＲ１Ｒ２０６Ｈ変異を有する患者、ＡＮＣＯＶＡ＝共分散の分析、ＭＭＲＭ＝反復測定を伴う混合モデル。２８週目に、審査された選択されたリーダーによって提供された評価を、一次解析に使用した（２８週目に審査が行われなかった場合には、リーダー１が選択された）。
ガレトスマブによる新しい病変の阻害の分析
以下のＡＨＯ集団における主要な事前に指定された副次的探索的事後解析の分析（表４）は、ＰＥＴにおける総病変活動性およびＣＴにおけるＨＯ病変の総体積において、プラセボと比較してガレトスマブアームにおける低減が、主に、新しいＨＯ病変の発生、率、病変活動性（ＰＥＴ）および体積（ＣＴ）などの新しいＨＯ病変成長に関連する複数のエンドポイントにおけるほぼ９０％の減少によって引き起こされたことを示す。２８週にわたる新しいＰＥＴ病変の数は、プラセボと比較して、ガレトスマブアームにおいて実質的に低減した（新しい病変の率の８７．４％減少）。新しいＰＥＴ病変の数は、プラセボと比較して、ガレトスマブ群において顕著に低かった（３対２９）。新しい病変に関連する患者当たりの平均総病変活動性は、プラセボと比較して、ガレトスマブ群において低かった（５．２２／ｐｔ対２０５．９９／ｐｔ）。ガレトスマブ群において新しいＰＥＴ病変を発症した患者における新しい病変に関連する総病変活動性も、プラセボ群と比較して実質的に低かった（図６）。２８週にわたって新しいＰＥＴ病変を発症した患者の率も、プラセボと比較して、ガレトスマブアームにおいて低かった（１５％対４６％、図７）。２８週にわたる新しいＣＴ病変の数は、プラセボと比較して、ガレトスマブアームにおいて低かった（新しい病変の率の８６．７％減少）。プラセボ群では２７個の新しいＣＴ病変が存在したのに対し、ガレトスマブ群では、３個の新しいＣＴ病変が存在した。新しい病変に関連する患者当たりの総ＣＴ体積の平均は、プラセボと比較して、ガレトスマブ群において低かった（１．０６ｃｍ３／ｐｔ対１０．２１ｃｍ３／ｐｔ）。新しいＣＴ病変を発症した患者における新しい病変に関連する総ＣＴ体積も、プラセボ群と比較して、ガレトスマブ群において低かった（図８）。２８週にわたって新しいＣＴ病変を発症した患者の率も、プラセボと比較して、ガレトスマブアームにおいて低かった（１５％対４６％、図９）。追加的に、患者日記によって評価されるようなフレアアップを有する患者の割合は、フレアアップの治験責任医師が報告した有害事象が、プラセボと比較して、ガレトスマブアームにおいて低かったため、良好であった。ＡＨＯＣ集団においても、同様の結果が観察された。
Figure 2023510270000006
安全性結果
２８週の二重盲検治療期間中、治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）は、ガレトスマブ群およびプラセボ群の両方の１００％で発生した。その大部分は、軽度から中程度の重症度であった。それぞれガレトスマブ群およびプラセボ群についてのＴＥＡＥにおける顕著な不均衡には、鼻血（５０．０％対１６．７％）、および皮膚事象（脱落症［眉毛の喪失、２５．０％対０％］、ざ瘡［３０．０％対８．３％］、ならびに膿瘍、よう、毛包炎、せつを含む、皮膚感染症の混合）が含まれていた。プラセボ群の患者が、進行中の非盲検期間（第２期間）にガレトスマブに移行したとき、鼻血および上述の皮膚事象の報告頻度が増加した。２８週の二重盲検期間中の急性輸液反応の頻度は、プラセボ群とガレトスマブ群とでバランスがとられた（プラセボ：６／２４（２５％、ガレトスマブ：５／２０（２５％））。第２期間の間に、４名の患者（９．３％）が、ガレトスマブを受けている間に急性輸液反応を示した。重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、第１期間の間、ガレトスマブ治療群およびプラセボ治療群において、それぞれ２０％および８．３％で報告された。第１期間の間に発生したガレトスマブ群に割り当てられた患者における１つのＳＡＥ（鼻血）は、鼻腔タンポン挿入のために入院となった。この事象は、予期せぬ重篤な有害反応の疑い（ＳＵＳＡＲ）であると特徴付けられた。患者は完全に回復し、この試験を継続した。非盲検期間中、データの締切日までに、３件のＳＡＥが報告された。２名の患者は、第２期間の間に、切開およびドレナージのために入院を必要とする膿瘍のＳＡＥを発症した（皮下膿瘍および嚢胞膿瘍は、それぞれ治験責任医師によって、治験薬に関連しているもの、および治験薬に関連していないものとして報告された）。膿瘍は、解消され、患者は、一時的な治療中断の後に、ガレトスマブ引き続き投与された。３人目の患者は、転倒後の重度の頭部外傷のＳＡＥを有し、その後、死亡した。頭部外傷は、第３期間の間に、患者が１６回のガレトスマブ注入を受けた後に発生し、治験責任医師によって治験薬とは無関係であると評価された。２０名のガレトスマブ群の患者のうち１９名、２４名のプラセボ群の患者のうち２４名が、第１期間を完了した。２８週の治療期間中にガレトスマブを中止した患者は、発熱の有害事象を有しており、これは治験責任医師によって、重症度は軽度であり、治験薬に無関係であると評価された。患者が、肺炎の２つのＳＡＥ（入院）を有し、そのうちの１つが敗血症を合併するものであった後の発熱の再発によって、治験責任医師は、この患者をこの試験から中止させた。この患者の病歴の他の臨床的特徴には、重度の拘束性肺疾患、気管支拡張症および骨格変形が含まれていた。非盲検フォローアップ治療期間（第３期間）において１名の患者が、治療と無関係の頭部外傷により死亡した。
結論
ガレトスマブは、２８週にわたってベースラインからの総病変活動性（新しいものおよび既存のもの）を減少させた（時間加重平均ｌｓ差は約２５％、ｐ＝０．０７４１）。このことは、主に、新しい病変の発生率、率、活動性（ＰＥＴ）および体積（ＣＴ）のおよそ９０％の減少によって引き起こされた。十分な検定力を確保するために十分な大規模な検討を行うことが不可能なＦＯＰのような非常に稀な状態では、第２種の過誤を避けるために第１種の過誤率１０％を許容することが一般的である。この観点で、全体的な有効性の結果は説得力があり、ガレトスマブが、ＦＯＰを有する患者における新しいＨＯの形成を減少させることを強く裏付ける。この結果は、ベースライン時にＰＥＴ／ＣＴによって選択された既存のＨＯ病変の進行において、アクチビンＡが重要な役割を果たさないように見えるという解釈も裏付ける。ガレトスマブによる治療は、急性輸液反応およびＳＡＥの発生率が低く、許容可能な安全性プロファイルを示した。ＴＥＡＥの大部分は、軽度から中等度の重症度であった。ＴＥＡＥにおける顕著な不均衡には、鼻血、ざ瘡、脱落症、ならびに膿瘍、よう、毛包炎、せつを含む、皮膚感染症の混合が含まれていた。この進行中の試験では、すべての患者が、非盲検期間（第２期間および第３期間）に移行した。プラセボ患者のガレトスマブに対するクロスオーバーは、ガレトスマブ治療が、対照と比較して、新しい骨病変形成の顕著な低減につながることを５６週目に確認することを可能にする（「対照」は、その前のプラセボ治療期間中のこれらの同じ患者の測定値である）。５６週のデータはまた、ガレトスマブ治療を継続する患者における治療効果の持続性に関する情報を提供する。まとめると、この試験からの安全性および有効性のデータは、ＦＯＰを有する成人患者の治療に対するガレトスマブの正のベネフィット－リスクを示す。ガレトスマブを用いたアクチビンＡの遮断は、長期にわたって罹患しているＦＯＰ患者の疾患の経過を変える機会を提供する。
試験目的
主要目的
この試験の主要な安全性の目的は、ＦＯＰを有する患者におけるガレトスマブの安全性および忍容性を評価することであった。本試験の主要な有効性の目的は、ＰＥＴによるＨＯ病変における１８Ｆ－ＮａＦ取り込み、およびＣＴによるＨＯ病変の総体積によって決定される、ＦＯＰを有する患者におけるＨＯにおけるベースラインからの変化に対する、プラセボに対するガレトスマブの効果を評価することであった。
副次目的
この試験の副次目的は、以下の通りであった。
●１日疼痛ＮＲＳスコアに基づく疼痛の曲線下面積（ＡＵＣ）によって測定されるような、ＦＯＰに起因する疼痛に対する、プラセボに対するガレトスマブの効果を比較すること。
●１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴまたはＣＴによって特定された新しいＨＯ病変の数によって決定されるような、ＨＯにおけるベースラインからの変化に対する、プラセボに対するガレトスマブの効果を評価すること。
●ＰＥＴによる個々の活動性ＨＯ部位の１８Ｆ－ＮａＦ標準化最大取り込み値（ＳＵＶ最大）におけるベースラインからの変化に対する、プラセボに対するガレトスマブの効果を評価すること。
●２８週目にプラセボからガレトスマブに切り替えられた患者において、ベースラインと２８週目との間の同じ患者に対して、１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴまたはＣＴによって特定されるＨＯ病変の数、活動性、および体積に対する、２８～５６週の間のガレトスマブの効果を評価すること。
●骨形成の生化学的マーカーにおけるベースラインからの変化に対する、プラセボに対するガレトスマブの効果を評価すること。
●ベースライン時、および治験薬の最初の投与後の時間経過に伴い、総アクチビンＡ濃度を特性決定すること。
●ＦＯＰを有する患者におけるガレトスマブの濃度－時間プロファイル（薬物動態［ＰＫ］）プロファイルを特性決定すること。
●ガレトスマブの免疫原性を評価すること。
研究設計
これは、ＦＯＰを有する成人患者において、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶガレトスマブＱ４Ｗの反復投与の安全性、忍容性、ＰＫ、および異所性骨形成に対する効果を評価するために設計された、第２相のランダム化二重盲検プラセボ対照試験であった。研究設計の概略図（図１）に示すように、この試験は、スクリーニング／ベースライン期間（－２８日目～－１日目）、２つの６ヶ月間の治療期間、およびフォローアップ治療期間（第３期間）からなっていた。
スクリーニング／ベースライン期間中に、すべての患者は、インフォームドコンセントプロセスおよびスクリーニング／ベースライン手順を受けた。二重盲検治療期間（第１期間）では、患者を、１０ｍｇ／ｋｇ用量でのガレトスマブまたは合致するプラセボを受けるようにランダム化して、２４週目まで、合計７回の用量でＩＣ Ｑ４Ｗ投与した。性別、古典的なＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］変異／異なるＡＣＶＲ１変異、および１８Ｆ－ＮａＦ－ＰＥＴ／ＣＴによって決定されるベースライン活動性ＨＯ病変の有無によって、ランダム化したものを層別化した。非盲検治療期間（第２期間）では、二重盲検治療期間を完了したすべての患者は、合計７回の用量で、５２週目まで１０ｍｇ／ｋｇの用量で、Ｑ４Ｗで静脈内投与されるガレトスマブを受けた。第２期間を完了した患者は、第３期間の７６週目以降までガレトスマブを受け続ける。画像診断手技は、ベースライン時、８週目、２８週目、５６週目、および７６週目に実施される。
統計的方法
分析集団
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ（ＩＣＨ）ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ＩＣＨ Ｅ９ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ（１９９８）からのガイダンスに従い、以下の分析集団をすべての統計分析に使用した。
ベースライン－活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）：ベースライン－活動性ＨＯ分析セット（ＡＨＯ）には、ベースライン時に少なくとも１つの活動性ＨＯ病変を有していたすべてのランダム化された患者が含まれていた。これは、割り当てられた治療に基づいていた（ランダム化された）。
ベースライン－活動性ＨＯ古典的ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］変異分析セット（ＡＨＯＣ）：ベースライン－活動性ＨＯ古典的ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］変異分析セット（ＡＨＯＣ）には、古典的ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］変異を有し、１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴ陽性によって定義されるような、ベースライン時に少なくとも１つの活動性ＨＯ病変を有していたすべてのランダム化された患者が含まれていた。これは、割り当てられた治療に基づいていた（ランダム化された）。
安全性分析セット（ＳＡＦ）：安全性分析セット（ＳＡＦ）には、任意の試験薬を受けたすべてのランダム化された患者が含まれていた。実際に受けた治療は、安全性の分析に使用された。
有効性変数の解析
試験の有効性変数は、画像診断手順、臨床エンドポイント、および骨形成のバイオマーカーからの評価からなっていた。
多重性の考慮：本試験には、４つの主要な有効性の目的と、２つの副次的な有効性の目的があった。第１種の過誤率を制御するために、階層試験手順を、両側５％の有意水準で適用し、主要副次有効性エンドポイントは、すべての主要エンドポイントについて統計的有意性が確立された場合にのみ試験した。主要有効性エンドポイントおよび主要副次有効性エンドポイントの試験シーケンスの順序は、以下の通りであった。
Figure 2023510270000007
主要有効性エンドポイント：
ＡＨＯにおける、２８週にわたる１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる総病変活動性におけるベースラインからの変化率の時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）
２８週にわたる１８Ｆ－Ｎａｆ ＰＥＴによる総病変活動性におけるベースラインからの変化率のＡＵＣを、各患者について算出した。ＡＵＣの計算には、実際の時間ではなく、公称の時間（すなわち、８週および２８週）を使用した。８週目の画像診断スキャンが欠落している場合、ベースラインと２８週目との間の変化％の線形補間を使用して、ＡＵＣを計算した。２８週目の画像診断スキャンが欠落している場合、８週目での変化％を、ＡＵＣを計算するために２８週目に繰り越した。時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）は、２８週にわたる１８Ｆ－Ｎａｆ ＰＥＴによる総病変活動性におけるベースラインからの変化率のＡＵＣを２８で割り算することによって誘導された。共分散（ＡＮＣＯＶＡ）モデルの解析を用いて、２８週にわたる変化率の時間加重平均を解析した。このモデルには、共変量として、治療、性別、およびベースライン総病変活動性が含まれていた。２名の患者を除くすべての患者が、ＡＣＶＲ１の古典的変異を有していたため、ＡＣＶＲ１の変異型をこのモデルから除外した。ベースラインからのＬＳ平均変化の差、対応する９５％ＣＩおよびｐ値は、プラセボ群に対するガレトスマブ群の比較のためにＡＮＣＯＶＡモデルから提供された。
ＡＨＯにおける、２８週目のＣＴによって評価されたＨＯ病変の総体積におけるベースラインからの変化率
ＡＨＯにおける、８週目および２８週目のＣＴによって評価されたＨＯ病変の総体積におけるベースラインからの変化率を、ＭＭＲＭモデルを使用したＡＨＯ分析セットで分析した。モデルは、治療、性別、ＡＣＶＲ１変異型（古典的、非古典的）、来院（８週目および２８週目）、ベースライン総体積および来院別の治療の相互作用を含有する。複数時間の間の患者内相関を考慮するために、非構造化共分散を使用した。ベースラインからのＬＳ平均変化の差、対応する９５％ＣＩおよびｐ値は、プラセボ群に対するガレトスマブ群の比較のためにＭＭＲＭモデルから提供された。
ＡＨＯＣにおける、２８週にわたる１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる総病変活動性におけるベースラインからの変化率の時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）
ＡＨＯＣにおける、２８週にわたる１８Ｆ－ＮａＦ ＰＥＴによる総病変活動性におけるベースラインからの変化率の時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）を、ＡＨＯにおける第１の主要エンドポイントと同じ方法を使用して分析した。このモデルには、治療、性別、来院（８週目および２８週目）、来院別の治療の相互作用、およびベースライン総病変活動性の独立変数が含まれていた。
ＡＨＯＣにおける、２８週目のＣＴによって評価されたＨＯ病変の総体積におけるベースラインからの変化率
ＡＨＯにおける、２８週目のＣＴによって評価されたＨＯ病変の総体積におけるベースラインからの変化率を、ＡＨＯにおける第２の主要エンドポイントと同じ方法で分析した。このモデルには、治療、性別、来院（８週目および２８週目）、ベースライン総体積、および来院別の治療の相互作用が含まれていた。
主要副次有効性エンドポイント：
ＡＨＯにおける、２８週にわたる１日ＮＲＳを使用して測定された、ＦＯＰに起因する１日疼痛のベースラインからの時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）変化
１日疼痛スコア（現在の疼痛、最悪の疼痛、および最小の疼痛の平均）におけるベースラインからの変化の時間加重平均を、各患者について算出した。中間の日の疼痛スコアが欠落している場合、隣接する２つの測定値間の変化の線形補間を使用して、時間加重平均を計算した。一本調子で欠落している場合には、ベースライン後の最後に観測された値で補完する（ｌａｓｔ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｃａｒｒｉｅｄ ｆｏｒｗａｒｄ（ＬＯＣＦ））方法を使用して、欠落している値を代入した。ＡＨＯでは、ＡＮＣＯＶＡモデルを使用して、２８週にわたる１日疼痛の時間加重平均変化を解析した。このモデルには、治療、性別、ＡＣＶＲ１変異型（古典的、非古典的）、およびベースライン１日疼痛スコアが含まれていた。
ＡＨＯＣにおける、２８週にわたる１日ＮＲＳを使用して測定された、ＦＯＰに起因する１日疼痛のベースラインからの時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）変化
ＡＨＯＣにおける、２８週にわたる１日ＮＲＳを使用して測定された、ＦＯＰに起因する１日疼痛のベースラインからの時間加重平均（標準化されたＡＵＣ）変化を、（ＡＨＯにおける）以前の主要副次エンドポイントと同じ方法で分析した。このモデルには、治療、性別、およびベースライン１日疼痛スコアが含まれていた。
安全性データの分析
安全性および忍容性のまとめは、ＳＡＦにおけるすべての患者について実施された。安全性分析は、報告されたＡＥ、臨床検査評価、およびバイタルサインに基づいていた。検査室変数およびバイタルサインにおける、治療中に発生した臨床上有意な可能性がある値（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｅｍｅｒｇｅｎｔ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ Ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ Ｖａｌｕｅｓ（ＰＣＳＶ））の閾値を、ＳＡＰで定義した。治療中に発生したＰＣＳＶを決定する際のベースラインは、現在の試験のベースラインを示す。
２８週間の試験の延長
ガレトスマブを受けた試験参加者は、試験の延長において、５６週までガレトスマブを受け続けた。さらに、プラセボを受けた試験参加者には、延長期間中に、ガレトスマブを受けさせた。延長期間中にガレトスマブを受けたプラセボ患者は、盲検期間中（すなわち、２８週目まで）に治療群でみられたのと同様に、新しい病変の数、病変体積、および疼痛スコアが低下した。
非公式な配列表
配列番号１
Figure 2023510270000008
 配列番号２
ＧＧＳＦＳＳＨＦ
配列番号３
ＩＬＹＴＧＧＴ
配列番号４
ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩ
配列番号５
Figure 2023510270000009
 配列番号６
ＱＳＶＳＳＳＹ
配列番号７
ＧＡＳ
配列番号８
ＱＱＹＧＳＳＰＷＴ
配列番号９
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＫＡＳＧＦＡＦＤＤＦＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＶＷＮＳＧＤＩＧＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＬＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＶＫＤＭＶＲＧＬＭＧＦＮＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴ
ＶＴＶＳＳ
配列番号１０
ＧＦＡＦＤＤＦＡ
配列番号１１
ＩＶＷＮＳＧＤＩ
配列番号１２
ＶＫＤＭＶＲＧＬＭＧＦＮＹＹＧＭＤＶ
配列番号１３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＴＩＳＴＹＬＶＷＹＲＱＲＰＧＱＡＰＳＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＤＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
配列番号１４
ＱＴＩＳＴＹ
配列番号１５
ＤＡＳ
配列番号１６
ＱＱＲＳＮＷＰＩＴ
配列番号１７
ＳＹＥＶＴＱＡＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＣＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲ
ＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１８
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＩＰＹＮＧＮＴＮＳ
ＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＤＲＤＹＧＶＮＹＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶ
ＳＳ
配列番号１９
ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＣ
配列番号２０
ＱＤＳＫＲＰＳ
配列番号２１
ＱＡＷＤＳＳＴＡＶ
配列番号２２
ＧＹＴＦＴＳＹＧＬＳ
配列番号２３
ＷＩＩＰＹＮＧＮＴＮＳＡＱＫＬＱＧ
配列番号２４
ＤＲＤＹＧＶＮＹＤＡＦＤＩ

Claims (31)

  1. ＦＯＰを有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を減少させる方法であって、前記方法が、前記ヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによって前記ヒト対象において前記新しい異所性骨化病変の形成を減少させる、方法。
  2. 前記新しい異所性骨化病変の形成が、前記ヒト対象において予防される、請求項１に記載の方法。
  3. ＦＯＰを有するヒト対象において新しい異所性骨化病変の形成を予防する方法であって、前記方法が、前記ヒト対象に、治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含み、それによって前記ヒト対象において前記新しい異所性骨化病変の形成を予防する、方法。
  4. 前記ヒト対象が、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の数の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも５％～９０％、少なくとも１０％～９０％、少なくとも２０％～９０％、少なくとも３０％～９０％、少なくとも４０％～９０％、少なくとも５０％～９０％、少なくとも６０％～９０％、少なくとも７０％～９０％、少なくとも８０％～９０％、少なくとも５％～８０％、少なくとも５％～７０％、少なくとも５％～６０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記ヒト対象が、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の体積の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記ヒト対象が、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の成長および石灰化の速度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記ヒト対象が、対照と比較して、新しい異所性骨化病変の強度の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも１０％～５０％、少なくとも２０％～５０％、少なくとも３０％～５０％、少なくとも４０％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記ヒト対象が、対照と比較して、前記異所性骨化病変の総病変活動性（ＴＬＡ）の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも５％～８０％、少なくとも１０％～８０％、少なくとも２０％～８０％、少なくとも３０％～８０％、少なくとも４０％～８０％、少なくとも５０％～８０％、少なくとも６０％～８０％、少なくとも７０％～８０％、少なくとも５％～７０％、少なくとも５％～６０％、少なくとも５％～５０％、少なくとも５％～４０％、少なくとも５％～３０％、少なくとも５％～２０％、または少なくとも５％～１０％の減少を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記ヒト対象が、対照と比較して、１日平均疼痛－ＮＲＳの約０．２倍、０．５倍、１倍、１．５倍、２倍、３倍、０．２～３倍、０．５～３倍、１～３倍、１．５～３倍、２～３倍、２．５～３倍、０．２～２．５倍、０．２～２倍、０．２～１．５倍、０．２～１倍、または０．２～０．５倍の減少を示す、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記対照が、前記アクチビンＡアンタゴニストを投与されていないＦＯＰを有するヒト対象の集団から集められた平均測定値または値である、請求項４～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストが、対照と比較して、前記ヒト対象における痛みのあるフレアアップ（ｆｌａｒｅ－ｕｐ）の発生を低減する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記新しい異所性骨化病変が、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、またはそれらの組み合わせによって分析される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記ＰＥＴスキャン分析が、前記ヒト対象への放射標識１８Ｆフッ化ナトリウム（１８Ｆ－ＮａＦ）の投与によって行われる、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記治療有効量のアクチビンＡアンタゴニストが、前記ヒト対象に少なくとも８週間投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  15. 新しい異所性骨化病変の形成を減少させることから利益を受け得るＦＯＰを有する対象を選択することをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  16. 新しい異所性骨化病変の形成を減少させることから利益を受け得る前記対象が、もうすぐ手術を受けようとしている、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記ヒト対象が、もうすぐＦＯＰの療法的治療を受けようとしている、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記アクチビンＡアンタゴニストが、前記ヒト対象におけるいずれの既存の病変の数、体積、またはサイズも減少させない、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記アクチビンＡアンタゴニストが、タンパク質または小分子である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記アクチビンＡアンタゴニストが、抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、キメラ抗体、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体、またはその抗原結合断片である、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、ヒトカッパＩｇＧ１抗体である、請求項２０または２１に記載の方法。
  23. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、以下の６個のＣＤＲ配列：
    （ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ１、
    （ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ２、
    （ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＨＣＤＲ３、
    （ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ１、
    （ｅ）配列ＧＡＳに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ２、および
    （ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴに対して少なくとも約８０％の同一性を有するＬＣＤＲ３を含む、請求項２０または２１に記載の方法。
  24. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、以下の６個のＣＤＲ配列：
    （ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦを有するＨＣＤＲ１、
    （ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴを有するＨＣＤＲ２、
    （ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩを有するＨＣＤＲ３、
    （ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹを有するＬＣＤＲ１、
    （ｅ）配列ＧＡＳを有するＬＣＤＲ２、および
    （ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴを有するＬＣＤＲ３を含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、配列番号１と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、配列番号１と少なくとも９５％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９５％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、配列番号１を含む重鎖可変領域と、配列番号５を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、配列番号２５を含む重鎖と、配列番号２６を含む軽鎖と、を含む、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、配列番号１と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変領域と、を含む、請求項２０または２１に記載の方法。
  30. 前記抗アクチビンＡ抗体、またはその抗原結合断片が、以下の６個のＣＤＲ配列：
    （ａ）配列ＧＧＳＦＳＳＨＦを有するＨＣＤＲ１、
    （ｂ）配列ＩＬＹＴＧＧＴを有するＨＣＤＲ２、
    （ｃ）配列ＡＲＡＲＳＧＩＴＦＴＧＩＩＶＰＧＳＦＤＩを有するＨＣＤＲ３、
    （ｄ）配列ＱＳＶＳＳＳＹを有するＬＣＤＲ１、
    （ｅ）配列ＧＡＳを有するＬＣＤＲ２、および
    （ｆ）配列ＱＱＹＧＳＳＰＷＴを有するＬＣＤＲ３を含む抗体との結合と競合する、請求項２０または２１に記載の方法。
  31. 前記アクチビンＡアンタゴニストが、第２の療法と組み合わせて投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
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