JP2023506215A - 抗がん性化合物としてのＣｕｌｌｉｎ３アダプタＫＢＴＢＤ４モジュレータ - Google Patents

Abstract

ピリミド［４，５－Ｂ］インドール誘導体の抗がん性化合物としての使用、より具体的には、通常ＲＣＯＲ１／ＬＳＤ１およびＨＤＡＣ２複合体の足場タンパク質として作用するＲＣＯＲ１を分解し、それ自体はＵＭ１７１の存在下で解離するＣＵＬＬＩＮ３－ＲＩＮＧユビキチンリガーゼ複合体を活性化することによる、がんを治療するためのＵＭ１７１およびその誘導体の使用が提供される。このようにＵＭ１７１は、ＨＤＡＣ、ＲＣＯＲ１、ＣｏＲＥＳＴおよびＬＳＤ１を阻害し、抗がん活性をもたらす分子糊分解剤のように作用する。【選択図】図１５Ａ、１５Ｂ

Description

ピリミド［４，５－Ｂ］インドール誘導体の抗がん性化合物としての使用を提供する。

ヒトは、リンパ腫および白血病を含む様々な種類のがんに悩まされているが、これらは非常に悪性の腫瘍であり高い死亡率をもたらす。大半の場合、現存する治療様式（化学療法、放射線療法、手術、特定の追加抗がん剤および骨髄移植）は満足のいくものには程遠く、例えばリンパ腫および白血病患者のうち数年間生存できるのは比較的少数の割合にとどまる。

ユビキチン－プロテアソーム系（ＵＰＳ）は、細胞周期の進行、発がんおよびゲノムの完全性において重要な制御的役割を有する短命のタンパク質の適時分解を促進する。ＵＰＳの異常な制御によりタンパク質のホメオスタシスが崩壊し、多くのヒト疾患、特にがんを引き起こす。ボルテゾミブは、再発性多発性骨髄腫およびマントル細胞リンパ腫の治療薬として承認されているＦＤＡ治療用プロテアソーム阻害剤である。従って、ユビキチン－プロテアソーム系のモジュレータを抗がん性標的とする。ボルテゾミブに関連する正常細胞毒性はタンパク質分解の網羅的な阻害に起因するため、より特異性を高めるためにプロテアソームの上流の酵素を標的とする創薬努力に注目が集まっている。Ｅ３ユビキチンリガーゼ、中でも特にヒトのがんで活性化することが知られているものが、魅力的な選択肢となる。Ｅ３ユビキチンリガーゼの最大のファミリーは多数の成分を有するＣｕｌｌｉｎ－ＲＩＮＧリガーゼ（ＣＲＬ）であり、これはユビキチン－プロテアソーム系により分解される細胞タンパク質の～２０％のユビキチン化を担っている(Zhao and Sun, 2013, Curr Pharm Des, 19: 3215-3225)。

現在臨床試験中のペボネディスタット（ＭＬＮ４９２４）は、ＮＥＤＤ８の選択的阻害剤である。ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）を阻害することにより、プロテアソームを介したタンパク質分解ＣＲＬに重要なＣｕｌｌｉｎ－ＲＩＮＧリガーゼ（ＣＲＬ）の活性化を防ぐ。

インディスラムは、ＲＢＭ３９（スプライシング因子）とＥ３リガーゼＤＣＡＦ１５の間の相互作用を媒介し、ＲＢＭ３９ポリユビキチン化およびプロテアソーム分解を引き起こす抗がん剤であって、ＤＣＡＦ１５と結合する分子糊分解体として作用し、ＲＢＭ３９結合を増強する新規リガーゼ表面を形成する(Bussiere et al, 2019, bioRxiv, 737510)。

したがって、がん細胞を選択的に死滅させることが可能な新規の薬物および／または治療の代替物が提供される必要性が依然として存在する。

患者に少なくとも1つの式Ｉの化合物：

またはその塩もしくはプロドラッグを投与するステップを含む、前記患者のがんを治療する方法であって、
式中：
各Ｙは、独立してＮおよびＣＨから選択され；
ｍは０～３（または置換基Ｚを含む環においてＹがＣＨである場合は０～４）の整数であり；
Ｚは、毎回独立して、以下の：
－ＣＮ、
－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－ヘテロアリール、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－アリールから選択され、
ここで、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
Ｗは
－ＣＮ、
－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｓ（Ｏ）_２Ｒ１、
１つ、２つもしくは３つのＲＡもしくはＲ１置換基で任意に置換された－ベンジル、
－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－アリール、
－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）_ｎ－ＮＲ１ＲＡ、
－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）_ｎ－Ｎ^＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６^－、または
－ハロゲンであり；
ここで、ｎは０、１、２、３、４、または５のいずれかに等しい整数であり、
さらに、Ｒ１およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
各Ｘは、独立してＣＨ_２、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から選択され；
各Ｌは、独立して
－Ｃ_１－６アルキレン、
－Ｃ_２－６アルケニレン、
－Ｃ_２－６アルキニレン、
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルキレン、または
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルケニレンであり、
ここで、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立して、１つまたは２つのＲ４またはＲＡ置換基で任意に置換され；
Ｒ１は、それぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキルペルフルオロ化アルキル、
－ヘテロシクリル、
－アリール、
－ヘテロアリール、または
－ベンジルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ２は
－Ｈ、
さらに１つのＲＡ置換基で任意に置換された－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－ヘテロアリール、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４で任意に置換された－Ｌ－ヘテロシクリル、または
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－アリール、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｎ（Ｒ１）アリールであり、
Ｒ３はそれぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
－ヘテロシクリル、
－アリール、
－ヘテロアリール、
－ベンジル、または
－メチル２－ベンジル－９Ｈ－ピリド［２'，３'：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－カルボキシラ―ト－４－イルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ４は、それぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_１－６ハロアルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
－ヘテロシクリル、
－アリール、
－ヘテロアリール、または
－ベンジルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ５は、それぞれ独立して
－Ｃ_１－６アルキル、
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルケニル、
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルキニル、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－アリール、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－ヘテロアリール、
－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、
－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｃ_１－６アルキレン－ＣＮ、
－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（ここで、Ｒ１およびＲ３は、任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成する）；または
－Ｃ_１－６アルキレン－ＯＨであり；
Ｒ６は
－ハロゲン、
－ＯＣ（Ｏ）ＣＦ_３、または
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１であり；
ＲＡは、それぞれ独立して
－ハロゲン、
－ＣＦ_３、
－ＯＲ１、
－Ｌ－ＯＲ１、
－ＯＣＦ_３、
－ＳＲ１、
－ＣＮ、
－ＮＯ_２、
－ＮＲ１Ｒ３、
－Ｌ－ＮＲ１Ｒ１、
－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ４、
－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－Ｎ_３；または
－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨであり；
ここで、Ｒ１およびＲ３は、任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し；
Ｒｄはそれぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
－ベンジル、または
－ヘテロシクリルであり；
ＲＢは
－Ｈ、または
－Ｃ_１－６アルキルであり；
任意に、少なくとも１つの細胞拡大因子を伴う、方法を提供する。

一実施形態において、式Ｉの化合物は、

またはその薬学的に許容される塩である。

別の実施形態において、式Ｉの化合物は、

の臭化水素酸塩である。

さらなる実施形態において、式Ｉの化合物は、

またはその薬学的に許容される塩である。

一実施形態において、式Ｉの化合物は、本明細書で定義されるとおり、特に表３で定義されるとおりである。

追加の実施形態において、患者はヒトまたは動物である。

さらなる実施形態において、動物はマウスである。

一実施形態において、がんは、Ｋ２７変異、ＥＺＨ２またはＰＲＣ２の変異に基づくがんである。

一実施形態において、化合物は、経口、筋肉内、静脈内または皮下投与のために製剤化される。

さらなる実施形態において、化合物は、ＬＳＤ１、ＲＣＯＲ１、ＨＤＡＣ２およびＣｏＲＥＳＴの少なくとも１つを分解する。

別の実施形態では、増殖中の細胞を含む培地に本明細書に記載の化合物を投与することを含むｅｘ ｖｉｖｏでのがん細胞の増殖を阻害する方法であって、前記化合物はがん細胞の増殖に対して抗悪性腫瘍性を有する、方法が提供される。

また、がんを治療するための式Ｉの化合物：

またはその塩もしくはプロドラッグ
（式中：
各Ｙは、独立してＮおよびＣＨから選択され；
Ｚは、
－ＣＮ、
－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または
－１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換されたヘテロアリールであり、
ここで、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
Ｗは
－ＣＮ、
－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｓ（Ｏ）_２Ｒ１、
１つ、２つもしくは３つのＲＡもしくはＲ１置換基で任意に置換された－ベンジル、
－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－アリール、
－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）_ｎ－ＮＲ１ＲＡ、または
－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）_ｎ－Ｎ^＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６^－であり、
ここで、ｎは０、１、２、３、４、または５のいずれかに等しい整数であり、
さらに、Ｒ１およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
各Ｘは、独立してＣ、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から選択され；
各Ｌは、独立して
－Ｃ_１－６アルキレン、
－Ｃ_２－６アルケニレン、
－Ｃ_２－６アルキニレン、
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルキレン、または
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルケニレンであり、
ここで、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立して、１つまたは２つのＲ４またはＲＡ置換基で任意に置換され；
Ｒ１は、それぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
－ヘテロシクリル、
－アリール、
－ヘテロアリール、または
－ベンジルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ２は
－Ｈ、
さらに１つのＲＡ置換基で任意に置換された－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－ヘテロアリール、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４で任意に置換された－Ｌ－ヘテロシクリル、または
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－アリールであり；
Ｒ３はそれぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
－ヘテロシクリル、
－アリール、
－ヘテロアリール、または
－ベンジルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ４は、それぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
－ヘテロシクリル、
－アリール、
－ヘテロアリール、または
－ベンジルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ５は、それぞれ独立して
－Ｃ_１－６アルキル、
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルケニル、
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルキニル、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－アリール、
１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－ヘテロアリール、
－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）Ｏ－
－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１
－Ｃ_１－６アルキレン－ＣＮ
－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（ここで、Ｒ１およびＲ３は、任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成する）；または
－Ｃ_１－６アルキレン－ＯＨであり；
Ｒ６は
－ハロゲン
－ＯＣ（Ｏ）ＣＦ_３、または
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１であり；
ＲＡは、それぞれ独立して
－ハロゲン、
－ＣＦ_３、
－ＯＲ１、
－Ｌ－ＯＲ１、
－ＯＣＦ_３、
－ＳＲ１、
－ＣＮ、
－ＮＯ_２、
－ＮＲ１Ｒ３、
－Ｌ－ＮＲ１Ｒ１、
－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ４、
－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
－Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、または
－Ｎ_３であり；
Ｒｄはそれぞれ独立して
－Ｈ、
－Ｃ_１－６アルキル、
－Ｃ_２－６アルケニル、
－Ｃ_２－６アルキニル、
－Ｃ_３－７シクロアルキル、
－Ｃ_３－７シクロアルケニル、
－Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル
－ベンジル、または
－ヘテロシクリルである）を提供する。

次に、添付の図面を参照する。

図１Ａは、ＵＭ１７１（２５０ｎＭおよび８００ｎＭ）に８日間および１４日間曝露したまたは曝露しなかったＯＣＩ－ＡＭＬ５またはＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞株の全ゲノムＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９スクリーニングの実験概略を示す図である。図１Ｂは、ＯＣＩ－ＡＭＬ５ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９スクリーニングにおける全細胞集団倍加（上段パネル）およびペアワイズサンプル相関（下段パネル）を示す図である。図１Ｃは、ＯＣＩ－ＡＭＬ１ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９スクリーニングにおける全細胞集団倍加（上段パネル）およびペアワイズサンプル相関（下段パネル）を示す図である。図１Ｄは、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に８日間（左パネル）または１４日間（右パネル）曝露したＣＲＩＳＰＲノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ５（ｙ軸に表示）およびＯＣＩ－ＡＭＬ１（ｘ軸）のＭＡＧｅＣＫ出力ベータスコアを示す散布図であり、ここでは、合成レスキュー性および合成致死性の相互作用が特定され、ＫＢＴＢＤ４（合成レスキュー性）およびＲＣＯＲ１（合成致死性）がＵＭ１７１用量および曝露時間に依存せず特定されている。 図２Ａは、ＢｉｒＡまたはＢｉｒＡ－ＫＢＴＢＤ４融合タンパク質をベイトとして用いたＢｉｏＩＤプルダウン／ＭＳ実験で同定されたタンパク質候補の存在量のヒートマップを示す図である。図２Ｂは、標的複合体におけるタンパク質相互作用を示す図である。図２Ｃは、ｓｈＬｕｃ（対照ルシフェラーゼ）またはｓｈＫＢＴＢＤ４を発現し、０．１％ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に２４時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＨ３Ｋ２７アセチル化（上段パネル）およびＨ３Ｋ４ジメチル化（下段パネル）のフローサイトメトリに基づく分析を示す図である。データは、ＧＦＰ陰性（非感染、黒い点）とＧＦＰ陽性（感染、淡色の点）のサブセットにおける修飾ヒストンの相対平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。正規化には総Ｈ３レベルを使用した。３つの独立した実験の代表である。図２Ｄは、ｓｈＫＢＴＢＤ４（上段パネル）またはｓｈＲＣＯＲ１（下段パネル）を発現し、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）、ＨＤＡＣ阻害剤（パノビノスタット、５ｎＭ）またはＬＳＤ１阻害剤（ＴＣＰ、１０μＭ）に２４時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１（左）およびＣＤ８６（右）の表面発現についてのフローサイトメトリに基づく分析を示す図である。３つの独立した実験の代表である。図２Ｅは、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ、２４時間）に曝露しまたは曝露せずに、対照、ＫＢＴＢＤ４全長（ｗｔ）、ＢＴＢ欠失（ΔＢＴＢ）またはＫｅｌｃｈドメイン欠失（ΔＫｅｌｃｈ）変異ベクターを発現するように操作した、ｓｇＡＡＶＳ１（左パネル）またはｓｇＫＢＴＢＤ４（右パネル）ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞における、ＣＤ８６およびＣＤ２０１の表面発現についてのフローサイトメトリに基づく分析を示す図である。 図３Ａは、ＣＲＩＳＰＲスクリーニング候補であるＫＢＴＢＤ４およびＲＣＯＲ１についての検証を示す図である。ＤＭＳＯまたは漸増濃度のＵＭ１７１の存在下で４日間培養した、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＫＢＴＢＤ４（上段パネル）またはｓｈＲＣＯＲ１（下段パネル）を発現する細胞の絶対細胞数の倍率変化。図３Ｂは、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ以上）またはＨＤＡＣ阻害剤（パノビノスタット、５ｎＭ）に対するＨ３Ｋ２７アセチル化についてのウエスタンブロット（上段パネル）およびフローサイトメトリに基づく分析（下段パネル）を示す図である。図３Ｃは、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４（３つのｓｈＲＮＡを示す）を発現し、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に４８時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１／ＧＦＰ（上段パネル）またはＣＤ８６／ＧＦＰ（下段パネル）発現についての代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。ＫＢＴＢＤ４に対する３つのｓｈＲＮＡの全てが、ＵＭ１７１活性を消失させたことに留意されたい（ＧＦＰ＋とＧＦＰ－サブセットを比較する）。図３Ｄは、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に２４時間曝露した、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４（ｓｈ１－３）を発現するＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。ＫＢＴＢＤ４およびヌクレオリン（ＮＣＬ、ローディング対照）レベルを示す代表的なブロットにより、ＫＢＴＢＤ４のノックダウンが確認された。図３Ｅは、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＫＢＴＢＤ４（ｓｈ２）およびｓｈＲＣＯＲ１を発現するＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１およびＣＤ８６発現の代表的なＦＡＣＳプロファイルと、非形質導入ＧＦＰ陰性細胞と形質導入ＧＦＰ陽性細胞におけるそれらの分布とを示す図である。ｓｈＫＢＴＢＤ４はＵＭ１７１を介したＣＤ２０１／ＣＤ８６表面発現を消失させるが、ｓｈＲＣＯＲ１はそれらの発現を増強させ、これはＣＲＩＳＰＲスクリーニング結果と一致する。図３Ｆは、漸増濃度のＵＭ１７１に曝露した、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＫＢＴＢＤ４（ｓｈ２）を発現するＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１およびＣＤ８６の表面発現についての代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。図３Ｇは、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＫＢＴＢＤ４またはｓｈＲＣＯＲ１を発現するＯＣＩ－ＡＭＬ１のＵＭ１７１（２５０ｎＭ）曝露（２４時間）時のＣＤ２０１（上段パネル）およびＣＤ８６（下段パネル）の相対平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す図である。ＣＤ２０１／ＣＤ８６レベルは、ＧＦＰ陰性（非感染）およびＧＦＰ陽性（感染）細胞で測定される。３つの独立した実験の代表である。図３Ｈは、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＫＢＴＢＤ４またはｓｈＲＣＯＲ１を発現し、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）、ＨＤＡＣ阻害剤（パノビノスタット、５ｎＭ）またはＬＳＤ１阻害剤（ＴＣＰ、５μＭ）で処理したＯＣＩ－ＡＭＬ１おけるＣＤ８６／ＧＦＰ発現の代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。ＨＤＡＣｉおよびＬＳＤｉがｓｈＫＢＴＢＤ４発現細胞におけるＣＤ８６発現を誘導し（中段パネル）、ＫＢＴＢＤ４がＨＤＡＣ／ＬＳＤ１コリプレッサー複合体の上流で作用することを示唆することに留意されたい。 図４Ａは、ＤＭＳＯと比較した場合、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）、ＨＤＡＣｉ（パノビノスタット、５ｎＭ）またはＬＳＤ１ｉ（ＴＣＰ、１０μＭ）に２４時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ５におけるＣＤ２０１およびＣＤ８６のアップレギュレーションを示す代表的なＦＡＣＳ分析を示す図である。図４Ｂは、ＤＭＳＯ、ＵＭ１３４（ＵＭ１７１の不活性アナログ（２５０ｎＭ））、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）、ＨＤＡＣｉ（パノビノスタット、５ｎＭ）またはＬＳＤ１ｉ（ＴＣＰ、１０μＭ）に２４時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ５におけるＨ３Ｋ２７Ａｃ、Ｈ３Ｋ４ｍｅ２およびＨ３の相対平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す図であり、ＨＤＡＣｉおよびＬＳＤｉとしてのＵＭ１７１は、ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞株のＨ３Ｋ２７ＡｃおよびＨ３Ｋ４ｍｅ２マークを誘導する。 図５は、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ、２４時間）に曝露しまたは曝露せずに、対照（空ベクター）、ＫＢＴＢＤ４全長（ｗｔ）、ＢＴＢ欠失（ΔＢＴＢ）またはＫｅｌｃｈドメイン欠失（Ｋｅｌｃｈ）変異ベクターを発現するように操作した、ｓｇＡＡＶＳ１（上段パネル）またはｓｇＫＢＴＢＤ４（下段パネル）ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ８６／ＧＦＰ発現の代表的ＦＡＣＳ分析を示す図である。全長ＫＢＴＢＤ４のみが、ＵＭ１７１媒介ＣＤ８６アップレギュレーションを増強（ｓｇＡＡＶＳ１において）またはレスキュー（ｓｇＫＢＴＢＤ４）することに留意されたい。 図６Ａは、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（３５ｎＭ）の存在下で４日間増殖させた精製ＣＤ３４＋臍帯血細胞におけるヒストン３（Ｈ３）、Ｈ３Ｋ２７ａｃおよびＨ３Ｋ４ｍｅ２のエピジェネティックマークについてのフローサイトメトリに基づく分析を示す図である。結果は、ＨＳＰＣ濃縮ＣＤ３４＋ゲーティングサブセットにおけるヒストンマークの相対レベルを示す（上段パネル参照）。中段パネルはヒストグラムオーバーレイを示し、下段パネルは総Ｈ３レベルで正規化した相対ＭＦＩを示す。図６Ｂは、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（３５ｎＭ）、ＨＤＡＣｉ（パノビノスタット、５ｎＭ）またはＬＳＤ１ｉ（ＴＣＰ、５μＭ）の存在下で７日間培養したＣＤ３４＋臍帯血細胞の代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋ＣＤ２０１＋およびＣＤ３４＋ＣＤ８６＋のサブセットを表す。図６Ｃは、示した化合物を補充した培養物における、７日後のＨＳＣ濃縮ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋細胞サブセットの絶対数（平均±ＳＤ）を示す棒グラフである。図６Ｄは、ｓｈＬｕｃ（左パネル）、ｓｈＲＣＯＲ１（２ｓｈＲＮＡ）またはｓｈＬＳＤ１（２ｓｈＲＮＡ）（右パネル）に感染させ、示すようにＵＭ１７１（３５ｎＭ）の存在下または非存在下で７日間培養したＣＤ３４＋臍帯血細胞の代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。ＣＤ３４＋およびＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋のサブセットを示す。また、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４（２ｓｈＲＮＡ）に感染させ、ＵＭ１７１（３５ｎＭ）の存在下で７日間培養したＣＤ３４＋臍帯血細胞の代表的なＦＡＣＳプロファイルも示す。図６Ｅは、対照ベクター（ＣＴ）、全長ＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）、ΔＢＴＢまたはΔＫｅｌｃｈ変異体に感染させ、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（３５ｎＭ）の存在下で７日間培養したＣＤ３４＋臍帯血細胞の代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。データは、ＧＦＰ形質導入細胞にゲーティングした後に提示される。図６Ｆは、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（５ｎＭ）またはＵＭ１７１（３５ｎＭ）の存在下で、示した感染細胞（ｓｈＲＮＡ（上段パネル）、異所性発現（下段パネル））で開始した培養物における、７日後のＨＳＣ濃縮ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋細胞サブセットの絶対数（平均±ＳＤ）を示す棒グラフである。 図７Ａは、示した化合物に曝露したＣＤ３４＋臍帯血細胞を７日間培養した後に得られたＣＤ３４＋およびＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋ＨＳＰＣ％を示す図である（中央値±ＳＤ）。図７Ｂは、新鮮なＣＤ３４＋と、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（３５ｎＭ）または示したＨＤＡＣｉに曝露した７日目の培養物を、免疫不全ＮＳＧマウスに移植したことを示す図である（結果は、３０００日で０細胞）。移植後３、８および２６週目にヒトＣＤ４５の生着を評価した。ヒトＣＤ３４の生着は、移植後２６週目に評価した。 図８Ａは、示した化合物を補充した培養物における、７日後の総細胞数（上段パネル）およびＣＤ３４＋細胞サブセットの絶対数（下段パネル）を示す棒グラフである（平均±ＳＤ）。 図８Ｂは、示したｓｈＲＮＡ（上段パネル）またはＫＢＴＢＤ４ベクター（下段パネル）を形質導入した臍帯血細胞を７日間培養した後の総細胞数（左パネル）およびＣＤ３４＋細胞サブセットの絶対数（右パネル）を示す棒グラフである。 図８Ｃは、ＣＤ３４＋臍帯血細胞を、示した濃度のＵＭ１７１および／またはＬＳＤ１阻害剤（ＴＣＰ）で７日間培養した後のＣＤ３４＋（左パネル）、ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋ＣＤ９０＋（中央パネル）およびＣＤ３４＋ＣＤ８６＋（右パネル）サブセットの代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図であり、ＬＳＤ１ｉと５ｎＭのＵＭ１７１の相乗効果を示している。 図８Ｄは、ＤＭＳＯの存在下でｓｈＬｕまたはｓｈＫＢＴＢＤ４（２ｓｈＲＮＡ）に感染させたＣＤ３４＋臍帯血細胞を７日間培養した後のＣＤ３４＋およびＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋サブセットの代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。 図９は、ｉＢＥＴブロモドメイン阻害剤の非存在下（０）または存在下（５０ｎＭおよび１００ｎＭ）でＵＭ１７１（３５ｎＭ）に曝露したＣＤ３４＋臍帯血細胞を７日間培養した後に得られた、ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋およびＣＤ３４＋ＣＤ８６＋サブセット（ＵＭ１７１シグネチャ）の代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。ｉＢＥＴは、臍帯血細胞におけるＵＭ１７１活性を完全に消失させることに留意されたい。 図１０は、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＲＣＯＲ１（ｓｈ１）を形質導入したｓｇＡＡＶＳ１またはｓｇＫＢＴＢＤ４ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞株から抽出した細胞質およびクロマチン結合タンパク質のウエスタンブロット分析によって測定したＲＣＯＲ１タンパク質レベルを示す図である。 図１１Ａは、対照ベクター（ＣＴ）、全長ＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）、ΔＢＴＢまたはΔＫｅｌｃｈ変異体を発現するように操作したｓｇＡＡＶＳ１（ＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。ＫＢＴＢＤ４、ＲＣＯＲ１およびＣＵＬ１（ローディング対照）のレベルを示す代表的なブロットである。 図１１Ｂは、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に２４時間曝露し、最後の４時間をＭＧ１３２（１０μＭ）で処理したまたは処理しなかった、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４を形質導入したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した核質タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。代表的なブロット（上段パネル）は、ＫＢＴＢＤ４、ＲＣＯＲ１、ＬＳＤ１、ＨＤＡＣ２およびヌクレオリン（ＮＣＬ、ローディング対照）タンパク質レベルを示す。ＲＣＯＲ１タンパク質レベルの定量化は、３つの独立した実験において評価した（下段パネル）。 図１１Ｃは、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）、ＭＬＮ２４９４（１００ｎＭ）、ＭＬＮ２４９４／ＵＭ１７１またはＭＧ１３２／ＵＭ１７１に４時間曝露したｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４を形質導入したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。代表的なブロット（上段パネル）は、ＣＵＬ３、ＲＣＯＲ１およびＴＵＢＡ（ローディング対照）のタンパク質レベルを示す。ＲＣＯＲ１タンパク質レベルの定量化は、２つの独立した実験において評価した（下段パネル）。 図１１Ｄは、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に４時間曝露したｓｈＬｕｃ、ｓｈＫＢＴＢＤ４、ｓｈＮＵＤＣＤ３またはｓｈＣＡＮＤ１から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。代表的なブロット（上段パネル）は、ＮＵＤＣＤ３、ＣＡＮＤ１、ＲＣＯＲ１およびＴＵＢＡ（ローディング対照）のタンパク質レベルを示す。ＲＣＯＲ１タンパク質レベルの定量化は、２つの独立した実験において評価した（下段パネル）。 図１１Ｅは、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＮＵＤＣＤ３、ｓｈＣＵＬ３またはｓｈＣＡＮＤ１を発現し、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に２４時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１およびＣＤ８６の表面発現についての代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。結果は、形質導入された細胞（ＧＦＰ＋）のみを示す。 図１１Ｆは、示した各条件について、ＧＦＰ陰性（非感染）およびＧＦＰ陽性（感染）サブセットのＵＭ１７１（２５０ｎＭ）曝露時のＣＤ２０１（上段パネル）およびＣＤ８６（下段パネル）の相対平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す図である。 図１２Ａは、ＤＭＳＯ、ＵＭ１３４（ＵＭ１７１の不活性アナログ）またはＵＭ１７１（１μＭ）に４時間曝露し、最後の３時間をＭＧ１３２（１０μＭ）で処理したまたは処理しなかったＨＥＫ２９３細胞株から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。図１２Ｂは、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４を発現し、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（１μＭ）に１時間曝露したＨＥＫ２９３細胞株から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。図１２Ｃは、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（１μＭ）に１、６または２４時間曝露したＵ２ＯＳ細胞株から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。ＫＢＴＢＤ４、ＲＣＯＲ１およびＴＵＢＡのタンパク質レベルを示す。図１２Ｄは、対照ベクター（ＣＴ）、全長ＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）、ΔＢＴＢまたはΔＫｅｌｃｈ変異体を発現するように操作したｓｇＫＢＴＢＤ４ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。 図１３Ａは、ＫＢＴＢＤ４およびＲＣＯＲ１のタンパク質レベルを、対照またはＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）ベクターを発現するように操作したｓｇＡＡＶＳ１またはｓｇＮＵＤＣＤ３ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析によって測定することを示す図である。ＣＵＬ１をローディング対照として使用する。ｓｇＲＮＡにより媒介されるＮＵＤＣＤ３欠失が内在性ＫＢＴＢＤ４レベルを劇的に減少させ（右パネル、第１レーン）、ＮＵＤＣＤ３欠失細胞におけるＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）の再導入がＲＣＯＲ１タンパク質レベルを減少させる（右パネル、第２レーン）ことに留意されたい。 図１３Ｂは、ＫＢＴＢＤ４およびＲＣＯＲ１のタンパク質レベルを、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＮＵＤＣＤ３を発現するＯＣＩ－ＡＭＬ１から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析によって測定することを示す図である。ＴＵＢＡをローディング対照として使用する。 図１３Ｃは、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ、２４時間）に曝露しまたは曝露せずに、対照（空ベクター）、全長ＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）、ＢＴＢ欠失（ΔＢＴＢ）またはＫｅｌｃｈドメイン欠失（ΔＫｅｌｃｈ）変異ベクターを発現するように操作した、ｓｇＡＡＶＳ１（左パネル）またはｓｇＮＵＤＣＤ３（下段パネル）ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ８６／ＧＦＰ発現についての代表的なＦＡＣＳプロファイルを示す図である。 図１３Ｄは、ＵＭ１７１（２５０ｎＭ、２４時間）に曝露しまたは曝露せずに、対照、全長ＫＢＴＢＤ４（ｗｔ）、ΔＢＴＢまたはΔＫｅｌｃｈ変異ベクターを発現するように操作した、ｓｇＡＡＶＳ１またはｓｇＮＵＤＣＤ３ノックアウトＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１（左パネル）およびＣＤ８６（右パネル）の表面発現の結果を示す図である。 図１４は、ｓｈＬｕｃ、ｓｈＮＵＤＣＤ３またはｓｈＣＵＬ３を発現し、ＨＤＡＣ阻害剤（パノビノスタット、５ｎＭ）（左パネル）またはＬＳＤ１阻害剤（ＴＣＰ、１０μＭ）（右パネル）に２４時間曝露したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞におけるＣＤ２０１表面発現についてのフローサイトメトリに基づく分析を示す図である。グラフは、ＧＦＰ陰性またはＧＦＰ陽性サブセットにおける相対ＣＤ２０１ＭＦＩの中央値±ＳＤを示す。ＨＤＡＣｉおよびＬＳＤ１ｉの両方が、ｓｈＮＵＤＣＤ３およびｓｈＣＵＬ３発現細胞においてＣＤ２０１アップレギュレーションを誘導し、ＣＵＬ３およびＮＵＤＣＤ３が、ＫＢＴＢＤ４について示されたように、ＵＭ１７１媒介転写活性化の上流で作用することを示唆することに留意されたい。 図１５Ａは、ＤＭＳＯ、ＵＭ１７１（５００ｎＭ）またはＵＭ１７１／ＭＧ１３２（５μＭ）に４時間曝露したｄ３増殖ＣＤ３４＋由来臍帯血細胞から抽出した総タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。代表的なブロットは、ＫＢＴＢＤ４、ＲＣＯＲ１、ＬＳＤ１、ＨＤＡＣ２、ＣＵＬ３およびローディング対照としてのＴＵＢＡを示す。 図１５Ｂは、ＤＭＳＯまたはＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に２４時間曝露し、最後の４時間をＭＧ１３２（１０μＭ）で処理したまたは処理しなかった、ｓｈＬｕｃまたはｓｈＫＢＴＢＤ４を形質導入したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞から抽出した核質タンパク質についてのウエスタンブロット分析を示す図である。代表的なブロットは、ＫＢＴＢＤ４、ＲＣＯＲ１、ＬＳＤ１、ＨＤＡＣ２およびヌクレオリン（ＮＣＬ、ローディング対照）のタンパク質レベルを示す。ＲＣＯＲ１タンパク質レベルの定量化は、３つの独立した実験において評価した。 図１６は、マウスに静脈内投与した、図示した化合物のバイオアベイラビリティを示す図である。 図１７Ａは、マウスに静脈内投与した化合物ＵＭ６８１のバイオアベイラビリティを示す図である。図１７Ｂは、マウスに経口投与した化合物ＵＭ６８１のバイオアベイラビリティを示す図である。

抗がん性化合物としてのピリミド［４，５－Ｂ］インドール誘導体、ならびに５Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］インドール誘導体およびピリド［２'，３'：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン誘導体が提供される。

斯かるピリミド［４，５－Ｂ］インドール誘導体の一例は、ＵＭ１７１（米国特許第９，４０９，９０６号および同第１０，３３６，７４７号参照、その内容は参照により組み込まれるものとする）であり、これは始原細胞に対し活性を有しているが、該活性は前記化合物が培養物から洗い流されると急速に可逆的になる。ＵＭ１７１は成長因子の非存在下では独立して細胞増殖を引き起こすことはなく；分裂促進的ではなく、むしろ細胞の分化を妨げる。この分子は、ｅｘ ｖｉｖｏ培養において長期造血幹細胞（ＨＳＣ）を優先的に増殖させることが報告されており、この増殖は７日目までに最大になった。ＮＳＧマウスで最初に記載された結果は、２２人の患者に単一のＵＭ１７１増殖臍帯血移植片を移植した臨床試験で確認されたものである。これらの患者は、対照移植に比べ、好中球の回復が早く、発熱も少なかった。最も興味深かったのは、ＵＭ１７１の患者は、拡大した慢性移植片対宿主病を発症せず、移植関連死亡率および疾患再発率が極めて低いことであった。ＵＭ１７１は、ＣＤ２０１＋（ＥＰＣＲ）原始ＨＳＣに加えて、ＣＤ８６＋樹状突起前駆細胞およびマスト細胞の重要な増殖を誘導することが発見された（国際公開２０１９／１６１４９４号参照、その内容は参照により組み込まれるものとする）。さらに、この分子は、多数の炎症誘発性遺伝子および抗炎症性遺伝子、ならびにＣＤ２０１およびＣＤ８６を含むいくつかの必須幹細胞マーカー遺伝子の発現を迅速に誘導することも示された。本明細書で同様に考慮される他の関連化合物は、５Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］インドール誘導体およびピリド［２'，３'：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン誘導体という。それらの化合物は、例えば米国特許第１０，６４７，７１８号明細書に開示されており、その内容は参照により組み込まれるものとする。

これらの結果により、ＵＭ１７１が広範な抗がん用途を有することが可能か否かを決定する研究が促された。

ＵＭ１７１に曝露されたＯＣＩ－ＡＭＬ５などの造血細胞株は、６時間以内に４００超の遺伝子をアップレギュレートし、抑制された遺伝子は１２個未満である。遺伝子のアップレギュレーションに対するこのほぼ排他的な効果により、この分子によって標的化される潜在的な転写抑制因子が指摘された。様々なＵＭ１７１の用量にわたり２つの異なる細胞株においてＣＲＩＳＰＲスクリーニングを行ったところ（図１）、十分には特徴づけられていないＫｅｌｃｈ－ＢＴＢドメインタンパク質ＫＢＴＢＤ４がＵＭ１７１表現型のサプレッサーであり、転写コリプレッサーＲＣＯＲ１またはＣｏＲＥＳＴが強力なエンハンサーであることが明らかになった（図１および３Ａ）。

ＫＢＴＢＤ４の機能は現在不明であるが、Ｋｅｌｃｈ ＢＴＢドメインタンパク質が、ＣＵＬＬＩＮ３－ＲＩＮＧユビキチンリガーゼ（ＣＲＬ３複合体）とその基質とを架橋し(Genschik et al., 2013, EMBO J, 32:2307～2320)、それによってタンパク質分解のためのタンパク質標的化において特異性を規定することが知られている。この知見に一致して、ＣＲＬ３複合体のいくつかのコアおよび重要な構成要素、すなわちＣＵＬＬＩＮ３自体およびその必須調節因子Ｃｕｌｌｉｎ関連ＮＥＤＤ８解離タンパク質１（ＣＡＮＤ１）が、異なるＣＲＩＳＰＲスクリーニングにおいてＵＭ１７１の強力なサプレッサーであった（図１Ｄ）。

ＢｉｒＡ－ＫＢＴＢＤ４近接標識の指向性質量分析でも、ＣＲＬ３のいくつかの構成要素またはＣＵＬＬＩＮ３、ＣＳＮ４、ＵＢＣ１２およびＫＥＬＣＨドメイン指向性ＨＳＰ９０アダプタＮＵＤＣＤ３などの関連タンパク質が容易に特定された（図２Ｄ）。最も興味深いのは、ＲＣＯＲ１およびそれに関連するリジン脱メチル化酵素１Ａ（ＫＤＭ１ＡまたはＬＳＤ１）もこれらの実験において特定されたことである（図２Ｄ）。これらの結果に基づくと、ＵＭ１７１は、ＬＳＤ１－ＲＣＯＲ１ ＣｏＲＥＳＴリプレッサー複合体を標的とする新規ＣＬＲ３^{ＫＢＴＢＤ４}複合体をプロテアソーム分解のために活性化し、ヒストン修飾および主要幹細胞遺伝子のアップレギュレーションをもたらすことが示される（図２Ｅ）。

ヒストン３リジン２７アセチル化（Ｈ３Ｋ２７ａｃ）マークがＵＭ１７１への曝露時に急速に増強されること、およびこのエピジェネティックマークに対するＵＭ１７１の急速な影響に対するＫＢＴＢＤ４の必須の役割が示されている（図２Ｃ上段パネルならびに図３Ｂおよび図４）。同様に、ヒストン３リジン４ジメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ２）は、ＵＭ１７１処理によって増強され、ＫＢＴＢＤ４に依存することが示された（図２Ｃ下段パネル）。同様に、ＵＭ１７１によって誘導されるＣＤ２０１とＣＤ８６の発現は、ＫＢＴＢＤ４に依存する（図２Ｄ上段左パネルおよび右パネル最初の４列ならびに図３Ｃ～Ｇを比較）。ＲＣＯＲ１複合体の２つのコアメンバーであるＨＤＡＣおよびＬＳＤ１の阻害剤が、ＫＢＴＢＤ４に左右されずＣＤ２０１およびＣＤ８６の発現を誘導したことが提案される（図２Ｄ上段左および右パネル最後の４列ならびに図３Ｈ）。ＲＣＯＲ１がＫＢＴＢＤ４の下流側にあることに一致して、ＲＣＯＲ１レベルを実験的に減少させると、ＣＤ２０１およびＣＤ８６の両方がＵＭ１７１によって強く誘導されることが実証されている（図２Ｄ下段パネル最初の４列および図３Ｇ～Ｈ）。

さらに、ＲＣＯＲ１レベルの減少により、ＣＤ２０１およびＣＤ８６発現に対するＨＤＡＣまたはＬＳＤ阻害剤の影響はさらに高まる（図２Ｄ下段パネル最後の４列）。初代臍帯血細胞においてははるかに顕著である、これらの２つのマーカーの発現におけるわずかな増加が、ｓｈＲＣＯＲ１では自然発生的に観察される（図２Ｄ下段パネル最初の２列）。これは、処理した細胞におけるＣＤ２０１およびＣＤ８６のアップレギュレーションを最終的にもたらす、ＵＭ１７１、ＫＢＴＢＤ４およびＲＣＯＲ１の間の上位性相互作用を裏付けるものである（図２Ｂ）。

このモデルに対する更なる裏付けとして、ＵＭ１７１によるＣＤ２０１およびＣＤ８６の誘導は、ＫＢＴＢＤ４に、この遺伝子を欠くようにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によって操作したＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞では厳密に依存しており（図２ＥのｓｇＫＢＴＢＤ４パネルを参照し、対照ｓｇＡＡＶＳ１パネルおよび図５と比較されたい）、ＢＴＢもＫＥＬＣＨ欠失ドメイン変異体もこれらの表現型をレスキューしないことが示されている（図２Ｅおよび図５）。

これらの結果を初代ＣＤ３４＋ヒト臍帯血細胞で検証したところ、ＵＭ１７１に曝露したＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋造血幹／前駆細胞（ＨＳＰＣ）において、Ｈ３Ｋ２７ａｃおよびＨ３Ｋ４ｍｅ２活性化マークの両方のレベルがより高いことが示された（図６Ａ）。他者によって報告されたように(Broxmeyer, 2014, J Clin Invest, 124:2365-2368)、ＨＤＡＣまたはＬＳＤ１阻害剤による処理はｉｎ ｖｉｔｒｏでのＨＳＰＣ増幅およびｉｎ ｖｉｖｏでの生着の改善をもたらし、ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋を含むいくつかの原始亜集団における表現型は、ＵＭ１７１と共通している（図６Ｂ～Ｃ、図７Ａ、図８Ａ）。したがって、ＬＳＤ１ｉ処理細胞においてＵＭ１７１に対する感作が提供される（図８Ｃ）。次に、異なるＨＤＡＣ阻害剤を、短期（３週間）および長期（２６週間）のｉｎ ｖｉｖｏ実験の両方で試験し、免疫不全マウスにおいて強固なヒト生着を提供する際、ＵＭ１７１と同等であることを見出した（図７Ｂ）。これと一致して、ＵＭ１７１が媒介するＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋ＨＳＰＣ表現型は、ＢＲＤドメインタンパク質とアセチル化ヒストンとの相互作用を妨げる化合物であるｉＢＥＴによって消失し、これは、ＨＳＣ増殖およびＵＭ１７１活性におけるこのマークの重要性をさらに強調する（図９）。

ＬＳＤ１は、ＬＳＤ１、ＣｏＲＥＳＴおよびＨＤＡＣ１／２で構成されるコリプレッサー複合体のメンバーである。この複合体は、おそらくＬＳＤ１（Ｈ３Ｋ４ｍｅ１／２脱メチル化酵素）およびＨＤＡＣ１／２（例えば、Ｈ３Ｋ２７ａｃ脱アセチル化酵素）の活性を結合させることにより、造幹細胞および前駆細胞の転写遺伝子シグネチャを抑制する。最近の研究により、ＣｏＲＥＳＴ（またはＲＣＯＲ１）は２つの酵素が両端に位置する２葉構造、つまりシス活性化または阻害のために広範なクロストークが可能であるコンフォーメーションを有することが示された。そのため、ＬＳＤ１阻害は、ある程度のＨＤＡＣ１／２阻害と関連しており、その逆もまた然りである。注目すべきは、ＨＤＡＣ阻害剤、特にバルプロ酸などのクラスＩ ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１／２を含む）を阻害するものは、ヒトＨＳＣのｅｘ ｖｉｖｏでの機能不全をある程度まで回復させ得ることである。

図２Ｂで提示された仮説と一致して、ＲＣＯＲ１またはＬＳＤ１レベルの減少（図１０）は、原始的なＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋ＨＳＰＣ上のＵＭ１７１表現型を模倣すること（図６Ｄ「－ＵＭ１７１」と表示された中央パネルおよび図８Ｂ）、および、ＫＢＴＢＤ４はＵＭ１７１誘導ＨＳＰＣ表現型に必須であること（図６Ｄ「＋ＵＭ１７１」と表示された右パネルおよび図８Ｄ）がさらに示されている。最も興味深いことに、ＫＢＴＢＤ４の過剰発現は、ＵＭ１７１処理で見られるＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋表現型を、相対および絶対細胞数の両方において強く増強する（図６Ｅおよび図８Ｂ）。しかしながら、それ自体では、ＫＢＴＢＤ４の過剰発現は、低用量のＵＭ１７１への曝露を部分的にしか模倣できず（図６Ｅのパネル２（高ＫＢＴＢＤ４、ＵＭ１７１なし）と、パネル５（５ｎＭ ＵＭ１７１）およびパネル１（ＵＭ１７１なし）を比較）、これは、ＫＢＴＢＤ４の完全活性化は、ＵＭ１７１処理の結果として起こり得、このタンパク質のレベルは所定用量のＵＭ１７１に対して限定的であることを示す可能性がある。これは、最適化されたレベルのＵＭ１７１（３５ｎＭ）に曝露された一方で様々な範囲のＫＢＴＢＤ４レベルに曝露された細胞を比較したときに最もよく観察され（図６Ｅのパネル１０（高ＫＢＴＢＤ４）に対してパネル９（通常ＫＢＴＢＤ４）を比較）、ＵＭ１７１処理ＨＳＰＣのＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋絶対数にも反映される（図６Ｆ、下段パネル）。

要約すると、またＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋絶対細胞数に着目すると、ｓｈＲＣＯＲ１またはｓｈＬＳＤ１はＵＭ１７１の影響を少なくとも部分的に模倣することが可能であり、ｓｈＫＢＴＢＤ４がＵＭ１７１誘導ＨＳＰＣ表現型を完全に抑止することが明らかにされている（図６Ｆ、上段パネルおよび図８Ｂ上段パネル参照）。しかしながら、より高いレベルのＫＢＴＢＤ４のみが、ＣＤ３４＋ＣＤ２０１＋絶対細胞数をさらに改善できており、ＵＭ１７１によって誘導されるＨＳＣ増殖を改善するための制限因子であることを示した。

ＬＳＤ１（ＣｏＲＥＳＴ複合体におけるＲＣＯＲ１のパートナー）の化学的阻害により、ＫＢＴＢＤ４には依存せずにＣＤ２０１およびＣＤ８６の表面発現が誘導されることを示す。

ＫＢＴＢＤ４と報告されたＲＣＯＲ１－ＨＤＡＣ１／２－ＬＳＤ１複合体の間の上位性関係をさらに理解するために、ＫＢＴＢＤ４を高レベルで発現するように操作したＡＭＬ１細胞においてＲＣＯＲ１レベルが減少することと、Ｋｅｌｃｈ（基質結合）およびＢＴＢ（ＣＵＬ３結合）ドメインの両方が必須であることがまず実証された（図１１Ａ）。さらに、ＵＭ１７１処理は、ＫＢＴＢＤ４依存的にＲＣＯＲ１（図１１Ｂおよび図１２）、ＬＳＤ１およびＨＤＡＣ２タンパク質レベルの重要な減少を引き起こす（図１１Ｂ、第３および第４レーンならびに下段のグラフ）。この効果は、プロテアソーム阻害剤ＭＧ１３２の存在下では減少する（図１１Ｂ、レーン５～８、および図１２Ａ）。ＵＭ１７１処理細胞ではＣＵＬＬＩＮ３のＮＥＤＤ化（活性化）は正常であるように見えるが（図１１Ｃ、第２レーンのＣＵＬ３^{ＮＥＤＤ８}と表示されたバンド参照）、ＮＥＤＤ化阻害剤ＭＬＮ２４９４に曝露した場合ＵＭ１７１処理細胞でＲＣＯＲ１レベルが正常であり、ＣＵＬ３活性化がＲＣＯＲ１減少に必要なことを示す点は注目すべきである（図１１Ｃ、レーン４）。さらに、ＮＥＤＤ化依存性交換体ＣＡＮＤ１およびｋｅｌｃｈコシャペロンＮＵＤＣＤ３が、ＵＭ１７１誘導性のＲＣＯＲ１減少に必須であることが実証された（図１１Ｄにおいて、レーン５（ｓｈＬｕｃ）対レーン６（ｓｈＫＢＴＢＤ４）、レーン７（ｓｈＮＵＤＣＤ３）およびレーン８（ｓｈＣＡＮＤ１）におけるＲＣＯＲ１レベル、ならびに下段グラフの定量化を比較）。ＣＲＩＳＰＲスクリーニングで見出されたＣＵＬ３、ＣＡＮＤ１およびＮＵＤＣＤ３は、ＵＭ１７１誘導性のＲＣＯＲ１タンパク質の減少（図１１Ｄ）およびＣＤ２０１およびＣＤ８６発現の誘導（図１１Ｅ～Ｆ）に実際に必要である。ＮＵＤＣＤ３コシャペロンとＫｅｌｃｈドメインタンパク質との間の関連は、以前に確立されている(Taipale et al., 2014, Cell, 158:434-448)。ｓｇＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのいずれかによるＮＵＤＣＤ３の減少が、ＫＢＴＢＤ４タンパク質レベルの減少をもたらし（図１３Ａ－Ｂ）、ＫＢＴＢＤ４の機能獲得が、ＮＵＤＣＤ３非存在下でのＵＭ１７１誘導性のＣＤ２０１およびＣＤ８６発現を一部レスキューすることが示される（図１３Ｃ－Ｄ）。一貫して、ＫＢＴＢＤ４ヌルコンテキストでの観察と同様に、ＨＤＡＣおよびＬＳＤ１阻害の両方が、低レベルのＮＵＤＣＤ３またはＣＵＬＬＩＮ３を発現するように操作した細胞においてＣＤ２０１発現を回復させる（図１４）。

要約すると、ＵＭ１７１ ＣＲＩＳＰＲに基づくスクリーニングおよびＢｉｏＩＤ指向性プロテオミクスを使用して、ＲＣＯＲ１タンパク質の減少を引き起こすこれまでに特徴づけられていないＫＢＴＢＤ４アダプタを使用する新規のＣＲＬ３複合体を提供する。これは次に、クロマチン結合ＬＳＤ１－ＲＣＯＲ１－ＨＤＡＣエピジェネティックモディファイアの下流調節を通じて、ＣＤ２０１およびＣＤ８６を含むいくつかのＨＳＣ必須遺伝子のアップレギュレーションを促進し（図１１Ｂ）、おそらくＵＭ１７１処理とＨＤＡＣまたはＬＳＤ１阻害剤への曝露の相関関係を説明する。

精製したヒトＣＤ３４＋細胞を用いると、ＵＭ１７１処理は、４時間以内にＲＣＯＲ１およびＬＳＤ１レベルを減少させる。ＨＤＡＣ２レベルは、この時点では、これらの細胞においてあまり影響を受けなかった（図１５Ａ）。重要なことは、ＭＧ１３２の共処理により、ＬＳＤ１およびＲＣＯＲ１タンパク質の減少が消失することである（図１５Ａ）。さらに、ＣＤ３４＋細胞で得られた結果と一致して、ＬＳＤ１、ＲＣＯＲ１および今回のＨＤＡＣ２のレベルは、ＵＭ１７１曝露により急速に減少したことが実証されている（図１５Ｂレーン３）。

これらの結果を合わせると、ＵＭ１７１はＫＢＴＢＤ４を介して機能し、ＣｏＲＥＳＴメンバーの分解を急速に（４時間以内に）誘導することが証明される。

以下の表１に見られるように、ＵＭ１７１および変異体（ＵＭ６８１）を試験して、様々ながん細胞株における細胞増殖の阻害におけるそれらの能力を評価した。

ＵＭ１３４およびＵＭ６８１は、以下の構造を有する。

さらに、表２に見られるように、ＵＭ１７１および２つの変異体（ＵＭ６８１とＵＭ１３４）の抗悪性腫瘍効果は、患者由来のがん性サンプル（急性骨髄性白血病または「ＡＭＬ」サンプル）においても実証される。

本明細書で実証されるように、ＵＭ１７１およびその誘導体は、ＣＵＬＬＩＮ３－ＲＩＮＧユビキチンリガーゼ複合体（本明細書に記載されるＣＲＬ３複合体）を活性化する。ＣＲＬ３／ＫＢＴＢＤ４複合体は、通常ＲＣＯＲ１／ＬＳＤ１およびＨＤＡＣ２複合体の足場タンパク質として作用するＲＣＯＲ１を分解し、0０４１はＵＭ１７１の存在下で解離する。

従って、本明細書で定義される一般式Ｉの化合物：

Ｉ
またはその塩もしくはプロドラッグの投与後に、対象のがんを治療する方法であって、
式中：
各Ｙは、独立してＮおよびＣＨから選択され；
Ｚは－ＣＮ；－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－Ｃ（Ｏ）Ｒ１；または－１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換されたヘテロアリールであり、ここで、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
Ｗは－ＣＮ；－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１：－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１；－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１；－Ｃ（Ｏ）Ｒ１；－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－ＮＲ１Ｓ（Ｏ）_２Ｒ１；１つ、２つもしくは３つのＲＡもしくはＲ１置換基で任意に置換された－ベンジル；－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ；－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール；Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル；１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－アリール；－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）_ｎ－ＮＲ１ＲＡ、または－（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）_ｎ－Ｎ^＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６^－であり、ここで、ｎは０、１、２、３、４、または５のいずれかに等しい整数であり、
さらに、Ｒ１およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
各Ｘは、独立してＣ、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から選択され；
Ｌは、それぞれ独立して－Ｃ_１－６アルキレン；－Ｃ_２－６アルケニレン；－Ｃ_２－６アルキニレン；Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルキレン；または－Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルケニレンであり、ここで、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立して、１つまたは２つのＲ４またはＲＡ置換基で任意に置換され；
Ｒ１は、それぞれ独立して－Ｈ；－Ｃ_１－６アルキル；－Ｃ_２－６アルケニル；－Ｃ_２－６アルキニル；－Ｃ_３－７シクロアルキル；－Ｃ_３－７シクロアルケニル；－Ｃ_１－５ペルフルオロ化；－ヘテロシクリル；－アリール；－ヘテロアリール；または－ベンジルであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ２は－Ｈ；さらに１つのＲＡ置換基で任意に置換された－Ｃ_１－６アルキル；－Ｃ（Ｏ）Ｒ４；１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－ヘテロアリール；１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４で任意に置換された－Ｌ－ヘテロシクリル；または１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－アリールであり；
Ｒ３はそれぞれ独立して－Ｈ；－Ｃ_１－６アルキル；－Ｃ_２－６アルケニル；－Ｃ_２－６アルキニル；－Ｃ_３－７シクロアルキル；－Ｃ_３－７シクロアルケニル；－Ｃ_１－５ペルフルオロ化；－ヘテロシクリル；－アリール；－ヘテロアリール；または－ベンジルであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され、
Ｒ４は、それぞれ独立して－Ｈ；－Ｃ_１－６アルキル；－Ｃ_２－６アルケニル；－Ｃ_２－６アルキニル；－Ｃ_３－７シクロアルキル；－Ｃ_３－７シクロアルケニル；－Ｃ_１－５ペルフルオロ化；－ヘテロシクリル；－アリール；－ヘテロアリール；または－ベンジルであり；ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
Ｒ５は、それぞれ独立して－Ｃ_１－６アルキル；Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルケニル；Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルキニル；１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－アリール；１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－ヘテロアリール；－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）Ｏ－；－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１；－Ｃ_１－６アルキレン－ＣＮ；－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（ここで、Ｒ１およびＲ３は、任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成する）；または－Ｃ_１－６アルキレン－ＯＨであり；
Ｒ６は－ハロゲン；－ＯＣ（Ｏ）ＣＦ_３；または－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１であり；
ＲＡは、それぞれ独立して－ハロゲン；－ＣＦ_３；－ＯＲ１；－Ｌ－ＯＲ１；－ＯＣＦ_３；－ＳＲ１；－ＣＮ；－ＮＯ_２；－ＮＲ１Ｒ３；－Ｌ－ＮＲ１Ｒ１；－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１；－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ４；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１；－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１；－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１；－Ｃ（Ｏ）Ｒ４；－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；－ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３；または－Ｎ_３であり；
Ｒｄはそれぞれ独立して－Ｈ；－Ｃ_１－６アルキル；－Ｃ_２－６アルケニル；－Ｃ_２－６アルキニル；－Ｃ_３－７シクロアルキル；－Ｃ_３－７シクロアルケニル；－Ｃ_１－５ペルフルオロ化；－ベンジル；または－ヘテロシクリルである、方法が包含される。

一実施形態では、化合物は、式：

を有する。

一実施形態において、ｍ個の置換基Ｚを含む本明細書の任意の式において、ｍは、１または２の整数である。

一実施形態において、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、または１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ１置換基で任意に置換された－ヘテロアリールであり、Ｒ２はＨ、１つもしくは複数のＲＡ置換基で任意に置換された－Ｃ_１－６アルキル、または１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－アリールであり、Ｗは－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３であり、ここでＲ１はＲＡで置換されたＣ_３－７シクロアルキルであり、Ｒ３はＨである。

一実施形態において、Ｚは－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－４アルキルまたは５員環ヘテロアリールであり、該ヘテロアリールは２～４個のヘテロ原子（ＮもしくはＯ）を含み、Ｒ２はＨ、またはハロゲン、ＯＲ１で任意に置換された－Ｌ－アリール、ＲＡ、Ｃ（Ｏ）Ｒ４で任意に置換されたＣ_１－６アルキル、－へテロシクリル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４またはＣ_２－６アルキニルであり、Ｗは－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３であり、ここでＲ１はＲＡで置換されたシクロヘキシルであり、Ｒ３はＨである。

別の実施形態に従えば、
ＺはＣＯ_２Ｍｅまたは２－メチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イルであり；
Ｒ２はベンジルまたはＨであり；
ＷはＮＨ－Ｌ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３であり、ここでＬはＣ_２－４アルキレンまたはＣ_３－７シクロアルキレンであり、Ｒ１およびＲ３はＣ_１－４アルキルもしくはＨであるか；またはＲ１およびＲ３は、それらが結合している窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４で任意に置換されたものである。

別の実施形態に従えば、
Ｚは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－４アルキルまたは５員環ヘテロアリールであり、該ヘテロアリールは２～４個のヘテロ原子（ＮもしくはＯ）または６個の炭素原子を含むアリールを含み；
Ｒ２は、＝Ｈ、またはハロゲン、ＯＲ１で任意に置換された－ＣＨ_２－アリール、ＲＡ、Ｃ（Ｏ）Ｒ４によって任意に置換されたＣ_１－６アルキル、－ヘテロシクリル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４またはＣ_２－６アルキニルであり、ここでアリールはフェニルであるか；またはＲ２は１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基によって任意に置換された－Ｃ_１－６アルキレン－ヘテロアリールもしくは－Ｃ_１－６アルキレン－アリールであり；
Ｗは－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、Ｘ＝ＮＲ１（ここでＲ１はＨもしくはＣ_１－６アルキル（メチルなど）であり、ｎ＝０であり、（Ｒ１）およびＲ３は窒素原子に結合して３～７員環（ピペリジニルもしくはピロリジニル環など）を形成し、Ｌは－Ｃ_１－６アルキレン（プロピルもしくはエチル鎖など）である）であるか、またはＷ＝－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ＮＲ１ＲＡ、Ｘ＝ＮＲ１（ここでＲ１はＨもしくはＣ_１－６アルキル（メチルなど）であり、ｎ＝０であり、Ｒ１およびＲＡ＝それぞれ－Ｈ、もしくは－Ｃ_１－６アルキル（Ｒ１について）であり、ＲＡは本明細書中に記載するとおり、例えば、本明細書の表３に示されるとおりである）である。

別の実施形態に従えば、
Ｚは、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、メチル－テトラゾール、エチル－テトラゾールまたはメチル－オキサジアゾール、チオフェニル、もしくはフェニルであり；
Ｒ２は、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２－フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ_２－フェニル、－ＣＨ_２－チオフェニル、－ＣＨ_２－ピリジル、ＣＨ_２－シクロヘキシル、－ＮＨ－フェニル、－ＣＨ（Ｏベンジル）－フェニル、－ＣＨ（ＯＨ）－フェニル、－ＣＨ（ＣＨ_３）－フェニル、－Ｃ（Ｏ）－フェニル、ＣＨ_２ナフチルであり、１つまたは複数のＲＡまたはＲ４置換基で任意に置換され；
Ｗは－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、Ｘ＝ＮＲ１（ここでＲ１はＨもしくはＣ_１－６アルキル（メチルなど）であり、ｎ＝０であり、（Ｒ１）およびＲ３は窒素原子に結合して３～７員環（ピペリジニルもしくはピロリジニル環など）を形成し、Ｌは－Ｃ_１－６アルキレン（プロピルもしくはエチル鎖など）である）であるか、またはＷ＝－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ＮＲ１ＲＡ、Ｘ＝ＮＲ１（ここでＲ１はＨもしくはＣ_１－６アルキル（メチルなど）であり、ｎ＝０であり、Ｒ１およびＲＡ＝それぞれ－Ｈ、もしくは－Ｃ_１－６アルキル（Ｒ１について）であり、ＲＡは本明細書に記載するとおり、例えば、本明細書の表３に示されるとおりである）であり、特にＷ＝

である。

一実施形態において、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－４アルキルまたは５員環ヘテロアリールであり、該ヘテロアリールは２～４個のヘテロ原子（ＮもしくはＯ）もしくは６個の炭素原子を含むアリールを含む。

一実施形態において、Ｚは、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、メチル－テトラゾール、エチル－テトラゾールまたはメチル－オキサジアゾール、チオフェニル、もしくはフェニルである。

一実施形態において、Ｚは、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、テトラゾールまたはオキサジアゾールである。

一実施形態において、Ｒ２は、＝Ｈ、またはハロゲン、ＯＲ１で任意に置換された－ＣＨ_２－アリール、ＲＡ、Ｃ（Ｏ）Ｒ４で任意に置換されたＣ_１－６アルキル、－ヘテロシクリル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４またはＣ_２－６アルキニルであり、ここで、アリールはフェニルである。

一実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、－Ｃ_１－６アルキレン－ヘテロアリールまたは－Ｃ_１－６アルキレン－アリールであり、１つまたは複数のＲＡまたはＲ４置換基で任意に置換される。

一実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２－フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ_２－フェニル、－ＣＨ_２－チオフェニル、－ＣＨ_２－ピリジル、ＣＨ_２－シクロヘキシル、－ＮＨ－フェニル、－ＣＨ（Ｏベンジル）－フェニル、－ＣＨ（ＯＨ）－フェニル、－ＣＨ（ＣＨ_３）－フェニル、－Ｃ（Ｏ）－フェニル、ＣＨ_２ナフチルであり、１つまたは複数のＲＡまたはＲ４置換基で任意に置換される。

別の実施形態に従えば、Ｗ＝－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、Ｘ＝ＮＲ１であり、ここでＲ１はＨまたはＣ_１－６アルキル（メチルなど）であり、ｎ＝０であり、（Ｒ１）およびＲ３は窒素原子に結合して３～７員環（ピペリジニルまたはピロリジニル環など）を形成し、Ｌは－Ｃ_１－６アルキレン（プロピルまたはエチル鎖など）である。

一実施形態において、Ｗ＝－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ＮＲ１ＲＡ、Ｘ＝ＮＲ１であり、ここでＲ１はＨまたはＣ_１－６アルキル（メチルなど）であり、ｎ＝０であり、Ｒ１およびＲＡ＝それぞれ－Ｈまたは－Ｃ_１－６アルキル（Ｒ１について）であり、ＲＡは本明細書に記載するとおり、例えば、本明細書の表３に示されるとおりである。

別の実施形態に従えば、化合物は、式Ｉであり、ここで、Ｗは

である。

本明細書に開示される式Ｉの化合物（以下に記載する代表的な化合物を含む）は、その調製および特徴を含め、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１３／１１０１９８号に記載されており、その内容は、以下に見られる合成方法論の項と同様に、参照によりその全体が組み込まれるものとする。

本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、特定の数の炭素原子を有する分枝および直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を含むことを意図し、例えば、Ｃ１－Ｃ６アルキルのＣ１－Ｃ６は、直鎖または分枝の飽和配置で１、２、３、４、５または６個の炭素を有する基を含むものとして定義される。上記で定義されたＣ１－Ｃ６アルキルの例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、ｉ－ブチル、ペンチル、およびヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、その中に特定の数の炭素原子を有する単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味することを意図し、例えばＣ３－Ｃ７シクロアルキルのＣ３－Ｃ７は、単環式飽和配置で３、４、５、６または７個の炭素を有する基を含むものとして定義される。上記で定義されたＣ３－Ｃ７シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」は、その中に特定の数の炭素原子を有し、少なくとも２つの炭素原子が二重結合によって互いに結合し、ＥまたはＺ位置化学およびそれらの組み合わせのいずれかを有する不飽和直鎖または分枝鎖炭化水素基を意味することを意図する。例えばＣ２－Ｃ６アルケニルのＣ２－Ｃ６は、直鎖状または分枝状の配置で２、３、４、５または６個の炭素原子を有し、炭素原子の少なくとも２つが二重結合によって互いに結合している基を含むものとして定義される。Ｃ２－Ｃ６アルケニルの例としては、エテニル（ビニル）、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」は、その中に特定の数の炭素原子を有し、少なくとも２つの炭素原子が三重結合によって互いに結合している不飽和直鎖炭化水素基を意味することを意図する。例えばＣ２－Ｃ４アルキニルは、鎖中に２、３または４個の炭素原子を有する基を含み、炭素原子の少なくとも２つが三重結合によって互いに結合しているものとして定義される。そのようなアルキニルの例としては、エチニル、１－プロピニル、２－プロピニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「シクロアルケニル」は、その中に特定の数の炭素原子を有する単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味することを意図し、例えばＣ３－Ｃ７シクロアルケニルのＣ３－Ｃ７は、単環式配置で３、４、５、６または７個の炭素を有する基を含むものとして定義される。上記で定義されたＣ３－Ｃ７シクロアルケニルの例としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味することを意図する。

本明細書で使用される場合、用語「ハロアルキル」は、各水素原子がハロゲン原子で連続的に置換されていてもよい、上記で定義したアルキルを意味することを意図する。ハロアルキルの例としては、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２およびＣＦ_３が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「アリール」は、単独でまたは別のラジカルと併せて、芳香族、飽和または不飽和であってもよい第２の５員または６員炭素環式基とさらに縮合していてもよい６個の炭素原子を含む炭素環式芳香族単環式基を意味する。アリールの例としては、フェニル、インダニル、１－ナフチル、２－ナフチル、テトラヒドロナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アリールは、シクロアルキル環上または芳香環上のいずれかの適当な位置で別の基と連結されていてもよい。

本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの環が芳香族であり、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を含む最大１０原子の単環式または二環式環系を意味することを意図する。ヘテロアリールは環炭素原子またはヘテロ原子の１つを介して結合されてもよい。ヘテロアリールの例としては、チエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、フリル、ベンゾフラニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンセニル、２Ｈ－ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ－インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ－キノリズニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シノリニル、プテリジニル、イソチアゾリル、イソクロマンニル、クロマンニル、イソキサゾリル、フラザニル、インドリニル、イソインドリニル、チアゾロ［４，５－ｂ］－ピリジン、テトラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チエニル、ピリミド－インドリル、ピリド－インドリル、ピリド－ピロロ－ピリミジニル、ピロロ－ジピリジニルおよびフルオロセイン誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「複素環」、「複素環状の」または「ヘテロシクリル」は、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を含む３、４、５、６または７員の非芳香環系を意味することを意図する。複素環の例としては、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、３，５－ジメチルピペリジル、ピロリニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、テトラヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］イミダゾール－２（３Ｈ）－オン、ジアジリニルなどが挙げられるが、これらに限定されず、環への結合は、以下に述べるような環の窒素原子または炭素原子のいずれにおいても可能である。

本明細書で使用される場合、用語「１つもしくは複数の置換基で任意に置換された」またはそれと同等の用語「少なくとも1つの置換基で任意に置換された」は、その後に記載される状況の事象が発生してもしなくてもよく、その記載にはその事象または状況が発生する例としない例が含まれることを意味することを意図する。この定義は、０から5個の置換基を意味することを意図する。

本明細書で使用される場合、用語「対象」または「患者」は、ヒトおよび霊長類、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ、ラット、マウスなどの非ヒト哺乳類を意味することを意図する。

置換基自体が本明細書に記載の合成方法に適合しない場合、置換基は、これらの方法で用いられる反応条件に対して安定的である適切な保護基（ＰＧ）で保護されていてもよい。保護基は、所望の中間体または標的化合物を提供するために、本方法の一連の反応の適切な時点で除去されてもよい。適切な保護基ならびにそのような適切な保護基を使用して異なる置換基を保護および脱保護する方法は、当業者にとって周知であり；その例は、T. Greene and P. Wuts, "Protecting Groups in Chemical Synthesis" (4th ed.), John Wiley & Sons, NY (2007)に見出すことができ、これは参照によりその全体がここに組み込まれるものとする。全体を通して使用される保護基の例としては、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、ＣＢｚおよびＣＯＣＦ_３が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、置換基は、本明細書に記載される方法で使用される反応条件下で反応性が高いように特異的に選択されてもよい。これらの状況下で、反応条件は、選択された置換基を、本明細書に記載の方法における中間化合物において有用であるか、または標的化合物における所望の置換基である、別の置換基へと変換される。

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩」は、酸および塩基付加塩の両方を意味することを意図する。

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的にも他の点でも望ましくないものではなく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、および酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸で形成される塩を意味することを意図する。

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩基付加塩」は、遊離酸の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではない塩を意味することを意図する。これらの塩は、遊離酸への無機塩基または有機塩基の添加により調製される。無機塩基から誘導される塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩等が挙げられるが、これらに限定されない。有機塩基から誘導される塩としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２－ジメチルアミノエタノール、２－ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの、第１級、第２級、第３級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂の塩が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に包含される化合物またはその薬学的に許容される塩は、１つもしくは複数の不斉中心、キラル軸およびキラル平面を含むことができ、したがって、エナンチオマー、ジアステレオマーおよび他の立体異性形態を生じさせることができ、絶対立体化学、例えば（Ｒ）－または（Ｓ）－またはアミノ酸では（Ｄ）－もしくは（Ｌ）－の観点から定義され得る。本明細書は、そのようなすべての可能な異性体、ならびにそれらのラセミ体形態および光学的に純粋な形態を含むことを意図する。光学活性（＋）および（－）の、（Ｒ）－および（Ｓ）－または（Ｄ）および（Ｌ）－異性体は、キラルシントンまたはキラル試薬を用いて調製してもよく、逆相ＨＰＬＣなどの従来技術を用いて分離してもよい。ラセミ混合物を調製し、その後、個々の光学異性体に分離してもよいし、これらの光学異性体をキラル合成により調製してもよい。エナンチオマーは、当業者に既知の方法、例えば、結晶化、ガス液体または液体クロマトグラフィー、１つのエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応によってその後分離され得るジアステレオ異性塩を形成することによって分離してもよい。また、当業者には、所望のエナンチオマーが分離技術によって別の化学実体に変換される場合、所望のエナンチオマー形態を形成するために追加の工程が必要であることが理解されるであろう。あるいは、特異的なエナンチオマーは、光学活性試薬、基質、触媒、もしくは溶媒を用いた不斉合成によって、または不斉変換によって１つのエナンチオマーを別のものに変換することによって合成されうる。

本明細書に包含されるある化合物は、エピマーの混合物として存在してもよい。エピマーとは、それぞれの化合物中に存在する２つ以上の不斉中心のうち１つのみにおいて反対の立体配置を有するジアステレオ異性体を意味する。

本明細書に包含される化合物は、双性イオン形態で存在してもよく、本明細書は、これらの化合物の双性イオン形態およびその混合物を含む。

さらに、本明細書に包含される化合物はまた、水和物および無水物形態で存在してもよい。本明細書に記載される任意の式の化合物の水和物が含まれる。さらなる実施形態では、本明細書に記載される任意の式の化合物は、一水和物である。実施形態において、本明細書に記載の化合物は、約１０重量％以下、約９重量％以下、約８重量％以下、約７重量％以下、約６重量％以下、約５重量％以下、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．５重量％以下、約０．１重量％の水を含む。他の実施形態では、本明細書に記載の化合物は、約０．１重量％以上、約０．５重量％以上、約１重量％以上、約２重量％以上、約３重量％以上、約４重量％以上、約５重量％以上、または約６重量％の水を含む。

プロドラッグの形態で化合物を調製、精製、および／または取り扱うことが便利または望ましい場合がある。したがって、本明細書で使用される場合、用語「プロドラッグ」は、代謝されると（例えばｉｎ ｖｉｖｏで）所望の活性化合物をもたらす化合物に関係する。典型的には、プロドラッグは不活性であるか、または所望の活性化合物よりも活性が低いが、有利な取り扱い、投与、または代謝特性を提供し得る。特に指定しない限り、特定の化合物への言及はまた、そのプロドラッグも含む。

一実施形態では、本明細書に定義される化合物またはその薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体と関連付けて提供される。

多くの薬学的に許容される担体が、当技術分野で知られている。薬学的に許容される担体は、製剤の他の成分と適合し、それを必要とする対象によって許容されなければならないことが、当業者には理解されるであろう。薬学的組成物は、薬学的に有用な組成物を調製するための既知の方法に従って製剤化することが可能である。担体は、当業者に周知であり容易に入手可能な多数の資料に記載されている。

各担体の割合は、薬剤の溶解度および化学的性質、投与経路、ならびに標準的な薬務によって決定される。

投与の一貫性を保証するために、実施形態では、医薬組成物は単位用量の形態であってよい。

化合物または組成物は、図１７Ｂに例証するように、薬学的に許容される担体を含む錠剤、カプセル、または顆粒などの固体経口組成物／剤形で、経口投与用であってもよい。また、化合物または組成物は、舌下投与用であってもよい。

固形経口組成物／剤形は、混合、充填、打錠等の定法により調製し得る。担体を利用するそれらの組成物全体に活性剤を分布させるために、繰り返しの混合操作を使用してもよい。そのような操作は、当然、当技術分野で慣習である。

固体経口組成物／剤形は、通常の薬務において周知である方法に従って、特に腸溶性コーティングでコーティングされてもよい。

経口液体製剤は、乳剤、シロップ、またはエリキシルの形態であってもよく、または使用前に水もしくは他の適切な溶媒と再構成するために乾燥製品として提示されてもよい。このような液体製剤は、従来の添加物を含んでも含まなくてもよい。

化合物または組成物は非経口注射用であってもよく；これは筋肉内、静脈内（図１６および図１７Ａに例証）、または皮下である。

非経口投与のために、化合物または組成物は、任意に溶質、例えば溶液を等張にするのに十分な生理食塩水またはグルコースを含む、無菌溶液の形態で使用されてもよい。非経口注射用の化合物または組成物は、化合物および無菌溶媒を利用して調製してもよく、利用する濃度に応じて、化合物は溶媒中に懸濁または溶解されていてもよい。溶液になったら、化合物を注入し、適切なバイアルまたはアンプルに充填する前にフィルター滅菌し、続いてキャリアまたは貯蔵パッケージを密封してもよい。

一実施形態において、前記化合物または前記化合物を含む医薬組成物は、さらに、少なくとも１つの追加の活性成分と併せて使用することが可能である。

本明細書に包含される化合物が、経口、静脈内、または皮下投与されることが包含される。

式Ｉの化合物を用いた増殖後に得られた臍帯血移植片の移植後に、対象においてがんを治療する方法も包含される。

特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の構造；

のＵＭ１７１である。

一実施形態では、式Ｉの化合物は

またはその薬学的に許容される塩である。

別の実施形態では、式Ｉの化合物は、

の臭化水素酸塩である。

補足的な実施形態では、式Ｉの化合物は

またはその薬学的に許容される塩である。

本明細書に開示される化合物ピリミド［４，５－Ｂ］インドール誘導体は、例えば、米国特許第９，４０９，９０６号および同第１０，３３６，７４７号に従って調製し得る。５Ｈ－ピリド［４，３－ｂ］インドール誘導体およびピリド［２’，３’：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン誘導体は、例えば米国特許第１０，６４７，７１８号に従って調製することができ、その内容は参照によりここに組み込まれるものとする。

あるいは、本明細書に開示する代表的な化合物は、以下の化学例に従って調製することが可能である。他の化合物は、異なる出発材料を用いて、同様の条件を用いて調製し得ることは、当業者には明らかであろう。

〔化学的実施例〕
実施例1

９－メチル－４－（メチル（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル

中間体１Ａ

４－クロロ－９－メチル－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル

１００ｍＬ丸底フラスコの中で、トルエン（３５ｍＬ）に４－クロロ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．１ｇ、０．３８２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（０．２９７ｍＬ、２．２１７ｍｍｏｌ）を加えて黄褐色懸濁液を得た。１１０℃まで１７時間加熱した。反応混合物を２０℃に冷却し、濃縮乾固して９４ｍｇを黄褐色固体として得た。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ１２ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃで溶出）で精製して、４－クロロ－９－メチル－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（５３ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ、収率５０．３％）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.96 (s, 3 H) 4.03 (s, 3 H) 8.08 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 8.39 (dd, J=1.6, 0.8 Hz, 1 H) 8.46 (dd, J=8.2, 0.8 Hz, 1 H) 8.93 (s, 1 H). LCMS m/z 276.0 (M+H)+.

実施例1

９－メチル－４－（メチル（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル

マイクロ波バイアルの中で、メタノール（０．７６ｍＬ）に４－クロロ－９－メチル－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．０２ｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチル－３－（ピペリジン－１－イル）プロパン－１－アミン（０．０２４ｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０２０ｍＬ、０．１４５ｍｍｏｌ）を加えて黄褐色懸濁液を得た。バイアルを密封し、マイクロ波で１４０℃まで１５分間加熱した。反応混合物を濃縮乾固して赤色オイルを得た。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ４ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨで溶出）で精製し、９－メチル－４－（メチル（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（２１ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、収率７３．２％）を無色オイルとして得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.13 - 1.33 (m, 6 H) 1.74 - 1.90 (m, 2 H) 2.00 - 2.25 (m, 6 H) 3.29 (s, 3 H) 3.82 (t, J=6.8 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 3.92 (s, 3 H) 7.91 (dd, J=8.6, 1.6 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.19 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H). HRMS m/z 396.2517 (M+H)+.

実施例２

９－メチル－４－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル

例１に記載の手順に従い、表題化合物を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.32 - 1.44 (m, 2 H) 1.45 - 1.57 (m, 4 H) 1.76 - 1.91 (m, 2 H) 2.25 - 2.45 (m, 6 H) 3.61 - 3.70 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.92 (s, 3 H) 7.49 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 7.90 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 8.19 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 8.46 (d, J=8.2 Hz, 1 H). HRMS m/z 382.2374 (M+H)+.

実施例３

４－（（４－（ピペリジン－１－イル）ブト－２－イン－１－イル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル

中間体３Ａ

２００ｍＬ丸底フラスコの中で、ＤＭＦ（３０．０ｍＬ）に１，３－ジオキソインドリン－２－イドカリウム（４．７５ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）を加えて、白色懸濁液を得た。１，４－ジクロロブト－２－イン（２０．０６ｍＬ、２０５ｍｍｏｌ）を加えた。褐色懸濁液を１００℃に加熱した。２時間後、２０℃に冷却した。水（５０．０ｍＬ）を加え、濃縮乾固して褐色固体を得た。この固体を水（７５ｍＬ）とＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）の間で分配した。層を分離し、水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で抽出した。混合性有機層を水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、６．８ｇを褐色固体として得た。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ１２０ｇカラム、ヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２で溶出）で精製して、２－（４－クロロブト－２－イン－１－イル）イソインドリン－１，３－ジオン（３．９０ｇ、１６．６９ｍｍｏｌ、収率６５．１％）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.44 (t, J=2.0 Hz, 2 H) 4.47 (t, J=2.0 Hz, 2 H) 7.81 - 7.96 (m, 4 H). LCMS m/z 234.0 (M+H)+.

中間体３Ｂ

１００ｍＬ丸底フラスコの中で、アセトニトリル（１５ｍＬ）に２－（４－クロロブト－２－イン－１－イル）イソインドリン－１，３－ジオン（１ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）とピペリジン（０．９３２ｍＬ、９．４２ｍｍｏｌ）を加えて黄色溶液を得た。８０℃に加熱し、得られた懸濁液を１６．５時間攪拌した。濃縮乾固してオレンジ色の固体を得た。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）の間で分配した。層を分離した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）で水層を抽出した。混合性有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、１．６５ｇをオレンジ色のオイルとして得た。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ４０ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃで溶出）で精製して、２－（４－（ピペリジン－１－イル）ブト－２－イン－１－イル）イソインドリン－１，３－ジオン（７５２ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ、収率６２．２％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.31 (s, 2 H) 1.46 (quin, J=5.7 Hz, 4 H) 2.33 (s, 3 H) 3.18 (s, 2 H) 4.40 (t, J=2.2 Hz, 2 H) 7.84 - 7.89 (m, 2 H) 7.89 - 7.94 (m, 2 H). LCMS m/z 283.2 (M+H)+.

中間体３Ｃ

５０ｍＬ丸底フラスコの中で、エタノール（１３ｍＬ）に２－（４－（ピペリジン－１－イル）ブト－２－イン－１－イル）イソインドリン－１，３－ジオン（０．７５２ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（０．１５２ｍＬ、２．８０ｍｍｏｌ）を加えて黄色溶液を得た。３時間加熱還流（約８０℃）した後、ヒドラジン水和物（０．０４３ｍＬ、０．７９９ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流を１時間続けた。２０℃に冷却し、１６時間撹拌した。０℃に冷却し、懸濁液を１時間攪拌した。ブフナー漏斗で固体を濾過し、固体を冷エタノール（２×１ｍＬ）ですすいだ。濾液を濃縮乾固して６１５ｍｇを黄色固体として得た。固体をＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）に懸濁し、ブフナー漏斗で濾過した。固体をＥｔ_２Ｏ（５ｍＬ）ですすいだ。ロータリーエバポレータで濃縮乾固して、４－（ピペリジン－１－イル）ブト－２－イン－１－アミン（３１５ｍｇ、２．０６９ｍｍｏｌ、収率７８％）を黄色オイルとして得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.29 - 1.41 (m, 2 H) 1.49 (quin, J=5.6 Hz, 4 H) 2.25 - 2.43 (m, 4 H) 3.16 (t, J=2.1 Hz, 2 H) 3.28 (t, J=2.1 Hz, 2 H). LCMS m/z 153.2 (M+H)+.

実施例３

４－クロロ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチルおよび４－（ピペリジン－１－イル）ブト－２－イン－１－アミンを用いて例１に記載の手順に従って表題化合物を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.22 - 1.35 (m, 2 H) 1.44 (quin, J=5.4 Hz, 4 H) 2.28 - 2.40 (m, 4 H) 3.17 (br. s., 2 H) 3.90 (s, 3 H) 4.43 (d, J=5.9 Hz, 2 H) 7.81 - 7.89 (m, 2 H) 8.06 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.43 - 8.48 (m, 2 H) 12.24 (s, 1 H). LCMS m/z 378.2 (M+H)+.

実施例４

バイアルに７－ブロモ－Ｎ－（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－４－アミン（０．０４ｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（０．０２５ｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（０）（０．０１８ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密閉し、窒素で排気した（３サイクル真空＋窒素再充填）。１，４－ジオキサン（０．５２ｍＬ）および水中の炭酸ナトリウム２Ｍ（０．３０９ｍＬ、０．６１８ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを窒素で排気した（３サイクル真空＋窒素再充填）。二相性混合物を８５℃に加熱し、１８時間攪拌した。２０℃に冷却し、メタノール（２ｍＬ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）で希釈した。混合物を０．４５μｍフィルターで濾過した。バイアルとフィルターをメタノール（２×２ｍＬ）とＣＨ_２Ｃｌ_２（２×２ｍＬ）ですすいだ。濃縮乾固してオレンジ色の固体を得た。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ１２ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨで溶出）で精製して、７－フェニル－Ｎ－（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－４－アミン（３３ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ、収率８３％）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.39 (br. s., 2 H) 1.46 - 1.59 (m, 4 H) 1.77 - 1.91 (m, 2 H) 2.38 (br. s., 6 H) 3.64 (q, J=6.5 Hz, 2 H) 7.24 (t, J=4.9 Hz, 1 H) 7.34 - 7.41 (m, 1 H) 7.50 (t, J=7.6 Hz, 2 H) 7.54 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.66 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.74 (d, J=7.4 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H) 8.38 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 11.93 (s, 1 H). LCMS m/z 386.2 (M+H)+.

実施例５

中間体５Ａ

５０ｍＬ丸底フラスコの中で、ＤＭＦ（１０ｍＬ）に鉱油中６０重量％のＮａＨ（０．２６５ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）を加えて灰色の懸濁液を得た。０℃に冷却し、２－ヒドロキシ－２－フェニル酢酸メチル（１ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）を加えた。得られたオレンジ色の懸濁液を４５分間攪拌した。臭化ベンジル（０．７８７ｍＬ、６．６２ｍｍｏｌ）を加えた。２０℃に温め、３０分間攪拌した。飽和ＮＨ_４Ｃｌ（４０ｍＬ）＋水（１０ｍＬ）を加えることにより反応を抑制した。水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合性有機層を水（２×５０ｍＬ）、次に鹹水（３５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、１．７２ｇを淡黄色オイルとして得た。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐＧｏｌｄ４０ｇカラム、ヘキサン／Ｅｔ_２Ｏで溶出）で精製した。ＩＳＣＯをさらに２回繰り返して、２－（ベンジルオキシ）－２－フェニル酢酸メチル（５０８ｍｇ、１．９８２ｍｍｏｌ、収率３２．９％）を無色オイルとして得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.64 (s, 3 H) 4.49 (d, J=11.3 Hz, 1 H) 4.59 (d, J=11.3 Hz, 1 H) 5.11 (s, 1 H) 7.04 - 7.19 (m, 1 H) 7.23 - 7.45 (m, 9 H).

中間体５Ｂ

マイクロ波バイアルの中で、メタノール（２ｍL）に２－アミノ－３－カルバモイル－１Ｈ－インドール－６－カルボン酸メチル（０．１８５ｇ、０．７９３ｍｍｏｌ）、２－（ベンジルオキシ）－２－フェニル酢酸メチル（０．５０８ｇ、１．９８３ｍｍｏｌ）およびメタノール（２ｍＬ）中３０重量％のナトリウムメトキシド（０．３７２ｍＬ、１．９８３ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密封し、マイクロ波で１４０℃まで１時間加熱した。２０℃に冷却し、ＡｃＯＨ（０．１１８ｍＬ、２．０６２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を２０℃で１時間撹拌した。固体をブフナー上で回収した。ケークをメタノール（３×０．５ｍＬ）で洗浄した。生成物を高真空下２０℃で一定重量になるまで乾燥させて、２－（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）－４－ヒドロキシ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（２３８ｍｇ、０．５４２ｍｍｏｌ、収率６８．３％）を黄褐色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.87 (s, 3 H) 4.58 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 4.69 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 5.56 (s, 1 H) 7.27 - 7.46 (m, 8 H) 7.55 - 7.64 (m, 2 H) 7.84 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 8.00 - 8.06 (m, 2 H) 12.49 (br. s., 1 H) 12.60 (br. s., 1 H). LCMS m/z 440.2 (M+H)+.

中間体５Ｃ

１５ｍＬ丸底フラスコの中で、オキシ塩化リン（３．４７ｍＬ、３７．３ｍｍｏｌ）に２－（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）－４－ヒドロキシ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．２３４ｇ、０．５３２ｍｍｏｌ）を加えて、８５℃まで１６．５時間加熱した。濃縮乾固した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）に懸濁し、１時間攪拌した。固体をブフナー上で回収した。ケークを水（３×２ｍＬ）で洗浄した。生成物を高真空下４０℃で一定重量まで乾燥させて、２－（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）－４－クロロ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（２２８ｍｇ、０．４９８ｍｍｏｌ、収率９４％）を黄褐色固体として得た。LCMS m/z 458.2 (M+H)+.

実施例５

マイクロ波バイアルの中で、メタノール（３．８ｍＬ）に２－（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）－４－クロロ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．２２８ｇ、０．４９８ｍｍｏｌ）、３－（ピペリジン－１－イル）プロパン－１－アミン（０．１５８ｍＬ、０．９９６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１７３ｍＬ、１．２４５ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密封し、マイクロ波で１４０℃まで３０分間加熱した。濃縮乾固した。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐＧｏｌｄ４０ｇ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨで溶出）で精製した。ＩＳＣＯ精製を２回繰り返して、２－（（ベンジルオキシ）（フェニル）メチル）－４－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（１７２ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ、収率６１．３％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.29 - 1.42 (m, 2 H) 1.42 - 1.56 (m, 4 H) 1.72 - 1.91 (m, 2 H) 2.18 - 2.47 (m, 6 H) 3.66 (tt, J=13.2, 6.6 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.54 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 4.64 (d, J=12.1 Hz, 1 H) 5.50 (s, 1 H) 7.21 - 7.43 (m, 8 H) 7.51 (t, J=5.9 Hz, 1 H) 7.57 (d, J=7.0 Hz, 2 H) 7.82 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 8.00 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.38 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.22 (s, 1 H). HRMS m/z 564.2979 (M+H)+.

実施例６

１０ｍＬ丸底フラスコの中で、ＴＨＦ（２．７ｍＬ）に４－（（３－（（３－アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）－アミノ）－２－ベンジル－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（２５ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチルアミン（８．６３μＬ、０．０８１ｍｍｏｌ）を加えた。臭化プロパルギル（７．２６μＬ、０．０６５ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で６９．５時間攪拌した。濃縮乾固した。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ１２ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨで溶出）で精製して、２－ベンジル－４－（（３－（メチル（３－（プロプ－２－イン－１－イルアミノ）プロピル）アミノ）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（３．２ｍｇ、６．４２μｍｏｌ、収率１１．８２％）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.23 (s, 1 H) 1.56 (dt, J=14.1, 7.0 Hz, 2 H) 1.80 (dt, J=13.5, 6.6 Hz, 2 H) 2.20 (s, 3 H) 2.34 - 2.46 (m, 4 H) 2.56 (t, J=7.0 Hz, 2 H) 2.99 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 3.25 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 3.58 - 3.70 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.04 (s, 2 H) 7.15 - 7.23 (m, 1 H) 7.28 (t, J=7.6 Hz, 2 H) 7.37 (m, J=7.4 Hz, 2 H) 7.54 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 7.83 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 12.05 (s, 1 H). HRMS m/z 499.2823 (M+H)+.

実施例７

マイクロ波バイアルの中で、メタノール（２ｍＬ）に２－ベンジル－４－クロロ－７－（２－メチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール（０．１００ｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）およびＮ１－（３－アミノプロピル）プロパン－１，３－ジアミン（０．３７５ｍＬ、２．６６ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密封し、マイクロ波で１４０℃まで３０分間加熱した。濃縮乾固した。残渣をＩＳＣＯ（ＲｅｄｉＳｅｐ１２ｇカラム、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨで溶出）で精製して、Ｎ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ３－（２－ベンジル－７－（２－メチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン（１１２ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ、収率８９％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.54 (quin, J=6.85 Hz, 2 H) 1.79 (quin, J=6.26 Hz, 2 H) 2.53 - 2.69 (m, 6 H) 3.68 (q, J=6.26 Hz, 2 H) 4.04 (s, 2 H) 4.43 (s, 3 H) 7.15 - 7.22 (m, 1 H) 7.28 (t, J=7.43 Hz, 2 H) 7.38 (d, J=7.43 Hz, 2 H) 7.57 (t, J=4.89 Hz, 1 H) 7.90 (dd, J=8.22, 1.17 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.36 (d, J=8.22 Hz, 1 H). HRMS m/z 471.2737 (M+H)+.

実施例８

１５ｍＬ丸底フラスコの中で、ＤＭＦ（２．８ｍＬ）にＮ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ３－（２－ベンジル－７－（２－メチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン（５７ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５．３μＬ、０．１８２ｍｍｏｌ）を加えた。２，５－ジオキソピロリジン－１－イル５－（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］イミダゾール－４－イル）ペンタノエート（４４．７ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応混合物を濃縮乾固した。残渣をメタノール（３ｍＬ）、水（２ｍＬ）および水中の２ＭのＮａ_２ＣＯ_３（５滴）に懸濁した。３０分間攪拌した。固体をブフナー上で回収した。ケークを水（２×１ｍＬ）で洗浄し、次いでメタノール（１×１ｍＬ）で洗浄した。生成物を高真空下４０℃で一定重量まで乾燥させて、Ｎ－（３－（（３－（２－ベンジル－７－（２－メチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－４－イル）アミノ）プロピル）アミノ）プロピル）－５－（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］イミダゾール－４－イル）ペンタンアミド（７８ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ、収率９２％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.28 (m, J=13.79, 13.79, 6.85 Hz, 2 H) 1.36 - 1.52 (m, 3 H) 1.52 - 1.63 (m, 3 H) 1.79 (dt, J=12.23, 5.82 Hz, 2 H) 2.04 (t, J=7.24 Hz, 2 H) 2.52 - 2.58 (m, 3 H) 2.62 (t, J=6.26 Hz, 2 H) 2.78 (dd, J=12.13, 5.09 Hz, 1 H) 2.99 - 3.06 (m, 1 H) 3.06 - 3.13 (m, 2 H) 3.68 (q, J=6.26 Hz, 2 H) 4.04 (s, 2 H) 4.06 - 4.11 (m, 1 H) 4.22 - 4.31 (m, 1 H) 4.43 (s, 3 H) 6.34 (s, 1 H) 6.40 (s, 1 H) 7.14 - 7.23 (m, 1 H) 7.28 (t, J=7.43 Hz, 2 H) 7.34 - 7.41 (m, 2 H) 7.56 (t, J=5.28 Hz, 1 H) 7.77 (t, J=5.48 Hz, 1 H) 7.89 (dd, J=8.20, 1.20 Hz, 1 H) 8.07 (d, J=1.20 Hz, 1 H) 8.36 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 12.00 (br. s., 2 H). HRMS m/z 697.3498 (M+H)+.

実施例９

中間体９Ａ

ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）中の２－ベンジル－４－クロロ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．１００ｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．０７９ｍＬ、０．５６９ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチル（３－アミノプロピル）（メチル）カルバメート（０．０８０ｇ、０．４２６ｍｍｏｌ）の混合物を１４０℃で２０分間マイクロ波中で加熱した。反応が完了せず、さらに試薬を加え、再び１４０℃で２０分間加熱した。溶媒を除去し、粗残渣をＨｘ－ＥＡ（６５－３５）を用いてＳｉＯ_２のショートパッド上で精製して、２－ベンジル－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル０．０９２ｇを得た。LRMS + H+: 504.2.

中間体９Ｂ

ＴＦＡ（１．０ｍＬ、１２．９ｍｍｏｌ）を先の中間体（０．０９２ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の低温懸濁液（０－５℃）に滴下して加え、その後室温に戻した。３０分後、それをトルエンで希釈し、溶媒を除去した。残渣をさらに多くのトルエン中に取り、溶媒を除去した。最後にそれをＥＡ中に取り、溶媒を除去して、２－ベンジル－４－（（３－（メチルアミノ）プロピル）アミノ）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチルのトリフルオロ酢酸塩０．０８５ｇを得た。LRMS + H+: 404.2.

実施例９

先のＴＦＡ塩（０．０２０ｇ）、炭酸ナトリウム（８．８１ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１．４ｍｇ、９．６μｍｏｌ）および２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エタノール（６．５μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）をアセトン（０．２ｍＬ）中で、７０℃で一晩加熱した。さらに２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エタノール（６．４μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）を加え、再び７０℃で一晩攪拌した。それを次にＥＡ－水で希釈し、有機相を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過した。粗付加物をＤＣＭ－ＭｅＯＨ（０－２５％）を用いてコンビフラッシュ上で精製して、０．００９ｇの表題化合物を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.74 - 1.85 (m, 2 H) 2.25 (br. s., 3 H) 2.55 (br. s., 2 H) 3.32 - 3.36 (m, 4 H) 3.39 - 3.46 (m, 6 H) 3.51 (t,J=5.87 Hz, 2 H) 3.64 (q, J=6.52 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.04 (s, 2 H) 4.53 (br. s., 1 H) 7.18 (t, J=7.40 Hz, 1 H) 7.28 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.37 (d, J=7.04 Hz, 2 H) 7.55 (t, J=5.28 Hz, 1 H) 7.82 (dd, J=8.22, 1.17 Hz, 1 H) 7.99 (s, 1 H) 8.27 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 12.05 (s, 1 H). LRMS + H+: 536.3.

実施例１０

マイクロ波バイアルの中で、ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ、４９．４ｍｍｏｌ）に２－ベンジル－４－クロロ－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．０５０ｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）およびＮ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ１－メチルプロパン－１，３－ジアミン（０．１２ｍＬ、０．７１ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルをマイクロ波中におき、１４０℃まで３０分間加熱した。３０分後、濃縮乾固した。残渣をＤＣＭ－ＭｅＯＨ－ＮＨ_４ＯＨを用いてＩＳＣＯ ＲｅｄｉＳｅｐＧｏｌｄカラムで精製して、表題化合物０．０４４ｇを得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.44 (dt, J=13.8, 6.6 Hz, 2 H) 1.72 (dt, J=13.7, 6.8 Hz, 2 H) 2.11 (s, 3 H) 2.24 - 2.30 (m, 2 H) 2.33 (t, J=6.7 Hz, 2 H) 2.47 (br. s., 2 H) 3.51 - 3.61 (m, 2 H) 3.76 - 3.85 (m, 3 H) 3.97 (s, 2 H) 7.08 - 7.15 (m, 1 H) 7.17 - 7.24 (m, 2 H) 7.27 - 7.34 (m, 2 H) 7.50 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 7.76 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.92 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.20 (d, J=8.2 Hz, 1 H). LRMS + H+: 461.2.

実施例１１

５℃のＤＭＦ（０．１２ｍＬ）中のペント－４－イノイン酸（２．５６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６．２４ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．５８μＬ、０．０３３ｍｍｏｌ）の混合物に、４－（（３－（３－アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロピル）アミノ）－２－ベンジル－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－７－カルボン酸メチル（０．０１０ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を加えた。５分後、室温に戻し、一晩攪拌した。混合物をＤＭＳＯで希釈し、分取ＨＰＬＣ（Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８ ＰｒｅｐＨＴ ５ｕｍ；２１．２×１００ｍｍ）上で２０％ＭｅＯＨ（０．０６５％ＴＦＡ）から１００ＭｅＯＨ（０．０５％ＴＦＡ）の勾配で直接精製して、エタノールからの凍結乾燥後に表題化合物０．００６ｇをＴＦＡ塩として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.74 (quin, J=7.20 Hz, 2 H) 2.02 (br. s., 2 H) 2.20 - 2.29 (m, 2 H) 2.31 - 2.38 (m, 2 H) 2.68 - 2.74 (m, 3 H) 2.76 (t, J=2.54 Hz, 1 H) 3.07 - 3.13 (m, 3 H) 3.69 (q, J=6.30 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.08 (s, 2 H) 7.21 (t, J=7.04 Hz, 1 H) 7.30 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.34 - 7.40 (m, 2 H) 7.51 (t, J=5.48 Hz, 1 H) 7.84 (dd, J=8.22, 1.17 Hz, 1 H) 7.98 - 8.02 (m, 1 H) 8.05 (t, J=5.48 Hz, 1 H) 8.37 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 9.18 (br. s., 1 H) 12.15 (s, 1 H). LRMS + H+: 541.3.

実施例１２

２－ベンジル－４－クロロ－７－（２－メチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）－９Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドールおよびアミンとしてＮ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ１－メチルプロパン－１，３－ジアミンを用いて、先に述べたのと同様の手順に従って、表題化合物を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.52 (quin, J=6.85 Hz, 2 H) 1.80 (quin, J=6.85 Hz, 2 H) 2.18 (s, 3 H) 2.36 (t, J=7.24 Hz, 2 H) 2.41 (t, J=6.65 Hz, 2 H) 2.53 - 2.61 (m, 2 H) 3.64 (q, J=6.52 Hz, 2 H) 4.04 (s, 2 H) 4.43 (s, 3 H) 7.14 - 7.23 (m, 1 H) 7.28 (t, J=7.43 Hz, 2 H) 7.38 (d, J=7.43 Hz, 2 H) 7.49 (t, J=5.09 Hz, 1 H) 7.91 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.32 (d, J=8.22 Hz, 1 H). LRMS + H+: 485.4.

実施例１３

中間体１３Ａ

ＭｅＯＨ（１．６０１ｍＬ）中の２－アミノ－３－カルバモイル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－６－カルボン酸メチル（０．０９０ｇ、０．３８４ｍｍｏｌ）、２－（ナフタレン－２－イル）酢酸メチル（０．２６９ｇ、１．３４５ｍｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド５．４Ｍ（０．２８ｍＬ、１．５３ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波中で、１４０℃で７５分間加熱した。混合物をＭｅＯＨ－ＮＨ４Ｃｌ飽和溶液で希釈し、濾過した。固体をＭｅＯＨ－水ですすいで、高真空下で乾燥させて、０．１２０ｇの粗４－ヒドロキシ－２－（ナフタレン－２－イルメチル）－９Ｈ－ピリド［２’，３’：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－カルボン酸メチルを与えた。

中間体１３Ｂ

ジオキサン（０．４１ｍＬ）－ＤＣＥ（０．６２ｍＬ）中のこの中間体（０．０６０ｇ）にＰＯＣｌ_３（０．１３ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物をマイクロ波中で、１６０℃で１０分間加熱した。反応が完了せず、さらにＰＯＣｌ_３（０．１３１ｍＬ、１．４０５ｍｍｏｌ）を加えた。Ｏｋ。溶媒を除去した。溶媒を除去し、残渣を飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）に懸濁し、１時間攪拌した。固体をブフナー上で回収し、ケークを水（３×２ｍＬ）で洗浄し、高真空下４０℃で乾燥して、４－クロロ－２－（ナフタレン－２－イルメチル）－９Ｈ－ピリド［２’，３’：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－カルボン酸メチル０．０４０ｇを得た。LRMS + H+: 403.1.

実施例１３

先の中間体およびアミンとして３－（ピペリジン－１－イル）プロパン－１－アミンを用いて前と同様の手順に従い、分取ＨＰＬＣ（Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８ ＰｒｅｐＨＴ ５ｕｍ；２１．２×１００ｍｍ）上で２０％ＭｅＯＨ（０．０６５％ＴＦＡ）から１００ＭｅＯＨ（０．０５％ＴＦＡ）の勾配で精製後、表題化合物０．０１２ｇをＴＦＡ塩として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.15 - 1.31 (m, 1 H) 1.43 - 1.72 (m, 5 H) 1.91 - 2.04 (m, 2 H) 2.58 (q, J=11.00 Hz, 2 H) 2.95 (br. s., 2 H) 3.26 (d, J=11.35 Hz, 2 H) 3.72 (q, J=5.50 Hz, 2 H) 3.92 (s, 3 H) 4.27 (s, 2 H) 7.48 (quin, J=6.26 Hz, 2 H) 7.58 (d, J=8.61 Hz, 1 H) 7.64 (t, J=5.09 Hz, 1 H) 7.78 - 7.93 (m, 4 H) 8.22 (s, 1 H) 8.94 (br. s., 1 H) 9.01 (s, 1 H) 12.32 (s, 1 H). LRMS + H+: 509.3.

本明細書に包含される化合物について、ＡＭＬ３における細胞増殖を阻害する能力についてさらに試験したところ、高い効力（ＩＣ_５０＝＜５００ｎＭ）からより低い効力（ＩＣ_５０＝２０００～５０００ｎＭ）までが示された。したがって、ＡＭＬ３細胞における上記括弧内に記載の活性のレベルを有する以下の化合物も包含される（ここで、Ａ：ＩＣ_５０＝＜５００ｎＭ；Ｂ：ＩＣ_５０＝５００－１０００ｎＭ；Ｃ：ＩＣ_５０＝１０００－２０００ｎＭ；およびＤ：ＩＣ_５０＝２０００－５０００ｎＭ）：

一実施形態において、本明細書に記載のピリミド［４，５－Ｂ］インドール誘導体は、がんを治療することを可能にする。同様の作用機序（例えば、Ｋ２７変異、ＥＺＨ２またはＰＲＣ２変異）に基づくと、任意の他のがんが本明細書に包含される。

ＵＭ１７１は、それ自体はＵＭ１７１の存在下で解離する本明細書に記載のＣＲＬ３複合体を活性化することにより、通常ＲＣＯＲ１／ＬＳＤ１およびＨＤＡＣ２複合体の足場タンパク質として作用するＲＣＯＲ１を分解する。したがって、ＵＭ１７１は、ＨＤＡＣおよびＬＳＤ１の阻害をもたらす抗がん剤として、分子糊分解剤のように作用する。

ＫＢＴＢ４複合体がＵＭ１７１処理下でＣｏＲＥＳＴを分解のために標的化することが、本明細書で実証される。ＵＭ１７１分子は、アダプタ／レセプタＫＢＴＢＤ４およびＣｏＲＥＳＴの間の相互作用を増大させることにより、プロテアソーム分解のためのＣｏＲＥＳＴの明確な標的化を引き起こす。

〔生物学的実施例Ｉ〕
全ゲノムＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９スクリーニングおよび方法論
１９，０８４個のＲｅｆＳｅｑ遺伝子、３，８７２個の仮説的ＯＲＦ、および２０，８５２個の代替スプライシングアイソフォームを標的とする２７８，７５４個のｓｇＲＮＡの拡張ノックアウト（ＥＫＯ）プール化レンチウイルスライブラリを、Bertomeuら(2018, Mol Cell Biol, 38(1): e00302-1)によって以前に記載されたようにドキシサイクリン誘導性Ｃａｓ９を発現するように操作したＯＣＩ－ＡＭＬ５およびＯＣＩ－ＡＭＬ１細胞株のクロ－ン内に導入した。ＥＫＯライブラリ（ｓｇＲＮＡあたり最低５００細胞で維持）を、２μｇ／ｍＬドキシサイクリンを補充した１０％ＦＢＳ ＤＭＥＭ中で７日間培養して、ノックアウトを誘導した。７日目に１億４千万個の細胞を１，２００ｒｐｍで５分間スピンし、１×ＰＢＳで洗浄し、ペレット化し、凍結した。ドキシサイクリンなしで、２５０ｎＭおよび８００ｎＭのＵＭ１７１またはＤＭＳＯのみでさらに８日間または１４日間放置してライブラリを増殖させた（ｓｇＲＮＡあたり平均２５０細胞）。細胞濃度は２日ごとに評価した。ゲノムＤＮＡを、ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ ｂｌｏｏｄ ｍａｘｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、すべてのサンプルから抽出した。ＳｇＲＮＡ配列を回復させ、ＰＣＲによってＩｌｌｕｍｉｎａアダプタを装着し、Bertomeuらの以前の記載（2018, Mol Cell Biol, 38(1): e00302-1）のようにＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ２０００装置（ＩＲＩＣ）上でＮＧＳを実行した。合成レスキュー／陽性選択および合成致死／陰性選択のベータスコアは、ＭＡＧｅＣＫ－ＶＩＳＰＲ(Li et al., 2015, Genome Biol, 16:281)を使用して決定した。

マウス抗ヒト抗体を用いて、ＣＤ３４（ＡＰＣまたはＢＶ４２１－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４５ＲＡ（ＰＥ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ８６（ＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ７１０－ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ９０（ＰＥＣＹ７－ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）およびＣＤ２０１（ＡＰＣ－ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を検出した。フローサイトメトリの取得はＣａｎｔｏＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で行い、データ解析はＦｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ，アメリカ合衆国オレゴン州オシュランド）およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。死細胞は、７ＡＡＤ染色を用いて除外した。

細胞内染色のために、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ペレット化し、Ｔｒｕｅ Ｎｕｃｌｅａｒ固定キット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ＃４２４４０１）を使用して固定した。次に、細胞をマウスモノクローナル抗Ｈ３Ｋ２７Ａｃ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃１５５６２）、ウサギ抗Ｈ３Ｋ４ｍｅ２（Ａｂｃａｍ、カタログ＃７７６６）およびウサギ抗Ｈ３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃１２１６７Ｓ）で染色し、ＦＡＣＳ分析をＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＣａｎｔｏＩＩサイトメーターで行った。

臍帯血単位は、カナダ、ケベック州モントリオールのＣｈａｒｌｅｓ－Ｌｅｍｏｙｎｅ病院で倫理的に承認されたプロトコルに従って、同意した母親から採取した。ヒトＣＤ３４^＋臍帯血（ＣＢ）細胞を、Ｔｈｅ ＥａｓｙＳｅｐ(商標) ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃａｔ＃１８０５６）を用いて単離した。より原始的な表現型の選別は、ＢＤ ＡｒｉａＩＩソーターを用いて追加のステップで行った。

ヒト１００ｎｇ／ｍＬ幹細胞因子（ＳＣＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、１００ｎｇ／ｍＬ ＦＭＳ様トリシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、５０ｎｇ／ｍＬトロンボポエチン（ＴＰＯ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）および１０μｇ／ｍＬ低密度リポタンパク質（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＳｔｅｍＳｐａｎ ＳＦＥＭ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）からなるＨＳＣ増殖培地中で、ヒトＣＤ３４^＋細胞を培養した。

動物を用いた全ての実験は、モントリオール大学動物ケア委員会により承認されたプロトコルの下で実施した。亜致死的照射（２５０ｃＧｙ、移植の＜２４時間前）した８～１０週齢のメスＮＳＧ（ＮＯＤ－Ｓｃｉｄ ＩＬ２Ｒ?ｎｕｌｌ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）マウスに、新鮮なＣＤ３４＋ＣＢ細胞または後代を、尾静脈注射によって移植した。ヒト細胞ＮＳＧ－ＢＭ細胞は、動物を２６週目に犠牲にしたときに大腿骨吸引により、または２つの大腿骨、脛骨および臀部をフラッシングすることにより回収した。

ＨＤＡＣ阻害剤（パノビノスタット（Ａｄｏｏｑ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃Ａ１０５１８）、バルプロ酸（Ｓｉｇｍａ、＃Ｐ４５４３）、Ｍ３４４（Ｓｉｇｍａ、＃Ｍ５８２０）、ＬＭＫ２３５（Ｓｉｇｍａ、＃ＳＭＬ１０５３）を、ＣＤ３４＋臍帯血細胞においてそれぞれ５，１０００、５００および５００ｎＭで使用した。ＬＳＤ１阻害剤（トラニルシプロミン（ＴＣＰ））を５および２０μＭで使用した。ｉＢＥＴ（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、＃Ｓ７１８９）をＣＤ３４＋臍帯血細胞において５０および１００ｎＭで使用した。ＮＥＤＤ８ Ｅ１活性化酵素（ＮＡＥ）Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＭＬＮ４９２４（Ａｄｏｏｑ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃Ａ１１２６０－５）を１００ｎＭで使用した。プロテアソーム阻害剤ＭＧ１３２（Ａｄｏｏｑ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃Ａ１１０４３）を１０μＭで使用した。

ｓｈＲＮＡ（ＫＢＴＢＤ４、ＣＵＬ３、ＮＵＤＣＤ３、ＣＡＮＤ１、ＲＣＯＲ１、ＬＳＤ１）を有するレンチウイルスベクターを、Fellmannら(2013, Cell Rep, 5:1704-1713)に記載される適切なｓｈＲＮＡ配列を、ＧＦＰと同様にｍｉＲ－Ｅ配列を含むＭＮＤＵベクターにクローニングすることにより生成した。対照ベクターには、ｓｈＲＮＡ標的化レニラルシフェラーゼ（ｓｈＬｕｃ）を含ませた。

ｓｇＲＮＡ（ＫＢＴＢＤ４、ＮＵＤＣＤ３）を有するレンチウイルスベクターを、適切な配列（ＫＢＴＢＤ４：ＧＧＣＴＡＧＣＡＴＧＧＡＡＴＣＡＣＣＡＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１；ＮＵＤＣＤ３：ＧＧＡＧＣＧＣＴＣＣＡＴＧＧＣＣＡＣＣＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）をｐＬＫＯ５．ｓｇ．ＥＦＳ．ｔＲＦＰ６４７レンチウイルスベクターにクローニングすることにより生成した。対照ベクターには、ｓｇＲＮＡ標的化ＡＡＶＳ１遺伝子座（ｓｇＡＡＶＳ１）を含ませた。

ＫＢＴＢＤ４ ｃＤＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、＃ＭＨＳ６２７８－２０２８２９４９２）をＭＮＤＵ－ｅＧＦＰレンチウイルスベクターにサブクローニングした。ＢＴＢおよびＫｅｌｃｈ変異体は、それぞれＢＴＢドメインおよび最初の３つのＫｅｌｃｈドメインを欠失させることによって生成した。

ＨＥＫ－２９３細胞においてレンチウイルスを産生し、初代ＣＤ３４＋細胞またはＡＭＬ細胞株を１０ｎｇ／ｍＬポリブレンを補充した培地中で２４時間レンチウイルスに感染させた。ＧＦＰ陽性細胞の割合で決定される感染効率を、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩフローサイトメータを用いてフローサイトメトリによってモニターした。必要に応じて、感染細胞をＢＤ ＡｒｉａＩＩセルソーターを用いて選別し、ノックダウン効率を標準的な方法を用いてウエスタンブロッティングによって求めた。

全タンパク質抽出を、溶解バッファ（２５ｍＭトリス ｐｈ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ＮＰ－４０、プロテアーゼ阻害剤）中で実施した。クロマチン結合（ＣＢ）および細胞質／核質（ＣＮ）分画を、Ｍladenovと同僚により記載されたように実施した(2007, J Cell Physiol, 211: 468-476)。細胞質分画を、溶解バッファ（１０ｍＭ ｐｉｐｅｓ ｐｈ６．８、０．３Ｍスクロース、０．１Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＭｇＣｌ２、５ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０１５％ジギトニンおよびプロテアーゼ阻害剤）中で実施した。

抗ヒト抗体を用いて、ＫＢＴＢＤ４（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、＃ＮＢＰ１－８８５８７）、ＮＵＤＣＤ３（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、＃ＮＢＰ１－８２９４０）、ＣＵＬ３（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、＃ＮＢ１００－５８７８８）、ＲＣＯＲ１（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、＃ＮＢ６００－２４０）、ＬＳＤ１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃２１３９Ｓ）、ＨＤＡＣ２（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃Ａ３００－７０５Ａ）、Ｈ３Ｋ２７Ａｃ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃８１７３Ｓ）、ＣＵＬ１（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃ｓｃ－１７７７５）、ＮＣＬ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃１４５７４Ｓ）、ＴＵＢＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃２１４４）およびＨ３（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、＃０６－７５５）を検出した。

ＢｉｏＩＤプルダウン実験を、以前に記載されたように実施した(Comartin et al., 2013, Curr Biol, 23:1360-1366)。簡単に言えば、全長ヒトＫＢＴＢＤ４コーディング配列をＰＣＲにより増幅し、ｐｃＤＮＡ－ＦＲＴ／ＴＯ－ＦＬＡＧＢｉｒＡ発現ベクターにクローニングした。ＦＬＡＧＢｉｒＡまたはＦＬＡＧＢｉｒＡ^＊－ＫＢＴＢＤ４を安定的に発現する２９３Ｔ細胞を生成し、１μｇ／ｍＬのテトラサイクリン（Ｓｉｇｍａ）、５０μＭのビオチン（ＢｉｏＳｈｏｐ、カナダ、オンタリオ州バーリントン）および１０μＭのＭＧ１３２を補充した完全培地で２４時間インキュベートした。細胞を回収し、溶解バッファで溶解した。タンパク質抽出物をストレプトアビジン－セファロースビーズと一緒にインキュベートした。

ペプチドを、ｔｒｉｂｒｉｄ Ｆｕｓｉｏｎ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に結合したＰｒｏｘｅｏｎ ｎａｎｏｆｌｏｗ ＨＰＬＣシステムを用いてＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析した。各サンプルを、手動で充填した逆相分析カラム（長さ１８ｃｍ、１５０ｍｍｉ．ｄ．）（Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８、３ｍｍ、３００Ａ°、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）にロードして分離させた。ＬＣ分離は、５－３０％水性ＡＣＮ（０．２％ＦＡ）の直線勾配を用いて、１０６分で流量０．６ｍＬ／ｍｉｎで実施した。ＭＳスペクトルは分解能６０，０００で取得した。高エネルギー解離（ＨＣＤ）を用いた最も強いイオンのデータ依存スキャンには「ＴｏｐＳｐｅｅｄ」（５秒ウィンドウ内のシーケンシングイベントの最大数）メソッドを使用した。ＭＳおよびＭＳ／ＭＳスキャンのＡＧＣ目標値は、それぞれ５ｅ５（ｍａｘ ｆｉｌｌ ｔｉｍｅ ２００ｍｓ）および５ｅ４（ｍａｘ ｆｉｌｌ ｔｉｍｅ ２００ｍｓ）に設定した。前駆物質単離ウィンドウはｍ／ｚ１．６に設定し、ＨＣＤ正規化衝突エネルギーは２５に設定した。動的排除ウィンドウは３０秒に設定した。ＭＳデータはＭａｘＱｕａｎｔソフトウェアバージョン１．３．０．３を用いて解析し、Ｈ．Ｓａｐｉｅｎｓ ｕｎｉｐｒｏｔデータベースのＳｗｉｓｓＰｒｏｔサブセットに対して検索を行った。

５×１０^５個のＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞をＵＭ１７１（２５０ｎＭ）に６～７２時間曝露し、または曝露せずに、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃａｔ＃１５５９６０２６）中に－８０℃で保存した。ｃＤＮＡライブラリをＴｒｕＳｅｑプロトコル（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）に従って構築し、シーケンシングをＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ２０００装置を用いて実施した。

遺伝子発現統計を、ｋａｌｌｉｓｔｏ／ｓｌｅｕｔｈ解析パイプラインおよびＧＲＣｈ３８バージョン８４アノテーションを使用して得た。ＴＰＭ値をＲにロードし、ウィルコクソン順位和統計を使用して差次的発現を検定した。有意性（ｐ≦０．０１、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定）に基づき、差次的発現遺伝子を選択した。

〔生物学的実施例ＩＩ〕
経口および／または静脈内投与された化合物のバイオアベイラビリティを実証するＰＫアッセイ
マウス（ｎ＝３）においてＰＫアッセイを実施した。化合物を１ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し（図１６の化合物：５％ブドウ糖、図１７ＡのＵＭ６８１：２５ｍＭクエン酸：５％ブドウ糖（１：３））、投与から５、１５、３０分ならびに１、２、４、６および８時間後に血漿サンプルを回収した。以下の薬物動態パラメータを算出した。図１６の化合物の半減期（Ｔ_１／２）は１．７時間であり、分布容積（Ｖｓｓ）は１３．９Ｌ／ｋｇと決定され、クリアランス（ＣＬ）は１４１．６ｍＬ／分／ｋｇであった。ＵＭ６８１については、Ｔ_１／２は１．９時間であり、Ｖｓｓは１４．３Ｌ／ｋｇと決定され、ＣＬは１０９ｍＬ／分／ｋｇであった。

化合物を２０ｍｇ／ｋｇで経口投与し、投与から１５分、３０分ならびに１、２、４、６および８時間後に血漿サンプルを回収した。以下の薬物動態パラメータを算出した。ＵＭ７２９の最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）は０．２ｕＭであり、最大時間（ｔ_ｍａｘ）は０．８時間と決定され、曲線下面積（ＡＵＣ）は１．２ｕＭ^＊ｈであり、％バイオアベイラビリティ（％Ｆ）は１９％であった（図１７Ｂを参照）。ＵＭ６８１についても、Ｃ_ｍａｘは０．２ｕＭであり、ｔ_ｍａｘは４時間と決定され、ＡＵＣは２．４５ｕＭ^＊ｈであり、％バイオアベイラビリティ（％Ｆ）は３１％（オス）および３９％（メス）であった。

本開示は、その特定の実施形態に関連して記載されているが、さらなる修正が可能であり、当該技術分野において既知または通例の慣行の範囲内にあり、本明細書において先に記載された本質的特徴に適用可能で、かつ添付の特許請求の範囲に従う本開示からの逸脱を含んだ任意の変形、使用または適応を、本出願は網羅することが意図されることが理解されよう。

Claims (18)

1. 患者に少なくとも1つの式Ｉの化合物：
   

   

   またはその塩もしくはプロドラッグを投与するステップを含む、前記患者のがんを治療する方法であって、
   式中：
   各Ｙは、独立してＮおよびＣＨから選択され；
   ｍは０～３（または置換基Ｚを含む環においてＹがＣＨである場合は０～４）の整数であり；
   Ｚは、毎回独立して、以下の：
   －ＣＮ、
   －Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
   －Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－ヘテロアリール、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－アリールから選択され、
   ここで、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
   Ｗは
   －ＣＮ、
   －Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
   －Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
   －ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
   －ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
   －Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
   －ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －ＮＲ１Ｓ（Ｏ）_２Ｒ１、
   １つ、２つもしくは３つのＲＡもしくはＲ１置換基で任意に置換された－ベンジル、
   －Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   Ｌおよびヘテロアリール基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロアリール、
   Ｌおよびヘテロシクリル基のいずれかもしくは両方に結合した１つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－ヘテロシクリル、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）ｎ－アリール、
   －Ｘ－Ｌ－（Ｘ－Ｌ）_ｎ－ＮＲ１ＲＡ、
   －（Ｎ（Ｒ１）－Ｌ）_ｎ－Ｎ^＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６^－、または
   －ハロゲンであり；
   ここで、ｎは０、１、２、３、４、または５のいずれかに等しい整数であり、
   さらに、Ｒ１およびＲ３が窒素原子に結合している場合、それらは任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し、該環は１つまたは複数のＲＡまたはＲ４で任意に置換され；
   各Ｘは、独立してＣＨ_２、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から選択され；
   各Ｌは、独立して
   －Ｃ_１－６アルキレン、
   －Ｃ_２－６アルケニレン、
   －Ｃ_２－６アルキニレン、
   Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルキレン、または
   Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_３－７シクロアルケニレンであり、
   ここで、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立して、１つまたは２つのＲ４またはＲＡ置換基で任意に置換され；
   Ｒ１は、それぞれ独立して
   －Ｈ、
   －Ｃ_１－６アルキル、
   －Ｃ_２－６アルケニル、
   －Ｃ_２－６アルキニル、
   －Ｃ_３－７シクロアルキル、
   －Ｃ_３－７シクロアルケニル、
   －Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
   －ヘテロシクリル、
   －アリール、
   －ヘテロアリール、または
   －ベンジルであり、
   ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
   Ｒ２は
   －Ｈ、
   さらに１つのＲＡ置換基で任意に置換された－Ｃ_１－６アルキル、
   －Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－ヘテロアリール、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４で任意に置換された－Ｌ－ヘテロシクリル、または
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｌ－アリール、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基で任意に置換された－Ｎ（Ｒ１）アリールであり、
   Ｒ３はそれぞれ独立して
   －Ｈ、
   －Ｃ_１－６アルキル、
   －Ｃ_２－６アルケニル、
   －Ｃ_２－６アルキニル、
   －Ｃ_３－７シクロアルキル、
   －Ｃ_３－７シクロアルケニル、
   －Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
   －ヘテロシクリル、
   －アリール、
   －ヘテロアリール、
   －ベンジル、または
   －メチル２－ベンジル－９Ｈ－ピリド［２'，３'：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－７－カルボキシラ―ト－４－イルであり、
   ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
   Ｒ４は、それぞれ独立して
   －Ｈ、
   －Ｃ_１－６アルキル、
   －Ｃ_１－６ハロアルキル、
   －Ｃ_２－６アルケニル、
   －Ｃ_２－６アルキニル、
   －Ｃ_３－７シクロアルキル、
   －Ｃ_３－７シクロアルケニル、
   －Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル、
   －ヘテロシクリル、
   －アリール、
   －ヘテロアリール、または
   －ベンジルであり、
   ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ペルフルオロ化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立して、１つ、２つまたは３つのＲＡまたはＲｄ置換基で任意に置換され；
   Ｒ５は、それぞれ独立して
   －Ｃ_１－６アルキル、
   Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルケニル、
   Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む－Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ_２－６アルキニル、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－アリール、
   １つもしくは複数のＲＡもしくはＲ４置換基を任意に含む－Ｌ－ヘテロアリール、
   －Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、
   －Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
   －Ｃ_１－６アルキレン－ＣＮ、
   －Ｃ_１－６アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（ここで、Ｒ１およびＲ３は、任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つもしくは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成する）；または
   －Ｃ_１－６アルキレン－ＯＨであり；
   Ｒ６は
   －ハロゲン、
   －ＯＣ（Ｏ）ＣＦ_３、または
   －ＯＣ（Ｏ）Ｒ１であり；
   ＲＡは、それぞれ独立して
   －ハロゲン、
   －ＣＦ_３、
   －ＯＲ１、
   －Ｌ－ＯＲ１、
   －ＯＣＦ_３、
   －ＳＲ１、
   －ＣＮ、
   －ＮＯ_２、
   －ＮＲ１Ｒ３、
   －Ｌ－ＮＲ１Ｒ１、
   －Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
   －Ｓ（Ｏ）_２Ｒ４、
   －Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
   －ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
   －ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
   －Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
   －ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
   －Ｎ_３；または
   －（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨであり；
   ここで、Ｒ１およびＲ３は、任意に窒素原子と結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１つまたは複数の他のヘテロ原子を任意に含む３～７員環を形成し；
   Ｒｄはそれぞれ独立して
   －Ｈ、
   －Ｃ_１－６アルキル、
   －Ｃ_２－６アルケニル、
   －Ｃ_２－６アルキニル、
   －Ｃ_３－７シクロアルキル、
   －Ｃ_３－７シクロアルケニル、
   －Ｃ_１－５ペルフルオロ化アルキル
   －ベンジル、または
   －ヘテロシクリルであり；
   ＲＢは
   －Ｈ、または
   －Ｃ_１－６アルキルであり；
   任意に、少なくとも１つの細胞拡大因子を伴う、方法。
2. 前記式Ｉの化合物は、
   

   

   またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
3. 前記式Ｉの化合物は、
   

   

   の臭化水素酸塩である、請求項１に記載の方法。
4. 前記式Ｉの化合物は、
   

   

   またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
5. 前記式Ｉの化合物は、本明細書、例えば本明細書の表３で定義されるとおりであるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
6. 前記患者はヒトまたは動物である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記動物はマウスである、請求項６に記載の方法。
8. 前記化合物は、経口、筋肉内、静脈内または皮下投与のために製剤化される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記化合物は、ＬＳＤ１、ＲＣＯＲ１、ＨＤＡＣ２およびＣｏＲＥＳＴの少なくとも１つを分解する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. がんを治療するための式Ｉの化合物：
    

    

    またはその塩もしくはプロドラッグ
    （式中、Ｗ、Ｙ、Ｚ、Ｒ２、ＲＢおよびｍは、請求項１に定義されるとおりである）。
11. 前記式Ｉの化合物はＵＭ１７１
    

    

    またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０に記載のがんを治療するための化合物。
12. 前記式Ｉの化合物は、
    

    

    の臭化水素酸塩である、請求項１０に記載のがんを治療するための化合物。
13. 前記式Ｉの化合物は
    

    

    またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０に記載のがんを治療するための化合物。
14. 前記式Ｉの化合物は表３で定義されるとおりであるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０に記載のがんを治療するための化合物。
15. 前記化合物は、経口、筋肉内、静脈内または皮下投与のために製剤化される、請求項１０～１４のいずれか一項に記載のがんを治療するための化合物。
16. 前記化合物はＬＳＤ１、ＲＣＯＲ１、ＨＤＡＣ２およびＣｏＲＥＳＴの少なくとも１つを分解する、請求項１０～１５のいずれか一項に記載のがんを治療するための化合物。
17. 前記がんは、Ｋ２７変異、ＥＺＨ２変異またはＰＲＣ２変異に基づくがんである、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法または請求項１０～１６のいずれか一項に記載の化合物。
18. 増殖中のがん細胞を含む培地に請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含むｅｘ ｖｉｖｏでがん細胞の増殖を阻害する方法であって、前記化合物は前記がん細胞の増殖に対して抗悪性腫瘍性を有する、方法。

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