JP2023500337A - 脳がんを治療するための併用療法 - Google Patents

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Abstract

対象における脳がんを治療するための核酸分子、タンパク質、組成物、および方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡを含む。いくつかの実施形態では、組成物はまた、アジュバントを含む。本方法は、投与を必要とする対象に、がん抗原を投与することを含む。ある特定の実施形態によれば、本方法はさらに、アジュバントおよび抗ＰＤ－１抗体を投与することを伴う。ある特定の実施形態では、この方法は、放射線療法および／または化学療法剤を投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、臨床的に安全であることが証明されているか、臨床的に有効であることが証明されているか、またはその両方である。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年８月２７日に出願された米国出願第６３／０７０，９８７号、２０２０年４月３０日に出願された米国出願第６３／０１８，０６０号、２０２０年３月１１日に出願された米国出願第６２／９８８，１０２号、および２０１９年１１月４日に出願された米国出願第６２／９３０，４１７号の利益を主張する。これらの出願の各々は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含有し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年１１月４日に作成され、１０４４０９＿０００５８１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、８９，８６１バイトのサイズである。
本発明は、併用療法および脳がんを治療するための方法に関する。
療法の進歩にもかかわらず、膠芽腫（ＧＢＭ）は依然として最も致命的ながんのうちの１つである。ＧＢＭの現在の標準療法は、手術後、放射線療法（ＲＴ）を併用し、ＲＴ中にテモゾロミド（ＴＭＺ）化学療法を毎日投与し、次いで、選択された患者に対してＲＴ終了後に６～１２サイクルの維持（アジュバント）を行った［Ｓｔｕｐｐ Ｒ，Ｍａｓｏｎ ＷＰ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｎｔ ＭＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ｐｌｕｓ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ａｎｄ ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ ｆｏｒ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００５，３５２：９８７－９９６］。
プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）阻害剤などのチェックポイント阻害剤は、多くのがんでの奏効率が増加しているが、ＧＢＭでの臨床的効果はまだ示されていない。
したがって、疾患の臨床管理および進行を容易にするためのＧＢＭの治療方法の特定および開発が必要とされている。さらに、がんに罹患している対象の疾患進行を遅らせ、かつ／または死亡率を低減するために、より効果的な治療が必要とされる。
がんを防止または治療するためのワクチンおよびそれらの使用方法が本明細書に提供される。がんは、脳がん、例えば、膠芽腫であり得る。ワクチンは、好ましくは、少なくとも３つのがん抗原、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡを含む。ある特定の実施形態では、ワクチンはまた、ＩＬ－１２などのアジュバント、および抗ＰＤ－１抗体も含む。本方法は、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡ、アジュバント、ならびに抗ＰＤ－１抗体などのプログラム死受容体－１（ＰＤ－１）チェックポイント阻害剤を、がんと診断された対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍成長を防止する。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍成長および／または腫瘍量を低減させることができる。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍細胞の転移を防止することができる。いくつかの実施形態では、方法は、対象における細胞免疫応答を増加させることができる。いくつかの実施形態では、方法は、対象の無腫瘍生存、無増悪生存、全生存、またはそれらの任意の組み合わせを増加させる。
ある特定の実施形態では、ＩＬ－１２は、ＤＮＡプラスミド、例えば、ＩＮＯ－９０１２またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物によってコードされる。ある特定の実施形態では、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡは、１つ以上のＤＮＡプラスミド、例えば、ＩＮＯ－５４０１またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物によってコードされる。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブまたはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物である。ある特定の実施形態では、方法は、放射線療法および／または化学療法剤、例えば、テモゾロミドまたはその生物学的等価物を投与することをさらに含む。
ある特定の実施形態では、方法は、臨床的に安全であることが証明されているか、臨床的に有効であることが証明されているか、またはその両方である。
概要ならびに以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むとさらに理解される。開示される方法を例示する目的で、その例示的な実施形態が図面に示されており、しかしながら、この方法は、開示される特定の実施形態に限定されない。図面：
実施例の研究設計を示す。
実施例の研究対象集団の人口統計を示す。
ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２およびセミプリマブ－ｒｗｌｃの最初の投与後の時点で、浮腫または腫瘍を示唆するＭＲＩシグナルの増加を示す２人の患者の代表的なＭＲＩ画像を示す。いくつかの患者の生検では、壊死および混合炎症を伴う治療関連の変化、有糸分裂活性の不在、および生存腫瘍の証拠がないことが示されている。下部パネルのＭＲＩ画像に代表される対象は、９週目に疾患進行の証拠を示したが、２１週目に消散を示した。切除されたＭＲＩで同様の所見を有する対象は、生存腫瘍がない状態での免疫浸潤のみを示した。
ＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃの組み合わせが、１２ヶ月のデータカットオフで得られた５／１１人の対象におけるすべての３つの抗原、および９人の対象における少なくとも１つの抗原に対してベースラインを上回るＩＦＮ－ｇの大きさを有する免疫原性であることを支持するＥＬＩＳｐｏｔ結果を示す。
１２ヶ月のデータカットオフで得られた溶解電位（グランザイムＡ、パーフォリンを発現する）を有する生きた、抗原特異的、活性化（ＣＤ３８＋）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す溶解性顆粒負荷アッセイ結果を示す。図５Ａは、ＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃによる治療前（前）および治療後の最高値（ピーク）からの、生きた、抗原特異的、活性化（ＣＤ３８＋）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。各対象は、白丸で表され、棒は、平均値を表す。各抗原のグラフ、ならびに合わせてアッセイされた８人の対象（図５Ｂ）および１２週目までの利用可能な試料を有する５人の対象（図５Ｃ）について、治療前とピークとの差、デルタが示されている。ＩＮＯ－５４０１は、ＷＴ１、ＰＳＭＡ、およびｈＴＥＲＴの合計である。箱ひげ図は、２５パーセンタイルから７５パーセンタイルまで延び、中央値には水平線があり、平均値には「＋」がある。 同上。 同上。
腫瘍細胞内で非メチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡの６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。曲線は、一定の時間間隔での事象の確率を示す。事象の確率は、ｙ軸上に数値で表され、時間間隔は、ｘ軸上に表される。示される事象は、無増悪生存である。無増悪生存は、所与の対象についての所与の時点での疾患の進行の不在である。
腫瘍細胞内でメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＢの６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。曲線は、一定の時間間隔での事象の確率を示す。事象の確率は、ｙ軸上に数値で表され、時間間隔は、ｘ軸上に表される。示される事象は、無増悪生存である。無増悪生存は、所与の対象についての所与の時点での疾患の進行の不在である。
腫瘍細胞内で非メチル化されたかまたはメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡおよびコホートＢの６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。曲線は、一定の時間間隔での事象の確率を示す。事象の確率は、ｙ軸上に数値で表され、時間間隔は、ｘ軸上に表される。示される事象は、無増悪生存である。無増悪生存は、所与の対象についての所与の時点での疾患の進行の不在である。
コホートＡ、コホートＢ、および両方のコホートを合わせた６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。コホート当たりの対象の総数、事象の数、事象（ＰＦＳ６）の推定、および事象（ＰＦＳ６）の数値的推定が存在する９５％信頼区間（ＣＩ）が、すべて提供されている。
腫瘍細胞内で非メチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡの１２ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。 腫瘍細胞内で非メチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡの１８ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。コホートＡにおけるフォローアップ期間中央値は、１７．８ヶ月である。ｍＩＴＴには、１回用量以上の研究療法を受けた任意の対象が含まれる。陰影は、その時点での生存についての点推定に対する信頼帯を表す。
腫瘍細胞内でメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＢの１２ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。 腫瘍細胞内でメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＢの１８ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。コホートＢにおけるフォローアップ期間中央値は、１５．６ヶ月である。打ち切り、コホートＢの２人の対象は、３週目にフォローアップの同意を撤回した。ｍＩＴＴには、１回用量以上の研究療法を受けた任意の対象が含まれる。陰影は、その時点での生存についての点推定に対する信頼帯を表す。
コホートＡ＋Ｂを合わせた１２ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。
コホートＡ、コホートＢ、および組み合わせの１２ヶ月および１８ヶ月における全生存期間の有効性データを示す。図は、１２ヶ月および１８ヶ月で生存が報告された対象の総数を示す。対象の総数、事象（ＯＳ１２またはＯＳ１８）の推定、および事象（ＯＳ１２またはＯＳ１８）の数値的推定が存在する９５％信頼区間（ＣＩ）が、すべて提供されている。９５％ ＣＩは、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎの正確信頼区間法を使用して計算される。
実施例からの臨床試験プロトコル≧ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード３によって定義されるすべての有害事象を示す。 実施例からの臨床試験プロトコルによって定義されるすべての有害事象を示す。 同上。
１８ヶ月のデータカットオフでのコホートによるＥＬＩＳｐｏｔの結果を提供する。コホートＡでは、これまでに試験した１９／２２人（８６％）の対象が、抗原ＩＮＯ－５４０１のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＩＦＮ－ｇの大きさを有した（図１６Ａ）。コホートＢでは、これまでに試験した１６／１７人（９４％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１での抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＩＦＮ－ｇの大きさを有した（図１６Ｂ）。治療後のピーク時点からのベースライン値がプロットされている。試料を、Ｑ３週×４、次いでＱ１２週に収集した。 同上。
１８ヶ月のデータカットオフにおける、フローサイトメトリー（溶解電位を有する抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大）によるコホートによるＩＮＯ－５４０１の末梢免疫応答後の評価の結果を提供する。コホートＡでは、これまでに試験した１３／１９人（６８％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１での抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＣＤ３８＋ＧｒｚＡ＋Ｐｒｆ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を有した（図１７Ａ）。コホートＢでは、これまでに試験した８／１０人（８０％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１での抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＣＤ３８＋ＧｒｚＡ＋Ｐｒｆ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を有した（図１７Ｂ）。治療後のピーク時点からのベースライン値がプロットされている。試料を、Ｑ３週×４、次いでＱ１２週に収集した。 同上。
開示される核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法は、本開示の一部を形成する添付の図面に関連して取られる以下の詳細な説明を参照することによって、より容易に理解され得る。開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法は、本明細書に記載され、かつ／または示された特定の核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法に限定されないこと、ならびに本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を例示的に説明するためのものであり、請求された核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法を限定する意図はないことが理解されるであろう。
特に明記しない限り、可能性のある機序、作用様式、または改善の理由に関する任意の説明は、例示のみを意図し、開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法は、任意のそのような提案される機序、作用様式、または改善の理由の正確性または不正確性によって制限されるべきではない。
本文を通して、説明は、組成物および当該組成物を使用する方法を指す。本開示が組成物に関連する特徴または実施形態を記載または特許請求する場合、そのような特徴または実施形態は、当該組成物を使用する方法に等しく適用可能である。同様に、本開示が、組成物を使用する方法に関連する特徴または実施形態を記載または特許請求する場合、そのような特徴または実施形態は組成物に等しく適用可能である。
別個の実施形態の文脈で本明細書に記載されるものである、開示される核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法の特定の特徴は、明確にするために、単一の実施形態において組み合わせて提供され得ることを理解されたい。
逆に、単一の実施形態の文脈で記載されるものである、開示される核酸分子、タンパク質、ワクチン、および方法の様々な特徴は、簡潔にするために、別々にまたは任意の下位組み合わせで提供され得る。
がんを防止または治療するためのワクチンおよびそれらの使用方法が本明細書に提供される。がんは、脳がん、例えば、膠芽腫であり得る。ワクチンは、好ましくは、少なくとも３つのがん抗原、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡを含む。ある特定の実施形態では、ワクチンはまた、ＩＬ－１２などのアジュバント、および抗ＰＤ－１抗体も含む。本方法は、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡ、アジュバント、ならびに抗ＰＤ－１抗体などのプログラム死受容体－１（ＰＤ－１）チェックポイント阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍成長を防止する。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍成長および／または腫瘍量を低減させることができる。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍細胞の転移を防止することができる。いくつかの実施形態では、方法は、対象における細胞免疫応答を増加させることができる。いくつかの実施形態では、方法は、対象の無腫瘍生存、無増悪生存、全生存、またはそれらの任意の組み合わせを増加させる。
ある特定の実施形態では、ＩＬ－１２は、ＤＮＡプラスミド、例えば、ＩＮＯ－９０１２またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物によってコードされる。ある特定の実施形態では、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡは、１つ以上のＤＮＡプラスミド、例えば、ＩＮＯ－５４０１またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物によってコードされる。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブまたはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物である。ある特定の実施形態では、方法は、放射線療法および／または化学療法剤、例えば、テモゾロミドまたはその生物学的等価物を投与することをさらに含む。
ある特定の実施形態では、方法は、臨床的に安全であることが証明されているか、臨床的に有効であることが証明されているか、またはその両方である。
組換えがん抗原は、抗原特異的Ｔ細胞および／または高力価の抗体応答を誘導し、それにより、抗原を発現するがんまたは腫瘍に対して向けられた、もしくはそれに反応性である免疫応答を誘導または誘発する。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、細胞性免疫応答、体液性免疫応答、または細胞性免疫応答および体液性免疫応答の両方であり得る。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された細胞性免疫応答には、インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）および／または腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）の誘導または分泌が含まれ得る。他の実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、抗原を発現する腫瘍またはがんの成長を促進する１つ以上の免疫抑制因子、例えば、これらに限定されないが、ＭＨＣ提示を下方制御する因子；抗原特異的制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＰＤ－Ｌ１、ＦａｓＬ、ＩＬ－１０およびＴＦＧ－βなどのサイトカイン、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連線維芽細胞、免疫抑制細胞により産生される可溶性因子、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＭＤＳＣ、ＭＣＰ－１、ならびに免疫チェックポイント分子を上方制御する因子を低減または阻害することができる。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先するであろう。例示的な方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を本発明の実践または試験に使用することができる。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、および例は、単なる例示にすぎず、限定することを意図しない。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載することのみを目的とし、限定することを意図しない。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語およびそれらの変形は、本明細書で使用される場合、追加の行為または構造の可能性を妨げない、オープンエンドな移行句、用語、または語であることを意図する。「ａ」、「ａｎｄ」、および「ｔｈｅ」という単数形は、文脈が別途明示しない限り、複数の参照物を含む。本開示はまた、明示的に記載されているか否かにかかわらず、本明細書に提示される実施形態または要素「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」、他の実施形態も企図する。
本明細書における数値範囲の列挙について、同じ精度でその間に介在する各数が明示的に企図される。例えば、６～９の範囲では、数６および９に加えて７および８が企図され、６．０～７．０の範囲では、数６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、および７．０が明示的に企図される。
本明細書で与えられる定量的発現のいくつかは、「約」という用語で限定されない。「約」という用語が明示的に使用されるか否かにかかわらず、与えられるすべての量は、実際の所与の値を指すことを意図しており、そのような値に対する実験および／または測定条件による近似を含む、当業者の一般的な技術に基づいて合理的に推測されるであろうそのような所与の値に対する近似を指すことも意図されることが理解される。
本明細書で使用される「アジュバント」は、以下に記載の核酸分子およびコード核酸配列によりコードされる抗原の免疫原性を増強するために、本明細書に記載の免疫原性組成物に添加される任意の分子を意味する。
「バイオシミラー」（承認された参照製品／生物学的薬物の、すなわち、参照収載の薬物の）は、（ａ）臨床的に不活性な成分のわずかな差異にもかかわらず、生物学的製品が参照製品と高度に類似していることを示す分析研究、（ｂ）動物研究（毒性の評価を含む）、ならびに／または（ｃ）参照製品が認可され、使用されることが意図され、バイオシミラーについて免許交付が求められる、１つ以上の適切な使用条件で安全性、純度、および効力を示すのに十分な臨床研究もしくは研究（免疫原性および薬物動態または薬力学の評価を含む）から得られるデータに基づいて、安全性、純度、および効力の点で、バイオシミラーと参照製品との間に臨床的に意味のある差異がなく、臨床的に不活性な成分のわずかな差異にもかかわらず、参照製品と高度に類似している生物学的製品を指す。バイオシミラーは、処方する医療従事者の介入なしに、薬局で参照製品と置き換えることができる交換可能な製品であり得る。「交換可能性」の追加の基準を満たすために、バイオシミラーは、任意の所与の患者において参照製品と同じ臨床結果を生じることが予想され、バイオシミラーが個体に２回以上投与される場合、バイオシミラーと参照製品の使用との間の交互または切り替えの安全性または有効性の低下の観点からのリスクは、そのような交互または切り替えなしで参照製品を使用するリスクよりも大きくはない。バイオシミラーは、機序が参照製品について既知である限り、提案された使用条件に対して同じ作用機序を利用する。バイオシミラーに提案されているラベルに規定され、推奨され、または提案されている条件または使用条件は、以前に参照製品に承認されている。投与経路、剤形、および／またはバイオシミラーの強度は、参照製品のものと同じであり、バイオシミラーは、バイオシミラーが安全、純粋、および強力であり続けることを保証するように設計された基準を満たす施設で製造、処理、梱包、または保持される。バイオシミラーは、バイオシミラー性能を変化させることが予想されないＮ末端またはＣ末端切断などの参照製品と比較した場合、アミノ酸配列におけるわずかな修飾を含み得る。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互連結された４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と称される領域が点在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化され得る。ＶＨおよびＶＬは各々、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。本発明の異なる実施形態では、抗体（もしくはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であり得るか、または天然にもしくは人工的に修飾され得る。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。
本明細書で使用される「抗体」という用語はまた、完全抗体分子の抗原結合断片を含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原を特異的に結合して複合体を形成する、天然発生型の、酵素処理で入手可能な、合成の、または遺伝子操作された、ポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、抗体可変ドメインおよび任意選択的に抗体定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現に関与するタンパク質分解消化技法または組換え遺伝子操作技法などの任意の好適な標準的な技法を使用して、完全抗体分子から得られ得る。そのようなＤＮＡは既知であり、かつ／または例えば、商業的供給元、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成され得る。ＤＮＡは、化学的に、または分子生物学技法を使用することによって配列決定および操作されて、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを好適な立体配置に配置するか、またはコドンを導入し、システイン残基を作成し、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失などすることができる。
抗原結合断片の非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位、または拘束されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドが挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュール型免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という表現に包含される。
抗体の抗原結合断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであり得、一般に、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているか、またはそれとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合断片では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の好適な配置で互いに対して位置付けられ得る。例えば、可変領域は、二量体であり得、かつＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ、またはＶＬ－ＶＬ二量体を含有し得る。代替的に、抗体の抗原結合断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有し得る。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本発明の抗体の抗原結合断片内に見られ得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な立体配置としては、（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２、（Ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ、（Ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬが挙げられる。上に列挙される例示的な立体配置のうちのいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の立体配置において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されているか、または完全もしくは部分的ヒンジ領域もしくはリンカー領域によって連結されているかのいずれかであり得る。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間の可動性または半可動性連結をもたらす少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０、またはそれ以上の）アミノ酸からなり得る。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いとの、および／または１つ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインとの（例えば、ジスルフィド結合による）非共有結合において、上に列挙される可変ドメイン立体配置および定常ドメイン立体配置のうちのいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
本明細書で使用される「コード配列」または「コード核酸」は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ分子）を意味する。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳動物の細胞における発現を指示することが可能なプロモータおよびポリアデニル化シグナルを含む、制御要素に作動可能に連結された開始および終結シグナルをさらに含み得る。
本明細書で使用される「補体」または「相補的」は、核酸がヌクレオチド間または核酸分子のヌクレオチド類似体間のワトソン－クリック（例えば、Ａ－Ｔ／ＵおよびＣ－Ｇ）またはフーグスティーン塩基対を意味し得ることを意味する。
本明細書で使用される「コンセンサス」または「コンセンサス配列」は、異なる生物からの同じ遺伝子に対する複数の配列のアライメントの分析に基づいたポリペプチド配列を意味する。コンセンサスポリペプチド配列をコードする核酸配列を調製することができる。
コンセンサス配列を含むタンパク質および／またはそのようなタンパク質をコードする核酸分子を含む免疫原性組成物を使用して、抗原に対して広範な免疫を誘導することができる。
本明細書で互換的に使用される「エレクトロポレーション」、「電気透過化」、または「動電学的増強」（「ＥＰ」）は、生体膜に微視的経路（細孔）を誘導する膜貫通電場パルスの使用を意味し、それらの存在により、プラスミド、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、薬物、イオン、および水などの生体分子が細胞膜の一方の側からもう一方の側へと通過することができる。
核酸配列に関して本明細書で使用される「断片」は、本明細書に開示される抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発することが可能なポリペプチドをコードする核酸配列またはその部分を意味する。断片は、以下に示すタンパク質断片をコードする様々なヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つから選択されるＤＮＡ断片であり得る。断片は、以下に示される１つ以上の核酸配列の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を含むことができる。いくつかの実施形態では、断片は、以下に示される少なくとも１つの核酸配列の少なくとも２０ヌクレオチド以上、少なくとも３０ヌクレオチド以上、少なくとも４０ヌクレオチド以上、少なくとも５０ヌクレオチド以上、少なくとも６０ヌクレオチド以上、少なくとも７０ヌクレオチド以上、少なくとも８０ヌクレオチド以上、少なくとも９０ヌクレオチド以上、少なくとも１００ヌクレオチド以上、少なくとも１５０ヌクレオチド以上、少なくとも２００ヌクレオチド以上、少なくとも２５０ヌクレオチド以上、少なくとも３００ヌクレオチド以上、少なくとも３５０ヌクレオチド以上、少なくとも４００ヌクレオチド以上、少なくとも４５０ヌクレオチド以上、少なくとも５００ヌクレオチド以上、少なくとも５５０ヌクレオチド以上、少なくとも６００ヌクレオチド以上、少なくとも６５０ヌクレオチド以上、少なくとも７００ヌクレオチド以上、少なくとも７５０ヌクレオチド以上、少なくとも８００ヌクレオチド以上、少なくとも８５０ヌクレオチド以上、少なくとも９００ヌクレオチド以上、少なくとも９５０ヌクレオチド以上、または少なくとも１０００ヌクレオチド以上を含むことができる。
ポリペプチド配列に関する「断片」または「免疫原性断片」は、本明細書に開示される抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発することができるポリペプチドを意味する。断片は、以下の様々なアミノ酸配列のうちの少なくとも１つから選択されるポリペプチド断片であり得る。コンセンサスタンパク質の断片は、コンセンサスタンパク質の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を含むことができる。いくつかの実施形態では、コンセンサスタンパク質の断片は、本明細書に開示されるタンパク質配列の少なくとも２０アミノ酸以上、少なくとも３０アミノ酸以上、少なくとも４０アミノ酸以上、少なくとも５０アミノ酸以上、少なくとも６０アミノ酸以上、少なくとも７０アミノ酸以上、少なくとも８０アミノ酸以上、少なくとも９０アミノ酸以上、少なくとも１００アミノ酸以上、少なくとも１１０アミノ酸以上、少なくとも１２０アミノ酸以上、少なくとも１３０アミノ酸以上、少なくとも１４０アミノ酸以上、少なくとも１５０アミノ酸以上、少なくとも１６０アミノ酸以上、少なくとも１７０アミノ酸以上、少なくとも１８０アミノ酸以上を含むことができる。
本明細書で使用する場合、「遺伝子構築物」という用語は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子を指す。コード配列は、プロモータを含む制御要素に作動可能に連結した開始および終結シグナル、ならびに核酸分子を投与される個体の細胞における発現を指示することができるポリアデニル化シグナルを含む。本明細書で使用される場合、「発現可能な形態」という用語は、個体の細胞に存在する場合、コード配列が発現されるように、タンパク質をコードするコード配列に作動可能に連結される必要な制御要素を含有する遺伝子構築物を指す。
本明細書で使用される「相同性」という用語は、ある程度の相補性を指す。部分的な相同性または完全な相同性（すなわち、同一性）があり得る。完全に相補的な配列が標的核酸にハイブリダイズするのを少なくとも部分的に阻害する、部分的に相補的な配列は、機能的用語「実質的に相同な」を使用して言及される。ｃＤＮＡまたはゲノムクローンなどの二本鎖核酸配列に関して使用される場合、本明細書で使用される「実質的に相同な」という用語は、低ストリンジェンシーの条件下で二本鎖核酸配列の鎖にハイブリダイズすることができるプローブを指す。一本鎖核酸配列に関して使用される場合、本明細書で使用される「実質的に相同な」という用語は、低ストリンジェンシーの条件下で一本鎖核酸鋳型配列にハイブリダイズすることができる（すなわち、その補体である）プローブを指す。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈で本明細書で使用される「同一の」または「同一性」は、配列が、特定の領域にわたって同じである特定の割合の残基を有することを意味する。割合は、２つの配列を最適に整列し、２つの配列を特定された領域にわたって比較し、両方の配列において同一の残基が発生する位置の数を決定して、一致した位置の数をもたらし、一致した位置の数を特定された領域における位置の総数で割り、結果に１００を掛けて、配列同一性の割合をもたらすことによって、計算され得る。２つの配列が異なる長さであるか、または整列が１つ以上の千鳥状末端を生み出し、比較の特定された領域が単一の配列のみを含む場合、単一の配列の残基は、計算の分母には含まれるが、分子には含まれない。ＤＮＡおよびＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）は、同等とみなされ得る。同一性は、手動で、またはＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ ２．０などのコンピュータ配列アルゴリズムを使用して実施することができる。
本明細書で使用される「実質的に相補的」は、第１の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０以上のヌクレオチドもしくはアミノ酸の領域にわたって、第２の配列の補体と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、または２つの配列が、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることを意味する。
本明細書で使用される「実質的に同一」は、第１の配列が第２の配列の補体と実質的に相補的である場合、第１および第２の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０以上のヌクレオチドもしくはアミノ酸の領域にわたって、または核酸に関して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であることを意味する。
「治療有効量」という用語は、ヒト対象において治療効果をもたらすことができる生物学的、化合物、または組成物の治療有効量を指す。治療有効量は、特定された疾患もしくは状態を治療、改善、もしくは予防することができる量、または検出可能な治療効果を示すことができる量である。治療有効量は、（ａ）症状の重症度もしくは期間の減少、もしくはがん、例えば、膠芽腫の兆候、（ｂ）腫瘍成長の阻害、もしくは腫瘍壊死、腫瘍収縮および／もしくは腫瘍消失の増加、（ｃ）腫瘍成長および発達の遅延、（ｄ）腫瘍転移の阻害、（ｅ）腫瘍成長の再発の予防、（ｆ）がんを有する対象の生存率の増加、ならびに／または（ｇ）未治療の対象もしくは単剤療法として抗がん療法を投与された対象と比較した、従来の抗がん療法（例えば、化学療法剤または細胞傷害性薬剤の使用の低減もしくは排除）の使用もしくは必要性の減少のうちの１つ以上をもたらす量である。対象の正確な有効量は、対象の体重、サイズ、および健康状態、ならびに対象の性質および範囲、ならびに投与のための選択された治療に依存する。所与の状況に対する治療有効量は、臨床医のスキルおよび判断の範囲内である日常的な実験によって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「治療効果」は、その結果が望ましく、有益であると判断される任意の種類の医学的治療の結果である。これは、結果が予想されたものであるか、予期しないものであるか、または治療の意図しない結果であるかにかかわらず正しい。治療効果は、臨床医または他の有資格観察者によって指摘されるような、客観的に特定可能な改善であり得る。
核酸に関して本明細書で使用される「バリアント」は、（ｉ）参照されたヌクレオチド配列の部分もしくは断片、（ｉｉ）参照されたヌクレオチド配列もしくはその部分の補体、（ｉｉｉ）参照された核酸もしくはその補体と実質的に同一である核酸、または（ｉｖ）参照された核酸、その補体、もしくはそれと実質的に同一である配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸を意味する。バリアントは、完全遺伝子配列またはその断片の完全長にわたって実質的に同一である核酸配列であり得る。核酸配列は、遺伝子配列またはその断片の完全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。
ポリペプチドに関する「バリアント」は、アミノ酸配列においてアミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換が異なるが、参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を保持するものである。バリアントはまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質も意味し得る。バリアントは、アミノ酸配列またはその断片の完全長にわたって実質的に同一であるアミノ酸配列であり得る。アミノ酸配列は、アミノ酸配列またはその断片の完全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。
本明細書で使用される「ベクター」は、複製起点を含有する核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製染色体外ベクターであり得、一実施形態では、発現プラスミドである。ベクターは、１つ以上の異種核酸配列を含有し得るか、またはそれを含み得る。
本明細書で使用される「免疫応答」は、抗原の導入に応答した、宿主の免疫系、例えば、哺乳動物の免疫系の活性化を意味する。免疫応答は、細胞性もしくは体液性応答、またはその両方の形態であり得る。
本明細書で使用される「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、互いに共有結合された少なくとも２つのヌクレオチドを意味する。一本鎖の描写はまた、相補鎖の配列を定義する。よって、核酸はまた、描写された一本鎖の相補鎖を包含する。核酸の多くのバリアントは、所与の核酸と同じ目的で使用することができる。よって、核酸はまた、実質的に同一の核酸およびその補体を包含する。一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的配列にハイブリダイズすることができるプローブを提供する。よって、核酸はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするプローブを包含する。
核酸は、一本鎖もしくは二本鎖であり得、または二本鎖および一本鎖配列の両方の部分を含み得る。核酸は、ゲノムとｃＤＮＡの両方のＤＮＡ、ＲＮＡ、またはハイブリッドであり得、核酸は、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチンヒポキサンチン、イソシトシンおよびイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含み得る。核酸は、化学合成法によって、または組換え法によって得ることができる。
本明細書で使用される「作動可能に連結された」は、遺伝子の発現が、それが空間的に接続されているプロモータの制御下にあることを意味する。プロモータは、その制御下にある遺伝子の５’（上流）または３’（下流）に配置され得る。プロモータと遺伝子との間の距離は、そのプロモータと、プロモータが由来する遺伝子においてそれが制御する遺伝子との間の距離とほぼ同じであり得る。当該技術分野で既知であるように、この距離の変動は、プロモータ機能の喪失なしに順応され得る。
本明細書で使用される「ペプチド」、「タンパク質」、または「ポリペプチド」は、アミノ酸の連結配列を意味することができ、天然、合成、または天然および合成の修飾もしくは組み合わせであり得る。
本明細書で使用される「プロモータ」は、細胞における核酸の発現を付与するか、活性化するか、または増強することができる、合成または天然由来の分子を意味する。プロモータは、その発現をさらに向上させるための、ならびに／または空間的発現および／もしくは時間的発現を変更するための、１つ以上の特異的転写制御配列を含み得る。プロモータはまた、転写の開始部位から数千塩基対ほど離れて位置し得る遠位エンハンサまたはリプレッサ要素も含み得る。プロモータは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、および動物を含む源に由来し得る。プロモータは、構成的に、あるいは細胞、発現が起こる組織もしくは臓器に対して、または発現が起こる発生段階に対して、または生理学的ストレス、病原体、金属イオン、もしくは誘導剤などの外部刺激に応答して差次的に、遺伝子成分の発現を制御することができる。プロモータの代表的な例としては、バクテリオファージＴ７プロモータ、バクテリオファージＴ３プロモータ、ＳＰ６プロモータ、ｌａｃオペレータ－プロモータ、ｔａｃプロモータ、ＳＶ４０後期プロモータ、ＳＶ４０初期プロモータ、ＲＳＶ－ＬＴＲプロモータ、ＣＭＶ ＩＥプロモータ、ＳＶ４０初期プロモータ、またはＳＶ４０後期プロモータ、およびＣＭＶ ＩＥプロモータが挙げられる。
「シグナルペプチド」および「リーダー配列」は、本明細書で互換的に使用され、本明細書に記載されるタンパク質のアミノ末端で連結され得るアミノ酸配列を指す。シグナルペプチド／リーダー配列は、典型的には、タンパク質の局在化を指示する。本明細書で使用されるシグナルペプチド／リーダー配列は、それが産生される細胞からのタンパク質の分泌を容易にし得る。シグナルペプチド／リーダー配列は、多くの場合、タンパク質の残部から開裂され、多くの場合、細胞からの分泌時に成熟タンパク質と称される。シグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質のアミノ末端（すなわち、Ｎ末端）で連結される。
本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、脳がんの１つ以上の症状もしくは兆候を呈し、かつ／または例えば膠芽腫を含む脳がんと診断され、それに対する治療を必要とするヒトまたは非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態では、「対象」という用語は、「患者」という用語と互換的に使用され得る。例えば、ヒト対象は、原発性もしくは転移性腫瘍、ならびに／または原因不明の体重減少、全般的な脱力感、持続的な疲労、食欲不振、発熱、夜間汗、骨痛、息切れ、腹部腫脹、胸痛／圧力、脾臓の肥大、およびがん関連バイオマーカー（例えば、ＣＡ１２５）のレベルの上昇を含むがこれらに限定されない１つ以上の症状または兆候と診断され得る。この発現は、原発性または確立された腫瘍を有する対象を含む。この用語は、原発性または転移性腫瘍（進行性悪性腫瘍）を有する対象を含む。例えば、この発現は、新たに診断された対象を含む。いくつかの実施形態では、発現は、開示される方法による治療が初期治療である対象（例えば、患者ががんの以前の全身治療を受けていない「第一選択」治療）を含む。ある特定の実施形態では、発現は、開示される方法による治療が「二次選択」治療である対象を含み、患者は、化学療法、手術、および放射線を含むがこれらに限定されない「標準治療」療法で以前に治療されている。
本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などという用語は、症状を緩和すること、症状の原因を一時的もしくは永続的に排除すること、腫瘍成長を遅延もしくは阻害すること、腫瘍細胞負荷もしくは腫瘍負荷を低減させること、腫瘍退縮を促進すること、腫瘍収縮、壊死および／もしくは消失を引き起こすこと、腫瘍再発を防止すること、転移を防止または阻害すること、転移性腫瘍成長を阻害すること、ならびに／または対象の生存期間を増加させることを意味する。
本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」という語句は、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡ、およびＷＴ－１が、アジュバント、プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）チェックポイント阻害剤、放射線療法、および／または化学療法剤の投与と同時、直前、または直後に、対象に投与されることを意味する。ある特定の実施形態では、がん抗原は、アジュバントとの共製剤として投与される。
本明細書で使用される場合、別段の記載がない限り、「臨床的に証明された」という用語（独立して使用されるか、または「安全な」および／もしくは「有効な」という用語を修正するために使用される）は、それが、臨床治験が米国食品医薬品局、ＥＭＡ、または対応する国の規制当局の承認基準を満たした臨床治験によって証明されたことを意味するものとする。例えば、証明は、本明細書で提供される実施例に記載される臨床治験によって提供され得る。
「臨床的に証明された安全」という用語は、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡ、ＷＴ１（例えば、ＩＮＯ－５４０１またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物として投与される）と、ＩＬ－１２（例えば、ＩＮＯ－９０１２またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物として投与される）などのアジュバント、および抗ＰＤ－１抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体ＲＥＧＮ２８１０またはバイオシミラーもしくは生物学的等価物）などのプログラム死受容体－１（ＰＤ－１）チェックポイント阻害剤とを組み合わせた用量、投与計画、治療、または方法に関するものであり、標準治療または別対照薬と比較して、許容可能な頻度および／または許容可能な治療下で発現した有害事象（ＡＥまたはＴＥＡＥと称される）の重症度を有する有利なリスク：利益比率を指す。有害事象とは、医薬品を投与された患者で起こる不適切な医学的事象である。安全性の指標の１つは、有害事象の一般毒性基準ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３に従ってグレード付けされた米国国立がん研究所（ＮＣＩ）の有害事象（ＡＥ）の発生率である。
用量、投与計画、治療または方法の文脈で本明細書で使用される「臨床的に証明された有効性（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｐｒｏｖｅｎ ｅｆｆｉｃａｃｙ）」および「臨床的に証明された有効性（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｐｒｏｖｅｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）」という用語は、特定の用量、投与または治療計画の有効性を指す。有効性は、本発明の薬剤に応答して疾患の経過の変化に基づいて測定することができる。例えば、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、およびアジュバント（例えば、ＩＮＯ－９０１２またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物と組み合わせたＩＮＯ－５４０１またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物）と、抗ＰＤ－１抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体セミプリマブまたはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物）などのＰＤ－１チェックポイント阻害剤との組み合わせは、治療されている障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、好ましくは持続的改善を誘導するのに十分な量および時間で患者に投与される。治療の量および時間が十分であるかどうかを決定するために、対象の病気、疾患または状態の程度を反映する様々な指標が評価され得る。そのような指標としては、例えば、問題の障害の疾患重症度、症状、または発現の臨床的に認識される指標が挙げられる。改善の程度は、一般に、兆候、症状、生検、または他の試験結果に基づいてこの判定を行うことができ、所与の疾患のために開発された生活の質のアンケートなど、対象に投与されるアンケートを用いることもできる医師によって決定される。例えば、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、およびアジュバント（例えば、ＩＮＯ－９０１２またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物と組み合わせたＩＮＯ－５４０１またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物）と、抗ＰＤ－１抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体セミプリマブまたはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物）との組み合わせは、膠芽腫（ＧＢＭ）などの脳がんに関連する患者の状態の改善を達成するために投与され得る。改善は、疾患活性の指標の改善によって、臨床症状の改善によって、または疾患活性の任意の他の尺度によって示され得る。
本明細書で使用される場合、「ＩＮＯ－５４０１」は、３つのＤＮＡプラスミド：プロモータによって作動可能に制御されるｈＴＥＲＴをコードする挿入物を含むＤＮＡプラスミド、プロモータによって作動可能に制御されるＷＴ１をコードする挿入物を含むＤＮＡプラスミド、およびプロモータによって作動可能に制御されるＰＳＭＡをコードする挿入物を含むＤＮＡプラスミドの免疫学的組成物を指す。
本明細書で使用される場合、「ＸＲＴ」とも称される「放射線療法」という用語は、一般に、抗がん療法の一部として、がん細胞を死滅させるために電離放射線を使用することを意味する。Ｘ線、ガンマ線、または荷電粒子（例えば、陽子または電子）を使用して、電離放射線を生成する。
放射線療法は、患者の体外に配置された機械（外部照射療法）によって、または患者の体内に配置された源（内部放射線療法または近接照射療法）によって、または静脈内または経口的に送達された全身性放射性同位体（全身性放射性同位体療法）を介して送達され得る。放射線療法は、投与される放射線の用量および位置を正確に決定するために、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）などのイメージングベースの技術と組み合わせて計画および投与され得る。様々な実施形態では、放射線療法は、全身放射線療法、従来の外部照射療法、定位放射線手術、体幹部定位放射線療法、３Ｄコンフォーマル放射線療法、強度変調放射線療法、画像誘導放射線療法、トモセラピー、近接照射療法、および全身照射療法からなる群から選択される。意図に応じて、ある特定の実施形態では、放射線療法は、治癒的、補助的または緩和的である。特定の実施形態では、「放射線療法」という用語は、低分割放射線療法を指す。
低分割放射線療法とは、放射線の全線量を大線量に分割し、１日１回以下の頻度で治療を行う放射線治療スケジュールを指す。
低分割放射線療法は、標準的な放射線療法よりも少ない用量で１回当たりより多くの放射線を提供することができる。様々な実施形態では、各部分は２～２０Ｇｙを含む。例えば、５０Ｇｙの放射線量は、各々が５Ｇｙを含む１０の部分に分割され得る。ある特定の実施形態では、２つ以上の部分は、連続または連続した日に投与される。ある特定の他の実施形態では、２つ以上の部分は、２日間に１回、３日間に１回、４日間に１回、５日間に１回、６日間に１回、７日間に１回、またはこれらの組み合わせで投与される。
ある特定の実施形態によれば、対象における脳がん（例えば、膠芽腫）などのがんを治療するための方法が本明細書に提供される。開示される方法は、がん抗原ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウイルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、アジュバント、ならびに抗プログラム細胞死受容体１（ＰＤ－１）抗体またはその抗体結合断片の免疫原性組成物を対象に投与することを含む。
本明細書に開示されるのは、がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡの最適化されたコンセンサス配列である。一実施形態では、最適化されたコンセンサス配列によってコードされる抗原は、哺乳動物において免疫応答を誘発することが可能である。一実施形態では、最適化されたコンセンサス配列によってコードされる抗原は、免疫応答が誘導され得る免疫原として特に効果的になるエピトープを含むことができる。
一実施形態では、天然ヒトＰＳＭＡに対する耐容性を破るように設計された最適化されたコンセンサスＰＳＭＡが提供される。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＰＳＭＡコード配列は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号２１、または配列番号２８に示される通りである。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＰＳＭＡコード抗原は、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、最適化されたコンセンサスＷＴ－１は、天然ヒトＷＴ－１に対する耐容性を破るように設計される。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＷＴ－１コード配列は、配列番号１５または配列番号２７に記載される通りである。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＷＴ－１コード化抗原は、配列番号１６または配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、最適化されたコンセンサスＴＥＲＴは、天然ヒトＴＥＲＴに対する耐容性を破るように設計される。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＴＥＲＴコード配列は、配列番号１７または配列番号１９に記載される通りである。一実施形態では、ヒト最適化コンセンサスＴＥＲＴコード化抗原は、配列番号１８および配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する。
開示されるワクチンは、アジュバントをさらに含み得る。ある特定の実施形態では、治療の開示される方法は、対象にアジュバントを投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、アジュバントは、ＩＬ１２である。ＩＬ１２は、そのｐ３５およびｐ４０サブユニットの形態でワクチンに含まれ得る。アジュバントＩＬ１２は、そのｐ３５およびｐ４０サブユニットとして対象に投与され得る。ＩＬ１２ ｐ３５およびｐ４０サブユニットは、同じ発現ベクターまたは別個の発現ベクターによってコードされ得る。一実施形態では、ＩＬ１２ ｐ３５コード配列は、配列番号２２に示される通りである。一実施形態では、ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ＩＬ１２ ｐ４０コード配列は、配列番号２４に示される通りである。一実施形態では、ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有する。
がん抗原ＴＥＲＴ、ＷＴ－１、ＰＳＭＡ、および／またはアジュバントは、ワクチン中に存在し得るか、またはポリペプチド、その断片、そのバリアント、ポリペプチドをコードする核酸配列、その断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせとして対象に投与され得る。がん抗原は、対象における免疫応答を誘導する任意の形態であり得る。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらのバリアント、それらの断片、またはそれらの組み合わせであり得る。核酸配列はまた、ペプチド結合により抗原と連結されるリンカーまたはタグ配列をコードする追加の配列を含み得る。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、それらのバリアント、それらの断片、またはそれらの組み合わせであり得る。
がん抗原ＴＥＲＴ、ＷＴ－１、ＰＳＭＡ、および／またはアジュバントは、ワクチン中に含まれ得るか、またはポリペプチド、その断片、そのバリアント、ポリペプチドをコードする核酸配列、その断片もしくはバリアント、またはそれらの任意の組み合わせとして対象に投与され得る。がん抗原は、対象における免疫応答を誘導する任意の形態であり得る。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらのバリアント、それらの断片、またはそれらの組み合わせであり得る。核酸配列はまた、ペプチド結合により抗原と連結されるリンカーまたはタグ配列をコードする追加の配列を含み得る。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、それらのバリアント、それらの断片、またはそれらの組み合わせであり得る。
がん抗原ＴＥＲＴ、ＷＴ－１、ＰＳＭＡおよび／またはＩＬ－１２は、ワクチンに含まれ得るか、または１つ以上の核酸分子、例えば、限定されないが、発現ベクターとして投与され得る。発現ベクターは、環状プラスミドまたは直鎖状核酸であり得る。発現ベクターは、適切な対象細胞における特定のヌクレオチド配列の発現を誘導することができる。発現ベクターは、抗原をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモータを有することができ、終結シグナルに作動可能に連結され得る。発現ベクターはまた、ヌクレオチド配列の適切な翻訳に必要な配列も含有し得る。目的のヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、キメラであり得、これは、その成分のうちの少なくとも１つが、他の成分のうちの少なくとも１つに対して異種であることを意味する。発現カセットにおけるヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモータまたは誘導性プロモータの制御下であり得、これは、宿主細胞がいくつかの特定の外部刺激に曝露されたときにのみ転写を開始する。多細胞生物の場合、プロモータはまた、特定の組織もしくは臓器または発達段階に特異的であり得る。
一実施形態では、核酸は、ＲＮＡ分子である。したがって、一実施形態では、本発明は、１つ以上の目的のポリペプチドをコードするＲＮＡ分子を提供する。ＲＮＡは、プラス鎖であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、逆転写などの任意の介在複製ステップを必要とすることなく細胞によって翻訳することができる。本発明で有用なＲＮＡ分子は、５’キャップ（例えば、７－メチルグアノシン）を有し得る。このキャップは、ＲＮＡのインビボ翻訳を向上させることができる。本発明で有用なＲＮＡ分子の５’ヌクレオチドは、５’三リン酸基を有し得る。キャップＲＮＡでは、これは、５’－５’架橋を介して７－メチルグアノシンに連結され得る。ＲＮＡ分子は、３’ポリ－Ａテールを有し得る。それはまた、その３’末端の近くにポリ－Ａポリメラーゼ認識配列（例えば、ＡＡＵＡＡＡ）も含み得る。本発明で有用なＲＮＡ分子は、一本鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、裸ＲＮＡ分子である。一実施形態では、ＲＮＡ分子は、ベクター内に含まれる。
一実施形態では、ＲＮＡは、５’および３’ＵＴＲを有する。一実施形態では、５’ＵＴＲは、０～３０００ヌクレオチド長である。コード領域に付加される５’および３’ＵＴＲ配列の長さは、これらに限定されないが、ＵＴＲの異なる領域にアニールするＰＣＲのプライマーを設計することを含む、異なる方法によって変更することができる。このアプローチを使用して、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクション後の最適な翻訳効率を達成するために必要な５’および３’ＵＴＲ長を修飾することができる。
５’および３’ＵＴＲは、目的の遺伝子についての天然発生型の内在性５’および３’ＵＴＲであり得る。代替的に、目的の遺伝子に内在性ではないＵＴＲ配列は、ＵＴＲ配列をフォワードおよびリバースプライマーに組み込むことによって、または鋳型の任意の他の修飾によって付加することができる。目的の遺伝子に内在性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を修飾するために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列におけるＡＵ富化エレメントがＲＮＡの安定性を増加させることができることは、既知である。したがって、３’ＵＴＲは、当該技術分野において周知であるＵＴＲの特性に基づいて転写されたＲＮＡの安定性を増加させるように選択または設計することができる。
一実施形態では、５’ＵＴＲは、内在性遺伝子のＫｏｚａｋ配列を含有し得る。代替的に、目的の遺伝子に内在性ではない５’ＵＴＲが上記のＰＣＲによって付加されている場合、コンセンサスＫｏｚａｋ配列は、５’ＵＴＲ配列を付加することによって再設計することができる。Ｋｏｚａｋ配列は、いくつかのＲＮＡ転写物の翻訳の効率を増加させることができるが、すべてのＲＮＡに対して効率的な転写を可能にするために必要とされるわけではないようである。多くのＲＮＡのＫｏｚａｋ配列の要件は、当該技術分野において既知である。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡウイルスに由来し得、そのＲＮＡゲノムは、細胞において安定である。他の実施形態では、様々なヌクレオチド類似体を３’または５’ＵＴＲにおいて使用して、ＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げることができる。
一実施形態では、ＲＮＡは、５’末端のキャップおよび３’ポリ（Ａ）テールの両方を有し、これは、細胞におけるリボソーム結合、翻訳の開始、およびＲＮＡの安定性を決定する。
一実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオシド修飾ＲＮＡである。ヌクレオシド修飾ＲＮＡは、例えば、安定性の増加、自然免疫原性の低さまたは不在、および翻訳の増進を含む、非修飾ＲＮＡに対する特定の利点を有する。
発現ベクターは、細胞ゲノムに組み込むことによって標的細胞を形質転換するか、または染色体外で存在し得る環状プラスミド（例えば、複製起点を有する自己複製プラスミド）であり得る。ベクターは、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、もしくはｐｒｏｖａｘ、または抗原をコードするＤＮＡを発現し、細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳することを可能にすることができる任意の他の発現ベクターであり得る。
エレクトロポレーションを介して対象に効率的に送達され、１つ以上の所望の抗原を発現することができる直鎖状核酸免疫学的組成物または直鎖状発現カセット（「ＬＥＣ」）もまた、本明細書に提供される。ＬＥＣは、あらゆるリン酸骨格を欠いた任意の線状ＤＮＡであり得る。ＤＮＡは、１つ以上の抗原をコードし得る。ＬＥＣは、プロモータ、イントロン、終止コドン、および／またはポリアデニル化シグナルを含有し得る。抗原の発現は、プロモータにより制御され得る。ＬＥＣは、いかなる抗生物質耐性遺伝子および／またはリン酸骨格も含有しない場合がある。ＬＥＣは、所望の抗原遺伝子発現に無関係の他のヌクレオチド配列を含有しない場合がある。ＬＥＣは、線状化することができる任意のプラスミドに由来し得る。プラスミドは、抗原を発現することが可能であり得る。プラスミドは、ｐＮＰ（Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／３４）またはｐＭ２（Ｎｅｗ Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／９９）であり得る。プラスミドは、ＷＬＶ００９、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、もしくはｐｒｏｖａｘ、または抗原をコードするＤＮＡを発現し、細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳することを可能にすることができる任意の他の発現ベクターであり得る。ＬＥＣは、ｐｃｒＭ２であり得る。ＬＥＣは、ｐｃｒＮＰであり得る。ｐｃｒＮＰおよびｐｃｒＭＲは、それぞれ、ｐＮＰ（Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／３４）およびｐＭ２（Ｎｅｗ Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／９９）に由来し得る。
ベクターは、上記の抗原をコードする異種核酸を含むことができ、１つ以上のがん抗原コード配列の上流にあり得る開始コドン、および上記の抗原のコード配列の下流にあり得る終止コドンをさらに含むことができる。
ベクターは、プロモータを有し得る。プロモータは、遺伝子発現を駆動し、単離された核酸の発現を制御することができる任意のプロモータであり得る。そのようなプロモータは、本明細書に記載される抗原配列を転写するＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを介した転写に必要なシス作用性配列要素である。異種核酸の発現を指示するために使用されるプロモータの選択は、特定の用途に依存する。プロモータは、ベクターにおける転写開始から、その天然設定での転写開始部位からとほぼ同じ距離に配置され得る。しかしながら、この距離の変動は、プロモータ機能の喪失なしに順応され得る。
開始および終止コドンは、上記の抗原のコード配列とインフレームにすることができる。ベクターはまた、上記の抗原のコード配列に作動可能に連結されているプロモータを含むことができる。上記の抗原のコード配列に作動可能に連結されたプロモータは、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモータ、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモータ、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）長鎖末端反復（ＬＴＲ）プロモータなどのヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモータ、モロニーウイルスプロモータ、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモータ、ＣＭＶ最初期プロモータなどのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモータ、またはラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモータであり得る。プロモータはまた、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、またはヒトメタロチオネインなどのヒト遺伝子由来のプロモータであり得る。プロモータはまた、天然もしくは合成の筋肉または皮膚特異的プロモータなどの組織特異的プロモータであり得る。そのようなプロモータの例は、米国特許出願公開第２００４／０１７５７２７号に記載されており、その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
ベクターはまた、上述の抗原および／または抗体のコード配列の下流にあり得るポリアデニル化シグナルを含み得る。ポリアデニル化シグナルは、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ＬＴＲポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化シグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化シグナル、またはヒトβ－グロビンポリアデニル化シグナルであり得る。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）由来のポリアデニル化シグナルであり得る。
ベクターはまた、上記の抗原の上流にエンハンサを含むことができる。
エンハンサは、発現に必要な場合がある。エンハンサは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、またはＣＭＶ、ＨＡ、ＲＳＶ、もしくはＥＢＶ由来のものなどのウイルスエンハンサであり得る。
ベクターは、機能的なスプライスドナーおよびアクセプタ部位を有するエンハンサおよびイントロンを含み得る。ベクターは、効率的な終結を提供するために、構造遺伝子の下流に転写終結領域を含有し得る。終結領域は、プロモータ配列と同じ遺伝子から得られ得るか、または異なる遺伝子から得られ得る。
開示される方法は、単一のプラスミドなどの単一の核酸分子の複数のコピー、または２個以上の異なるプラスミドなどの２個以上の異なる核酸分子の複数のコピーの投与を含み得る。例えば、方法は、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上の異なる核酸分子の投与を含み得る。
プラスミドなどの開示される方法に従って使用される核酸分子は、単一の抗原または複数の抗原のコード配列を集合的に含有し得る。一例として、一実施形態では、抗原は、ＴＥＲＴおよび１つ以上の追加のがん抗原から選択される複数の抗原である。例示的な一実施形態では、抗原は、ＴＥＲＴおよびＷＴ－１である。例示的な一実施形態では、抗原は、ＴＥＲＴおよびＰＳＭＡである。例示的な一実施形態では、抗原は、ＰＳＭＡおよび１つ以上の追加のがん抗原である。例示的な一実施形態では、抗原は、ＰＳＭＡおよびＷＴ－１である。別の例示的な実施形態では、抗原は、ＴＥＲＴ、ＷＴ－１およびＰＳＭＡである。
ベクターは、それが染色体に組み込まれるのを阻害する要素または試薬をさらに含むことができる。ベクターは、ベクターを染色体外に維持し、細胞内でベクターの複数のコピーを産生するために、哺乳動物の複製起点を含むことができる。ベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）製のｐＶＡＸ１、ｐＣＥＰ４、またはｐＲＥＰ４であり得、これは、Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒウイルス複製起点および核抗原ＥＢＮＡ－１コード領域を含み得、これは、統合なしに高コピーエピソーム複製を産生し得る。ベクターは、本明細書に記載されるバリアントプラスミドなどの変化を有する、ｐＶＡＸ１またはｐＶａｘ１バリアントであり得る。バリアントｐＶａｘ１プラスミドは、骨格ベクタープラスミドｐＶＡＸ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）の２９９８塩基対のバリアントである。ＣＭＶプロモータは、１３７～７２４塩基に位置している。Ｔ７プロモータ／プライミング部位は、塩基６６４～６８３にある。マルチクローニングサイトは、塩基６９６～８１１にある。
ウシＧＨポリアデニル化シグナルは、塩基８２９～１０５３にある。カナマイシン耐性遺伝子は、塩基１２２６～２０２０にある。ｐＵＣの起点は、２３２０～２９９３塩基にある。
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＶＡＸ１の配列に基づいて、本明細書に記載のプラスミド１～６の骨格として使用されたｐＶＡＸ１の配列において以下の変異が見出された：
ＣＭＶプロモータにおいてＣ＞Ｇ２４１
Ｃ＞Ｔ １９４２骨格、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ）の下流
Ａ＞－２８７６骨格、カナマイシン遺伝子の下流
ｐＵＣ複製起点（Ｏｒｉ）高コピー数変異のＣ＞Ｔ ３２７７（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９８５参照）
ＲＮＡＳｅＨ部位の上流のｐＵＣ Ｏｒｉの最端においてＧ＞Ｃ ３７５３
塩基対２、３、および４は、ＣＭＶプロモータの上流の骨格においてＡＣＴからＣＴＧに変更される。ベクターの骨格は、ｐＡＶ０２４２であり得る。ベクターは、複製欠損アデノウイルス５型（Ａｄ５）ベクターであり得る。
ベクターはまた、ベクターが投与される哺乳動物またはヒト細胞における遺伝子発現によく適している可能性がある制御配列を含み得る。本明細書に開示される１つ以上のがん抗原は、宿主細胞におけるコード配列のより効率的な転写を可能にすることができるコドンを含むことができる。
ベクターは、ｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であり得、これは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるタンパク質産生に使用され得る。ベクターはまた、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であり得、これは、酵母のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株におけるタンパク質産生に使用され得る。ベクターはまた、ＭＡＸＢＡＣ（商標）完全バキュロウイルス発現システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）のものであり得、これは、昆虫細胞におけるタンパク質産生に使用され得る。ベクターはまた、ｐｃＤＮＡ ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であり得、これは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞におけるタンパク質産生に使用され得る。ベクターは、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（１９８９）を含む、日常的な技術および容易に入手可能な出発物質によってタンパク質を産生するための発現ベクターまたはシステムであり得る。
がん抗原ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、および／またはＰＳＭＡをコードする例示的なＤＮＡプラスミドは、２０１９年９月１２日に出願された米国出願第６２／８９９，５４３号に開示されており、その内容全体が参照により本明細書に開示されている。
開示される方法に従って、対象は、約５ナノグラム～約２０ｍｇの抗原（複数可）をコードする核酸分子を投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、約５ｍｇ～約１５ｍｇの抗原（複数可）をコードする核酸分子を投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、約９ｍｇ～約１１ｍｇの抗原（複数可）をコードする核酸分子を投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、約１０ｍｇの抗原（複数可）をコードする核酸分子を投与され得る。
ＤＮＡプラスミドは、様々な経路を介して送達することができる。典型的な送達経路としては、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、または皮下送達が挙げられる。他の経路としては、経口投与、鼻腔内、および膣内経路が挙げられる。特に、ワクチンのＤＮＡについては、ワクチンは、個体の組織の間質空間に送達され得る（Ｆｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，５８０，８５９号および同第５，７０３，０５５号、それらのすべての内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＤＮＡプラスミドはまた、筋肉に投与され得るか、または皮内もしくは皮下注射を介して、またはイオン電気泳動などにより経皮的に投与され得る。ＤＮＡプラスミドの表皮投与を用いることもできる。表皮投与は、刺激物に対する免疫応答を刺激するために、表皮の最外層を機械的または化学的に刺激することを伴うことができる（Ｃａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，６７９，６４７号、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
ＤＮＡプラスミドは、懸濁液、シロップまたはエリキシル剤などの液体調製物であり得る。ワクチンはまた、滅菌懸濁液または乳剤などの非経口、皮下、皮内、筋肉内、または静脈内投与（例えば、注射可能な投与）のための調製物であり得る。
ＤＮＡプラスミドは、リポソーム、マイクロスフィア、または他のポリマーマトリックスに組み込むことができる（Ｆｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，７０３，０５５号、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ ｔｏ ＩＩＩ（２ｎｄ ｅｄ．１９９３）、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。リポソームは、リン脂質または他の脂質から構成され得、比較的単純に作製および投与することができる無毒性、生理学的に許容される、および代謝可能な担体であり得る。
ＤＮＡプラスミドは、米国特許第７，６６４，５４５号に記載されている方法などのエレクトロポレーションを介して投与することができ、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
エレクトロポレーションは、米国特許第６，３０２，８７４号、同第５，６７６，６４６号、同第６，２４１，７０１号、同第６，２３３，４８２号、同第６，２１６，０３４号、同第６，２０８，８９３号、同第６，１９２，２７０号、同第６，１８１，９６４号、同第６，１５０，１４８号、同第６，１２０，４９３号、同第６，０９６，０２０号、同第６，０６８，６５０号、および同第５，７０２，３５９号に記載される方法およびまたは装置によるものであり得、それらの内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。エレクトロポレーションは、最小侵襲性デバイスを介して実施され得る。
最小侵襲性エレクトロポレーションデバイス（「ＭＩＤ」）は、上記のワクチンおよび関連する流体を体内組織に注入するための装置であり得る。デバイスは、中空針、ＤＮＡカセット、および流体送達手段を含み得、デバイスは、使用中の流体送達手段を作動させるように適合され、針の当該体内組織への挿入中に、ＤＮＡを体内組織に同時に（例えば、自動的に）注入する。これには、針が挿入されている間にＤＮＡおよび関連する流体を徐々に注入する能力が、体内組織を通る流体のより均一な分布につながるという利点がある。注射中に経験される痛みは、より大きな領域にわたって注射されるＤＮＡの分布に起因して軽減され得る。
ＭＩＤは、針を使用することなくＤＮＡプラスミドを組織内に注入し得る。
ＭＩＤは、ワクチンが組織の表面を貫通し、下にある組織および／または筋肉に入るような力で、ワクチンを小さな流れまたは噴射として注入し得る。小さな流れまたは噴射の背後の力は、二酸化炭素などの圧縮ガスが数秒以内に微小オリフィスを通って膨張することによって提供され得る。最小侵襲性エレクトロポレーションデバイスの例およびそれを使用する方法は、公開されている米国特許出願第２００８０２３４６５５号、米国特許第６，５２０，９５０号、米国特許第７，１７１，２６４号、同第６，２０８，８９３号、同第６，００９，３４７号、同第６，１２０，４９３号、同第７，２４５，９６３号、同第７，３２８，０６４号、および同第６，７６３，２６４号に記載され、これらの各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
ＭＩＤは、組織を痛みなく突き刺す液体の高速噴射を作り出す注射器を含み得る。そのような無針注射器は市販されている。本明細書で利用され得る無針注射器の例としては、米国特許第３，８０５，７８３号、同第４，４４７，２２３号、同第５，５０５，６９７号、および同第４，３４２，３１０号に記載されているものが挙げられ、これらの各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
直接的または間接的な電気輸送に好適な形態の所望のワクチンは、通常、薬剤の噴射を作動させるように組織表面を注射器と接触させることによって、組織へのワクチンの浸透を引き起こすのに十分な力で、治療される組織に無針注射器を使用して導入（例えば、注入）され得る。例えば、治療される組織が粘膜、皮膚、または筋肉である場合、薬剤は、十分な力で粘膜または皮膚表面に向かって投射され、薬剤は、それぞれ、角質層を通って皮膚層に、または下にある組織および筋肉に浸透する。
無針注射器は、ＤＮＡプラスミドをすべての種類の組織、特に皮膚および粘膜に送達するのに適している。いくつかの実施形態では、無針注射器を使用して、ＤＮＡプラスミドを含有する液体を表面および対象の皮膚または粘膜中に推進することができる。本発明の方法を使用して治療することができる様々な種類の組織の代表例としては、膵臓、喉頭、鼻咽頭、下咽頭、口腔咽頭、唇、喉、肺、心臓、腎臓、筋肉、乳房、結腸、前立腺、胸腺、精巣、皮膚、粘膜組織、卵巣、血管、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
ＭＩＤは、組織をエレクトロポレーションする針電極を有し得る。例えば、長方形または正方形のパターンで設定された複数の電極アレイ内の複数の対の電極間をパルスすることによって、対の電極間のパルスの結果よりも改善された結果を提供する。
例えば、「Ｎｅｅｄｌｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ ｆｏｒ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｇｅｎｅｓ」と題される米国特許第５，７０２，３５９号に開示されているのは、治療的処置中に複数の対の針がパルスされ得る針のアレイである。完全に記載されているかのように参照により本明細書に組み込まれるその出願では、針は円形アレイに配置されたが、対向する針電極の対間のパルスを可能にするコネクタおよび切替装置を有する。組換え発現ベクターを細胞に送達するための一対の針電極が使用され得る。そのようなデバイスおよびシステムは、米国特許第６，７６３，２６４号に記載され、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。代替的に、ＤＮＡの注射および通常の注射針に似た単一の針によるエレクトロポレーションを可能にし、現在使用されているデバイスによって送達されるよりも低い電圧のパルスを印加し、したがって、患者が経験する電気的感覚を低減する単一の針デバイスを使用してもよい。
ＭＩＤは、１つ以上の電極アレイを含み得る。アレイは、同じ直径または異なる直径の２つ以上の針を含み得る。針は、均等にまたは不均等に隔置され得る。針は、０．００５インチ～０．０３インチ、０．０１インチ～０．０２５インチ、または０．０１５インチ～０．０２０インチであり得る。針は、０．０１７５インチの直径であり得る。針は、０．５ｍｍ、１．０ｍｍ、１．５ｍｍ、２．０ｍｍ、２．５ｍｍ、３．０ｍｍ、３．５ｍｍ、４．０ｍｍまたはそれ以上隔置され得る。
ＭＩＤは、ＤＮＡプラスミドおよびエレクトロポレーションパルスを単一のステップで送達する、パルス発生器および２つ以上の針注射器から構成され得る。パルス発生器は、フラッシュカード操作のパーソナルコンピュータを介してパルスおよび注入パラメータを柔軟にプログラミングすること、ならびにエレクトロポレーションおよび患者データの包括的な記録および保存を可能にすることができる。パルス発生器は、短時間に様々なボルトのパルスを送達し得る。例えば、パルス発生器は、持続時間１００ｍｓの１５ボルトのパルスを３回送達し得る。そのようなＭＩＤの例は、Ｉｎｏｖｉｏ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによるＥｌｇｅｎ １０００システムであり、米国特許第
７，３２８，０６４号に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
ＭＩＤは、身体または植物の選択された組織の細胞に、ＤＮＡなどの高分子の導入を導入するのを容易にするためのＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）（Ｉｎｏｖｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｌｕｅ Ｂｅｌｌ Ｐａ．）デバイスおよびシステムであり得る。モジュラー電極システムは、複数の針電極；皮下針；プログラム可能な定電流パルスコントローラから複数の針電極までの導電リンクを提供する電気コネクタ；および電源を含み得る。オペレータは、支持構造に載置される複数の針電極を把持し、それらを身体もしくは植物の選択された組織にしっかりと挿入することができる。次いで、高分子は、選択された組織に皮下針を介して送達される。プログラム可能な定電流パルスコントローラが作動し、定電流電気パルスが複数の針電極に印加される。印加される定電流電気パルスは、複数の電極間の細胞への高分子の導入を容易にする。細胞の過熱による細胞死は、定電流パルスによって組織内の電力散逸を制限することによって最小限に抑える。ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）デバイスおよびシステムは、米国特許第７，２４５，９６３号に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
ＭＩＤは、Ｅｌｇｅｎ １０００システム（Ｉｎｏｖｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）であり得る。Ｅｌｇｅｎ １０００システムは、中空針を提供するデバイスと、流体送達手段とを含み得、装置は、使用中の流体送達手段を作動させるように適合され、針の当該体内組織への挿入中に、流体、本明細書に記載のＤＮＡプラスミドを体内組織に同時に（例えば、自動的に）注入する。利点は、針が挿入されている間に流体を徐々に注入することができ、体内組織を通る流体のより均一な分布をもたらすことである。また、注入中に経験される痛みは、注入される流体の体積がより大きな領域にわたって分布することによって軽減されると考えられる。
加えて、流体の自動注入は、注入された流体の実際の用量を自動的に監視および登録することを容易にする。このデータは、必要に応じて、文書化のために制御ユニットによって保存することができる。
注射速度は、直線的であっても非直線的であってもよく、注射は、針が治療される対象の皮膚を通って挿入された後、およびそれらが体内組織にさらに挿入されている間に実行されてもよいことが理解されるであろう。
本発明の装置によって流体が注入され得る好適な組織としては、腫瘍組織、皮膚または肝臓組織が挙げられるが、筋肉組織であってもよい。
装置は、針の体内組織への挿入を誘導するための針挿入手段をさらに含む。流体の注入速度は針の挿入速度により制御される。
これには、流体の針の挿入および注入の両方が、挿入速度が所望に応じて注入速度に一致するように制御され得るという利点がある。それによってまた、ユーザにとって操作を容易にする装置となる。所望される場合、針を体内組織に自動的に挿入するための手段が提供され得る。
ユーザは、流体の注入を開始するタイミングを選択できる。しかしながら、理想的には、注射は、針の先端が筋肉組織に到達したときに開始され、装置は、針が流体の注射を開始するのに十分な深さまで挿入されたときに感知するための手段を含み得る。これは、針が所望の深さ（通常は筋肉組織が開始する深さ）に達したときに、流体の注入を自動的に開始するように促すことができることを意味する。筋肉組織が開始する深さは、例えば、針が皮膚層を通過するのに十分であるとみなされる４ｍｍの値などの事前設定された針挿入深さとすることができる。
感知手段は、超音波プローブを含み得る。感知手段は、インピーダンスまたは抵抗の変化を感知する手段を含み得る。この場合、このような手段は、体内組織内の針の深さを記録するものではなく、むしろ、針が異なる種類の体内組織から筋肉に移動するときのインピーダンスまたは抵抗の変化を感知するように適合され得る。
これらの代替案のいずれかは、注入が開始され得る感知手段を比較的正確かつ簡単に操作することを提供する。必要に応じて、針の挿入深度をさらに記録することができ、注入される流体の体積が針の挿入深度が記録されるにつれて決定されるように、流体の注入を制御するために使用することができる。
装置は、針を支持するための基部と、その中に基部を受容するためのハウジングとをさらに含むことができ、基部は、針がハウジングに対して第１の後方位置にあるときにハウジング内に格納され、針がハウジング内の第２の前方位置にあるときにハウジングから延びるように、ハウジングに対して移動可能である。これは、ハウジングを患者の皮膚に並べることができ、次いで針を基部に対してハウジングを移動させることによって患者の皮膚に挿入することができるため、ユーザに有利である。
上述のように、流体が皮膚に挿入されるにつれて針の長さにわたって均等に分布するように、制御された流体注入速度を達成することが望ましい。流体送達手段は、制御された速度で流体を注入するように適合されたピストン駆動手段を含み得る。ピストン駆動手段は、例えば、サーボモータによって作動させることができる。しかしながら、ピストン駆動手段は、基部がハウジングに対して軸方向に移動されることにより作動され得る。流体送達のための代替手段が提供され得ることが理解されるであろう。したがって、例えば、制御された速度または制御されていない速度で流体送達のために圧縮され得る密閉容器は、シリンジおよびピストンシステムの代わりに提供され得る。
上記の装置は、任意の種類の注入に使用することができる。しかしながら、それは、エレクトロポレーションの分野で特に有用であることが想定され、したがって、それは、針に電圧を印加するための手段をさらに含み得る。これにより、注射だけでなく、エレクトロポレーション中の電極としても針を使用することができる。これは、電界が注入された流体と同じ領域に印加されることを意味するため、特に有利である。従来、エレクトロポレーションでは電極を以前に注入された流体と正確に位置合わせすることが非常に困難であるため、ユーザは、より大きな面積にわたって必要とされるよりも大きな流体を注入し、より高い面積にわたって電界を印加して、注入された物質と電界との間の重複を保証しようとする傾向があったという点で問題があった。本発明を使用して、注入される流体の体積および印加される電界のサイズの両方が、電界と流体との間の良好な適合を達成しながら低減され得る。
対象に核酸分子コードがん抗原ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡ、およびＷＴ－１を投与すると、トランスフェクトされた細胞ががん抗原のうちの１つ以上を発現および分泌する。これらの分泌されたタンパク質または合成抗原は、免疫系によって異物として認識され、免疫系は、１つ以上のがん抗原に対して作られた抗体、および１つ以上のがん抗原に特異的に対するＴ細胞応答を含み得る、免疫応答を開始する。いくつかの例では、本明細書で考察される免疫原性組成物を投与された哺乳動物は、抗原刺激を受けた免疫系を有し、本明細書に開示される１つ以上のがん抗原を接種された場合、抗原刺激を受けた免疫系は、液性、細胞性、または細胞性および液性の両方の免疫応答によるものかにかかわらず、本明細書に開示される後のがん抗原を迅速に除去することができる。
組換えがん抗原は、抗原特異的Ｔ細胞および／または高力価の抗体応答を誘導し、それにより、抗原を発現するがんまたは腫瘍に対して向けられた、もしくはそれに反応性である免疫応答を誘導または誘発する。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、細胞性免疫応答、体液性免疫応答、または細胞性免疫応答および体液性免疫応答の両方であり得る。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された細胞性免疫応答には、インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）および／または腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）の誘導または分泌が含まれ得る。他の実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、抗原を発現する腫瘍またはがんの成長を促進する１つ以上の免疫抑制因子、例えば、これらに限定されないが、ＭＨＣ提示を下方制御する因子；抗原特異的制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＰＤ－Ｌ１、ＦａｓＬ、ＩＬ－１０およびＴＦＧ－βなどのサイトカイン、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連線維芽細胞、免疫抑制細胞により産生される可溶性因子、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＭＤＳＣ、ＭＣＰ－１、ならびに免疫チェックポイント分子を上方制御する因子を低減または阻害することができる。
開示されるワクチンは、抗ＰＤ－１抗体をさらに含み得る。開示される治療方法は、抗ＰＤ－１抗体を対象に投与することをさらに含み得る。
本発明のある特定の実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体は、米国特許公開第２０１５０２０３５７９号に示される抗ＰＤ－１抗体のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、その全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の例示的な実施形態では、開示される方法の文脈で使用され得る抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む。ある特定の実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体は、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）および３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１を含むＨＣＶＲおよび配列番号２を含むＬＣＶＲを含む。ある特定の実施形態では、本発明の方法は、抗ＰＤ－１抗体の使用を含み、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む例示的な抗体は、ＲＥＧＮ２８１０として知られ、セミプリマブまたはセミプリマブ－ｒｗｌｃとしても知られる完全ヒト型抗ＰＤ－１抗体である。
ある特定の例示的な実施形態によれば、本発明の方法は、ＲＥＧＮ２８１０またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物の使用を含む。本明細書で使用する場合、「生物学的等価物」という用語は、単回投与または複数回投与のいずれかの同様の実験条件下で同じモル量を投与したときに、ＲＥＧＮ２８１０の吸収速度および／または吸収範囲と有意差を示さない薬学的等価物または薬学的選択肢である抗ＰＤ－１抗体またはＰＤ－１結合タンパク質もしくはその断片を指す。本発明の文脈では、この用語は、ＰＤ－１に結合する抗原結合タンパク質であって、その安全性、純度、および／または効力において、ＲＥＧＮ２８１０と臨床的に意味のある差異を有さないものを指す。
本発明のある特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号１に対して９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含む。
本発明のある特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号２に対して９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含む。
本発明のある特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体は、５個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む。本発明の特定の実施形態によれば、抗ヒトＰＤ－１抗体は、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
配列同一性は、当該技術分野で知られている任意の方法（例えば、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴおよびＢＬＡＳＴ）によって測定され得る。
本発明は、がんを治療する方法における抗ＰＤ－１抗体の使用を含み、抗ＰＤ－１抗体は、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかのバリアントを含む。例えば、本発明は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列に対して、例えば、１０以下、８以下、６以下、４以下などのいずれか保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＤ－１抗体の使用を含む。
開示される方法に従って対象に投与される抗ＰＤ－１抗体の量は、治療有効量であり得る。本明細書で使用される場合、抗ＰＤ－１抗体の「治療有効量」という語句は、（ａ）症状の重症度もしくは期間の減少、もしくはがん、例えば、膠芽腫の兆候、（ｂ）腫瘍成長の阻害、もしくは腫瘍壊死、腫瘍収縮および／もしくは腫瘍消失の増加、（ｃ）腫瘍成長および発達の遅延、（ｄ）腫瘍転移の阻害、（ｅ）腫瘍成長の再発の予防、（ｆ）がんを有する対象の生存率の増加、ならびに／または（ｇ）未治療の対象もしくは単剤療法として抗体を投与された対象と比較した、従来の抗がん療法（例えば、化学療法剤または細胞傷害性薬剤の使用の低減もしくは排除）の使用もしくは必要性の減少のうちの１つ以上をもたらす量である。
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片の場合、治療有効量は、約０．０５ｍｇ～約６００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約４５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約４００ｍｇ、約７５ｍｇ～約３５０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約３００ｍｇの抗体であり得る。例えば、様々な実施形態では、抗ＰＤ－１抗体の量は、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、または約６００ｍｇの抗ＰＤ－１抗体である。一実施形態では、２５０ｍｇの抗ＰＤ－１抗体は、本発明の方法に従って投与される。一実施形態では、２００ｍｇの抗ＰＤ－１抗体は、本発明の方法に従って投与される。一実施形態では、３５０ｍｇの抗ＰＤ－１抗体は、本発明の方法に従って投与される。
抗ＰＤ－１抗体は、例えば、特定の治療的投与計画の一部として、複数回用量で対象に投与され得る。例えば、治療的投与計画は、約１日に１回、２日毎に１回、３日毎に１回、４日毎に１回、５日毎に１回、６日毎に１回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、１ヶ月毎に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、４ヶ月毎に１回、またはそれより少ない頻度で、対象に１回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体を投与することを含み得る。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、薬学的組成物内に含まれる。本発明の薬学的組成物は、好適な担体、賦形剤、および好適な移動、送達、耐性などをもたらす他の薬剤とともに製剤化され得る。多くの適切な製剤は、薬剤師全員に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａにおいて認めることができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト、水中油エマルションおよび油中水エマルション、エマルションカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８－３１１も参照されたい。
様々な送達系が既知であり、かつ抗ＰＤ－１抗体を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスへのカプセル封入である（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）。投与方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、例えば、注入もしくはボーラス注射による、上皮または粘膜皮膚内層（ｌｉｎｉｎｇ）（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介した吸収による任意の好都合な経路によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。
抗ＰＤ－１抗体は、標準的な針および注射器を用いて皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、抗ＰＤ－１抗体を送達する際の適用を容易にする。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能または使い捨てであり得る。再利用可能なペン型送達デバイスは、概して、抗ＰＤ－１抗体の薬学的組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の薬学的組成物がすべて投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは容易に廃棄することができ、薬学的組成物を含有する新しいカートリッジと容易に交換することができる。ペン型送達デバイスは、次いで、再利用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てのペン型送達デバイスは、デバイス内の貯蔵器に保持された薬学的組成物が事前に充填されている。貯蔵器の薬学的組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
ある特定の状況において、抗ＰＤ－１抗体は、徐放系で送達することができる。一実施形態では、ポンプが使用され得る。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができ、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａを参照されたい。さらに別の実施形態では、徐放系を標的の近傍に配置することができ、それによって全身用量のほんの一部のみが必要となる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８を参照されたい）。他の徐放系は、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３による総説において考察されている。
抗ＰＤ－１抗体の注射可能な調製物には、静脈内注射、皮下注射、皮内注射および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形が含まれ得る。これらの注射可能な調製物は、既知の方法によって調製され得る。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射用に従来どおり使用される滅菌水性媒体または油性媒体中に上記の抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることによって調製され得る。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース含有等張液、および他の補助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。このようにして調製した注射液は、好ましくは適切なアンプルに充填される。
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、静脈内投与で使用するための薬学的組成物に製剤化される。
ある特定の実施形態では、方法は、対象に放射線療法を投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、１回以上の用量の放射線療法は、約１日に１回、２日毎に１回、３日毎に１回、４日毎に１回、５日毎に１回、６日毎に１回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、１ヶ月毎に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、４ヶ月毎に１回、またはそれより少ない頻度で、対象に投与される。
ある特定の実施形態では、放射線療法は、低分割放射線療法である。いくつかの実施形態では、対象は、２０～６０Ｇｙを２～２０分割で投与される。ある特定の実施形態では、低分割放射線療法は、１５の分割を含む。ある特定の実施形態では、１５分割は、１５～２５日連続で投与される。ある特定の実施形態では、１５分割は、２１日連続で投与される。
ある特定の実施形態では、この方法は、対象に、化学療法剤、例えばテモゾロミド（ＴＭＺ）を投与することをさらに含む。化学療法剤を放射線療法とともに投与することができる。例えば、ＴＭＺは、低分割放射線療法と併せて７５ｍｇ／ｍ２の１日用量で投与される。いくつかの実施形態では、メチル化ＭＧＭＴプロモータを有する腫瘍を有する対象に、化学療法剤の維持療法を投与する。例えば、放射線療法後、メチル化ＭＧＭＴプロモータを有する腫瘍を有する対象は、血液学的毒性がない場合に、各維持サイクルを５０ｍｇ／ｍ２／用量増加させて、最大２００ｍｇ／ｍ２／用量にして、２８日サイクルの最初の５日間（５日間「オン」、２３日間「オフ」）にわたって、１５０ｍｇ／ｍ２／日の開始用量で６サイクルＴＭＺを受けることができる。いくつかの実施形態では、維持療法は、放射線療法の最後の用量の約３～５週間後、好ましくは約４週間後に開始される。
特定の実施形態では、開示される方法は、（１）単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）の産生を遮断する抗体を生成し、それにより骨髄由来サプレッサ細胞（ＭＤＳＣ）を遅延させ、腫瘍成長を抑制するＢ細胞応答による液性免疫、（２）腫瘍細胞を攻撃および殺傷するＣＤ８＋などの細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の増加、（３）Ｔヘルパー細胞応答の増加、（４）ならびにＩＦＮ－γおよびＴＦＮ－αによる炎症応答の増加、または（５）前述の任意の組み合わせを誘導することにより、腫瘍細胞のクリアランスを媒介するか、またはその成長を防止することができる。方法は、無憎悪生存を３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、および４５％増加させることができる。方法は、免疫化後に、腫瘍量を３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、および６０％低減させることができる。方法は、骨髄由来サプレッサ細胞から分泌されるサイトカインである単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１）の増加を防止および遮断することができる。方法は、腫瘍生存を３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、および６０％増加させることができる。
開示される方法は、方法を投与されていないかまたは標準治療の治療法を投与された対象における細胞性免疫応答と比較して、対象における細胞性免疫応答を約５０倍～約６０００倍、約５０倍～約５５００倍、約５０倍～約５０００倍、約５０倍～約４５００倍、約１００倍～約６０００倍、約１５０倍～約６０００倍、約２００倍～約６０００倍、約２５０倍～約６０００倍、または約３００倍～約６０００倍増加させることができる。いくつかの実施形態では、方法は、方法を投与されていないかまたは標準治療の治療法を投与された対象における細胞性免疫応答と比較して、対象における細胞性免疫応答を約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍増加させることができる。
いくつかの実施形態では、方法は、対象の無腫瘍生存を増加させるか、腫瘍量を低減するか、無憎悪生存を増加させるか、全生存を増加させるか、またはそれらの組み合わせであり得る。方法は、対象において、無腫瘍生存を２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、および６０％増加させることができる。方法は、対象において、腫瘍量を２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、および７０％低減させることができる。方法は、対象において、無増悪生存を２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、および６０％増加させることができる。方法は、対象において、全生存を２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、および６０％増加させることができる。
ある特定の実施形態では、方法は、臨床的に安全であることが証明されているか、臨床的に有効であることが証明されているか、またはその両方である。
目的
主な目的：新たにＧＢＭと診断された成人対象に、ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２を筋肉内（ＩＭ）注射により送達した後、セミプリマブ－ｒｗｌｃと組み合わせてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００でＥＰした安全性および忍容性を評価する。
主要エンドポイントおよび評価：
●有害事象の一般毒性基準（ＣＴＣＡＥ）ｖ４．０３に従ってグレード付けされた有害事象（ＡＥ）の発生率は、システム臓器クラス、好ましい用語、重症度、および治験治療との関連性によって分類される。
●ベースラインからの安全性検査パラメータの臨床的に有意な変化。
副次的な目的：
●新たにＧＢＭと診断された成人対象に、ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２をＩＭ注射により送達した後、セミプリマブ－ｒｗｌｃと組み合わせてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００でＥＰした予備的臨床有効性および免疫原性を評価する。
●新たにＧＢＭと診断された成人対象に、ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２をＩＭ注射により送達した後、ＲＥＧＮ２８１０と組み合わせてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００でＥＰした予備的免疫原性を評価する。
副次的エンドポイントおよび評価：
●１８ヶ月時点の全生存期間（ＯＳ１８）、
●抗原特異的細胞免疫応答は、
○ＥＬＩＳｐｏｔによる末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のインターフェロンγ分泌Ｔリンパ球、
○フローサイトメトリーによるＰＢＭＣ中のＴ細胞表現型（例えば、活性化および細胞溶解性細胞、骨髄由来サプレッサ細胞頻度（ＭＤＳＣ））、
○多様性および推定抗原特異性を評価するための、ＰＢＭＣからのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）配列決定によって評価され、
●抗原特異的体液性応答（例えば、Ｂ細胞活性化／抗体分泌）。
探索的目的：
●臨床的有効性および腫瘍遺伝学および／またはバイオマーカーとの相関関係を探索する。
●新たにＧＢＭと診断された成人対象に、ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２をＩＭ注射により送達した後、ＲＥＧＮ２８１０および低分割放射線療法と組み合わせてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００でＥＰした有効性をさらに評価する。探索的エンドポイント：
●可能であれば、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）および免疫抑制要素、
●ＩＨＣ、免疫蛍光（ＩＦ）またはゲノム配列決定によるｈＴＥＲＴ、ＷＴ１、およびＰＳＭＡの腫瘍発現を含むがこれらに限定されない腫瘍オンコプロテインの発現、
●血漿および／または血清中のマイクロＲＮＡシグネチャー、
●可能であれば、末梢血からの循環腫瘍細胞、循環内皮細胞、および／または循環がん関連マクロファージ様細胞、
●ＲＮＡｓｅｑによる腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）特異的末梢Ｔ細胞の評価、
●血漿および／または血清からのサイトカインプロファイルの評価、
●ＲＡＮＯ（神経腫瘍学における奏効評価）基準および神経腫瘍学における免疫療法奏効評価（ｉＲＡＮＯ）基準によって評価される無増悪生存期間、
●全生存期間（ＯＳ）。
研究設計
本実施例に記載される研究は、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ＿ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０３４９１６８３に対応する。本研究に関連するとして本明細書に掲示されたデータは、本出願時点での本研究の状態を反映している。本研究では、抗原特異的Ｔ細胞生成療法であるＩＮＯ－５４０１をＩＮＯ－９０１２と組み合わせ、続いて、ＰＤ－１チェックポイント阻害剤であるセミプリマブ－ｒｗｌｃとともにＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００デバイスを用いたエレクトロポレーションを、この組み合わせの耐容性、免疫原性および抗腫瘍活性を評価するために、放射線およびテモゾロミドとともに新たに診断されたＧＢＭを有する患者に行った。ＮＹＵ倫理委員会による倫理承認、承認番号ｉ１７－００７６４。
これは、新たにＧＢＭと診断された対象におけるセミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０としても知られる）と組み合わせたＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２の安全性、免疫原性、および予備的有効性を評価するための第１／２相、非盲検、多施設治験である。すべての患者は、書面によるインフォームドコンセントを受けた。
対象は、ＧＢＭの確定的な病理組織学的診断および外科的介入からの適切な回復時に、ＲＥＧＮ２８１０を用いた免疫療法を開始した。ＲＴの完了前に入手可能であったＣＬＩＡ認定検査室で行われたＭＧＭＴ遺伝子メチル化アッセイの結果に基づいて、対象をコホートに割り当てた。免疫療法の開始を０日目として設計する。ＲＥＧＮ２８１０を、ｉＲＡＮＯ（神経腫瘍学における免疫療法奏効評価）によって定義される疾患進行、許容できない毒性、同意の撤回、または死亡まで３週間毎に静脈内（ＩＶ）投与した。
０日目に、対象は、ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２を筋肉内（ＩＭ）で受け、続いてエレクトロポレーション（ＥＰ）を受けた。ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２を投与し、続いてＥＰを４回用量３週間毎に投与し、次いで、ｉＲＡＮＯによって定義される疾患進行、許容できない毒性、同意の撤回、または死亡まで９週間毎に投与した。
テモゾロミドは、放射線療法中に、臨床的に禁忌である場合を除き、ＭＧＭＴプロモータメチル化の有無にかかわらず、すべての対象に投与された。放射線療法（ＲＴ）は、術後４２日以内に開始した。放射線療法は、０日目から約１～２週間後に開始し、約３週間継続することとした。テモゾロミド（ＴＭＺ）は、放射線療法（ＴＭＺ／ＲＴ）中に毎日投与された。ＭＧＭＴプロモータメチル化を有する対象は、ＴＭＺ／ＲＴからの回復後、６サイクルにわたってＴＭＺの維持（アジュバント）を受けた。維持（アジュバント）ＴＭＺを２８日サイクルの最初の５日間投与した。本研究には、以下の２つのコホート：非メチル化ＭＧＭＴプロモータを有する対象からなるコホートＡ、およびメチル化ＭＧＭＴプロモータを有する対象からなるコホートＢを有した。
研究対象集団
各潜在的対象は、研究に登録するための以下のすべての基準を満たしていた：患者の適格性の概要
確定手術後であり、標準的な療法を受けることができる新たにＧＢＭと診断された成人。推定対象数：５２。コホートＡ：非メチル化ＭＧＭＴプロモータ（Ｎ＝３２ ３０人の評価可能な対象の場合）。コホートＢ：メチル化ＭＧＭＴプロモータ（Ｎ＝２０ １９人の評価可能な対象の場合）。
組み入れ基準：
●対象は、施設のガイドラインに従って、書面によるＩＲＢ承認済みのインフォームドコンセントを提供しなければならない。
●インフォームドコンセントに署名した日に１８歳以上であり、すべての治験の手順に従うことができ、かつ意欲的であること。
●膠芽腫（ＧＢＭ）の病理組織学的診断を伴う新たに診断された脳がん、
●カルノフスキーパフォーマンスステータス（ＫＰＳ）のベースライン時の評価≧７０、
●デキサメタゾン等価用量≦２ｍｇ／日投与する、０日目より≧３日前安定または減少している、
●治験責任医師が定義した以前のＧＢＭ手術の影響からの回復、
●インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）への署名から２８日以内に実施された治験責任医師による評価による臨床的に有意な所見がない心電図、
●最初の治験治療の２８日前に得られた、下記の表に定義される血液学的、腎臓、肝臓パラメータによって実証される適切な臓器機能、
Figure 2023500337000002
 ●治験中、男性は父親とはならないこと、女性は妊娠の可能性がある場合、妊娠しないことに同意する。対象は、子供を妊娠している可能性がない（ホルモン補充をしていない場合、卵胞刺激ホルモン［ＦＳＨ］によって確認される１２ヶ月以上の非療法誘発性無月経）、または外科的に不妊である（男性では精管切除、または女性では卵巣および／もしくは子宮がない）、または治療期間中および最終投与後少なくとも１２週までは年間＜１％の失敗率をもたらす、非常に効果的なまたは組み合わせた避妊方法を使用することに同意しなければならない。定期的な禁欲（例えば、カレンダー、排卵、症候体温法、または排卵後の方法）および離脱は、避妊の許容可能な方法ではない。失敗率が年間＜１％未満と予想される避妊法の例としては、男性不妊手術およびホルモン剤によるインプラントが挙げられる。代替的に、経口または注射ホルモン避妊薬および特定の子宮内避妊器具（ＩＵＤ）を適切に組み合わせるか、または２つの方法（例えば、コンドームおよび子宮頸部キャップなどの２つのバリア法）を組み合わせて、年間＜１％の失敗率を達成することができる（バリア法は、常に殺精子剤の使用によって補完されなければならない）。
●磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）に耐えることができること。
除外基準：
●術後ＭＲＩにおける１ｃｍ×１ｃｍを超える残存腫瘍の増強があること、
●術後ＭＲＩにおける多巣性疾患または軟髄膜疾患（ＬＭ）、
●腫瘍の外科的切除から４２日以内に放射線を開始することができない、
●デキサメタゾン等価用量＞２ｍｇ／日投与する、
●過去の任意の時点でＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を遮断する薬剤による以前の治療、
●最初の投与から２８日以内に、承認済みまたは治験中の免疫調節剤（例えば、抗ＴＮＦ、治療用抗がん剤ワクチン、サイトカイン治療（Ｇ－ＣＳＦまたはエリスロポエチン以外）、または細胞障害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＰＩ３ＫデルタまたはＯＸ－４０を標的とする薬剤）を受けたことがあること。
●過去の任意の時点でイデラリシブによる治療を受けたことがある。
●腫瘍治療分野（Ｏｐｔｕｎｅ、ＮｏｖｏＴＴＦ）による過去、現在、または計画された治療、腫瘍溶解性ウイルス治療、または化学療法のためのＧｌｉａｄｅｌ ｗａｆｅｒ（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）インプラントを含む治験薬もしくはデバイスへの過去の曝露、最初の投与を受けてから２８日以内、
●ＲＥＧＮ２８１０またはその賦形剤のいずれかに対するアレルギーまたは過敏症、
●抗体治療に起因するアレルギー反応または急性過敏症反応の既往歴、
●白斑、消散した小児喘息、１型糖尿病、ホルモン補充のみを必要とする残存性甲状腺機能低下症、または全身治療を必要としない乾癬を除いて、免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）のリスクを示唆する、全身免疫抑制治療による治療を必要とした自己免疫疾患の進行中または最近（５年以内）の証拠。
●組み入れ基準に記載されているように、治験治療の最初の投与前２８日以内の、調査中である基礎疾患に対するデキサメタゾン以外の免疫不全の診断または全身性免疫抑制療法による治療、
●ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の陽性血清学的検査、またはＨＩＶ感染の既往歴、または活動的または慢性感染を示すＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢＶ ｓＡｇ）もしくはＣ型肝炎ウイルスリボ核酸（ＨＣＶ ＲＮＡ）の陽性検査は、これらの感染がワクチン接種に対する適切な免疫応答を開始する能力を妨げる可能性がある、
●適切に治療された基底細胞または扁平上皮皮膚がん、または子宮頸部のがん腫を除き、３年以内に疾患の証拠がない別の部位に現在、悪性腫瘍。以前の悪性腫瘍の治療療法を受けたが、３年間疾患の証拠がなく、再発のリスクが低いとみなされるがん生存者は、治験の対象となる。
●最大２週間前に投与され得る、不活化インフルエンザワクチンを除く、治験治療の最初の投与４週間前までに任意のワクチンを受け取ること、
●臨床的に重要で医学的に不安定な病歴があり、治験責任医師の判断により、対象の安全を脅かし、試験評価またはエンドポイント評価を妨害し、治験結果の妥当性に影響を与える可能性がある場合（例えば、慢性腎不全、狭心症、心筋梗塞、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩ／ＩＶの心臓疾患）、または心臓の前駆症状（Ｗｏｌｆｆ－ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ－Ｗｈｉｔｅ、心筋症、または臨床的に有意な不整脈など）がある場合。
●過去５年以内の肺炎の既往歴、
●０日目の２週間以内にＩＭ注射または抗凝固剤（例えば抗凝固剤または抗血小板薬、市販のアスピリンまたはイブプロフェンなどの非ステロイド性抗炎症薬を除く）の使用を禁忌とする急性または慢性の出血または凝固障害がある場合、
●三角筋および大腿四頭筋の前外側を考慮すると、ＩＭ注射に使用できる許容部位は２箇所未満である。以下は、許容されない部位である：
○意図した治療部位から２ｃｍ以内に位置する刺青、ケロイド、または肥厚性瘢痕、
○三角注射部位と同側に位置する（心臓専門医が許容できると判断した場合を除く）心臓除細動器またはペースメーカ（生命を脅かす不整脈を防止するため）
○意図された治療部位（すなわち、ＥＰ領域）内の金属インプラントまたは植え込み型医療機器、
●治験責任医師の意見では、治験要件の遵守を妨げる薬物またはアルコールの積極的な使用または依存、
●精神疾患または身体疾患（すなわち、感染症）の治療のための監禁または強制収容（非自発的収容）、
●妊娠中または現在授乳中、
●対象の参加能力を妨げるか、または対象の安全性に影響を与える可能性のある医学的、心理学的、非医学的状態であると治験責任医師が判断した場合。
用量および投与
治験薬製品
Figure 2023500337000003
ＩＮＯ－５４０１における活性医薬成分（ＡＰＩ）は、独自の合成コンセンサス（ＳｙｎＣｏｎ（登録商標））技術を使用して設計および構築されたＤＮＡプラスミド配列である。このプロセスは、複数の株にわたってコンセンサス遺伝子を合成的に誘導し、遺伝子レベルでＤＮＡ挿入を最適化して、ヒト細胞内での高い発現を可能にすることを含む。ＩＮＯ－５４０１プラスミドは次の通りである：
●ｐＧＸ１１０８、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ、配列番号２８）の発現のためのプラスミド。３ｍｇのｐＧＸ１１０８が、治験治療の各１０ｍｇ用量に存在する（ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２）。
●ｐＧＸ１４０４、ウイルムス腫瘍遺伝子－１（ＷＴ１）抗原（配列番号２６）の発現のためのプラスミド。３ｍｇのｐＧＸ１４０４が、治験治療の各１０ｍｇ用量に存在する。
●ｐＧＸ１４３４、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）（配列番号２０）の発現のためのプラスミド。３ｍｇのｐＧＸ１４３４が、治験治療の各１０ｍｇ用量に存在する。
薬剤製品ＩＮＯ－９０１２におけるＡＰＩは、ｐＧＸ６００１であり、ヒトＩＬ－１２ ｐ３５およびｐ４０サブユニットタンパク質の発現のためのＤＮＡプラスミドである。１ｍｇのｐＧＸ６００１が、治験治療の各１０ｍｇ用量に存在する。ＤＮＡプラスミド製品ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２の両方は、シリンジおよび治験用ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００エレクトロポレーション（ＥＰ）デバイスを使用して投与される。
セミプリマブ－ｒｗｌｃ（ＲＥＧＮ２８１０）は、２つのジスルフィド結合ヒト重鎖からなる共有結合ヘテロ四量体であり、各々は、ヒトカッパ軽鎖へのジスルフィド結合を介して共有結合される。抗体は、一次配列に基づいて約１４３．６ｋＤａの分子量を有する。各重鎖上に単一のＮ結合グリコシル化部位があり、分子のＦｃ部分の定常領域内に位置する。
ＲＥＧＮ２８１０重鎖は、ＩｇＧ４アイソタイプ定常領域を有する。重鎖および軽鎖の可変ドメインが結合して、抗体内にＰＤ－１結合部位を形成する。ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスによる抗体生成は、ＰＤ－１での免疫化後に標準的な技術を使用して実行される。ＲＥＧＮ２８１０の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子をＣＨＯ細胞に導入し、この抗体のために、より高い力価を有する安定した発現細胞株（細胞株２）を開発した。両方の細胞株について、組換えＣＨＯ細胞を浮遊培養で増殖させ、抗体発現および細胞培養培地への分泌を開始するように化学的に誘導した。抗体は、濾過を介して回収され、一連の調製カラムクロマトグラフィーおよび濾過ステップを通じて精製され、原薬を生成する。次いで、原薬を製剤化し、滅菌濾過して最終的な原薬生成物を生成する。
ＲＥＧＮ２８１０（５０ｍｇ／ｍＬ）は、１０ｍＭヒスチジン、５％（ｗ／ｖ）スクロース、１．５％（ｗ／ｖ）Ｌプロリン、および０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０を含有するｐＨ６．０の緩衝水溶液中に製剤化される。ＲＥＧＮ２８１０は、静脈内投与のために１０または２０ｍＬのガラスバイアルに５．５ｍＬの滅菌液として供給される。最大体積５．０ｍＬは、２５０ｍｇのＲＥＧＮ２８１０を含有する各バイアルから取り出すことができる。ＲＥＧＮ２８１０の３５０ｍｇ用量を提供するために７ｍＬが必要であるため、５ｍＬバイアルとともに供給される場合は２バイアルを使用する必要がある。ＲＥＧＮ２８１０（５０ｍｇ／ｍＬ）はまた、静脈内投与用に１０または２０ｍＬのガラスバイアル中に７．４４ｍＬの滅菌液として供給される。最大体積７．０ｍＬは、３５０ｍｇのＲＥＧＮ２８１０を含有する各バイアルから取り出すことができる。
治療
すべての組み入れ基準を満たし、除外基準のいずれも満たさない対象は、０日目にＲＥＧＮ２８１０およびＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２を用いて免疫療法を開始した。ＲＥＧＮ２８１０を、ｉＲＡＮＯによって定義される疾患進行、許容できない毒性、同意の撤回、または死亡まで、用量保持の不在下で、用量当たり３５０ｍｇの用量で３週間毎にＩＶ投与した。ＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２ ＩＭ、続いてＥＰは、３週間毎に４回投与され、次いで９週間毎に、用量保持がない場合、用量当たり１０ｍｇ／ＤＮＡの用量で、ｉＲＡＮＯによって定義される疾患進行、許容できない毒性、同意の撤回、または死亡まで投与された。ＲＴは、外科的介入の４２日後までに開始し、０日目の約１～２週間後に開始した。ＲＴは約３週間継続した。ＲＴの総用量は、３週間にわたって４０Ｇｙを投与した。
放射線療法（ＴＭＺ／ＲＴ）を伴う毎日のＴＭＺは、外科的介入の４２日後および０日目の約２週間後までに開始した。ＴＭＺ／ＲＴは約３週間継続した。ＴＭＺは、用量減少がない場合に、７５ｍｇ／ｍ２／用量で投与された。次いでに、対象は、追加の６サイクルの維持（アジュバント）ＴＭＺを受けるべきである。コホートＢは、最大６サイクルの放射線療法後にＴＭＺを受けた。維持（アジュバント）ＴＭＺは、標準ガイドラインＴＭＺ治療に従ってＴＭＺ／ＲＴから末梢血数回復した後、２８日サイクルの最初の５日間、１５０～２００ｍｇ／ｍ２／用量でコホートＢの対象に投与した。
０日目（ＩＮＯ５４０１、ＩＮＯ９０１２およびＲＥＧＮ２８１０の最初の投与）は、原発腫瘍の切除が完了した少なくとも１４日後であり、対象は術後２８日までに手術から回復した。
進行以外の理由で１つの治療（ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２またはＲＥＧＮ２８１０のいずれか）を中止した対象については、医療モニターに相談した後、他の治療を継続することができた。
図１は、コホートＡおよびＢの治験設計を図示する。
●ＩＮＯ－５４０１（各３ｍｇのｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１およびＰＳＭＡプラスミド）は、１ｍｇのＩＮＯ－９０１２（ＩＬ－１２）と合わせて、合計１０ｍｇのＤＮＡを、筋肉内（ＩＭ）注射、続いてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００デバイスによるエレクトロポレーション（ＥＰ）を介して投与し、４回用量を３週間毎に、次いで９週間毎に送達した。
●化学放射線治療：低分割スケジュールで与えられた放射線（ＲＴ）（３週間にわたって４０Ｇｙ）
●放射線と同時にテモゾロミド（ＴＭＺ）（コホートＡおよびＢ）、続いて６回の維持（アジュバント）サイクル（コホートＢのみ）
セミプリマブ－ｒｗｌｃ（ＲＥＧＮ２８１０）を、０日目に開始して、およそ３０分間にわたって３週間毎（Ｑ３Ｗ）に３５０ｍｇの用量でＩＶ投与し、ｉＲＡＮＯによって定義される疾患進行、許容できない毒性、同意の撤回、または死亡まで続けた。
ＩＮＯ－５４０１は、ＷＴ１、ＰＳＭＡおよびｈＴＥＲＴタンパク質を標的とする３つの別々の合成プラスミドの混合物である。各プラスミドは、３ｍｇのＤＮＡで投薬され、ＩＮＯ－５４０１の用量当たり合計９ｍｇのＤＮＡであった。ＩＮＯ－５４０１を、０日目、３週目、６週目、および９週目に、次いで９週間毎にＩＭ投与し、ｉＲＡＮＯ、許容できない毒性、同意の撤回、または死亡によって定義される疾患進行まで続けた。ＩＮＯ－９０１２は、ヒトＩＬ－１２を発現する合成プラスミドであり、１ｍｇのＤＮＡで投与され、ＩＮＯ－５４０１とともにＩＭ投与された。混合して一緒に投与した場合の、ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２の各用量におけるＤＮＡの総用量は１０ｍｇであった。ＩＮＯ－５４０１（各３ｍｇのｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１およびＰＳＭＡプラスミド）は、１ｍｇのＩＮＯ－９０１２（ＩＬ－１２）と合わせて、合計１０ｍｇのＤＮＡを、筋肉内（ＩＭ）注射、続いてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００デバイスによるエレクトロポレーション（ＥＰ）を介して投与し、４回用量を３週間毎に、次いで９週間毎に送達した。
すべての対象は、１５回の分割（３週間）で合計４０Ｇｙを受けた。
低分割放射線療法（ｈｆＲＴ）は、術後４２日以内に開始した。
放射線療法を３週間行った。
臨床的に禁忌である場合を除き、すべての患者は、放射線療法中にＭＧＭＴメチル化ステータスに関係なくＴＭＺを投与された。ＴＭＺは、ｈｆＲＴ療法を伴う２１日間（週７日間、３週間）、１日当たり７５ｍｇ／ｍ２で経口投与した。
放射線療法後、ＭＧＭＴプロモータメチル化を有する対象（コホートＢ）は、血液学的毒性がない場合に、各維持サイクルを５０ｍｇ／ｍ２／用量増加させて、最大２００ｍｇ／ｍ２／用量にして、２８日サイクルの最初の５日間（５日間「オン」、２３日間「オフ」）にわたって、１５０ｍｇ／ｍ２／日の開始用量で６サイクルＴＭＺ維持療法を継続した。ＴＭＺの維持（アジュバント）は、ＴＭＺ治療ガイドラインに従って、ＲＴの最後の投与（±３日）から約４週間後に開始し、末梢血数の回復に続いて開始した。各治療サイクルの開始時に平方メートルで計算した実際の体表面積（ＢＳＡ）を使用して用量を決定した。
１日用量は、５ｍｇ単位で四捨五入した。
有効性評価／エンドポイントＥＬＩＳｐｏｔ
ＥＬＩＳｐｏｔを用いて、抗原特異的Ｔ細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料中に存在するかどうかの定性的測定を行った。ＰＢＭＣを、研究週０、３、６、９、１２、および２４週目に対象から収集し、ＩＦＮ－ｇ ＥＬＩＳｐｏｔによってアッセイした。１２ヶ月のデータカットオフにおいて、２４週目までの試料を有する８人の対象からのＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃによる治療前（前）および治療後最高の最高値（ピーク）から、１００万ＰＢＭＣ当たりの抗原特異的ＩＦＮｇスポット形成単位（ＳＦＵ）を示す。各対象は、白丸で表され、棒は、平均値を表す。各抗原のグラフ、ならびに合わせてアッセイされた１１人の対象および２４週目までの利用可能な試料を有する８人の対象について、治療前とピークとの差、デルタが示されている。１８ヶ月のデータカットオフにおいて、３９人の対象からのＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃによる治療前（前）および治療後最高の最高値（ピーク）から、１００万ＰＢＭＣ当たりの抗原特異的ＩＦＮｇスポット形成単位（ＳＦＵ）を示す。
各対象は、白丸で表され、棒は、平均値を表す。各抗原のグラフ、および合わせて３９人の対象について、治療前とピークとの差、デルタが示されている。ＩＮＯ－５４０１は、ＷＴ１、ＰＳＭＡ、およびｈＴＥＲＴの合計である。箱ひげ図は、２５パーセンタイルから７５パーセンタイルまで延び、中央値には水平線があり、平均値には「＋」がある。
溶解性顆粒負荷
研究週０、３、６、９、１２、および２４週目に対象から採取したＰＢＭＣ試料中に存在する抗原特異的Ｔ細胞の活性化状態および溶解電位を探索するために溶解性顆粒負荷アッセイを実施した。ＰＢＭＣは、任意の外因性サイトカインの不在下で、ＩＮＯ－５４０１抗原（ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡおよびＷＴ１）または関連する対照のための重複するペプチドライブラリで刺激された。５日後、細胞を抗体で染色し、フローサイトメトリーにより評価した。ＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃによる治療前（前）および治療後の最高値（ピーク）からの溶解電位（グランザイムＡ、パーフォリンを発現する）を有する、生きた、抗原特異的、活性化（ＣＤ３８＋）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を、１２ヶ月のデータカットオフで８人の対象から、および１８ヶ月のデータカットオフで２９人の対象から決定した。
安全性評価
有害事象の一般毒性基準（ＣＴＣＡＥ）ｖ４．０３に従ってグレード付けされた有害事象（ＡＥ）は、システム臓器クラス、好ましい用語、重症度、および治験治療との関連性、ならびにベースラインからの安全性検査パラメータの臨床的に有意な変化によって分類される。
各コホートに最大６人の対象（ＡおよびＢ合計で最大１２人の対象）を登録した、修正されたローリング６設計を使用して、安全性の試験を実施した。各コホートにおいて１人目および２人目の対象の登録と、２人目および３人目の対象との間で１週間の待機期間を有して、登録を段階分けした。各対象を最大９週間評価した。９週目までに、対象は、３用量のＲＥＧＮ２８１０、３用量のＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２を受け、ＲＴを完了した。
各コホートにおけるこれら６人の最初の３人の対象が、用量制限毒性（ＤＬＴ）がない状態で、９週目の評価を完了すると、治験依頼者およびＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからの医療モニター、ならびにまとめ役の治験責任医師によるこれらの患者からの利用可能なすべての安全性データのレビュー後、そのコホートへの登録が完全に開始された。しかしながら、各コホートの最初の３人の対象が９週目を完了する前に、そのコホートの最初の６人の対象からの単一の対象がＤＬＴを経験した場合、登録は、６人の対象全員が９週目に達し、ＤＬＴについて評価されるまで、そのコホートの６人の対象に限定されるものとした。
最初の６人内の２人目の対象が、最初の９週間以内に同じコホートでＤＬＴを経験した場合、そのコホートへの登録は停止され、対象の施設の治験責任医師（ＰＩ）および治験責任医師に加えて治験依頼者の医療モニターが、その症例を議論し、そのコホート内の治験薬または併用薬（ＲＴ／ＴＭＺ）の用量を変更するか、またはそのコホートへのさらなる登録を停止するかを決定するであろう。プロトコルの変更が必要な場合、プロトコルの修正およびＩＲＢによる修正プロトコルの承認後にのみ、登録を再開することとした。
ＤＬＴは次のように定義される。
非血液学的毒性
●グレード≧２のブドウ膜炎。
●グレード≧３の非血液学的毒性、ただし、以下を除く：
●グレード３の悪心、嘔吐、下痢、治療医の処方による最大限の支持療法にもかかわらず持続している場合（＞７日持続時間）を除く。
●臨床的に重要ではないと考えられ、ＡＥの基準を満たさないグレード≧３の検査異常。
●医学的管理に応答するグレード３の注入関連反応。
●１４日以内に医学的管理（ステロイドによる治療を含む）によりグレード≦２まで改善する、ブドウ膜炎を除くグレード３の免疫関連有害事象（ＩＲＡＥ）。

血液学的毒性
●グレード４の好中球減少症＞７日間。
●出血を伴うグレード４の血小板減少症、またはグレード３の血小板減少症。
●グレード≧３の発熱性好中球減少症（発熱≧３８．５℃、絶対好中球数［ＡＮＣ］＜１０００／ｍｍ３）、またはグレード≧３の好中球減少症で、感染が記録されている。
治験責任医師が、基礎となる腫瘍、併用薬または併存疾患に関連するとみなした事象、および試験療法に関連する可能性は低いとみなされた事象（ＩＮＯ－５４０１、ＩＮＯ－９０１２、またはＲＥＧＮ２８１０）が、少なくともおそらくテモゾロミドまたはＲＴのいずれかに関連しているとみなされた事象は、ＤＬＴとみなされなかった。ＤＬＴを経験した患者は、さらなる治験療法を中止し、治験の治験後のフォローアップ段階に入ることとした。ＤＬＴ基準を満たしているがＤＬＴウインドウ外で発生した有害事象は、許容できないＡＥとして分類し、治験治療を中止することとした。
安全性慣らし期間の後、本臨床試験の過程のいずれかの時点で、いずれかのコホートの対象の３０％以上が、治験薬に関連するとみなされる用量制限毒性を経験した場合、１つまたは両方のコホートへの登録は停止され、対象の施設の治験責任医師（ＰＩ）および治験責任医師に加えて治験依頼者の医療モニターが、治験薬の安全性プロファイルを議論し、治験薬または併用薬（ＲＴ／ＴＭＺ）の用量を１つまたは両方のコホート内で変更するか、または１つまたは両方のコホートへのさらなる登録を停止するかを決定することになっていた。プロトコルの変更が必要な場合、プロトコルの修正およびＩＲＢによる修正プロトコルの承認後にのみ、登録を再開することとした。
医学的および臨床的評価
ＩＣＦに署名した時点から、その後の治験訪問から治験退院までのすべての期間に併用薬を回収した。
すべてのＡＥの評価は、ＩＣＦに署名した時点から、ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２またはＲＥＧＮ２８１０の最後の投与から３０日後のいずれか遅い方の投与後に収集されたが、ＡＥＳＩおよび本プロトコルで定義されているＳＡＥは、ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２またはＲＥＧＮ２８１０の最後の投与から６ヶ月後のいずれか遅い方の投与後に収集される予定であった。ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３を使用してＡＥを評価した。
物理的評価
完全な神経学的検査（脳神経評価、深部腱反射、筋力および感覚）、およびカルノフスキーパフォーマンスステータス（ＫＰＳ）を含む完全な検査を３週間毎に実施した。
医療治療後の反応評価
０日目に、ＲＥＧＮ２８１０およびＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２の両方の治療前に、ＲＥＧＮ２８１０の注入の終了時に、およびＲＥＧＮ２８１０の注入後の最初の４時間の３０分毎に、ならびにＥＰによるＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２の注入の３０分後に、バイタルサインを収集した。他のすべての訪問で、治験責任医師は、各治療（ＲＥＧＮ２８１０および／またはＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２）後３０分間、および事象スケジュールに従って指定された訪問で局所および全身の反応を評価した。
バイタルサイン
すべての治験治療訪問で、体温、呼吸数、血圧、心拍数を含むバイタルサインを測定した。
体重、身長、体重指数
スクリーニング訪問時に体重（ｋｇ）および身長（ｃｍ）を収集した。０日目から治療終了までの各追加の治療訪問で体重を収集した。
対象がＥＰ治療を受けている間、０日目、３週目、６週目、９週目、１８週目、および１８週目以降の９週間毎に、針ゲージを評価する必要性に応じて、体重指数を評価した。
１２誘導心電図
対象の適格性を決定するために、０日目の２８日前までにスクリーニング時に心電図を実施した。異常な心電図は、臨床的に有意であるか、または臨床的に有意ではないかに解釈された。スクリーニング時の異常な心電図は、対象の適格性を決定するために治験医療モニターと協議することとした。
妊娠検査
生殖能力を有する女性の場合、スクリーニング訪問時およびＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２およびＲＥＧＮ２８１０の各投与前に、血清妊娠検査（検査は少なくとも２５ｍＩＵ／ｍＬの感度でなければならない）の陰性結果が得られた。いずれかの時点で、β－ＨＣＧ（妊娠）試験が陽性であり、対象が妊娠していることを示す場合、追加の治験治療は投与されなかったが、対象は、治験の期間中およびそれ以降に追跡され、（対象の同意を得て）妊娠の転帰を決定する必要があった。
検査室での評価
血液試料を、事象の治験スケジュールに示すように収集した。
スクリーニング検査は、０日目から７日以内であれば、訪問＃１（０日目）に使用することができる。それ以外の場合、治療訪問に関連するすべての検査（ＣＢＣおよび化学物質）は、治療の７２時間以内に収集され、治療前に治験責任医師によってレビュー／評価された。
全血球計算（ＣＢＣ）には以下が含まれる：
●白血球数（ＷＢＣ）微分あり
●赤血球（ＲＢＣ）数
●ヘモグロビン、ヘマトクリット
●血小板数
血清化学物質には以下が含まれる：
●グルコース
●アルブミン
●総タンパク質
●ＳＧＰＴ（血清グルタミン酸ビルビン酸トランスアミナーゼ、ＡＬＴ）
●ＳＧＯＴ（血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ、ＡＳＴ）
●アルカリホスファターゼ
●ビリルビン（合計）
●直接ビリルビン
●ＢＵＮ（血中尿素窒素）
●カルシウム
●クレアチニン
●電解質（ナトリウム、カリウム、塩化物、二酸化炭素または重炭酸）
●リパーゼ
●アミラーゼ
●ＣＰＫ
スクリーニング時にのみ実施される評価：
●ＨＩＶスクリーニング試験（抗体イムノアッセイ試験）、または医療記録内のこれらの結果の文書化、
●Ｂ型肝炎血清学：ＨＢｓＡｇ（Ｂ型肝炎表面抗原）、または医療記録内のこれらの結果の文書化、
●Ｃ型肝炎抗体イムノアッセイ、または医療記録内のこれらの結果の文書化、
●比重、グルコース、血液およびケトンを含む尿検査、
●活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）、ＩＮＲ。
末梢血免疫原性評価
全血および血清試料を得た。免疫学的試料を、スクリーニング、０日目、３週目、６週目、９週目、１２週目、次いで１２週目（週２４、３６、４８週目など）毎に採取した。
抗原特異的ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して、ＩＮＯ－５４０１抗原（ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡ）をカバーする重複ペプチドライブラリを使用して、Ｔ細胞応答を評価した。
さらに、試験中に一般的な細胞免疫能力を追跡するために、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルスおよびインフルエンザ（ＣＥＦ）から組み合わされた既知の抗原エピトープのプールに対するＰＢＭＣ応答を評価した。
Ｔ細胞応答を、ＩＮＯ－５４０１抗原をカバーする重複ペプチドライブラリを介してフローサイトメトリーによって評価した。フローサイトメトリーアッセイは、ＩＮＯ－５４０１抗原に対応するペプチドによる刺激後の細胞溶解能、活性化または枯渇に関連する表現型マーカーを示す対象Ｔ細胞の能力に対する免疫療法の影響の検討を含み得る。この目的で使用されるマーカーとしては、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１３７、ＣＤ６９、ＣＤ３８、ＰＤ－１、グラヌリシン、グランザイムＡ、グランザイムＢおよびパーフォリンが挙げられる。これらのマーカーは、この評価に役立つ新しいデータが入手可能になると、変化し得る。
免疫抑制に役割を果たすことが知られている細胞の存在の評価は、フローサイトメトリーの適用を介して行われ得る。フローサイトメトリーアッセイは、免疫療法後の免疫応答の誘導または拡大に対するこれらの細胞の影響の検討を含み得る。この目的で使用されるマーカーとしては、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ３３およびＨＬＡ－ＤＲが挙げられる。これらのマーカーは、この評価に役立つ新しいデータが入手可能になると、変化し得る。
多様性および推定抗原特異性を評価するための、ＰＢＭＣからのＴＣＲ配列決定は、事前のインビトロ刺激の有無にかかわらず、全ＰＢＭＣで実施した。
抗原特異的抗体分泌の検出および／またはＢ細胞表現型のためのフローサイトメトリーの使用のための酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または他の方法の適用を介して、体液性応答を評価した。ＴＡＡ特異的Ｔ細胞の分析は、ＣＤ１３７などのマーカーの発現に基づいて、これらの細胞の単離を介して行われ得る。単離時に、これらの細胞の固有のトランスクリプトームを理解するために、ＲＮＡｓｅｑを実施し得る。末梢血由来のサイトカインプロファイルの分析は、Ｌｕｍｉｎｅｘなどの評価プラットフォームを使用して実施し得る。
組織免疫学
ＩＮＯ－５４０１投与の前後に、免疫浸潤および腫瘍性組織における免疫調節因子の存在を、以下を含む多数の評価を介して調べた：
●ＩＨＣ、免疫蛍光（ＩＦ）またはゲノム配列決定による、腫瘍および浸潤性免疫細胞におけるＰＤ－Ｌ１および腫瘍オンコプロテインの発現
●ＲＮＡＳｃｏｐｅによるＴＩＬ浸潤（ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ４）の特徴
●ＲＮＡＳｃｏｐｅによる腫瘍Ｔｒｅｇ、骨髄性免疫抑制集団およびＴ細胞免疫チェックポイント発現の評価
●切除された腫瘍組織におけるＴ細胞受容体配列決定により、任意の既存のクローン性Ｔ細胞集団を、末梢血中のＴ細胞多様性の治療関連変化と相関させる
バイオマーカー
上記で参照した末梢および組織試料からバイオマーカー評価を行い、検査の取扱説明書に従って収集した。登録された対象からの組織試料中のｈＴＥＲＴ、ＷＴ１、および／またはＰＳＭＡタンパク質の発現の免疫組織化学的評価は、十分な試料量の存在および利用可能なデータによって裏付けられる継続的な関連性に応じて生じた。ＩＤＨ－１ステータスは、可能であれば腫瘍組織で実施することとした。
血漿および／または血清中のマイクロＲＮＡシグネチャーは、ＩＮＯ－５４０１ならびにＩＮＯ－５４０１駆動変化による治療に対する疾患経過および／または反応を予測する疾患および／または療法特異的シグネチャーを決定するために評価されるべきであった。ＲＮＡｓｅｑは、この方法に使用され得る。
末梢血由来の循環腫瘍細胞、循環内皮細胞および／または循環がん関連マクロファージ様細胞の評価が生じ得る。サイズ排除ベースフィルタの使用は、この目的のために使用され得、マーカーは、ＧＦＡＰ、ＣＤ４５、ビメンチン、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ１４６、ＴＩＥ－２、および場合によっては他のものを含み得る。
臨床的評価
すべての治験訪問において、疾患応答の臨床評価を実施した（疾患進行の臨床的兆候および症状によって評価される）。疾患進行のためのＭＲＩは、ｉＲＡＮＯ評価によって疑似進行とみなされない限り、０日目の９週間後（±３日）およびその後３ヶ月毎に、すべての対象に対して得られた。その場合、偽進行の疑いがある３ヶ月後には、繰り返し確認ＭＲＩスキャンを実施することとした。
全生存期間
生存帰還のためにすべての対象を追跡した。治療終了訪問の完了後、生存状況の文書化は、６ヶ月毎、および０日後の１８ヶ月に必要とされた。生存期間を文書化するために、以下の方法：電話、個人的な連絡、証明された手紙、または医療記録で確認された訪問の文書化が許容された。
進行
進行を、ＲＡＮＯおよびｉＲＡＮＯの両方によって評価した。進行前に離脱した患者を、進行および生存について追跡した。
ＲＡＮＯおよびＩＲＡＮＯ：神経腫瘍学における（免疫療法）奏効評価
この治験では、ＲＡＮＯおよびｉＲＡＮＯの両方の基準が利用された。神経腫瘍の放射線学的評価（ＲＡＮＯ）基準は、悪性神経膠腫を有する対象の画像の進化する複雑さの評価を改善するために、２０１０年に提案された［Ｗｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１０，２８：１９６３－１９７２．］。ＲＡＮＯ基準は、放射線療法およびＴＭＺ療法後に新たにＧＢＭと診断された対象の約１０～２０％で発生する疑似進行の発生に関するガイダンスを提供する。長期生存および腫瘍退縮を含む臨床的利益は、初期疾患進行後または新たな病変の出現後に依然として生じ得る。ｉＲＡＮＯ基準は、多国籍および多分野の神経腫瘍学免疫療法専門家パネル（ＲＡＮＯワーキンググループ）によって開発され、神経腫瘍学における免疫療法試験における腫瘍進行の決定のためのガイダンスを確立した［Ｏｋａｄａ，ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ ２０１５，１６：ｅ５３４－５４２、Ｒｅａｒｄｏｎ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１４，１６（Ｓｕｐｐｌ ２）］。ｉＲＡＮＯワーキング委員会は、新たな病変を発症するが、実質的な神経学的低下を有さない対象を含む早期進行所見（６ヶ月未満の免疫療法による治療）を有する対象については、偽進行または遅延応答を有する対象において進行性疾患を早期に宣言する可能性を低減するために、進行性疾患の初期エックス線撮影の証拠から３ヶ月後にフォローアップ画像によるエックス線撮影の進行の確認を求めることを推奨する。そのような対象において、疾患進行の証拠を最初に示したスキャンとの比較に基づくさらなるエックス線撮影進行の確認を有するか、または任意の時点で実質的な臨床的低下を発現するものは、対象がエックス線撮影進行の基準を満たした最初の日付にさかのぼる疾患進行日を有する進行性疾患と分類されるべきであった。
本研究では、研究者は、進行の疑いがある場合に治験薬を中止するかどうかを決定する際にｉＲＡＮＯ基準を使用したが、すべての対象は、進行のためのＲＡＮＯおよびｉＲＡＮＯ基準の両方によって進行を評価する必要があった。
ナノスケール：神経腫瘍学における神経学的評価
ナノスケールは、ｉＲＡＮＯおよびＲＡＮＯ基準と組み合わせてのみ使用される。
ＲＡＮＯスケールおよびｉＲＡＮＯスケールの両方で、全体的な評価のために臨床ステータスを組み込む必要があることが明記されているが、どちらのスケールも特定のパラメータを提供していない。神経腫瘍学者の国際グループが、日常的な検査で評価可能な神経機能の客観的かつ定量化可能な指標として、ナノ基準を起草するために招集された。ナノスケールは、定期的な外来診療中に実施された直接観察／検査に基づいて、８つの関連する神経学的領域の評価を伴う。スコアは、応答、進行、安定した疾患、および「評価されていない」の領域特定および全体的なスコアの基準を定義する。これらの基準は、臨床治験および治療的介入にわたって評価され得る神経機能の詳細かつ客観的な測定値を提供する［Ｎａｙａｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏ Ｏｎｃｏｌ ２０１７，１９：６２５－６３５］。この治験には、ＲＡＮＯおよびｉＲＡＮＯを評価した場合のナノスケールを利用した臨床評価が含まれていた。
ＡＥは、医薬品を投与された患者または臨床試験の対象で、必ずしもこの治療と因果関係を有する必要はない任意の不適切な医学的事象として定義される。したがって、ＡＥは、医薬品と関連があるかどうかにかかわらず、医薬品の使用に時間的に関連する好ましくない、意図しない兆候（例えば、異常な検査所見を含む）、症状、または疾患であり得る。
本研究では、ＡＥを監視し、分類し、要約した。治験薬を開始する前に存在した医学的状態／疾患は、治験薬の治療を開始した後に悪化した場合にのみ、ＡＥとみなされた。予期しないＡＥは、治験薬の参照安全性文書またはＩＢの対応するセクションで特定されていないものである。研究の過程を通じて、すべてのＡＥを監視し、事象の重篤度、重症度、取られた処置、およびＩＰとの関連性を含むＡＥ ＣＲＦで報告された。ＡＥは解消または安定するまで追跡され、結果は適切なＣＲＦに記録された。すべてのＡＥは、対象自身の言葉ではなく、標準的な医学用語で記録された。
ＡＥは、以下を含む：
●プロトコルで義務付けられた手術の結果として発生する治療前または治療後の合併症。
●ヒト臨床治験の治験薬フェーズ中またはその結果として重症度が増加するか、または性質が変化する既往症。
●妊娠の合併症。ＡＥは以下を含まない：
●医学的または外科的処置（例えば、手術、内視鏡検査、抜歯、輸血）が実施され、処置につながる状態は、ＡＥと考慮され得る。
●スクリーニング訪問前に存在または検出された、悪化しない疾患、状態、または検査異常。
●不測の事態が発生していない状況（例えば、待機的手術のための入院、社会的および／または便宜的な入院）。
●臨床的後遺症のない治験薬の過量投与
●ＩＣＦに署名する前の発症日がある病状または臨床的に有意な検査異常は、悪化しない限り、ＡＥではない。病歴ＣＲＦに記録されている。
●合併症のない妊娠。
●医学的理由なしに妊娠を終了させるための誘発性選択的流産（妊娠ＣＲＦに記録されている）。
同意書に署名した時点から治験期間を通して、および最後の投与後３０日（免疫関連ＡＥの場合は６ヶ月）までに発生したすべてのＡＥを記録した。
重篤な有害事象（ＳＡＥ）とは、以下のうちの１つの条件を満たす任意のＡＥである。
●プロトコルによって定義される監視期間中の死亡（疾患進行による死亡を除く）。
●直ちに生命を脅かすもの（例えば、対象は、治験責任医師の見解では、事象が発生したときに、その事象によって即座に死亡する危険性があった）、
プロトコルで定義された監視期間中に対象の入院または既存の入院の延長が必要である（入院が継続的な観察を可能にするための予防措置に過ぎない場合であっても、入院期間に関係なく、任意の１泊２日の入院を含む）。しかしながら、悪化していない既往症のための入院（待機的手術のための入院を含む）はＳＡＥを該当するものではない、
●持続的または重大な障害／能力障害をもたらす（正常な生活機能を遂行する能力が著しく損なわれること）、
●先天性異常または出生時障害の結果、
●死亡、生命の危険、または入院を必要としないかもしれないが、適切な医学的判断に基づいて、対象を危険にさらす可能性があり、上記の結果のうちの１つを予防するために医学的または外科的介入を必要とする可能性がある重要な医学的事象である。そのような医療事象の例としては、以下が挙げられる：
○救急または自宅での集中治療を必要とするアレルギー性気管支けいれん
○入院をもたらさない血液疾患またはけいれん、
○薬物依存症または薬物乱用の発症。ＳＡＥについて以下のように明確化している：
●死亡はＡＥの結果であり、ＡＥそのものではない。
●事象が発生したときに対象がＩＰを受けていない可能性がある。
●投薬は、治療サイクルとして行われたか、またはＳＡＥの発症前に一時的に中断されたが、事象に寄与した可能性がある。
●「生命を脅かす」とは、対象がその事象が発生したときに、その事象によって即座に死亡する危険性があったことを意味する。これには、重症度が高い場合に死亡につながる可能性のある事象は含まれない。
●入院中に発生する合併症はＡＥである。合併症が入院を長引かせる場合は、ＳＡＥとなる。
●入院とは、対象が医療上の理由により、任意の期間にわたって正式に入院していることを意味する。
治験責任医師は、兆候、症状、および／またはその他の臨床情報に基づいて事象の診断を確立しようとした。このような場合、診断は個々の兆候／症状ではなく、ＡＥおよび／またはＳＡＥとして記録されなければならなかった。
統計分析計画
これは、非メチル化ＭＧＭＴプロモータを有する腫瘍（コホートＡ）およびメチル化ＭＧＭＴプロモータを有する腫瘍（コホートＢ）を有する新たにＧＢＭと診断された対象における、単群（ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ９０１２、ＲＥＧＮ２８１０との組み合わせ）の非盲検多施設治験である。本治験の主要な分析は、ＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２の安全性および忍容性に関するものである。本治験の副次的分析は、ＯＳ１８を使用し、免疫原性バイオマーカー（ＥＬＩＳｐｏｔ／フローサイトメトリー／ＴＣＲ配列決定／抗原特異的体液応答）を使用して、ＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたＩＮＯ－５４０１およびＩＮＯ－９０１２の有効性を評価した。
探索的分析は、臨床応答と腫瘍遺伝学およびバイオマーカーとの間の相関関係に関わる。ＲＡＮＯ（神経腫瘍学における奏効評価）基準によって評価した無増悪生存期間および全生存期間もまた、探索的エンドポイントとして評価した。
統計学的仮説
この治験の各コホートは、１８ヶ月時点の副次的エンドポイントの全生存期間（ＯＳ１８）を評価するために、個別の独立した仮説を有していた。ＯＳ１８の真の治療効果は、ｐとして定義され、ｐは、各コホートにおけるＯＳ１８の真の集団確率を示す。次いで、ＭＧＭＴプロモータ非メチル化対象（コホートＡ）については、履歴対照に対する有意性の仮説は、Ｈ０：ｐ≦０．４５対Ｈ１：ｐ＞０．４５、ＭＧＭＴプロモータメチル化対象（コホートＢ）については、履歴対照に対する有意性の仮説は、Ｈ０：ｐ≦０．６０対Ｈ１：ｐ＞０．６０となる。
分析集団／データセット
分析集団は、
○修正された治療企図（ｍＩＴＴ）集団には、少なくとも１回の用量の治験治療を受けるすべての対象が含まれる。ｍＩＴＴ集団は、ＯＳ１８の副次的エンドポイント、ならびにＯＳおよびＰＦＳを含むすべての探索的有効性エンドポイントの分析に使用される。
○パープロトコル（ＰＰ）集団は、治験治療の最初の４回の投与のうちの少なくとも３回を受け、プロトコル違反を有しない対象で構成される。ＰＰ集団の分析は、有効性の分析のために、対応するｍＩＴＴ集団を支持するとみなされる。ＰＰ集団から除外された対象は、治験データベースをロックする前に特定され、記録される。
○安全性分析セットには、少なくとも１回の用量のＩＮＯ－５４０１またはＩＮＯ－９０１２またはＲＥＧＮ２８１０のいずれかの治験治療を受けるすべての対象が含まれる。対象は、彼らが受けた治療について分析される。
主要安全性エンドポイントの統計的方法分析の説明
この治験の主要な分析は、治療下で発言した有害事象（ＴＥＡＥ）の安全性分析およびベースラインからの安全性検査パラメータの臨床的に有意な変化である。
ＴＥＡＥは、この治験に関しては、治験治療の最終投与の３０日後までに０日目以降に発生する任意のＡＥとして定義されるが、ｉｒＡＥ、ＡＥＳＩ、およびＳＡＥは、治験治療の最終投与の６ヶ月後までに発生する可能性がある。すべてのＴＥＡＥは、各コホート内および両方のコホートにわたる頻度、割合、および９５％のＣｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ信頼区間によって設定された安全性分析における対象のために要約される。
これらの頻度は、全体的に、かつ用量数によって別々に提示され、全体的に、システム臓器クラスによって、および好ましい用語によって、影響を受ける対象の割合を示す。
追加の頻度は、最大重症度および治験治療との最強の関係に関して提示される。単一の対象における同一のＡＥの複数回の発生は、重症度および治験治療との関係に関して最悪の場合のアプローチに従って１回のみ集計される。すべての重篤なＴＥＡＥも上記のように要約される。
発症／停止日の不明または部分的なＡＥは、全体的なＡＥの概要に含まれるが、ＡＥ持続時間の計算から除外される。ＡＥ持続時間は、ＡＥの停止日～ＡＥの開始日＋１日として計算される。ＴＥＡＥまたは重篤なＴＥＡＥではないＡＥ、ｉｒＡＥ、ＡＥＳＩおよびＳＡＥは、リストに提示される。
検査応答変数は、各時点、および９５％信頼区間を含むベースラインからの変化として記述的に要約される。ＣＴＣＡＥによるベースラインからのシフトも提示する。臨床的に有意であると考えられる臨床検査値は、リストに提示される。
すべての安全性解析は、安全性解析セットの対象に対して実施される。
副次的有効性エンドポイントの分析
ＯＳ１８の副次的エンドポイントは、各コホートの頻度、割合、９５％のＣｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ信頼区間、およびｐ値を使用して要約される。対象は、１８ヶ月（５４８日）後に生存していると決定された場合、生存者とみなされる。
片側のｐ値が＜０．０２５の場合、優位性は結論づけられる。ＯＳ１８は、ｍＩＴＴ集団およびパープロトコル集団の両方の対象で分析され、すべてのｍＩＴＴ／ＰＰ対象はＯＳ１８分母に含まれていた。
細胞性および体液性免疫応答は、各時点での記述統計を使用して、およびベースラインからの変化のために提示される。
その他の安全性データの分析
異常な病歴所見を有する対象の割合は、安全性集団の対象の各コホートについて、身体システムおよび好ましい用語によって要約される。
前薬は、治験開始前（０日目前の２８日以内）に使用されたものである。併用薬は、治験の過程（０日目以降）で使用されるものである。前薬および併用薬の部分的な開始日は、部分的な日付と一致する可能な限り早い日付であると仮定される。前薬および併用薬の部分的な停止日は、部分的な日付と一致する遅い可能性のある日付であると仮定される。すべての前薬および併用薬のデータは、安全性集団の対象の各コホートの割合で要約される。
バイタルサインの測定ならびにベースラインからの変化は、安全性分析セットの対象の各コホートの時点毎に記述的に要約される。各時点で異常な身体検査所見を有する対象の割合は、安全性分析セット内の対象について、全体的に、および各コホート内で身体システムによって記述的に要約される。
スクリーニング時の心電図およびウイルス血清学、ならびに各時点での血清妊娠を、全体的および各コホート内で記述的に要約する。
処分
対象の処分は、すべての登録された対象についてコホート毎に、および全体的に要約され、登録された数および割合、各計画用量を受けた数および割合、ならびに治験を完了した数を含む。治療を中止した対象の数および割合は、全体的におよび理由別に要約する。各解析母集団の数も提示する。
人口統計学的および他のベースライン特性
人口統計学的およびベースライン特性データを、安全性分析セット内の対象のコホート毎に記述的に要約した。
探索的分析
無増悪生存期間は、ＲＡＮＯ（０日目から任意の原因による死亡日までの期間またはいずれか先に発生する進行の日までの期間として定義）およびＯＳ（０日目から任意の原因による死亡日までの期間として定義）によって評価され、各コホート内および全体的なカプランマイヤー統計的手法で要約された。同意の撤回時または最後の進行評価日に、対象が進行していないとみなされたＰＦＳが打ち切られた。死亡したと記録されていない対象は、同意の撤回時または対象が生存していることが確認された最後の日付にＯＳが打ち切られた。無増悪生存期間およびＯＳを、ｍＩＴＴおよびパープロトコル集団において分析した。
探索的腫瘍遺伝学的および／またはバイオマーカー応答は、各時点での記述統計を使用して、ｍＩＴＴ集団およびパープロトコル集団のベースラインからの変化として提示した。
ＯＳ１８、ＰＦＳ、およびＯＳを、ロジスティック回帰モデルおよびＣｏｘ ＰＨモデルを使用して、探索的応答に対してモデル化し、関連性を調べた。患者の人口統計学または患者の疾患特性などのベースライン変数を潜在的混同因子としてモデルに含めた。別途、細胞性および体液性免疫応答を説明変数として使用した。
結果
登録された患者の人口統計を図２に示す（人口統計表）。診断時の腫瘍由来の遺伝子転写産物の評価により、ＩＮＯ－５４０１によってコードされる抗原の発現および多様な免疫遺伝子プロファイルが確認された。評価のために利用可能な組織を有する４７人の対象のうち５人（８１１％）は、ＩＮＯ－５４０１によってコードされる１つ以上の腫瘍関連抗原（ＷＴ１、ＰＳＭＡおよびｈＴＥＲＴ）の転写発現を示した。評価のために利用可能な組織を有する４７人の対象のうち４３人（８９％）は、ＩＮＯ－５４０１によってコードされる２つ以上の腫瘍関連抗原（ＷＴ１、ＰＳＭＡおよびｈＴＥＲＴ）の転写発現を示した。４７人の対象のうち１９人（４０％）が、３つすべての腫瘍関連抗原の転写発現を示した。ＰＤ－Ｌ１発現を伴わないＰＤ－１発現を示した対象はいなかった。４７人の対象のうち２７人（５７％）は、ＰＤ－１発現を伴わないＰＤ－Ｌ１発現を示した。４７人の対象のうち２０人（４３％）が、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１の共発現を示した。正規化された転写産物リードカウント＞１は、「陽性」とみなされた。
ＭＲＩ画像
いくつかの患者は、反復生検での腫瘍の証拠なしに、ＭＲＩでの進行のエックス線撮影の証拠があり、疑似進行を経験している。例示的な患者からの画像は、ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２およびセミプリマブ－ｒｗｌｃの最初の投与後の時点でのＭＲＩシグナルの増加を示し、浮腫または腫瘍を示唆する。いくつかの患者の生検では、壊死および混合炎症を伴う治療関連の変化、有糸分裂活性の不在、および生存腫瘍の証拠がないことが示されている。２人の患者からの代表的な画像を図３に示す。
ＥＬＩＳｐｏｔ
ＥＬＩＳｐｏｔを用いて、抗原特異的Ｔ細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料中に存在するかどうかの定性的測定を行う／行った。ＰＢＭＣを、研究週０、３、６、９、１２、および２４週目に対象から収集し、ＩＦＮ－ｇ ＥＬＩＳｐｏｔによってアッセイする。１２ヶ月のデータカットオフにおいて、２４週目までの試料を有する８人の対象からのＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃによる治療前（前）および治療後最高の最高値（ピーク）から、１００万ＰＢＭＣ当たりの抗原特異的ＩＦＮｇスポット形成単位（ＳＦＵ）を示す（図４）。各対象は、白丸で表され、棒は、平均値を表す。各抗原のグラフ、ならびに合わせてアッセイされた１１人の対象および２４週目までの利用可能な試料を有する８人の対象について、治療前とピークとの差、デルタが示されている。ＩＮＯ－５４０１は、ＷＴ１、ＰＳＭＡ、およびｈＴＥＲＴの合計である。箱ひげ図は、２５パーセンタイルから７５パーセンタイルまで延び、中央値には水平線があり、平均値には「＋」がある。ＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃの組み合わせが、図４に示されるように５／１１人の対象におけるすべての３つの抗原、および９人の対象における少なくとも１つの抗原に対してベースラインを上回るＩＦＮ－ｇの大きさを有する免疫原性であることを、ＥＬＩＳｐｏｔ結果が支持する。
１８ヶ月のデータカットオフでのコホートによるＩＮＯ－５４０１後の末梢免疫応答の評価は、インターフェロンガンマＥＬＩＳｐｏｔ（ＩＮＯ－５４０１の各成分に応答したサイトカイン産生）による抗原特異的Ｔ細胞応答を明らかにした。コホートによるＥＬＩＳｐｏｔによるＩＮＯ－５４０１後の末梢免疫応答の評価の結果を図１６Ａおよび１６Ｂに提供する。治療後のピーク時点からのベースライン値がプロットされている。コホートＡでは、これまでに試験した１９／２２人（８６％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＩＦＮ－ｇの大きさを有した（図１６Ａ）。コホートＢでは、これまでに試験した１６／１７人（９４％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＩＦＮ－ｇの大きさを有した（図１６Ｂ）。
溶解性顆粒負荷
研究週０、３、６、９、１２、および２４週目に対象から採取したＰＢＭＣ試料中に存在する抗原特異的Ｔ細胞の活性化状態および溶解電位を探索するために溶解性顆粒負荷アッセイを実施した。ＰＢＭＣは、任意の外因性サイトカインの不在下で、ＩＮＯ－５４０１抗原（ｈＴＥＲＴ、ＰＳＭＡおよびＷＴ１）または関連する対照のための重複するペプチドライブラリで刺激された。５日後、細胞を抗体で染色し、フローサイトメトリーにより評価した。溶解電位（グランザイムＡ、パーフォリンを発現する）を有する生きた、抗原特異的、活性化（ＣＤ３８＋）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を、各抗原について、８人の対象からのＩＮＯ－５４０１およびセミプリマブ－ｒｗｌｃによるベースラインでの治療前（前）および治療後の最高値（ピーク）で示す（図５Ａ）。各対象は、白丸で表され、棒は、平均値を表す。１２ヶ月間のデータカットオフにおける各抗原、ならびにＩＮＯ－５４０１について、アッセイされた８人の対象（図５Ｂ）および１２週目までの利用可能な試料を有する５／８人の対象（図５Ｃ）について、治療前とピークとの差、デルタが示されている。ＩＮＯ－５４０１は、ＷＴ１、ＰＳＭＡ、およびｈＴＥＲＴの合計である。箱ひげ図は、２５パーセンタイルから７５パーセンタイルまで延び、中央値には水平線があり、平均値には「＋」がある。５人の対象は、１つを超える抗原に対してベースライン（前）を上回る溶解電位（ＣＤ３８＋Ｐｒｆ＋ＧｒｚＡ＋）を有する活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を有し、３人の対象は、すべての３つの抗原に対してベースラインを上回る溶解電位（ＣＤ３８＋Ｐｒｆ＋ＧｒｚＡ＋）を有する活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を有した。３人の対象は、いかなる抗原に対しても、いかなる時点でもベースラインを上回る応答を示さなかった。
１８ヶ月のデータカットオフにおけるコホートによるＩＮＯ－５４０１の末梢免疫応答後の評価は、フローサイトメトリー（溶解電位を有する抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大）による抗原特異的Ｔ細胞応答を明らかにした。コホートＡでは、これまでに試験した１３／１９人（６８％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＣＤ３８＋ＧｒｚＡ＋Ｐｒｆ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を有した（図１７Ａ）。コホートＢでは、これまでに試験した８／１０人（８０％）の対象が、ＩＮＯ－５４０１抗原のうちの１つ以上に対してベースラインを上回るＣＤ３８＋ＧｒｚＡ＋Ｐｒｆ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を有した（図１７Ｂ）。試料を、Ｑ３週×４、次いでＱ１２週に収集した。治療後のピーク時点からのベースライン値がプロットされている。
無増悪生存期間
図６は、腫瘍細胞内で非メチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡの６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。曲線は、一定の時間間隔での事象の確率を示す。事象の確率は、ｙ軸上に数値で表され、時間間隔は、ｘ軸上に表される。示される事象は、無増悪生存である。
無増悪生存は、所与の対象についての所与の時点での疾患の進行の不在である。
図７は、腫瘍細胞内でメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＢの６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。曲線は、一定の時間間隔での事象の確率を示す。事象の確率は、ｙ軸上に数値で表され、時間間隔は、ｘ軸上に表される。示される事象は、無増悪生存である。無増悪生存は、所与の対象についての所与の時点での疾患の進行の不在である。
図８は、腫瘍細胞内で非メチル化されたかまたはメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡおよびコホートＢの６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。曲線は、一定の時間間隔での事象の確率を示す。事象の確率は、ｙ軸上に数値で表され、時間間隔は、ｘ軸上に表される。示される事象は、無増悪生存である。無増悪生存は、所与の対象についての所与の時点での疾患の進行の不在である。
図９は、コホートＡ、コホートＢ、および両方のコホートを合わせた６ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ６）のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。コホート当たりの対象の総数、事象の数、事象（ＰＦＳ６）の推定、および事象（ＰＦＳ６）の数値的推定が存在する９５％信頼区間（ＣＩ）が、すべて提供されている。
確認された進行性疾患（ＰＤ）は、元のＰＤ事象から４週間以上経過した連続したＰＤスキャンによる確認、または生検手術に応じて進行した確認によって決定される。ＰＤ以外の６ヶ月前に何らかの理由で終了した対象は、３週目に研究から外れたコホートＢの２人の対象を含む確定進行性事象として含まれ、長期フォローアップを拒否した。
全生存期間
すべての有効性分析（ＯＳ１２、ＯＳ１８、およびカプランマイヤー）は、計画された治療の少なくとも１回の用量を受けたすべての対象として定義される修正された治療企図（ｍＩＴＴ）集団の対象について分析した。１２ヶ月時点の全生存（ＯＳ１２）を、研究開始時に死亡のリスクがあるすべての対象のうち、１２ヶ月時点で生存している対象の割合として表した。脱落した対象は失敗（すなわち死亡）とされた。１２ヶ月前に脱落したコホートＡのすべての対象も、１２ヶ月のフォローアップの前に死亡した。９５％信頼区間（ＣＩ）は、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎの正確信頼区間法を使用して計算される。１８ヶ月時点の全生存（ＯＳ１８）を、研究開始時に死亡のリスクがあるすべての対象のうち、１８ヶ月時点で生存している対象の割合として表した。９５％信頼区間（ＣＩ）は、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎの正確信頼区間法を使用して計算される。
図１０Ａは、腫瘍細胞内で非メチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡの１２ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。図１０Ｂは、腫瘍細胞内で非メチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＡの１８ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。コホートＡにおけるフォローアップ期間中央値は、１７．８ヶ月である。ｍＩＴＴには、１回用量以上の研究療法を受けた任意の対象が含まれる。陰影は、その時点での生存についての点推定に対する信頼帯を表す。
図１１Ａは、腫瘍細胞内でメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＢの１２ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。図１１Ｂは、腫瘍細胞内でメチル化されたＯ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータを有する患者であるコホートＢの１８ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。コホートＢにおけるフォローアップ期間中央値は、１５．６ヶ月である。打ち切り、コホートＢの２人の対象は、３週目にフォローアップの同意を撤回した。ｍＩＴＴには、１回用量以上の研究療法を受けた任意の対象が含まれる。陰影は、その時点での生存についての点推定に対する信頼帯を表す。
図１２は、コホートＡ＋Ｂを合わせた１２ヶ月にわたる全生存確率のカプランマイヤー推定値の視覚的表示を示す。階段状の曲線は、特定の時点まで、およびそれを超えて生存する確率を示す。生存確率は、ｙ軸上に数値で表され、生存時間は、ｘ軸上に日数で表される。
図１３は、コホートＡ、コホートＢ、および組み合わせの１２ヶ月および１８ヶ月における全生存期間の有効性データを示す。図は、１２ヶ月および１８ヶ月で生存が報告された対象の総数を示す。対象の総数、事象（ＯＳ１２またはＯＳ１８）の推定、および事象（ＯＳ１２またはＯＳ１８）の数値的推定が存在する９５％信頼区間（ＣＩ）が、すべて提供されている。９５％ ＣＩは、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎの正確信頼区間法を使用して計算される。
安全性データ
安全性データは、少なくとも１回の用量の治験薬（ＩＰ）を有すると定義される安全性分析集団のメンバーである対象から表にした。
臨床試験プロトコル≧ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード３によって定義されるすべての有害事象を図１４に示す。臨床試験プロトコルによって定義される免疫関連有害事象を図１５に示す。
対象において報告された最も一般的なグレード≧３の有害事象は、血小板数の減少（１１．５％）、リンパ球数の減少（１１．５％）、腫瘍炎症（７．７％）、発作（７．７％）、ＡＬＴ増加（７．７％）であった。１件のグレード５非関連事象の尿路性敗血症が報告された。ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２に関連するＳＡＥは、発熱が１件のみ報告された。４８％の対象がｉｒＡＥを報告し、最も頻度が高かったのはＡＬＴ上昇（９．６％）、ＡＳＴ上昇（７．７％）、下痢（７．７％）、発熱（７．７％）、および腫瘍炎症（７．７％）であった。報告されたＳＡＥおよびｉｒＡＥの７１％は、治療の最初の１２週間以内に発生した。
結論
新たにＧＢＭと診断された患者では、ＩＮＯ－５４０１＋ＩＮＯ－９０１２は、放射線およびテモゾロミドとともに投与されたセミプリマブ－ｒｗｌｃと組み合わせて、許容可能な安全性プロファイルを有し、免疫原性があり、新たにＧＢＭと診断された患者に有効である可能性がある。一般的なＡＥには、注射部位投与事象が含まれ、グレード≧３のＡＥは主にＴＭＺまたは放射線に起因し、免疫関連のＡＥは、セミプリマブ－ｒｗｌｃのプロファイルと一致した。ＳＡＥは、ＧＢＭ（発作）を有する患者で見られたＳＡＥと一致していた。
抗原特異的Ｔ細胞応答は、これまでに試験したほぼすべての患者において、ＩＮＯ－５４０１に含まれる抗原のうちの１つ以上に対して見られた。ＰＦＳ６は、ＭＧＭＴプロモータメチル化の有無にかかわらず、本研究における過去の対照のＰＦＳ６を上回り、ＯＳ１２は、ＭＧＭＴプロモータメチル化のない患者では過去の対照のＰＦＳ６を上回る［Ｓｔｕｐｐ Ｒ，Ｍａｓｏｎ ＷＰ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｎｔ ＭＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ｐｌｕｓ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ａｎｄ ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ ｆｏｒ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００５，３５２：９８７－９９６］。
前述の詳細な説明および付随する例は、単なる例示にすぎず、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではなく、本発明の範囲は、専ら添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物によって定義されることを理解されたい。
本開示の実施形態に対する様々な変更および修正は、当業者には明らかであろう。本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成物、組成物、製剤、または使用方法に関連するもの含むがこれらに限定されない、そのような変更および修飾は、その趣旨および範囲から逸脱することなく行われ得る。
配列表
配列番号１ Ｒ２８１０ ＨＣＶＲ
Figure 2023500337000004
 配列番号２ Ｒ２８１０ ＬＣＶＲ
Figure 2023500337000005
 配列番号３ Ｒ２８１０ ＨＣＤＲ１
Figure 2023500337000006
 配列番号４ Ｒ２８１０ ＨＣＤＲ２
Figure 2023500337000007
 配列番号５ Ｒ２８１０ ＨＣＤＲ３
Figure 2023500337000008
 配列番号６ Ｒ２８１０ ＬＣＤＲ１
Figure 2023500337000009
 配列番号７ Ｒ２８１０ ＬＣＤＲ２
Figure 2023500337000010
 配列番号８ Ｒ２８１０ ＬＣＤＲ３
Figure 2023500337000011
 配列番号９ Ｒ２８１０ ＨＣ
Figure 2023500337000012
Figure 2023500337000013
 配列番号１０ Ｒ２８１０ ＬＣ
Figure 2023500337000014
 配列番号１１ ＩｇＥリーダー配列を有さず、ＨＡタグを有するＰＳＭＡ
Figure 2023500337000015
 配列番号１２ ＩｇＥリーダー配列（下線）を有し、ＨＡタグを有するＰＳＭＡ
Figure 2023500337000016
Figure 2023500337000017
 配列番号１３ ＩｇＥリーダー配列を有さないＰＳＭＡ
Figure 2023500337000018
Figure 2023500337000019
 配列番号１４ ＩｇＥリーダー配列（下線）を有するＰＳＭＡ
Figure 2023500337000020
Figure 2023500337000021
 配列番号１５ 修飾ジンクフィンガー核酸配列に加えてＩｇＥリーダーを有するコンセンサスＷＴ１－Ｌ
Figure 2023500337000022
 配列番号１６ 修飾ジンクフィンガータンパク質配列に加えてＩｇＥリーダー（下線）を有するＣｏｎ ＷＴ１－Ｌ
Figure 2023500337000023
Figure 2023500337000024
 配列番号１７ ＩｇＥに作用可能に連結された合成コンセンサスｈＴＥＲＴ核酸配列（下線）
Figure 2023500337000025
Figure 2023500337000026
 配列番号１８ ＩｇＥに作用可能に連結された合成コンセンサスｈＴＥＲＴアミノ酸配列（下線）
Figure 2023500337000027
Figure 2023500337000028
 配列番号１９ 合成コンセンサスｈＴＥＲＴ核酸配列
Figure 2023500337000029
Figure 2023500337000030
 配列番号２０ 合成コンセンサスｈＴＥＲＴアミノ酸配列
Figure 2023500337000031
 配列番号２１ ＩｇＥリーダー配列を有するＰＳＭＡをコードする核酸配列
Figure 2023500337000032
Figure 2023500337000033
 配列番号２２ ＩＬ１２ ｐ３５（ｐＧＸ６００１）をコードする核酸配列
Figure 2023500337000034
 配列番号２３ ＩＬ１２ ｐ３５アミノ酸配列（ｐＧＸ６００１）
Figure 2023500337000035
 配列番号２４ ＩＬ１２ ｐ４０（ｐＧＸ６００１）をコードする核酸配列
Figure 2023500337000036
 配列番号２５ ＩＬ１２ ｐ４０アミノ酸配列（ｐＧＸ６００１）
Figure 2023500337000037
 配列番号２６ 修飾ジンクフィンガータンパク質を有するＣｏｎ ＷＴ１－Ｌ
Figure 2023500337000038
 配列番号２７ 修飾ジンクフィンガー核酸配列を有するコンセンサスＷＴ１－Ｌ
Figure 2023500337000039
Figure 2023500337000040
 配列番号２８ ＰＳＭＡ
Figure 2023500337000041
 配列番号２９ ＰＳＭＡをコードする核酸配列
Figure 2023500337000042

Claims (40)

  1. ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウイルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を含む、免疫原性組成物。
  2. ｈＴＥＲＴがＤＮＡプラスミドによってコードされ、ＷＴ－１がＤＮＡプラスミドによってコードされ、かつ／またはＰＳＭＡがＤＮＡプラスミドによってコードされる、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  3. ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡが同じＤＮＡプラスミドによってコードされるか、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡのうちの２つが、同じＤＮＡプラスミドによってコードされるか、またはｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡが、異なるＤＮＡプラスミドによってコードされる、請求項２に記載の免疫原性組成物。
  4. 前記ｈＴＥＲＴが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、もしくは配列番号１９の核酸配列によってコードされ、
    前記ＷＴ－１が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、もしくは配列番号２７の核酸配列によってコードされ、かつ／または
    前記ＰＳＭＡが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、もしくは配列番号２９の核酸配列によってコードされる、先行請求項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  5. 先行請求項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物、
    ＩＬ１２、および
    抗プログラム細胞死受容体１（ＰＤ－１）抗体を含む、ワクチン。
  6. 前記抗ＰＤ－１抗体が、
    配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）と、を含むか、
    ３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）および３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号８のアミノ酸配列を含むか、
    配列番号１に対して９０％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含むか、
    配列番号２に対して９０％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含むか、
    配列番号１に対して９０％の配列同一性を有するＨＣＶＲおよび配列番号２に対して９０％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含むか、
    配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含むか、
    配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むか、
    ＩｇＧ４抗体であるか、あるいは
    ＲＥＧＮ２８１０またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物である、請求項５に記載のワクチン。
  7. 前記ＩＬ－１２がＤＮＡプラスミドによってコードされる、請求項５または請求項６に記載のワクチン。
  8. ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、
    ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２２の核酸配列によってコードされるか、
    前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２４の核酸配列によってコードされるか、または
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２２の核酸配列によってコードされ、かつ前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２４の核酸配列によってコードされ、
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、またはその両方である、請求項５、請求項６、または請求項７に記載のワクチン。
  9. 対象における脳がんを治療する方法であって、
    インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、
    ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウイルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）の免疫原性組成物、ならびに
    抗プログラム細胞死受容体１（ＰＤ－１）抗体を、前記対象に投与することを含む、方法。
  10. 対象における脳がんの治療に使用するためのワクチンであって、前記ワクチンが、
    ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウイルムス腫瘍－１（ＷＴ－１）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）の免疫原性組成物、ならびに
    抗プログラム細胞死受容体１（ＰＤ－１）抗体を含む、ワクチン。
  11. 前記対象が、非メチル化Ｏ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）遺伝子プロモータを有する、請求項９に記載の方法または請求項１０に記載の使用のためのワクチン。
  12. 前記対象が、メチル化Ｏ６－メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）遺伝子プロモータを有する、請求項９に記載の方法または請求項１０に記載の使用のためのワクチン。
  13. ＩＬ－１２がＤＮＡプラスミドによってコードされる、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  14. ｈＴＥＲＴがＤＮＡプラスミドによってコードされ、ＷＴ－１がＤＮＡプラスミドによってコードされ、かつ／またはＰＳＭＡがＤＮＡプラスミドによってコードされる、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  15. ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡが、同じＤＮＡプラスミドによってコードされるか、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡのうちの２つが、同じＤＮＡプラスミドによってコードされるか、またはｈＴＥＲＴ、ＷＴ－１、およびＰＳＭＡが、各々、異なるＤＮＡプラスミドによってコードされる、請求項１４に記載の方法または使用のためのワクチン。
  16. 前記抗ＰＤ－１抗体が、
    配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）と、を含むか、
    ３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）および３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号８のアミノ酸配列を含むか、
    配列番号１に対して９０％の配列同一性を有するＨＣＶＲを含むか、
    配列番号２に対して９０％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含むか、
    配列番号１に対して９０％の配列同一性を有するＨＣＶＲおよび配列番号２に対して９０％の配列同一性を有するＬＣＶＲを含むか、
    配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含むか、
    配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むか、
    ＩｇＧ４抗体であるか、あるいは
    ＲＥＧＮ２８１０またはそのバイオシミラーもしくは生物学的等価物である、請求項９～１５のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  17. 前記抗ＰＤ－１抗体が、静脈内または皮下に投与される、請求項９～１６のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  18. ３５０ｍｇの前記抗ＰＤ－１抗体が３週間毎に投与される、請求項９～１７のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  19. ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、
    ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２２の核酸配列によってコードされるか、
    前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２４の核酸配列によってコードされるか、または
    前記ＩＬ１２ ｐ３５サブユニットが、配列番号２２の核酸配列によってコードされ、かつ前記ＩＬ１２ ｐ４０サブユニットが、配列番号２４の核酸配列によってコードされる、請求項９～１８のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  20. 前記ｈＴＥＲＴが配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、もしくは配列番号１９の核酸配列によってコードされ、
    前記ＷＴ－１が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、もしくは配列番号２７の核酸配列によってコードされ、かつ／または
    前記ＰＳＭＡが配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、もしくは配列番号２９の核酸配列によってコードされる、請求項９～１９のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  21. 前記方法が、前記対象に投与することを含むか、または前記ワクチンが、３ｍｇのｈＴＥＲＴをコードする前記ＤＮＡプラスミド、３ｍｇのＰＳＭＡをコードする前記ＤＮＡプラスミド、３ｍｇのＷＴ－１をコードする前記ＤＮＡプラスミド、および１ｍｇのＩＬ－１２をコードする前記プラスミドを含む、請求項２０に記載の方法または使用のためのワクチン。
  22. 前記ＩＬ－１２および前記免疫原性組成物が、４回用量を３週間毎に、次いで９週間毎に筋肉内注射によって同時投与される、請求項９～２１のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  23. 各筋肉内注射後のエレクトロポレーションをさらに含む、請求項２２に記載の方法または使用のためのワクチン。
  24. １回以上の用量の放射線療法を前記対象に投与することをさらに含む、請求項９～２３のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  25. 放射線療法の各用量が、２０～５０Ｇｙを含む、請求項２４に記載の方法または使用のためのワクチン。
  26. 前記放射線療法が、分割放射線療法である、請求項２５に記載の方法または使用のためのワクチン。
  27. 前記分割放射線療法が、２～２０の分割を含む、請求項２６に記載の方法または使用のためのワクチン。
  28. 前記分割放射線療法が、１５分割で４０Ｇｙを含む、請求項２７に記載の方法または使用のためのワクチン。
  29. 前記分割放射線療法が、２１日連続で投与される、請求項２８に記載の方法または使用のためのワクチン。
  30. １回以上の用量の化学療法剤を前記対象に投与することをさらに含み、任意選択的に、前記化学療法剤がテモゾロミドである、請求項９～２９のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  31. 前記分割放射線療法とともに２１日連続で１日７５ｍｇ／ｍ２テモゾロミドを前記対象に投与することを含む、請求項３０に記載の方法または使用のためのワクチン。
  32. 前記対象がメチル化ＭＧＭＴプロモータを有する腫瘍を有する場合、テモゾロミド維持療法を前記対象に投与することをさらに含む、請求項３０または請求項３１に記載の方法または使用のためのワクチン。
  33. 前記脳がんが、膠芽腫である、請求項９～３２のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  34. 前記脳がんが、ＭＧＭＴ－メチル化膠芽腫である、請求項３３に記載の方法または使用のためのワクチン。
  35. 前記脳がんが、ＭＧＭＴ－非メチル化膠芽腫である、請求項３３に記載の方法または使用のためのワクチン。
  36. 前記方法が、臨床的に安全であることが証明されているか、臨床的に有効であることが証明されているか、またはその両方である、請求項９～３５のいずれか一項に記載の方法または使用のためのワクチン。
  37. 脳がんを治療するための医薬品の製造における使用のための、請求項１～４のいずれか一項に記載の免疫学的組成物。
  38. 前記脳がんが、膠芽腫である、請求項３７に記載の使用のための免疫学的組成物。
  39. 前記脳がんが、ＭＧＭＴ－メチル化膠芽腫である、請求項３８に記載の使用のための免疫学的組成物。
  40. 前記脳がんが、ＭＧＭＴ－非メチル化膠芽腫である、請求項３８に記載の使用のための免疫学的組成物。
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