JP2023525558A - 再発性呼吸器乳頭腫症のためのワクチン及びそれを使用する方法 - Google Patents

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Abstract

ＨＰＶ抗原をコードする核酸分子が本明細書に提供される。核酸を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に対するワクチン、免疫応答を誘導する方法、並びに再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）に対して個体を予防的及び／又は治療的に免疫化する方法も提供される。薬学的組成物、ＤＮＡプラスミドを含む組換えワクチン、及び弱毒生ワクチンが開示され、ＲＲＰを治療又は予防するために免疫応答を誘導する方法もまた開示される。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年５月１４日に出願された米国仮出願第６３／０２４，９１２号の利益を主張し、その内容は、全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年５月１４日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１０４４０９＿０００６１２＿ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、３７，９１３バイトのサイズである。
本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン、免疫応答を誘導する方法、ＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１に対して予防的及び／又は治療的に個体を免疫化するための方法、並びに再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を予防又は治療する方法に関する。
ヒトパピローマウイルス関連（ＨＰＶ＋）悪性腫瘍は、新たに発生した世界的な流行である（Ｇｒａｄｉｓｈａｒ ｅｔ ａｌ．，ＪＮＣＣＮ ２０１４；１２（４）：５４２－９０）。ＨＰＶ関連の気道消化器前がん病変及び悪性腫瘍は、中咽頭、喉頭、及び上気道において発生する可能性がある。気道消化器の悪性腫瘍の大部分の病因におけるＨＰＶ６及びＨＰＶ１１の役割は不明なままであるが、それらは、再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）において因果関係があるとして広く受け入れられており（Ｍｏｕｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １９８２；７９（１７）：５４２５－９、Ｇｉｓｓｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １９８３；８０（２）：５６０－３、Ｂｏｎａｇｕｒａ ｅｔ ａｌ．，ＡＰＭＩＳ．２０１０；１１８（６－７）：４５５－７０）、喉頭上皮の最も一般的な良性腫瘍である。ＲＲＰは、稀であり、発生率は米国において成人１００，０００人当たり１．８人と推定されている（Ｗｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＮＥＪＭ ２００５；３５２（２５）：２５８９－９７）。ほとんどの病変は良性であるが、いくつかは悪性形質転換を起こし、ＲＲＰを有する患者は、喉頭腫瘍及びがん腫を発症するより高いリスクを有する（Ｏｍｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，ＰｌｏＳ Ｏｎｅ．２０１４；９（６）：ｅ９９１１４）。
再発性呼吸器乳頭腫症は、依然として子供及び成人を苦しめる難病であり、結果として米国の医療関連費用は年間１億２０００万ドルと推定され、患者１人当たりの年間費用は６万ドルに近づいている。ＲＲＰの有病率は低下してきているが、ＲＲＰは小児において最も一般的な良性喉頭新生物のままである。ＲＲＰは、その多部位再発率が高く、患者の生活の質に対する負担が高く、及び関連する医療費用が高いということにおいて、独特である。したがって、ＲＲＰの治療又は予防のための改善された組成物及び方法の必要性がある。本発明は、この満たされていない必要性を満たす。
本明細書では、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原をコードする核酸分子が提供され、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインを含む。本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列の断片、又は配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列の断片と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含むＨＰＶ抗原をコードし得る。いくつかの態様によれば、核酸分子は、配列番号２若しくは配列番号１２と少なくとも９５％相同なヌクレオチド配列、配列番号２のヌクレオチド配列、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列は、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列の５’に位置する。代替的な実施形態では、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列は、ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列の５’に位置する。
核酸分子は、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方をコードする核酸配列を含み得る。かかる配列は、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列とＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列との間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインをコードする核酸配列とＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインをコードする核酸配列との間、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインをコードする核酸配列とＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインをコードする核酸配列との間、又はそれらの任意の組み合わせに含まれ得る。
開示される核酸分子のうちのいずれかを含む発現ベクターも本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、ＤＮＡプラスミドである。一例として、発現ベクターは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み得る。
更に本明細書では、ＨＰＶ１１抗原性ドメインに融合したヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６抗原性ドメインを含む免疫原性タンパク質が開示される。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＨＰＶ６ Ｅ７を含むか、ＨＰＶ１１抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１ Ｅ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７を含むか、又はそれらの両方である。ＨＰＶ１１抗原性ドメインは、ＨＰＶ６抗原性ドメインのＮ末端又はＣ末端に位置し得る。免疫原性タンパク質は、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方を含有し得る。かかる部位は、ＨＰＶ６抗原性ドメインとＨＰＶ１１抗原性ドメインとの間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインとの間、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインとの間、又はそれらの任意の組み合わせに位置し得る。
いくつかの実施形態によれば、免疫原性タンパク質は、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列の断片、又は配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列の断片と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む。
本明細書ではまた、核酸分子、発現ベクター、免疫原性タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせと、薬学的に許容される担体と、を含む組成物も提供される。いくつかの態様では、核酸分子、発現ベクター、免疫原性タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせを含むワクチンが提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子、発現ベクター、免疫原性タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせと、アジュバントと、を含む薬学的組成物が提供される。アジュバントは、例えば、インターロイキン１２（ＩＬ１２）であり得る。いくつかの実施形態によれば、ＩＬ１２は、発現ベクターなどの核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。例えば、ＩＬ１２のｐ３５サブユニットをコードするヌクレオチド配列は、配列番号６をコードするヌクレオチド配列、配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、配列番号６をコードするヌクレオチド配列の断片、及び配列番号６をコードするヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの態様では、ＩＬ１２のｐ４０サブユニットをコードするヌクレオチド配列は、配列番号８をコードするヌクレオチド配列、配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、配列番号８をコードするヌクレオチド配列の断片、及び配列番号８をコードするヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＩＬ１２をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４のヌクレオチド配列、配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、配列番号４のヌクレオチド配列の断片、及び配列番号４のヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
更に本明細書では、対象に、開示される核酸分子、発現ベクター、免疫原性タンパク質、薬学的組成物、又はワクチンのうちのいずれかの有効量を投与し、それによって免疫応答を誘導することによって、対象における免疫応答を誘導する方法が記載される。
本明細書ではまた、ＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１に対して対象を予防的又は治療的に免疫化する方法であって、対象に、開示される核酸分子、発現ベクター、免疫原性タンパク質、薬学的組成物、又はワクチンのうちのいずれかの有効量を投与し、それによって、ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、又はそれらの両方に対する免疫応答を誘導することを含む、方法も提供される。
加えて、本明細書では、対象における再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を治療又は予防するための方法であって、対象に、開示される核酸分子、発現ベクター、免疫原性タンパク質、薬学的組成物、又はワクチンのうちのいずれかの有効量を投与し、それによってＲＲＰを治療又は予防することを含む、方法が提供される。ＲＲＰは、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰであり得る。
開示される方法のいくつかの実施形態によれば、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む核酸分子が、対象に投与される。
開示される方法のいくつかの態様では、アジュバントが、更に対象に投与される。アジュバントは、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）であり得る。ＩＬ１２は、例えば、発現ベクター又はプラスミドなどの核酸分子によってコードされ得る。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。ｐ３５をコードするヌクレオチド配列は、配列番号６をコードするヌクレオチド配列、配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、配列番号６をコードするヌクレオチド配列の断片、及び配列番号６をコードするヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。ｐ４０をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８をコードするヌクレオチド配列、配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、配列番号８をコードするヌクレオチド配列の断片、及び配列番号８をコードするヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの態様によれば、ＩＬ１２をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４のヌクレオチド配列、配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、配列番号４のヌクレオチド配列の断片、及び配列番号４のヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態によれば、ＩＬ１２をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子は、ｐＧＸ６０１０である。
いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
本明細書に提供される方法のいくつかの実施形態によれば、本方法は、対象にｐＧＸ３０２４及びｐＧＸ６０１０を投与することを含む。本方法のいくつかの態様では、ｐＧＸ３０２４及びｐＧＸ６０１０は、組成物として、例えば、ＩＮＯ－３１０７として投与される。本方法のいくつかの実施形態は、対象に６ｍｇのｐＧＸ３０２４及び０．２５ｍｇのｐＧＸ６０１０を投与することを含む。開示される方法のいくつかの態様では、投与は、皮内又は筋肉内注射を含む。投与は、エレクトロポレーションを更に含み得る。
概要及び以下の詳細な記載は、添付の図面と併せて読むと更に理解される。開示された方法を例示する目的で、その例示的な実施形態が図面に示されているが、本方法は、開示された特定の実施形態に限定されない。図面：
異なるＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１プラスミドにコードされる抗原の概略図を示す。個々の抗原は、翻訳スキップのためのＰ２Ａ切断部位、及びＰ２Ａ配列の翻訳後切断のためのフーリン切断部位によって分離されている。ＤＮＡプラスミドｐＧＸ３０２４は、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１の両方のコンセンサスＳｙｎＣｏｎ（登録商標）Ｅ６及びＥ７抗原をコードする。 ｐＧＸ３０２４のプラスミドマップを提供する。 ｐＧＸ３０２４ Ｅ６及びＥ７タンパク質抗原のインビトロでの発現を示す。ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞に、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００トランスフェクション試薬を使用して、ｐＧＸ３０２４プラスミド、陽性対照ｐＧＸ３０２１若しくはｐＧＸ３０２２プラスミド、又は陰性対照の空のｐＧＸ０００１プラスミドのいずれかをトランスフェクションした。細胞を、トランスフェクションの４８時間後に回収し、次いで、ウエスタンブロットによって、抗ＨＰＶ１１ Ｅ７（左パネル）又は抗２Ａ（中央パネル）抗体で細胞溶解物をプロービングした。ブロットを剥離し、抗βアクチン抗体でリプロービングし（右パネル）、等しいタンパク質充填を確認した。Ｅ６及びＥ７タンパク質は、ｐＧＸ３０２４並びに対照ｐＧＸ３０２１及びｐＧＸ３０２２プラスミドでトランスフェクションされた細胞においては検出されたが、陰性対照ｐＧＸ０００１プラスミドでは検出されなかった。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスのｐＧＸ３０２４免疫化後のＨＰＶ６及びＨＰＶ１１特異的細胞応答を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス脾細胞を、ｐＧＸ３０２４、ＨＰＶ６（ｐＧＸ３０２１）又はＨＰＶ１１（ｐＧＸ３０２２）抗原をコードする対照プラスミド、又は陰性対照プラスミド（ｐＧＸ０００１）のいずれかでの免疫化の１週間後に収集した。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７ペプチドに対する特異的細胞応答を、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。アスタリスクは、一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネットの事後検定によるｐＧＸ０００１対照と比較した総細胞応答の有意差を示す。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスのｐＧＸ３０２４免疫化後のＨＰＶ６及びＨＰＶ１１体液性応答を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス血清試料を、免疫化前（第０週目）並びにｐＧＸ３０２４又は陰性対照プラスミド（ｐＧＸ０００１）のいずれかでの第１（第２週目）及び第２（第３週目）の免疫化後に収集した。ＨＰＶ６ Ｅ７（左パネル）又はＨＰＶ１１ Ｅ７（右パネル）抗原に対する特異的ＩｇＧ結合抗体をＥＬＩＳＡによって測定した。 ＢＡＬＢ／ｃマウスのｐＧＸ３０２４免疫化後のＨＰＶ６及びＨＰＶ１１特異的細胞応答を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスの脾細胞を、示された用量のｐＧＸ３０２４単独での、又は示された用量のプラスミドマウスＩＬ－１２（ｐＧＸ６０１２）、若しくは陰性対照プラスミド（ｐＧＸ０００１）と組み合わせた免疫化の１週間後に、収集した。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７ペプチドに対する特異的細胞応答を、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。アスタリスクは、一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネットの事後検定によるｐＧＸ０００１対照と比較した総細胞応答の有意差を示す。 ＢＡＬＢ／ｃマウスのｐＧＸ３０２４免疫化後のＨＰＶ６及びＨＰＶ１１体液性応答を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウス血清試料を、免疫化前（第０週目）、並びに示された用量のｐＧＸ３０２４単独での、又は示された用量のプラスミドマウスＩＬ－１２（ｐＧＸ６０１２）、若しくは陰性対照プラスミド（ｐＧＸ０００１）と組み合わせた、第１（第２週目）及び第２（第３週目）の免疫化後に収集した。ＨＰＶ６ Ｅ７（左パネル）又はＨＰＶ１１ Ｅ７（右パネル）抗原に対する特異的ＩｇＧ結合抗体をＥＬＩＳＡによって測定した。アスタリスクは、二元配置ＡＮＯＶＡによる第０週目と比較した有意性を示し、「ｎｓ」は有意差がないこと示す。 ＮＺＷウサギのＩＮＯ－３１０７免疫化後のＨＰＶ６特異的及びＨＰＶ１１特異的細胞応答の時間経過を示す。ＮＺＷウサギ末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＩＮＯ－３１０７又は１×生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液（ＳＳＣ）のいずれかでの免疫化後の示された時点で収集した。ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７ペプチド並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７ペプチドに対する特異的細胞応答を、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。データは、個々の動物についてのＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７（左パネル）又はＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７（右パネル）応答の合計として示される。 ＮＺＷウサギのＩＮＯ－３１０７免疫化後のＨＰＶ６特異的及びＨＰＶ１１特異的細胞応答を示す。第１１週目（４回目の免疫化の２週間後）、図７に記載されるように、ＩＮＯ－３１０７又は１×ＳＳＣのいずれかでの第１１週目（４回目の免疫化の２週間後）に、ＮＺＷウサギについてのＨＰＶ６ Ｅ６、ＨＰＶ６ Ｅ７、ＨＰＶ１１ Ｅ６、又はＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対するＴ細胞応答。データは、個々のウサギ（左パネル）又は各処置群の平均±ＳＥＭ（右パネル）について示されている。アスタリスクは、マン－ホイットニーＵ検定により決定された有意差（ｐ＜０．０５）を示す。 ＮＺＷウサギのＩＮＯ－３１０７免疫化後のＨＰＶ６及びＨＰＶ１１体液性応答の時間経過を示す。ＮＺＷウサギ血清試料を、ＩＮＯ－３１０７又は１×ＳＳＣのいずれかでの免疫化後の示された時点で収集した。ＨＰＶ６ Ｅ７（左パネル）及びＨＰＶ１１ Ｅ７（右パネル）抗原に対する特異的体液性応答を、ＩｇＧ結合ＥＬＩＳＡによって測定した。データは、個々の動物について示されている。 ＩＮＯ－３１０７（左パネル）又は１×ＳＳＣ（右パネル）を投与されたＮＺＷウサギの体重測定の時間経過を示す。 ＨａｒｔｌｅｙモルモットのｐＧＸ３０２４免疫化後のＨＰＶ６特異的及びＨＰＶ１１特異的細胞応答の時間経過を示す。モルモット（ｎは５）を、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ皮内エレクトロポレーションによって投与された１００ｕｇのｐＧＸ３０２４で、第０週目、第２週目及び第４週目に免疫化した。ナイーブモルモット（ｎは２）は、陰性対照として機能した。モルモット末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ｐＧＸ３０２４での免疫化後の示された時点で、又はナイーブモルモットから収集した。ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７ペプチド並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７ペプチドに対する特異的細胞応答を、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。データは、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７の各処置群の平均±ＳＥＭとして示される。 ＨａｒｔｌｅｙモルモットのｐＧＸ３０２４免疫化後のＨＰＶ６特異的及びＨＰＶ１１特異的体液性応答の時間経過を示す。Ｈａｒｔｌｅｙモルモット（ｎは５）を、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ皮内エレクトロポレーションによって投与された１００ｕｇのｐＧＸ３０２４で、第０週目、第２週目及び第４週目に免疫化した。モルモット血清試料を、ＥＬＩＳＡによるＨＰＶ６ Ｅ７（左）又はＨＰＶ１１ Ｅ７（右）抗原に対する特異的ＩｇＧ結合抗体の測定のために、ｐＧＸ３０２４での免疫化後の示された時点で収集した。データは、５匹の動物の平均±ＳＥＭとして示されている。 ＮＺＷウサギへのＩＮＯ－３１０７の皮内送達後に誘導される免疫応答を示す。細胞性免疫応答を、免疫化前（第０週目）及び各免疫化の２週間後（第２週目、第５週目及び第８週目）にＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔによって評価した。両方の抗原、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１に対する組み合わせた免疫応答は、各免疫化後に増加し、Ｔ細胞応答は、よりＨＰＶ６ Ｅ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６特異的であった。
開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法は、本開示の一部を形成する添付の図面に関連して示される以下の詳細な説明を参照することによって、より容易に理解され得る。開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法は、本明細書で説明される及び／又は示される特定の核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法に限定されるものではないこと、並びに本明細書で使用される用語は、例として特定の実施形態を説明する目的のみのためであり、請求された核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法を限定することを意図するものではないことが、理解される必要がある。
特に別段明記しない限り、可能性のある作用機序若しくは作用モード、又は改善の理由に関する任意の説明は、例示のみを意図し、開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法は、任意のかかる提案された作機序若しくは作用モード、又は改善の理由の正確性又は不正確性によって制限されるべきではない。
本明細書全体を通して、説明は、組成物及び当該組成物を使用する方法を指す。本開示が組成物に関連する特徴又は実施形態を記載又は請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、当該組成物を使用する方法に等しく適用可能である。同様に、本開示が組成物を使用する方法に関連する特徴又は実施形態を記載又は請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、組成物に等しく適用可能である。
明確にするために、別個の実施形態の文脈において本明細書に記載される開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法の特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される必要がある。逆に、簡潔さのために、単一の実施形態の文脈において記載される開示された核酸分子、タンパク質、ワクチン、及び方法の様々な特徴は、別々に又は任意のサブコンビネーションで提供されてもよい。
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先するであろう。本発明の実施又は試験において本明細書に記載されるものと類似又は同等の方法及び材料を使用することができるが、例示的な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それらの全体において参照により組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、及び例は、例示的のみであり、限定的であることを意図しない。本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を記載する目的のためであり、限定することが意図されない。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「有すること」、「有する」、「できる」、「含有する」という用語及びそれらの変形は、本明細書で使用される場合、追加の行為又は構造の可能性を妨げない、オープンエンドな移行句、用語、又は語であることを意図する。「含む」という用語は、「から本質的になる」及び「からなる」という用語によって包含される例を含むことを意図しており、同様に、「から本質的になる」という用語は、「からなる」という用語によって包含される例を含むことを意図する。本開示はまた、明示的に記載されるか否かにかかわらず、本明細書で示される実施形態又は要素「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」他の実施形態を企図する。
「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、文脈が別段に明示しない限り、複数の参照物を含む。
本明細書における数値範囲の列挙について、同じ程度の精度でそれらの間に介在する各数値が明示的に企図される。例えば、６～９の範囲については、６及び９に加えて数字７及び８が企図され、６．０～７．０の範囲については、数字６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０が明示的に企図される。
本明細書に示されている定量的表現のいくつかは、「約」という用語で限定されていない。「約」という用語が明示的に使用されるか否かにかかわらず、所与の全ての量は、実際の所与の値を指すことを意図しており、かつ、かかる値についての実験及び／又は測定条件に起因する近似を含む、当業者に基づいて合理的に推測されるであろうかかる所与の値についての近似を指すことも意図されることが理解される。
本明細書で使用される「アジュバント」は、本明細書に記載の免疫原性組成物に添加されて、抗原及び抗原をコードする核酸分子並びに以下に記載の配列の免疫原性を増強する任意の分子を意味する。
「抗原」は、ＨＰＶ６ Ｅ６ドメイン、ＨＰＶ６ Ｅ７ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ６ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ７ドメイン、又はそれらの任意の組み合わせを有するタンパク質、好ましくは、各ドメイン間にエンデオタンパク質分解切断部位を有するＨＰＶ６ Ｅ６ドメイン、ＨＰＶ６ Ｅ７ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ６ドメイン、及びＨＰＶ１１ Ｅ７ドメインの融合タンパク質を指す。抗原には、配列番号１、本明細書に記載の長さのその断片、バリアント、すなわち、本明細書に記載の配列番号１に相同である配列を有するタンパク質、本明細書に記載の長さを有するバリアントの断片、及びそれらの組み合わせが含まれる。抗原は、配列番号１０のＩｇＥリーダー配列を有してもよく、あるいはＮ末端からそのような配列を除去してもよい。例えば、ＨＰＶ６ Ｅ６ドメイン、ＨＰＶ６ Ｅ７ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ６ドメイン、及びＨＰＶ１１ Ｅ７ドメインを含むＨＰＶ抗原は、各ドメイン間のエンデオタンパク質分解切断部位の有無にかかわらず、ＨＰＶ抗原のＮ末端ＨＰＶドメインに対してＮ末端に位置するＩｇＥリーダー配列を有し得る。抗原は、任意に、他のタンパク質由来のものなどのシグナルペプチドを含み得る。
（承認された参照産物／生物学的薬物、すなわち、参照リスト化された薬物の）「バイオシミラー」という用語は、以下から得られたデータに基づく、安全性、純度及び有効性の観点で、バイオシミラーと参照産物との間に臨床的に有意義な違いがなく、臨床的に不活性な構成要素にわずかな違いがあるにもかかわらず、参照産物に非常に類似している生物学的産物を指す。（ａ）臨床的に不活性な構成要素のわずかな違いにもかかわらず、生物学的産物が参照産物と非常に類似していることを示す分析研究、（ｂ）動物研究（毒性の評価を含む）、及び／又は（ｃ）参照産物がライセンスされ、使用されることが意図され、バイオシミラーのためのライセンスが求められる、１つ以上の適切な使用条件で安全性、純度、及び効力を示すのに十分な臨床研究（免疫原性及び薬物動態又は薬力学の評価を含む）。バイオシミラーは、処方する医療専門家の介入なしに、薬局で参照産物の代わりに置き換えられ得る交換可能な産物であり得る。「交換可能性」の追加の基準を満たすために、バイオシミラーは、任意の所与の患者において参照産物と同じ臨床結果を産生することが予想され、バイオシミラーが個体に複数回投与された場合、バイオシミラーの使用と参照産物の使用との間の代替又は切り替えの安全性の観点でのリスク又は低減された有効性は、かかる代替又は切り替えなしで参照産物を使用するリスクよりも大きくはない。バイオシミラーは、機序が参照産物について既知の範囲で、提案された使用条件に対して同じ作用機序を利用する。バイオシミラーについて提案されているラベルに規定されているか、推奨されているか、又は提案されている使用条件は、以前に参照産物について承認されている。バイオシミラーの投与経路、剤形、及び／又は強度は、参照産物のものと同じであり、バイオシミラーは、バイオシミラーが安全で、純粋で、強力であり続けることを保証するように設計された基準を満たす施設で製造され、処理され、梱包され、又は保持される。バイオシミラーは、参照産物と比較した場合、例えば、バイオシミラー性能を変化させることが予想されないＮ末端又はＣ末端切断など、アミノ酸配列におけるわずかな修飾を含み得る。
本明細書で使用される「コード配列」又は「コード核酸」は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（ＲＮＡ又はＤＮＡ分子）を意味する。コード配列は、核酸が投与される個体又は哺乳動物の細胞における発現を指示することが可能なプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む制御要素に作動可能に連結された開始及び終結シグナルを更に含み得る。
本明細書で使用される「補体」又は「相補的」は、ヌクレオチド又はヌクレオチド類似体と参照核酸分子との間のワトソンクリック（例えば、Ａ－Ｔ／Ｕ及びＣ－Ｇ）又はフーグスティーン塩基対合を有する核酸分子を指す。
本明細書で使用される、「コンセンサス」又は「コンセンサス配列」は、異なる生物からの同じ遺伝子に対する複数の配列のアラインメントの分析に基づいたポリペプチド配列を意味する。コンセンサスポリペプチド配列をコードする核酸配列を調製することができる。コンセンサス配列を含むタンパク質及び／又はかかるタンパク質をコードする核酸分子を含む免疫原性組成物を使用して、抗原に対して広範な免疫を誘導することができる。
本明細書で互換的に使用される「エレクトロポレーション」、「電気透過性」、又は「動電学的増強」（「ＥＰ」）は、生体膜に微視的経路（細孔）を誘導する膜貫通電場パルスの使用を意味し、それらの存在により、プラスミド及びベクター、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、薬物、イオン、水などの生体分子が細胞膜の一方の側からもう一方の側へと通過することができる。
核酸配列に関して本明細書で使用される「断片」は、本明細書で開示される抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発することが可能なポリペプチドをコードする核酸配列又はその一部分を意味する。断片は、以下に記載されるタンパク質断片をコードする様々なヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つから選択されるＤＮＡ断片であり得る。断片は、以下に記載される核酸配列のうちの１つ以上の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％を含み得る。いくつかの実施形態において、断片は、以下に示される核酸配列のうちの少なくとも１つの少なくとも２０ヌクレオチド以上、少なくとも３０ヌクレオチド以上、少なくとも４０ヌクレオチド以上、少なくとも５０ヌクレオチド以上、少なくとも６０ヌクレオチド以上、少なくとも７０ヌクレオチド以上、少なくとも８０ヌクレオチド以上、少なくとも９０ヌクレオチド以上、少なくとも１００ヌクレオチド以上、少なくとも１５０ヌクレオチド以上、少なくとも２００ヌクレオチド以上、少なくとも２５０ヌクレオチド以上、少なくとも３００ヌクレオチド以上、少なくとも３５０ヌクレオチド以上、少なくとも４００ヌクレオチド以上、少なくとも４５０ヌクレオチド以上、少なくとも５００ヌクレオチド以上、少なくとも５５０ヌクレオチド以上、少なくとも６００ヌクレオチド以上、少なくとも６５０ヌクレオチド以上、少なくとも７００ヌクレオチド以上、少なくとも７５０ヌクレオチド以上、少なくとも８００ヌクレオチド以上、少なくとも８５０ヌクレオチド以上、少なくとも９００ヌクレオチド以上、少なくとも９５０ヌクレオチド以上、又は少なくとも１０００ヌクレオチド以上を含むことができる。
ポリペプチド配列に関して「断片」又は「免疫原性断片」は、本明細書に開示の抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発することができるポリペプチドを意味する。断片は、以下の様々なアミノ酸配列のうちの少なくとも１つから選択されるポリペプチド断片であり得る。コンセンサスタンパク質の断片は、コンセンサスタンパク質の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％を含み得る。いくつかの実施形態において、コンセンサスタンパク質の断片は、本明細書に開示されるタンパク質配列の少なくとも２０アミノ酸以上、少なくとも３０アミノ酸以上、少なくとも４０アミノ酸以上、少なくとも５０アミノ酸以上、少なくとも６０アミノ酸以上、少なくとも７０アミノ酸以上、少なくとも８０アミノ酸以上、少なくとも９０アミノ酸以上、少なくとも１００アミノ酸以上、少なくとも１１０アミノ酸以上、少なくとも１２０アミノ酸以上、少なくとも１３０アミノ酸以上、少なくとも１４０アミノ酸以上、少なくとも１５０アミノ酸以上、少なくとも１６０アミノ酸以上、少なくとも１７０アミノ酸以上、少なくとも１８０アミノ酸以上を含むことができる。
本明細書で使用する場合、「遺伝子構築物」という用語は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡ分子を指す。コード配列は、プロモーターを含む制御要素に作動可能に連結した開始及び終結シグナル、並びに核酸分子を投与される個体の細胞における発現を指示することができるポリアデニル化シグナルを含む。本明細書で使用される場合、「発現可能な形態」という用語は、個体の細胞に存在する場合、コード配列が発現されるように、タンパク質をコードするコード配列に作動可能に連結した必要な制御要素を含有する遺伝子構築物を指す。
本明細書で使用される「相同性」という用語は、相補性の程度を指す。部分的な相同性又は完全な相同性（すなわち、同一性）があり得る。完全に相補的な配列が、標的核酸にハイブリダイズするのを少なくとも部分的に阻害する部分的に相補的な配列は、「実質的に相同な」という機能的用語を使用して言及される。ｃＤＮＡ又はゲノムクローンなどの二本鎖核酸配列に関して使用される場合に、本明細書で使用される「実質的に相同な」という用語は、低ストリンジェントの条件下で二本鎖核酸配列の鎖にハイブリダイズすることができるプローブを指す。一本鎖核酸配列に関して使用される場合に、本明細書で使用される「実質的に相同な」という用語は、低ストリンジェントの条件下で一本鎖核酸鋳型配列にハイブリダイズすることができる（すなわち、その相補体である）プローブを指す。
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈において本明細書で使用される「同一の」又は「同一性」は、配列が、特定の領域にわたって同じである残基の特定の割合を有することを意味する。割合は、２つの配列を最適に整列し、指定された領域にわたり２つの配列を比較し、一致した位置の数を得るために、両方の配列で同一の残基が発生する位置の数を決定し、一致した位置の数を指定された領域の位置の総数で割り、結果に１００を掛けて、配列同一性の割合を得ることで計算することができる。２つの配列が異なる長さを有するか、又はアラインメントが１つ以上の食い違った末端をもたらし、特定の比較領域が単一の配列のみを含む場合、単一の配列の残基は、計算の分子ではなく分母に含まれる。ＤＮＡ及びＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）は、同等とみなすことができる。同一性は、手動で、又はＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴ２．０などのコンピュータ配列アルゴリズムを使用して実行することができる。
本明細書で使用される場合、「ＩＮＯ－３１０７」は、２つのＤＮＡプラスミド：ヒトＩＬ－１２をコードするＤＮＡプラスミドｐＧＸ６０１０と組み合わせた、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１の両方のＳｙｎＣｏｎ（登録商標）Ｅ６及びＥ７抗原を含むＨＰＶ抗原をコードするＤＮＡプラスミドｐＧＸ３０２４の免疫原性組成物を指す。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１の両方のＳｙｎＣｏｎ（登録商標）Ｅ６及びＥ７抗原を含むＨＰＶ抗原のアミノ酸配列は、配列番号１に提供される。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１の両方のＳｙｎＣｏｎ（登録商標）Ｅ６及びＥ７抗原を含むＨＰＶ抗原をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２に提供される。ＤＮＡプラスミドｐＧＸ３０２４の核酸配列は、配列番号３に記載されている。ＤＮＡプラスミドｐＧＸ６０１０の配列は、配列番号４に記載されている。「ＩＮＯ－３１０７」は、生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液を更に含み得る。「ＩＮＯ－３１０７医薬品」は、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）中に６．２５ｍｇの総プラスミド／ｍＬ（６ｍｇ／ｍＬのｐＧＸ３０２４、０．２５ｍｇ／ｍＬのｐＧＸ６０１０）を含有する免疫原性組成物を指す。
本明細書で使用される「免疫応答」は、抗原の導入に応答した、宿主の免疫系、例えば、哺乳動物の免疫系の活性化を意味する。免疫応答は、細胞若しくは体液応答、又は両方の形態であり得る。
本明細書で使用される「核酸」又は「オリゴヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド」は、互いに共有結合された少なくとも２つのヌクレオチドを意味する。一本鎖の描写は、相補鎖の配列も画定する。よって、核酸は、描写される一本鎖の相補鎖も包含する。核酸の多くのバリアントは、所定の核酸と同じ目的で使用することができる。よって、核酸はまた、実質的に同一の核酸及びその補体を包含する。一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的配列にハイブリダイズすることができるプローブを提供する。よって、核酸は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするプローブも包含する。
核酸は、一本鎖若しくは二本鎖であり得るか、又は二本鎖及び一本鎖配列の両方の部分を含有し得る。核酸は、ゲノム及びｃＤＮＡの両方のＤＮＡ、ＲＮＡ、又はハイブリッドであることができ、核酸は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの組み合わせを含むことができ、塩基の組み合わせは、ウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシン、及びイソグアニンを含む。核酸は、化学合成法又は組換え法によって得ることができる。
本明細書で使用される「作動可能に連結された」は、遺伝子の発現が、それが空間的に接続されているプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下にある遺伝子の５’（上流）又は３’（下流）に配置され得る。プロモーターと遺伝子との間の距離は、そのプロモーターとプロモーターが由来する遺伝子においてそれが制御する遺伝子との間の距離とほぼ同じであり得る。当該技術分野で知られているように、この距離の変動は、プロモーター機能を失うことなく対応することができる。
本明細書で使用される「ペプチド」、「タンパク質」、又は「ポリペプチド」は、アミノ酸の連結配列を意味することができ、天然、合成、又は天然及び合成の修飾若しくは組み合わせであり得る。
本明細書で使用される「プロモーター」は、細胞における核酸の発現を付与、活性化又は増強することができる合成又は天然由来の分子を意味する。プロモーターは、発現を更に増強し、かつ／又はその空間発現及び／若しくは時間発現を改変するために１つ以上の特異的転写調節配列を含み得る。プロモーターは、転写の開始部位から数千塩基対ほど離れて位置し得る遠位エンハンサー又はリプレッサー要素も含み得る。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、及び動物を含む供給源に由来し得る。プロモーターは、発現が発生する細胞、組織若しくは臓器に関して、又は発現が発生する発達段階に関して、又は生理学的ストレス、病原体、金属イオン、若しくは誘導剤などの外部刺激に応答して、遺伝子構成要素の発現を構成的に、又は差次的に調節し得る。プロモーターの代表例としては、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレーター－プロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０前期プロモーター、ＲＳＶ－ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶ ＩＥプロモーター、ＳＶ４０前期プロモーター又はＳＶ４０後期プロモーター、及びＣＭＶ ＩＥプロモーターが挙げられる。
「シグナルペプチド」及び「リーダー配列」は、本明細書で互換的に使用され、本明細書に記載されるタンパク質のアミノ末端で連結することができるアミノ酸配列を指す。シグナルペプチド／リーダー配列は、典型的には、タンパク質の局在化を指示する。本明細書で使用されるシグナルペプチド／リーダー配列は、それが産生される細胞からのタンパク質の分泌を容易にし得る。シグナルペプチド／リーダー配列は、多くの場合、細胞からの分泌時に、多くの場合成熟タンパク質と称されるタンパク質の残部から切断される。シグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質のアミノ末端（すなわち、Ｎ末端）で連結される。
本明細書で使用される「実質的に相補的」は、第１の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸の領域にわたって、第２の配列の補体に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は２つの配列がストリンジェントハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることを意味する。
本明細書で使用される「実質的に同一」は、第１及び第２の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸の領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であること、又は核酸に関して、第１の配列が第２の配列の補体と実質的に相補的であることを意味する。
本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）の１つ以上の症状又は適応症を示し、かつ／あるいはＲＲＰと診断され、それの治療を必要とする、ヒト又は非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態では、「対象」という用語は、「患者」という用語と互換的に使用され得る。例えば、ヒト対象は、ＲＲＰ並びに／又はこれらに限定されないが、嗄声、弱い泣き声、慢性咳嗽、呼吸障害、呼吸困難、再発性上気道感染症、肺炎、嚥下障害、喘鳴、成長不全、及び／若しくは呼吸器腫瘍を含む１つ以上の症状若しくは適応症と診断され得る。例えば、この表現は、新たに診断された対象を含む。いくつかの実施形態では、この表現は、開示される方法による治療が初期治療である対象（例えば、患者がＲＲＰのための事前の全身治療を受けていない「第１のライン」治療）を含む。特定の実施形態では、この発現は、開示される方法による治療が「第２のライン」の治療である対象を含み、患者は、手術、抗ウイルス療法、及び気管切開を含むがこれらに限定されない「標準的治療」療法で以前に治療されている。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」などという用語は、症状を緩和すること、症状の原因を一時的若しくは永続的に排除すること、腫瘍成長を遅延若しくは阻害すること、腫瘍細胞負荷若しくは腫瘍負荷を低減させること、腫瘍退縮を促進すること、腫瘍縮小、壊死及び／若しくは消失を引き起こすこと、腫瘍再発を予防すること、悪性形質転換を予防若しくは阻害すること、並びに／又は対象の生存期間を増加させることを意味する。
本明細書で使用される場合、別段の記載がない限り、「臨床的に証明された」という用語（独立して使用されるか、又は「安全な」及び／若しくは「有効な」という用語を修飾するために使用される）は、それが、臨床試験がＵ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、ＥＭＡ、又は対応する国の規制当局の承認基準を満たした臨床試験によって証明されたことを意味するものとする。例えば、証明は、本明細書に提供される実施例に記載される臨床試験によって提供され得る。
「臨床的に証明された安全性」という用語は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原（例えば、ｐＧＸ３０２４若しくはＩＮＯ－３１０７医薬品又はそれらのバイオシミラーとして投与されるＨＰＶ抗原）を用いる用量、投薬量レジメン、治療又は方法に関連する場合、標準的治療又は別の比較対象と比較して、治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥと称される）の許容可能な頻度及び／又は許容可能な重症度を伴う好ましいリスク：利益比を指す。有害事象とは、医薬品を投与された患者において発生する不適切な医学的事象である。安全性の１つの指標は、有害事象の共通毒性基準ＣＴＣＡＥｖ５．０に従って等級分けされた、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）の有害事象（ＡＥ）の発生率である。
用量、投薬量レジメン、治療又は方法の文脈において本明細書で使用される「臨床的に証明された有効性」及び「臨床的に証明された有効な」という用語は、特定の用量、投薬量又は治療レジメンの有効性を指す。有効性は、本発明の薬剤への応答における疾患の経過の変化に基づいて測定され得る。例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原（例えば、ｐＧＸ３０２４若しくはＩＮＯ－３１０７医薬品又はそれらのバイオシミラーとして投与されるＨＰＶ抗原）は、治療されている障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、好ましくは持続的改善を誘導するのに十分な量及び時間で患者に投与される。治療の量及び時間が十分であるかどうかを決定するために、対象の病気、疾患又は状態の程度を反映する様々な指標が評価され得る。かかる指標には、例えば、問題の障害の疾患重症度、症状、又は兆候の臨床的に認識される指標が含まれる。改善の程度は、概して、兆候、症状、生検、又は他の試験結果に基づいてこの決定を行うことができ、また、所与の疾患のために開発された生活の質のアンケートなど、対象に施されるアンケートを用いることができる医師によって決定される。改善は、疾患活性の指標の改善、臨床症状の改善、又は疾患活性の任意の他の尺度によって示され得る。例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原（例えば、ｐＧＸ３０２４若しくはＩＮＯ－３１０７医薬品又はそれらのバイオシミラーとして投与されるＨＰＶ抗原）を投与して、ＲＲＰ外科的介入の頻度の低減、ＲＲＰ病期評価スコアの変化、手術間隔の増加、又はＨＰＶクリアランス若しくは疾患負荷の減少に関連する患者の状態の改善を達成し得る。
核酸に関して本明細書で使用される「バリアント」は、（ｉ）参照されるヌクレオチド配列の一部分若しくは断片、（ｉｉ）参照されるヌクレオチド配列の補体若しくはその一部分、（ｉｉｉ）参照される核酸若しくはその補体と実質的に同一である核酸、又は（ｉｖ）参照される核酸、その補体、若しくはそれらと実質的に同一である配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸を意味する。バリアントは、完全遺伝子配列又はその断片の完全長にわたって実質的に同一である核酸配列であり得る。核酸配列は、遺伝子配列又はその断片の完全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり得る。
ポリペプチドに関する「バリアント」は、アミノ酸の挿入、欠失、又は保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を保持するポリペプチドである。バリアントは、少なくとも１つの生物学的活性を保持しているアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質も意味し得る。バリアントは、アミノ酸配列又はその断片の完全長にわたって実質的に同一であるアミノ酸配列であり得る。アミノ酸配列は、アミノ酸配列又はその断片の完全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり得る。
本明細書で使用される「ベクター」は、複製起点を含有する核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体、又は酵母人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡ又はＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製染色体外ベクターであり得、一実施形態では、発現プラスミドである。ベクターは、１つ以上の異種核酸配列を含有するか、又はそれを含み得る。
本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」という語句は、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７抗原並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原が、アジュバントの投与と同時に、直前に又は直後に対象に投与されることを意味する。特定の実施形態では、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７抗原並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原は、アジュバントとの共製剤として投与される。
本明細書で使用される場合、別段の記載がない限り、「臨床的に証明された」という用語（独立して使用されるか、あるいは「安全な」及び／又は「有効な」という用語を修飾するために使用される）は、それが、臨床試験がＵ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、ＥＭＡ、又は対応する国の規制当局の承認基準を満たした臨床試験によって証明されたことを意味するものとする。例えば、証明は、本明細書に提供される実施例に記載される臨床試験によって提供され得る。
「臨床的に証明された安全」という用語は、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７抗原並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原（例えば、ｐＧＸ３０２４として投与）を、ＩＬ－１２などのアジュバント（例えば、ｐＧＸ６０１０として投与）と組み合わせて用いる用量、投薬量レジメン、治療又は方法に関連する場合、標準的治療又は別の比較対象と比較して、治療中に発生した有害事象（ＡＥ又はＴＥＡＥと称される）の許容可能な頻度及び／又は許容可能な重症度を伴う好ましいリスク：利益比を指す。有害事象とは、医薬品を投与された対象において発生する不適切な医学的事象である。
用量、投薬量レジメン、治療又は方法の文脈において本明細書で使用される「臨床的に証明された有効性」及び「臨床的に証明された有効な」という用語は、特定の用量、投薬量又は治療レジメンの有効性を指す。有効性は、本発明の薬剤への応答における疾患の経過の変化に基づいて測定され得る。例えば、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７抗原並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原（例えば、ｐＧＸ３０２４として投与される）と、ＩＬ－１２などのアジュバント（例えば、ｐＧＸ６０１０として投与される）との組み合わせは、治療されている障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、好ましくは持続的改善を誘導するのに十分な量及び時間で対象に投与される。治療の量及び時間が十分であるかどうかを決定するために、対象の病気、疾患又は状態の程度を反映する様々な指標が評価され得る。かかる指標には、例えば、問題の障害の疾患重症度、症状、又は兆候の臨床的に認識される指標が含まれる。改善の程度は、概して、兆候、症状、生検、又は他の試験結果に基づいてこの決定を行うことができる医師によって決定され、また、所与の疾患のために開発された生活の質のアンケートなど、対象に施されるアンケートを用いることができる。例えば、ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７抗原並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原（例えば、ｐＧＸ３０２４として投与）と、ＩＬ－１２などのアジュバント（例えば、ｐＧＸ６０１０として投与）の組み合わせは、ＲＲＰに関連する患者の状態の改善を達成するために投与され得る。改善は、疾患活性の指標の改善、臨床症状の改善、又は疾患活性の任意の他の尺度によって示され得る。
本明細書では、核酸分子、タンパク質、ワクチンを含む免疫原性組成物、並びに免疫応答を誘導し、かつ／又はＲＲＰを予防若しくは治療するためのそれらの使用法が提供される。免疫原性組成物は、好ましくは、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン、及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインを含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む。開示される免疫原性組成物は、修飾されたコンセンサス配列が生成され、コドン最適化、ＲＮＡ最適化、及び高効率免疫グロブリンリーダー配列の付加を含む遺伝子修飾が行われる多相戦略から生じる。免疫原性組成物を、ＨＰＶの複数の株から保護するために使用し、それによってＨＰＶに基づく病態を治療、予防、及び／又は保護し得る。特に、免疫原性組成物は、ＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１ベースの病態を予防又は治療するために使用され得る。免疫原性組成物は、免疫原性組成物を投与された対象の免疫応答を顕著に誘導することができ、それによって、ＨＰＶ６感染症、ＨＰＶ１１感染症、又はそれらの両方に対して保護し、かつそれらを治療する。
ワクチンは、ＤＮＡワクチン、ペプチドワクチン、又はＤＮＡ及びペプチドの組み合わせワクチンであり得る。ＤＮＡワクチンは、ＨＰＶ抗原をコードする核酸配列を含み得る。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらのバリアント、それらの断片、又はそれらの組み合わせであり得る。核酸配列はまた、ペプチド結合によってＨＰＶ抗原に連結されるリンカー、リーダー又はタグ配列をコードする追加の配列を含み得る。ペプチドワクチンは、ＨＰＶ抗原ペプチド、ＨＰＶ抗原タンパク質、それらのバリアント、それらの断片、又はそれらの組み合わせを含み得る。ＤＮＡ及びペプチドの組み合わせワクチンは、ＨＰＶ抗原をコードする上述の核酸配列とＨＰＶ抗原ペプチド又はタンパク質とを含み得、ＨＰＶ抗原ペプチド又はタンパク質及びコードされたＨＰＶ抗原は、同じアミノ酸配列を有する。
ワクチンは、ワクチンを投与された対象において体液性免疫応答を誘導し得る。誘導された体液性免疫応答は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメイン、又はそれらの任意の組み合わせに特異的であり得る。誘導された体液性免疫応答は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原、又はこれらの任意の組み合わせと反応性であり得る。体液性免疫応答は、ワクチンを投与された対象において、約１．５倍～約１６倍、約２倍～約１２倍、又は約３倍～約１０倍誘導され得る。体液性免疫応答は、ワクチンを投与された対象において、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１５．５倍、又は少なくとも約１６．０倍誘導され得る。
ワクチンによって誘導される体液性免疫応答には、ワクチンを投与されていない対象と比較して、ワクチンを投与された対象に関連するＩｇＧ抗体のレベルの増加が含まれ得る。これらのＩｇＧ抗体は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原、又はそれらの任意の組み合わせに特異的であり得る。これらのＩｇＧ抗体は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原、又はそれらの任意の組み合わせと反応性であり得る。ワクチンを投与された対象に関連するＩｇＧ抗体のレベルは、ワクチンを投与されていない対象と比較して、約１．５倍～約１６倍、約２倍～約１２倍、又は約３倍～約１０倍増加し得る。ワクチンを投与された対象に関連するＩｇＧ抗体のレベルは、ワクチンを投与されていない対象と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１５．５倍、又は少なくとも約１６．０倍増加し得る。
ワクチンは、ワクチンを投与された対象において細胞性免疫応答を誘導し得る。誘導された細胞性免疫応答は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原、又はこれらの任意の組み合わせに特異的であり得る。誘導された細胞性免疫応答は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原、又はこれらの任意の組み合わせと反応性であり得る。誘導された細胞性免疫応答には、Ｔ細胞応答を誘発することが含まれ得る。誘発されたＴ細胞応答は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原、又はこれらの任意の組み合わせと反応性であり得る。誘発されたＴ細胞応答は、多官能性であり得る。誘導された細胞性免疫応答には、Ｔ細胞がインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）を産生するＴ細胞応答を誘発することが含まれ得る。誘導された細胞性免疫応答には、ワクチンを投与されていない対象と比較して、ワクチンを投与された対象に関連するＴ細胞応答の増加が含まれ得る。ワクチンを投与された対象に関連するＴ細胞応答は、ワクチンを投与されていない対象と比較して、約２倍～約３０倍、約３倍～約２５倍、又は約４倍～約２０倍増加し得る。ワクチンを投与された対象に関連するＴ細胞応答は、ワクチンを投与されていない対象と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２．０倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約４．０倍、少なくとも約５．０倍、少なくとも約６．０倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７．０倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８．０倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９．０倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０．０倍、少なくとも約１０．５倍、少なくとも約１１．０倍、少なくとも約１１．５倍、少なくとも約１２．０倍、少なくとも約１２．５倍、少なくとも約１３．０倍、少なくとも約１３．５倍、少なくとも約１４．０倍、少なくとも約１４．５倍、少なくとも約１５．０倍、少なくとも約１６．０倍、少なくとも約１７．０倍、少なくとも約１８．０倍、少なくとも約１９．０倍、少なくとも約２０．０倍、少なくとも約２１．０倍、少なくとも約２２．０倍、少なくとも約２３．０倍、少なくとも約２４．０倍、少なくとも約２５．０倍、少なくとも約２６．０倍、少なくとも約２７．０倍、少なくとも約２８．０倍、少なくとも約２９．０倍、又は少なくとも約３０．０倍増加し得る。
本発明のワクチンは、ワクチン自体が病気又は死亡を引き起こさないように安全である、ウイルス又はバクテリアなどの生きた病原体への曝露からもたらされる病気から保護する、抗体を誘導して細胞の発明を予防する、細胞内病原体に対する保護Ｔ細胞を誘導する、かつ、投与の簡易性、少ない副反応、生物学的安定性、及び用量当たりの低いコストを提供するなどの有効なワクチンに要求される特徴を有し得る。
ワクチンは、筋肉又は皮膚などの種々の組織に投与される場合、免疫応答を更に誘導し得る。ワクチンは、エレクトロポレーション、又は注射、又は、皮下若しくは筋肉内を介して投与される場合、免疫応答を更に誘導し得る。
ＨＰＶ抗原は、１つ以上のＨＰＶ株に対して哺乳動物における免疫応答を誘発し得る。したがって、ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含むＨＰＶ抗原が本明細書に開示される。ＨＰＶ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１抗原性ドメインのＮ末端又はＣ末端に位置し得る。
いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン、その断片、又はそのバリアント、並びにＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメイン、その断片、そのバリアント、又はそれらの組み合わせを含む。ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインのＮ末端又はＣ末端に位置し得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインは、免疫応答が誘導され得る免疫原として特に効果的になるエピトープを含み得る。ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ６の２つ以上の株に由来するコンセンサス配列であり得る。ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインは、発現を改善するためのコンセンサス配列及び／又は修飾を含み得る。修飾には、コドン最適化、ＲＮＡ最適化、翻訳開始を増加させるためのコザック配列の追加、及び／又はＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインの免疫原性を増加させるための免疫グロブリンリーダー配列の追加が含まれ得る。ＨＰＶ６ Ｅ６コンセンサス抗原性ドメインは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、これらに限定されないが、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）又は免疫グロブリン（ＩｇＧ）シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６ Ｅ６コンセンサス抗原性ドメインは、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグを含み得る。ＨＰＶ６ Ｅ６コンセンサス抗原性ドメインは、対応するコドン最適化ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインよりも強く広範な細胞性及び／又は体液性免疫応答を誘発するように設計され得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインは、免疫応答が誘導され得る免疫原として特に効果的になるエピトープを含み得る。ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインは、ＨＰＶ６の２つ以上の株に由来するコンセンサス配列であり得る。ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインは、発現を改善するためのコンセンサス配列及び／又は修飾を含み得る。修飾には、コドン最適化、ＲＮＡ最適化、翻訳開始を増加させるためのコザック配列の追加、及び／又はＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインの免疫原性を増加させるための免疫グロブリンリーダー配列の追加が含まれ得る。ＨＰＶ６ Ｅ７コンセンサス抗原性ドメインは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、これらに限定されないが、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）又は免疫グロブリン（ＩｇＧ）シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６ Ｅ７コンセンサス抗原性ドメインは、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグを含み得る。ＨＰＶ６ Ｅ７コンセンサス抗原性ドメインは、対応するコドン最適化ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインよりも強く広範な細胞性及び／又は体液性免疫応答を誘発するように設計され得る。
いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン、その断片、又はそのバリアント、並びにＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメイン、その断片、そのバリアント、又はそれらの組み合わせを含む。ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインに対してＮ末端又はＣ末端に配置され得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインは、免疫応答が誘導され得る免疫原として特に効果的になるエピトープを含み得る。ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１の２つ以上の株に由来するコンセンサス配列であり得る。ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインは、発現を改善するためのコンセンサス配列及び／又は修飾を含み得る。修飾には、コドン最適化、ＲＮＡ最適化、翻訳開始を増加させるためのコザック配列の追加、及び／又はＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインの免疫原性を増加させるための免疫グロブリンリーダー配列の追加が含まれ得る。ＨＰＶ１１ Ｅ６コンセンサス抗原性ドメインは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、これらに限定されないが、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）又は免疫グロブリン（ＩｇＧ）シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１ Ｅ６コンセンサス抗原性ドメインは、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグを含み得る。ＨＰＶ１１ Ｅ６コンセンサス抗原性ドメインは、対応するコドン最適化ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインよりも強く広範な細胞性及び／又は体液性免疫応答を誘発するように設計され得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインは、免疫応答が誘導され得る免疫原として特に効果的になるエピトープを含み得る。ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインは、ＨＰＶ１１の２つ以上の株に由来するコンセンサス配列であり得る。ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインは、発現を改善するためのコンセンサス配列及び／又は修飾を含み得る。修飾には、コドン最適化、ＲＮＡ最適化、翻訳開始を増加させるためのコザック配列の追加、及び／又はＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインの免疫原性を増加させるための免疫グロブリンリーダー配列の追加が含まれ得る。ＨＰＶ１１ Ｅ７コンセンサス抗原性ドメインは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、これらに限定されないが、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）又は免疫グロブリン（ＩｇＧ）シグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１ Ｅ７コンセンサス抗原性ドメインは、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグを含み得る。ＨＰＶ１１ Ｅ７コンセンサス抗原性ドメインは、対応するコドン最適化ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインよりも強く広範な細胞性及び／又は体液性免疫応答を誘発するように設計され得る。
いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列の免疫原性断片、又は配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列の免疫原性断片と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるアミノ酸配列を含む。
配列番号１又は配列番号１１のアミノ酸配列の断片は、配列番号１又は配列番号１１のアミノ酸配列の完全長の長さの６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含み得る。配列番号１又は配列番号１１のアミノ酸配列の断片は、配列番号１又は配列番号１１のアミノ酸配列の完全長の長さの６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含み得る。配列番号１又は配列番号１１の断片は、１位にシグナルペプチド及び／又はメチオニンを有する又は有しない各場合において、Ｎ及び／又はＣ末端から少なくとも１つのアミノ酸を欠いていることを除いて、全長参照配列と１００％同一であり得る。配列番号１又は配列番号１１のアミノ酸配列の断片は、追加された任意の異種シグナルペプチドを除いて、完全長の配列番号１又は配列番号１１の長さの６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含み得る。断片は、好ましくは、配列番号１又は配列番号１１と９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上相同である配列番号１又は配列番号１１の断片を含み得、加えて、相同性の割合を計算する場合に含まれないＮ末端メチオニン又は異種シグナルペプチドを含み得、断片は、Ｎ末端メチオニン及び／又は免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、ＩｇＥ若しくはＩｇＧシグナルペプチドなどのシグナルペプチドを更に含み得る。Ｎ末端メチオニン及び／又はシグナルペプチドは、断片に連結され得る。
いくつかの実施形態では、配列番号１又は配列番号１１の断片は、１００個以上の残基、いくつかの実施形態では、２００個以上の残基、いくつかの実施形態では、３００個以上の残基、いくつかの実施形態では、４００個以上の残基、いくつかの実施形態では、５００個以上の残基を含み得る。
いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されたＨＰＶ６及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、翻訳後切断部位は、ＨＰＶ６抗原ドメインとＨＰＶ１１抗原ドメインとの間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインとの間、及び／又はＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインとの間に位置する。いくつかの実施形態では、翻訳スキップ部位は、ＨＰＶ６抗原ドメインとＨＰＶ１１抗原ドメインとの間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインとの間、及び／又はＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインとの間に位置する。いくつかの実施形態では、翻訳後切断部位及び翻訳スキップ部位は、ＨＰＶ６抗原ドメインとＨＰＶ１１抗原ドメインとの間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原ドメインとＨＰＶ６ Ｅ７抗原ドメインとの間、及び／又はＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインとＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインとの間に位置する。いくつかの実施形態では、翻訳後切断部位は、フーリン切断部位である。いくつかの実施形態では、翻訳スキップ部位は、Ｐ２Ａ部位である。いくつかの態様では、ＨＰＶ免疫原性タンパク質は、配列番号１又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるアミノ酸配列、配列番号１若しくは配列番号１１の免疫原性断片、又は配列番号１若しくは配列番号１１の免疫原性断片と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるアミノ酸配列を含む。
本発明のタンパク質は、周知の技法を使用して生成され得る。いくつかの実施形態では、例えば、本発明のタンパク質をコードするＤＮＡ分子は、発現系における使用のために市販されている発現ベクターに挿入され得る。産生されたタンパク質は、細胞を溶解することによって、又は必要に応じて当業者に既知の培養培地から回収される。当業者は、周知の技法を使用して、そのような発現系を使用して産生されるタンパク質を単離することができる。上述のように特定のタンパク質に特異的に結合する抗体を使用して天然源からタンパク質を精製する方法は、組換えＤＮＡ方法論によって産生されるタンパク質の精製に等しく適用され得る。組換え技法によってタンパク質を産生することに加えて、単離された、本質的に純粋なタンパク質を産生するために自動化ペプチド合成装置も使用され得る。
ＨＰＶ抗原は、本明細書に開示されるＨＰＶ６－ＨＰＶ１１融合抗原をコードする核酸分子であり得る。ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列は、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列に対して５’又は３’に位置し得る。
いくつかの実施形態では、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列は、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインをコードする核酸配列を含む。ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインをコードする核酸配列は、ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインをコードする核酸配列に対して５’又は３’に位置し得る。
いくつかの実施形態では、ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列は、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインをコードする核酸配列を含む。ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインをコードする核酸配列は、ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインをコードする核酸配列に対して５’又は３’に位置し得る。
いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原の抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列は、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列によって分離され得る。いくつかの実施形態では、翻訳後切断部位をコードするヌクレオチド配列は、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、又はそれらの任意の組み合わせに位置する。いくつかの実施形態では、翻訳スキップ部位をコードするヌクレオチド配列は、ＨＰＶ６抗原ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ１１抗原ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ６ Ｅ７抗原ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、又はそれらの任意の組み合わせに位置する。いくつかの実施形態では、翻訳後切断部位及び翻訳スキップ部位をコードするヌクレオチド配列は、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列とＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインをコードするヌクレオチド配列との間、又はそれらの任意の組み合わせに位置する。いくつかの実施形態では、翻訳後切断部位は、フーリン切断部位である。いくつかの実施形態では、翻訳スキップ部位は、Ｐ２Ａ部位である。
いくつかの実施形態では、ＨＰＶ抗原をコードする核酸配列は、配列番号２若しくは配列番号１２のヌクレオチド配列、配列番号２若しくは配列番号１２のヌクレオチド配列と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるヌクレオチド配列、配列番号２若しくは配列番号１２のヌクレオチド配列の断片、又は配列番号２若しくは配列番号１２のヌクレオチド配列の断片と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるヌクレオチド配列を含む。断片は、Ｎ末端メチオニン及び／又は免疫グロブリンシグナルペプチド、例えば、ＩｇＥ若しくはＩｇＧシグナルペプチドなどのシグナルペプチドのコード配列を更に含むことができる。Ｎ末端メチオニン及び／又はシグナルペプチドをコードするコード配列は、断片に連結され得る。
免疫原をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子は、調節要素に作動可能に連結され得る。核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、それらのバリアント、それらの断片、又はそれらの組み合わせであり得る。核酸配列はまた、ペプチド結合によって抗原に連結されているリンカー又はタグ配列をコードする追加の配列を含み得る。
いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原をコードする核酸分子は、発現ベクターである。発現ベクターは、環状プラスミド又は直鎖状核酸であり得る。発現ベクターは、適切な対象細胞における特定のヌクレオチド配列の発現を指示することができる。発現ベクターは、抗原をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを有することができ、それは終結シグナルに作動可能に連結され得る。発現ベクターは、ヌクレオチド配列の適切な翻訳に必要な配列も含有し得る。目的のヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、キメラであり得、その構成要素のうちの少なくとも１つが、他の構成要素のうちの少なくとも１つに関して異種であることを意味する。発現カセットにおけるヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター又は誘導性プロモーターの制御下であり得、宿主細胞が、一部の特定の外部刺激に曝露されたときにのみ転写を開始する。多細胞生物の場合、プロモーターはまた、特定の組織又は器官又は発達段階に特異的であり得る。
一実施形態では、核酸は、ＲＮＡ分子である。したがって、一実施形態では、本発明は、目的の１つ以上のポリペプチドをコードするＲＮＡ分子を提供する。ＲＮＡは、プラス鎖であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、逆転写などの任意の介在複製ステップを必要とすることなく細胞によって翻訳することができる。本発明で有用なＲＮＡ分子は、５’キャップ（例えば、７－メチルグアノシン）を有し得る。このキャップは、ＲＮＡのインビボ翻訳を向上させることができる。本発明で有用なＲＮＡ分子の５’ヌクレオチドは、５’トリホスフェート基を有し得る。キャップＲＮＡでは、これは、５’－５’架橋を介して７－メチルグアノシンに連結され得る。ＲＮＡ分子は、３’ポリ－Ａテールを有し得る。それはまた、その３’末端近くにポリ－Ａポリメラーゼ認識配列（例えば、ＡＡＵＡＡＡ）を含み得る。本発明で有用なＲＮＡ分子は、一本鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、裸ＲＮＡ分子である。一実施形態では、ＲＮＡ分子は、ベクター内に含まれる。
一実施形態では、ＲＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを有する。一実施形態では、５’ＵＴＲは、０～３０００ヌクレオチド長である。コード領域に付加される５’及び３’ＵＴＲ配列の長さは、これらに限定されないが、ＵＴＲの異なる領域にアニールするＰＣＲのプライマーを設計することを含む、異なる方法によって変更することができる。このアプローチを用いて、当業者は、転写ＲＮＡのトランスフェクション後の最適な翻訳効率を達成するために必要な５’及び３’ＵＴＲ長を修飾することができる。
５’及び３’ＵＴＲは、目的の遺伝子についての天然発生型、内因性５’及び３’ＵＴＲであり得る。あるいは、目的の遺伝子に内因性ではないＵＴＲ配列は、ＵＴＲ配列をフォワード及びリバースプライマーに組み込むことによって、又はテンプレートの任意の他の修飾によって付加することができる。目的の遺伝子に内因性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／又は翻訳効率を修飾するために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列におけるＡＵ富化要素は、ＲＮＡの安定性を増加させることができることが知られている。したがって、３’ＵＴＲは、当該技術分野において周知であるＵＴＲの特性に基づいて転写されたＲＮＡの安定性を増加させるように選択又は設計することができる。
一実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含み得る。あるいは、目的の遺伝子に内因性ではない５’ＵＴＲが、上記のＰＣＲによって付加されている場合、コンセンサスコザック配列は、５’ＵＴＲ配列を付加することによって再設計することができる。コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写物の翻訳の効率を増加させることができるが、全てのＲＮＡについて効率的な転写を可能にするために必要とされるわけではないようである。多くのＲＮＡのコザック配列の要件は、当該技術分野において知られている。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡウイルスに由来し得、このＲＮＡゲノムは、細胞において安定である。他の実施形態では、様々なヌクレオチド類似体は、ＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げるために３’又は５’ＵＴＲにおいて使用することができる。
一実施形態では、ＲＮＡは、５’末端及び３’ポリ（Ａ）テールの両方にキャップを有し、これは、リボソーム結合、翻訳の開始、及び細胞におけるＲＮＡの安定性を決定する。
一実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオシド修飾ＲＮＡである。ヌクレオシド修飾ＲＮＡは、例えば、安定性の増加、自然免疫原性の低さ又は不在、及び翻訳の向上を含む、非修飾ＲＮＡに対する特定の利点を有する。
発現ベクターは、細胞ゲノムへの組み込みによって標的細胞を形質転換し得るか、又は染色体外で存在し得る（例えば、複製起点を有する自己複製プラスミド）環状プラスミドであり得る。ベクターは、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、若しくはｐｒｏｖａｘ、又は抗原をコードするＤＮＡを発現し、細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳することを可能にすることができる任意の他の発現ベクターであり得る。
本明細書ではまた、エレクトロポレーションにより対象に効率的に送達され、１つ以上の所望の抗原を発現することができる直鎖状核酸免疫原性組成物又は直鎖状発現カセット（「ＬＥＣ」）も提供される。ＬＥＣは、リン酸骨格が全くない任意の線状ＤＮＡであり得る。ＤＮＡは、１つ以上の抗原をコードし得る。ＬＥＣは、プロモーター、イントロン、終止コドン、及び／又はポリアデニル化シグナルを含有し得る。抗原の発現はプロモーターにより制御され得る。ＬＥＣは、任意の抗生物質耐性遺伝子及び／又はリン酸骨格を含まない場合がある。ＬＥＣは、所望の抗原遺伝子発現に無関係の他のヌクレオチド配列を含有しなくてもよい。ＬＥＣは、線状化することができる任意のプラスミドに由来し得る。プラスミドは、抗原を発現することが可能であり得る。プラスミドは、ｐＮＰ（Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／３４）又はｐＭ２（Ｎｅｗ Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／９９）であり得る。プラスミドは、ＷＬＶ００９、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、若しくはｐｒｏｖａｘ、又は抗原をコードするＤＮＡを発現し、細胞が配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳することを可能にすることができる任意の他の発現ベクターであり得る。ＬＥＣは、ｐｃｒＭ２であり得る。ＬＥＣは、ｐｃｒＮＰであり得る。ｐｃｒＮＰ及びｐｃｒＭＲは、それぞれ、ｐＮＰ（Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／３４）及びｐＭ２（Ｎｅｗ Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／９９）に由来し得る。
ベクターは、上記の抗原をコードする異種核酸を含み得、１つ以上のがん抗原コード配列の上流にあり得る開始コドン、及び上記の抗原のコード配列の下流にあり得る終結コドンを更に含み得る。
ベクターは、プロモーターを有し得る。プロモーターは、遺伝子発現を駆動し、単離された核酸の発現を制御することが可能な任意のプロモーターであり得る。かかるプロモーターは、本明細書に記載される抗原配列を転写するＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを介した転写に必要なシス作用性配列要素である。異種核酸の発現を指示するために使用されるプロモーターの選択は、特定の用途に依存する。プロモーターは、ベクター内の転写開始からほぼ同じ距離に配置し得、それは、その自然な設定での転写開始部位からである。しかしながら、この距離における変動は、プロモーター機能の喪失なしに順応され得る。
開始コドン及び終結コドンは、上記の抗原のコード配列とインフレームであり得る。ベクターはまた、上記の抗原のコード配列に作動可能に連結されているプロモーターを含み得る。上記の抗原のコード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、サルウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーター、マウス乳がんウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーターなどのヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモーター、ＣＭＶ最初期プロモーターなどのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、又はラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターであり得る。プロモーターはまた、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、又はヒトメタロチオネインなどのヒト遺伝子由来のプロモーターであり得る。プロモーターはまた、天然又は合成の筋肉又は皮膚特異的プロモーターなどの組織特異的プロモーターであり得る。そのようなプロモーターの例は、米国特許出願公開第２００４／０１７５７２７号に記載されており、その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
ベクターはまた、上述の抗原及び／又は抗体のコード配列の下流にあり得るポリアデニル化シグナルを含み得る。ポリアデニル化シグナルは、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ＬＴＲポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化シグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化シグナル、又はヒトβグロビンポリアデニル化シグナルであり得る。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）由来のポリアデニル化シグナルであり得る。
ベクターはまた、上記の抗原の上流にエンハンサーを含み得る。エンハンサーは、発現に必要な場合がある。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、又はＣＭＶ、ＨＡ、ＲＳＶ若しくはＥＢＶ由来のものなどのウイルスエンハンサーであり得る。
ベクターは、機能的なスプライスドナー及びアクセプター部位を有するエンハンサー及びイントロンを含み得る。ベクターは、効率的な終結を提供するために、構造遺伝子の下流に転写終結領域を含有し得る。終結領域は、プロモーター配列と同じ遺伝子から得ることができるか、又は異なる遺伝子から得てもよい。
ベクターは、それが染色体に組み込まれるのを阻害する要素又は試薬を更に含み得る。ベクターは、ベクターを染色体外に維持し、細胞内でベクターの複数のコピーを産生するために、哺乳動物の複製起点を含み得る。ベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からのｐＶＡＸ１、ｐＣＥＰ４、又はｐＲＥＰ４であり得、これは、エプスタインバーウイルスの複製起点及び核抗原ＥＢＮＡ－１コード領域を含み得、これは、組み込みなしに高コピーエピソーム複製を産生し得る。ベクターは、ｐＶＡＸ１又は本明細書に記載のバリアントプラスミドなどの変化を伴うｐＶＡＸ１バリアントであり得る。バリアントｐＶａｘ１プラスミドは、骨格ベクタープラスミドｐＶＡＸ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）の２９９８塩基対バリアントである。ＣＭＶプロモーターは、塩基１３７～７２４に位置している。Ｔ７プロモーター／プライミング部位は、塩基６６４～６８３にある。複数クローニング部位は、塩基６９６～８１１にある。ウシＧＨポリアデニル化シグナルは、塩基８２９～１０５３にある。カナマイシン耐性遺伝子は、塩基１２２６～２０２０にある。ｐＵＣの起点は、塩基２３２０～２９９３にある。
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＶＡＸ１の配列に基づいて、ｐＶＡＸ１の配列に以下の変異が見出された。
Ｃ＞Ｇ２４１ ＣＭＶプロモーター中
Ｃ＞Ｔ １９４２ 骨格、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ）の下流
Ａ＞－ ２８７６ 骨格、カナマイシン耐性遺伝子の下流
Ｃ＞Ｔ３２７７ ｐＵＣ複製起点（Ｏｒｉ）の高コピー数変異中（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９８５を参照されたい）
Ｇ＞Ｃ ３７５３ ＲＮＡＳｅＨ部位の上流のｐＵＣ Ｏｒｉの最端
塩基対２、３、及び４は、ＣＭＶプロモーターの上流の骨格においてＡＣＴからＣＴＧに変更される。
ベクターのバックボーンは、ｐＡＶ０２４２であり得る。ベクターは、複製欠損アデノウイルス５型（Ａｄ５）ベクターであり得る。
ベクターはまた、ベクターが投与される哺乳動物又はヒト細胞における遺伝子発現によく適している可能性がある制御配列を含むことができる。本明細書に開示される抗原配列は、宿主細胞におけるコード配列のより効率的な転写を可能にすることができるコドンを含み得る。
ベクターは、ｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であり得、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）でのタンパク質産生に使用することができる。ベクターはまた、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であり得、これは酵母のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株でのタンパク質産生に使用することができる。ベクターはまた、昆虫細胞でのタンパク質産生に使用され得るＭＡＸＢＡＣ（商標）完全バキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）のものであり得る。ベクターはまた、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞でのタンパク質産生に使用され得るｐｃＤＮＡ Ｉ又はｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であり得る。ベクターは、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（１９８９）を含む、日常的な技術及び容易に入手可能な出発物質によってタンパク質を産生するための発現ベクター又は系であり得る。
例示的なＤＮＡプラスミドは、配列番号３を含む。
本発明の免疫原性組成物は、本発明のＨＰＶ抗原、本発明のＨＰＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む組換えワクチン、本発明のＨＰＶ抗原をコードし、かつ／若しくは本発明のＨＰＶ抗原を含む弱毒生病原体、本発明のＨＰＶ抗原を含む死滅した病原体、又は本発明のＨＰＶ抗原を含むリポソーム若しくはサブユニットワクチンなどの組成物を含み得る。本発明は更に、薬学的組成物、例えば、これに限定されないが、開示された免疫原性組成物を含む注射可能な薬学的組成物に関する。
本発明の免疫原性組成物は、好適な移送、送達、忍容性などを提供する好適な薬学的に許容される担体、賦形剤、及び他の薬剤とともに製剤化され得る。薬学的に許容される賦形剤は、ビヒクル、担体、又は希釈剤などの機能的分子であり得る。
薬学的に許容される賦形剤は、トランスフェクション促進剤であり得、これは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）などの表面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、スクアレン及びスクアレンなどの小胞、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、若しくはナノ粒子、又は他の既知のトランスフェクション促進剤を含み得る。
薬学的に許容される賦形剤は、アジュバントであり得る。いくつかの態様では、アジュバントと組み合わせて本発明のＨＰＶ抗原を含む組成物及びワクチンが提供される。アジュバントは、代替プラスミドにおいて発現される他の遺伝子であり得るか、又は本発明のＨＰＶ抗原と組み合わせてタンパク質として送達される。アジュバントは、α－インターフェロン（ＩＦＮ－α）、β－インターフェロン（ＩＦＮ－β）、γ－インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ－ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＭＨＣ、ＣＤ８０、欠失したシグナル配列を有し、任意にＩｇＥからのシグナルペプチドを含むＩＬ－１５を含むＣＤ８６からなる群から選択され得る。アジュバントは、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ－ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、又はそれらの組み合わせであり得る。
アジュバントとして有用であり得る他の遺伝子は、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｐ、ＩＬ－８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ－セレクチン、Ｐ－セレクチン、Ｅ－セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ－１、ＭａｄＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１、ＶＬＡ－１、Ｍａｃ－１、ｐ１５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－２、ＩＣＡＭ－３、ＣＤ２、ＬＦＡ－３、Ｍ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１８の変異型、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管成長因子、線維芽細胞成長因子、ＩＬ－７、ＩＬ－２２、神経成長因子、血管内皮成長因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ－１、ｐ５５、ＷＳＬ－１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ－３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、Ｓｐ－１、Ａｐ－１、Ａｐ－２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ Ｋ、ＳＡＰ－１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ－Ｒ３、ＴＲＡＩＬ－Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ ＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０ ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、及びそれらの機能断片をコードするものを含む。
特定の実施形態では、アジュバントは、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である。ＩＬ１２は、そのｐ３５及びｐ４０サブユニットの形態でワクチンに含まれ得る。アジュバントＩＬ－１２は、そのｐ３５及びｐ４０サブユニットとして対象に投与され得る。ＩＬ１２ｐ３５及びｐ４０サブユニットは、同じ発現ベクター又は別個の発現ベクターによってコードされ得る。ＩＬ１２をコードする核酸分子は、ＨＰＶ１１抗原に融合されたＨＰＶ６抗原をコードする核酸分子と同一であってもよく、又は異なってもよい。いくつかの態様では、ＩＬ１２をコードする核酸分子は、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む。ＩＬ１２のｐ３５サブユニットをコードする核酸分子は、配列番号６をコードするヌクレオチド配列、配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるヌクレオチド配列、配列番号６をコードするヌクレオチド配列の断片、又は配列番号６をコードするヌクレオチド配列の断片と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるヌクレオチド配列を含み得る。ＩＬ１２のｐ４０サブユニットをコードする核酸分子は、配列番号８をコードするヌクレオチド配列、配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるヌクレオチド配列、配列番号８をコードするヌクレオチド配列の断片、又は配列番号８をコードするヌクレオチド配列の断片と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列を含み得る。ＩＬ１２のｐ３５サブユニットをコードする核酸分子は、配列番号５のヌクレオチド配列、配列番号５のヌクレオチド配列と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％同一であるヌクレオチド配列、配列番号５のヌクレオチド配列の断片、又は配列番号５のヌクレオチド配列の断片と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％同一であるヌクレオチド配列を含み得る。ＩＬ１２のｐ４０サブユニットをコードする核酸分子は、配列番号７のヌクレオチド配列、配列番号７のヌクレオチド配列と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％同一であるヌクレオチド配列、配列番号７のヌクレオチド配列の断片、又は配列番号７のヌクレオチド配列の断片と少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％同一であるヌクレオチド配列を含み得る。
記載の免疫原性組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、ｐＧＸ３０２４及びｐＧＸ６０１０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＮＯ－３１０７である。
本明細書で使用される場合、「緩衝液」は、その酸塩基コンジュゲート構成要素の作用によってｐＨの変化に抵抗する緩衝された溶液を指す。緩衝液は、概して、約４．０～約８．０、例えば、約５．０～約７．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、緩衝液は、生理食塩水－クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）緩衝液である。免疫原性組成物が、上述のＨＰＶ抗原をコードする核酸分子を含むベクターを含む、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、緩衝液、例えば、これに限定されないが、ＳＳＣ緩衝液中に６ｍｇ／ｍｌのベクターを含む。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、緩衝液中に６ｍｇ／ｍＬのＤＮＡプラスミドｐＧＸ３０２４を含む。免疫原性組成物が、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードする核酸分子を含む別個のベクターを更に含む、いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、緩衝液中に０．２５ｍｇ／ｍｌの別個のベクターを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、ＨＰＶ抗原をコードする核酸分子を含むベクター（例えば、ｐＧＸ３０２４）に加えて、緩衝液中に０．２５ｍｇ／ｍＬのＤＮＡプラスミドｐＧＸ６０１０を含む。
本発明による薬学的組成物は、使用される投与様式に従って製剤化される。薬学的組成物が注射可能な薬学的組成物である場合、それらは、滅菌、パイロジェンフリー、及び微粒子フリーである。等張性製剤が好ましくは使用される。一般に、等張性のための添加剤としては、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースを挙げることができる。いくつかの場合では、リン酸塩緩衝生理食塩水などの等張性溶液が好ましい。安定剤としては、ゼラチンやアルブミンが挙げられる。いくつかの実施形態では、血管収縮剤が製剤に添加される。
本明細書ではまた、本発明のワクチンを対象に投与することによって、疾患の治療、防御、及び／又は予防を必要とする対象における疾患を治療、防御、及び／又は予防する方法も提供される。ワクチンを対象に投与することにより、対象における免疫応答を誘導又は誘発し得る。したがって、対象に有効量の本発明のＨＰＶ抗原を投与し、それによって、免疫応答を誘導することを含む、対象における免疫応答を誘導する方法が提供される。
更に、ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、又はそれらの両方に対して対象を予防的又は治療的に免疫化する方法であって、対象に有効量の本発明のＨＰＶ抗原を投与し、それによって、ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、又はそれらの両方に対する免疫応答を誘導することを含む、方法が提供される。対象における再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を治療又は予防するための方法であって、対象に有効量の本発明のＨＰＶ抗原を投与し、ＲＲＰを治療又は予防することを含む、方法も提供される。
誘導された免疫応答は、疾患、例えば、ＨＰＶ感染症に関連する病態を治療、予防、及び／又は保護するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＨＰＶ抗原を対象に投与することによって、ＲＲＰの治療、保護、及び／又は予防を必要とする対象においてＲＲＰを治療、保護、及び／又は予防する方法が提供される。誘導された免疫応答は、ワクチンを投与された対象に１つ以上のＨＰＶ株への耐性を提供する。誘導された免疫応答には、誘導された体液性免疫応答及び／又は誘導された細胞性免疫応答が含まれ得る。
対象は、ヒト、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウサギ、モルモット、ラット、又はマウスなどの哺乳動物であり得る。
ワクチン用量は、１回の注射当たり１μｇ～１０ｍｇの総プラスミド、好ましくは１回の注射当たり６．２５ｍｇの総プラスミドであり得る。ワクチンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、又は３１日ごとに投与され得る。有効な治療のためのワクチン用量の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であり得る。
ワクチンは、予防的又は治療的に投与され得る。予防的投与では、ワクチンは、免疫応答を誘導するのに十分な量で投与され得る。治療用途では、ワクチンは、治療効果を誘発するのに十分な量で、それを必要とする対象に投与される。これを達成するのに適切な量は、「治療有効用量」として定義される。この使用に有効な量は、例えば、投与されるワクチンレジメンの特定の組成、投与方法、疾患の病期及び重症度、患者の一般的な健康の状態、並びに処方する医師の判断に依存するであろう。
ワクチンは、Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：６１７－６４８（１９９７））、Ｆｅｌｇｎｅｒら（米国特許第５，５８０，８５９号、１９９６年１２月３日発行）、Ｆｅｌｇｎｅｒ（米国特許第５，７０３，０５５号、１９９７年１２月３０日発行）、及びＣａｒｓｏｎら（米国特許第５，６７９，６４７号、１９９７年１０月２１日発行）に記載される当該技術分野で周知の方法によって投与され得、これらの全ての内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。ワクチンのＤＮＡは、例えば、ワクチンガンを使用して個体に投与され得る粒子又はビーズに複合体化され得る。当業者は、生理学的に許容される化合物を含む薬学的に許容される担体の選択が、例えば、発現ベクターの投与経路に依存することを知っているだろう。
記載される方法のいくつかの実施形態では、対象は、ｐＧＸ３０２４及びｐＧＸ６０１０を投与される。いくつかの実施形態では、ｐＧＸ３０２４及びｐＧＸ６０１０は、ＩＮＯ－３１０７として対象に投与される。いくつかの実施形態では、ｐＧＸ３０２４及びｐＧＸ６０１０は、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）中に６．２５ｍｇ総プラスミド／ｍＬ（６ｍｇ／ｍＬのｐＧＸ３０２４、０．２５ｍｇ／ｍＬのｐＧＸ６０１０）を含有するＩＮＯ－３１０７医薬品として対象に投与される。
ワクチンは、様々な経路を介して送達され得る。典型的な送達経路としては、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、又は皮下送達が挙げられる。他の経路としては、経口投与、鼻腔内投与、及び膣内投与が挙げられる。特に、ワクチンのＤＮＡについては、ワクチンは、個体の組織の間質空間に送達され得る（Ｆｅｌｇｎｅｒら、米国特許第５，５８０，８５９号及び同第５，７０３，０５５号、これら全ての内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ワクチンはまた、筋肉に投与され得るか、又は皮内若しくは皮下注射を介して、若しくはイオン透過などによって経皮的に投与され得る。ワクチンの表皮投与も用いられ得る。表皮投与は、刺激物に対する免疫応答を刺激するために、表皮の最外層を機械的又は化学的に刺激することを伴い得る（Ｃａｒｓｏｎら、米国特許第５，６７９，６４７号、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態によれば、ワクチンは、個体の免疫系の活性を調節し、それによってＲＲＰを治療するＨＰＶに対する免疫応答を増強するために、個体に送達される。本発明のＨＰＶ抗原をコードする核酸分子が個体の細胞によって取り込まれると、ヌクレオチド配列が細胞において発現され、それによってタンパク質が個体に送達される。プラスミドなどの核酸分子上のタンパク質のコード配列を、組換えワクチンの一部として及び弱毒ワクチンの一部として、単離されたタンパク質又はベクターの一部として送達する方法が提供される。
本方法は、対象に本発明のＨＰＶ抗原を投与することを含む。いくつかの態様では、本方法は、提供される核酸分子を導入し、続いてエレクトロポレーションするステップを含む。
開示される方法は、単一のプラスミドなどの単一の核酸分子の複数のコピー、又は２つ以上の異なるプラスミドなどの２つ以上の異なる核酸分子の複数のコピーの投与を含み得る。例えば、方法は、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個以上の異なる核酸分子の投与を含み得る。
特定の実施形態では、免疫応答を誘導する開示される方法、又はＲＲＰを予防若しくは治療する方法は、対象にアジュバントを投与することを更に含む。特定の実施形態では、アジュバントは、ＩＬ１２である。ＩＬ１２は、そのｐ３５及びｐ４０サブユニットの形態でワクチンに含まれ得る。アジュバントＩＬ－１２は、そのｐ３５及びｐ４０サブユニットとして対象に投与され得る。ＩＬ１２ｐ３５及びｐ４０サブユニットは、同じ発現ベクター又は別個の発現ベクターによってコードされ得る。一実施形態では、ＩＬ１２ｐ３５をコードする配列は、配列番号５に記載のとおりである。一実施形態では、ＩＬ１２ｐ３５サブユニットは、配列番号６に記載のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ＩＬ１２ｐ４０をコードする配列は、配列番号７に記載のとおりである。一実施形態では、ＩＬ１２ｐ４０サブユニットは、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、発現ベクターはｐＧＸ６０１２又はｐＧＸ６０１０である。特定の実施形態では、本方法は、臨床的に安全であることが証明されているか、臨床的に有効であることが証明されているか、又はそれらの両方である。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）本明細書に開示されるＨＰＶ抗原を含む免疫原性組成物、及び（ｂ）本明細書に開示される１つ以上のＩＬ－１２サブユニット（例えば、ｐ３５及び／又はｐ４０）をコードする核酸分子を含む組成物の同時投与を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示されるＨＰＶ抗原をコードする核酸分子を含む組成物の事前投与の後に、本明細書に開示される１つ以上のＩＬ－１２サブユニット（例えば、ｐ３５及び／又はｐ４０）をコードする核酸分子を含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される１つ以上のＩＬ－１２サブユニット（例えば、ｐ３５及び／又はｐ４０）をコードする核酸分子を含む組成物の事前投与の後に、本明細書に開示されるＨＰＶ抗原をコードする核酸分子を含む組成物を投与することを含む。
投与経路には、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼内、及び経口、並びに局所、経皮、吸入若しくは坐剤による、又は膣、直腸、尿道、頬側、及び舌下組織への洗浄などによる粘膜組織が含まれるこれらに限定されない。好ましい投与経路としては、筋肉内、腹腔内、皮内、及び皮下注射が挙げられる。遺伝子構築物は、エレクトロポレーション方法及び装置、従来の注射器、無針注射装置、又は「マイクロプロジェクタイル衝撃遺伝子銃」を含むが、これらに限定されない手段によって投与され得る。
ワクチンは、米国特許第７，６６４，５４５号に記載される方法などのエレクトロポレーションを介して投与され得、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。エレクトロポレーションは、米国特許第６，３０２，８７４号、同第５，６７６，６４６号、同第６，２４１，７０１号、同第６，２３３，４８２号、同第６，２１６，０３４号、同第６，２０８，８９３号、同第６，１９２，２７０号、同第６，１８１，９６４号、同第６，１５０，１４８号、同第６，１２０，４９３号、同第６，０９６，０２０号、同第６，０６８，６５０号、及び同第５，７０２，３５９号に記載される方法及び／又は装置によるものであり得、それらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。エレクトロポレーションは、低侵襲性装置を介して実施され得る。
低侵襲性エレクトロポレーション装置（「ＭＩＤ」）は、上述のワクチン及び関連する流体を体組織に注射するための装置であり得る。装置は、中空の針、ＤＮＡカセット、及び流体送達手段を備え得、装置は、当該体組織への針の挿入中にＤＮＡを体組織に同時に（例えば、自動的に）注射するように、使用中に流体送達手段を作動させるように適合される。これには、針が挿入されている間にＤＮＡ及び関連する流体を徐々に注射する能力が、体組織を通る流体のより均一な分布をもたらすという利点がある。注射中に経験する痛みは、より大きな区域にわたって注射されるＤＮＡの分布に起因して低減される可能性がある。
ＭＩＤは、針を使用せずにワクチンを組織に注射し得る。ＭＩＤは、ワクチンが組織の表面を貫通し、基礎となる組織及び／又は筋肉に入るような力で、ワクチンを小さな流れ又は噴出として注射し得る。小さな流れ又は噴出の背後にある力は、１秒の何分の１以内で微小オリフィスを通る二酸化炭素などの圧縮ガスの膨張によって提供され得る。低侵襲性エレクトロポレーション装置の例及びそれらを使用する方法は、米国特許出願第２００８／０２３４６５５号、米国特許第６，５２０，９５０号、同第７，１７１，２６４号、同第６，２０８，８９３号、同第６，００９，３４７号、同第６，１２０，４９３号、同第７，２４５，９６３号、同第７，３２８，０６４号、及び同第６，７６３，２６４号に記載されており、これらの各々の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ＭＩＤは、組織を痛みなく貫通する液体の高速噴出を生成する注射器を備え得る。かかる無針注射器は、市販されている。本明細書で利用され得る無針注射器の例には、米国特許第３，８０５，７８３号、同第４，４４７，２２３号、同第５，５０５，６９７号、及び同第４，３４２，３１０号に記載されているものが挙げられ、これらの各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
直接的又は間接的な電気輸送に好適な形態の所望のワクチンは、通常、組織へのワクチンの浸透を引き起こすのに十分な力で薬剤の噴出の送達を作動させるように組織表面を注射器と接触させることによって、治療される組織に無針注射器を使用して導入（例えば、注射）され得る。例えば、治療される組織が粘膜、皮膚又は筋肉である場合、薬剤がそれぞれ角質層を通って皮膚層に、又は基礎組織及び筋肉に浸透するのに十分な力で、薬剤が、粘膜又は皮膚表面に向かって発射される。
無針注射器は、全ての種類の組織、特に皮膚及び粘膜にワクチンを送達するのに十分に好適である。いくつかの実施形態では、無針注射器を使用して、ワクチンを含有する液体を表面及び対象の皮膚又は粘膜に推進することができる。本発明の方法を使用して治療され得る様々な種類の組織の代表例としては、膵臓、喉頭、鼻咽頭、下咽頭、口腔咽頭、唇、喉、肺、心臓、腎臓、筋肉、乳房、結腸、前立腺、胸腺、精巣、皮膚、粘膜組織、卵巣、血管、又はそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
ＭＩＤは、組織をエレクトロポレーションする針電極を有し得る。例えば、長方形又は正方形のパターンで設定された複数の電極アレイ中の複数の電極対の間でパルスすることにより、一対の電極間のパルスのものに対して改善された結果を提供する。例えば、「Ｎｅｅｄｌｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ ｆｏｒ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｇｅｎｅｓ」と題される米国特許第５，７０２，３５９号には、治療的処置中に複数の対の針がパルスされ得る針のアレイが開示される。完全に記載されているかのように参照により本明細書に組み込まれるその出願では、針は円形アレイに配置されたが、対向する対の針電極間のパルスを可能にするコネクタ及び切替装置を有する。組換え発現ベクターを細胞に送達するための一対の針電極が使用され得る。かかる装置及びシステムは、米国特許第６，７６３，２６４号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、ＤＮＡの注射及び通常の注射針に似た単一針によるエレクトロポレーションを可能にし、かつ現在使用されている装置によって送達されるものよりも低い電圧のパルスを印加し、したがって、患者が経験する電気的感覚を低減する、単一針の装置が使用され得る。
ＭＩＤは、１つ以上の電極アレイを備え得る。アレイは、同じ直径又は異なる直径の２つ以上の針を備え得る。針は、均等に又は不均等に間隔をあけてよい。針は、０．００５インチ～０．０３インチ、０．０１インチ～０．０２５インチ、又は０．０１５インチ～０．０２０インチであり得る。針は、直径が０．０１７５インチであり得る。針は、０．５ｍｍ、１．０ｍｍ、１．５ｍｍ、２．０ｍｍ、２．５ｍｍ、３．０ｍｍ、３．５ｍｍ、４．０ｍｍ、又はそれ以上間隔をあけてもよい。
ＭＩＤは、ワクチン及びエレクトロポレーションパルスを単一のステップで送達する、パルス発生器及び２つ以上の針ワクチン注射器からなり得る。パルス発生器は、フラッシュカード操作のパーソナルコンピュータを介したパルス及び注射パラメータの柔軟なプログラミング、並びにエレクトロポレーション及び患者データの包括的な記録及び保存を可能にし得る。パルス発生器は、短時間に様々なボルトのパルスを送達し得る。例えば、パルス発生器は、持続して１００ｍｓの１５ボルトのパルスを３つ送達し得る。そのようなＭＩＤの例は、Ｉｎｏｖｉｏ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによるＥｌｇｅｎ １０００システムであり、それは、米国特許第７，３２８，０６４号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ＭＩＤは、身体又は植物の選択された組織の細胞にＤＮＡなどの巨大分子を導入するのを容易にする、モジュール式電極システムであるＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）（Ｉｎｏｖｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｂｌｕｅ Ｂｅｌｌ Ｐａ．）装置及びシステムであり得る。モジュール式電極システムは、複数の針電極、皮下針、プログラム可能な定電流パルス制御器から複数の針電極までのコンダクティブ連結を提供する電気コネクタ、及び電源を備え得る。操作者は、支持構造上に取り付けられた複数の針電極を把握し、それらを体内又は植物内の選択された組織に確実に挿入することができる。次いで、巨大分子は、皮下針を介して選択された組織に送達される。プログラム可能な定電流パルスコントローラが作動し、定電流電気パルスが複数の針電極に印加される。印加される定電流電気パルスは、複数の電極間の細胞への巨大分子の導入を容易にする。細胞の過熱による細胞死は、定電流パルスの効力によって組織中の消費電力を制限することによって最小限に抑えられる。ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ装置及びシステムは、米国特許第７，２４５，９６３号に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）装置は、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ２０００（登録商標）装置又はＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）３ＰＳＰ装置であり得る。ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００装置は、製造業者によって、ＩＤ（皮内）又はＩＭ（筋肉内）投与のいずれかを支持するように構成されている。ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（商標）２０００には、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（商標）パルス発生器、適切なアプリケータ、使い捨て滅菌アレイ、使い捨てシース（ＩＤのみ）が含まれている。ＤＮＡプラスミドは、エレクトロポレーション処置の直前に電極によって画定される区域において、針及びシリンジの注射を介して別々に送達される。
ＭＩＤは、Ｅｌｇｅｎ１０００システム（Ｉｎｏｖｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）であり得る。Ｅｌｇｅｎ１０００システムは、中空針を提供する装置、及び流体送達手段を備え得、装置は、当該体組織への針の挿入中に、液体の本明細書に記載のワクチンを体組織に同時に（例えば、自動的に）注射するように、使用中に流体送達手段を作動させるように適合される。利点は、針が挿入されている間に流体を徐々に注射することができ、体組織を通る流体のより均一な分布をもたらすことである。注射中に経験する痛みは、より大きな領域にわたって注射される流体の体積の分布に起因して低減されるとも考えられる。
加えて、液体の自動注射は、注射された液体の実際の用量の自動監視及び登録を容易にする。このデータは、必要に応じて、文書化のための制御ユニットによって保存され得る。
注射の速度は、線形又は非線形であり得、注射は、針が治療される対象の皮膚を通って挿入された後に、かつそれらが体組織に更に挿入されている間に実施され得ることは、理解されるであろう。本発明の装置によって流体が注射され得る好適な組織には、腫瘍組織、皮膚、又は筋肉組織が挙げられる。
装置は、針の体組織への挿入を誘導するための針挿入手段を更に備える。流体注射の速度は、針の挿入速度により制御される。これには、針の挿入及び流体の注射の両方が、挿入速度が所望に応じて注射速度に一致するように制御され得るという利点がある。それはまた、装置をユーザが操作するのを容易にする。所望される場合、針を体組織に自動的に挿入するための手段が提供され得る。
ユーザは、液体の注射を開始するタイミングを選択することができる。しかしながら、理想的には、注射は、針の先端が筋肉組織に達したときに開始され、装置は、針が流体の注射を開始するのに十分な深さまで挿入されたときに感知するための手段を含み得る。これは、針が所望の深さ（通常、筋肉組織が開始する深さ）に達したときに、流体の注射を自動的に開始するように促すことができることを意味する。筋肉組織が始まる深さは、例えば、針が皮膚層を通過するのに十分であるとみなされる４ｍｍの値などの予め設定された針の挿入深さとすることができる。
感知手段は、超音波プローブを備え得る。感知手段は、インピーダンス又は抵抗の変化を感知する手段を含み得る。この場合、手段は、体組織内の針の深さを記録するようなものではなく、むしろ、針が異なる種類の体組織から筋肉に移動するときに、インピーダンス又は抵抗の変化を感知するように適合され得る。これらの代替案のいずれかは、注射が開始され得る感知手段を比較的正確かつ簡単に操作することを提供する。所望される場合、針の挿入深さを更に記録することができ、針の挿入深さが記録されるにつれて注射される流体の体積が決定されるように、流体の注射を制御するために使用され得る。
装置は、針を支持するための基部、及びその中に基部を受容するための筐体を更に備えてもよく、針は、基部が筐体に対して第１の後方位置にあるとき、筐体内に格納され、針は、基部が筐体内の第２の前方位置にあるとき、筐体外に延在するように、筐体に対して移動可能である。これは、筐体を患者の皮膚上に並べることができ、次いで基部に対して筐体を移動させることによって針を患者の皮膚に挿入することができるため、ユーザにとって有利である。
上述したように、流体が皮膚に挿入されるにつれて針の長さにわたって均等に分布するように、制御された流体注射の速度を達成することが望ましい。流体送達手段は、制御された速度で流体を注射するように適合されたピストン駆動手段を備え得る。ピストン駆動手段を、例えば、サーボモータによって作動させることができる。しかしながら、ピストン駆動手段は、基部が筐体に対して軸方向に移動されることによって作動され得る。流体送達のための代替手段が提供され得ることは、理解されるであろう。したがって、例えば、制御された速度又は制御されていない速度で流体送達のために圧縮され得る閉鎖容器は、シリンジ及びピストンシステムの代わりに提供され得る。
上述の装置は、任意の種類の注射に使用され得る。しかしながら、それは、エレクトロポレーションの分野で特に有用であることが想定され、したがって、それは、針に電圧を印加するための手段を更に含み得る。これにより、針を注射だけでなく、エレクトロポレーション中の電極としても使用することができる。これは、電界が、注射された流体と同じ区域に印加されることを意味するため、特に有利である。従来、電極を先に注射された流体と正確に位置合わせすることは非常に困難であるため、ユーザは、より大きな区域にわたって必要とされるよりも多量の流体を注射し、より広い区域にわたって電場を印加して、注射された物質と電場との間の重複を保証しようとする傾向があったという、エレクトロポレーションの問題があった。本発明を使用して、注射される流体の体積及び印加される電界のサイズの両方が、電界と流体との間の良好な適合を達成しながら低減され得る。
更に、本明細書では、上記のワクチン接種方法を使用して対象を治療するために使用され得るキットが提供される。キットは、ワクチンを含み得る。キットはまた、上述のワクチン接種方法及び／又はキットの使用方法を実施するための説明書を含み得る。キットに含まれる説明書は、梱包材に貼付することができ、又は添付文書として含むことができる。説明書は典型的には書面又は印刷物であるが、かかるものに限定されない。説明書を保管し、それらをエンドユーザに伝達することが可能な任意の媒体が、本開示によって企図される。かかる媒体には、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ）、光学媒体（例えば、ＣＤ ＲＯＭ）などが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「説明書」という用語は、説明書を提供するインターネットサイトのアドレスを含み得る。
例示的な実施形態
実施形態１．ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原をコードする核酸分子であって、ＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む、核酸分子。
実施形態２．ＨＰＶ６抗原性ドメインが、ＨＰＶ６ Ｅ６－Ｅ７融合抗原である、実施形態１に記載の核酸分子。
実施形態３．ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ１１ Ｅ６－Ｅ７融合抗原である、実施形態１又は２に記載の核酸分子。
実施形態４．ＨＰＶ抗原が、
配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、又は
配列番号１若しくは配列番号１１と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子。
実施形態５．
配列番号２若しくは配列番号１２と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、
配列番号２のヌクレオチド配列、又は
配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子。
実施形態６．ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列が、ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列の５’に位置する、先行実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子。
実施形態７．ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、先行実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子。
実施形態８．ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、実施形態２に記載の核酸分子。
実施形態９．ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、実施形態４に記載の核酸分子。
実施形態１０．先行実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
実施形態１１．ＤＮＡプラスミドを含む、実施形態１０に記載の発現ベクター。
実施形態１２．配列番号３のヌクレオチド配列を含む、実施形態１０に記載の発現ベクター。
実施形態１３．ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む、免疫原性タンパク質。
実施形態１４．ＨＰＶ６抗原性ドメインが、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインを含む、実施形態１４に記載の免疫原性タンパク質。
実施形態１５．ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインを含む、実施形態１３又は１４に記載の免疫原性タンパク質。
実施形態１６．
配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、又は
配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質。
実施形態１７．ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ６抗原のＮ末端に位置する、実施形態１３～１６のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質。
実施形態１８．ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、実施形態１３～１７のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質。
実施形態１９．ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、実施形態１４に記載の免疫原性タンパク質。
実施形態２０．ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、実施形態１５に記載の免疫原性タンパク質。
実施形態２１．実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子又は実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、ワクチン。
実施形態２２．実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子又は実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
実施形態２３．アジュバントを含む、実施形態２２に記載の薬学的組成物。
実施形態２４．アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）を含む、実施形態２３に記載の薬学的組成物。
実施形態２５．ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、実施形態２４に記載の薬学的組成物。
実施形態２６．ＩＬ１２をコードする核酸分子が、発現ベクターである、実施形態２５に記載の薬学的組成物。
実施形態２７．実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質を含む、ワクチン。
実施形態２８．実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
実施形態２９．アジュバントを含む、実施形態２８に記載の薬学的組成物。
実施形態３０．アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）を含む、実施形態２９に記載の薬学的組成物。
実施形態３１．アジュバントが、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、実施形態２３又は２９に記載の薬学的組成物。
実施形態３２． ＩＬ１２のｐ３５サブユニットをコードするヌクレオチド配列が、
配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の薬学的組成物。
実施形態３３． ＩＬ１２のｐ４０サブユニットをコードするヌクレオチド配列が、
配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態３１又は３２に記載の薬学的組成物。
実施形態３４． ＩＬ１２をコードするヌクレオチド配列が、
配列番号４のヌクレオチド配列、又は
配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態３１、３２又は３３に記載の薬学的組成物。
実施形態３５．ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子が、発現ベクターである、実施形態３１～３４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
実施形態３６．ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードする核酸分子を含む発現ベクターが、ＨＰＶ抗原をコードする核酸分子を含む発現ベクターと同じ発現ベクター又は異なる発現ベクターである、実施形態３５に記載の薬学的組成物。
実施形態３７．薬学的に許容される賦形剤が、緩衝液、任意に、生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液、任意に、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）を含む緩衝液を含む、実施形態２２～２６又は２８～３６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
実施形態３８．組成物が、生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液１ミリリットル当たり６ｍｇのＨＰＶ抗原をコードするベクターと、緩衝液１ミリリットル当たり０．２５ｍｇのＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするベクターと、を含む、実施形態３７に記載の薬学的組成物。
実施形態３９．薬学的組成物が、生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液１ミリリットル当たり６ｍｇのｐＧＸ３０２４と、緩衝液１ミリリットル当たり０．２５ｍｇのｐＧＸ６０１０と、を含む、実施形態３８に記載の薬学的組成物。
実施形態４０．対象における免疫応答を誘導する方法であって、対象に、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター、実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質、実施形態２１～２７に記載のワクチン、又は実施形態２２～２６若しくは２８～３９のいずれか１つに記載の薬学的組成物を投与し、それによって、免疫応答を誘導することを含む、方法。
実施形態４１．対象をＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１に対して予防的又は治療的に免疫化する方法であって、対象に、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター、実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質、実施形態２１～２７に記載のワクチン、又は実施形態２２～２６若しくは２８～３９のいずれか１つに記載の薬学的組成物を投与し、それによって、ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、又はそれらの両方に対する免疫応答を誘導することを含む、方法。
実施形態４２．対象における再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を治療又は予防するための方法であって、対象に、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター、実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質、実施形態２１～２７に記載のワクチン、又は実施形態２２～２６若しくは２８～３９のいずれか１つに記載の薬学的組成物を投与し、それによって、ＲＲＰを治療又は予防することを含む、方法。
実施形態４３．ＲＲＰが、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰである、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４４．核酸分子が、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、実施形態４０～４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４５．アジュバントを対象に投与することを更に含む、実施形態４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４６．アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４７．ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、実施形態４６に記載の方法。
実施形態４８．アジュバントが、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４９． ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットをコードするヌクレオチド配列が、
配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５０． ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットをコードするヌクレオチド配列が、
配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態４８又は４９に記載の方法。
実施形態５１．ＩＬ１２をコードする核酸分子が、
配列番号４のヌクレオチド配列、又は
配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態４７に記載の方法。
実施形態５２．ＩＬ１２をコードする核酸分子が、発現ベクター、任意に、プラスミドである、実施形態４７に記載の方法。
実施形態５３．プラスミドが、ｐＧＸ６０１０である、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５４．対象が、ヒトである、実施形態４０～５３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５５．投与が、皮内又は筋肉内注射を含む、実施形態４０～５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５６．投与が、エレクトロポレーションを更に含む、実施形態５５に記載の方法。
実施形態５７．予防薬又は医薬品の製造における、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター又は実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質の、使用。
実施形態５８．ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６又はＨＰＶ１１感染症を予防又は治療するための、予防薬又は医薬品の製造における、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター又は実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質の、使用。
実施形態５９．ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６又はＨＰＶ１１感染症を予防又は治療するための、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター、実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質、実施形態２１～２７に記載のワクチン、又は実施形態２２～２６若しくは２８～３９のいずれか１つに記載の薬学的組成物の、使用。
実施形態６０．再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を予防又は治療するための、有効量の実施形態１～９のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１０～１２のいずれか１つに記載の発現ベクター、実施形態１３～２０のいずれか１つに記載の免疫原性タンパク質、実施形態２１～２７に記載のワクチン、又は実施形態２２～２６若しくは２８～３９のいずれか１つに記載の薬学的組成物の、使用。
実施形態６１．ＲＲＰが、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰである、実施形態６０に記載の使用。
実施形態６２．核酸分子が、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、実施形態５７～６１のいずれか１つに記載の使用。
実施形態６３．アジュバントと組み合わせた、実施形態５７～６２のいずれか１つに記載の使用。
実施形態６４．アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である、実施形態６３に記載の使用。
実施形態６５．ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、実施形態６４に記載の使用。
実施形態６６．アジュバントが、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、実施形態６５に記載の使用。
実施形態６７． ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットをコードするヌクレオチド配列が、
配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態６６に記載の使用。
実施形態６８． ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットをコードするヌクレオチド配列が、
配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態６６又は６７に記載の使用。
実施形態６９．ＩＬ１２をコードする核酸配列が、
配列番号４のヌクレオチド配列、又は
配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態６５に記載の使用。
実施形態７０．ＩＬ１２をコードする核酸分子が、発現ベクター、任意に、プラスミドである、実施形態６５に記載の使用。
実施形態７１．プラスミドが、ｐＧＸ６０１０である、実施形態７０に記載の使用。
本発明は、以下の実施例において更に示される。これらの実施例は、本発明の実施形態を示すが、例示としてのみ提供されることを理解される必要がある。上記の考察及びこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的な特徴を確認することができ、その趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な用途及び条件に適応するために本発明の様々な変更及び修正を行うことができる。よって、本明細書に示され、記載されるものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の記載から当業者に明らかとなるであろう。そのような修正はまた、添付の特許請求の範囲内に該当することが意図される。
本開示を通して引用される米国特許、米国出願、及び参考文献の各々は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６／Ｅ７コンセンサスベースの融合免疫原ＤＮＡ構築物の生成
ＧｅｎＢａｎｋから得られた配列を使用して、ＨＰＶ６ Ｅ６／Ｅ７及びＨＰＶ１１ Ｅ６／Ｅ７コンセンサス配列を生成した。ＨＰＶ６ Ｅ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６タンパク質に２つの点変異を導入して、ｐ５３に結合及び分解する能力を阻害した。ＨＰＶ６ Ｅ７及びＨＰＶ１１ Ｅ７タンパク質に１つの点変異を導入して、ｐ１３０の結合を無効にした。配列を、Ｉｎｏｖｉｏの独自の遺伝子最適化アルゴリズムを使用して最適化した。図１Ａは、異なるＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１プラスミドにコードされる抗原の概略図を示す。個々の抗原は、翻訳スキップのためのＰ２Ａ切断部位、及びＰ２Ａ配列の翻訳後切断のためのフーリン切断部位によって分離されている。ＤＮＡプラスミドｐＧＸ３０２４は、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１の両方のコンセンサスＳｙｎＣｏｎ（登録商標）Ｅ６及びＥ７抗原をコードする。図１Ｂは、ｐＧＸ３０２４のプラスミドマップを提供する。
インビトロトランスフェクション及びウエスタンブロット分析
インビトロでのｐＧＸ３０２４の発現。ｐＧＸ３０２４媒介ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原発現を、ｐＧＸ３０２４プラスミドでのＨＥＫ－２９３Ｔ細胞のインビトロトランスフェクション後のウエスタンブロット分析により確認した。ＨＰＶ６又はＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原（のいずれかをコードするプラスミドそれぞれ、ｐＧＸ３０２１及びｐＧＸ３０２２）でトランスフェクションされた細胞は、陽性対照として機能し、空のプラスミド骨格（ｐＧＸ０００１）でトランスフェクションされた細胞は、陰性対照として機能した。
ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を、６ウェルの組織培養皿にトランスフェクションの前日に８０％コンフルエントで播種した。翌日、細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００トランスフェクション試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、製造業者の推奨に従って、３μｇのプラスミドＤＮＡでトランスフェクションした。トランスフェクションの４８時間後、細胞溶解物を採取し、タンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｑｕｉｃｋ Ｓｔａｒｔ（商標）Ｂｒａｄｆｏｒｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ、ＢｉｏＲａｄ）によって決定した。３０マイクロガム（３０μｇ）の細胞溶解物を、１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓアクリルアミドゲル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に充填し、ＰＶＤＦ膜に移した。Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｌｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ（商標）Ｄｕａｌ Ｘｔｒａ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号１６１０３７７）を分子量参照として充填した。移動後、ブロットを１×ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０で洗浄し、１×ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０／５％Ｍｉｌｋ中で室温で１時間ブロッキングした後、希釈した抗ＨＰＶ１１ Ｅ７（Ｇｅｎｅｔｅｘ）で一晩、室温で一晩プロービングした。翌日、ブロットを洗浄し、次いで、抗マウスＩｇＧ ＨＲＰ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）１：１０，０００で１時間、室温でインキュベーションし、次いで、再度洗浄した。検出のため、ブロットを、ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ Ｗｅｓｔｅｒｎブロッティング基質（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ａｍｅｒｓｈａｍカタログ番号ＲＰＮ２２３２／８９１６８－７８２）で５分間インキュベーションした。ブロットを、化学発光によってＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ ＦｌｕｏｒＣｈｅｍ（登録商標）で画像化した。検出後、１５分間Ｒｅｓｔｏｒｅ試薬（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、ｃａｔ＃２１０５９）を添加することによってブロットを剥離し、次いで、洗浄し、抗－２Ａ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）又は抗β－アクチン（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でプロービングし、以前のように現像した。
図２に示すように、Ｅ６及びＥ７タンパク質は、ｐＧＸ３０２４並びに対照ｐＧＸ３０２１及びｐＧＸ３０２２プラスミドでトランスフェクションされた細胞においては検出されたが、陰性対照ｐＧＸ０００１プラスミドでは検出されなかった。Ｅ７タンパク質の発現は、市販の抗ＨＰＶ１１ Ｅ７抗体を使用して検出した（図２、左パネル）。Ｅ７タンパク質は、ｐＧＸ３０２４でトランスフェクションされた細胞においては検出されたが、陰性対照ｐＧＸ０００１プラスミドでは検出されなかった。Ｅ７抗原は、ＨＰＶ６抗原のみのプラスミド（ｐＧＸ３０２１）及びＨＰＶ１１抗原のみのプラスミド（ｐＧＸ３０２２）でトランスフェクションされた細胞で検出され、抗ＨＰＶ１１ Ｅ７抗体がＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原の両方に対して交差反応性であることを示し、ｐＧＸ３０２４トランスフェクションされた細胞で検出されたバンドがＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７タンパク質発現の両方を表すことを示唆した。
複数の市販の試薬を評価した後、ＨＰＶ６又はＨＰＶ１１ Ｅ６タンパク質を特異的に認識した抗体は同定できなかった。しかしながら、抗ＨＰＶ１１ Ｅ７プローブを使用して、Ｅ７及びＥ７－フーリン／Ｐ２Ａについてそれぞれ、約１０．７ｋＤａ及び約１３ｋＤａの予測分子量で２つの特異的なバンドが検出され、このインビトロ系におけるＰ２Ａ配列の部分的なフーリン切断が示された（図２、左パネル）。したがって、Ｅ６及びＥ７抗原発現の両方が、部分的に切断されたタンパク質産物に対する抗２Ａ抗体プローブを使用して検出することができた（図２、中央パネル）。抗２Ａ抗体でプロービングした後、ｐＧＸ３０２４でトランスフェクションされた細胞では、約２０ｋＤａのＥ６－フーリン／Ｐ２Ａを表すバンドが検出されたが、対照のｐＧＸ０００１でトランスフェクションされた細胞では検出されなかった。また、ｐＧＸ３０２４をトランスフェクションした細胞では約１５ｋＤａのＥ７－フーリン／Ｐ２Ａバンドを検出したが、対照ｐＧＸ０００１をトランスフェクションした細胞では検出せず、抗ＨＰＶ１１ Ｅ７プローブを使用して検出したものと一致する。
マウスＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ
ｐＧＸ３０２４を、２つのマウスモデルにおける免疫原性について評価した（図３～６）。ＤＮＡワクチンｐＧＸ３０２４で誘導した細胞性及び体液性免疫応答は、２つの独立した研究におけるＣ５７ＢＬ／６マウスモデルにおいて特徴付けられた。雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（研究１又は研究２それぞれにおいて群当たりｎは５又は１０）は、２０μｇのｐＧＸ３０２４又は対照ＤＮＡワクチンの筋肉内エレクトロポレーション（ＩＭ－ＥＰ）送達によって２週間間隔で２回の免疫化を受けた。ＨＰＶ６／ＨＰＶ１１ Ｅ６又はＥ７ペプチドでの脾細胞刺激後、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔによって、２回目の免疫化の１週間後にＴ細胞応答を測定した。安楽死後、マウス脾臓を単離し、５ｍｌのＲ１０培地（１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び０．００１％ ２－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ１６４０）を含有するチューブに入れた。脾細胞を、ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して脾臓を機械的に破壊することによって単離し、次いで、４０μｍのセルストレーナー（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）を使用して濾過した。遠心分離後、再懸濁した細胞ペレットをＡＣＫ溶解緩衝液（Ｌｏｎｚａ）で５分間処理し、赤血球を溶解した。ＰＢＳで脾細胞を洗浄し、遠心分離し、Ｒ１０培地に再懸濁し、Ｖｉ－ｃｅｌｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して計数した。マウスＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔキットをＭａｂＴｅｃｈから購入し（ＭａｂＴｅｃｈ番号３３２１－４ＡＰＷ－１０）、抗原特異的応答を評価した。予めコーティングされた９６ウェルプレートを、製造業者のプロトコルに従ってＰＢＳで洗浄し、Ｒ１０培地で、室温で２時間ブロッキングした。単離された脾細胞を、Ｒ１０培地に再懸濁し、ウェル当たり２×１０５細胞で、３重で播種した。ＨＰＶ６ Ｅ６及びＥ７タンパク質、並びにＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７タンパク質の重複した１５ｍｅｒペプチドを合成した。それらのペプチドをＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）に再懸濁し、細胞刺激のためにペプチド当たり約２μｇ／ｍｌの濃度で各抗原（ＨＰＶ６ Ｅ６、ＨＰＶ６ Ｅ７、ＨＰＶ１１ Ｅ６、及びＨＰＶ１１ Ｅ７）当たり２つのペプチドプールにプールした。陽性対照として、コンカナバリンＡ（Ｓｉｇｍａ）を５μｇ／ｍｌで使用し、ＤＭＳＯを有する完全培地を陰性対照として使用した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で最低１８時間インキュベーションした。発現のために、プレートを最初にＰＢＳで洗浄し、次いで、ビオチン化抗マウスＩＦＮ－γ検出抗体（Ｒ４－６Ａ２－ビオチン）で、室温で２時間インキュベーションした。洗浄後、次いで、プレートをストレプトアビジン－ＡＬＰ（ＭａｂＴｅｃｈ番号３３２１－４ＡＰＷ－１０）とともに室温で１時間インキュベーションした。製造業者の指示（ＭａｂＴｅｃｈ）に従って、濾過した基質溶液（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ－ｐｌｕｓ）を使用してスポットを検出した。プレートが乾燥したら、自動ＥＬＩＳｐｏｔリーダー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して計数した。平均スポット形成単位（ＳＦＵ）を１×１０６個の脾臓細胞に調整し、抗原特異的応答をＤＭＳＯ対照よりも大きい１×１０６個の脾臓細胞当たりのＩＦＮ－γ ＳＦＵの数として報告した。
ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１特異的Ｔ細胞応答は、ｐＧＸ３０２４での免疫化後のマウスで検出されたが、陰性対照ｐＧＸ０００１プラスミドでは検出されなかった（図３）。一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの事後検定によって決定したように、ｐＧＸ３０２４で免疫化したマウスにおけるＴ細胞応答には、ｐＧＸ３０２１及び／又はｐＧＸ３０２２で免疫化したマウスと比較して有意差はなかった（図３）。ｐＧＸ３０２４による免疫化は、ＨＰＶ６ Ｅ７、ＨＰＶ１１ Ｅ６、及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対するＴ細胞応答を誘導したが、このモデルではＨＰＶ６ Ｅ６抗原は誘導しなかった。近交系Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、このモデルにおけるＨＰＶ６ Ｅ６細胞応答の欠如を説明し得る単一のＭＨＣハプロタイプ（Ｈ２ｂ）を有する。Ｔ細胞応答は、２つの独立した研究間で高度に再現可能であった。
ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対する抗体を、免疫化前（第０週目）、並びにｐＧＸ３０２４又は陰性対照プラスミド（ｐＧＸ０００１）のいずれかでの第１（第２週目）及び第２（第３週目）の免疫化後に採取した血清試料における結合ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって測定した。
ＩｇＧ抗原結合ＥＬＩＳＡ
９６ウェル高結合Ｎｕｎｃ（商標）プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、１×ＤＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中の０．５μｇ／ｍｌの各タンパク質（ＨＰＶ６ Ｅ７及びＨＰＶ１１ Ｅ７－Ｔｕｌｉｐ ＢｉｏＬａｂｓ）で、４℃で一晩コーティングした。翌日、プレートを１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０で洗浄し、ＰＢＳ＋Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０中の３％ＢＳＡで２時間、３７℃でブロッキングした。次いで、プレートを以前のように洗浄し、連続希釈した血清試料を添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、１：１０，０００希釈の抗マウス又はウサギＩｇＧ ＨＲＰ二次抗体（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）とともに、室温で１時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、１００μｌ／ウェルのＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＰ基質（ＫＰＬ５１２０－００７７）をプレートに添加した。６分間のインキュベーション後、１００ｕｌ／ウェルのＴＭＢ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＫＰＬ５１５０－００２１）を添加して反応を停止し、プレートを、４５０ｎｍの波長でＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーで読み取った。
ＨＰＶ６ Ｅ７結合抗体は、第１及び第２の免疫化後のｐＧＸ３０２４で免疫化されたマウスにおいて検出されたが、ｐＧＸ０００１で免疫化されたマウスにおいては検出されなかった（図４、左パネル）。概して、ＨＰＶ１１ Ｅ７結合抗体は、免疫化マウスでのＨＰＶ６ Ｅ７結合抗体と比較して低減したが、しかしながら、ｐＧＸ３０２４で免疫化したマウスでの２回の免疫化（第３週目）後のＨＰＶ１１ Ｅ７結合抗体は、ｐＧＸ０００１と比較して、より大きかった（図４、右パネル）。
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるｐＧＸ３０２４免疫原性。前述のように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、このモデルにおけるＨＰＶ６ Ｅ６細胞応答の欠如を説明し得る単一のＭＨＣハプロタイプ（Ｈ２ｂ）を有する。したがって、ｐＧＸ３０２４ワクチンで誘導された細胞応答は、異なるＭＨＣハプロタイプ（Ｈ２ｄ）を有するＢＡＬＢ／ｃマウスモデルにおいて調査された。ｐＧＸ３０２４用量及びマウスＩＬ－１２アジュバント（ｐＧＸ６０１２）をコードするプラスミドとの組み合わせの影響も調査した。雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（群当たりｎは６）は、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、又は２０μｇのｐＧＸ３０２４ ＤＮＡワクチン単独、又は２μｇ若しくは１１μｇのｐＧＸ６０１２マウスＩＬ－１２プラスミドのいずれかでアジュバントされた５μｇ ｐＧＸ３０２４の筋肉内エレクトロポレーション（ＩＭ－ＥＰ）送達によって２週間間隔で２回の免疫化を受けた。４０μｇの空のｐＧＸ０００１プラスミドで免疫化したマウスは、陰性対照として機能した。図５に示すように、ＨＰＶ６／ＨＰＶ１１ Ｅ６又はＥ７ペプチドでの脾細胞刺激後、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔによって、２回目の免疫化の１週間後にＴ細胞応答を測定した。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１特異的Ｔ細胞応答は、全ての用量レベルのｐＧＸ３０２４での免疫化後のマウスで検出されたが、ｐＧＸ０００１プラスミドでは用量関連して検出されなかった。総ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１細胞応答は、ｐＧＸ３０２４用量の増加とともに増加した。Ｃ５７ＢＬ／６モデルとは異なり、ｐＧＸ３０２４免疫化ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原、並びにＨＰＶ６ Ｅ７、ＨＰＶ１１ Ｅ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対するＴ細胞応答を有した。一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの事後検定によって決定したように、ｐＧＸ６０１２の用量レベルのいずれかの有無にかかわらず５μｇのｐＧＸ３０２４で免疫化したマウス間のＴ細胞応答に有意差はなかった。
ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対する抗体は、免疫化前（第０週目）並びに５μｇ、１０μｇ若しくは２０μｇのｐＧＸ３０２４ ＤＮＡワクチン単独で、又は２μｇのマウスＩＬ－１２プラスミド（ｐＧＸ６０１２）でアジュバントされた５μｇのｐＧＸ３０２４での、第１（第２週目）及び第２（第３週目）の免疫化後に採取された血清試料における結合ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって測定した。４０μｇの空のｐＧＸ０００１プラスミドで免疫化したマウス由来の血清は、陰性対照として機能した。ＨＰＶ６ Ｅ７及びＨＰＶ１１ Ｅ７結合抗体は、用量又はＩＬ－１２プラスミドの存在に関係なく、ｐＧＸ３０２４で免疫化したＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、第０週目と比較して第３週目に有意に増加したが、ｐＧＸ０００１マウスにおいては増加しなかった（図６）。抗体レベルも、２０μｇのｐＧＸ３０２４、又は２μｇのマウスＩＬ－１２プラスミドでアジュバントされた５μｇのｐＧＸ３０２４での単回免疫化（第２週目）後に有意に増加した。特に第２週目の時点で、マウスＩＬ－１２を５μｇのｐＧＸ３０２４に添加することで、両方の抗原に対する結合抗体が増加傾向にあった。
ウサギ免疫原性研究
ＩＮＯ－３１０７（ｐＧＸ３０２４、ｐＧＸ６０１０）をウサギモデルにおける免疫原性及び安全性について評価した。
ニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）ウサギ（群当たりｎは５）は、大腿四頭筋への筋肉内（ＩＭ）注射、続くＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００エレクトロポレーション装置を使用したエレクトロポレーション（ＥＰ）によって、ＩＮＯ－３１０７（１ｍＬの１×ＳＳＣ中に共製剤化された６ｍｇのｐＧＸ３０２４及び０．２５ｍｇのｐＧＸ６０１０）、又は１ｍＬの１×ＳＳＣ（陰性対照）の３週間間隔の４回の免疫化を受けた。細胞性及び体液性免疫応答を、免疫化前（第０週目）及び各免疫化の２週間後（第２週目、第５週目、第８週目及び第１１週目）にそれぞれ、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ及びＩｇＧ結合ＥＬＩＳＡによって評価した。体重、血液学、血清化学、及び一般的な外観を含む生理学的パラメータを、ワクチンの安全性及び動物の健康の指標として、研究全体を通して監視した。
ＨＰＶ６／ＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７ペプチドでのＰＢＭＣの刺激後、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによってウサギ細胞応答を評価した。ＳｅｐＭａｔｅ－１５ｍｌチューブに、３．５ｍｌのＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配を充填し、室温で平衡化させた。全血をＫ２ＥＤＴＡチューブに採取し、続いて数回反転して混合させた。血液をハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）で希釈し、ＳｅｐＭａｔｅチューブ中のＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配の上部にゆっくりと重層した。チューブを回転させ、バフィーコートを回収し、新鮮な１５ｍｌチューブに入れた。細胞を、Ｒ１０培地（１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び０．００１％ ２－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ１６４０）で希釈することによって洗浄した。細胞ペレットをＡＣＫ溶解緩衝液（Ｌｏｎｚａ）に再懸濁して赤血球を溶解し、室温で４分間インキュベーションした。ＰＢＭＣを洗浄し、回転させ、Ｒ１０培地に再懸濁し、Ｖｉ－ｃｅｌｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して計数した。ウサギＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔキット（ＭａｂＴｅｃｈ（ＭａｂＴｅｃｈ番号３１１０－４ＨＰＷ－１０）を使用して、抗原特異的応答を評価した。プレートを製造業者のプロトコルに従って調製し、ウサギＰＢＭＣを、２×１０５細胞／ウェルで三重で播種した。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１のＥ６及びＥ７タンパク質の重複した１５ｍｅｒペプチドを細胞刺激に使用した。ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート及びイオノマイシン（ＰＭＡ／Ｉ）（Ｓｉｇｍａ）並びにＤＭＳＯを含有する培地は、それぞれ、陽性対照及び陰性対照として機能した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で最低１８時間インキュベーションした。翌日、プレートを製造業者のプロトコルに従って発現させ、プレートを乾燥させたら、自動ＥＬＩＳｐｏｔリーダー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用してスポットを計数した。平均スポット形成単位（ＳＦＵ）を１×１０６個の脾臓細胞に調整し、抗原特異的応答をＤＭＳＯ対照よりも大きい１×１０６個の脾臓細胞当たりのＩＦＮ－γ ＳＦＵの数として報告した。
ベースラインを上回るＨＰＶ６及びＨＰＶ１１特異的Ｔ細胞応答が、ＩＮＯ－３１０７で免疫化した後の全てのウサギで検出されたが、１×ＳＳＣで処置したウサギでは検出されなかった。ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１のＴ細胞応答は、ＩＮＯ－３１０７での各連続的な免疫化に続いて増加したため、強化可能であった（図７）。ＩＮＯ－３１０７での免疫化は、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６抗原に対するＴ細胞応答を誘導したが、このモデルにおけるＨＰＶ６又はＨＰＶ１１ Ｅ７抗原は誘導しなかった（図８）。
ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対する体液性応答は、各免疫化の前及び２週間後に採取した血清試料における結合ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって測定した。抗体レベルの時間経過を図９に示す。ＨＰＶ６又はＨＰＶ１１ Ｅ７結合抗体は、ＩＮＯ－３１０７で免疫化した５匹のウサギのうちの４匹で検出されたが、１×ＳＳＣで投薬したウサギでは検出されなかった。概して、免疫化ウサギにおいて、ＨＰＶ６ Ｅ７結合抗体は、ＨＰＶ１１ Ｅ７結合抗体と比較して低減した。ＥＬＩＳｐｏｔ及びＥＬＩＳＡデータをまとめると、ウサギモデルにおいて、ＩＮＯ－３１０７によってコードされる全ての抗原の免疫原性が確認された。
ＩＮＯ－３１０７媒介性免疫応答に加えて、体重、血液学、血清化学、及び一般的な外観を含む生理学的パラメータを、ワクチンの安全性及び動物の健康の指標として、研究全体を通して監視した。ＩＮＯ－３１０７を投与したウサギでは、経時的な体重又は体重変化の有意差は観察されなかった（図１０）。また、研究中のいずれの処置群についても、一般的な外観（鼻、目、毛皮、動き）の監視中に所見は観察されなかった。免疫化前並びに免疫化後第５週目、第８週目及び第１１週目に、血液学及び血清臨床化学分析のために試料を採取し、その結果を、臨床獣医病理学者（ＩＤＥＸＸ ＢｉｏＡｎａｌｙｔｉｃｓ）による独立したレビューのために提出した。ベースライン値と比較して、ＩＮＯ－３１０７の投与により、ＮＺＷウサギにおける第５週目（ただし、第８週目又は第１１週目ではない）のリンパ球数の軽度の増加がもたらされた。ＩＮＯ－３１０７の投与から、生物学的に関連する効果を示す他の血液学的又は血清臨床化学的所見はなかった。
ウサギにおける皮内（ＩＤ）送達の評価
細胞免疫応答を評価するために、ＮＺＷウサギにおいて皮内（ＩＤ）注射研究を実施した。ＮＺＷウサギ（ｎは５）を、ＩＤ送達により、０．１ｍＬの１×ＳＳＣ中１ｍｇのｐＧＸ３０２４で製剤化したＩＮＯ－３１０７で３週間間隔で３回免疫化した。前述のウサギＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔを、最初のワクチン接種の前、第２週目、第５週目及び第８週目に実施した。両方の抗原、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１に対する組み合わせた免疫応答は、各免疫化後に増加し、Ｔ細胞応答は、よりＨＰＶ６ Ｅ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６特異的であった（図１３）。
モルモットモデルにおける皮内（ＩＤ）送達の評価
Ｈａｒｔｌｅｙモルモット（ｎは５）は、皮内（ＩＤ）注射、続くＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００エレクトロポレーション装置を使用したエレクトロポレーション（ＥＰ）でのｐＧＸ３０２４（最終０．１ｍＬの１×ＳＳＣに製剤化された０．１ｍｇ）の２週間間隔の３回の免疫化を受けた。ナイーブモルモットは、陰性対照（ｎは２）として機能した。細胞性及び体液性免疫応答を、免疫化前（第０週目）及び各免疫化の２週間後（第２週目、第４週目及び第６週目）にそれぞれ、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ及びＩｇＧ結合ＥＬＩＳＡによって評価した。
Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ａｃｔ、ＰＨＳポリシー、ＡＡＡＬＡＣｉガイドライン、ＵＳＤＡ、並びに動物及び動物を含む実験に関連する他の連邦法及び規制に準拠して、ＩＡＣＵＣ承認プロトコルのもと、動物飼育、免疫化及び試料収集をＡｃｃｕｌａｂ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で実施した。全ての試料分析をＩｎｏｖｉｏ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で実施した。ｐＧＸ３０２４を、０．１ｍＬの投与溶液中の最終０．１ｍｇで１×ＳＳＣ中で製剤化し、使用するまで２～８℃で保存した。８週齢の雌のＨａｒｔｌｅｙモルモットを、表１に従って各々において５匹又は２匹の動物の２つの群に無作為に分けた。各処置を、製造業者のプロトコルに従って、１００μＬの投与溶液の皮膚へのＭａｎｔｏｕｘ皮内（ＩＤ）注射、続く３Ｐアレイを備えたＣＥＬＬＥＣＴＲＡ２０００（登録商標）Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｄｅｖｉｃｅ（Ｉｎｏｖｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を使用したエレクトロポレーションによって送達した。
Figure 2023525558000002
群１の動物は、２週間間隔で合計３回の免疫化を受けた。第０週目、第２週目、第４週目及び第６週目に、体液性免疫原性の評価のために、全ての動物から血清試料を収集した。第２週目、第４週目、及び第６週目に、細胞性免疫原性の評価のために、全ての動物から全血試料を収集した。
モルモットＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ。モルモットＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔを、Ｓｃｈｕｌｔｈｅｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ．２０１９；（１４３）：１０．３７９１／５８５９５．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１９ Ｊａｎ ２０．ｄｏｉ：１０．３７９１／５８５９５に記載の方法に従って実施した。末梢血を各麻酔された動物の頸静脈から採取し、直ちにＥＤＴＡ採血チューブに移した。血液を、リン酸緩衝生理食塩水で１：１に希釈した。希釈した血液を、ＳｅｐＭａｔｅ（商標）チューブ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ）中のＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で重層し、遠心分離した（１２００ｇ、１０分、２４℃）。ＰＢＭＣを、Ｒ１０培地中に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁し、５μｇ／ｍｌの一次抗ＩＦＮ－γ抗体Ｖ－Ｅ４（Ｓｃｈａｆｅｒ教授、Ｒｏｂｅｒｔ Ｋｏｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙより提供された）で先にコーティングされ、Ｒ１０培地でブロッキングされた９６ウェルＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ＩＰプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上に１００μｌ／ウェルで播種した。１００μｌのＨＰＶ６ Ｅ６、ＨＰＶ６ Ｅ７、ＨＰＶ１１ Ｅ６、又はＨＰＶ１１ Ｅ７ペプチドプール、又はホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）／イオノマイシン刺激剤を細胞に添加した。試料を三重でアッセイした。加湿した５％ＣＯ２中、３７℃で１８時間インキュベーションした後、細胞を洗浄することによって除去し、ブロッキング緩衝液中に希釈した２μｇ／ｍｌのビオチン化二次抗ＩＦＮ－γ抗体Ｎ－Ｇ３をウェル当たり１００μｌで添加した。２時間のインキュベーション及び洗浄後、アルカリホスファターゼコンジュゲートストレプトアビジン（ＭａｂＴｅｃｈ）をウェル当たり１００μｌで室温で１時間添加した。洗浄後、ウェルを、ニトロ－青色テトラゾリウム／５－ブロモ－４－クロロ－３’－インドリリン酸（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ）検出試薬基質（ＭａｂＴｅｃｈ）をウェル当たり１００μｌで、室温で６～１２分間インキュベーションした。ＣＴＬ－Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ（登録商標）Ｓ６ ＥＬＩＳＰＯＴプレートリーダー及びＣＴＬ－Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ（登録商標）ソフトウェアを使用して、インターフェロン－ガンマ陽性スポットを画像化し、分析し、計数した。抗原特異的応答は、ペプチド処理したウェルからＤＭＳＯ処理したウェル内のスポットの数を減じることによって決定した。
結果は、３つのウェルについて得られた個々の動物のスポット形成単位（ＳＦＵ）／１０６のＰＢＭＣについて示されている。ベースラインを上回るＨＰＶ６及びＨＰＶ１１特異的Ｔ細胞応答が、ｐＧＸ３０２４で免疫化した後のモルモットで検出されたが、ナイーブモルモットでは検出されなかった（図１１）。このモデルにおいて、ｐＧＸ３０２４での免疫化は、ＨＰＶ６及びＨＰＶ１１ Ｅ６及びＥ７抗原に対するＴ細胞応答を誘導した（図１１）。
抗原結合ＥＬＩＳＡ。９６ウェル高結合Ｎｕｎｃ（商標）プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、１×ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中の１μｇ／ｍｌの組換えＨＰＶ６ Ｅ７又はＨＰＶ１１ Ｅ７タンパク質で、４℃で一晩コーティングした。翌日、プレートを１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０で洗浄し、ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０中の３％ＢＳＡで２時間、室温でブロッキングした。次いで、プレートを以前のように洗浄し、連続希釈した血清試料を添加し、プレートを室温で２時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、１：１０，０００希釈の抗モルモットＩｇＧホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）二次抗体（Ｓｉｇｍａ）とともに室温で１時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、１００μｌ／ウェルのＳｕｒｅＢｌｕｅ（商標）ＴＭＢ基質（ＫＰＬ５１２０－００７７）をプレートに添加した。６分間のインキュベーション後、１００ｕｌ／ウェルのＴＭＢ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＫＰＬ５１５０－００２１）を添加して反応を停止し、プレートを、４５０ｎｍの波長でＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙプレートリーダーで読み取った。
ＨＰＶ６ Ｅ７及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原に対する体液性応答は、各免疫化の前及び２週間後に採取した血清試料における結合ＩｇＧ ＥＬＩＳＡによって測定した。抗体レベルの時間経過を図１２に示す。ｐＧＸ３０２４での免疫化後、モルモットにおいてＨＰＶ６ Ｅ７及びＨＰＶ１１ Ｅ７結合抗体を検出した。
第１／２相臨床試験：ＨＰＶ－６及び／又はＨＰＶ－１１関連の再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を有する対象におけるエレクトロポレーション（ＥＰ）でのＩＮＯ－３１０７［ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子：ＮＣＴ０４３９８４３３］
これは、ＨＰＶ－６及び／又はＨＰＶ－１１関連再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を有する対象におけるＩＮＯ－３１０７医薬品の安全性、忍容性、免疫原性、及び有効性を評価するための第１／２相非盲検多施設試験である。ＩＮＯ－３１０７医薬品を、第０日目、第３週目、第６週目及び第９週目に対象にＩＭ投与し、続いてＥＰする。
本研究では、最初の診断時に１２歳未満の年齢によって定義される若年発症ＲＲＰ（Ｊ－Ｏ ＲＲＰ）又は最初の診断時に１２歳以上の年齢によって定義される成人発症ＲＲＰ（Ａ－Ｏ ＲＲＰ）のいずれかで診断された約２０人の成人（１８歳以上）を登録する。試験集団は、以下の２つのコホートに分けられる。コホートＡ： ＲＲＰの最初の診断時に１２歳未満の年齢によって定義される若年発症ＲＲＰの診断を有する参加者。コホートＢ：ＲＲＰの最初の診断時に１２歳以上の年齢によって定義される成人発症ＲＲＰを有する参加者。
この研究は、各登録された参加者間で１週間の待機期間を設けた、最大６名の参加者での安全性慣らし運転を有する。安全性及び忍容性は、忍容性が確立された後も研究全体を通して評価され続ける。忍容性は、用量制限毒性（ＤＬＴ）の報告された発生率によって決定され、これは以下のように定義される。
－処置に関連するＮＣＩ Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ、バージョン５．０）等級３以上の非血液学的毒性で、支持療法に応答せず、４８時間を超えて持続する、又は
－処置に関連するＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ５．０等級３以上の血液学的毒性で、支持療法に応答せず、４８時間を超えて持続する。
対象は、第０日目の投薬前１４日以内のスクリーニング期間中に、乳頭腫を除去するための日常的な外科的処置を受ける（他の適格性基準を満たしている場合、乳頭腫除去及び０日目の用量は同日に実施され得る）。生検組織を収集し、副次的及び探索的エンドポイントについて評価する。試験中の疾患の状態を監視する。
コホートＡ（若年発症ＲＲＰを有する参加者）に、第０日目、第３週目、第６週目、及び第９週目に、ＩＮＯ－３１０７医薬品の筋肉内（ＩＭ）注射の１回６．２５ｍｇの注射、続くＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００を使用したエレクトロポレーション（ＥＰ）を施す。コホートＢ（成人発症ＲＲＰを有する参加者）に、第０日目、第３週目、第６週目、及び第９週目に、ＩＮＯ－３１０７医薬品の筋肉内（ＩＭ）注射の１回６．２５ｍｇの注射、続くＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００を使用したＥＰを施す。
この試験の主要な目的は、ＨＰＶ－６及び／又はＨＰＶ－１１関連ＲＲＰを有する対象におけるＩＮＯ－３１０７医薬品の安全性及び忍容性を評価することである。主要なエンドポイントは、報告された有害事象（ＡＥ）及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）によって評価される安全性及び忍容性である。主要評価基準は、有害事象（ＡＥ）及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）を有する参加者の割合である［時間枠：最大第５２週目までスクリーニング（最大約１年）］。有害事象（ＡＥ）とは、医薬品を投与された参加者又は臨床調査参加者において発生した任意の不都合な医学的事象であり、必ずしも本処置と因果関係を有するとは限らない。ＡＥには、医薬品（検査品）と関連があるかどうかにかかわらず、医薬品（検査品）の使用に時間的に関連する好ましくなく、意図しない兆候（異常な検査所見を含む）、症状、又は疾患が含まれ得る。重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、任意の用量で以下のような任意の不都合な医学的事象である。１．死をもたらす。２．生命を脅かす事象。ただし、より深刻な形態で発生した場合に死亡を引き起こした可能性のある事象はこれに含まれない。３．入院患者の入院期間又は既存の入院期間の延長が必要である。４．持続的又は重大な障害／能力障害をもたらす。５．先天的な異常／出生をもたらす。
この研究の副次的な目的は、以下のとおりである。
１．第０日目前の１年の頻度と比較して、検査品の最初の用量後の１年のＲＲＰ外科的介入の頻度により決定されるＩＮＯ－３１０７医薬品の有効性を評価すること。
２．経時的なＲＲＰ病期評価の変化によって評価されるＩＮＯ－３１０７医薬品の有効性を評価すること。
３．ＩＭ、続いてＥＰで与えられた場合のＩＮＯ－３１０７医薬品に対する細胞性免疫応答を評価すること。
４．研究登録時、及び利用可能な場合、その後の組織切除時に、切除された腫瘍組織における炎症促進性及び免疫抑制性要素によって評価されるＩＮＯ－３１０７医薬品の免疫原性を評価すること。
５．ＲＲＰ外科的介入の頻度の減少に伴うマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）プロファイルの任意の潜在的な関連性を評価すること。
副次的エンドポイントは、以下のとおりである。
１．第０日目の投薬前の１年におけるＲＲＰ外科的介入の数と比較した０日目後の５２週間におけるＲＲＰ外科的介入の数［時間枠：最大第５２週目までスクリーニング（最大約１年）］。
２．経時的なＲＲＰ病期評価スコアの変化［時間枠：スクリーニング、第０日目、第６週目、第１１週目、第２６週目、第５２週目（最大約１年間）］。ＲＲＰ病期評価スコアは、修正されたＤｅｒｋａｙ病期ツールを使用して決定される。臨床パラメータの主観的機能的評価及び疾患分布の解剖学的評価の両方を含む。次いで、解剖学的スコアを機能的スコアと組み合わせて使用して、個々の患者の臨床経過及び経時的な療法に対する応答を測定することができる。
３．末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮ－γ分泌細胞についてのインターフェロンγ酵素結合免疫吸着スポット（ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ）の応答の大きさにおけるベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、第６週目、第９週目、第１１週目、第２６週目、第５２週目］
４．ＰＢＭＣにおけるＴ細胞表現型及び溶解電位についてのフローサイトメトリー応答の大きさのベースラインからの変化［時間枠：ベースライン、第６週目、第９週目、第１１週目、第２６週目、第５２週目］
５．炎症促進性及び免疫抑制性要素についての切除された腫瘍組織応答の大きさのベースラインからの変化［時間枠：ベースライン及びその後の組織切除時、最大第５２週目まで（最大約１年間）］
６．ＲＲＰ外科的介入の頻度の低減に関連するマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）発現におけるベースラインからの変化［時間枠：ベースライン及び第６週目］。
この試験の探索的な目的は、以下のとおりである。
１．利用可能な場合、切除された組織におけるＨＰＶ－６及び／又は１１のウイルス学的クリアランスを説明すること。
２．ＩＭ、続いてＥＰで与えられた場合のＩＮＯ－３１０７医薬品に対する体液性免疫応答を評価すること。
３．末梢血中の炎症促進性及び免疫抑制性要素によって評価されるＩＮＯ－３１０７医薬品の免疫原性を評価すること。
４．ＩＮＯ－３１０７医薬品で処置したＲＲＰ患者における疾患負荷及び臨床転帰の相関として循環遊離ＨＰＶ ＤＮＡ（ｃｆＨＰＶ ＤＮＡ）６／１１を評価すること。
探索的エンドポイントは、以下のとおりである。
１．ベースラインと比較した切除された組織におけるＨＰＶ－６／１１のクリアランス、
２．ＥＬＩＳＡによって評価される抗原特異的体液性免疫応答、
３．末梢血における炎症促進性及び免疫抑制性要素の評価、並びに
４．ＩＮＯ－３１０７医薬品で処置したＲＲＰ患者における疾患負荷及び臨床転帰の相関としてのＩＮＯ－３１０７医薬品の前後のｃｆＨＰＶ ＤＮＡ６／１１の量。
有効性評価：ＨＰＶ－６及び／又はＨＰＶ－１１ＲＲＰの文書、スクリーニング前の３年以内に発生したＲＲＰ手術及び治療のリスト、並びに任意の寛解期間を含む各対象についての詳細な病歴を取得する。対象は、研究に適格となるために、第０日目を含むその前の１年に少なくとも２つの外科的ＲＲＰ介入（レーザーを含む）を受けている必要がある。対象は、この試験に入る時点でＲＲＰ介入を必要とし、第０日目の投薬前の１４日以内のスクリーニング中に、対象にわたるベースライン病期の標準化を最大化するために、乳頭腫の外科的除去を受けている必要がある。有効性評価は、第０日目の投薬前の１年のＲＲＰ外科的介入の数と比較して、第０日目後５２週間のＲＲＰ外科的介入の数に基づく。ＲＲＰ外科的介入には、レーザー療法が含まれる。試験はまた、副次的エンドポイントとして、経時的なＲＲＰ病期評価の変化も評価する。
安全性評価：対象は、インフォームドコンセントに署名した時点から第５２週まで、又は対象の最後の訪問まで、安全性について追跡される。ＩＮＯ－３１０７医薬品の安全性は、ＣＴＣＡＥ ｖ５．０に従って測定及び等級分けされる。ベースライン評価からの検査パラメータ及びバイタルサインの臨床的に顕著な変化を評価する。
有害事象とは、医薬品を投与された患者又は臨床調査対象において発生した任意の不都合な医学的事象であり、必ずしも本処置と因果関係を有する必要はない。したがって、ＡＥには、医薬品と関連があると考えられるかどうかにかかわらず、医薬品の使用に時間的に関連する好ましくない、意図しない兆候（例えば、異常な検査所見を含む）、症状、又は疾患であり得る。有害事象（ＡＥ）には、以下が含まれる：スクリーニング中又はスクリーニング後（臨床試験薬物の投与前）にプロトコルが義務付けられた処置の結果として発生する治療前又は治療後の合併症；本研究における調査中の状態を除いて、臨床試験薬物投与フェーズ中又はその結果として重症度が増加する、又は性質が変化する任意の既存の状態；妊娠の合併症。有害事象（ＡＥ）には、以下は含まれない：医学的又は外科的処置（例えば、手術、内視鏡検査、抜歯、輸血）が実施されたが、処置につながる状態が、ＡＥである；スクリーニング訪問前に存在又は検出された悪化しない既存の疾患若しくは状態、又は検査異常；ＲＲＰの再発；不都合な医学的事象が発生していない状況（例えば、選択的手術のための入院、社会的及び／又は便宜的入院）；臨床的後遺症のない過剰摂取；インフォームドコンセントが提供される前の発症日を伴う任意の医学的状態又は臨床的に顕著な検査異常が、ＡＥではない；合併症のない妊娠；医学的理由なしに妊娠を終了させるための誘導された選択的中絶。
有害薬物反応（ＡＤＲ）には、任意の用量に関連する医薬品に対する全ての有害及び意図しない応答が含まれる。これは、医薬品と有害事象との間の因果関係が少なくとも合理的な可能性であることを意味する（すなわち、関係を排除することはできない）。
重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、任意の用量で、死亡をもたらす、生命を脅かす、入院患者の入院期間を必要とする、若しくは既存の入院を延長する、持続的若しくは重大な障害／能力障害をもたらす、先天性異常若しくは出生欠陥をもたらす、及び／又は重要な医療事象をもたらす、任意の不都合な医学的事象である。
予期しない有害薬物反応は、その性質又は重症度が該当する産物情報と一致しない有害反応である。予期せぬ（重篤な）有害機器影響（ＵＡＤＥ）とは、その影響、問題、若しくは死が、試験計画又は用途（補足計画又は用途を含む）において、性質、重症度若しくは発生の程度において以前に特定されていなかった場合、又は対象の権利、安全若しくは福祉に関連する装置に関連するその他の予期せぬ重篤な問題が発生した場合、装置によって引き起こされるか、又は装置に関連する健康又は安全性又は任意の生命を脅かす問題又は死に対する任意の重篤で有害な影響である。
免疫原性評価：この研究は、ベースライン（すなわち、投薬前のスクリーニング及び第０日目）及び第６週目、第９週目、第１１週目、第２６週目及び第５２週目に採取した血液試料中の体液及び細胞媒介性免疫応答を探索する。組織試料は、ベースライン時及び試験中に臨床的に示された場合に採取される。試験には、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳｐｏｔ、フローサイトメトリー、免疫組織化学（ＩＨＣ）、末梢血試料及び／又は切除された組織上のナノストリング（可能であれば、研究登録及び再発）が含まれ得るが、これらに限定されない。
ｍｉＲＮＡのプロファイリングは、スクリーニング、第０日目及び再発時に得られた組織を使用して行われ得る。第０日目及びスクリーニング試料の評価は、ＩＮＯ－３１０７での処置への応答に対する予測アルゴリズムを探索する。再発から評価された試料は、ｍｉＲＮＡプロファイルの変化が再発の尤度とどのように関連付けられ得るかを説明する。
ウイルス学的評価：試験は、記載されるように、研究処置の前後に、組織試料及び末梢血中のＨＰＶ－６／１１ＤＮＡの存在を評価する。
重要な採用基準：
●組織学的に文書化されたＨＰＶ－６若しくはＨＰＶ－１１陽性呼吸器乳頭腫又はスポンサー承認ＨＰＶ－６／１１型特異的アッセイを使用した低リスク陽性ＨＰＶの文書化。
●第０日目を含むその前の１年に少なくとも２回のＲＲＰ外科的（レーザーを含む）介入として定義される、呼吸器乳頭腫を除去又は切除するための頻繁なＲＲＰ介入の要件。
●治験責任医師の判断及びＲＲＰ病期評価スコアに従って、今後の外科的介入の適切な候補者である必要がある。
●以下によって定義される適切な骨髄、肝臓、及び腎臓機能：ＡＮＣ（絶対好中球数）≧１０００細胞／ｍｍ３、血小板≧５０，０００／ｍｍ３、ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ、１．５×正常の上限（ＵＬＮ）内の総血清ビリルビンの濃度、１．５×ＵＬＮ内のＡＳＴ及びＡＬＴ、血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ。
●参加者は、以下の要件のうちの１つを満たしている必要がある：
○出産の可能性がないか（ホルモン補充を受けていない場合は、卵胞刺激ホルモン［ＦＳＨ］によって確認された、１２ヶ月以上の非治療誘発性無月経）、
○外科的に不妊であるか（男性の場合は精管摘出術、女性の場合は卵巣及び／又は子宮がない）、
○処置期間中、及び少なくとも最後の用量後第１２週目まで、年間１％未満の失敗率をもたらす、１つの非常に効果的な又は組み合わせた避妊方法を使用することに同意するか、又は
○性交の禁欲に同意する。
主要な除外基準：
●第０日目前の３ヶ月以内の、治療的介入としての抗ウイルス（シドフォビルを含む）、放射線、化学療法、抗血管新生療法（ベバシズマブを含む）、予防的ＨＰＶワクチン接種（ガーダシルを含む）又は実験薬による療法を含むがこれらに限定されない、ＲＲＰ疾患に対する療法（手術又はアブレーションを除く）のレシピエント。
●白斑、解消した小児喘息、１型糖尿病、ホルモン置換のみを必要とする残存性甲状腺機能低下症、又は全身治療を必要としない乾癬を除き、全身免疫抑制治療での治療を必要とする自己免疫疾患の進行中又は最近（１年以内）の証拠。
●免疫不全の診断、又は全身性コルチコステロイドを含む、最初の用量の試験処置前の２８日以内の全身性免疫抑制療法での治療。
●出血のリスクが高いか、又は既知の出血素因の管理のために抗凝固剤の使用を必要とする。
●最初の用量の試験処置前の４週間以内の任意の生ウイルスワクチン又は第１の用量の試験処置前の２週間以内の任意の非生ウイルスワクチンのレシピエント。
●治験責任医師の判断で、参加者の安全性を危険にさらすか、試験評価又はエンドポイント評価に干渉するか、又はそうでなければ試験結果の妥当性に影響を及ぼすであろう臨床的に重大で医学的に不安定な疾患の病歴（これには、慢性腎不全、心筋虚血又は心筋梗塞、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩ／ＩＶ心疾患が含まれ得る）；任意の心臓早期興奮症候群（ウォルフパーキンソンホワイト、心筋症、又は臨床的に重大な不整脈など）；インサイチュで治療された基底細胞若しくは扁平上皮細胞がん、前立腺がん、又は子宮頸がんを除く現在の悪性腫瘍；研究療法に対する免疫応答を実装する能力に影響を及ぼす可能性があるＨＩＶ；又は薬物若しくはアルコール依存症）。
●三角筋及び前外側大腿四頭筋を考慮すると、ＩＭ注射で使用可能な許容部位が２箇所未満である［以下は許容できない部位である：意図した処置部位から２ｃｍ以内に位置するタトゥー、ケロイド、又は肥厚性瘢痕；三角筋注射部位と同側に位置する心臓除細動器又はペースメーカー（生命を脅かす不整脈を防止するため）（心臓専門医が許容できるとみなさない限り）；意図した処置部位内の金属インプラント又は植え込み型医療装置］。
●妊娠中又は現在授乳中。
臨床試験処置：ＩＮＯ－３１０７医薬品は、この研究で使用される検査品である。ＩＮＯ－３１０７医薬品は、ＨＰＶ１１及びＨＰＶ６遺伝子のＥ６及びＥ７タンパク質の発現のためのＤＮＡプラスミド（ｐＧＸ３０２４）及びヒトＩＬ－１２サブユニットを発現する発現プラスミド（ｐＧＸ６０１０）を含有する。ＩＮＯ－３１０７医薬品は、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）中に６．２５ｍｇ総プラスミド／ｍＬ（６ｍｇ／ｍＬのｐＧＸ３０２４、０．２５ｍｇ／ｍＬのｐＧＸ６０１０）を含有する透明な無色の溶液である。１ｍＬの最小体積を、筋肉内注射のために２ｍＬの透明なガラスバイアルに充填する。
対象に、第０日目、第３週目、第６週目、及び第９週目に、ＩＮＯ－３１０７医薬品の１回の６．２５ｍｇの注射を筋肉内投与し、続いてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）２０００ＥＰ装置を使用してＥＰを施す。
分析集団は以下のものとする。
－処置意図（ＩＴＴ）集団には、適格である全ての対象が含まれる。
－修正された処置意図（ｍＩＴＴ）集団には、少なくとも１用量のＩＮＯ－３１０７医薬品を受ける全ての対象が含まれる。
－プロトコルに従った（ＰＰ）集団は、全ての用量のＩＮＯ－３１０７医薬品を投与され、かつプロトコル違反がない対象を含む。ＰＰ集団から除外された対象は、試験データベースのロック前に同定され、文書化される。
－安全性分析セットには、少なくとも１用量のＩＮＯ－３１０７医薬品を受けた全ての対象が含まれる。
末梢血免疫原性評価：全血及び血清試料は、ベースライン（スクリーニング及び投薬前の第０日目）、並びに第６週目、第９週目、第１１週目、第２６週目及び第５２週目に取得される。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を全血試料から単離する。細胞性免疫活性の評価は、遺伝子発現、インターフェロンγ酵素結合免疫吸着スポット（ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ）、及びフローサイトメトリーアッセイの適用を介して行われ得る。細胞性免疫活性の追加の評価は、溶解性顆粒負荷アッセイを実施する目的で、フローサイトメトリーの適用を介して行われ得る。溶解性顆粒負荷アッセイは、以下の外部細胞マーカーを検査し得る。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８（Ｔ細胞同定）、Ｋｉ６７、ＣＤ１３７、ＣＤ３８及びＣＤ６９（Ｔ細胞活性化マーカー）、並びにＰＤ－１（枯渇／活性化マーカー）、Ｔｉｍ－３及びＬａｇ－３。溶解性顆粒負荷アッセイは、以下の細胞内マーカーを更に分析し得る。グランザイムＡ、グランザイムＢ、グラニュライシン及びパーフォリン（溶解脱顆粒及び細胞毒性の可能性に関与するタンパク質）。
ｍｉＲＮＡのプロファイリングは、スクリーニング、第０日目及び第６週目に得られた血漿を使用して行われる。第０日目及びスクリーニング試料の評価は、ＩＮＯ－３１０７での処置への応答に対する予測アルゴリズムを探索する。第６週目から評価された試料は、ｍｉＲＮＡプロファイルの変化が最終的な処置の成功又は失敗とどのように関連付けられ得るかを説明する。
標準的な結合ＥＬＩＳＡは、ＩＮＯ－３１０７医薬品によって誘導される抗ＨＰＶ－６／１１抗体応答を測定するために実施され得る。
ＨＰＶ－６／１１試験：全血を、ｃｆＨＰＶ ＤＮＡ－６／１１の測定のために、第０日目、並びに第６週目、第１１週目、第２６週目及び第５２週目の投薬前に採取する。
統計的方法の説明：
主要な分析：この試験の主要な分析は、治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）の安全性分析及びベースラインからの安全性検査パラメータの臨床的に有意な変化である。ＴＥＡＥは、研究薬の投与（ＩＭ＋ＥＰ）後、最後の用量後３０日まで、第０日目以降に生じる任意のＡＥとして、本試験のために定義される。全てのＴＥＡＥは、頻度別に安全性集団の中で要約される。これらの頻度は、全体的に、システム臓器クラスごと、及び好ましい用語ごと、影響を受ける対象の割合によって示される。追加の頻度は、最大重症度及び研究処置との最も強い関係に関して示される。同じＡＥの複数回発生は、重症度及び研究処置との関連に関して最悪の場合のアプローチに従った１回のみ計数される。安全性データの主な要約は、ＴＥＡＥに基づいている。この要約では、好ましい期間の事象の頻度は、クロッパーピアソンの正確な方法を使用して、９５％信頼区間とともに計算される。個別の要約は、任意の用量の７日以内に発生した事象に基づいており、いつ発生したかは関係ない。ＴＥＡＥ又は重篤なＴＥＡＥではないＡＥ及びＳＡＥは、リストに示される。
ＡＥのデータについては、部分的な開始日は、日付の一部が研究処置のものと一致する場合はいつでも、処置中に発生したものとして事象を保存的に報告するために、処置の日付に帰属される。それ以外の場合は、部分的な日付と一致する最も早い日付に帰属される。完全に欠落した発症日は、治療の日として帰属される。部分的な停止日は、部分的な日付と一致する最も遅い可能な日とみなされる。
有害事象の期間は、（停止日－開始日）＋１として計算される。
検査応答変数を、時点ごとに、及び９５％信頼区間を含むベースラインからの変化として、記述的に要約する。ＣＴＣＡＥによるベースラインからのシフトも示される。臨床的に有意であると考えられる臨床検査値は、リストで示される。
安全性分析の全ては、安全性分析セットの対象に対して実施される。
分析は、以前の外科的介入の数（≦２、３～５、及び≧６）及び全体的な数によって要約及び示される。
副次的分析：
有効性：ＩＮＯ－３１０７医薬品の最初の用量後の１年のＲＲＰ外科的介入の頻度は、第０日目の投与前の１年の頻度と比較して、平均倍率変化及び９５％ｔ分布ベースのＣＩを使用して記述的に要約される。ベースライン投薬前から各投薬後へのＲＲＰ病期評価スコアの変化の評価を分析する。中央値の変化及び関連する９５％信頼区間が計算される。
有効性エンドポイント対ｍｉＲＮＡ結果間の関係を検査する。関係は、エンドポイント転帰対ｍｉＲＮＡ結果をリグレッサー変数としてモデル化する回帰モデルを使用して検査する。
手術間隔についても要約する。分析は、以前の外科的介入の数（≦２、３～５、及び≧６）及び全体的な数によって要約及び示される。ｍＩＴＴ集団を使用した有効性分析を実施する。プロトコルごとの集団は、支持分析にも使用される。
免疫原性：インターフェロン－γ ＥＬＩＳｐｏｔのベースラインからの増加及びフロー応答の大きさを要約する。中央値の増加及び関連する９５％信頼区間が計算される。腫瘍組織応答の大きさのベースラインからの変化を要約する。平均増加及び関連する９５％ｔ分布べースの信頼区間を計算する。統計分析を目的とする有効な試料は、指定された訪問から７日以内に収集されたものとする。ベースラインは、最初の処置投与の前の最後の測定値として定義される。ｍＩＴＴ集団は、免疫原性分析に使用される。分析は、以前の外科的介入の数（≦２、３～５、及び≧６）及び全体的な数によって要約及び示される。
探索的分析：
有効性：ＨＰＶクリアランスを要約し、切除された腫瘍組織におけるベースラインと比較したＨＰＶ－６／１１をクリアする対象の割合を計算する。ＲＲＰ患者における疾患負荷及び臨床転帰の相関としてのＩＮＯ－３１０７医薬品前後のｃｆＨＰＶ ＤＮＡ６／１１間の関係を、回帰モデルを使用して検査する。分析は、以前の外科的介入の数（≦２、３～５、及び≧６）及び全体的な数によって要約及び示される。
免疫原性：ベースライン後のＥＬＩＳＡ力価は、幾何学的手段で分析される。末梢血におけるベースラインからの遺伝子発現の変化を要約する。分析は、以前の外科的介入の数（≦２、３～５、及び≧６）及び全体的な数によって要約及び示される。
配列及び配列識別子
＞ｐＧＸ３０２４ ＩｇＥリーダー配列を有しないアミノ酸配列のみ挿入＜配列番号１＞
ＥＳＫＤＡＳＴＳＡＴＳＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＬＨＴＬＱＩＱＣＶＦＣＲＮＡＬＴＴＡＥＩＹＡＹＡＹＫＮＬＫＶＶＷＲＤＮＦＰＦＡＡＣＡＣＣＬＥＬＱＧＫＩＮＱＹＲＨＦＮＹＡＡＹＡＰＴＶＥＥＥＴＮＥＤＩＬＫＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＩＥＫＬＫＨＩＬＧＫＡＲＦＩＫＬＮＮＱＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＬＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＬＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＥＤＳＳＥＤＥＶＤＫＶＤＫＱＤＳＱＰＬＴＱＨＹＱＩＬＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＥＣＴＤＧＤＩＲＱＬＱＤＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＥＳＡＮＡＳＴＳＡＴＴＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＭＨＴＬＱＩＮＣＶＦＣＫＮＡＬＴＴＡＥＩＹＳＹＡＹＫＱＬＫＶＬＦＲＧＧＹＰＹＡＡＣＡＣＣＬＥＦＨＧＫＩＮＱＹＲＨＦＤＹＡＧＹＡＴＴＶＥＥＥＴＫＱＤＩＬＤＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＶＥＫＶＫＨＩＬＴＫＡＲＦＩＫＬＮＣＴＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＭＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＨＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＶＤＳＳＥＤＥＶＤＥＶＤＧＱＤＳＱＰＬＫＱＨＹＱＩＶＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＱＣＴＥＴＤＩＲＥＶＱＱＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＴ
＞ｐＧＸ３０２４＿ＩｇＥリーダー配列を有しない挿入のみ＜配列番号２＞
ＧＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＣＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＴＡＡＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＧＡＡＡＴＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＴＴＣＣＴＴＴＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＴＣＡＧＴＡＣＣＧＧＣＡＣＴＴＣＡＡＣＴＡＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＧＡＡＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＧＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＴＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＣＣＧＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＴＧＴＧＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＡＡＧＡＡＴＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＣＴＧＡＴＣＣＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＡＧＡＣＡＣＧＴＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＡＴＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＡＧＣＡＡＴＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＧＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡ
＞ｐＧＸ３０２４＿完全配列＜配列番号３＞
ｇｃｔｇｃｔｔｃｇｃｇａｔｇｔａｃｇｇｇｃｃａｇａｔａｔａｃｇｃｇｔｔｇａｃａｔｔｇａｔｔａｔｔｇａｃｔａｇｔｔａｔｔａａｔａｇｔａａｔｃａａｔｔａｃｇｇｇｇｔｃａｔｔａｇｔｔｃａｔａｇｃｃｃａｔａｔａｔｇｇａｇｔｔｃｃｇｃｇｔｔａｃａｔａａｃｔｔａｃｇｇｔａａａｔｇｇｃｃｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇａｃｃｇｃｃｃａａｃｇａｃｃｃｃｃｇｃｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔａａｔｇａｃｇｔａｔｇｔｔｃｃｃａｔａｇｔａａｃｇｃｃａａｔａｇｇｇａｃｔｔｔｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇｇｇｔｇｇａｇｔａｔｔｔａｃｇｇｔａａａｃｔｇｃｃｃａｃｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃａａｇｔｇｔａｔｃａｔａｔｇｃｃａａｇｔａｃｇｃｃｃｃｃｔａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇａｃｇｇｔａａａｔｇｇｃｃｃｇｃｃｔｇｇｃａｔｔａｔｇｃｃｃａｇｔａｃａｔｇａｃｃｔｔａｔｇｇｇａｃｔｔｔｃｃｔａｃｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃｔａｃｇｔａｔｔａｇｔｃａｔｃｇｃｔａｔｔａｃｃａｔｇｇｔｇａｔｇｃｇｇｔｔｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃａａｔｇｇｇｃｇｔｇｇａｔａｇｃｇｇｔｔｔｇａｃｔｃａｃｇｇｇｇａｔｔｔｃｃａａｇｔｃｔｃｃａｃｃｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇｇｇａｇｔｔｔｇｔｔｔｔｇｇｃａｃｃａａａａｔｃａａｃｇｇｇａｃｔｔｔｃｃａａａａｔｇｔｃｇｔａａｃａａｃｔｃｃｇｃｃｃｃａｔｔｇａｃｇｃａａａｔｇｇｇｃｇｇｔａｇｇｃｇｔｇｔａｃｇｇｔｇｇｇａｇｇｔｃｔａｔａｔａａｇｃａｇａｇｃｔｃｔｃｔｇｇｃｔａａｃｔａｇａｇａａｃｃｃａｃｔｇｃｔｔａｃｔｇｇｃｔｔａｔｃｇａａａｔｔａａｔａｃｇａｃｔｃａｃｔａｔａｇｇｇａｇａｃｃｃａａｇｃｔｇｇｃｔａｇｃｇｔｔｔａａａｃｔｔａａｇｃｔｔｇｇｔａｃｃｇａｇｃｔｃｇｇａｔｃｃｇｃｃａｃｃａｔｇｇａｔｔｇｇａｃｃｔｇｇａｔｔｃｔｃｔｔｔｃｔｃｇｔｔｇｃｃｇｃｔｇｃｔａｃｔｃｇｃｇｔｔｃａｔａｇｔｇａｇａｇｃａａｇｇａｔｇｃｃａｇｃａｃａａｇｃｇｃｃａｃｃａｇｃａｔｃｇａｃｃａｇｃｔｔｔｇｃａａｇａｃｃｔｔｔａａｃｃｔｇａｇｃｃｔｇｃａｃａｃａｃｔｔｃａｇａｔｃｃａｇｔｇｔｇｔｃｔｔｃｔｇｃｃｇａａａｔｇｃｔｃｔｇａｃａａｃａｇｃａｇａａａｔｃｔａｃｇｃｃｔａｃｇｃｃｔａｃａａａａａｃｃｔｇａａｇｇｔｇｇｔｇｔｇｇａｇａｇａｃａａｃｔｔｔｃｃｔｔｔｃｇｃｔｇｃｃｔｇｃｇｃｔｔｇｃｔｇｃｃｔｇｇａｇｃｔｇｃａｇｇｇｃａａｇａｔｃａａｔｃａｇｔａｃｃｇｇｃａｃｔｔｃａａｃｔａｃｇｃｔｇｃｃｔａｃｇｃｃｃｃｔａｃａｇｔｇｇａｇｇａｇｇａａａｃａａａｃｇａａｇａｃａｔｃｃｔｇａａｇｇｔｇｃｔｇａｔｃａｇａｔｇｃｔａｃｃｔｃｔｇｃｃａｃａａｇｃｃａｃａｇｔｇｔｇａａａｔｃｇａｇａａｇｃｔｇａａｇｃａｃａｔｔｃｔｇｇｇｃａａｇｇｃｃａｇａｔｔｔａｔｃａａｇｃｔｇａａｃａａｃｃａｇａｇａａａｇｇｇａａｇａｔｇｔｃｔｇｃａｃｔｇｔｔｇｇａｃａａｃｃｔｇｃａｔｇｇａｇｇａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃａｇａｇｇｃａｇａａａｇａｇａａｇａｔｃｔｇｇｃａｇｃｇｇａｇｃｔａｃｃａａｃｔｔｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇａａｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇａｔｇｔｔｇａｇｇａｇａａｃｃｃａｇｇｃｃｃｔｃａｃｇｇｃｃｇｇｃｔｇｇｔｃａｃｃｃｔｇａａｇｇａｔａｔｃｇｔｇｃｔｇｇａｔｃｔｇｃａｇｃｃｃｃｃｔｇａｔｃｃｔｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃａｃｇｃｃｔａｃｇａａｃａｇｃｔｇｇａｇｇａｃａｇｃｔｃｔｇａａｇａｃｇａａｇｔｇｇａｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇｃａｇｇａｃｔｃｔｃａｇｃｃｔｃｔｇａｃａｃａｇｃａｃｔａｔｃａｇａｔｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｇｇｃｔｇｔｇａｃｔｃｔａａｃｇｔｇａｇａｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｇｔｇｃａｃｃｇａｔｇｇａｇａｃａｔｃａｇａｃａｇｃｔｇｃａｇｇａｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｔａｃｃｃｔｇａａｃａｔｔｇｔｇｔｇｔｃｃｔａｔｃｔｇｔｇｃｔｃｃａａａｇｃｃａａｇａｇｇｃａｇｇａａａａｇａａｇａｔｃｃｇｇｃａｇｃｇｇａｇｃｃａｃｃａａｔｔｔｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇａａｇｃａａｇｃｔｇｇａｇａｔｇｔｇｇａｇｇａｇａａｃｃｃｔｇｇｃｃｃｔｇａｇａｇｃｇｃｃａａｃｇｃｃａｇｃａｃａｔｃｃｇｃｃａｃｃａｃｃａｔｃｇａｃｃａｇｃｔｇｔｇｃａａｇａｃｃｔｔｃａａｃｃｔｇａｇｃａｔｇｃａｃａｃａｃｔｇｃａｇａｔｃａａｃｔｇｔｇｔｃｔｔｃｔｇｃａａｇａａｔｇｃｃｃｔｇａｃｃａｃａｇｃａｇａｇａｔｃｔａｃａｇｃｔａｃｇｃｃｔａｃａａｇｃａｇｃｔｇａａｇｇｔｇｃｔｇｔｔｃａｇａｇｇｃｇｇｃｔａｃｃｃｔｔａｔｇｃｔｇｃｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇｃｃｔｇｇａｇｔｔｃｃａｃｇｇｃａａｇａｔｃａａｃｃａｇｔａｃａｇａｃａｃｔｔｃｇａｃｔａｃｇｃｔｇｇｃｔａｃｇｃｃａｃｃａｃａｇｔｇｇａａｇａｇｇａａａｃａａａｇｃａｇｇａｃａｔｃｃｔｇｇａｃｇｔｇｃｔｇａｔｃｃｇａｔｇｃｔａｃｃｔｇｔｇｃｃａｃａａｇｃｃｔｃａｇｔｇｔｇａａｇｔｇｇａａａａａｇｔｇａａｇｃａｃａｔｃｃｔｇａｃｃａａｇｇｃｃａｇａｔｔｃａｔｃａａｇｃｔｇａａｃｔｇｃａｃｃａｇａａａａｇｇｃａｇａｔｇｃｃｔｇｃａｃｔｇｃｔｇｇａｃｃａｃｃｔｇｃａｔｇｇａａｇａｃａｔｇｃｔｇｃｃｔａｇａｇｇｃａｇａａａａａｇａａｇａａｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇａｇｃｃａｃｃａａｃｔｔｔｔｃｃｃｔｇｃｔｇａａａｃａａｇｃｔｇｇａｇａｃｇｔｇｇａｇｇａａａａｃｃｃｔｇｇｃｃｃｔｃａｃｇｇｃａｇａｃａｃｇｔｇａｃａｃｔｇａａｇｇａｃａｔｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｃｃｔｇａｃｃｃｔｇｔｇｇｇｃｃｔｇｃａｃｇｃｃｔａｃｇａｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｃａｇｃａｇｃｇａｇｇａｃｇａａｇｔｇｇａｃｇａａｇｔｇｇａｔｇｇｃｃａｇｇａｃａｇｃｃａｇｃｃｔｃｔｇａａｇｃａｇｃａｃｔａｃｃａｇａｔｃｇｔｃａｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇｔｇａｔａｇｃａａｔｇｔｇａｇｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｃａｇｔｇｃａｃａｇａａａｃａｇａｃａｔｃａｇａｇａａｇｔｇｃａｇｃａａｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃａｃｃｃｔｇａａｃａｔｃｇｔｇｔｇｔｃｃｃａｔｃｔｇｔｇｃｔｃｃｃａａｇａｃａｔｇａｔａａｃｔｃｇａｇｔｃｔａｇａｇｇｇｃｃｃｇｔｔｔａａａｃｃｃｇｃｔｇａｔｃａｇｃｃｔｃｇａｃｔｇｔｇｃｃｔｔｃｔａｇｔｔｇｃｃａｇｃｃａｔｃｔｇｔｔｇｔｔｔｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃｔｔｇａｃｃｃｔｇｇａａｇｇｔｇｃｃａｃｔｃｃｃａｃｔｇｔｃｃｔｔｔｃｃｔａａｔａａａａｔｇａｇｇａａａｔｔｇｃａｔｃｇｃａｔｔｇｔｃｔｇａｇｔａｇｇｔｇｔｃａｔｔｃｔａｔｔｃｔｇｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇｔｇｇｇｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇｇｇｇａｇｇａｔｔｇｇｇａａｇａｃａａｔａｇｃａｇｇｃａｔｇｃｔｇｇｇｇａｔｇｃｇｇｔｇｇｇｃｔｃｔａｔｇｇｃｔｔｃｔａｃｔｇｇｇｃｇｇｔｔｔｔａｔｇｇａｃａｇｃａａｇｃｇａａｃｃｇｇａａｔｔｇｃｃａｇｃｔｇｇｇｇｃｇｃｃｃｔｃｔｇｇｔａａｇｇｔｔｇｇｇａａｇｃｃｃｔｇｃａａａｇｔａａａｃｔｇｇａｔｇｇｃｔｔｔｃｔｔｇｃｃｇｃｃａａｇｇａｔｃｔｇａｔｇｇｃｇｃａｇｇｇｇａｔｃａａｇｃｔｃｔｇａｔｃａａｇａｇａｃａｇｇａｔｇａｇｇａｔｃｇｔｔｔｃｇｃａｔｇａｔｔｇａａｃａａｇａｔｇｇａｔｔｇｃａｃｇｃａｇｇｔｔｃｔｃｃｇｇｃｃｇｃｔｔｇｇｇｔｇｇａｇａｇｇｃｔａｔｔｃｇｇｃｔａｔｇａｃｔｇｇｇｃａｃａａｃａｇａｃａａｔｃｇｇｃｔｇｃｔｃｔｇａｔｇｃｃｇｃｃｇｔｇｔｔｃｃｇｇｃｔｇｔｃａｇｃｇｃａｇｇｇｇｃｇｃｃｃｇｇｔｔｃｔｔｔｔｔｇｔｃａａｇａｃｃｇａｃｃｔｇｔｃｃｇｇｔｇｃｃｃｔｇａａｔｇａａｃｔｇｃａａｇａｃｇａｇｇｃａｇｃｇｃｇｇｃｔａｔｃｇｔｇｇｃｔｇｇｃｃａｃｇａｃｇｇｇｃｇｔｔｃｃｔｔｇｃｇｃａｇｃｔｇｔｇｃｔｃｇａｃｇｔｔｇｔｃａｃｔｇａａｇｃｇｇｇａａｇｇｇａｃｔｇｇｃｔｇｃｔａｔｔｇｇｇｃｇａａｇｔｇｃｃｇｇｇｇｃａｇｇａｔｃｔｃｃｔｇｔｃａｔｃｔｃａｃｃｔｔｇｃｔｃｃｔｇｃｃｇａｇａａａｇｔａｔｃｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇａｔｇｃａａｔｇｃｇｇｃｇｇｃｔｇｃａｔａｃｇｃｔｔｇａｔｃｃｇｇｃｔａｃｃｔｇｃｃｃａｔｔｃｇａｃｃａｃｃａａｇｃｇａａａｃａｔｃｇｃａｔｃｇａｇｃｇａｇｃａｃｇｔａｃｔｃｇｇａｔｇｇａａｇｃｃｇｇｔｃｔｔｇｔｃｇａｔｃａｇｇａｔｇａｔｃｔｇｇａｃｇａａｇａｇｃａｔｃａｇｇｇｇｃｔｃｇｃｇｃｃａｇｃｃｇａａｃｔｇｔｔｃｇｃｃａｇｇｃｔｃａａｇｇｃｇａｇｃａｔｇｃｃｃｇａｃｇｇｃｇａｇｇａｔｃｔｃｇｔｃｇｔｇａｃｃｃａｔｇｇｃｇａｔｇｃｃｔｇｃｔｔｇｃｃｇａａｔａｔｃａｔｇｇｔｇｇａａａａｔｇｇｃｃｇｃｔｔｔｔｃｔｇｇａｔｔｃａｔｃｇａｃｔｇｔｇｇｃｃｇｇｃｔｇｇｇｔｇｔｇｇｃｇｇａｃｃｇｃｔａｔｃａｇｇａｃａｔａｇｃｇｔｔｇｇｃｔａｃｃｃｇｔｇａｔａｔｔｇｃｔｇａａｇａｇｃｔｔｇｇｃｇｇｃｇａａｔｇｇｇｃｔｇａｃｃｇｃｔｔｃｃｔｃｇｔｇｃｔｔｔａｃｇｇｔａｔｃｇｃｃｇｃｔｃｃｃｇａｔｔｃｇｃａｇｃｇｃａｔｃｇｃｃｔｔｃｔａｔｃｇｃｃｔｔｃｔｔｇａｃｇａｇｔｔｃｔｔｃｔｇａａｔｔａｔｔａａｃｇｃｔｔａｃａａｔｔｔｃｃｔｇａｔｇｃｇｇｔａｔｔｔｔｃｔｃｃｔｔａｃｇｃａｔｃｔｇｔｇｃｇｇｔａｔｔｔｃａｃａｃｃｇｃａｔｃａｇｇｔｇｇｃａｃｔｔｔｔｃｇｇｇｇａａａｔｇｔｇｃｇｃｇｇａａｃｃｃｃｔａｔｔｔｇｔｔｔａｔｔｔｔｔｃｔａａａｔａｃａｔｔｃａａａｔａｔｇｔａｔｃｃｇｃｔｃａｔｇａｇａｃａａｔａａｃｃｃｔｇａｔａａａｔｇｃｔｔｃａａｔａａｔａｇｃａｃｇｔｇｃｔａａａａｃｔｔｃａｔｔｔｔｔａａｔｔｔａａａａｇｇａｔｃｔａｇｇｔｇａａｇａｔｃｃｔｔｔｔｔｇａｔａａｔｃｔｃａｔｇａｃｃａａａａｔｃｃｃｔｔａａｃｇｔｇａｇｔｔｔｔｃｇｔｔｃｃａｃｔｇａｇｃｇｔｃａｇａｃｃｃｃｇｔａｇａａａａｇａｔｃａａａｇｇａｔｃｔｔｃｔｔｇａｇａｔｃｃｔｔｔｔｔｔｔｃｔｇｃｇｃｇｔａａｔｃｔｇｃｔｇｃｔｔｇｃａａａｃａａａａａａａｃｃａｃｃｇｃｔａｃｃａｇｃｇｇｔｇｇｔｔｔｇｔｔｔｇｃｃｇｇａｔｃａａｇａｇｃｔａｃｃａａｃｔｃｔｔｔｔｔｃｃｇａａｇｇｔａａｃｔｇｇｃｔｔｃａｇｃａｇａｇｃｇｃａｇａｔａｃｃａａａｔａｃｔｇｔｔｃｔｔｃｔａｇｔｇｔａｇｃｃｇｔａｇｔｔａｇｇｃｃａｃｃａｃｔｔｃａａｇａａｃｔｃｔｇｔａｇｃａｃｃｇｃｃｔａｃａｔａｃｃｔｃｇｃｔｃｔｇｃｔａａｔｃｃｔｇｔｔａｃｃａｇｔｇｇｃｔｇｃｔｇｃｃａｇｔｇｇｃｇａｔａａｇｔｃｇｔｇｔｃｔｔａｃｃｇｇｇｔｔｇｇａｃｔｃａａｇａｃｇａｔａｇｔｔａｃｃｇｇａｔａａｇｇｃｇｃａｇｃｇｇｔｃｇｇｇｃｔｇａａｃｇｇｇｇｇｇｔｔｃｇｔｇｃａｃａｃａｇｃｃｃａｇｃｔｔｇｇａｇｃｇａａｃｇａｃｃｔａｃａｃｃｇａａｃｔｇａｇａｔａｃｃｔａｃａｇｃｇｔｇａｇｃｔａｔｇａｇａａａｇｃｇｃｃａｃｇｃｔｔｃｃｃｇａａｇｇｇａｇａａａｇｇｃｇｇａｃａｇｇｔａｔｃｃｇｇｔａａｇｃｇｇｃａｇｇｇｔｃｇｇａａｃａｇｇａｇａｇｃｇｃａｃｇａｇｇｇａｇｃｔｔｃｃａｇｇｇｇｇａａａｃｇｃｃｔｇｇｔａｔｃｔｔｔａｔａｇｔｃｃｔｇｔｃｇｇｇｔｔｔｃｇｃｃａｃｃｔｃｔｇａｃｔｔｇａｇｃｇｔｃｇａｔｔｔｔｔｇｔｇａｔｇｃｔｃｇｔｃａｇｇｇｇｇｇｃｇｇａｇｃｃｔａｔｇｇａａａａａｃｇｃｃａｇｃａａｃｇｃｇｇｃｃｔｔｔｔｔａｃｇｇｔｔｃｃｔｇｇｃｃｔｔｔｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｔｔｇｃｔｃａｃａｔｇｔｔｃｔｔ
配列番号４：ｐＧＸ６０１０完全長配列及び注釈：
Figure 2023525558000003
Figure 2023525558000004
Figure 2023525558000005
 配列番号５－ｐ３５ＤＮＡ配列：
ＡＴＧＴＧＴＣＣＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＡＣＣＴＣＡＧＴＴＴＧＧＣＣＡＧＡＡＡＣＣＴＣＣＣＣＧＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＡＧＡＣＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＣＴＣＣＣＡＡＡＡＣＣＴＧＣＴＧＡＧＧＧＣＣＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＧＣＡＣＴＴＣＴＧＡＡＧＡＧＡＴＴＧＡＴＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＡＣＡＡＡＡＧＡＴＡＡＡＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＧＴＴＴＡＣＣＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＣＣＡＡＧＡＡＴＧＡＧＡＧＴＴＧＣＣＴＡＡＡＴＴＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＣＴＣＴＴＴＣＡＴＡＡＣＴＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＧＣＣＴＧＧＣＣＴＣＣＡＧＡＡＡＧＡＣＣＴＣＴＴＴＴＡＴＧＡＴＧＧＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＧＴＡＧＴＡＴＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＴＴＧＡＡＧＡＴＧＴＡＣＣＡＧＧＴＧＧＡＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＴＧＡＡＴＧＣＡＡＡＧＣＴＴＣＴＧＡＴＧＧＡＴＣＣＴＡＡＧＡＧＧＣＡＧＡＴＣＴＴＴＣＴＡＧＡＴＣＡＡＡＡＣＡＴＧＣＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＴＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＴＴＴＣＡＡＣＡＧＴＧＡＧＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＡＡＡＡＴＣＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＧＡＡＣＣＧＧＡＴＴＴＴＴＡＴＡＡＡＡＣＴＡＡＡＡＴＣＡＡＧＣＴＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＣＴＴＣＡＴＧＣＴＴＴＣＡＧＡＡＴＴＣＧＧＧＣＡＧＴＧＡＣＴＡＴＴＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＴＧＡＧＣＴＡＴＣＴＧＡＡＴＧＣＴＴＣＣＴＡＡ
配列番号６－ｐ３５アミノ酸配列：
ＭＣＰＡＲＳＬＬＬＶＡＴＬＶＬＬＤＨＬＳＬＡＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ＊
配列番号７－ｐ４０ＤＮＡ配列：
ＡＴＧＴＧＴＣＡＣＣＡＧＣＡＧＴＴＧＧＴＣＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＴＴＴＣＣＣＴＧＧＴＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＣＣＣＣＴＣＧＴＧＧＣＣＡＴＡＴＧＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＡＡＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＧＴＣＧＴＡＧＡＡＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＣＧＧＡＴＧＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＴＧＧＴＧＧＴＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＴＴＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＴＧＡＧＧＴＣＴＴＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＡＧＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＧＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＣＣＡＧＴＡＣＡＣＣＴＧＴＣＡＣＡＡＡＧＧＡＧＧＣＧＡＧＧＴＴＣＴＡＡＧＣＣＡＴＴＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＴＴＧＧＴＣＣＡＣＴＧＡＴＡＴＴＴＴＡＡＡＧＧＡＣＣＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＴＴＣＴＡＡＧＡＴＧＣＧＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＣＴＧＧＡＣＧＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＡＴＣＡＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＧＡＣＡＴＴＣＡＧＴＧＴＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＴＣＴＴＣＴＧＡＣＣＣＣＣＡＡＧＧＧＧＴＧＡＣＧＴＧＣＧＧＡＧＣＴＧＣＴＡＣＡＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＴＣＡＧＡＧＧＧＧＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＧＡＧＴＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＧＴＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＣＣＧＴＴＣＡＣＡＡＧＣＴＣＡＡＧＴＡＴＧＡＡＡＡＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＡＡＣＴＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＣＴＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＣＡＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＴＴＣＣＴＡＣＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＧＣＧＴＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＴＡＧＡＧＴＣＴＴＣＡＣＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＴＣＡＧＣＣＡＣＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＴＡＧＣＧＴＧＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＣＧＣＴＡＣＴＡＴＡＧＣＴＣＡＴＣＴＴＧＧＡＧＣＧＡＡＴＧＧＧＣＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＡＧ
配列番号８ ｐ４０アミノ酸配列：
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ＊
配列番号９ ＩｇＥリーダーＤＮＡ配列
Figure 2023525558000006
 配列番号１０ ＩｇＥリーダータンパク質
Figure 2023525558000007
 ＞ｐＧＸ３０２４ ＩｇＥリーダー配列を有するアミノ酸配列を挿入＜配列番号１１＞
ＭＤＷＴＷＩＬＦＬＶＡＡＡＴＲＶＨＳＥＳＫＤＡＳＴＳＡＴＳＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＬＨＴＬＱＩＱＣＶＦＣＲＮＡＬＴＴＡＥＩＹＡＹＡＹＫＮＬＫＶＶＷＲＤＮＦＰＦＡＡＣＡＣＣＬＥＬＱＧＫＩＮＱＹＲＨＦＮＹＡＡＹＡＰＴＶＥＥＥＴＮＥＤＩＬＫＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＩＥＫＬＫＨＩＬＧＫＡＲＦＩＫＬＮＮＱＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＬＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＬＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＥＤＳＳＥＤＥＶＤＫＶＤＫＱＤＳＱＰＬＴＱＨＹＱＩＬＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＥＣＴＤＧＤＩＲＱＬＱＤＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＥＳＡＮＡＳＴＳＡＴＴＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＭＨＴＬＱＩＮＣＶＦＣＫＮＡＬＴＴＡＥＩＹＳＹＡＹＫＱＬＫＶＬＦＲＧＧＹＰＹＡＡＣＡＣＣＬＥＦＨＧＫＩＮＱＹＲＨＦＤＹＡＧＹＡＴＴＶＥＥＥＴＫＱＤＩＬＤＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＶＥＫＶＫＨＩＬＴＫＡＲＦＩＫＬＮＣＴＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＭＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＨＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＶＤＳＳＥＤＥＶＤＥＶＤＧＱＤＳＱＰＬＫＱＨＹＱＩＶＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＱＣＴＥＴＤＩＲＥＶＱＱＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＴ
＞ｐＧＸ３０２４＿ＩｇＥリーダー配列を有する挿入のみ＜配列番号１２＞
ＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＴＴＴＣＴＣＧＴＴＧＣＣＧＣＴＧＣＴＡＣＴＣＧＣＧＴＴＣＡＴＡＧＴＧＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＣＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＴＡＡＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＧＡＡＡＴＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＴＴＣＣＴＴＴＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＴＣＡＧＴＡＣＣＧＧＣＡＣＴＴＣＡＡＣＴＡＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＧＡＡＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＧＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＴＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＣＣＧＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＴＧＴＧＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＡＡＧＡＡＴＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＣＴＧＡＴＣＣＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＡＧＡＣＡＣＧＴＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＡＴＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＡＧＣＡＡＴＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＧＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡ
配列及び配列識別子
＞ｐＧＸ３０２４ ＩｇＥリーダー配列を有しないアミノ酸配列のみ挿入＜配列番号１＞
ＥＳＫＤＡＳＴＳＡＴＳＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＬＨＴＬＱＩＱＣＶＦＣＲＮＡＬＴＴＡＥＩＹＡＹＡＹＫＮＬＫＶＶＷＲＤＮＦＰＦＡＡＣＡＣＣＬＥＬＱＧＫＩＮＱＹＲＨＦＮＹＡＡＹＡＰＴＶＥＥＥＴＮＥＤＩＬＫＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＩＥＫＬＫＨＩＬＧＫＡＲＦＩＫＬＮＮＱＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＬＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＬＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＥＤＳＳＥＤＥＶＤＫＶＤＫＱＤＳＱＰＬＴＱＨＹＱＩＬＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＥＣＴＤＧＤＩＲＱＬＱＤＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＥＳＡＮＡＳＴＳＡＴＴＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＭＨＴＬＱＩＮＣＶＦＣＫＮＡＬＴＴＡＥＩＹＳＹＡＹＫＱＬＫＶＬＦＲＧＧＹＰＹＡＡＣＡＣＣＬＥＦＨＧＫＩＮＱＹＲＨＦＤＹＡＧＹＡＴＴＶＥＥＥＴＫＱＤＩＬＤＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＶＥＫＶＫＨＩＬＴＫＡＲＦＩＫＬＮＣＴＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＭＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＨＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＶＤＳＳＥＤＥＶＤＥＶＤＧＱＤＳＱＰＬＫＱＨＹＱＩＶＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＱＣＴＥＴＤＩＲＥＶＱＱＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＴ
＞ｐＧＸ３０２４＿ＩｇＥリーダー配列を有しない挿入のみ＜配列番号２＞
ＧＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＣＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＴＡＡＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＧＡＡＡＴＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＴＴＣＣＴＴＴＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＴＣＡＧＴＡＣＣＧＧＣＡＣＴＴＣＡＡＣＴＡＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＧＡＡＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＧＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＴＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＣＣＧＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＴＧＴＧＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＡＡＧＡＡＴＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＣＴＧＡＴＣＣＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＡＧＡＣＡＣＧＴＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＡＴＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＡＧＣＡＡＴＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＧＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡ
＞ｐＧＸ３０２４＿完全配列＜配列番号３＞
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配列番号４：ｐＧＸ６０１０完全長配列及び注釈：
Figure 2023525558000022
Figure 2023525558000023
Figure 2023525558000024
 配列番号５－ｐ３５ＤＮＡ配列：
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配列番号６－ｐ３５アミノ酸配列：
ＭＣＰＡＲＳＬＬＬＶＡＴＬＶＬＬＤＨＬＳＬＡＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ＊
配列番号７－ｐ４０ＤＮＡ配列：
ＡＴＧＴＧＴＣＡＣＣＡＧＣＡＧＴＴＧＧＴＣＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＴＴＴＣＣＣＴＧＧＴＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＣＣＣＣＴＣＧＴＧＧＣＣＡＴＡＴＧＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＡＡＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＧＴＣＧＴＡＧＡＡＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＴＣＣＧＧＡＴＧＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＴＧＧＴＧＧＴＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＴＴＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＴＧＡＧＧＴＣＴＴＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＡＧＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＧＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＣＣＡＧＴＡＣＡＣＣＴＧＴＣＡＣＡＡＡＧＧＡＧＧＣＧＡＧＧＴＴＣＴＡＡＧＣＣＡＴＴＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＴＴＧＧＴＣＣＡＣＴＧＡＴＡＴＴＴＴＡＡＡＧＧＡＣＣＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＴＴＣＴＡＡＧＡＴＧＣＧＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＣＴＧＧＡＣＧＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＡＴＣＡＧＴＡＣＴＧＡＴＴＴＧＡＣＡＴＴＣＡＧＴＧＴＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＴＣＴＴＣＴＧＡＣＣＣＣＣＡＡＧＧＧＧＴＧＡＣＧＴＧＣＧＧＡＧＣＴＧＣＴＡＣＡＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＴＣＡＧＡＧＧＧＧＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＧＡＧＴＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＧＴＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＣＣＧＴＴＣＡＣＡＡＧＣＴＣＡＡＧＴＡＴＧＡＡＡＡＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＡＡＣＴＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＣＴＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＣＡＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＴＣＣＡＣＡＴＴＣＣＴＡＣＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＧＣＧＴＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＴＡＧＡＧＴＣＴＴＣＡＣＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＴＣＡＧＣＣＡＣＧＧＴＣＡＴＣＴＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＴＡＧＣＧＴＧＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＣＧＣＴＡＣＴＡＴＡＧＣＴＣＡＴＣＴＴＧＧＡＧＣＧＡＡＴＧＧＧＣＡＴＣＴＧＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＡＧ
配列番号８ ｐ４０アミノ酸配列：
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ＊
配列番号９ ＩｇＥリーダーＤＮＡ配列
Figure 2023525558000025
 配列番号１０ ＩｇＥリーダータンパク質
Figure 2023525558000026
 ＞ｐＧＸ３０２４ ＩｇＥリーダー配列を有するアミノ酸配列を挿入＜配列番号１１＞
ＭＤＷＴＷＩＬＦＬＶＡＡＡＴＲＶＨＳＥＳＫＤＡＳＴＳＡＴＳＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＬＨＴＬＱＩＱＣＶＦＣＲＮＡＬＴＴＡＥＩＹＡＹＡＹＫＮＬＫＶＶＷＲＤＮＦＰＦＡＡＣＡＣＣＬＥＬＱＧＫＩＮＱＹＲＨＦＮＹＡＡＹＡＰＴＶＥＥＥＴＮＥＤＩＬＫＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＩＥＫＬＫＨＩＬＧＫＡＲＦＩＫＬＮＮＱＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＬＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＬＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＥＤＳＳＥＤＥＶＤＫＶＤＫＱＤＳＱＰＬＴＱＨＹＱＩＬＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＥＣＴＤＧＤＩＲＱＬＱＤＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＥＳＡＮＡＳＴＳＡＴＴＩＤＱＬＣＫＴＦＮＬＳＭＨＴＬＱＩＮＣＶＦＣＫＮＡＬＴＴＡＥＩＹＳＹＡＹＫＱＬＫＶＬＦＲＧＧＹＰＹＡＡＣＡＣＣＬＥＦＨＧＫＩＮＱＹＲＨＦＤＹＡＧＹＡＴＴＶＥＥＥＴＫＱＤＩＬＤＶＬＩＲＣＹＬＣＨＫＰＱＣＥＶＥＫＶＫＨＩＬＴＫＡＲＦＩＫＬＮＣＴＲＫＧＲＣＬＨＣＷＴＴＣＭＥＤＭＬＰＲＧＲＫＲＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＨＧＲＨＶＴＬＫＤＩＶＬＤＬＱＰＰＤＰＶＧＬＨＡＹＥＱＬＶＤＳＳＥＤＥＶＤＥＶＤＧＱＤＳＱＰＬＫＱＨＹＱＩＶＴＣＣＣＧＣＤＳＮＶＲＬＶＶＱＣＴＥＴＤＩＲＥＶＱＱＬＬＬＧＴＬＮＩＶＣＰＩＣＡＰＫＴ
＞ｐＧＸ３０２４＿ＩｇＥリーダー配列を有する挿入のみ＜配列番号１２＞
ＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＴＴＴＣＴＣＧＴＴＧＣＣＧＣＴＧＣＴＡＣＴＣＧＣＧＴＴＣＡＴＡＧＴＧＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＣＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＴＡＡＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＣＡＧＡＴＣＣＡＧＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＣＧＡＡＡＴＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＴＴＣＣＴＴＴＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＴＣＡＧＴＡＣＣＧＧＣＡＣＴＴＣＡＡＣＴＡＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＣＧＡＡＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＡＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＡＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＧＧＡＡＧＡＴＧＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＴＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＣＡＣＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＧＣＡＣＣＧＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＴＧＴＧＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＣＡＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＣＡＡＧＡＡＴＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＧＣＴＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＡＣＡＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣＧＴＧＣＴＧＡＴＣＣＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＣＡＣＧＧＣＡＧＡＣＡＣＧＴＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＣＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＡＴＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＴＡＧＣＡＡＴＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＧＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＴＧＴＧＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡ
以上、本発明を要約すると下記のとおりである。
１．
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原をコードする核酸分子であって、前記ＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む、核酸分子。
２．
前記ＨＰＶ６抗原性ドメインが、ＨＰＶ６ Ｅ６－Ｅ７融合抗原である、上記１に記載の核酸分子。
３．
前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ１１ Ｅ６－Ｅ７融合抗原である、上記１又は２に記載の核酸分子。
４．
前記ＨＰＶ抗原が、
配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、又は
配列番号１若しくは配列番号１１と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む、上記１～３のいずれかに記載の核酸分子。
５．
配列番号２若しくは配列番号１２と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、
配列番号２のヌクレオチド配列、又は
配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、上記１～４のいずれかに記載の核酸分子。
６．
前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列が、前記ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列の５’に位置する、上記１～５のいずれかに記載の核酸分子。
７．
前記ＨＰＶ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、上記１～６のいずれかに記載の核酸分子。
８．
前記ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、上記２に記載の核酸分子。
９．
前記ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、上記３に記載の核酸分子。
１０．
上記１～９のいずれかに記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
１１．
ＤＮＡプラスミドを含む、上記１０に記載の発現ベクター。
１２．
配列番号３のヌクレオチド配列を含む、上記１０に記載の発現ベクター。
１３．
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む、免疫原性タンパク質。
１４．
前記ＨＰＶ６抗原性ドメインが、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインを含む、上記１３に記載の免疫原性タンパク質。
１５．
前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインを含む、上記１３又は１４に記載の免疫原性タンパク質。
１６．
配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、又は
配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む、上記１３～１５のいずれかに記載の免疫原性タンパク質。
１７．
前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、前記ＨＰＶ６抗原のＮ末端に位置する、上記１３～１６のいずれかに記載の免疫原性タンパク質。
１８．
前記ＨＰＶ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、上記１３～１７のいずれかに記載の免疫原性タンパク質。
１９．
前記ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、上記１４に記載の免疫原性タンパク質。
２０．
前記ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、上記１５に記載の免疫原性タンパク質。
２１．
上記１０～１２のいずれかに記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、ワクチン。
２２．
上記１０～１２のいずれかに記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
２３．
アジュバントを含む、上記２２に記載の薬学的組成物。
２４．
前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）を含む、上記２３に記載の薬学的組成物。
２５．
前記ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、上記２４に記載の薬学的組成物。
２６．
前記ＩＬ１２をコードする核酸分子が、発現ベクターである、上記２５に記載の薬学的組成物。
２７．
上記１３～２０のいずれかに記載の免疫原性タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、ワクチン。
２８．
上記１３～２０のいずれかに記載の免疫原性タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
２９．
アジュバントを含む、上記２８に記載の薬学的組成物。
３０．
前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）を含む、上記２９に記載の薬学的組成物。
３１．
前記アジュバントが、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、上記２３又は２９に記載の薬学的組成物。
３２．
前記ＩＬ１２のｐ３５サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記３１に記載の薬学的組成物。
３３．
前記ＩＬ１２のｐ４０サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記３１又は３２に記載の薬学的組成物。
３４．
ＩＬ１２をコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号４のヌクレオチド配列、又は
配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記３１、３２又は３３に記載の薬学的組成物。
３５．
前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む前記核酸分子が、発現ベクターである、上記３１～３４のいずれかに記載の薬学的組成物。
３６．
前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードする前記核酸分子を含む前記発現ベクターが、前記ＨＰＶ抗原をコードする前記核酸分子を含む前記発現ベクターと同じ発現ベクター又は異なる発現ベクターである、上記３５に記載の薬学的組成物。
３７．
前記薬学的に許容される賦形剤が、緩衝液、任意に、生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液、任意に、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）を含む緩衝液を含む、上記２２～２６又は２８～３６のいずれかに記載の薬学的組成物。
３８．
前記組成物が、緩衝液１ミリリットル当たり６ｍｇの前記ＨＰＶ抗原をコードする前記ベクターと、緩衝液１ミリリットル当たり０．２５ｍｇの前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードする前記ベクターと、を含む、上記３７に記載の薬学的組成物。
３９．
前記組成物が、緩衝液１ミリリットル当たり６ｍｇのｐＧＸ３０２４と、緩衝液１ミリリットル当たり０．２５ｍｇのｐＧＸ６０１０と、を含む、上記３８に記載の薬学的組成物。
４０．
対象における免疫応答を誘導する方法であって、前記対象に有効量の上記２２～２６又は２８～３９のいずれかに記載の薬学的組成物を投与し、それによって前記免疫応答を誘導することを含む、方法。
４１．
対象をＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１に対して予防的又は治療的に免疫化する方法であって、前記対象に有効量の上記２２～２６又は２８～３９のいずれかに記載の薬学的組成物を投与し、それによってＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、又はそれらの両方に対する免疫応答を誘導することを含む、方法。
４２．
対象における再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を治療又は予防するための方法であって、前記対象に有効量の上記２２～２６又は２８～３９のいずれかに記載の薬学的組成物を投与し、それによってＲＲＰを治療又は予防することを含む、方法。
４３．
前記ＲＲＰが、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰである、上記４２に記載の方法。
４４．
前記核酸分子が、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、上記４０～４３のいずれかに記載の方法。
４５．
アジュバントを前記対象に投与することを更に含む、上記４０～４４のいずれかに記載の方法。
４６．
前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である、上記４５に記載の方法。
４７．
前記ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、上記４６に記載の方法。
４８．
前記アジュバントが、前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、上記４５に記載の方法。
４９．
前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記４８に記載の方法。
５０．
前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記４８又は４９に記載の方法。
５１．
ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、
配列番号４のヌクレオチド配列、又は
配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記４７に記載の方法。
５２．
前記ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、発現ベクター、任意に、プラスミドである、上記４７に記載の方法。
５３．
前記プラスミドが、ｐＧＸ６０１０である、上記５２に記載の方法。
５４．
前記対象が、ヒトである、上記４０～５３のいずれかに記載の方法。
５５．
前記投与が、皮内又は筋肉内注射を含む、上記４０～５４のいずれかに記載の方法。
５６．
前記投与が、エレクトロポレーションを更に含む、上記５５に記載の方法。
５７．
予防薬又は医薬品の製造における、有効量の上記１０～１２のいずれかに記載の発現ベクター又は上記１３～２０のいずれかに記載の免疫原性タンパク質の、使用。
５８．
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６又はＨＰＶ１１感染症を予防又は治療するための、予防薬又は医薬品の製造における、有効量の上記１０～１２のいずれかに記載の発現ベクター又は上記１３～２０のいずれかに記載の免疫原性タンパク質の、使用。
５９．
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６又はＨＰＶ１１感染症を予防又は治療するための、有効量の上記２２～２６又は２８～３９のいずれかに記載の薬学的組成物の、使用。
６０．
再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を予防又は治療するための、有効量の上記２２～２６又は２８～３９のいずれかに記載の薬学的組成物の、使用。
６１．
前記ＲＲＰが、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰである、上記６０に記載の使用。
６２．
前記核酸分子が、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、上記５７～６１のいずれかに記載の使用。
６３．
アジュバントと組み合わせた、上記５７～６２のいずれかに記載の使用。
６４．
前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である、上記６３に記載の使用。
６５．
前記ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、上記６４に記載の使用。
６６．
前記アジュバントが、前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、上記６５に記載の使用。
６７．
前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記６６に記載の使用。
６８．
前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記６６又は６７に記載の使用。
６９．
ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、
配列番号４のヌクレオチド配列、又は
配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、上記６５に記載の使用。
７０．
前記ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、発現ベクター、任意に、プラスミドである、上記６５に記載の使用。
７１．
前記プラスミドが、ｐＧＸ６０１０である、上記７０に記載の使用。

Claims (71)

  1. ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原をコードする核酸分子であって、前記ＨＰＶ抗原が、ＨＰＶ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む、核酸分子。
  2. 前記ＨＰＶ６抗原性ドメインが、ＨＰＶ６ Ｅ６－Ｅ７融合抗原である、請求項１に記載の核酸分子。
  3. 前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ１１ Ｅ６－Ｅ７融合抗原である、請求項１又は２に記載の核酸分子。
  4. 前記ＨＰＶ抗原が、
    配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、又は
    配列番号１若しくは配列番号１１と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子。
  5. 配列番号２若しくは配列番号１２と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列、
    配列番号２のヌクレオチド配列、又は
    配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子。
  6. 前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインをコードする核酸配列が、前記ＨＰＶ６抗原性ドメインをコードする核酸配列の５’に位置する、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子。
  7. 前記ＨＰＶ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子。
  8. 前記ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、請求項２に記載の核酸分子。
  9. 前記ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、請求項３に記載の核酸分子。
  10. 先行請求項のいずれか一項に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
  11. ＤＮＡプラスミドを含む、請求項１０に記載の発現ベクター。
  12. 配列番号３のヌクレオチド配列を含む、請求項１０に記載の発現ベクター。
  13. ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１抗原性ドメインを含む、免疫原性タンパク質。
  14. 前記ＨＰＶ６抗原性ドメインが、ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインを含む、請求項１３に記載の免疫原性タンパク質。
  15. 前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及びＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインを含む、請求項１３又は１４に記載の免疫原性タンパク質。
  16. 配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列、又は
    配列番号１若しくは配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％相同であるアミノ酸配列を含む、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質。
  17. 前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、前記ＨＰＶ６抗原のＮ末端に位置する、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質。
  18. 前記ＨＰＶ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、請求項１３～１７のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質。
  19. 前記ＨＰＶ６ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ６ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、請求項１４に記載の免疫原性タンパク質。
  20. 前記ＨＰＶ１１ Ｅ６抗原性ドメイン及び前記ＨＰＶ１１ Ｅ７抗原性ドメインが、１つ以上の翻訳後切断部位、１つ以上の翻訳スキップ部位、又はそれらの両方によって分離されている、請求項１５に記載の免疫原性タンパク質。
  21. 請求項１０～１２のいずれか一項に記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、ワクチン。
  22. 請求項１０～１２のいずれか一項に記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
  23. アジュバントを含む、請求項２２に記載の薬学的組成物。
  24. 前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）を含む、請求項２３に記載の薬学的組成物。
  25. 前記ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、請求項２４に記載の薬学的組成物。
  26. 前記ＩＬ１２をコードする核酸分子が、発現ベクターである、請求項２５に記載の薬学的組成物。
  27. 請求項１３～２０のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、ワクチン。
  28. 請求項１３～２０のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
  29. アジュバントを含む、請求項２８に記載の薬学的組成物。
  30. 前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）を含む、請求項２９に記載の薬学的組成物。
  31. 前記アジュバントが、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、請求項２３又は２９に記載の薬学的組成物。
  32. 前記ＩＬ１２のｐ３５サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
    配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の薬学的組成物。
  33. 前記ＩＬ１２のｐ４０サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
    配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項３１又は３２に記載の薬学的組成物。
  34. ＩＬ１２をコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号４のヌクレオチド配列、又は
    配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項３１、３２又は３３に記載の薬学的組成物。
  35. 前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む前記核酸分子が、発現ベクターである、請求項３１～３４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  36. 前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードする前記核酸分子を含む前記発現ベクターが、前記ＨＰＶ抗原をコードする前記核酸分子を含む前記発現ベクターと同じ発現ベクター又は異なる発現ベクターである、請求項３５に記載の薬学的組成物。
  37. 前記薬学的に許容される賦形剤が、緩衝液、任意に、生理食塩水－クエン酸ナトリウム緩衝液、任意に、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）を含む緩衝液を含む、請求項２２～２６又は２８～３６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  38. 前記組成物が、緩衝液１ミリリットル当たり６ｍｇの前記ＨＰＶ抗原をコードする前記ベクターと、緩衝液１ミリリットル当たり０．２５ｍｇの前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードする前記ベクターと、を含む、請求項３７に記載の薬学的組成物。
  39. 前記組成物が、緩衝液１ミリリットル当たり６ｍｇのｐＧＸ３０２４と、緩衝液１ミリリットル当たり０．２５ｍｇのｐＧＸ６０１０と、を含む、請求項３８に記載の薬学的組成物。
  40. 対象における免疫応答を誘導する方法であって、前記対象に有効量の請求項２２～２６又は２８～３９のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与し、それによって前記免疫応答を誘導することを含む、方法。
  41. 対象をＨＰＶ６及び／又はＨＰＶ１１に対して予防的又は治療的に免疫化する方法であって、前記対象に有効量の請求項２２～２６又は２８～３９のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与し、それによってＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、又はそれらの両方に対する免疫応答を誘導することを含む、方法。
  42. 対象における再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を治療又は予防するための方法であって、前記対象に有効量の請求項２２～２６又は２８～３９のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与し、それによってＲＲＰを治療又は予防することを含む、方法。
  43. 前記ＲＲＰが、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰである、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記核酸分子が、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. アジュバントを前記対象に投与することを更に含む、請求項４０～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記アジュバントが、前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、請求項４５に記載の方法。
  49. 前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
    配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
    配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４８又は４９に記載の方法。
  51. ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、
    配列番号４のヌクレオチド配列、又は
    配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  52. 前記ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、発現ベクター、任意に、プラスミドである、請求項４７に記載の方法。
  53. 前記プラスミドが、ｐＧＸ６０１０である、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記対象が、ヒトである、請求項４０～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記投与が、皮内又は筋肉内注射を含む、請求項４０～５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記投与が、エレクトロポレーションを更に含む、請求項５５に記載の方法。
  57. 予防薬又は医薬品の製造における、有効量の請求項１０～１２のいずれか一項に記載の発現ベクター又は請求項１３～２０のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質の、使用。
  58. ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６又はＨＰＶ１１感染症を予防又は治療するための、予防薬又は医薬品の製造における、有効量の請求項１０～１２のいずれか一項に記載の発現ベクター又は請求項１３～２０のいずれか一項に記載の免疫原性タンパク質の、使用。
  59. ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６又はＨＰＶ１１感染症を予防又は治療するための、有効量の請求項２２～２６又は２８～３９のいずれか一項に記載の薬学的組成物の、使用。
  60. 再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）を予防又は治療するための、有効量の請求項２２～２６又は２８～３９のいずれか一項に記載の薬学的組成物の、使用。
  61. 前記ＲＲＰが、若年発症ＲＲＰ又は成人発症ＲＲＰである、請求項６０に記載の使用。
  62. 前記核酸分子が、配列番号２、配列番号３、又は配列番号１２のヌクレオチド配列を含む、請求項５７～６１のいずれか一項に記載の使用。
  63. アジュバントと組み合わせた、請求項５７～６２のいずれか一項に記載の使用。
  64. 前記アジュバントが、インターロイキン－１２（ＩＬ１２）である、請求項６３に記載の使用。
  65. 前記ＩＬ１２が、核酸分子によってコードされる、請求項６４に記載の使用。
  66. 前記アジュバントが、前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニット、前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、又はそれらの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む、請求項６５に記載の使用。
  67. 前記ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号６をコードするヌクレオチド配列、又は
    配列番号６をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項６６に記載の使用。
  68. 前記ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットをコードする前記ヌクレオチド配列が、
    配列番号８をコードするヌクレオチド配列、又は
    配列番号８をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項６６又は６７に記載の使用。
  69. ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、
    配列番号４のヌクレオチド配列、又は
    配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％相同であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項６５に記載の使用。
  70. 前記ＩＬ１２をコードする前記核酸分子が、発現ベクター、任意に、プラスミドである、請求項６５に記載の使用。
  71. 前記プラスミドが、ｐＧＸ６０１０である、請求項７０に記載の使用。
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