JP2023062563A - 栄養組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
また、特許文献3には、ヒトミルクオリゴ糖の1つである2’-フコシルラクトースとα-トコフェロールとを含有する組成物が開示されており、かかる組成物が認知、学習、及び記憶の少なくとも1つを改善する作用を有することが記載されている。
なお、α-トコフェロール以外の他のトコフェロールのアイソフォームについては上述したような知見はない。
のオリゴ糖と、α-トコフェロール以外のトコフェロールのアイソフォームとを組み合わせることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖をより促進させられることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明の栄養組成物において、β-トコフェロールの含有量に対するδ-トコフェロールの含有量の質量比(δ/β)は、好ましくは5以上であり、より好ましくは10以上である。
本発明の栄養組成物において、δ-トコフェロールの含有量に対するγ-トコフェロールの含有量の質量比(γ/δ)は、好ましくは8.8以下であり、より好ましくは3.9以下である。
本発明の栄養組成物において、オリゴ糖の含有量に対する、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールの総含有量の質量比は、好ましくは0.001~0.2である。
本発明の栄養組成物において、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールの組成物全体に対する総含有量は、好ましくは0.0002~0.1質量%である。
本発明の栄養組成物において、オリゴ糖の組成物全体に対する含有量は、好ましくは0.05~10質量%である。
本発明の栄養組成物において、前記オリゴ糖は、好ましくは糖残基の数が3個以上5個以下であるものである。また、前記オリゴ糖は、好ましくはヒトミルクオリゴ糖であり、より好ましくはラクト-N-ネオテトラオース(LNnTとも記す)、ラクト-N-テトラオース(LNTとも記す)、2’-フコシルラクトース(2’-FLとも記す)、3’-シアリルラクトース(3’-SLとも記す)、6’-シアリルラクトース(6’-SLとも記す)、ジフコシルラクトース(DFLとも記す)、及び3-フコシルラクトース(3-FLとも記す)からなる群から選択される一種又は二種以上を含む。
本発明の栄養組成物は、ビフィドバクテリウム属細菌増殖促進用途に好適であり、前記ビフィドバクテリウム属細菌は、好ましくはビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ロンガムからなる群から選択される一種又は二種以上である。
本発明の栄養組成物は、さらにビフィドバクテリウム属細菌を含有することが好ましい。
本発明の栄養組成物は、調製乳であることが好ましい。
かかる栄養組成物は、飲食品や医薬品等の経口組成物の態様としたり、添加物等の態様で飲食品や医薬品に含有させたりすることができる。本発明の栄養組成物を摂取することにより、腸内細菌叢の改善効果が得られ、摂食者、特に乳幼児の健康維持に役立つことが期待される。
前記トコフェロールは、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールからなる群から選択される一種又は二種以上を含む。好ましくは、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールの3種ともを含む。また、本発明の栄養組成物は、α-トコフェロールをさらに含んでもよい。
δ/βを上記の範囲とすることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進効果がより得られやすくなる。
γ/δを上記の範囲とすることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進効果がより得られやすくなる。
前記質量比を上記の範囲とすることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進効果がより得られやすくなる。
前記総含有量を上記の範囲とすることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進効果がより得られやすくなる。
前記総含有量を上記の範囲とすることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進効果がより得られやすくなる。
本発明におけるオリゴ糖としては、ラフィノース、ラクチュロース、マルトトリオース、スタキオース、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ケストース、ニストース、大豆オリゴ糖、乳果オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸、ポリデキストロース、イヌリン等が好ましく挙げられるが、これらに限定されない。また、前述したオリゴ糖の一種又は二種以上を含んでいてもよい。
これらのうち、糖残基の数が3個以上5個以下のオリゴ糖として、マルトトリオース、スタキオース、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ケストース、ニストース、及びヒトミルクオリゴ糖等が好ましい。
ヒトミルクオリゴ糖は、ヒトの乳に通常含まれるオリゴ糖であれば特に限定されず、フコシル化オリゴ糖、シアリル化オリゴ糖、アセチル化オリゴ糖、ガラクトシルラクトース等が挙げられる。
フコシル化オリゴ糖としては、2’-フコシルラクトース、ラクト-N-フコペンタオース-I、ラクト-N-フコペンタオース-II、ラクト-N-フコペンタオース-III等が挙げられる。
シアリル化オリゴ糖としては、3’-シアリルラクトース、6’-シアリルラクトース、ジフコシルラクトース、3-フコシルラクトース、ラクトジフコテトラオース、ジフコシルラクト-N-テトラオース、シアリルラクト-N-テトラオースa、シアリルラクト-N-テトラオースb、シアリルラクト-N-テトラオースc、ジシアリルラクト-N-
テトラオース等が挙げられる。
アセチル化オリゴ糖としては、ラクト-N-ネオテトラオース、ラクト-N-テトラオース、ラクト-N-ヘキサオース等が挙げられる。
ガラクトシルラクトースとしては、3’-ガラクトシルラクトース、4’-ガラクトシルラクトース、6’-ガラクトシルラクトース等が挙げられる。
これらのうち、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進効果の観点から、ラクト-N-ネオテトラオース、ラクト-N-テトラオース、2’-フコシルラクトース、3’-シアリルラクトース、6’-シアリルラクトース、ジフコシルラクトース、及び3-フコシルラクトースから選択される一種又は二種以上が特に好ましい。
進させることができる。より具体的には、通常オリゴ糖がビフィドバクテリウム細菌により資化されその増殖を促進するところ、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及び/又はδ-トコフェロールがその増殖促進効果をより高めることにより、優れたプレバイオティクスとなり得る。
本発明の栄養組成物により増殖が促進されるビフィドバクテリウム属細菌は、特に限定されないが例えばビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(Bifidobacterium breve)、ビフィドバクテリウム・インフ
ァンティス(Bifidobacterium infantis、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに再分類されている)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム・アニマリス(Bifidobacterium animalis)
、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム(Bifidobacterium pseudolongum)、ビフィドバクテリウム・ロイテリ(Bifidobacterium reuteri)、ビフィドバクテリウム・カテ
ヌラータム(Bifidobacterium catenulatum)、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌ
ラータム(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、ビフィドバクテリウム・ラクティス
(Bifidobacterium lactis)等が挙げられる。これらのうち、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムは、乳幼児期の腸内細菌叢の健康に特に重要な四種であり(いわゆる「乳児型ビフィズス菌」)、増殖促進されることが好ましい。
かかる菌数の増加は、菌数を直接的に計測する他、例えば、細菌を培養した培地や組成物を摂取したヒト等の動物の消化管内容物の濁度(吸光度)又は酢酸等の短鎖脂肪酸量を測定してその値が上昇すること、前記培地におけるpHを測定してその値が低下すること、等により確認することができる。
在するビフィドバクテリウム属細菌の存在割合を増加させることを含む。ここで「存在割合」は、腸内細菌叢において検出された菌群全体に対する「占有率」とも言い換えることができる。「存在割合の増加」は、ビフィドバクテリウム属細菌の腸内細菌叢における存在割合が増加する限りにおいて、他の細菌の腸内細菌叢における存在割合が増加又は減少することが同時に生じてもよい。
かかる存在割合の増加の程度は、特に限定されないが、本発明の栄養組成物を適用しない場合の当該細菌の存在割合に対して、好ましくは2%以上、より好ましくは5%以上、さらに好ましくは20%以上大きいことをいう。
速度の増大は、例えば、任意の菌数又は存在割合に達するのに要する時間が、本発明の栄養組成物を適用した場合に適用しない場合に比べて短くなること等により確認することができる。
本発明の栄養組成物の摂取(投与)経路は、経口又は非経口のいずれでもよいが、通常は経口である。また、非経口摂取(投与)としては、直腸投与等が挙げられる。
ここで、栄養組成物に含有させるビフィドバクテリウム属細菌は、フィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム、ビフィドバクテリウム・ロイテリ、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム、ビフィドバクテリウム・ラクティス
等が挙げられ、特に限定されないが、前述した乳幼児において特に重要なビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含むことが好ましい。
BP-02621(別名:BB536又はBifidobacterium longum subsp. longum ATCC BAA-999)を用いることができる。ビフ
ィドバクテリウム・ロンガムBB536は、NPMDに、2018年1月26日にNITE BP-02621の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたもので
ある。これと同一の細菌であるBifidobacterium longum subsp. longum ATCC BAA-999(番号:ATCC BAA-999)は、A
merican Type Culture Collection(ATCC:米国、2
0110、ヴァージニア州、マナサス、ユニバーシティ ブルバード10801(108
01 University Boulevard, Manassas, VA 2011
0,United States of America))から、ATCC BAA-999として入手可能である(例えば、特開2012-223134号公報等参照)。
また、ビフィドバクテリウム・ロンガムとしては、ATCCから入手可能である、ビフ
ィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムATCC 15707を用い
ることができる。
6Vが挙げられる。ビフィドバクテリウム・ブレーベ M-16Vは、2018年1月2
6日付で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター(NPMD)(〒292-0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室)に、受託番号NITE BP-02622で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。市販品と
して入手可能な、例えば、森永乳業社製の「ビフィドバクテリウム・ブレーベ M-16
V」を用いてもよい。
また、ビフィドバクテリウム・ブレーベとしては、ビフィドバクテリウム・ブレーベ
MCC1274も挙げられる。ビフィドバクテリウム・ブレーベ MCC1274は、2
009年8月25日付で、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(現・独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(IPOD)(〒292-0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 120号室)に、受託番号FERM BP-
11175で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。
に基づく国際寄託がなされている。
ビフィドバクテリウム・インファンティスとしては、ビフィドバクテリウム・インファンティス M-63も挙げられる。ビフィドバクテリウム・インファンティス M-63は、2018年1月26日付で、NPMDに、受託番号NITE BP-02623で、ブ
ダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・インファンティスとしては、ATCCから入手可能である、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスATCC
15697を用いることができる。
約に基づく国際寄託がなされている。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092は、2017年2月21日付でNPMDに、受託番号NITE BP-02429で、ブダペスト条
約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319は、2017年2月21日付でNPMDに、受託番号NITE BP-02431で、ブダペ
スト条約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868は、2017年2月21日付でNPMDに、受託番号NITE BP-02432で、ブダペ
スト条約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870は、2017年2月21日付でNPMDに、受託番号NITE BP-02433で、ブダペ
スト条約に基づく国際寄託がなされている。
ン、エチルメタンスルフォネート、およびメチルメタンスルフォネート等の変異剤による処理が挙げられる。寄託株から自然に生じた株としては、寄託株の使用の際に自然に生じた株が挙げられる。そのような株としては、寄託株の培養(例えば継代培養)により自然に生じた変異株が挙げられる。派生株は、一種の改変により構築されてもよく、二種またはそれ以上の改変により構築されてもよい。
また、本発明の栄養組成物に含有させるビフィドバクテリウム属細菌の菌体は、前述のビフィドバクテリウム属細菌を培養することにより容易に取得することができる。培養方法は、ビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り、特に制限されない。培養方法としては、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を、そのまま、あるいは適宜修正して、用いることができる。培養温度は、例えば、25~50℃であってよく、35~42℃であることが好ましい。培養は、好ましくは嫌気条件下で実施することができ、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら実施することができる。また、培養は、液体静置培養等の微好気条件下で実施することもできる。培養は、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌が所望の程度に増殖するまで、あるいは5~24時間実施することができる。
本発明の栄養組成物に含有し得るビフィドバクテリウム属細菌の取得手順の一例を挙げると、炭素源、窒素源、無機塩類、有機成分、及び培地全体に対して0.1~2.0質量%のアスコルビン酸を含有する培地に、ビフィドバクテリウム属細菌を接種し、35~42℃で5~24時間培養し、該培養物から遠心分離により菌体を集菌し、回収した湿菌体を凍結乾燥して菌末とする。このような手順によれば、生菌体の保存安定性が高いビフィドバクテリウム属細菌菌末を取得できるので好ましい。
また、本発明の栄養組成物において、組成物に含有されるビフィドバクテリウム属細菌の総生菌数は、組成物に含有されるオリゴ糖1g当たり、好ましくは1×108~1×1011cfu、より好ましくは1×108~1×1010cfu、さらに好ましくは1×108~3×109cfuである。
なお、生菌を含有する限りにおいて、死菌も含まれていても構わない。
ここで、cfuはコロニー形成単位(Colony forming unit)を指す。本明細書においては、例えば、還元脱脂粉乳10質量%を含む固体培地にて38℃で培養したときの値とすることができる。
これらの範囲は、通常、栄養組成物として流通するときの含有量であっても、経口摂取するときの含有量であってもよい。
そのため、本発明の栄養組成物は、腸内細菌叢を改善させるために用いることができる。ここで、「菌叢改善」とは、ビフィドバクテリウム属細菌、特に乳児型ビフィズス菌の腸内細菌叢に存在する細菌数やその存在割合を増加させることを含む。また、「菌叢改善」は、ビフィドバクテリウム属細菌の腸内細菌叢における存在割合が増加する限りにおいて、他の善玉菌の腸内細菌叢における存在割合を増加させることや、悪玉菌の腸内細菌叢における存在割合を減少させることを含んでもよい。他の善玉菌としては乳酸菌等が挙げられる。悪玉菌としては、ウェルシュ菌、サルモネラ属細菌、黄色ブドウ球菌、病原性大腸菌等が挙げられる。
前記「存在割合」は、腸内細菌叢において検出された菌群全体に対する「占有率」とも言い換えることができる。
本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進における、オリゴ糖及びβ-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールからなる群から選択される一種又は二種以上のトコフェロールの使用とも言い換えることができる。
本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖を促進させるために用いられるオリゴ糖及びβ-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールからなる群から選択される一種又は二種以上のトコフェロール、とも言い換えることができる。
ここで、対象は、動物であれば特に限定されないが、通常はヒトである。なお、「対象に投与すること」は、「対象に摂取させること」と同義であってよい。摂取は、自発的なもの(自由摂取)であってもよく、強制的なもの(強制摂取)であってもよい。すなわち、投与工程は、具体的には、例えば、オリゴ糖及びβ-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールからなる群から選択される一種又は二種以上のトコフェロールを飲食品や飼料に配合して対象に供給し、以て対象に飲食品や飼料を自由摂取させる工程であってもよい。
なお、摂取(投与)の量や期間にかかわらず、薬剤は1日1回又は複数回に分けて投与することができる。
飲食品としては、本発明の効果を損なわないものであれば形態や性状は特に制限されず、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。
なお、飲食品や医薬品に添加する添加物の態様も本発明の栄養組成物に含まれる。かかる態様としては、例えば、搾乳された母乳や調製乳に添加する添加物が挙げられ、添加後の乳を新生児や乳児に摂取させることが想定される。
飲食品は、通常は経口摂取されるものであるが、これに限られず、例えば経鼻摂取されるもの、胃瘻や腸瘻により摂取されるものでもよい。例えば、新生児や乳児に対し、後述の本発明の栄養組成物である調製乳や、本発明の栄養組成物を添加した母乳を、経鼻胃栄養チューブ等によって摂取させることが想定される。
本発明において、「栄養組成物」は、飲食品の一態様として特に限定されないが、好ましくは調製乳、流動食、サプリメント等であり、より好ましくは調製乳である。摂取対象は、乳児、幼児、小児、成人を問わないが、好ましくは乳児及び幼児である。
調製乳には、調製粉乳、調製液状乳が含まれる。
調製粉乳は、乳および乳製品の成分規格等に関する省令(乳等省令)において、「生乳、牛乳、特別牛乳、またはこれらを原料として製造した食品を加工し、または主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え粉末状にしたもの」として定義される。
調製液状乳は、前記省令において、「生乳、牛乳、特別牛乳、またはこれらを原料として製造した食品を加工し、または主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え液状にしたもの」として定義される。
また、調製乳は、各種の蛋白質、油脂、炭水化物、ミネラル類、ビタミン類等の栄養成分が配合されたものであって、粉末状又は液状に加工されたものも含まれる。
また、調製乳にはさらに、健康増進法で規定される特別用途食品における「乳児用調製粉乳」、「乳児用調製液状乳」「妊産婦、授乳婦用粉乳」が含まれ、幼児向け調製粉乳、成人用栄養粉末、高齢者用栄養粉末等の態様も含まれる。
飼料の形態としては特に制限されず、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類;大豆油粕、ナタネ油粕、ヤシ油粕、アマニ油粕等の植物性油粕類;フスマ、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類;コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類;魚粉、脱脂粉乳、ホエイ、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類;トルラ酵
母、ビール酵母等の酵母類;第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料;油脂類;単体アミノ酸;糖類等を含有するものであってよい。
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的(インターネット等)方法により提供する行為等が挙げられる。
かかる表示としては、例えば、「ビフィズス菌を増やしたい方」、「赤ちゃんの健康に役立つビフィズス菌を増やすために」、「腸内細菌叢を改善する」「腸内フローラを改善する」、「乳幼児のおなかの健康のために」等と表示することが挙げられる。
医薬品の形態としては、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤;溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合、座剤、軟膏剤、注射剤等に製剤化することができる。
製剤化に際しては、通常製剤化に用いられている賦形剤、pH調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。また、他の薬効成分や、公知の又は将来的に見出されるビフィドバクテリウム属細菌に対するプレバイオティクスや、他の細菌に対するプレバイオティクスなどを併用することも可能である。
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤等が挙げられる。
(1)単独培養
ビフィドバクテリウム・インファンティス M-63、ビフィドバクテリウム・インフ
ァンティス MCC2042、又はビフィドバクテリウム・ビフィダム MCC2030をMRS培地中で37℃、16時間培養して前培養液を作成した。
表1に示す成分(システィン、トコフェロール、及びオリゴ糖以外)を精製水に溶解して2倍濃度の培地を作成し、pHを6.5に調整したのちに、121℃、15分間オートクレーブ滅菌した。その後、フィルター滅菌したシスティンを添加した。トコフェロールをジメチルスルホキシド(富士フィルム和光純薬)に、オリゴ糖を精製水にそれぞれ溶解し、それぞれフィルター滅菌して上記培地にさらに添加したのちに、表1に示す最終濃度になるように、滅菌した精製水で濃度を調整した。調製済みの培地を96wellプレートに1群につき、n=6となるように200μLずつ添加し、続いて嫌気状態下で、無菌的にビフィドバクテリウム・インファンティス M-63、ビフィドバクテリウム・イン
ファンティス MCC2042、又はビフィドバクテリウム・ビフィダム MCC2030の前培養液をそれぞれ培地容量の1%となるように添加した。37℃で16時間嫌気チャンバー内(Baker Ruskinn)で培養を行い、濁度(OD600)を測定した。
培養開始時から培養16時間後の濁度の差(ΔOD600)を各ビフィドバクテリウム属細菌の菌株の増殖度合として、図1~12に示す。いずれの菌株も、トコフェロールを含有せずヒトミルクオリゴ糖を含有する場合と比較して、3種トコフェロールとヒトミルクオリゴ糖を組み合わせて含有する場合にビフィドバクテリウム属細菌の増殖がより促進された。なお、3種トコフェロールを含有しヒトミルクオリゴ糖を含有しない場合は、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖は認められなかった。
(1)検体の前処理
1.5又は7ヶ月齢の健康な乳児2名から、便サンプルを入手した。排便後直ちに採取し、直ちに10℃以下、嫌気条件下に移行させた。排便後8時間以内に、採取した便を10倍量の生理食塩水で希釈し、使用するまで-80℃にて保管した。
大腸内の環境を模すために、以下の手順で培養実験を行った。Bio Jr.8 100mL×8連培養装置(株式会社バイオット社製BJR-25NA1S-8M)を用い、操作は機器の説明書に従った。培地は、表2に示す組成のYCFA培地100mLを用いた。トコフェロール及びオリゴ糖以外の培地成分は精製水に溶解してオートクレーブで滅菌し、トコフェロールはジメチルスルホキシド(DMSO、富士フィルム和光純薬株式会社)にオリゴ糖は精製水に溶解した後ろ過滅菌したものを、前記オートクレーブ後のものに添加した。培養温度は37℃とし、各培養容器にろ過滅菌したCO2を吹き込み、培養期間中の嫌気状態を維持した。pHを7.0に調整した後、生理食塩水で希釈した便サンプルを100μL(便として10mg)添加し、嫌気培養を開始した。乳児の大腸内pHを模すために、培養期間中にpHが5.5を下回った際は1M Na2CO3で中和し、pHの
コントロールを行った。培養開始から7時間後に培地を回収し、8000rmp、3min、4℃で遠心し、上清と沈殿物をそれぞれ回収した。
GENE PREP STAR PI-480自動抽出機(Kurabo Industries Ltd. Japan)を用いて、(2
)で回収した沈殿物からDNAを抽出した。抽出したDNAを鋳型として、配列番号1及び2のプライマーを用いて、Applied Bio systems 7500 Fast & 7500リアルタイムPCRシ
ステム(サーモフィッシャー製)により定量PCRを行い、ビフィドバクテリウム属細菌の菌数を測定した。PCR条件は、95℃で5秒間変性した後、55℃で20秒間アニーリング及び72℃で30秒間伸長を40サイクルとした。
表3に、定量PCRにより測定した、7時間培養後のビフィドバクテリウム属細菌の菌数示す。菌数は、トコフェロール非添加群の菌数を1とした場合の相対値で示した。
2’-フコシルラクトース及び6’-シアリルラクトースとも、トコフェロールと組み合わせて培養することによりビフィドバクテリウム属細菌の増殖がより促進された。
Claims (15)
- オリゴ糖とトコフェロールとを含有する栄養組成物であって、
前記トコフェロールが、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールからなる群から選択される一種又は二種以上を含む栄養組成物(ただし、母乳を除く)。 - β-トコフェロールの含有量に対するδ-トコフェロールの含有量の質量比(δ/β)が5以上である、請求項1に記載の栄養組成物。
- β-トコフェロールの含有量に対するδ-トコフェロールの含有量の質量比(δ/β)が10以上である、請求項2に記載の栄養組成物。
- δ-トコフェロールの含有量に対するγ-トコフェロールの含有量の質量比(γ/δ)が8.8以下である、請求項1~3のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- δ-トコフェロールの含有量に対するγ-トコフェロールの含有量の質量比(γ/δ)が3.9以下である、請求項4に記載の栄養組成物。
- オリゴ糖の含有量に対する、β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールの総含有量の質量比が0.001~0.2である、請求項1~5のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- β-トコフェロール、γ-トコフェロール及びδ-トコフェロールの組成物全体に対する総含有量が、0.0002~0.1質量%である、請求項1~6のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- オリゴ糖の組成物全体に対する含有量が、0.05~10質量%である、請求項1~7のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- 前記オリゴ糖の糖残基の数が3個以上5個以下である、請求項1~8のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- 前記オリゴ糖が、ヒトミルクオリゴ糖である、請求項1~9のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- 前記ヒトミルクオリゴ糖が、ラクト-N-ネオテトラオース、ラクト-N-テトラオース、2’-フコシルラクトース、3’-シアリルラクトース、6’-シアリルラクトース、ジフコシルラクトース、及び3-フコシルラクトースからなる群から選択される一種又は二種以上を含む、請求項10に記載の栄養組成物。
- ビフィドバクテリウム属細菌増殖促進用である、請求項1~11のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- 前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ロンガムからなる群から選択される一種又は二種以上である、請求項12に記載の栄養組成物。
- さらにビフィドバクテリウム属細菌を含有する、請求項1~13のいずれか一項に記載
の栄養組成物。 - 調製乳である、請求項1~14のいずれか一項に記載の栄養組成物。
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