WO2017130859A1 - 神経細胞死抑制剤 - Google Patents

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WO2017130859A1
WO2017130859A1 PCT/JP2017/001935 JP2017001935W WO2017130859A1 WO 2017130859 A1 WO2017130859 A1 WO 2017130859A1 JP 2017001935 W JP2017001935 W JP 2017001935W WO 2017130859 A1 WO2017130859 A1 WO 2017130859A1
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WO
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bifidobacterium longum
bacterium
cell death
culture
subspecies
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PCT/JP2017/001935
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リオング，ミン－ツェ
タン，イサベラ
金忠 清水
拓海 佐藤
洋大 小林
徹哉 久原
那波 橋倉
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森永乳業株式会社
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria

Definitions

  • the present invention relates to a nerve cell death inhibitor.
  • Non-patent Document 1 the literature does not report that probiotics such as lactic acid bacteria suppress neuronal cell death.
  • Non-patent Documents 2, 3, and 4 some probiotics such as lactic acid bacteria have been reported to suppress neuronal cell death due to stress.
  • Non-patent Document 5 It has also been reported that anxiety behavior of mice due to chronic stress has been improved by ingestion of Lactobacillus plantarum PS128.
  • Lactobacillus helveticus (Lactobacillus helveticus) R0052 and Bifidobacterium longum (R0175) were ingested by humans, there was a report that improvements in stress, anxiety, anger, etc. were observed (Non-patent literature) 6).
  • Lactobacillus helveticus NS8 is ingested in depression model rats, behavioral abnormalities caused by stress and factors such as serotonin, noradrenaline and BDNF in the brain have been reported to be improved (Non-patent Document 7).
  • Non-patent Document 8 it has been reported that when a model mouse with hyperammonemia was ingested with Lactobacillus helveticus NS8, cognitive memory and depression-like symptoms were improved. However, it has not been reported so far that bacteria belonging to Bifidobacterium longum can suppress neuronal cell death.
  • An object of the present invention is to provide a neuronal cell death inhibitor capable of suppressing neuronal cell death caused by stress.
  • the present inventors have found that bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof can suppress neuronal cell death, and have completed the present invention.
  • the present invention provides a neuronal cell death inhibitor comprising a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof.
  • the nerve cell death inhibitor is preferably a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies Infantitis and / or a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies longum It is said.
  • the bacterium is Bifidobacterium longum subspecies Infantis LMG23728 and / or Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC15707. Yes.
  • the present invention also provides a food / beverage composition for inhibiting neuronal cell death comprising a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof as an active ingredient.
  • the food / beverage composition preferably has a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies Infantitis and / or a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies longum. Yes.
  • the said food-drinks composition makes it the more preferable aspect that the said bacteria are Bifidobacterium longum subspecies Infatis LMG23728 and / or Bifidobacterium longum subspecies longong ATCC15707. .
  • the present invention also provides a feed containing the nerve cell death inhibitor.
  • the present invention also provides use of a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof in the manufacture of a medicament for inhibiting neuronal cell death.
  • the above-mentioned use has a preferred embodiment in which the bacterium is a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies Infantitis and / or a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies longans.
  • the said use makes it a more preferable aspect that the said bacteria are Bifidobacterium longum subspecies Infatitis LMG23728 and / or Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC15707.
  • the present invention also provides a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof used for suppressing neuronal cell death.
  • the bacterium or culture thereof is a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies Infantis and / or a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies longum. It is said. More preferably, the bacterium or culture thereof is Bifidobacterium longum sub-species Infatis LMG23728 and / or Bifidobacterium longum sub-species longum ATCC 15707.
  • the present invention also provides a neuronal cell death comprising administering to a mammal a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, or a neuronal cell death inhibitor comprising the bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof.
  • a method for suppressing The method is preferably characterized in that the bacterium is a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies Infantis and / or a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies longans.
  • the bacterium is Bifidobacterium longum subspecies Infatis LMG 23728 and / or Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC 15707.
  • the present invention also provides a neuronal cell death comprising administering to a mammal a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, or a neuronal cell death inhibitor comprising the bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof.
  • the present invention provides a method for preventing or treating a disease that can be prevented or treated by suppressing the above.
  • the prevention method or the treatment method is preferably such that the bacterium is a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies infantis and / or a bacterium belonging to Bifidobacterium longum subspecies longum. It is said.
  • the prevention method or the treatment method has a more preferable embodiment in which the bacterium is Bifidobacterium longum subspecies Infatis LMG23728 and / or Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC15707.
  • the nerve cell death inhibitor of the present invention can suppress nerve cell death caused by stress.
  • the nerve cell death inhibitor of the present invention includes a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof.
  • Bacteria belonging to Bifidobacterium longum are Gram-positive obligate anaerobes.
  • the bacteria belonging to Bifidobacterium longum are not particularly limited as long as they can suppress neuronal cell death when the mammal or the culture is ingested by mammals.
  • Bifidobacterium longum Bacteria belonging to Bifidobacterium longum subsp. Infantis and / or bacteria belonging to Bifidobacterium longum subsp.
  • Bifidobacterium Bacteria longum subspecies Infatis LMG 23728 also referred to as “Bifidobacterium longum subspecies Infatis M-63”
  • Bifidobacterium longum subspecies Infatis M-63 Bifidobacterium longum subspecies Infatis M-63
  • Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC 15707 Etc. Ri preferred.
  • Bifidobacterium longum sub-species Infantis LMG 23728 is a Belgian Coordinated Collection of microorganisms (BCCM) (http://bccm.belspo.be /, Universiteit Gent, Laboratorium voor Microbiologie, KLLedeganckstraat, 35 9000 Gent Belgium, which is stored as a public deposit and can be obtained from the same organization with the strain number of LMG23728.
  • BCCM Belgian Coordinated Collection of microorganisms
  • Bifidobacterium longum subspecies infantis LMG 23728 is not limited to the above-mentioned deposited bacteria, and may be a bacterium substantially equivalent to the deposited bacteria.
  • Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC 15707 is publicly deposited with the American Type Culture Collection (ATCC) (American Type Culture Collection, addresses PO Box 1549, Manassas, VA 20108, United States States of America America) deposit), which can be obtained from the same organization under the strain number ATCC15707.
  • ATCC American Type Culture Collection
  • Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC 15707 is not limited to the above-mentioned deposited bacteria, and may be a bacterium substantially equivalent to the deposited bacteria.
  • the bacteria substantially equivalent to the deposited bacteria are bacteria belonging to Bifidobacterium longum sub-species Infantis, Neuronal cell death can be suppressed when a mammal or a culture thereof is ingested by a mammal, and the base sequence of the 16S rRNA gene is preferably 99.99 to the base sequence of the 16S rRNA gene of the deposited bacterium. It is a bacterium having a homology of 86% or more, more preferably 99.93% or more, more preferably 100%, and preferably having the same mycological properties as the deposited bacteria.
  • bacteria belonging to Bifidobacterium longum sub-species Infantis include mutant strains and genetically modified strains having the same bacterium as a parent strain. This also applies to Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC 15707.
  • the active ingredient of the drug of the present invention may be a bacterial cell as described above or a bacterial culture.
  • Bacteria may be live or dead, and may be both live and dead, but are preferably live.
  • the dead bacteria may be a crushed material.
  • various additional operations such as heating and freeze-drying can be performed after culturing as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • the additional operation is preferably one in which viability of viable bacteria is high.
  • Examples of the bacterial culture include a culture medium in which bacteria are cultured, a concentrate thereof, a dried product, or a fraction or a component obtained by fractionating or purifying a fraction or component capable of suppressing neuronal cell death from the culture medium.
  • the medium may contain microbial cells, or may be a culture supernatant from which the microbial cells have been removed.
  • Bacteria belonging to Bifidobacterium longum can be easily propagated by culturing the bacteria.
  • the method of culturing is not particularly limited as long as the bacterium can grow, and the method usually used for culturing Bifidobacterium (Bifidobacteria) can be appropriately modified as necessary.
  • the culture temperature may be 25 to 50 ° C., preferably 30 to 40 ° C.
  • the culture is preferably performed under anaerobic conditions, and for example, the culture can be performed while anaerobic gas such as carbon dioxide gas is passed.
  • the medium used for culturing is not particularly limited, and a medium usually used for culturing Bifidobacterium bacteria can be appropriately modified as necessary. That is, as the carbon source, for example, saccharides such as galactose, glucose, fructose, mannose, cellobiose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, starch, starch hydrolyzate, and molasses can be used according to the utilization.
  • the nitrogen source for example, ammonium salts such as ammonia, ammonium sulfate, ammonium chloride, and ammonium nitrate, and nitrates can be used.
  • inorganic salts examples include sodium chloride, potassium chloride, potassium phosphate, magnesium sulfate, calcium chloride, calcium nitrate, manganese chloride, and ferrous sulfate.
  • Organic components such as peptone, soybean powder, defatted soybean meal, meat extract, yeast extract and the like may also be used.
  • an MRS medium can be preferably used as the prepared medium.
  • nerve cell death When a mammal is ingested with bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, nerve cell death can be suppressed. Therefore, the bacterium belonging to Bifidobacterium longum or its culture can be used as it is as a neuronal cell death inhibitor.
  • nerve cells include brain nerve cells.
  • Bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, or a composition containing the agent of the present invention can be widely used as medicines, foods and drinks, and feeds.
  • a drug for suppressing nerve cell death, a food and drink for suppressing nerve cell death, and a feed for suppressing nerve cell death can be provided.
  • the drug of the present invention is not particularly limited as long as it contains bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof.
  • the agent of the present invention may be a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof as it is, or may be used after blending with a physiologically acceptable liquid or solid pharmaceutical carrier. .
  • the preparation form of the drug of the present invention is not particularly limited, and tablets (including sugar-coated tablets, enteric-coated tablets, buccal tablets), powders, capsules (including enteric capsules, soft capsules), granules (coated ones) ), Pills, troches, encapsulated liposomes, solutions, or pharmaceutically acceptable sustained-release preparations thereof.
  • tablets including sugar-coated tablets, enteric-coated tablets, buccal tablets
  • powders including enteric capsules, soft capsules), granules (coated ones)
  • Pills including sugar-coated tablets, enteric capsules, soft capsules), granules (coated ones)
  • Pills including sugar-coated tablets, enteric capsules, soft capsules
  • granules coated ones
  • a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, a known or future-found drug having a neuronal cell death inhibitory action, or a pharmaceutical composition May be used in combination.
  • the present inventors have found that a bacterium belonging to Lactobacillus helveticus or a culture thereof has a GABA production promoting action and a nerve cell death inhibiting action in the brain, and Bifidobacterium A bacterium belonging to Longum or a culture thereof and a bacterium belonging to Lactobacillus helveticus or a culture thereof may be used in combination.
  • the pharmaceutical composition to be used in combination may be contained as one of the active ingredients in the drug of the present invention, or may be combined and commercialized as a separate drug without being contained in the drug of the present invention.
  • Carriers and excipients used in the above formulations include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, corn starch, calcium carbonate, calcium phosphate, calcium sulfate, crystalline cellulose, licorice powder, gentian powder and the like as binders
  • binders for example, starch, gelatin, syrup, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, polyvinyl pyrrolidone, hydroxypropyl cellulose, ethyl cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose and the like can be exemplified.
  • disintegrant examples include starch, agar, gelatin powder, sodium carboxymethyl cellulose, calcium carboxymethyl cellulose, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium alginate and the like.
  • lubricant magnesium stearate, hydrogenated vegetable oil, macrogol, etc.
  • colorant red No. 2, yellow No. 4, and blue No. 1, etc., which are allowed to be added to pharmaceuticals, etc. It can be illustrated.
  • Tablets and granules include sucrose, hydroxypropylcellulose, purified shellac, gelatin, sorbitol, glycerin, ethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose phthalate acetate, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, methyl methacrylate, It can also be coated with a methacrylic acid polymer or the like.
  • Another aspect of the present invention is the use of a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof in the manufacture of a medicament for inhibiting neuronal cell death.
  • Another embodiment of the present invention is a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof used for suppressing neuronal cell death.
  • a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, or a neuronal cell death inhibitor containing a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof is administered to a mammal. This is a method for suppressing neuronal cell death.
  • a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, or a neuronal cell death inhibitor containing a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof is administered to a mammal.
  • Mammals include humans, cows, sheep, goats, pigs, dogs, cats, horses and the like.
  • the amount of the bacteria belonging to Bifidobacterium longum or the culture thereof contained in the drug of the present invention depends on the dosage form, usage, age of the subject, sex, type of disease, degree of disease, and other conditions.
  • it is preferably within a range of 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g or 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / ml. More preferably, it is in the range of ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / g or 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / ml.
  • cfu / g or cfu / ml can be replaced with individual cells / g or individual cells / ml.
  • the culture may be a medium containing bacteria in the above range or a processed product thereof.
  • the drug of the present invention is useful for suppressing neuronal cell death.
  • Neuronal cell death includes neuronal cell death caused by stress.
  • the stress that causes neuronal cell death is not particularly limited, and examples thereof include physical stress, environmental stress, chemical stress, biological stress such as biological stress, and mental stress.
  • Examples of diseases for which the drug of the present invention is effective, or diseases that can be prevented or treated by suppressing neuronal cell death include cognitive disorders including depression, sleep disorders, anxiety disorders, Alzheimer's disease, schizophrenia, and the like.
  • the dose of the drug of the present invention can be appropriately selected depending on the age, sex, condition, other conditions, etc. of the administration subject.
  • the amount of bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof is preferably 2 ⁇ 10 4 to 2 ⁇ 10 9 cfu / kg / day, more preferably 2 ⁇ 10 6 to the amount of bacteria.
  • An amount in the range of 2 ⁇ 10 9 cfu / kg / day should be used as a guide.
  • the administration time of the drug of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the state of the administration target. It may be administered prophylactically or used for maintenance therapy.
  • the dosage form is preferably determined according to the dosage form, the patient's age, sex, other conditions, the degree of symptoms of the patient, and the like.
  • the drug of the present invention can be administered once or a plurality of times a day, or may be administered once every several days or weeks.
  • Bacteria belonging to Bifidobacterium longum which is the active ingredient of the present invention, or a culture thereof, can also be contained in food and drink (beverages or foods).
  • foods and drinks containing the bacteria belonging to Bifidobacterium longum or cultures thereof, or the drug of the present invention as active ingredients in foods and drinks, and having a nerve cell death inhibitory action as one aspect of the nerve cell death inhibitor It is also possible to process as. That is, this invention provides the food-drinks composition for nerve cell death suppression which uses the bacteria which belong to Bifidobacterium longum, or its culture
  • the form and properties are not particularly limited as long as they can be taken orally without impairing the nerve cell death inhibitory effect, except for containing bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof, It can manufacture by a normal method using the raw material normally used for food-drinks.
  • Foods such as the above, in the form of liquids, pastes, gels, powders, etc., in addition to tablet confectionery, liquid foods, etc., for example, bread, macaroni, spaghetti, noodles, cake mix, fried flour Wheat flour products such as bread crumbs; instant noodles, cup noodles, retort / cooked food, canned food, microwave food, instant soup / stew, instant miso soup / soup, canned soup, freeze-dried food, other instant foods Agricultural processed products such as canned agricultural products, canned fruits, jams and marmalades, pickles, boiled beans, dried agricultural products, processed cereals, etc .; canned fishery products, fish ham and sausages, marine products, marine delicacies, Tsukudani Processed fishery products such as fish; canned and pasted livestock products; processed livestock products such as livestock ham and sausage; processed milk, milk drinks, yogurts Milk and dairy products such as lactic acid bacteria beverages, cheese, ice cream, formula milk powder, cream and other dairy products; fats and oils such as butter
  • Included in the food and drink of the present invention are those added to the food and drink after the production process or production of the food and drink, such as raw materials for food and drink production and food additives.
  • a bacterium belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof can be used as a starter for producing fermented milk.
  • bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof can be added later to the produced fermented milk.
  • the food / beverage products of the present invention can be sold as food / beverage products for which the use for suppressing neuronal cell death is displayed.
  • such foods and beverages can be labeled as “for nerve cell death suppression”.
  • any other words can be used as long as the wording expresses an effect that is secondarily generated by suppressing nerve cell death.
  • the “display” means all acts for informing the consumer of the use, and if it is a display that can recall and analogize the use, the purpose of the display, the content of the display, the display Regardless of the object and medium to be processed, all fall under the “display” of the present invention. However, it is preferable to display in such an expression that the consumer can directly recognize the application.
  • the act of describing the above-mentioned use in the product or product packaging relating to the food or drink of the present invention the product or product packaging describing the above-mentioned use is transferred, and displayed for delivery, transfer or delivery And importing, displaying advertisements on products, price lists or transaction documents for display or distribution, or describing the above uses in information containing these, electromagnetic (Internet, etc.) methods
  • the display is preferably a display permitted by the government or the like (for example, a display that is approved based on various systems determined by the government and is performed in a mode based on such approval).
  • indications such as health foods, functional foods, enteral nutrition foods, special purpose foods, functional nutrition foods, quasi-drugs, and other indications approved by the Ministry of Health, Labor and Welfare, such as specific Examples of health foods and labels approved by similar systems. Examples of the latter include a display as a food for specified health use, a display as a food for specified specific health use, a display that affects the structure and function of the body, a display for reducing disease risk, and the like.
  • Bacteria belonging to Bifidobacterium longum or a culture thereof can be contained in the feed as an active ingredient, and can be processed as a feed having a nerve cell death inhibitory action as one embodiment of the nerve cell death inhibitor.
  • the form of the feed is not particularly limited, for example, grains such as corn, wheat, barley, rye, milo; vegetable oils such as soybean oil meal, rapeseed oil meal, coconut oil meal, linseed oil meal; bran, wheat straw, rice bran, Dehydrated rice bran, etc .; Manufactured deer such as corn gluten meal, corn jam meal; Animal feed such as fish meal, non-fat dry milk, whey, yellow grease, tallow; Yeasts such as torula yeast, beer yeast; It can be produced by blending mineral feed such as calcium phosphate and calcium carbonate; fats and oils; simple amino acids; sugars and the like. Examples of the form of the feed include pet food, livestock feed, and fish feed.
  • the amount of the bacteria belonging to Bifidobacterium longum or the culture thereof contained in the food and drink (including feed) of the present invention is not particularly limited and may be appropriately selected. Same as drug.
  • Example 1 Effect of Bifidobacterium longum on neuronal cell death by dexamethasone Dexamethasone was added to the culture solution of human neuroblast SH-SY5Y cells, and the cell viability was measured by MTT method. . Specifically, it was performed as follows. Human neuroblast SH-SY5Y cells were seeded at a concentration of 10 6 cells / cm 2 in a 96-well plate containing Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum. After 24 hours, the dexamethasone-treated group was replaced with 100 ⁇ l of medium containing 3 ⁇ M dexamethasone.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • the dexamethasone treatment group includes Bifidobacterium longum subspecies Infatis LMG23728, Bifidobacterium longum subspecies longum ATCC 15707, Bifidobacterium amaryllis subspecies animaris (Bifidobacterium animalis subsp. 20 ⁇ l of the culture supernatant of animalis) ATCC25527, Bifidobacterium animalis subsp. lactis DSM10140 or Bifidobacterium breve ATCC15700 was added and cultured for 48 hours.
  • the culture supernatant of Bifidobacterium longum subspecies Infatis M-63 is an OD 600 (absorbance at 600 nm) of a culture solution cultured in MRS medium at 37 ° C. for 16 hours under static conditions. After adjusting so as to obtain, it was obtained by centrifugation at 2400 ⁇ g for 20 minutes. The culture supernatants of other bacteria were obtained in the same manner.
  • Bifidobacterium arimalis subspecies animalsis ATCC25527 and Bifidobacterium breve ATCC15700 are American Type Culture Collection (American Type Culture Collection, address PO Box 1549, Manassas, VA 20108, United States of America).
  • Bifidobacterium animalis Subspecies Lactis DSM10140 is a Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, address: Inhoffenstrasse 7B, 38124 Braunschweig, Germany).

Abstract

ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７等の、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を有効成分とする、神経細胞死抑制剤。

Description

神経細胞死抑制剤
　本発明は、神経細胞死抑制剤に関する。
　現代のストレス社会において、うつ病の患者数は増加傾向にあり、その予防および治療対策が望まれている。
　慢性的なストレスによって体内の糖質コルチコイドが長期間上昇していると、その曝露により神経細胞が死に至り、うつ病などの神経疾患につながる。パーキンソン病治療薬であるラサギリン（Rasagiline）及びセレギリン（Selegiline）のほか、1-R-アミノインダンは、神経細胞死を防ぐ物質として報告されている（非特許文献１）。
　しかし、同文献では、乳酸菌などのプロバイオティクスが神経細胞死を抑制するとの報告はされていない。
　一方で、乳酸菌など一部のプロバイオティクスが、ストレスによる神経細胞死を抑制するとの報告がされている（非特許文献２、３、４）。
　また、慢性ストレスによるマウスの不安行動が、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）PS128の摂取により改善されたことが報告されている（非特許文献５）。
　さらに、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）R0052とビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）R0175をヒトに摂取させると、ストレス、不安、怒りなどにおける改善がみられたとの報告がある（非特許文献６）。また、うつ病モデルラットにラクトバチルス・ヘルベティカスNS8を摂取させると、ストレスによる行動異常や、脳内セロトニン、ノルアドレナリン、BDNFなどの因子が、改善されたと報告されている（非特許文献７）。さらに、高アンモニア血症のモデルマウスにラクトバチルス・ヘルベティカスNS8を摂取させると、認知記憶やうつ様の症状が改善したことが報告されている（非特許文献８）。
　しかし、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）に属する細菌が神経細胞死を抑制することができることは、これまで報告されていない。
Tazik, S. et al., Neurotox Res 15(3):284-290, 2009 Liu, J. et al., BioMed Research International Volume 2015 (2015), Article ID 412946, 12 pages Girard, S.A. et al., British Journal of Nutrition 102:1420-1425, 2009 Ait-Belgnaoui, A. et al., Neurogastroenterol Motil 26(4):510-520, 2014 Liu, Y.W. et al. Brain Research 1631:1-12, 2016 Messaoudi, M. et al. British Journal of Nutrition 105:755-764, 2011 Liang, S. et al. Neuroscience 310:561-577, 2015 Luo, J. et al. Sci China Life Sci 57(3):327-335, 2014
　本発明は、ストレスにより引き起こされる神経細胞死を抑制できる神経細胞死抑制剤を提供することを課題とする。
　本発明者らは、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物が、神経細胞死を抑制できることを見出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を含む、神経細胞死抑制剤を提供する。
　前記神経細胞死抑制剤は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌であることを好ましい態様としている。
　また、前記神経細胞死抑制剤は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７であることをより好ましい態様としている。
　本発明はまた、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を有効成分とする、神経細胞死抑制用の飲食品組成物を提供する。
　前記飲食品組成物は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌であることを好ましい態様としている。
　また、前記飲食品組成物は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７であることをより好ましい態様としている。
　本発明はまた、前記神経細胞死抑制剤を含む飼料を提供する。
　本発明はまた、神経細胞死抑制用の医薬の製造における、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物の使用を提供する。
　前記使用は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌であることを好ましい態様としている。
　また、前記使用は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７であることをより好ましい態様としている。
　本発明はまた、神経細胞死抑制用に用いられるビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を提供する。
　前記細菌又はその培養物は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌であることを好ましい態様としている。
　前記細菌又はその培養物は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７であることをより好ましい態様としている。
　本発明はまた、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物、又はビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物を含む神経細胞死抑制剤を哺乳動物に投与する、神経細胞死を抑制する方法を提供する。
　前記方法は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌であることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７であることをより好ましい態様としている。
　本発明はまた、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物、又はビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物を含む神経細胞死抑制剤を哺乳動物に投与する、神経細胞死の抑制によって予防又は治療され得る疾患の予防方法又は治療方法を提供する。
　前記予防方法又は治療方法は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌であることを好ましい態様としている。
　前記予防方法又は治療方法は、前記細菌がビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７であることをより好ましい態様としている。
　本発明の神経細胞死抑制剤は、ストレスにより引き起こされる神経細胞死を抑制することができる。
　以下、本発明を詳細に説明する。
　本発明の神経細胞死抑制剤（以下、「本発明の薬剤」と記載することがある。）は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を含む。
　ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）に属する細菌は、グラム陽性の偏性嫌気性桿菌である。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌は、その細菌又はその培養物を哺乳動物に摂取させたときに神経細胞死を抑制し得るものであれば特に制限されないが、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（Bifidobacterium longum subsp. infantis）に属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（Bifidobacterium longum subsp. longum）に属する細菌等が好ましく、その中でも、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８（「ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　Ｍ－６３」とも言う。）及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７等がより好ましい。
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８は、ベルギーの保存機関であるベルジアン　コーディネイテッド　コレクションズ　オブ　マイクロオーガニズムズ（Belgian Coordinated Collections of Microorganisims）（BCCM）（http://bccm.belspo.be/、Universiteit Gent, Laboratorium voor Microbiologie, K.L.Ledeganckstraat, 35 9000 Gent Belgium）に一般寄託（Public deposit）として保存されており、同機関からＬＭＧ２３７２８の菌株番号で入手することができる。ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８は、上記寄託菌に制限されず、上記寄託菌と実質的に同等の細菌であってもよい。
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC）（American Type Culture Collection、住所　P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108, United States of America）に一般寄託（Public deposit）として保存されており、同機関からＡＴＣＣ１５７０７の菌株番号で入手することができる。ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７は、上記寄託菌に制限されず、上記寄託菌と実質的に同等の細菌であってもよい。
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８について、上記寄託菌と実質的に同等の細菌とは、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌であって、その細菌又はその培養物を哺乳動物に摂取させたときに神経細胞死を抑制することができ、さらにその１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して、好ましくは９９．８６％以上、さらに好ましくは９９．９３％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託菌と同一の菌学的性質を有する細菌である。また、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌には、同細菌を親株とする変異株及び遺伝子組換え株も含まれる。
　このことは、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７にも同様に適用される。
　本発明の薬剤の有効成分は、上記のような細菌の菌体であってもよく、細菌の培養物であってもよい。細菌は、生菌であっても死菌であってもよく、生菌及び死菌の両方であってもよいが、生菌であることが好ましい。死菌は、破砕物であってもよい。また、本発明の効果を損なわない限り、培養後に加熱、及び凍結乾燥等の種々の追加操作を行うことができる。追加の操作は、生菌の生残性が高いものであることが好ましい。
　細菌の培養物としては、細菌を培養した培地もしくはその濃縮物、乾燥物、又は、前記培地から神経細胞死を抑制し得る画分又は成分を分画又は精製したものが挙げられる。培地は、菌体を含んでいてもよく、菌体を除いた培地上清であってもよい。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌は、同細菌を培養することにより容易に増殖させることができる。培養する方法は、前記細菌が増殖できる限り特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィズス菌）の培養に通常用いられる方法を必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培養温度は２５～５０℃でよく、３０～４０℃であることが好ましい。また、培養は好ましくは嫌気条件下で行われ、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。また、液体静置培養等の微好気条件下で培養しても良い。
　培養に用いる培地としては、特に限定されず、ビフィドバクテリウム細菌の培養に通常用いられる培地を必要により適宜修正して用いることができる。すなわち、炭素源としては、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて使用できる。窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩類や硝酸塩類を使用できる。また、無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、ペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。また、調製済みの培地としては、例えばＭＲＳ培地を好適に用いることができる。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を哺乳動物に摂取させると、神経細胞死を抑制することができる。したがって、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物は、そのまま神経細胞死抑制剤として利用することが可能である。神経細胞としては、脳の神経細胞が挙げられる。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物、又は本発明の薬剤を含む組成物は、医薬、飲食品、及び飼料として広く用いることができる。たとえば、神経細胞死抑制用医薬、神経細胞死抑制用飲食品、神経細胞死抑制用飼料を提供することができる。
　本発明の薬剤は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を含有する限り特に制限されない。本発明の薬剤は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物をそのまま使用してもよく、生理的に許容される液体又は固体の製剤担体を配合し製剤化して使用してもよい。
　本発明の薬剤の製剤形態は特に限定されず、錠剤（糖衣錠、腸溶性コーティング錠、バッカル錠を含む。）、散剤、カプセル剤（腸溶性カプセル、ソフトカプセルを含む。）、顆粒剤（コーティングしたものを含む。）、丸剤、トローチ剤、封入リポソーム剤、液剤、又はこれらの製剤学的に許容され得る徐放製剤等を例示することができる。製剤化にあたっては、製剤成分として通常の経口薬剤に汎用される、担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損わない限り、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物と、公知の、もしくは将来的に見出される神経細胞死抑制作用を有する薬剤、又は医薬組成物とを併用してもよい。例えば、本発明者らは、ラクトバチルス・ヘルベティカスに属する細菌又はその培養物が、脳内のGABAの産生促進作用、及び、神経細胞死抑制作用を有することを見出しており、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物と、ラクトバチルス・ヘルベティカスに属する細菌又はその培養物を併用してもよい。併用する医薬組成物は、本発明の薬剤中に有効成分の一つとして含有させてもよいし、本発明の薬剤中には含有させずに別個の薬剤として組み合わせて商品化してもよい。
　上記の製剤に用いる担体及び賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯澱粉、トウモロコシ澱粉、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末等を、結合剤としては例えば澱粉、ゼラチン、シロップ、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等を、それぞれ例示することができる。
　また、崩壊剤としては、澱粉、寒天、ゼラチン末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、及びアルギン酸ナトリウム等を例示することができる。
　更に、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、及びマクロゴール等を、着色剤としては医薬品に添加することが許容されている赤色２号、黄色４号、及び青色１号等を例示することができる。
　錠剤及び顆粒剤は、必要に応じ白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、精製セラック、ゼラチン、ソルビトール、グリセリン、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート、及びメタアクリル酸重合体等により被膜することもできる。
　また、本発明の他の態様は、神経細胞死抑制用の医薬の製造における、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物の使用である。また、本発明の他の態様は、神経細胞死抑制用に用いられるビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物である。また、本発明の他の態様は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物、又はビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物を含む神経細胞死抑制剤を哺乳動物に投与する、神経細胞死を抑制する方法である。また、本発明の他の態様は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物、又はビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物を含む神経細胞死抑制剤を哺乳動物に投与する、神経細胞死の抑制によって予防又は治療され得る疾患の予防方法又は治療方法である。哺乳動物としては、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウマ等が挙げられる。
　本発明の薬剤中に含まれるビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物の量は、剤形、用法、対象の年齢、性別、疾患の種類、疾患の程度、及びその他の条件等により適宜設定されるが、例えば、細菌の場合は、通常、１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｇまたは１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｍｌの範囲内であることが好ましく、１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｇまたは１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｍｌの範囲内であることがより好ましい。細菌が死菌の場合、ｃｆｕ／ｇまたはｃｆｕ／ｍｌは、個細胞／ｇまたは個細胞／ｍｌと置き換えることができる。また、細菌の培養物の場合は、培養物が上記範囲の量の細菌を含む培地又はその加工物であればよい。
　本発明の薬剤は、神経細胞死を抑制するのに有用である。神経細胞死としては、ストレスにより引き起こされる神経細胞死が挙げられる。神経細胞死を引き起こすストレスとしては、特に制限されないが、例えば、物理的ストレス、環境ストレス、化学的ストレス、生物的ストレス等の身体的ストレス、及び、精神的ストレスが挙げられる。本発明の薬剤が有効な疾患、又は、神経細胞死の抑制によって予防又は治療され得る疾患としては、うつ、睡眠障害、不安障害、アルツハイマー病などを含む認知障害、統合失調症等が挙げられる。
　本発明の薬剤の投与量は、投与対象の年齢、性別、状態、その他の条件等により適宜選択され得る。ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物の量は、細菌の量に換算して、好ましくは２×１０4～２×１０9ｃｆｕ／ｋｇ／日、より好ましくは２×１０6～２×１０9ｃｆｕ／ｋｇ／日の範囲となる量を目安とするのが良い。
　本発明の薬剤の投与時期は特に限定されず、投与対象の状態に応じて適宜選択することが可能である。また、予防的に投与してもよく、維持療法に用いてもよい。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。
　なお、本発明の薬剤は、いずれの場合も１日１回又は複数回に分けて投与することができ、また、数日又は数週間に１回の投与としてもよい。
　本発明の薬剤、又はその有効成分であるビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物は、飲食品（飲料又は食品）に含有させることもできる。
　また、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物、又は本発明の薬剤を有効成分として飲食品に含有させ、神経細胞死抑制剤の一態様として、神経細胞死抑制作用を有する飲食品として加工することも可能である。すなわち、本発明は、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を有効成分とする、神経細胞死抑制用の飲食品組成物を提供する。
　飲食品としては、神経細胞死抑制効果を損なわず、経口摂取できるものであれば形態や性状は特に制限されず、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。
　上記のような食品としては、液状、ペースト状、ゲル状固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食等のほか、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品；即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等の即席食品類； 農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等の農産加工品； 水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等の水産加工品；畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品；加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等の乳・乳製品；バター、マーガリン類、植物油等の油脂類；しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等の基礎調味料；調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等の複合調味料・食品類；素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等の冷凍食品；キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、ゼリー、その他の菓子などの菓子類；炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等の嗜好飲料類、ベビーフード、ふりかけ、お茶潰けのり等のその他の市販食品等；育児用調製粉乳；経腸栄養食；機能性食品（特定保健用食品、栄養機能食品）等が挙げられる。
　本発明の飲食品には、飲食品製造のための原料、及び食品添加物等、飲食品の製造工程又は製造後に飲食品に添加されるものも含まれる。例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物は、発酵乳製造用スターターとして使用することができる。また、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物を、製造された発酵乳に後から添加することもできる。
　本発明の飲食品は、神経細胞死抑制用との用途が表示された飲食品として販売することができる。また、そのような飲食品には、「神経細胞死抑制用」等の表示をすることができる。また、これ以外でも、神経細胞死の抑制によって二次的に生じる効果を表す文言であれば、使用できることはいうまでもない。
　前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物及び媒体等の如何に拘わらず、すべて本発明の「表示」に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。
　具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が例示でき、特に包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。
　また、表示としては、行政等によって許可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましい。例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができる。さらに詳細には、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示等を例示することができる。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物を有効成分として飼料中に含有させ、神経細胞死抑制剤の一態様として、神経細胞死抑制作用を有する飼料として加工することも可能である。
　飼料の形態としては特に制限されず、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類；大豆油粕、ナタネ油粕、ヤシ油粕、アマニ油粕等の植物性油粕類；フスマ、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；魚粉、脱脂粉乳、ホエイ、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類；トルラ酵母、ビール酵母等の酵母類；第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；単体アミノ酸；糖類等を配合することにより製造できる。飼料の形態としては、例えば、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
　本発明の飲食品（飼料を含む）中に含まれるビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌もしくはその培養物の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、好ましくは、前記した本発明の薬剤と同様である。
　以下に、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕デキサメタゾンによる神経細胞死へのビフィドバクテリウム・ロンガムの効果
　ヒト神経芽細胞SH-SY5Y細胞の培養液にデキサメタゾン（Dexamethasone）を添加し、細胞の生存率をＭＴＴ法により測定した。具体的には、以下のようにして行った。
　10％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地（DMEM）を入れた96ウェルプレートに、ヒト神経芽細胞SH-SY5Y細胞を106 cells/cm2の濃度にて播種した。24時間後に、デキサメタゾン処理群は、3μMのデキサメタゾン（Dexamethasone）を含む培地100μlに培地交換した。非処理群は、デキサメタゾンを含まない培地に培地交換した。デキサメタゾン処理群には、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスLMG23728、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムATCC15707、ビフィドバクテリウム・アリマリス・サブスピーシーズ・アニマリス（Bifidobacterium animalis subsp. animalis）ATCC25527、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）DSM10140、又は、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）ATCC15700の培養上清を20μl加えて48時間培養した。非処理群及びデキサメタゾン処理群に培養上清を加えないものを、それぞれ陽性対照及び陰性対照とした。ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスM-63の培養上清は、ＭＲＳ培地で３７℃、１６時間、静置条件下で培養した培養液をＯＤ600（600nmの吸光度）が１となるように調整後、２４００×ｇ、２０分遠心分離して得た。他の細菌の培養上清も、同様にして得た。
　ビフィドバクテリウム・アリマリス・サブスピーシーズ・アニマリスATCC25527、及びビフィドバクテリウム・ブレーベATCC15700は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC）（American Type Culture Collection、住所　P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108, United States of America）より分譲を受けることが出来る。ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスDSM10140は、ドイチェ・ザムルング ・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルトゥレン・ゲーエムベーハー（DSMZ）（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH、住所：Inhoffenstrasse 7B、38124 Braunschweig、Germany）から入手することができる。
　培養後の細胞生存数を、Johnson, S. et al., Front Neurosci. 4:180 (2010)に記載のMTT法により測定した。その結果を表１に示す。ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスLMG23728及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムATCC15707の培養上清に顕著な細胞死抑制効果が認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001

Claims (19)

  1. 　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を含む、神経細胞死抑制剤。
  2. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌である、請求項１に記載の神経細胞死抑制剤。
  3. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７である、請求項２に記載の神経細胞死抑制剤。
  4. 　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物を有効成分とする、神経細胞死抑制用の飲食品組成物。
  5. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌である、請求項４に記載の飲食品組成物。
  6. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７である、請求項５に記載の飲食品組成物。
  7. 　請求項１～３のいずれか１項に記載の神経細胞死抑制剤を含む飼料。
  8. 　神経細胞死抑制用の医薬の製造における、ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物の使用。
  9. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌である、請求項８に記載の使用。
  10. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７である、請求項９に記載の使用。
  11. 　神経細胞死抑制用に用いられるビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌又はその培養物。
  12. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌である、請求項１１に記載の細菌又はその培養物。
  13. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７である、請求項１２に記載の細菌又はその培養物。
  14. 　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物、又はビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物を含む神経細胞死抑制剤を哺乳動物に投与する、神経細胞死を抑制する方法。
  15. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌である、請求項１４に記載の方法。
  16. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７である、請求項１５に記載の方法。
  17. 　ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物、又はビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌若しくはその培養物を含む神経細胞死抑制剤を哺乳動物に投与する、神経細胞死の抑制によって予防又は治療され得る疾患の予防方法又は治療方法。
  18. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスに属する細菌及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する細菌である、請求項１７に記載の予防方法又は治療方法。
  19. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス　ＬＭＧ２３７２８及び／又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＡＴＣＣ１５７０７である、請求項１８に記載の予防方法又は治療方法。
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