JP2022545741A - 抗ｃｄ９６抗体およびその使用方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＣＤ９６機能に拮抗する抗体を提供する。また、これらの抗体を含む医薬組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法も提供される。

Description

関連出願
本出願は、２０１９年８月３０日に出願された米国仮出願第６２／８９４，３３４号、および２０１９年１１月６日に出願された米国仮出願第６２／９３１，４７６号の利益を主張するものであり、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）に特異的に結合する抗体、およびそれを使用する方法に関する。
ＴＡＣＴＩＬＥ（Ｔ細胞活性化、増加された後期発現）としても知られるＣＤ９６（表面抗原分類（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）９６）は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーにおけるＩ型膜貫通タンパク質である。それは、単一のＩｇドメイン、Ｉ型膜貫通ドメイン、単一の細胞内免疫受容体チロシン系阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）、および単一のＹＸＸＭリン酸化モチーフを有し、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面上に発現される。
ＣＤ９６は、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞およびＴ細胞）および腫瘍転移の制御において役割を果たすと考えられる。特に、ＣＤ９６機能の遮断は、ＣＤ８＋Ｔ細胞依存性様式で、いくつかのマウス腫瘍モデルにおいて原発性腫瘍の成長を抑制したことが示されている。
免疫反応を調節することにおけるヒトＣＤ９６の役割を考えると、ＣＤ９６リガンドの相互作用を遮断するように設計された治療剤は、免疫抑制を伴う疾患の治療に大いに有望である。
本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＣＤ９６機能、例えば、ＣＤ９６媒介性免疫抑制を調節する抗体を提供する。また、これらの抗体を含む医薬組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、免疫細胞活性化を増加させるために特に有用であり、したがって、対象におけるがんの治療、または対象における感染症の治療もしくは予防に有用である。
したがって、一態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、Ｘ１ＹＸ２Ｘ３Ｘ４（配列番号１３５）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、ＱまたはＳであり、
Ｘ２は、ＡまたはＳであり、
Ｘ３は、ＭまたはＩであり、
Ｘ４は、ＨまたはＳであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＱＧ（配列番号１３７）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、ＷまたはＧであり、
Ｘ２は、ＮまたはＩであり、
Ｘ３は、Ａ、Ｅ、Ｖ、またはＰであり、
Ｘ４は、Ｖ、Ｇ、Ｗ、またはＩであり、
Ｘ５は、Ｓ、Ｙ、Ｔ、Ｎ、またはＦであり、
Ｘ６は、ＧまたはＷであり、
Ｘ７は、Ｄ、Ｙ、Ｎ、またはＴであり、
Ｘ８は、ＴまたはＡであり、
Ｘ９は、ＫまたはＮであり、
Ｘ１０は、ＳまたはＡであり、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、ＮＷＧＸ１ＳＹＧＸ２ＤＶ（配列番号１８０）、ＧＹＤＳＲＰＬＤＶ（配列番号１９）、またはＧＹＤＳＲＰＬＤＹ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、ＭまたはＬであり、
Ｘ２は、ＭまたはＬであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、ＲＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２ＹＬＮ（配列番号１３９）またはＧＧＮＮＩＧＳＫＩＶＨ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、
Ｘ２は、Ｓ、Ｐ、またはＷであり、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、Ｘ１Ｘ２ＳＳＬＱＳ（配列番号１４１）またはＤＤＲＤＲＰＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、ＳまたはＡであり、
Ｘ２は、Ａ、Ｓ、またはＥであり、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、ＱＱＸ１ＹＳＴＰＡＬＸ２（配列番号１４３）またはＱＶＷＤＩＮＶＨＨＶＩ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、ＳまたはＡであり、
Ｘ２は、ＴまたはＳであり、
任意選択で、ＣＤＲＨ１に対するすぐＮ末端のアミノ酸は、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｄ、またはＡである。
ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、Ｘ１ＹＸ２ＭＨ（配列番号１３６）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、ＱまたはＳであり、
Ｘ２が、ＡまたはＳであり、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、ＷＩＮＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号１３８）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１は、Ａ、Ｖ、またはＥであり、
Ｘ２は、Ｖ、Ｗ、またはＧであり、
Ｘ３は、Ｓ、Ｙ、Ｔ、またはＮであり、
Ｘ４は、ＧまたはＷであり、
Ｘ５は、Ｄ、Ｎ、Ｙ、またはＴであり、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、ＮＷＧＸ１ＳＹＧＸ２ＤＶ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１が、ＭまたはＬであり、
Ｘ２が、ＭまたはＬであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、ＲＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２ＹＬＮ（配列番号１３９）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１が、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ｐ、またはＷであり、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、Ｘ１Ｘ２ＳＳＬＱＳ（配列番号１４１）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｓ、またはＥであり、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、ＱＱＳＹＳＴＰＡＬＴ（配列番号３３）またはＱＱＡＹＳＴＰＡＬＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号１９または２０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、配列番号１、５、および１８；２、６、および１８；２、８、および１８；２、９、および１８；２、１０、および１８；１、７、および１８；２、１１、および１８；１、１２、および１８；１、１３、および１８；１、１４、および１８；３、１５、および１８；１、１６、および１８；１、５、および１４０；１、５、および１４２；１、５、および１７９；４、１７、および１９；または４、１７、および２０のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号２１、２８、および３３；２１、２９、および３３；２１、３０、および３３；２１、３１、および３３；２２、２９、および３３；２４、２９、および３３；２３、２９、および３３；２５、２８、および３４；または２６、３２、および３５のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、配列番号１、５、１８、２１、２８、および３３；１、５、１８、２１、２９、および３３；１、５、１８、２２、２９、および３３；１、５、１８、２３、２９、および３３；１、５、１８、２４、２９、および３３；１、５、１８、２５、２８、および３４；１、５、１４０、２１、２８、および３３；１、５、１４２、２１、２８、および３３；１、５、１７９、２１、２８、および３３；１、７、１８、２１、２９、および３３；１、１２、１８、２１、２８、および３３；１、１３、１８、２１、２８、および３３；１、１４、１８、２１、２８、および３３；１、１６、１８、２１、２８、および３３；２、６、１８、２１、２９、および３３；２、８、１８、２１、２９、および３３；２、９、１８、２１、３０、および３３；２、１０、１８、２１、２９、および３３；２、１１、１８、２１、３１、および３３；３、１５、１８、２１、２８、および３３；４、１７、１９、２６、３２、および３５；または４、１７、２０、２６、３２、および３５のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５のアミノ酸配列からなる。
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、もしくは６１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、もしくは７５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１３０または１３１のアミノ酸配列に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列に結合する。
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ９６を発現する細胞に結合すると内在化される。
別の態様では、本開示は、配列番号１３０または１３１のアミノ酸配列に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列に結合する、請求項１８または１９に記載の単離された抗体。
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、ヒトＣＤ９６を発現する細胞に結合すると内在化される。
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ２９７Ａ変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１２４または１７６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１２５または１７７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１２６または１７８のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、野生型重鎖定常領域のバリアントである重鎖定常領域を含み、バリアント重鎖定常領域は、野生型重鎖定常領域がＦｃγＲに結合するよりも高い親和性でＦｃγＲに結合する。ある特定の実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩＩＢである。
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、または１６９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、または１６９のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、および１６９のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、および１６９のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１２２または１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５のアミノ酸配列からなる。
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、もしくは１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、もしくは１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、もしくは１６９のアミノ酸配列からなり、かつ／または軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、もしくは１１５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖は、それぞれ、配列番号７６および１０２；７９および１０３；７８および１０３；８２および１０３；８４および１０４；８３および１０４；８６および１０３；８５および１０３；８１および１０３；８０および１０３；８７および１０５；７７および１０２；８８および１０２；７７および１０６；７７および１０７；７７および１０８；７７および１０３；８９および１０２；９０および１０２；９１および１０２；９２および１０２；９３および１０２；７７および１０９；９４および１０２；９５および１０２；９６および１０２；９７および１０２；９８および１０２；９９および１０２；１００および１１０；１００および１１１；１００および１１２；１００および１１３；１００および１１４；１００および１１５；１０１および１１０；１４４および１０２；１４７および１０３；１４６および１０３；１５０および１０３；１５２および１０４；１５１および１０４；１５４および１０３；１５３および１０３；１４９および１０３；１４８および１０３；１５５および１０５；１４５および１０２；１５６および１０２；１４５および１０６；１４５および１０７；１４５および１０８；１４５および１０３；１５７および１０２；１５８および１０２；１５９および１０２；１６０および１０２；１６１および１０２；１４５および１０９；１６２および１０２；１６３および１０２；１６４および１０２；１６５および１０２；１６６および１０２；１６７および１０２；１６８および１１０；１６８および１１１；１６８および１１２；１６８および１１３；１６８および１１４；１６８および１１５；または１６９および１１０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７６および１０２；７９および１０３；７８および１０３；８２および１０３；８４および１０４；８３および１０４；８６および１０３；８５および１０３；８１および１０３；８０および１０３；８７および１０５；７７および１０２；８８および１０２；７７および１０６；７７および１０７；７７および１０８；７７および１０３；８９および１０２；９０および１０２；９１および１０２；９２および１０２；９３および１０２；７７および１０９；９４および１０２；９５および１０２；９６および１０２；９７および１０２；９８および１０２；９９および１０２；１００および１１０；１００および１１１；１００および１１２；１００および１１３；１００および１１４；１００および１１５；１０１および１１０；１４４および１０２；１４７および１０３；１４６および１０３；１５０および１０３；１５２および１０４；１５１および１０４；１５４および１０３；１５３および１０３；１４９および１０３；１４８および１０３；１５５および１０５；１４５および１０２；１５６および１０２；１４５および１０６；１４５および１０７；１４５および１０８；１４５および１０３；１５７および１０２；１５８および１０２；１５９および１０２；１６０および１０２；１６１および１０２；１４５および１０９；１６２および１０２；１６３および１０２；１６４および１０２；１６５および１０２；１６６および１０２；１６７および１０２；１６８および１１０；１６８および１１１；１６８および１１２；１６８および１１３；１６８および１１４；１６８および１１５；または１６９および１１０のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書に開示される抗体と同じヒトＣＤ９６のエピトープに結合する。
別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書に開示される抗体とヒトＣＤ９６への結合について競合する。
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、多重特異性抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、細胞傷害性剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識にコンジュゲートされている。ある特定の実施形態では、抗体は、第２の抗体にコンジュゲートされている。
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗体のＶＨおよび／またはＶＬをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。別の態様では、本開示は、ポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。別の態様では、本開示は、ポリヌクレオチドまたはベクターを含む組換え宿主細胞を提供する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する抗体を産生する方法を提供し、方法は、ポリヌクレオチドが発現され、抗体が産生されるように、好適な条件下で宿主細胞を培養することを含む。
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞、ならびに薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、対象における免疫応答を増加させる方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に開示される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は、対象におけるがんを治療する方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に開示される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は、対象における感染症を治療する方法を提供し、方法は、本明細書に開示される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物を対象に投与することを含む。
前述の方法のある特定の実施形態では、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物は、全身的に、静脈内に、皮下に、腫瘍内に投与されるか、または腫瘍排出リンパ節に送達される。
前述の方法のある特定の実施形態では、方法は、追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤である。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、チェックポイント標的化剤である。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的化剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＣＤ９６抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、抗ＰＤ－１抗体であり、任意選択で抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブまたはニボルマブである。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である。ある特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、ワクチンである。ある特定の実施形態では、ワクチンは、抗原ペプチドと複合体化された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む。ある特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化されている。ある特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化されており、任意選択でＨＳＰＰＣは、対象から得られた腫瘍に由来する。
高レベルのＣＤ９６の細胞表面ヒトアイソフォーム２を発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のＪｕｒｋａｔ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図１Ａ）またはＢＡ１０１（図１Ｂ）のＪｕｒｋａｔ細胞結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム１を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のＣＨＯ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図２Ａ）またはＢＡ１０１（図２Ｂ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のＣＨＯ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図３Ａ）またはＢＡ１０１（図３Ｂ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 高レベルのカニクイザルＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のＣＨＯ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図４Ａ）またはＢＡ１０１（図４Ｂ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 細胞表面ＣＤ９６を発現する活性化された初代ヒトＴ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の活性化された初代ヒトＴ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図５Ａ）またはＢＡ１０１（図５Ｂ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 細胞表面ＣＤ９６を発現する活性化された初代ヒトＴ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２、ＢＡ０８３、もしくはＢＡ０８４、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の活性化された初代ヒトＴ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図６Ａ）、ＢＡ０８３（図６Ｂ）、またはＢＡ０８４（図６Ｃ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 細胞表面ＣＤ９６を発現する活性化された初代ヒトＴ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ１０１、ＢＡ１０２、ＢＡ１０３、ＢＡ１０４、ＢＡ１０５、もしくはＢＡ１０６、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の活性化された初代ヒトＴ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ１０１（図７Ａ）、ＢＡ１０２（図７Ｂ）、ＢＡ１０３（図７Ｃ）、ＢＡ１０４（図７Ｄ）、ＢＡ１０５（図７Ｅ）、またはＢＡ１０６（図７Ｆ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 細胞表面ＣＤ９６を発現するＮＹ－ＥＳＯ－１トランスフェクトＣＤ８＋Ｔ細胞への、親和性成熟抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７４、ＢＡ０７３、ＢＡ０７９、ＢＡ０７８、ＢＡ０８１、ＢＡ０８０、ＢＡ０７７、ＢＡ０７６、ＢＡ０８２、もしくはＢＡ０７５、親抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のＮＹ－ＥＳＯ－１トランスフェクトＣＤ８＋Ｔ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図８Ａ）、ＢＡ０８３（図８Ｂ）、ＢＡ０７４（図８Ｃ）、ＢＡ０７３（図８Ｄ）、ＢＡ０７９（図８Ｅ）、ＢＡ０７８（図８Ｆ）、ＢＡ０８１（図８Ｇ）、ＢＡ０８０（図８Ｈ）、ＢＡ０７７（図８Ｉ）、ＢＡ０７６（図８Ｊ）、ＢＡ０８２（図８Ｋ）、ＢＡ０７５（図８Ｌ）、またはＢＡ１０１（図８Ｍ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 細胞表面カニクイザルＣＤ９６を発現する活性化されたカニクイザル初代Ｔ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２もしくはＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の活性化された初代カニクイザルＴ細胞結合と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＢＡ０７２（図９Ａ）またはＢＡ１０１（図９Ｂ）の結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１０Ａ）またはＢＡ１０１（図１０Ｂ）によって、高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１１Ａ）またはＢＡ１０１（図１１Ｂ）によって、高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ＰＶＲ－Ｈｉｓ結合の遮断を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｈｉｓの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１２Ａ）、ＢＡ０８３（図１２Ｂ）、またはＢＡ０８４（図１２Ｃ）によって、高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１３Ａ）、ＢＡ０８３（図１３Ｂ）、ＢＡ０８５（図１３Ｃ）、ＢＡ０８６（図１３Ｄ）、ＢＡ０８７（図１３Ｅ）、ＢＡ０８９（図１３Ｆ）、ＢＡ０９０（図１３Ｇ）、ＢＡ０８８（図１３Ｈ）、ＢＡ０９１（図１３Ｉ）、ＢＡ０９２（図１３Ｊ）、ＢＡ０９３（図１３Ｋ）、またはＢＡ０９４（図１３Ｌ）によって、高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ヒトＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図１４Ａ）、ＢＡ０７４（図１４Ｂ）、ＢＡ０７８（図１４Ｃ）、ＢＡ０７９（図１４Ｄ）、ＢＡ０８０（図１４Ｅ）、ＢＡ０８１（図１４Ｆ）、ＢＡ０７６（図１４Ｇ）、ＢＡ０７７（図１４Ｈ）、ＢＡ０８２（図１４Ｉ）、ＢＡ０７５（図１４Ｊ）、ＢＡ０８３（図１４Ｋ）、またはＢＡ０７２（図１４Ｌ）によって、高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム１を発現するように操作されたＣＨＯ細胞へのヒトＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図１５Ａ）、ＢＡ０７４（図１５Ｂ）、ＢＡ０７８（図１５Ｃ）、ＢＡ０７９（図１５Ｄ）、ＢＡ０８０（図１５Ｅ）、ＢＡ０８１（図１５Ｆ）、ＢＡ０７６（図１５Ｇ）、ＢＡ０７７（図１５Ｈ）、ＢＡ０８２（図１５Ｉ）、ＢＡ０７５（図１５Ｊ）、ＢＡ０８３（図１５Ｋ）、またはＢＡ０７２（図１５Ｌ）によって、高レベルのヒトＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ヒトＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ１０１（図１６Ａ）、ＢＡ１０２（図１６Ｂ）、ＢＡ１０３（図１６Ｃ）、ＢＡ１０４（図１６Ｄ）、ＢＡ１０５（図１６Ｅ）、またはＢＡ１０６（図１６Ｆ）によって、高レベルのＣＤ９６の細胞表面ヒトアイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ１０１（図１７Ａ）またはＢＡ１０７（図１７Ｂ）によって、高レベルのＣＤ９６の細胞表面ヒトアイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１８Ａ）、ＢＡ０８３（図１８Ｂ）、またはＢＡ０８４（図１８Ｃ）によって、高レベルのカニクイザルＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１９Ａ）、ＢＡ０８３（図１９Ｂ）、ＢＡ０８５（図１９Ｃ）、ＢＡ０８６（図１９Ｄ）、ＢＡ０８８（図１９Ｅ）、ＢＡ０８７（図１９Ｆ）、ＢＡ０８９（図１９Ｇ）、ＢＡ０９０（図１９Ｈ）、ＢＡ０９１（図１９Ｉ）、ＢＡ０９２（図１９Ｊ）、ＢＡ０９３（図１９Ｋ）、またはＢＡ０９４（図１９Ｌ）によって、高レベルのカニクイザルＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ヒトＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図２０Ａ）、ＢＡ０７４（図２０Ｂ）、ＢＡ０７８（図２０Ｃ）、ＢＡ０７９（図２０Ｄ）、ＢＡ０８０（図２０Ｅ）、ＢＡ０８１（図２０Ｆ）、ＢＡ０７６（図２０Ｇ）、ＢＡ０７７（図２０Ｈ）、ＢＡ０８２（図２０Ｉ）、ＢＡ０７５（図２０Ｊ）、ＢＡ０８３（図２０Ｋ）、またはＢＡ０７２（図２０Ｌ）によって、高レベルのカニクイザルＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム１を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ヒトＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図２１Ａ）、ＢＡ０７４（図２１Ｂ）、ＢＡ０７８（図２１Ｃ）、ＢＡ０７９（図２１Ｄ）、ＢＡ０８０（図２１Ｅ）、ＢＡ０８１（図２１Ｆ）、ＢＡ０７６（図２１Ｇ）、ＢＡ０７７（図２１Ｈ）、ＢＡ０８２（図２１Ｉ）、ＢＡ０７５（図２１Ｊ）、ＢＡ０８３（図２１Ｋ）、またはＢＡ０７２（図２１Ｌ）によって、高レベルのカニクイザルＣＤ９６の細胞表面アイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞への、ヒトＰＶＲ－Ｆｃ結合の遮断を示す一連のグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体による遮断と比較して、中央蛍光強度（ＭＦＩ）によって評価されるＰＶＲ－Ｆｃの結合のレベルは、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対して最大応答％としてプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図２２Ａ）もしくはＢＡ１０１（図２２Ｂ）、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の存在下で、高レベルのヒトＣＤ９６またはＰＶＲのアイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞のコンジュゲート形成を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、形成されたコンジュゲートの割合は、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 アイソタイプ対照の存在下で、かつブロッキング抗体の存在下でない、象限Ｑ２におけるコンジュゲート形成を示す散布図である。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２、ＢＡ０８３、ＢＡ０８４、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の存在下で、高レベルのヒトＣＤ９６またはＰＶＲのアイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞のコンジュゲート形成を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、形成されたコンジュゲートの割合は、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ１０１、ＢＡ１０２、ＢＡ１０３、ＢＡ１０４、ＢＡ１０５、またはＢＡ１０６の存在下で、高レベルのヒトＣＤ９６またはＰＶＲのアイソフォーム２を発現するように操作されたＣＨＯ細胞のコンジュゲート形成を示すグラフである。いずれの場合も、ＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、形成されたコンジュゲートの割合は、細胞とともにインキュベートされたそれぞれの抗体の濃度に対してプロットされる。 抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２およびＢＡ１０１が、抗ＰＤ－１抗体ありまたはなしで、２つの異なるドナーに投与されたとき、用量依存的様式で、ＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２分泌を促進することを示す一連のグラフである。図２５Ａ～Ｄは、第１のドナーでの第１の実験を表し、図２５Ｅ～Ｈは、第２のドナーでの第２の実験を表す。 親和性成熟ＢＡ０７３、ＢＡ０７８、ＢＡ０８０、およびＢＡ０７６抗体、ならびに生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３が、抗ＰＤ－１抗体ありおよびなしの両方で、ＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２分泌を促進することを示す一連のグラフである。図２６Ａおよび２６Ｂは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２６Ａ）、および抗ＰＤ－１抗体あり（図２６Ｂ）の１つの実験を表す。図２６Ｃおよび２６Ｄは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２６Ｃ）およびあり（図２６Ｄ）の、異なるドナーでの第２の実験を表す。図２６Ｅおよび２６Ｆは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２６Ｅ）およびあり（図２６Ｆ）の、異なるドナーでの第３の実験を表す。 親和性成熟ＢＡ０７４、ＢＡ０７９、ＢＡ０７７、ＢＡ０８１、ＢＡ０８２、およびＢＡ０７５抗体、ならびに親ＢＡ０７２抗体が、ＳＥＡ刺激ＰＢＭＣによるＩＬ－２分泌を促進する能力を示す一連のグラフである。図２７Ａおよび２７８Ｂは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２７Ａ）、および抗ＰＤ－１抗体あり（図２７Ｂ）の１つの実験を表す。図２７Ｃおよび２７Ｄは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２７Ｃ）およびあり（図２７Ｄ）の、異なるドナーでの第２の実験を表す。図２７Ｅおよび２７Ｆは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２７Ｅ）およびあり（図２７Ｆ）の、異なるドナーでの第３の実験を表す。 ＢＡ０７２およびＰＶＲならびに抗ＣＤ３発現ＣＨＯ細胞の存在下でのＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞上のＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ（図２８Ａ）およびＮＦκＢ－ルシフェラーゼ（図２８Ｂ）シグナル伝達の増加を示すグラフである。ＢＡ０７２とアイソタイプ対照との間のデルタ相対光単位（ＲＬＵ）は、抗体濃度に対してプロットされる。 ＣＤ９６、ＣＤ２２６、ＰＶＲ、およびＣＤ３の細胞表面発現を示す一連のヒストグラムである。 ＢＡ０７２およびＰＶＲならびに抗ＣＤ３発現ＣＨＯ細胞の存在下でのＣＤ２２６表面発現あり（図２９Ａ）およびなし（図２９Ｂ）の、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞上のＮＦＡＴ－ルシフェラーゼシグナル伝達の増加を示すグラフである。ＢＡ０７２とアイソタイプ対照との間のデルタ相対光単位（ＲＬＵ）は、抗体濃度に対してプロットされる。 いずれの場合も、アイソタイプ対照と比較して、ＢＡ０７２ ＩｇＧ１（図３０Ａ）、Ｆｃ増強ＢＡ０７２（ＢＡ１０９）（図３０Ｂ）、またはＢＡ０７２（ＢＡ１０８）のＦｃサイレントバリアント（図３０Ｃ）によるカスパーゼ３／７活性化の誘導によって測定される、初代ＮＫ細胞の存在下でのＣＤ９６発現細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の促進を示す一連のグラフである。誘導されたカスパーゼ３／７活性化％は、時間（ｈ）に対してプロットされる。 ＣＤ９６発現標的細胞に結合した、抗ＣＤ９６ ＢＡ０７２ Ｆｃバリアント、Ｆｃ増強ＢＡ０７２バリアント（ＢＡ１０９）（図３１Ｂ）、ＢＡ０７２のＦｃサイレントバリアント（ＢＡ１０８）（図３１Ｃ）、またはＢＡ０７２ ＩｇＧ１（図３１Ａ）の存在下でのＦｃγＲＩＩＩＡ発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞からのＦｃγＲＩＩＩＡ媒介性ＮＦＡＴシグナル伝達を示す一連のグラフである（４：１のＥ：Ｔ比）。相対光単位（ＲＬＵ）は、抗体濃度に対してプロットされる。 ２名のヒトドナーからのＰＢＭＣを使用したＴ細胞：ＡＰＣ共培養アッセイにおける、ＢＡ０７２（図３２Ａ）およびＢＡ１０８（ＢＡ０７２のＦｃサイレントバリアント；図３２Ｂ）によって誘発されたＩＬ－２分泌の程度を示すグラフである。 ＢＡ０７２（図３３Ａ）、ＢＡ１０１（図３３Ｂ）、参照抗体参照Ａ（図３３Ｃ）、またはＰＶＲ－Ｆｃ（図３３Ｄ）の存在下でのＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を使用したＣＤ９６の内在化パーセントを示す一連のグラフである。 親抗体ＢＡ０７２（図３４Ａ）もしくはＢＡ１０１（図３４Ｄ）、または生殖細胞系列バリアントＢＡ０８３（図３４Ｂ）もしくはＢＡ０８４（図３４Ｃ）の存在下でのＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を使用したＣＤ９６の内在化パーセントを示す一連のグラフである。 ドナー１（図３５Ａ）およびドナー２（図３５Ｂ）におけるＢＡ０７２の存在下での、ＣＤ９６発現初代Ｔ細胞によるＣＤ９６の内在化を示すグラフである。 Ｆｃタグ付き完全長ヒトＣＤ９６（図３６Ａ）またはＦｃタグ付きドメイン１ヒトＣＤ９６（図３６Ｂ）へのＢＡ０７２ Ｆａｂ、ＢＡ１０１ Ｆａｂ、および参照Ａ Ｆａｂの結合を示すセンサーグラムである。 Ｆｃタグ付き完全長ヒトＣＤ９６（図３７Ａおよび３７Ｂ）またはＦｃタグ付きドメイン１ヒトＣＤ９６（図３７Ｃおよび３７Ｄ）へのＢＡ０７２ Ｆａｂ、ＢＡ１０１ Ｆａｂ、および参照Ａ Ｆａｂの結合を示す一連のセンサーグラムである。図３７Ａおよび図３７Ｃは、初期会合がＢＡ０７２とのものであった実験を表す。図３７Ｂおよび図３７Ｄは、初期会合がＢＡ１０１とのものであった実験を表す。
本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＣＤ９６機能、例えば、ＣＤ９６媒介性免疫抑制に拮抗する抗体を提供する。また、これらの抗体を含む医薬組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、免疫細胞活性化を増加させるために特に有用であり、したがって、対象におけるがんの治療、または対象における感染症の治療もしくは予防に有用である。本明細書に記載される「単離された抗体」のすべての例は、単離されていてもよいが、単離される必要はない抗体として追加的に企図される。本明細書に記載される「単離されたポリヌクレオチド」のすべての例は、単離されていてもよいが、単離される必要はないポリヌクレオチドとして追加的に企図される。本明細書に記載される「抗体」のすべての例は、単離されていてもよいが、単離される必要はない抗体として追加的に企図される。本明細書に記載される「ポリヌクレオチド」のすべての例は、単離されていてもよいが、単離される必要はないポリヌクレオチドとして追加的に企図される。
定義
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用されるとき、値または範囲の５％～１０％上（例えば、最大５％～１０％上）および５％～１０％下（例えば、最大５％～１０％下）の逸脱が、列挙される値または範囲の意図される意味にとどまることを示す。
本明細書で使用される場合、「ＣＤ９６」という用語は、ＴＡＣＴＩＬＥ（Ｔ細胞活性化、増加された後期発現）としても知られる、ヒトにおいてＣＤ９６遺伝子によってコードされる表面抗原分類９６を指す。本明細書で使用される場合、「ヒトＣＤ９６」という用語は、野生型ヒトＣＤ９６遺伝子（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＭ＿００５８１６．５）、断片、またはそのバリアントによってコードされるＣＤ９６タンパク質を指す。例序的なヒトＣＤ９６の細胞外部分を、配列番号１２７、１２８、１２９、１３０、および１３１として本明細書に提供する。例序的なカニクイザルＣＤ９６の細胞外部分を、配列番号１３２、１３３、および１３４として本明細書に提供する。
本明細書で使用される場合、「ＣＤ１５５」、「ポリオウイルス受容体」、および「ＰＶＲ」という用語は、互換的に使用され、ＣＤ１５５遺伝子（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＭ＿００６５０５．５）、断片、またはそのバリアントによってコードされるＣＤ１５５タンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、完全長抗体、完全長抗体の抗原結合断片、ならびに抗体ＣＤＲ、ＶＨ領域、および／またはＶＬ領域を含む分子を含む。抗体の例には、限定するものではないが、モノクローナル抗体、組換えで産生された抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、細胞内抗体、ヘテロ複合体抗体、抗体－薬物コンジュゲート、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、ならびに上記のうちのいずれかの抗原結合断片が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）のものであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ抗体、あるいはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）またはサブクラスである。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の特定の実施形態では、抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。
本明細書で使用される場合、「ＶＨ領域」および「ＶＬ領域」という用語は、それぞれ、ＦＲ（フレームワーク領域）１、２、３、および４、ならびにＣＤＲ（相補性決定領域）１、２、および３を含む、単一抗体重鎖可変領域および軽鎖可変領域を指す（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ）を参照されたく、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続性抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９－６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）によって、およびＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）によって説明されており、それらのすべては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、定義は互いに比較した場合にアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。ある特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）およびＭａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）によって定義されるようなＣＤＲである。ある特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，” ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９－６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって定義されるようなＣＤＲである。ある特定の実施形態では、抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲは、異なる慣例を使用して定義される。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲは、抗体の構造解析を行い、標的分子（例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＣＤ９６）のエピトープ領域と接触すると予測される可変領域（複数可）の残基を特定することによって定義される。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、重鎖ＣＤＲを示し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、軽鎖ＣＤＲを示す。
本明細書で使用される場合、「フレームワーク（ＦＲ）アミノ酸残基」という用語は、イムノグロブリン鎖のフレームワーク領域のそれらのアミノ酸を指す。本明細書で使用される「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」という用語は、可変領域の一部であるが、ＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を含む（例えば、ＣＤＲのＫａｂａｔまたはＭａｃＣａｌｌｕｍ定義を使用する）。
本明細書で使用される場合、「可変領域」および「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の部分、一般的には、軽鎖または重鎖の部分、典型的には、成熟重鎖におけるアミノ末端の約１１０～１２０個のアミノ酸もしくは１１０～１２５個のアミノ酸および成熟軽鎖における約９０～１１５個のアミノ酸を指し、それは抗体の間で配列が大々的に異なり、特定の抗体のその特定の抗原に対する結合および特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるその領域に集中し、一方、可変ドメインにおけるより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。任意の特定のメカニズムまたは理論により結び付けられることを望まないが、軽鎖および重鎖のＣＤＲが、抗体の抗原との相互作用および特異性の主な原因であると考えられている。ある特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。ある特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。ある特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲおよび霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
「ＶＬ」および「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すように互換的に使用される。
「ＶＨ」および「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すように互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、互換可能であり、当該技術分野において一般的である。定常領域は、抗体部分、例えば、抗体の抗原との結合に直接的には関与しないが、Ｆｃ受容体（例えば、Ｆｃガンマ受容体）との相互作用のような、様々なエフェクター機能を呈し得る、軽および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用されるとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、任意の異なる種類、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）を指すことができ、それは、それぞれ、ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む、抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭクラスを生じる。
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用されるとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、任意の異なる種類、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。特定の実施形態では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。
本明細書で使用される場合、「ＥＵ番号付けシステム」という用語は、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９）およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１に記載されるように、抗体の定常領域のＥＵ番号付け慣例を指し、それらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
「結合親和性」は、一般的に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）の間での非共有結合性相互作用の合計の強さを指す。別の方法で示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）の間での１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に、解離定数（ＫＤ）により表され得る。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）、および平衡結合定数（ＫＡ）を含むが、これらに限定されない、当該技術分野において既知の多数の方法で測定され、かつ／または表され得る。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの割合から計算され、一方、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの割合から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗体の抗原への結合率定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗体の抗原への解離速度定数を指す。ｋｏｎおよびｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡのような、当業者に既知の技術により決定され得る。本明細書で使用される場合、「低い親和性」は、より大きなＫＤを指す。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、「免疫特異的に結合する」、および「免疫特異的に認識する」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、かかる結合が当業者により理解される通り、抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する分子を指す。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、イムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ ３０００ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ボイシ、アイダホ州）、または当該技術分野において既知の他のアッセイにより決定される通り、一般的により低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合し得る。特定の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、分子が別の抗原に非特異的に結合するとき、ＫＡより少なくとも２ｌｏｇ（例えば、１０倍）、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ以上であるＫＡで抗原に結合する。
別の特定の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、同様の結合条件下で他のタンパク質と交差反応しない。別の特定の実施形態では、ＣＤ９６に特異的に結合する分子は、他の非ＣＤ９６タンパク質と交差反応しない。特定の実施形態では、別の無関連の抗原より高い親和性でＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）に結合する抗体が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、例えば、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、または結合平衡除外法（ｋｉｎｅｔｉｃ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）によって測定された場合、別の無関連の抗原よりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上高い親和性でＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）に結合する抗体が本明細書に提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６抗体の無関連の非ＣＤ９６タンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫アッセイにより測定された場合、ＣＤ９６タンパク質の抗体の結合の１０％、１５％、または２０％よりも低い。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合し得る抗原の領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（直鎖または連続エピトープ）であり得るか、あるいはエピトープは、例えば、ポリペプチドまたは複数のポリペプチドの２つ以上の不連続領域から一体となり得る（立体構造、非直線、非連続、もしくは不連続エピトープ）。ある特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析連結水素／ジュウテリウム交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴ－ペプチドスキャニングアッセイ（例えば、ＣＬＩＰＳ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｎｋａｇｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎｔｏ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）を使用するペプチドを拘束して、非連続または立体構造エピトープをマッピングする）、および／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）により決定され得る。Ｘ線結晶構造解析について、結晶化は、当該技術分野で既知の方法（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）のうちのいずれかを使用して達成され得る。Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究されてもよく、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．により配布されたＹａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４＆１１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，；ＵＳ２００４／００１４１９４を参照されたい）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｋｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化されてもよく、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して、行われてもよい。アラニンスキャニング変異誘発技術を含む、変異誘発技術の説明について、例えば、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたく、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＣＬＩＰＳ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｎｋａｇｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎｔｏ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）は、複雑なタンパク質ドメインの機能的模倣体として挙動する構造的に拘束された立体配置で１つ以上のペプチドを提示する技術である。例えば、米国公開第ＵＳ２００８／０１３９４０７ Ａ１号および第ＵＳ２００７／０９９２４０ Ａ１号、ならびに米国特許第７，９７２，９９３号を参照されたく、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、アラニンスキャニング変異誘発研究を使用して決定される。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、質量分析と一体になった水素／重水素交換を使用して決定される。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、Ｐｅｐｓｃａｎ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＣＬＩＰＳエピトープマッピング技術を使用して決定される。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、別の種由来のそのオルソログの一部を有する抗原のスイッチ変異体を生成し、次いで、抗体結合の喪失について（例えば、本明細書に記載されるＦＡＣＳベースの細胞結合アッセイによって）スイッチ変異体を試験することによって、タンパク質変異誘発によって決定される。
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」および「ＴＣＲ」という用語は、互換的に使用され、完全長ヘテロ二量体αβまたはγδ ＴＣＲ、完全長ＴＣＲの抗原結合断片、およびＴＣＲ ＣＤＲまたは可変領域を含む分子を指す。ＴＣＲの例としては、これらに限定されないが、完全長ＴＣＲ、完全長ＴＣＲの抗原結合断片、膜貫通領域および細胞質領域を欠く可溶性ＴＣＲ、可動性リンカーにより結合されたＴＣＲの可変領域を含む一本鎖ＴＣＲ、操作されたジスルフィド結合により連結されたＴＣＲ鎖、単一特異性ＴＣＲ、多重特異性ＴＣＲ（二重特異性ＴＣＲを含む）、ＴＣＲ融合、ヒトＴＣＲ、ヒト化ＴＣＲ、キメラＴＣＲ、組換えで産生されたＴＣＲ、ならびに合成ＴＣＲが挙げられる。この用語は、野生型ＴＣＲおよび遺伝子操作されたＴＣＲ（例えば、第１の種のＴＣＲからの第１の部分および第２の種のＴＣＲからの第２の部分を含むキメラＴＣＲ鎖を含むキメラＴＣＲ）を包含する。
本明細書で使用される場合、「主要組織適合性複合体」および「ＭＨＣ」は、互換的に使用され、ＭＨＣクラスＩ分子および／またはＭＨＣクラスＩＩ分子を指す。
本明細書で使用される場合、「ペプチド－ＭＨＣ複合体」は、ＭＨＣの当該技術分野に認識されるペプチド結合ポケット内に結合されたペプチドを有するＭＨＣ分子（ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ）を指す。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、本明細書に記載される治療的または予防的な措置を指す。「治療」の方法は、疾患もしくは障害または再発性の疾患もしくは障害の１つ以上の症状を予防、治癒、遅延、重症度の低減、または改善するために、あるいはかかる治療の不在下で予期される以上に対象の寿命を延ばすために、疾患もしくは障害を有する、またはかかる疾患もしくは障害を有する傾向がある対象への抗体の投与を用いる。
本明細書で使用される場合、対象への治療の投与の文脈における「有効量」という用語は、所望の予防または治療効果を達成する治療の量を指す。
本明細書で使用される場合、「内在化」または「内在化された」という用語は、細胞の表面で発現される抗原への抗体の結合時の、細胞の細胞内区画内への抗体の取り込みを指す。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。一実施形態では、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳類である。一実施形態では、対象は、ヒトである。
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の「同一性パーセント」の決定は、数学的アルゴリズムを使用して成し遂げられ得る。２つの配列の比較のため利用される数学的アルゴリズムの特定の非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ Ｓ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ（１９９３）ＰＮＡＳ ９０：５８７３－５８７７において改変されたＫａｒｌｉｎ Ｓ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ ８７：２２６４－２２６８のアルゴリズムであり、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれ、それは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本明細書において記載される核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るためのＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメーターセット、例えば、スコア＝１００についてワード長＝１２で行われ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書において記載されるタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るためのＸＢＬＡＳＴプログラムパラメーターセット、例えば、スコア＝５０に対して、ワード長＝３で行われ得る。比較目的でギャップアライメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２５：３３８９－３４０２に記載される通り、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが利用されてもよく、それは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係を検出する反復検索を行うことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを利用するとき、それぞれのプログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメーターが使用され得る（例えば、ワールドワイドウェブ、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ上の全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）を参照）。配列の比較のため利用される数学的アルゴリズムの別の特定の非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７のアルゴリズムであり、それは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウエアパッケージの一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためＡＬＩＧＮプログラムを利用するとき、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４が使用され得る。
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許可して、または許可しないで、上で記載されたものと同様の技術を使用して決定され得る。同一性パーセントを計算する際、典型的には、完全一致のみがカウントされる。
抗ＣＤ９６抗体
一態様では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＣＤ９６機能に拮抗する抗体を提供する。例示的な抗体のアミノ酸配列を、本明細書の表１に示す。
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ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書の表１に示されるＶＨのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＨのＣＤＲＨ１を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＨのＣＤＲＨ２を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＨのＣＤＲＨ３を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書の表１に開示されるＶＬのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＬのＣＤＲＬ１を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＬのＣＤＲＬ２を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＬのＣＤＲＬ３を含む。
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９－６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９９１）に従って決定することができ、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定され、抗体の重鎖ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（上記）に従って決定される。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲは、抗体の構造解析を行い、標的分子（例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＣＤ９６）のエピトープ領域と接触すると予測される可変領域（複数可）の残基を特定することによって定義される。
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を指す、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ＆Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２、および米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ＆Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２；典型的には、Ｋａｂａｔ番号付け慣例を使用するとき、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＨ１ループは、重鎖アミノ酸２６～３２、３３、または３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＨ２ループは、重鎖アミノ酸５２～５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＨ３ループは、重鎖アミノ酸９５～１０２に存在し、一方、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＬ１ループは、軽鎖アミノ酸２４～３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＬ２ループは、軽鎖アミノ酸５０～５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＬ３ループは、軽鎖アミノ酸８９～９７に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け慣例を使用して番号付けられるとき、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲＨ１ループの末端は、ループの長さに依存して、Ｈ３２～Ｈ３４で変動する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが、Ｈ３５ＡおよびＨ３５Ｂにおいて挿入を生じ、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２において終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３において終わり、３５Ａと３５Ｂ両方が存在する場合、ループは３４において終わるためである）。
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５に従って決定することができる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）のＭａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ”もまた参照されたい。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書の表１に開示されるＶＨのＣｈｏｔｈｉａのＶＨ ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書の表１に開示されるＶＬのＣｈｏｔｈｉａのＶＬ ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、本明細書の表１に開示される抗体のＣｈｏｔｈｉａのＶＨ ＣＤＲおよびＣｈｏｔｈｉａのＶＬ ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する抗体は、１つ以上のＣＤＲを含み、ここで、ＣｈｏｔｈｉａおよびＫａｂａｔのＣＤＲは、同じアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、ＫａｂａｔのＣＤＲおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせを含む。
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６；Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、およびＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３７：Ｄ１００６－Ｄ１０１２に記載されるようなＩＭＧＴ番号付けシステムに従って決定することができる。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、例えば、上記のＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ（１９９９）および上記のＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）に記載されるようなＩＭＧＴ番号付けシステムによって決定される、本明細書の表１に開示される抗体のＣＤＲを含む抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造ループとの間の歩み寄りを表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）により使用される、ＡｂＭ高頻度可変領域を指す、ＡｂＭ番号付けスキームに従って決定することができる。特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、ＡｂＭ番号付けスキームによって決定される、本明細書の表１に開示される抗体のＣＤＲを含む抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１に示されるＶＨのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５に示されるＶＬのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域のアミノ酸配列を含むＶＬを含み、各ＣＤＲは、ＣＤＲのＭａｃＣａｌｌｕｍの定義、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＩＭＧＴ番号付けシステム、ＡｂＭの定義、構造分析、またはそれらの組み合わせに従って定義され、構造分析は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはＣＤ９６カニクイザルＣＤ９６）のエピトープ領域と接触すると予測される可変領域（複数可）の残基を特定する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、Ｋａｂａｔの定義によって定義されるＣＤＲおよび抗体の構造分析によって定義されるＣＤＲの組み合わせを含む単離された抗体を提供し、構造分析は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）のエピトープ領域と接触すると予測される可変領域（複数可）の残基を特定する。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、
（ａ）Ｘ１ＹＸ２Ｘ３Ｘ４（配列番号１３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１であって、
Ｘ１が、ＱまたはＳであり、
Ｘ２が、ＡまたはＳであり、
Ｘ３が、ＭまたはＩであり、
Ｘ４が、ＨまたはＳである、ＣＨＲＨ１、
（ｂ）Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＱＧ（配列番号１３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２であって、
Ｘ１が、ＷまたはＧであり、
Ｘ２が、ＮまたはＩであり、
Ｘ３が、Ａ、Ｅ、Ｖ、またはＰであり、
Ｘ４が、Ｖ、Ｇ、Ｗ、またはＩであり、
Ｘ５が、Ｓ、Ｙ、Ｔ、Ｎ、またはＦであり、
Ｘ６が、ＧまたはＷであり、
Ｘ７が、Ｄ、Ｙ、Ｎ、またはＴであり、
Ｘ８が、ＴまたはＡであり、
Ｘ９が、ＫまたはＮであり、
Ｘ１０が、ＳまたはＡである、ＣＤＲＨ２、
（ｃ）ＮＷＧＸ１ＳＹＧＸ２ＤＶ（配列番号１８０）、ＧＹＤＳＲＰＬＤＶ（配列番号１９）、またはＧＹＤＳＲＰＬＤＹ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３であって、
Ｘ１が、ＭまたはＬであり、
Ｘ２が、ＭまたはＬである、ＣＤＲＨ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２ＹＬＮ（配列番号１３９）またはＧＧＮＮＩＧＳＫＩＶＨ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１であって、
Ｘ１が、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ｐ、またはＷである、ＣＤＲＬ１、
（ｅ）Ｘ１Ｘ２ＳＳＬＱＳ（配列番号１４１）またはＤＤＲＤＲＰＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２であって、
Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｓ、またはＥである、ＣＤＲＬ２、ならびに／または
（ｆ）ＱＱＸ１ＹＳＴＰＡＬＸ２（配列番号１４３）またはＱＶＷＤＩＮＶＨＨＶＩ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３であって、
Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
Ｘ２が、ＴまたはＳである、ＣＤＲＬ３を含む。
本明細書に開示される抗体のある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１（例えば、本明細書の表１に記載される）に対してすぐＮ末端のアミノ酸は、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ｄ、またはＡである。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、
（ａ）Ｘ１ＹＸ２Ｘ３Ｘ４（配列番号１３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１であって、
Ｘ１が、ＱまたはＳであり、
Ｘ２が、ＡまたはＳであり、
Ｘ３が、ＭまたはＩであり、
Ｘ４が、ＨまたはＳである、ＣＤＲＨ１、
（ｂ）Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＱＧ（配列番号１３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２であって、
Ｘ１が、ＷまたはＧであり、
Ｘ２が、ＮまたはＩであり、
Ｘ３が、Ａ、Ｅ、Ｖ、またはＰであり、
Ｘ４が、Ｖ、Ｇ、Ｗ、またはＩであり、
Ｘ５が、Ｓ、Ｙ、Ｔ、Ｎ、またはＦであり、
Ｘ６が、ＧまたはＷであり、
Ｘ７が、Ｄ、Ｙ、Ｎ、またはＴであり、
Ｘ８が、ＴまたはＡであり、
Ｘ９が、ＫまたはＮであり、
Ｘ１０が、ＳまたはＡである、ＣＤＲＨ２、
（ｃ）ＮＷＧＸ１ＳＹＧＸ２ＤＶ（配列番号１８０）、ＧＹＤＳＲＰＬＤＶ（配列番号１９）、またはＧＹＤＳＲＰＬＤＹ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３であって、
Ｘ１が、ＭまたはＬであり、
Ｘ２が、ＭまたはＬである、ＣＤＲＨ３、
（ｄ）ＲＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２ＹＬＮ（配列番号１３９）またはＧＧＮＮＩＧＳＫＩＶＨ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１であって、
Ｘ１が、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、
Ｘ２が、Ｓ、Ｐ、またはＷである、ＣＤＲＬ１、
（ｅ）Ｘ１Ｘ２ＳＳＬＱＳ（配列番号１４１）またはＤＤＲＤＲＰＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２であって、
Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｓ、またはＥである、ＣＤＲＬ２、ならびに
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＱＸ１ＹＳＴＰＡＬＸ２（配列番号１４３）またはＱＶＷＤＩＮＶＨＨＶＩ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含み、
Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
Ｘ２が、ＴまたはＳである、単離された抗体。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、それぞれ、配列番号１、５、および１８；２、６、および１８；２、８、および１８；２、９、および１８；２、１０、および１８；１、７、および１８；２、１１、および１８；１、１２、および１８；１、１３、および１８；１、１４、および１８；３、１５、および１８；１、１６、および１８；１、５、および１４０；１、５、および１４２；１、５、および１７９；４、１７、および１９；または４、１７、および２０に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、それぞれ、配列番号２１、２８、および３３；２１、２９、および３３；２１、３０、および３３；２１、３１、および３３；２２、２９、および３３；２４、２９、および３３；２３、２９、および３３；２５、２８、および３４；または２６、３２、および３５に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含むＶＨ、ならびにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含むＶＬを含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域は、それぞれ、配列番号１、５、１８、２１、２８、および３３；１、５、１８、２１、２９、および３３；１、５、１８、２２、２９、および３３；１、５、１８、２３、２９、および３３；１、５、１８、２４、２９、および３３；１、５、１８、２５、２８、および３４；１、５、１４０、２１、２８、および３３；１、５、１４２、２１、２８、および３３；１、５、１７９、２１、２８、および３３；１、７、１８、２１、２９、および３３；１、１２、１８、２１、２８、および３３；１、１３、１８、２１、２８、および３３；１、１４、１８、２１、２８、および３３；１、１６、１８、２１、２８、および３３；２、６、１８、２１、２９、および３３；２、８、１８、２１、２９、および３３；２、９、１８、２１、３０、および３３；２、１０、１８、２１、２９、および３３；２、１１、１８、２１、３１および３３；３、１５、１８、２１、２８、および３３；４、１７、１９、２６、３２、および３５；または４、１７、２０、２６、３２、および３５に示されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号３６～６１のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号３６～６１のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５に示されるアミノ酸配列からなる。
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１に示されるアミノ酸配列からなり、ＶＬのアミノ酸配列は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号３６～６１のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号３６～６１のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、本開示は、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０に示されるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０に示されるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号３６～６１のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号３６～６１のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、本開示は、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０に示されるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む抗体と、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）への結合について交差競合する単離された抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載される抗体、例えば、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０に示されるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む抗体と同じまたは重複するＣＤ９６のエピトープ（例えば、ヒトＣＤ９６のエピトープまたはカニクイザルＣＤ９６のエピトープ）に結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析連結水素／ジュウテリウム交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴ－ペプチドスキャニングアッセイ、および／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）により決定され得る。Ｘ線結晶構造解析について、結晶化は、当該技術分野で既知の方法（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）のうちのいずれかを使用して達成され得る。Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究されてもよく、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．により配布されたＹａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４＆１１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．、米国特許出願第２００４／００１４１９４号を参照されたい）、ＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｋｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化されてもよい。Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４＆１１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．２００４／００１４１９４），ａｎｄ ＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３，変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して、行われてもよい。アラニンスキャニング変異誘発技術を含む、変異誘発技術の説明について、例えば、上記のＣｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）および上記のＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）を参照されたい。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、アラニンスキャニング変異誘発研究を使用して決定される。加えて、同じまたは重複するＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）のエピトープを認識し、結合する抗体は、例えば、１つの抗体の、別の抗体の標的抗原への結合をブロックする能力を示すこと、すなわち、競合結合アッセイによる、イムノアッセイなどの日常的技術を使用して特定され得る。競合結合アッセイもまた使用して、２つの抗体が、エピトープに対して同様の結合特異性を有するかどうかを決定することができる。競合結合は、免疫グロブリンが、試験下で、参照抗体の、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）などの共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定され得る。多数の種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＴＮ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３７：３６１４－９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ＧＡ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２５（１）：７－１５を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ＲＣ ｅｔ ａｌ．、（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５２を参照されたい）；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：７７－８２を参照されたい）が、既知であり、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。典型的には、かかるアッセイは、これらの未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンのいずれかを有する、固体表面または細胞に結合された精製された抗原（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６などのＣＤ９６）の使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合された標識の量を決定することにより、測定され得る。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在するとき、それは、参照抗体の共通の抗原への特異手的結合を、少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％またはそれ以上阻害するであろう。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して、多数の異なるフォーマットで設計され得る。一般的なバージョンのこのアッセイにおいて、抗原は、９６ウェルプレートに固定される。次に、未標識抗体の、標識抗体の抗原への結合をブロックする能力が、放射性または酵素標識を使用して測定される。さらなる詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３０：２３０８－２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ６８：２６９－２７４、Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ａｔ ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５０：４８７２－４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｖｅｓｔ ２１：５２３－５３８、Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １１：３９１－４０７、およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３０：２３０８－２３１５；Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ６８：２６９－２７４；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５０：４８７２－４８７９；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｖｅｓｔ ２１：５２３－５３８；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １１：３９１－４０７ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ ｅｄｉｔｏｒｓ（上記），ｐｐ．３８６－３８９を参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ９６のヒトＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）としても知られる）への結合を阻害する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ９６のヒトＣＤ１５５への結合は、抗体の不在下でのヒトＣＤ９６のヒトＣＤ１５５への結合に対して、抗体の存在下で５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超低減される。
ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ９６の可溶性断片が、ヒトＣＤ１５５の可溶性断片に結合するのを阻害する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ９６の可溶性断片のヒトＣＤ１５５の可溶性断片への結合は、抗体の不在下でのヒトＣＤ９６の可溶性断片のヒトＣＤ１５５の可溶性断片への結合に対して、抗体の存在下で５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超低減される。
ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ９６発現細胞が、ヒトＣＤ１５５の可溶性断片に結合するのを阻害する。ある特定の実施形態では、ＣＤ９６発現細胞のヒトＣＤ１５５の可溶性断片への結合は、抗体の不在下でのＣＤ９６発現細胞のヒトＣＤ１５５の可溶性断片への結合に対して、抗体の存在下で５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超低減される。
ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ９６発現細胞が、ヒトＣＤ１５５を発現する細胞に結合するのを阻害する。ある特定の実施形態では、ＣＤ９６発現細胞のＣＤ１５５発現細胞への結合は、抗体の不在下でのＣＤ９６発現細胞のＣＤ１５５発現細胞への結合に対して、抗体の存在下で５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超低減される。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、または１６９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１５９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７９に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８３に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８４に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８５に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８７に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８８に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号８９に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９１に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９８に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９９に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４８に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５０に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５２に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５８に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１５９に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６０に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６１に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６３に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６４に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６５に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６６に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６７に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６８に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
ある特定の実施形態では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、重鎖および軽鎖は、それぞれ、配列番号７６および１０２；７９および１０３；７８および１０３；８２および１０３；８４および１０４；８３および１０４；８６および１０３；８５および１０３；８１および１０３；８０および１０３；８７および１０５；７７および１０２；８８および１０２；７７および１０６；７７および１０７；７７および１０８；７７および１０３；８９および１０２；９０および１０２；９１および１０２；９２および１０２；９３および１０２；７７および１０９；９４および１０２；９５および１０２；９６および１０２；９７および１０２；９８および１０２；９９および１０２；１００および１１０；１００および１１１；１００および１１２；１００および１１３；１００および１１４；１００および１１５；１０１および１１０；１４４および１０２；１４７および１０３；１４６および１０３；１５０および１０３；１５２および１０４；１５１および１０４；１５４および１０３；１５３および１０３；１４９および１０３；１４８および１０３；１５５および１０５；１４５および１０２；１５６および１０２；１４５および１０６；１４５および１０７；１４５および１０８；１４５および１０３；１５７および１０２；１５８および１０２；１５９および１０２；１６０および１０２；１６１および１０２；１４５および１０９；１６２および１０２；１６３および１０２；１６４および１０２；１６５および１０２；１６６および１０２；１６７および１０２；１６８および１１０；１６８および１１１；１６８および１１２；１６８および１１３；１６８および１１４；１６８および１１５；または１６９および１１０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７６および１０２；７９および１０３；７８および１０３；８２および１０３；８４および１０４；８３および１０４；８６および１０３；８５および１０３；８１および１０３；８０および１０３；８７および１０５；７７および１０２；８８および１０２；７７および１０６；７７および１０７；７７および１０８；７７および１０３；８９および１０２；９０および１０２；９１および１０２；９２および１０２；９３および１０２；７７および１０９；９４および１０２；９５および１０２；９６および１０２；９７および１０２；９８および１０２；９９および１０２；１００および１１０；１００および１１１；１００および１１２；１００および１１３；１００および１１４；１００および１１５；１０１および１１０；１４４および１０２；１４７および１０３；１４６および１０３；１５０および１０３；１５２および１０４；１５１および１０４；１５４および１０３；１５３および１０３；１４９および１０３；１４８および１０３；１５５および１０５；１４５および１０２；１５６および１０２；１４５および１０６；１４５および１０７；１４５および１０８；１４５および１０３；１５７および１０２；１５８および１０２；１５９および１０２；１６０および１０２；１６１および１０２；１４５および１０９；１６２および１０２；１６３および１０２；１６４および１０２；１６５および１０２；１６６および１０２；１６７および１０２；１６８および１１０；１６８および１１１；１６８および１１２；１６８および１１３；１６８および１１４；１６８および１１５；または１６９および１１０のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つのＸは、グルタミンである。ある特定の実施形態では、配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つのＸは、ピログルタメートである。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。あ


る特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７６および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７９および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７８および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８２および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８４および１０４のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８３および１０４のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８６および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８５および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８１および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８０および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８７および１０５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７７および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８８および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７７および１０６のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７７および１０７のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７７および１０８のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７７および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号８９および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９０および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９１および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９２および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９３および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号７７および１０９のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９４および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９５および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９６および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９７および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９８および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号９９および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１００および１１０のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１００および１１１のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１００および１１２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１００および１１３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１００および１１４のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１００および１１５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１０１および１１０のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４４および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４７および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４６および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５０および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５２および１０４のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５１および１０４のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５４および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５３および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４９および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４８および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５５および１０５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５６および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５および１０６のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５および１０７のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５および１０８のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５および１０３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５７および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５８および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５９および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６０および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６１および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４５および１０９のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６２および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６３および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６４および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６５および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６６および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６７および１０２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６８および１１０のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６８および１１１のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６８および１１２のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６８および１１３のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６８および１１４のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６８および１１５のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１６９および１１０のアミノ酸配列からなる。
任意の抗体フォーマットを、本明細書に開示される抗体に使用することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域（ｓｃＦｖ－Ｆｃ）と融合したｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ断片である。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆ（ａｂ’）２断片である。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）および第２の抗原に特異的に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、細胞傷害性剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識にコンジュゲートされている。ある特定の実施形態では、細胞傷害性剤は、それと接触する細胞の死または破壊を誘発することができる。ある特定の実施形態では、細胞増殖抑制剤は、増殖を防止もしくは実質的に低減し、かつ／またはそれと接触する細胞の活性もしくは機能を阻害することができる。ある特定の実施形態では、細胞傷害性剤または細胞増殖抑制剤は、化学療法剤である。ある特定の実施形態では、放射性核種は、ｉｓｏｔｏｐｅｓ３Ｈ，１４Ｃ，３２Ｐ，３５Ｓ，３６Ｃｌ，５１Ｃｒ，５７Ｃｏ，５８Ｃｏ，５９Ｆｅ，６７Ｃｕ，９０Ｙ，９９Ｔｃ，１１１Ｉｎ，１１７Ｌｕ，１２１Ｉ，１２４Ｉ，１２５Ｉ，１３１Ｉ，１９８Ａｕ，２１１Ａｔ，２１３Ｂｉ，２２５Ａｃおよび１８６Ｒｅからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光部分またはクリックケミストリーハンドルを含む。
任意のイムノグロブリン（Ｉｇ）定常領域を、本明細書に開示される抗体に使用することができる。ある特定の実施形態では、Ｉｇ領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）である。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１２１または１７５のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号１２２または１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７））、および／またはヒンジ領域に導入され、血清半減期、補体固定化、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞細胞傷害性などの、抗体の１つ以上の機能特性を変更する。
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６７７，４２５号に記載されるように変更されるように（例えば、増加または減少させる）、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に導入される。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域におけるシステイン残基の数を変更して、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリが促進されるか、または抗体の安定性を変更し得る（例えば、増加または減少させる）。
特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上アミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）は、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、Ｆｃまたはヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に導入され、インビボでの抗体の半減期を変更する（例えば、減少または増加させる）。例えば、インビボでの抗体の半減期を変更する（例えば、減少または増加させる）変異の例について、国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、第ＷＯ９８／２３２８９号、および第ＷＯ９７／３４６３１号、ならびに米国特許第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第６，２７７，３７５号、および第６，１６５，７４５号を参照されたく、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上アミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）は、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、Ｆｃまたはヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に導入され、インビボでの抗体の半減期を減少させる。他の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）は、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、Ｆｃまたはヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に導入され、インビボでの抗体の半減期を増加させる。ある特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／または第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）における１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換）を有してもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＩｇＧ１の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、２５２位におけるメチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換、２５４位におけるセリン（Ｓ）からスレオニン（Ｔ）への置換、および２５６位におけるスレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換を含む。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，６５８，９２１号を参照されたい。「ＹＴＥ変異体」と呼ばれる、この種類の変異体ＩｇＧは、同じ抗体の野生型バージョンと比較して、４倍増大した半減期を提示することが示された（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ＷＦ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：２３５１４－２４を参照されたい）。ある特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従い番号付けられた、２５１～２５７、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、および４２８～４３６位のアミノ酸残基の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７））、および／またはヒンジ領域に導入され、エフェクター細胞の表面のＦｃ受容体（例えば、活性化されたＦｃ受容体）の抗体の親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を減少または増加させる抗体のＦｃ領域における変異、およびＦｃ受容体またはその断片にかかる変異を導入するための技術は、当業者に既知である。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を変更するために作製され得る抗体のＦｃ受容体における変異の例は、例えば、Ｓｍｉｔｈ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ １０９：６１８１－６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、ならびに国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、第ＷＯ９８／２３２８９号、および第ＷＯ９７／３４６３１号に記載されており、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、抗体は、野生型重鎖定常領域のバリアントである重鎖定常領域を含み、バリアント重鎖定常領域は、野生型重鎖定常領域がＦｃγＲＩＩＢに結合するよりも高い親和性でＦｃγＲＩＩＢに結合する。ある特定の実施形態では、バリアント重鎖定常領域は、バリアントヒト重鎖定常領域、例えば、バリアントヒトＩｇＧ１、バリアントヒトＩｇＧ２、またはバリアントヒトＩｇＧ４重鎖定常領域である。ある特定の実施形態では、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けシステムによる、以下のアミノ酸変異：Ｇ２３６Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、およびＬ３２８Ｅのうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けシステムによる、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ；Ｐ２３８ＤおよびＬ３２８Ｅ；Ｐ２３８ＤとＥ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒからなる群から選択される１つ以上の置換；Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒ；Ｇ２３６ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｓ２３９ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｖ２６２Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、およびＬ３２８Ｆ；ならびにＶ２６４Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、およびＬ３２８Ｆからなる群から選択されるアミノ酸変異のセットを含む。ある特定の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＢは、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、樹状細胞、内皮細胞、および活性化Ｔ細胞からなる群から選択される細胞上に発現される。
さらなる実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸置換は、ＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域に導入され、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更する。例えば、抗体が、エフェクターリガンドに対する変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２４３、２６７、２９２、２９７、３００、３１８、３２０、３２２、３２８、３３０、３３２、および３９６から選択される１つ以上のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。親和性が変更されているエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されており、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点変異もしくは他の手段による）は、循環抗体のＦｃ受容体結合を低減し、それにより、腫瘍局在化が増加されてもよい。定常ドメインを欠失させるか、または不活性化し、それにより、腫瘍局在化を増加させる変異の説明について、例えば、米国特許第５，５８５，０９７号および第８，５９１，８８６号を参照されたい。ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域に導入され、Ｆｃ領域上の可能性のあるグリコシル化部位を取り除くことができ、それは、Ｆｃ受容体結合を低減してもよい（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：６５９１－６０４を参照されたい）。様々な実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、本明細書に記載される抗体の定常領域における以下の変異：Ｎ２９７Ａ置換、Ｎ２９７Ｑ置換、Ｌ２３４Ａ置換、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ａ置換、Ｌ２３５Ｆ置換、Ｌ２３５Ｖ置換と、Ｌ２３７Ａ置換、Ｓ２３９Ｄ置換、Ｅ２３３Ｐ置換、Ｌ２３４Ｖ置換、Ｌ２３５Ａ置換、Ｃ２３６の欠失、Ｐ２３８Ａ置換、Ｓ２３９Ｄ置換、Ｆ２４３Ｌ置換、Ｄ２６５Ａ置換、Ｓ２６７Ｅ置換、Ｌ３２８Ｆ置換、Ｒ２９２Ｐ置換、Ｙ３００Ｌ置換、Ａ３２７Ｑ置換、Ｐ３２９Ａ置換、Ａ３３２Ｌ置換、Ｉ３３２Ｅ置換、またはＰ３９６Ｌ置換のうちの１つ以上が作製されてもよい。
ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異は、本明細書に記載される抗体の定常領域において作製されてもよい。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３７Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異は、本明細書に記載される抗体の定常領域において作製されてもよい。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異は、本明細書に記載される抗体の定常領域において作製されてもよい。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、任意選択でＡ３３０Ｌ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異は、本明細書に記載される抗体の定常領域において作製されてもよい。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｐ３９６Ｌ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異は、本明細書に記載される抗体の定常領域において作製されてもよい。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異は、本明細書に記載される抗体の定常領域において作製されてもよい。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ａアミノ酸置換を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびその組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびその組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｆ、Ｎ２９７Ａ、およびその組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、ヒトＩｇＧ１重鎖における位置Ｌ２３４、Ｌ２３５、およびにＤ２６５に対応する位置の本明細書に記載される抗体の定常領域におけるアミノ酸残基は、それぞれ、Ｌ、Ｌ、およびＤではない。このアプローチは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ１４／１０８４８３号に詳細に記載されている。特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、ヒトＩｇＧ１重鎖における位置Ｌ２３４、Ｌ２３５、およびＤ２６５に対応するアミノ酸は、それぞれ、Ｆ、Ｅ、およびＡ、またはＡ、Ａ、およびＡである。
ある特定の実施形態では、抗体が、変更されたＣ１ｑ結合および／または低減もしくは無効にされた補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、本明細書に記載される抗体の定常領域におけるアミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。このアプローチは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．）にさらに詳細に記載されている。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＨ２メインのＮ末端領域におけるアミノ酸位置２３１～２３８内の１つ以上のアミノ酸残基は変更され、それにより、抗体の補体を固定する能力が変更される。このアプローチは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号にさらに記載されている。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、修飾され、抗体の抗体依存性細胞細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を増加させ、および／またはＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、以下の位置：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、もしくは４３９の１つ以上のアミノ酸を変異させること（例えば、アミノ酸置換を導入すること）により、Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を増加させる。このアプローチは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ００／４２０７２号にさらに記載されている。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ１の修飾された定常ドメインを含み、修飾は、抗体依存性細胞細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増加させる。ある特定の実施形態では、０．１、１、または１０μｇ／／ｍＬの抗体は、本明細書に記載され、かつ／または当業者に既知の方法によって評価されるように、１、２、または３時間以内にＣＤ９６発現細胞の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％の細胞死を誘発することができる。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾された定常ドメインは、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ置換を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾された定常ドメインは、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ置換を含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾された定常ドメインは、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、およびＰ３９６Ｌ置換を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、エフェクターＴ細胞およびＴｒｅｇにおいて細胞死を誘発することができ、細胞死を経るＴｒｅｇの割合は、細胞死を経るエフェクターＴ細胞の割合よりも、少なくとも１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、または５倍高い。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ４抗体の定常領域を含み、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられた、重鎖のアミノ酸残基２２８のセリンは、プロリンに置換される。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される定常領域変異または修飾のうちのいずれかは、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載される抗体の重鎖定常領域の一方または両方に導入され得る。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつアンタゴニストとして機能する（例えば、ＣＤ９６活性を減少または増加させる）単離された抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性に対して、本明細書に記載される方法および／または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは９９％減少または阻害する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性に対して、本明細書に記載される方法および／または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、もしくはそれ以上減少または阻害する単離された抗体を提供する。ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性の非限定的な例には、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）シグナル伝達、そのリガンド（例えば、ＣＤ１５５）またはその断片および／もしくは融合タンパク質へのＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）結合、Ｔ細胞（例えば、ヒトＣＤ９６を発現するＴ細胞）の活性化、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、Ｔｒｅｇの減少または阻害、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）産生の増加、ＣＤ１５５（例えば、ヒトＣＤ１５５）の活性の増加が挙げられ得る。特定の実施形態では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性の増加は、実施例に記載されるように評価される。
特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトまたはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、このリガンドへのＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）結合に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつそのリガンド（例えば、ＣＤ１５５）またはその断片および／もしくは融合タンパク質へのＣＤ９６（例えば、ヒトまたはカニクイザルＣＤ９６）結合を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは９９％減少または阻害する単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトまたはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、このリガンドへのＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）結合に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつそのリガンド（例えば、ＣＤ１５５（例えば、ヒトまたはカニクイザルＣＤ１５５）またはその断片および／もしくは融合タンパク質）へのＣＤ９６（例えば、ヒトまたはカニクイザルＣＤ９６）結合を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍減少または阻害する単離された抗体を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＴ細胞（例えば、ヒトＣＤ９６を発現するＴ細胞）を活性化する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、メモリーＴ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、初代ＣＤ３発現Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、活性化されたＴ細胞の核内因子（ＮＦＡＴ）活性に対して、活性本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＮＦＡＴの活性を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは９９％増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むＮＦＡＴ活性に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＮＦＡＴの活性を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍、またはそれ以上増加させる。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ９６のリガンド（例えば、ＣＤ１５５）またはその断片および／もしくは融合タンパク質、ならびに／またはＣＤ９６のリガンドを発現する細胞（例えば、単球または樹状細胞）の存在下で、ＮＦＡＴ活性を増加させる。
特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むサイトカイン産生に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むサイトカイン産生に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつサイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２）を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍、またはそれ以上増加させる単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ９６のリガンド（例えば、ＣＤ１５５）またはその断片および／もしくは融合タンパク質、ならびに／またはＣＤ９６のリガンドを発現する細胞（例えば、単球または樹状細胞）の存在下で、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２）を増加させる。ある特定の実施形態では、抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むＩＬ－２産生に対して、ＩＬ－２の産生を増加させる。
ある特定の実施形態では、本開示は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むＩＦＮγおよび／またはＩＬ－２産生に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつそれが単独または抗ＰＤ－１抗体（例えば、ペムブロリズマブまたはニボルマブ）と組み合わせてのいずれかで、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激に応答してヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）においてＩＦＮγおよび／またはＩＬ－２産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる単離された抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体の存在下で、ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、ＳＥＡのみに刺激されたＰＢＭＣからのＩＦＮγおよび／またはＩＬ－２産生に対して、ＩＦＮγおよび／またはＩＬ－２産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させた。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつメモリーＴ細胞のメモリーリコールを増加または促進する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞である。ある特定の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４エフェクターメモリーＴ細胞である。ある特定の実施形態では、抗体は、任意の抗体の不在下、または無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）の存在下で、メモリーＴ細胞がそれらの同種抗原（複数可）と接触したときに増殖するメモリーＴ細胞の数に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、メモリーＴ細胞がそれらの同種抗原（複数可）と接触したときに増殖するメモリーＴ細胞の数を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。ある特定の実施形態では、抗体は、任意の抗体の不在下、または無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）の存在下で、メモリーＴ細胞がその同種抗原と接触したときのメモリーＴ細胞からのサイトカインの産生に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、メモリーＴ細胞がその同種抗原と接触したときのメモリーＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）の産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合し、かつＮＫ細胞を活性化する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、単離される。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、ＰＢＭＣの混合培養物中にある。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、ＮＫ細胞におけるＣＤ１０７ａの発現レベルに対して、活性本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＮＫ細胞におけるＣＤ１０７ａの発現レベルを、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは９９％増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、ＮＫ細胞におけるＣＤ１０７の発現レベルに対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＮＫ細胞におけるＣＤ１０７の発現レベルを少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍、またはそれ以上増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含む、ＮＫ細胞からのサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦα）に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＮＫ細胞からのサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦα）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、任意の抗体を含まないまたは無関連の抗体（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合しない抗体）を含むＮＫ細胞からのサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦα）に対して、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法によって評価された場合に、ＮＫ細胞からのサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦα）を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。
医薬組成物
生理的に許容される担体、賦形剤、または安定剤において所望の程度の純度を有する本明細書に記載される抗体を含む組成物が、本明細書に提供される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照されたい）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、リン酸などの緩衝剤、クエン酸塩、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体に、本明細書に記載される抗ＣＤ９６抗体（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）、および任意選択で１つ以上の追加の予防薬または治療剤を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体に、有効量の本明細書に記載される抗体、および任意選択で１つ以上の追加の予防薬または治療剤を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、医薬組成物に含まれる唯一の活性成分である。本明細書に記載される医薬組成物は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）活性を増加または促進し、かつがんまたは感染症などの状態を治療するのに有用であり得る。一実施形態では、本発明は、薬剤として使用するための本発明の抗ＣＤ９６抗体を含む本発明の医薬組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、がんまたは感染症の治療のための方法における使用のための本発明の医薬組成物に関する。
非経口調製物に使用される薬学的に許容される担体には、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗微生物剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁剤および分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤またはキレート剤、ならびに他の薬学的に許容される物質が含まれる。水性ビヒクルの例には、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロースおよび乳酸リンゲル注射液が挙げられる。非水性非経口ビヒクルには、植物起源の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、およびピーナッツ油が含まれる。静菌濃度または静真菌濃度の抗微生物剤は、フェノールまたはクレゾール、水銀、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムを含む複数回用量容器にパッケージングされた非経口調製物に添加され得る。等張剤には、塩化ナトリウムおよびデキストロースが含まれる。緩衝剤には、リン酸塩およびクエン酸塩が含まれる。抗酸化剤には、二硫酸ナトリウムが含まれる。局所麻酔剤には、プロカイン塩酸塩が含まれる。懸濁剤および分散剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが含まれる。乳化剤には、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が含まれる。金属イオン封鎖剤またはキレート剤には、ＥＤＴＡが含まれる。医薬担体にはまた、水混和性ビヒクル用のエチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコール、ならびにｐＨ調整用の水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸が含まれる。
医薬組成物は、対象への任意の投与経路に対して製剤化されてもよい。投与経路の具体的な例には、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内、および非経口が挙げられる。皮下注射、筋肉内注射、または静脈内注射のいずれかによって特徴付けられる非経口投与も本明細書で企図される。注射剤は、液体溶液または懸濁剤として、注射前の液体中の溶液または懸濁剤に好適な固体形態として、またはエマルションとしてのいずれかで従来形態で調製され得る。注射剤、溶液、およびエマルションはまた、１つ以上の賦形剤を含む。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。さらに、所望される場合、投与される医薬組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解性エンハンサー、および例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、およびシクロデキストリンなどの他のかかる薬剤などの、少量の非毒性補助物質を含み得る。
抗体の非経口投与のための調製物には、注射の準備ができた滅菌溶液、皮下注射用錠剤を含む、使用直前に溶媒と混合される準備ができた凍結乾燥粉末などの滅菌乾燥可溶性生成物、注射の準備ができた滅菌懸濁剤、使用直前にビヒクルと混合される準備ができた滅菌乾燥不溶性生成物、および滅菌エマルションが含まれる。溶液は、水性または非水性のいずれかであってもよい。
静脈内投与される場合、好適な担体には、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）と、グルコース、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールなどの増粘剤および可溶化剤、ならびにそれらの混合物を含む溶液とが含まれる。
抗体を含む局所混合物は、局所および全身投与について記載されるように調製される。得られた混合物は、溶液、懸濁剤、エマルションなどであってもよく、クリーム、ゲル、軟膏、エマルション、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ、ペースト、発泡体、エアロゾル、灌注剤、スプレー、坐剤、包帯、皮膚パッチ、または局所投与に好適な任意の他の製剤として製剤化され得る。
本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、吸入などによって、局所適用のためのエアロゾルとして製剤化され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイド送達のためのエアロゾルを記載し、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，０４４，１２６号、第４，４１４，２０９号、および第４，３６４，９２３号を参照されたい）。気道への投与のためのこれらの製剤は、ネブライザー用のエアロゾルもしくは溶液の形態で、または吹送用の微細粉末として、単独でまたはラクトースなどの不活性担体と組み合わせてもよい。このような場合、製剤の粒子は、一実施形態では、５０ミクロン未満、一実施形態では、１０ミクロン未満の直径を有する。
本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、ゲル、クリーム、およびローションの形態で、皮膚および眼などの粘膜への局所適用、ならびに眼への適用、または槽内もしくは脊髄内適用のためなど、部分的または局所的適用のために製剤化され得る。局所投与は、経皮送達、ならびに眼もしくは粘膜への投与、または吸入療法のためにも企図される。抗体の鼻腔溶液を単独でまたは他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて投与することもできる。
イオン電気泳動および電気泳動装置を含む経皮パッチは、当業者に周知であり、抗体を投与するために使用することができる。例えば、かかるパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、第６，２６１，５９５号、第６，２５６，５３３号、第６，１６７，３０１号、第６，０２４，９７５号、第６，０１０，７１５号、第５，９８５，３１７号、第５，９８３，１３４号、第５，９４８，４３３号、および第５，８６０，９５７号に開示されており、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体を含む医薬組成物は、溶液、エマルション、および他の混合物としての投与のために再構成され得る凍結乾燥粉末である。また、それは固形分またはゲルとして再構成および製剤化されてもよい。凍結乾燥粉末は、本明細書に記載される抗体、またはその薬学的に許容される誘導体を好適な溶媒に溶解することによって調製される。ある特定の実施形態では、凍結乾燥粉末は、滅菌である。溶媒は、粉末または粉末から調製された再構成溶液の安定性または他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含んでもよい。使用され得る賦形剤には、これらに限定されないが、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、トウモロコシシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が含まれる。溶媒はまた、一実施形態では、ほぼ中性ｐＨで、クエン酸塩、ナトリウム、もしくはリン酸カリウムなどの緩衝剤、または当業者に既知の他のかかる緩衝剤を含んでもよい。溶液のその後の滅菌濾過、それに続く当業者に既知の標準条件下での凍結乾燥は、所望の製剤を提供する。一実施形態では、得られた溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配される。各バイアルは、化合物の単回用量または複数回用量を含む。凍結乾燥粉末は、約４℃～室温などの適切な条件下で保存され得る。この凍結乾燥粉末の注射用水との再構成は、非経口投与における使用のための製剤を提供する。再構成のために、凍結乾燥粉末が滅菌水または他の好適な担体に添加される。正確な量は、選択された化合物に依存する。かかる量は、経験的に決定され得る。
本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体、および本明細書に提供される他の組成物はまた、治療される対象の特定の組織、受容体、または身体の他の領域を標的とするように製剤化され得る。多くのかかる標的化方法は、当業者に周知である。本組成物で使用するために、すべてのかかる標的化方法が本明細書で企図される。標的化方法の非限定的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、第６，２７４，５５２号、第６，２７１，３５９号、第６，２５３，８７２号、第６，１３９，８６５号、第６，１３１，５７０号、第６，１２０，７５１号、第６，０７１，４９５号、第６，０６０，０８２号、第６，０４８，７３６号、第６，０３９，９７５号、第６，００４，５３４号、第５，９８５，３０７号、第５，９７２，３６６号、第５，９００，２５２号、第５，８４０，６７４号、第５，７５９，５４２号、および第５，７０９，８７４号を参照されたく、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、腫瘍を標的とする。
インビボ投与のため使用されるべき組成物は、滅菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。
使用方法
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体を使用して対象を治療する方法を提供する。ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）機能の減少から利益を得るであろう対象の任意の疾患または障害は、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体を使用して治療され得る。ある特定の実施形態では、疾患または障害は、チェックポイント標的化剤（例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、またはアンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体）に対して耐性である。ある特定の実施形態では、疾患または障害は、チェックポイント標的化剤（例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、またはアンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体）による治療後に再発する。
本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）抗体は、腫瘍に対する免疫系の耐性を阻害するために特に有用であり、したがって、がんを有する対象の免疫療法として使用することができる。例えば、ある特定の実施形態では、本開示は、対象における抗原に応答して、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、ＮＫＴ細胞、エフェクターＴ細胞、またはメモリーＴ細胞）活性化を増加させる方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその医薬組成物を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、本開示は、対象におけるがんを治療する方法を提供し、方法は、本明細書に開示されるように、有効量の抗体または医薬組成物を対象に投与することを含む。
本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体または医薬組成物により治療され得るがんには、限定されるものではないが、固体腫瘍、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫）、および転移性病変が含まれる。一実施形態では、がんは、固体腫瘍である。固体腫瘍の例には、悪性腫瘍、例えば、肉腫およびがん腫、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ、消化管（例えば、結腸）、肛門、生殖器および尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経またはグリア細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、黒色腫）、および膵臓に影響を及ぼすものなど、様々な器官系の腺がん、ならびに結腸がん、腎臓がん、腎細胞がん、肝臓がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がん）、小腸がん、および食道がんなどの悪性腫瘍を含む腺がんが挙げられる。がんは、早期、中期、後期の段階、または転移性のがんであり得る。ある特定の実施形態では、がんは、チェックポイント標的化剤（例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、またはアンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体）に対して耐性である。ある特定の実施形態では、がんは、チェックポイント標的化剤（例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、またはアンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体）による治療後に再発する。
一実施形態では、がんは、肺がん（例えば、肺腺がんまたは非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平上皮および／もしくは非扁平上皮の組織型を有するＮＳＣＬＣ、またはＮＳＣＬＣ腺がん））、黒色腫（例えば、進行性黒色腫）、腎臓がん（例えば、腎細胞がん）、肝臓がん（例えば、肝細胞がん）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺がん、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つ、またはすべてを発現しない乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん）、卵巣がん、大腸がん、膵臓がん、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮細胞がん（ＨＮＳＣＣ）、肛門がん、胃食道がん（例えば、食道扁平上皮細胞がん）、中皮腫、鼻咽腔がん、甲状腺がん、子宮頸がん、上皮がん、腹膜がん、またはリンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）から選択される。特定の実施形態では、がんは、子宮頸がんである。
一実施形態では、がんは、血液がん、例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫である。一実施形態では、がんは、白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、または有毛細胞白血病である。一実施形態では、がんは、リンパ腫、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、再発性非ホジキンリンパ腫、難治性非ホジキンリンパ腫、再発性濾胞性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、または節外性辺縁帯リンパ腫である。一実施形態では、がんは、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫である。
別の実施形態では、がんは、がん腫（例えば、進行性がんまたは転移性がん）、黒色腫、または肺がん、例えば、非小細胞肺がんから選択される。
一実施形態では、がんは、肺がん、例えば、肺腺がん、非小細胞肺がん、または小細胞肺がんである。
一実施形態では、がんは、黒色腫、例えば、進行性黒色腫である。一実施形態では、がんは、他の療法に応答しない進行性または切除不能な黒色腫である。他の実施形態では、がんは、ＢＲＡＦ変異（例えば、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異）を有する黒色腫である。さらに他の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体または医薬組成物は、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）ありまたはなしの抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ）による治療後に投与される。
別の実施形態では、がんは、ウイルス感染、例えば、慢性ウイルス性肝炎を伴う、または伴わない肝細胞がん、例えば、進行性肝細胞がんである。
別の実施形態では、がんは、前立腺がん、例えば、進行性前立腺がんである。
一実施形態では、がんは、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫である。
さらに別の実施形態では、がんは、腎臓がん、例えば、腎細胞がん（ＲＣＣ）（例えば、転移性ＲＣＣ、明細胞腎細胞がん（ＣＣＲＣＣ）、または乳頭状腎細胞がん）である。
さらに別の実施形態では、がんは、肺がん、黒色腫、腎臓がん、乳がん、大腸がん、白血病、またはがんの転移性病変から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、対象における感染症を予防または治療する方法を提供し、方法は、本明細書に開示されるように、有効量の抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその医薬組成物を対象に投与することを含む。一実施形態では、感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、原虫感染、または寄生虫感染）を予防および／または治療するための方法が本明細書に提供される。方法に従って予防および／または治療される感染は、本明細書で特定される感染性因子によって引き起こされ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその組成物は、対象に投与される唯一の活性剤である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその組成物は、感染症の治療のための抗感染介入（例えば、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、または抗ヘルミン薬）と組み合わせて使用される。したがって、一実施形態では、本発明は、感染症を予防および／または治療する方法での使用のための、本発明の抗体および／または医薬組成物に関し、任意選択で、抗体または医薬組成物は、対象に投与される唯一の活性薬剤であるか、または抗体もしくは医薬組成物は、抗感染介入と組み合わせて使用される。
本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体または医薬組成物によって治療および／または予防され得る感染症は、これらに限定されないが、細菌、寄生虫、真菌、原虫、およびウイルスを含む感染因子によって引き起こされる。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体または医薬組成物によって治療および／または予防される感染症は、ウイルスによって引き起こされる。本明細書に記載される方法に従って予防および／または治療され得るウイルス性疾患またはウイルス感染症には、これらに限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ（例えば、インフルエンザＡまたはインフルエンザＢ）、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ－Ｉ）、単純ヘルペスＩＩ型（ＨＳＶ－ＩＩ）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エチノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、天然痘、エプスタインバーウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ－Ｉ）、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ－ＩＩ）、およびウイルス性髄膜炎、脳炎、デング、または天然痘などのウイルス性疾患の因子が含まれる。
予防および／または治療され得る細菌感染症には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって引き起こされる感染症が含まれる。本明細書に記載される方法に従って予防および／または治療され得る細菌（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって引き起こされる細菌性疾患には、これらに限定されないが、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｒａｃｉｓ（炭疽）、破傷風、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、百日咳、コレラ、ペスト、ジフテリア、クラミジア、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、およびレジオネラ症が含まれる。
本明細書に記載される方法に従って予防および／または治療され得る原虫によって引き起こされる原虫性疾患または原虫感染症には、これらに限定されないが、ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ、ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ、またはマラリアが含まれる。本明細書に記載される方法に従って予防および／または治療され得る寄生虫によって引き起こされる寄生虫性疾患または寄生虫感染症には、これらに限定されないが、ｃｈｌａｍｙｄｉａおよびｒｉｃｋｅｔｔｓｉａが含まれる。
本明細書に記載される方法に従って予防および／または治療され得る真菌性疾患または真菌感染症には、これらに限定されないが、Ｃａｎｄｉｄａ感染症、接合菌症、Ｃａｎｄｉｄａ乳腺炎、潜在性トリコスポロン血症を伴う進行性播種性トリコスポロン症、播種性カンジダ症、肺パラコクシジオイデス症、肺アスペルギルス症、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎、ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃａｌ髄膜炎、ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄａｌ髄膜脳炎および脳血管炎、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ感染症、Ｆｕｓａｒｉｕｍ角膜炎、副鼻腔真菌症、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ心内膜炎、脛骨軟骨異形成症、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ膣炎、口腔カンジダ症、Ｘ 連鎖慢性肉芽腫症、足白癬、皮膚カンジダ症、真菌性胎盤炎、播種性トリコスポロン症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、真菌性角膜炎、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ感染症、真菌性腹膜炎、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｇｅｎｉｃｕｌａｔａ感染症、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ眼内炎、ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｏｓｉｓ、ならびに皮膚糸状菌症によって引き起こされるものが含まれる。
ある特定の実施形態では、方法は、追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、放射線療法剤、またはチェックポイント標的化剤である。ある特定の実施形態では、化学療法剤は、低メチル化剤（例えば、アザシチジン）である。ある特定の実施形態では、化学療法剤は、ＤＮＡ損傷誘発剤（例えば、ゲムシタビン）である。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的化剤は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニスト抗ＣＤ９６抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、チェックポイント標的化剤は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、およびアンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体からなる群から選択され、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体または医薬組成物は、チェックポイント標的化剤と相乗効果を示す。
一実施形態では、本発明は、本発明の方法での使用のための本発明の抗体および／または医薬組成物に関し、方法は、追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。一実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体および／または医薬組成物、ならびに（ｂ）薬剤として使用するための追加の治療剤に関する。一実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体および／または医薬組成物、ならびに（ｂ）がんの治療のための方法での使用のための追加の治療剤に関する。さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体および／または医薬組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤を含む、医薬組成物、キット、またはキットオブパーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）に関する。一実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、放射線療法剤、またはチェックポイント標的化剤である。
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって開発された、ＢＭＳ－９３６５５８またはＭＤＸ１１０６としても知られるニボルマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏによって開発された、ラムブロリズマブまたはＭＫ－３４７５としても知られるペムブロリズマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＣｕｒｅＴｅｃｈによって開発された、ＣＴ－０１１としても知られるピジリズマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発された、ＡＭＰ－５１４としても知られるＭＥＤＩ０６８０である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＰＤＲ００１である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＲＥＧＮ２８１０である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｐｆｉｚｅｒによって開発されたＰＦ－０６８０１５９１である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢｅｉＧｅｎｅによって開発されたＢＧＢ－Ａ３１７である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏおよびＴｅｓａｒｏによって開発されたＴＳＲ－０４２である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｈｅｎｇｒｕｉによって開発されたＳＨＲ－１２１０である。
本明細書に開示される治療方法において使用され得る抗ＰＤ－１抗体のさらなる非限定的な例は、以下の特許および特許出願：米国特許第６，８０８，７１０号、米国特許第７，３３２，５８２号、米国特許第７，４８８，８０２号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，１１４，８４５号、米国特許第８，１６８，７５７号、米国特許第８，３５４，５０９号、米国特許第８，６８６，１１９号、米国特許第８，７３５，５５３号、米国特許第８，７４７，８４７号、米国特許第８，７７９，１０５号、米国特許第８，９２７，６９７号、米国特許第８，９９３，７３１号、米国特許第９，１０２，７２７号、米国特許第９，２０５，１４８号、米国公開第ＵＳ２０１３／０２０２６２３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１３／０２９１１３６Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００４４７３８Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０３５６３６３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１６／００７５７８３Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３３０９１Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０３６３９４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１７９６６４Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０９８０４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０６１０７Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０５８５７３Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／２００１１９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０１５６８５Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０２０８５６Ａ１号に開示されており、それらのすべては、それらの全体が参照によりすべての目的に対して本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されたアテゾリズマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ、およびＭｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたデュルバルマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｍｅｒｃｋ ＳｅｒｏｎｏおよびＰｆｉｚｅｒによって開発された、ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られるアベルマブである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたＭＤＸ－１１０５である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫによって開発されたＡＭＰ－２２４である。
本明細書に開示される治療方法において使用され得る抗ＰＤ－Ｌ１抗体の非限定的な例は、以下の特許および特許出願：米国特許第７，９４３，７４３号、米国特許第８，１６８，１７９号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許第８，５５２，１５４号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許第８，９８１，０６３号、米国特許第９，１７５，０８２号、米国公開第ＵＳ２０１０／０２０３０５６Ａ１号、米国公開第ＵＳ２００３／０２３２３２３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１３／０３２３２４９Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００４４７３８Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２０３５８０Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２２５４８３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０３４６２０８Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０３５５１８４Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ ２０１４／１０００７９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０２２７５８Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０５５８９７Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０６１６６８Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１０９１２４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１９５１６３Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０００６１９Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０３０３５０Ａ１号に開示されており、それらのすべては、それらの全体が参照によりすべての目的に対して本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書に開示される方法において使用される。ある特定の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたイピリムマブである。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、ＩＤＯ（インドールアミン－（２，３）－ジオキシゲナーゼ）および／またはＴＤＯ（トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ）などの免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物と組み合わせて対象に投与される。したがって、一実施形態では、追加の治療剤は、インドールアミン－（２，３）－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤などの免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物である。ある特定の実施形態では、かかる化合物は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐ；例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１０／００５９５８を参照されたい）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態では、化合物は、エパカドスタットである。別の実施形態では、化合物は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、化合物は、インドキシモドである。別の実施形態では、化合物は、ＮＬＧ９１９である。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６）抗体は、がんを治療するためのＩＤＯ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。がんを治療するのに使用するための本明細書に記載されるＩＤＯ阻害剤は、錠剤、ピル、またはカプセルなどの医薬組成物の固形剤形中に存在し、医薬組成物は、ＩＤＯ阻害剤および薬学的に許容される賦形剤を含む。したがって、本明細書に記載される抗体および本明細書に記載されるＩＤＯ阻害剤は、別個の剤形として、別々に、逐次的に、または同時に投与され得る。一実施形態では、抗体は、非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。特定の実施形態では、阻害剤は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。エパカドスタットは、参照によりその全体がすべての目的に対して本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１０／００５９５８号に記載されている。一実施形態では、阻害剤は、エパカドスタットである。別の実施形態では、阻害剤は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、阻害剤は、インドキシモドである。別の実施形態では、阻害剤は、ＮＬＧ９１９である。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、ワクチンと組み合わせて対象に投与される。ワクチンは、例えば、ペプチドワクチン、ＤＮＡワクチン、またはＲＮＡワクチンであり得る。ある特定の実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質系病原体ワクチンである。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンと組み合わせて対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、すべての種にわたって一様に見出される高度に保存されたタンパク質のファミリーである。それらの発現は、熱ショック、または毒素への曝露、酸化ストレスもしくはグルコース欠乏を含む他の形態のストレスの結果として、はるかに高いレベルまで強力に誘導され得る。５つのファミリーが、分子量に従って、ＨＳＰ－１１０、－９０、－７０、－６０、および－２８に分類されている。ＨＳＰは、Ｔ細胞活性化を導く、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）のような抗原提示細胞（ＡＰＣ）における交差提示経路を通じて免疫原性ペプチドを送達する。ＨＳＰは、腫瘍特異的免疫を誘導することができる複合体を形成する、腫瘍関連抗原性ペプチドのシャペロン担体として機能する。瀕死の腫瘍細胞からの放出の際、ＨＳＰ－抗原複合体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）により持ち上げられ、ここで、抗原は、抗腫瘍ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を導く、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子に結合するペプチドに処理される。腫瘍調製物に由来するＨＳＰ複合体により引き出された免疫は、それぞれの対象のがんにより発現される固有の抗原性ペプチドレパートリーに対して特異的に指向される。したがって、一実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体および／または医薬組成物、ならびに（ｂ）薬剤としての使用のため、例えば、がんの治療のための方法での使用のためのワクチンに関する。一実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗体および／または医薬組成物、ならびに（ｂ）ワクチンを含む、医薬組成物、キット、またはキットオブパーツに関する。一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンである。一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系病原体ワクチンである。ある特定の実施形態では、ワクチンは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／１８３４８６に記載される通りである。
熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原性ペプチドと非共有結合で複合体化された熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰＰＣは、自然および適応免疫応答の両方を誘発する。特定の実施形態では、抗原性ペプチド（複数可）は、治療れているがんに対する抗原性を提示する。ＨＳＰＰＣは、膜受容体（主に、ＣＤ９１）を介してＡＰＣにより、またはＴｏｌｌ様受容体への結合により、効率的にサイズ分類される。ＨＳＰＰＣ内在化は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、ならびにＴｈ１およびＴｈ－２介在性免疫応答の活性化を導く、ケモカインおよびサイトカイン産生を伴うＡＰＣの機能的成熟をもたらす。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法において使用されるＨＳＰＰＣは、抗原性ペプチドと複合体化されたストレスタンパク質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、またはｈｓｐ９０ファミリー由来の１つ以上の熱ショックタンパク質を含む。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、またはその２つもしくはそれ以上の組み合わせを含む。
特定の実施形態では、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、組換え抗原性ペプチドと複合体化された組換え熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０またはｈｓｃ７０）またはそのペプチド結合ドメインを含む。組換え熱ショックタンパク質は、例えば、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｗｏｒｎｉｃｚａｋ ａｎｄ Ｍｉｒａｕｌｔ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：５１８１－５１９７（１９８７）ならびにＧｅｎＢａｎｋ受託番号 Ｐ１１１４２および／またはＹ００３７１に記載されるように、ヒトｈｓｃ７０配列を使用して、組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。ある特定の実施形態では、Ｈｓｐ７０配列は、Ｈｕｎｔ ａｎｄ Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２（１９），６４５５－６４５９（１９８５）ならびにＧｅｎＢａｎｋ受託番号 Ｐ０ＤＭＶ８および／またはＭ１１７１７に記載される通りであり、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。抗原性ペプチドはまた、当該技術分野で既知の組換えＤＮＡ法によって調製することができる。
ある特定の実施形態では、抗原性ペプチドは、修飾アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、翻訳後修飾を含む。ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、翻訳後修飾の模倣物を含む。ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミン上でリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、側鎖ヒドロキシルまたはアミン上でリン酸化されたＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓアミノ酸の模倣物である。
特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば、熱ショックタンパク質ペプチド複合体９６（ＨＳＰＰＣ－９６）と組み合わせて対象に投与され、がんを治療する。ＨＳＰＰＣ－９６は、抗原性ペプチドと複合体化された９６ｋＤａ熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ－９６は、対象の腫瘍から製造されたがん免疫療法であり、がんの抗原性「フィンガープリント」を含む。ある特定の実施形態では、このフィンガープリントは、特定の対象の特定のがん細胞においてのみ存在する固有の抗原を含み、ワクチンの注射は、特定のがんフィンガープリントで任意の細胞を認識し、攻撃するように、対象の免疫系を刺激することが意図される。したがって、一実施形態では、本発明は、薬剤としての使用のためおよび／またはがんの治療のための方法における使用のための熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）と組み合わせた、本発明の抗体および／または医薬組成物に関する。
ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ－９６は、対象の腫瘍組織から産生される。特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ－９６）は、治療されているがんまたはその転移のタイプの腫瘍から産生される。別の特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ－９６）は、治療されている対象にとって自己由来である。ある特定の実施形態では、腫瘍組織は、非壊死性腫瘍組織である。ある特定の実施形態では、非壊死性腫瘍組織の少なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０グラム）を使用して、ワクチン投与計画が生み出される。ある特定の実施形態では、外科的切除後、非壊死性腫瘍組織は、ワクチン調製における使用の前に凍結される。ある特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ－９６は、精製技術により、腫瘍組織から単離され、濾過され、注射可能なワクチン用に調製される。ある特定の実施形態では、対象は、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＣＣ－９６の６～１２回の用量を投与される。かかる実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ－９６用量は、最初の４回の用量を毎週、次に、２～８回の追加用量を隔週で投与されてもよい。
本明細書に記載される方法に従って使用され得るＨＳＰＰＣのさらなる例は、以下の特許および特許出願：米国特許第６，３９１，３０６号、第６，３８３，４９２号、第６，４０３，０９５号、第６，４１０，０２６号、第６，４３６，４０４号、第６，４４７，７８０号、第６，４４７，７８１号、および第６，６１０，６５９号に記載されており、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、アジュバントと組み合わせて対象に投与される。治療状況に応じて、様々なアジュバントを使用することができる。適切なアジュバントの非限定的な例には、これらに限定されないが、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、モンタニドＩＳＡ（不完全Ｓｅｐｐｉｃアジュバント）、Ｒｉｂｉアジュバント系（ＲＡＳ）と、Ｔｉｔｅｒ Ｍａｘ、ムラミルペプチド、Ｓｙｎｔｅｘアジュバント製剤（ＳＡＦ）、ミョウバン（水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウム）、アルミニウム塩アジュバント、Ｇｅｒｂｕ（登録商標）アジュバント、ニトロセルロース吸収抗原、封入または閉じ込められた抗原、３脱Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ－ＭＰＬ）、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ）リガンド、ＳＴＩＮＧアゴニスト、サポニンなどの免疫刺激複合体、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＳ－２１、ＱＳ－７、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸなどが挙げられる。他のアジュバントには、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ならびにポリ（Ａ）およびポリ（Ｕ）などの二本鎖ＲＮＡ分子が含まれる。上記のアジュバントの組み合わせも使用され得る。例えば、米国特許第６，６４５，４９５号、第７，０２９，６７８号、および第７，８５８，５８９号を参照されたく、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、本明細書で使用されるアジュバントは、ＱＳ－２１ ＳＴＩＭＵＬＯＮである。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、ＴＣＲを含む追加の治療剤と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、可溶性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、ＴＣＲを発現する細胞である。したがって、一実施形態では、本発明は、薬剤としての使用のためおよび／またはがんの治療のための方法における使用のためのＴＣＲを含む追加の薬剤と組み合わせた、本発明の抗体および／または医薬組成物に関する。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、ＴＣＲ模倣抗体と組み合わせて対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ模倣抗体は、ペプチド－ＭＨＣ複合体に特異的に結合する抗体である。ＴＣＲ模倣抗体の非限定的な例については、例えば、米国特許第９，０７４，０００号ならびに米国公開第ＵＳ２００９／０３０４６７９Ａ１号および第ＵＳ２０１４／０１３４１９１Ａ１を参照されたく、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００５／０６１５４７Ａ２に記載される）、および／または二重親和性再標的化抗体（ＤＡＲＴ）（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１２／１６２０６７Ａ２に記載される）と組み合わせて、対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＢｉＴＥおよび／またはＤＡＲＴは、腫瘍関連抗原（例えば、腫瘍において過剰発現されるポリペプチド、オンコウイルスに由来するポリペプチド、腫瘍に特異的な翻訳後修飾を含むポリペプチド、腫瘍において特異的に変異されたポリペプチド）、およびエフェクター細胞上の分子（例えば、ＣＤ３またはＣＤ１６）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＥＧＦＲ（例えば、ヒトＥＧＦＲ）であり、任意選択で、ＢｉＴＥおよび／またはＤＡＲＴは、セツキシマブのＶＨおよびＶＬ配列を含む。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、Ｈｅｒ２（例えば、ヒトＨｅｒ２）であり、任意選択で、ＢｉＴＥおよび／またはＤＡＲＴは、トラスツズマブのＶＨおよびＶＬ配列を含む。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＣＤ２０（例えば、ヒトＣＤ２０）である。
抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体および追加の治療剤（例えば、化学療法剤、放射線療法剤、チェックポイント標的化剤、ＩＤＯ阻害剤、ワクチン、アジュバント、可溶性ＴＣＲ、ＴＣＲを発現する細胞、キメラ抗原受容体を発現する細胞、および／またはＴＣＲ模倣抗体）は、別個の剤形として、別々に、逐次的に、または同時に投与され得る。一実施形態では、抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。
本明細書に記載される抗体または医薬組成物は、様々な経路によって対象に送達され得る。これらには、これらに限定されないが、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、動脈内、および皮下経路が含まれる。肺投与はまた、例えば、吸入器またはネブライザーの使用、およびスプレーとして使用するためのエアロゾル化剤との製剤化によって用いられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体または医薬組成物は、皮下または静脈内に送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体または医薬組成物は、動脈内に送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体または医薬組成物は、腫瘍内に送達される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体または医薬組成物は、腫瘍排出リンパ節に送達される。
状態の治療および／もしくは予防において有効であるであろう抗体または組成物の量は、疾患の性質に依存し、標準的な臨床技術により決定され得る。
組成物において用いられるべき正確な用量はまた、投与の経路、およびそれによって引き起こされる感染または疾患の重症度に依存し、開業医の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効な用量はまた、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、および健康を含む）、患者がヒトもしくは動物であるかどうか、投与される他の医薬品、または治療が予防的もしくは治療的であるかどうかに応じて変動してもよい。通常、患者はヒトであるが、遺伝子導入哺乳類を含む非ヒト哺乳類もまた処置され得る。治療投与量を、最適に滴定して、安全性および有効性が最適化される。
本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体を使用して、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）のようなイムノアッセイ、免疫沈降、またはウエスタンブロッティングを含む、当業者に既知の古典的な免疫組織学的方法を使用して、生物学的試料においてＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質レベルをアッセイすることもできる。好適な抗体アッセイ標識は、当該技術分野において既知であり、グルコース酸化酵素などの酵素標識、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などのラジオアイソトープ、ルミノールなどの発光標識、ならびにフルオレセインおよびローダミン、ならびにビオチンなどの蛍光標識を含む。かかる標識を使用して、本明細書に記載される抗体を標識することができる。あるいは、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、標識され、抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体と組み合わせて使用され、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質レベルを検出することができる。したがって、一実施形態では、本発明は、生物学的試料中のＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質のインビトロ検出のための本発明の抗体の使用に関する。さらなる実施形態では、本発明は、インビトロでの生物学的試料中のＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出のための、本発明の抗ＣＤ９６抗体の使用に関し、任意選択で、抗ＣＤ９６抗体は、放射性核種または検出可能な標識にコンジュゲートされており、かつ／または本明細書に記載される標識を担持し、かつ／または免疫組織学的方法が使用される。
ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質の発現レベルについてアッセイすることは、直接的（例えば、絶対タンパク質レベルを決定または推定することにより）、または比較的（例えば、第２の生物学的試料における疾患関連タンパク質レベルと比較することにより）のいずれかで、第１の生物学的試料におけるＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質のレベルを定性的もしくは定量的に測定または推定することを含むことが意図される。第１の生物学的試料におけるＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）ポリペプチド発現レベルは、測定または推定され、標準的なＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）タンパク質レベルと比較することができ、標準は、例えば、障害を有していない個体から得られた第２の生物学的試料から取られるか、または障害を有していない個体の集団からのレベルを平均化することにより決定される。当該技術分野において理解される通り、「標準的な」ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）ポリペプチドレベルが既知であると、それは、比較用の標準として繰り返し使用され得る。したがって、さらなる実施形態では、本発明は、生物学的試料中のＣＤ９６タンパク質レベル、例えば、ヒトＣＤ９６タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出のためのインビトロ方法に関し、免疫組織学的方法によって、生物学的試料中の、ＣＤ９６タンパク質、例えば、ヒトＣＤ９６タンパク質のレベルを定性的または定量的に測定または推定することを含む。
本明細書で使用される場合、「生物学的試料」という用語は、対象、細胞株、組織、またはＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）を潜在的に発現する細胞の他の供給源から得られる任意の生物学的試料を指す。動物（例えば、ヒトまたはカニクイザル）から組織生検および体液を得る方法は、当該技術分野で周知である。生物学的試料は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む。
本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、技術者に周知であり、かつ本記載に基づくインビトロおよびインビボ適用を含む、予後、診断、モニタリング、およびスクリーニング適用のために使用され得る。免疫系の状態および／または免疫応答のインビトロ判断および評価のための、予後アッセイ、診断アッセイ、モニタリングおよびスクリーニングアッセイならびにキットは、免疫不全を有することが分かっているか、もしくは有することが疑われるもの、あるいは予想されるもしくは所望の免疫系応答、抗原応答、またはワクチン応答に関するものを含む患者試料を評価するために予想し、診断し、モニタリングするために利用されてもよい。免疫系状態および／または免疫応答の判断ならびに評価はまた、異なる薬剤または抗体に対する、薬物の臨床試験について、または特定の化学療法剤、放射線療法剤、もしくは抗体（それらの組み合わせを含む）の投与について、患者の適合性を決定する際に有用である。この種の予後および診断のモニタリングならびに判断は、アッセイが、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を使用する抗体療法について患者を評価するためにも使用される、乳がんにおいてＨＥＲ２タンパク質に対する抗体を利用して、既に実施中である（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）、Ｄａｋｏ）。インビボ適用は、指向された細胞療法、および免疫系調整、および免疫応答の放射線画像化を含む。したがって、一実施形態では、本発明は、診断としての使用のための本発明の抗ＣＤ９６抗体および／または医薬組成物に関する。一実施形態では、本発明は、免疫系不全を有するか、もしくは有すると疑われる、ならびに／または予期されるもしくは所望の免疫系応答、抗原応答、もしくはワクチン応答に関して、対象を予測、診断、および／またはモニタリングするための方法における使用のための、本発明の抗ＣＤ９６抗体および／または医薬組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、インビトロで対象の生物学的試料におけるヒトＣＤ９６タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出することによって、免疫系不全を有するか、もしくは有すると疑われる、ならびに／または予期されるもしくは所望の免疫系応答、抗原応答、もしくはワクチン応答に関して、対象を予測、診断、および／またはモニタリングするための、本発明の抗ＣＤ９６抗体に関する。
一実施形態では、抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、生検試料の免疫組織化学において使用され得る。一実施形態では、方法は、インビトロ方法である。別の実施形態では、抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体を使用して、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）のレベル、またはＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）を含む細胞のレベルを、それらの膜表面上に検出することができ、次いで、そのレベルは、ある特定の疾患症状に連結され得る。本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、検出可能または機能的な標識を担持してもよく、かつ／または放射性核種もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされてもよい。蛍光標識が使用されるとき、当該技術分野において既知の、現在利用可能な顕微鏡および蛍光活性化細胞選別解析（ＦＡＣＳ）または両方の方法手順の組み合わせを利用して、特定の結合メンバーが同定され、定量されてもよい。本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、蛍光標識を担持してもよく、または蛍光標識にコンジュゲートされてもよい。例示的な蛍光標識は、例えば、反応性およびコンジュゲートされたプローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、およびテキサスレッド、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素、ならびにＤｙＬｉｇｈｔ色素を含む。抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、アイソトープ３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、および１８６Ｒｅなどの放射性標識または放射性核種を担持してもよく、またはそれにコンジュゲートされてもよい。放射性標識が使用されるとき、当該技術分野で既知の、現在入手可能なカウント手順を利用して、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）への抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体の特異的結合が同定され、定量されてもよい。標識が酵素である場合において、検出は、当該技術分野において既知の、現在利用される比色分析技術、分光光度技術、蛍光分光光度技術、電流測定技術、または気体定量技術のいずれかにより達成されてもよい。これは、抗体とＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）との間の複合体の形成を可能にする条件下で、試料または対照試料を抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体と接触させることにより達成され得る。抗体とＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）との間で形成される任意の複合体は、試料および対照において検出され、比較される。ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に対する本明細書に記載される抗体の特異的結合に照らして、抗体を使用して、細胞の表面上のＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載される抗体は、免疫親和性精製を介してＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）を精製するためにも使用され得る。また、例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）またはＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）／ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）リガンド複合体の存在の程度の定量的分析のために、試験キット、キット、またはキットオブパーツの形態で調製され得るアッセイシステムが本明細書に含まれる。システム、試験キット、キット、またはキットオブパーツは、標識された成分、例えば、標識された抗体、および１つ以上の追加の免疫化学試薬を含み得る。
ポリヌクレオチド、ベクター、および抗ＣＤ９６抗体を産生する方法
別の態様では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原に特異的に結合する、本明細書に記載される抗体、またはその一部、またはその断片（例えば、ＶＬおよび／またはＶＨ、ならびに軽鎖および／または重鎖）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、およびベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび哺乳類細胞）における組換え発現のためのかかるポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。本明細書に提供される抗体のうちのいずれかの重鎖および／または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにかかるポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、宿主細胞、例えば、哺乳類細胞におけるそれらの効率的発現のための発現ベクターが本明細書に提供される。
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然の供給源に（例えば、マウスまたはヒトに）存在する他の核酸分子から分離されるものである。さらに、ｃＤＮＡ分子のような「単離された」核酸分子は、組換え技術により産生されるとき、他の細胞材料もしくは培地を実質的に含み得ないか、または化学的に合成されるとき、化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含み得ない。例えば、専門用語「実質的に含まない」は、他の材料、例えば、細胞材料、培地、他の核酸分子、化学前駆体および／もしくは他の化学物質の約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に、約１０％未満）を有するポリヌクレオチドあるいは核酸分子の調製を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体をコードする核酸分子（複数可）は、単離または精製される。
特定の態様では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）ポリペプチドに特異的に結合し、かつ本明細書に記載されるアミノ酸配列を含む抗体、ならびにＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）ポリペプチドへの結合についてかかる抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合するか、またはかかる抗体のものと同じエピトープに結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。
ある特定の態様では、本明細書に記載される抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載される抗体のＶＬ ＦＲおよびＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、表１を参照されたい）、または本明細書に記載される抗体のＶＨ ＦＲおよびＣＤＲを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、表１を参照されたい）を含み得る。
例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種性シグナル配列での置換、およびｍＲＮＡ不安定性エレメントの除去により最適化される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体をコードするポリヌクレオチドもまた本明細書に提供される。ｍＲＮＡにおいてコドン変更を導入すること、および／もしくは阻害性領域を除外することによる、組換え発現のための抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片（例えば、軽鎖、重鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、第６，１７４，６６６号、第６，２９１，６６４号、第６，４１４，１３２号、および第６，７９４，４９８号（それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される最適化方法を適切に適用することにより実施することができる。例えば、ＲＮＡ内の可能性のあるスプライス部位および不安定性エレメント（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕリッチエレメント）は、組換え発現のためのＲＮＡの安定性を増加させるために核酸配列によりコードされるアミノ酸を変更することなく、変異され得る。変更は、例えば、同一のアミノ酸の代替コドンを使用する、遺伝子コードの縮重を利用する。ある特定の実施形態では、保存的変異、例えば、元々のアミノ酸と同様の化学構造ならびに特性および／または機能を有する同様のアミノ酸をコードする１つ以上のコドンを変更させることが所望であり得る。かかる方法は、抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片の発現を、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされる抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体の発現に対して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍、またはそれ以上増加させることができる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメインおよび／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されたポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメインおよび／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補）ポリヌクレオチドにハイブリダイズし得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体または断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、高度に厳密な条件下で、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズする。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、高度に厳密な、中程度に厳密な、もしくはより低度に厳密なハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片をコードする最適化されていないヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報は説明されており、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００５／００４８５４９（例えば、段落７２～７３）を参照されたい。
ポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知の任意の方法によって得ることができ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。本明細書に記載される抗体、例えば、表１に記載される抗体、およびこれらの抗体の修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知の方法を使用して決定することができ、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、抗体をコードする核酸を生成するようにアセンブリされる。抗体をコードするかかるポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブリされ得（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２－６に記載されるように）、これは簡潔に言えば、抗体をコードする配列の一部を含む重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、ならびに次いでＰＣＲによるライゲーションされたオリゴヌクレオチドの増幅を伴う。
あるいは、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング方法）を使用して、好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）からの核酸から生成され得る。例えば、既知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して実施することができる。かかるＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体の軽鎖および／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。かかるＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体の可変軽鎖領域および／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、宿主細胞における発現のためにベクターにクローニングすることができ、さらなるクローニングのために、例えば、キメラおよびヒト化抗体を生成することができる。
特定の抗体をコードする核酸を含むクローンが利用できないが、抗体分子の配列は既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用してクローニングし、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを特定することによって、化学的に合成されるか、または好適な供給源（例えば、任意の組織、または本明細書に記載される抗体を発現するように選択されるハイブリドーマ細胞などの抗体を発現する細胞から生成される抗体ｃＤＮＡライブラリーもしくはｃＤＮＡライブラリー、またはそれらから単離される核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から得ることができる。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅された核酸を、当該技術分野で周知の任意の方法を使用して、複製可能なクローニングベクターにクローニングすることができる。
本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順（例えば、抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を使用して容易に単離および配列決定することができる。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの供給源として作用し得る。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに配置され、次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞）、またはそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞において抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体の合成を得ることができる。
全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限酵素部位、および制限酵素部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンにおいてＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローニング技術を使用して、ＰＣＲにより増幅されたＶＨドメインは、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ１またはヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングされ得、ＰＣＲにより増幅されたＶＬドメインは、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングされ得る。ある特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ－１αプロモーター、分泌シグナル、可変領域のクローニング部位、定常ドメイン、およびネオマイシンなどの選択マーカーを含む。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングされ得る。次に、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、細胞株に共トランスフェクトして、当業者に既知の技術を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定したまたは一過性細胞株を生成する。
ＤＮＡはまた、例えば、マウス配列の代わりに、ヒト重および軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を共有結合させることにより、修飾され得る。
高度に厳密、中程度またはより低度に厳密なハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、高度に厳密、中程度またはより低度に厳密なハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に提供されるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする。
ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野において記載されており、当業者に既知である。例えば、厳密な条件下でのハイブリダイゼーションは、フィルター結合したＤＮＡへの、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）における約４５℃でのハイブリダイゼーション、続いて、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳにおける約５０～６５℃での１回または複数回の洗浄を含み得、高度に厳密な条件下でのハイブリダイゼーションは、フィルター結合した核酸への、６×ＳＳＣにおける約４５℃でのハイブリダイゼーション、続いて、０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳにおける約６８℃での１回または複数回の洗浄を含み得る。他の厳密なハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者に公知であり、記載されており、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｔ ｐａｇｅｓ ６．３．１－６．３．６ ａｎｄ ２．１０．３を参照されたい。
ある特定の態様では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体を発現する（例えば、組換えで）細胞（例えば、宿主細胞）、ならびに関連するポリヌクレオチドおよび発現ベクターが本明細書に提供される。宿主細胞における、好ましくは、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）における組換え発現のための抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書に提供される。本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体（例えば、ヒトまたはヒト化抗体）を組換えで発現させるためのかかるベクターを含む宿主細胞もまた本明細書に提供される。特定の態様では、宿主細胞からかかる抗体を発現させることを含む、本明細書に記載される抗体を産生する方法が本明細書に提供される。
ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する、本明細書に記載される抗体（例えば、本明細書に記載される完全長抗体、抗体の重鎖もしくは軽鎖、または一本鎖抗体）の組換え発現は、概して、抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築に関与する。本明細書に記載される抗体分子、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、またはその断片（例えば、重鎖または軽鎖可変領域）をコードするポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該技術分野で周知の技術を使用する組換えＤＮＡ技術により産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）を含むポリヌクレオチドを発現させることにより、タンパク質を調製する方法が、本明細書に記載される。当業者に周知である方法を使用して、抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）コード配列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターが構築され得る。これらの方法は、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載される抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体もしくはその断片の重鎖もしくは軽鎖可変領域、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターもまた提供される。かかるベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号および第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、抗体の可変領域は、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖および軽鎖全体の両方の発現のためのかかるベクターにクローニングされ得る。
発現ベクターは、従来の技術により細胞（例えば、宿主細胞）に導入され得、次に、得られた細胞が従来の技術により培養され、本明細書に記載される抗体またはその断片を産生がされ得る。したがって、宿主細胞におけるかかる配列の発現のためにプロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載される抗体もしくはその断片、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはその断片、または本明細書に記載される一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、二本鎖抗体の発現について、重鎖および軽鎖の両方を個々にコードするベクターは、以下に詳述される通り、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞において共発現され得る。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載される抗体またはその断片の重鎖および軽鎖両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載される抗体の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載される抗体もしくはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとの２つの異なるベクターを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載される抗体もしくはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載される抗体の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。特定の実施形態では、第１の細胞によって発現される重鎖／重鎖可変領域は、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と関連して、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体を形成した。ある特定の実施形態では、かかる第１の宿主細胞およびかかる第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が、本明細書に提供される。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含むベクターの集団が本明細書に提供される。
様々な宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載される抗体分子を発現することができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。かかる宿主発現系は、対象のコード配列が産生され、続いて精製され得るビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換されるか、またはトランスフェクトされるとき、本明細書に記載される抗体分子をインサイツで発現し得る細胞も表す。これらには、これらに限定されないが、例えば、抗体コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物；例えば、抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓおよびＰｉｃｈｉａ）；例えば、抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；例えば、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染させた、もしくは例えば、抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻）；または例えば、哺乳類細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳類ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を有する哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、およびＢＭＴ１０細胞）が含まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体を発現する細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、例えば、ＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。ある特定の実施形態では、ＣＨＯ細胞によって産生される抗体の重鎖および／または軽鎖は、ピログルタメートにより置き換えられたＮ末端グルタミンまたはグルタメート残基を有し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。特定の実施形態では、哺乳類発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または真核生物細胞（例えば、哺乳類細胞）が、組換え抗体分子の発現のため、特に、組換え抗体分子全体の発現のため使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間早期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと関連する、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞は、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１－５、およびＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８（７）：６６２－７、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞により産生される。特定の実施形態では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する、本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導可能なプロモーター、または組織特異的プロモーターにより制御される。
細菌系では、発現される抗体分子に意図される使用に応じて、いくつかの発現ベクターを有利に選択することができる。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のため、大量のかかる抗体が産生される場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが望ましい場合がある。かかるベクターには、これらに限定されないが、抗体コード配列が融合タンパク質が産生されるように、ｌａｃ Ｚコード領域を有するフレーム内のベクター内に個別にライゲーションされ得るＥ．ｃｏｌｉ発現ｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ Ｕ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｌｌ Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ Ｊ ２：１７９１－１７９４）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １３：３１０１－３１０９、Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＳＭ（１９８９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２４：５５０３－５５０９）などが含まれ、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。Ｉｎｏｕｙｅ Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １３：３１０１－３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＳＭ（１９８９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２４：５５０３－５５０９例えば、ｐＧＥＸベクターを使用して、グルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含む融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現することもできる。一般に、かかる融合タンパク質は可溶性であり、吸着およびマトリックスグルタチオンアガロースビーズへの結合によって溶解細胞から容易に精製され、その後、遊離グルタチオンの存在下で溶出され得る。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたは第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
昆虫系では、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）を、外来遺伝子を発現するベクターとして使用することができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞において成長する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれてもよい。
哺乳類宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび３部分（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列にライゲーションされ得る。次いで、このキメラ遺伝子を、インビトロまたはインビボ組換えによりアデノウイルスゲノム内に挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）での挿入は、感染した宿主において生存可能かつ抗体分子を発現することができる組換えウイルスをもたらす（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ ８１（１２）：３６５５－９を参照されたい）。挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳には、特定の開始シグナルも必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。さらに、開始コドンは、挿入全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと相内になければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどの包含によって強化され得る（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｉｔｔｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４を参照されたい）。
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾および処理する宿主細胞株が、選択され得る。タンパク質産物のかかる修飾（例えば、グリコシル化）および処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後処理ならびに修飾の特徴的かつ特異的な機序を有する。適当な細胞株または宿主系は、発現される外来タンパク質の正しい修飾および処理を確実にするために選択され得る。この目的で、遺伝子産物の最初の転写、グリコシル化、およびリン酸化の適切な処理の細胞機構を有する真核生物宿主細胞が使用され得る。かかる哺乳類宿主細胞には、これらに限定されないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０Ｔ４７Ｄ、ＮＳ０（いずれのイムノグロブリン鎖も内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられる。ＣＨＯ，ＶＥＲＯ，ＢＨＫ，Ｈｅｌａ，ＭＤＣＫ，ＨＥＫ ２９３，ＮＩＨ ３Ｔ３，Ｗ１３８，ＢＴ４８３，Ｈｓ５７８Ｔ，ＨＴＢ２，ＢＴ２ＯＰＥＲ．Ｃ６，ＶＥＲＯ，ＨｓＳ７８Ｂｓｔ，ＨＥＫ－２９３Ｔ，ＨｅｐＧ２，ＳＰ２１０，Ｒ１．１，Ｂ－Ｗ，Ｌ－Ｍ，ＢＳＣ１，ＢＳＣ４０，ＹＢ／２０，ＢＭＴ１０ ある実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞において産生される。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、低減されたフコース含量を有するか、またはフコース含量を有しない。かかる抗体は、当業者に既知の技術を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化する能力を欠損するか、または欠く細胞において発現され得る。特定の例では、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの対立遺伝子の両方のノックアウトを有する細胞株を使用して、低減されたフコース含量を有する抗体を産生することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、低減されたフコース含量を有する抗体を産生するために使用され得る、かかるシステムの例である。
組換えタンパク質の長期間の高収率の産生のため、安定した発現細胞が生成され得る。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体を安定的に発現する細胞株は、操作され得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される細胞は、軽鎖／軽鎖可変領域および重鎖／重鎖可変領域を安定的に発現し、それらは、本明細書に記載される抗体を形成するように会合する。
ある特定の態様では、複製のウイルス起源を含む発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞を、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞を濃縮培地中で１～２日間増殖させることができ、次いで、選択培地に切り換える。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がプラスミドをその染色体に安定的に組み込み、増殖して病巣を形成することを可能にし、それによりクローン化されて細胞株に拡大される。この方法は、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体またはその断片を発現する細胞株を設計するために有利に使用され得る。かかる操作された細胞株は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価に特に有用であり得る。
これに限定されないが、それぞれ、ｔｋ、ｈｇｐｒｔ、またはａｐｒｔ細胞における単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ １１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ ４８（１２）：２０２６－２０３４）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ Ｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ ２２（３）：８１７－２３）遺伝子を含む、いくつかの選択系を使用することができ、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｎｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ ７７（６）：３５６７－７０、Ｏ’Ｈａｒｅ Ｋ ａｔ ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：１５２７－３１）、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ＆Ｂｅｒｇ Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ ７８（４）：２０７２－６）、アミノグリコシドＧ－４１８（Ｗｕ ＧＹ＆Ｗｕ ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ Ｐ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３２：５７３－５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２、およびＭｏｒｇａｎ ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６２：１９１－２１７、Ｎａｂｅｌ ＧＪ＆Ｆｅｌｇｎｅｒ ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１（５）：２１１－５）に対する耐性を付与するｎｅｏ、およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ＲＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ ３０（１－３）：１４７－５６）に対する選択の基準として使用することができる。Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ ７７（６）：３５６７－７０；Ｏ’Ｈａｒｅ Ｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：１５２７－３１）Ｇ－４１８（Ｗｕ ＧＹ＆Ｗｕ ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ Ｐ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；ａｎｄ Ｍｏｒｇａｎ ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６２：１９１－２１７；Ｎａｂｅｌ ＧＪ＆Ｆｅｌｇｎｅｒ ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１（５）：２１１－５）；組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般的に既知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用することができ、かかる方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉ ＮＣ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ Ｆ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５０：１－１４の第１２章および第１３章に記載されており、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加され得る（概説については、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ＣＲ＆Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ ＣＣＧ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系中のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養中に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅領域は抗体遺伝子と関連しているため、抗体の産生も増加する（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｒｏｕｓｅ ＧＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２５７－６６）。
宿主細胞は、本明細書に記載される２つ以上の発現ベクター、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター、および軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターでトランスフェクトすることができる。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択マーカーを含み得る。宿主細胞は、異なる量の２つ以上の発現ベクターで共トランスフェクトすることができる。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクターおよび第２の発現ベクターの以下の比：約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０のうちのいずれか１つでトランスフェクトすることができる。
あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、それらを発現することができる単一ベクターを使用することができる。かかる状況では、軽鎖は、過剰の毒性のない遊離重鎖を避けるために重鎖の前に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５６２－５６５、およびＫｏｈｌｅｒ Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ ７７：２１９７－２１９９、それらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。発現ベクターは、モノシストロニックまたはマルチシストロニックであり得る。マルチシストロニック核酸構築物は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくはそれ以上の遺伝子／ヌクレオチド配列、または２～５個、５～１０個、もしくは１０～２０個の範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列をコードし得る。例えば、バイシストロニック核酸構築物は、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に記載される抗体の重鎖）、および第２の遺伝子（例えば、本明細書に記載される抗体の軽鎖）を含み得る。かかる発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写は、プロモーターによって駆動され得るが、第１の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存性スキャニング機構によって行うことができ、第２の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、例えば、ＩＲＥＳによるキャップ非依存性機構によって行うことができる。
本明細書に記載される抗体分子が、組換え発現により産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製について当該技術分野で既知の任意の方法により、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、具体的には、タンパク質Ａ後の特異的な抗原に対する親和性、およびサイズ分類カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度により、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術により精製され得る。さらに、本明細書に記載される抗体を、本明細書に記載されるか、またはそうでなければ当該技術分野で既知の異種性ポリペプチド配列に融合して、精製が促進され得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、単離されるか、または精製される。一般的に、単離された抗体は、単離された抗体と異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体の調製物は、細胞材料および／または化学前駆体を実質的に含まない。専門用語「細胞材料を実質的に含まない」は、抗体が、それが単離されるか、または組換え産生される細胞の細胞成分から分離される、抗体の調製物を含む。したがって、細胞材料を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、もしくは０．１％（乾燥重量で）未満の、異種性タンパク質（本明細書において「混在タンパク質」としても称される）を有する抗体、および／または抗体のバリアント、例えば、抗体の異なる翻訳後修飾形態もしくは抗体の他の異なるバージョン（例えば、抗体断片）の調製物を含む。抗体が組換え産生されるとき、それはまた、概して、培養培地を実質的に含まず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満を表す。抗体が化学合成により産生されるとき、それは、概して、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、それは、タンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量で）未満の、目的の抗体以外の化学前駆体または化合物を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、単離されるか、または精製される。
ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する抗体またはその断片は、例えば、化学合成によって、または組換え発現技術によって、抗体の合成のために当該技術分野で既知の任意の方法によって産生され得る。本明細書に記載される方法は、別段に示されない限り、分子生物学、マイクロ生物学、遺伝子解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当業者内の関連する分野における従来の技術を用いる。これらの技術は、例えば、本明細書において引用される参考文献において記載され、文献において完全に説明される。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ ａｔ ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ａｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｒｏｔｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、例えば、ＤＮＡ配列の合成、遺伝子操作を介した、創出を含む任意の手段により調製され、発現され、作られ、または単離された抗体（例えば、組換え抗体）である。ある特定の実施形態では、かかる抗体は、インビボで動物または哺乳類（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリー内に天然で存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列またはアミノ酸配列）を含む。
一態様では、本明細書に記載される細胞または宿主細胞を培養することを含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する抗体を作製する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、方法は、インビトロで行われる。ある特定の態様では、本明細書に記載される細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して、抗体を発現させること（例えば、組換え発現させること）を含む、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する抗体を作製する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の実施形態では、外来ポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。特定の実施形態では、方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体を精製する工程をさらに含む。
ポリクローナル抗体を産生する方法は、当該技術分野で既知である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む当該技術分野で既知の多種多様な技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ例えばＨａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｓ ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ａｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｈａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３ ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（それらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に教示されるものを含むハイブリドーマ技術を使用して産生され得る。本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術により産生される抗体に制限されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載される抗体またはその断片、例えば、かかる抗体の軽鎖および／または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組換えで産生され得る。
特定の実施形態では、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、単一の細胞（例えば、組換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体であり、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、または当該技術分野もしくは本明細書に提供される実施例で既知の他の抗原結合もしくは競合結合アッセイによって決定された場合、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、単一特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）であり得る。本明細書に記載されるモノクローナル抗体は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されるハイブリドーマ法によって作製され得るか、または例えば、本明細書に記載される技術を使用して、例えば、ファージライブラリーから単離され得る。クローン細胞株、およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の他の調製方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，（上記）の第１１章を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、抗体は、抗体が、各一価結合ドメインが抗原上のエピトープに結合することができる少なくとも２つ（例えば、２つ以上）の一価結合ドメインを含む場合、多価（例えば、二価）で抗原に結合する。各一価結合ドメインは、抗原上の同じまたは異なるエピトープに結合し得る。
ハイブリドーマ技術を使用して特異性抗体を産生およびスクリーニングする方法は、当該技術分野で習慣的であり周知である。例えば、ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えば、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター、またはマカクサルなどが免疫化されて、免疫化に使用されるタンパク質（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６））に特異的に結合する抗体を産生する、または産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化されてもよい。次いで、リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）。さらに、ＲＩＭＭＳ（反復免疫多重部位）技術を使用して、動物を免疫化することができる（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ ＫＥ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １６：３８１－９）。
ある特定の実施形態では、マウス（またはラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌなどの他の動物）は、抗原（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６））で免疫化することができ、免疫応答が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清中に検出され、マウス脾臓が採取され、脾臓細胞が単離される。次いで、脾臓細胞は、周知の技術により、任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞に融合され、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、限定された希釈によって選択およびクローニングされる。ある特定の実施形態では、免疫化マウスのリンパ節が採取され、ＮＳ０骨髄腫細胞と融合される。
このように調製されたハイブリドーマ細胞は、融合されていない親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含む好適な培養培地に播種され、増殖される。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨げる。
特定の実施形態は、効率的に融合し、かつ選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生をサポートし、かつＨＡＴ培地などの培地に感受性である、骨髄腫細胞を用いる。これらの骨髄腫細胞株は、ＮＳ０細胞株、またはＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ－２１およびＭＰＣ－１１マウス腫瘍、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ－２またはＸ６３－Ａｇ８．６５３細胞に由来するものなどのマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されており（Ｋｏｚｂｏｒ Ｄ（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３３：３００１－５、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に対して指向されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野で既知の方法、例えば、免疫沈降によって、または放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定される。
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンは、希釈手順を制限することによってサブクローニングされ、標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（上記））によって増殖され得る。この目的に好適な培養培地には、例えば、Ｄ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ １６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで増殖され得る。
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ－セファロース、ヒドロキシラパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水液、または血清から好適に分離される。
本明細書に記載される抗体には、例えば、特定のＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）を認識し、かつ当業者に既知の任意の技術によって生成され得る抗体断片が含まれる。例えば、本明細書に記載されるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するため）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク分解性切断により産生され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一のアームのうちの１つに対応し、重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインと対合した完全な軽鎖を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合により連結された抗体分子の２つの抗原結合アームを含む。
さらに、本明細書に記載される抗体はまた、当該技術分野で既知の様々なファージディスプレイ方法を使用して生成され得る。ファージディスプレイ方法において、機能性抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。特に、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、冒された組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによりｓｃＦｖリンカーと一緒に組換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉにエレクトロポレーションされ、Ｅ．ｃｏｌｉは、ヘルパーファージに感染する。これらの方法において使用されるファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含む糸状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換え融合される。特定の抗原に結合する抗原結合断片を発現するファージは、例えば、標識抗原、あるいは固体表面もしくはビーズに結合または捕獲された抗原を使用して、抗原で選択されるか、または同定され得る。本明細書に記載される抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ方法の例には、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０、Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８、Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ １８７：９－１８、Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ＆Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７：１９１－２８０、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号、国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、第ＷＯ９１／１０７３７号、第ＷＯ９２／０１０４７号、第ＷＯ９２／１８６１９号、第ＷＯ９３／１１２３６号、第ＷＯ９５／１５９８２号、ＷＯ９５／２０４０１号、および第ＷＯ９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号、および第５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げれられ、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
上記参考文献において記載される通り、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域が単離され、それを使用して、ヒト抗体を含む全抗体、または任意の他の所望の抗原結合断片を生成し、例えば、以下に記載される通り、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片を組換え産生する技術もまた、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４－９、Ｓａｗａｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４：２６－３４、およびＢｅｔｔｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３に開示されているものなど、当該技術分野で既知の方法を使用して用いることができ、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限酵素部位、および制限酵素部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、テンプレート、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローニング技術を使用して、ＰＣＲにより増幅されたＶＨドメインは、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングされ得、ＰＣＲにより増幅されたＶＬドメインは、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングされ得る。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングされ得る。次に、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、細胞株に共トランスフェクトして、当業者に既知の技術を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定したまたは一過性細胞株を生成する。
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が、異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合されたマウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含み得る。キメラ抗体を産生する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－７；Ｏｉ ＶＴ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４－２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ ＳＤ ａｔ ａｌ．，（１９８９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ１２５：１９１－２０２、ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、第４，８１６，３９７号、および第６，３３１，４１５号を参照されたく、そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ヒト化抗体は、予め決定された抗原と結合することができ、それは、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域、および非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含み得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、これらに限定されないが、ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、および第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは表面再構成（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号および第ＥＰ５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８（４／５）：４８９－４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ＧＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４、ならびにＲｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、Ｔａｎ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：１１１９－２５、Ｃａｌｄａｓ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０、Ｍｏｒｅａ Ｖ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）２６７－７９、Ｂａｃａ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２（１６）：１０６７８－８４、Ｒｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９（１０）：８９５ ９０４、Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５（８）：１７１７－２２、Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０、およびＰｅｄｅｒｓｅｎ ＪＴ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２３５（３）：９５９－７３（そのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示される技術を含む、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して産生され得る。また、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４Ａ１号（２００５年２月２４日）も参照されたい。
多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製する方法が説明されており、例えば、米国特許第７，９５１，９１７号、第７，１８３，０７６号、第８，２２７，５７７号、第５，８３７，２４２号、第５，９８９，８３０号、第５，８６９，６２０号、第６，１３２，９９２号、および第８，５８６，７１３号を参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。７，９５１，９１７；７，１８３，０７６；８，２２７，５７７；５，８３７，２４２；５，９８９，８３０；５，８６９，６２０；６，１３２，９９２
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当該技術分野で周知の方法によって産生され得る。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ＆Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３１：２５－３８、Ｎｕｔｔａｌｌ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １（３）：２５３－２６３、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４（４）：２７７－３０２、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、第ＷＯ９４／２５５９１号、および第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ＆Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３１：２５－３８；Ｎｕｔｔａｌｌ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １（３）：２５３－２６３；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４（４）：２７７－３０２；
さらに、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原に特異的に結合する抗体は、次いで、当業者に周知の技術を使用して抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために利用され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ ＮＳ＆Ｂｏｎａ ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ Ｊ ７（５）：４３７－４４４、およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ Ａ（１９９１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７（８）：２４２９－２４３８を参照されたく、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗体と同じＣＤ９６の（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）のエピトープに結合する本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）への結合から、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つを競合的に遮断する（例えば、用量依存的様式で）本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して産生され得る。例えば、機能的内在性免疫グロブリンを発現する能力はないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現し得る遺伝子導入マウスが使用され得る。特に、ヒト重および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、無作為に、またはマウス胚性幹細胞への相同組換えにより、導入され得る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域は、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚性幹細胞に導入され得る。マウス重および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入と非機能的に別々にまたは同時に与えられ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合欠失は、内在性抗体産生を妨げる。修飾された胚性幹細胞を拡大し、胚盤胞に微量注入して、キメラマウスが産生される。次に、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合子孫が産生される。遺伝子導入マウスは、通常の様式で、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６））のすべてまたは一部で免疫化される。抗原に対して指向されたモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫化された遺伝子導入マウスから得ることができる。遺伝子導入マウスが宿すヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再構成し、クラススイッチおよび体細胞変異を実質的に経験する。したがって、かかる技術を使用して、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するこの技術の概説については、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ＆Ｈｕｓｚａｒ Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５－９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにかかる抗体を産生するためのプロトコルについての詳細な議論については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９６／３４０９６号、および第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号、および第５，９３９，５９８号を参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。５，４１３，９２３，５，６２５，１２６，５，６３３，４２５，５，５６９，８２５，５，６６１，０１６，５，５４５，８０６，５，８１４，３１８ ヒト抗体を産生することができるマウスの例は、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．；米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍ；米国特許第５，５４５，８０６号および第５，５６９、８２５号）、Ｔｒａｎｓ Ｃｈｒｏｍｏ Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）、およびＫＭ Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）を含み、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用する上記のファージディスプレイ方法を含む当該技術分野で既知の様々な方法により作製され得る。また、米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号、および第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、第ＷＯ９８／５０４３３号、第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９８／１６６５４号、第ＷＯ９６／３４０９６号、第ＷＯ９６／３３７３５号、および第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたく、それらのすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＷＯ ９８／４６６４５，ＷＯ ９８／５０４３３，ＷＯ ９８／２４８９３，ＷＯ ９８／１６６５４，ＷＯ ９６／３４０９６，ＷＯ ９６／３３７３５，
ある特定の実施形態では、ヒト抗体は、マウス－ヒトハイブリドーマを使用して産生され得る。例えば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球を、マウスミエローマ細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス－ヒトハイブリドーマが産生され得、これらのマウス－ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６））に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものが決定され得る。かかる方法は当該技術分野で既知であり、かつ記載されており、例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４６：１９－２３、Ｎａｋａｇａｗａ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ １４：２７－３１を参照されたく、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。Ｓｈｉｎｍｏｔｏ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４６：１９－２３；Ｎａｇａｎａｗａ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ １４：２７－３１
キット
本明細書に記載される１つ以上の抗体、またはその医薬組成物もしくはコンジュゲートを含むキットもまた本明細書に提供される。特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の抗体などの、本明細書に記載される医薬組成物の成分のうちの１つ以上を充填した１つの以上の容器を含む医薬パックまたはキットが本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、キットは、本明細書に記載される医薬組成物、および本明細書に記載されるものなどの任意の予防または治療剤を含む。ある特定の実施形態では、キットは、例えば、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）および／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）などのＴ細胞マイトジェン、または抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体などのＴＣＲ複合体刺激抗体を含み得る。ヒト投与のための製造、使用、または販売の機関による承認を反映する、医薬もしくは生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関により規定された形態の通知が、任意選択で、かかる容器（複数可）と結び付けられ得る。
上記の方法において使用され得るキットもまた本明細書に提供される。一実施形態では、キットは、１つ以上の容器において、本明細書に記載される抗体、好ましくは、精製された抗体を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるキットは、対照としての実質的に単離されたＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載されるキットは、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原と反応しない対照抗体をさらに含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載されるキットは、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原への抗体の結合を検出するため１つ以上のエレメントを含む（例えば、抗体は、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物のような検出可能な基質に結合され得る抗体、または一次抗体を認識する二次抗体に、検出可能な基質を結合させ得る）。特定の実施形態では、本明細書に提供されるキットは、組換え産生された、または化学的に合成されたＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原を含み得る。キットにおいて提供されるＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原はまた、固体支持体に結合され得る。より特定の実施形態では、上に記載されるキットの検出手段は、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原が結合される固体支持体を含む。かかるキットはまた、結合していないレポーター標識抗ヒト抗体または抗マウス／ラット抗体を含み得る。この実施形態では、ＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）抗原への抗体の結合は、当該レポーター標識抗体の結合により検出され得る。一実施形態では、本発明は、生物学的試料中のＣＤ９６（例えば、ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６）をインビトロアッセイおよび／または検出するための本発明のキットの使用に関する。
この節（すなわち、節６）における実施例は、説明の目的であるが、制限の目的ではなく、提示される。
実施例１：抗ＣＤ９６抗体の特徴付け
本実施例は、ヒトＣＤ９６に特異的に結合する抗体の特徴付けを記載する。例示的な抗体のアミノ酸配列を、表１に示す。
抗ヒトＣＤ９６抗体は、精製されたヒトおよびカニクイザルＣＤ９６タンパク質に結合する
Ｃ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のＨｉｓタグ付きアイソフォーム２への親および生殖細胞系列抗ＣＤ９６抗体の結合
Ｈｉｓタグを有するＣ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２９）への、親抗体ＢＡ０７２、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ０８３およびＢＡ０８４の結合親和性を、表面プラズモン共鳴によって評価した。
簡潔に述べると、表面プラズモン共鳴実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して行い、会合速度（Ｋａ）、解離速度（Ｋｄ）、および解離定数（ＫＤ）を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを用いた１：１の結合モデルを使用して各実験から計算した。
ランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）中で希釈された約４μｇ／ｍｌのＢＡ０７２、ＢＡ０８３、ＢＡ０８４、ＢＡ０８３３、およびＢＡ０８３４を、基準として単一フローセルを保持するＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ、カタログ番号２９－１２７５－５６）の個々のフローセルに捕捉した。抗体を、１０μｌ／分の流量で１５秒間の注入を使用して捕捉し、約１５０共鳴単位（ＲＵ）に到達した。０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００、３００ｎＭの濃度で、ランニング緩衝液中で希釈された、Ｈｉｓタグを含むＣ８９Ｓ（配列番号１２９）変異を有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２を、３分の会合相および１０分または１５分の解離相のいずれかで、３０μｌ／分の流量でチップ表面上に流した。センサーチップを、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンの３０秒間の注入によりサイクル間で再生成した。センサーグラムを評価し、ＢＩＡ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．１ソフトウェアのグローバルデータ解析オプションを使用して、単純なＬａｎｇｍｕｉｒ １：１相互作用モデルに適合させた。データ品質は、偏差および曲線適合を視覚的に検査し、Ｒｍａｘ 、Ｃｈｉ２、およびＴｃのパラメータを評価することによって検証した。結合動態（Ｋａ、Ｋｄ、およびＫＤ）を、センサーグラム分析から決定し、表３に示す。
Figure 2022545741000050
Ｈｉｓタグを有するＣ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２９）への、親抗体ＢＡ１０１、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ１０２、ＢＡ１０３、ＢＡ１０４、ＢＡ１０５、ＢＡ１０６、およびＢＡ１０７の結合親和性を、表面プラズモン共鳴によって評価した。
簡潔に述べると、表面プラズモン共鳴実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して行い、会合速度（Ｋａ）、解離速度（Ｋｄ）、および解離定数（ＫＤ）を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを用いた１：１の結合モデルを使用して各実験から計算した。
ランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）中で希釈された約４μｇ／ｍｌのＢＡ１０２、ＢＡ１０３、ＢＡ１０４、ＢＡ１０５、ＢＡ１０６、およびＢＡ１０７を、基準として単一フローセルを保持するＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ、カタログ番号２９－１２７５－５６）の個々のフローセルに捕捉した。抗体を、１０μｌ／分の流量で１５秒間の注入を使用して捕捉し、約２００共鳴単位（ＲＵ）に到達した。０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００、３００ｎＭの濃度で、ランニング緩衝液中で希釈された、Ｈｉｓタグを含むＣ８９Ｓ変異（配列番号１２９）を有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２を、３分の会合相および１０分（ｇｌ６の場合）または１５分の解離相のいずれかで、３０μｌ／分の流量でチップ表面上に流した。センサーチップを、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンの３０秒間の注入によりサイクル間で再生成した。センサーグラムを評価し、ＢＩＡ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．１ソフトウェアのグローバルデータ解析オプションを使用して、単純なＬａｎｇｍｕｉｒ １：１相互作用モデルに適合させた。データ品質は、偏差および曲線適合を視覚的に検査し、Ｒｍａｘ 、Ｃｈｉ２、およびＴｃのパラメータを評価することによって検証した。結合動態（Ｋａ、Ｋｄ、およびＫＤ）を、センサーグラム分析から決定し、表４に示す。
Figure 2022545741000051
Ｃ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のＨｉｓタグ付きドメイン１、またはカニクイザルＣＤ９６のＨｉｓタグ付きドメイン１への、親和性成熟抗ＣＤ９６抗体の結合
Ｈｉｓタグを有するＣ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３１）、またはＨｉｓタグを有するカニクイザルＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３４）への、親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０９３、ＢＡ０９２、ＢＡ０９１、ＢＡ０８９、ＢＡ０８６、ＢＡ０９４、ＢＡ０８８、ＢＡ０９０、ＢＡ０８７、およびＢＡ０８５の結合親和性を、表面プラズモン共鳴によって評価した。親和性成熟バリアントを、カニクイザルＣＤ９６に対する親和性の増加のために選択した。
簡潔に述べると、表面プラズモン共鳴実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して行い、会合速度（Ｋａ）、解離速度（Ｋｄ）、および解離定数（ＫＤ）を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを用いた１：１の結合モデルを使用して各実験から計算した。
具体的には、ランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）中で希釈された抗体を、基準として単一フローセルを保持するＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ、カタログ番号２９－１２７５－５６）の個々のフローセルに捕捉した。抗体を、１０μｌ／分の流量で、１５秒間の注入を使用して捕捉し、胴体分析に最適化された捕捉レベルに到達した（約４３０ＲＵ）。最適な捕捉レベルに到達するための抗体の濃度を、各実験について別々に決定した（各抗体に対して約８μｇ／ｍｌを使用）。０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３３．３、１００、３００ｎＭの濃度で、ランニング緩衝液中で希釈された、Ｈｉｓタグを含むＣ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３１）、またはＨｉｓタグを含むカニクイザルＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３４）を、３分の会合相および１５分の解離相で、３０μｌ／分の流量でチップ表面上に流した。センサーチップを、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンの３０秒間の注入によりサイクル間で再生成した。センサーグラムを評価し、ＢＩＡ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．１ソフトウェアのグローバルデータ解析オプションを使用して、単純なＬａｎｇｍｕｉｒ １：１相互作用モデルに適合させた。データ品質は、偏差および曲線適合を視覚的に検査し、Ｒｍａｘ 、Ｃｈｉ２、およびＴｃのパラメータを評価することによって検証した。結合動態（Ｋａ、Ｋｄ、およびＫＤ）を、センサーグラム分析から決定し、表５（ヒト）および表６（カニクイザル）に示す。
Figure 2022545741000052
Figure 2022545741000053
Ｃ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のＨｉｓタグ付きドメイン１、またはカニクイザルＣＤ９６のＨｉｓタグ付きドメイン１への、親和性成熟抗ＣＤ９６抗体の結合
Ｈｉｓタグを有するＣ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３１）、またはＨｉｓタグを有するカニクイザルＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３４）への、親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０７３、ＢＡ０７４、ＢＡ０７８、ＢＡ０７９、ＢＡ０８０、ＢＡ０８１、ＢＡ０７６、ＢＡ０７７、ＢＡ０８２、ＢＡ０７５の結合親和性を、表面プラズモン共鳴によって評価した。親和性成熟バリアントを、カニクイザルＣＤ９６に対する親和性の増加のために選択した。
簡潔に述べると、表面プラズモン共鳴実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して行い、会合速度（Ｋａ）、解離速度（Ｋｄ）、および解離定数（ＫＤ）を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを用いた１：１の結合モデルを使用して各実験から計算した。
具体的には、ランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）中で希釈された抗体を、基準として単一フローセルを保持するＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ、カタログ番号２９－１２７５－５６）の個々のフローセルに捕捉した。抗体を、１０μｌ／分の流量で、１５秒間の注入を使用して捕捉し、胴体分析に最適化された捕捉レベルに到達した（約２５０ＲＵ）。最適な捕捉レベルに到達するための抗体の濃度を、各実験について別々に決定した（各抗体に対して約４μｇ／ｍｌを使用）。０．７５、１．５６、３．１３、６．２５、１２．５、２５、５０、１００ｎＭの濃度で、ランニング緩衝液中で希釈された、Ｈｉｓタグを含むＣ８９Ｓ変異を有するヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３１）、またはＨｉｓタグを含むカニクイザルＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３４）を、３分の会合相および１５分の解離相で、３０μｌ／分の流量でチップ表面上に流した。センサーチップを、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンの３０秒間の注入によりサイクル間で再生成した。センサーグラムを評価し、ＢＩＡ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．１ソフトウェアのグローバルデータ解析オプションを使用して、単純なＬａｎｇｍｕｉｒ １：１相互作用モデルに適合させた。データ品質は、偏差および曲線適合を視覚的に検査し、Ｒｍａｘ 、Ｃｈｉ２、およびＴｃのパラメータを評価することによって検証した。結合動態（Ｋａ、Ｋｄ、およびＫＤ）を、センサーグラム分析から決定し、表７（ヒト）および表８（カニクイザル）に示す。
Figure 2022545741000054
Figure 2022545741000055
抗ヒトＣＤ９６抗体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ９６を発現する細胞に結合する
ヒトＣＤ９６またはカニクイザルＣＤ９６を発現する細胞に結合するヒト抗ＣＤ９６ ＩｇＧ１抗体の能力を、様々な細胞型で試験した。
ヒトＣＤ９６のアイソフォーム２を発現するＪｕｒｋａｔ細胞への抗ＣＤ９６抗体の結合
Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ９６のアイソフォーム２に結合する親抗体ＢＡ０７２およびＢＡ１０１の能力を評価した。簡潔に述べると、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）をコードするベクターでトランスフェクトし、高レベルのＣＤ９６を安定的に発現するクローンを選択した。この安定した細胞株を、１０％熱不活化ＦＢＳおよび１％ピューロマイシン（Ｒ１０培地）を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で培養した。
抗体結合アッセイについては、細胞を、１ウェル当たり５×１０４細胞の密度で、９６ウェルＵ底組織培養プレートに播種し、２％熱不活化ＦＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）を補充したＰＢＳ中で希釈した、１０μｇ／ｍＬから０．３ｎｇ／ｍＬの濃度でのＢＡ０７２、ＢＡ１０１、またはアイソタイプ対照抗体の連続希釈とともに、４℃で３０分間インキュベートした。
抗体染色については、細胞を、冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、１：２０の希釈で、Ｒ－フィコエリスリンヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’２）（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ／４３Ｃ－ＣＪ０１２３）を含むＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。４℃で１０分間のインキュベーション後、細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、細胞をフローサイトメトリー（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター）により分析した。染色されていない対照細胞を使用して、単一細胞選択のための前方散乱光面積（ＦＳＣ－Ａ）対側方散乱光面積（ＳＳＣ－Ａ）のプロット、およびＦＳＣ－Ａ対ＦＳＣの高さ（ＦＳＣ－Ｈ）の別のプロットを使用してリンパ球集団をゲーティングした。試料を、以下の集団で逐次的にゲーティングすることによって分析した：ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ、ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ、およびＳＳＣ－Ａ対ＰＥ。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってデータをプロットした。
図１Ａおよび図１Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図１Ａ）およびＢＡ１０１（図１Ｂ）は、用量依存的様式でヒトＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞に結合した。図１Ａおよび１Ｂに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）およびＥＣ５０値を、表９および表１０に列挙する。
Figure 2022545741000056
Figure 2022545741000057
ヒトＣＤ９６のアイソフォーム１またはヒトＣＤ９６のアイソフォーム２を発現するＣＨＯ細胞への抗ＣＤ９６抗体の結合
ＣＨＯ細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ９６に結合する親抗体ＢＡ０７２およびＢＡ１０１の能力を評価した。簡潔に述べると、ＣＨＯ細胞を、ヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム１（配列番号１２７）、またはヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）をコードするベクターでトランスフェクトし、ＣＤ９６アイソフォーム１またはアイソフォーム２を安定的に発現するクローンを選択した。これらの安定した細胞株を、４ｍＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１倍ＨＴ－サプリメント、および２．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンを含むＰｏｗｅｒ ＣＨＯ－２培地中で培養した。
抗体結合アッセイについて、ヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞（アイソフォーム１またはアイソフォーム２）の凍結アリコートを、３７℃で解凍し、次いで、０．５％ウシ血清アルブミンおよび０．０５％アジ化ナトリウム（ＦＡＣＳ緩衝液）を補充したＰＢＳを含有するチューブに移した。細胞を３００ｇで５分間遠心分離した。上清を廃棄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した細胞を、５０μＬ中１ウェル当たり２×１０５細胞の密度で、９６ウェルＵ底組織培養プレートに播種した。別個のマイクロプレートで、各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ１０１、およびアイソタイプ対照）の２倍濃縮中間体ストックを調製した。抗体を、ＦＡＣＳ緩衝液中で１対３に連続希釈した。６０μｇ／ｍＬ～０．０００３３９μｇ／ｍＬの範囲の合計１１個の作業希釈物を調製した。次いで、５０μＬの各希釈物を、ヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞を含むマイクロプレートに移した。次いで、細胞を４℃で３０分間インキュベートした。抗体染色のために、細胞を、冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、Ｆｃγ断片特異的である、Ｒ－フィコエリスリン（ＰＥ）ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９－１１６－０９８）を含むＦＡＣＳ緩衝液中に、１：８００の最終希釈で再懸濁した。氷上で３０分間のインキュベーション後、細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、細胞をフローサイトメトリー（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター）により分析した。データを、ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－ＡおよびＳＳＣ－Ｈ対ＳＳＣ－Ａを逐次的にゲーティングすることによって、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を計算し、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってプロットした。４パラメータロジスティック方程式を使用して、曲線適合によって、５０％の最大結合をもたらす抗体の濃度（有効濃度５０、［ＥＣ５０］）を決定するために、ソフトウェアを使用した。
図２Ａおよび図２Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図２Ａ）およびＢＡ１０１（図２Ｂ）は、用量依存的様式でヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム１（配列番号１２７）を発現するＣＨＯ細胞に結合した。図２Ａおよび２Ｂに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）およびＥＣ５０値を、表１１および表１２に列挙する。
Figure 2022545741000058
Figure 2022545741000059
図３Ａおよび図３Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図３Ａ）およびＢＡ１０１（図３Ｂ）は、用量依存的様式でヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）を発現するＣＨＯ細胞に結合した。図３Ａおよび３Ｂに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）およびＥＣ５０値を、表１３および表１４に列挙する。
Figure 2022545741000060
Figure 2022545741000061
カニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２を発現するＣＨＯ細胞への抗ＣＤ９６抗体の結合
上述のこの節に記載されるものと同様の実験において、それらの細胞表面上にカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２（配列番号１３３）を発現するように操作されたＣＨＯ細胞に結合する、親抗体ＢＡ０７２およびＢＡ１０１の能力を試験した。簡潔に述べると、ＣＨＯ細胞を、カニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２をコードするベクターでトランスフェクトし、ＣＤ９６を安定的に発現するクローンを選択した。この安定した細胞株を、４ｍＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１倍ＨＴ－サプリメント、および２．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンを含むＰｏｗｅｒ ＣＨＯ－２培地中で培養した。カニクイザルＣＤ９６－ＣＨＯのアイソフォーム２に結合する抗体ＢＡ０７２およびＢＡ１０１の能力を、上記のヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞について記載されるように決定した。
図４Ａおよび図４Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図４Ａ）およびＢＡ１０１（図４Ｂ）は、用量依存的様式でカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２（配列番号１３３）を発現するＣＨＯ細胞に結合した。図４Ａおよび４Ｂに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）およびＥＣ５０値を、表１５および表１６に列挙する。
Figure 2022545741000062
Figure 2022545741000063
活性化初代ヒト細胞への抗ＣＤ９６抗体の結合
この実験では、活性化ヒトＴ細胞に結合する抗ＣＤ９６抗体の能力を試験した。
活性化Ｔ細胞について、ヒトＰＢＭＣの凍結アリコートを、液体窒素から取り出し、流氷が観察されるまで３７℃の水で直ちに解凍した。Ｐａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ／１３０－０９６－５３５）を使用してＴ細胞を単離した。次いで、Ｔ細胞を、１０ｍＬの予め加温されたＲ１０培地に移した。２０μＬを除去し、３８０μＬの生存性色素に添加して、細胞をカウントし、Ｍｕｓｅ装置を使用して生存率を確認した。試料を１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いで、Ｒ１０培地を用いて１×１０６細胞／ｍＬの最終濃度まで懸濁した。
コンカナバリンＡ（Ｓｉｇｍａ／Ｃ－５２７５）を、上に記載されるように調製された単離されたＴ細胞に、５０ＵのＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ／２０２－ＩＬ）で、５μｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、１００μＬの刺激細胞を、９６ウェル丸底組織培養プレートの各ウェルにピペッティングし、５％ ＣＯ２で、３７℃で８日間インキュベートした。
抗体の用量範囲を、９６ウェル丸底プレートで調製した。まず、６００μＬの５０μｇ／ｍｌの各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照）を、緩衝液中で調製した。次いで、抗体を、２００μＬの以前の希釈物を４００μＬの試料緩衝液にピペッティングすることによって、３倍希釈で滴定した。１０μｇ／ｍｌ～０．３ｎｇ／ｍＬの範囲の合計９個の希釈物を調製した。
８日後、試料プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。試料を、ＰＢＳ中のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｌ１０１１９）で１０分間染色した。次いで、試料プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。次いで、細胞を、図５、図６、および図７に示される濃度で、１００μＬのＢＡ０７２、ＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照に再懸濁した。試料プレートを、４℃で２０分間インキュベートした。細胞を、冷たい試料緩衝液の添加により洗浄し、２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。この洗浄を１回繰り返した。
ＰＥ標識二次抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’２）抗体の最終カクテルを、１１ｍＬのＦＡＣ緩衝液中で調製した。１ウェル当たり５０μＬの二次抗体を、丸底９６ウェルプレートに添加した。４℃で１０分間のインキュベーション後、細胞を、冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳ中の１．６％パラホルムアルデヒド中に再懸濁した。
抗体結合を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用してフローサイトメトリーにより測定した。染色されていない対照細胞を使用して、単一細胞選択のためのＦＳＣ－Ａ対側方散乱光面積ＳＳＣ－Ａのプロット、およびＦＳＣ－Ａ対ＦＳＣ－Ｈの別のプロットを使用してリンパ球集団をゲーティングした。各個々の抗体で染色された細胞のチューブを使用して、実験で使用される様々な色の補正を計算した。各試料に対して５０，０００個の事象を記録した。試料を、以下の集団で逐次的にゲーティングすることによって分析した：ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ、ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ、ＳＳＣ－Ａ対ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ、およびＳＳＣ－Ａ対ＰＥ。ＭＦＩを計算した。
図５Ａおよび図５Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図５Ａ）およびＢＡ１０１（図５Ｂ）は、用量依存的様式でＣＤ９６を発現する活性化初代ヒトＴ細胞に結合した。図５Ａおよび５Ｂに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）およびＥＣ５０値を、表１７および表１８に列挙する。
Figure 2022545741000064
Figure 2022545741000065
図６Ａ～６Ｃに示されるように、ＢＡ０７２（図６Ａ）、ＢＡ０８３（図６Ｂ）、およびＢＡ０８４（図６Ｃ）は、用量依存的様式で活性化初代ヒトＴ細胞に結合した。図６Ａ～Ｃに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）値を表１９に列挙する。
Figure 2022545741000066
図７Ａ～Ｆに示されるように、ＢＡ１０１（図７Ａ）、ＢＡ１０２（図７Ｂ）、ＢＡ１０３（図７Ｃ）、ＢＡ１０４（図７Ｄ）、ＢＡ１０５（図７Ｅ）、およびＢＡ１０６（図７Ｆ）は、用量依存的様式で活性化初代ヒトＴ細胞に結合した。図７Ａ～Ｆに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）値を表２０に列挙する。
Figure 2022545741000067
活性化初代ヒト細胞への親和性成熟抗ＣＤ９６抗体の結合
ＮＹ－ＥＳＯ－１トランスフェクトＣＤ８＋Ｔ細胞に結合するＢＡ０７２、ＢＡ０８３、ＢＡ０７３、ＢＡ０７４、ＢＡ０７８、ＢＡ０７９、ＢＡ０８０、ＢＡ０８１、ＢＡ０７６、ＢＡ０７７、ＢＡ０７５、ＢＡ０８２、およびＢＡ１０１の能力を試験した。簡潔に述べると、ＮＹ－ＥＳＯ－１形質導入Ｔ細胞の凍結アリコートを、液体窒素から取り出し、流氷が観察されるまで３７℃の水で直ちに解凍した。次いで、細胞を９ｍＬの予め加温されたＲ１０ ＮＹ－ＥＳＯ－１培地に移した。試料を３００ｇで５分間遠心分離し、次いで、Ｒ１０培地を用いて１×１０６細胞／ｍＬの最終濃度まで懸濁した。Ｔ細胞を、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドで形質導入された照射Ｕ２５１ＭＧ細胞を含む組織培養フラスコに１：１希釈で添加し、５％ＣＯ２中、３７℃で、組織培養インキュベーター中で、すべてのＵ２５１ＭＧ細胞が死滅するまでインキュベートした。Ｔ細胞を、新鮮な照射Ｕ２５１ＭＧ ＮＹＥＳＯ細胞を有するフラスコに移し、インキュベーションを繰り返した。このサイクルを８日間にわたって３回繰り返した。
抗体の用量範囲を、９６ウェル丸底プレートで調製した。まず、３００μＬの４０μｇ／ｍＬの各抗体を、緩衝液中で調製した。次いで、抗体を、６２．５μＬの以前の希釈物を２５０μＬの試料緩衝液にピペッティングすることによって、１対５倍に連続希釈した。４０μｇ／ｍＬ～０．０００５１２μｇ／ｍＬの範囲の合計８個の希釈物を調製した。上記からの活性化Ｔ細胞を、４℃で１５分間、５００μＬのＰＢＳ中の２ μＬのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｌ１０１１９）で染色した。細胞を、ＰＢＳで最大１０ｍＬまで培養し、次いで、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を５００μＬの冷たいＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、１：１０に希釈したＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｆｃ受容体遮断溶液、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２）とともに４℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞を、１５ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、５０を、図８Ａ～８Ｍに示される濃度で、５０μＬの抗ＣＤ９６抗体または関連するアイソタイプ対照に１：５０に希釈したＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｆｃ受容体遮断溶液、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２）とともにインキュベートした。試料プレートを、４℃で６０分間インキュベートした。細胞を、冷たい試料緩衝液の添加により洗浄し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。この洗浄を１回繰り返した。
次いで、細胞を、蛍光標識された抗体のカクテル中に再懸濁した。抗体染色のために、細胞を、冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ中に再懸濁した。すべての試料に十分な蛍光標識された抗体のカクテルを、ＦＡＣ緩衝液中で調製した。次いで、１：１００希釈のＲ－フィコエリスリンＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２断片ロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号０９－１１６－１４９）と、１：２００希釈のＣＤ４ ＢＵＶ４９６と、１：２００希釈のＣＤ８ ＡＰＣとを含む５０μＬの緩衝液を、試料プレートに添加した。試料プレートを、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を、冷たい試料緩衝液の添加により洗浄し、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。この洗浄を１回繰り返した。細胞を、ＦＡＣ緩衝液中の１．６％ＰＦＡ中に再懸濁した。
抗体結合を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用してフローサイトメトリーにより測定した。染色されていない対照細胞を使用して、単一細胞選択のための前方散乱光面積（ＦＳＣ－Ａ）対側方散乱光面積（ＳＳＣ－Ａ）のプロット、およびＦＳＣ－Ａ対ＦＳＣの高さ（ＦＳＣ－Ｈ）の別のプロットを使用してリンパ球集団をゲーティングした。各個々の抗体で染色された細胞のチューブを使用して、実験で使用される様々な色の補正を計算した。各試料に対して２０，０００個の事象を記録した。試料を、以下の集団で逐次的にゲーティングすることによって分析した：ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ、ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ、ＳＳＣ－Ａ対ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ、およびＣＤ４対ＣＤ８。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算した。
図８Ａ～８Ｍに示されるように、ＢＡ０７２（図８Ａ）、ＢＡ０８３（図８Ｂ）、ＢＡ０７４（図８Ｃ）、ＢＡ０７３（図８Ｄ）、ＢＡ０７９（図８Ｅ）、ＢＡ０７８（図８Ｆ）、ＢＡ０８１（図８Ｇ）、ＢＡ０８０（図８Ｈ）、ＢＡ０７７（図８Ｉ）、ＢＡ０７６（図８Ｊ）、ＢＡ０８２（図８Ｋ）、ＢＡ０７５（図８Ｌ）、およびＢＡ１０１（図８Ｍ）は、用量依存的様式でＮＹ－ＥＳＯ－１トランスフェクトＣＤ８＋Ｔ細胞に結合した。図８Ａ～８Ｍに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）値を表２１に列挙する。実験を２回行い、１回の繰り返しで提示された結果を代表とする。
Figure 2022545741000068
活性化初代カニクイ ザル細胞への抗ＣＤ９６抗体の結合
この例では、活性化カニクイザル細胞に結合するＢＡ０７２およびＢＡ１０１の能力を試験した。
カニクイザル末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の凍結アリコートを、液体窒素から取り出し、流氷が観察されるまで３７℃の水で直ちに解凍した。次いで、細胞を、９ｍＬの予め加温されたＲ１０培地に移した。２０μＬを除去し、３８０μＬの生存性色素に添加して、細胞をカウントし、Ｍｕｓｅ装置を使用して生存率を確認した。試料を２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、次いで、Ｒ１０培地を用いて１×１０６細胞／ｍＬの最終濃度まで懸濁した。
コンカナバリンＡ（Ｓｉｇｍａ／Ｃ－５２７５）を、上に記載されるように調製されたＰＢＭＣ細胞に、５０ＵのＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ／２０２－ＩＬ）で、５μｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、１００μＬの刺激細胞を、９６ウェル丸底組織培養プレートの各ウェルにピペッティングし、５％ ＣＯ２で、３７℃で８日間インキュベートした。
抗体の用量範囲を、９６ウェル丸底プレートで調製した。まず、６００μＬの５０μｇ／ｍｌの各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照）を、緩衝液中で調製した。次いで、抗体を、２００μＬの以前の希釈物を４００μＬの試料緩衝液にピペッティングすることによって、３倍希釈で滴定した。１０μｇ／ｍｌ～０．３ｎｇ／ｍＬの範囲の合計９個の希釈物を調製した。８日後、試料プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。試料を、ＰＢＳ中のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｌ１０１１９）で１０分間染色した。次いで、試料プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。次いで、細胞を、図９Ａおよび９Ｂに示される濃度で、１００μＬのＢＡ０７２、ＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照に再懸濁した。試料プレートを、４℃で２０分間インキュベートした。細胞を、冷たい試料緩衝液の添加により洗浄し、２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を廃棄した。この洗浄を１回繰り返した。
ＰＥ標識二次抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’２）抗体の最終カクテルを、１１ｍＬのＦＡＣ緩衝液中で調製した。１ウェル当たり５０μＬの二次抗体を、丸底９６ウェルプレートに添加した。４℃で１０分間のインキュベーション後、細胞を、冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳ中の１．６％パラホルムアルデヒド中に再懸濁した。
抗体結合を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用してフローサイトメトリーにより測定した。染色されていない対照細胞を使用して、単一細胞選択のためのＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａのプロット、およびＦＳＣ－Ａ対ＦＳＣ－Ｈの別のプロットを使用してリンパ球集団をゲーティングした。各個々の抗体で染色された細胞のチューブを使用して、実験で使用される様々な色の補正を計算した。各試料に対して５０，０００個の事象を記録した。試料を、以下の集団で逐次的にゲーティングすることによって分析した：ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ、ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ、ＳＳＣ－Ａ対ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ、およびＳＳＣ－Ａ対ＰＥ。ＭＦＩを計算した。
図９Ａおよび９Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図９Ａ）およびＢＡ１０１（図９Ｂ）は、ＣＤ９６を発現する活性化初代カニクイザルＴ細胞に結合した。図９Ａおよび９Ｂに提示される抗ＣＤ９６抗体の計算された曲線下面積（ＡＵＣ）値を表２２に列挙する。
Figure 2022545741000069
抗ＣＤ９６抗体は、ＣＤ９６へのリガンド結合を遮断する
この例では、ＣＤ９６とそのリガンドＰＶＲ（ＣＤ１５５とも称される）との間の結合を遮断する抗ＣＤ９６抗体の能力を試験した。
親抗ＣＤ９６抗体は、ＣＤ９６のＣＨＯ細胞発現ヒトアイソフォーム２へのＣＤ１５５／ＰＶＲ－Ｆｃの結合を遮断する
ＣＤ９６発現ＣＨＯ細胞を、ＰＢＳを用いて１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。１００μＬの細胞を、９６ウェル丸底プレートにアリコートし、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。各抗体（すなわち、ＢＡ０７、ＢＡ１０１、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照）を、ＦＡＣ緩衝液中、３０μｇ／ｍＬで調製した。次いで、抗体を、１１２μＬの以前の希釈物を２２４μＬの試料緩衝液にピペッティングすることによって、３倍希釈で滴定した。３０μｇ／ｍＬ～０．０３３μｇ／ｍＬの範囲の合計７個の作業希釈物を調製した。各抗体濃度の５０μＬを、９６ウェルプレート中の細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。
ＰＶＲ－Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ／１０１０９－Ｈ０２Ｈ－１００）を、ＬＹＮＸ Ｒａｐｉｄ Ｒ－ＰＥ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ／ＬＮＫ０２２ＲＰＥ）を使用してＲ－フィコエリスリンとコンジュゲートした。ＰＶＲ－Ｆｃ－ＰＥを、ＰＢＳ中、５μｇ／ｍＬで再懸濁し、５０μＬの溶液を、抗体を用いて細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。細胞を、冷たいＦＡＣ緩衝液の添加により洗浄した。この洗浄を１回繰り返し、細胞をＰＢＳ中の１．６％パラホルムアルデヒド中に再懸濁した。
抗体結合を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用してフローサイトメトリーにより測定した。染色されていない対照細胞を使用して、単一細胞選択のためのＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａのプロット、およびＦＳＣ－Ａ対ＦＳＣ－Ｈの別のプロットを使用してリンパ球集団をゲーティングした。各個々の抗体で染色された細胞のチューブを使用して、実験で使用される様々な色の補正を計算した。各試料に対して５０，０００個の事象を記録した。試料を、以下の集団で逐次的にゲーティングすることによって分析した：ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ、ＦＳＣ－Ｈ対ＦＳＣ－Ａ、およびＳＳＣ－Ａ対ＰＥ。ＭＦＩを計算した。結合パーセントを以下のように計算した。（ＭＦＩ（試料）－ＭＦＩ（ストレプトアビジン単独バックグラウンド））／（ＭＦＩ（抗体なし完全結合）））×１００
図１０Ａおよび１０Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図１０Ａ）およびＢＡ１０１（図１０Ｂ）は、ＣＤ９６発現細胞へのＰＶＲ－Ｆｃの結合を遮断した。
親抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲへのヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞結合の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断するＢＡ０７２およびＢＡ１０１の能力を試験した。具体的には、ＢＡ０７２、ＢＡ１０１、およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたＣＤ９６のヒトアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。
簡潔に述べると、各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ１０１、およびアイソタイプ対照）の４倍濃縮中間体ストックを、マイクロプレートで調製した。抗体を、ＦＡＣＳ緩衝液中で１対３に連続希釈した。１２０μｇ／ｍＬ～０．０００６７７μｇ／ｍＬの範囲の合計１１個の作業希釈物を調製した。次いで、２５マイクロリットルの各希釈物を、節６．１．２に記載されるように調製された２５μＬのヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞を含む９６ウェルＵ底マイクロプレートに移した。細胞を、４℃で３０分間、抗体希釈物とともに予めインキュベートした後、以下のようにＣＤ９６リガンドを添加した。Ｒ－フィコエリスリン（ＣＤ１５５－Ｈｉｓ－ＰＥ）にコンジュゲートされた３００ｎｇ／ｍＬのヒトＣＤ１５５－Ｈｉｓを含む溶液を、ＦＡＣＳ緩衝液中で調製した。次いで、５０マイクロリットルのヒトＣＤ１５５－Ｈｉｓ－ＰＥのこの作業ストックを、ヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞および抗体を含むマイクロタイタープレートのウェルに添加した。氷上で３０分間のインキュベーション後、細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、細胞をフローサイトメトリー（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター）により分析した。データを、ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－ＡおよびＳＳＣ－Ｈ対ＳＳＣ－Ａ上で逐次的にゲーティングすることによって、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を計算し、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってプロットした。各抗体濃度について、方程式１に従って、抗体の不在下で、ＣＤ１５５－Ｈｉｓ－ＰＥとともにインキュベートされたヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞について得られたＭＦＩ値と、ヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞自家蛍光（バックグラウンド）についてのＭＦＩ値とを使用して、実験データを正規化した。
方程式１
最大シグナル％＝
（ＭＦＩ「抗体」－ＭＦＩ「バックグラウンド」）／（ＭＦＩ「合計」－ＭＦＩ「バックグラウンド」）
（式中、
「抗体」は、ＢＡ０７２またはＢＡ１０１であり、
「バックグラウンド」は、細胞単独（抗体またはＣＤ１５５－ｈｉｓ－ＰＥなし）であり、
「合計」は、抗体の不在下でＣＤ１５５－Ｈｉｓ－ＰＥとともにインキュベートされた細胞である）
ヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞へのＣＤ１５５－Ｈｉｓ－ＰＥ結合の５０％（ＩＣ５０）を阻害する抗体の濃度を決定した。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、４パラメータロジスティック方程式を使用して曲線フィッティングによって計算した。
図１１Ａおよび１１Ｂに示されるように、ＢＡ０７２（図１１Ａ）およびＢＡ１０１（図１１Ｂ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。平均ＩＣ５０値および９５％信頼区間を各抗体について計算し、表２３に報告する。
Figure 2022545741000070
生殖細胞系列抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するヒトアイソフォーム２ ＣＤ９６の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断するＢＡ０７２、ＢＡ０８３、およびＢＡ０８４の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたヒトＣＤ９６のアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。
簡潔に述べると、Ｒ－フィコエリスリン（ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ）にコンジュゲートされた２００ｎｇ／ｍＬのヒトＣＤ１５５－Ｆｃを含む溶液を、ＦＡＣＳ緩衝液中で調製した。次いで、５０マイクロリットルのヒトＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥのこの作業ストックを、９６ウェルＵ底マイクロプレートのウェルに添加した。各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ０８３、ＢＡ０８４、およびアイソタイプ対照）の４倍濃縮中間体ストックを、別個のマイクロプレートで調製した。抗体を、４０μｇ／ｍｌで開始して、ＦＡＣＳ緩衝液中で１対３に連続希釈した。合計１１個の作業希釈物を調製した。次いで、各希釈の２５マイクロリットルを、５０μＬのＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥを含むマイクロプレートに移した。最後に、節６．１．１．に記載されるように調製された２５μＬのヒトＣＤ９６－ＣＨＯ細胞（アイソフォーム２）を各ウェルに添加した。氷上で３０分間のインキュベーション後、細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、細胞をフローサイトメトリー（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター）により分析した。データを、ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－ＡおよびＳＳＣ－Ｈ対ＳＳＣ－Ａ上で逐次的にゲーティングすることによって、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を計算し、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってプロットし、節６．１．１に記載されるように分析した。
図１２Ａ～１２Ｃに示されるように、ＢＡ０７２（図１２Ａ）、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ０８３（図１２Ｂ）およびＢＡ０８４（図１２Ｃ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それらのそれぞれのＩＣ５０値を、表２４に報告する。
Figure 2022545741000071
親和性成熟抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するヒトアイソフォーム２ ＣＤ９６の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断する親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０８５、ＢＡ０８６、ＢＡ０８７、ＢＡ０８９、ＢＡ０９０、ＢＡ０８８、ＢＡ０９１、ＢＡ０９２、ＢＡ０９３、およびＢＡ０９４の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたヒトＣＤ９６のアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始され、ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ濃度が、１μｇ／ｍｌの最終濃度であったことを除いて、節６．１．３に記載されるように設定した。
図１３Ａ～１３Ｌに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１３Ａ）、ＢＡ０８３（図１３Ｂ）、ＢＡ０８５（図１３Ｃ）、ＢＡ０８６（図１３Ｄ）、ＢＡ０８７（図１３Ｅ）、ＢＡ０８９（図１３Ｆ）、ＢＡ０９０（図１３Ｇ）、ＢＡ０８８（図１３Ｈ）、ＢＡ０９１（図１３Ｉ）、ＢＡ０９２（図１３Ｊ）、ＢＡ０９３（図１３Ｋ）、およびＢＡ０９４（図１３Ｌ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表２５に報告する。
Figure 2022545741000072
親和性成熟抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するヒトＣＤ９６のアイソフォーム１の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６のアイソフォーム１とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断する親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０７３、ＢＡ０７４、ＢＡ０７８、ＢＡ０７９、ＢＡ０８０、ＢＡ０８１、ＢＡ０７６、ＢＡ０７７、ＢＡ０８２、およびＢＡ０７５の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたヒトＣＤ９６（アイソフォーム１）と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始され、ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ濃度が、１μｇ／ｍｌの最終濃度であったことを除いて、ＢＡ０７２生殖細胞系列抗体バリアント抗体（節６．１．３）に記載されるように設定した。
図１４Ａ～１４Ｌに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図１４Ａ）、ＢＡ０７４（図１４Ｂ）、ＢＡ０７８（図１４Ｃ）、ＢＡ０７９（図１４Ｄ）、ＢＡ０８０（図１４Ｅ）、ＢＡ０８１（図１４Ｆ）、ＢＡ０７６（図１４Ｇ）、ＢＡ０７７（図１４Ｈ）、ＢＡ０８２（図１４Ｉ）、ＢＡ０７５（図１４Ｊ）、ＢＡ０８３（図１４Ｋ）、およびＢＡ０７２（図１４Ｌ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表２６に報告する。
Figure 2022545741000073
親和性成熟抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するヒトアイソフォーム２ ＣＤ９６の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６のアイソフォーム２とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断する親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０７３、ＢＡ０７４、ＢＡ０７８、ＢＡ０７９、ＢＡ０８０、ＢＡ０８１、ＢＡ０７６、ＢＡ０７７、ＢＡ０８２、およびＢＡ０７５の能力を試験した。ＢＡ０７３，ＢＡ０７４，ＢＡ０７８，ＢＡ０７９，ＢＡ０８０，ＢＡ０８１，ＢＡ０７６，ＢＡ０７７，ＢＡ０８２，具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたヒトＣＤ９６（アイソフォーム２）と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始され、ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ濃度が、１μｇ／ｍｌの最終濃度であったことを除いて、ＢＡ０７２生殖細胞系列抗体バリアント抗体（節６．１．３）に記載されるように設定した。
図１５Ａ～１５Ｌに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図１５Ａ）、ＢＡ０７４（図１５Ｂ）、ＢＡ０７８（図１５Ｃ）、ＢＡ０７９（図１５Ｄ）、ＢＡ０８０（図１５Ｅ）、ＢＡ０８１（図１５Ｆ）、ＢＡ０７６（図１５Ｇ）、ＢＡ０７７（図１５Ｈ）、ＢＡ０８２（図１５Ｉ）、ＢＡ０７５（図１５Ｊ）、ＢＡ０８３（図１５Ｋ）、およびＢＡ０７２（図１５Ｌ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表２７に報告する。
Figure 2022545741000074
生殖細胞系列抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するヒトアイソフォーム２ ＣＤ９６の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６のアイソフォーム２とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断するＢＡ１０１、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ１０２、ＢＡ１０３、ＢＡ１０４、ＢＡ１０５、およびＢＡ１０６の能力を試験した。具体的には、抗体滴定が３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始されたことを除いて、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、ＢＡ０７２生殖細胞系列バリアント抗体について（節６．１．３）上に記載されるように、フローサイトメトリーにより、ＣＨＯ細胞上で過剰発現されたヒトＣＤ９６（アイソフォーム２）と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。
図１６Ａ～１６Ｆに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ１０１（図１６Ａ）、ＢＡ１０２（図１６Ｂ）、ＢＡ１０３（図１６Ｃ）、ＢＡ１０４（図１６Ｄ）、ＢＡ１０５（図１６Ｅ）、およびＢＡ１０６（図１６Ｆ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表２８に報告する。
Figure 2022545741000075
生殖細胞系列抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するヒトアイソフォーム２ ＣＤ９６の遮断
この例では、ヒトＣＤ９６とそのリガンドヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断するＢＡ１０１およびバリアントＢＡ１０７の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたヒトＣＤ９６のアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、１５μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始されことを除いて、ＢＡ０７２生殖細胞系列抗体バリアント抗体（節６．１．３）に記載されるように設定した。
図１７Ａおよび１７Ｂに示されるように、ＢＡ１０１（図１７Ａ）およびＢＡ１０７（図１７Ｂ）抗体は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表２９に報告する。
Figure 2022545741000076
生殖細胞系列抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２の遮断
この例では、カニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２（配列番号１３３）とヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断するＢＡ０７２、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ０８３およびＢＡ０８４の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。
簡潔に述べると、Ｒ－フィコエリスリン（ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ）にコンジュゲートされた２００ｎｇ／ｍＬのヒトＣＤ１５５－Ｆｃを含む溶液を、ＦＡＣＳ緩衝液中で調製した。次いで、５０マイクロリットルのヒトＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥのこの作業ストックを、９６ウェルＵ底マイクロプレートのウェルに添加した。各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ０８３、ＢＡ０８４、およびアイソタイプ対照）の４倍濃縮中間体ストックを、別個のマイクロプレートで調製した。抗体を、３０μｇ／ｍｌで開始して、ＦＡＣＳ緩衝液中で１対３に連続希釈した。合計１１個の作業希釈物を調製した。次いで、各希釈の２５マイクロリットルを、５０μＬのＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥを含むマイクロプレートに移した。最後に、節６．１．２．に記載されるように調製された２５μＬのＣＨＯ細胞を発現するカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２を、各ウェルに添加した。氷上で３０分間のインキュベーション後、細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、細胞をフローサイトメトリー（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター）により分析した。データを、ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－ＡおよびＳＳＣ－Ｈ対ＳＳＣ－Ａ上で逐次的にゲーティングすることによって、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を計算し、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってプロットし、節６．１．２に記載されるように分析した。
図１８Ａ～１８Ｃに示されるように、ＢＡ０７２（図１８Ａ）、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ０８３（図１８Ｂ）およびＢＡ０８４（図１８Ｃ）は、ＣＤ１５５に結合するカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表３０に報告する。
Figure 2022545741000077
親和性成熟抗ＣＤ９６抗体による可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するＣＨＯ細胞を発現するカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２の遮断
この例では、カニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２とヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断する親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０８５、ＢＡ０８６、ＢＡ０８８、ＢＡ０８７、ＢＡ０８９、ＢＡ０９０、ＢＡ０９１、ＢＡ０９２、ＢＡ０９３、およびＢＡ０９４の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始され、ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ濃度が、１μｇ／ｍｌの最終濃度であったことを除いて、ＢＡ０７２生殖細胞系列抗体バリアント抗体（節６．１．３）に記載されるように設定した。
図１９Ａ～１９Ｌに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（図１９Ａ）、ＢＡ０８３（図１９Ｂ）、ＢＡ０８５（図１９Ｃ）、ＢＡ０８６（図１９Ｄ）、ＢＡ０８８（図１９Ｅ）、ＢＡ０８７（図１９Ｆ）、ＢＡ０８９（図１９Ｇ）、ＢＡ０９０（図１９Ｈ）、ＢＡ０９１（図１９Ｉ）、ＢＡ０９２（図１９Ｊ）、ＢＡ０９３（図１９Ｋ）、およびＢＡ０９４（図１９Ｌ）は、ＣＤ１５５に結合するカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表３１に報告する。
Figure 2022545741000078
可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するカニクイザルＣＤ９６ ＣＨＯ細胞のアイソフォーム１の遮断
この例では、カニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム１とヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断する親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０７４、ＢＡ０７８、ＢＡ０７９、ＢＡ０８０、ＢＡ０８１、ＢＡ０７６、ＢＡ０７７、ＢＡ０８２、ＢＡ０７５、およびＢＡ０７２の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたカニクイザルアイソフォーム１のＣＤ９６のアイソフォーム１と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始され、ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ濃度が、１μｇ／ｍｌの最終濃度であったことを除いて、ＢＡ０７２生殖細胞系列抗体バリアント抗体（節６．１．３）に記載されるように設定した。
図２０Ａ～２０Ｌに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図２０Ａ）、ＢＡ０７４（図２０Ｂ）、ＢＡ０７８（図２０Ｃ）、ＢＡ０７９（図２０Ｄ）、ＢＡ０８０（図２０Ｅ）、ＢＡ０８１（図２０Ｆ）、ＢＡ０７６（図２０Ｇ）、ＢＡ０７７（図２０Ｈ）、ＢＡ０８２（図２０Ｉ）、ＢＡ０７５（図２０Ｊ）、ＢＡ０８３（図２０Ｋ）、およびＢＡ０７２（図２０Ｌ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表３２に報告する。
Figure 2022545741000079
可溶性ヒトＣＤ１５５／ＰＶＲに結合するカニクイザルＣＤ９６発現ＣＨＯ細胞のアイソフォーム２の遮断
この例では、カニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２とヒトＣＤ１５５（ＰＶＲとも称される）との間の結合を遮断する親抗体ＢＡ０７２、生殖細胞系列抗体ＢＡ０８３、ならびに親和性成熟バリアントＢＡ０７３、ＢＡ０７４、ＢＡ０７８、ＢＡ０７９、ＢＡ０８０、ＢＡ０８１、ＢＡ０７６、ＢＡ０７７、ＢＡ０８２、およびＢＡ０７５の能力を試験した。具体的には、これらの抗体およびアイソタイプ対照を、フローサイトメトリーによってＣＨＯ細胞上に過剰発現されたカニクイザルＣＤ９６のアイソフォーム２と可溶性ヒトＣＤ１５５との間の結合を遮断するそれらの能力についてインビトロで試験した。実験は、抗体滴定が、３０μｇ／ｍｌの最終的な最高濃度で開始され、ＣＤ１５５－Ｆｃ－ＰＥ濃度が、１μｇ／ｍｌの最終濃度であったことを除いて、ＢＡ０７２生殖細胞系列抗体バリアント抗体（節６．１．３）に記載されるように設定した。
図２１Ａ～２１Ｌに示されるように、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７３（図２１Ａ）、ＢＡ０７４（図２１Ｂ）、ＢＡ０７８（図２１Ｃ）、ＢＡ０７９（図２１Ｄ）、ＢＡ０８０（図２１Ｅ）、ＢＡ０８１（図２１Ｆ）、ＢＡ０７６（図２１Ｇ）、ＢＡ０７７（図２１Ｈ）、ＢＡ０８２（図２１Ｉ）、ＢＡ０７５（図２１Ｊ）、ＢＡ０８３（図２１Ｋ）、またはＢＡ０７２（図２１Ｌ）は、ＣＤ１５５へのヒトＣＤ９６結合を完全にまたは部分的に遮断した。それぞれのＩＣ５０値を、表３３に報告する。
Figure 2022545741000080
抗ＣＤ９６抗体は、ＣＤ９６発現細胞へのＣＤ１５５／ＰＶＲ発現細胞の結合を遮断する
ＣＤ９６発現ＣＨＯ細胞およびＰＶＲ発現ＣＨＯ細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、１２００ｒｐｍで５分間スピンダウンした。２０μＬを除去し、３８０μＬの生存性色素に添加して、細胞をカウントし、Ｍｕｓｅ装置を使用して生存率を確認した。試料を１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いで、ＰＫＨ２６ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｋｅｒ Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ／ＰＫＨ２６ＧＬ）またはＰＫＨ６７ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｋｅｒ Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ／ＰＫＨ６７ＧＬ）のいずれかから、希釈Ｃで１×１０７細胞／ｍＬの最終濃度まで懸濁した。４μＬのＰＫＨ２６赤色色素を１ｍＬの希釈Ｃで調製し、１ｍＬの再懸濁ＰＶＲ発現ＣＨＯ細胞に添加し、４μＬのＰＫＨ６７緑色色素を１ｍＬの希釈Ｃで調製し、１ｍＬの再懸濁ＣＤ９６発現ＣＨＯ細胞に添加した。細胞を、室温で５分間、色素とともにインキュベートした。
１０ｍＬのＰｏｗｅｒＣＨＯ培地を、標識細胞の各チューブに添加し、室温で１分間インキュベートした。細胞を１２００ｒｐｍで５分間スピンダウンし、１０ｍＬのＰｏｗｅｒＣＨＯ培地で２回洗浄した。
標識細胞を、１０％熱不活化ＦＢＳおよび１％ＨＥＰＥＳ緩衝液を補充した１ｍＬのＨＢＳＳ中に再懸濁し、８×１０５細胞／ｍＬで再懸濁した。２５μＬの標識ＣＤ９６発現ＣＨＯ細胞を、９６ウェル丸底プレートの各ウェルに添加した。
各抗体（すなわち、ＢＡ０７２、ＢＡ１０１、その生殖細胞系列バリアント、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照）を、ＦＡＣ緩衝液中、３０μｇ／ｍＬで調製した。次いで、抗体を、１１２μＬの以前の希釈物を、調製された３０μｇ／ｍＬ～０．１μｇ／ｍＬの範囲の２２４μＬの試料緩衝液にピペッティングすることによって、３倍希釈で滴定した。各抗体濃度の２５μＬを、９６ウェルプレート中の細胞に添加し、室温で３０分間インキュベートした。その間で洗浄することなく、２５μＬの標識ＰＶＲ発現ＣＨＯ細胞を、１ウェル当たり合計７５μＬで、９６ウェルプレートの各ウェルに添加し、３７℃および５％ＣＯ２で４５分間インキュベートした。
コンジュゲート形成を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用してフローサイトメトリーにより直ちに測定した。各色素で染色された細胞のチューブを使用して、赤色ＰＫＨ２６標識細胞（ＰＥチャネル）および緑色ＰＫＨ６７標識細胞（ＦＩＴＣチャネル）の補正を計算した。各試料に対して５０，０００個の事象を記録した。試料を、以下の集団で逐次的にゲーティングすることによって分析した：ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ、およびＦＩＴＣ対ＰＥ。図２２Ｃに示されるように、遮断が発生しない場合、コンジュゲートは、散乱プロットの象限Ｑ２に現れる。遮断抗体が存在する場合、コンジュゲートは形成することができず、散乱プロットの象限Ｑ２ではコンジュゲートは検出されない。コンジュゲートパーセントを計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてプロットした。
図２２Ａおよび２２Ｂに示されるように、ＢＡ０７２およびＢＡ１０１は、用量依存的様式で、ＣＤ９６発現細胞へのＰＶＲ発現細胞の結合（コンジュゲート形成）を遮断した。図２３に示されるように、ＢＡ０７２、ＢＡ０８３、およびＢＡ０８４は、用量依存的様式で、ＣＤ９６発現細胞へのＰＶＲ発現細胞の結合を遮断した。図２４に示されるように、ＢＡ１０１、ＢＡ１０２、ＢＡ１０３、ＢＡ１０４、ＢＡ１０５、およびＢＡ１０６は、ＣＤ９６発現細胞へのＰＶＲ発現細胞の結合を遮断した。
実施例２：抗ＣＤ９６抗体の機能性および併用治療
抗ＣＤ９６抗体は、初代細胞によるＴＨ１サイトカイン分泌を強化する
抗ＣＤ９６抗体は、用量依存的様式で刺激されたＰＢＭＣによるＩＬ－２分泌を増強する
ある用量範囲の抗ＣＤ９６（ＢＡ０７２およびＢＡ１０１）およびアイソタイプ対照抗体を、１．２ｍｌのブレットチューブ中で、４倍濃度で調製した。まず、６００μＬの２００μｇ／／ｍＬ（５０μｇ／ｍＬの最終濃度）の各抗体を、Ｒ１０培地中で調製した。次いで、抗体を、５０μｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの最終濃度まで１０倍希釈で滴定した。９６ウェル丸底プレートで、２５μｌの各抗ＣＤ９６抗体またはアイソタイプ対照抗体を、対応するウェルにピペッティングした。
そのそれぞれのアイソタイプ対照を有する抗ＰＤ－１抗体を、Ｒ１０培地中、２０μｇ／ｍＬの４倍最終濃度（５μｇ／ｍＬの最終濃度）で調製した。２５μｌの抗ＰＤ－１またはアイソタイプ抗体を、以前に調製した抗体を用いて対応するウェルに添加した。ヒトＰＢＭＣの凍結アリコートを、液体窒素から取り出し、流氷が観察されるまで３７℃の水で直ちに解凍した。細胞を、１０ｍＬの予め加温されたＲ１０培地に移し、１２００ｒｐｍで５分間直ちに遠心分離した。細胞をカウントし、生存率を確認するために、２０μｌの試料を除去し、３８０μＬの生存性色素に添加し、混合し、Ｍｕｓｅ装置を使用して読み取った。
試料を１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、Ｒ１０培地中で２×１０６細胞／ｍＬの濃度に再懸濁した。１μＬの１０００μｇ／ｍＬのＳＥＡを９９μＬのＲ１０に添加して、１０μｇ／ｍＬの中間体濃縮を作製することによって、ＳＥＡの中間体ストック濃縮を作製した。細胞を刺激するために、２倍の最終濃度の２ｎｇ／ｍＬ（１ｎｇ／ｍＬの最終濃度）のＳＥＡを、上記で調製した細胞に添加した。５０μＬの細胞（０．１×１０６細胞／ウェル）およびＳＥＡ混合物を、抗体を含む対応するウェルに添加し、加湿チャンバ内で、３７℃および５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。
４日間のインキュベーション後、プレートをインキュベーターから取り出した。次いで、プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。サイトカイン分析のために、５μＬの上清を３８４ウェルのＡｌｐｈａＬＩＳＡプレートに移した。ＩＬ－２分泌の測定には、ＡｌｐｈａＬＩＳＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用した。簡潔に述べると、アッセイ緩衝液を、２．５ｍＬの１０倍ＡｌｐｈａＬＩＳＡイムノアッセイ緩衝液を２２．５ｍＬの水にピペッティングすることによって調製した。ヒトＩＬ－２分析物を使用して、標準希釈物を調製した。１．６倍ＡｌｐｈａＬＩＳＡ抗ＩＬ－２アクセプタービーズおよびビオチン化抗ＩＬ－２抗体の混合物を、アッセイ緩衝液中で調製した。８μＬを各ウェルに添加し、暗所で、室温でインキュベートした。ＡｌｐｈａＬＩＳＡプレートを２０００ｒｐｍで手短に遠心分離した。２．３倍ストレプトアビジンドナービーズ中間体ストックを、アッセイ緩衝液中で調製した。１０μＬを各ウェルに添加し、暗所で、室温でインキュベートした。ＡｌｐｈａＬＩＳＡプレートを２０００ｒｐｍで手短に遠心分離した。相対光単位（ＲＬＵ）を、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー上でＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコルを使用して測定した。結果をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでプロットし、対応のないｔ検定を使用して統計分析を行った。
図２５Ａ～２５Ｈに示されるように、ＢＡ０７２またはＢＡ１０１は、抗ＰＤ－１なしおよびありの両方で、平均して、アイソタイプ対照に対してＩＬ－２分泌を増強した。この応答は概して用量依存的であった。図２５Ａ～２５Ｄは、第１のドナーでの第１の実験を表し、図２５Ｅ～２５Ｈは、第２のドナーでの第２の実験を表す。
抗ＣＤ９６親和性成熟抗ＣＤ９６抗体は、刺激されたＰＢＭＣによるＩＬ－２分泌を増強する
この例の実験を、上記の節の手順の概要に従って、以下の変更とともに実施した。抗体（ＢＡ０７２、その親和性成熟バリアント、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体）を、０．２μｇ／ｍｌの４倍濃度（０．０５μｇ／ｍｌの最終濃度）で、１．２ｍｌのブレットチューブ中で調製し、各抗体の２５μｌを、９６ウェルプレート中の対応するウェルに添加した。
図２６Ａ～２６Ｆに示されるように、抗ＰＤ－１ありおよびなしのＢＡ０８３、ＢＡ０７３、ＢＡ０８０、およびＢＡ０７６は、アイソタイプ対照と比較して、すべてのドナーにおいてＩＬ－２分泌の増加をもたらした。図２６Ａおよび２６Ｂは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２６Ａ）、および抗ＰＤ－１抗体あり（図２６Ｂ）の１つの実験を表す。図２６Ｃおよび２６Ｄは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２６Ｃ）およびあり（図２６Ｄ）の、異なるドナーでの第２の実験を表す。図２６Ｅおよび２６Ｆは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２６Ｅ）およびあり（図２６Ｆ）の、異なるドナーでの第３の実験を表す。
図２７Ａ～２７Ｆに示されるように、ＢＡ０７２、ＢＡ０７４、ＢＡ０７９、ＢＡ０８１、ＢＡ０７７、ＢＡ０８２、およびＢＡ０７５は、抗ＰＤ－１なしおよびありの両方で、平均して、アイソタイプ対照に対してＩＬ－２分泌を増強した。図２７Ａおよび２７Ｂは、抗ＰＤ－１なし（図２７Ａ）、および抗ＰＤ－１抗体あり（図２７Ｂ）の１つの実験を表す。図２７Ｃおよび２７Ｄは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２７Ｃ）およびあり（図２７Ｄ）の、異なるドナーでの第２の実験を表す。図２７Ｅおよび２７Ｆは、抗ＰＤ－１抗体なし（図２７Ｅ）およびあり（図２７Ｆ）の、異なるドナーでの第３の実験を表す。
抗ＣＤ９６抗体は、ヒトＣＤ９６ Ｔ細胞レポーターアッセイにおいてＣＤ９６を遮断し、ＴＣＲ－ＮＦＡＴおよびＮＦｋＢシグナル伝達を増加させる
ＮＦＡＴ－ＬｕｃおよびＮＦｋＢ－Ｌｕｃ Ｊｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ９６遮断
ＣＤ９６を発現するように実験室で操作されたＪｕｒｋａｔ細胞、およびＮＦＡＴ－ルシフェラーゼまたはＮＦｋＢ－ルシフェラーゼのいずれかを、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンを含むＲ１０培地中で培養した。これらのＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、１２００ｒｐｍで５分間スピンダウンし、１×１０６細胞／ｍＬでＲ１０培地中に再懸濁した。抗ＣＤ２８抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／３４７６９８）を、２μｇ／ｍＬの４倍最終濃度（０．５μｇ／ｍＬの最終濃度）でＮＦｋＢ－ルシフェラーゼレポーターＪｕｒｋａｔ細胞にのみ添加した。２５μＬのレポーター細胞を、アッセイプレート上のＣＨＯ細胞および抗体を含む対応するウェルに添加し（一緒にではない）、３７℃および５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。
この例では、ＣＤ９６レポーター細胞とＰＶＲ発現細胞との間の結合を遮断し、ＮＦＡＴおよびＮＦｋＢによりＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達を増強する可溶性ＢＡ０７２の能力を試験した。
高レベルのＰＶＲおよび抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）を発現するように実験室で操作された、選別およびクローン性ＣＨＯ細胞を、５×１０５細胞／ｍＬで、Ｒ１０培地中に再懸濁した。５０μＬの細胞（２．５×１０４細胞）を、白色の９６ウェル平底アッセイプレート上に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で４時間インキュベートして接着させた。
ＢＡ０７２およびＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を、Ｒ１０培地中、４０μｇ／ｍＬの４倍最終濃度（１０μｇ／ｍＬの最終濃度）で調製し、１１２μｇの以前の希釈物を、２２４μｇの試料緩衝液にピペッティングすることによって、３倍希釈で滴定した。４時間のインキュベーション後、各抗体濃度の２５μＬを、アッセイプレート中の接着ＣＨＯ細胞を含む対応するウェルに添加した。
４時間後、プレートを１５分間室温に平衡化し、次いで、１ウェル当たり１００μＬのＮａｎｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ／Ｎ１１２０）を添加した。次いで、混合物を室温で５分間インキュベートし、発光をプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して測定した。ＲＬＵを計算した。ＲＬＵ（誘導）－ＲＬＵ（バックグラウンド）デルタＲＬＵを以下のように計算し、ＲＬＵ（ＢＡ０７２）－ＲＬＵ（アイソタイプ）、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してプロットした。
図２８Ａおよび２８Ｂに示されるように、ＢＡ０７２は、ヒトＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞において、アイソタイプ対照に対して、ＴＣＲ－ＮＦＡＴ（図２８Ａ）およびＮＦκＢ（図２８Ｂ）の両方のシグナル伝達を増加させた（図２８Ｃ）。
同様の実験において、ＣＤ９６誘導シグナル伝達に対するＣＤ２６６発現の影響を調査した。図２８Ａ～２８Ｃについて上に記載されるように実験を行ったが、しかしながら、使用したレポーター細胞は、ＣＤ９６およびＮＦＡＴ－ルシフェラーゼを発現するように実験室で操作されたＪｕｒｋａｔ細胞（図２９Ａ）、またはＣＤ２２６ノックアウトを含むＣＤ９６およびＮＦＡＴ－ルシフェラーゼを発現するように実験室で操作されたＪｕｒｋａｔ細胞（図２９Ｂ）であった。図２９Ａおよび２９Ｂに示されるように、ＢＡ０７２は、アイソタイプ対照に対してＴＣＲ－ＮＦＡＴを増加させ、この効果がＣＤ２２６発現に依存しなかったことを示す。
実施例３：抗ＣＤ９６抗体のＦｃバリアント
この例では、ＢＡ０７２の結合および機能活性に対するＦｃ領域／ＦｃγＲ相互作用の影響を分析した。特に、表３４に要約されるように、ＢＡ０７２のＶＨ領域は、様々なＦｃ骨格で発現された。
Figure 2022545741000081
次いで、ＢＡ０７２のこれらのＦｃバリアントを、以下に記載されるように、機能的アッセイで試験した。
ＢＡ０７２のＦｃバリアントは、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞での共培養におけるＣＤ９６＋Ｊｕｒｋａｔ細胞の殺傷を増強した
ＢＡ０７２のＦｃバリアントを、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＣＤ１６発現ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の共培養において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を誘導するそれらの能力について調べた。簡潔に述べると、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、１０％のウシ胎児血清（Ｂｅｎｃｈｍａｒｋカタログ番号１００－１０６、ロットＡ６９Ｅ００Ｆ）および１％Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐグルタミン（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１０３７８－０１６）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号１０－０４０－ＣＭ）中で培養した。ＮＫ細胞を、５％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ４５２２）、１％Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐグルタミン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１０３７８－０１６）、１００単位／ｍＬのＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２０２－１６）、および１００単位／ｍＬのＩＬ－１５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２４７－ＩＬＢ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号１０－０４０－ＣＭ）中で培養した。２００万個のＪｕｒｋａｔ細胞を、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離することによってペレット化した。細胞を、ＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号２１－０４０－ＣＶ）中１ｍＬの０．５μＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ３４５６５）中のペレットを再懸濁し、３７℃および５％のＣＯ２で３０分間インキュベートすることによって染色した。インキュベーション後、９ｍＬのＰＢＳを添加し、細胞を３００ｇで５分間遠心分離することによってペレット化した。次いで、細胞ペレットを、１μＭのＣｅｌｌＥｖｅｎｔ カスパーゼ－３／７緑色検出試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ１０４２３）を含むＪｕｒｋａｔ培養培地中に再懸濁した。抗体を、その最終濃度の３倍で、ＮＫ培養培地で希釈した。染色されたＪｕｒｋａｔ細胞を、１ｍＬ当たり６２．５万細胞に希釈し、ＮＫ細胞を、１ｍＬ当たり６２．５万細胞に希釈した。１ウェル当たり、２０μＬの抗体、２０μＬの染色されたＪｕｒｋａｔ細胞（１２５００細胞）、および２０μＬのＮＫ細胞（１２５００細胞）をピペッティングすることによって、３８４ウェル顕微鏡プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号７８１９３６）を参照）でアッセイを行った。
環境制御下（３７℃、５％ＣＯ２）でＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ Ｍｉｃｒｏ Ｃｏｎｆｏｃａｌハイコンテント顕微鏡（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してライブイメージングを直後に実施し、画像を、それぞれ、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびカスパーゼ３／７陽性Ｊｕｒｋａｔ細胞に対して、Ｃｙ５（ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄ）およびＦＩＴＣ（カスパーゼ３／７）チャネルから、４時間にわたって３０分ごとに取得した。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ分析ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して画像分析を行った。Ｊｕｒｋａｔ細胞をＣｙ５チャネルから同定し、カスパーゼ３／７シグナルの量をＦＩＴＣチャネルから細胞当たりで定量した。バックグラウンドを上回るカスパーゼ３／７強度を有する細胞をアポトーシスとして指定した。アポトーシス細胞の数を、条件ごとの合計細胞カウントに対して正規化して、殺傷パーセントの測定値を決定した。
図３０Ａ～３０Ｃに示されるように、Ｆｃ増強ＢＡ０７２（ＢＡ１０９）（図３０Ｂ）は、ＢＡ０７２（図３０Ａ）およびＢＡ０７２（ＢＡ１０８）の「Ｆｃサイレント」Ｎ２９７Ａ変異（図３０Ｃ）、ならびにアイソタイプ対照よりも高い程度に、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞の殺傷を促進する。
ＦｃγＲＩＩＩＡにより抗ＣＤ９６抗体Ｆｃバリアントシグナル伝達
別の例では、ＦｃγＲＩＩＩＡＶ１５８を発現するレポーター細胞を活性化するＢＡ０７２ Ｆｃバリアントの能力を試験した。
２５μＬの標的細胞（すなわち、節６．１．２に記載される高レベルのヒトＣＤ９６を発現するように実験室で操作されたＪｕｒｋａｔ細胞）を、ＡＤＣＣアッセイプレート（１．５×１０６細胞／ｍＬ）のウェルに添加した。抗体（すなわち、ＢＡ０７２、そのＦｃバリアント、または対応するアイソタイプ対照）の３倍連続希釈物を、４％低ＩｇＧ ＦＢＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ／Ｇ７１１Ａ）（ＡＤＣＣアッセイ緩衝液）を補充したＲＰＭＩ－１６４０中で３０μｇ／ｍＬ～０．０００３μｇ／ｍＬ（１０μｇ／ｍＬ～０．０００１μｇ／ｍＬの範囲の最終濃度）の範囲の３倍最終濃度で調製し、２５μＬの３倍抗体希釈物を、標的細胞を含むアッセイプレートウェルに添加した。エフェクター細胞（すなわち、培養中６週間未満で、高親和性１５８ Ｖ／Ｖ多型でＦｃγＲＩＩＩＡ ＣＤ１６Ａを過剰発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞、Ｐｒｏｍｅｇａ／Ｇ７１０２）を、ＡＤＣＣアッセイ緩衝液中、６×１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、アッセイプレート（１５０，０００細胞／ウェル）上の各ウェルに２５μＬを添加した。次いで、アッセイプレートを、３７℃および５％ＣＯ２で２０時間インキュベートした。エフェクター細胞表面上のＣＤ１６Ａへの、標的細胞表面上の抗体／抗原複合体の結合は、レポーター構築物へのシグナル伝達およびルシフェラーゼの発現をもたらす。
翌日、プレートを１５分間室温に平衡化し、次いで、１ウェル当たり７５μＬのＢｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ／Ｇ７９４０）を添加した。次いで、混合物を室温で５～１０分間インキュベートし、発光をプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）を使用して測定した。ＲＬＵを計算した。ＲＬＵ（誘導）－ＲＬＵ（バックグラウンド）
図３１Ａ～３１Ｃに示されるように、ＦｃγＲＩＩＩＡ結合およびシグナル伝達について、ＢＡ０７２（図３１Ａ）、ＢＡ１０８（図３１Ｃ）、およびアイソタイプ対照は、シグナル伝達を示さず、一方で、ＢＡ１０９（図３１Ｂ）は、ＦｃγＲＩＩＩＡによるシグナル伝達を呈した。
抗ＣＤ９６抗体Ｆｃバリアントに対するＴ細胞応答
この例では、初代Ｔ細胞：ＡＰＣ共培養アッセイにおけるＴ細胞応答を誘発するＢＡ０７２のＦｃバリアントの能力を試験した。
ある用量範囲の抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２（ＩｇＧ１）およびＢＡ１０８（ＢＡ０７２のＦｃサイレントバリアント）、ならびにアイソタイプ対照抗体を、１．２ｍｌのブレットチューブ中で、２倍濃度で調製した。まず、６００μＬの１００μｇ／／ｍＬ（５０μｇ／ｍＬの最終濃度）の各抗体を、Ｒ１０培地中で調製した。次いで、抗体を、５０μｇ／ｍＬ～０．０５ｎｇ／ｍＬの最終濃度まで１０倍希釈で滴定した。９６ウェル丸底プレートで、５０μｌの各抗ＣＤ９６抗体またはアイソタイプ対照抗体を、対応するウェルにピペッティングした。
ヒトＰＢＭＣの凍結アリコートを、液体窒素から取り出し、流氷が観察されるまで３７℃の水で直ちに解凍した。細胞を、１０ｍＬの予め加温されたＲ１０培地に移し、１２００ｒｐｍで５分間直ちに遠心分離した。２０μＬの各試料を除去し、３８０μＬの生存性色素に添加して、細胞をカウントし、Ｍｕｓｅ装置を使用して生存率を確認した。
試料を１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、Ｒ１０培地中で２×１０６細胞／ｍＬの濃度に再懸濁した。１μＬの１０００μｇ／ｍＬのＳＥＡを９９μＬのＲ１０に添加して、１０μｇ／ｍＬの中間体濃縮を作製することによって、ＳＥＡの中間体ストック濃縮を作製した。細胞を刺激するために、１ｎｇ／ｍＬのＳＥＡを、上記で調製した細胞に添加した。５０μＬの細胞（０．１×１０６細胞／ウェル）およびＳＥＡ混合物を、抗体を含む対応するウェルに添加し、加湿チャンバ内で、３７℃および５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。
４日間のインキュベーション後、プレートをインキュベーターから取り出した。次いで、プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。サイトカイン分析のために、５μＬの上清を３８４ウェルのＡｌｐｈａＬＩＳＡプレートに移した。ＩＬ－２分泌の測定には、ＡｌｐｈａＬＩＳＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用した。簡潔に述べると、アッセイ緩衝液を、２．５ｍＬの１０倍ＡｌｐｈａＬＩＳＡイムノアッセイ緩衝液を２２．５ｍＬの水にピペッティングすることによって調製した。ヒトＩＬ－２分析物を使用して、標準希釈物を調製した。１．６倍ＡｌｐｈａＬＩＳＡ抗ＩＬ－２アクセプタービーズおよびビオチン化抗ＩＬ－２抗体の混合物を、アッセイ緩衝液中で調製した。８μＬを各ウェルに添加し、暗所で、室温でインキュベートした。ＡｌｐｈａＬＩＳＡプレートを２０００ｒｐｍで手短に遠心分離した。２．３倍ストレプトアビジンドナービーズ中間体ストックを、アッセイ緩衝液中で調製した。１０μＬを各ウェルに添加し、暗所で、室温でインキュベートした。ＡｌｐｈａＬＩＳＡプレートを２０００ｒｐｍで手短に遠心分離した。相対光単位（ＲＬＵ）を、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー上でＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコルを使用して測定した。結果をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでプロットし、対応のないｔ検定を使用して統計分析を行った。
図３２Ａおよび図３２Ｂに示されるように、ＢＡ０７２は、ドナー１およびドナー２の両方からのＰＢＭＣ試料において、アイソタイプ対照に対して増強されたＩＬ－２分泌を誘発した。この応答は概して用量依存的であった。ＢＡ１０８によって誘発されたＩＬ－２分泌は、アイソタイプ対照と同等であった。
実施例４：ＣＤ９６内在化
ＣＤ９６過剰発現Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＤ９６内在化
ＢＡ０７２のバリアントを、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ９６の抗体依存性内在化を誘導するそれらの能力について検証した。簡潔に述べると、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、１０％のウシ胎児血清（Ｂｅｎｃｈｍａｒｋカタログ番号１００－１０６、ロットＡ６９Ｅ００Ｆ）および１％Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐグルタミン（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１０３７８－０１６）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号１０－０４０－ＣＭ）中で培養した。２００万個のＪｕｒｋａｔ細胞を、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離することによってペレット化した。細胞を、ＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号２１－０４０－ＣＶ）中１ｍＬの０．５μＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ３４５６５）およびＨａｌｏＴａｇ Ｌｉｇａｎｄ ＡＦ４８８（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ１００Ａ）の１：５００の希釈物中のペレットを再懸濁し、３７℃および５％のＣＯ２で１５分間インキュベートすることによって染色した。インキュベーション後、９ｍＬのＰＢＳを添加し、細胞を３００ｇで５分間遠心分離することによってペレット化した。次いで、細胞ペレットをＪｕｒｋａｔ培養培地に再懸濁した。抗体を、それらの２倍最終濃度（１０μｇ／ｍＬ）で、培養培地で希釈した。染色されたＪｕｒｋａｔ細胞を、１ｍＬ当たり４０万細胞に希釈した。１ウェル当たり、３０μＬの抗体および３０μＬの染色されたＪｕｒｋａｔ細胞（１２５００細胞）をピペッティングすることによって、３８４ウェル顕微鏡プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号７８１９３６）を参照）でアッセイを行った。
環境制御下（３７℃、５％ＣＯ２）でＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ Ｍｉｃｒｏ Ｃｏｎｆｏｃａｌハイコンテント顕微鏡（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してライブイメージングを直後に実施し、画像を、Ｊｕｒｋａｔ細胞に対して、Ｃｙ５（ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄ）およびＦＩＴＣ（ＨａｌｏＴａｇ Ｌｉｇａｎｄ）チャネルから、８時間にわたって毎時間取得した。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ分析ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して画像分析を行った。Ｊｕｒｋａｔ細胞をＣｙ５チャネルから同定し、ＨａｌｏＴａｇリガンドシグナルの量をＦＩＴＣチャネルから細胞当たりで定量した。バックグラウンドを上回るＨａｌｏＴａｇリガンド強度を有する細胞を、内在化として指定した。内在化細胞の数を、条件ごとの合計細胞カウントに対して正規化して、内在化パーセントの測定値を決定した。
図３３Ａ～３３Ｄに示されるように、ＢＡ０７２（図３３Ａ）、ＢＡ１０１（図３３Ｂ）、参照Ａ（図３３Ｃ）、およびＰＶＲ－Ｆｃ（図３３Ｄ）は、アイソタイプ対照に対して、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ９６のより高いレベルの内在化を促進した。
図３４に示されるように、ＢＡ０７２（図３４Ａ）、ならびに生殖細胞系列バリアントＢＡ０８３（図３４Ｂ）およびＢＡ０８４（図３４Ｃ）は、アイソタイプ対照に対して、ＣＤ９６発現Ｊｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ９６のより高いレベルの内在化を促進した。
初代細胞におけるＣＤ９６内在化
この例では、ＣＤ９６を発現する初代活性化Ｔ細胞への、抗ＣＤ９６抗体ＢＡ０７２の内在化を分析した。ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）にコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体を使用して、ＢＡ０７２またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の内在化を評価した。この二次抗体薬物コンジュゲートαＨＦｃ－ＰＢＤは、抗体（例えば、ＢＡ０７２）に結合し、内在化時に細胞傷害性ペイロードＰＢＤの細胞質への放出をもたらす。
簡潔に述べると、ＣＤ９６を発現する予め活性化された初代Ｔ細胞を、１ウェル当たり５×１０４の密度で白色底部組織培養プレートに播種した。二次抗体薬物コンジュゲートαＨＦｃ－ＰＢＤを使用して、ＢＡ０７２またはＩｇＧアイソタイプ対照抗体のいずれかの３倍希釈（３．３μｇ／ｍｌ～０．００３μｇ／ｍｌ）で、αＨＦｃ－ＰＢＤ（一次抗体と１：１）と共同して、７点用量滴定を、１００μｌ／ウェルの最終体積で細胞に添加した。細胞を、一次抗体および二次抗体薬物コンジュゲートとともに３７℃および５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。
インキュベーション後、９０μｌの再構成されたＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、細胞を室温で５分間インキュベートした。得られた発光を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して記録した。
図３５Ａおよび３５Ｂに示されるように、ＢＡ０７２は、アイソタイプ対照よりも、２つの別個のドナーにおいて細胞生存のより大きな低減を誘導した。細胞死は内在化のマーカーであるため、この結果は、ＢＡ０７２がアイソタイプ対照に対してＣＤ９６の内在化を増強することを示す。
実施例５：抗ＣＤ９６抗体のエピトープ結合
ヒトＣＤ９６のＦｃタグ付き完全長アイソフォーム２またはヒトＣＤ９６のＦｃタグ付きドメイン１へのＢＡ０７２およびＢＡ１０１ Ｆａｂ結合
Ｆｃタグを有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）、またはＦｃタグを有するヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３０）への、ＢＡ０７２ ＦａｂおよびＢＡ１０１ Ｆａｂの結合を、表面プラズモン共鳴によって評価した。
簡潔に述べると、表面プラズモン共鳴実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して行い、センサーグラムをＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を使用して視覚的に検査した。
具体的には、ランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％界面活性剤Ｐ２０）中で希釈された、１７μｇ／ｍｌのＦｃタグを有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）、および５μｇ／ｍｌのＦｃタグを有するヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３０）を、１０μｌ／分の流量で６０秒間の注入を使用して、シリーズＳプロテインＡセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ、カタログ番号２９－１２７５－５６）の個々のフローセルに捕捉し、９００共鳴単位（ＲＵ）に到達した。単一のフローセルを、参照として維持した。１００ｎＭの濃度のＢＡ０７２ Ｆａｂ、ＢＡ１０１ Ｆａｂ、または参照Ａ Ｆａｂを、３分間の会合相で、３０μｌ／分の速度でフローセルの各々に流し、続いて、２０分間の会合相で流した。センサーチップを、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンの４０秒間の注入によりサイクル間で再生成した。センサーグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を使用して視覚的に検査した。
図３６Ａに示されるように、抗ヒトＣＤ９６抗体ＢＡ０７２ Ｆａｂ、ＢＡ１０１ Ｆａｂ、および参照Ａ Ｆａｂは、ヒトＣＤ９６の精製された組換え完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）に結合した。図３６Ｂに示されるように、ＢＡ０７２ Ｆａｂは、ヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３０）に結合した。ヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３０）へのＢＡ１０１ Ｆａｂのより限定的な結合が観察された。ヒトＣＤ９６のドメイン１（配列番号１３０）と参照Ａ Ｆａｂとの間の結合は観察されなかった。
ＢＡ０７２およびＢＡ１０１ Ｆａｂのエピトープ結合
Ｆｃタグを有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）、またはＦｃタグを有するドメイン１ヒトＣＤ９６（配列番号１３０）への、ＢＡ０７２ ＦａｂおよびＢＡ１０１ Ｆａｂの結合を、表面プラズモン共鳴によって評価した。
簡潔に述べると、表面プラズモン共鳴実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して行い、センサーグラムをＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を使用して視覚的に検査した。
具体的には、ランニング緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％界面活性剤Ｐ２０）中で希釈された、１７μｇ／ｍｌのＦｃタグを有するヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２（配列番号１２８）、および５μｇ／ｍｌのＦｃタグを有するドメイン１ヒトＣＤ９６（配列番号１３０）を、１０μｌ／分の流量で６０秒間の注入を使用して、シリーズＳプロテインＡセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ、カタログ番号２９－１２７５－５６）の個々のフローセルに捕捉し、９００共鳴単位（ＲＵ）に到達した。単一のフローセルを、参照として維持した。１００ｎＭの濃度のＢＡ０７２ Ｆａｂ、またはＢＡ１０１ Ｆａｂを、３分間の会合相で、３０μｌ／分の速度でフローセルの各々に流した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００のデュアル注入プロトコルを使用して、会合相に続いて、等モル濃度での初期Ｆａｂと第２のＦａｂの組み合わせ（すなわち、１００ｎＭのＢＡ０７２ Ｆａｂ＋ＢＡ１０１ Ｆａｂ、１００ｎＭのＢＡ０７２ Ｆａｂ＋参照Ａ Ｆａｂ、１００ｎＭのＢＡ１０１ Ｆａｂ＋ＢＡ０７２ Ｆａｂ、または１００ｎＭのＢＡ１０１ Ｆａｂ＋ＢＡ０７２ Ｆａｂ）の第２の注入を、直ちに行った。デュアルＦａｂ注入を、３分間の会合相で、３０μｌ／分の速度でフローセルに流し、続いて、１０分間の解離相で流した。センサーチップを、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンの４０秒間の注入によりサイクル間で再生成した。センサーグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア３．０を使用して視覚的に検査した。
図３７Ａに示されるように、参照Ａ Ｆａｂは、ＢＡ０７２ Ｆａｂの結合後にヒトＣＤ９６の完全長アイソフォーム２に結合することができ、ＢＡ０７２が、参照Ａに対してＣＤ９６上の異なるエピトープに結合することを示唆する。図３７Ｂに示されるように、参照Ａ Ｆａｂは、ＢＡ１０１ Ｆａｂが結合した後、完全長ヒトＣＤ９６に結合することができ、ＢＡ１０１が、参照Ａに対してＣＤ９６上の異なるエピトープに結合することを示唆する。図３７Ｃに示されるように、参照Ａ ＦａｂおよびＢＡ１０１のいずれも、ＢＡ０７２ Ｆａｂの結合後にヒトＣＤ９６のドメイン１に結合することができなかった。図３７Ｄに示されるように、ＢＡ１０１ Ｆａｂは、ＣＤ９６のドメイン１を結合することができた。参照Ａ Ｆａｂは、ＢＡ１０１ Ｆａｂ結合後にＣＤ９６のドメイン１に結合することができなかった。ＢＡ０７２ Ｆａｂは、ＢＡ１０１ Ｆａｂの結合後にＣＤ９６のドメイン１を結合することができ、ＢＡ０７２がＢＡ１０１に対して異なるエピトープに結合することを示す。
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態により、範囲において制限されるべきではない。実際に、記載されるものに加えて、本発明の様々な修飾は、前述の記載および添付の図面から当業者に明らかとなるであろう。かかる修飾は、添付の特許請求の範囲内にあることが意図される。
本明細書において引用されるすべての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、それぞれ個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が、すべての目的のためにその全体が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示されるのと同程度まで、すべての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (71)

  1. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
    （ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１ＹＸ２Ｘ３Ｘ４（配列番号１３５）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＱまたはＳであり、
    Ｘ２が、ＡまたはＳであり、
    Ｘ３が、ＭまたはＩであり、
    Ｘ４が、ＨまたはＳであり、
    （ｂ）ＣＤＲＨ２が、Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＱＧ（配列番号１３７）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＷまたはＧであり、
    Ｘ２が、ＮまたはＩであり、
    Ｘ３が、Ａ、Ｅ、Ｖ、またはＰであり、
    Ｘ４が、Ｖ、Ｇ、Ｗ、またはＩであり、
    Ｘ５が、Ｓ、Ｙ、Ｔ、Ｎ、またはＦであり、
    Ｘ６が、ＧまたはＷであり、
    Ｘ７が、Ｄ、Ｙ、Ｎ、またはＴであり、
    Ｘ８が、ＴまたはＡであり、
    Ｘ９が、ＫまたはＮであり、
    Ｘ１０が、ＳまたはＡであり、
    （ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＮＷＧＸ１ＳＹＧＸ２ＤＶ（配列番号１８０）、ＧＹＤＳＲＰＬＤＶ（配列番号１９）、またはＧＹＤＳＲＰＬＤＹ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＭまたはＬであり、
    Ｘ２が、ＭまたはＬであり、
    （ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＲＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２ＹＬＮ（配列番号１３９）またはＧＧＮＮＩＧＳＫＩＶＨ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、
    Ｘ２が、Ｓ、Ｐ、またはＷであり、
    （ｅ）ＣＤＲＬ２が、Ｘ１Ｘ２ＳＳＬＱＳ（配列番号１４１）またはＤＤＲＤＲＰＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
    Ｘ２が、Ａ、Ｓ、またはＥであり、かつ／あるいは
    （ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＱＸ１ＹＳＴＰＡＬＸ２（配列番号１４３）またはＱＶＷＤＩＮＶＨＨＶＩ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
    Ｘ２が、ＴまたはＳである、単離された抗体。
  2. （ａ）ＣＤＲＨ１が、Ｘ１ＹＸ２ＭＨ（配列番号１３６）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＱまたはＳであり、
    Ｘ２が、ＡまたはＳであり、
    （ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＷＩＮＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号１３８）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、Ａ、Ｖ、またはＥであり、
    Ｘ２が、Ｖ、Ｗ、またはＧであり、
    Ｘ３が、Ｓ、Ｙ、Ｔ、またはＮであり、
    Ｘ４が、ＧまたはＷであり、
    Ｘ５が、Ｄ、Ｎ、Ｙ、またはＴであり、
    （ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＮＷＧＸ１ＳＹＧＸ２ＤＶ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＭまたはＬであり、
    Ｘ２が、ＭまたはＬであり、
    （ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＲＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２ＹＬＮ（配列番号１３９）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、
    Ｘ２が、Ｓ、Ｐ、またはＷであり、
    （ｅ）ＣＤＲＬ２が、Ｘ１Ｘ２ＳＳＬＱＳ（配列番号１４１）のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１が、ＳまたはＡであり、
    Ｘ２が、Ａ、Ｓ、またはＥであり、かつ／あるいは
    （ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＱＳＹＳＴＰＡＬＴ（配列番号３３）またはＱＱＡＹＳＴＰＡＬＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
  3. （ａ）ＣＤＲＨ１が、配列番号４のアミノ酸配列を含み、
    （ｂ）ＣＤＲＨ２が、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、
    （ｃ）ＣＤＲＨ３が、配列番号１９または２０のアミノ酸配列を含み、
    （ｄ）ＣＤＲＬ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、
    （ｅ）ＣＤＲＬ２が、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは
    （ｆ）ＣＤＲＬ３が、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
  4. ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、５、および１８；２、６、および１８；２、８、および１８；２、９、および１８；２、１０、および１８；１、７、および１８；２、１１、および１８；１、１２、および１８；１、１３、および１８；１、１４、および１８；３、１５、および１８；１、１６、および１８；１、５、および１４０；１、５、および１４２；１、５、および１７９；４、１７、および１９；または４、１７、および２０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
  5. ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２１、２８、および３３；２１、２９、および３３；２１、３０、および３３；２１、３１、および３３；２２、２９、および３３；２４、２９、および３３；２３、２９、および３３；２５、２８、および３４；または２６、３２、および３５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
  6. ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１、５、１８、２１、２８、および３３；１、５、１８、２１、２９、および３３；１、５、１８、２２、２９、および３３；１、５、１８、２３、２９、および３３；１、５、１８、２４、２９、および３３；１、５、１８、２５、２８、および３４；１、５、１４０、２１、２８、および３３；１、５、１４２、２１、２８、および３３；１、５、１７９、２１、２８、および３３；１、７、１８、２１、２９、および３３；１、１２、１８、２１、２８、および３３；１、１３、１８、２１、２８、および３３；１、１４、１８、２１、２８、および３３；１、１６、１８、２１、２８、および３３；２、６、１８、２１、２９、および３３；２、８、１８、２１、２９、および３３；２、９、１８、２１、３０、および３３；２、１０、１８、２１、２９、および３３；２、１１、１８、２１、３１、および３３；３、１５、１８、２１、２８、および３３；４、１７、１９、２６、３２、および３５；または４、１７、２０、２６、３２、および３５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
  7. 前記抗体が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  8. 前記ＶＨの前記アミノ酸配列が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のアミノ酸配列からなる、請求項７に記載の単離された抗体。
  9. 配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つの前記Ｘが、グルタミンである、請求項７または８に記載の単離された抗体。
  10. 配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つの前記Ｘが、ピログルタメートである、請求項７または８に記載の単離された抗体。
  11. 前記抗体が、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  12. 前記ＶＬの前記アミノ酸配列が、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５のアミノ酸配列からなる、請求項１１に記載の単離された抗体。
  13. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、もしくは６１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、もしくは７５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、単離された抗体。
  14. 前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離された抗体。
  15. 前記ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列が、それぞれ、配列番号３６および６２；３７および６２；３７および６３；３７および６６；３７および６７；３７および６８；３７および６９；３８および６３；３９および６３；４０および６３；４１および６３；４２および６３；４３および６４；４４および６４；４５および６３；４６および６３；４７および６５；４８および６２；４９および６２；５０および６２；５１および６２；５２および６２；５３および６２；５４および６２；５５および６２；５６および６２；５７および６２；５８および６２；５９および６２；６０および７０；６０および７１；６０および７２；６０および７３；６０および７４；６０および７５；または６１および７０のアミノ酸配列からなる、請求項１４に記載の単離された抗体。
  16. 配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つの前記Ｘが、グルタミンである、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  17. 配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、または６１のうちのいずれか１つの前記Ｘが、ピログルタメートである、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  18. 前記抗体が、配列番号１３０または１３１のアミノ酸配列に特異的に結合する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  19. 配列番号１３０または１３１のアミノ酸配列に特異的に結合する、単離された抗体。
  20. 前記抗体が、配列番号１３４のアミノ酸配列に結合する、請求項１８または１９に記載の単離された抗体。
  21. 前記抗体が、ヒトＣＤ９６を発現する細胞に結合すると内在化される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  22. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＣＤ９６を発現する細胞に結合すると内在化される、単離された抗体。
  23. 前記抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２からなる群から選択される重鎖定常領域を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  24. 前記抗体が、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。
  25. 前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ２９７Ａ変異を含む、請求項２４に記載の単離された抗体。
  26. 前記抗体が、配列番号１２４または１７６のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２５に記載の単離された抗体。
  27. 前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ変異を含む、請求項２４に記載の単離された抗体。
  28. 前記抗体が、配列番号１２５または１７７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２７に記載の単離された抗体。
  29. 前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ変異を含む、請求項２４に記載の単離された抗体。
  30. 前記抗体が、配列番号１２６または１７８のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
  31. 前記抗体が、野生型重鎖定常領域のバリアントである重鎖定常領域を含み、前記バリアント重鎖定常領域が、前記野生型重鎖定常領域がＦｃγＲに結合するよりも高い親和性で前記ＦｃγＲに結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  32. 前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＢである、請求項３１に記載の単離された抗体。
  33. 前記抗体が、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、または１６９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  34. 前記重鎖のアミノ酸配列が、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、または１６９のアミノ酸配列からなる、請求項３３に記載の単離された抗体。
  35. 配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、および１６９のうちのいずれか１つの前記Ｘが、グルタミンである、請求項３３または３４に記載の単離された抗体。
  36. 配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、および１６９のうちのいずれか１つの前記Ｘが、ピログルタメートである、請求項３３または３４に記載の単離された抗体。
  37. 前記抗体が、配列番号１２２または１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  38. 前記抗体が、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  39. 前記軽鎖のアミノ酸配列が、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５のアミノ酸配列からなる、請求項３８に記載の単離された抗体。
  40. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、もしくは１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、もしくは１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体。
  41. 前記重鎖のアミノ酸配列が、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、もしくは１６９のアミノ酸配列からなり、かつ／または前記軽鎖のアミノ酸配列が、配列番号１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、もしくは１１５のアミノ酸配列からなる、請求項４０に記載の単離された抗体。
  42. 前記重鎖および軽鎖が、それぞれ、配列番号７６および１０２；７９および１０３；７８および１０３；８２および１０３；８４および１０４；８３および１０４；８６および１０３；８５および１０３；８１および１０３；８０および１０３；８７および１０５；７７および１０２；８８および１０２；７７および１０６；７７および１０７；７７および１０８；７７および１０３；８９および１０２；９０および１０２；９１および１０２；９２および１０２；９３および１０２；７７および１０９；９４および１０２；９５および１０２；９６および１０２；９７および１０２；９８および１０２；９９および１０２；１００および１１０；１００および１１１；１００および１１２；１００および１１３；１００および１１４；１００および１１５；１０１および１１０；１４４および１０２；１４７および１０３；１４６および１０３；１５０および１０３；１５２および１０４；１５１および１０４；１５４および１０３；１５３および１０３；１４９および１０３；１４８および１０３；１５５および１０５；１４５および１０２；１５６および１０２；１４５および１０６；１４５および１０７；１４５および１０８；１４５および１０３；１５７および１０２；１５８および１０２；１５９および１０２；１６０および１０２；１６１および１０２；１４５および１０９；１６２および１０２；１６３および１０２；１６４および１０２；１６５および１０２；１６６および１０２；１６７および１０２；１６８および１１０；１６８および１１１；１６８および１１２；１６８および１１３；１６８および１１４；１６８および１１５；または１６９および１１０のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の単離された抗体。
  43. 前記重鎖および前記軽鎖のアミノ酸配列が、それぞれ、配列番号７６および１０２；７９および１０３；７８および１０３；８２および１０３；８４および１０４；８３および１０４；８６および１０３；８５および１０３；８１および１０３；８０および１０３；８７および１０５；７７および１０２；８８および１０２；７７および１０６；７７および１０７；７７および１０８；７７および１０３；８９および１０２；９０および１０２；９１および１０２；９２および１０２；９３および１０２；７７および１０９；９４および１０２；９５および１０２；９６および１０２；９７および１０２；９８および１０２；９９および１０２；１００および１１０；１００および１１１；１００および１１２；１００および１１３；１００および１１４；１００および１１５；１０１および１１０；１４４および１０２；１４７および１０３；１４６および１０３；１５０および１０３；１５２および１０４；１５１および１０４；１５４および１０３；１５３および１０３；１４９および１０３；１４８および１０３；１５５および１０５；１４５および１０２；１５６および１０２；１４５および１０６；１４５および１０７；１４５および１０８；１４５および１０３；１５７および１０２；１５８および１０２；１５９および１０２；１６０および１０２；１６１および１０２；１４５および１０９；１６２および１０２；１６３および１０２；１６４および１０２；１６５および１０２；１６６および１０２；１６７および１０２；１６８および１１０；１６８および１１１；１６８および１１２；１６８および１１３；１６８および１１４；１６８および１１５；または１６９および１１０のアミノ酸配列からなる、請求項４１に記載の単離された抗体。
  44. 配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つの前記Ｘが、グルタミンである、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  45. 配列番号７６～１０１または１４４～１６９のうちのいずれか１つの前記Ｘが、ピログルタメートである、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  46. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体と同じヒトＣＤ９６のエピトープに結合する、単離された抗体。
  47. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体とヒトＣＤ９６への結合について競合する、単離された抗体。
  48. 前記抗体が、ヒト抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  49. 前記抗体が、多重特異性抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  50. 前記抗体が、細胞傷害性剤、細胞増殖抑制剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  51. 前記抗体が、第２の抗体にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  52. 先行請求項のいずれか一項に記載の抗体のＶＨおよび／またはＶＬをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  53. 請求項５２に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  54. 請求項５２に記載のポリヌクレオチドまたは請求項５５に記載のベクターを含む、組換え宿主細胞。
  55. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５２に記載のポリヌクレオチド、請求項５３に記載のベクター、または請求項５４に記載の宿主細胞、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
  56. ヒトＣＤ９６に特異的に結合する抗体を産生する方法であって、前記ポリヌクレオチドが発現され、前記抗体が産生されるように、好適な条件下で請求項５４に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
  57. 対象における免疫応答を増加させる方法であって、有効量の請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５２に記載のポリヌクレオチド、請求項５３に記載のベクター、請求項５４に記載の宿主細胞、または請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  58. 対象におけるがんを治療する方法であって、有効量の請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５２に記載のポリヌクレオチド、請求項５３に記載のベクター、請求項５４に記載の宿主細胞、または請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  59. 前記抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物が、全身的に、静脈内に、皮下に、もしくは腫瘍内に投与されるか、または腫瘍排出リンパ節に送達される、請求項５７または５８に記載の方法。
  60. 追加の治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項５７～５９のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記追加の治療剤が、化学療法剤である、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記追加の治療剤が、チェックポイント標的化剤である、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記チェックポイント標的化剤が、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ－３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ－３抗体、アンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＣＤ９６抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、およびアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記追加の治療剤が、抗ＰＤ－１抗体であり、任意選択で前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブまたはニボルマブである、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記追加の治療剤が、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である、請求項６０に記載の方法。
  66. 前記阻害剤が、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記追加の治療剤が、ワクチンである、請求項６０に記載の方法。
  68. 前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体化された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記熱ショックタンパク質が、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化されている、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記熱ショックタンパク質が、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化されており、任意選択で前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、請求項６８に記載の方法。
  71. 対象における感染症を治療する方法であって、有効量の請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５２に記載のポリヌクレオチド、請求項５３に記載のベクター、請求項５４に記載の宿主細胞、または請求項５５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
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