JP2022539479A - 抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用 - Google Patents

Abstract

本発明はバイオ医薬品の技術分野に属し、具体的には、抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用に関する。本発明では、生ウイルス実験により、タンニン酸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含むコロナウイルス、Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスなどの呼吸器ウイルスに対して顕著な抑制効果があり、治療効果が確実であり、抗呼吸器ウイルス薬の製造分野において将来性が期待できることを示している。また、タンニン酸は多くの植物に存在し、自然界に存在する天然活性化合物であり、食品添加物としても応用されており、安全性が高く、医薬品開発の基礎が良い。

Description

本発明は、バイオ医薬品の技術分野に属する。より具体的には、抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用に関する。

ウイルスによる疾患はほとんど一定の伝染性を持っており、その爆発や流行はすべて人間の健康と生活に巨大な影響をもたらす。現在、ウイルス感染の予防治療は主にワクチン接種及び／又は抗ウイルス薬により治療される。しかし、臨床応用において、ワクチンの価格は高く、低温貯蔵が必要であり、広く応用することが困難であり、一方、現在の多くのウイルスは変異性があり、特に呼吸器ウイルス（例えばコロナウイルス、オルソミクソウイルス科ウイルスなど）は更に変異が発生しやすく、ワクチンの研究開発はウイルスの変異に追いつくことが難しい。そのため、抗ウイルス薬はすでにウイルス性伝染病を治療する主要な手段になりつつある。

その中で、呼吸器ウイルスのうちコロナウイルスは系統分類でニドウイルス目（Ｎｉｄｏｖｉｒａｌｅｓ）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス属（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）に属する。コロナウイルス属のウイルスはエンベロープ（ｅｎｖｅｌｏｐｅ）を有し、ゲノムが線形一本鎖プラス鎖のＲＮＡウイルスであり、自然界に広く存在する１種類のウイルスである。コロナウイルスは直径が約８０～１２０ｎｍであり、ゲノムの５’末端にメチル化されたキャップ構造を有し、３’末端にｐｏｌｙ（Ａ）テールを有し、ゲノム全長が約２７～３２ｋｂであり、現在知られているＲＮＡウイルスの中で最大のゲノムを有するウイルスである。コロナウイルスはヒトを含め脊椎動物にしか感染できず、現在、ヒトに感染し、極めて大きな流行をもたらすコロナウイルスとしてＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１が知られており、呼吸器、消化管、肝臓や神経系の病気を引き起こすことがある。ヒトコロナウイルスは１９６５年に単離されたが、現在までそれらに対する認識はまだかなり限られており、コロナウイルスの血清型と抗原変異性はまだ明確ではない。また、コロナウイルスは重複感染を発生することができ、多種の血清型（少なくとも４種類が知られている）が存在し、抗原の変異があることを表明し、その免疫は困難であり、まだ予防治療の特効薬がない。

現在、実験的な研究でしか発見されていないが、アザウラシル（αｚａｕｒａｃｉｌ）及びリバビリン（ウイルスゾール、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ、Ｖｉｒａｚｏｌｅ）、スピロアダマンタン（ｓｐｉｒｏａｄａｍａｎｔａｎｅ）はコロナウイルスに対して明らかな抑制作用がある（向倩、王叡、コロナウイルス感染の特徴と予防・治療［Ｊ］．中華病院感染学雑誌，２００３，０１３（０１１）：１０９７－１１００．）。しかし、上記医薬品は下痢、貧血、めまい、頭痛、虚弱、無力などの副作用が現れやすい。また、臨床研究では、レムデシビル（Ｒｅｍｄｅｓｉｖｉｒ、ＣＡＳ：１８０９２４９－３７－３）は非典型性肺炎（ＳＡＲＳ）や中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）などのコロナウイルス科ウイルス病原体に対して一定の活性があるが、レムデシビルはどの国でも発売が承認されておらず、その安全性と有効性も確認されていない。現在の抗コロナウイルス薬には一定の安全上の危険性が存在していることがわかり、また、ウイルスの変異や新株の出現に伴い、これらの化学薬の抗ウイルス効果は大幅に低下しており、例えば２０１９年末に出現した新型コロナウイルス２０１９－ｎＣｏＶ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）については、現在まで治療効果の確実な薬は発見されていない。

本発明が解決しようとする技術的課題は、従来の抗呼吸器ウイルス薬の欠点及び不備を克服し、新たな抗呼吸器ウイルス薬、すなわちタンニン酸（Ｔａｎｎｉｃａｃｉｄ、ＣＡＳ：１４０１－５５－４）を提供することである。発明者らは多くの探索と研究を行った結果、タンニン酸が呼吸器ウイルス、特にコロナウイルス、ノルマルミクソウイルス科のインフルエンザウイルスに対する抗ウイルス効果が顕著であることを見出した。また、このような物質は多種の植物中に存在し、自然界に存在する天然活性化合物であり、食品添加物としても応用されており、安全性が高いため、呼吸器ウイルスに対する抗ウイルス薬の製造・開発において将来性が期待できる。

本発明は、抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用を提供することを目的とする。
本発明は、抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸誘導体又はタンニン酸構造類似体の使用を提供することを別の目的とする。
本発明は、タンニン酸を含む抗呼吸器ウイルス薬を提供することを他の目的とする。

本発明の上記目的は、以下の技術的解決手段によって実現される。
本発明の研究により、タンニン酸は呼吸器ウイルスに対して顕著な抗ウイルス作用があり、特に新型コロナウイルス２０１９－ｎＣｏＶ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する抑制効果は陽性対照薬のレムデシビルより顕著に高く、ノルマルミクソウイルス科のインフルエンザウイルスに対する抗ウイルス効果も非常に顕著であることが示された。以上の結果に基づいて、本発明は、抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用の保護を請求する。

本発明の前記タンニン酸は、自由形態であるか、又は適切であり、薬学的に許容される誘導体が存在する。本発明によれば、薬学的に許容される誘導体は、薬学的に許容されるプロドラッグ、塩、エステル、エステル類の塩、又は患者のニーズに応じて直接又は間接的に投与可能な他の付加体又は誘導体、本発明の他の態様で説明される化合物、その代謝産物、又はその残留物を含むが、これらに限定されるものではない。

したがって、本発明はまた、抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸誘導体又はタンニン酸構造類似体の使用の保護を請求する。

さらに、タンニン酸、タンニン酸誘導体、タンニン酸構造類似体の立体異性体、幾何異性体、水和物、溶媒和物、又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグも、発明の保護範囲に含まれる。

本発明の「溶媒和物」とは、１つ又は複数の溶媒分子と本発明の化合物とで形成される会合体を指す。溶媒和物を形成する溶媒としては、水、イソプロピルアルコール、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、酢酸、及びアミノエタノールが含まれるが、これらに限定されるものではない。「水和物」という用語は、溶媒分子と水とで形成された会合物であることを意味する。

さらに、前記抗呼吸器ウイルスは、コロナウイルス科ウイルス及びノルマルミクソウイルス科ウイルスを含む。

またさらに、前記コロナウイルス科ウイルスは、コロナウイルス属ウイルスである。
具体的には、現在確認された前記コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１を含む。
好ましくは、前記コロナウイルス属ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。

さらに、前記ノルマルミクソウイルス科ウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス属、Ｂ型インフルエンザウイルス属、及びＣ型インフルエンザウイルス属を含む。
好ましくは、前記ノルマルミクソウイルス科ウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス属のＡ型インフルエンザＨ１Ｎ１ウイルスである。

以上に基づいて、本発明は、タンニン酸を含む抗呼吸器ウイルス薬をさらに提供する。

またさらに、前記医薬品は、タンニン酸誘導体、タンニン酸構造類縁体のいずれか１種又は２種をさらに含む。

さらに、前記医薬品は、ポリフェノール系化合物、抗ウイルス金属塩の１種又は２種をさらに含む。

またさらに、前記抗ウイルス金属塩は、亜鉛塩、鉄塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、タングステン塩、及びルビジウム塩を含む。

好ましくは、前記亜鉛塩は硫酸亜鉛又はグルコン酸亜鉛であり、前記鉄塩はグルコン酸第一鉄であり、前記カルシウム塩はグルコン酸カルシウムであり、前記タングステン塩はタングステン酸ナトリウムであり、前記ルビジウム塩はヨウ化ルビジウムである。

さらに、前記タンニン酸、タンニン酸誘導体又はタンニン酸構造類縁体と抗ウイルス金属塩との質量比が１：０．０５～１：５０である。

またさらに、前記ポリフェノール系化合物は、フラボノイド、スチルベン、フェノール酸、及びリグノシン等を含む。

さらに、前記タンニン酸、タンニン酸誘導体又はタンニン酸構造類縁体とポリフェノール系化合物との質量比が１：０．０５～１：５０である。

本発明で保護を請求する化合物又は組成物は、抗呼吸器ウイルス薬の製造に使用されるが、本発明の化合物又は医薬組成物の有効量を患者に投与することにより、呼吸器ウイルスによって誘発される疾患の予防又は治療、呼吸器ウイルスによって誘発される疾患の症状の軽減、又は呼吸器ウイルスによって誘発される疾患の発症又は発展の遅延のための医薬品を製造するための使用に限定されるものではない。

本発明で保護を請求する化合物又は医薬品は、人間の治療に有益であることに加えて、動物獣医師によるペット、哺乳動物、げっ歯類、鳥類等を含む導入された品種の動物や農場の動物の治療にも応用することができる。他のいくつかの動物の例には、馬、犬、猫、豚などが含まれる。

またさらに、前記医薬品は、薬学的に許容される補助材料、担体、賦形剤、希釈剤、媒質などをさらに含み、注射剤、経口剤、スプレー剤、吸入剤、エアゾール剤などの各種の医薬剤形にされる。

薬学的に許容される担体として有用な物質には、イオン交換剤、アルミニウム、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清蛋白例えばヒト血清タンパク質、緩衝物質例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドけい素、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロッカー重合体、ラノリン、糖例えば乳糖、グルコース及びショ糖、スターチ例えばコーンスターチ及びポテトスターチ、セルロース及びその誘導体例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース等；ゴム粉；麦芽；ゼラチン；タルク；補助材料例えばカカオ豆脂や座薬ワックス；油例えば落花生油、綿実油、ベニバナ油、麻油、オリーブ油、トウモロコシ油や豆油；ジオール系化合物例えばプロピレングリコール及びポリエチレングリコール；エステル類例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤例えば水酸化マグネシウムや水酸化アルミニウム；アルギン酸；熱源のない水；等張塩；リンガー溶液；エタノール、リン酸緩衝液、及び他の毒性のない適切な潤滑剤例えばラウリン硫酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム；着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤と香料、防腐剤、及び抗酸化剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。

錠剤のような固形組成物を製造するために、本発明の化合物の均一な混合物を含む固形の予備調合組成物を形成するために、主要な活性成分を医薬賦形剤（又は担体）と混合する。これらの予備調合組成物を均一とすると、活性成分が組成物全体に均一に分散され、組成物が錠剤、丸薬及びカプセル剤のような同一の有効な単位剤型に容易に細分化されることを指す。

本発明の錠剤又は丸薬は、作用を延長する利点を有する剤形を提供するために、又は胃内の酸性状態から錠剤又は丸薬を保護するために、塗布又は他の方法で配合することができる。例えば、錠剤又は丸薬は、内部用量成分及び外部用量成分を含んでもよく、後者は、前者の上における外皮の形態を有する。２つの成分は腸溶性層を用いて分離することができ、腸溶性層は胃内での崩壊を阻止し、内部成分が十二指腸に完全に入るか、又は遅延放出されることを可能にするためのものである。様々な材料は、このような腸溶性層又はコーティングに使用することができ、上記材料は、多くの高分子酸、及び高分子酸とシェラック、セタンアルコール、及び酢酸セルロースなどのこのような材料との混合物を含む。

吸入法又は吹き込み法に用いられる組成物は、薬学的に許容される水性溶媒又は有機溶媒、又はそれらの混合物中の溶液及び懸濁液、ならびに散剤を含む。液状又は固形組成物は、適切な薬用賦形剤を含んでもよい。好ましくは、これらの組成物は、経口又は鼻呼吸経路を介して投与され、局所的又は全身的効果を得る。この組成物は、好ましくは薬学的に許容される溶媒中で不活性ガスを使用して噴霧することができる。霧化溶液は霧化装置から直接吸引することができ、又は霧化装置はマスクのような帳状物又は間欠陽圧呼吸器に接続することができる。溶液、懸濁剤、又は散剤組成物は、適切な方法で剤形を送達する装置、好ましくは経口又は鼻経路によって投与することができる。

以上に基づいて、本発明は、タンニン酸を有効成分として含む抗ウイルススプレー剤をさらに提供する。

さらに、前記抗ウイルススプレー剤は、タンニン酸５～２０重量部、ポリフェノール系化合物１～５０重量部、添加剤１～１５重量部及び残部の水を成分として含む。

本発明は、タンニン酸を有効成分として含む抗ウイルスエアゾール剤をさらに提供する。

さらに、タンニン酸１～２０重量部、抗ウイルス金属塩０～１０重量部、添加剤１～１５重量部及び残部の推進剤を成分として含む。

さらに、前記推進剤は、テトラフルオロエタン（ＨＦＡ－１３４ａ）又はセボフルオロプロパン（ＨＦＡ－２２７）である。

本発明は、タンニン酸を有効成分として含む抗ウイルス経口剤をさらに提供する。

さらに、タンニン酸３～２０重量部、抗ウイルス金属塩１～１５重量部、添加剤１～１５重量部、及び残部の水を成分として含む。

さらに、前記添加剤は、抗酸化剤及び薬学的に添加可能な他の補助材料を含む。

またさらに、前記抗酸化剤はビタミンＣとローズマリー酸とを含む。

本発明は、以下の有益な効果を有する。
本発明の研究結果により、タンニン酸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含むコロナウイルス、Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスなどの呼吸器ウイルスに対して顕著な抑制効果があり、治療効果が確実であり、抗呼吸器ウイルス薬の製造分野において将来性が期待できることを示している。また、タンニン酸は多くの植物に存在し、自然界に存在する天然活性化合物であり、食品添加物としても応用されており、安全性が高く、医薬品開発の基礎が良い。

以下では、具体的な実施例を参照して本発明をさらに説明するが、実施例は本発明をいかなる形でも限定しない。特に明記されていない限り、本発明に採用される試薬、方法及び設備は、当技術分野における従来の試薬、方法及び設備である。

本発明の活性ウイルス実験はすべて広東省疾患予防コントロールセンターに依頼して行い、微生物材料は広東省疾患予防コントロールセンターから提供さる。

特に明記されていない限り、以下の実施例で使用される試薬及び材料は市販品である。

実施例１ アフリカ緑猿腎細胞（Ｖｅｒｏ－Ｅ６細胞）に対するタンニン酸の毒性の測定
１、実験材料
（１）医薬品：実験群、タンニン酸；対照群、レムデシビル（上海陶素生化科技有限公司より購入）。
（２）細胞株：アフリカ緑猿腎細胞（Ｖｅｒｏ－Ｅ６細胞）
（３）その他：ＭＥＭ培地；９６穴培養板。

２、実験ステップ
（１）微量培養法を用いて細胞培養を行った。
（２）医薬品希釈：それぞれ１２本の遠心分離管内でタンニン酸、レムデシビルを細胞培養液［成分要求：ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％二重抗体（Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２％胎児牛血清（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）］で倍比希釈して、合計１２濃度のタンニン酸、レムデシビル溶液とした。
（３）濃度ごとに３つの平行複孔を設け、同時に細胞対照孔を設けた（医薬品は添加せず、培養液のみを添加する）。
（４）４８時間後に細胞培養液１００μｌごとにＣＣＫ－８を１０μｌ加え、３７℃で１時間インキュベートした後、分光光度計でＯＤ_４５０を測定し、タンニン酸とレムデシビルの最大無毒濃度（ＴＣ_０）と半数毒性濃度（ＴＣ_５０）を算出した。

３、実験結果

実施例２ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対するタンニン酸の薬効試験
１、実験材料
（１）医薬品：実験群、タンニン酸；対照群、レムデシビル（上海陶素生化科技有限公司より購入）。
（２）細胞株：アフリカ緑猿腎細胞（Ｖｅｒｏ－Ｅ６細胞）
（３）ウイルス：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス。
（４）その他：ＭＥＭ培地；９６穴培養板。

２、実験ステップ
（１）Ｖｅｒｏ－Ｅ６細胞をあらかじめ９６穴培養板を用いて単層細胞（細胞数：２×１０^４細胞／孔））に培養しておいた。
（２）検査対象医薬品として最大無毒用量（ＴＤ_０）薬液を、細胞維持液で１２濃度ずつ倍比希釈し、ウイルス感染力価は１００ ＴＣＩＤ_５０とした。
（３）医薬品について濃度ごとに３孔として、ウイルス吸着１時間後、ウイルス液を棄却し、ＰＢＳで１回洗浄した後、各孔に医薬品を含む維持液を０．２ｍｌ添加した。同時に細胞対照（維持液のみ添加）、医薬品対照（ウイルスを添加しない）、ウイルス対照（薬液を添加しない）を設け、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベータに入れて培養した。
（４）４８時間後に細胞培養上清を回収してウイルス核酸抽出に用い、ＣＯＶＩＤ－１９蛍光定量ＰＣＲキット（臨床医療機器登録証を取得済み）を用いてウイルスの相対定量を行い、タンニン酸がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの抑制に与える影響を算出した。半数抑制濃度（ＩＣ_５０）や選択指数（ＳＩ）などのパラメータを算出した。
選択指数（ＳＩ）＝ＴＣ_５０／ＩＣ_５０
ＴＣ_５０（５０％毒性濃度）：Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ式を用いて算出
ＩＣ_５０（半数抑制濃度）：Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ式を用いて算出

３、実験結果
表２に示すように、タンニン酸は高い抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス活性を示し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対するＩＣ_５０値は０．００３２μＭ、ＳＩは７３４３．７５であり、陽性対照群のレムデシビルの抗ウイルス活性よりも有意に高く、選択指数も高かった。

実施例３ イヌ腎上皮細胞（ＭＤＣＫ細胞）に対するタンニン酸の毒性の測定
１、実験材料
（１）医薬品：実験群、タンニン酸；対照群、リバビリン（諾徳薬業（江蘇）有限公司より購入）。
（２）細胞株：イヌ腎上皮細胞（ＭＤＣＫ細胞）；
（３）その他：ＤＭＥＭ培地；９６穴培養板。

２、実験ステップ
（１）微量培養法を用いて細胞培養を行った。
（２）医薬品希釈：それぞれ１２本の遠心分離管内でタンニン酸、リバビリンを細胞培養液［成分要求：ＤＭＥＭ培地（ＧｉｂｃｏＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％二重抗体（ＧｉｂｃｏＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；ＧｉｂｃｏＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）］で倍比希釈して、合計１２濃度のタンニン酸、リバビリン溶液とした。
（３）各希釈度の医薬品をそれぞれＭＤＣＫ細胞の孔に加え、希釈度ごとに３個の複孔を設け、１孔当たり１００μＬとし、同時に正常細胞対照孔を設け、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベータで培養した。
（４）細胞病変を毎日観察、記録した。（－）、細胞病変なし；（＋）、０～１／４の細胞病変；（＋＋）、１／４～１／２の細胞病変；（＋＋＋）、１／２～３／４の細胞病変；（＋＋＋＋）、３／４～１の細胞病変。細胞病変が発生しない医薬品の最小希釈倍数を医薬品の最大無毒濃度（ＴＣ_０）とし、Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ式を用いて医薬品の半数有毒濃度（ＴＣ_５０）を算出した。

３、実験結果

実施例４ Ａ型インフルエンザＨ１Ｎ１ウイルスに対するタンニン酸の薬効試験
１、実験材料
（１）医薬品：実験群、タンニン酸；対照群、リバビリン（諾徳薬業（江蘇）有限公司より購入）；
（２）細胞株：イヌ腎上皮細胞（ＭＤＣＫ細胞）。
（３）ウイルス：新型インフルエンザＨ１Ｎ１ウイルス；
（４）その他：ＤＭＥＭ培地、９６穴培養板。

２、実験ステップ
（１）０．２５％パンクレアチンで単層ＭＤＣＫ細胞を消化し、１×１０^５個／ｍＬの細胞濃度で接種して培養し、細胞が必要な密度（８０～９０％）になるまで培養液を吸引し、ＰＢＳで２回洗浄した。
（２）細胞群、ウイルス群、リバビリン群、及びタンニン酸群に分け、検査対象医薬品を最大無毒用量（ＴＤ_０）の薬液で倍比希釈し、１２濃度の医薬品含有血清をした。
（３）１００ ＴＣＩＤ５０／１００μＬのＡ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスを各群の細胞に感染させ（細胞群は感染せず、維持液を１００μＬ加えて）、インキュベータ吸着、ＰＢＳ洗浄などの操作を行った後、リバビリン血清、タンニン酸血清、細胞維持液をそれぞれ加え、医薬品について濃度ごとに３孔とし、１００μＬ／孔とし、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベータに入れて培養した。
（４）４８時間後に細胞培養上清を回収し、ウイルス核酸抽出に用い、Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルス蛍光定量ＰＣＲキットを用いてウイルス相対定量を行い、Ａ型Ｈ１Ｎ１ウイルス抑制に対するタンニン酸の影響を算出し、半数抑制濃度（ＩＣ_５０）や選択指数（ＳＩ）などのパラメータを算出した。
選択指数（ＳＩ）＝ＴＣ_５０／ＩＣ_５０
ＴＣ_５０（５０％毒性濃度）：Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ式を用いて算出
ＩＣ_５０（半数抑制濃度）：Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ式を用いて算出

３、実験結果
表４に示すように、タンニン酸は新型インフルエンザウイルスに対して高い抗活性を示し、新型インフルエンザウイルスに対するＩＣ_５０値は０．００３２μＭ、ＳＩは７３４３．７５であり、陽性対照群のリバビリンの抗ウイルス活性より有意に高く、選択指数も高かった。

実施例５ アフリカ緑猿腎細胞（Ｖｅｒｏ－Ｅ６細胞）に対するタンニン酸組成物の毒性の測定
１、実験材料
（１）医薬品：実験群、タンニン酸とカテキン、レスベラトロール、グルコン酸亜鉛のそれぞれとを質量比１：１で混合し、３種類の医薬組成物を作製した。対照群、レムデシビル（上海陶素生化科技有限公司より購入）。
（２）その他の実験材料は実施例１と同様であった。
２、実験ステップ：実施例１を参照。
３、実験結果

実施例６ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに対するタンニン酸組成物の薬効試験
１、実験材料
（１）医薬品：実施例５と同様。
（２）その他の実験材料は実施例２と同様であった。
２、実験ステップ：実施例２を参照。
３、実験結果
表６に示すように、タンニン酸組成物は高い抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス活性を示し、陽性対照群のレムデシビルの抗ウイルス活性よりも有意に高く、選択指数も高かった。

実施例７ イヌ腎上皮細胞（ＭＤＣＫ細胞）に対するタンニン酸組成物の毒性の測定
１、実験材料
（１）医薬品：実施例５と同様。
（２）その他の実験材料は実施例３と同様であった。
２、実験ステップ：実施例３を参照。
３、実験結果

実施例８ Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスに対するタンニン酸組成物の薬効試験
１、実験材料
（１）医薬品：実施例５と同様。
（２）その他の実験材料は実施例４と同様であった。
２、実験ステップ：実施例４を参照。
３、実験結果
表８に示すように、タンニン酸組成物は高い抗Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルス活性を示し、陽性対照群のリバビリンの抗ウイルス活性より有意に高く、選択指数も高かった。

実施例９ 抗ウイルススプレー剤
タンニン酸１０重量％、カテキン５重量％、ビタミンＣ ３重量％、及び残部の脱イオン水を成分として含む抗ウイルススプレー剤。

実施例１０ 抗ウイルススプレー剤
タンニン酸５重量％、レスベラトロール５重量％、ローズマリー酸重量３％、残部の脱イオン水を成分として含む抗ウイルススプレー剤。

実施例１１ 抗ウイルスエアゾール剤
タンニン酸５重量％、グルコン酸亜鉛１重量％、脱イオン水８重量％、エタノール２重量％、残部の放出剤としてテトラフルオロエタンを成分として含む抗ウイルスエアゾール剤。

実施例１２ 抗ウイルス経口剤
タンニン酸１０重量％、グルコン酸亜鉛１０重量％、補助材料２重量％、残部の蒸留水を成分として含む抗ウイルス経口剤。

上記の実施例は本発明の優れた実施形態であるが、本発明の実施形態は上記の実施例によって限定されるものではなく、本発明の本質及び原理から逸脱しない他のいかなる変更、修飾、代替、組み合わせ、簡略化も、等価な置換であり、本発明の保護範囲に含まれるものとする。

さらに、前記呼吸器ウイルスは、コロナウイルス科ウイルス及びノルマルミクソウイルス科ウイルスを含む。

実施例８ Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスに対するタンニン酸組成物の薬効試験
１、実験材料
（１）医薬品：実験群について実施例５と同様。対照群について実施例４と同様
（２）その他の実験材料は実施例４と同様であった。
２、実験ステップ：実施例４を参照。
３、実験結果
表８に示すように、タンニン酸組成物は高い抗Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルス活性を示し、陽性対照群のリバビリンの抗ウイルス活性より有意に高く、選択指数も高かった。

上記の実施例は本発明の優れた実施形態であるが、本発明の実施形態は上記の実施例によって限定されるものではなく、本発明の本質及び原理から逸脱しない他のいかなる変更、修飾、代替、組み合わせ、簡略化も、等価な置換であり、本発明の保護範囲に含まれるものとする。
本発明の実施態様には、以下の態様が含まれる。
１． 抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用。
２． 抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸誘導体又はタンニン酸構造類似体の使用。
３． 前記抗呼吸器ウイルスはコロナウイルス科ウイルス及びオルソミクソウイルス科ウイルスを含む、ことを特徴とする項１又は２に記載の使用。
４． 前記コロナウイルス科ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１を含むコロナウイルス属ウイルスである、ことを特徴とする項３に記載の使用。
５． 前記オルソミクソウイルス科ウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス属、Ｂ型インフルエンザウイルス属、Ｃ型インフルエンザウイルス属を含む、ことを特徴とする項３に記載の使用。
６． タンニン酸を含む、ことを特徴とする抗呼吸器ウイルス薬。
７． タンニン酸誘導体、タンニン酸構造類似体のいずれか１種又は２種をさらに含む、ことを特徴とする項６に記載の医薬品。
８． ポリフェノール系化合物、抗ウイルス金属塩のうちの１種又は２種をさらに含む、ことを特徴とする項６に記載の医薬品。
９． 前記抗ウイルス金属塩は、亜鉛塩、鉄塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、タングステン塩及びルビジウム塩を含む、ことを特徴とする項８に記載の医薬品。
１０． 経口剤、スプレー剤、エアゾール剤又は注射剤である、ことを特徴とする項９に記載の医薬品。
１１． タンニン酸を有効成分として含む、ことを特徴とする抗ウイルススプレー剤。
１２． タンニン酸５～２０重量部、ポリフェノール系化合物１～５０重量部、添加剤１～１５重量部、残部の水を成分として含む、ことを特徴とする項１１に記載の抗ウイルススプレー剤。
１３． タンニン酸を有効成分として含む、ことを特徴とする抗ウイルスエアゾール剤。
１４． タンニン酸１～２０重量部、抗ウイルス金属塩０～１０重量部、添加剤１～１５重量部及び残部の推進剤を成分として含む、ことを特徴とする項１３に記載の抗ウイルスエアゾール剤。
１５． タンニン酸を有効成分として含む、ことを特徴とする抗ウイルス経口剤。
１６． タンニン酸３～２０重量部、抗ウイルス金属塩１～１５重量部、添加剤１～１５重量部、残部の水を成分として含む、ことを特徴とする項１５に記載の抗ウイルス経口剤。

Claims (16)

1. 抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸の使用。
2. 抗呼吸器ウイルス薬の製造におけるタンニン酸誘導体又はタンニン酸構造類似体の使用。
3. 前記抗呼吸器ウイルスはコロナウイルス科ウイルス及びオルソミクソウイルス科ウイルスを含む、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の使用。
4. 前記コロナウイルス科ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１を含むコロナウイルス属ウイルスである、ことを特徴とする請求項３に記載の使用。
5. 前記オルソミクソウイルス科ウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス属、Ｂ型インフルエンザウイルス属、Ｃ型インフルエンザウイルス属を含む、ことを特徴とする請求項３に記載の使用。
6. タンニン酸を含む、ことを特徴とする抗呼吸器ウイルス薬。
7. タンニン酸誘導体、タンニン酸構造類似体のいずれか１種又は２種をさらに含む、ことを特徴とする請求項６に記載の医薬品。
8. ポリフェノール系化合物、抗ウイルス金属塩のうちの１種又は２種をさらに含む、ことを特徴とする請求項６に記載の医薬品。
9. 前記抗ウイルス金属塩は、亜鉛塩、鉄塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、タングステン塩及びルビジウム塩を含む、ことを特徴とする請求項８に記載の医薬品。
10. 経口剤、スプレー剤、エアゾール剤又は注射剤である、ことを特徴とする請求項９に記載の医薬品。
11. タンニン酸を有効成分として含む、ことを特徴とする抗ウイルススプレー剤。
12. タンニン酸５～２０重量部、ポリフェノール系化合物１～５０重量部、添加剤１～１５重量部、残部の水を成分として含む、ことを特徴とする請求項１１に記載の抗ウイルススプレー剤。
13. タンニン酸を有効成分として含む、ことを特徴とする抗ウイルスエアゾール剤。
14. タンニン酸１～２０重量部、抗ウイルス金属塩０～１０重量部、添加剤１～１５重量部及び残部の推進剤を成分として含む、ことを特徴とする請求項１３に記載の抗ウイルスエアゾール剤。
15. タンニン酸を有効成分として含む、ことを特徴とする抗ウイルス経口剤。
16. タンニン酸３～２０重量部、抗ウイルス金属塩１～１５重量部、添加剤１～１５重量部、残部の水を成分として含む、ことを特徴とする請求項１５に記載の抗ウイルス経口剤。