JP2022536692A - 調節不全の血漿カリクレインによって媒介される疾患の治療のための抗体のアデノ随伴ウイルスベクター送達 - Google Patents

調節不全の血漿カリクレインによって媒介される疾患の治療のための抗体のアデノ随伴ウイルスベクター送達 Download PDF

Info

Publication number
JP2022536692A
JP2022536692A JP2021573442A JP2021573442A JP2022536692A JP 2022536692 A JP2022536692 A JP 2022536692A JP 2021573442 A JP2021573442 A JP 2021573442A JP 2021573442 A JP2021573442 A JP 2021573442A JP 2022536692 A JP2022536692 A JP 2022536692A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
raav
plasma kallikrein
vector
raav vector
promoter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021573442A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2020252136A5 (ja
Inventor
ジョン ケニストン，
フロリー ボレル，
マドフスダン ナタラジャン，
ヴィヴィアン チョイ，
ダン セクストン，
アレクセイ セレギン，
Original Assignee
シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド filed Critical シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド
Publication of JP2022536692A publication Critical patent/JP2022536692A/ja
Publication of JPWO2020252136A5 publication Critical patent/JPWO2020252136A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
    • C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)

Abstract

本開示は、とりわけ、血漿カリクレインのタンパク質分解活性を阻害する薬剤をコードする、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを提供する。本開示はまた、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードする、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月１１日に出願されたＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ ６２／８６０，１０１に対する利益および優先権を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
調節不全の血漿カリクレイン活性は、炎症誘発性および血管作動性ペプチドであるブラジキニンの過剰産生につながる可能性がある。こうした疾患の一例は、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）であり、これは、皮下および粘膜下血管性浮腫として現れる血管拡張の予測不可能かつ反復性の発作を特徴とする、稀であるが生命を脅かす可能性のある障害である。ＨＡＥは、Ｃ１－阻害剤の血漿レベルが低いことに関連している場合（Ｉ型）がある一方で、そのタンパク質が正常または基準以上の量で循環しているが、機能不全となっている場合（ＩＩ型）もある。Ｃ１阻害剤は、血漿カリクレイン活性の主要な調節因子である。ＨＡＥ発作の症状として、顔面、口、および／または気道の腫脹が挙げられ、これらは自然発症的に生じるか、または軽度の外傷によって誘発される。気道に影響を及ぼす浮腫発作は、致死的である可能性がある。急性炎症の再燃に加えて、過剰な血漿カリクレイン活性も、エリテマトーデスを含む自己免疫疾患などの慢性病状に関連している。
例えば、接触系のメンバーを阻害することを含む、Ｃ１－ＩＮＨの欠損または機能不全の治療のための様々な戦略が企図および開発されてきた。例えば、ラナデルマブは、ＨＡＥの治療のために承認されている血漿カリクレインの完全ヒトモノクローナル抗体阻害剤である。
インビボで抗体を含むタンパク質を産生するベクターの使用は、疾患の治療に望ましいが、対象への送達後の抗体産生不良を含む様々な要因によって制限される。
本発明は、抗血漿カリクレイン抗体をコードする、効率的かつ強固な組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを提供する。本発明は、部分的に、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードする特異的な組換えＡＡＶベクターが、高レベルの機能的抗血漿カリクレイン抗体のインビボ産生をもたらすという驚くべき発見に基づく。具体的には、ｒＡＡＶは、インビボでの抗血漿カリクレインｍＡｂの強固かつ持続的な産生をもたらし、ベクター介在性発現抗血漿カリクレイン抗体は、従来の組換え発現方法（例えば、ＣＨＯ細胞）によって産生される抗体タンパク質と同等の標的化活性を保持する。本発明より前に、所望のペイロードを担持するｒＡＡＶベクターの投与を介した抗血漿カリクレイン抗体の送達は、未知の量の活性抗体産生をもたらした。したがって、本発明より前に、例えば、遺伝性血管性浮腫を含むＣ１－ＩＮＨ欠損または障害の治療のために抗血漿カリクレインをコードするｒＡＡＶベクターを使用することは、予測可能または実行可能ではなかった。
いくつかの態様において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖を含む完全長抗体をコードする、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターが本明細書に提供される。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、リンカーを介して連結されている。
いくつかの実施形態において、リンカーは、切断可能なリンカーを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、切断不可能なリンカーを含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、単一プロモーターによって制御されている。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、別々のプロモーターによって制御されている。
いくつかの実施形態において、単一プロモーター、または別々のプロモーターのうちの１つ以上は、ユビキタスプロモーター、組織特異的プロモーター、または調節可能なプロモーターから選択される。
いくつかの実施形態において、組織特異的プロモーターは、肝臓特異的プロモーターである。
いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）、修飾されたｈＴＴＲ（ｈＴＴＲ ｍｏｄ．）、α－抗トリプシンプロモーター、肝臓プロモーター１（ＬＰ１）、ＴＲＭプロモーター、ヒト第ＩＸ因子プロ／肝臓転写因子応答性オリゴマー、ＬＳＰ、ＣＭＶ／ＣＢＡプロモーター（１．１ｋｂ）、ＣＡＧプロモーター（１．７ｋｂ）、ｍＴＴＲ、修飾されたｍＴＴＲ、ｍＴＴＲプロ、ｍＴＴＲエンハンサー、または塩基性アルブミンプロモーターから選択されるプロモーターを含む。
いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）である。
いくつかの実施形態において、調節可能なプロモーターは、誘導性または抑制性プロモーターである。
いくつかの実施形態において、ベクターは、以下：５’および３’の逆位末端反復配列、配列のイントロン上流、ならびにシス作用性調節モジュール（ＣＲＭ）のうちの１つ以上をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ベクターは、ウッドチャック転写後調節要素（ＷＰＲＥ）配列をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＷＰＲＥ配列は、修飾されている。
いくつかの実施形態において、ＷＰＲＥは、ｍｕｔ６ｄｅｌＡＴＧ修飾を含有する。いくつかの実施形態において、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥ３バリアントである。
いくつかの実施形態において、ＣＲＭは、肝臓特異的ＣＲＭである。
いくつかの実施形態において、ＣＲＭは、ＣＲＭ８である。
いくつかの実施形態において、ベクターは、少なくとも３つのＣＲＭを含む。
いくつかの実施形態において、ベクターは、３つのＣＲＭ８を含む。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体の軽鎖および／または重鎖は、抗体の半減期を増強する、および／またはエフェクター機能を低減する、１つ以上の変異を含む。
いくつかの実施形態において、１つ以上の変異は、ＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ）ならびに／またはＮＨａｎｃｅ変異（Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）を含む。
いくつかの実施形態において、１つ以上の変異は、ＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ）を含む。
いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶｒｈ．１０から選択される。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターキャプシドは、操作されている。
いくつかの実施形態において、操作されたｒＡＡＶベクターは、修飾されたアミノ酸配列を有するＡＡＶキャプシド配列を含む。
いくつかの実施形態において、修飾されたアミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、または置換を含む。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶキャプシドは、天然由来である。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターキャプシドは、ＡＡＶ８である。
いくつかの実施形態において、切断可能な配列は、フリン切断可能な配列である。
いくつかの実施形態において、フリン切断可能な配列の後に、リンカーおよび２Ａ配列が続く。
いくつかの実施形態において、リンカーは、ＧＳＧリンカーである。
いくつかの実施形態において、２Ａ配列は、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａ配列である。
いくつかの実施形態において、２Ａ配列は、Ｐ２Ａ配列である。
いくつかの実施形態において、ベクターは、分泌シグナルをさらにコードする。
いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、天然に発生するシグナルペプチドである。
いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、人工シグナルペプチドである。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、血漿カリクレインに結合することができる機能的抗血漿カリクレイン抗体を産生する。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、血漿カリクレインのタンパク質分解活性を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体は、血漿カリクレイン活性部位に結合する。
いくつかの実施形態において、結合は、血漿カリクレインの活性部位を閉塞する。
いくつかの実施形態において、結合は、血漿カリクレインの活性を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体は、プレカリクレインに結合しない。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、同じベクターから発現されている。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、異なるｒＡＡＶベクターから発現されている。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、別々のｒＡＡＶベクターから発現されている。
いくつかの実施形態において、ベクターは、５’および３’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）、１つ以上のエンハンサー要素、ならびに／またはポリ（Ａ）テールをさらに含む。
いくつかの実施形態において、１つ以上のエンハンサー要素は、転写因子結合部位および／またはＷＰＲＥ配列のクラスターから選択される。
いくつかの態様において、ＡＡＶ８キャプシドおよびｒＡＡＶベクターを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）が提供され、当該ベクターは、（ａ）５’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と、（ｂ）シス作用性調節モジュール（ＣＲＭ）と、（ｃ）肝臓特異的プロモーターと、（ｄ）抗血漿カリクレイン抗体重鎖配列および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖と、（ｅ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素（ＷＰＲＥ）と、（ｆ）３’ ＩＴＲとを含む。
いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）、修飾されたｈＴＴＲ（ｈＴＴＲ ｍｏｄ．）、α－抗トリプシンプロモーター、肝臓プロモーター１（ＬＰ１）、ＴＲＭプロモーター、ヒト第ＩＸ因子プロ／肝臓転写因子応答性オリゴマー、ＬＳＰ、ＣＭＶ／ＣＢＡプロモーター（１．１ｋｂ）、ＣＡＧプロモーター（１．７ｋｂ）、ｍＴＴＲ、修飾されたｍＴＴＲ、ｍＴＴＲプロ、ｍＴＴＲエンハンサー、または塩基性アルブミンプロモーターから選択されるプロモーターを含む。
いくつかの実施形態において、肝臓特異的プロモーターは、ヒトトランスサイレチンプロモーターを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＲＭは、肝臓特異的ＣＲＭである。
いくつかの実施形態において、ベクターは、少なくともＣＲＭを含む。
いくつかの実施形態において、ベクターは、３つのＣＲＭ８を含む。
いくつかの実施形態において、ＷＰＲＥ配列は、修飾されている。
いくつかの実施形態において、ＷＰＲＥ配列は、ＷＰＲＥ ｍｕｔ６ｄｅｌＡＴＧである。
いくつかの態様において、活性化カリクレイン－キニン経路の欠損または調節不全に関連する疾患または障害を治療することを必要とする対象において、それを行う方法が提供され、当該方法は、本明細書に記載される組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）を投与することを含む。
いくつかの実施形態において、活性化カリクレイン－キニン経路の欠損または調節不全は、Ｃ１エステラーゼ阻害剤の欠損に関連する疾患または障害である。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、静脈内、皮下、または経皮投与によって投与される。
いくつかの実施形態において、経皮投与は、遺伝子銃によるものである。
いくつかの実施形態において、活性化カリクレイン－キニン経路の欠損もしくは調節不全、またはＣ１エステラーゼ阻害剤の欠損に関連する障害が、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、正常なＣ１阻害剤を伴う血管性浮腫、糖尿病黄斑浮腫、片頭痛、腫瘍、神経変性疾患、アルツハイマー病、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、脊椎管狭窄症－変性脊椎疾患、動脈もしくは静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節炎、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助デバイスもしくはステントによって誘発される凝固、頭部外傷もしくは腫瘍周囲脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血性イベント、再狭窄、全身性エリテマトーデス腎炎／血管炎、または熱傷である。
いくつかの実施形態において、Ｃ１エステラーゼ阻害剤の欠損に関連する障害は、ＨＡＥである。いくつかの実施形態において、障害は、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）である。いくつかの実施形態において、障害は、正常なＣ１阻害剤を有する血管性浮腫である。いくつかの実施形態において、障害は、糖尿病黄斑浮腫である。いくつかの実施形態において、障害は、片頭痛である。いくつかの実施形態において、状態は、がんである。いくつかの実施形態において、障害は神経変性疾患である。いくつかの実施形態において、障害は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態において、障害は、関節リウマチである。いくつかの実施形態において、障害は、痛風である。いくつかの実施形態において、障害は、腸疾患である。いくつかの実施形態において、障害は、口腔粘膜炎である。いくつかの実施形態において、障害は、神経障害性疼痛である。いくつかの実施形態において、障害は、炎症性疼痛である。いくつかの実施形態において、障害は、脊椎管狭窄症－変性脊椎疾患である。いくつかの実施形態において、障害は、動脈または静脈血栓症である。いくつかの実施形態において、障害は、術後イレウスである。いくつかの実施形態において、障害は、大動脈瘤である。いくつかの実施形態において、障害は、変形性関節炎である。いくつかの実施形態において、障害は、血管炎である。いくつかの実施形態において、障害は、浮腫である。いくつかの実施形態において、障害は、脳浮腫である。いくつかの実施形態において、障害は、肺塞栓症である。いくつかの実施形態において、障害は、脳卒中である。いくつかの実施形態において、障害は、心室補助デバイスまたはステントによって誘発される凝固である。いくつかの実施形態において、障害は、頭部外傷または腫瘍周囲脳浮腫である。いくつかの実施形態において、障害は、敗血症である。いくつかの実施形態において、障害は、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血性イベントである。いくつかの実施形態において、障害は、再狭窄である。いくつかの実施形態において、障害は、全身性エリテマトーデス腎炎／血管炎である。いくつかの実施形態において、障害は、熱傷である。
いくつかの実施形態において、ＨＡＥは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型である。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、投与後にエピソーム性である。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体の投与後の重鎖および軽鎖は、集合して機能的抗体になる。
いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧである。
いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の約２～６週間後に、対象の血漿中で検出可能である。
いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の約４週間後に、対象の血漿中で検出可能である。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖は、配列番号１と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を有する。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖は、配列番号１と同一である。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、配列番号２と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を有する。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、配列番号２と同一である。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体の軽鎖および／または重鎖は、抗体の半減期を増強する、および／またはエフェクター機能を低減する、１つ以上の変異を含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖は、配列番号３と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を有する。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を有する。
抗血漿カリクレイン抗体をコードするｒＡＡＶベクターを使用した、例示的な遺伝子療法アプローチを示す概略図である。図１は、抗血漿カリクレイン抗体を必要とする対象に静脈内（ＩＶ）投与される抗血漿カリクレイン抗体をコードする、ＡＡＶベクターを示し、ベクターは、機能的抗血漿カリクレイン抗体に翻訳され、これは、対象の循環中に分泌され、抗体は、対象における血漿カリクレインの結合および阻害をもたらす。ＩＶ＝静脈内、ＨＣ＝重鎖、ＬＣ＝軽鎖。 図２Ａは、ｒＡＡＶ構築物（一連の概略図の上から下まで）１）ＩｇＧ（－）対照構築物、２）抗ＰＫａ ＩｇＧ＋ＬＡＬＡ構築物、３）抗ＰＫａ Ｆａｂ構築物、および４）抗ＰＫａ ＩｇＧ構築物を示す、一連の概略図である。図２Ｂは、肝臓特異的プロモーターおよび／またはエンハンサー要素、ＷＰＲＥ要素、ならびにヒト分泌シグナルを含む、ｒＡＡＶ構築物を示す概略図である。 同上。 図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｃは、指示されたベクターのＩＶ投与の２および４週間後の、マウス血漿中の総ＩｇＧレベルおよび活性ＩｇＧレベルをそれぞれ示すグラフである。総ＩｇＧを、抗Ｆｃ抗体検出システムを利用したＥＬＩＳＡで定量化した一方で、活性ＩｇＧ ＥＬＩＳＡは、活性ＰＫａに結合した発現ＩｇＧのみを定量化した。グラフの各々の左から右への試料は、次の処置に対応する：ヌルベクター対照（導入遺伝子発現なし）、非関連対照抗体のコード配列を含む対照ベクター、ＬＡＬＡ変異を有する抗ＰＫａ抗体のコード配列を含むベクター、抗ＰＫａ抗体Ｆａｂドメインのコード配列を含むベクター、完全長抗ＰＫａ抗体のコード配列を含むベクター。これらの試料のグラフに示されたデータを、投与の２週間後および４週間後に得た。一番右の状態は、血漿採取の２時間前にタンパク質試料として注射した抗ＰＫａ ＩｇＧ（ＬＡＬＡ変異を有する）のレベルに対応する。図３Ｃは、ＨＡＥの治療について、治療ＩｇＧレベルを示す上に横たわる水平線、および治療レベルを超える範囲を追加した、図３Ａに示されるのと同じグラフである。ＢＬＱ＝定量限界未満。図３Ｄは、ベクター－ビヒクル、ｒＡＡＶ８－１、ｒＡＡＶ８－２、およびｒＡＡＶ８－３の静脈内投与の２８日後の、マウス血漿中の総ＩｇＧレベルおよび活性ＩｇＧレベルを示すグラフである。ベクターｒＡＡＶ８－１、ｒＡＡＶ８－２、およびｒＡＡＶ８－３は主に、プロモーターおよび／またはエンハンサー要素、分泌シグナル、ならびにＷＰＲＥ要素に関するいくつかの変化を伴う、図３Ｅに示されるｒＡＡＶ構築物に由来する。ベクターｒＡＡＶ８－１は、ＣＢプロモーターおよびマウス分泌シグナルを含むが、ＷＰＲＥ要素を含まない。ベクターｒＡＡＶ８－２は、ｈＴＴＲ＋３ｘＣＲＭ８プロモーターおよびマウス分泌シグナルを含むが、ＷＰＲＥ要素を含まない。ベクターｒＡＡＶ８－３は、ｈＴＴＲ＋３ｘＣＲＭ８プロモーター、ヒト分泌シグナル、およびＷＰＲＥ ｍｕｔ６要素を含む。図３Ｆは、マウス（ｎ＝８）における１×１０１１ｖｇ／ｋｇ用量でのｒＡＡＶ８－２ベクターの静脈内投与後の、１６週間にわたるマウス血漿中の活性ＩｇＧレベルを示すグラフである。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 ｒＡＡＶ８－ＰＫａ ＩｇＧ；ＬＡＬＡで処置されたマウスの血漿由来のインビボ発現抗体の重鎖および軽鎖を検出するための、代表的なウェスタンブロットの画像である。指示されたベクターの投与後、２８日目に試料を採取した。比較のために、精製された抗ＰＫａ ｍＡｂ（ＣＨＯ細胞の従来のプラスミドトランスフェクションから発現および精製）が、ブロット上に含まれる。 図５Ａは、ｒＡＡＶベクター由来抗体のエクスビボ生物活性を測定するためのアッセイを示す概略図である。アッセイは、それぞれのベクターの投与の前および後に得られた血漿試料中の蛍光ペプチド基質を使用して、血漿カリクレイン（ＰＫａ）活性を測定する。図５Ｂは、示されるように、それぞれの抗体投与の１４および２８日後（またはタンパク質ＩｇＧ対照のＩＶ注射の０および２時間後）に採取した、血漿のエクスビボ生物活性を示すグラフである。生物活性を、血漿カリクレイン活性の阻害率として測定した。 同上。 次の投与後のマウス肝臓切片の代表的な免疫組織化学の一連の顕微鏡を示す：ＬＡＬＡ変異を有するｒＡＡＶ８抗血漿カリクレイン抗体（「ｒＡＡＶ８ ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡ」）（左）、ｒＡＡＶ８ヌルベクター対照（中央）、および未注射対照（右）。矢印は、特異的抗体の陽性染色を示す。 図７Ａ、図７Ｂ、および図７Ｃは、示されるように、完全長ＩｇＧまたはＦａｂのコード配列を含むｒＡＡＶベクターの注射の４週後の、マウス肝臓切片の代表的な免疫組織化学の異なる倍率の一連の顕微鏡写真を示す。肝細胞および類洞細胞の陽性染色は、図７Ａの幅広い矢印および狭い矢印によってそれぞれ示される。 同上。 同上。 ｒＡＡＶ８抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡベクターを注射し、投与の２週間後および４週間後に評価した、マウスからの活性抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡの割合を示すグラフである。一番右の状態は、精製された抗ＰＫａ ＬＡＬＡ抗体のＩＶ注射、その後の、投与前期間（時間ゼロ）および投与後２時間の活性抗ＰＫＡ ＩｇＧの割合の評価である。 インタクトな抗体および処理された抗体の分子量を測定する質量スペクトルを示す。この図の左のパネルにあるグラフは、精製／標準抗体を表す。この図の右のパネルにあるグラフは、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿中で産生された抗ＰＫａ抗体を表す。インタクトな抗体は、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿中で産生される天然抗体を指す。精製された抗ＰＫａ ｍＡｂを、ブランクマウス血漿中でスパイクして、精製されたインタクトな試料を作った。処理された抗体は、還元、脱グリコシル化、または脱グリコシル化および還元の両方を受けた抗ＰＫａ抗体を指す。 ｒＡＡＶ８構築物の静脈内投与の２８日後に採取した、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中で産生された、抗ＰＫａ抗体のエクスビボ生物活性を示すグラフである。カリクレイン－キニン経路を阻害する際のｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿中で産生された抗ＰＫａ抗体の効力を、同じ経路を阻害する際あの市販の阻害剤であるＴａｋｈｚｙｒｏ（商標）（ラナデルマブ、血漿カリクレインの完全ヒトモノクローナル抗体阻害剤）の効力と比較した。生物活性を、抗ＰＫａ抗体濃度の関数としての血漿カリクレイン活性の阻害率の観点から測定した。
定義
本発明がより容易に理解されるように、ある特定の用語が以下で最初に定義される。以下の用語および他の用語に対する追加の定義は、本明細書全体を通して記述される。
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないことを示さない限り、複数への言及を含む。例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」という用語は、その混合物を含めた複数の細胞（ｃｅｌｌｓ）を含む。
２Ａ配列：本明細書で使用される場合、「２Ａ」または「２Ａ配列」または「２Ａペプチド」は、自己切断可能なペプチドのクラスを指す。２Ａペプチドの例としては、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、およびＦ２Ａが挙げられる。Ｔ２Ａは、ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰの配列（配列番号１３）を有し、Ｐ２Ａは、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰの配列（配列番号１４）を有し、Ｅ２Ａは、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰの配列（配列番号１５）を有し、Ｆ２Ａは、ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰの配列（配列番号１６）を有する。本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターに適した切断効率の高い２Ａペプチドは、Ｃｈｎｇ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｍａｂｓ．２０１５；７（２）：４０３－４１２、およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１１；６（４）に記載され、それらの各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）：本明細書で使用される場合、「アデノ随伴ウイルス」または「ＡＡＶ」または組換えＡＡＶ（「ｒＡＡＶ」）という用語としては、ＡＡＶ １型、ＡＡＶ ２型、ＡＡＶ ３型（３Ａ型および３Ｂ型を含む）、ＡＡＶ ４型、ＡＡＶ ５型、ＡＡＶ ６型、ＡＡＶ ７型、ＡＡＶ ８型、ＡＡＶ ９型、ＡＡＶ １０型、ＡＡＶ １１型、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、およびヒツジＡＡＶが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌｕｍｅ ２，ｃｈａｐｔｅｒ ６９（４ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７８：６３８１－６３８８（２００４）、Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３０：３７５－３８３（２００４）を参照されたい）。典型的には、ＡＡＶは、分裂細胞および非分裂細胞の両方に感染し、宿主細胞のゲノムに組み込むことなく、染色体外状態で存在することができる。ＡＡＶベクターは、遺伝子療法で一般的に使用される。いくつかの実施形態において、ＡＡＶは、操作されている。ＡＡＶは、当該技術分野で既知の任意の方法を通して操作され得る。例えば、いくつかの実施形態において、ＡＡＶキャプシドは、タンパク質工学方法を通して操作されている。
投与：本明細書で使用される場合、「投与すること」、または「導入すること」という用語は、抗体をコードするｒＡＡＶベクターを、ｒＡＡＶベクターの効率的な送達をもたらす方法または経路によって、対象に送達する文脈において互換的に使用される。例えば、静脈内、皮下、または経皮を含む、ｒＡＡＶベクターを投与するための様々な方法が、当該技術分野で知られている。ｒＡＡＶベクターの経皮投与は、「遺伝子ガン」またはバイオリスティック粒子送達システムの使用によって実施され得る。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、非ウイルス性脂質ナノ粒子を介して投与される。
動物：本明細書で使用される場合、「動物」という用語は、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発育段階のヒトを指す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発育段階の非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、および／またはブタ）である。いくつかの実施形態において、動物は、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生類、魚、昆虫、および／または寄生虫を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、および／またはクローンであり得る。
抗体：本明細書で使用される場合、「抗体」または「Ａｂ」または「Ａｂｓ」または「ｍＡｂｓ」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫活性部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含有する分子を指す。「特異的に結合する」または「免疫反応する」とは、抗体が、その所望の抗原の１つの所望の抗原の１つ以上の領域と反応することを意味する。抗体には、抗体断片が含まれる。抗体には、ポリクローナル、モノクローナル、キメラｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦａｂ発現ライブラリが含まれるが、これらに限定されない。抗体は、全抗体、または免疫グロブリン、または抗体断片であってもよい。
認められている免疫グロブリンポリペプチドには、カッパおよびラムダ軽鎖、ならびに他の種におけるアルファ、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロン、およびミュー重鎖または等価物が含まれる。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは約２１４個のアミノ酸）は、ＮＨ２末端に約１１０個のアミノ酸の可変領域、およびＣＯＯＨ末端にカッパまたはラムダ定常領域を含む。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは約４４６個のアミノ酸）は、同様に、（約１１６個のアミノ酸の）可変領域、および（約３３０個のアミノ酸の）前述の重鎖定常領域のうちの１つ、例えば、ガンマを含む。
抗原結合部位：本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合部位は、重鎖（「Ｈ」）および軽鎖（「Ｌ」）のＮ末端可変（Ｖ）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に分岐したストレッチは、「超可変領域」と称され、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られるより保存された隣接ストレッチの間に介在する。したがって、「ＦＲ」という用語は、免疫グロブリン中の超可変領域の間、およびそれらに隣接して天然に見られるアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間において互いに対して配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合抗原の三次元表面に相補的であり、重鎖および軽鎖の各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と称される。
およそまたは約：本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、明記された参照値と同様である値を指す。ある特定の実施形態において、「およそ」または「約」という用語は、別途提示されない限り、または文脈から明らかではない限り（かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除く）、提示される参照値のいずれか（それよりも大きいまたは小さい）の方向で２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満内に収まる値の範囲を指す。
生物学的に活性：本明細書で使用される「生物学的に活性である」という句は、生物系において、特に生命体において活性を有する任意の薬剤の特徴を指す。例えば、生命体に投与された時に、その生命体に対して生物学的効果を有する薬剤は、生物学的に活性であると考えられる。ペプチドが生物学的に活性である特定の実施形態において、そのペプチドの少なくとも１つの生物活性を共有するそのペプチドの一部分は典型的に、「生物学的に活性」な部分と称される。
Ｃ１－エステラーゼ欠損またはＣ１－エステラーゼ障害：本明細書で使用される場合、「Ｃ１－エステラーゼ欠損」または「Ｃ１－エステラーゼ障害」は、健康な個人と比較した、対象に存在する機能的Ｃ１－エステラーゼ阻害剤の量の低減を意味する。
切断可能なリンカー：本明細書で使用される場合、「切断可能リンカー」という用語は、化合物によって切断され得る任意のポリペプチドリンカーを含む。例えば、切断可能なリンカーは、酵素的に切断可能なポリペプチドリンカーであり得る。例えば、フリン切断可能なリンカーまたはトロンビン切断可能なリンカーを含む、様々な酵素的に切断可能なリンカーが、本発明に適している。
共役、連結、結合、または融合：本明細書で使用される場合、「共役される」、「連結される」、「結合される」、「融合される」、および「融合」という用語は、互換的に使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含む、いかなる手段にもよる２つのさらなる要素または成分の結合を指す。
エピトープ：本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたは断片への特異的結合が可能な任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端ペプチドに対して作製されてもよい。
機能的均等物または機能的誘導体：本明細書で使用される「機能的均等物」または「機能的誘導体」という用語は、アミノ酸配列の機能的誘導体の文脈において、本来の配列の生物学的活性と実質的に同様の生物活性（機能的活性または構造的活性のいずれか）を保持する分子を示す。機能的誘導体または機能的均等物は、天然の誘導体であってもよく、または合成で調製される。例示的な機能的誘導体としては、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失、または付加を有するが、タンパク質の生物学的活性が保たれているアミノ酸配列が挙げられる。置換したアミノ酸は、望ましくは、置換されたアミノ酸と類似する化学物理的性質を有する。類似した望ましい化学物理的性質として、電荷、嵩高さ、疎水性、親水性などにおける類似性が挙げられる。
遺伝性血管性浮腫またはＨＡＥ：本明細書で使用される場合、「遺伝性血管性浮腫」または「ＨＡＥ」という用語は、予測不可能な反復性の炎症発作によって特徴付けられる血液障害を意味する。ＨＡＥはＣ１－ＩＮＨ欠損と関連しているのが典型的であり、この欠損は、Ｃ１－ＩＮＨが低レベルであることか、またはＣ１－ＩＮＨの活性が損なわれている、もしくは低下していることに起因し得る。ＨＡＥはまた、とりわけ、ＦＸＩＩの変異などの他の遺伝子変異とも関連している。症状として、顔面、四肢、生殖器、胃腸管、および上気道などの身体の任意の部位に生じ得る腫脹が挙げられるが、これらに限定されない。
インビトロ：本明細書で使用される場合、「インビトロ」という用語は、多細胞生物内というよりむしろ、人工環境下で、例えば、試験管または反応容器内、細胞培養下などで生じる事象を指す。
インビボ：本明細書で使用される場合、「インビボ」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物などの多細胞生物内で生じる事象を指す。細胞ベースの系の文脈では、この用語は、（例えば、インビトロ系とは対照的に）生きている細胞内で生じる事象を指すために使用され得る。
ＩＲＥＳ：本明細書で使用される場合、「ＩＲＥＳ」という用語は、任意の好適な内部リボソーム侵入部位配列を指す。
単離された：本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、（１）（自然界および／または実験的環境にかかわらず）最初に産生されたときに会合していた成分のうちの少なくともいくつかから分離しており、かつ／または（２）人工的に産生、調製、および／もしくは製造された物質および／または実体を指す。単離された物質および／または実体は、それらが最初に会合していた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９８％、約９９％、実質的に１００％、または１００％から分離され得る。いくつかの実施形態において、単離された薬剤は、約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、実質的に１００％、または１００％純粋である。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。本明細書で使用される場合、「単離細胞」という用語は、多細胞生物体に含有されていない細胞を指す。
免疫学的結合：「免疫学的結合」という用語は、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じるタイプの非共有結合性相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度、または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点から表され得、Ｋｄが小さいほどより高い親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野で周知の方法を使用して定量化され得る。
リンカーまたはペプチドリンカー：本明細書で使用される場合、「リンカー」または「ペプチドリンカー」という用語は、２つのポリペプチドドメインを接続するアミノ酸配列を指す。例えば、「リンカー」または「ペプチドリンカー」は、抗体重鎖アミノ酸配列および抗体軽鎖アミノ酸配列を分離することができる。例えば、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（ＧＳＧ）モチーフを有するリンカーを含む、様々な種類のリンカーが本発明に適している。
ポリペプチド：「ポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、ペプチド結合を介して互いに連結したアミノ酸の連続鎖を意味する。この用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を指すために使用されるが、当業者であれば、この用語は長い鎖に限定されず、ペプチド結合を介して一緒に連結された２つのアミノ酸を含む最小限の鎖を指すことができることを理解するであろう。当業者に知られている通り、ポリペプチドはプロセシングおよび／または修飾されてもよい。
予防：本明細書で使用される「予防する」または「予防」という用語は、疾患、障害、および／または病状の発病に関連して使用される場合、疾患、障害、および／または病状の発症のリスクを低減することを指す。
タンパク質：本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、個別単位として機能する１つ以上のポリペプチドを意味する。単一のポリペプチドが個別の機能性単位であり、かつ個別の機能性単位を形成するために他のポリペプチドと永続的にまたは一時的に物理的に会合することを必要としない場合、「ポリペプチド」という用語と「タンパク質」という用語は交換可能に用いることができる。個別の機能性単位が、互いに物理的に会合する２つ以上のポリペプチドから成る場合、「タンパク質」という用語は、物理的に共役し、かつ個別の単位として一緒に機能する複数のポリペプチドを指す。
対象：本明細書で使用される際に、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長類）を指す。ヒトは、出生前形態および出生後形態を含む。多くの実施形態において、対象は、ヒトである。対象は、疾患の診断または治療のために医療提供者に受診するヒトを指す、患者であり得る。「対象」という用語は、本明細書では「個体」または「患者」と互換的に使用される。対象は、疾患または障害に罹患し得るか、またはそれに罹り易いが、疾患または障害の症状を呈する場合も呈さない場合もある。
実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、目的の特徴または特性のすべてまたはほぼすべての範囲または程度を呈する質的状態を指す。生物学技術分野の当業者であれば、生物学的および化学的現象が、完了すること、および／または完了に至ること、または絶対的結果を達成もしくは回避することが、仮にあったとしても稀であることを、理解するであろう。従って、「実質的に」という用語は本明細書において、多くの生物学的および化学的現象に固有の完了の潜在的な欠如を捉えるために使用される。
実質的相同性：本明細書では、「実質的相同性」という句は、アミノ酸または核酸配列間の比較を指すために使用される。当業者に理解される通り、２つの配列は概して、それらが対応する位置に相同な残基を含有する場合、「実質的に相同」であると考えられる。相同な残基は同一の残基であってもよい。代替的に、相同な残基は非同一の残基であってもよく、構造的特徴および／または機能的特徴が適切に類似である。例えば、当業者に周知の通り、ある特定のアミノ酸は典型的に、「疎水性」または「親水性」アミノ酸として、かつ／または「極性」または「非極性」の側鎖を有するものとして分類される。１つのアミノ酸を同じタイプの別のアミノ酸に置換することは、しばしば「相同的」置換と考えられ得る。
この技術分野で周知の通り、アミノ酸配列または核酸配列は、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップドＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ－ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムで利用可能なものを含む様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較されてもよい。こうしたプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０，１９９０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，”Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２，１９９７、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、およびＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同な配列を同定することに加えて、上述のプログラムは典型的に、相同性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上が、残基の関連するストレッチにわたって相同である場合、実質的に相同であると考えられる。いくつかの実施形態において、関連するストレッチは完全な配列である。いくつかの実施形態において、関連するストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれ以上の残基である。
実質的同一性：本明細書では、「実質的同一性」という句は、アミノ酸または核酸配列間の比較を指すために使用される。当業者に理解される通り、２つの配列は、それらが対応する位置に同一の残基を含む場合、一般的に「実質的に同一」であると考えられる。この技術分野で周知の通り、アミノ酸配列または核酸配列は、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップドＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ－ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムで利用可能なものを含む様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較されてもよい。こうしたプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０，１９９０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２，１９９７、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、およびＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。同一の配列を同定することに加えて、上述のプログラムは典型的に、同一性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上が残基の関連するストレッチにわたって同一である場合に、実質的に同一であると考えられる。いくつかの実施形態において、関連するストレッチは完全な配列である。いくつかの実施形態において、関連するストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれ以上の残基である。
罹患：疾患、障害、および／または病状に「罹患」している個体は、その疾患、障害、および／または病状を有すると診断されているか、またはその疾患、障害、および／または病状の１つ以上の症状を示す。
治療有効量：本明細書で使用される場合、治療薬の「治療有効量」という用語は、疾患、障害、および／または状態に罹患しているか、またはそれに罹り易い対象に投与されたときに、疾患、障害、および／または状態の症状を治療する、診断する、予防する、および／またはその発症を遅延させるのに十分な量を意味する。当業者であれば、治療有効量が、典型的には、少なくとも１つの単位用量を含む投薬レジメンにより投与されることを理解する。
治療すること：本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、特定の疾患、障害、および／もしくは状態の１つ以上の症状もしくは特徴を部分的にまたは完全に緩和する、改善する、軽減する、抑制する、予防する、その発症を遅延させる、その重症度を低減する、ならびに／またはその発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。治療は、疾患の兆候を呈せず、かつ／または疾患の初期の兆候のみを呈する対象に、その疾患に関連する病態を発症させるリスクを減少させる目的のために投与され得る。
本明細書の終点による数値範囲の列挙は、その範囲内に含まれるすべての数および分数を含む（例えば、１～５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．９、４、および５を含む）。また、そのすべての数および分数は、「約」という用語によって修正されると推定されることを理解されたい。
本発明の様々な態様は、以下のセクションで詳細に記載される。セクションの使用は、本発明を限定することを意味しない。各セクションは、本発明の任意の態様に適用することができる。本出願において、「または」の使用は、別段の記述がない限り、「および／または」を意味する。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないことを示さない限り、単数および複数の両方の指示対象を含む。
本発明の様々な態様は、以下のセクションで詳細に記載される。セクションの使用は、本発明を限定することを意味しない。各セクションは、本発明の任意の態様に適用することができる。本出願において、「または」の使用は、別段の記述がない限り、「および／または」を意味する。
［発明を実施するための形態］
本開示は、ＨＡＥ関連Ｃ１ ＩＮＨ欠損などの血漿カリクレイン媒介性障害の治療のための抗血漿カリクレイン抗体をコードする、効率的かつ強固な組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを記載する。ヒトＣ１－ＩＮＨは、広範な抑制性および非抑制性の生物学的活性を有する重要な抗炎症性血漿タンパク質である。ヒトＣ１－ＩＮＨは、配列相同性、そのＣ末端ドメインの構造、およびプロテアーゼ阻害の機序により、血漿プロテアーゼ阻害剤の最大クラスであるセルピンスーパーファミリーに属する。このセルピンスーパーファミリーには、抗トロンビン、α１－プロテイナーゼ阻害剤、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、および多種多様な生理学系を調節する構造上類似した多くの他のタンパク質も含まれる。Ｃ１－ＩＮＨは、補体系、キニン生成の接触系、および固有凝固経路におけるプロテアーゼの阻害剤である。
Ｃ１－ＩＮＨの低い血漿含有量またはその機能不全により、補体カスケードおよび接触血漿カスケードの両方が活性化され、同様に他の系も影響を受ける恐れがある。Ｃ１－ＩＮＨの血漿含有量が５５μｇ／ｍＬ（正常値の約２５％）未満のレベルに低下すると、Ｃ１の自発的活性化が誘導されることがわかっている。正常なＣ１－ＩＮＨ活性の存在下であっても、カリクレインキニン系が過剰に活性化され得る他の方法がある。例えば、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）には、より容易に活性化され、したがって、その後にプレカリクレインを血漿カリクレインに活性化する傾向がより強い、既知の変異がある。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターは、過剰な血漿カリクレイン活性によって媒介される疾患または機能不全を有する対象を治療するために使用される。
血漿カリクレインに結合する抗体の送達のためのｒＡＡＶベクターアプローチを示す概略図が、図１に示される。図１に示されるように、組換え抗血漿カリクレイン抗体配列を含むｒＡＡＶベクターが対象に投与され、融合された重鎖および軽鎖の転写物の産生をもたらす。この転写物は、その後に切断され、循環中に分泌される機能的抗血漿カリクレイン抗体の産生をもたらす。図２Ａおよび２Ｂは、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターの実施形態を示す。
したがって、本開示は、とりわけ、カリクレイン－キニン系機能不全に関連する疾患などの疾患の治療に有用である抗体をコードする、ｒＡＡＶベクターを提供する。ｒＡＡＶベクターは、例えば、血漿カリクレインなどのカリクレイン－キニン系の選択されたタンパク質メンバーを標的とする抗体をコードするように構築され得る。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、抗血漿カリクレイン抗体をコードする。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードする。
本開示はさらに、とりわけ、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターを使用して疾患を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、疾患は、Ｃ１－ＩＮＨ欠損または障害などのカリクレイン－キニンカスケードの過剰な活性に関連する疾患である。
いくつかの実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨ欠損または障害は、ＨＡＥである。
ｒＡＡＶベクター設計
いくつかの態様において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードする、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターが本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターは、融合された抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖を産生する。融合された重鎖および軽鎖の転写物は、その後に切断されて、循環中に分泌される機能的抗血漿カリクレイン抗体を産生する。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターは、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖配列の両方を含む１つの遺伝子カセットを提供する。いくつかの実施形態において、肝臓は、ｒＡＡＶベクターの投与後に貯蔵所として作用する。
いくつかの実施形態において、リンカーは、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖を連結する。様々な種類のリンカーが、ｒＡＡＶベクターで使用され得る。いくつかの実施形態において、リンカーは、グリシン／セリンリンカー、すなわち、グリシンおよびセリンから本質的になるペプチドリンカーである。例示的な実施形態において、リンカーは、ＧＳまたはＧＳＧを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、ＧＳＧである。別の実施形態において、リンカーは、ＧＧＳＧ（配列番号７）、（ＧＳ）ｘ３（配列番号１２）、（ＧＧＳＧ）ｘ２（配列番号８）、ＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号９）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１０）、（ＧＧＧＧＳ）ｘ３（配列番号１１）などのＧｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（ＧＳＧ）モチーフを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、切断可能なリンカーである。多数の種類の切断可能なリンカー、例えば、酵素によって切断可能であるものが、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態において、リンカーは、フリンまたはトロンビン切断可能なリンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、フリン切断可能なリンカーである。
いくつかの実施形態において、フリン切断可能なリンカーの後に、２Ａ配列が続く。様々な種類の２Ａ配列が当該技術分野で既知であり、例えば、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａを含む。いくつかの実施形態において、２Ａ配列は、Ｔ２Ａである。いくつかの実施形態において、２Ａ配列は、Ｐ２Ａである。いくつかの実施形態において、２Ａは、Ｅ２Ａである。いくつかの実施形態において、２Ａは、Ｆ２Ａである。
いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターは、ＩＲＥＳ配列を有する。いくつかの実施形態において、リンカーは、ＩＲＥＳ配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、単一プロモーターによって制御されている。こうした構成は、転写物を含む１つの融合された重鎖および軽鎖の産生をもたらし、融合された重鎖配列および軽鎖配列の切断後に、２つのポリペプチド産物を生じさせる。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖は、別々のプロモーターによって制御されている。
様々な種類のプロモーターが、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターで使用され得る。これらには、例えば、ユビキタスプロモーター、組織特異的プロモーター、および調節可能な（例えば、誘導性または抑制性）プロモーターが含まれる。いくつかの実施形態において、プロモーターは、修飾されている。様々な種類の修飾されたプロモーターが当該技術分野で既知であり、例えばとりわけ、短縮された最小プロモーターを含む。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ユビキタスプロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ニワトリベータアクチンプロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは、肝臓特異的プロモーターである。好適な肝臓特異的プロモーターの例としては、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）、修飾されたｈＴＴＲ（ｈＴＴＲ ｍｏｄ．）、α－抗トリプシンプロモーター、肝臓プロモーター１（ＬＰ１）、ＴＲＭプロモーター、ヒト第ＩＸ因子プロ／肝臓転写因子応答性オリゴマー、ＬＳＰ、ＣＭＶ／ＣＢＡプロモーター（１．１ｋｂ）、ＣＡＧプロモーター（１．７ｋｂ）、ｍＴＴＲ、修飾されたｍＴＴＲ、ｍＴＴＲプロ、ｍＴＴＲエンハンサー、および塩基性アルブミンプロモーターが挙げられる。肝臓特異的プロモーターは、例えば、Ｚｈｉｊｉａｎ Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ｖｏｌ．１６，ｎｏ ２，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００８に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ｒＡＡＶベクターは、ｍＲＮＡの転写および／または翻訳を促進するための追加のエンハンサーまたは調節要素（例えば、エンハンサー配列、Ｋｏｚａｋ配列、ポリアデニル化配列、転写終結配列、ＩＲＥＳなど）を含有することができる。いくつかの実施形態において、ベクターは、５’および３’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、１つ以上のエンハンサー要素を含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、ポリ（Ａ）テールを含む。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、肝臓特異的制御要素／領域（ＨＣＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡｐｏＥエンハンサーを含む。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、例えば、シス調節要素（ＣＲＥ）などの肝臓特異的核酸調節要素を含む。ＣＲＥは、ＥＰ １８２０２８８８に記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的なＣＲＥには、例えば、ＣＲＥ４およびＣＲＥ６が含まれる。いくつかの実施形態において、ＣＲＥ４は、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩ遺伝子と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態において、ＣＲＥ６は、アポリポタンパク質Ｃ－Ｉ遺伝子と組み合わせて使用される。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御要素（ＷＰＲＥ）を含む。ＷＰＲＥの様々な最適化形態またはバリアント形態が、本明細書に記載されるベクターと使用され得、例えばとりわけ、ＷＰＲＥ野生型、ＷＰＲＥ３、およびＷＰＲＥｍｕｔ６ｄｅｌＡＴＧを含む。ＷＰＲＥおよび関連するＷＰＲＥバリアントは、米国特許第１０，１７９，９１８号、米国特許第７，４１９，８２９号、米国特許第９，７３１，０３３号、米国特許第８，７４８，１６９号、米国特許第７，８１６，１３１号、米国特許第８，８６５，８８１号、米国特許第６，２８７，８１４号、米国特許公開第２０１６／０１９９４１２号、米国特許公開第２０１７／０１１４３６３号、米国特許公開第２０１７／０３６０９６１号、米国特許公開第２０１９／００３２０７８号、米国特許公開第２０１８／０３５３６２１号、国際公開第ＷＯ２０１７／２０１５２７号、国際公開第ＷＯ２０１８／１５２４５１号、国際公開第ＷＯ２０１３／１５３３６１号、国際公開第ＷＯ２０１４／１４４７５６号、欧州特許第ＥＰ１０１７７８５号、および欧州特許公開第３４４０１９１号に記載されている。前述の公開の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＷＰＲＥ要素、および／または転写因子結合部位のクラスターを含む。したがって、いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御要素（ＷＰＲＥ）を含む。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、転写因子結合部位のクラスターを含む。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、シス調節モジュール（ＣＲＭ）を含む。様々な種類のＣＲＭが、本明細書に記載されるベクターで使用するのに適しており、例えば、肝臓特異的ＣＲＭ、ニューロン特異的ＣＲＭ、および／またはＣＲＭ８を含む。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＲＭは、肝臓特異的ＣＲＭである。いくつかの実施形態において、ＣＲＭは、ニューロン特異的ＣＦＭである。いくつかの実施形態において、ＣＲＭは，ＣＲＭ８である。いくつかの実施形態において、ベクターは、２つ以上のＣＲＭを含む。例えば、いくつかの実施形態において、ベクターは、２、３、４、５、または６つのＣＲＭを含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、３つのＣＲＭ、例えば、３つのＣＲＭ８を含む。
ｒＡＡＶベクターは、天然に発生する、および／または人工（例えば、組換え操作された）シグナルペプチドである分泌シグナルを含む。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、天然に発生するシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、人工（例えば、組換え操作された）シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、ヒト分泌シグナルである。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、マウス分泌シグナルである。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、より効率的な翻訳のために転写物の安定性を高め、かつ免疫原性を低減するように配列最適化される。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン重鎖および軽鎖を含むｒＡＡＶベクターは、より効率的な翻訳のために転写物の安定性を高め、かつ免疫原性を低減するように配列最適化される。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン重鎖および軽鎖は、コドン最適化される。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１ベクターである。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ３である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ４である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ５である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ７である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ８である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ９である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１０である。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１１である。
いくつかの態様において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、核酸は、ＤＮＡである。いくつかの実施形態において、核酸は、ＲＮＡである。いくつかの実施形態において、核酸は、ＤＮＡおよびＲＮＡの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むベクターが、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの実施形態において、プロモーターは、肝臓特異的プロモーターである。肝臓特異的プロモーターの例としては、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）および修飾されたｈＴＴＲ（ｈＴＴＲ ｍｏｄ．）が挙げられる。様々な実施形態で使用され得る様々な好適なプロモーターが、上述されている。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列は、シス－アクチン調節モジュール（ＣＲＭ）に作動可能に連結されている。いくつかの実施形態において、ＣＲＭは、肝臓特異的ＣＲＭを含む。いくつかの実施形態は、３つのＣＲＭ、例えば、３つのＣＲＭ８を含む。様々な実施形態で使用され得る様々な好適なＣＲＭが、本明細書に記載されている。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列は、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御要素（ＷＰＲＥ）に作動可能に連結されている。いくつかの実施形態において、ＷＰＲＥは、ＷＰＲＥｍｕｔ６である。ＷＰＲＥの様々な最適化形態またはバリアント形態が当該技術分野で既知であり、本明細書に記載されている。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列は、天然に発生する、または人工（例えば、組換え操作された）シグナルペプチドである分泌シグナルに作動可能に連結されている。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、天然に発生するシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、人工（例えば、組換え操作された）シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、ヒト分泌シグナルである。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、マウス分泌シグナルである。
抗血漿カリクレイン抗体
ｒＡＡＶベクターによってコードされる、例示的な重鎖および軽鎖の抗血漿カリクレインアミノ酸配列が、以下の表１に示される。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、半減期が延長されるように操作されている。この目的のために、いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、ＮＨａｎｃｅ変異（すなわち、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）を含む。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、ＹＴＥ変異（すなわち、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、Ｆｃ受容体との相互作用が低減されるように操作されている。この目的のために、いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、ＬＡＬＡ変異（すなわち、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ）を含む。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、アルブミンまたはＦｃＲｎ相互作用ペプチドに融合されている。
いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、以下の表に記載される配列と約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約５０％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約５５％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約６０％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約６５％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約７０％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約７５％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約８０％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約８５％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約９０％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約９５％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と約１００％同一である。いくつかの実施形態において、重鎖配列および軽鎖配列は、表１に記載される配列と同一である。
Figure 2022536692000002
いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＦＴＦＳＨＹＩＭＭ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＧＩＹＳＳＧＧＩＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ（配列番号１８）を含む重鎖ＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＲＲＩＧＶＰＲＲＤＥＦＤＩ（配列番号１９）を含む重鎖ＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＦＴＦＳＨＹＩＭＭ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、ＧＩＹＳＳＧＧＩＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ（配列番号１８）を含むＣＤＲ２、およびＲＲＩＧＶＰＲＲＤＥＦＤＩ（配列番号１９）を含むＣＤＲ３を有する。
いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号２０）を含む軽鎖ＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＹＫＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦ（配列番号２１）を含む軽鎖ＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＱＱＹＮＴＹＷＴ（配列番号２２）を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号２０）を含む軽鎖ＣＤＲ１、（配列番号２１）を含む軽鎖ＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＴＹＷＴ（配列番号２２）を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する。
いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＦＴＦＳＨＹＩＭＭ（配列番号１７）を含む重鎖ＣＤＲ１、ＧＩＹＳＳＧＧＩＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ（配列番号１８）を含むＣＤＲ２、およびＲＲＩＧＶＰＲＲＤＥＦＤＩ（配列番号１９）を含むＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態において、例示的な抗血漿カリクレイン抗体は、ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号２０）を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＹＫＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦ（配列番号２１）を含む軽鎖ＣＤＲ２、およびＱＱＹＮＴＹＷＴ（配列番号２２）を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤＲは、本明細書に列挙されるＣＤＲに関連する１、２、３、または４つのアミノ酸置換、欠失、または挿入を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＣＤＲは、列挙されたＣＤＲ配列と比較して、３つ以下、２つ以下、または１つ以下のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する。いくつかの実施形態において、親和性成熟バリアントは、所望の結合特性を得ている。様々な親和性成熟ＣＤＲ配列が、ＷＯ２０１４／１５２２３２に提示され、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の例示的な抗血漿カリクレイン抗体には、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、およびＩｇＡｓｅｃ）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ならびにＳＭＩＰ結合部分が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体は、ラナデルマブの重鎖配列および軽鎖配列をコードする。いくつかの実施形態において、抗体は、完全長抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体断片ではない。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｆａｂではない。
特定の実施形態において、抗体は、ｓｃＦｖである。ｓｃＦｖは、例えば、抗原結合を可能にするためにｓｃＦｖが異なる方向に向くことを可能にする可動性リンカーを含み得る。様々な実施形態において、抗体は、細胞内部の還元環境においてその構造および機能を保持するサイトゾル安定性ｓｃＦｖまたはイントラボディであってもよい（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｆｉｓｈｅｒ ａｎｄ ＤｅＬｉｓａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８５（１）：２９９－３１１，２００９を参照されたい）。特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、本明細書に記載される方法に従って、ＩｇＧまたはキメラ抗原受容体に変換される。実施形態において、抗体は、変性タンパク質標的および天然タンパク質標的の両方に結合する。実施形態において、抗体は、変性タンパク質または天然タンパク質のいずれかに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、補体系の選択メンバーに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、血漿カリクレインに結合する。
ヒトを含むほとんどの哺乳動物において、全抗体は、ジスルフィド結合によって接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）、ならびにＣＨ１とＣＨ２との間のヒンジ領域からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。
抗体は、抗体のすべての既知の形態、および抗体様特性を有する他のタンパク質骨格を含む。例えば、抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、またはフィブロネクチンもしくはアンキリン反復などの抗体様特性を有するタンパク質骨格であり得る。抗体は、以下のアイソタイプのうちのいずれかを有することができる：ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、およびＩｇＡｓｅｃ）、ＩｇＤ、またはＩｇＥ。
抗体断片は、抗体に由来する１つ以上のセグメントを含んでもよい。抗体に由来するセグメントは、特定の抗原に特異的に結合する能力を保持し得る。抗体断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、またはＳＭＩＰであってもよい。抗体断片は、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、ドメイン抗体、線形抗体、一本鎖抗体、または抗体断片から形成され得る様々な多重特異性抗体のうちのいずれかであってもよい。
抗体断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片：ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片：ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片：ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片：抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなる断片、（ｖ）ｄＡｂ断片：ＶＨおよびＶＬドメインを含む断片、（ｖｉ）ｄＡｂ断片：ＶＨドメインである断片、（ｖｉｉ）ｄＡｂ断片：ＶＬドメインである断片、（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｉｘ）１つ以上の合成リンカーによって任意に結合され得る、２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、組換え法を使用して、例えば、それらが単一タンパク質として発現されることを可能にする合成リンカーによって結合され得、そのＶＬおよびＶＨ領域は、対になって、一価結合部分（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）を形成する。抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を使用して得られてもよく、場合によっては、インタクトな抗体と同じ様式で使用されてもよい。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生されてもよい。抗体断片は、さらなるＣ末端アミノ酸、Ｎ末端アミノ酸、または個々の断片を分離するアミノ酸を付加した、上述の抗体断片のいずれかをさらに含んでもよい。
抗体は、第１の種に由来する１つ以上の抗原決定領域または定常領域、および第２の種に由来する１つ以上の抗原決定領域または定常領域を含む場合、キメラと称されてもよい。キメラ抗体は、例えば、遺伝子工学によって構築されてもよい。キメラ抗体は、異なる種に属する（例えば、マウスおよびヒトに由来する）免疫グロブリン遺伝子セグメントを含んでもよい。
疾患の治療のための抗血漿カリクレイン抗体をコードするｒＡＡＶベクターの使用
Ｃ１エステラーゼ阻害剤の欠損または障害などの調節されていない血漿カリクレイン活性に関連する疾患の治療を必要とする対象において、それを行う方法が本明細書に記載され、方法は、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖をコードするＡＡＶベクターを投与することを含む。本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターの投与後、抗血漿カリクレイン抗体の重鎖および軽鎖は、集合して機能的抗体になる。機能的抗体は、循環中に分泌され、血漿カリクレインに結合する。
本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターは、任意のＣ１エステラーゼ阻害剤欠損もしくは障害、および／または調節不全の血漿カリクレイン活性によって媒介される障害を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態において、障害は、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、脊椎管狭窄症－変性脊椎疾患、動脈もしくは静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節炎、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助デバイスもしくはステントによって誘発される凝固、頭部外傷もしくは腫瘍周囲脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血性イベント、再狭窄、全身性エリテマトーデス腎炎／血管炎、糖尿病黄斑浮腫、または熱傷である。いくつかの実施形態において、Ｃ１エステラーゼ阻害剤欠損または障害は、ＨＡＥである。ＨＡＥは、ＨＡＥ Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型を含む任意の種類のＨＡＥであり得る。
いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、それを必要とする対象への投与後にエピソーム性のままである。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、それを必要とする対象への投与後にエピソーム性のままではない。例えば、いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、対象のゲノムに組み込む。こうした統合は、例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮＳ）、ＡＲＣＵＳゲノム編集、および／またはＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系などの様々な遺伝子編集技術を使用することによって達成され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物が、それを必要とする対象を治療するために使用される。本発明のｒＡＡＶベクターまたは粒子を含有する医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含有する。好適な薬学的担体の例は、当該技術分野で周知であり、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水乳濁液などの乳濁液、様々なタイプの湿潤剤、滅菌溶液などを含む。こうした担体は、従来の方法によって製剤化され得、治療有効量で対象に投与される。
ｒＡＡＶベクターは、好適な経路を介してそれを必要とする対象に投与される。実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、静脈内、腹腔内、皮下、または皮内投与によって投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、静脈内投与される。実施形態において、皮内投与は、「遺伝子銃」またはバイオリスティック粒子送達システムの使用による投与を含む。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、非ウイルス性脂質ナノ粒子を介して投与される。例えば、ｒＡＡＶベクターを含む組成物は、１つ以上の希釈剤、緩衝剤、リポソーム、脂質、脂質複合体を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、マイクロスフェアまたは脂質ナノ粒子などのナノ粒子内に含まれる。
いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の約２～６週間後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、約２週間で、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、約３週間で、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、約４週間で、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、約５週間で、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、約６週間で、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の約２～６週間後に、対象の肝細胞中で検出可能である。
いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも３か月、６か月、１２か月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、または１０年後に、対象の血漿中で検出可能である。したがって、いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも３か月後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも６か月後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも１２か月後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも２年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも３年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも４年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも５年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも６年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも７年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも８年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも９年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクターの投与の少なくとも１０年後に、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、機能的抗血漿カリクレイン抗体は、ｒＡＡＶベクター投与後の対象の残りの寿命にわたって、対象の血漿中で検出可能である。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、静脈内に送達された精製された抗ＰＫａ ＩｇＧの投与後に見られるのと同じ程度の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、静脈内に送達される精製された抗ＰＫａ ＩｇＧの投与と比較して、より多量の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。
いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも６０％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも６５％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも７０％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも７５％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも８０％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも８５％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも９０％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも９５％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。いくつかの実施形態において、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖抗体を含む投与されたｒＡＡＶは、少なくとも９９％の活性抗ＰＫａ抗体の産生をもたらす。
いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターの対象への投与後、循環中で検出可能な血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、精製された血漿カリクレイン抗体の対象への直接投与後に検出可能なＩｇＧよりも約４～１０倍高い。いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターの対象への投与後、検出可能な活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルを満たすか、またはそれを超える。いくつかの実施形態において、ｒＡＡＶベクターの投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約２～３５倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約２倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約３倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約４倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約５倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約６倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約６倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約７倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約８倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約９倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約１０倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約１５倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約２０倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約２５倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約３０倍である。いくつかの実施形態において、投与後の活性血漿カリクレインＩｇＧのレベルは、ヒト治療レベルの約３５倍である。
したがって、抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖を含むｒＡＡＶベクターの投与は、精製された抗血漿カリクレイン抗体のそれを必要とする対象への単回投与と比較して、持続的で強固な発現をもたらす。
いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約５０～９５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。したがって、いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約５０％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約５５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約６０％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約６５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約７０％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約７５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約７５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約８０％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約８５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約９０％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。いくつかの実施形態において、投与されたｒＡＡＶベクターは、血漿カリクレイン活性を約９５％阻害することができる抗血漿カリクレイン抗体を産生する。
本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の実施例において明らかになる。しかしながら、本実施例は、本発明の実施形態を示すが、単に例示のためであり、制限するものではないことを理解すべきである。本発明の範囲内の様々な変更および修正は、本実施例から当業者に明らかになるであろう。
実施例１．ベクター設計
抗カリクレイン抗体のコード配列およびその変異を含むｒＡＡＶ発現構築物（ｒＡＡＶベクター）を生成する例示的な方法および設計が、本実施例に提供される。この研究では、組換えＡＡＶベクター（ｒＡＡＶ８）を使用した。ｒＡＡＶベクターの基本設計は、逆位末端反復配列（ＩＴＲ）：５’－ＩＴＲおよび３’－ＩＴＲが隣接した発現カセットを含む。これらのＩＴＲは、ＡＡＶ複製タンパク質Ｒｅｐおよびベクター産生細胞の関連因子によって、ベクターゲノムの複製およびパッケージングを媒介する。典型的には、発現カセットは、プロモーター、コード配列、ポリＡテール、および／またはタグを含有する。ヒト抗血漿カリクレイン（ＰＫａ）－ＩｇＧ抗体（ラナデルマブ）をコードする発現構築物を、標準的な分子生物学技術を使用して設計および調製した。抗ＰＫａ抗体重鎖（ＨＣ）のコード配列および抗ＰＫａ抗体軽鎖（ＬＣ）のコード配列を、プロモーターであるニワトリＢ－アクチンプロモーター（ＣＢ）の下流に挿入した。別の例示的な方法および設計では、プロモーター（＋／－エンハンサー）は、ＣＲＭ８／ｈＴＴＲを含む肝臓特異的プロモーターである。いくつかの実施形態において、発現カセットはまた、ＷＰＲＥ要素およびヒト分泌シグナル（ＳＳ）を含む。フリン切断可能な部位（Ｆ／２Ａ）をコードするオリゴヌクレオチドを含む短いリンカーを、ＨＣとＬＣとの間に挿入した。１６８ｂｐ ＳＶ４０ ｐｏｌ Ａ配列およびＤＮＡタイター配列を、ＩｇＧ ＬＣの下流に挿入した。図２Ａおよび２Ｂは、発現構築物の概略表現を例示する。次いで、発現構築物をＡＡＶベクターにライゲーションし、シーケンシングによって試験した。ベクターをウイルス粒子にパッケージングし、保存した。
上述のスキームの任意の数の変化形が実施され得る。代替の構築物は、ＨＣおよびＬＣのコード配列を、断片抗原結合（Ｆａｂ）のコード配列と置き換えること、抗ＰＫａコード配列を、Ｆｃ受容体との相互作用を阻害するロイシン－アラニン変異（ＬＡＬＡ）を有するバリアントと置き換えることによって得られ得る（図２Ａおよび２Ｂ）。さらに、２つ以上のプロモーターが使用されてもよく、かつ／またはＩＲＥＳ配列がＬＣの上流に導入されてもよい。
実施例２．インビボでのｒＡＡＶ駆動型抗ＰＫａ抗体の発現
以下に記載される例示的な研究は、抗ＰＫＡ抗体のｒＡＡＶ駆動型発現を試験することを対象とする。表２に記載されるように、（ａ）陰性対照ベクター（（－）ｖｅ対照）を発現するｒＡＡＶベクター、または試験試料（ｂ）抗ＰＫａ ＩｇＧ＋ＬＡＬＡ構築物、（ｃ）抗ＰＫａ Ｆａｂ、（ｄ）抗ＰＫａ ＩｇＧ、もしくは陽性対照（精製された抗血漿カリクレイン抗体）を、マウスに注射した。
Figure 2022536692000003
血漿を、ｒＡＡＶの注射の２週間後および４週間後に採取し、血漿中の総ヒトＩｇＧ濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。結果が、図３Ａ～３Ｃに示される。対照ｒＡＡＶを注射したマウスは、総ヒトＩｇＧレベルのいかなる増加も示さなかった。一方で、抗ＰＫａ ＩｇＧ＋ＬＡＬＡおよび抗ＰＫａ ＩｇＧを投与されたマウスにおいて、血漿中のヒトＩｇＧ総濃度は高かった（図３Ａ～３Ｃ）。図３Ａおよび３Ｂに示されるように、活性ＩｇＧのレベルを試験したときに同様の結果が得られた。さらに、図３Ｃは、ｒＡＡＶ構築物の注射後の抗ＰＫａ ＩｇＧ抗体の増加のレベルが、ヒトにおける治療レベルよりも３０倍近く高かったことを実証した。
以下に記載される別の例示的な研究は、ＣＲＭ８／ｈＴＴＲ、分泌シグナル、およびＷＰＲＥ要素のうちの１つ以上を含むｒＡＡＶ発現構築物によって、抗ＰＫａ抗体発現を評価した。３つのｒＡＡＶ発現構築物、ｒＡＡＶ８－１、ｒＡＡＶ８－２、およびｒＡＡＶ８－３を、５×１０１１ｖｇ／ｋｇ用量でマウスに尾静脈注射を介して投与した。ｒＡＡＶ８－３構築物の発現レベルを、２つのベクター用量、５×１０１１ｖｇ／ｋｇおよび５×１０１０ｖｇ／ｋｇで試験した。ベクターｒＡＡＶ８－１は、ニワトリＢ－アクチンプロモーター（ＣＢ）およびマウス分泌シグナルを含むが、ＷＰＲＥ要素を含まない。ベクターｒＡＡＶ８－２は、ｈＴＴＲ＋３ｘＣＲＭ８プロモーターおよびマウス分泌シグナルを含むが、ＷＰＲＥ要素を含まない。ベクターｒＡＡＶ８－３は、ｈＴＴＲ＋３ｘＣＲＭ８プロモーター、およびヒト分泌シグナル、およびＷＰＲＥｍｕｔ６要素を含む。
血漿を、ｒＡＡＶの注射の２８日後に採取し、血漿中の総ヒトＩｇＧレベルおよび活性ヒトＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。結果が、図３Ｄに示される。ビヒクルを注射したマウスは、ヒトＩｇＧレベルのいかなる増加も示さなかった。一方で、ｒＡＡＶ８－１、ｒＡＡＶ８－２、およびｒＡＡＶ８－３構築物を投与されたマウスでは、血漿中の総ヒトＩｇＧ濃度および活性ヒトＩｇＧ濃度は高かった。血漿中の総ヒトＩｇＧレベルおよび活性ヒトＩｇＧレベルの両方が、ｒＡＡＶ８－２およびｒＡＡＶ８－３構築物を投与されたマウスにおいて、ｒＡＡＶ８－１と比較してより高く、ＩｇＧ発現の促進における肝臓特異的プロモーターおよびエンハンサー要素の寄与を示している。ｒＡＡＶ８－３構築物を投与されたマウスの血漿中の総ヒトＩｇＧレベルおよび活性ヒトＩｇＧレベルの両方が、ｒＡＡＶ８－２構築物を投与されたマウスと比較してより高かっただけでなく、比較的安定もしており、ｍＲＮＡの安定化におけるＷＰＲＥ要素の寄与を示している。ｒＡＡＶ８－３構築物を投与されたマウスの血漿中のＩｇＧレベルの安定した発現は、ｒＡＡＶ８－３構築物をより低い用量、５×１０１０ｖｇ／ｋｇでマウスに注射したときにも明らかである。ｒＡＡＶ８－３構築物について図３Ｄに示されるＩｇＧ発現データは、安定したＩｇＧ発現を示す。
以下に記載される別の例示的な研究は、マウスにおけるｒＡＡＶ８－２構築物による抗ＰＫＡ抗体発現の期間を試験することを対象とする。ｒＡＡＶ８－２構築物を、１×１０１１ｖｇ／ｋｇ用量で尾静脈注射を介してマウス（ｎ＝８）に投与し、血漿中の活性ＩｇＧ発現のレベルを１６週間（４か月）にわたって測定した。上述のように、ベクターｒＡＡＶ８－２は、ｈＴＴＲ＋３ｘＣＲＭ８プロモーターおよびマウス分泌シグナルを含むが、ＷＰＲＥ要素を含まない。
血漿を、ｒＡＡＶ８－２の注射の２、４、６、８、１０、１２、１４、および１６週間後に採取し、血漿中の活性ヒトＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。ｒＡＡＶ８－２ベクターを注射したマウスは、１６週間にわたって活性ヒトＩｇＧを発現し続けた。最大１６週間にわたるマウス血漿中の活性ヒトＩｇＧの発現プロファイルが、図３Ｆに示される。
図４は、２８日目に採取したマウス血漿試料中の抗ＰＫａ ＩｇＧ＋ＬＡＬＡ重鎖および軽鎖タンパク質の処理および発現の成功を示す。８～６％還元トリス－グリシンゲル中で試料を電気泳動させた後にウェスタンブロットを実施し、１：５０００の希釈でウサギ抗ヒトＩｇＧ Ｈ＆Ｌ抗体を使用して、免疫ブロット反応を実施した。
実施例３．ｒＡＡＶ駆動型抗ＰＫａ抗体によるＰＫａの阻害
ＰＫａ阻害のレベルを決定するために、図５Ａの概略図に示されるように、蛍光アッセイを使用した。注射の１４日後および２８日後に、対照または抗ＰＫａ抗体発現ｒＡＡＶを注射したマウスから血漿を採取した。図５Ｂに示されるように、抗ＰＫａ ＩｇＧ＋ＬＡＬＡおよび抗ＰＫａ ＩｇＧを注射したマウスは、１４日目および２８日目にＰＫａ活性の強固な阻害を示した。
実施例４：マウス肝臓におけるｒＡＡＶ８／抗ＰＫａ ＩｇＧまたはＦａｂの発現
この研究では、マウスにｒＡＡＶ８／抗ＰＫａ ＩｇＧまたはＦａｂを注射し、４週間後に安楽死させた。肝臓由来の組織標本を免疫組織化学（ＩＨＣ）のために処理した。図６は、抗ＰＫａ－ＬＡＬＡベクターを発現するベクター（左画像）を注射したマウスのみにおける、抗ヒトＩｇＧ（抗Ｆａｂドメイン検出）の陽性の免疫染色を示す。空のベクターを注射したマウス組織（中央）も、未注射のマウスも、免疫染色を示さなかった。図７Ａ～７Ｃは、抗ＰＫａ ＩｇＧ＋ＬＡＬＡ、抗ＰＫａ ＩｇＧ、および抗ＰＫａ Ｆａｂベクターを注射したマウスからの肝臓試料の高倍率、中倍率、および低倍率のＩＨＣ画像をそれぞれ示す。矢印で示されるように、肝細胞および肝臓類洞細胞において陽性染色が観察された。
実施例５：ｒＡＡＶ投与後の抗ＰＫａ抗体の持続的産生
抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡ重鎖配列および軽鎖配列を含むｒＡＡＶ８の投与後に産生された抗ＰＫａ抗体の活性率を評価するための研究を実施した。これらの研究のために、マウスに１ｅ１０ｖｇおよび１ｅ１１ｖｇ用量のいずれかのｒＡＡＶ抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡベクターを注射し、その後、ｒＡＡＶベクター投与の２週間後および４週間後に活性抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡの存在を評価した。これらの研究の陰性対照として、非免疫化マウスからの試料（図８中時間ゼロ、「該当なし」）を、活性抗ＰＫＡ ＩｇＧ ＬＡＬＡの存在について評価した。これらの研究の陽性対照として、精製された抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡで免疫化されたマウスからの試料を、精製された抗ＰＫａ ＩｇＧの注射の２時間後に評価した。これらの研究からの結果が、図８に示される。
結果は、抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡ重鎖配列および軽鎖配列を含むｒＡＡＶの投与が、評価した時点（２週間および４週間）を通して、活性抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡの持続的産生をもたらしたことを示す。驚くべきことに、肝臓で産生されたｒＡＡＶ抗体は、ＩＶによって送達された、精製されたタンパク質に対して同一の活性率を有した。この研究は、ｒＡＡＶの単回投与後の活性抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡの持続的発現を得るために、抗ＰＫａ ＩｇＧ ＬＡＬＡ重鎖配列および軽鎖配列を含むｒＡＡＶを使用することの実行可能性を実証する。
実施例６：インタクトな抗体および処理された抗体のＬＣ－ＭＳ分析
この研究は、２つの抗ＰＫａ抗体の質量スペクトルを比較する：１）精製または標準抗ＰＫａ抗体、および２）ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中で産生された抗ＰＫａ抗体。これら両方の抗体の質量スペクトルを、以下の４つの条件下で比較した：１）両方の抗ＰＫａ抗体がインタクトであった場合、すなわち、抗体がマウス血漿中にあった場合、２）両方の抗ＰＫａ抗体がジチオトレイトール（ＤＴＴ）を使用して還元された場合、３）両方の抗ＰＫａ抗体が脱グリコシル化された場合、ならびに４）両方の抗ＰＫａ抗体が脱グリコシル化および還元された場合。両方の抗ＰＫａ抗体をインタクトな形態で比較するために、精製された抗ＰＫａ抗体をブランクマウス血漿に添加し、次いでｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中にあった抗ＰＫａ抗体と比較した。
図９は、４つの異なる上述のような条件下での、精製された抗ＰＫａ抗体およびｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿中で産生された抗ＰＫａ抗体の質量スペクトルを示す。図の左のパネルにあるグラフは、精製／標準抗体を表す。図の右のパネルにあるグラフは、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中で産生された抗ＰＫａ抗体を表す。明確にわかるように、精製された抗ＰＫａ抗体の分子量およびスペクトルは、類似の脱グリコシル化条件下で、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中で産生された抗ＰＫａ抗体と同一である。例えば、脱グリコシル化された、精製された抗ＰＫａ抗体（左パネル、上から３番目のグラフ）、およびｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿から得られた脱グリコシル化された抗ＰＫａ抗体（右パネル、上から３番目のグラフ）は両方とも、同じスペクトルおよび分子量を示す。脱グリコシル化および還元された、精製された抗ＰＫａ抗体（左パネル、一番下のグラフ）、ならびにｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿から得られた脱グリコシル化および還元された抗ＰＫａ抗体（右パネル、一番下のグラフ）も、軽鎖および重鎖の両方に対して同じスペクトルおよび質量を示す。
実施例７：ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿中で産生された抗ＰＫａ抗体のエクスビボ効力の評価
この研究は、ｒＡＡＶ８構築物の静脈内投与の２８日後に採取した、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中で産生された抗ＰＫａ抗体のエクスビボ生物活性を示す。この研究では、カリクレイン－キニン経路を、外因性阻害剤であるＴａｋｈｚｙｒｏ（商標）の漸増（滴定）の存在下でのエラグ酸の添加によって、対照未処置マウス血漿試料中で活性化した。Ｔａｋｈｚｙｒｏ（商標）（ラナデルマブ－ｆｌｙｏ）は、１２歳以上の患者における遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）発作を予防するために、ＦＤＡが承認した完全ヒトモノクローナル抗体薬である。血漿中のＰＫａ活性は、ＰＫａ特異的プロ蛍光基質（ＰＦＲ－ＡＭＣ）の添加、およびその後の経時的に行われる蛍光測定を通して監視される。ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿試料中で産生された抗ＰＫａ抗体の生物活性を試験するために、カリクレイン－キニン経路を、これらのマウスからの血漿へのエラグ酸の添加することによって同様に活性化し、ＰＫａ活性を測定した。具体的には、個々のｒＡＡＶ８処置されたマウスからの投与後血漿を、エラグ酸およびＰＦＲ－ＡＭＣ添加前の同じマウスからの投与前血漿試料に連続希釈して、用量応答を測定した。
生物活性を、これらの希釈系列からの抗ＰＫａ抗体濃度の関数としての血漿カリクレイン活性の阻害率の観点から測定し、より高いレベルの抗体は、より低いＰＫａ活性率をもたらす。図１０は、この研究の結果を示す。結果は、ｒＡＡＶ８処置されたマウスにおいて産生された抗ＰＫａ抗体の用量応答が、ＦＤＡが承認した薬物であるＴａｋｈｚｙｒｏ（商標）の用量応答と同一であることを実証する。これは、ｒＡＡＶ８処置されたマウス血漿中で産生された抗ＰＫａ抗体が、Ｔａｋｈｚｙｒｏ（商標）医薬品と区別できない、非常に高い完全性を有することを実証する。
均等物および範囲
当業者は、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識するか、または日常的な実験作業を越えない手法を使用して確認できるであろう。本発明の範囲は、上記の記載に限定されることは意図されず、むしろ以下の特許請求の範囲に記述されるとおりである。

Claims (68)

  1. 抗血漿カリクレイン抗体重鎖および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖を含む完全長抗体をコードする、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター。
  2. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、リンカーを介して連結されている、請求項１に記載のｒＡＡＶベクター。
  3. 前記リンカーが、切断可能なリンカーを含む、請求項２に記載のｒＡＡＶベクター。
  4. 前記リンカーが、切断不可能なリンカーを含む、請求項３に記載のｒＡＡＶベクター。
  5. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、単一プロモーターによって制御されている、請求項１～４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  6. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、別々のプロモーターによって制御されている、請求項１～５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  7. 前記単一プロモーターまたは前記別々のプロモーターが、ユビキタスプロモーター、組織特異的プロモーター、または調節可能なプロモーターから選択される、請求項５または６に記載のｒＡＡＶベクター。
  8. 前記組織特異的プロモーターが、肝臓特異的プロモーターである、請求項７に記載のｒＡＡＶベクター。
  9. 前記肝臓特異的プロモーターが、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）、修飾されたｈＴＴＲ（ｈＴＴＲ ｍｏｄ．）、α－抗トリプシンプロモーター、肝臓プロモーター１（ＬＰ１）、ＴＲＭプロモーター、ヒト第ＩＸ因子プロ／肝臓転写因子応答性オリゴマー、ＬＳＰ、ＣＭＶ／ＣＢＡプロモーター（１．１ｋｂ）、ＣＡＧプロモーター（１．７ｋｂ）、ｍＴＴＲ、修飾されたｍＴＴＲ、ｍＴＴＲプロ、ｍＴＴＲエンハンサー、または塩基性アルブミンプロモーターから選択されるプロモーターを含む、請求項８に記載のｒＡＡＶベクター。
  10. 前記肝臓特異的プロモーターが、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）である、請求項９に記載のｒＡＡＶベクター。
  11. 前記調節可能なプロモーターが、誘導性または抑制性プロモーターである、請求項７に記載のｒＡＡＶベクター。
  12. 前記ベクターが、以下：５’および３’の逆位末端反復配列、前記配列のイントロン上流、ならびにシス作用性調節モジュール（ＣＲＭ）、のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  13. 前記ベクターが、ＷＰＲＥ配列をさらに含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  14. 前記ＷＰＲＥ配列が、修飾されている、請求項１３に記載のｒＡＡＶベクター。
  15. 前記ＷＰＲＥが、ｍｕｔ６ｄｅｌＡＴＧ修飾を含有する、請求項１４に記載のｒＡＡＶベクター。
  16. 前記ＣＲＭが、肝臓特異的ＣＲＭである、請求項１２～１５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  17. 前記ＣＲＭが、ＣＲＭ８である、請求項１２～１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  18. 前記ベクターが、少なくとも３つのＣＲＭを含む、請求項１２～１７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  19. 前記ベクターが、３つのＣＲＭ８を含む、請求項１２～１８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  20. 前記ｒＡＡＶベクターが、ＩＲＥＳ配列を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  21. 前記抗血漿カリクレイン抗体の軽鎖および／または重鎖が、前記抗体の半減期を増強する、および／またはエフェクター機能を低減する、１つ以上の変異を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  22. 前記１つ以上の変異が、ＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ）ならびに／またはＮＨａｎｃｅ変異（Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）を含む、請求項２１に記載のｒＡＡＶベクター。
  23. 前記１つ以上の変異が、ＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ）を含む、請求項２１または２２に記載のｒＡＡＶベクター。
  24. 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶｒｈ．１０から選択される、請求項１～２３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  25. ｒＡＡＶベクターキャプシドが、操作されている、請求項２４に記載のｒＡＡＶ。
  26. 前記操作されたｒＡＡＶベクターが、修飾されたアミノ酸配列を有するＡＡＶキャプシド配列を含む、請求項２５に記載のｒＡＡＶ。
  27. 前記修飾されたアミノ酸配列が、アミノ酸配列の挿入、欠失、または置換を含む、請求項２６に記載のｒＡＡＶ。
  28. 前記ｒＡＡＶキャプシドが、天然由来である、請求項２４に記載のｒＡＡＶベクター。
  29. 前記ｒＡＡＶベクターキャプシドが、ＡＡＶ８である、請求項２８に記載のｒＡＡＶベクター。
  30. 前記切断可能な配列が、フリン切断可能な配列である、請求項３に記載のｒＡＡＶベクター。
  31. 前記フリン切断可能な配列の後に、リンカーおよび２Ａ配列が続く、請求項３０に記載のｒＡＡＶベクター。
  32. 前記リンカーが、ＧＳＧリンカーである、請求項３１に記載のｒＡＡＶベクター。
  33. 前記２Ａ配列が、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａ配列である、請求項３１または３２に記載のｒＡＡＶベクター。
  34. 前記２Ａ配列が、Ｐ２Ａ配列である、請求項３３に記載のｒＡＡＶベクター。
  35. 前記ベクターが、分泌シグナルをさらにコードする、請求項１～３４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  36. 前記分泌シグナルが、天然に発生するシグナルペプチドである、請求項３５に記載のｒＡＡＶベクター。
  37. 前記分泌シグナルが、人工シグナルペプチドである、請求項３５に記載のｒＡＡＶベクター。
  38. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、血漿カリクレインに結合することができる機能的抗血漿カリクレイン抗体を産生する、請求項１～３７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  39. 前記抗血漿カリクレイン抗体が、血漿カリクレインのタンパク質分解活性を阻害する、請求項３８に記載のｒＡＡＶベクター。
  40. 前記抗体が、前記血漿カリクレイン活性部位に結合する、請求項１～３９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  41. 前記結合が、前記血漿カリクレインの活性部位を閉塞する、請求項３８～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  42. 前記結合が、前記血漿カリクレインの活性を阻害する、請求項３８～４１の一項に記載のｒＡＡＶ。
  43. 前記抗体が、プレカリクレインに結合しない、請求項３８～４２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  44. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、同じベクターから発現されている、請求項１～４３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  45. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、異なるｒＡＡＶベクターから発現されている、請求項１～４３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  46. 前記抗血漿カリクレイン抗体重鎖および前記抗血漿カリクレイン抗体軽鎖が、別々のｒＡＡＶベクターから発現されている、請求項１～４３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  47. 前記ベクターが、５’および３’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）、１つ以上のエンハンサー要素、ならびに／またはポリ（Ａ）テールをさらに含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  48. 前記１つ以上のエンハンサー要素が、転写因子結合部位および／またはＷＰＲＥ配列のクラスターから選択される、請求項１６に記載のｒＡＡＶベクター。
  49. ＡＡＶ８キャプシドおよびｒＡＡＶベクターを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）であって、前記ベクターが、
    ａ．５’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）と、
    ｂ．シス作用性調節モジュール（ＣＲＭ）と、
    ｃ．肝臓特異的プロモーターと、
    ｅ．抗血漿カリクレイン抗体重鎖配列および抗血漿カリクレイン抗体軽鎖配列と、
    ｆ．ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素（ＷＰＲＥ）と、
    ｇ．３’ＩＴＲと、を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）。
  50. 前記肝臓特異的プロモーターが、ヒトトランスサイレチンプロモーター（ＴＴＲ）、修飾されたｈＴＴＲ（ｈＴＴＲ ｍｏｄ．）、α－抗トリプシンプロモーター、肝臓プロモーター１（ＬＰ１）、ＴＲＭプロモーター、ヒト第ＩＸ因子プロ／肝臓転写因子応答性オリゴマー、ＬＳＰ、ＣＭＶ／ＣＢＡプロモーター（１．１ｋｂ）、ＣＡＧプロモーター（１．７ｋｂ）、ｍＴＴＲ、修飾されたｍＴＴＲ、ｍＴＴＲプロ、ｍＴＴＲエンハンサー、または塩基性アルブミンプロモーターから選択されるプロモーターを含む、請求項４９に記載の組換えベクター。
  51. 前記肝臓特異的プロモーターが、ヒトトランスサイレチンプロモーターを含む、請求項５０に記載の組換えベクター。
  52. 前記ＣＲＭが、肝臓特異的ＣＲＭである、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の組換えベクター。
  53. 前記ベクターが、少なくとも３つのＣＲＭを含む、請求項４９～５２のいずれか一項に記載の組換えベクター。
  54. 前記ベクターが、３つのＣＲＭ８を含む、請求項４９～５３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  55. 前記ＷＰＲＥ配列が、修飾されている、請求項４８～５４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  56. 前記ＷＰＲＥ配列が、ＷＰＲＥ ｍｕｔ６ｄｅｌＡＴＧである、請求項４８～５４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
  57. 活性化カリクレイン－キニン経路の欠損または調節不全に関連する疾患または障害を治療することを必要とする対象において、それを行う方法であって、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）を投与することを含む、方法。
  58. 前記活性化カリクレイン－キニン経路の前記欠損または調節不全が、Ｃ１エステラーゼ阻害剤の欠損に関連する疾患または障害である、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記ｒＡＡＶベクターが、静脈内、皮下、または経皮投与によって投与される、請求項５７または５８に記載の方法。
  60. 前記経皮投与が、遺伝子銃によるものである、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記活性化カリクレイン－キニン経路の欠損もしくは調節不全、またはＣ１エステラーゼ阻害剤の欠損に関連する前記障害が、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、正常なＣ１阻害剤を伴う血管性浮腫、糖尿病黄斑浮腫、片頭痛、腫瘍、神経変性疾患、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、脊椎管狭窄症－変性脊椎疾患、動脈もしくは静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節炎、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助デバイスもしくはステントによって誘発される凝固、頭部外傷もしくは腫瘍周囲脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血性イベント、再狭窄、全身性エリテマトーデス腎炎／血管炎、または熱傷である、請求項５７～６０のいずれか一項に記載の方法。
  62. Ｃ１エステラーゼ阻害剤の欠損に関連する前記障害が、ＨＡＥである、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記ＨＡＥが、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型である、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記ｒＡＡＶベクターが、投与後にエピソーム性である、請求項５７～６３のいずれか一項に記載の方法。
  65. 投与後、前記抗血漿カリクレイン抗体の重鎖および軽鎖が、集合して機能的抗体になる、請求項５７～６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記抗体が、ＩｇＧである、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記機能的抗血漿カリクレイン抗体が、前記ｒＡＡＶベクターの投与の約２～６週間後に、前記対象の血漿中で検出可能である、請求項５７～６６のいずれか一項に記載の方法。
  68. 前記機能的抗血漿カリクレイン抗体が、前記ｒＡＡＶベクターの投与の約４週間後に、前記対象の血漿中で検出可能である、請求項６７に記載の方法。
JP2021573442A 2019-06-11 2020-06-11 調節不全の血漿カリクレインによって媒介される疾患の治療のための抗体のアデノ随伴ウイルスベクター送達 Pending JP2022536692A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962860101P 2019-06-11 2019-06-11
US62/860,101 2019-06-11
PCT/US2020/037189 WO2020252136A1 (en) 2019-06-11 2020-06-11 Adeno associated viral vector delivery of antibodies for the treatment of disease mediated dysregulated plasma kallikrein

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022536692A true JP2022536692A (ja) 2022-08-18
JPWO2020252136A5 JPWO2020252136A5 (ja) 2023-06-20

Family

ID=71995023

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021573442A Pending JP2022536692A (ja) 2019-06-11 2020-06-11 調節不全の血漿カリクレインによって媒介される疾患の治療のための抗体のアデノ随伴ウイルスベクター送達

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20230038502A1 (ja)
EP (1) EP3983449A1 (ja)
JP (1) JP2022536692A (ja)
CN (1) CN114207135A (ja)
AR (1) AR119271A1 (ja)
TW (1) TW202115126A (ja)
WO (1) WO2020252136A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4213890A1 (en) * 2020-09-15 2023-07-26 RegenxBio Inc. Vectorized lanadelumab and administration thereof
CA3094859A1 (en) * 2020-10-01 2022-04-01 Entos Pharmaceuticals Inc. Proteolipid vesicles formulated with fusion associated small transmembrane proteins
CN114790245A (zh) * 2021-01-25 2022-07-26 成都康弘生物科技有限公司 一种抗体及其用途

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136597A (en) 1997-09-18 2000-10-24 The Salk Institute For Biological Studies RNA export element
US7419829B2 (en) 2000-10-06 2008-09-02 Oxford Biomedica (Uk) Limited Vector system
US7575924B2 (en) 2000-11-13 2009-08-18 Research Development Foundation Methods and compositions relating to improved lentiviral vectors and their applications
EP1438075A4 (en) 2001-10-02 2006-04-19 Inst Clayton De La Rech METHOD AND COMPOSITIONS ASSOCIATED WITH LENTIVIRAL VECTORS WITH LIMITED EXPRESSION AND ITS APPLICATIONS
EP1737966B1 (en) 2004-04-02 2012-05-09 Board of Regents, The University of Texas System Cancer specific promoters
US9725485B2 (en) * 2012-05-15 2017-08-08 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy
JP6091435B2 (ja) 2011-02-22 2017-03-08 カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー アデノ随伴ウイルス（ａａｖ）ベクターを用いたタンパク質の送達
GB201206455D0 (en) 2012-04-12 2012-05-30 Royal Holloway & Bedford New College Gene expression
CA2906770A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Vlp Biotech, Inc. Palivizumab epitope-based virus-like particles
EP3594244A1 (en) 2013-03-15 2020-01-15 Dyax Corp. Anti-plasma kallikrein antibodies
US20160130324A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. C1 Inhibitor Fusion Proteins and Uses Thereof
EP3233131A1 (en) 2014-12-16 2017-10-25 Board of Regents of the University of Nebraska Gene therapy for juvenile batten disease
CL2014003590A1 (es) 2014-12-30 2015-07-10 Univ Chile Virus aav/xbp1s-ha, método de tratamiento genético y su uso en la optimizacion y mejoramiento de las capacidades cognitivas, de memoria y de aprendizaje.
MA41346A (fr) 2015-01-12 2017-11-21 Juno Therapeutics Inc Eléments régulateurs post-transcriptionnels d'hépatite modifiée
AU2016232146B2 (en) * 2015-03-17 2021-11-04 Vrije Universiteit Brussel Optimized liver-specific expression systems for FVIII and FIX
US10179918B2 (en) 2015-05-07 2019-01-15 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for increasing transgene activity
GB2547179A (en) 2015-10-26 2017-08-16 Quethera Ltd Genetic construct
CN108291238A (zh) 2015-10-27 2018-07-17 赛尔希恩公司 嵌合转录后调控元件
CA3020330A1 (en) 2016-04-07 2017-10-12 Bluebird Bio, Inc. Chimeric antigen receptor t cell compositions
CA3025020A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 President And Fellows Of Harvard College Gene therapy methods for age-related diseases and conditions
WO2018152451A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Purdue Research Foundation Targeted ligand-payload based drug delivery for cell therapy
CA3079568A1 (en) * 2017-10-18 2019-04-25 Regenxbio Inc. Fully-human post-translationally modified antibody therapeutics

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020252136A1 (en) 2020-12-17
EP3983449A1 (en) 2022-04-20
US20230038502A1 (en) 2023-02-09
AR119271A1 (es) 2021-12-09
CN114207135A (zh) 2022-03-18
TW202115126A (zh) 2021-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2022536692A (ja) 調節不全の血漿カリクレインによって媒介される疾患の治療のための抗体のアデノ随伴ウイルスベクター送達
US20220339270A1 (en) Compositions and methods for the treatment of tauopathy
EP3561058A1 (en) Fusion protein including bdnf
JP7410522B2 (ja) 抗ｆａｍ１９ａ５抗体のアデノ関連ウイルス（ａａｖ）伝達
KR20210126029A (ko) 체액성 면역을 회피하기 위한 조성물 및 방법
JP2018535213A (ja) ＩｇＧ軽鎖におけるＮ末端切断の防止
US20190202907A1 (en) Method of treating systemic fibrotic disorders using an il-33/tnf bispecific antibody
US20230391864A1 (en) Vectorized anti-tnf-alpha antibodies for ocular indications
US20220186252A1 (en) Adeno associated viral vector delivery of antibodies for the treatment of disease mediated by dysregulated plasma kallikrein
US20190225682A1 (en) Method of treating localized fibrotic disorders using an il-33/tnf bispecific antibody
US20230390418A1 (en) Vectorized factor xii antibodies and administration thereof
US20240000971A1 (en) Compositions and methods for the treatment of tauopathy
WO2022147087A1 (en) Tau-specific antibody gene therapy compositions, methods and uses thereof
WO2023238869A1 (ja) 筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、老化に関連する変性疾患若しくは神経疾患、脳老化、あるいは脳老化を伴う疾患の予防剤又は治療剤
US20240025985A1 (en) Agent for Preventing or Treating Frontotemporal Lobar Degeneration
US20240124890A1 (en) Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof
TW202039585A (zh) 靶向htra1之基於抗體之療法及使用方法
JP2023541058A (ja) ベクター化抗体およびその使用
WO2020243659A1 (en) Vector-based therapy for thyroid disease

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220214

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230612

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230612