JP2023541058A - ベクター化抗体およびその使用 - Google Patents

ベクター化抗体およびその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2023541058A
JP2023541058A JP2023515817A JP2023515817A JP2023541058A JP 2023541058 A JP2023541058 A JP 2023541058A JP 2023515817 A JP2023515817 A JP 2023515817A JP 2023515817 A JP2023515817 A JP 2023515817A JP 2023541058 A JP2023541058 A JP 2023541058A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
amino acid
nucleotide sequence
sequence
capsid protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023515817A
Other languages
English (en)
Inventor
カルメン・バーンズ
ヨゲシュワル・シャルマ
セレナ・ドリーヴ
オマー・フランコーン
Original Assignee
ホモロジー・メディシンズ・インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ホモロジー・メディシンズ・インコーポレイテッド filed Critical ホモロジー・メディシンズ・インコーポレイテッド
Publication of JP2023541058A publication Critical patent/JP2023541058A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/761—Adenovirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/38—Vector systems having a special element relevant for transcription being a stuffer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/42—Vector systems having a special element relevant for transcription being an intron or intervening sequence for splicing and/or stability of RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Abstract

細胞における抗体（例えば、抗補体成分５（Ｃ５）抗体）の発現のための組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）組成物、およびそれを用いて障害（例えば、Ｃ５活性と関連する障害（例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症））を治療する方法が提供される。ｒＡＡＶ組成物を作製するための組成物、系、および方法も提供される。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年９月９日出願の米国仮特許出願第６３／０７５，８９８号、および２０２１年４月２６日出願の同第６３／１７９，９９０号に対する優先権を主張し、これらの全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、配列表はその全体が参照により本明細書に組み込まれる（当該ＡＳＣＩＩコピーは２０２１年９月８日に作成され、「４０４２１７－ＨＭＷ－０４２ＷＯ＿１８５４０７＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と名付けられ、サイズは２５２，０３５バイトである）。
治療用抗体は、対象である標的に対して高い特異性を有する、強力な種類の薬物を表す。しかしながら、多くの抗体は、所望される治療効果を達成するために、高い個々の用量および定期的な投与を必要とする。これは、患者の血清中に高濃度で見られる抗体標的に特に当てはまる。例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯＳＤ）、および非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）などのＣ５介在性疾患の治療に使用される抗補体成分５（Ｃ５）抗体は、血清中の大量のＣ５のため、複数回の高用量の抗体を必要とする。
ウイルス送達機序は、特に、患者の血清中に高濃度で見られる抗体標的に対して、従来の抗体治療に代わる魅力的な選択肢を提供する。特に、抗体重鎖および軽鎖の発現カセットを有するウイルスベクターの単回投与は、対象の血清中の持続的な治療レベルの抗体を産生し、これにより、高用量の抗体の連続投与の必要を回避する可能性を有する。
したがって、当該技術分野において、対象における抗体の効率的かつ持続的な発現のための改善されたウイルスベクターのニーズがある。
細胞における抗体（例えば、抗補体成分５（Ｃ５）抗体）の発現のための組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）組成物、および障害（例えば、Ｃ５活性と関連する障害（例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症））を治療するためにそれを使用する方法が、本明細書で提供される。ｒＡＡＶ組成物を作製するための組成物、系、および方法も提供される。
したがって、一態様では、本開示は、
（ａ）５’から３’の方向に、
第一の肝臓特異的転写制御エレメント、
第一のシグナル配列に作動可能に連結された抗体重鎖を含む第一のポリペプチドをコードする第一のコード配列、および
第一のポリアデニル化配列を含む、第一の発現カセット；および
（ｂ）５’から３’の方向に、
第二の肝臓特異的転写制御エレメント、
第二のシグナル配列に作動可能に連結された抗体軽鎖を含む第二のポリペプチドをコードする第二のコード配列、および
第二のポリアデニル化配列を含む、第二の発現カセットを含み、
第一および第二のコード配列の発現は、抗体重鎖および抗体軽鎖を含む抗体を産生する、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ゲノムを提供する。
ある特定の実施形態では、第一および／または第二の転写制御エレメントは、ヒトアルブミンプロモーター、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーター、ヒトチロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、ヒトＡｐｏＨプロモーター、ヒトＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、およびヒトＡｐｏＥ／Ｃ－Ｉ肝臓調節領域（ＨＣＲ）１または２などの、その肝臓特異的制御モジュールからなる群から選択されるプロモーターエレメントを含む。
ある特定の実施形態では、第一および／または第二の転写制御エレメントは、配列番号２５、２７、６６、６８、６９、１１６、および１１７からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むプロモーターエレメントを含む。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントのヌクレオチド配列は、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントのヌクレオチド配列は、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、第一および／または第二の発現カセットは、第一および／または第二のコード配列の５’に、ならびに転写制御エレメントの３’に位置するイントロンエレメントをさらに含む。
ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、外因性イントロンエレメントであり、任意選択的に、外因性イントロンエレメントは、ＳＶ４０イントロンエレメントまたはマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンエレメントである。
ある特定の実施形態では、ＳＶ４０イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０イントロンエレメントのヌクレオチド配列は、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ＭＶＭイントロンエレメントは、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＭＶＭイントロンエレメントは、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＭＶＭイントロンエレメントのヌクレオチド配列は、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、第一および第二の転写制御エレメントは、同一である。
ある特定の実施形態では、第一の転写制御エレメントは、ＨＣＲ１エレメント、ｈＡＡＴプロモーター、およびＳＶ４０イントロンエレメントを含み、第二の転写制御エレメントは、ＳＥＲＰＩＮＡ１肝臓特異的制御モジュール、ＴＴＲプロモーター、およびＭＶＭイントロンエレメントを含む。
ある特定の実施形態では、第一の転写制御エレメントは、配列番号５０の核酸配列を含み、第二の転写制御エレメントは、配列番号４３の核酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一および／または第二の発現カセットは、第一および／または第二のコード配列の３’に、ポリアデニル化配列をさらに含む。
ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、外因性ポリアデニル化配列であり、任意選択的に、外因性ポリアデニル化配列は、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、またはウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化配列である。
ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列のヌクレオチド配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ＢＧＨポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＢＧＨポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＢＧＨポリアデニル化配列のヌクレオチド配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、第一および第二の発現カセットは、同一のポリアデニル化配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一の発現カセットは、ＳＶ４０ポリアデニル化配列を含む。ある特定の実施形態では、第二の発現カセットは、ＢＧＨポリアデニル化配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のポリアデニル化配列は、配列番号３１の核酸配列を含み、第二のポリアデニル化配列は、配列番号３３の核酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一および第二の発現カセットは、ｒＡＡＶゲノムにおいて同じ配向にある。ある特定の実施形態では、第一および第二の発現カセットは、ｒＡＡＶゲノムにおいて逆の配向にある。
ある特定の実施形態では、第一および第二の発現カセットは、ｒＡＡＶゲノムにおいて遠位に位置する第一および第二のポリアデニル化配列と逆の配向にある。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、第一の転写制御エレメントと第二の転写制御エレメントの間に挿入されたスタッファー配列をさらに含む。
ある特定の実施形態では、スタッファー配列は、ベータグロビンポリアデニル化配列を含む。ある特定の実施形態では、ベータグロビンポリアデニル化配列は、配列番号５１の核酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、（ａ）配列番号３３の核酸配列を含む第一のポリアデニル化配列；（ｂ）第一のコード配列；（ｃ）配列番号２７の核酸配列を含む第一の肝臓特異的転写制御エレメント；（ｄ）配列番号５１の核酸配列を含むスタッファー配列；（ｅ）配列番号６７の核酸配列を含む第二の肝臓特異的転写制御エレメント；（ｆ）第二のコード配列；（ｇ）配列番号３１の核酸配列を含む第二の転写ポリアデニル化配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、第一の発現カセットの逆相補鎖；スタッファー配列、および第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第一のコード配列、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第二のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第一のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第二のコード配列、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第一のコード配列、第一のポリアデニル化配列を含む第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第二のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第一のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、第二のコード配列、第一のポリアデニル化配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列、第一のコード配列、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列、第二のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列、第一のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列、第二のコード配列、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列、配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列、第一のコード配列、第一のポリアデニル化配列を含む第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列、配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列、第二のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、（ａ）５’から３’の方向に、配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列、配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列、第一のコード配列、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット；（ｂ）配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含むスタッファー配列；および（ｃ）５’から３’の方向に、配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列、配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列、第二のコード配列、第一のポリアデニル化配列を含む第二の発現カセットを含む。
一態様では、本開示は、５’から３’の方向に、
（ａ）肝臓特異的転写制御エレメント；第一のシグナル配列に作動可能に連結された抗体重鎖を含む第一のポリペプチドをコードする第一のコード配列；リボソームスキッピングペプチドをコードするリボソームスキッピング配列；第二のシグナル配列に作動可能に連結された抗体軽鎖を含む第二のポリペプチドをコードする第二のコード配列；およびポリアデニル化配列、または
（ｂ）肝臓特異的転写制御エレメント；第二のシグナル配列に作動可能に連結された抗体軽鎖を含む第二のポリペプチドをコードする第二のコード配列；リボソームスキッピングペプチドをコードするリボソームスキッピング配列；第一のシグナル配列に作動可能に連結された抗体重鎖を含む第一のポリペプチドをコードする第一のコード配列；およびポリアデニル化配列を含む、バイシストロニック発現カセットを含み、
バイシストロニック発現カセットの発現は、抗体重鎖および抗体軽鎖を含む抗体を産生する、ｒＡＡＶゲノムを提供する。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、ヒトアルブミンプロモーター、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーター、ヒトチロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、ヒトＡｐｏＨプロモーター、ヒトＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、およびヒトＡｐｏＥ／Ｃ－Ｉ肝臓調節領域（ＨＣＲ）１または２などの、その肝臓特異的制御モジュールからなる群から選択されるプロモーターエレメントを含む。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号２５、２７、６６、６８、６９、１１６、および１１７からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むプロモーターエレメントを含む。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントのヌクレオチド配列は、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写制御エレメントのヌクレオチド配列は、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、バイシストロニック発現カセットは、第一および／または第二のコード配列の５’に、ならびに転写制御エレメントの３’に位置するイントロンエレメントをさらに含む。
ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、外因性イントロンエレメントであり、任意選択的に、外因性イントロンエレメントは、ＳＶ４０イントロンエレメントまたはマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンエレメントである。
ある特定の実施形態では、ＳＶ４０イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０イントロンエレメントのヌクレオチド配列は、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ＭＶＭイントロンエレメントは、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＭＶＭイントロンエレメントは、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＭＶＭイントロンエレメントのヌクレオチド配列は、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、
ａ）ＨＣＲ１エレメント、ｈＡＡＴプロモーター、およびＳＶ４０イントロンエレメント；または
ｂ）ＳＥＲＰＩＮＡ１肝臓特異的制御モジュール、ＴＴＲプロモーター、およびＭＶＭイントロンエレメントを含む。
ある特定の実施形態では、転写制御エレメントは、配列番号５０の核酸配列、または配列番号４３の核酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、外因性ポリアデニル化配列であり、任意選択的に、外因性ポリアデニル化配列は、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、またはウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化配列である。
ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列のヌクレオチド配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ＢＧＨポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＢＧＨポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ＢＧＨポリアデニル化配列のヌクレオチド配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、第一および／または第二のシグナル配列は、天然に存在するシグナル配列である。ある特定の実施形態では、第一および／または第二のシグナル配列は、抗体シグナル配列、任意選択的に、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＫシグナル配列である。ある特定の実施形態では、第一および／または第二のシグナル配列は、天然に存在しないシグナル配列である。ある特定の実施形態では、第一および／または第二のシグナル配列は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第一および／または第二のシグナル配列は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第一のシグナル配列は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、第二のシグナル配列は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第一および／または第二のコード配列は、配列番号２３、９６、１０２、または１０８に記載される核酸配列のいずれか一つを含む。ある特定の実施形態では、第一および／または第二のコード配列は、配列番号２４、９９、１０５、１１１、または１３０に記載される核酸配列のいずれか一つを含む。ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号２３、９６、１０２、または１０８に記載される核酸配列のいずれか一つを含み、第二のコード配列は、配列番号２４、９９、１０５、１１１、または１３０に記載される核酸配列のいずれか一つを含む。
ある特定の実施形態では、抗体は、補体Ｃ５に特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、抗体重鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体重鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体軽鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一および／または第二のコード配列は、ヒト細胞における発現に最適化されている。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、１１３、１１４、または１１５に記載される核酸配列のいずれか一つを含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号８３、９４、９５、１０１、または１０７に記載される核酸配列のいずれか一つを含む。
ある特定の実施形態では、第二のコード配列は、配列番号５３、９８、１０４、１１０、または１３１に記載される核酸配列のいずれか一つを含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号５３に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号６３に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号９８に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号９９に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１００に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１０４に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１０５に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１０６に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１１０に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１１１に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、第一のコード配列は、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、第二のコード配列は、配列番号１１２に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、一本鎖ｒＡＡＶゲノムである。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、自己相補的ｒＡＡＶゲノムである。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８４の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８５の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８６の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８７の核酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、第一のポリアデニル化配列の５’に５’末端逆位配列（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列、および第二のポリアデニル化配列の３’に３’末端逆位配列（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列をさらに含む。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、および／または３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８９の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９０の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９１の核酸配列を含む。
別の態様では、本開示は、
（ａ）ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシド；および
（ｂ）上記の実施形態のいずれかのｒＡＡＶゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を提供する。
ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、およびＡＡＶ９からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸は、Ｃであり、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、または配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。
ある特定の実施形態では、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
（ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、または
（ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。
ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸は、Ｒであり、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、または配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。
ある特定の実施形態では、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
（ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、または
（ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。
ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸は、Ｔであり、配列番号１６のアミノ酸６５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＶである、配列番号１６のアミノ酸７７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＬである、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、または配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。
ある特定の実施形態では、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＴであり、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸６５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＹである、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸７７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、
（ｄ）配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＬであり、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、
（ｅ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
（ｆ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
（ｇ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
（ｈ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、または
（ｉ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。
ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、配列番号８５～９３に記載される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
一態様では、本開示は、上記のｒＡＡＶまたは上記のポリヌクレオチドを含む医薬組成物を提供する。
一態様では、本開示は、ｒＡＡＶの調製のためのパッケージング系を提供し、パッケージング系は、
（ａ）一つまたは複数のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第一のヌクレオチド配列、
（ｂ）上記のｒＡＡＶのカプシドタンパク質をコードする第二のヌクレオチド配列、および
（ｃ）上記のｒＡＡＶのｒＡＡＶゲノム配列を含む第三のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、パッケージング系は、第一のヌクレオチド配列および第二のヌクレオチド配列を含む第一のベクター、ならびに第三のヌクレオチド配列を含む第二のベクターを含む。
ある特定の実施形態では、パッケージング系は、一つまたは複数のヘルパーウイルス遺伝子を含む第四のヌクレオチド配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、第四のヌクレオチド配列は、第三のベクターに含まれる。ある特定の実施形態では、第四のヌクレオチド配列は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からなる群から選択されるウイルス由来の一つ以上の遺伝子を含む。
ある特定の実施形態では、第一のベクター、第二のベクター、及び／又は第三のベクターは、プラスミドである。
一態様では、本開示は、ｒＡＡＶの組換え調製方法を提供し、方法は、ｒＡＡＶが産生される条件下で、上記のパッケージング系を細胞に導入することを含む。
別の態様では、本開示は、医薬として使用するための、上記のｒＡＡＶ、上記の医薬組成物、または上記のポリヌクレオチドを提供する。
別の態様では、本開示は、補体Ｃ５関連疾患の治療における使用のための、上記のｒＡＡＶ、上記の医薬組成物、または上記のポリヌクレオチドを提供する。
別の態様では、本開示は、補体Ｃ５関連疾患を有する対象を治療する方法における使用のための、上記のｒＡＡＶ、上記の医薬組成物、または上記のポリヌクレオチドを提供し、方法は、対象に有効量のｒＡＡＶ、医薬組成物、またはポリヌクレオチドを投与することを含む。
一態様では、本開示は、対象において抗体を産生する方法を提供し、方法は、対象に上記の医薬組成物を投与することを含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与される。
一態様では、本開示は、それを必要とする対象における補体Ｃ５関連疾患を治療する方法を提供し、方法は、対象に有効量の上記のｒＡＡＶ、上記の医薬組成物または上記のポリヌクレオチドを投与することを含む。
ある特定の実施形態では、補体Ｃ５関連疾患は、地図状萎縮（ＧＡ）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）腎炎、増殖性腎炎、喘息、関節リウマチ、敗血症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、および加齢黄斑変性（ＡＭＤ）からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶ、医薬組成物、またはポリヌクレオチドは、静脈内投与される。
図１は、ｒＡＡＶベクターＣ５Ａｂ０１、Ｃ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３およびＣ５Ａｂ０４の発現カセットのベクターマップを示す。
図２Ａ～図２Ｉは、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１５、またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされた抗Ｃ５抗体発現ベクター（Ｃ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、およびＣ５Ａｂ０４）を受けているＮＯＤ ＳＣＩＤマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。図２Ａは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１３またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０４を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。オスおよびメスのマウスについてのデータを分離し、複数の血清試料を、２３週間にわたって採取した。 図２Ｂは、対数スケールのＹ軸と共に、図２Ａの結果を示すグラフを示す。 図２Ｃは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０２を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。オスおよびメスのマウスについてのデータを分離し、複数の血清試料を、１６週間にわたって採取した。 図２Ｄは、対数スケールのＹ軸と共に、図２Ｃの結果を示すグラフを示す。 図２Ｅは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、それぞれが、ＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。オスのマウスについてのデータを示し、複数の血清試料を、１６週間にわたって採取した。 図２Ｆは、折れ線グラフ形式で示す図２Ｅの結果を示し、 図２Ｇは、対数スケールのＹ軸と共に、折れ線グラフ形式で示す図２Ｅの結果を示す。 図２Ｈは、５用量である、５ｅ１１ｖｇ／ｋｇ、５ｅ１２ｖｇ／ｋｇ、１．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、４．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、および１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０４を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。オスのマウスについてのデータを示し、複数の血清試料を、１３週間にわたって採取した。 図２Ｉは、対数スケールのＹ軸と共に、図２Ｈの結果を示すグラフを示す。
図３Ａ～図３Ｃは、抗Ｃ５抗体発現ベクターを受けているＮＯＤ ＳＣＩＤオスマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。データは、上記の図２に由来し、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１５、またはＡＡＶＨＳＣ１７ カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を比較するように整列される。図３Ａは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１３カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０４を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。 図３Ｂは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１５カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。 図３Ｃは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を受けているマウスの血清中の抗Ｃ５抗体濃度を示すグラフを示す。
図４Ａは、抗Ｃ５抗体エクリズマブおよびラブリズマブを用いた長期維持療法を受けているＰＮＨ患者における推定抗Ｃ５抗体濃度を、ＡＡＶＨＳＣ１３またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドのいずれかを使用してＮＯＤ ＳＣＩＤオスおよびメスのマウスのいずれかにおいて測定した抗Ｃ５抗体濃度（図２Ｂのデータ）と比較するグラフを示す。 図４Ｂは、抗Ｃ５抗体エクリズマブおよびラブリズマブを受けているＰＮＨ患者における推定抗Ｃ５抗体濃度を、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドを使用してＮＯＤ ＳＣＩＤおよびＨｕＬｉｖマウスにおいて測定した抗Ｃ５抗体濃度（図２Ａ、２Ｉ、および８Ｂの代表的なデータ）と比較するグラフを示す。
図５は、ｅｘ ｖｉｖｏ溶血アッセイにおける様々な濃度の抗Ｃ５抗体における活性化ヒツジ赤血球（ＲＢＣ）の溶血の％のグラフを示す。抗Ｃ５対照抗体を、ＡＡＶＨＳＣ１３にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４およびＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処理したマウスから得られた血清と比較した。
図６Ａは、血清抗体濃度のグラフを示し、 図６Ｂは、ｅｘ ｖｉｖｏ溶血アッセイにおける活性化ヒツジＲＢＣの溶血の％のグラフを示す。陰性対照マウス血清を、投与の１、３、５、７、および９週間後の、それぞれ１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１３にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４およびＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処置されたマウスから得られた血清と比較した。 図６Ｃは、折れ線グラフで示される、投与の１９週間後に得られた血清試料から決定された溶血の％を用いて図６Ｂの結果を示すグラフを示す。 図６Ｄは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０２を用いて処置された血清を使用して行われたｅｘ ｖｉｖｏ溶血アッセイにおける活性化ヒツジＲＢＣの溶血の％のグラフを示す。 図６Ｅは、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を用いて処置された血清を使用して行われたｅｘ ｖｉｖｏ溶血アッセイにおける活性化ヒツジＲＢＣの溶血の％のグラフを示す。 図６Ｆは、５ｅ１１ｖｇ／ｋｇ、５ｅ１２ｖｇ／ｋｇ、１．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、４．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、および１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処置された血清を使用して行われたｅｘ ｖｉｖｏ溶血アッセイにおける活性化ヒツジＲＢＣの溶血の％のグラフを示す。図６Ａ～６Ｆにおいて、オスおよびメスのマウスについてのデータを分離し、図６Ｅおよび６Ｆのデータは、オスのマウス由来であった。
図７Ａ～図７Ｂは、Ｃ５７Ｂｌ／６（ＦＲＧＣ５７）またはＮＯＤ（ＦＲＧＮＯＤ）バックグラウンドのいずれかのＦＲＧＫＯヒト化肝臓マウス（本明細書において以下、ＨｕＬｉｖ、Ｙｅｃｕｒｉｓと称する）の血清中のヒトＣ５のレベルを、ヒト血清において見られるヒトＣ５のレベル（図７Ａ） およびＣ５７Ｂｌ６またはＮＯＤバックグラウンドのＨｕＬｉｖマウスの血清中のマウスＣ５のレベル（図７Ｂ）と比較するグラフを示す。ＦＲＧＣ５７＿ドナーＡは、患者ドナーＡ由来の肝細胞を有するＨｕＬｉｖマウスを表す（ｎ＝３）。ＦＲＧＣ５７＿ドナーＢは、患者ドナーＢ由来の肝細胞を有するＨｕＬｉｖマウスを表す（ｎ＝３）。ＮＯＤ＿ドナーＡは、患者ドナーＡ由来の肝細胞を有するコンジェニックＮＯＤマウス由来のＨｕＬｉｖマウスを表す（ｎ＝９）。 同上。
図８Ａは、それぞれの場合、投与の０、１、３、および５週間後の、抗Ｃ５抗体（バイオシミラー）１００μｇ、または１ｅ１３ｖｇ／ｋｇもしくは１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を投与されたＨｕＬｉｖマウスにおける抗Ｃ５抗体の血清抗体濃度のグラフを示す。図８Ａにおいて、ＰＢは、出血前を示す。 図８Ｂは、折れ線グラフで示される、投与の１１週間後に決定された血清抗体濃度を用いて図８Ａに示されたデータを示す。 図８Ｃは、抗Ｃ５抗体（バイオシミラー）１００μｇ、または１ｅ１３ｖｇ／ｋｇもしくは１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を投与されたマウスから得られた血清を使用して行われたｅｘ ｖｉｖｏ溶血アッセイにおける活性化ヒツジＲＢＣの溶血の％のグラフを示す。 図８Ｄは、抗Ｃ５抗体（バイオシミラー）１００μｇの単回用量、または１ｅ１３ｖｇ／ｋｇもしくは１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を投与されたマウスから得られた血清において決定されたマウスＣ５のレベルを示すグラフを示す。 図９Ａ～図９Ｂは、初代ヒト肝細胞およびＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を用いて形質導入されたマウス肝細胞の培養培地中のヒトＣ５のレベルのウェスタンブロット（図９Ａ）およびヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡデータ（図９Ｂ）を示す。 同上。
細胞（例えば、肝臓細胞）における抗体（例えば、抗Ｃ５抗体）の発現のためのｒＡＡＶゲノムおよびｒＡＡＶ、ならびにそれを用いて障害（例えば、Ｃ５活性と関連する障害（例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症））を治療するためのそれを使用する方法が、本明細書で提供される。核酸、ベクター、パッケージング系、およびｒＡＡＶを作製する方法も提供される。
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、「組換えアデノ随伴ウイルス」又は「ｒＡＡＶ」という用語は、機能性Ｒｅｐ遺伝子及びＣａｐ遺伝子を欠くゲノムを含むＡＡＶを指す。
本明細書で使用される場合、「ｒＡＡＶゲノム」という用語は、ｒＡＡＶのゲノム配列を含む核酸分子（例えば、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ）を指す。当業者であれば、ｒＡＡＶゲノムが導入遺伝子（例えば、転写制御エレメントに作動可能に連結された抗体重鎖または軽鎖コード配列）を含む場合、ｒＡＡＶゲノムが導入遺伝子の転写方向に対してセンス又はアンチセンス配向であり得ることを理解するであろう。
本明細書で使用される場合、「ＡＡＶカプシドタンパク質」という用語は、ＡＡＶ ＶＰ１、ＶＰ２、又はＶＰ３カプシドタンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、二つのヌクレオチド配列間又は二つのアミノ酸配列間の「同一性パーセンテージ」は、整列した配列の対間の一致数に１００を乗じ、かつ内部ギャップを含む整列した領域の長さで除することによって計算される。同一性スコアリングは、完全一致のみをカウントし、アミノ酸の相互の類似度を考慮しない。配列末端のギャップではなく、内部ギャップのみが長さに含まれることに留意されたい。
本明細書で使用される場合、「コード配列」という用語は、開始コドンで始まり、終止コドンで終わる、ポリペプチドをコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の部分を指す。遺伝子は、選択的スプライシング、選択的翻訳開始、及び集団内変動に起因して、一つ以上のコード配列を有し得る。コード配列は、野生型、サイレント改変、又はイントロン挿入のいずれかであり得る。例示的な抗Ｃ５重鎖コード配列は、配列番号５２および８３に記載される。例示的な抗Ｃ５軽鎖コード配列は、配列番号５３に記載される。コード配列は、最適化コドンであってもよい。コドン最適化を行い、ヒト細胞などの所望される宿主細胞におけるコード配列の発現を増強してもよい。例示的なコドン最適化抗Ｃ５重鎖コード配列は、配列番号９４、９５、１０１、１０７、１１３、１１４、および１１５に記載される。例示的なコドン最適化抗Ｃ５軽鎖コード配列は、配列番号９８、１０４、１１０、または１３１に記載される。
ある特定の実施形態では、二つ以上のコード配列（例えば、抗体重鎖コード配列および抗体軽鎖コード配列）は、２Ａペプチドリボソームスキッピングエレメントなどのペプチド切断配列をコードするヌクレオチド配列によって分けることができる。例示的な２Ａペプチド切断配列は、配列番号２８もしくは１２５（Ｔ２Ａペプチド切断配列）、または１２８（Ｐ２Ａペプチド切断配列）に記載される。２Ａペプチド切断配列は、フューリン切断配列およびリンカーをさらに含んでもよい。フューリン切断配列およびリンカーを有する例示的な２Ａペプチド切断配列は、配列番号１２７または１２９に記載される。
本明細書で使用される場合、「ポリアデニル化配列」という用語は、ＲＮＡに転写されたときに、ポリアデニル化シグナル配列を構成するＤＮＡ配列を指す。ポリアデニル化配列は、天然または外因性であり得る。外因性ポリアデニル化配列は、哺乳類またはウイルスポリアデニル化配列（例えば、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列もしくはＳＶ４０ポリアデニル化配列）であり得る。
本明細書で使用される場合、「イントロンエレメント」という用語は、導入遺伝子の発現を調節する（例えば、制御、増加、又は低減する）シス作用ヌクレオチド配列、例えば、ＤＮＡ配列を指す。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、修飾イントロン、例えば、合成イントロン配列である。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、外因性イントロンエレメントであり、それが調節され得る導入遺伝子に対する外因性イントロンに由来する。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、修飾スプライスアクセプター及び／又はスプライスドナーを含み、結果として、より堅牢なスプライシング活性をもたらす。理論によって束縛されることを望んでいないが、イントロンは、例えば、転写サイレンシングを減少させ、かつ核から細胞質へのｍＲＮＡの輸送を増強することによって、導入遺伝子発現を増加させることができる。当業者であれば、合成イントロン配列が当該技術分野で既知のいずれかのコンセンサススプライシングモチーフを導入することによってＲＮＡスプライシングを媒介するように設計され得ることを理解するであろう（例えば、Ｓｉｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７，４０７－２１（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。例示的なイントロン配列は、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２１（５）：９５４－６３、およびＬｕ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２８（１）：１２５－３４に提供され、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「サイレントに改変された」という用語は、コード配列またはスタッファー挿入コード配列によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更することがない、遺伝子のコード配列の改変（例えば、ヌクレオチド置換による）を指す。かかるサイレント改変は、コード配列の翻訳効率を高める、及び／又はコード配列が細胞に形質導入されたときに内因性遺伝子の対応する配列との組換えを防止し得るという点で有利である。
本明細書で使用される場合、「転写制御エレメント」又は「ＴＲＥ」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼによる作動可能に連結されたヌクレオチド配列の転写を調節して（例えば、制御して、増加させて、又は減少させて）ＲＮＡ分子を形成するシス作用性ヌクレオチド配列、例えば、ＤＮＡ配列を指す。ＴＲＥは、転写を調節するために、転写因子などの一つ以上のトランス作用性分子に依存する。したがって、一つのＴＲＥは、異なるトランス作用性分子と接触しているとき、例えば、異なるタイプの細胞に存在しているときに、異なる方法で転写を調節することができる。ＴＲＥは、一つ以上のプロモーターエレメント及び／又はエンハンサーエレメントを含んでもよい。当業者であれば、遺伝子におけるプロモーターエレメントとエンハンサーエレメントの位置が近い可能性があり、「プロモーター」という用語がプロモーターエレメント及びエンハンサーエレメントを含む配列を指し得ることを理解するであろう。したがって、「プロモーター」という用語は、配列中のエンハンサーエレメントを除外しない。プロモーターエレメント及びエンハンサーエレメントは、同じ遺伝子又は種に由来する必要はなく、各プロモーターエレメント又はエンハンサーエレメントの配列は、ゲノム中の対応する内因性配列と同一であるか、又は実質的に同一であるかのいずれかであり得る。
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、ＴＲＥと転写されるコード配列との間の結合を説明するために使用される。典型的には、遺伝子発現は、一つ以上のプロモーターエレメン及び／又はエンハンサーエレメントを含むＴＲＥの制御下に置かれる。コード配列の転写がＴＲＥによって制御又は影響される場合、コード配列はＴＲＥに「作動可能に連結」されている。ＴＲＥのプロモーターエレメント及びエンハンサーエレメントは、所望の転写活性が得られる限り、コード配列から任意の配向及び／又は距離にあり得る。ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、コード配列の上流にある。
本開示では、抗体コード配列（例えば、抗体重鎖コード配列または抗体軽鎖コード配列）中のヌクレオチド位置は、開始コドンの第一のヌクレオチドに対して特定される。開始コドンの第一のヌクレオチドは、１位であり、開始コドンの第一のヌクレオチドの５’のヌクレオチドは、負の数を有し、開始コドンの第一のヌクレオチドの３’のヌクレオチドは、正の数を有する。
本明細書で使用される場合、用語「発現カセット」は、５’から３’の方向に、転写制御エレメント（ＴＲＥ）、ポリペプチドをコードするコード配列、およびポリアデニル化配列を含むポリヌクレオチド配列を指す。ある特定の実施形態では、イントロンは、ＴＲＥとコード配列の間に存在する。ある特定の実施形態では、コード配列は、抗体重鎖または抗体軽鎖をコードする。
本明細書で使用される場合、対象へのＡＡＶの投与との関連での「有効量」という用語は、所望の予防効果又は治療効果をもたらすＡＡＶの量を指す。
本明細書で使用される場合、抗体（例えば、抗体重鎖および抗体軽鎖）の発現レベルなどの測定可能な値を指す場合の「約」又は「およそ」という用語は、本明細書に開示される方法を行うのに適切なように、所与の値又は範囲の±２０％又は±１０％、±５％、±１％、又は±０．１％の変動を包含する。
ＩＩ．アデノ随伴ウイルス組成物
一態様では、抗体コード配列（例えば、抗Ｃ５抗体重鎖コード配列および／または抗Ｃ５抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部に作動可能に連結された転写制御エレメント（ＴＲＥ）を含む新規ｒＡＡＶゲノムが、本明細書において提供される。本明細書において提供されるｒＡＡＶゲノムは、ｒＡＡＶゲノムを含む細胞における抗体の染色体外発現に有用である。
ｒＡＡＶゲノムは、任意の哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）において抗体を発現させるために使用され得る。したがって、ＴＲＥは、任意の哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）で活性であり得る。ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、広範なヒト細胞で活性である。かかるＴＲＥは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター／エンハンサー（例えば、配列番号５４、５５、もしくは５６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ＳＶ４０プロモーター、トリＡＣＴＢプロモーター（例えば、配列番号４７もしくは５７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ＪｅＴプロモーター（例えば、配列番号５８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ｓｍＣＢＡプロモーター（例えば、配列番号５９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒト伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーター（例えば、配列番号３９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、転写因子結合部位を含むマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン（例えば、配列番号３０もしくは６１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトユビキチンＣ（Ｕｂｃ）プロモーター、ヒトベータアクチンプロモーター、ヒトニューロン特異的エノラーゼ（ＥＮＯ２）プロモーター、ヒトベータ－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）プロモーター、ウサギベータ－グロビンエレメント（例えば、配列番号４１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒトカルモジュリン１（ＣＡＬＭ１）プロモーター（例えば、配列番号４４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、および／またはヒトメチル－ＣｐＧ結合タンパク質２（ＭｅＣＰ２）プロモーターを含む構成的プロモーターならびに／あるいはエンハンサーエレメントを含んでもよい。これらのＴＲＥのうちのいずれかを任意の順序で組み合わせて、効率的な転写を駆動することができる。例えば、ｒＡＡＶゲノムは、ＣＡＧプロモーターと総称される、ウサギベータグロビン遺伝子のエクソン３由来のＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモーター、及びスプライスアクセプター（例えば、配列番号４２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み得る。例えば、ｒＡＡＶゲノムは、ＣＡＳＩプロモーター領域と総称される、ＣＭＶエンハンサーとＣＢＡプロモーターとのハイブリッド、続いて、スプライスドナー及びスプライスアクセプター（例えば、配列番号４８又は６５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み得る。
あるいは、ＴＲＥは、組織特異的ＴＲＥであり得る、すなわち、特定の組織及び／又は器官で活性である。組織特異的ＴＲＥは、一つ以上の組織特異的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメント、並びに任意選択的に一つ以上の構成的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメントを含む。当業者であれば、当該技術分野で既知の方法によって、組織特異的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメントを、組織で特異的に発現される遺伝子から単離することができることを理解するであろう。
特定の実施形態では、ＴＲＥは、肝臓特異的（例えば、肝細胞特異的）である。例示的な肝臓特異的ＴＲＥは、ヒトアルブミンプロモーター、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーター（例えば、配列番号６６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒトＡＰＯＥ／Ｃ－Ｉ肝制御領域（ＨＣＲ）１（例えば、配列番号２５若しくは６８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒトＡＰＯＨプロモーター、及びヒトＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター（例えば、配列番号２６、６９、若しくは７０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、又はその肝特異的調節モジュール（例えば、配列番号７１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）からなる群から選択される一つ以上のエレメントを含み得る。ある特定の実施形態では、ｈＡＡＴプロモーター領域は、配列番号７２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｇｅｎｅ（２０１６）５０６，２８９－２９４）に記載されるＴＢＧ ＳＥＲＰＩＮＡ７プロモーター（例えば、配列番号１１６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｈａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ （１９９３）７（８），１０４９－１０６０）に記載されるＴＢＧ ＳＥＲＰＩＮＡ７プロモーター（例えば、配列番号１１７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｈａｆｅｎｒｉｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｂｌｏｏｄ（１９９４）８４（１０），３３９４－３４０４）に記載されるｈＡＡＴ ＳＥＲＰＩＮＡ１プロモーター（例えば、配列番号１１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８８）８（１），８１－９０）に記載されるＴＴＲプロモーター（例えば、配列番号１１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｋａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）２７（４），１１０４－１１１７）に記載されるＡｐｏＡ２プロモーター（例えば、配列番号１２０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１７）６，６２７－６３２）に記載されるアルブミンプロモーター（例えば、配列番号１２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｋｙｏｓｔｉｏ－Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１６）３，１６００６）に記載される改変されたフィブリノーゲンプロモーター（例えば、配列番号１２２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ｄａｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）２７０（３８），２２５５７－８５）に記載される最小ヒトＡＰＯＥ／Ｃ－Ｉ肝臓調節領域（ＨＣＲ）１プロモーター（例えば、配列番号１２３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、肝臓特異的ＴＲＥは、Ａｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）２７０（４４），２６２７８－８１）に記載されるヒトＡＰＯＥ／Ｃ－Ｉ肝臓調節領域（ＨＣＲ）２プロモーター（例えば、配列番号１２４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。さらなる肝臓特異的プロモーターエレメントは、国際公開第２００９／１３０２０８号およびＫｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００３）７，３７５－３８５）に記載され、それらは、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、任意選択的に上に開示されるＴＲＥのうちの少なくとも一つを含む二つ以上のＴＲＥを含む。当業者であれば、これらのＴＲＥのうちのいずれかを任意の順序で組み合わせることができ、構成的ＴＲＥと組織特異的ＴＲＥとの組み合わせが効率的で組織特異的な転写を駆動することができることを理解するであろう。例えば、ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ヒトＨＣＲ１（例えば、配列番号２５、６８または１２３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、及びヒトＥＦ－１αプロモーター（例えば、配列番号３９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み、任意選択的に、ヒトＨＣＲ１が、ヒトＥＦ－１αプロモーターの５’側である。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６０に記載される配列ヌクレオチドと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
同様に、二つ以上の組織特異的ＴＲＥの組み合わせは、効率的かつ組織特異的転写を駆動し得る。例えば、ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ヒトＨＣＲ１（例えば、配列番号２５、６８または１２３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、及びｈＡＡＴプロモーター（例えば、配列番号２６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み、任意選択的に、ヒトＨＣＲ１が、ｈＡＡＴプロモーターの５’側である。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ヒトＨＣＲ１（例えば、配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列を含む）及びｈＡＡＴプロモーター（例えば、配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列を含む）を含み、任意選択的に、ヒトＨＣＲ１は、ｈＡＡＴプロモーターの５’側である。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ｈＡＡＴプロモーターの肝臓特異的調節モジュール（例えば、配列番号７１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、及びヒトＴＴＲプロモーター（例えば、配列番号６６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み、任意選択的に、肝臓特異的調節モジュールが、ヒトＴＴＲプロモーターの５’側である。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ｈＡＡＴプロモーターの肝臓特異的調節モジュール（例えば、配列番号７１に記載されるヌクレオチド配列を含む）及びヒトＴＴＲプロモーター（例えば、配列番号６６に記載されるヌクレオチド配列を含む）を含み、任意選択的に、肝臓特異的調節モジュールは、ヒトＴＴＲプロモーターの５’側である。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、抗体コード配列の少なくとも一部分の５’側のイントロンエレメントを含む。かかるイントロンエレメントは、例えば、転写サイレンシングを減少させ、かつ核から細胞質へのｍＲＮＡの輸送を増強することによって、導入遺伝子発現を増加させることができる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、ＴＲＥ、イントロンエレメント、および抗体コード配列の少なくとも一部分を含む。
イントロンエレメントは、免疫グロブリン遺伝子の天然イントロン配列の少なくとも一部分を含み得るか、又はイントロンエレメントは、外因性イントロンエレメントであり得る（例えば、少なくとも、異なる種由来若しくは同じ種由来の異なる遺伝子由来のイントロン配列、及び／又は合成イントロン配列を含む）。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、異なる種からのイントロン配列の少なくとも一部分を含む外因性イントロンエレメントである。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、同じ種由来の異なる遺伝子からのイントロン配列の少なくとも一部分を含む外因性イントロンエレメントである。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、合成イントロン配列を含む外因性イントロンエレメントである。ある特定の実施形態では、イントロンエレメントは、少なくとも、異なる種由来若しくは同じ種由来の異なる遺伝子由来のイントロン配列、及び／又は合成イントロン配列の組み合わせを含む外因性イントロンエレメントである。
当業者であれば、イントロンエレメントが当該技術分野で既知のいずれかのコンセンサススプライシングモチーフを導入することによってＲＮＡスプライシングを媒介するように設計され得ることを理解するであろう（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｉｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７，４０７－２１）。例示的なイントロン配列は、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２１（５）：９５４－６３、およびＬｕ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２８（１）：１２５－３４に提供され、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、外因性イントロンエレメントを含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＳＶ４０イントロンエレメント（例えば、配列番号２９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン（例えば、配列番号３０もしくは６１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、または合成イントロン（例えば、配列番号４５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＳＶ４０イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含む）、マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンエレメント（例えば、配列番号３０および６１に記載されるヌクレオチド配列を含む）、または合成イントロン（例えば、配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列を含む）を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、ＴＲＥおよびイントロンエレメントを含む。ある特定の実施形態では、組み合わされたＴＲＥおよびイントロンエレメントは、配列番号４３または５０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、組み合わされたＴＲＥおよびイントロンエレメントは、配列番号４３または５０のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、組み合わされたＴＲＥおよびイントロンエレメントは、配列番号４３または５０のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムは、転写ターミネーター（例えば、ポリアデニル化配列）を更に含む。特定の実施形態では、転写ターミネーターは、抗体コード配列の少なくとも一部分の３’側である。転写ターミネーターは、転写を効果的に終了する任意の配列であり得、当業者であれば、かかる配列を、抗体コード配列の少なくとも一部分の転写が所望される細胞で発現されるいずれの遺伝子からも単離することができることを理解するであろう。ある特定の実施形態では、転写ターミネーターは、ポリアデニル化配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、免疫グロブリン遺伝子の内因性ポリアデニル化配列と同一であるか、又は実質的に同一である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、外因性ポリアデニル化配列である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１、３４、若しくは３５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一のヌクレオチド配列、又はそれらに相補的なヌクレオチド配列を含む）である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一のヌクレオチド配列、またはそれと相補的なヌクレオチド配列を含む）である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、配列番号３２に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列が、配列番号３２に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、ＴＲＥ、イントロンエレメント、抗体コード配列の少なくとも一部分、及びポリアデニル化配列を含む。ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５～２７、３６、３９、４２、４４、４６～４９、５４～６０、または６５～７２のうちのいずれか一つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、イントロンエレメントは、配列番号２９、３０または６１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、抗体コード配列の少なくとも一部は、配列番号５２、５３、６２、６３、８３、９４、９５、９７、９８、１００、１０１、１０３、１０４、１０６、１０７、１０９、１１０、１１２、１１３、１１４、１１５、１３１、および１３２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する；ならびに／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１、３３、３４、または３５のうちのいずれか一つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５～２７、３６、３９、４２、４４、４６～４９、５４～６０、および６５～７２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、イントロンエレメントは、配列番号２９、３０および６１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号５２に記載されるヌクレオチド配列を含む、ならびに／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１、３３、３４、および３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５～２７、３６、３９、４２、４４、４６～４９、５４～６０、および６５～７２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、イントロンエレメントは、配列番号２９、３０および６１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号５３に記載されるヌクレオチド配列を含む、ならびに／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１、３３、３４、および３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５～２７、３６、３９、４２、４４、４６～４９、５４～６０、および６５～７２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、イントロンエレメントは、配列番号２９、３０および６１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号６２に記載されるヌクレオチド配列を含む、ならびに／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１、３３、３４、および３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５～２７、３６、３９、４２、４４、４６～４９、５４～６０、および６５～７２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、イントロンエレメントは、配列番号２９、３０および６１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号６３に記載されるヌクレオチド配列を含む、ならびに／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１、３３、３４、および３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５～２７、３６、３９、４２、４４、４６～４９、５４～６０、および６５～７２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、イントロンエレメントは、配列番号２９、３０および６１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号８３に記載されるヌクレオチド配列を含む、ならびに／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１、３３、３４、および３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５、２６、もしくは２７に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号５２に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、および／またはポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５、２６、もしくは２７に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号６２に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、および／またはポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２５、２６、もしくは２７に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、イントロンエレメントは、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号８３に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、および／またはポリアデニル化配列は、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号６６、６７、もしくは７１に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、イントロンエレメントは、配列番号３０もしくは６１に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号５３に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、および／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号６６、６７、もしくは７１に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、イントロンエレメントは、配列番号３０もしくは６１に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、抗体コード配列の少なくとも一部分は、配列番号６３に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる、および／またはポリアデニル化配列は、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含むか、もしくはそれからなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８、８９、９０、または９１のいずれか一つと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％）同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８、８９、９０、または９１のいずれか一つに記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８、８９、９０、または９１のいずれか一つに記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％）同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８８に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％）同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８９に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号８９に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９０と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％）同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９０に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９０に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％）同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９１に記載されるヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号９１に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムは、ＴＲＥの５’に５’末端逆位配列（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列および抗体軽鎖コード配列と関連するポリアデニル化配列の３’に３’末端逆位配列（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列をさらに含む。任意のＡＡＶ血清型のＩＴＲ配列又はそのバリアントを本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムに使用することができる。５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲは、同じ血清型のＡＡＶ由来である可能性も異なる血清型のＡＡＶ由来である可能性もある。本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムに使用するための例示的なＩＴＲは、本明細書では、配列番号１４、１８、１９、２０、２１、および３２に記載される。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲまたは３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲと３’ＩＴＲの両方は、ＡＡＶ２由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するか、又は３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号４３に記載されるヌクレオチド配列、配列番号１４の配列を有する５’ＩＴＲヌクレオチド配列、及び配列番号１８の配列を有する３’ＩＴＲヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲは、ＡＡＶ５由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲと３’ＩＴＲの両方は、ＡＡＶ５由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するか、又は３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号４３のうちのいずれか一つに記載されるヌクレオチド配列、配列番号２０の配列を有する５’ＩＴＲヌクレオチド配列、及び配列番号２１の配列を有する３’ＩＴＲヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列及び３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、互いに実質的に相補的である（例えば、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲにおける１、２、３、４、又は５つのヌクレオチド位置でのミスマッチを除いて互いに相補的である）。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲは、Ｒｅｐタンパク質による分解を減少させる又は排除するように修飾されている（「非分解性ＩＴＲ」）。ある特定の実施形態では、非分解性ＩＴＲは、末端分解部位のヌクレオチド配列の挿入、欠失、又は置換を含む。ｒＡＡＶゲノムが感染細胞で複製された後、かかる修飾によりＡＡＶの自己相補的二本鎖ＤＮＡゲノムの形成が可能になる。例示的な非分解性ＩＴＲ配列は、当技術分野で公知である（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，７９０，１５４号および第９，７８３，８２４号に提供されるものを参照されたい）。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１９に記載されるヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、配列番号３２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号３２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、配列番号３２に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１９に記載のヌクレオチド配列からなり、３’ＩＴＲは、配列番号３２に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１９に記載のヌクレオチド配列からなり、３’ＩＴＲは、配列番号３２に記載のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、野生型ＡＡＶ２ゲノム配列に由来する追加のヌクレオチド配列に隣接している。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、ＡＡＶ２ゲノム内の野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲに隣接する野生型ＡＡＶ２配列に由来する追加の４６ｂｐ配列に隣接している。ある特定の実施形態では、追加の４６ｂｐ配列は、ｒＡＡＶゲノムにおける３’から５’ＩＴＲの方向である。ある特定の実施形態では、４６ｂｐ配列は、配列番号７４に記載されるヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、野生型ＡＡＶ２ゲノム配列に由来する追加のヌクレオチド配列に隣接している。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２ゲノム内の野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲに隣接する野生型ＡＡＶ２配列に由来する追加の３７ｂｐ配列に隣接している。例えば、Ｓａｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１７）２８（５）：２７７－２８９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ある特定の実施形態では、追加の３７ｂｐ配列は、ｒＡＡＶゲノムにおける５’から３’ＩＴＲの方向である。ある特定の実施形態では、３７ｂｐ配列は、配列番号７３に記載されるヌクレオチド配列からなる。
別の態様では、配列番号８４、８５、８６、または８７に記載される核酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一である核酸配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８４、８５、８６、または８７に記載される核酸配列を含むか、又はそれからなる。
別の態様では、ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシド、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノム（例えば、ＡＡＶを形質導入された細胞における抗体の染色体外発現を可能にする、抗体コード配列（例えば、抗体重鎖または軽鎖コード配列）に作動可能に連結された転写制御エレメントを含むｒＡＡＶゲノム）を含む、新規ｒＡＡＶ組成物が、本明細書に提供される。
以下に限定されないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９血清型由来のＡＡＶカプシドタンパク質を含む、当該技術分野で公知の任意のカプシド由来のカプシドタンパク質を、本明細書に開示されるｒＡＡＶ組成物に使用することができる。例えば、ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含む。
例えば、ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含む。
例えば、ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１６のアミノ酸２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＴである、配列番号１６のアミノ酸６５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＶである、配列番号１６のアミノ酸７７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＬである、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＴであり、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＹである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸７７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＬであり、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するカプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。ある特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１、２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの二つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１、２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び （ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの二つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの二つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び （ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの二つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、及び （ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの一つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質のうちの二つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含む。
本開示のｒＡＡＶゲノムを使用して、当該技術分野で公知の任意の抗体重鎖および抗体軽鎖を発現させることができる。一態様では、抗体コード配列（例えば、抗体重鎖コード配列および／または抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部に作動可能に連結されたＴＲＥを含むｒＡＡＶゲノムが、本明細書において提供される。抗体の非限定的な例としては、抗Ｃ５抗体（例えば、エクリズマブ、ラブリズマブ、およびポゼリマブ）、抗因子Ｄ抗体（例えば、ランパリズマブ）、抗マンノース結合タンパク質関連セリンタンパク質分解酵素２（ＭＡＳＰ－２）抗体（例えば、ナルソプリマブ）、抗カリクレイン抗体（例えば、ラナデルマブ）、抗インターロイキン１ベータ抗体（例えば、カナキヌマブ）、抗インターフェロンガンマ抗体（例えば、エマパルマブ）、抗ＰＣＳＫ９抗体（例えば、エボロクマブおよびアリロクマブ）、抗凝固因子ＩＸならびに第Ｘ因子抗体（例えば、二重特異性抗体エミシズマブ）、ならびに抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ラニビズマブ）が挙げられる。
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＡＶを、薬学的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、ビヒクル若しくは担体、又はそれらの組み合わせと一緒に含む医薬組成物を提供する。「薬学的に許容される担体」には、組成物の活性成分と組み合わせられた場合、その成分が、意図せぬ免疫反応などの破壊的な生理学的反応を引き起こすことなく生物学的活性を保持することを可能にする任意の材料が含まれる。薬学的に許容される担体には、水、リン酸緩衝生理食塩水、油／水エマルションなどのエマルション、及び湿潤剤が含まれる。かかる担体を含む組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．１８０４２，ＵＳＡ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．に記載の方法などの周知の従来の方法によって製剤化される。
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＡＶを、薬学的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、ビヒクル若しくは担体、又はそれらの組み合わせと一緒に含む医薬組成物を提供する。「薬学的に許容される担体」には、組成物の活性成分と組み合わせられた場合、その成分が、意図せぬ免疫反応などの破壊的な生理学的反応を引き起こすことなく生物学的活性を保持することを可能にする任意の材料が含まれる。薬学的に許容される担体には、水、リン酸緩衝生理食塩水、油／水エマルションなどのエマルション、及び湿潤剤が含まれる。かかる担体を含む組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．１８０４２，ＵＳＡ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．に記載の方法などの周知の従来の方法によって製剤化される。
ＩＩＩ．使用方法
別の態様では、本開示は、細胞において抗体（例えば、抗体重鎖および軽鎖）を発現させる方法を提供する。本方法は、概して、細胞に、本明細書に開示されるｒＡＡＶを形質導入することを含む。こうした方法は、抗体の高レベルの発現および分泌をもたらす。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、細胞に、本明細書に開示されるｒＡＡＶを形質導入することを含む。
本明細書に開示される方法は、抗体の発現が所望される任意の細胞（例えば、肝細胞）に適用することができる。したがって、ある特定の実施形態では、方法は、肝臓の細胞に適用される。ある特定の実施形態では、方法は、肝細胞に適用される。
本明細書に開示される方法は、研究目的のためにインビトロで行われ得るか、又は治療目的のためにエクスビボ若しくはインビボで行われ得る。
ある特定の実施形態では、形質導入される細胞は、哺乳類対象に存在し、ＡＡＶは、対象における細胞に形質導入するのに有効な量で対象に投与される。したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、治療標的に特異的に結合する抗体の発現および分泌から恩恵を受ける疾患または障害を有する対象を治療する方法を提供し、方法は、概して、対象に有効量の本明細書に開示されるｒＡＡＶを投与することを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、補体Ｃ５に特異的に結合し、疾患または障害は、補体Ｃ５活性と関連する。対象は、ヒト肝臓細胞を含有するヒト対象又は齧歯類対象（例えば、マウス）とすることができる。好適なマウス対象としては、限定なしで、ヒト肝臓細胞（例えば、ヒト肝細胞）が生着したマウスが挙げられる。補体Ｃ５活性と関連する任意の疾患または障害は、本明細書に開示される方法を使用して治療することができる。適当な疾患または障害としては、非限定的に、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯＳＤ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、重症筋無力症、造血幹細胞移植－移植関連血栓性微小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）、補体介在性血栓性微小血管症（ＣＭ－ＴＭＡ）、ギラン・バレー症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、原発性進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）、多巣性運動ニューロパチー、抗体介在性腎拒絶、Ｃ３糸球体症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ＡＱＰ４ ＩｇＧ陽性視神経脊髄炎、全身性エリテマトーデス、乾癬、関節リウマチ（ＲＡ）、皮膚筋炎、特発性膜性糸球体腎炎、脱髄性ニューロパチー、補体過剰活性化、血管障害性血栓、タンパク質漏出性腸（ＣＨＡＰＬＥ）症候群、地図状萎縮（ＧＡ）、喘息、増殖性腎炎、および敗血症が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本開示は、補体Ｃ５に関連する疾患又は障害を有する対象を治療するための方法であって、概して、対象に、有効量の本明細書に開示されるｒＡＡＶを投与することを含む、方法を提供する。対象は、異常な補体Ｃ５活性を有する、ヒト対象、非ヒト霊長類対象（例えば、カニクイザル）、又は齧歯類対象（例えば、マウス）であり得る。補体Ｃ５活性と関連する任意の疾患または障害は、本明細書に開示される方法を使用して治療することができる。適当な疾患または障害としては、非限定的に、ＰＮＨ、ＮＭＯＳＤ、ａＨＵＳ、重症筋無力症、ＨＳＣＴ－ＴＭＡ、ＣＭ－ＴＭＡ、ギラン・バレー症候群、ＡＬＳ、ＰＰＭＳ、多巣性運動ニューロパチー、抗体介在性腎拒絶、Ｃ３糸球体症、ＡＭＤ、ＡＱＰ４ ＩｇＧ陽性視神経脊髄炎、全身性エリテマトーデス、乾癬、ＲＡ、皮膚筋炎、特発性膜性糸球体腎炎、脱髄性ニューロパチー、ＣＨＡＰＬＥ症候群、地図状萎縮（ＧＡ）、喘息、増殖性腎炎、および敗血症が挙げられる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、転写制御エレメント（例えば、配列番号６０に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、Ｔ２Ａペプチド切断配列（例えば、配列番号２８のＴ２Ａペプチド切断配列）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、転写制御エレメント（例えば、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、Ｔ２Ａペプチド切断配列（例えば、配列番号２８のＴ２Ａペプチド切断配列）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、転写制御エレメント（例えば、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３３のＢＧＨポリアデニル化配列）、転写制御エレメント（例えば、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号３０または６１に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３３のＢＧＨポリアデニル化配列）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、転写制御エレメント（例えば、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、スタッファー配列（例えば、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列を含むスタッファー）、転写制御エレメント（例えば、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号３０または６１に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、転写制御エレメント（例えば、配列番号６０に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、Ｔ２Ａペプチド切断配列（例えば、配列番号２８のＴ２Ａペプチド切断配列）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、転写制御エレメント（例えば、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、Ｔ２Ａペプチド切断配列（例えば、配列番号２８のＴ２Ａペプチド切断配列）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、転写制御エレメント（例えば、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３３のＢＧＨポリアデニル化配列）、転写制御エレメント（例えば、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号３０または６１に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＡＡＶカプシドタンパク質、ならびに５’から３’に、以下の遺伝子エレメント：５’ＩＴＲ（例えば、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含む５’ＩＴＲ）、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３３のＢＧＨポリアデニル化配列）、抗体重鎖コード配列（例えば、配列番号５２、６２、または８３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体重鎖コード配列）の少なくとも一部、イントロンエレメント（例えば、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、転写制御エレメント（例えば、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、スタッファー配列（例えば、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列を含むスタッファー）、転写制御エレメント（例えば、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含むＴＲＥ）、イントロンエレメント（例えば、配列番号３０または６１に記載されるヌクレオチド配列を含むイントロンエレメント）、抗体軽鎖コード配列（例えば、配列番号５３または６３に記載されるヌクレオチド配列を含む抗体軽鎖コード配列）の少なくとも一部、ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３１のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、および３’ＩＴＲ（例えば、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列を含む３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶを利用する。
本明細書に開示される方法は、それらがインビボで高い効率で、抗体を発現し、対象の血清に抗体を分泌することができるという点で特に有利である。ある特定の実施形態では、抗体の血清濃度は、少なくとも約１００μｇ／ｍＬ、少なくとも約５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約１５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約２０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約２５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約３０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約３５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約４０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約４５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約５０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約７５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約１００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約２００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約３００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約４００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０００μｇ／ｍＬ、少なくとも約５００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約６００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約７００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約８００００μｇ／ｍＬ、少なくとも約９００００μｇ／ｍＬ、または少なくとも約１０００００μｇ／ｍＬである。ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、免疫染色、及び質量分析を含むが、これらに限定されない、抗体の発現レベルまたは血清濃度を決定するいずれかの方法を用いることができる。ある特定の実施形態では、抗体の血清濃度は、抗ヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡを用いて決定される。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＡＡＶ組成物の細胞への形質導入は、本明細書に提供されるように、又は当業者に既知の任意の形質導入方法によって行われ得る。ある特定の実施形態では、細胞は、５０，０００、１００，０００、１５０，０００、２００，０００、２５０，０００、３００，０００、３５０，０００、４００，０００、４５０，０００、若しくは５００，０００の感染多重度（ＭＯＩ）で、又は最適な細胞への形質導入を提供するいずれかのＭＯＩでＡＡＶと接触し得る。
本明細書に開示されるＡＡＶ組成物は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、局所、又は皮内経路を含むが、これらに限定されない任意の適切な経路によって対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、本組成物は、静脈内注射又は皮下注射による投与用に製剤化されている。
ＩＶ．ＡＡＶパッケージング系
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）の組換え調製のためのパッケージング系を提供する。かかるパッケージング系は、概して、一つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第一のヌクレオチドと、本明細書に開示されるＡＡＶのうちのいずれかのカプシドタンパク質をコードする第二のヌクレオチドと、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムのうちのいずれかを含む第三のヌクレオチド配列と、を含み、ここで、パッケージング系が、ｒＡＡＶゲノムをカプシド内に封入してＡＡＶを形成するように細胞内で作動可能である。
ある特定の実施形態では、パッケージング系は、一つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第一のヌクレオチド配列及びＡＡＶカプシドタンパク質をコードする第二のヌクレオチド配列を含む第一のベクターと、ｒＡＡＶゲノムを含む第三のヌクレオチド配列を含む第二のベクターとを含む。本明細書に記載のパッケージング系に関連して使用される場合、「ベクター」とは、核酸を細胞に導入するためのビヒクルである核酸分子（例えば、プラスミド、ウイルス、コスミド、人工染色体など）を指す。
いずれのＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質も本明細書に開示されるパッケージング系に用いることができる。パッケージング系のある特定の実施形態では、Ｒｅｐヌクレオチド配列は、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質をコードする。好適なＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質には、Ｒｅｐ ７８／６８又はＲｅｐ ６８／５２が挙げられるが、これらに限定されない。パッケージング系のある特定の実施形態では、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２２のＡＡＶ２ Ｒｅｐアミノ酸配列と最小配列同一性パーセントを有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、最小配列同一性パーセントは、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質のアミノ酸配列の長さにわたって、少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）である。パッケージング系のある特定の実施形態では、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有する。
パッケージング系のある特定の実施形態では、パッケージング系は、一つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第四のヌクレオチド配列を更に含む。パッケージング系のある特定の実施形態では、パッケージング系は、一つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第四のヌクレオチド配列を含む、第三のベクター、例えば、ヘルパーウイルスベクターを更に含む。第三のベクターは、独立した第三のベクターであっても、第一のベクターと一体型であっても、第二のベクターと一体型であってもよい。
パッケージング系のある特定の実施形態では、ヘルパーウイルスは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）を含む）、ポックスウイルス（ワクシニアウイルスなど）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、及びバキュロウイルスからなる群から選択される。パッケージング系のある特定の実施形態では、ヘルパーウイルスがアデノウイルスである場合、アデノウイルスゲノムは、Ｅｌ、Ｅ２、Ｅ４、及びＶＡからなる群から選択される一つ以上のアデノウイルスＲＮＡ遺伝子を含む。パッケージング系のある特定の実施形態では、ヘルパーウイルスがＨＳＶである場合、ＨＳＶゲノムは、ＵＬ５／８／５２、ＩＣＰＯ、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、及びＵＬ３０／ＵＬ４２からなる群から選択されるＨＳＶ遺伝子のうちの一つ以上を含む。
パッケージング系のある特定の実施形態では、第一のベクター、第二のベクター、及び／又は第三のベクターは、一つ以上のプラスミド内に含まれている。ある特定の実施形態では、第一のベクター及び第三のベクターが第一のプラスミド内に含まれている。ある特定の実施形態では、第二のベクター及び第三のベクターが第二のプラスミド内に含まれている。
パッケージング系のある特定の実施形態では、第一のベクター、第二のベクター、及び／又は第三のベクターは、一つ以上の組換えヘルパーウイルス内に含まれている。ある特定の実施形態では、第一のベクター及び第三のベクターが組換えヘルパーウイルス内に含まれている。ある特定の実施形態では、第二のベクター及び第三のベクターが組換えヘルパーウイルス内に含まれている。
更なる態様では、本開示は、本明細書に記載のＡＡＶの組換え調製のための方法であって、ｒＡＡＶゲノムをカプシドに封入して本明細書に記載のｒＡＡＶを形成するように作動可能な条件下で、本明細書に記載のパッケージング系を細胞にトランスフェクト又は形質導入することを含む、方法を提供する。ｒＡＡＶの組換え調製のための例示的な方法は、一過性トランスフェクション（例えば、本明細書に記載の第一のベクターと、第二のベクターと、任意選択的に第三のベクターとを含む一つ以上のトランスフェクションプラスミドでの）、ウイルス感染（例えば、一つ以上の組換えヘルパーウイルス、例えば、アデノウイルス、ポックスウイルス（ワクシニアウイルスなど）、ヘルペスウイルス（本明細書に記載の第一のベクターと、第二のベクターと、任意選択的に第三のベクターとを含む、ＨＳＶ、サイトメガロウイルス、又はバキュロウイルスを含む）での）、及び安定した産生細胞株トランスフェクション又は感染（例えば、本明細書に記載の一つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードするＲｅｐヌクレオチド配列及び／又は一つ以上のＡＡＶカプシドタンパク質をコードするＣａｐヌクレオチド配列を含む安定した産生細胞、例えば、哺乳類又は昆虫細胞での、かつプラスミド又は組換えヘルパーウイルスの形態で送達される本明細書に記載のｒＡＡＶゲノムでの）を含む。
したがって、本開示は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）の調製のためのパッケージング系であって、一つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第一のヌクレオチド配列と、本明細書に記載のＡＡＶのうちのいずれか一つのカプシドタンパク質をコードする第二のヌクレオチド配列と、本明細書に記載のＡＡＶのうちのいずれか一つのｒＡＡＶゲノム配列を含む第三のヌクレオチド配列と、任意選択的に、一つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第四のヌクレオチド配列と、を含む、パッケージング系を提供する。
Ｖ．実施例
以下の実施例は、本明細書に開示されるｒＡＡＶベクターを使用した対象における抗体（例えば、抗Ｃ５抗体）の効率的な発現を示す。これらの実施例は、例証として提供されており、限定するものではない。
実施例１：抗補体Ｃ５抗体ｒＡＡＶベクター
本実施例は、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞またはマウス細胞）における抗Ｃ５抗体の発現のための抗Ｃ５抗体発現ベクターＣ５Ａｂ０１、Ｃ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、およびＣ５Ａｂ０４を提供する。
ａ）Ｃ５Ａｂ０１
図１に示す通り、抗Ｃ５抗体ベクターＣ５Ａｂ０１は、５’から３’の方向に、以下の遺伝子エレメント：ＥＦ１αプロモーターを含む転写制御エレメント；抗Ｃ５抗体重鎖（ＨＣ）に連結したヒトＩｇＧ２（Ｐ１）シグナル配列をコードするコード配列；２Ａリボソームスキッピングペプチドをコードする核酸配列；抗Ｃ５抗体軽鎖（ＬＣ）に連結したＩｇκ（Ｐ２）シグナル配列をコードするコード配列；およびＳＶ４０後期ポリアデニル化配列（ＬＰＡ）を含む。これらのエレメントの核酸配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内で抗Ｃ５抗体を発現させることができる。
ｂ）Ｃ５Ａｂ０２
図１に示す通り、抗Ｃ５抗体ベクターＣ５Ａｂ０２は、５’から３’の方向に、以下の遺伝子エレメント：肝臓特異的ＬＰ１プロモーターを含む転写制御エレメント；抗Ｃ５抗体重鎖（ＨＣ）に連結したヒトＩｇＧ２（Ｐ１）シグナル配列をコードするコード配列；２Ａリボソームスキッピングペプチドをコードする核酸配列；抗Ｃ５抗体軽鎖（ＬＣ）に連結したＩｇκ（Ｐ２）シグナル配列をコードするコード配列；およびＳＶ４０後期ポリアデニル化配列（ＬＰＡ）を含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内で抗Ｃ５抗体を発現させることができる。
ｃ）Ｃ５Ａｂ０３
図１に示す通り、抗Ｃ５抗体ベクターＣ５Ａｂ０３は、５’から３’の方向に、以下の遺伝子エレメント：肝臓特異的ＬＰ１プロモーターを含む転写制御エレメント；抗Ｃ５抗体重鎖（ＨＣ）に連結したヒトＩｇＧ２（Ｐ１）シグナル配列をコードするコード配列；ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨｐＡ）；肝臓特異的ＤｎＧプロモーターを含む転写制御エレメント；抗Ｃ５抗体軽鎖（ＬＣ）に連結したＩｇκ（Ｐ２）シグナル配列をコードするコード配列；およびＳＶ４０後期ポリアデニル化配列（ＬＰＡ）を含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内で抗Ｃ５抗体を発現させることができる。
ｄ）Ｃ５Ａｂ０４
図１に示す通り、抗Ｃ５抗体ベクターＣ５Ａｂ０４は、５’から３’の方向に、以下の遺伝子エレメント：ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨｐＡ）；抗Ｃ５抗体重鎖コード配列；ヒトＩｇＧ２（Ｐ１）シグナル配列に連結した抗Ｃ５抗体重鎖（ＨＣ）をコードするコード配列；肝臓特異的ＬＰ１プロモーターを含む転写制御エレメント；スタッファー配列、肝臓特異的ＤｎＧプロモーターを含む転写制御エレメント；抗Ｃ５抗体軽鎖（ＬＣ）に連結したＩｇκ（Ｐ２）シグナル配列をコードするコード配列；およびＳＶ４０後期ポリアデニル化配列（ＬＰＡ）を含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内で抗Ｃ５抗体を発現させることができる。
本明細書に開示するベクターを、非限定的に、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１５、またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドを含む、ＡＡＶカプシドにパッケージングすることができる。
実施例２：マウスモデルにおける抗Ｃ５抗体の発現
補体成分Ｃ５の異常または過剰な活性は、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯＳＤ）、および非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）を含む、いくつかの疾患と関連する。抗Ｃ５モノクローナル抗体は、これらの疾患の治療に有効であることが示されているが、患者は、多くの場合、治療上の利益を享受するために、抗体の複数回の大量投与を必要とする。これは、部分的には、患者の血清中のＣ５タンパク質の高濃度によるものである。したがって、必要な治療効果を生じるのに十分なＣ５に結合し、除去するために、高レベルの抗Ｃ５抗体を必要とする。これらの問題は、患者が、自身の抗Ｃ５抗体を発現する能力を有する場合、克服され得る。
十分に高レベルの抗Ｃ５抗体を生物において発現することができるかどうかを検討するために、ＮＯＤ ＳＣＩＤマウスに、マウス肝臓由来の当該抗Ｃ５抗体の発現のためのＡＡＶベクターを投与した。ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１５、およびＡＡＶＨＳＣ１７のそれぞれにパッケージングしたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、およびＣ５Ａｂ０４（上記）を試験する、四種の実験を行った。
ヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡプロトコール
以下の実験において血清ヒトＩｇＧ濃度（ｕｇ／ｍＬ）を評価するために、ＡｂｃａｍのＳｉｍｐｌｅＳｔｅｐ ＥＬＩＳＡ（登録商標）キットを利用した。簡潔に述べると、抗体カクテルを、抗体希釈液ＣＰ中の捕捉抗体および検出抗体を希釈することによって調製した。抗体カクテル３ｍＬを作るために、１０×捕捉抗体３００μＬおよび１０×検出抗体３００μＬを、抗体希釈液ＣＰ２．４ｍＬと合わせた。続いて、使用直前に連続希釈によって標準物質を調製した。キットにおいて提供されたヒトＩｇＧタンパク質を、陽性対照連続希釈のため使用した。
アッセイを行うために、すべての試薬を使用前に室温にした。全ての試料または標準物質５０μＬを、マイクロプレートの適切なウェルに加えた。次いで、抗体カクテル５０μＬを各ウェルに加えた。次いで、プレートを密封し、４００ｒｐｍに設定したプレート振とう器上、室温で４０分間インキュベートした。次いで、各ウェルを、１×洗浄バッファーＰＴ３×３５０μＬで洗浄した。最終の洗浄後、プレートを反転させ、清潔なペーパータオルに吸い取って、過剰な液体を除去した。次いで、ＴＭＢ展開溶液１００μＬを各ウェルに加え、４００ｒｐｍに設定したプレート振とう器上、暗所で約５分間インキュベートした。最適なインキュベーション時間は、５～２０分の間で変動しうる。停止溶液１００μＬを各ウェルに加えた。プレートを、プレート振とう器上で１分間振とうして混合した。次いで、光学密度（ＯＤ）を４５０ｎｍで読み取った。これがエンドポイントの読み取り値であった。
結果
第一の実験では、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１３またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングしたベクターＣ５Ａｂ０４をマウスに投与した。血清試料を、１週間、３週間、５週間、７週間、９週間、１１週間、１５週間、１９週間、および２３週間後に採取した。血清試料を、抗Ｃ５抗体レベルの読取り値としてヒトＩｇＧ濃度（ｕｇ／ｍＬ）について試験した。メスのマウスは、ＡＡＶ介在性遺伝子導入の乏しいモデルであるため、データはオスのマウスとメスのマウスで分けた。図２Ａに示す通り、ＡＡＶＨＳＣ１３またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドのいずれかにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を受け取っているマウスは、経時的に上昇したレベルの抗Ｃ５抗体を示した。図２Ｂは、対数スケールのＹ軸と共に、図２Ａの結果を示す。図２Ａ～２Ｂにおいて、１群当たりｎ＝２～３匹のマウス。
第二の実験では、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングしたベクターＣ５Ａｂ０２をマウスに投与した。オスおよびメスのマウスについてのデータを分離し、複数の血清試料を、１６週間にわたって採取した。血清試料を、抗Ｃ５抗体レベルの読取り値としてヒトＩｇＧ濃度（ｕｇ／ｍＬ）について試験した。図２Ｃに示す通り、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０２を受け取っているマウスは、経時的に上昇したレベルの抗Ｃ５抗体を示した。図２Ｄは、対数スケールのＹ軸と共に、図２Ｃの結果を示す。図２Ｃ～２Ｄにおいて、１群当たりｎ＝３匹のマウス。
第三の実験では、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、それぞれ、ＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングしたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４をマウスに投与した。オスのマウスについてのデータを示し、複数の血清試料を、１６週間にわたって採取した。血清試料を、抗Ｃ５抗体レベルの読取り値としてヒトＩｇＧ濃度（ｕｇ／ｍＬ）について試験した。図２Ｅに示す通り、ＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドのいずれかにパッケージングされたベクターＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４のいずれか一つを受け取っているマウスは、経時的に上昇したレベルの抗Ｃ５抗体を示した。図２Ｆおよび２Ｇ（対数スケールのＹ軸）は、折れ線グラフ形式で示した図２Ｅの結果を示す。図２Ｅ～２Ｇにおいて、１群当たりｎ＝３匹のオスのマウス。
第四の実験では、５用量の５ｅ１１ｖｇ／ｋｇ、５ｅ１２ｖｇ／ｋｇ、１．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、４．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、および１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングしたベクターＣ５Ａｂ０４をマウスに投与した。オスのマウスについてのデータを示し、複数の血清試料を、１３週間にわたって採取した。血清試料を、抗Ｃ５抗体レベルの読取り値としてヒトＩｇＧ濃度（ｕｇ／ｍＬ）について試験した。図２Ｈの用量応答データに示す通り、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を受け取っているマウスは、経時的に上昇したレベルの抗Ｃ５抗体を示した。さらに、ＡＡＶＨＳＣ１７の用量を増量すると、用量１．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、４．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、および１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで、抗Ｃ５抗体の濃度の対応する増加を導き、これにより、ミリグラム濃度の抗体を得る。図２Ｉは、対数スケールのＹ軸と共に、折れ線グラフ形式で示した図２Ｈの結果を示す。図２Ｅ～２Ｉにおいて、１群当たりｎ＝３匹のオスのマウス。
上記のデータを再構成して、各ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１５、またはＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされた各ベクターの有効性を比較した。図３Ａ～３Ｃに示す通り、Ｃ５Ａｂ０４は、経時的により高い濃度の抗Ｃ５抗体を一貫して生産した。さらに、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドは、経時的により高い濃度の抗Ｃ５抗体を一貫して生産した。ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４の組み合わせは、マウスへの送達の１５週間後に、約２０００μｇ／ｍＬの最高濃度の抗Ｃ５抗体を産生した。
上記のデータを使用して、達成した抗Ｃ５抗体濃度が、患者に直接投与した公知の治療用抗Ｃ５抗体（すなわち、患者においてベクターから発現されない）と一致するかどうかも予測した。市販のエクリズマブおよびラブリズマブの薬物動態を、ＰＮＨの処置についてのＣｍａｘ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、および投薬スケジュールデータに基づきモデル化した。標準偏差範囲は、これらの試験に使用した変動係数および患者数（図４Ａおよび４Ｂの点線）に基づいていた。このモデル化データを、第一の実験のＡＡＶＨＳＣ１３およびＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングしたベクターについての上記のインビボマウス実験のデータと整合させた。比較により、本明細書に記載される治療アプローチが、公知の抗Ｃ５抗体であるラブリズマブおよびエクリズマブの臨床上有効なレベルを達成できることが明らかになった（図４Ａ）。モデル化したデータも、上記のインビボマウス実験（第一の実験：「ＮＯＤ－ＳＣＩＤ、１Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇ」、および第四の実験：「ＮＯＤ－ＳＣＩＤ １．８Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇ」）のデータ、ならびにＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４についての以下のＨｕＬｉｖマウス実験（実施例４）のデータと整列させた（図４Ｂ）。
実施例３：マウスモデルで発現させた抗Ｃ５抗体のエクスビボ分析
発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）は、赤血球の破壊（溶血性貧血）、血栓（血栓）、および骨髄機能の障害によって特徴付けられる。発現した抗Ｃ５抗体が、溶血性貧血の低減に有効であるかを判定するために、ＰＮＨエクスビボ溶血アッセイを行った。ヒトＣ５を含有するヒト血清を、ＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４で処置したＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清、および活性化ヒツジ赤血球（ＲＢＣ）と混合した。溶血の％を、抗Ｃ５バイオシミラー抗体と比較した。図５に示す通り、ＡＡＶＨＳＣ１３にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４またはＡＡＶＨＳＣ１７におパッケージングされたＣ５Ａｂ０４のいずれかを用いて試験したＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清が、バイオシミラー対照抗Ｃ５抗体より高い程度まで、溶血を阻害することができた。
１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１３にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４またはＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４のいずれかで処置したＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清を、陰性対照マウス血清（図２Ａ実験由来）と比較する、同様のエクスビボ溶血アッセイを行った。オスおよびメスのマウスについてのデータを分離し、複数の血清試料を、処置後９週間にわたって採取した。ヒトＩｇＧ濃度（μｇ／ｍＬ）を、抗Ｃ５抗体レベルの読み取り値として血清試料で測定し、ＡＡＶＨＳＣ１３またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドのいずれかにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４で処置したマウスにおいて、経時的に上昇したレベルの抗Ｃ５抗体を示した（図６Ａ）。図６Ａに示したデータは、図２Ａおよび２Ｂに示したデータのサブセットである。ＡＡＶＨＳＣ１３またはＡＡＶＨＳＣ１７カプシドのいずれかにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処置したマウスから得られた血清は、溶血を阻害することができた（図６Ｂ）。図６Ｃは、折れ線グラフで示された、投与の１９週間後に得た血清試料から決定された溶血の％を用いて図６Ｂの結果を示す。図６Ａ～６Ｃにおいて、１群当たりｎ＝３匹のマウス。
第二の実験において、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０２を用いて処置したＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清を、陰性対照マウス血清（図２Ｃに示す通り）と比較する、エクスビボ溶血アッセイを行った。オスおよびメスのマウスについてのデータを分離し、複数の血清試料を、処置後１６週間にわたって採取した。図６Ｄに示す通り、処置されたＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清は、溶血を阻害することができた。図６Ｄにおいて、１群当たりｎ＝３匹のマウス。
第三の実験において、１ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４を用いて処置したオスのＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清を、陰性対照マウス血清（図２Ｅに示す通り）と比較する、エクスビボ溶血アッセイを行った。複数の血清試料を、投与後１６週間にわたって採取した。図６Ｅに示す通り、処置されたＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清は、溶血を阻害することができた。図６Ｅにおいて、１群当たりｎ＝３匹のオスのマウス。
第四の実験において、５ｅ１１ｖｇ／ｋｇ、５ｅ１２ｖｇ／ｋｇ、１．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、４．４ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、または１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処置したオスのＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清を、陰性対照マウス血清（図２Ｈに示す通り）と比較する、エクスビボ溶血アッセイを行った。複数の血清試料を、投与後１６週間にわたって採取した。図６Ｆに示す通り、処置されたＮＯＤ ＳＣＩＤマウスから得られた血清は、ｒＡＡＶ用量依存性の様式で溶血を阻害することができた。図６Ｆにおいて、１群当たりｎ＝３匹のオスのマウス。
溶血アッセイプロトコール
上記の溶血アッセイを、以下のプロトコールを使用して行った。９６ウェルのＶ底プレートにおいて、ゼラチンＶｅｒｏｎａｌバッファー（ＧＶＢＳ、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｇ６５１４）を、各ウェル（ＥＤＴＡありおよびなし）のマウス血清と混合した。次いで、１０％正常ヒト血清（ＮＨＳ、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ４５２２）を各ウェルに加えた。次いで、プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、１ｍＬの抗体感作ヒツジ赤血球（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，カタログ番号：Ｂ２００、Ｂ２０１およびＢ２０２）を各ウェルに加え、約３０分間振とうした。次いで、プレートを１０００ｇで５分間遠心分離した。上清を新しいプレートに移し、５４０ｎｍおよび６１５ｎｍで読み取った。次に、６１５ｎｍの値を５４０ｎｍ値から減算して、最終読み取り値を得た。全ての報告した溶血の％値において、製剤バッファーのみまたはＡＡＶＨＳＣで処理した試料を含む、全ての試料の溶血の％を、１００％赤血球溶解対照で正規化した後、報告する。
実施例４：ＨｕＬｉｖマウスモデルの生成および特徴決定
本明細書に記載される治療アプローチの機能活性および耐久性を評価するために、一般的にＦＲＧ（登録商標）ノックアウトマウスと称されるＣ５７Ｂｌ／６バックグラウンド上のＦａｈ－／－Ｒａｇ２－／－Ｉｌ２ｒｇ－／－マウスを、肝臓ヒト化のモデルとして使用した。マウスは免疫不全であり、チロシン異化酵素フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（Ｆａｈ）を欠いていた。マウス肝細胞の切除を、保護剤２－（２－ニトロ－４－トリフルオロメチルベンゾイル）－１，３－シクロヘキサンジオン（ＮＴＢＣ）の回収によって誘発した。次いで、マウスをヒト肝細胞で生着させ、ウロキナーゼ発現アデノウイルスを投与して、ヒト肝細胞の再配置を強化した。生着は、適切なレジメンのＣｕＲｘ（商標）ニチノン（２０－００２６）およびＳＭＸ／ＴＭＰ抗生物質（２０－００３７）の予防的処置を用いて、動物の生涯にわたって維持された。得られたＨｕＬｉｖマウス肝臓は、＞７０％のヒト肝細胞で再配置された。これらのＨｕＬｉｖマウスは、Ａｚｕｍａ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２５（８）：９０３－９１０（２００７））にさらに記載される。
図７Ａおよび図７Ｂに示す通り、ＨｕＬｉｖマウスは、マウスＣ５をほとんど産生せずに、ヒト血清と同等のレベルでヒトＣ５を産生する。このＨｕＬｉｖモデルは、インビボでのヒト肝細胞による抗Ｃ５抗体発現、およびヒトＣ５の存在下での抗Ｃ５抗体の耐久性の検討を可能にする。
ＨｕＬｉｖマウス（ｎ＝２）に、抗Ｃ５バイオシミラー抗体１００μｇの単回用量を投与するか、または１ｅ１３ｖｇ／ｋｇもしくは１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を投与した。血清抗体濃度を、１、３、５、７、９、および１１週目に決定した。１、３、および５週目について図８Ａに示す通り、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４のＨｕＬｉｖマウスへの投与は、対照抗Ｃ５抗体の直接投与と比較して、実質的により高い濃度の抗Ｃ５抗体をもたらした。図８Ｂは、対数スケールのＹ軸と共に折れ線グラフで示される、投与の１１週後に決定された血清抗体濃度を用いて図８Ａの結果を示す。１ｅ１３ｖｇ／ｋｇまたは１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処置したＨｕＬｉｖマウスから得られた血清を、対照抗Ｃ５抗体（バイオシミラー）を直接投与したＨｕＬｉｖマウスから得られた血清と比較する、エクスビ溶血アッセイを、上記と同じ方法を使用して行った。血清試料を、投与後１１週間にわたって採取した。図８Ｃに示す通り、処置したＨｕＬｉｖマウスから得られた血清は、溶血を阻害することができた。１ｅ１３ｖｇ／ｋｇまたは１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ＡＡＶＨＳＣ１７カプシドにパッケージングされたＣ５Ａｂ０４を用いて処置したマウスは、エクスビボ溶血アッセイにおいて溶血から約８０％の保護を示した。最大約２０％のバックグラウンドの残りの溶血を、ＨｕＬｉｖマウスにおけるＣ５７Ｂｌ／６肝細胞の残りの集団が作製したマウス補体タンパク質の存在によって説明し得る。図８Ｄは、処置したＨｕＬｉｖマウスから得られた血清において、酵素結合免疫吸着アッセイを介して決定したマウスＣ５のレベルを示す。
実施例５：初代肝細胞スクリーニングアッセイ
最適化ｒＡＡＶベクターを迅速に試験するために、抗体産生および分泌を評価するための細胞株ベースのアッセイを開発した。ヒト初代肝細胞を、インビボ実験に最も近いものとして選択した。Ｌｏｎｚａの、播種可能なヒト肝細胞（カタログ番号ＨＵＣＰＧ）および播種可能なＣ５７ＢＬ／６マウス肝細胞（カタログ番号ＭＢＣＰ０１）を使用した。
約５００，０００個のヒト肝細胞または２５０，０００個のマウス肝細胞を播種し、続いて約３００，０００ＭＯＩの、ＡＡＶＨＳＣ１５またはＡＡＶＨＳＣ１７にパッケージングされたＣ５Ａｂ０２、Ｃ５Ａｂ０３、またはＣ５Ａｂ０４とインキュベートした。次いで、培養培地を、ウイルス添加の７日目に収集し、ウェスタンブロットおよびヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡにより分析した。図９Ａおよび図９Ｂに示す通り、大量レベルの抗Ｃ５抗体を検出した。
＊＊＊
本発明の範囲は、本明細書に記載の特定の実施形態によって限定されるべきではない。実際に、記載されるものに加えて本発明の様々な修正が、前述の記述及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に入るよう意図されている。
本明細書で引用される全ての参考文献（例えば、刊行物又は特許又は特許出願）は、個々の参考文献（例えば、刊行物又は特許又は特許出願）が各々、全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれることを具体的かつ個別に示された場合と同じ程度に、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。他の実施形態も以下の特許請求の範囲内である。

Claims (145)

  1. （ａ）５’から３’の方向に、
    第一の肝臓特異的転写制御エレメント、
    第一のシグナル配列に作動可能に連結された抗体重鎖を含む第一のポリペプチドをコードする第一のコード配列、および
    第一のポリアデニル化配列を含む、第一の発現カセット；および
    （ｂ）５’から３’の方向に、
    第二の肝臓特異的転写制御エレメント、
    第二のシグナル配列に作動可能に連結された抗体軽鎖を含む第二のポリペプチドをコードする第二のコード配列、および
    第二のポリアデニル化配列を含む、第二の発現カセットを含み、
    前記第一および第二のコード配列の発現が、前記抗体重鎖および前記抗体軽鎖を含む抗体を産生する、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ゲノム。
  2. 前記第一および／または第二の転写制御エレメントが、ヒトアルブミンプロモーター、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーター、ヒトチロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、ヒトＡｐｏＨプロモーター、ヒトＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、およびヒトＡｐｏＥ／Ｃ－Ｉ肝臓調節領域（ＨＣＲ）１または２などのその肝臓特異的制御モジュールからなる群から選択されるプロモーターエレメントを含む、請求項１に記載のｒＡＡＶゲノム。
  3. 前記第一および／または第二の転写制御エレメントが、配列番号２５、２７、６６、６８、６９、１１６、および１１７からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むプロモーターエレメントを含む、請求項１または２に記載のｒＡＡＶゲノム。
  4. 前記転写制御エレメントが、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  5. 前記転写制御エレメントが、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  6. 前記転写制御エレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項１～５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  7. 前記転写制御エレメントが、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  8. 前記転写制御エレメントが、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  9. 前記転写制御エレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項１～５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  10. 前記第一および／または第二の発現カセットが、前記第一および／または第二のコード配列の５’ならびに前記転写制御エレメントの３’に位置するイントロンエレメントをさらに含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  11. 前記イントロンエレメントが、外因性イントロンエレメントであり、任意選択的に、前記外因性イントロンエレメントが、ＳＶ４０イントロンエレメントまたはマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンエレメントである、請求項１０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  12. 前記ＳＶ４０イントロンエレメントが、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載のｒＡＡＶゲノム。
  13. 前記ＳＶ４０イントロンエレメントが、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１または１２に記載のｒＡＡＶゲノム。
  14. 前記ＳＶ４０イントロンエレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項１１～１３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  15. 前記ＭＶＭイントロンエレメントが、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  16. 前記ＭＶＭイントロンエレメントが、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  17. 前記ＭＶＭイントロンエレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項１１～１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  18. 前記第一および第二の転写制御エレメントが同一である、請求項１～１７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  19. 前記第一の転写制御エレメントが、ＨＣＲ１エレメント、ｈＡＡＴプロモーター、およびＳＶ４０イントロンエレメントを含み、前記第二の転写制御エレメントが、ＳＥＲＰＩＮＡ１肝臓特異的制御モジュール、ＴＴＲプロモーター、およびＭＶＭイントロンエレメントを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  20. 前記第一の転写制御エレメントが、配列番号５０の核酸配列を含み、前記第二の転写制御エレメントが、配列番号４３の核酸配列を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  21. 前記第一および／または第二の発現カセットが、前記第一および／または第二のコード配列の３’にポリアデニル化配列をさらに含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  22. 前記ポリアデニル化配列が、外因性ポリアデニル化配列であり、任意選択的に、前記外因性ポリアデニル化配列が、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、またはウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化配列である、請求項２１に記載のｒＡＡＶゲノム。
  23. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項２２に記載のｒＡＡＶゲノム。
  24. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項２２または２３に記載のｒＡＡＶゲノム。
  25. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列の前記ヌクレオチド配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項２２～２４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  26. 前記ＢＧＨポリアデニル化配列が、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項２２～２５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  27. 前記ＢＧＨポリアデニル化配列が、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項２２～２６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  28. 前記ＢＧＨポリアデニル化配列の前記ヌクレオチド配列が、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項２２～２７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  29. 前記第一および第二の発現カセットが、同一のポリアデニル化配列を含む、請求項２１～２８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  30. 前記第一の発現カセットが、前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列を含む、請求項２１～２９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  31. 前記第二の発現カセットが、前記ＢＧＨポリアデニル化配列を含む、請求項２１～３０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  32. 前記第一のポリアデニル化配列が、配列番号３１の核酸配列を含み、前記第二のポリアデニル化配列が、配列番号３３の核酸配列を含む、請求項２１～３１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  33. 前記第一および第二の発現カセットが、前記ｒＡＡＶゲノムで同じ配向にある、請求項１～３２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  34. 前記第一および第二の発現カセットが、前記ｒＡＡＶゲノムで逆の配向にある、請求項１～３２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  35. 前記第一および第二の発現カセットが、前記ｒＡＡＶゲノムで遠位に位置する前記第一および第二のポリアデニル化配列と逆の配向にある、請求項１～３４のいずれかに記載のｒＡＡＶゲノム。
  36. 前記ｒＡＡＶゲノムが、前記第一の転写制御エレメントと第二の転写制御エレメントの間に挿入されるスタッファー配列をさらに含む、請求項３５に記載のｒＡＡＶゲノム。
  37. 前記スタッファー配列が、ベータグロビンポリアデニル化配列を含む、請求項３６に記載のｒＡＡＶゲノム。
  38. 前記ベータグロビンポリアデニル化配列が、配列番号５１の核酸配列を含む、請求項３７に記載のｒＡＡＶゲノム。
  39. 前記ｒＡＡＶゲノムが、５’から３’の方向に、
    （ａ）配列番号３３の核酸配列を含む前記第一のポリアデニル化配列；
    （ｂ）前記第一のコード配列；
    （ｃ）配列番号２７の核酸配列を含む前記第一の肝臓特異的転写制御エレメント；
    （ｄ）配列番号５１の核酸配列を含むスタッファー配列；
    （ｅ）配列番号６７の核酸配列を含む前記第二の肝臓特異的転写制御エレメント；
    （ｆ）前記第二のコード配列；および
    （ｇ）配列番号３１の核酸配列を含む前記第二の転写ポリアデニル化配列を含む、請求項３５にｒＡＡＶゲノム。
  40. 前記ｒＡＡＶゲノムが、５’から３’の方向に、前記第一の発現カセットの逆相補鎖、スタッファー配列、および前記第二の発現カセットを含む、請求項３５に記載のｒＡＡＶゲノム。
  41. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み；および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  42. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み；および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  43. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    前記第一のポリアデニル化配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み；および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  44. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み；
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含み；および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    前記第一のポリアデニル化配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  45. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含み、および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  46. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含み、および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  47. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列、
    配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    前記第一のポリアデニル化配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含み、および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列、
    配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  48. （ａ）前記第一の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列、
    配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第一のコード配列、
    配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含み、
    （ｂ）前記スタッファー配列が、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列またはその逆相補鎖を含み、および
    （ｃ）前記第二の発現カセットが、５’から３’の方向に、
    配列番号２５に記載されるヌクレオチド配列、
    配列番号２６に記載されるヌクレオチド配列、
    前記第二のコード配列、
    前記第一のポリアデニル化配列を含む、請求項４０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  49. ５’から３’の方向に、
    （ａ）肝臓特異的転写制御エレメント；第一のシグナル配列に作動可能に連結された抗体重鎖を含む第一のポリペプチドをコードする第一のコード配列；リボソームスキッピングペプチドをコードするリボソームスキッピング配列；第二のシグナル配列に作動可能に連結された抗体軽鎖を含む第二のポリペプチドをコードする第二のコード配列；およびポリアデニル化配列；または
    （ｂ） 肝臓特異的転写制御エレメント；第二のシグナル配列に作動可能に連結された抗体軽鎖を含む第二のポリペプチドをコードする第二のコード配列；リボソームスキッピングペプチドをコードするリボソームスキッピング配列；第一のシグナル配列に作動可能に連結された抗体重鎖を含む第一のポリペプチドをコードする第一のコード配列；およびポリアデニル化配列を含む、バイシストロニック発現カセットを含み、
    前記バイシストロニック発現カセットの発現が、前記抗体重鎖および前記抗体軽鎖を含む抗体を産生する、ｒＡＡＶゲノム。
  50. 転写制御エレメントが、ヒトアルブミンプロモーター、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーター、前記ヒトチロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーター、ヒトＡｐｏＨプロモーター、ヒトＳＥＲＰＩＮＡ１（ｈＡＡＴ）プロモーター、およびヒトＡｐｏＥ／Ｃ－Ｉ肝臓調節領域（ＨＣＲ）１または２などのその肝臓特異的制御モジュールからなる群から選択されるプロモーターエレメントを含む、請求項４９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  51. 前記転写制御エレメントが、配列番号２５、２７、６６、６８、６９、１１６、および１１７からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むプロモーターエレメントを含む、請求項４９または５０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  52. 前記転写制御エレメントが、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項４９～５１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  53. 前記転写制御エレメントが、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項４９～５２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  54. 前記転写制御エレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号２７に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項４９～５３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  55. 前記転写制御エレメントが、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項４９または５０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  56. 前記転写制御エレメントが、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項５５に記載のｒＡＡＶゲノム。
  57. 前記転写制御エレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号６７に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項５５に記載のｒＡＡＶゲノム。
  58. 前記バイシストロニック発現カセットが、前記第一および／または第二のコード配列の５’、ならびに前記転写制御エレメントの３’に位置するイントロンエレメントをさらに含む、請求項４９～５７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  59. 前記イントロンエレメントが、外因性イントロンエレメントであり、任意選択的に、前記外因性イントロンエレメントが、ＳＶ４０イントロンエレメントまたはマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンエレメントである、請求項５８に記載のｒＡＡＶゲノム。
  60. 前記ＳＶ４０イントロンエレメントが、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項５９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  61. 前記ＳＶ４０イントロンエレメントが、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項５９または６０に記載のｒＡＡＶゲノム。
  62. 前記ＳＶ４０イントロンエレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号２９に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項５９～６１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  63. 前記ＭＶＭイントロンエレメントが、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項５９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  64. 前記ＭＶＭイントロンエレメントが、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項５９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  65. 前記ＭＶＭイントロンエレメントの前記ヌクレオチド配列が、配列番号３０に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項５９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  66. 前記転写制御エレメントが、
    （ａ）ＨＣＲ１エレメント、ｈＡＡＴプロモーター、およびＳＶ４０イントロンエレメント；または
    （ｂ）ＳＥＲＰＩＮＡ１肝臓特異的制御モジュール、ＴＴＲプロモーター、およびＭＶＭイントロンエレメントを含む、請求項４９～６５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  67. 前記転写制御エレメントが、配列番号５０の核酸配列、または配列番号４３の核酸配列を含む、請求項４９～６６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  68. 前記ポリアデニル化配列が、外因性ポリアデニル化配列であり、任意選択的に、前記外因性ポリアデニル化配列が、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、またはウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化配列である、請求項４９～６７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  69. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項６８に記載のｒＡＡＶゲノム。
  70. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項６８または６９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  71. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列の前記ヌクレオチド配列が、配列番号３１に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項６８～７０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  72. 前記ＢＧＨポリアデニル化配列が、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  73. 前記ＢＧＨポリアデニル化配列が、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項６８～７２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  74. 前記ＢＧＨポリアデニル化配列の前記ヌクレオチド配列が、配列番号３３に記載されるヌクレオチド配列からなる、請求項６８～７３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  75. 前記第一および／または第二のシグナル配列が、天然に存在するシグナル配列である、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  76. 前記第一および／または第二のシグナル配列が、抗体シグナル配列であり、任意選択的に、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＫシグナル配列である、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  77. 前記第一および／または第二のシグナル配列が、天然に存在しないシグナル配列である、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  78. 前記第一および／または第二のシグナル配列が、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  79. 前記第一および／または第二のシグナル配列が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  80. 前記第一のシグナル配列が、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、前記第二のシグナル配列が、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  81. 前記第一および／または第二のコード配列が、配列番号２３、９６、１０２、または１０８に記載される核酸配列のいずれか一つを含む、請求項１～８０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  82. 前記第一および／または第二のコード配列が、配列番号２４、９９、１０５、１１１、または１３０に記載される核酸配列のいずれか一つを含む、請求項１～８０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  83. 前記第一のコード配列が、配列番号２３、９６、１０２、または１０８に記載される核酸配列のいずれか一つを含み、前記第二のコード配列が、配列番号２４、９９、１０５、１１１、または１３０に記載される核酸配列のいずれか一つを含む、請求項１～８２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  84. 前記抗体が、補体Ｃ５に特異的に結合する、請求項１～８３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  85. 前記抗体重鎖が、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  86. 前記抗体重鎖が、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  87. 前記抗体軽鎖が、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  88. 前記第一および／または第二のコード配列が、ヒト細胞における発現に最適化されている、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  89. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、１１３、１１４、または１１５に記載される核酸配列のいずれか一つを含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  90. 前記第一のコード配列が、配列番号８３、９４、９５、１０１、または１０７に記載される核酸配列のいずれか一つを含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  91. 前記第二のコード配列が、配列番号５３、９８、１０４、１１０、または１３１に記載される核酸配列のいずれか一つを含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  92. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号５３に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  93. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号６３に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  94. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号９８に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  95. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号９９に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  96. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１００に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  97. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１０４に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  98. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１０５に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  99. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１０６に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  100. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１１０に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  101. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１１１に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  102. 前記第一のコード配列が、配列番号５２、６２、８３、９４、９５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１０７、１０８、１０９、１１３、１１４、および１１５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記第二のコード配列が、配列番号１１２に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～９１のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  103. 前記ｒＡＡＶゲノムが、一本鎖ｒＡＡＶゲノムである、請求項１～１０２のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  104. 前記ｒＡＡＶゲノムが、自己相補的ｒＡＡＶゲノムである、請求項１～１０３のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  105. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号８４の核酸配列を含む、請求項１～１０４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  106. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号８５の核酸配列を含む、請求項１～１０４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  107. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号８６の核酸配列を含む、請求項１～１０４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  108. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号８７の核酸配列を含む、請求項１～１０４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  109. 前記ｒＡＡＶゲノムが、前記第一のポリアデニル化配列の５’に５’末端逆位配列（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列、および前記第二のポリアデニル化配列の３’に３’末端逆位配列（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１～１０８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  110. 前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、かつ／又は前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１８に記載されるヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、請求項１０９に記載のｒＡＡＶゲノム。
  111. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号８８の核酸配列を含む、請求項１～１１０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  112. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号８９の核酸配列を含む、請求項１～１１０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  113. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号９０の核酸配列を含む、請求項１～１１０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  114. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号９１の核酸配列を含む、請求項１～１１０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノム。
  115. （ａ）ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシド；および
    （ｂ）請求項１～１１４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶゲノムを含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）。
  116. 前記カプシドタンパク質が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、およびＡＡＶ９からなる群から選択される、請求項１１５に記載のｒＡＡＶ。
  117. 前記ＡＡＶカプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１１５または１１６に記載のｒＡＡＶ。
  118. 配列番号１６のアミノ酸２０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、または配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、請求項１１５～１１７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  119. （ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、または
    （ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、請求項１１８に記載のｒＡＡＶ。
  120. 前記カプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含む、請求項１１８に記載のｒＡＡＶ。
  121. 前記ＡＡＶカプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１５～１２０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  122. 配列番号１６のアミノ酸１５１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、または配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、請求項１２１に記載のｒＡＡＶ。
  123. （ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、または
    （ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、請求項１２２に記載のｒＡＡＶ。
  124. 前記カプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含む、請求項１２２に記載のｒＡＡＶ。
  125. 前記ＡＡＶカプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１５～１２４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  126. 配列番号１６のアミノ酸２に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＴである、配列番号１６のアミノ酸６５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸６８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＶである、配列番号１６のアミノ酸７７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＬである、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧもしくはＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、または配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、請求項１２５に記載のｒＡＡＶ。
  127. （ａ）配列番号１６のアミノ酸２に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＴであり、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸６５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＹである、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸７７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸１１９に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＬであり、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、
    （ｅ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
    （ｆ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
    （ｇ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
    （ｈ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、または
    （ｉ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、請求項１２６に記載のｒＡＡＶ。
  128. 前記カプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含む、請求項１２７に記載のｒＡＡＶ。
  129. 配列番号８５～９３に記載される核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
  130. 請求項１１５～１２８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、または請求項１２９に記載のポリヌクレオチドを含む、医薬組成物。
  131. ｒＡＡＶの調製のためのパッケージング系であって、
    （ａ）一つまたは複数のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第一のヌクレオチド配列、
    （ｂ）請求項１１５～１２８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶのカプシドタンパク質をコードする第二のヌクレオチド配列、および
    （ｃ）請求項１～１１４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶのｒＡＡＶゲノム配列を含む第三のヌクレオチド配列を含む、パッケージング系。
  132. 前記パッケージング系が、前記第一のヌクレオチド配列および前記第二のヌクレオチド配列を含む第一のベクター、ならびに前記第三のヌクレオチド配列を含む第二のベクターを含む、請求項１３１に記載のパッケージング系。
  133. 一つまたは複数のヘルパーウイルス遺伝子を含む第四のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１３１または１３２に記載のパッケージング系。
  134. 前記第四のヌクレオチド配列が、第三のベクターに含まれる、請求項１３３に記載のパッケージング系。
  135. 前記第四のヌクレオチド配列が、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からなる群から選択されるウイルスからの一つまたは複数の遺伝子を含む、請求項１３３または１３４に記載のパッケージング系。
  136. 前記第一のベクター、第二のベクター、および／または前記第三のベクターが、プラスミドである、請求項１３１～１３５のいずれか一項に記載のパッケージング系。
  137. ｒＡＡＶの組換え調製のための方法であって、前記ｒＡＡＶが産生される条件下で請求項１３１～１３５のいずれか一項に記載のパッケージング系を細胞に導入することを含む、方法。
  138. 医薬として使用するための、請求項１１５～１３８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１２９に記載のポリヌクレオチド。
  139. 補体Ｃ５関連疾患の治療における使用のための、請求項１１５～１３８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１２９に記載のポリヌクレオチド。
  140. 補体Ｃ５関連疾患を有する対象を治療する方法における使用のための請求項１１５～１３８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１２９に記載のポリヌクレオチドであって、前記方法が、有効量の前記ｒＡＡＶ、前記医薬組成物、または前記ポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含む、ｒＡＡＶ、医薬組成物、またはポリヌクレオチド。
  141. 対象において抗体を産生する方法であって、前記対象に請求項１３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  142. 前記医薬組成物が、静脈内投与される、請求項１４１に記載の方法。
  143. それを必要とする対象における補体Ｃ５関連疾患を治療する方法であって、前記対象に、有効量の請求項１１５～１２８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１２９に記載のポリヌクレオチドを投与することを含む、方法。
  144. 前記補体Ｃ５関連疾患が、地図状萎縮（ＧＡ）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）腎炎、増殖性腎炎、喘息、関節リウマチ、敗血症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、および加齢黄斑変性（ＡＭＤ）からなる群から選択される、請求項１４３に記載の方法。
  145. 前記ｒＡＡＶ、前記医薬組成物、または前記ポリヌクレオチドが、静脈内投与される、請求項１４３または１４４に記載の方法。
JP2023515817A 2020-09-09 2021-09-09 ベクター化抗体およびその使用 Pending JP2023541058A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063075898P 2020-09-09 2020-09-09
US63/075,898 2020-09-09
US202163179990P 2021-04-26 2021-04-26
US63/179,990 2021-04-26
PCT/US2021/071400 WO2022056531A1 (en) 2020-09-09 2021-09-09 Vectorized antibodies and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023541058A true JP2023541058A (ja) 2023-09-27

Family

ID=80629961

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023515817A Pending JP2023541058A (ja) 2020-09-09 2021-09-09 ベクター化抗体およびその使用

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20220106611A1 (ja)
EP (1) EP4211252A1 (ja)
JP (1) JP2023541058A (ja)
KR (1) KR20230082623A (ja)
AU (1) AU2021340972A1 (ja)
CA (1) CA3191777A1 (ja)
IL (1) IL301131A (ja)
MX (1) MX2023002753A (ja)
TW (1) TW202227635A (ja)
WO (1) WO2022056531A1 (ja)

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003223517A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-27 Children's Hospital, Inc. Antibody gene transfer and recombinant aav
US9839696B2 (en) * 2010-04-30 2017-12-12 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
AU2015231231B2 (en) * 2014-03-21 2021-09-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Genome editing without nucleases
AU2015234242B2 (en) * 2014-03-21 2020-09-24 Children's Medical Research Institute Stable gene transfer to proliferating cells
GB201519086D0 (en) * 2015-10-28 2015-12-09 Syncona Partners Llp Gene Therapy
EP3519436A4 (en) * 2016-09-30 2020-09-09 Baylor College of Medicine TISSUE-ORIENTED ANTIBODY-BASED GENE THERAPY
CA3045161A1 (en) * 2016-12-01 2018-06-07 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence Production of ricin antibodies in plant
US10610606B2 (en) * 2018-02-01 2020-04-07 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP4211252A1 (en) 2023-07-19
AU2021340972A1 (en) 2023-04-13
WO2022056531A1 (en) 2022-03-17
KR20230082623A (ko) 2023-06-08
TW202227635A (zh) 2022-07-16
IL301131A (en) 2023-05-01
MX2023002753A (es) 2023-04-03
CA3191777A1 (en) 2022-03-17
US20220106611A1 (en) 2022-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210008227A1 (en) Gene therapy for spinal cord disorders
JP2022088645A (ja) 高ビリルビン血症の処置
JP2020096642A (ja) 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
JP2021503914A (ja) アデノ随伴ウイルス変異キャプシドおよび血管新生の阻害のための使用
US20210346519A1 (en) Hybrid regulatory elements
TW201704253A (zh) 殼體
RU2764919C2 (ru) Оптимизированные гены и экспрессионные кассеты cln1, и их применение
US20210292724A1 (en) Mini-gde for the treatment of glycogen storage disease iii
JP2022523679A (ja) 体液性免疫を回避する組成物および方法
JP7371954B2 (ja) ヒト肝臓への遺伝子導入のためのアデノ随伴ウイルスビリオン
US20220106611A1 (en) Vectorized antibodies and uses thereof
US20230313152A1 (en) C-terminal truncated gde for the treatment of glycogen storage disease iii
CN116568814A (zh) 载体化抗体和其用途
JP2023554066A (ja) 血漿カリクレインの制御不全によって媒介される疾患の処置のための抗体のアデノ随伴ウイルスベクター送達
US20230374546A1 (en) Bidirectional dual promoter expression vectors and uses thereof
KR20230029616A (ko) 종간 호환가능한 아데노-관련 바이러스 조성물 및 이의 사용 방법
BR112020012830A2 (pt) terapia genética para distúrbios eosinofílicos
CN117897492A (zh) 用于肌肉和cns中的基因表达的杂合启动子
CN117363656A (zh) 核酸构建体及其用途