JP2022535526A

JP2022535526A - 過負荷クロマトグラフィーカラムの再生のための方法

Info

Publication number: JP2022535526A
Application number: JP2021571606A
Authority: JP
Inventors: マークエル．ウォン，; ドナエフ．キチョ，; ジェイソンエー．ブラウン，; ジョセフィンケー．パーション，; エイミーリム，
Original assignee: ジェネンテック，インコーポレイテッド
Priority date: 2019-06-05
Filing date: 2020-06-04
Publication date: 2022-08-09
Also published as: SG11202112816WA; TW202112799A; BR112021024147A2; US20220203347A1; WO2020247634A1; KR20220017436A; CA3140903A1; AU2020286442A1; MX2021014920A; AR119264A1; CN114096553A; EP3980153A1; IL288518A

Abstract

本発明は、再利用のためにクロマトグラフィー材料を洗浄または再生するための方法を提供する。本発明の方法は、イオン交換クロマトグラフィーカラムを、イオン交換クロマトグラフィーカラムが過負荷モードで使用される複数のポリペプチド製品の大規模製造において再利用するために、洗浄または再生するために使用し得る。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月５日出願の米国仮出願第６２／８５７，７３４号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

発明の分野
本発明は、クロマトグラフィーのための方法を提供する。

発明の背景
過負荷（ＯＬ）陽イオン交換クロマトグラフィーは、樹脂の利用率およびプラント効率を改善するプロセスを強化しながら、結合および溶出モードと同等の不純物除去機能を備えていることが示されている。樹脂は、樹脂の動的結合容量を超える強い結合条件下で負荷される。生成物のブレークスルーが回収されている間、不純物は優先的に樹脂に結合する。高い負荷密度（通常、５００ｇ／Ｌ超）により、高濃度の宿主細胞タンパク質が樹脂に結合したままである。このように、精製プロセスの消毒フェーズ（０．５Ｎ水酸化ナトリウム）中にカラムは欠陥を生じる（高いカラム圧力、８０ｐｓｉ超）（図１）。必要なのは、クロマトグラフィーのラン間で不純物が持ち越されることなく、消毒フェーズでの圧力上昇を最小限に抑える改善されたプロセスである。

過負荷クロマトグラフィーの方法は、米国特許出願公開第２０１３／００７９２７２Ａ１号および米国特許出願公開第２０１４／０３０１９７７Ａ１号に記載されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

特許出願および刊行物を含む本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

簡単な説明
いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー材料）を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０～約６００ｍＭの酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）を含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０～１１である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．３である。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、イオン交換クロマトグラフィー材料を再生緩衝液が通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約４材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｃ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液および第２の再生緩衝液は、約２５～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ５．０である。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約７材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、酸洗浄液は、約１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸である。いくつかの実施形態において、約１～約５材料体積の酸洗浄液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３材料体積の酸洗浄液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約４材料体積の消毒緩衝液が通過し、イオン交換クロマトグラフィー材料を再生緩衝液が通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約３材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー材料）を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ７～９である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．０である。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約４材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー材料）を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約４０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約ｐＨ５．０～約ｐＨ６．０である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約ｐＨ５．５である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約３～７材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０～１１である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．３である。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約４材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、およびｈ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、約７０ｇ／Ｌ以上である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の約２倍～約１００倍である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の約１０倍である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭのＮａＯＡｃおよび約２５ｍＭ～約７５ｍＭのトリスを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約８５ｍＭの酢酸ナトリウムおよび約５０ｍＭのトリスを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約ｐＨ６．０～約ｐＨ１０．０である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．０である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約５～約１５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１０材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約２５～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ５．０である。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約７材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、酸洗浄液は、約１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸である。いくつかの実施形態において、約１～約５材料体積の酸洗浄液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３材料体積の酸洗浄液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約４材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約３材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液によって平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの実施形態では、負荷密度は、７０ｇ／Ｌ以上である。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液によって平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液によって平衡化するステップ、ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、負荷密度は、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の約２倍～約１００倍である。いくつかの実施形態において、負荷密度は、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の約１０倍である。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液によって平衡化するステップ、ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

上記の局面のいくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約４０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約ｐＨ５．０～約ｐＨ６．０である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約ｐＨ５．５である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約３～７材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ７～９である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．０である。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約４材料体積の保存緩衝液に保存される。

上述のいくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、クロマトグラフィーカラム内にある。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、支持マトリックスに連結されたスルホプロピル部分を含む。いくつかの実施形態において、支持マトリックスは、架橋されたポリ（スチレンジビニルベンゼン）を含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＳ５０材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陽イオン交換材料である。いくつかの実施形態では、混合モード陽イオン交換材料は、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）ＩｍｐＲｅｓ、Ｎｕｖｉａ（商標）ｃＰｒｉｍｅ（商標）、またはＴｏｙｏｐｅａｒｌＭＸＴｒｐ－６５０Ｍである。

本発明のいくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、支持マトリックスに結合した、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、もしくは第四級アンモニウムイオン官能基、ポリアミン官能基、またはジエチルアミノエチル官能基を含み得る。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陰イオン交換材料である。いくつかの実施形態において、混合モード陰イオン交換材料は、ＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）またはＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）ＩｍｐＲｅｓである。

本発明のいくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの大規模生産のために使用される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、抗体、免疫アドへシン、Ｆｃ含有タンパク質、または免疫コンジュゲートである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ＩｇＧモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ、タンデム（ｄｉ，ｔｒｉ）－ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｓｄＡｂ、三官能性抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディまたはトリアボディである。いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＦｌｕＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗Ａｂｅｔａ、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬ融合タンパク質、およびＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１およびＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。

本発明のいくつかの実施形態において、ポリペプチドは、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する前に、親和性クロマトグラフィー材料を使用して精製され、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、親和性材料は、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィーおよびカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、プロテインＡ親和性材料は、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ材料、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）材料、またはＭＡｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）ＬＸ材料である。いくつかの実施形態において、緩衝液は、約１５～２０材料体積／時間でイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約１０材料体積／時間でイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

本発明のいくつかの実施形態において、ポリペプチドは、宿主細胞において産生される。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態において、不純物は、１つまたは複数のＩｇＧ断片、宿主細胞タンパク質、または宿主細胞核酸を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ＣＨＯ細胞において産生され、不純物は、ＣＨＯ宿主細胞タンパク質（ＣＨＯＰ）および／またはＣＨＯ核酸を含む。

図１は、再生フェーズなしで実行された過負荷クロマトグラフィーランのクロマトグラムである。樹脂の汚れは、消毒フェーズの開始時の圧力スパイク中に観察される。

図２は、抗体ｍＡｂ１の過負荷クロマトグラフィーからのＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳクロマトグラムの例を示している。

図３は、２回の評価ランからの再生フェーズのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のクロマトグラムを示している。評価ラン１の再生緩衝液は、５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．０であった。評価ラン２の再生緩衝液は３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３であった。

図４は、抗体ｍＡｂ１の評価ランＡのクロマトグラムを示す。

図５は、抗体ｍＡｂ１の評価ランＢのクロマトグラムを示す。

図６は、抗体ｍＡｂ２の評価ランＡのクロマトグラムを示す。

図７は、抗体ｍＡｂ２の評価ランＢのクロマトグラムを示す。

図８Ａおよび８Ｂは、ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳモックラン洗浄手順のＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図８Ａにおける、再生緩衝液の順序は１．）５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．０、続いて２．）３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３である。図８Ｂにおける、再生緩衝液の順序は、１．）３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３、続いて２．）５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０である。

図９は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ樹脂におけるロボットによる不純物マップスクリーニングを示す。ｍＡｂ３、チャイニーズハムスター卵巣細胞タンパク質（ＣＨＯＰ）および高分子量（ＨＭＷ）ポリペプチドの結合が示されている。

図１０Ａ～１０Ｅは、ｍＡｂ３についての、それぞれ、評価ランＡ～Ｅのクロマトグラムを示している。

発明の詳細な説明
本明細書に提供されるのは、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であり、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

本明細書に提供されるのは、再利用のために陽イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であり、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に再生緩衝液を通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｃ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、再利用のために陽イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｃ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

本明細書に提供されるのは、再利用のために陰イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であり、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に消毒緩衝液を通すステップ、ｃ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、再利用のために陰イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｃ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｃ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、およびｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換材料は、陰イオン交換材料である。いくつかの実施形態では、イオン交換材料は、混合モード陰イオン交換材料である。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについてのイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについてのイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについての陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについての陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについての陰イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについての陰イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、およびｈ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィー材料である。

本発明のいくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー）は、ポリペプチドの大規模生産において使用される。いくつかの実施形態において、タンパク質は、抗体、例えばモノクローナル抗体である。

定義
「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、本明細書において、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために互換的に使用される。ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、改変アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。これらの用語は、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作または改変、例えば、標識成分とのコンジュゲートにより改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１つまたは複数の類似体を含有するポリペプチド、ならびに当該技術分野で既知の他の改変もまたこの定義に含まれる。本明細書で使用される用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、特に抗体を包含する。

「精製された」ポリペプチド（例えば、抗体または免疫アドヘシン）は、ポリペプチドがその天然環境下で存在するよりもさらに純粋な形態で存在するように、および／または実験室条件下で最初に合成および／または増幅される際にポリペプチドの純度が上昇していることを意味する。純度は、相対用語であり、必ずしも絶対純度を意味しない。

本明細書で使用される「過負荷クロマトグラフィー」は、目的の生成物が、生成物についてのクロマトグラフィー材料の動的結合容量を超えて負荷されるクロマトグラフィー手順を指す。不純物は生成物よりも強く結合し、タンパク質のブレークスルーが達成された後に、精製された生成物の溶出がもたらされる。いくつかの例において、目的の生成物は、動的結合容量に達した後、フロースルーの画分に収集される。

本明細書で使用される、クロマトグラフィー材料の「材料体積」は、クロマトグラフィー手順で使用されるクロマトグラフィー材料の総体積である。例えば、クロマトグラフィー材料がカラム内にある場合、材料の体積はカラム内のクロマトグラフィー材料の総体積である。この例において、「材料体積」は「カラム体積」とも称し得る。

目的の抗原、例えば、腫瘍関連ポリペプチド抗原標的「と結合する」ポリペプチドは、ポリペプチドが、抗原を発現する細胞または組織を標的とする際に、診断および／または治療剤として有用であり、他のポリペプチドと有意には交差反応しないような十分な親和性で抗原と結合するものである。このような実施形態において、ポリペプチドの「非標的」ポリペプチドへの結合の程度は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降法（ＲＩＡ）によって決定されるように、ポリペプチドのその特定の標的ポリペプチドへの結合の約１０％未満である。

標的分子へのポリペプチドの結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」、またはそれに「特異的に結合する」、またはそれに「特異的な」という用語は、非特異的相互作用と測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般的に結合活性を有しない類似の構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定し得る。例えば、特異的結合は、標的に類似している対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって決定し得る。この場合、標識した標的のプローブに対する結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合に、特異的結合が示される。

本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を包含するが、これは、それらが所望の生物活性を呈する場合に限る。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書で抗体と互換的に使用される。

抗体は、種々の構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子であり、それらの構造は全て免疫グロブリン折り畳みに基づく。例えば、ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合して機能的抗体を形成する２つの「重」鎖および２つの「軽」鎖を有する。各重鎖および軽鎖はそれ自体、「定常」（Ｃ）領域および「可変」（Ｖ）領域を含む。Ｖ領域が抗体の抗原結合特異性を決定する一方で、Ｃ領域は、構造的支持を提供し、免疫エフェクタとの非抗原特異的相互作用において機能する。抗体または抗体の抗原結合断片の抗原結合特異性は、抗体が特定の抗原に特異的に結合する能力である。

抗体の抗原結合特異性は、Ｖ領域の構造的特徴によって決定される。可変性は、可変ドメインの１１０アミノ酸長にわたって均等に分布していない。代わりに、Ｖ領域は、各々９～１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極度に可変性の短い領域によって分離されている、１５～３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変の伸長部からなる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、主にβシート構成を採用する４つのＦＲを含み、これらは、３つの超可変領域（「ＨＶＲ」）により連結され、これらは、βシート構造を連結し、いくつかの場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによって共に近接近して保持されており、他方の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への寄与等の種々のエフェクタ機能を呈する。

各Ｖ領域は、典型的には、３つの超可変領域、例えば、各々が「超可変ループ」を含む相補性決定領域（「ＣＤＲ」）、および４つのフレームワーク領域を含む。したがって、特定の所望の抗原に対して実質的な親和性で結合するために必要とされる最小の構造単位である抗体結合部位は、典型的には、３つのＣＤＲと、適切な立体構造でＣＤＲを保持し、提示するためにそれらの間に散在する少なくとも３つ、好ましくは４つのフレームワーク領域とを含む。古典的な４鎖抗体は、Ｖ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインによって協働して決定される抗原結合部位を有する。ラクダ抗体およびサメ抗体等の特定の抗体は、軽鎖を欠き、重鎖のみによって形成される結合部位に依存する。単一ドメインの操作された免疫グロブリンは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌとの間に協働がない場合、結合部位が重鎖または軽鎖のみによって形成されるように調製され得る。

「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で広く異なり、かつ各特定の抗体の特定の抗原に対する結合および特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等に分布していない。これは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方において超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、主にβシート構成を採用する４つのＦＲを含み、これらは、３つの超可変領域により連結され、これらは、βシート構造を連結し、いくつかの場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによって共に近接近して保持されており、他方の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への寄与等の種々のエフェクタ機能を呈する。

「超可変領域」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、Ｖ_Ｌのおよそ２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）および８９～９７（Ｌ３）残基の周辺、およびＶ_Ｈのおよそ３１～３５Ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、および９５～１０２（Ｈ３）残基の周辺（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））および／または「超可変ループ」からのそれらの残基（例えば、Ｖ_Ｌの残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）および９１～９６（Ｌ３）、およびＶ_Ｈの２６～３２（Ｈ１）、５２Ａ～５５（Ｈ２）および９６～１０１（Ｈ３）（ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））を含む。

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書において定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

「抗体断片」は、好ましくはその抗原結合領域を含む、インタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖ断片、ダイアボディ、タンデムダイアボディ（ｔａＤｂ）、トリアボディ、直鎖抗体（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２、Ｚａｐａｔａｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５））、一アーム抗体、単一可変ドメイン抗体、ミニボディ、一本鎖抗体分子、抗体断片から形成された多重特異性抗体（例えば、Ｄｂ－Ｆｃ、ｔａＤｂ－Ｆｃ、ｔａＤｂ－ＣＨ３、（ｓｃＦＶ）４－Ｆｃ、ｓｃ－Ｆｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ、またはタンデム（ｄｉ，ｔｒｉ）－ｓｃＦｖ）、二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ）、および三官能性抗体が挙げられる。

抗体のパパイン消化により、各々単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と、容易に結晶化するその能力を反映して命名された残りの「Ｆｃ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片が産生される。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有しながら依然として抗原に架橋し得る、Ｆ（ａｂ’）_２断片が得られる。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この領域は、緊密な非共有結合にある１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この構成において、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用して、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体の表面上に抗原結合部位を決定する。まとめると、６つの超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえも、抗原を認識してそれに結合する能力を有するが、全結合部位よりも親和性が低い。

Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における少数の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が少なくとも１つの遊離チオール基を有するＦａｂ’に対する、本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。

任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明らかに異なる型のうちの１つに割り当て得る。

抗体は、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当て得る。インタクトな抗体には５つの主要なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、さらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２に分けられてもよい。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元配置は周知である。

「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在している。いくつかの実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合に所望の構造を形成することを可能にする、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖに関する概説については、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇａｎｄＭｏｏｒｅｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。

「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小抗体断片を指し、これらの断片は、同一のポリペプチド鎖内の軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に結合した重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）。同一鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、これらのドメインは、他の鎖の相補的ドメインと対合させられ、２つの抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）にさらに詳述されている。

「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、特にポリエピトープ特異性を有する抗体を包含する。このような多重特異性抗体としては、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗体であって、Ｖ_ＨＶ_Ｌ単位がポリエピトープ特異性を有する抗体、２つ以上のＶ_ＬドメインおよびＶ_Ｈドメインを有し、各Ｖ_ＨＶ_Ｌ単位が異なるエピトープに結合する抗体、２つ以上の単一可変ドメインを有し、各単一可変ドメインが異なるエピトープに結合する抗体、全長抗体、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ、トリアボディ、三官能性抗体、共有結合または非共有結合している抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。「ポリエピトープ特異性」は、同一または異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに、特異的に結合することができる能力を指す。「単一特異性」は、１つのエピトープのみに結合する能力を指す。一実施形態によれば、多重特異性抗体は、５μＭ～０．００１ｐＭ、３ μＭ～０．００１ｐＭ、１ μＭ～０．００１ｐＭ、０．５μＭ～０．００１ｐＭ、または０．１ μＭ～０．００１ｐＭの親和性で各エピトープに結合するＩｇＧ抗体である。

「単一ドメイン抗体」（ｓｄＡｂ）または「単一可変ドメイン（ＳＶＤ）抗体」という表現は、一般的に、単一可変ドメイン（ＶＨまたはＶＬ）が抗原結合を付与し得る抗体を指す。言い換えれば、単一可変ドメインは、標的抗原を認識するために他の可変ドメインと相互作用する必要はない。単一ドメイン抗体の例としては、ラクダ科動物（ラマおよびラクダ）ならびに軟骨魚類（例えば、テンジクザメ）由来の抗体、ならびにヒトおよびマウス抗体由来の組換え方法から得られる抗体が挙げられるＮａｔｕｒｅ（１９８９）３４１：５４４－５４６、ＤｅｖＣｏｍｐＩｍｍｕｎｏｌ（２００６）３０：４３－５６、ＴｒｅｎｄＢｉｏｃｈｅｍＳｃｉ（２００１）２６：２３０－２３５、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２００３）：２１：４８４－４９０、国際公開第２００５／０３５５７２号、国際公開第０３／０３５６９４号、ＦＥＢｓＬｅｔｔ（１９９４）３３９：２８５－２９０、国際公開第００／２９００４号、国際公開第０２／０５１８７０号）。

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、同一である、および／または同一のエピトープに結合し、モノクローナル抗体の産生中に生じ得る想定されるバリアントを除くが、かかるバリアントは、一般的に、少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。モノクローナル抗体は、その特異性に加えて、他の免疫グロブリンによって汚染されない点でも有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本明細書に示す方法にしたがって使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５（１９７５）によって記載されたハイブリドーマ法によって作製されても、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）に記載の技術を用いてファージ抗体ライブラリから単離し得る。

本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りの部分が、他の種に由来するか、または他の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物学的活性を呈する限り、このような抗体の断片が含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１～６８５５（１９８４））。本明細書における目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、ヒヒ、アカゲザル、またはカニクイザルなどの旧世界ザル）に由来する可変ドメイン抗原結合配列と、ヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が含まれる（米国特許第５，６９３，７８０号）。

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、もしくは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでいてもよい。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、上述のＦＲ置換（複数可）を除いて、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、かつＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、免疫グロブリンの定常領域、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）、およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。

本明細書において「インタクトな抗体」は、重および軽可変ドメイン、ならびにＦｃ領域を含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。好ましくは、インタクトな抗体は、１つまたは複数のエフェクタ機能を有する。

「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖が１つのジスルフィド共有結合により重鎖に連結される一方で、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖および軽鎖はまた、規則的に離間した鎖間ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、いくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。

「ネイキッド抗体」は、（本明細書における定義では）細胞傷害性部分または放射性標識等の異種分子にコンジュゲートされていない抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体の「エフェクタ機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指し、これは抗体アイソタイプによって異なる。抗体エフェクタ機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体の下方調節が挙げられる。

「抗体依存性細胞媒介細胞傷害性」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介反応を指す。ＡＤＣＣの媒介のための主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、ＲａｖｅｔｃｈａｎｄＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）の第４６４頁、表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。このようなアッセイに有用なエフェクタ細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。これに代えて、またはこれに加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて評価されてもよい。

「ヒトエフェクタ細胞」は、１つまたは複数のＦｃＲを発現し、かつエフェクタ機能を実行する白血球である。いくつかの実施形態において、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクタ機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、および好中球が挙げられ、このうちＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するために使用される。いくつかの実施形態において、ＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体のアレルバリアントおよび選択的スプライシング形態を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が挙げられ、これらは、主にそれらの細胞質ドメインの点で異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン内に免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照されたい）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈａｎｄＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ９：４５７－９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ４：２５－３４（１９９４）、およびｄｅＨａａｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）に総説されている。今後特定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語により包含されている。この用語はまた、母体のＩｇＧの胎児への転移を担う新生児受容体である、ＦｃＲｎも包含する（Ｇｕｙｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。

クロマトグラフィーに関して本明細書で使用される「連続的（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ）」という用語は、第１のクロマトグラフィーに続いて第２のクロマトグラフィーを有することを指す。さらなるステップが第１のクロマトグラフィーと第２のクロマトグラフィーとの間に含まれていてもよい。

クロマトグラフィーに関して本明細書で使用される「連続（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ）」という用語は、直接接続されているか、または２つのクロマトグラフィー材料の間の連続流を可能にする何らかの他の機構を介して接続された第１のクロマトグラフィー材料と第２のクロマトグラフィーとを有することを指す。

本明細書で使用される「単離された」という用語は、典型的には自然界に見出されるかまたは生成される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と呼ばれる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含む上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的には自然界に見られるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合はゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡ等）の一部ではない場合、または、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と呼ばれる。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」と呼ばれ得る。

「混入物」は、所望のポリペプチド生成物とは異なる物質を指す。混入物としては、宿主細胞物質、例えばＣＨＯ宿主細胞タンパク質（ＣＨＯＰ）、浸出プロテインＡ、核酸；所望のポリペプチドのバリアント、断片、凝集体または誘導体、他のポリペプチド、エンドトキシン、ウイルス混入物、細胞培養培地成分等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例においては、混入物は、例えば、細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、昆虫細胞、原核細胞、真核細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、真菌細胞からの宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）であり得るが、これらに限定されない。

本明細書における値またはパラメータへの「約」という言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変形を含む（かつ記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される、単数形「ａ（１つの）」、「ｏｒ（または）」、および「ｔｈｅ（その）」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。本明細書に記載の本発明の局面および変形は、局面および変形「からなる」および／または「本質的にからなる」を含むことが理解される。

クロマトグラフィー洗浄の方法
クロマトグラフィー
本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄または再生する方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィーは過負荷モードで使用される。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において使用される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）を含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０ｍＭ～６００ｍＭ、１００ｍＭ～６００ｍＭ、１５０ｍＭ～６００ｍＭ、２００ｍＭ～６００ｍＭ、２５０ｍＭ～６００ｍＭ、３００ｍＭ～６００ｍＭ、３５０ｍＭ～６００ｍＭ、４００ｍＭ～６００ｍＭ、４５０ｍＭ～６００ｍＭ、５００ｍＭ～６００ｍＭ、５５０ｍＭ～６００ｍＭ、５０ｍＭ～５５０ｍＭ、５０ｍＭ～４５０ｍＭ、５０ｍＭ～４００ｍＭ、５０ｍＭ～３５０ｍＭ、５０ｍＭ～３００ｍＭ、５０ｍＭ～２５０ｍＭ、５０ｍＭ～２００ｍＭ、５０ｍＭ～１５０ｍＭ、５０ｍＭ～１００ｍＭ、１００ｍＭ～５５０ｍＭ、１５０ｍＭ～５００ｍＭ、２００ｍＭ～４５０ｍＭ、２５０ｍＭ～４００ｍＭ、または３００ｍＭ～４００ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、または６５０ｍＭのいずれかのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。

いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約７０ｍＭ～１００ｍＭ、７５ｍＭ～９５ｍＭ、または８０ｍＭ～９０ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約７０ｍＭ～１００ｍＭ、７５ｍＭ～９５ｍＭ、または８０ｍＭ～９０ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含み、さらにトリスを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約７０ｍＭ～１００ｍＭ、７５ｍＭ～９５ｍＭ、または８０ｍＭ～９０ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含み、さらに約２５ｍＭ～７５ｍＭ、３０ｍＭ～７５ｍＭ、３５ｍＭ～４０ｍＭ、４５ｍＭ～７５ｍＭ、５０ｍＭ～７５ｍＭ、２５ｍＭ～７０ｍＭ、２５ｍＭ～６５ｍＭ、２５ｍＭ～６０ｍＭ、２５ｍＭ～５５ｍＭ、または２５ｍＭ～５０ｍＭのいずれかのトリスを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約７０ｍＭ～１００ｍＭ、７５ｍＭ～９５ｍＭ、または８０ｍＭ～９０ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含み、さらに約２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、または７５ｍＭのいずれかのトリスを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０～約ｐＨ１１．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０～約ｐＨ１０．５、約ｐＨ４．０～約ｐＨ１０．０、約ｐＨ４．０～約ｐＨ９．５、約ｐＨ４．０～約ｐＨ９．０、約ｐＨ４．０～約ｐＨ８．５で、約ｐＨ４．０～約ｐＨ８．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ１０．５、約ｐＨ５．５～約ｐＨ１０．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ９．５、約ｐＨ５．５～約ｐＨ９．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ８．５、約ｐＨ５．５～約ｐＨ８．０、約ｐＨ６．０～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ６．５～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ７．０～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ７．５～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ８．０～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ６．０～約ｐＨ１１．０、約ｐＨ６．５～約ｐＨ１０．５、約ｐＨ７．０～約ｐＨ１０．０、約ｐＨ７．５～約ｐＨ９．５、または約ｐＨ８．０～約ｐＨ９．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ７．５、約ｐＨ８．０、約ｐＨ８．１、約ｐＨ８．２、約ｐＨ８．３、約ｐＨ８．４、約ｐＨ８．５、または約ｐＨ９．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．３である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８である。いくつかの実施形態では、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．０で約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。

いくつかの実施形態において、約３～約１２、約３～約１１、約３～約１０、約３～約９、約３～約８、約３～約７、約３～約６、約３～約５、約３～約４、約４～約１２、約５～約１２、約６～約１２、約７～約１２、約８～約１２、約９～約１２、約１０～約１２、約１１～約１２、約５～約１２、約５～約１０、約８～約１２、または約９～約１１の材料体積（例えば、カラム体積）の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積（例えば、カラム体積）の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｃ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、およびｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィー材料である。

いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～約ｐＨ６．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ６．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ５．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ５．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ４．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ４．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ３．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ３．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ２．５、約ｐＨ２．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ３．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ３．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ４．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ４．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ６．０～約ｐＨ７．０、または約ｐＨ６．５～約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ２．０、約ｐＨ８．０、約ｐＨ２．５、約ｐＨ３．０、約ｐＨ３．５、約ｐＨ４．０、約ｐＨ４．５、約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、約ｐＨ６．０、約ｐＨ６．５、または約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ４．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ５．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、４０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ４．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、４０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ５．０である。

いくつかの実施形態において、約３～約１２、約３～約１１、約３～約１０、約３～約９、約３～約８、約３～約７、約３～約６、約３～約５、約３～約４、約４～約１２、約５～約１２、約６～約１２、約７～約１２、約８～約１２、約９～約１２、約１０～約１２、約１１～約１２、約５～約１２、約５～約１０、約８～約１２、または約９～約１１の材料体積（例えば、カラム体積）の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約７材料体積（例えば、カラム体積）の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、酸洗浄液は、ＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、酸洗浄液は、リン酸を含む。いくつかの実施形態において、酸洗浄液は、ＮａＯＡｃおよびリン酸を含む。いくつかの実施形態において、酸洗浄液中のＮａＯＡｃの濃度は、約０．１Ｍ超～約０．５Ｍ未満の任意の濃度である。いくつかの実施形態において、酸洗浄液中のＮａＯＡｃの濃度は、約０．１００Ｍ、０．１２０Ｍ、０．１３０Ｍ、０．１４０Ｍ、０．１５０Ｍ、０．１６０Ｍ、０．１６１Ｍ、０．１６２Ｍ、０．１６３Ｍ、０．１６４Ｍ、０．１６７Ｍ、０．１６８Ｍ、０．１６９Ｍ、０．１７０Ｍ、０．１８０Ｍ、０．１９０Ｍ、０．２００Ｍ、０．２５０Ｍ、０．３００Ｍ、０．３５０Ｍ、０．４００Ｍ、０．４５０Ｍ、または０．５００Ｍのいずれかである。いくつかの実施形態において、酸洗浄液中のリン酸の濃度は、約０．１０Ｍ、０．１５Ｍ、０．２０Ｍ、０．２５Ｍ、０．３０Ｍ、０．３５Ｍ、０．４０Ｍ、０．４５Ｍ、０．５０Ｍ、０．５５Ｍ、または０．６０Ｍのいずれかである。いくつかの実施形態において、酸洗浄液は、約０．１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸を含む。

いくつかの実施形態において、約１～約５、約１～約４、約１～約３、約１～約２、約２～約５、約２～約４、約２～約３、約３～約５、約３～約４、約４～約５の材料体積（例えば、カラム体積）の酸洗浄液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１、２、３、４、または５のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の酸洗浄液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３の材料体積（例えば、カラム体積）の酸洗浄液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）第１の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｂ）第２の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、第２の再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、およびｃ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通し、
消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、およびｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィー材料である。

いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液は、約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液は、約２５ｍＭ～６００ｍＭ、３０ｍＭ～６００ｍＭ、４０ｍＭ～６００ｍＭ、５０ｍＭ～６００ｍＭ、７５ｍＭ～６００ｍＭ、１００ｍＭ～６００ｍＭ、１２５ｍＭ～６００ｍＭ、１５０ｍＭ～６００ｍＭ、１７５ｍＭ～６００ｍＭ、２００ｍＭ～６００ｍＭ、２２５ｍＭ～６００ｍＭ、２５０ｍＭ～６００ｍＭ、２７５ｍＭ～６００ｍＭ、３００ｍＭ～６００ｍＭ、３２５ｍＭ～６００ｍＭ、３５０ｍＭ～６００ｍＭ、３７５ｍＭ～６００ｍＭ、４００ｍＭ～６００ｍＭ、４５０ｍＭ～６００ｍＭ、５００ｍＭ～６００ｍＭ、５５０ｍＭ～６００ｍＭ、２５ｍＭ～５５０ｍＭ、２５ｍＭ～５００ｍＭ、２５ｍＭ～４７５ｍＭ、２５ｍＭ～４５０ｍＭ、２５ｍＭ～４２５ｍＭ、２５ｍＭ～４００ｍＭ、２５ｍＭ～３７５ｍＭ、２５ｍＭ～５５０ｍＭ、２５ｍＭ～３２５ｍＭ、２５ｍＭ～３００ｍＭ、２５ｍＭ～２７５ｍＭ、２５ｍＭ～２５０ｍＭ、２５ｍＭ～２２５ｍＭ、２５ｍＭ～２００ｍＭ、２５ｍＭ～１７５ｍＭ、２５ｍＭ～１５０ｍＭ、２５ｍＭ～１２５ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～９０ｍＭ、２５ｍＭ～８０ｍＭ、２５ｍＭ～７０ｍＭ、２５ｍＭ～６０ｍＭ、２５ｍＭ～５０ｍＭ、２５ｍＭ～４０ｍＭ、または２５ｍＭ～３０ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、または６００ｍＭのいずれかのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。

いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～約ｐＨ６．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ６．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ５．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ５．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ４．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ４．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ３．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ３．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ２．５、約ｐＨ２．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ３．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ３．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ４．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ４．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ６．０～約ｐＨ７．０、または約ｐＨ６．５～約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ２．０、約ｐＨ８．０、約ｐＨ２．５、約ｐＨ３．０、約ｐＨ３．５、約ｐＨ４．０、約ｐＨ４．５、約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、約ｐＨ６．０、約ｐＨ６．５、または約ｐＨ７．０である。

いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ４．０であり、第２の再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ４．０である。いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ５．０であり、第２の再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ５．０である。いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ４．０であり、第２の再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ４．０である。いくつかの実施形態において、第１の再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ５．０であり、第２の再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃかつ約ｐＨ５．０である。

いくつかの実施形態において、約３～約１２、約３～約１１、約３～約１０、約３～約９、約３～約８、約３～約７、約３～約６、約３～約５、約３～約４、約４～約１２、約５～約１２、約６～約１２、約７～約１２、約８～約１２、約９～約１２、約１０～約１２、約１１～約１２、約５～約１２、約５～約１０、約８～約１２、または約９～約１１の材料体積（例えば、カラム体積）の第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０の材料体積（例えば、カラム体積）の第１の再生緩衝液および／または第２の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、消毒緩衝液はＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．９ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．８ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．７ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．８ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．６ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨ、約０．２Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．３Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．４Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．５Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．２Ｎ～約０．８ＮのＮａＯＨ、約０．３Ｎ～約０．７ＮのＮａＯＨ、または約０．４Ｎ～約０．６ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ、０．２Ｎ、０．３Ｎ、０．４Ｎ、０．５Ｎ、０．６Ｎ、０．７ＮのＮａＯＨ、０．８Ｎ、０．９Ｎ、または１．０ＮのＮａＯＨのいずれかを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨを含む。

いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、ＮａＯＨおよびＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．９ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．８ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．７ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．８ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．６ＮのＮａＯＨ、約０．１Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨ、約０．２Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．３Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．４Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．５Ｎ～約１．０ＮのＮａＯＨ、約０．２Ｎ～約０．８ＮのＮａＯＨ、約０．３Ｎ～約０．７ＮのＮａＯＨ、または約０．４Ｎ～約０．６ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ、０．２Ｎ、０．３Ｎ、０．４Ｎ、０．５Ｎ、０．６Ｎ、０．７ＮのＮａＯＨ、０．８Ｎ、０．９Ｎ、または１．０ＮのＮａＯＨのいずれかを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５Ｍ～約１．５ＭのＮａＣｌ、０．７５Ｍ～約１．５ＭのＮａＣｌ、約１．０ＭのＮａＣｌ～約１．５ＭのＮａＣｌ、約１．２５ＭのＮａＣｌ～約１．５ＭのＮａＣｌ、約０．５ＭのＮａＣｌ～約１．２５ＭのＮａＣｌ、約０．５ＭのＮａＣｌ～約１．０ＭのＮａＯＨ、または約０．５ＭのＮａＣｌ～約０．７５ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５Ｍ、０．７５Ｍ、１．０Ｍ、１．２５Ｍ、または１．５ＭのＮａＣｌのいずれかを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む。

いくつかの実施形態において、約３～約１２、約３～約１１、約３～約１０、約３～約９、約３～約８、約３～約７、約３～約６、約３～約５、約３～約４、約４～約１２、約５～約１２、約６～約１２、約７～約１２、約８～約１２、約９～約１２、約１０～約１２、約１１～約１２、約５～約１２、約５～約１０、約８～約１２、または約９～約１１の材料体積（例えば、カラム体積）の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積（例えば、カラム体積）の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約４材料体積（例えば、カラム体積）の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、保存緩衝液はＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、保存緩衝液は、約０．０５Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨ、０．０５Ｎ～約０．４ＮのＮａＯＨ、０．０５Ｎ～約０．４ＮのＮａＯＨ、０．０５Ｎ～約０．３ＮのＮａＯＨ、０．０５Ｎ～約０．２ＮのＮａＯＨ、０．０５Ｎ～約０．１ＮのＮａＯＨ、０．１Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨ、０．２Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨ、０．３Ｎ～約０．０５ＮのＮａＯＨ、または０．４Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、保存緩衝液は、約０．０５Ｎ、０．０６Ｎ、０．０７ＮのＮａＯＨ、０．０８Ｎ、０．０９Ｎ、０．１Ｎ、０．２Ｎ、０．３Ｎ、０．４Ｎまたは０．５ＮのＮａＯＨのいずれかを含む。いくつかの実施形態において、保存緩衝液は、約０．１ＮのＮａＯＨを含む。

いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～約１０、約１～約８、約１～約６、約１～約５、約１～約４、約１～約３、約１～約２、約２～約１０、約３～約２０、約４～約１０、約５～約１０、約１～約７、約２～約６、約３～約５の材料体積（例えば、カラム体積）の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の材料体積（例えば、カラム体積）のいずれかの保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約４材料体積（例えば、カラム体積）の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約３材料体積（例えば、カラム体積）の保存緩衝液に保存される。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約３５０ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．３で含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約３５０ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．３で含む、ステップ、ｂ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のために陽イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約３５０ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．３で含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、再利用のために陽イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約３５０ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．３で含む、ステップ、ｂ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、再利用のために陰イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約３５０ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．３で含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、再利用のために陰イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約３５０ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．３で含む、ステップ、ｂ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭの酢酸ナトリウムをｐＨ８．０で含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、本発明は、再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約２５ｍＭのトリスおよび８５ｍＭの酢酸ナトリウムをｐＨ８．０で含む、ステップ、ｂ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの実施形態において、本発明は、再利用のために陽イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭの酢酸ナトリウムをｐＨ８．０で含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、本発明は、再利用のために陽イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約２５ｍＭのトリスおよび８５ｍＭの酢酸ナトリウムをｐＨ８．０で含む、ステップ、ｂ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、再利用のために陰イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭの酢酸ナトリウムをｐＨ８．０で含む、ステップ、ｂ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、本発明は、再利用のために陰イオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法を提供し、クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法は、ａ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約２５ｍＭのトリスおよび８５ｍＭの酢酸ナトリウムをｐＨ８．０で含む、ステップ、ｂ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｃ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用してポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについてのイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについての陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液を用いて平衡化するステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドについての陰イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップを含む。

いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約９０ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約７０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、約１０ｍＭ～約７０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約３０ｍＭ～約５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、または１００ｍＭのいずれかのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。

いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約４．０～約８．０、約５．０～約８．０、約６．０～約８．０、約７．０～約８．０、約４．０～約７．０、約４．０～約６．０、約４．０～約５．０、約４．０～約７．０、約４．５～約６．５、または約５．０～約６．０である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、または８．０のいずれかである。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約５．５である。

いくつかの実施形態において、約３～約１０、約３～約９、約３～約８、約３～約７、約３～約６、約３～約５、約３～約４、約４～約１０、約５～約１０、約６～約１０、約７～約１０、約８～約１０、約９～約１０、約３～約８、約４～約７、または約５～約６の材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷する前に、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３、４、５、６、７、８、９、または１０のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷する前にイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約５材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷する前に、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換材料は、組成物を負荷した後、十分な量のポリペプチドが画分に収集されるまで、平衡化緩衝液で洗浄される。

いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ４．０～１１．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．３である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ８．０である。いくつかの実施形態では、再生緩衝液は、約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ８．０で約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、約３～約１２材料体積の再生緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ～約１ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、保存緩衝液は、約０．０５Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約４材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、１０００ｇ／Ｌ以下のクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約２５０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約３００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約４００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約５００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約６００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約７００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約７５０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約８００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、または約９００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ～約９００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約８００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約７５０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約７００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約６００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約５００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約４００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約３００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約２５０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約２００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約１００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約７５ｇ／Ｌ、または約２０ｇ／Ｌ～約５０ｇ／Ｌのいずれかのクロマトグラフィー材料のいずれかである。

いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、２０ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７５ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約２５０ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約３００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約４００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約５００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約６００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約７００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約７５０ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約８００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約９００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約１０００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、約１２５０ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌ、または約１５００ｇ／Ｌ～約２０００ｇ／Ｌクロマトグラフィー材料のいずれかである。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ～約１７５０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約１５００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約１２５０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約１２００ｇ／Ｌ、または約２０ｇ／Ｌ～約１１００ｇ／Ｌクロマトグラフィー材料のいずれかである。

いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を、約２倍（２倍）、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、７５倍、８０倍、９０倍、または１００倍のいずれかで超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を、２倍～１００倍、５倍～１００倍、１０倍～１００倍、２０倍～１００倍、２５倍～１００倍、３０倍～１００倍、４０倍～１００倍、５０倍～１００倍、６０倍～１００倍、７０倍～１００倍、７５倍～１００倍、８０倍～１００倍、または９０倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍、２倍～７５倍、２倍～５０倍、２倍～２５倍、２倍～２０倍、２倍～１５倍、２倍～１４倍、２倍～１３倍、２倍～１２倍、２倍～１１倍、２倍～１０倍、２倍～９倍、２倍～８倍、２倍～７倍、２倍～６倍、２倍～５倍、２倍～４倍、または２倍～３倍超える。

いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５５ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６５ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７５ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８５ｍＭ～約１００ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、約９５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９５ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、または１００ｍＭのいずれかのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約２０ｍＭ～約８０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２０ｍＭ～約７０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約３０ｍＭのトリスを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、または７０ｍＭのいずれかのトリスを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約５０ｍＭのトリスを含む。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約５０ｍＭのトリスおよび８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む。

いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約６．０～約１０．０、約７．０～約１０．０、約８．０～約１０．０、約９．０～約１０．０、約９．０～約９．０、約６．０～約８．０、または約６．０～約７．０である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは、約６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５または１０．０のいずれかである。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液のｐＨは約８．０である。いくつかの実施形態において、平衡化緩衝液は、約５０ｍＭのトリスおよび８５ｍＭのＮａＯＡｃ、約ｐＨ８．０を含む。

いくつかの実施形態において、約３～約１０、約３～約９、約３～約８、約３～約７、約３～約６、約３～約５、約３～約４、約４～約１０、約５～約１０、約６～約１０、約７～約１０、約８～約１０、約９～約１０、約３～約８、約４～約７、または約５～約６の材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷する前に、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約３、４、５、６、７、８、９、または１０のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷する前にイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約５材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷する前に、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、イオン交換材料は、組成物を負荷した後、十分な量のポリペプチドが画分に収集されるまで、平衡化緩衝液で洗浄される。いくつかの実施形態において、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５のいずれかの材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷した後にイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約１０材料体積（例えば、カラム体積）の平衡化緩衝液が、組成物を負荷した後にイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約２５ｍＭ～６００ｍＭ、３０ｍＭ～６００ｍＭ、４０ｍＭ～６００ｍＭ、５０ｍＭ～６００ｍＭ、７５ｍＭ～６００ｍＭ、１００ｍＭ～６００ｍＭ、１２５ｍＭ～６００ｍＭ、１５０ｍＭ～６００ｍＭ、１７５ｍＭ～６００ｍＭ、２００ｍＭ～６００ｍＭ、２２５ｍＭ～６００ｍＭ、２５０ｍＭ～６００ｍＭ、２７５ｍＭ～６００ｍＭ、３００ｍＭ～６００ｍＭ、３２５ｍＭ～６００ｍＭ、３５０ｍＭ～６００ｍＭ、３７５ｍＭ～６００ｍＭ、４００ｍＭ～６００ｍＭ、４５０ｍＭ～６００ｍＭ、５００ｍＭ～６００ｍＭ、５５０ｍＭ～６００ｍＭ、２５ｍＭ～５５０ｍＭ、２５ｍＭ～５００ｍＭ、２５ｍＭ～４７５ｍＭ、２５ｍＭ～４５０ｍＭ、２５ｍＭ～４２５ｍＭ、２５ｍＭ～４００ｍＭ、２５ｍＭ～３７５ｍＭ、２５ｍＭ～５５０ｍＭ、２５ｍＭ～３２５ｍＭ、２５ｍＭ～３００ｍＭ、２５ｍＭ～２７５ｍＭ、２５ｍＭ～２５０ｍＭ、２５ｍＭ～２２５ｍＭ、２５ｍＭ～２００ｍＭ、２５ｍＭ～１７５ｍＭ、２５ｍＭ～１５０ｍＭ、２５ｍＭ～１２５ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～９０ｍＭ、２５ｍＭ～８０ｍＭ、２５ｍＭ～７０ｍＭ、２５ｍＭ～６０ｍＭ、２５ｍＭ～５０ｍＭ、２５ｍＭ～４０ｍＭ、または２５ｍＭ～３０ｍＭのいずれかの濃度範囲のＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、または６００ｍＭのいずれかのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む。

いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約ｐＨ２．０～約ｐＨ６．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ６．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ５．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ５．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ４．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ４．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ３．５、約ｐＨ２．０～約ｐＨ３．０、約ｐＨ２．０～約ｐＨ２．５、約ｐＨ２．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ３．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ３．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ４．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ４．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．０～約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．５～約ｐＨ７．０、約ｐＨ６．０～約ｐＨ７．０、または約ｐＨ６．５～約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ２．０、約ｐＨ８．０、約ｐＨ２．５、約ｐＨ３．０、約ｐＨ３．５、約ｐＨ４．０、約ｐＨ４．５、約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、約ｐＨ６．０、約ｐＨ６．５、または約ｐＨ７．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液のｐＨは、約４．０である。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ４．０の約３５０ｍＭのＮａＯＡｃである。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ５．０の約３５０ｍＭのＮａＯＡｃである。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ４．０の約４０ｍＭのＮａＯＡｃである。いくつかの実施形態において、再生緩衝液は、約ｐＨ４．０の約４０ｍＭのＮａＯＡｃである。

いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ～約１ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５Ｍ～約１．５ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＭのＮａＣｌ～約２ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約１．０ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、約１～約１０材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約４材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、保存緩衝液は、約０．０５Ｎ～約０．５ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、約３材料体積の保存緩衝液に保存される。

いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、１０００ｇ／Ｌ以下のクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約２５０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約３００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約４００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約５００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約６００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約７００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約７５０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約８００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、または約９００ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌクロマトグラフィー材料のいずれかである。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ～約９００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約８００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約７５０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約７００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約６００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約５００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約４００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約３００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約２５０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約２００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約１００ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ～約７５ｇ／Ｌ、または約２０ｇ／Ｌ～約５０ｇ／Ｌクロマトグラフィー材料のいずれかである。

いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を、約２倍（２倍）、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、７５倍、８０倍、９０倍、または１００倍のいずれかで超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を、２倍～１００倍、５倍～１００倍、１０倍～１００倍、２０倍～１００倍、２５倍～１００倍、３０倍～１００倍、４０倍～１００倍、５０倍～１００倍、６０倍～１００倍、７０倍～１００倍、７５倍～１００倍、８０倍～１００倍、または９０倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍、２倍～７５倍、２倍～５０倍、２倍～２５倍、２倍～２０倍、２倍～１５倍、２倍～１４倍、２倍～１３倍、２倍～１２倍、２倍～１１倍、２倍～１０倍、２倍～９倍、２倍～８倍、２倍～７倍、２倍～６倍、２倍～５倍、２倍～４倍、または２倍～３倍で超える。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料は再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）第１の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、ｆ）第２の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、第２の再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含み、再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｈ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、ｉ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が、約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｊ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィー材料である。

いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．１Ｎ～約１ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５Ｍ～約１．５ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約１．０ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、消毒緩衝液は、約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態において、約１～約１０材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。いくつかの実施形態において、約４材料体積の消毒緩衝液が、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する。

いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を、約２倍（２倍）、３倍、４倍、５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、７５倍、８０倍、９０倍、または１００倍のいずれかで超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を、２倍～１００倍、５倍～１００倍、１０倍～１００倍、２０倍～１００倍、２５倍～１００倍、３０倍～１００倍、４０倍～１００倍、５０倍～１００倍、６０倍～１００倍、７０倍～１００倍、７５倍～１００倍、８０倍～１００倍、または９０倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍、２倍～７５倍、２倍～５０倍、２倍～２５倍、２倍～２０倍、２倍～１５倍、２倍～１４倍、２倍～１３倍、２倍～１２倍、２倍～１１倍、２倍～１０倍、２倍～９倍、２倍～８倍、２倍～７倍、２倍～６倍、２倍～５倍、２倍～４倍、または２倍～３倍で超える。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７０ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７０ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７０ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を約１０倍超える。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対する陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対する陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を約１０倍超える。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対する陰イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が約ｐＨ８．３で約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を約１０倍超える。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約１０００ｇ／Ｌ以下、９００ｇ／Ｌ以下、８００ｇ／Ｌ以下、７５０ｇ／Ｌ以下、７００ｇ／Ｌ以下、６００ｇ／Ｌ以下、５００ｇ／Ｌ以下、４００ｇ／Ｌ以下、３００ｇ／Ｌ以下、２５０ｇ／Ｌ以下、２００ｇ／Ｌ以下、１００ｇ／Ｌ以下のいずれかのクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７０ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７０ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、約２０ｇ／Ｌ以上、５０ｇ／Ｌ以上、７０ｇ／Ｌ以上、１００ｇ／Ｌ以上、２００ｇ／Ｌ以上、２５０ｇ／Ｌ以上、３００ｇ／Ｌ以上、４００ｇ／Ｌ以上、５００ｇ／Ｌ以上、６００ｇ／Ｌ以上、７００ｇ／Ｌ以上、７５０ｇ／Ｌ以上、８００ｇ／Ｌ以上、９００ｇ／Ｌ以上、１０００ｇ／Ｌ以上、１２００ｇ／Ｌ以上、１４００ｇ／Ｌ以上、１５００ｇ／Ｌ以上、１７５０ｇ／Ｌ以上、または２０００ｇ／Ｌ以上のクロマトグラフィー材料である。

いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を約１０倍超える。

いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対する陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陽イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対する陽イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陽イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を約１０倍超える。

いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対する陰イオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの局面において、本発明は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法を提供し、陰イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法は、ａ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の平衡化緩衝液で平衡化するステップであって、平衡化緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｂ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料に組成物を負荷するステップであって、負荷密度がポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量を超える、ステップ、ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、ｄ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、ｅ）約１０材料体積の再生緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がｐＨ８．０で約２５ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、ステップ、ｆ）約１０材料体積の消毒緩衝液を陰イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、およびｇ）陰イオン交換クロマトグラフィー材料を約４材料体積の保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が、約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を２倍～１００倍超える。いくつかの実施形態において、組成物の負荷密度は、ポリペプチドに対するクロマトグラフィー材料の動的結合容量を約１０倍超える。

本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は、イオン交換材料（例えば、陽イオン交換材料または陰イオン交換材料）である。いくつかの実施形態において、イオン交換材料は、クロマトグラフィーカラム（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムまたは陰イオン交換クロマトグラフィーカラム）内にある。

いくつかの実施形態において、陽イオン交換材料は、負に荷電しており、かつ固相を通るか、または通過した水溶液中の陽イオンとの交換のために遊離陽イオンを有する固相である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、陽イオン交換材料は、膜、モノリス、または樹脂であり得る。いくつかの実施形態において、陽イオン交換材料は、樹脂であり得る。陽イオン交換材料は、例えば、スルホン酸塩、カルボキシル、カルボキシメチルスルホン酸、スルホイソブチル、スルホエチル、カルボキシル、スルホプロピル、スルホニル、スルホキシエチル、またはオルトリン酸塩であるが、これらに限定されないカルボン酸官能基またはスルホン酸官能基を含み得る。上述のいくつかの実施形態において、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー樹脂である。上述のいくつかの実施形態では、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー膜である。本発明のいくつかの実施形態では、クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料ではない。いくつかの実施形態において、陽イオン交換クロマトグラフィー材料は、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において使用される。

本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、イオン交換材料は、従来のクロマトグラフィー材料または対流クロマトグラフィー材料を利用し得る。従来のクロマトグラフィー材料としては、例えば、灌流材料（例えば、ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）樹脂）および拡散材料（例えば、架橋アガロース樹脂）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ポリ（スチレン－ジビニルベンゼン）樹脂は、Ｐｏｒｏｓ（商標）樹脂であり得る。いくつかの実施形態において、架橋アガロース樹脂は、スルホプロピル－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦａｓｔＦｌｏｗ（「ＳＰＳＦＦ」）樹脂であり得る。対流クロマトグラフィー材料は、膜（例えば、ポリエーテルスルホン）またはモノリス材料（例えば、架橋ポリマー）であり得る。ポリエーテルスルホン膜は、Ｍｕｓｔａｎｇであり得る。架橋ポリマーモノリス材料は、架橋ポリ（グリシジルメタクリレート－コ－エチレンジメタクリレート）であり得る。

陽イオン交換材料の例は、当該技術分野で公知であり、それらとしては、Ｍｕｓｔａｎｇ（登録商標）Ｓ、Ｓａｒｔｏｂｉｎｄ（登録商標）Ｓ、ＳＯ３Ｍｏｎｏｌｉｔｈ、ＳＣｅｒａｍｉｃＨｙｐｅｒＤ（商標）、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＸＳ、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＳ５０、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＳ２０、ＳＰＳＦＦ、ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＸＬ（ＳＰＸＬ）、ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦａｓｔＦｌｏｗ、Ｃａｐｔｏ（商標）Ｓ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（登録商標）ＳｅＨｉＣａｐ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（登録商標）ＳＯ３、またはＦｒａｃｔｏｇｅｌ（登録商標）ＣＯＯが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、陽イオン交換材料は、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＳ５０である。いくつかの実施形態において、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＳ樹脂は、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＳ５０μｍまたはＰｏｒｏｓ（商標）ＨＳ２０μｍ粒子であり得る。

本明細書のいくつかの実施形態において、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は、正に荷電しており、かつ固相を通るか、または通過した水溶液中の陰イオンとの交換のために遊離陰イオンを有する固相である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、陰イオン交換材料は、膜、モノリス、または樹脂であり得る。一実施形態において、陰イオン交換材料は、樹脂であり得る。いくつかの実施形態において、陰イオン交換材料は、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、もしくは第四級アンモニウムイオン官能基、ポリアミン官能基、またはジエチルアミノエチル官能基を含み得る。上述のいくつかの実施形態において、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムである。上述のいくつかの実施形態において、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー膜である。陰イオン交換材料の例は、当該技術分野で公知であり、それらとしては、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＨＱ５０、Ｐｏｒｏｓ（商標）ＰＩ５０、Ｐｏｒｏｓ（商標）Ｄ、Ｍｕｓｔａｎｇ（登録商標）Ｑ、ＱＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦ、およびＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モードイオン交換クロマトグラフィー材料である。混合モードクロマトグラフィー材料は、以下の機能、陰イオン交換、陽イオン交換、水素結合、および疎水性相互作用の１つ以上が可能な官能基を含む。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陽イオン交換クロマトグラフィー材料である。陽イオン交換混合モード材料の例には、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）ＩｍｐＲｅｓ、Ｎｕｖｉａ（商標）ｃＰｒｉｍｅ（商標）、およびＴｏｙｏｐｅａｒｌＭＸＴｒｐ－６５０Ｍが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー材料である。陰イオン交換混合モード材料の例としては、ＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）およびＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）ＩｍｐＲｅｓが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、複数のポリペプチド製品を精製するために使用される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィー材料は、複数の抗体産物を精製するために使用される。いくつかの実施形態において、洗浄方法後のキャリーオーバーは、０．２５ｍｇ／ｍＬ未満総タンパク質、１ｐｐｍ未満ＩｇＧ断片、１ｐｐｍ未満ＩｇＧ凝集体、１ｐｐｍ未満浸出プロテインＡ、１μｇ／ｍＬ未満ＣＺＥＬＩＦ、１ｐｐｍ未満ＣＨＯＰ、および１ｐｇ／ｍＬ未満ＣＨＯＤＮＡの１つまたは複数を含む。

いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドの精製において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされる。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィーは、抗体の精製において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされる。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされて使用される。いくつかの実施形態において、イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされて使用される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷イオン交換クロマトグラフィーの前に実行される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷イオン交換クロマトグラフィーの後に実行される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷イオン交換クロマトグラフィーの前に実行され、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷イオン交換クロマトグラフィーの後に実行される。いくつかの実施形態において、過負荷イオン交換クロマトグラフィーは、混合モードクロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、親和性クロマトグラフィー、およびサイズ排除クロマトグラフィーからなる群から選択される１つまたは複数のクロマトグラフィー手順と組み合わされる。

いくつかの実施形態において、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドの精製において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされる。いくつかの実施形態において、陽イオン交換クロマトグラフィーは、抗体の精製において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされる。いくつかの実施形態において、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされて使用される。いくつかの実施形態において、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順と組み合わされて使用される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィーの前に実行される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィーの後に実行される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィーの前に実行され、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィーの後に実行される。いくつかの実施形態において、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィーは、混合モードクロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびさらなる陽イオン交換クロマトグラフィーからなる群から選択される１つまたは複数のクロマトグラフィー手順と組み合わされる。

モノクローナル抗体の２０００Ｌ精製プロセスの例は、抗体を産生するＣＨＯ細胞を回収してフィードストリームを生成することを含む。フィードストリームを結合および溶出モードで３０ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度でプロテインＡ親和性クロマトグラフィー（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標））に供し、プロテインＡ溶出液を結合および溶出モードで８５ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で陽イオン交換クロマトグラフィー（例えば、ＰＯＲＯＳ（商標）ＸＳ）に供し、陽イオン交換溶出液をフロースルーモードで、１００ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー（例えば、Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦ）に供し、そして、混合モード陰イオン交換画分を限外濾過／ダイアフィルトレーション（例えば、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）３）に供し、最終濃度５０ｇ／Ｌで抗体を製剤化する。

モノクローナル抗体の２０００Ｌ精製プロセスの他の例は、抗体を産生するＣＨＯ細胞を回収してフィードストリームを生成することを含む。フィードストリームを結合および溶出モードで３０ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度でプロテインＡ親和性クロマトグラフィー（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標））に供し、プロテインＡ溶出液を結合および溶出モードで４１ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で陽イオン交換クロマトグラフィー（例えば、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＳ）に供し、陽イオン交換溶出液をフロースルーモードで、１００ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー（例えば、Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦ）に供し、混合モード陰イオン交換画分を１．２～２．６ｋｇ／ｍ^２でフィルタ（例えば、１：１Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ（登録商標）ＰｒｏＳｈｉｅｌｄ／Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ（登録商標）Ｐｒｏ）にかけてウイルスを除去し、そして、フィードストリームを限外濾過／ダイアフィルトレーションに供し、最終濃度５０ｇ／Ｌで抗体を製剤化する。

モノクローナル抗体の１２０００Ｌ製造規模の精製プロセスの例は、抗体を産生するＣＨＯ細胞を回収してフィードストリームを生成することを含む。フィードストリームを界面活性剤ウイルス不活化ステップ（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ－ＣＧ１１０）に供し、フィードストリームを結合および溶出モードで４０ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度でプロテインＡ親和性クロマトグラフィー（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標））に供し、プロテインＡ溶出液を結合および溶出モードで１０００ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で陽イオン交換クロマトグラフィー（例えば、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＳ）に供し、陽イオン交換溶出液をフロースルーモードで、３５０ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー（例えば、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ）に供し、そして、混合モード陰イオン交換画分を限外濾過／ダイアフィルトレーション（例えば、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）３）に供し、最終濃度６０ｇ／Ｌで抗体を製剤化する。

モノクローナル抗体の１２０００Ｌ製造規模の精製プロセスの他の例は、抗体を産生するＣＨＯ細胞を回収してフィードストリームを生成することを含む。フィードストリームを結合および溶出モードで３５ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度でプロテインＡ親和性クロマトグラフィー（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標））に供し、プロテインＡ溶出液を過負荷モードで８００ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で陽イオン交換クロマトグラフィー（例えば、ＰＯＲＯＳ（商標）ＨＳ）に供し、陽イオン交換溶出液をフロースルーモードで、２５０ｇ／Ｌ樹脂以下の負荷密度で混合モード陰イオン交換クロマトグラフィー（例えば、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ）に供し、混合モード陰イオン交換画分を９～１０ｋｇ／ｍ^２でフィルタ（例えば、１：１Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ（登録商標）ＰｒｏＳｈｉｅｌｄ／Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ（登録商標）Ｐｒｏ）にかけてウイルスを除去し、そして、フィードストリームを限外濾過／ダイアフィルトレーションに供し、最終濃度１００ｇ／Ｌで抗体を製剤化する。

本発明のいくつかの局面において、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィーは、親和性クロマトグラフィー材料と組み合わせて使用される。親和性クロマトグラフィー材料の例としては、プロテインＡおよび／またはプロテインＧで誘導体化されたクロマトグラフィー材料が挙げられるが、これらに限定されない。親和性クロマトグラフィー材料の例としては、Ｐｒｏｓｅｐ（登録商標）－ＶＡ、Ｐｒｏｓｅｐ（登録商標）－ＶＡＵｌｔｒａＰｌｕｓ、プロテインＡｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ファストフロー、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）プロテインＡ、およびＭＡｂＳｅｌｅｃｔ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）およびＭＡｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）ＬＸ、プロテインＬ、ＦｃＸＬ、プロテインＸＬ、カッパクロマトグラフィー、およびカッパＸＬクロマトグラフィーが挙げられるが、これらに限定されない。上述のいくつかの実施形態において、親和性クロマトグラフィー材料は、親和性クロマトグラフィーカラムである。上述のいくつかの実施形態において、親和性クロマトグラフィー材料は、親和性クロマトグラフィー膜である。

本発明のいくつかの局面において、過負荷イオン交換クロマトグラフィー（例えば、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィー）は、混合モードクロマトグラフィー材料と組み合わせて使用される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、クロマトグラフィー材料は、以下の機能、陰イオン交換、陽イオン交換、水素結合、および疎水性相互作用の１つ以上が可能な官能基を含む混合モード材料である。いくつかの実施形態において、混合モード材料は、陰イオン交換および疎水性相互作用が可能な官能基を含む。混合モード材料は、リガンドとしてＮ－ベンジル－Ｎ－メチルエタノールアミン、４－メルカプト－エチル－ピリジン、ヘキシルアミン、またはフェニルプロピルアミンを含むか、または架橋ポリアリルアミンを含み得る。混合モード材料の例としては、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ樹脂、ＱＭＡ樹脂、Ｃａｐｔｏ（商標）ＭＭＣ樹脂、ＭＥＰＨｙｐｅｒＣｅｌ（商標）樹脂、ＨＥＡＨｙｐｅｒＣｅｌ（商標）樹脂、ＰＰＡＨｙｐｅｒＣｅｌ（商標）樹脂、またはＣｈｒｏｍａＳｏｒｂ（商標）膜またはＳａｒｔｏｂｉｎｄ（登録商標）ＳＴＩＣが挙げられる。いくつかの実施形態において、混合モード材料は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ樹脂である。上述のいくつかの実施形態において、混合モード材料は混合モードクロマトグラフィーカラムである。上述のいくつかの実施形態において、混合モード材料は混合モード膜である。

本発明のいくつかの局面において、過負荷イオン交換クロマトグラフィー（例えば、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィー）は、陰イオン交換クロマトグラフィー材料と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態において、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は、正に荷電しており、かつ固相を通るか、または通過した水溶液中の陰イオンとの交換のために遊離陰イオンを有する固相である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、陰イオン交換材料は、膜、モノリス、または樹脂であり得る。一実施形態において、陰イオン交換材料は、樹脂であり得る。いくつかの実施形態において、陰イオン交換材料は、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、もしくは第四級アンモニウムイオン官能基、ポリアミン官能基、またはジエチルアミノエチル官能基を含み得る。上述のいくつかの実施形態において、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムである。上述のいくつかの実施形態において、陰イオン交換クロマトグラフィー材料は、陰イオン交換クロマトグラフィー膜である。

本発明のいくつかの局面において、過負荷イオン交換クロマトグラフィー（例えば、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィー）は、疎水性相互作用クロマトグラフィー材料と組み合わせて使用される。疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）は、疎水性に応じて生体分子を分離する液体クロマトグラフィー技術である。ＨＩＣクロマトグラフィー材料の例としては、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）ヘキシル６５０、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）ブチル６５０、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）フェニル６５０、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）エーテル６５０、Ｓｏｕｒｃｅ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｈｉ－Ｔｒａｐ、Ｏｃｔｙｌｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）、Ｐｈｅｎｙｌｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。上述のいくつかの実施形態において、ＨＩＣクロマトグラフィー材料は、ＨＩＣクロマトグラフィーカラムである。上述のいくつかの実施形態では、ＨＩＣクロマトグラフィー材料は、ＨＩＣクロマトグラフィー膜である。

本発明のいくつかの局面において、過負荷イオン交換クロマトグラフィー（例えば、過負荷陽イオン交換クロマトグラフィー）は、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）クロマトグラフィー材料と組み合わせて使用される。ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー材料の例としては、ＨＡＵｌｔｒｏｇｅｌ（登録商標）、およびＣＨＴヒドロキシアパタイトが挙げられるが、これらに限定されない。上述のいくつかの実施形態において、ＨＡクロマトグラフィー材料は、ＨＡクロマトグラフィーカラムである。上述のいくつかの実施形態において、ＨＡクロマトグラフィー材料は、ＨＡクロマトグラフィー膜である。

いくつかの実施形態において、過負荷イオン交換クロマトグラフィーは、カラム内で実行される（すなわち、カラムクロマトグラフィー）。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他のクロマトグラフィー手順は、カラム内で実行される。

いくつかの実施形態において、本発明は、アルカリ安定クロマトグラフィー材料、例えばアルカリ安定クロマトグラフィーカラムを洗浄または再生するための方法を提供する。

本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、流量は、約５０材料体積／時間、約４０材料体積／時間、または約３０材料体積／時間いずれか未満である。流量は、約５材料体積／時間～約５０材料体積／時間、約１０材料体積／時間～約４０材料体積／時間、または約１８材料体積／時間～約３６材料体積／時間のいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、流量は、約９材料体積／時、約１８材料体積／時間、約２５材料体積／時間、約３０材料体積／時間、約３６材料体積／時間、または約４０材料体積／時間のいずれかである。

いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は、クロマトグラフィーカラム内にある。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、流量は、約５０カラム体積（ＣＶ）／時間、４０ＣＶ／時間、３０ＣＶ／時間、２０ＣＶ／時間、または１５ＣＶ／時間のいずれか未満である。流量は、約５ＣＶ／時間～約５０ＣＶ／時間、約１０ＣＶ／時間～約４０ＣＶ／時間、または約１５ＣＶ／時間～約２０ＣＶ／時間のいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、流量は、約１０ＣＶ／時間、約１５ＣＶ／時間、約２０ＣＶ／時間、約２５ＣＶ／時間、約３０ＣＶ／時間、または約４０ＣＶ／時間のいずれかである。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、流量は、約１００ｃｍ／時間、７５ｃｍ／時間、または５０ｃｍ／時間のいずれか未満である。流量は、約２５ｃｍ／時間～約１５０ｃｍ／時間、約２５ｃｍ／時間～約１００ｃｍ／時間、約５０ｃｍ／時間～約１００ｃｍ／時間、または約６５ｃｍ／時間～約８５ｃｍ／時間のうちのいずれかであり得る。

床高さとは、使用されるクロマトグラフィー材料の高さである。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、床高さは、約３ｃｍ、約１０ｃｍ、または約１５ｃｍのいずれかよりも大きい。床高さは、約３ｃｍ～約３５ｃｍ、約５ｃｍ～約１５ｃｍ、約３ｃｍ～約１０ｃｍ、または約５ｃｍ～約８ｃｍのいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、床高さは、約３ｃｍ、約５ｃｍ、約１０ｃｍ、約１５ｃｍ、約２０ｃｍ、約２５ｃｍ、または約３０ｃｍのいずれかである。いくつかの実施形態において、床高さは、負荷中のポリペプチドまたは混入物の量に基づいて決定される。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は、カラム内で、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において使用される。いくつかの実施形態において、製造規模のクロマトグラフィー材料は、約１０ｃｍ、約１５ｃｍ、約２０ｃｍ、約２５ｃｍまたは約３０ｃｍのいずれかの床高さを有する。

床直径は、使用されるクロマトグラフィー材料の直径である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、床直径は、約８０ｃｍ、約１００ｃｍ、または約１２０ｃｍのいずれかよりも大きい。いくつかの実施形態において、床直径は、約５０ｃｍ、約６０ｃｍ、約７０ｃｍ、約８０ｃｍ、約９０ｃｍ、約１００ｃｍ、約１１０ｃｍ、約１２０ｃｍ、約１３０ｃｍ、約１４０ｃｍ、約１５０ｃｍ、約１６０ｃｍ、約１７０ｃｍ、約１８０ｃｍ、約１９０、または約２００ｃｍのいずれかである。いくつかの実施形態において、床直径は、負荷中のポリペプチドまたは混入物の量に基づいて決定される。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は、カラム内で、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において使用される。いくつかの実施形態において、製造規模のクロマトグラフィー材料は、約５０ｃｍ、約６０ｃｍ、約７０ｃｍ、約８０ｃｍ、約９０ｃｍ、約１００ｃｍ、約１１０ｃｍ、約１２０ｃｍ、約１３０ｃｍ、約１４０ｃｍ、約１５０ｃｍ、約１６０ｃｍ、約１７０ｃｍ、約１８０ｃｍ、約１９０、または約２００ｃｍのいずれかの床直径を有していた。

いくつかの実施形態において、クロマトグラフィーは、約１ｍＬ、約２ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、約５ｍＬ、約６ｍＬ、約７ｍＬ、約８ｍＬ、約９ｍＬ、約１０ｍＬ、約１５ｍＬ、約２０ｍＬ、約２５ｍＬ、約３０ｍＬ、約４０ｍＬ、約５０ｍＬ、約７５ｍＬ、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、約１０Ｌ、約２５Ｌ、約５０Ｌ、約１００Ｌ、約２００Ｌ、約３００Ｌ、約４００Ｌ、約５００Ｌ、約６００Ｌ、約７００Ｌ、約８００Ｌ、約９００Ｌ、または約１０００Ｌを超える容量のカラムまたは容器内にある。いくつかの実施形態において、容器は、１４ｃｍの床高さおよび８０ｃｍの床容積を有し、例えば大規模なプロテインＡカラムである。いくつかの実施形態において、容器は、１９ｃｍの床高さおよび１００ｃｍの床容積を有し、例えば大規模な陰イオン交換カラムである。いくつかの実施形態において、容器は、３０ｃｍの床高さおよび１２０ｃｍの床容積を有し、例えば大規模なイオン交換カラムである。

本明細書で使用される、負荷物は、クロマトグラフィー材料に負荷される組成物である。いくつかの実施形態において、負荷物は、異なるポリペプチドを単離するために以前に使用されたクロマトグラフィー材料に負荷されるポリペプチドである。負荷緩衝液は、目的の産物を含む組成物をクロマトグラフィー材料に負荷するために使用される緩衝液である。クロマトグラフィー材料は、精製される組成物の負荷前に平衡化緩衝液で平衡化され得る。いくつかの例において、洗浄緩衝液は、組成物をクロマトグラフィー材料に負荷した後、かつ目的のポリペプチドを固相から溶出させる前に使用される。いくつかの実施形態において、洗浄緩衝液は、負荷緩衝液と同じである。いくつかの実施形態において、目的の産物のいくつか、例えば、ポリペプチドは、洗浄緩衝液（例えば、過負荷モード）によってクロマトグラフィー材料から除去し得る。

本明細書で使用される溶出は、産物、例えばポリペプチドのクロマトグラフィー材料からの除去である。本発明のいくつかの実施形態において、溶出は、溶出手順が、最後の洗浄手順の後にタンパク質が負荷されなかったクロマトグラフィー材料に適用される「モック溶出」である。本発明のいくつかの実施形態において、モック溶出手順は、本明細書に記載の洗浄手順のいずれか１つにしたがってクロマトグラフィー材料に適用される。いくつかの実施形態において、モック溶出は、実際の産生ラン中にキャリーオーバー材料（例えば、混入物）が存在する可能性があるかどうかを決定するための試みにおいて、材料に適用されるタンパク質を溶出するために使用される溶出を模倣する。モック溶出は、洗浄手順の有効性を評価する手段として使用し得る。

溶出緩衝液は、クロマトグラフィー材料から目的とするポリペプチドまたは他の産物を溶出させるために使用される緩衝液である。多くの場合、溶出緩衝液は、負荷緩衝液とは異なる物理的特徴を有する。例えば、溶出緩衝液は、負荷緩衝液とは異なる伝導度または負荷緩衝液とは異なるｐＨを有し得る。いくつかの実施形態において、溶出緩衝液は、負荷緩衝液よりも低い伝導度を有する。いくつかの実施形態において、溶出緩衝液は、負荷緩衝液よりも高い伝導度を有する。いくつかの実施形態において、溶出緩衝液は、負荷緩衝液よりも低いｐＨを有する。いくつかの実施形態において、溶出緩衝液は、負荷緩衝液よりも高いｐＨを有する。いくつかの実施形態では、溶出緩衝液は、負荷緩衝液とは異なる伝導度および異なるｐＨを有する。溶出緩衝液は、より高いまたはより低い伝導度、およびより高いまたはより低いｐＨの任意の組み合わせを有し得る。

伝導度とは、２つの電極間に電流を伝導する水溶液の能力を指す。溶液中で、電流は、イオン輸送により流れる。したがって、水溶液中に存在するイオンの量が増加すると、溶液は、より高い伝導度を有するようになる。伝導度の尺度の基本単位は、ジーメンス（Ｓｉｅｍｅｎ）（またはモー（ｍｈｏ））であり、ｍｈｏ（ｍｓ／ｃｍ）であり、種々のモデルのＯｒｉｏｎ伝導度計等の伝導度計を使用して測定し得る。電解質伝導度は溶液中のイオンの電流を搬送する能力であるため、溶液の伝導度は、その中のイオンの濃度を変化させることによって変更し得る。例えば、溶液中の緩衝剤の濃度および／または塩（例えば、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、または塩化カリウム）の濃度を変更して、所望の伝導度を達成してもよい。好ましくは、種々の緩衝液の塩濃度は、所望の伝導度を達成するために改変される。

混入物
本発明は、ポリペプチドの大規模精製、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の産生において使用するためのクロマトグラフィー材料の再利用のための方法を提供する。本方法は、複数のポリペプチド製品のためのクロマトグラフィー材料の複数の使用を提供する。例えば、本発明の方法を使用して、第１の抗体をクロマトグラフィー材料上で工業規模で精製し、続いて本明細書に記載のクロマトグラフィー材料を洗浄／再生する方法、続いて第２の抗体産物の工業規模の精製を行うことができる。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、クロマトグラフィー材料を使用して精製された以前の産物の「キャリーオーバー」を低減するために使用される。いくつかの実施形態において、キャリーオーバー混入物としては、抗体全体、ＩｇＧ断片、Ｆｃ、Ｆｃ断片、および抗体凝集体が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書に記載する任意の方法のいくつかの実施形態において、少なくとも１つの混入物は、宿主細胞物質、例えばＣＨＯＰ）、浸出プロテインＡ、核酸；所望のポリペプチドのバリアント、断片、凝集体または誘導体、他のポリペプチド、エンドトキシン、ウイルス混入物、細胞培養培地成分、カルボキシペプチダーゼＢ、ゲンタマイシン等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例においては、混入物は、例えば、細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、昆虫細胞、原核細胞、真核細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、真菌細胞からの宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）であり得るが、これらに限定されない。

浸出プロテインＡは、それが結合している固相から分離または洗浄されたプロテインＡである。例えば、浸出プロテインＡは、プロテインＡクロマトグラフィー材料から浸出し得る。プロテインＡの量は、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定し得る。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、浸出プロテインＡの量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％減少する。浸出プロテインＡの量は、約１０％～約９９％、約３０％～約９５％、約３０％～約９９％、約５０％～約９５％、約５０％～約９９％、約７５％～約９９％または約８５％～約９９％いずれかで減少し得る。いくつかの実施形態において、浸出プロテインＡの量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％のいずれかで減少する。いくつかの実施形態において、減少は、精製ステップ（複数可）から回収された組成物中の浸出プロテインＡの量を、精製ステップ（複数可）前の組成物中の浸出プロテインＡの量と比較することによって決定される。

宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）は、ポリペプチドが産生された細胞由来のタンパク質である。例えば、ＣＨＯＰは宿主細胞由来のタンパク質、すなわちチャイニーズハムスター卵巣タンパク質である。ＣＨＯＰの量は、酵素結合免疫吸着検定法（「ＥＬＩＳＡ」）またはメソスケールディスカバリー（「ＭＳＯ」）によって測定し得る。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、溶出液中のＨＣＰ（例えば、ＣＨＯＰ）の量は、モック溶出において最小である。いくつかの実施形態において、モック溶出からの溶出液中の宿主細胞タンパク質のレベルは、洗浄方法がある場合とない場合、または洗浄方法の前後で比較される。

宿主細胞ＤＮＡ等のＤＮＡの測定方法は、当該技術分野で公知であり、実施例のセクションに記載される。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、ＤＮＡの量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％減少する。ＤＮＡの量は、約１０％～約９９％、約３０％～約９５％、約３０％～約９９％、約５０％～約９５％、約５０％～約９９％、約７５％～約９９％または約８５％～約９９％のいずれかで減少し得る。ＤＮＡの量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９９％のいずれかで減少し得る。いくつかの実施形態において、減少は、精製ステップ（複数可）から回収された組成物中のＤＮＡの量を、精製ステップ（複数可）前の組成物中のＤＮＡの量と比較することによって決定される。

断片ポリペプチドは、低分子量（ＬＭＷ）タンパク質であり得る。いくつかの実施形態において、断片化されたポリペプチドは、目的のポリペプチドの断片である。ＬＭＷタンパク質の例としては、目的の抗体のＦａｂ（断片抗原結合）、Ｆｃ（断片、結晶化可能）領域、または両方または任意のランダムに断片化された部分の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。断片化タンパク質（例えば、ＬＭＷタンパク質）の測定方法は、当該技術分野で公知であり、実施例のセクションに記載されている。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、ＬＭＷタンパク質の量は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％のいずれかよりも大きく減少する。ＬＭＷタンパク質の量は、約１０％～約９９％、約３０％～約９５％、約３０％～約９９％、約５０％～約９５％、約５０％～約９９％、約７５％～約９９％、または約８５％～９９％のいずれかで減少し得る。ＬＭＷタンパク質の量は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または９５％のいずれかで減少し得る。いくつかの実施形態において、減少は、精製ステップ（複数可）から回収された組成物中の断片化されたタンパク質（例えば、ＬＭＷタンパク質）の量を、精製ステップ（複数可）前の組成物中の断片化されたタンパク質（例えば、ＬＭＷタンパク質）の量と比較することによって決定される。

凝集ポリペプチドは、高分子量（ＨＭＷ）タンパク質であり得る。いくつかの実施形態において、凝集ポリペプチドは、目的のポリペプチドの多量体である。ＨＭＷタンパク質は、目的のポリペプチドの二量体、最大８倍の単量体、またはそれ以上であり得る。凝集タンパク質（例えば、ＨＭＷタンパク質）を測定する方法は当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態において、モック溶出におけるＨＭＷのレベルは最小であり、例えば、約５ｐｐｍ未満、約４ｐｐｍ未満、約３ｐｐｍ未満、約２ｐｐｍ未満、または約１ｐｐｍ未満である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、凝集タンパク質の量は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％のいずれかよりも大きく減少する。凝集タンパク質の量は、約１０％～約９９％、約３０％～約９５％、約３０％～約９９％、約５０％～約９５％、約５０％～約９９％、約７５％～約９９％、または約８５％～９９％のいずれかで減少し得る。凝集タンパク質の量は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または９５％のいずれかで減少し得る。いくつかの実施形態において、減少は、精製ステップ（複数可）から回収された組成物中の凝集タンパク質（例えば、ＨＭＷタンパク質）の量を、精製ステップ（複数可）前の組成物中の凝集タンパク質（例えば、ＨＭＷタンパク質）の量と比較することによって決定される。

細胞培養培地成分とは、細胞培養培地中に存在する成分を指す。細胞培養培地は、細胞の回収時の細胞培養培地であり得る。いくつかの実施形態において、細胞培養培地成分は、ゲンタマイシンである。ゲンタマイシンの量は、ＥＬＩＳＡによって測定し得る。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、細胞培養培地成分の量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％よりも大きく減少する。細胞培養培地成分の量は、約１０％～約９９％、約３０％～約９５％、約３０％～約９９％、約５０％～約９５％、約５０％～約９９％、約７５％～約９９％、または約８５％～９９％のいずれかで減少し得る。いくつかの実施形態において、細胞培養培地成分の量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％のいずれかで減少する。いくつかの実施形態において、減少は、精製ステップ（複数可）から回収された組成物中の細胞培養培地成分の量を、精製ステップ（複数可）前の組成物中の細胞培養培地成分の量と比較することによって決定される。

混入物を検出する方法
本発明は、再利用可能なクロマトグラフィー材料の洗浄の有効性を評価するための方法を提供する。例えば、ポリペプチドが以前に負荷され、少なくとも１回溶出されたクロマトグラフィー材料は、上記の本発明の方法の１つによって洗浄される。次に、洗浄手順後に追加のポリペプチドが材料に負荷されていない材料に対してモック溶出が実行される。モック溶出は、以前に材料に負荷されたポリペプチドで使用された溶出手順にしたがっても、または溶出手順は、洗浄手順の後に精製されるポリペプチドの溶出手順にしたがってもよい。いくつかの実施形態において、モック溶出の前に、モック負荷が材料上で実行される。モック負荷は、ポリペプチドが負荷物に含まれていないことを除いて、同じ手順を使用してポリペプチドを材料に負荷する。いくつかの実施形態において、モック溶出からの溶出液は、１つまたは複数の画分に収集される。いくつかの実施形態において、モック溶出からの溶出液は、単一の画分に収集される。いくつかの実施形態において、溶出液、または溶出液のサンプルは、クロマトグラフィー材料の以前の負荷からのキャリーオーバーポリペプチド、ＩｇＧ断片、浸出プロテインＡ、ＣＨＯＰおよびＣＨＯＤＮＡを含む混入物質について分析される。

ポリペプチドの定量化
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）等のポリペプチドの濃度は、ＵＶ－可視分光光度計（８４５３モデルＧ１１０３Ａ；ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＳａｎｔａＣｌａｒａ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）またはＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）１０００モデルＮＤ－１０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して、２８０および３２０ｎｍでの吸光度を介して決定し得る。再利用可能なクロマトグラフィー材料に以前に負荷されたポリペプチドまたは本発明の方法によって洗浄された材料に負荷されたポリペプチド（すなわち、不純物）以外の種は、濃度が低すぎて、ＵＶ吸収に感知できるほどの影響を及ぼさない可能性がある。必要に応じて、サンプルを０．１～１．０吸光度単位の範囲の適切な非干渉希釈液で希釈し得る。サンプル準備およびＵＶ測定は重複して実行され、平均値が記録される。ＭＡｂ吸収係数は、１．４２～１．６４５／ｍｇ・ｍｌ・ｃｍの範囲であり得る。

総タンパク質は、キャピラリーゾーン電気泳動／レーザー誘起蛍光検出アッセイによって決定し得る。
ＩｇＧ検出

インタクトなヒトＩｇＧおよびヒトＩｇＧ断片は、インタクトなヒトＩｇＧ特異的またはＩｇＧ断片特異的ＥＬＩＳＡを使用して検出し得る。ヒトＦｃは、ヒトＦｃ特異的ＥＬＩＳＡを使用して検出し得る。
ＩｇＧ凝集体

ＩｇＧ凝集体は、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して検出し得る。ＩｇＧ凝集体は典型的には、インタクトなＩｇＧよりも大きい。
ＣＨＯ宿主細胞タンパク質（ＣＨＯＰ）定量化

ＥＬＩＳＡを使用して、ＣＨＯＰと呼ばれるＣＨＯ宿主細胞タンパク質のレベルを定量化し得る。抗ＣＨＯＰ抗体はマイクロタイタープレートウェルに固定化されている。ＣＨＯＰ、標準、および対照を含むサンプルの希釈液をウェル内でインキュベートした後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートした抗ＣＨＯＰ抗体と共にインキュベートする。ＨＲＰ酵素活性はｏ－フェニレンジアミンで検出でき、ＣＨＯＰはマイクロタイタープレートリーダーで４９０ｎｍの吸光度を読み取ることで定量化される。サンドイッチＥＬＩＳＡの原理に基づいて、ペルオキシダーゼの濃度はＣＨＯＰ濃度に対応する。ＥＬＩＳＡのアッセイ範囲は典型的には５～３２０ｎｇ／ｍｌであり、アッセイ内変動は１０％未満である。ＣＨＯＰ値は、ｎｇ／ｍｌの単位で報告され得る。あるいは、ＣＨＯＰ値をポリペプチド濃度で割って、結果をＰＰＭで報告してもよい（１００万分の１、例えば、ＣＨＯＰのｎｇ／ポリペプチドのｍｇ）。ＣＨＯＰＥＬＩＳＡは、サンプル中の総ＣＨＯＰレベルを定量化するために使用し得るが、個々のタンパク質の濃度を定量化するものではない。

ＣＨＯＤＮＡの定量化
産物サンプル中のＣＨＯＤＮＡは、リアルタイムＰＣＲ（ＴａｑＭａｎＰＣＲ）を使用して定量化し得る。サンプルおよび対照からのＤＮＡは、ＱｉａｇｅｎのＶｉｒｕｓＢｉｏｒｏｂｏｔキットを使用して最初に抽出し得る。抽出されたサンプル、対照、および標準ＤＮＡを、ＡＢＩの配列検出システムを用いて、９６ウェルプレートでＰＣＲプライマーとプローブを使用したＴａｑＭａｎリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供する。プライマーは、Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓｇｒｉｓｅｕｓゲノムの反復ＤＮＡ配列の１１０塩基対セグメントによって決定される。プローブは、５’末端において蛍光レポーター色素、３’末端においてクエンチャー色素で標識されている。プローブがインタクトの場合、レポーターの発光スペクトルはクエンチャーによって抑制される。ポリメラーゼの５’ヌクレアーゼ活性はプローブを加水分解してレポートを放出し、その結果、蛍光発光が増加する。配列検出器は、ＤＮＡ増幅中に連続的に測定された蛍光発光の増加に直接比例して増幅産物を定量化する。ＤＮＡが閾値（ＣＴ）を超えて増幅したサイクル数を、検量線に対して計算する。１ｐｇ／ｍＬ～１０，０００ｐｇ／ｍＬの範囲の検量線を作成し、これは、サンプル中のＤＮＡの定量化に使用する。

浸出プロテインＡ定量化
プロテインＡプール中の浸出プロテインＡのレベルは、サンドイッチプロテインＡ－ＥＬＩＳＡによって決定し得る。ニワトリ抗黄色ブドウ球菌プロテインＡ抗体はマイクロタイタープレートウェルに固定化されている。サンプル処理手順は、サンドイッチＥＬＩＳＡでサンプルを実行する前に、前処理ステップとしてマイクロ波支援加熱を使用したプロテインＡ／ＩｇＧ複合体のサンプル希釈および解離を含み得る。プロテインＡは、サンプルに存在する場合、コーティングされた抗体に結合し得る。結合したプロテインＡは、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした抗プロテイン抗体を使用して検出される。西洋ワサビペルオキシダーゼの酵素活性は、比色シグナルを生成する２成分ＴＭＢ基質溶液により定量化される。

ポリペプチド
本発明の方法は、複数のポリペプチドの精製に使用されるクロマトグラフィー材料を洗浄するために使用し得る。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は大規模、例えば、抗体またはその断片等のポリペプチドの製造規模の生産において使用される。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー材料は、第１の抗体等の第１のポリペプチドの精製に使用され、次いで、材料は、本発明の方法によって洗浄され、次いで、クロマトグラフィー材料は、第２の抗体等の第２のポリペプチドを精製するために使用し得る。いくつかの実施形態において、洗浄は、第２の精製されたポリペプチドを含む調製物が第１のポリペプチドを本質的に含まない程度に効果的である。いくつかの実施形態において、第２の精製されたポリペプチド（例えば、第２の抗体）を含む調製物は、１ｐｐｍ未満の第１のポリペプチド（例えば、第１の抗体）を含む。いくつかの実施形態において、第２の精製されたポリペプチドは、１ｐｐｍ、２ｐｐｍ、３ｐｐｍ、４ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、３０ｐｐｍ、４０ｐｐｍ、５０ｐｐｍまたは１００ｐｐｍのいずれか１つ未満の第１のポリペプチドを含む。

いくつかの実施形態において、本発明の方法は、治療用ポリペプチドを精製するために使用されるクロマトグラフィー材料を再利用するために使用される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、アゴニストである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、エピトープタグ付加されている。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、生物学的および／または免疫学的活性を保持する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、補体依存性細胞障害性を開始する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、抗体または免疫アドヘシンである。

いくつかの実施形態において、ポリペプチド、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドは、約５，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約７５，０００ダルトン、約１００，０００ダルトン、約１２５，０００ダルトン、または約１５０，０００ダルトンのいずれかよりも大きい分子量を有する。ポリペプチドは、約５０，０００ダルトン～約２００，０００ダルトンまたは約１００，０００ダルトン～約２００，０００ダルトンのいずれかの分子量を有し得る。あるいは、本明細書で使用されるポリペプチドは、約１２０，０００ダルトンまたは約２５，０００ダルトンの分子量を有し得る。

ｐＩは等電点であり、特定の分子または分子の表面が正味の電荷を帯びないｐＨである。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、ポリペプチド、例えば、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドのｐＩは、約６～約１０、約７～約９、または約８～９のいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、約６、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、または約１０のいずれかのｐＩを有する。

本明細書に記載の方法を使用して洗浄される再利用可能なクロマトグラフィー材料を使用して精製されるポリペプチドは、一般的に、組換え技法を使用して産生される。組換えタンパク質を産生するための方法は、例えば、米国特許第５，５３４，６１５号および同第４，８１６，５６７号に記載され、具体的には、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、目的のタンパク質は、ＣＨＯ細胞中で産生される（例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照のこと）。組換え技法を使用する場合、ポリペプチドは、細胞内に、ペリプラズム空間に産生され得るか、または培地に直接分泌され得る。

本明細書に記載の方法によって洗浄された再利用可能なクロマトグラフィー材料を使用して精製されるポリペプチドは、培養培地または宿主細胞溶解物から回収し得る。ポリペプチドの発現に用いられる細胞は、種々の物理的または化学的手段、例えば、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤によって破壊され得る。ポリペプチドが細胞内で産生される場合、第１のステップとして、粒子状残屑、宿主細胞、または溶解された断片のいずれかが、例えば、遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：１６３－１６７（１９９２）は、大腸菌のペリプラズム空間に分泌されるポリペプチドを単離するための手順を記載している。簡潔には、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分間にわたって融解する。細胞残屑が遠心分離によって除去され得る。ポリペプチドが培地に分泌される場合、かかる発現系由来の上清は、一般的に、市販のポリペプチド濃縮フィルタ、例えば、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮する。タンパク質分解を阻害するために、ＰＭＳＦ等のプロテアーゼ阻害剤が前述のステップのいずれかに含まれてもよく、外来性混入物の増殖を防止するために、抗生物質が含まれてもよい。

本発明の方法によって洗浄される再利用可能なクロマトグラフィー材料を使用して精製し得るポリペプチドの例としては、免疫グロブリン、免疫アドヘシン、抗体、酵素、ホルモン、融合タンパク質、Ｆｃ含有タンパク質、免疫コンジュゲート、サイトカイン、およびインターロイキンが挙げられるが、これらに限定されない。ポリペリプチドの例としては、哺乳動物のタンパク質、例えば、レニン、ホルモン、ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン、成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、リポタンパク質、アルファ－１－アンチトリプシン、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、プロインスリン、卵胞刺激ホルモン、カルシトニン、黄体形成ホルモン、グルカゴン、凝固因子、例えば第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、およびフォン・ヴィレブランド因子、抗凝固因子、例えばプロテインＣ、心房性ナトリウム利尿因子；肺サーファクタント、プラスミノーゲン活性化因子、例えばウロキナーゼまたはヒト尿もしくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子－アルファおよび－ベータ；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化時に調節され、Ｔ細胞が正常に発現および分泌している）、ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ－１－アルファ）、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン、ミュラー管抑制物質、リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖、プロリラキシン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、酵素、微生物タンパク質、例えばベータ－ラクタマーゼ；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えばＣＴＬＡ－４；インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；ホルモンまたは成長因子の受容体、プロテインＡまたはＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、ニューロトロフィン－５、もしくはニューロトロフィン－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５、もしくはＮＴ－６）、または神経成長因子、例えばＮＧＦ－β；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；線維芽細胞増殖因子、例えばａＦＧＦおよびｂＦＧＦ；上皮成長因子（ＥＧＦ）；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ－アルファおよびＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、またはＴＧＦ－β５を含むＴＧＦ－ベータ；インスリン様成長因子ＩおよびＩＩ（ＩＧＦ－ＩおよびＩＧＦ－ＩＩ）；ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、サイトカイン、ＣＤタンパク質、例えばＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９およびＣＤ２０；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素、融合ポリペプチド、すなわち、２つ以上の異種性ポリペプチドまたはその断片上に構成されるポリペプチド、Ｆｃ含有ポリペプチド、例えば第２のポリペプチドに融合した、免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質またはその断片、免疫コンジュゲート、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、インターフェロン、例えばインターフェロン－アルファ、インターフェロン－ベータ、およびインターフェロン－ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばＭ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＧ－ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ－１～ＩＬ－１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス抗原、例えばＡＩＤＳエンベロープの一部分；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；インテグリン、例えばＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ－４およびＶＣＡＭ；腫瘍関連抗原、例えばＣＡ１２５（卵巣がん抗原）、またはＨＥＲ２、ＨＥＲ３、もしくはＨＥＲ４受容体、免疫アドヘシン、ならびに上述のタンパク質のいずれかの断片および／またはバリアント、ならびにタンパク質、例えば上記のタンパク質のいずれかに結合する抗体、例えば抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。

抗体
本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法によって洗浄された再利用可能なクロマトグラフィー材料を使用して精製され得るポリペプチド、例えば、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドまたはその後の任意のポリペプチドは抗体である。

抗体の分子標的としては、ＣＤタンパク質およびそれらのリガンド、例えば、限定するものではないが、（ｉ）ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ７９α（ＣＤ７９ａ）、およびＣＤ７９β（ＣＤ７９ｂ）、（ｉｉ）ＥｒｂＢ受容体ファミリーのメンバー、例えば、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４受容体、（ｉｉｉ）細胞接着分子、例えば、ＬＦＡ－１、Ｍａｃ１、ｐ１５０，９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ、およびαｖ／β３インテグリン例えば、それらのアルファサブユニットまたはベータサブユニットのいずれか（例えば、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、または抗ＣＤ１１ｂ抗体）、（ｉｖ）成長因子、例えば、ＶＥＧＦ、ＩｇＥ、血液型抗原、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、ｍｐｌ受容体、ＣＴＬＡ－４、プロテインＣ、ＢＲ３、ｃ－ｍｅｔ、組織因子、β７等、ならびに（ｖ）細胞表面および膜貫通腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているものが挙げられる。

他の例示的な抗体としては、限定されるものではないが、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＦｌｕＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗因子Ｄ抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗Ａｂｅｔａ、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、抗エストロゲン受容体抗体、抗プロゲステロン受容体抗体、抗ｐ５３抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗カテプシンＤ抗体、抗Ｂｃｌ－２抗体、抗Ｅ－カドヘリン抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗ＣＡ１５－３抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、抗ｃ－ｅｒｂＢ－２抗体、抗Ｐ－糖タンパク質抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗網膜芽細胞腫タンパク質抗体、抗ｒａｓ腫瘍性タンパク質抗体、抗ＬｅｗｉｓＸ抗体、抗Ｋｉ－６７抗体、抗ＰＣＮＡ抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ５抗体、抗ＣＤ７抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ９／ｐ２４抗体、抗ＣＤ１０抗体、抗ＣＤ１１ａ抗体、抗ＣＤ１１ｃ抗体、抗ＣＤ１３抗体、抗ＣＤ１４抗体、抗ＣＤ１５抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２３抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３１抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３４抗体、抗ＣＤ３５抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＤ４１抗体、抗ＬＣＡ／ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ４５ＲＯ抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ１００抗体、抗ＣＤ９５／Ｆａｓ抗体、抗ＣＤ９９抗体、抗ＣＤ１０６抗体、抗ユビキチン抗体、抗ＣＤ７１抗体、抗ｃ－ｍｙｃ抗体、抗サイトケラチン抗体、抗ビメンチン抗体、抗ＨＰＶタンパク質抗体、抗κ軽鎖抗体、抗λ軽鎖抗体、抗メラノソーム抗体、抗前立性特異的抗原抗体、抗Ｓ－１００抗体、抗タウ抗原抗体、抗フィブリン抗体、抗ケラチン抗体および抗Ｔｎ－抗原抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１およびＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。

ポリクローナル抗体
いくつかの実施形態において、抗体は、ポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注入により動物において産生される。二機能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介するコンジュゲート）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ_２、またはＲ^１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ^１は異なるアルキル基である）を使用して、関連抗原を、免疫化される種において免疫原性であるポリペプチド、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートすることが有用であり得る。

例えば、１００μｇまたは５μｇのポリペプチドまたはコンジュゲート（それぞれ、ウサギまたはマウスの場合）を、３体積のフロイント完全アジュバントと組み合わせ、複数の部位で溶液を皮内注入することにより、動物を、抗原、免疫原性コンジュゲート、または誘導体に対して免疫化する。１ヶ月後、動物を、複数の部位での皮下注入により、完全フロイントアジュバント中の最初の量の１／５～１／１０のペプチドまたはコンジュゲートで追加免疫する。７～１４日後、動物を採血し、血清を抗体力価についてアッセイする。力価が水平状態になるまで動物を追加免疫する。いくつかの実施形態において、動物は、同一抗原のコンジュゲートであるが、異なるポリペプチドにコンジュゲートされ、かつ／または異なる架橋試薬によりコンジュゲートされたもので追加免疫される。コンジュゲートは、ポリペプチド融合物として組換え細胞培養で作製することもできる。ミョウバン等の凝集剤も免疫応答を増強するために好適に使用される。

モノクローナル抗体
いくつかの実施形態において、本発明の方法によって洗浄される再利用可能なクロマトグラフィー材料上で精製される抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体の集団から得られ、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、同一であり、および／または同一エピトープに結合するが、モノクローナル抗体の産生中に生じる想定されるバリアントは除外されるが、かかるバリアントは、一般的に少量で存在する。したがって「モノクローナル」という修飾語は、個別のまたはポリクローナル抗体の混合物ではない抗体の特徴を示す。

例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒｅｔａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されるハイブリドーマ法を使用して作製されてもよいし、または組換えＤＮＡ法によって作製されてもよい（米国特許第４，８１６，５６７号）。

ハイブリドーマ法において、マウス、またはハムスター等の他の適切な宿主動物が、本明細書に記載されるように免疫化され、免疫化のために使用されるポリペプチドに特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球が誘発される。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫してもよい。その後、リンパ球は、ポリエチレングリコール等の好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞に融合されて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９８６））。

そのように調製されたハイブリドーマ細胞は、融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含有する好適な培養培地に播種され、成長する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を阻害する。

いくつかの実施形態において、骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体産生を支援し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性を示すものである。とりわけ、いくつかの実施形態において、骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えば、ＳａｌｋＩｎｓｔｉｔｕｔｅＣｅｌｌＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ－２１およびＭＰＣ－１１マウス腫瘍、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭａｒｙｌａｎｄＵＳＡから入手可能なＳＰ－２またはＸ６３－Ａｇ８－６５３細胞に由来するものである。ヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、ヒトモノクローナル抗体の産生についても記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒｅｔａｌ．，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｐｐ．５１－６３（ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８７））。

ハイブリドーマ細胞が増殖している培地は、抗原に対して指向されるモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。いくつかの実施形態において、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等のインビトロ結合アッセイによって決定される。

モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎｅｔａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により決定し得る。

所望の特異性、親和性、および／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞が特定された後、クローンは、限界希釈手順によりサブクローニングし、標準的な方法により成長させてもよい（Ｇｏｄｉｎｇ，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｐｐ．５９－１０３（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９８６））。この目的に好適な培養培地としては、例えば、Ｄ－ＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍としてインビボで成長し得る。

サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、ポリペプチドＡ－セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィー等によって、培養培地、腹水、または血清から好適に分離される。

モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離および配列決定される。いくつかの実施形態において、ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの供給源としての機能を果たす。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクター内に配置され得、次いで、宿主細胞、例えば大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞等にトランスフェクションされて、組換え宿主細胞内のモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する概説論文として、Ｓｋｅｒｒａｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．ＯｐｉｎｉｏｎｉｎＩｍｍｕｎｏｌ．５：２５６－２６２（１９９３）およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．，１３０：１５１－１８８（１９９２）が挙げられる。

さらなる一実施形態において、抗体または抗体断片は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２－５５４（１９９０）に記載される技法を使用して作製された抗体ファージライブラリから単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）は、それぞれ、ファージライブラリを使用したマウスおよびヒト抗体の単離を記載する。その後の刊行物は、鎖シャッフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９－７８３（１９９２））、ならびに極めて大きいファージライブラリを構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染およびインビボ組換えを記載している（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅｅｔａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２１：２２６５－２２６６（１９９３））。したがって、これらの技法は、モノクローナル抗体を単離するための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技法に代わる実行可能な別法である。

ＤＮＡはまた、例えば、コード配列を、相同的なマウス配列の代わりに、ヒトの重鎖および軽鎖の定常ドメインに置換することによるか（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１（１９８４））、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合することにより改変してもよい。

典型的には、かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに置換されるか、またはそれらは、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに置換されて、抗原に対して特異性を有する１つの抗原結合部位、および異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製する。

本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭである。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧモノクローナル抗体である。
ヒト化抗体

いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野で記載されている。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、非ヒトである入手源からそれに導入される１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））にしたがって、超可変領域配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって行うことができる。したがって、このような「ヒト化」抗体は、実質的にインタクトな可変ドメインより少ない部分が、非ヒト種由来の対応する配列により置換されているキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基および恐らくいくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体における類似部位由来の残基により置換されているヒト抗体である。

ヒト化抗体の作製に使用されるヒト可変ドメイン、重鎖および軽鎖の両方の選択は、抗原性を低減させるのに非常に重要である。いわゆる「最良適合」法にしたがって、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を、公知のヒト可変－ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングする。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として認められる（Ｓｉｍｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７））。他の方法は、軽または重鎖可変領域の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同一のフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用されてもよい（Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））。

抗体は、抗原に対する高親和性および他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化されることがさらに重要である。この目標を達成するために、本方法のいくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用した、親配列および種々の概念上のヒト化産物の分析プロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に入手可能であり、当業者に周知である。選択された候補免疫グロブリン配列の推定される三次元立体構造を例示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示されたものを調べることにより、候補免疫グロブリン配列が機能する際の残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このような方法で、標的抗原（複数可）に対する親和性の増大等の所望の抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント配列および移入配列から選択し、組み合わせ得る。一般的に、超可変領域残基は、抗原結合への影響に直接かつ最も実質的に関与する。

ヒト抗体
いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。ヒト化の代替物として、ヒト抗体が生成され得る。例えば、免疫化すると内在性免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することのできるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが現在では可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖接合領域（Ｊ_Ｈ）遺伝子のホモ接合型欠失により、内在性抗体産生の完全な阻害がもたらされることが記載されている。かかる生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移行により、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生がもたらされる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６２：２５５－２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．，ＹｅａｒｉｎＩｍｍｕｎｏ．７：３３（１９９３）、および米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号、および同第５，５４５，８０７号を参照のこと。

あるいは、ファージディスプレイ技法（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２－５５３（１９９０））は、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ヒト抗体および抗体断片をインビトロで産生するために使用し得る。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄ等の糸状バクテリオファージの主要または非主要なコートポリペプチド遺伝子中にインフレームでクローン化され、ファージ粒子の表面上に機能的抗体断片として提示される。糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むため、抗体の機能的特性に基づく選択により、それらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択ももたらされる。したがって、ファージは、Ｂ細胞のいくつかの特性を模倣する。ファージディスプレイは、種々のフォーマットで行うことができ、それらの概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，ＫｅｖｉｎＳ．ａｎｄＣｈｉｓｗｅｌｌ，ＤａｖｉｄＪ．，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ３：５６４－５７１（１９９３）を参照のこと。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの源は、ファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小規模なランダムコンビナトリアルライブラリから、抗オキサゾロン抗体の多種多様なアレイを単離した。非免疫化ヒトドナーからＶ遺伝子のレパートリーを構築してもよく、かつ、多様なアレイの抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を、本質的にＭａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．１２：７２５－７３４（１９９３）に記載の技術にしたがって単離し得る。米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号も参照のこと。

また、ヒト抗体は、インビトロ活性化Ｂ細胞により生成され得る（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照のこと）。

抗体断片
いくつかの実施形態において、抗体は、抗体断片である。抗体断片を産生するために種々の技法が開発されている。従来、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ２４：１０７－１１７（１９９２）、およびＢｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞から直接産生することができる。例えば、抗体断片は、上記で考察される抗体ファージライブラリから単離し得る。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、大腸菌から直接回収され、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）_２断片を形成し得る（Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：１６３－１６７（１９９２））。他の手法によると、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離し得る。抗体断片を産生するための他の技法は、当業者に明らかである。他の実施形態において、最適な抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開第９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号、および米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるように、「直鎖抗体」であってもよい。かかる直鎖抗体断片は、単一特異的または二重特異的であり得る。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体の断片が提供される。いくつかの実施形態において、抗体断片は、抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ、タンデム（ｄｉ，ｔｒｉ）－ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｓｄＡｂ、三官能性抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、トリアボディからなる群から選択される。

二重特異性抗体
いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、２つの異なるエピトープに結合し得る。あるいは、二重特異性抗体結合アームは、細胞に対する細胞防御機序に集中するために、白血球上のトリガリング分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２もしくはＣＤ３）、またはＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃ受容体、例えばＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組合せ得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）として調製し得る。

二重特異性抗体の作製方法は、当該技術分野で公知である。完全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７－５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな分類のために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０個の異なる抗体分子の混合物を産生する可能性があり、これらのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。通常親和性クロマトグラフィーステップによって行われる正しい分子の精製は、幾分厄介であり、産物収率は低い。同様の手順が、国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，．，ＥＭＢＯＪ．，１０：３６５５－３６５９（１９９１）に開示されている。

異なる手法によると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体－抗原結合部位）が、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。いくつかの実施形態において、融合は、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。いくつかの実施形態において、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）は、融合物のうちの少なくとも１つに存在する。免疫グロブリン重鎖融合物、所望の場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが別個の発現ベクターに挿入され、好適な宿主生物に共トランスフェクションされる。これにより、構築時に使用される不均等な比率の３つのポリペプチド鎖が最適収率を提供する実施形態において、３つのポリペプチド断片の相互割合を調整する際に優れた柔軟性が提供される。しかしながら、等しい比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率をもたらす場合に、またはそれらの比率が特に重要でない場合に、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖をコードする配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。

このアプローチのいくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、一方のアームにある第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアームにある（第２の結合特異性を提供する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖－軽鎖対から構成される。二重特異性分子の半分のみでの免疫グロブリン軽鎖の存在により容易な分離方法が提供されるため、この非対称構造が望ましくない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促進することが見出された。このアプローチは、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。

米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチにしたがって、一対の抗体分子間の界面を操作して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にしてもよい。いくつかの実施形態において、界面は、抗体定常ドメインのＣ_Ｈ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。大きい側鎖（複数可）と同一または類似のサイズの補償「キャビティ」は、大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置換することによって、第２の抗体分子の界面上に作製される。これにより、ホモ二量体等の他の望ましくない最終生成物と比べてヘテロ二量体の収率を増加させるための機構が提供される。

二重特異性抗体は、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体の一方がアビジンにカップリングし、他方がビオチンにカップリングし得る。かかる抗体は、例えば、望ましくない細胞に対して免疫系細胞の標的とするために（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染を処置するために（国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／２００３７３号、および欧州特許第０３０８９号）提案されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製することができる。適切な架橋剤が当該技術分野で周知であり、いくつかの架橋技術とともに米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。

抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技法も本文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体がタンパク質分解的に切断されて、Ｆ（ａｂ’）_２断片を生成する手順を記載している。これらの断片は、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在の存在下で還元されて、隣接するジチオールを安定させ、分子間ジスルフィド形成を阻止する。その後、生成されたＦａｂ’断片は、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。その後、Ｆａｂ’－ＴＮＢ誘導体の一方がメルカプトエチルアミンでの還元によってＦａｂ’－チオールに再変換され、等モル量の他方のＦａｂ’－ＴＮＢ誘導体と混合されて、二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用し得る。

二重特異性抗体断片を組換え細胞培養から直接作製および単離するための様々な技法も記載されている。例えば、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体が産生された。Ｋｏｓｔｅｌｎｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合させた。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、その後、再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成した。この方法は、抗体ホモ二量体の産生にも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８（１９９３）により記載されている「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替的機構を提供している。この断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーにより、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に接続された重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。したがって、ある断片のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインが他の断片の相補的Ｖ_ＬドメインおよびＶ_Ｈドメインと対合させられ、それにより、２つの抗原結合部位が形成される。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用することによって二重特異性抗体断片を作製するための別の方法も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。

２を超える結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。

多価抗体
いくつかの実施形態では、抗体は、多価抗体である。多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（および／または異化）され得る。本明細書に提供される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する（ＩｇＭクラス以外の）多価抗体（例えば、四価抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメインおよび３つ以上の抗原結合部位を含み得る。好ましい二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（か、またはそれからなる）。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域のアミノ末端側に３つ以上の抗原結合部位とを含む。本明細書における好ましい多価抗体は、３つ～約８つであるが、好ましくは４つの抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（および好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含み得、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１およびＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは０または１である。例えば、このポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＨ－ＣＨ１－可撓性リンカー－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖、またはＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖を含み得る。本明細書における多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つ（好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書における多価抗体は、例えば、約２つ～約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書に企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意に、ＣＬドメインをさらに含む。

いくつかの実施形態において、抗体は、多重特異性抗体である。多重特異性抗体の例としては、限定するものではないが、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗体（Ｖ_ＨＶ_Ｌ単位がポリエピトープ特異性を有する）、２つ以上のＶ_ＬドメインおよびＶ_Ｈドメインを有する抗体（各Ｖ_ＨＶ_Ｌ単位が異なるエピトープに結合する）、２つ以上の単一可変ドメインを有する抗体（各単一可変ドメインが異なるエピトープに結合する）、全長抗体、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ、トリアボディ、三官能性抗体、共有結合または非共有結合している抗体断片が挙げられる。いくつかの実施形態において、その抗体は、ポリエピトープ特異性、例えば、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を有する。いくつかの実施形態において、その抗体は、単一特異性であり、例えば、１つのエピトープにのみ結合する抗体である。一実施形態によれば、多重特異性抗体は、５ μＭ～０．００１ｐＭ、３ μＭ～０．００１ｐＭ、１ μＭ～０．００１ｐＭ、０．５μＭ～０．００１ｐＭ、または０．１ μＭ～０．００１ｐＭの親和性で各エピトープに結合するＩｇＧ抗体である。

他の抗体改変
例えば、抗体の抗原依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を増強するために、エフェクタ機能に関して本明細書に提供される抗体を修飾することが望ましい場合がある。これは、１つまたは複数のアミノ酸置換を抗体のＦｃ領域内に導入することによって達成され得る。あるいはまたはさらに、システイン残基（複数可）を、Ｆｃ領域内に導入して、それにより、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にしてもよい。このように生成されたホモ二量体抗体は、改善された内部移行能力、および／または増加した補体媒介性細胞殺滅および抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１７６：１１９１－１１９５（１９９２）ａｎｄＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８－２９２２（１９９２）を参照のこと。増強された抗腫瘍活性を有するホモ二量体抗体はまた、Ｗｏｌｆｆｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５３：２５６０－２５６５（１９９３）に記載される、ヘテロ二官能性架橋剤を用いて調製され得る。あるいは、二重Ｆｃ領域を有し、それにより、増強された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有し得る、抗体を操作することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎｅｔａｌ．，Ａｎｔｉ－ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ３：２１９－２３０（１９８９）を参照のこと。

抗体の血清半減期を増大するために、アミノ酸代替物が、米国特許出願公開第２００６／００６７９３０号に記載される抗体において作製され得、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ポリペプチドバリアントおよび改変
本明細書に記載の抗体を含むポリペプチドのアミノ酸配列改変（複数可）を、本明細書に記載の方法によって洗浄される再利用可能なクロマトグラフィー材料において使用し得る。

バリアントポリペプチド
「ポリペプチドバリアント」とは、ポリペプチドの完全長天然配列、シグナルペプチドを欠くポリペプチド配列、シグナルペプチドを有するかまたは有しないポリペプチドの細胞外ドメインと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する本明細書に定義されるポリペプチド、好ましくは活性ポリペプチドを意味する。かかるポリペプチドバリアントとしては、例えば、１つまたは複数のアミノ酸残基が完全長天然アミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端に付加または欠失されたポリペプチドが挙げられる。通常、ＴＡＴポリペプチドバリアントは、完全長天然配列ポリペプチド配列、シグナルペプチドを欠くポリペプチド配列、シグナルペプチドを有するかまたは有しないポリペプチドの細胞外ドメインと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のうちの任意のアミノ酸配列同一性を有する。任意選択的に、バリアントポリペプチドは、天然ポリペプチド配列と比較して１つ以下の保存的アミノ酸置換を有し、あるいは天然ポリペプチド配列と比較して約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、または約１０個のうちのいずれか以下の保存的アミノ酸置換を有する。

バリアントポリペプチドは、Ｎ末端またはＣ末端で切断され得るか、または例えば、全長天然ポリペプチドと比較して、内部残基を欠損し得る。特定のバリアントポリペプチドは、所望の生物学的活性にとって不可欠ではないアミノ酸残基を欠損し得る。切断、欠失、および挿入を有するこれらのバリアントポリペプチドは、いくつかの従来の技法のうちのいずれかによって調製され得る。所望のバリアントポリペプチドは、化学的に合成されてもよい。別の好適な技法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって所望のバリアントポリペプチドをコードする核酸断片を単離および増幅することを伴う。核酸断片の所望の末端を定義するオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲにおいて５’プライマーおよび３’プライマーで用いられる。好ましくは、バリアントポリペプチドは、本明細書に開示される天然ポリペプチドと少なくとも１つの生物学的および／または免疫学的活性を共有する。

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに１つまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合される抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、抗体の血清半減期を増大する酵素またはポリペプチドへの抗体のＮ末端またはＣ末端の融合が挙げられる。

例えば、ポリペプチドの結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、適切なヌクレオチド変化を抗体核酸に導入することによって、またはペプチド合成によって調製される。かかる修飾としては、例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはそれへの挿入、および／またはその置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせが作製されて最終構築物に到達するが、但し、最終構築物が所望の特徴を有することを条件とする。アミノ酸変化は、ポリペプチド（例えば、抗体）の翻訳後プロセスも改変し得、例えば、グリコシル化部位の数または位置を変化し得る。

どのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を及ぼすことなく挿入、置換、または欠失され得るかを決定する際の手引きは、ポリペプチドの配列を同種の既知のポリペプチド分子の配列と比較すること、および相同性の高い領域にできたアミノ酸配列変化の数を最小限に抑えることによって見出され得る。

変異誘発の好ましい位置であるポリペプチド（例えば、抗体）のある特定の残基または領域の特定に有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍａｎｄＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１０８１－１０８５（１９８９）によって記載される「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。ここで、残基または標的残基群（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負荷電アミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）で置き換えられて、アミノ酸の抗原との相互作用に影響を及ぼす。その後、置換への機能的感受性を示すそれらのアミノ酸位置は、その置換部位でのまたはその置換部位に対する更なるまたは他のバリアントの導入により洗練される。したがって、アミノ酸配列変異を導入する部位が予め決定されているが、変異の本質はそれ自体予め決定されている必要はない。例えば、所与の部位での突然変異の性能を分析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム突然変異生成を標的コドンまたは領域で実行し、発現された抗体バリアントを所望の活性に関してスクリーニングする。

他の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、異なる残基に置き換えられた抗体分子内に少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換変異誘発において最も興味深い部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ改変も企図される。保存的置換は、以下の表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。かかる置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表１に「例示的な置換」と表示されるか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載されるより実質的な変化が導入され、産物がスクリーニングされ得る。

ポリペプチドの生物学的特性の実質的な修飾は、（ａ）置換領域中のポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくは螺旋立体配座、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルク、を維持するそれらの効果において大いに異なる置換を選択することによって達成される。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従って群分けされ得る（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓｅｃｏｎｄｅｄ．，ｐｐ．７３－７５，ＷｏｒｔｈＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９７５））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）

あるいは、自然発生する残基は、共通の側鎖特性に基づいて群に分け得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

抗体の適切な立体配座の維持に関与しない任意のシステイン残基も概してセリンで置換されて、分子の酸化的安定性が改善され、異常な架橋が阻止され得る。逆に、システイン結合（複数可）をポリペプチドに付加して、その安定性を改善してもよい（特に、抗体がＦｖ断片等の抗体断片である場合）。

特に好ましい型の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基の置換を伴う。一般的に、さらなる開発のために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、それらが生成される親抗体に対して改善された生物学的特性を有する。かかる置換バリアントを生成するための簡便な方法は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を伴う。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７つの部位）が、各部位に全ての可能なアミノ置換を生成するように突然変異される。このように作製された抗体バリアントは、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として糸状ファージ粒子からの一価様式で提示される。その後、ファージ提示バリアントは、本明細書に開示されるそれらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変の候補超可変領域部位を特定するために、アラニンスキャニング変異誘発を実施して、抗原結合に著しく寄与する超可変領域残基を同定することができる。あるいは、または加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と標的との間の接触点を特定することが有益であり得る。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書に詳述される技術に従う置換の候補である。かかるバリアントが生成されると、バリアントのパネルが本明細書に記載のスクリーニングに供され、１つまたは複数の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体が更なる開発のために選択され得る。

ポリペプチドの別の種類のアミノ酸変異体は、抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。ポリペプチドは、非アミノ酸部分を含み得る。例えば、ポリペプチドは、グリコシル化されてもよい。かかるグリコシル化は、宿主細胞もしくは宿主生物でのポリペプチドの発現中に天然に生じてもよいし、またはヒト介入に起因する計画的な修飾であってもよい。改変とは、ポリペプチドに見られる１つまたは複数の炭水化物部分の欠失、および／またはポリペプチド中に存在しない１つまたは複数のグリコシル化部位の付加を意味する。

ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合型とは、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－トレオニン（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド内でのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つのヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用され得る。

グリコシル化部位のポリペプチドへの付加は、（Ｎ結合グリコシル化部位のための）上述のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含有するようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成される。この改変は、元の抗体の配列への１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加またはそれによる置換によって行うこともできる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。

ポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的もしくは酵素的に、またはグリコシル化の標的としての機能を果たすアミノ酸残基をコードするコドンの変異置換によって達成され得る。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、様々なエンド－およびエキソ－グリコシダーゼの使用によって達成され得る。

他の修飾としては、グルタミニルおよびアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミルおよびアスパルチル残基への脱アミド化、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
キメラポリペプチド

本明細書に記載のポリペプチドは、別の異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合したポリペプチドを含むキメラ分子を形成するための方法で修飾され得る。いくつかの実施形態では、キメラ分子は、ポリペプチドと、抗タグ抗体が選択的に結合し得るエピトープを提供するタグポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般的に、ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に位置する。かかるエピトープタグ形態のポリペプチドの存在は、タグポリペプチドに対する抗体を使用して検出され得る。エピトープタグの提供により、抗タグ抗体またはエピトープタグに結合する別の種類の親和性マトリックスを使用してポリペプチドが親和性精製によって容易に精製されることも可能になる。

代替的な実施形態では、キメラ分子は、ポリペプチドと免疫グロブリンまたは免疫グロブリンの特定の領域との融合を含み得る。二価の形態のキメラ分子は、「免疫アドヘシン」と称される。

本明細書に使用される場合、「免疫アドヘシン」という用語は、異種ポリペプチドの結合特異性と、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクタ機能とを組み合わせた、抗体様分子を指す。構造的には、免疫アドヘシンは、抗体（すなわち、「異種性」）の抗原認識および結合部位以外である所望の結合特異性を持つアミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。免疫アドヘシン分子のアドヘシン部分は、典型的には、少なくとも受容体またはリガンドの結合部位を含む連続するアミノ酸配列である。免疫アドヘシンにおける免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、またはＩｇＧ－４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ－１およびＩｇＡ－２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得られ得る。

Ｉｇ融合物は、好ましくは、Ｉｇ分子内の少なくとも１つの可変領域の代わりに、可溶性の（膜貫通ドメインが欠失または不活性化されている）形態のポリペプチドの置換を含む。特定の好ましい実施形態では、免疫グロブリン融合体には、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ_２およびＣＨ_３、またはヒンジ、ＣＨ_１、ＣＨ_２およびＣＨ_３領域が含まれる。

ポリペプチドコンジュゲート
ポリペプチド製剤において使用するためのポリペプチドは、細胞毒性剤、例えば化学療法剤、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性複合体）と複合化され得る。

かかる複合体の生成において有用な化学療法剤を使用することができる。さらに、使用することができる酵素的に活性な毒素およびそれらの断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａからの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが含まれる。多様な放射性同位体は、放射性複合ポリペプチドの産生のために利用可能である。例としては、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙ、および^１８６Ｒｅが挙げられる、ポリペプチドと細胞毒性剤とのコンジュゲートは、Ｎ－サクシニミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣＬ等）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジル等）、アルデヒド（グルタレルデヒド等）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トリエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６－ジイソシアネート等）、およびビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン等）等の多様な二機能性タンパク質カップリング剤を使用して作製される。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように、リシン免疫トキシンを調製することができる。炭素－１４－で標識された１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドのポリペプチドへの複合のための例示的なキレート剤である。

ポリペプチドと、１つまたは複数の小分子毒素、例えば、カリケアマイシン、マイタンシノイド、トリコテセン、およびＣＣ１０６５、ならびに毒素活性を有する、これらの毒素の誘導体との複合体はまた、本明細書において企図される。

メイタンシノイドは、チューブリン重合の阻害によって作用する有糸分裂阻害剤である。マイタンシンは、東アフリカの低木であるＭａｙｔｅｎｕｓｓｅｒｒａｔａから最初に単離された。その後、特定の微生物もまた、マイタンシノールおよびＣ－３マイタンシノールエステル等のマイタンシノイドを産生することが発見された。合成マイタンシノールならびにその誘導体および類似体もまた、企図される。ポリペプチド－マイタンシノイド複合体を作製するための当該技術分野で既知の多くの連結基があり、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号に開示されているものを含む。連結基としては、上述した特許に開示されているようなジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光不安定性基、ペプチターゼに不安定な基、またはエステラーゼに不安定な基が含まれるが、ジスルフィドおよびチオエーテル基が好ましい。

結合の種類に応じて、リンカーが様々な位置でマイタンシノイド分子に結合され得る。例えば、エステル結合が従来のカップリング技法を使用したヒドロキシル基との反応によって形成され得る。反応は、ヒドロキシル基を有するＣ－３位、ヒドロキシメチルで修飾したＣ－１４位、ヒドロキシル基で修飾したＣ－１５位、およびヒドロキシル基を有するＣ－２０位で生じ得る。好ましい一実施形態では、結合は、マイタンシノールまたはマイタンシノール類似体のＣ－３位に形成される。

対象となる別の複合体は、１つまたは複数のカリケアマイシン分子に複合化されたポリペプチドを含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモルを下回る濃度で二本鎖ＤＮＡ切断をもたらすことができる。カリケアマイシンファミリーの複合体の調製については、例えば、米国特許第５，７１２，３７４号を参照のこと。使用できるカリケアマイシンの構造類似体には、γ_１ ^Ｉ、α_２ ^Ｉ、α_３ ^Ｉ、Ｎ－アセチル－γ_１ ^Ｉ、ＰＳＡＧ、およびθ_１ ^Ｉが含まれるが、これらに限定されない。本抗体がコンジュゲートされ得る別の抗腫瘍薬物は、抗葉酸剤であるＱＦＡである。カリケアマイシンもＱＦＡもいずれも、細胞内作用部位を有し、原形質膜を容易には通過しない。したがって、ポリペプチド（例えば、抗体）媒介性内部移行を通したこれらの薬剤の細胞取り込みによって、それらの細胞毒性効果を大いに増強する。

本明細書に記載されるポリペプチドに複合され得る他の抗腫瘍薬剤には、ＢＣＮＵ、ストレプトズマイシン、ビンクリスチン、および５－フルオロウラシル、集合的にＬＬ－Ｅ３３２８８複合体に既知の薬剤ファミリー、ならびにエスペラミシンが含まれる。

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドと核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ、またはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ）との間の複合体であり得る。

さらに別の実施形態では、ポリペプチド（例えば、抗体）は、腫瘍前標的化において利用するために「受容体」（ストレプトアビジン等）とコンジュゲートさせてもよく、この場合、ポリペプチド受容体コンジュゲートが患者に投与され、続いて除去剤を使用して血液循環から非結合コンジュゲートが除去された後、細胞毒性薬剤（例えば、放射性ヌクレオチド）とコンジュゲートされている「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤）を活性抗癌剤に転化させるプロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートしてもよい。免疫コンジュゲートの酵素構成成分としては、プロドラッグにおいて、それをより活性な細胞毒性形態に変換するような方法で作用し得る任意の酵素が含まれる。

有用である酵素としては、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；無毒性５－フルオロシトシンを抗癌薬物、５－フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、およびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ）等のプロテアーゼ；Ｄ－アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ－アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なβ－ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ等の炭水化物切断酵素、β－ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なβ－ラクタマーゼ、ならびにアミン窒素において、フェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼが含まれるが、これらに限定されない。あるいは、「アブザイム」としても当該技術分野で公知の酵素活性を有する抗体が、プロドラッグを遊離活性薬物に変換するために使用され得る。

その他
ポリペプチドの別の種類の共有結合修飾は、ポリペプチドを様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのコポリマーのうちの１つに連結することを含む。ポリペプチドはまた、例えば、コアセルベーション技法もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタシレート）マイクロカプセル）によって、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中、またはマイクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，Ｅｄ．，（１９９０）において開示されている。

製剤および方法における使用のためのポリペプチドの取得
本明細書に記載される方法で洗浄される再利用可能なクロマトグラフィー材料を使用して精製されるポリペプチドは、組換え方法を含む、当該技術分野で周知の方法を使用して得られ得る。以下のセクションは、これらの方法に関する手引きを提供する。

ポリヌクレオチド
本明細書で同義に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。

ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ポリペプチドｍＲＮＡを保有し、検出可能なレベルでそれを発現すると考えられている組織から調製されたｃＤＮＡライブラリを含むが、これに限定されない、任意の供給源から得られ得る。したがって、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ヒト組織から調製されたｃＤＮＡライブラリから簡便に得られ得る。ポリペプチドをコードする遺伝子はまた、ゲノムライブラリから、または既知の合成手順（例えば、自動核酸合成）によっても得られ得る。

例えば、ポリヌクレオチドは、軽鎖または重鎖等の全体の免疫グロブリン分子鎖をコードし得る。完全な重鎖は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）だけでなく、重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）も含み、これは典型的には以下の３つの定常ドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３、および「ヒンジ」領域を含む。場合によっては、定常領域の存在が望ましい。

ポリヌクレオチドによってコードされ得る他のポリペプチドには、抗原結合抗体断片、例えば、単一ドメイン抗体（「ｄＡｂ」）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）_２、および「ミニボディ」が含まれる。ミニボディは、（典型的には）Ｃ_Ｈ１およびＣ_ＫまたはＣ_Ｌドメインが切除されている二価抗体断片である。ミニボディは、従来の抗体より小さいので、それらは臨床／診断用途では良好な組織浸透を達成するはずであるが、二価であって、ｄＡｂのような一価抗体断片よりも高い結合親和性を保持しなければならない。したがって、別途文脈が規定しない限り、「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、全ての抗体分子だけでなく、上記で考察される型の抗原結合抗体断片も包含する。好ましくは、コードされたポリペプチド中に存在する各フレームワーク領域は、対応するヒト受容体フレームワークに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。したがって、例えば、フレームワーク領域は、受容体フレームワーク領域に対して、合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸置換を含み得る。

適切には、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、単離および／または精製され得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドである。

「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、分子がその通常または自然環境から除去または分離されているか、またはその通常または自然環境に存在しないような方法で産生されていることを示すことを意図している。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、精製されたポリヌクレオチドである。精製されたという用語は、少なくともいくつかの混入分子または物質が除去されたことを示すことを意図している。

適切には、ポリヌクレオチドは、関連するポリヌクレオチドが組成物中に存在する優勢な（すなわち、最も豊富な）ポリヌクレオチドを構成するように、実質的に精製される。

ポリヌクレオチドの発現
以下の記載は、主に、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換またはトランスフェクションされた細胞を培養することによるポリペプチドの産生に関する。もちろん、ポリペプチドを調製するために、当該技術分野で公知の代替方法を用いることができることが企図される。例えば、適切なアミノ酸配列またはその一部は、固相技術（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔｅｔａｌ．，Ｓｏｌｉｄ－ＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＷ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎＣｏ．，ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９６９）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９－２１５４（１９６３）））を用いる直接ペプチド合成によって産生することができる。インビトロでのタンパク質合成は、手動技術または自動化によって行うことができる。自動合成は、例えば、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（カリフォルニア州フォスターシティ）を使用し、製造業者の指示書を用いて達成することができる。ポリペプチドの種々の部分を、別々に化学的合成し、化学的または酵素的な方法を用いて組み合わせて、所望のポリペプチドを生成することができる。

本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ポリペプチドの産生のために発現ベクター（複数可）に挿入される。用語「制御配列」とは、特定の宿主生物における操作可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。制御配列には、プロモータ（例えば、天然に関連するまたは異種性のプロモータ）、シグナル配列、エンハンサエレメント、および転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。

ポリヌクレオチドは、他のポリヌクレオチド配列と機能的関係に置かれる場合に「作動可能に連結」している。例えば、プレ配列または分泌リーダーのための核酸は、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのための核酸に作動可能に連結され、プロモータまたはエンハンサは、配列の転写に影響する場合に、コード配列に作動可能に連結され、あるいはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置付けられる場合に、コード配列に作動可能に連結される。一般的に、「作動可能に連結される」は、連結される核酸配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ読み相（ｒｅａｄｉｎｇｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサは連続的である必要はない。連結は、簡便な制限部位でのライゲーションによって達成される。かかる部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプタまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。

抗体の場合、軽鎖と重鎖は同じまたは異なる発現ベクターにクローン化することができる。免疫グロブリン鎖をコードする核酸セグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター（複数可）中の制御配列に作動可能に連結されている。

ポリヌクレオチド配列（例えば、可変重鎖および／または可変軽鎖コード配列および任意の発現制御配列）を含むベクターは、細胞宿主のタイプに応じて変化する周知の方法によって宿主細胞に移すことができる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは、原核細胞に一般的に利用されているが、リン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポフェクション、微粒子銃またはウイルスベースのトランスフェクションは、他の細胞宿主に使用し得る。（一般的に、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，２ｎｄｅｄ．，１９８９）を参照のこと。哺乳動物細胞を形質転換するために使用される他の方法には、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、およびマイクロインジェクションの使用が含まれる。トランスジェニック動物を作製するために、導入遺伝子を受精卵母細胞にマイクロインジェクションするか、胚性幹細胞のゲノムに組み込んで、そのような細胞の核を脱核卵母細胞に移すことができる。

ベクター
「ベクター」という用語は、発現ベクターおよび形質転換ベクターならびにシャトルベクターを含む。

「発現ベクター」という用語は、インビボまたはインビトロで発現することができるコンストラクトを意味する。

「形質転換ベクター」という用語は、ある実体から別の実体に移すことができるコンストラクトを意味し、これは、同一種のものであっても、異なる種のものであってもよい。コンストラクトが、ある種から別の種に、例えば大腸菌プラスミドからバチルス属のような細菌に移すことができる場合、形質転換ベクターは「シャトルベクター」と呼ばれることもある。それは、大腸菌プラスミドからアグロバクテリウム、そして植物に移すことができるコンストラクトでさえあり得る。

ポリペプチドの発現を提供するために、以下に記載されるように、ベクターを適切な宿主細胞に形質転換することができる。様々なベクターが一般的に公開されている。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージの形態であり得る。適切な核酸配列は、種々の手順によってベクターへ挿入することができる。一般的に、ＤＮＡは、当該技術分野で公知の技術を用いて適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に挿入される。これらの成分の１つ以上を含有する好適なベクターの構築は、当業者に公知である標準的なライゲーション技術を用いる。

ベクターは、例えば、複製起点、任意選択でポリヌクレオチドの発現のためのプロモータ、および任意選択でプロモータの調節因子を備えたプラスミド、ウイルスまたはファージベクターであり得る。ベクターは、当該技術分野で周知の１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子を含み得る。

これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの統合部分として、宿主生物において複製可能である。

宿主細胞
宿主細胞は、例えば、細菌、酵母または他の真菌細胞、昆虫細胞、植物細胞、または哺乳動物細胞であり得る。

遺伝子操作されたトランスジェニック多細胞宿主生物を使用して、ポリペプチドを産生することができる。生物は、例えば、トランスジェニック哺乳動物生物（例えば、トランスジェニックヤギまたはマウス系統）であり得る。

好適な原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性の生物などの真正細菌、例えば、大腸菌などの腸内細菌科を挙げることができるが、これらに限定されない。大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）、大腸菌株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）、およびＫ５７７２（ＡＴＣＣ５３，６３５）などの種々の大腸菌株が公的に入手可能である。他の適切な原核生物宿主細胞には、エシェリキアなどの腸内細菌科、例えば、大腸菌、エンテロバクター属、エルウィニア属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ属、例えば、サルモネラ・ティフィムリウム、セラチア属、例えば、セラチア・マルセッセンス、およびシゲラ属、ならびにバチルス属、例えば枯草菌およびバシラス・リケニフォルミス（例えば、バシラス・リケニフォルミス４１Ｐ）、シュードモナス属、例えば、緑膿菌、およびストレプトマイセス属が含まれる。これらの例は、限定するものではなく、例示的なものである。株Ｗ３１１０は、組換えポリヌクレオチド産物発酵のための一般的な宿主株であるため、１つの特に好ましい宿主または親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株Ｗ３１１０は、宿主に内在性のポリペプチドをコードする遺伝子における遺伝子変異をもたらすように改変されていてもよく、かかる宿主の例は、完全な遺伝子型ｔｏｎＡを有する大腸菌Ｗ３１１０株１Ａ２、完全な遺伝子型ｔｏｎＡｐｔｒ３を有する大腸菌Ｗ３１１０株９Ｅ４、完全な遺伝子型ｔｏｎＡｐｔｒ３ｐｈｏＡＥ１５（ａｒｇＦ－ｌａｃ）１６９ｄｅｇＰｏｍｐＴｋａｎ’を有する大腸菌Ｗ３１１０株２７Ｃ７（ＡＴＣＣ５５，２４４）、完全な遺伝子型ｔｏｎＡｐｔｒ３ｐｈｏＡＥ１５（ａｒｇＦ－ｌａｃ）１６９ｄｅｇＰｏｍｐＴｒｂｓ７ｉｌｖＧｋａｎ’を有する大腸菌Ｗ３１１０株３７Ｄ６、非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠損変異を有する株３７Ｄ６である、大腸菌Ｗ３１１０株４０Ｂ４、および変異ペリプラズムプロテアーゼを有する大腸菌株を含む。あるいは、クローニングのインビトロ法、例えば、ＰＣＲまたは他の核酸ポリメラーゼ反応が適切である。

これらの原核生物宿主では、発現ベクターを作製することができ、これは典型的には、宿主細胞と適合性のある発現制御配列（例えば、複製起点）を含む。さらに、ラクトースプロモータシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモータシステム、ベータラクタマーゼプロモータシステム、またはファージラムダ由来のプロモータシステム等の、任意の数の種々の周知のプロモータが存在する。プロモータは、典型的には、任意選択でオペレーター配列を用いて発現を制御し、転写および翻訳を開始および完了するためのリボソーム結合部位配列等を有する。

真核微生物を発現に使用することができる。糸状真菌または酵母等の真核微生物は、ポリペプチドのコードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。出芽酵母は、一般的に使用される下等真核生物宿主微生物であるその他には、分裂酵母、クリベロミセス属宿主、例えば、Ｋ．ラクティス（ＭＷ９８－８Ｃ、ＣＢＳ６８３、ＣＢＳ４５７４）、Ｋ．フラジリス（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリカス（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィケラミイ（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルチー（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトリーサラン、およびＫ．マルシアナス、ヤロウイア（ＥＰ４０２，２２６）、ピキアパストリス；カンジダ、トリコデルマリージア、アカパンカビ；シュワンニオミセス属、例えばシュワンニオミセス・オシデンタリス、糸状菌、例えばアカパンカビ、ペニシリウム、トリポクラジウム、およびアスペルギルス宿主、例えばＡ．ニデュランスおよびＡ．ニガーが含まれる。メチルトロピック酵母が本明細書に適しており、ハンセヌラ、カンジダ、クロッケラ、ピキア、サッカロミセス、トルロプシス、およびロドトルラからなる属から選択されるメタノール上で増殖できる酵母が含まれるが、これらに限定されない。サッカロミセスは、好ましい酵母宿主であり、発現制御配列（例えば、プロモータ）、複製起点、終結配列などを必要に応じて有する適切なベクターを有する。典型的なプロモータには、３－ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖系酵素が含まれる。誘導性酵母プロモータとしては、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソチトクロームＣ、およびマルトースおよびガラクトースの利用に関与する酵素からのプロモータが挙げられる。

微生物に加えて、哺乳動物組織細胞培養を使用して、本明細書に記載のポリペプチドを発現および産生することもでき、場合によってはそれが好ましい（Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，ＦｒｏｍＧｅｎｅｓｔｏＣｌｏｎｅｓＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、異種性ポリペプチド（例えば、インタクトな免疫グロブリン）を分泌することができる多数の適切な宿主細胞株が当該技術分野で開発されており、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、好ましくは、骨髄腫細胞株、または形質転換されたＢ細胞またはハイブリドーマを含むため、真核細胞が好ましい場合がある。いくつかの実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、脊椎動物宿主細胞である。有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、以下のものが挙げられる：ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株統（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣＣＲＬ１６５１）、ヒト胎児腎臓株（２９３または浮遊培養での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣＣＣＬ１０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯまたはＣＨＯ－ＤＰ－１２株）、マウスセルトリ細胞、サル腎臓細胞（ＣＶ１ＡＴＣＣＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣＣＣＬ２）；犬の腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣＣＣＬ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ、ＡＴＣＣＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２、ＨＢ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、およびヒト肝癌株（ＨｅｐＧ２）。

製剤および製剤の製造方法
本明細書に記載の方法によって精製されたポリペプチド（例えば、抗体）を含む製剤および製剤を作製する方法も本明細書に提供される。例えば、精製されたポリペプチドは、薬学的に許容され得る担体と組み合わせることができる。

いくつかの実施形態において、ポリペプチド製剤は、所望の純度を有するポリペプチドを、任意の薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ、Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって凍結乾燥製剤または水溶液の形態で保存用に調製することができる。

本明細書で使用される「担体」には、用いられる投与量および濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳動物にとって無毒である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。多くの場合、生理的に許容され得る担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。

許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、レシピエントに対し、用いられる投薬量および濃度で非毒性であり、これらには、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど）、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなど）、単糖、二糖、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）、ＥＤＴＡなどのキレート剤、糖（スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなど）、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、ならびに／または非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、ポリペプチド製剤中のポリペプチドは、機能的活性を維持する。

インビボ投与のために使用される製剤は、滅菌性である必要がある。これは、滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。

本明細書の製剤は、治療されている特定の適応症に対して必要な２つ以上の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有してもよい。例えば、ポリペプチドに加えて、追加のポリペプチド（例えば、抗体）を１つの製剤に含めることが望ましい場合がある。代替的に、または加えて、組成物は、化学治療剤、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、および／または心臓保護剤をさらに含んでもよい。このような分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて好適に存在する。

製品
本明細書に記載の方法によって精製されるポリペプチドおよび／または本明細書に記載の方法によって精製されるポリペプチドを含む製剤は、製品に含まれ得る。製品は、ポリペプチドおよび／またはポリペプチド製剤を含む容器を含み得る。好ましくは、製品は、（ａ）本明細書に記載のポリペプチド、および／またはポリペプチド製剤を含む組成物を容器内に含む容器、ならびに（ｂ）製剤の投与に関する指示を有する添付文書を含む。

製品は、容器と、容器上のまたは容器に付随するラベルまたは添付文書とを備えている。好適な容器としては例えば、瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど様々な材料から形成され得る。容器は、製剤を保持または収容し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈用溶液袋またはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性物質はポリペプチドである。ラベルまたは添付文書は、提供されているポリペプチドおよび任意の他の薬物の投薬量および間隔についての具体的な指示により、本組成物が対象において使用されることを示す。製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでもよい。いくつかの実施形態では、容器は、シリンジである。いくつかの実施形態では、シリンジは、注入デバイス内にさらに収容される。いくつかの実施形態では、注入デバイスは、自己注入器である。

「添付文書」は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌症についての情報、パッケージ製品と組み合わされる他の治療薬、および／またはその使用に関する警告等を含有する、治療薬の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。

例示的な実施形態
本発明は、以下の例示的な実施形態を提供する。

実施形態１．再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であって、クロマトグラフィー材料がポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、本方法が、
ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）を含む、ステップ、
ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態２．再生緩衝液が約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態１に記載の方法。

実施形態３．再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態１または２に記載の方法。

実施形態４．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０～１１である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．３である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６．約３～約１２材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７．約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１～６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８．約２～約１２材料体積の消毒緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１～７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９．約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１～８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態１～９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１．イオン交換クロマトグラフィー材料が約４材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１２．再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であって、クロマトグラフィー材料がポリペプチドの精製において過負荷モードで使用される方法であって、
ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｂ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、
ｃ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、および
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態１３．再生緩衝液および第２の再生緩衝液が、約２５～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態１２に記載の方法。

実施形態１４．再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態１２または１３に記載の方法。

実施形態１５．再生緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態１２または１３に記載の方法。

実施形態１６．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ２．０～７．０である、実施形態１２～１５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１７．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０である、実施形態１２～１６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１８．約３～約１２材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１２～１７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１９．約７材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１２～１８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２０．酸洗浄液が約１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸である、実施形態１２～１９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２１．約１～約５材料体積の酸洗浄液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１２～２０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２２．約３材料体積の酸洗浄液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１２～２１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２３．約２～約１２材料体積の消毒緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１２～２２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２４．約４材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１２～２３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態１２～２４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２６．イオン交換クロマトグラフィー材料が約３材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態１２～２５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２７．再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であって、クロマトグラフィー材料がポリペプチドの精製において過負荷モードで使用される方法であって、
ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｃ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態２８．再生緩衝液が約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態２７に記載の方法。

実施形態２９．再生緩衝液が約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態２７または２８に記載の方法。

実施形態３０．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ７～９である、実施形態２７～２９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３１．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．０である、実施形態２７～３０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３２．約３～約１２材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態２７～３１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３３．約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態２７～３２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３４．約２～約１２材料体積の消毒緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態２７～３３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３５．約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態２７～３４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３６．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態２７～３５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３７．イオン交換クロマトグラフィー材料が約４材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態２７～３６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３８．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態３９．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態４０．負荷密度が７０ｇ／Ｌ以上である、実施形態３９に記載の方法。

実施形態４１．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態４２．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍である、実施形態４１に記載の方法。

実施形態４３．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍～約１００倍である、実施形態４２に記載の方法。

実施形態４４．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約１０倍である、実施形態４２に記載の方法。

実施形態４５．平衡化緩衝液が約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施形態３８～４４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態４６．平衡化緩衝液が約４０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施形態３８～４５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態４７．平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．０～約ｐＨ６．０である、実施形態３８～４６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態４８．平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．５である、実施形態３８～４７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態４９．イオン交換クロマトグラフィー材料が約３～７材料体積の平衡化緩衝液により洗浄される、実施形態３８～４８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５０．イオン交換クロマトグラフィー材料が約５材料体積の平衡化緩衝液により洗浄される、実施形態３８～４９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５１．再生緩衝液が約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態３８～５０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５２．再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態３８～５１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５３．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０～１１である、実施形態３８～５２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５４．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．３である、実施形態３８～５３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５５．約３～約１２材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態３８～５４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５６．約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態３８～５５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５７．約２～約１２材料体積の消毒緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態３８～５６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５８．約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態３８～５７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５９．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態３８～５８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６０．イオン交換クロマトグラフィー材料が約４材料体積の本緩衝液に保存される、実施形態３８～５９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６１．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）酸洗浄液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、
ｇ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、および
ｈ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態６２．負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、実施形態６１に記載の方法。

実施形態６３．負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、実施形態６１または６２に記載の方法。

実施形態６４．負荷密度が約７０ｇ／Ｌ以上である、実施形態６１～６３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６５．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍である、実施形態６１に記載の方法。

実施形態６６．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍～約１００倍である、実施形態６１に記載の方法。

実施形態６７．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約１０倍である、実施形態６１に記載の方法。

実施形態６８．平衡化緩衝液が約５０ｍＭ～約１００ｍＭの酢酸ナトリウムおよび約２５ｍＭ～約７５ｍＭのトリスを含む、実施形態６１～６７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６９．平衡化緩衝液が約８５ｍＭの酢酸ナトリウムおよび約５０ｍＭのトリスを含む、実施形態６１～６８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７０．平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ６．０～約ｐＨ１０．０である、実施形態６１～６９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７１．平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．０である、実施形態６１～７０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７２．イオン交換クロマトグラフィー材料が、約５～約１５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、実施形態６１～７１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７３．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１０材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、実施形態６１～７２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７４．再生緩衝液が約２５～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態６１～７３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７５．再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態６１～７４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７６．再生緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態６１～７４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７７．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ２．０～７．０である、実施形態６１～７６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７８．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０である、実施形態６１～７７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７９．約３～約１２材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態６１～７８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８０．約７材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態６１～７９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８１．酸洗浄液が約１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸である、実施形態６１～８０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８２．約１～約５材料体積の酸洗浄液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態６１～８１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８３．約３材料体積の酸洗浄液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態６１～８２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８４．約２～約１２材料体積の消毒緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態６１～８３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８５．約４材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態６１～８４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８６．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態６１～８５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８７．イオン交換クロマトグラフィー材料が約３材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態６１～８６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８８．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態８９．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態９０．負荷密度が７０ｇ／Ｌ以上である、実施形態８９に記載の方法。

実施形態９１．イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物からポリペプチドを精製するための方法であって、イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、本方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）組成物をイオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ、
ｃ）ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。

実施形態９２．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍である、実施形態９１に記載の方法。

実施形態９３．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約２倍～約１００倍である、実施形態９１に記載の方法。

実施形態９４．負荷密度が、ポリペプチドに対するイオン交換クロマトグラフィー材料の動的結合容量の少なくとも約１０倍である、実施形態９１に記載の方法。

実施形態９５．平衡化緩衝液が約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施形態９４に記載の方法。

実施形態９６．平衡化緩衝液が約４０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施形態８８～９５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９７．平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．０～約ｐＨ６．０である、実施形態８８～９６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９８．平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．５である、実施形態８８～９７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９９．イオン交換クロマトグラフィー材料が約３～７材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、実施形態８８～９８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１００．イオン交換クロマトグラフィー材料が約５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、実施形態８８～９９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０１．再生緩衝液が、約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態８８～１００のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０２．再生緩衝液が約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、実施形態８８～１０１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０３．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ７～９である、実施形態８８～１０２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０４．再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．０である、実施形態８８～１０３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０５．約３～約１２材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態８８～１０４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０６．約１０材料体積の再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態８８～１０５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０７．約２～約１２材料体積の消毒緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態８８～１０６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０８．約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液がイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態８８～１０７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０９．イオン交換クロマトグラフィー材料が約１から５材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態８８～１０８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１０．イオン交換クロマトグラフィー材料が約４材料体積の保存緩衝液に保存される、実施形態８８～１０９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１１．イオン交換クロマトグラフィー材料が、クロマトグラフィーカラム内にある、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１２．イオン交換クロマトグラフィー材料が陽イオン交換クロマトグラフィー材料体である、実施形態１～１１１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１３．イオン交換クロマトグラフィー材料が、支持マトリックスに連結されたスルホプロピル部分を含む、実施形態１～１１２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１４．支持マトリックスが架橋ポリ（スチレンジビニルベンゼン）を含む、実施形態１１３の方法。

実施形態１１５．イオン交換クロマトグラフィー材料がＰＯＲＯＳ（商標）ＨＳ５０材料である、請求項１～１１４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１６．イオン交換クロマトグラフィー材料が、混合モード陽イオン交換材料である、実施形態１～１１５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１７．混合モード陽イオン交換材料が、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）ＩｍｐＲｅｓ、Ｎｕｖｉａ（商標）ｃＰｒｉｍｅ（商標）、またはＴｏｙｏｐｅａｒｌＭＸＴｒｐ－６５０Ｍである実施形態１１６に記載の方法。

実施形態１１８．陰イオン交換クロマトグラフィー材料が陰イオン交換クロマトグラフィー材料である、実施形態１～１１１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１１９．イオン交換クロマトグラフィー材料が、支持マトリックスに連結された、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミンもしくは第四級アンモニウムイオン官能基、ポリアミン官能基、またはジエチルアミノエチル官能基を含む、実施形態１～１１１または１１８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１２０．イオン交換クロマトグラフィー材料が、混合モード陽イオン交換材料である、実施形態１～１１１、１１８または１１９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１２１．混合モード陰イオン交換材料が、ＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）またはＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）ＩｍｐＲｅｓである、実施形態１２０に記載の方法。

実施形態１２２．イオン交換クロマトグラフィー材料がポリペプチドの大規模生産に使用される、実施形態１～１２１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１２３．ポリペプチドが抗体、免疫アドヘシン、Ｆｃ含有タンパク質、または免疫コンジュゲートである、実施形態１～１２２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１２４．ポリペプチドが抗体である、実施形態１２３に記載の方法。

実施形態１２５．抗体がモノクローナル抗体である、実施形態１２４に記載の方法。

実施形態１２６．モノクローナル抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、実施形態１２５に記載の方法。

実施形態１２７．モノクローナル抗体がＩｇＧモノクローナル抗体である、実施形態１２５または１２６の方法。

実施形態１２８．抗体が抗原結合断片である、実施形態１２４～１２７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１２９．抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ、タンデム（ｄｉ，ｔｒｉ）－ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｓｄＡｂ、三官能性抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディまたはトリアボディである、実施形態１２８に記載の方法。

実施形態１３０．抗体が、二重特異性抗体である、実施形態１２４～１２９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３１．抗体が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗Ｆｌｕ－Ａ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗Ａｂｅｔａ、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬ融合タンパク質、およびＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質からなる群から選択される、実施形態１２４～１２７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３２．抗体が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１およびＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、実施形態１２４～１２７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３３．ポリペプチドは、イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する前に、親和性クロマトグラフィー材料を使用して精製され、イオン交換クロマトグラフィー材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である、実施形態１２４～１３２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３４．親和性材料が、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィー、およびカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群から選択される、実施形態１３３に記載の方法。

実施形態１３５．プロテインＡ親和性材料が、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ材料、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）材料、またはＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）ＬＸ材料である、実施形態１３４に記載の方法。

実施形態１３６．緩衝液が約１５～２０材料体積／時間でイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１～１３５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３７．再生緩衝液が約１０材料体積／時間でイオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、実施形態１～１３６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３８．ポリペプチドが宿主細胞内で産生される、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１３９．宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、実施形態１３８に記載の方法。

実施形態１４０．不純物が、ＩｇＧ断片、宿主細胞タンパク質、または宿主細胞核酸の１つまたは複数を含む、実施形態１～１３９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１４１．ポリペプチドがＣＨＯ細胞で産生され、不純物がＣＨＯ宿主細胞タンパク質（ＣＨＯＰ）および／またはＣＨＯ核酸を含む、実施形態１４０の方法。

本明細書に開示される特徴は全て、任意の組み合わせで組み合わせられてもよい。本明細書に開示される各特徴は、同じ、同等、または同様の目的を果たす代替の特徴に置き換えられてもよい。したがって、別途明確に示されない限り、開示される各特徴は、一般的な一連の同等または同様の特徴の一例にすぎない。

本発明のさらなる詳細が、以下の非限定的な実施例により例示されている。本明細書における全ての参考文献の開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

以下の実施例は、単に本発明の例示となるよう意図されており、したがって、決して本発明を限定するものと解釈されるべきではない。以下の実施例および詳細な説明は、限定するものではなく、例証として提供されている。

実施例１．陽イオン交換過負荷再生洗浄ステップの開発
過負荷陽イオン交換クロマトグラフィー材料の消毒中の汚れを減らし、クロマトグラフィーラン間の不純物のキャリーオーバーを最小限に抑えるために、再生ステップを開発した。

材料および方法
原料
本試験は、ＣＨＯ細胞株を使用して、４００Ｌパイロットプラントランから得られた調整済み抗体ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）（ＭＳＳ）プールを使用して実行された。４００Ｌの細胞培養産物を、連続（密閉）遠心分離、その後の深層濾過、および最終的な滅菌グレード（０．２ μｍ）のろ過によって回収した。

緩衝液
表２に記載されている緩衝液を、本実施例のＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ（ＯＬ）クロマトグラフィープロセスで使用した。

装置
全てのラボスケールのクロマトグラフィー開発作業は、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＡＫＴＡ（商標）Ａｖａｎｔ１５０およびＯｍｎｉｆｉｔ（登録商標）０．６６ｃｍ直径のカラムを使用して実行した。

精製方法
以下に示す方法は、ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ（過負荷モード）およびＣａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅステップの方法である。可能な限り、スケールに依存しないパラメータが提供されている。

陽イオン交換過負荷（ＯＬ）クロマトグラフィー（ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ）
ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳクロマトグラフィーを、原料がｐＨ５．５で負荷される過負荷モードで操作し、その後、同じ平衡緩衝液で負荷後洗浄を行った。過負荷モードでは、収量損失を相殺するために高負荷密度が必要になるため、水酸化ナトリウムで消毒および保存する前に、結合したタンパク質不純物を洗い流すために、酢酸ナトリウムを用いるより高いｐＨおよび導電率の再生ステップが必要である。過負荷モードを利用する場合、ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ受信は、ｍＡｂの動的結合容量を超える最適な結合容量で負荷された。これにより、タンパク質関連の不純物（例えば、ｖＨＭＷＳおよびＨＭＷＳ）およびプロセス関連の不純物（例えば、ＣＨＯＰ）が樹脂に競合的に結合し、ｍＡｂのブレークスルーを引き起こし、これにより、ブレークスルーが過負荷プールとして収集される。負荷密度を上昇させると、回収率が上昇する。

ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳクロマトグラフィーの標的パラメータ、フェーズ情報、およびラン条件を表３に記載する。図２は、代表的なＰｏｒｏｓＯｖｅｒｌｏａｄクロマトグラムを示す。

分析方法
産物タンパク質濃度
ＭＡｂ濃度は、２８０ｎｍおよび３２０ｎｍにおいて石英キュベットを備えたＡｇｉｌｅｎｔ８４５３分光光度計を使用して決定した。サンプルを精製水（ＰＷ）で希釈して、２８０ｎｍで０．１～１．０ＡＵの吸光度に到達させる。次の式を使用してタンパク質濃度を計算した：
タンパク質濃度＝（Ａ２８０－Ａ３２０）／（吸光係数＊経路長）×希釈係数
総タンパク質（ｍｇ）＝タンパク質濃度（ｍｇ／ｍｌ）×プール容量（ｍｌ）
サイズバリアントのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）

超高分子量種（ｖＨＭＷＳ）、高分子量種（ＨＭＷＳ）、総凝集体（ｖＨＭＷＳ＋ＨＭＷＳ）、モノマー、および断片の相対比率は、ＴＳＫＧ３０００ＳＷＸＬ（７．８ｘ３００ｍｍ）分析用ＨＰＬＣカラム（ＴｏｓｏｈＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用したサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって決定された。ラン条件を表４に詳述する。カラムは、表に記載されているランニング緩衝液で０．５ｍＬ／分で３０分間ランを行い、２８０ｎｍでモニタリングした。自動サンプルチャンバーは２～８°Ｃの範囲で５°Ｃに設定されているが、但し、カラムコンパートメントは周囲温度に設定されている。サンプルは、２５～５０ μｇのターゲット質量負荷で適切に注入された。本アッセイに使用されるＨＰＬＣシステムはＡｇｉｌｅｎｔ１１００／１２００である。

分析操作アッセイ
以下のアッセイは、プロセス開発およびラン分析中に実行された：
ＴａｑｍａｎＰＣＲによるＣＨＯＤＮＡ
キャピラリーゾーン電気泳動／レーザー誘起蛍光（ＣＺＥ－ＬＩＦ）によるキャリーオーバー
グラム陰性菌のエンドトキシンを検出するための速度論的アッセイによるエンドトキシン。

再生洗浄ステップの開発
ｍＡｂ１ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ（ＯＬ）カラム再生ステップおよびキャリーオーバー試験
ＣＥＸ過負荷クロマトグラフィー操作には、ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ樹脂から結合している不純物、特に凝集体を効果的に除去するための再生ステップが含まれる。不純物を効果的に除去するために、２つの再生緩衝液を評価した、３５０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ８．３、および５０ｍＭのトリス、８５ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ８．０。

再生緩衝液の評価中に、２回のＣＥＸ過負荷ランを最大１０００ｇ／Ｌ_樹脂で深し、２つの再生フェーズが組み込まれた（各緩衝液の５ＣＶ持続時間）が、ランごとに、再生緩衝液のシーケンスが変化した。以下は、試験された再生緩衝液のシーケンスを使用した２つの評価ランである。
評価ランＡ：
再生フェーズ１：５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０
再生フェーズ２：３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３
評価ランＢ：
再生フェーズ１：３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３
再生フェーズ２：５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０

典型的なアウトプットを分析し（ＫＰＩ、不純物クリアランスおよび産物品質）、いずれのランでも同様の性能が得られた。しかしながら、これらのアウトプットに加えて、第１の再生フェーズ中のカラム流出物を収集し、カラムからの凝集体除去の評価のためにＳＥＣ上で分析し、これを図３に要約する。（第１の再生フェーズカラム流出液のＳＥＣクロマトグラムのオーバーレイ）。図３は、３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３緩衝液を使用したフェーズのｖＨＭＷＳレベルが高いことを示しており、これは、カラムからより多くの凝集体が除去されており、したがって、より優れた再生洗浄緩衝液であることを示している。いずれの再生緩衝液を使用しても、カラムの汚れは観察されなかった。

評価ランのクロマトグラムを分析すると（図４、評価ランＡのクロマトグラム、および図５、評価ランＢのクロマトグラム）、３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３再生緩衝液を使用する後の再生フェーズ２でＯＤピークが観察されず、これは、使用後にカラムにタンパク質が残っていないことを示している。いずれの再生緩衝液を使用しても、プロセス中に圧力スパイクは観察されなかった。分析観察アッセイでは、残存タンパク質のキャリーオーバーは観察されなかった（表５）。

ｍＡｂ２ＰＯＲＯＳ（商標）５０ＨＳ（ＯＬ）カラム再生ステップおよびキャリーオーバー試験
ＣＥＸカラム再生ステップは、Ｐｏｒｏｓ（商標）５０ＨＳ樹脂から不純物を効果的に除去し、消毒段階でのラン間のキャリーオーバーおよび樹脂汚れを防ぐために最適化された。２つの再生緩衝液を試験した。５０ｍＭのトリス、８５ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ８．０および３５０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ８．３。再生緩衝液の評価中に、２回のＣＥＸ過負荷ランを最大８００ｇ／Ｌ_樹脂で深し、２つの再生フェーズが組み込まれた（各緩衝液の５ＣＶ持続時間）が、ランごとに、再生緩衝液のシーケンスが変化する。以下は、試験された再生緩衝液のシーケンスを使用した２つの評価ランである。
評価ランＡ：
再生フェーズ１：５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０
再生フェーズ２：３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３
評価ランＢ：
再生フェーズ１：３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３
再生フェーズ２：５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０

評価ランのクロマトグラムを分析すると（図６、評価ランＡのクロマトグラム、および図７、評価ランＢのクロマトグラム）、３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３再生緩衝液を使用する後の再生フェーズ２でＯＤピークが観察されず、これは、使用後にカラムにタンパク質が残っていないことを示している。いずれの再生緩衝液を使用しても、プロセス中に圧力スパイクは観察されなかった。

洗浄手順を確認するために、各再生緩衝液を使用して１回の産物接触ランを実行した。表６に詳述されている手順を使用した、産物接触ランの後、モックラン（負荷フェーズなしで実行されたラン）を実行した。模擬ランでは、タンパク質のキャリーオーバーを評価するために、２つの再生緩衝液を以前のタンパク質接触ランと交互に使用した。以下は、評価のランシーケンスの概要である：
１．）５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０再生フェーズを使用したタンパク質接触ラン
２．）３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３再生フェーズを使用したモックラン
３．）３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３再生フェーズを使用したタンパク質接触ラン
４．）５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０再生フェーズを使用したモックラン

＊試験した２つの再生緩衝液のモックプールを収集し、Ｙ：９９（総タンパク質）およびＹ：７７（ＣＨＯＤＮＡ）分析に提出した。

タンパク質接触ランおよびモックランの両方からの再生フェーズを収集し、ＳＥＣで実行した（図８Ａおよび８Ｂ）。モックプールを収集し、ＣＨＯＤＮＡ（Ｙ：７７）および総タンパク質（Ｙ：９９）を分析した。

表７に記載されている結果は、両方の再生緩衝液について同等の性能を示し、ＣＨＯＤＮＡおよび総タンパク質は、カラムでの産物接触ランの後、ＬＯＱ以下に減少した。タンパク質接触およびモックランの再生溶液のＳＥＣ分析は、３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３が、タンパク質接触ラン中に５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０よりも効果的に結合したタンパク質を溶出できることを示した。５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０を使用した場合、後続のモックランで３５０ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．３を使用した際に溶出する追加のタンパク質によって示されるように、タンパク質接触ランは依然としてカラムにタンパク質が結合したままであった（図８Ａおよび８Ｂ）。

＊キャリーオーバー（Ｙ９９）サンプルは、サンプル収集から３０分以内に０．１％ＰＳ２０で処理し、分析前に－７０℃以下で保存した。

結論
３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３および５０ｍＭのトリス、８５ｍＭのＮａＯＡｃ、ｐＨ８．０の再生により、ｍＡｂ２およびｍＡｂ１のＰｏｒｏｓ（商標）５０ＨＳ樹脂汚れが効果的に軽減された。いずれかの緩衝液を使用した消毒フェーズ間でも、最小限の圧力上昇が観察された。３５０ｍＭのＮａＯＡｃ再生緩衝液は、ＣＥＸ過負荷クロマトグラフィーのプラットフォーム再生緩衝液として５０ｍＭのトリス、ＮａＯＡｃｐＨ８．０緩衝液よりも選択された。

実施例２マルチモーダル陰イオン交換過負荷再生洗浄ステップの開発
過負荷マルチモーダル陰イオン交換クロマトグラフィー材料の消毒中の汚れを減らし、クロマトグラフィーラン間の不純物のキャリーオーバーを最小限に抑えるために、再生ステップを開発した。

材料および方法
原料
本試験は、ＣＨＯ細胞株を使用して、４００Ｌパイロットプラントランから得られた調整済み抗体ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）（ＭＳＳ）プールを使用して実行された。４００Ｌの細胞培養産物を、連続（密閉）遠心分離、その後の深層濾過、および最終的な滅菌グレード（０．２ μｍ）のろ過によって回収した。
過負荷（ＯＬ）クロマトグラフィー（Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ）

「過負荷」操作中、タンパク質のブレークスルーが発生し始める点を介して、産物と不純物の両方が強い結合を示す条件下（ｌｏｇＫ_ｐ＞２．０）でカラムに負荷する。不純物が産物タンパク質よりも強く結合する場合（すなわち、不純物ｌｏｇＫ_ｐ＞ｍＡｂｌｏｇＫ_ｐ）、産物タンパク質が不純物による置換を受けるように、最適な性能が実現され得る。これにより、ブレークスルー後に溶離液が生成され、これは、産物が濃縮されており、不純物が減少している。

Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ過負荷クロマトグラフィー試験の場合、原料は、図９に示すように高いｌｏｇＫ_ｐ（結合条件）であるｐＨ８．０で負荷される。充填負荷の後に、平衡化緩衝液による負荷後の洗浄が続く。結果を表８および９に概要する。試験した再生緩衝液を表１０に列挙する。

全てのラボスケールのクロマトグラフィー開発作業は、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＡＫＴＡＡｖａｎｔ１５０およびＯｍｎｉｆｉｔ０．６６ｃｍ直径のカラムを使用して実行した。

分析方法
産物タンパク質濃度
ＭＡｂ濃度は、２７８ｎｍでＳｏｌｏＶＰＥを使用して決定した。次の式を使用してタンパク質濃度を計算した：
タンパク質濃度＝（Ａ２８０－Ａ３２０）／（吸光係数＊経路長）×希釈係数

総タンパク質（ｍｇ）＝タンパク質濃度（ｍｇ／ｍｌ）×プール容量（ｍｌ）

再生洗浄ステップの開発
ＭＡＢ３Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ（ＯＬ）カラム再生試験の概要

過負荷クロマトグラフィー操作には、結合した不純物を効果的に除去するための再生ステップが含まれる。評価された再生緩衝液を表１０に示す。再生緩衝液の評価では、カラムに３００ｇ／Ｌ樹脂を負荷し、２つの再生フェーズを組み込んだ。ランごとに、再生緩衝液のシーケンスを変更した。試験した再生緩衝液のシーケンスを表１１に概要し、以下に詳述する。

＊７ＣＶの代わりに５ＣＶのフェーズ期間を使用した
評価ランＡ：
再生フェーズ１：３５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ８．３
再生フェーズ２：４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０
評価ランＢ：
再生フェーズ１：４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０
再生フェーズ２：３５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０
評価ランＣ：
再生フェーズ１：４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０
再生フェーズ２：３５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０
評価ランＤ：
再生フェーズ１：３５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０
再生フェーズ２：４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０
評価ランＥ：
再生フェーズ１：３５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０
再生フェーズ２：４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０

結果
フェーズ全体の質量均衡（％タンパク質回収）および圧力プロファイルを比較して、再生緩衝液の有効性を決定した。再生緩衝フェーズでの％回収が高いほど、再生緩衝液がより効果的であることを示す。表１２は、各ランのフェーズ間の質量均衡の概要を示す。主な試験の比較を以下に要約する。

評価ランＡ：
３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ８．３緩衝液は、最も効果の低い再生洗浄液である。少量のタンパク質が溶出されたが、その後の再生緩衝液（４０ｍＭＮａＯＡｃ、ｐＨ４．０）は、フェーズでの％回収がより高いことからわかるように、より効果的であった。最小限のタンパク質が、２回目の再生フェーズ後もカラムに残存する。図１０Ａに示すように、カラム汚れは観察されなかった（圧力スパイクはなかった）。

評価ランＢｖｓランＤ：４０ｍＭｖｓ３５０ｍＭＮａＯＡｃｐＨ４．０
４０ｍＭおよび３５０ｍＭＮａＯＡｃｐＨ４．０緩衝液は同等の効果を有していた。両方の再生洗浄緩衝液は、最初の再生洗浄フェーズとして使用すると同様のタンパク質回収率を有していた。最初の再生フェーズの後、最小限のタンパク質がカラムに残存する。図１０Ｂおよび図１０Ｄに示すように、カラム汚れは観察されなかった（圧力スパイクはなかった）。

評価ランＣｖｓランＥ：４０ｍＭのＮａＯＡｃｖｓ３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ５．０
４０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ５．０緩衝液は、３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ５．０と比較して、カラムからタンパク質を溶出する効果が向上した。３５０ｍＭのＮａＯＡｃｐＨ５．０を再生洗浄１として使用した場合、再生洗浄２の間に、より多くの残存タンパク質が溶出する（ランＥ）。再生洗浄２でＵＶシグナルの増加が観察される（図４、５）。図１０Ｃおよび図１０Ｅに示すように、カラム汚れは観察されなかった（圧力スパイクはなかった）。

評価ランＢｖｓランＣ：ｐＨ４．０ｖｓｐＨ５．０
ｐＨ４．０および５．０はどちらも、プーリングフェーズ後に残存している結合タンパク質を十分に溶出するが、ｐＨ４．０の再生緩衝液は、結合タンパク質の溶出においてｐＨ５．０よりもより効果的である。クロマトグラムを比較して示しているように、ｐＨ４．０条件では、再生フェーズ２後での残存タンパク質の溶出がより少ない（図１０Ｂ～１０Ｅ）。

結論
Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ再生緩衝液としては、ｐＨが低いほど効果的である。４０ｍＭおよび３５０ｍＭｐＨ４．０および５．０は、３５０ｍＭＮａＯＡｃｐＨ８．３と比較して、より効果的なＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ再生洗浄緩衝液である。この評価では、４０ｍＭおよび３５０ｍＭＮａＯＡｃｐＨ４．０再生緩衝液が最も効果的な再生緩衝液であった。これは、ｍＡＢ３について、低ｐＨでの樹脂へのタンパク質結合が減少したこと、および高ｐＨでの結合が増加した頃（すなわち、タンパク質溶出効率の低下）を示す結合等温線データと一致する（図９）。消毒フェーズでは、最小限の圧力上昇が観察された。将来の再生緩衝液研究のために、消毒フェーズの前にタンパク質をカラムから溶出するために、再生洗浄緩衝液の数を増やす可能性がある。

Claims

再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であって、前記クロマトグラフィー材料がポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、前記方法が、
ａ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液が酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）を含む、ステップ、
ｂ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｃ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記再生緩衝液が約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項１に記載の方法。
前記再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項１または２に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０～１１である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．３である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
約３～約１２材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約４材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であって、前記クロマトグラフィー材料がポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、前記方法が、
ａ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｂ）酸洗浄液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、
ｃ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、ならびに
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記再生緩衝液および第２の再生緩衝液が、約２５～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項１２に記載の方法。
前記再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
前記再生緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ２．０～７．０である、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０である、請求項１２～１６のいずれか一項に記載の方法。
約３～約１２材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の方法。
約７材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記酸洗浄液が約１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸である、請求項１２～１９のいずれか一項に記載の方法。
約１～約５材料体積の前記酸洗浄液が、前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１２～２０のいずれか一項に記載の方法。
約３材料体積の前記酸洗浄液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１２～２１のいずれか一項に記載の方法。
約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１２～２２のいずれか一項に記載の方法。
約４材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１２～２３のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項１２～２４のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約３材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項１２～２５のいずれか一項に記載の方法。
再利用のためにイオン交換クロマトグラフィー材料を洗浄する方法であって、前記クロマトグラフィー材料がポリペプチドの精製において過負荷モードで使用され、前記方法が、
ａ）再生緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｂ）消毒緩衝液をイオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ならびに
ｃ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記再生緩衝液が約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項２７に記載の方法。
前記再生緩衝液が、約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項２７または２８に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ７～９である、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．０である、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。
約３～約１２材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項２７～３２のいずれか一項に記載の方法。
約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項２７～３３のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項２７～３４のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項２７～３５のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約４材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項２７～３６のいずれか一項に記載の方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記負荷密度が７０ｇ／Ｌ以上である、請求項３９に記載の方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、および
ｇ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の少なくとも約２倍である、請求項４１に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の約２倍～約１００倍である、請求項４２に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の約１０倍である、請求項４２に記載の方法。
前記平衡化緩衝液が、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項３８～４４のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液が約４０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項３８～４５のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．０～約ｐＨ６．０である、請求項３８～４６のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．５である、請求項３８～４７のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が約３～７材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、請求項３８～４８のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、請求項３８～４９のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約５０～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項３８～５０のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項３８～５１のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０～１１である、請求項３８～５２のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．３である、請求項３８～５３のいずれか一項に記載の方法。
約３～約１２材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項３８～５４のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項３８～５５のいずれか一項に記載の方法。
約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項３８～５６のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項３８～５７のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項３８～５８のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約４材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項３８～５９のいずれか一項に記載の方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液が酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）酸洗浄液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップ、
ｇ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨおよび約１ＭのＮａＣｌを含む、ステップ、ならびに
ｈ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、請求項６１に記載の方法。
前記負荷密度が約２０ｇ／Ｌ以上である、請求項６１または６２に記載の方法。
前記負荷密度が約７０ｇ／Ｌ以上である、請求項６１～６３のいずれか一項に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の少なくとも約２倍である、請求項６１に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の約２倍～約１００倍である、請求項６１に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の約１０倍である、請求項６１に記載の方法。
前記平衡化緩衝液が、約５０ｍＭ～約１００ｍＭのＮａＯＡｃおよび約２５ｍＭ～約７５ｍＭのトリスを含む、請求項６１～６７のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液が約８５ｍＭの酢酸ナトリウムおよび約５０ｍＭのトリスを含む、請求項６１～６８のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ６．０～約ｐＨ１０．０である、請求項６１～６９のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．０である、請求項６１～７０のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約５～約１５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、請求項６１～７１のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が約１０材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、請求項６１～７２のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約２５～約６００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項６１～７３のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約３５０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項６１～７４のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約４０ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項６１～７４のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ２．０～７．０である、請求項６１～７６のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ４．０である、請求項６１～７７のいずれか一項に記載の方法。
約３～約１２材料体積の前記再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項６１～７８のいずれか一項に記載の方法。
約７材料体積の前記再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項６１～７９のいずれか一項に記載の方法。
前記酸洗浄液が約１６７ＭのＮａＯＡｃおよび約０．３Ｍのリン酸である、請求項６１～８０のいずれか一項に記載の方法。
約１～約５材料体積の前記酸洗浄液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項６１～８１のいずれか一項に記載の方法。
約３材料体積の前記酸洗浄液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項６１～８２のいずれか一項に記載の方法。
約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項６１～８３のいずれか一項に記載の方法。
約４材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項６１～８４のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項６１～８５のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約３材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項６１～８６のいずれか一項に記載の方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が約１０００ｇ／Ｌ以下である、ステップ、
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ならびに
ｇ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が２０ｇ／Ｌ以上である、ステップ、
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ならびに
ｇ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記負荷密度が７０ｇ／Ｌ以上である、請求項８９に記載の方法。
イオン交換クロマトグラフィー材料を使用して、ポリペプチドおよび不純物を含む組成物から前記ポリペプチドを精製するための方法であって、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が再利用に適しており、前記方法が、
ａ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で平衡化するステップ、
ｂ）前記組成物を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に負荷するステップであって、負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィーの動的結合容量を超える、ステップ
ｃ）前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップ、
ｄ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を平衡化緩衝液で洗浄するステップ、
ｅ）再生緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記再生緩衝液がトリスおよび酢酸ナトリウムを含む、ステップ、
ｆ）消毒緩衝液を前記イオン交換クロマトグラフィー材料に通すステップであって、前記消毒緩衝液が約０．５ＮのＮａＯＨを含む、ステップ、ならびに
ｇ）前記イオン交換クロマトグラフィー材料を保存緩衝液に保存するステップであって、前記保存緩衝液が約０．１ＮのＮａＯＨを含む、ステップを含む、方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の少なくとも約２倍である、請求項９１に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の約２倍～約１００倍である、請求項９１に記載の方法。
前記負荷密度が、前記ポリペプチドに対する前記イオン交換クロマトグラフィー材料の前記動的結合容量の約１０倍である、請求項９１に記載の方法。
前記平衡化緩衝液が約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項９４に記載の方法。
前記平衡化緩衝液が約４０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項８８～９５のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．０～約ｐＨ６．０である、請求項８８～９６のいずれか一項に記載の方法。
前記平衡化緩衝液のｐＨが約ｐＨ５．５である、請求項８８～９７のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約３～７材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、請求項８８～９８のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約５材料体積の平衡化緩衝液で洗浄される、請求項８８～９９のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約２５～約７５ｍＭのトリスおよび約５０～約１００ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項８８～１００のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約５０ｍＭのトリスおよび約８５ｍＭのＮａＯＡｃを含む、請求項８８～１０１のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ７～９である、請求項８８～１０２のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液のｐＨが約ｐＨ８．０である、請求項８８～１０３のいずれか一項に記載の方法。
約３～約１２材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項８８～１０４のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項８８～１０５のいずれか一項に記載の方法。
約２～約１２材料体積の消毒緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項８８～１０６のいずれか一項に記載の方法。
約１０材料体積の消毒緩衝液が通過し、再生緩衝液が前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項８８～１０７のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約１～５材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項８８～１０８のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、約４材料体積の保存緩衝液に保存される、請求項８８～１０９のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料がクロマトグラフィーカラム内にある、請求項１～１１０のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が陽イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項１～１１１のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が支持マトリックスに連結されたスルホプロピル部分を含む、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の方法。
前記支持マトリックスが架橋ポリ（スチレンジビニルベンゼン）を含む、請求項１１３に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料がＰＯＲＯＳ（商標）ＨＳ５０材料である、請求項１～１１４のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、混合モード陽イオン交換材料である、請求項１～１１５のいずれか一項に記載の方法。
前記混合モード陽イオン交換材料が、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）、ＣａｐｔｏＭＭＣ（商標）ＩｍｐＲｅｓ、Ｎｕｖｉａ（商標）ｃＰｒｉｍｅ（商標）、またはＴｏｙｏｐｅａｒｌＭＸＴｒｐ－６５０Ｍである、請求項１１６に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が陰イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項１～１１１のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、支持マトリックスに連結された、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミンもしくは第四級アンモニウムイオン官能基、ポリアミン官能基、またはジエチルアミノエチル官能基を含む、請求項１～１１１、または１１８のいずれか一項に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、混合モード陰イオン交換材料である、請求項１～１１１、１１８または１１９のいずれか一項に記載の方法。
前記混合モード陰イオン交換材料が、ＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）またはＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ（商標）ＩｍｐＲｅｓである、請求項１２０に記載の方法。
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が、前記ポリペプチドの大規模生産のために使用される、請求項１～１２１のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドが、抗体、免疫アドヘシン、Ｆｃ含有タンパク質または免疫コンジュゲートである、請求項１～１２２のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドが抗体である、請求項１２３に記載の方法。
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１２４に記載の方法。
前記モノクローナル抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１２５に記載の方法。
前記モノクローナル抗体がＩｇＧモノクローナル抗体である、請求項１２５または１２６に記載の方法。
前記抗体が抗原結合断片である、請求項１２４～１２７のいずれか一項に記載の方法。
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ、タンデム（ｄｉ，ｔｒｉ）－ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｓｄＡｂ、三官能性抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディまたはトリアボディである、請求項１２８に記載の方法。
前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１２４～１２９のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗Ｆｌｕ－Ａ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗Ａｂｅｔａ、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬ融合タンパク質、およびＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質からなる群から選択される、請求項１２４～１２７のいずれか一項に記載の方法。
前記抗体が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１、およびＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、請求項１２４～１２７のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドが、前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する前に親和性クロマトグラフィー材料を使用して精製され、前記イオン交換クロマトグラフィー材料が陽イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項１２４～１３２のいずれか一項に記載の方法。
前記親和性材料が、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィー、およびカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項１３３に記載の方法。
プロテインＡ親和性材料が、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ材料、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）材料、またはＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）ＬＸ材料である、請求項１３４に記載の方法。
前記緩衝液が、約１５～２０材料体積／時間で前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１～１３５のいずれか一項に記載の方法。
前記再生緩衝液が約１０材料体積／時間で前記イオン交換クロマトグラフィー材料を通過する、請求項１～１３６のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドが宿主細胞内で産生される、請求項１～１３７のいずれか一項に記載の方法。
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項１３８に記載の方法。
前記不純物が、ＩｇＧ断片、宿主細胞タンパク質、または宿主細胞核酸の１つまたは複数を含む、請求項１～１３９のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドがＣＨＯ細胞で産生され、前記不純物がＣＨＯ宿主細胞タンパク質（ＣＨＯＰ）および／またはＣＨＯ核酸を含む、請求項１４０に記載の方法。