CN113842673B - 液相色谱柱再生方法 - Google Patents

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    • B01D15/08Selective adsorption, e.g. chromatography
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Abstract

本发明涉及一种液相色谱柱再生方法,将需要再生的液相色谱柱连接于超高效液相系统;50%甲醇水溶液冲洗色谱柱;卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声;用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统,并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱;正向安装色谱柱,并采用甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。本发明的有益效果在于:解决了现有C18液相色谱柱的再生方法方式操作繁琐,对操作人员专业技术要求高,普通的分析检测技术人员很难完成的问题。

Description

液相色谱柱再生方法
技术领域
目前本发明属于化学分析检测领域,尤其涉及一种液相色谱柱再生方法。
背景技术
C18液相色谱柱是液相色谱系统中使用最为广泛的一类色谱柱,由于样品基质复杂,C18液相色谱柱在使用过程中会出现被污染、堵塞等情况,进而导致色谱峰峰型变差、色谱柱柱压升高,柱效变差等问题,以致于不得不更换新的色谱柱。作为液相色谱系统核心部件的色谱柱目前的价格比较高,单只价格数千元,如果频繁更换色谱柱,必然会增加实验室检测成本。因此研究一种C18液相色谱柱再生方法,提高液相色谱柱使用寿命非常有必要。
对于C18液相色谱柱的再生方法,目前最常用的是数倍柱体积的有机相、水相对色谱柱进行冲洗,这种方法仅适用于色谱柱的日常维护保养及轻微污染或堵塞;对于污染严重的色谱柱,有研究报道需将固定相从色谱柱内取出,进行清洗再生后重新装填,具体操作是:将色谱固定相从色谱柱内打出后,用甲醇浮选,去除其中细小的破碎颗粒;然后用二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇超声清洗;最后70℃水浴蒸干固定相,重新装填色谱柱。这种方式操作繁琐,对操作人员专业技术要求高,普通的分析检测技术人员很难完成。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:
本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案是:
一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤一,将需要再生的液相色谱柱连接于超高效液相系统(UPLC);
步骤二,用30-50倍柱体积的50%甲醇水溶液冲洗色谱柱;
步骤三,拆下经步骤二冲洗后的色谱柱,卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声10-20min;
步骤四,用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;
步骤五,经步骤四清洗后的色谱柱柱体重新装上步骤三清洗后的筛板及步骤四清洗后的柱头,将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统(UPLC),并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,从0.2 mL/min流速开始,逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1-2min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的80%-90%,继续维持30min;
步骤六,正向安装色谱柱,并采用甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。
优选地,需要再生的液相色谱柱选用C18液相色谱柱。
优选地,所述超高效液相系统采用通用型二元高压泵和进样器。
优选地,所述步骤二中,流速控制在0.2-1.5mL/min。
优选地,所述步骤五中,是从0.2 mL/min流速开始,以0.2mL/min为间隔逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1-2min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的80%-90%。
优选地,所述步骤六中,采用30-50倍柱体积的60%甲醇水溶液、30-50倍柱体积的70%甲醇水溶液、30-50倍柱体积的80%甲醇水溶液、30-50倍柱体积的90%甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
C18液相色谱柱在使用过程中会出现被污染、堵塞等情况,进而导致色谱峰峰型变差、色谱柱柱压升高,柱效变差等问题,以致于不得不更换新的色谱柱。本发明提供的一种液相色谱柱再生方法,针对C18液相色谱柱设计,利用现有超高效液相系统(UPLC),经色谱柱轻度冲洗、筛板拆卸清洗、色谱柱深度冲洗,仅利用超纯水、甲醇水溶液、色谱级甲醇等试剂,即可解决现有C18液相色谱柱的再生方法方式操作繁琐,对操作人员专业技术要求高,普通的分析检测技术人员很难完成的问题。
本发明还确定了,清洗顺序及各个步骤甲醇水溶液配制的溶液的浓度、体积和流速,在特定的浓度、流速和体积下,可以进一步提高使用精度,增加色谱柱的使用时间和使用次数。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中,类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中,各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1为原装柱的峰形图;
图2为实施例1所用待再生修复的色谱柱的峰形图;
图3为实施例2所用待再生修复的色谱柱的峰形图;
图4为实施例3所用待再生修复的色谱柱的峰形图;
图5为实施例4所用待再生修复的色谱柱的峰形图;
图6为实施例1再生后的色谱柱的峰形图;
图7为实施例2再生后的色谱柱的峰形图;
图8为实施例3再生后的色谱柱的峰形图;
图9为实施例4再生后的色谱柱的峰形图。
具体实施方式
下面结合附图进一步说明本发明的实施例。
以下通过具体实施例对本发明作进一步说明,但不用以限制本发明,凡在本发明精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明采用的超高效液相系统型号为Acquity UPLC,采用通用型二元高压泵和进样器。
取原装C18色谱柱,以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进50μg/L磺胺类标准品溶液,原装柱的峰形图如图1所示。并记录柱压为6880psi。
C18液相色谱柱在使用过程中会出现被污染、堵塞等情况,进而导致色谱峰峰型变差、色谱柱柱压升高,柱效变差等问题,作为待再生修复的色谱柱,取再生C18色谱柱(一),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进50μg/L磺胺类标准品溶液,峰形图如图2所示。并记录柱压为8260psi。
C18液相色谱柱在使用过程中会出现被污染、堵塞等情况,进而导致色谱峰峰型变差、色谱柱柱压升高,柱效变差等问题,作为待再生修复的色谱柱,取再生C18色谱柱(二),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进80μg/L磺胺类标准品溶液,峰形图如图3所示。并记录柱压为8530psi。
C18液相色谱柱在使用过程中会出现被污染、堵塞等情况,进而导致色谱峰峰型变差、色谱柱柱压升高,柱效变差等问题,作为待再生修复的色谱柱,取再生C18色谱柱(三),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进150μg/L磺胺类标准品溶液,峰形图如图4所示。并记录柱压为8397psi。
C18液相色谱柱在使用过程中会出现被污染、堵塞等情况,进而导致色谱峰峰型变差、色谱柱柱压升高,柱效变差等问题,作为待再生修复的色谱柱,取再生C18色谱柱(四),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进200μg/L磺胺类标准品溶液,峰形图如图5所示。并记录柱压为8776psi。
实施例1
一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤一,将需要再生的C18液相色谱柱连接于超高效液相系统(UPLC);
步骤二,用50倍柱体积的50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,流速控制在1.5mL/min;
步骤三,拆下经步骤二冲洗后的色谱柱,卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声20min;
步骤四,用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;
步骤五,经步骤四清洗后的色谱柱柱体重新装上步骤三清洗后的筛板及步骤四清洗后的柱头,将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统(UPLC),并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,从0.2 mL/min流速开始,以0.2mL/min为间隔逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1-2min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的85%,继续维持30min;
步骤六,正向安装色谱柱,采用50倍柱体积的60%甲醇水溶液、50倍柱体积的70%甲醇水溶液、50倍柱体积的80%甲醇水溶液、50倍柱体积的90%甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。
取再生C18色谱柱(一),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进50μg/L磺胺类标准品溶液,图6为实施例1再生后的色谱柱的峰形图。并记录柱压为7165psi。
实施例2
一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤一,将需要再生的C18液相色谱柱连接于超高效液相系统(UPLC);
步骤二,用45倍柱体积的50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,流速控制在1.0mL/min;
步骤三,拆下经步骤二冲洗后的色谱柱,卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声15min;
步骤四,用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;
步骤五,经步骤四清洗后的色谱柱柱体重新装上步骤三清洗后的筛板及步骤四清洗后的柱头,将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统(UPLC),并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,从0.2 mL/min流速开始,以0.2mL/min为间隔逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的85%,继续维持30min;
步骤六,正向安装色谱柱,采用45倍柱体积的60%甲醇水溶液、45倍柱体积的70%甲醇水溶液、45倍柱体积的80%甲醇水溶液、45倍柱体积的90%甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。
取再生C18色谱柱(二),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进80μg/L磺胺类标准品溶液,图四为实施例2再生后的色谱柱的峰形图7。并记录柱压为7188psi。
实施例3
一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤一,将需要再生的C18液相色谱柱连接于超高效液相系统(UPLC);
步骤二,用35倍柱体积的50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,流速控制在1.2mL/min;
步骤三,拆下经步骤二冲洗后的色谱柱,卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声10min;
步骤四,用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;
步骤五,经步骤四清洗后的色谱柱柱体重新装上步骤三清洗后的筛板及步骤四清洗后的柱头,将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统(UPLC),并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,从0.2 mL/min流速开始,以0.2mL/min为间隔逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的85%,继续维持30min;
步骤六,正向安装色谱柱,采用40倍柱体积的60%甲醇水溶液、40倍柱体积的70%甲醇水溶液、40倍柱体积的80%甲醇水溶液、40倍柱体积的90%甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。
取再生C18色谱柱(三),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进150μg/L磺胺类标准品溶液,图8为实施例3再生后的色谱柱的峰形图。并记录柱压为7150psi。
实施例4
一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤一,将需要再生的C18液相色谱柱连接于超高效液相系统(UPLC);
步骤二,用30倍柱体积的50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,流速控制在0.8mL/min;
步骤三,拆下经步骤二冲洗后的色谱柱,卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声10min;
步骤四,用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;
步骤五,经步骤四清洗后的色谱柱柱体重新装上步骤三清洗后的筛板及步骤四清洗后的柱头,将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统(UPLC),并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,从0.2 mL/min流速开始,以0.2mL/min为间隔逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的80%,继续维持30min;
步骤六,正向安装色谱柱,采用30倍柱体积的60%甲醇水溶液、40倍柱体积的70%甲醇水溶液、40倍柱体积的80%甲醇水溶液、40倍柱体积的90%甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。
取再生C18色谱柱(四),以甲醇、0.1%的甲酸水为流动相,流速0.4mL/min,进200μg/L磺胺类标准品溶液,图9为实施例4再生后的色谱柱的峰形图。并记录柱压为7166psi。
对比结果:
实施例1再生后的色谱柱的峰形图、实施例2再生后的色谱柱的峰形图、实施例3再生后的色谱柱的峰形图及实施例4再生后的色谱柱的峰形图均与原装柱的峰形图差异较小。同时记录的柱压差异也较小。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (5)

1.一种液相色谱柱再生方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一,将需要再生的液相色谱柱连接于超高效液相系统(UPLC);
步骤二,用30-50倍柱体积的50%甲醇水溶液冲洗色谱柱;
步骤三,拆下经步骤二冲洗后的色谱柱,卸下色谱柱柱体上的色谱柱柱头,并取出筛板,将筛板分别在超纯水、50%甲醇水溶液、色谱级甲醇中超声10-20min;
步骤四,用棉棒蘸取50%甲醇水溶液对色谱柱柱体前端及色谱柱柱头进行擦拭,去除表面污染物;
步骤五,经步骤四清洗后的色谱柱柱体重新装上步骤三清洗后的筛板及步骤四清洗后的柱头,将重新组装的色谱柱反向装于超高效液相系统(UPLC),并用50%甲醇水溶液冲洗色谱柱,从0.2 mL/min流速开始,逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1-2min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的80%-90%,继续维持30min;
步骤六,正向安装色谱柱,并采用30-50倍柱体积的60%甲醇水溶液、30-50倍柱体积的70%甲醇水溶液、30-50倍柱体积的80%甲醇水溶液、30-50倍柱体积的90%甲醇水溶液逐级冲洗色谱柱,调整流速,使柱压不超过色谱柱最大耐受压力的60%。
2.如权利要求1所述的一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:需要再生的液相色谱柱选用C18液相色谱柱。
3.如权利要求2所述的一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:所述超高效液相系统采用通用型二元高压泵和进样器。
4.如权利要求1所述的一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:所述步骤二中,流速控制在0.2-1.5mL/min。
5.如权利要求1所述的一种液相色谱柱再生方法,其特征在于:所述步骤五中,是从0.2mL/min流速开始,以0.2mL/min为间隔逐级增加流速,每级流速待柱压稳定后维持1-2min,一直增加到色谱柱最大耐受压力的80%-90%。
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