JP2022523647A - アレルゲンエキスの精製法 - Google Patents
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Abstract
Description
草アレルギーは、感作者が特定の季節に罹患する最もありふれた一般的なアレルギーの形態の一つである。晩春から初夏にかけての数ヶ月間、草の花粉が大気中に存在し、これがアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及び喘息を引き起こしうる。草地に座ったり芝刈りをしたりして皮膚が草に直接触れても、皮膚の痒み、蕁麻疹性及びアトピー性皮膚炎を引き起こすことがある。草の最も代表的な種の一つはオオアワガエリ(Phleum pratense)である。少なくとも9種類の異なるアレルゲンがオオアワガエリの種で同定されている。すなわち、Phl p 1(27kDaのベータ-エクスパンシン(Beta-expansin));Phl p 2(10-12kDの草グループII/III(Grass group II/III));Phl p 4(55kDaのタンパク質)、Phl p 5(32kDa)、Phl p 6(11kDa)、Phl p 7(6kDaのカルシウム結合タンパク質)、Phl p 11(20kDaのOle e 1関連タンパク質)、Phl p 12(14kDaのプロフィリン、及びPhl p 13(55kDaのポリガラクツロナーゼ)である。
地中海地方ではオリーブの木の栽培が盛んなため、オリーブ花粉症が重要な健康問題である。オリーブの木は大量の花粉を大気中に飛散させる。現在、オリーブ(O. europaea)由来の12種類のアレルゲンがWHO/IUISアレルゲン命名分科委員会(Allergen Nomenclature Sub-Committee)によって記載されている。11種類は花粉由来で、1種類(タウマチン、Ole e 13としても知られる)はオリーブ果実由来の食物アレルゲンである。Ole e 1は主要アレルゲンで、70%を超えるオリーブ花粉感作患者によって認識される。その他のアレルゲンは、プロフィリン(Ole e 2)、ポルカルシン(Ole e 3及びOle e 8)、グルカナーゼ(Ole e 4及びOle e 9)、スーパーオキシドジスムターゼ(Ole e 5)、脂質転移タンパク質(Ole e 7)、グリコシルヒドロラーゼ(Ole e 10)、ペクチンメチルエステラーゼ(Ole e 11)及びOle e 6などである。
ダニは、世界中、特に湿度と温度がそれらの発生に好適な地域で主要な感作源である。現在、チリダニ科(Pyroglyphidae family)に属するイエダニ(HDM,house dust mite)が屋内に生息する最も多いダニであるので、主要な屋内アレルゲン源である。ヤケヒョウヒダニ(D. pteronyssinus)では19種類のアレルゲンがWHO/IUISアレルゲン命名分科委員会によって記載されている。そのうちの9種類はプロテアーゼで、アレルゲン性に関連する活性を有している。最も重要なアレルゲンはDer p 1(25kDaのシステインプロテアーゼ)及びDer p 2(NPC2ファミリーの14kDaタンパク質)である。
a)天然アレルゲンエキスを塩基性化し;そして
b)3.5kDa未満の分子サイズを有する分子を除去し;そして
c)pHを中性に調整する
ことを含み、それによって脱色アレルゲンエキスを製造する。
d)脱色アレルゲンエキスをアルデヒドと接触させ;そして
e)100kDa未満の分子サイズを有する分子を除去する
ことを含む重合工程を含むこともでき、それによって脱色重合アレルゲンエキスを製造する。
本発明の第三の側面に従って、本発明の第一の側面の方法に従って得ることができる脱色重合アレルゲンエキスを提供する。
“アレルゲン”は、IgE応答及び/又はI型アレルギー反応を誘導できる分子と定義できる。
本明細書において参照(言及)されている用語“脱色アレルゲンエキス”は、天然アレルゲンエキスから、吸着色素を含めアレルゲンタンパク質に結合されたアレルギー的に無関係な物質を除去することによって得られた半精製アレルゲンエキスと定義できる。
さらに好ましくは、原料物質は、落花生(Arachis hypogaea)、花粉(オオアワガエリ、オリーブ及びシラカバ(シダレカンバ))、ダニ(ヤケヒョウヒダニ)、及び上皮(ネコのフケ)から選ばれる。
さらに詳しくは、原料物質は、オオアワガエリ、オリーブ及びシラカバ(シダレカンバ)から選ばれる。
あるいは、原料物質はオリーブである。
あるいは、原料物質はヤケヒョウヒダニである。
i)原料物質又は第一の原料物質残渣を液体アレルゲン抽出剤と接触させて、液相中に溶解されたアレルゲンと第二の原料物質残渣を含む固相との第二の混合物を製造し;
ii)第二の混合物を第二の分離工程に付して、液相中に溶解されたアレルゲンを単離し、粗アレルゲンエキスを製造し;
iii)粗アレルゲンエキスを低分子画分除去工程に付して、1~10kDa未満、好ましくは3.5kDa未満のサイズを有する分子を3~10℃で除去し;
iv)工程iii)を、3~10℃で、アレルゲンエキスが室温での測定で900μS/cm未満の導電率を有するまで実施して、天然アレルゲンエキスを得る
ことを含みうる。
i)アレルゲンを含む原料物質を液体脂質抽出剤と接触させて、液相中に溶解された脂質と、アレルゲン及びタンパク質を含む第一の原料物質残渣からなる固相とを含有する第一の混合物を製造し;そして
ii)第一の混合物を第一の分離工程に付して、第一の原料物質残渣を単離する
ことを含みうる。
第一の分離工程後、原料物質残渣は液体脂質抽出剤で洗浄できる。任意に、第一の原料物質残渣は液体脂質抽出剤でさらに抽出された後、分離されてもよい。好ましくは、1回、2回又はそれ以上の更なる脂質抽出工程が実施される。液体抽出剤のろ過はそれが透明になるまで反復できる。当業者に公知の他の適切な分離法も使用できる。
天然アレルゲンエキスは、標準化、診断、合成及びワクチン接種目的のための医薬組成物又はワクチンの製造に使用できる。
本発明は、アレルゲン/タンパク質に付着している非アレルゲン性化合物を、その非アレルゲン性化合物がタンパク質に付着している原因となっている静電気力、疎水性力、又はその他の物理的な力を分断する手段を用いて除去して脱色エキスを製造するという、塩基性化処理を含む脱色法を提供する。
a)天然アレルゲンエキスを塩基性化し;
b)3.5kDa未満の分子サイズを有する分子を除去し;そして
c)pHを中性に調整して、脱色アレルゲンエキスを製造する
ことを含む。
一態様において、塩基処理は、アレルゲンエキスをpH7~11、又はpH7~10、好ましくはpH7~8に塩基性化することを含む。
塩基性化処理後、得られた脱色アレルゲンエキスは回収され、該エキスのpHは、適切な酸、例えばHClを用いて調整できる。pHは、タンパク質の沈殿が回避される値、例えばpH7.0~7.5、さらに詳しくはpH7.3~7.4に調整できる。
a)天然アレルゲンエキスをpH7~11に塩基性化し、該塩基性化エキスを1分~24時間、例えば5~30分、好ましくは15分間維持し;
b)該エキスを、3.5kDa未満の分子サイズを有する分子を除去するための低分子画分除去工程に付し;そして
c)pHを7.0~7.5、特に7.3~7.4に調整して、脱色アレルゲンエキスを製造する
ことを含みうる。
低分子画分除去工程は、エキスが精製水又は緩衝液のような透析液に対して透析される透析工程でありうる。低分子画分除去工程は、2~25℃で実施できるが、好ましくは2~6℃、最も好ましくは3~5℃の低温で実施される。低分子画分除去工程は12~24時間実施されうるが、その場合、溶媒、又は透析の場合は透析液が、反応を維持するために定期的に交換される。
本発明の方法を用いて製造されたエキスはさらに処理することができる。該方法はさらに、
d)脱色アレルゲンエキスをアルデヒドと接触させ、そして重合後、
e)100kDa未満の分子サイズを有する分子を除去する
ことを含む重合工程を含むことができる。
重合工程は、
d)脱色アレルゲンエキスをグルタルアルデヒド又はホルムアルデヒドと接触させ、
e)該エキスを分子画分除去工程に付して、100kDa未満の分子サイズを有する分子を除去し、そして
f)工程e)を、アレルゲンエキスが210μS/cm未満の導電率(室温での測定)を有するまで、及び/又はエキスにグルタルアルデヒドがなくなるまで、3~15℃、好ましくは3~5℃で実施し、脱色重合アレルゲンエキスを得る
ことを含みうる。
好ましくは、分子画分除去工程は、エキスが精製水又は緩衝液などの透析液に対して3~15℃、好ましくは3~5℃で透析される透析工程である。分子画分除去工程は、3~15℃、好ましくは3~5℃で、室温で測定された導電率が300μS/cm未満、さらに好ましくは250μS/cm、最も好ましくは210μS/cm未満になるまで継続できる。
本明細書中に記載の低分子画分除去工程、例えば工程b)又はe)のいずれも、限外ろ過工程、透析ろ過工程、透析工程、又はろ過を含みうる。
本発明の第三の側面に従って、本発明の第一の側面の方法に従って得ることができる脱色重合アレルゲンエキスを提供する。活性治療物質として使用するための精製アレルゲンエキスも提供する。
i.水に可溶、
ii.100kDa未満の分子量を有する非重合アレルゲン/タンパク質が存在しない(非還元条件でのSDS-PAGEによりバンドとして確認)
iii.100kDa未満の分子量を有するIgE認識バンドが存在しない(非還元条件でのイムノブロットにより確認)
iv.100kDa未満の分子量を有する重合分子が存在しない(SDS-PAGEにより決定)
v.天然アレルゲンエキスに対して生物学的効力の低下(95%)(感作個体の特定血清プールを用いたIgE ELISA阻害実験により決定)及び
vi.マウス及びモルモットにおける異常毒性なし
特に、脱色重合アレルゲンエキスは、天然アレルゲンエキスに対して生物学的効力の低下(95%)を特徴とする(感作個体の特定血清プールを用いたIgE ELISA競合実験により決定)。
アレルギーの治療、又はアレルギーの治療用医薬の製造における本発明によるワクチンの使用を提供する。
方法A~Cにおいて、アレルゲンエキスの製造に使用された方法を詳述する。
A.アレルゲン原料の最適脱脂法
脱脂エキスを得た。一般に、ホモジナイズされた材料をアセトン中3~5℃で脱脂し、ろ過した。この工程をアセトンが透明になるまで繰り返した。脱脂材料を回収し、すべてのアセトンが除去されるまで室温で乾燥させた。
乾燥脱脂材料を秤量し、0.01MのPBS/0.15MのNaCl中、1:10の割合で4時間、3~5℃で磁気撹拌下、抽出した。その後、その溶液を30分間、4℃、10,000rpmで遠心分離した。得られた上清を回収し、3~5℃で貯蔵した。ペレットは0.01MのPBS/0.15MのNaCl中に再構成し(1:10)、磁気撹拌下3~5℃で一晩抽出した。その溶液を30分間、3~5℃、10,000rpmで遠心分離し、上清を回収して前に得られた画分と混合した。合わせたエキスを孔径0.45μmを用いてろ過し、3kDaカットオフ透析膜で導電率が500μS/cm未満になるまで拡大的に透析した。次に、エキスを孔径0.22μmを用いてろ過滅菌した。
水溶液中3~5℃に維持されていた天然エキスを、下記手順を用いてさらに処理した。磁気撹拌下、溶液のpHを、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム、尿素、水酸化アンモニウム又はメチルアミンの添加によってpH7~11に調整し、これらの条件下で15分間維持した。その後、エキスを3.5kDaカットオフ透析膜で精製水を用いておよそ17時間、10倍体積の精製水に対して3~5℃で透析した。この間、精製水を4回置換した。塩基処理後、エキスを回収し、0.1MのHClを用いてpHを7.3~7.4に調整した。最後に、エキスを0.22μmまで滅菌ろ過し、凍結及び凍結乾燥させた。
タンパク質含量
天然及び脱色エキスのタンパク質含量を、Lowry Biuret法により、製造業者の説明書に従って測定した。
タンパク質プロフィールは、SDS-PAGEにより、還元条件下(サンプルをβ-メルカプトエタノールとインキュベートし、95℃で10分間加熱した)、2.67%C、15%Tのアクリルアミド-アクリルアミドゲルで確認した。サンプルと低分子量標準(BioRad Laboratories社、米国カリフォルニア州ハーキュリーズ)の泳動は同じゲルで実施した。ゲルを0.1%クマシーブリリアントブルーR-250(BioRad社)で染色した。
電気泳動的に分離されたタンパク質(SDS-PAGEにより)をPVDF膜(Trans-Blot(登録商標)Turbo TM Transfer Pack,BioRad社)に転写し、各アレルゲンに感作された患者の血清(Plasmalab International社、米国ワシントン州エバレット)と一晩インキュベートした(血清は0.01Mリン酸緩衝液(PBS)-0.1%Tween中に希釈されている)。Plasmalab International社は、食品医薬品局の規制に全面的に準拠している。エキスへの特異的IgE結合は、ペルオキシダーゼ結合モノクローナル抗体、抗ヒト-IgE-PO(Ingenasa社、スペイン・マドリード)で検出され、ルミノール溶液(Western Immun-StarTM Western CTM Kit,Bio-Rad社)で発現させ、化学発光によって検出した(ChemiDoc XRS,Bio-Rad社)。
主要アレルゲンを、ELISAサンドイッチ法により、酵素結合免疫吸着アッセイ検出キット(Indoor Biotechnologies社、米国バージニア州)を用いて定量した。簡潔に述べると、Nunc Maxisorpプレート(Thermo Scientific社、米国マサチューセッツ州ウォルサム)を、炭酸塩/炭酸水素塩緩衝液(pH9.6)中に希釈された特異的モノクローナル抗体で被覆し、4℃で一晩インキュベートした。その後、プレートをPBS0.01M-Tween0.05%中BSA1%でブロックした。次に、サンプルと標準を、PBS0.01M-Tween0.05%中BSA1%で段階的に半分に希釈して加えた。特異的二次モノクローナル抗体(ビオチン化)を加え、最後にストレプトアビジンを使用した。硫酸で停止後、発色溶液(クロモゲン)との反応をOD450nmで測定した。標準曲線は、最小二乗法により4-パラメーターロジスティックフィットを用いて得られ、そこにサンプル濃度を補間して結果を得た。
生物学的に標準化された各所内標準物質(in-house reference preparation,IHRP)へのIgE結合を阻害する天然及び脱色エキスの能力を比較した。Nuncプレート(Thermo Scientific社)を抗IgEで被覆した。アレルゲンに感作された患者の血清プールをプレートでインキュベートした。サンプルの希釈物とIHRPをペルオキシダーゼで標識されたアレルゲンとインキュベートした。混合物を被覆プレートに加え、インキュベートした。その後、発色溶液(クロモゲン)を加え、硫酸で停止し、光学濃度(OD)を450nmで測定した。
エキス(天然及び脱色)のインビトロアレルゲン活性をELISA阻害により試験し、天然エキスを参照として用いて50%阻害点を確立した。プラスチック製マイクロタイタープレート(Immulon 4HBX;Thermo Scientific社)を天然エキス(10μgタンパク質/ml)で一晩被覆した。天然及び脱色エキスから段階的1:2希釈物をNunc F プレート(Thermo Scientific社)に作製した。各希釈物を血清プールと室温で2時間インキュベートした。その後、エキスの希釈物を天然(エキス)被覆プレートに移し、2時間インキュベートした。洗浄後、100μlの抗ヒトIgEペルオキシダーゼを加え、室温で30分間放置した。洗浄後、プレートを30分間発色させ(クロモゲン)、硫酸(1N)で停止させた。
植物フラボノイドを陽性対照として使用した。対照と標準をTLCアルミニウムシートシリカゲル60F(Merck社、ドイツ・ダルムシュタット)に適用した。酢酸エチル:ギ酸:酢酸:水(100:11:11:27)を溶離液として使用し、1%メタノール性ジフェニルホウ酸-β-エチルアミノエステル、次いで5%エタノール性ポリ(エチレングリコール)-4000の溶液を用いて展開した。
実施例1:オオアワガエリ(Phleum pratense)
脱色オオアワガエリエキスを方法手順A~Cに従って得た。
最大タンパク質含量は、メチルアンモニウムpH8を用いた処理後に得られ(865μgタンパク質/mg凍結乾燥エキス)、最小含量は水酸化カリウムpH11処理に対応する(579μgタンパク質/mg凍結乾燥エキス)(表1)。全pHにわたる平均値は718μgタンパク質/mg凍結乾燥エキスであった。
最低レベルはpH10の水酸化アンモニウム処理に対応していた(13.0μg Phl p 5/mg凍結乾燥エキス)(表1)。最も高いレベルは、pH8の水酸化リチウム処理、次いでpH11の水酸化アンモニウム処理に対応していた(それぞれ、41.0及び38.0μg Phl p 5/mg凍結乾燥エキス)。脱色(サンプル)の平均値は26.6μg Phl p 5/mg凍結乾燥エキスであった。
最も高い生物学的効力は、pH7及び9のメチルアンモニウム処理サンプルに対応していた(それぞれ、3052及び2909HEPL/mg凍結乾燥エキス)(図5及び6、表1)。最も低い値は水酸化カリウムによる処理に対応しており(平均値984HEPL/mg凍結乾燥エキス)、天然エキス(952HEPL/mg)と同様である(表3)。水酸化アンモニウムとメチルアミン以外のその他の群との間には差が検出されるようである(水酸化カリウム P=0.010、テューキー(Tukey)検定;尿素 P=0.005、水酸化ナトリウム P=0.012、及び水酸化リチウム P=0.049、マン・ホイットニー(Mann-Whitney))。メチルアミンと水酸化カリウムの間にも差があった。脱色サンプルの平均値は1685HEPL/mg凍結乾燥エキスで、天然エキス及びpH6のサンプル(処理なし)で得られた結果(それぞれ、952及び1262HEPL/mg凍結乾燥エキス)よりも高かった。
50%阻害に達するのに必要な凍結乾燥のマイクログラムμg数はHEPL/mg値と相関を示さなかった(ピアソンの積率相関(Pearson Product Moment Correlation)、P>0.050)。
SDS及びウェスタンブロット
SDS及びウェスタンブロットを全脱色サンプルについて実施し、天然エキス(オオアワガエリ)と比較した。
大部分の塩基性処理で(28のうち26)タンパク質含量は天然及び未処理サンプルより高く、塩基性処理が結果に貢献していることが確認された。
ELISA競合(REINA)に関しては、使用されたpH又は塩基処理に応じた明確な傾向はなかったが、水酸化アンモニウムによる処理は高い効力を示した。
タンパク質プロフィール及びアレルゲンプロフィールは、異なるpH処理にも異なる塩基にも顕著に影響されなかった。
一般に、塩基による処理は、タンパク質濃度及び主要アレルゲン含量に関して良好な結果をもたらした。SDS-PAGEにおけるタンパク質及び主要アレルゲンプロフィールは、塩基性処理によって影響を受けなかった。
脱色オリーブエキスを方法手順A~Cに従って得た。
タンパク質含量
最大タンパク質含量は、メチルアミンpH9を用いた処理後に得られ(862μgタンパク質/mg凍結乾燥エキス)、最小含量は水酸化ナトリウムpH10処理に対応する(441μgタンパク質/mg凍結乾燥エキス)。平均値は696μgタンパク質/mg凍結乾燥エキスであった(表4、図11及び12)。
中央値は302HEPL/mg凍結乾燥エキスであった。最も高い値は、水酸化ナトリウムpH8で処理されたサンプルに対応し(582HEPL/mg)、最も低い値はメチルアミンpH7による処理であった(128HEPL/mg)(表4)。
ELISA阻害(IgE)
50%阻害に達するのに必要な凍結乾燥エキスの量はそのエキスの効力に反比例する。50%阻害に達するのに必要な凍結乾燥エキスのマイクログラム数はHEPL/mg値と有意な相関を示さなかった(スピアマンの順位相関(Spearman Rank Order Correlation)。最低値はpH9の尿素に対応し(0.043μg)、最大値は水酸化リチウムpH10であった(0.132μg)(表4)。脱色サンプルの平均値は0.088μgであった。
イムノブロット及びSDS-PAGE
SDS及びウェスタンブロットを全脱色サンプルについて実施し、天然エキスと比較した。
薄層クロマトグラフィーを全サンプルで実施し、結果を天然と比較した。参照標準(植物由来)も技術対照として使用した。
まとめ
タンパク質含量及びELISA競合(REINA):群間で有意の差は観察されなかった。
薄層クロマトグラフィーは、塩基性処理中に色素の量の減少を示した。
1.一般に、塩基によるオリーブエキスの処理は、天然と比べて、タンパク質含量に関して良好な結果をもたらした。
実施例3:ヤケヒョウヒダニ(D. pteronyssinus)
脱色ヤケヒョウヒダニエキスを方法手順A~Cに従って得た。
最大タンパク質含量は、水酸化アンモニウムpH7による処理後に得られ(710μgタンパク質/mg凍結乾燥エキス)、最小含量はpH8のCH3NH2処理に対応する(561.5μgタンパク質/mg凍結乾燥エキス)(表7)。脱色サンプルの平均値は5985μgタンパク質/mg凍結乾燥エキスであった(表7)。
特定塩基の使用に関連して、最も高いタンパク質含量値は水酸化アンモニウムで得られたが、NaOH処理は最低濃度を示した(表9、図21)。
Der p 1の最高レベルは天然エキスに対応し(20.3μg Der p 1/mg凍結乾燥エキス)、次いでpH7、及び9であった(それぞれ、平均17.6及び17.1μg Der p 1/mg凍結乾燥エキス)。脱色(サンプルの)平均値は16.1μg Der p 1/mg凍結乾燥エキスであった(図22、表7及び8)。
最も高い生物学的効力は、pH7の水酸化アンモニウムで処理されたサンプルに対応していた(707HEPL/mg凍結乾燥エキス)。最も低い値はNaOHによる処理に対応している(pH10及び11でそれぞれ185.5及び168.3HEPL/mg凍結乾燥エキス)(表7)。脱色サンプルの中央値は、356HEPL/mg凍結乾燥エキスであった(図29及び30)。
50%阻害に達するのに必要な凍結乾燥のマイクログラム数はHEPL/mg値に反比例していた。
pH群間で明確な差異は観察されなかった(図26、表8)。使用された塩基に関し、最も高い50%阻害値はLiOHによる処理に対応していた(平均0.043μg)。最低値は、天然エキス、水酸化アンモニウムによる処理、及びpH6のサンプル(処理なし)で観察された(それぞれ、0.030、0.39及び平均0.04)(図27、表9)。
イムノブロット及びSDS-PAGE
SDS及びウェスタンブロットを全脱色サンプルについて実施し、天然エキスと比較した。
タンパク質含量は処理による影響を受けなかった(群間で有意差なし)。脱色サンプルは天然エキスよりも高いタンパク質含量を示した。しかしながら、この差は有意ではなかった(1個の天然サンプルのみ)。pH6のサンプル(処理なし)でさえ天然エキスより高いタンパク質含量を示し、処理サンプルと同様の値であった。従って、天然エキスと比較したタンパク質含量の増加は、これらのサンプルのより高度な精製によるものにちがいない(5回以上透析された)。
ELISA競合(REINA)及び阻害に関して、より悪い結果(より低いHEPL/mg及びより高い50%阻害のμg数)は尿素処理サンプルに対応していた。
1.タンパク質含量は、天然エキスより“脱色”エキスで高い。
2.高pH処理は、イムノブロットで高分子量タンパク質の認識を低下させた。
Claims (15)
- 脱色アレルゲンエキスの製造法であって、
a)天然アレルゲンエキスをpH7~11に1分~24時間塩基性化し;次いで
b)該エキスを第一の分子画分除去工程に付して3.5kDa未満の分子サイズを有する分子を除去し;そして
c)pHを中性に調整して脱色アレルゲンエキスを製造する
ことを含む方法。 - さらに重合を含み、該重合は、
d)脱色アレルゲンエキスをアルデヒドと接触させ;次いで
e)該エキスを第二の分子画分除去工程に付して100kDa未満の分子サイズを有する分子を除去し;次いで
f)工程e)を、アレルゲンエキスが、室温での測定で210μS/cm未満の導電率を有するまで、及び/又はUVもしくは可視スキャニングによる測定でアルデヒドがなくなるまで、3~15℃、好ましくは3~5℃で実施し、脱色重合アレルゲンエキスを得る
ことを含む、請求項1に記載の方法。 - 前記天然アレルゲンエキスが少なくとも7.5、8.0、8.5又は9.0のpHに塩基性化され、そして前記天然アレルゲンエキスが11、10.5、10.0、9.5、又は9.0以下のpHに塩基性化される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 工程a)が約15分間実施される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 前記第一及び第二の低分子除去工程b)及びe)が、それぞれ独立に、限外ろ過工程、透析ろ過工程、透析工程、又はろ過を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 工程c)のpHが、pH7.0~pH7.5、例えばpH7.3~pH7.4に調整される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 請求項1及び3から5のいずれか1項に記載の方法に従って得ることができる脱色アレルゲンエキス。
- 請求項2から6のいずれか1項に記載の方法に従って得られたまたは得ることができる脱色重合アレルゲンエキス。
- 前記アレルゲンエキスが、食物アレルゲン(例えば落花生)、空中浮遊アレルゲン(例えば、花粉(樹木の花粉、雑草の花粉、草の花粉、穀草の花粉)、チリダニ、菌類、カビ)、上皮アレルゲン(獣毛、動物の鱗屑、例えば、ネコの毛及びフケ、ならびにイヌの毛及びフケ)及び昆虫アレルゲン(例えば、ゴキブリ、ノミ、ならびにハナバチ及びカリバチの毒)から選ばれる原料物質から誘導される、請求項7又は請求項8に記載のアレルゲンエキス。
- 前記アレルゲンエキスが、食物アレルゲン(落花生(Arachis hypogaea))、花粉(ヨーロッパハンノキ(Alnus glutinosa)、シラカバ(Betula alba)、セイヨウハシバミ(Corylus avellana)、アリゾナイトスギ(Cupressus arizonica)、オリーブ(Olea europaea)、スズカケノキ属(Platanus sp)、ギョウギシバ(Cynodon dactylon)、カモガヤ(Dactylis glomerata)、オニウシノケグサ(Festuca elatior)、シラゲガヤ(Holcus lanatus)、ホソムギ(Lolium perenne)、オオアワガエリ(Phleum pratense)、ヨシ(Phragmites communis)、ナガハグサ(Poa pratensis)、ブタクサ(Ambrosia elatior)、オウシュウヨモギ(Artemisia vulgaris)、シロザ(Chenopodium album)、カベイラクサ(Parietaria judaica)、ヘラオオバコ(Plantago lanceolata)、ノハラヒジキ(Salsola kali)、エンバク(Avena sativa)、オオムギ(Hordeum vulgare)、ライムギ(Secale cereale)、パンコムギ(Triticum aestivum)、トウモロコシ(Zea mays))、ダニ(アシブトコナダニ(Acarus siro)、ネッタイタマニクダニ(Blomia tropicalis)、コナヒョウヒダニ(Dermatophagoides farinae)、デルマトファゴイデス・ミクロセラス(Dermatophagoides microceras)、ヤケヒョウヒダニ(Dermatophagoides pteronyssinus)、シワチリダニ(Euroglyphus maynei)、サヤアシニクダニ(Lepidoglyphus destructor)、ケナガコナダニ(Tyrophagus putrescentiae)、イエニクダニ(Glycyphagus domesticus)、コルトグリファス・アルクアツス(Chortoglyphus arcuatus))、菌類及びカビ(アルテルナリア・アルテルナータ(Alternaria alternata)、クラドスポリウム・ヘルバルム(Cladosporium herbarum)、アスペルギルス・フミガツス(Aspergillus fumigatus))、上皮アレルゲン(ネコの毛及びフケ、イヌの毛及びフケ、ウマの毛及びフケ、ヒトの毛及びフケ、ウサギの毛及びフケ、ラットの毛及びフケ、マウスの毛及びフケ、モルモットの毛及びフケ、ならびに羽毛)、昆虫アレルゲン(アリ、ノミ、ゴキブリ、カリバチの毒及びハナバチの毒)及び節足動物アレルゲン(ダニ)から選ばれる原料物質から誘導される、請求項7又は請求項8に記載のアレルゲンエキス。
- 前記原料物質が、花粉(オオアワガエリ、オリーブ及びシラカバ(シダレカンバ(pendula))及びダニ(ヤケヒョウヒダニ)から選ばれる、請求項7又は請求項8に記載のアレルゲンエキス。
- アレルギーの治療に使用するための請求項7~11のいずれか1項に定義のアレルゲンエキス。
- 花粉アレルギーの治療に使用するための請求項12に記載のアレルゲンエキス。
- 請求項7~11のいずれか1項に記載のアレルゲンエキスを含む医薬組成物。
- 請求項7~11のいずれか1項に定義のアレルゲンエキスを含むワクチン。
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