JP2022510170A - 細胞膜を含有するナノ粒子およびその使用 - Google Patents

細胞膜を含有するナノ粒子およびその使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、細胞膜を含有するナノ粒子およびその使用に関する。ナノ粒子は、内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含み、前記内側コンパートメント（または内部コア）は、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供しない。本開示はまた、ナノ粒子を作製する方法にも関する。本開示は、ナノ粒子を含む組成物、およびナノ粒子を使用する方法にさらに関する。

Description

Ｉ．関連出願
本出願は、すべての目的のため、その開示の全体が参照により組み込まれている、２０１８年１１月２６日に出願の米国仮特許出願第６２／７７１，５６１号への優先権を主張する。
ＩＩ．発明の分野
本開示は、細胞膜を含有するナノ粒子およびその使用に関する。ナノ粒子は、内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含み、前記内側コンパートメント（または内部コア）は、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供しない。本開示はまた、ナノ粒子を作製する方法にも関する。本開示は、ナノ粒子を含む組成物、およびナノ粒子を使用する方法にさらに関する。
ＩＩＩ．発明の背景
ＷＯ２０１３／０５２１６７（Ａ２）は、膜にカプセル封入したナノ粒子および使用方法に関する。Zhang et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2017, 56:14075-14079は、コレステロールに富む細胞膜由来ベシクルへの低分子治療剤のリモートローティングに関する。Ying et al., Adv. Funct. Mater. 2018, 28, 1801032は、治療剤の疾患－標的送達のためのリモートローディング血小板ベシクルに関する。Brian et al., Nature Biotechnology, 33:81-88 (2015)は、マウスにおいて、細菌外毒素を隔離して、重症な侵襲性感染から防御する操作されたリポソームに関する。
細胞膜を含有する新規なナノ粒子が必要とされている。本発明は、この必要性および当分野における関連する必要性に対処する。
国際公開第２０１３／０５２１６７（Ａ２）号
Zhang et al.,Angew.Chem.Int.Ed. 2017, 56:14075-14079 Ying et al., Adv. Funct. Mater. 2018, 28, 1801032 Brian et al., Nature Biotechnology, 33:81-88 (2015)
ＩＶ．発明の要旨
一態様では、本開示は、内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供せず、ａ）前記内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性の液体を含み、かつ／またはｂ）前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含み、ただし、前記細胞膜が赤血球に由来する場合、前記内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性である、ナノ粒子を提供する。
別の態様では、本開示は、内側コンパートメント（または内部コア）および外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供せずかつ／または細胞液または生理液に等張性であり、例えば内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性の液体を含み、前記外側表面（またはシェル）が、細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、ナノ粒子を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、ａ）細胞に由来する細胞膜にステロイドを接触させて組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、ａ）細胞に由来する細胞膜にステロイドを接触させて組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ、ならびにｃ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記ナノ粒子に外因性エネルギーを与え、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む前記内側コンパートメント（または内部コア）、および前記レベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む前記外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、細胞液または生理液に等張性の液体中の赤血球に由来する細胞膜に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性である前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）および前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、ａ）細胞に由来する細胞膜に、水混和性溶媒に溶解したステロイドおよびスフィンゴ脂質を接触させて組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）前記組合せ物、例えば液体中の組合せ物に外因性エネルギーを与え、内側コンパートメント（または内部コア）、ならびに前記細胞膜、前記ステロイドおよび前記スフィンゴ脂質を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。
上記の方法により作製されるナノ粒子もまた提供される。
さらに別の態様では、本開示は、有効量の上記のナノ粒子を含む、医薬送達システムまたはデバイスを提供する。
さらに別の態様では、本開示は、有効量の上記のナノ粒子、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、必要とするにおいて疾患もしくは状態を処置または予防する方法であって、内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含む有効量のナノ粒子を前記対象に投与するステップであり、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供しない、ステップを含む、方法を提供する。必要に応じて、および一部の実施形態では、ａ）前記ナノ粒子の前記内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）は細胞液または生理液に等張性の液体を含み、かつ／またはｂ）前記ナノ粒子の前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜は、レベルの増強または富化したステロイドを含む。さらに、必要に応じて、および一部の実施形態では、本ナノ粒子が、赤血球に由来する細胞膜を含む場合、内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性である。一部の実施形態では、本ナノ粒子は、医薬送達システムまたは該ナノ粒子を含む医薬組成物を使用して投与される。
さらに別の態様では、本開示は、必要とする対象において疾患もしくは状態を処置または予防する医薬を製造するための、有効量の上記のナノ粒子の使用を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、有効量の上記のナノ粒子を含み、免疫原性アジュバントまたは免疫増強物質を必要に応じてさらに含む、免疫原性組成物を提供する。上記の新生物に特異的な免疫原性組成物を含むワクチンも提供される。対象において新生物を処置または予防する方法であって、免疫原性組成物またはワクチンを使用する、方法がさらに提供される。新生物から対象を処置または防御するワクチンを製造するための、有効量の新生物に特異的な免疫原性組成物の使用がさらに提供される。
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子の細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患または状態を処置あるいは予防するように構成されている免疫原性組成物であって、ナノ粒子の外側表面がその部分を含む、免疫原性組成物を提供する。上記の免疫原性組成物を含むワクチンも提供される。対象において疾患または状態に関連する部分に免疫応答を引き起こす方法であって、免疫原性組成物またはワクチンを使用する、方法がさらに提供される。部分に関連する疾患または状態から対象を防御するワクチンを製造するための、有効量の免疫原性組成物の使用がさらに提供される。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子、医薬送達システム、医薬組成物および方法を使用して、米国食品医薬品局により出版されているOrange Book: Approved Drug Products with Therapeutic Equivalence Evaluations（２０１２年３月から現在まで）に列挙されている例示的な医薬、The Merck Index (a U. S. publication, the printed 14th Edition, Whitehouse Station, N.J., USA)およびそのオンライン版（The Merck Index OnlineSM、ウエブサイトへのロード最終日は、２０１２年５月１日、火曜日）に列挙されている例示的な医薬、および米国食品医薬品局により出版されているBiologics Products & Establishmentsに列挙されている例示的な医薬を送達することができ、対応する疾患および障害を処置または予防するために使用することができる。
一部の態様では、本開示は、２０１３年３月１４日に出願され、ＵＳ２０１３／３３７０６６（Ａ１）として公開された米国出願第１３／８２７，９０６号、２０１２年５月２４日に出願され、ＷＯ２０１３／０５２１６７（Ａ２）として公開された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３９４１１、および２０１１年６月２日に出願の米国仮出願第６１／４９２，６２６号に関連する。上述の出願の全内容が参照により組み込まれる。
Ｖ．図面の簡単な説明
当業者は、以下に記載されている図面は、例示目的に過ぎないことを理解している。図面は、本教示の範囲を決して限定することを意図するものではない。
図１は、コレステロールに富むＲＢＣ膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＲＢＣ－Ｖ）の製剤および特徴付けを示す図である。（Ａ）異なる初期コレステロールローディングでの外因性コレステロールのローディング収率。（Ｂ）外因性コレステロールの添加されていない膜ベシクルと比較した、Ｃｈｏ－ＲＢＣ－Ｖ（初期ローディングは１０％）に由来するカルセインの漏出。（Ｃ）ＲＢＣ溶血に対するＭＲＳＡ培養物の上澄み液の用量依存的中和。すべての研究において、データは、平均値±標準偏差（ｎ＝３）を表す。
図２は、コレステロールに富む血小板膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＰＬ－Ｖ）の製剤および特徴付けを示すグラフである。（Ａ）異なる初期コレステロールローディングでの外因性コレステロールのローディング収率。（Ｂ）外因性コレステロールの添加されていない膜ベシクルと比較した、Ｃｈｏ－ＰＬ－Ｖ（初期ローディングは１０％）に由来するカルセインの漏出。（Ｃ）Ｃｈｏ－ＰＬ－Ｖを有する抗血小板抗体の用量依存的中和。すべての研究において、データは、平均値±標準偏差（ｎ＝３）を表す。
図３は、コレステロールに富むマクロファージ膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＭΦ－Ｖ）の製剤および特徴付けを示すグラフである。（Ａ）異なる初期コレステロールローディングでの外因性コレステロールのローディング収率。（Ｂ）外因性コレステロールの添加されていない膜ベシクルと比較した、Ｃｈｏ－ＭΦ－Ｖ（初期ローディングは１０％）に由来するカルセインの漏出。（Ｃ）マクロファージ細胞による培養物中でＩＬ－６産生の低下により反映されたＬＰＳ（内毒素）の用量依存的中和。すべての研究において、データは、平均値±標準偏差（ｎ＝３）を表す。
図４は、コレステロールに富む好中球膜ベシクル（Ｃｈｏ－Ｎｅｕ－Ｖ）の製剤および特徴付けを示すグラフである。（Ａ）異なる初期コレステロールローディングでの外因性コレステロールのローディング収率。（Ｂ）外因性コレステロールの添加されていない膜ベシクルと比較した、Ｃｈｏ－Ｎｅｕ－Ｖ（初期ローディングは１０％）に由来するカルセインの漏出。（Ｃ）ＴＮＦ－αの用量依存的中和。すべての研究において、データは、平均値±標準偏差（ｎ＝３）を表す。
図５は、内側コンパートメント（または内部コア）および外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を含む組成物Ａを作製する例示的な方法であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供せず、前記外側表面（またはシェル）が、原形質膜に由来する赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、例示的な方法を例示する図である。
図６は、例示的な組成物Ａの粒子サイズ分布を例示するグラフである。
図７は、組成物Ａの例示的なｉｎ ｖｉｖｏ効力を例示するグラフである。Ａ．細菌チャレンジおよび製剤処置後の最初の４８時間以内の生存曲線。Ｂ．細菌チャレンジおよび製剤の処置後４８時間生存していたマウスから取得した肺組織の細菌負荷。データは、ログ－ランク（マンテル－コックス）検定（Ａ）およびスチューデントｔ検定（Ｂ）を使用して解析した。チャレンジ／処置後、４８時間、生存している個々のマウスから取得した肺におけるＣＦＵカウント数を対数変換して、図７Ｂにプロットした。組成物Ａにより処置したマウスにおける肺の細菌数は、ビヒクル処置したマウスにおける細菌数よりもかなり少なかった。
図８は、生存率に及ぼす組成物Ａの例示的な再現性効果を例示するグラフである。Ａ．マウスにおける、ＭＲＳＡを気管内注入した直後に、２種の異なるロットの組成物Ａである５－２５７－０６および５－２５７－１６を気管内投与した単一研究からの生存曲線。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。Ｂ．マウスにおける、ＭＲＳＡを気管内注入した直後に、３種のロットの組成物Ａである５－２５７－０６、５－２５７－１６および５－２６０－０２を気管内投与した３つの個別の研究からの平均した生存曲線。データは平均値±標準誤差として表されている。各時間点（１９、２６、４８または９６時間）における、ビヒクル対ロット処置群における生存率を、対応のないスチューデントｔ検定を使用して解析した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
図９は、生存率に及ぼす組成物Ａの例示的な用量－曲線効果を例示するグラフである。ロット５－２６６－０１をこの研究に使用した。生存日（survival date）は、ビヒクル、１９ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇの５－２６６－０１を投与した合計で４０匹のマウス、および６ｍｇ／ｋｇの５－２６６－０１を投与した合計で３０匹のマウスを用いた４つの独立した検定からプールした。
図１０は、肺の細菌負荷に及ぼす組成物Ａの例示的な効果を例示するグラフである。組成物Ａのロット５－２５７－１６を２２．５ｍｇ／ｋｇで、またはビヒクルを投与した。マウスの肺は、チャレンジ／処置して２４時間後に取得した。
図１１は、ＤｉＲ－組成物Ａのｉｎ ｖｉｔｒｏでの例示的な特徴付けを例示する図である。上部パネルの表は、ＤｉＲ－組成物Ａの動的光散乱法データを示している。底部のグラフは、最大で１８０時間、透析した後のＤｉＲ－組成物Ａの蛍光強度の安定性を示している。
図１２は、気管内投与後のＤｉＲ－組成物Ａの例示的な肺取り込み量および分布を示すグラフである。時間は、ＤｉＲ－組成物Ａの気管内投与後の分数または時間数を示す。各試料は、単一マウスの肺を表す。
図１３は、気管内投与後のマウスの肺における、ＤｉＲ－組成物Ａの例示的な保持時間の経過を例示するグラフである。
図１４は、気管内投与後のマウスの肺における、ＤｉＲ－組成物Ａの例示的な保持時間の経過を例示するグラフである。
図１５は、２種の異なる濃度における、ＤｉＲ－組成物Ａの例示的な取り込み分布を例示する図である。２０ｍｇ／ｍＬ（２２ｍｇ／ｋｇ）または４０ｍｇ／ｍＬ（４４ｍｇ／ｋｇ）のＤｉＲ－組成物Ａを気管内投与したマウスの肺における、ＤｉＲ－組成物Ａの取り込み分布間に、差異は全くまたはほとんどない。
ＶＩ．発明の詳細な説明
本発明の実施は、特に示さない限り、ナノテクノロジー、ナノエンジニアリング、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、免疫学、および薬理学という従来の技法を使用し、これらは、当業者の範囲内にある。このような技法は、分子クローニングなどの文献中で十分に説明されている：A Laboratory Manual, 2nd ed. (Sambrook et al., 1989); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984)；Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed., 1987); Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, および定期的な更新物); PCR: The Polymerase Chain Reaction (Mullis et al., eds., 1994); Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., (Lippincott, Williams & Wilkins 2003),およびRemington, The Science and Practice of Pharmacy, 22th ed., (Pharmaceutical Press and Philadelphia College of Pharmacy at University of the Sciences 2012)。
特に定義されない限り、本明細書において使用される技術的用語および科学的用語はすべて、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において言及されている特許、出願、公開出願および他の刊行物はすべて、それらの全体が参照により組み込まれている。この項目において説明されている定義が、参照により本明細書に組み込まれている特許、出願、公開出願および他の刊行物において説明されている定義に反するか、または他には一致しない場合、この項目において説明されている定義が、参照により本明細書に組み込まれている定義よりも優先する。
Ａ．定義
本発明の理解を容易にするため、本明細書において使用するいくつかの用語および略称を以下の通り定義する。
本発明の要素、または好ましいその実施形態を導入する場合、品詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および「前記」は、該要素の１つまたは複数が存在することを意味することが意図されている。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、包括的なものであることが意図されており、列挙されている要素以外の追加の要素が存在してもよいことを意味する。
用語「および／または」は、２つまたはそれより多い物品の一覧表示で使用されている場合、列挙されている物品のいずれの１つも、それ自体が使用され得ること、または列挙されている物品のいずれか１つまたは複数と組み合わせて使用され得ることを意味する。例えば、表現「Ａおよび／またはＢ」は、ＡとＢのどちらか一方または両方を、すなわちＡ単独、Ｂ単独、またはＡとＢとの組合せを意味することが意図されている。表現「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」は、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、ＡとＢとの組合せ、ＡとＣとの組合せ、ＢとＣとの組合せ、またはＡ、ＢおよびＣの組合せを意味することが意図されている。
細胞膜：用語「細胞膜」とは、本明細書で使用する場合、細胞もしくは出現したウイルス粒子の内部またはそれらの周囲における、選択的な障壁として作用する構造を取り囲んでいるまたは分離している生物膜を指す。細胞膜は、イオンおよび有機分子に対して選択的な透過性があり、細胞内外の物質の移動を制御している。細胞膜は、必要に応じてタンパク質および炭水化物に関連する、単一または二重リン脂質層を含む。本明細書で使用する場合、細胞膜とは、細胞もしくは細胞小器官、またはそれらに由来するものの、天然に存在する生物膜から得られる膜を指す。本明細書で使用する場合、用語「天然に存在する」とは、天然に存在しているものを指す。本明細書で使用する場合、用語「それらに由来する」とは、細胞膜を単離すること、膜の一部または断片を生成すること、細胞または細胞小器官から採取した膜に由来するまたは膜内の脂質、タンパク質もしくは炭水化物などのある特定の構成成分を除去および／または添加することなどの、天然の膜のその後の何らかの修飾を指す。膜は、任意の好適な方法によって、天然に存在する膜に由来し得る。例えば、膜は、細胞もしくはウイルスから調製または単離され得、調製後または単離後の膜は、他の物質または材料と一緒にされて、誘導膜を形成することができる。別の例では、細胞またはウイルスは、組換えにより操作されて、その膜にｉｎ ｖｉｖｏで取り込まれる「非天然」物質を生成することができ、細胞膜またはウイルス膜は、細胞またはウイルスから調製されるかまたは単離されて、誘導膜を形成することができる。
様々な実施形態では、単一ラメラまたは多層ラメラのナノ粒子のどちらか一方を覆う細胞膜は、コレステロール、遊離脂肪酸およびリン脂質などの他の脂質構成成分により飽和または不飽和となるようさらに改変され得、やはりまた細胞の表面抗原などの内在性または添加されたタンパク質および炭水化物を含むことができる。そのような場合、過量の他の脂質構成成分が膜壁に添加されることができ、これにより、膜壁における濃度が平衡に到達するまで低下し、これは、ナノ粒子の環境に依存し得る。膜はまた、ナノ粒子の活性を向上することがあるか、または向上しないことがある、他の薬剤を含んでもよい。他の例では、抗体およびアプタマーなどの官能基が、膜の外側表面に添加されて、がん細胞に見出される細胞表面エピトープなどを標的とする部位を増強することができる。ナノ粒子の膜はまた、以下に限定されないが、金、銀および合成ナノ粒子を含めた、生分解性の陽イオン性ナノ粒子とすることができる粒子を含むことができる。
合成膜または人工膜：本明細書で使用する場合、用語「合成膜」または「人工膜」とは、ポリマーおよび液体などの有機材料および無機材料から生成されるヒトが作り出した膜を指す。幅広い合成膜が当分野で周知である。
ナノ粒子：一部の実施形態では、用語「ナノ粒子」とは、本明細書で使用する場合、ナノ構造体、粒子、ベシクル、または約１ｎｍ～約１０μｍの間の少なくとも１つの寸法（例えば、高さ、長さ、幅または直径）を有するそれらの断片を指す。全身使用の場合、約３０ｎｍ～約５００ｎｍ、または約３０ｎｍ～約３００ｎｍ、または約５０ｎｍ～約２５０ｎｍの平均径が好ましいものとなり得る。用語「ナノ構造体」には、以下に必ずしも限定されないが、粒子および操作された特徴特徴が含まれる。粒子および操作された特徴は、例えば、規則的形状または不規則形状を有することができる。このような粒子はまた、ナノ粒子とも称される。ナノ粒子は、有機材料または他の材料からなることができ、代替として、多孔質粒子を備えることができる。ナノ粒子の層は、単層のナノ粒子、またはナノ粒子の凝集を有する層を備えることができる。一部の実施形態では、膜を含む外側表面（またはシェル）により覆われている内側コンパートメント（または内部コア）を含む、またはこれからなるナノ粒子が、本明細書において議論されている。本開示は、本明細書に記載されている膜を用いてコーティングされ得る、現在公知の任意のナノ粒子および今後開発されるナノ粒子を企図する。
薬学的に活性な：用語「薬学的に活性な」とは、本明細書で使用する場合、生存物質、特にヒト身体の細胞および組織に及ぼす物質の有益な生物活性を指す。「医薬活性剤」または「薬物」は、薬学的に活性な物質であり、「薬学的活性成分」（ＡＰＩ）は、薬物中の薬学的活性物質である。
薬学的に許容される：用語「薬学的に許容される」とは、本明細書で使用する場合、動物、およびより詳細にはヒトおよび／または非ヒト哺乳動物において使用するのに安全な他の製剤に加えて、州政府または中央政府の規制機関により承認を受けていること、または米国薬局方、その他の一般に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。
薬学的に許容される塩：用語「薬学的に許容される塩」とは、本明細書で使用する場合、本開示において、複数の薬物コンジュゲートなどの、化合物の酸付加塩または塩基付加塩を指す。薬学的に許容される塩は、親のナノ粒子または化合物の活性を保持している任意の塩であって、投与される対象、および投与される状況において、いかなる有害作用も望ましくない作用ももたらさない上記の塩である。薬学的に許容される塩は、以下に限定されないが、システインを含むアミノ酸から誘導され得る。塩として化合物を生成する方法は、当業者に公知である（例えば、Stahl et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Wiley-VCH; Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, 2002; Berge et al., J Pharm. Sci. 66: 1, 1977を参照されたい）。一部の実施形態では、「薬学的に許容される塩」は、非毒性の生物学的に耐容されるか、またはそうでない場合、対象に対する投与に生物学的に好適な、本明細書において表されているナノ粒子もしくは化合物の遊離酸または遊離塩基の塩を意味することが意図されている。一般には、Berge, et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19を参照されたい。好ましい薬学的に許容される塩は、過度の毒性、刺激またはアレルギー反応なしに、対象の組織と接触するのに薬理学的に有効かつ好適なものである。本明細書に記載されているナノ粒子または化合物は、十分に酸性な基、十分に塩基性の基、両方のタイプの官能基、または各タイプを１つより多く有することができ、したがって、いくつかの無機塩基または有機塩基、ならびに無機酸および有機酸と反応して、薬学的に許容される塩を形成する。
薬学的に許容される塩の例には、硫酸塩、ピロ硫酸塩（pyrosul fate）、硫酸水素塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン－１，４－二カルボン酸塩、ヘキシン－１，６－二カルボン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、プロピルスルホン酸塩、ベシル酸塩、キシレンスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、［ガンマ］－ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩およびマンデル酸塩が含まれる。
薬学的に許容される担体：用語「薬学的に許容される担体」とは、本明細書で使用する場合、多重薬物コンジュゲートなどのナノ粒子または化合物が一緒に投与される、賦形剤、希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／またはビヒクルを指す。このような担体は、水、およびピーナッツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油など、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールもしくは他の合成溶媒などの石油起源、動物起源、植物起源または合成起源のものを含めた油などの滅菌液体とすることができる。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度を調節する薬剤もまた、担体とすることができる。担体と組み合わせて組成物を生成する方法は、当業者に公知である。一部の実施形態では、「薬学的に許容される担体」という言い回しは、医薬品投与に適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図されている。薬学的活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当分野で周知である。例えば、Remington, The Science and Practice of Pharmacy. 20''' ed., (Lippincott, Williams & Wilkins 2003)を参照されたい。慣用的な媒体または薬剤のいずれも、活性成分と適合しない場合を除き、組成物中でのこのような使用が企図される。
リン脂質：用語「リン脂質」とは、本明細書で使用する場合、ジグリセリド、ホスフェート基、およびコリンなどの単一有機分子を含有する多数の脂質のいずれかを指す。リン脂質の例には、以下に限定されないが、ホスファチジン酸（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｅ ａｃｉｄ）（ホスファチデート）（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（セファリン）（ＰＥ）、ホスファチジルコリン（レシチン）（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、および以下に限定されないが、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトールリン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトールビスリン酸（ＰＩＰ２）およびホスファチジルイノシトール三リン酸（Ｐ１Ｐ３）を含むホスホイノシタイドが含まれる。ＰＣの追加例には、当分野において定義されている、ＤＤＰＣ、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＲＰＣおよびＤＥＰＣが含まれる。
治療有効量：本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」とは、対象の疾患または状態の性質および重症度を鑑みて特定の対象に投与されると、所望の治療効果を有する量、例えば、標的疾患もしくは状態を治癒する、予防する、阻害する、または少なくとも部分的に抑止する、または部分的に予防する量を指す。より多くの特定の実施形態は、以下の投与の項目の医薬調製物および方法に含まれる。一部の実施形態では、用語「治療有効量」または「有効量」とは、細胞、組織または対象に単独でまたは追加的な治療剤と組み合わせて投与すると、溶血性疾患もしくは状態などの疾患または状態、あるいはそのような疾患もしくは状態の進行を予防または改善するのに有効な治療剤の量を指す。治療有効用量は、症状の改善、例えば関連する医療状態の処置、治癒、予防もしくは改善、またはこのような状態の処置、治癒、予防もしくは改善の速度の向上をもたらすのに十分な治療剤のそのような量をさらに指す。治療有効用量とは、単独で投与される活性成分を個体に適用した場合、その成分単独のことを指す。治療有効用量とは、組合せ物に適用されると、組み合わせて、連続的にまたは同時に投与されるかに関わらず、治療作用をもたらす活性成分の組合せ量を指す。
「処置すること」または「処置」または「緩和」とは、標的とする病理学的状態もしくは障害を治癒しない場合、またはそれらの状態の再発を予防しない場合、その目的が緩徐（低下）することである治療的処置を指す。対象は、治療的量の治療剤を服用した後に、この対象が、特定の疾患の１つまたは複数の兆候および症状の観察可能なならびに／または測定可能な低下もしくは消失を示す場合に、「処置」が成功されている。兆候または疾患の症状の軽減はまた、患者によって体感されてもよい。患者はまた、患者が安定疾患を経験する場合、処置されたと見なされる。一部の実施形態では、治療剤による処置は、患者が、処置後、３か月、処置後、好ましくは６か月、より好ましくは１年、さらにより好ましくは２年またはそれより長い年の間、無疾患状態となるのに有効である。疾患における処置および改善の成功を評価するためのこれらのパラメータは、適切な当業者となる医師が精通している常套的手順によって容易に測定可能である。
本明細書で使用する場合、「予防的」処置は、疾患の発症、疾患の症状または医療状態の先送り、現れる可能性のある症状の抑制、あるいは疾患もしくは症状を発症または再発するリスクを低減することを示すことが意図されている。「治癒的」処置は、既存の疾患、症状もしくは状態の重症度の軽減、またはそれらの悪化の抑制を含む。
用語「組合せ物」とは、１つの投与単位形態にある固定された組合せ物または組合せ投与のためのパーツのキットのどちらか一方を指し、この場合、ナノ粒子または化合物、および組合せパートナー（例えば、「治療剤」または「共剤」とも称される、以下に説明されている別の薬物）は、同時に独立してまたは時間間隔内で個別に投与され得、とりわけこのような時間間隔により、組合せパートナーは、協同効果、例えば相乗効果を示すことが可能である。本明細書において利用される、用語「共投与」または「組合せ投与」などは、それを必要とする単一対象（例えば、患者）に対して、選択した組合せパートナーを投与することを包含することが意図され、薬剤が、同じ投与経路により、または同時に必ずしも投与される必要がない治療レジメンを含むことが意図されている。用語「組合せ医薬」は、本明細書で使用する場合、１種より多い活性成分を混合してまたは一緒にして得られる生成物を意味し、活性成分の固定および固定されない組合せ物の両方を含む。用語「固定された組合せ物」は、活性成分、例えばナノ粒子または化合物および組合せパートナーの両方が、単一実体または単一投与量の形態で患者に同時に投与されることを意味する。用語「固定されない組合せ物」は、活性成分、例えば、ナノ粒子または化合物および組合せパートナーの両方が、患者に、個別の実体として、同時に、一斉にまたは逐次のいずれかで、特定の時間制限なしに投与されることを意味し、この場合、このような投与は、患者の身体において、２種の部分または化合物が治療有効レベルとなることを実現する。後者の固定されない組合せ物はまた、カクテル療法、例えば、３種またはそれより多い活性成分の投与に適用される。
本明細書に記載されている、本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「からなる」、および／または「から実質的になる」ことを含むことが理解される。
本開示を通じて、本発明の種々の態様が、範囲形式で提示される。範囲形式での説明は、単に便宜上および簡潔性のために過ぎないこと、および本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことが理解されるべきである。したがって、範囲の説明は、具体的に開示されたすべての可能な部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数値を有すると見なされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの具体的に開示された部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５および６を有すると見なされるべきである。これは、その範囲の幅に関わらず適用される。
本明細書で使用する場合、必要とする対象は、動物、非ヒト哺乳動物またはヒトを指す。本明細書で使用する場合、「動物」は、ネコ、イヌ、ウマ、メウシ、オウシ、ブタ、ロバ、ヒツジ、コヒツジ、ヤギ、マウス、ウサギ、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、サルおよびチンパンジーを含む霊長類などのペット、家畜、産業動物、競技用動物および実験動物を含む。
本発明の他の目的、利点および特徴は、添付の図面と連携した以下の明細書から明白となろう。
Ｂ．細胞膜を含むナノ粒子
一態様では、本開示は、内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供せず、ａ）前記内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性の液体を含み、かつ／またはｂ）前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含み、ただし、前記細胞膜が赤血球に由来する場合、前記内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性である、ナノ粒子を提供する。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、任意の好適な方法で、細胞液または生理液と等張性であり得る。例えば、内側コンパートメント（内部コア）は、細胞液または生理液と等張性の液体を含むことができる。別の例では、内側コンパートメント（内部コア）は、液体を用いて再構成されると、細胞液または生理液に等張性の液体を形成する乾燥物質を含むことができる。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、任意の好適な環境で、細胞液または生理液と等張性であり得る。例えば、内側コンパートメント（内部コア）は、細胞または対象の外側に存在する細胞液または生理液と等張性であり得る。別の例では、内側コンパートメント（内部コア）は、細胞または対象内に存在する細胞液または生理液と等張性であり得る。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、細胞に含まれる細胞液と等張性の液体を含むことができる。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、液体により再構成されると、細胞中に存在する細胞液と等張性の液体を形成する乾燥物質を含むことができる。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、任意の好適な細胞に含まれる細胞液と等張性であり得る。細胞は、原核細胞または真核細胞とすることができる。一部の実施形態では、細胞は、単細胞生物、例えば細菌または真菌の細胞とすることができる。細胞はまた、多細胞生物、例えば植物、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトの細胞とすることができる。
一部の実施形態では、細胞は、動物細胞、例えば非ヒト哺乳動物細胞またはヒト細胞である。細胞は、任意の好適な動物細胞とすることができる。例えば、細胞は、結合組織、例えば、血液、骨、腱、靭帯、脂肪または疎性結合組織、線維性結合組織、骨格結合組織または流体結合組織の細胞とすることができる。別の例では、細胞は、筋肉組織、例えば、内臓筋または平滑筋、筋骨格または心筋の細胞とすることができる。さらに別の例では、細胞は、神経組織の細胞、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）または末梢神経系（ＰＮＳ）における細胞とすることができる。さらに別の例では、細胞は、上皮組織、例えば、単層扁平上皮、層状扁平上皮、単層立方上皮、移行上皮、偽重層円柱上皮（繊毛円柱上皮としても公知である）、円柱上皮、腺上皮または繊毛円柱上皮の細胞とすることができる。さらに別の例では、細胞は、神経系、心血管系、循環系、脈管系、消化系、内分泌系、免疫系、外皮系、リンパ系、筋骨格系、生殖系、呼吸器系、呼吸器、換気系、泌尿器系または腎臓系または尿路の細胞とすることができる。さらに別の例では、細胞は、血液細胞、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞とすることができる。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、任意の好適な環境で、生理液と等張性であり得る。例えば、内側コンパートメント（内部コア）は、細胞または対象の外側に存在する生理液と等張性であり得る。別の例では、内側コンパートメント（内部コア）は、細胞または対象内に存在する生理液と等張性であり得る。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、任意の好適な対象において生理液と等張性であり得る。例えば、内側コンパートメント（内部コア）は、多細胞生物、例えば植物、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトにおける生理液と等張性とすることができる。一部の実施形態では、内側コンパートメント（内部コア）は、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトにおける生理液、例えば動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトにおける循環血液と等張性とすることができる。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、任意の好適な生理液と等張性であり得る。例えば、生理液は、神経系、心血管系、循環系、脈管系、消化系、内分泌系、免疫系、外皮系、リンパ系、筋骨格系、生殖系、呼吸器系、呼吸器、換気系、泌尿器系または腎臓系または尿路の生理液とすることができる。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞液または生理液と等張性の液体を含む。他の実施形態では、本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞液または生理液と等張性の液体を含む。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、任意の好適な材料を含むことができる。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、外側表面（またはシェル）を支持しない。任意の好適な材料が使用され得る。例えば、内側コンパートメント（内部コア）は、液体、例えば、細胞液または生理液に等張性の液体しか含み得ず、このような液体は、外側表面（またはシェル）を支持しない。別の例では、内側コンパートメント（内部コア）は、固体材料を何ら含まない。別の例では、内側コンパートメント（内部コア）は、固体材料、例えば液体を用いて再構成されると、細胞液または生理液に等張性の液体を形成する乾燥物質を含むことができる。しかし、このような材料は外側表面（またはシェル）を支持するのに十分に大きくない、かつ／または強力ではない。
本発明のナノ粒子は、細胞、または細胞源、例えば赤血球に由来する任意の好適な細胞膜を含むことができる。例えば、ナノ粒子は、細胞、例えば赤血球に由来する原形質膜または細胞内膜を含むことができる。一部の実施形態では、細胞膜は、赤血球に由来する原形質膜、例えば、ヒト赤血球に由来する原形質膜を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞、例えば赤血球に由来する、任意の好適な天然に存在する細胞膜を含むことができる。一部の実施形態では、細胞膜は、赤血球に由来する天然に存在する原形質膜、例えば、ヒト赤血球に由来する天然に存在する原形質膜を含む。
一部の実施形態では、細胞膜は、単細胞生物（例えば、細菌または真菌）または多細胞生物（例えば、植物、動物、非ヒト哺乳動物、脊椎動物またはヒト）に由来することができる。他の実施形態では、細胞膜は、血液細胞、例えば赤血球、白血球または血小板に由来することができる。さらに他の実施形態では、細胞膜は、免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、Ｂ細胞またはＴ細胞）、腫瘍またはがん細胞、および上皮細胞、内皮細胞または神経細胞などの他の細胞に由来することができる。さらに他の実施形態では、細胞膜は、造血幹細胞、骨髄幹細胞、間葉系幹細胞、心臓幹細胞、神経幹細胞を含む幹細胞などの非最終分化細胞に由来することができる。さらに他の実施形態では、細胞膜は、以下に限定されないが、エクソソーム、分泌ベシクル、シナプスベシクル、小胞体（ＥＲ）、ゴルジ装置、ミトコンドリア、液胞または核を含めた、細胞構成成分または細胞小器官に由来することができる。
一部の実施形態では、細胞膜は、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトの細胞に由来する。細胞膜は、任意の好適なタイプの細胞に由来することができる。例えば、細胞膜は、結合組織、例えば、血液、骨、腱、靭帯、脂肪または疎性結合組織、線維性結合組織、骨格結合組織または流体結合組織の細胞に由来する。別の例では、細胞は、筋肉組織、例えば、内臓筋または平滑筋、筋骨格または心筋の細胞である。さらに別の例では、細胞は、神経組織の細胞、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）または末梢神経系（ＰＮＳ）における細胞である。さらに別の例では、細胞は、上皮組織、例えば、単層扁平上皮、層状扁平上皮、単層立方上皮、移行上皮、偽重層円柱上皮（繊毛円柱上皮としても公知である）、円柱上皮、腺上皮または繊毛円柱上皮の細胞である。さらに別の例では、細胞は、神経系、心血管系、循環系、脈管系、消化系、内分泌系、免疫系、外皮系、リンパ系、筋骨格系、生殖系、呼吸器系、呼吸器、換気系、泌尿器系または腎臓系または尿路の細胞である。さらに別の例では、細胞は、血液細胞、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞である。さらに別の例では、細胞膜は、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む。
本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、レベルの増強または富化した任意の好適なステロイドを含むことができる。例えば、ステロイドは、真菌ステロイド、動物ステロイド、植物ステロイドまたは原核生物のステロイドとすることができる。例示的な真菌ステロイドは、エルゴステロール、エルゴスタ－５，７，２２，２４（２８）－テトラエン－３β－オール、ザイモステロール、ラノステロールまたは５，６－ジヒドロエルゴステロールを含む。動物ステロイドは、脊椎動物のステロイドまたは昆虫ステロイドとすることができる。例示的な昆虫ステロイドは、エクジステロイド、例えば、２０－ヒドロキシエクジソン（エクジステロンまたは２０Ｅ）とすることができる。
例示的な脊椎動物のステロイドは、ステロイドホルモンまたはコレステロールとすることができる。一部の実施形態では、脊椎動物のステロイドは、コレステロールとすることができる。他の実施形態では、ステロイドホルモンは、性ステロイド、例えばアンドロゲン、エストロゲン、またはプロゲストーゲン、コルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドまたはミネラロコルチコイド、またはタンパク同化ステロイド、例えばテストステロンまたはそれらのエステルとすることができる。
例示的な植物ステロイドは、アルカロイド、強心配糖体、フィトステロールまたはブラシノステロイドとすることができる。例示的な原核生物のステロイドは、四環式ステロイドまたはトリテルペン、例えばホパンとすることができる。
一部の実施形態では、ステロイドは、コレスタン、例えば、コレステロール、コラン、例えば、コール酸、プレグナン、例えば、プロゲステロン、アンドロスタン、例えば、テストステロンまたはエストラン、例えば、エストラジオールである。他の実施形態では、ステロイドは、ゴナン、テストステロン、コール酸、デキサメタゾン、ラノステロール、プロゲステロン、メドロゲストン、β－シトステロール、コレステロールおよび５α－コレスタンからなる群から選択される。
一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、真菌細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した真菌ステロイドを含む。他の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、植物細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した植物ステロイドを含む。さらに他の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、原核細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した原核生物のステロイドを含む。さらに他の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、動物細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した動物ステロイドを含む。さらに他の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、脊椎動物細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した脊椎動物のステロイドを含む。さらに他の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、哺乳動物細胞、例えばヒト細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばヒトステロイドを含む。
一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、血液細胞に由来する細胞膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばコレステロールを含む。外側表面（またはシェル）は、任意の好適な血液細胞、例えば赤血球、白血球または血小板に由来する細胞膜を含むことができ、細胞膜は、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばコレステロールを含む。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、血液細胞、例えば赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばコレステロールを含む。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、ヒト血液細胞、例えば、ヒト赤血球、ヒト白血球および／またはヒト血小板に由来する原形質膜を含み、細胞膜は、レベルの増強または富化したヒトステロイド、例えばコレステロールを含む。
本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、ステロイドを含むことができ、そのレベルは、任意の好適な方法によって増強または富化されている。例えば、外側表面（またはシェル）の細胞膜中のレベルの増強または富化したステロイドは、外から添加されたステロイドによるものとすることができる。別の例では、外側表面（またはシェル）の細胞膜におけるレベルの増強または富化したステロイドは、その膜中にレベルの増強または富化したステロイドを含有するように改変されている細胞に由来する細胞膜の使用によるものとすることができる。
本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）の細胞膜は、任意の好適なレベルのステロイドを含むことができる。例えば、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、細胞膜中のステロイドの基底レベルよりも、少なくとも０．１％、例えば、少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、４倍、５倍、またはそれより高いレベルのステロイドを含むことができる。
一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、例えば、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％となる外から添加したステロイドを含むことができる。必要に応じて、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、細胞膜の総膜タンパク質重量と比べると、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、例えば、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％となる外から添加したステロイドを含むことができる。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、血液細胞に由来する細胞膜を含むことができ、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、例えば、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％となる外から添加したステロイド、例えばコレステロールを含む。必要に応じて、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、血液細胞に由来する細胞膜を含むことができ、細胞膜の総膜タンパク質重量と比べると、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、例えば、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％となる外から添加したステロイド、例えばコレステロールを含む。
一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）、例えば、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％または１００％のステロイドを含むことができる。必要に応じて、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、細胞膜の総膜タンパク質重量と比べると、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）、例えば、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％または１００％のステロイドを含むことができる。一部の実施形態では、「１００％」は、ステロイド、例えばコレステロールの量またはレベルと総膜タンパク質重量が等しいことを意味する。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、血液細胞に由来する細胞膜を含むことができ、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）、例えば、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％または１００％のステロイド、例えばコレステロールを含む。必要に応じて、外側表面（またはシェル）の細胞膜は、血液細胞に由来する細胞膜を含むことができ、細胞膜の総膜タンパク質重量と比べると、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）、例えば、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％または１００％のステロイド、例えばコレステロールを含む。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、任意の好適なｐＨを有することができる。例えば、内側コンパートメント（内部コア）は、約４～約１０の範囲、例えば、約６～約９または約６、６．５、７、７．５、８、８．５または９のｐＨを有することができる。
本発明のナノ粒子は、放出可能なカーゴ（ｃａｒｇｏ）をさらに含むことができる。ナノ粒子は、任意の好適な位置で放出可能なカーゴを含むことができる。例えば、放出可能なカーゴは、内側コンパートメント（内部コア）内もしくはその上、内側コンパートメント（内部コア）と外側表面（またはシェル）との間、または外側表面（またはシェル）内もしくはその上に位置することができる。放出可能なカーゴの放出は、任意の好適な機構によって引き起こされ得る。例えば、放出可能なカーゴの放出は、ナノ粒子と対象との間の接触によって、またはナノ粒子を取り囲む物理的パラメータの変化によって引き起こされ得る。ナノ粒子は、任意の好適なタイプの放出可能なカーゴを含むことができる。例えば、放出可能なカーゴは、治療剤、予防剤、診断剤もしくはマーカー剤、予後剤（ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、またはそれらの組合せとすることができる。治療剤は、細胞を死滅することができる細胞傷害性薬とすることができる。任意の好適な細胞傷害性薬が使用され得る。例えば、細胞傷害性薬は、アントラサイクリン、例えばドキソルビシンまたはダウノルビシン、タキサン、例えばドセタキセルまたはパクリタキセルまたは免疫抑制剤、例えばメトトレキセートまたはシクロスポリンＡとすることができる。別の例では、放出可能なカーゴは、金属粒子、ポリマー粒子、デンドリマー粒子もしくは無機粒子とすることができるか、または放出可能なカーゴは、金属粒子、ポリマー粒子、デンドリマー粒子または無機粒子の形態にあることができる。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、放出可能なカーゴを含まない。
ナノ粒子は、任意の好適なサイズを有することができる。例えば、ナノ粒子は、約１０ｎｍ～約１０μｍの直径を有することができる。ある特定の実施形態では、ナノ粒子の直径は、約１０ｎｍ、２０ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍおよび１０μｍ、または約１０ｎｍ～約１０μｍ内の任意の部分範囲、例えば、上記のサイズのいずれか２つの間の任意の範囲である。
ナノ粒子は、以下に限定されないが、球状、正方形、長方形、三角形、円形ディスク、立方体様形状、立方体、直方体（キューボイド）、円錐、円筒形、プリズム、角錐、直角円柱および他の規則形状または不規則形状を含めた、任意の好適な形状を有することができる。
一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞膜が誘導される細胞の構成物質を実質的に欠如している。例えば、ナノ粒子は、細胞の構成物質、例えば細胞膜が由来される赤血球を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％欠如し得る。一部の実施形態では、ナノ粒子は、赤血球に由来する原形質膜を含み、ナノ粒子は、ヘモグロビンを実質的に欠如している。例えば、ナノ粒子は、ヘモグロビンの約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％を欠如し得る。
一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞膜の天然の構造上の完全性もしくは活性、または細胞膜の構成物質を実質的に維持する。例えば、ナノ粒子は、天然の構造上の完全性を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％保持し得る。一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞膜の一次、二次、三次および／もしくは四次構造または細胞膜の構成物質を含めた、細胞膜の天然の構造上の完全性または細胞膜の構成物質を実質的に維持する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞膜の結合活性、受容体活性および／もしくは酵素活性、または細胞膜の構成物質を含めた、細胞膜の活性または細胞膜の構成物質を実質的に維持する。
本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、任意の好適な物質を含むことができる。例えば、本発明のナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、内側コンパートメント（または内部コア）を細胞液または生理液と等張性にする、任意の好適な物質を含むことができる。
一部の実施形態では、内側コンパートメント（または内部コア）は、塩、糖または糖アルコールを含むことができる。内側コンパートメント（または内部コア）は、任意の好適な塩、糖または糖アルコールを含むことができる。例えば、糖は、単糖または二糖とすることができる。例示的な単糖は、フルクトース、ガラクトースまたはグルコースとすることができる。例示的な二糖は、ラクトース、マルトースまたはスクロースとすることができる。例示的な塩は、ナトリウム、カリウムまたはマグネシウムの塩、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＭｇＣｌ２とすることができる。
別の例では、糖アルコールは、エチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、アラビトール（またはアラビニトール）、キシリトール、リビトール（またはアドニトール）、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール（ダルシトール）、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトールまたはポリグリシトールとすることができる。一部の実施形態では、糖アルコールは、ソルビトールである。
糖または糖アルコールは、任意の好適なオスモル濃度または濃度を有することができる。例えば、糖または糖アルコールは、約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ～約３５０ｍｍｏｌ／ｋｇ、例えば、約２７５ｍｍｏｌ／ｋｇ～約２９５もしくは３００ｍｍｏｌ／ｋｇ、または約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２７０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２８０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２９０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２９５ｍｍｏｌ／ｋｇまたは３００ｍｍｏｌ／ｋｇとなるオスモル濃度を有することができる。別の例では、糖または糖アルコールは、約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ～約１，０００ｍｍｏｌ／ｋｇ、例えば約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ、３００ｍｍｏｌ／ｋｇ、４００ｍｍｏｌ／ｋｇ、５００ｍｍｏｌ／ｋｇ、６００ｍｍｏｌ／ｋｇ、７００ｍｍｏｌ／ｋｇ、８００ｍｍｏｌ／ｋｇ、９００ｍｍｏｌ／ｋｇまたは１，０００ｍｍｏｌ／ｋｇの範囲の濃度を有することができる。
一部の実施形態では、内側コンパートメント（または内部コア）は、塩を含むことができる。内側コンパートメント（または内部コア）は、任意の好適な塩を含むことができる。例えば、塩は、ナトリウム、カリウムまたはマグネシウムの塩、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＭｇＣｌ２とすることができる。塩は、任意の好適なオスモル濃度または濃度を有することができる。例えば、塩は、約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ～約３５０ｍｍｏｌ／ｋｇ、例えば、約２７５ｍｍｏｌ／ｋｇ～約２９５もしくは３００ｍｍｏｌ／ｋｇ、または約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２７０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２８０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２９０ｍｍｏｌ／ｋｇ、２９５ｍｍｏｌ／ｋｇまたは３００ｍｍｏｌ／ｋｇとなるオスモル濃度を有することができる。別の例では、塩は、約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ～約１，０００ｍｍｏｌ／ｋｇ、例えば約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ、３００ｍｍｏｌ／ｋｇ、４００ｍｍｏｌ／ｋｇ、５００ｍｍｏｌ／ｋｇ、６００ｍｍｏｌ／ｋｇ、７００ｍｍｏｌ／ｋｇ、８００ｍｍｏｌ／ｋｇ、９００ｍｍｏｌ／ｋｇまたは１，０００ｍｍｏｌ／ｋｇの範囲の濃度を有することができる。
一部の実施形態では、ナノ粒子は生体適合性または生分解性である。例えば、ナノ粒子の内部コアは、生体適合性材料または生分解性材料を含むことができ、ナノ粒子の外側表面は、細胞、例えば赤血球に由来する原形質膜を含む。別の例では、内側コンパートメント（または内部コア）は、生体適合性材料または生分解性材料しか含まないか、または生体適合性でも生分解性でもないいずれの材料も含まない。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ａ）細胞液または生理液に等張性である内側コンパートメント（または内部コア）、例えば細胞液または生理液に等張性の液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、またはｂ）細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）であって、前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含む、外側表面（またはシェル）を含む。例示的な細胞膜は、赤血球、白血球、血小板、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来することができる。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）における細胞膜は、レベルの増強または富化したステロイド、例えば、レベルの増強または富化したステロイドを含まない赤血球、白血球、血小板、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来する細胞膜を含まない。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ａ）細胞液または生理液に等張性である内側コンパートメント（または内部コア）、例えば細胞液または生理液に等張性の液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびｂ）細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）であって、前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含む、外側表面（またはシェル）を含む。例示的な細胞膜は、赤血球、白血球、細胞、血小板、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来することができる。
一部の実施形態では、内側コンパートメント（または内部コア）は、ソルビトールを含み、外側表面（またはシェル）は、赤血球に由来した原形質膜を含む。
本発明のナノ粒子は、任意の好適な半減期をｉｎ ｖｉｖｏで有することができる。例えば、本発明のナノ粒子は、少なくとも約１分間、５分間、１０分間、２０分間、３０分間、４０分間、５０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、２９時間、３０時間、３１時間、３２時間、３３時間、３４時間、３５時間、３６時間、３７時間、３８時間、３９時間、４０時間またはそれより長い間、血液循環中でｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を有することができる。
一部の実施形態では、ナノ粒子は、ナノ粒子を投与するよう構成されている、対象、哺乳動物、非ヒト哺乳動物またはヒトへの免疫原性を実質的に欠如している。例えば、細胞膜は、対象と同じ種に由来する、細胞、例えば赤血球に由来することができる。別の例では、対象は、ヒトであり、細胞膜は、ヒト細胞、例えばヒト赤血球に由来する。一部の実施形態では、細胞膜は、処置される対象の細胞、例えば赤血球に由来することができる。例えば、細胞膜は、処置されるヒトの赤血球に由来することができる。
本発明のナノ粒子の外側表面は、細胞に由来する細胞膜および合成膜を含むハイブリッド膜を含むことができる。一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面は、少なくとも約５％（ｗ／ｗ）、６％（ｗ／ｗ）、７％（ｗ／ｗ）、８％（ｗ／ｗ）、９％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）、２０％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、６０％（ｗ／ｗ）、７０％（ｗ／ｗ）、８０％（ｗ／ｗ）、９０％（ｗ／ｗ）、９１％（ｗ／ｗ）、９２％（ｗ／ｗ）、９３％（ｗ／ｗ）、９４％（ｗ／ｗ）、９５％（ｗ／ｗ）、９６％（ｗ／ｗ）、９７％（ｗ／ｗ）、９８％（ｗ／ｗ）、９９％（ｗ／ｗ）の細胞膜を含む、ハイブリッド膜を含むことができる。他の実施形態では、ナノ粒子の外側表面は、少なくとも約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）、４％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）、６％（ｗ／ｗ）、７％（ｗ／ｗ）、８％（ｗ／ｗ）、９％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）、２０％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、６０％（ｗ／ｗ）、７０％（ｗ／ｗ）、８０％（ｗ／ｗ）、９０％（ｗ／ｗ）、９１％（ｗ／ｗ）、９２％（ｗ／ｗ）、９３％（ｗ／ｗ）、９４％（ｗ／ｗ）、９５％（ｗ／ｗ）の合成膜を含む、ハイブリッド膜を含むことができる。例えば、ナノ粒子の外側表面は、約５～１０％（ｗ／ｗ）の細胞膜および約９５～９９％（ｗ／ｗ）の合成膜、約１１～２５％（ｗ／ｗ）の細胞膜および約７５～８９％（ｗ／ｗ）の合成膜、約５０％（ｗ／ｗ）の細胞膜および約５０％（ｗ／ｗ）の合成膜、約５１～７５％（ｗ／ｗ）の細胞膜および約４９～２５％（ｗ／ｗ）の合成膜、または約９０～９９％（ｗ／ｗ）の細胞膜および約１～１０％（ｗ／ｗ）の合成膜を含むハイブリッド膜を含むことができる。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、スフィンゴ脂質をさらに含むことができる。本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、任意の好適なスフィンゴ脂質を含むことができる。例えば、スフィンゴ脂質は、単純スフィンゴ脂質とすることができる。別の例では、スフィンゴ脂質は、複合スフィンゴ脂質、例えば、スフィンゴミエリン、糖スフィンゴ脂質またはイノシトール含有セラミドとすることができる。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、融合細胞膜由来の細胞、ステロイド、例えばコレステロールおよびスフィンゴ脂質、例えば、スフィンゴミエリンを含むことができる。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、融合原形質膜由来の細胞、ステロイド、例えばコレステロール、およびスフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンを含むことができる。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、融合原形質膜由来の赤血球、ステロイド、例えば、コレステロールおよびスフィンゴ脂質、例えば、スフィンゴミエリンを含むことができる。
別の態様または実施形態では、本開示は、内側コンパートメント（または内部コア）および外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供せず、かつ／または細胞液または生理液に等張性である、例えば内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性の液体を含み、前記外側表面（またはシェル）が、細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、ナノ粒子を提供する。
一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、融合細胞膜由来細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む。例えば、外側表面（またはシェル）は、融合原形質膜由来赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含むことができる。
外側表面（またはシェル）は、任意の好適なレベルの細胞膜由来の細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含むことができる。例えば、外側表面（またはシェル）は、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約２０％（ｗ／ｗ）～約８０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約１０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の細胞膜由来の細胞、例えば、赤血球に由来する原形質膜を含むことができる。約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロールレベルとは、細胞膜中のコレステロールレベルとは無関係（またはこれを含まない）コレステロールレベルを指す。同様に、約２０％（ｗ／ｗ）～約８０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリンレベルとは、細胞膜中のスフィンゴミエリンレベルとは無関係（またはこれを含まない）スフィンゴミエリンレベルを指す。
一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、約２０％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、またはそれらの部分範囲のコレステロールを含む。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、約２０％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、６０％（ｗ／ｗ）、７０％（ｗ／ｗ）、８０％（ｗ／ｗ）、またはそれらの部分範囲のスフィンゴミエリンを含む。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、約１０％（ｗ／ｗ）、２０％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、またはそれらの部分範囲の細胞由来の細胞膜、例えば赤血球に由来する原形質膜を含む。一部の実施形態では、外側表面（またはシェル）は、約４０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約４０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約２０％（ｗ／ｗ）の細胞膜由来の細胞、例えば赤血球に由来する原形質膜を含む。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、レベルの増強または富化したステロイドを含まない同等のナノ粒子に比べて、一層良好な安定性を有する。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ナノ粒子の細胞膜が誘導されるあるタイプの細胞に結合するように構成されている。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ナノ粒子の細胞膜を標的とする、またはこれに結合する部分に結合するようまたはこの部分を中和するように構成されている。本発明のナノ粒子は、任意の好適な部分に結合するようまたはこの部分を中和するように構成され得る。例示的な部分は、薬剤、例えば化学剤、分子または生物とすることができる。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ナノ粒子の細胞膜を標的とする、またはこれに結合する毒素、サイトカイン、自己抗体もしくはケモカインに結合するようまたはこれらを中和するように構成されている。例示的な毒素は、細菌毒素、真菌毒素、動物毒素または化学毒素とすることができる。例示的な化学毒素は、有機ホスフェートとすることができる。例示的な動物毒素は、動物毒中の毒素とすることができる。
一部の実施形態では、「毒素」とは、その起源および生成方法に関わりなく、毒性物質、あるいは植物、動物、微生物（以下に限定されないが、細菌、ウイルス、真菌、ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｅまたは原虫を含む）の生成物、または感染性物質、または組換え分子もしくは合成分子を指す。ある特定の実施形態では、「毒素」は、生存細胞または生物内で産生する細菌毒素、真菌毒素または動物毒素を含む。例えば、ＵＳ２０１３／３３７０６６（Ａ１）の段落［０１３１］～［０１３４］を参照されたい。
ある特定の実施形態では、細菌性毒素は、外毒素および内毒素を含む。本明細書で使用する場合、「外毒素」は、細菌によって生成され、活発に分泌される一方、「内毒素」は、細菌自体の部分（例えば、細菌の外膜）であり、細菌が免疫系により死滅されるまで放出されない。本発明は、現在公知および今後発見される任意の外毒素および内毒素を企図する。細胞膜に挿入される細菌性毒素のタイプは、特に限定されない。ある特定の実施形態では、細菌性毒素は、アルファ－溶血素などの、細胞膜に挿入する、Ｓ．ａｕｒｅｕｓに由来する毒素である。ある特定の実施形態では、細菌性毒素は、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ストレプトリジン、例えばストレプトリジンＯ（ＳＬＯ）に由来する肺炎球菌産生毒素、およびｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来するストレプトリジンＳ（ＳＬＳ）などのｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、ｌｉｓｔｅｒｉａ、ｂａｃｉｌｌｕｓによって分泌される外毒素を含む。
本開示は、以下に限定されないが、アフラトキシン、シトリニン、エルゴタミン、フモニシン、エルゴバリン、オクラトキシン、フォモプシン、スラフラミン、スポリデスミン、トリコテセン（例えば、サトラトキシン、デオキシニバレノール）、ゼアラレノンを含む、現在公知および今後発見される任意の真菌毒素をさらに企図する。細胞膜に挿入される真菌毒素のタイプは、特に限定されない。
本開示において企図されている動物毒素は、動物によって産生される任意の毒物質を含む。動物毒素の例には、以下に限定されないが、心血管毒素、胃腸毒素、呼吸器毒素、神経毒素、腎臓／臓器不全毒素が含まれる。本開示は、現在公知および今後発見される任意の動物毒素を企図し、細胞膜に挿入される動物毒素のタイプは、特に限定されない。ある特定の実施形態では、細胞膜に挿入する動物毒素は、昆虫、クモ類、および甲殻類などの節足動物、またはワニ目（ｃｒｏｃｏｄｉｌｉａ）、ムカシトカゲ目（ｒｈｙｎｃｈｏｃｅｐｈａｌｉａ）、有鱗目（ｓｑｕａｍａｔａ）およびカメ目（ｔｅｓｔｕｄｉｎｅ）などの爬虫類に由来する。
例示的な化学毒素は、有機ホスフェート中毒などのアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）阻害剤を含む。例えば、ＷＯ２０１６／１７６０４１（Ａ１）およびＵＳ２０１８／０１４０５５８（Ａ１）を参照されたい。例示的な有機ホスフェートまたは有機ホスフェート毒には、アセフェート（オルセン）、アスポン、アジンホス－メチル（グチオン）、カルボフラン（フラダン、Ｆ製剤）、カルボフェノチオン（トリチオン）、クロルフェンビンホス（バーレーン）、クロルピリホス（ダースバン、ロースバン）、クーマホス（コーラル）、クロトキシホス（シオドリン、シオバップ）、クロホメート（ルエレン）、デメトン（シストックス）、ジアジノン（スペクトラシド）、ジクロルボス（ＤＤＶＰ、ヴァポナ）、ジクロトホス（ビドリン）、ジメトエート（サイゴン、デーフェンド）、ジオキサチオン（デルナフ）、ジスルホトン（ディ－シストン）、ＥＰＮ、エチオン、エトプロップ（モーキャプ）、ファムフール、フェナミホス（ネマクール）、フェニトロチオン（スミチオン）、フェンスルホチオン（ダサニット）、フェンチオン（ベイテックス、ティグボン）、ホノホス（ジホネート）、イソフェンホス（オフタノール、アメイズ）、マラチオン（シチオン）、メタミドホス（モニター）、メチダチオン（スプラシド）、メチルパラチオン、メビンホス（フォスドリン）、モノクロトホス、ナレド（ディブロム）、神経ガス（サリン、ソマン、ソマン、ＶＸ）、オキシデメトン－メチル（メタシストックス－Ｒ）、パラチオン（ニラン、フォスキル）、ホレート（ティメット）、ホサロン（ゾロンク）、ホスメット（イミダン、プロレート）、ホスファミドン（ディメクロン）、テメホス（アベート）、ＴＥＰＰ、テルブホス（カウンター）、テトラクロルビンホス（ラボン、ラバップ）およびトリクロルホン（ディロックス、ネグボン）が含まれる。本発明のナノ粒子は、対象において、上記の有機ホスフェートまたは有機ホスフェート毒の作用を低下または中和するために使用することができる。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ナノ粒子の細胞膜を標的とする、またはこれに結合する細菌、真菌もしくは寄生生物に結合するようまたはこれらを中和するように構成されている。
一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、レベルの増強または富化したステロイドを含まない同等のナノ粒子に比べて、ナノ粒子の細胞膜を標的とするまたはこれに結合する部分に結合するまたは中和する一層良好な能力を有する。
別の態様では、本開示は、有効量の上記のナノ粒子を含む、医薬送達システムまたはデバイスを提供する。医薬送達系またはデバイスは、別の活性成分、あるいは医学的にもしくは薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含むことができる。
さらに別の態様では、本開示は、有効量の上記のナノ粒子、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本医薬組成物は、別の活性成分をさらに含むことができる。
本医薬組成物は、ナノ粒子の細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患または状態を処置あるいは予防するよう構成され得る。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子の外側表面は、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含むことができる。
Ｃ．ナノ粒子を作製する方法
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、ａ）細胞に由来する細胞膜にステロイドを接触させて組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ステップｂ）は、細胞液または生理液に等張性の液体中の組合せ物に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性の液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化したステロイドを含む細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む。
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、ａ）細胞に由来する細胞膜にステロイドを接触させて組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ、ならびにｃ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記ナノ粒子に外因性エネルギーを与え、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む前記内側コンパートメント（または内部コア）、および前記レベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む前記外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、細胞液または生理液に等張性の液体中の赤血球に由来する細胞膜に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性である前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）および前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、ａ）赤血球に由来する細胞膜にステロイドを接触させて組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む。他の実施形態では、本方法は、ａ）赤血球に由来する細胞膜にステロイドを接触させて組合せ物を形成するステップ、ｂ）前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、内部コア、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ、ならびにｃ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記ナノ粒子に外因性エネルギーを与え、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む。
さらに別の態様では、本開示は、ナノ粒子を作製する方法であって、ａ）細胞に由来する細胞膜に、水混和性溶媒に溶解したステロイドおよびスフィンゴ脂質を接触させて組合せ物、例えば液体中の組合せ物を形成するステップ、ならびにｂ）前記組合せ物、または液体中の組合せ物に外因性エネルギーを与え、内側コンパートメント（または内部コア）、ならびに前記細胞膜、前記ステロイドおよび前記スフィンゴ脂質を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法を提供する。
本発明の方法または本発明のナノ粒子に使用される細胞膜は、任意の好適な細胞膜とすることができるか、または任意の好適な細胞に由来することができる。例えば、上記の段落６８～７０を参照されたい。例えば、細胞膜は、動物細胞、例えば非ヒト哺乳動物細胞またはヒト細胞に由来することができる。一部の実施形態では、細胞膜は、血液細胞、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来する。一部の実施形態では、細胞膜は、細胞または血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む。
本発明の方法では、細胞膜は、任意の好適な液体または水性液体に含まれ得る。例えば、水性液体は、水、約５～約９の範囲のｐＨを有する緩衝液、例えばＰＢＳ、または等張性液体もしくは緩衝液、例えば、１Ｘ ＰＢＳとすることができる。任意の好適な緩衝液を使用することができる。一部の実施形態では、緩衝液は、約５、６、７、８、９またはそれらの部分範囲のｐＨを有することができる。
本発明の方法または本発明のナノ粒子に使用されるステロイドは、任意の好適なステロイドとすることができる。例えば、上記の段落７１～８０を参照されたい。例えば、ステロイドは、コレスタン、例えば、コレステロール、コラン、例えば、コール酸、プレグナン、例えば、プロゲステロン、アンドロスタン、例えば、テストステロンまたはエストラン、例えば、エストラジオールとすることができる。別の例では、ステロイドは、ゴナン、テストステロン、コール酸、デキサメタゾン、ラノステロール、プロゲステロン、メドロゲストン、β－シトステロール、コレステロールおよび５α－コレスタンとすることができる。
本発明の方法または本発明のナノ粒子に使用されるスフィンゴ脂質は、任意の好適なスフィンゴ脂質とすることができる。例えば、上記の段落１００を参照されたい。例えば、スフィンゴ脂質は、単純スフィンゴ脂質とすることができる。別の例では、スフィンゴ脂質は、複合スフィンゴ脂質、例えば、スフィンゴミエリン、糖スフィンゴ脂質またはイノシトール含有セラミドとすることができる。
一部の実施形態では、ステロイド、例えばコレステロール、およびスフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンは、同じ水混和性溶媒に溶解することができる。一部の実施形態では、ステロイド、例えばコレステロール、およびスフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンは、異なる水混和性溶媒に溶解することができる。
水混和性溶媒中のステロイドおよび／またはスフィンゴ脂質の溶解は、任意の好適な手順または手段によって促進することができる。例えば、水混和性溶媒中のステロイドおよび／またはスフィンゴ脂質の溶解は、加熱および／または混合、例えば撹拌によって促進することができる。一部の実施形態では、加熱は、約３５℃～約６５℃、例えば約３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃の範囲、またはそれらの部分範囲の温度で行われる。
任意の好適な水混和性溶媒が、本発明の方法に使用することができる。例えば、水混和性溶媒は、有機化合物とすることができる。任意の好適な有機化合物が使用され得る。例えば、有機化合物は、アルコール、例えばＣ１～Ｃ５アルコールとすることができる。一部の実施形態では、アルコールは、メタノール、エタノール、１－プロパノール、１，３－プロパンジオール、１，５－ペンタンジオールまたはイソプロピルアルコール（イソプロパノールまたはＩＰＡ）である。一部の実施形態では、水混和性溶媒は、アセトアルデヒド、酢酸、アセトン、アセトニトリル、１，２－ブタンジオール、１，３－ブタンジオール、１，４－ブタンジオール、２－ブトキシエタノール、酪酸、ジエタノールアミン、ジエチレントリアミン、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，４－ジオキサン、エタノール、エチルアミン、エチレングリコール、ギ酸、フルフリルアルコール、グリセロール、メタノール、メチルジエタノールアミン、メチルイソシアニド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）、１－プロパノール、１，３－プロパンジオール、１，５－ペンタンジオール、イソプロピルアルコール、プロピオン酸、プロピレングリコール、ピリジン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはトリエチレングリコールから選択される１つまたは複数の有機化合物とすることができる。
別の例では、水混和性溶媒は、無機化合物とすることができる。一部の実施形態では、水混和性溶媒は、１，２－ジメチルヒドラジン、非対称ジメチルヒドラジン、ヒドラジン、フッ化水素酸、過酸化水素、硝酸または硫酸から選択される１つまたは複数の無機化合物とすることができる。
組合せ物では、水混和性溶媒、例えばＩＰＡは、任意の好適な濃度またはレベルを有することができる。例えば、組合せ物中、水混和性溶媒、例えばＩＰＡは、約５％（ｖ／ｖ）～約４０％（ｖ／ｖ）、例えば、約５％（ｖ／ｖ）、１０％（ｖ／ｖ）、１５％（ｖ／ｖ）、２０％（ｖ／ｖ）、２５％（ｖ／ｖ）、３０％（ｖ／ｖ）、３５％（ｖ／ｖ）、４０％（ｖ／ｖ）の範囲、もしくはそれらの部分範囲の濃度またはレベルを有することができる。
組合せ物は、任意の好適な質量濃度を有することができる。例えば、組合せ物は、約０．２５ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、３．５ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、４．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌの範囲、またはそれらの部分範囲の任意の好適な質量濃度を有することができる。
組合せ物では、ステロイド、例えばコレステロールは、任意の好適な濃度またはレベルを有することができる。例えば、組合せ物中、ステロイド、例えば、コレステロールは、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、３５％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、４５％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、もしくはそれらの部分範囲の濃度またはレベルを有することができる。約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のステロイド、例えばコレステロールのレベルとは、細胞膜中のステロイド、例えばコレステロールのレベルとは無関係（またはこれを含まない）ステロイド、例えばコレステロールのレベルを指す。
組合せ物では、スフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンは、任意の好適な濃度またはレベルを有することができる。例えば、組合せ物中、スフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンは、約２０％（ｗ／ｗ）～約９０％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、３５％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、４５％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、５５％（ｗ／ｗ）、６０％（ｗ／ｗ）、６５％（ｗ／ｗ）、７０％（ｗ／ｗ）、７５％（ｗ／ｗ）、８０％（ｗ／ｗ）、８５％（ｗ／ｗ）、９０％（ｗ／ｗ）、もしくはそれらの部分範囲の濃度またはレベルを有することができる。約２０％（ｗ／ｗ）～約９０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンのレベルとは、細胞膜中のスフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンのレベルとは無関係（またはこれを含まない）スフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンレベルを指す。
組合せ物において、細胞膜、例えば赤血球、白血球および／または血小板などの血液細胞に由来する原形質膜は、任意の好適な濃度またはレベルを有することができる。例えば、組合せ物中、細胞膜、例えば赤血球、白血球および／または血小板などの血液細胞に由来する原形質膜は、約５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約５％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）、１５％（ｗ／ｗ）、２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、３５％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、４５％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、もしくはそれらの部分範囲の濃度またはレベルを有することができる。
本発明の方法では、外因性エネルギーは、任意の好適なデバイス、手順または手段を使用して、組合せ物中に与えることができる。例えば、本発明の方法では、組合せ物に外因性エネルギーを与えることは、この組合せ物に液体中で超音波処理を施すことを含むことができる。
本発明の方法では、組合せ物に、任意の好適な温度で超音波処理が施され得る。例えば、組合せ物に、約１５℃～約５０℃の範囲、例えば約１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、またはそれらの部分範囲の温度で超音波処理が施され得る。
本発明の方法では、組合せ物に、任意の好適な周波数で超音波処理が施され得る。例えば、組合せ物は、約２０キロヘルツ（ｋＨｚ）～約６０ｋＨｚの範囲、例えば約２０ｋＨｚ、３０ｋＨｚ、４０ｋＨｚ、５０ｋＨｚ、６０ｋＨｚまたはそれらの部分範囲の周波数で超音波処理が施され得る。
本発明の方法では、組合せ物に、任意の好適な時間、超音波処理が施され得る。例えば、組合せ物に、約５分間～約５０分間の範囲、例えば、約５分間、１０分間、１５分間、２０分間、２５分間、３０分間、３５分間、４０分間、４５分間、５０分間、またはそれらの部分範囲の時間、超音波処置が施され得る。
本発明の方法では、外因性エネルギーは、任意の好適な目的のため、組合せ物中に与えられ得る。例えば、組合せ物に外因性エネルギーを与えること、例えば超音波処理を組合せ物に施すことは、組合せ物中の細胞膜、ステロイドおよびスフィンゴ脂質をホモジナイズするために行われ得る。
本方法は、任意の好適なナノ粒子を生成するために使用することができる。例えば、本方法は、ナノ粒子を生成するために使用することができ、この場合、外側表面（またはシェル）は、ナノ粒子中に、融合細胞膜、ステロイドおよびスフィンゴ脂質を含む。
本方法により作製または調製したナノ粒子は、任意の好適なサイズ分布を有することができる。例えば、本方法により作製または調製したナノ粒子は、約０．２またはそれより高い、例えば約０．３またはそれより高い粒子分布指数（ＰＤＩ）を有することができる。
本方法は、ステップｂ）の後に、ナノ粒子に、高せん断流体プロセッサーで高せん断処理（または高せん断力処理）が施されるステップをさらに含むことができる。任意の好適な高せん断流体プロセッサーが使用され得る。例えば、高せん断流体プロセッサーは、マイクロフルイダイザー（または、マイクロフルイダイザープロセッサー）または高いせん断力を発生するホモジナイザーとすることができる。
一部の実施形態では、本方法において使用される高せん断流体プロセッサーは、マイクロフルイダイザー（またはマイクロフルイダイザープロセッサー）である。任意の好適なマイクロフルイダイザー（または、マイクロフルイダイザープロセッサー）も使用することができる。一部の実施形態では、マイクロフルイダイザーは、約１０，０００ｐｓｉ～約３０，０００ｐｓｉ、例えば約１０，０００ｐｓｉ、１５，０００ｐｓｉ、２０，０００ｐｓｉ、約２５，０００ｐｓｉ、３０，０００ｐｓｉまたはそれらの部分範囲の実質的に一定の圧力を発生するように構成されている。
一部の実施形態では、マイクロフルイダイザーは、上流から下流にかけて、ナノ粒子を投入する入口、静圧を発生するためのインテンシファイアポンプ（ｉｎｔｅｎｓｉｆｉｅｒ ｐｕｍｐ）、ナノ粒子に高せん断圧を発生するための衝突式ジェットチャンバー（ｉｍｐｉｎｇｉｎｇ ｊｅｔ ｃｈａｍｂｅｒ）、およびナノ粒子を取り出すための出口を備える、マイクロ流体反応技術（ＭＲＴ）の構成を有する。一部の実施形態では、マイクロフルイダイザーは、Ｚタイプの相互作用チャンバーを備える。一部の実施形態では、マイクロフルイダイザーは、Ｙタイプの相互作用チャンバーを備える。
マイクロ流動化は、任意の好適な圧力数を使用して行うことができる。例えば、マイクロ流動化は、単一圧力を使用して行うことができる。別の例では、マイクロ流動化は、異なる圧力の組合せを使用して行うことができる。マイクロ流動化はまた、任意の好適な通過数を使用して行うことができる。例えば、マイクロ流動化は、単一通過数を使用して行うことができる。別の例では、マイクロ流動化は、複数の通過数を使用して行うことができる。
本発明の方法は、ナノ粒子を冷却するステップをさらに含むことができる。一部の実施形態では、マイクロフルイダイザーのチャンバーを出た後のチャネル中のナノ粒子は、クーラントを含む製品チラー（ｃｈｉｌｌｅｒ）によって冷却される。製品チラーまたは製品チラーにおけるクーラントは、任意の好適な温度に設定することができる。例えば、製品チラーまたは製品チラーにおけるクーラントは、約４℃～約５５℃の範囲、例えば約４℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、またはそれらの部分範囲の温度に設定することができる。
本方法は、任意の好適なサイズおよび／またはサイズ分布を有するナノ粒子を生成するために使用することができる。一般に、高せん断処理（または高せん断力処理）により生成したナノ粒子は、高せん断処理（または高せん断力処理）なしに生成したナノ粒子と比べると、より小さなサイズおよびより小さな範囲のサイズ分布を有する。一部の実施形態では、高せん断処理（または高せん断力処理）により生成したナノ粒子は、約０．０５～約０．２の範囲の粒子分布指数（ＰＤＩ）を有し、例えば、ＰＤＩは約０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２、またはそれらの部分範囲である。一部の実施形態では、高せん断処理（または高せん断力処理）により生成したナノ粒子は、約３０ｎｍ～約３００ｎｍの範囲のＺ平均値を有する粒子サイズを有し、例えば、Ｚ平均値は約３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、１６０ｎｍ、１７０ｎｍ、１８０ｎｍ、１９０ｎｍ、２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、２５０ｎｍ、２６０ｎｍ、２７０ｎｍ、２８０ｎｍ、２９０ｎｍ、２００ｎｍ、またはそれらの部分範囲である。
本発明の方法は、以下：１）約２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、２５０ｎｍ、またはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去するかまたはそのレベルを低下するステップ、２）水混和性溶媒を除去またはそのレベルを低下させるステップ、３）ナノ粒子を濃縮するステップ、４）ナノ粒子を滅菌するステップ、および／または５）ナノ粒子を個々の容器に充填するステップのうちの１つまたは複数をさらに含むことができる。一部の実施形態では、本発明の方法は、以下：１）約２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、２５０ｎｍ、またはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去するかまたはそのレベルを低下するステップ、２）水混和性溶媒を除去またはそのレベルを低下させるステップ、３）ナノ粒子を濃縮するステップ、４）ナノ粒子を滅菌するステップ、および／または５）ナノ粒子を個々の容器に充填するステップのうちの２つ、３つ、４つまたは５つをさらに含むことができる。
約２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、２５０ｎｍ、またはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去するかまたはそのレベルを低下するステップは、任意の好適なデバイス、手順または手段を使用して行うことができる。例えば、ステップ１）は、ナノ粒子を含有する液体にろ過を施すステップを含むことができる。任意の好適なタイプのろ過またはフィルターを使用することができる。一部の実施形態では、ろ過は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリ二フッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ガラス繊維、酢酸セルロースまたはそれらの組合せを含むフィルターを使用して行うことができる。フィルターは、任意の好適な細孔サイズを有することができる。例えば、フィルターは、約０．２μｍ～約１．２μｍの範囲、例えば約０．２μｍ、０．３μｍ、０．４μｍ、０．５μｍ、０．６μｍ、０．７μｍ、０．８μｍ、０．９μｍ、１．０μｍ、１．１μｍ、１．２μｍまたはそれらの部分範囲の細孔サイズを有することができる。一部の実施形態では、ろ過は、単一フィルターを使用して行う。一部の実施形態では、ろ過は、様々な細孔サイズを有する複数のフィルターを使用して行う。一部の実施形態では、ろ過は、約２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、２５０ｎｍ、またはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去するかまたはそのレベルを低下するため、およびナノ粒子を滅菌するために行われる。
水混和性溶媒を除去する、もしくはそのレベルを低下させるステップ、および／またはナノ粒子を濃縮するステップは、任意の好適なデバイス、手順または手段を使用して行うことができる。例えば、ステップ２）および／または３）は、ナノ粒子を含有する液体にタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）を施すステップを含むことができる。
ＴＦＦは、任意の好適なＴＦＦデバイスまたはシステムを使用して行うことができる。例えば、ＴＦＦは、フィードレザーバー、フィルターデバイスおよび収集デバイスを備えるＴＦＦシステムを使用して行うことができ、フィードレザーバーは、フィルターデバイスの入口を介してフィルターデバイスと流体連通しており、フィルターデバイスは、フィルターデバイスの透過液出口を介して収集デバイスと流体連通しており、フィルターデバイスは、フィルターデバイスの保持液出口を介してフィードレザーバーと流体連通している。
フィルターデバイスは、任意の好適な形態にあることができる。例えば、フィルターデバイスは、カートリッジ、カセット、または中空繊維フィルターを含有するカラムの形態にあることができる。フィルターデバイスは、任意の好適な細孔サイズを有するろ過膜を備えることができる。例えば、フィルターデバイスは、約１００Ｋｄ～約３００Ｋｄの範囲、例えば約１００Ｋｄ、１５０Ｋｄ、２００Ｋｄ、２５０Ｋｄ、３００Ｋｄ、またはそれらの部分範囲の細孔サイズを有するろ過膜を備えることができる。
ＴＦＦは、任意の好適なタイプの方法により行うことができる。例えば、ＴＦＦは、ダイアフィルトレーション方法によって行うことができる。一部の実施形態では、ダイアフィルトレーション方法は、連続式、断続式または逐次式ダイアフィルトレーション方法である。ＴＦＦは、任意の好適なサイクル数により行うことができる。一部の実施形態では、ＴＦＦは、単一サイクルにより行われる。一部の実施形態では、ＴＦＦは、複数のサイクルのダイアフィルトレーション方法により、例えば、複数のサイクルの連続式ダイアフィルトレーション方法により行われる。
本発明の方法またはＴＦＦは、ナノ粒子を採集するステップをさらに含むことができる。ナノ粒子は、任意の好適なデバイス、手順または手段を使用して採集することができる。例えば、ナノ粒子は、フィルターデバイスの保持液出口を介して採集することができる。
ＴＦＦは、任意の好適な目的のために行うことができる。一部の実施形態では、ＴＦＦは、ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体から水混和性溶媒の量またはレベルを低下させるために使用する。一部の実施形態では、ＴＦＦは、ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体から水混和性溶媒を除去するために使用される。一部の実施形態では、ＴＦＦは、組成物から約５０％～約９９．９９９９％の水混和性溶媒を除去するため、例えば、組成物から約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％または９９．９９９９％の水混和性溶媒を除去するために使用される。一部の実施形態では、本発明の方法に使用される水混和性溶媒はＩＰＡであり、ＴＦＦは、組成物中のＩＰＡ濃度またはレベルを５，０００ｐｐｍ未満に低下させるため、例えば組成物中のＩＰＡ濃度またはレベルを５，０００ｐｐｍ、４，０００ｐｐｍ、３，０００ｐｐｍ、２，０００ｐｐｍ、１，０００ｐｐｍまたは５００ｐｐｍ未満に低下させるため使用される。
ＴＦＦはまた、ナノ粒子を濃縮および／または富化するために使用することができる。一部の実施形態では、ＴＦＦは、ナノ粒子を約１倍～約４００倍、濃縮および／または富化するため、例えば、ナノ粒子を１倍、２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍またはそれらの部分範囲に濃縮および／または富化するために使用される。
水混和性溶媒を除去もしくはそのレベルを低下するステップ、およびナノ粒子を濃縮するステップは、組合せステップとして、または個別のステップとして行うことができる。例えば、ステップ２）および３）を一緒にして、ナノ粒子を含有する液体にタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）を施すステップを含む単一ステップにすることができる。
本方法は、ナノ粒子またはナノ粒子を含有する組成物、例えば液体を滅菌するステップをさらに含むことができる。例えば、本発明の方法では、ＴＦＦ処理の前および／またはその後に、ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体に、ナノ粒子を含有する組成物を滅菌するステップを施す。一部の実施形態では、ＴＦＦ処理の前に、ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体に、ナノ粒子を含有する組成物を滅菌するステップを施す。一部の実施形態では、ＴＦＦ処理の後に、ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体に、ナノ粒子を含有する組成物を滅菌するステップを施す。一部の実施形態では、ＴＦＦ処理の前および後に、ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体に、ナノ粒子を含有する組成物を滅菌するステップを施す。
ナノ粒子を含有する組成物を滅菌するステップは、任意の好適なデバイス、手順または手段を使用して行うことができる。例えば、組成物を滅菌するステップは、組成物にろ過を施すステップを含むことができる。任意の好適なタイプのろ過またはフィルターを使用することができる。一部の実施形態では、ろ過は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリ二フッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ガラス繊維、酢酸セルロースまたはそれらの組合せを含むフィルターを使用して行うことができる。フィルターは、任意の好適な細孔サイズを有することができる。例えば、フィルターは、約０．２μｍの細孔サイズを有することができる。一部の実施形態では、ろ過は、単一フィルターを使用して行われる。一部の実施形態では、ろ過は、様々な細孔サイズを有する複数のフィルターを使用して行う。
一部の実施形態では、本発明の方法は、水混和性溶媒を除去または蒸発させて、ステロイドおよびスフィンゴ脂質を含む膜を形成するステップを含まない。
一部の実施形態では、細胞膜が、原形質膜に由来する赤血球を含み、ステロイドがコレステロールであり、スフィンゴ脂質がスフィンゴミエリンであり、水混和性溶媒がＩＰＡである、本発明の方法が行われる。例えば、本発明の方法を行い、内側コンパートメント（または内部コア）、および前記原形質膜に由来する赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成することができる。一部の実施形態では、ナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供しない。一部の実施形態では、ナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性であり、例えば内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性の液体を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、約４０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約４０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約２０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む。約４０％（ｗ／ｗ）のコレステロールレベルとは、細胞膜中のコレステロールレベルとは無関係（またはこれを含まない）コレステロールレベルを指す。同様に、約４０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリンレベルとは、細胞膜中のスフィンゴミエリンレベルとは無関係（またはこれを含まない）スフィンゴミエリンレベルを指す。
本発明の方法で使用される細胞膜は、任意の好適な形態にあることができる。例えば、細胞に由来する細胞膜は、細胞膜ゴーストの形態にあることができる。
任意の好適な外因性エネルギーを、本発明の方法に使用することができる。例えば、本発明の方法に使用される外因性エネルギーは、機械エネルギー、音響エネルギーまたは熱エネルギーとすることができる。
任意の好適な細胞膜を、本発明の方法に使用することができる。例えば、本発明の方法に使用される細胞膜は、哺乳動物またはヒト血液細胞、例えば赤血球、白血球または血小板に由来することができる。
任意の好適なステロイドを、本発明の方法に使用することができる。例えば、本発明の方法に使用されるステロイドは、コレスタン、例えばコレステロールとすることができる。
本発明の方法によって調製されたナノ粒子も提供される。
一部の実施形態では、ナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供しない。一部の実施形態では、ナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性であり、例えば内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性の液体を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の内側コンパートメント（または内部コア）は、外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供せず、細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性である液体を含む。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、原形質膜に由来する赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、融合細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、融合原形質膜に由来する赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約２０％（ｗ／ｗ）～約９０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む。約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロールレベルとは、細胞膜中のコレステロールレベルとは無関係（またはこれを含まない）コレステロールレベルを指す。同様に、約２０％（ｗ／ｗ）～約９０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリンレベルとは、細胞膜中のスフィンゴミエリンレベルとは無関係（またはこれを含まない）スフィンゴミエリンレベルを指す。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、例えば約２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、３５％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、４５％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、またはそれらの部分範囲を含む。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、約２０％（ｗ／ｗ）～約９０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、例えば約２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、３５％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、４５％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）、５５％（ｗ／ｗ）、６０％（ｗ／ｗ）、６５％（ｗ／ｗ）、７０％（ｗ／ｗ）、７５％（ｗ／ｗ）、８０％（ｗ／ｗ）、８５％（ｗ／ｗ）、９０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、またはそれらの部分範囲を含む。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、約５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜、約５％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）、１５％（ｗ／ｗ）、２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、３５％（ｗ／ｗ）、４０％（ｗ／ｗ）、４５％（ｗ／ｗ）、５０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜、またはそれらの部分範囲を含む。
一部の実施形態では、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）は、約４０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約４０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約２０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む。
有効量の本発明のナノ粒子を含む、医薬送達システムまたはデバイスも提供される。医薬送達系またはデバイスは、別の活性成分、あるいは医学的にもしくは薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含むことができる。
有効量の本発明のナノ粒子および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物も提供される。本医薬品は、別の活性成分をさらに含むことができる。本医薬組成物はまた、ナノ粒子の細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患または状態を処置あるいは予防するよう構成され得る。本医薬組成物中のナノ粒子の外側表面は、任意の好適な細胞膜、例えば血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含むことができる。
Ｄ．疾患もしくは状態を処置または予防する方法
さらに別の態様では、本開示は、必要とする対象において疾患もしくは状態を処置または予防する方法であって、内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含む有効量のナノ粒子を前記対象に投与するステップであり、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供しない、ステップを含む、方法を提供する。必要に応じて、および一部の実施形態では、ａ）前記ナノ粒子の前記内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）は細胞液または生理液に等張性の液体を含み、かつ／またはｂ）前記ナノ粒子の前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜は、レベルの増強または富化したステロイドを含む。さらに、必要に応じて、および一部の実施形態では、ナノ粒子が、赤血球に由来する細胞膜を含む場合、内側コンパートメント（または内部コア）は、細胞液または生理液に等張性である。一部の実施形態では、ナノ粒子は、医薬送達システムまたは該ナノ粒子を含む医薬組成物を使用して投与される。
本方法は、任意の好適な対象において、疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例えば、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とすることができる。
本方法において使用されるナノ粒子は、任意の好適な細胞膜を含むことができる。例えば、ナノ粒子中の細胞膜は、対象と同じ種の細胞に由来することができるか、または対象の細胞に由来する。ナノ粒子中の細胞膜は、任意の好適な細胞に由来することができる。例えば、ナノ粒子中の細胞膜は、血液細胞、例えば赤血球、白血球および／または血小板に由来することができる。別の例では、ナノ粒子中の細胞膜は、対象と同じ種の赤血球に由来することができ、赤血球は、対象と同じ血液型を有する。
本方法は、任意の好適な目的のために使用することができる。例えば、本方法は、ナノ粒子の細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患または状態を処置あるいは予防するために使用することができる。例示的な部分は、薬剤、例えば化学剤、分子または生物とすることができる。
一部の実施形態では、本方法は、ナノ粒子の細胞膜を標的とする、またはこれに結合する生物に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な生物は、ウイルス、細菌、真菌または寄生生物とすることができる。
一部の実施形態では、「ウイルス」とは、ＤＮＡまたはＲＮＡおよびタンパク質膜からなる、生命体の細胞内偏性寄生生物であって、しかし非細胞性の性質である上記の寄生生物を指す。ウイルスは、直径が約２０～約３００ｎｍの範囲である。クラスＩウイルス（ボルティモア分類）は、そのゲノムとして二本鎖ＤＮＡを有する。クラスＩＩウイルスは、そのゲノムとして一本鎖ＤＮＡを有する。クラスＩＩＩウイルスは、そのゲノムとして二本鎖ＲＮＡを有する。クラスＩＶウイルスは、そのゲノムとしてプラス一本鎖ＲＮＡを有し、そのゲノム自体が、ｍＲＮＡとして働く。クラスＶウイルスは、ｍＲＮＡ合成の鋳型として使用されるそのゲノムとしてマイナス一本鎖ＲＮＡを有する。クラスＶＩウイルスは、プラス一本鎖ＲＮＡゲノムを有するが、複製時だけではなく、ｍＲＮＡ合成時のＤＮＡ中間体にもなる。ウイルスの大部分は、それらが植物、動物および原核生物において引き起こす疾患によって認識される。原核生物のウイルスは、バクテリオファージとして公知である。
一部の実施形態では、本方法は、病原性ウイルスに関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な病原性ウイルスは、天然痘ウイルス、インフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘ウイルス、エボラウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、風疹ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）およびＤ型肝炎（ＨＤＶ）を含む。
一部の実施形態では、「細菌」とは、非コンパートメント化環状ＤＮＡおよび約７０Ｓのリボソームを有する、小型の原核生物（約１ミクロンの線形寸法）を指す。細菌タンパク質合成は、真核生物の合成とは異なる。多数の抗細菌性抗生物質が、細菌タンパク質合成を妨害するが、感染した宿主には影響を及ぼさない。細菌の主要な下位分類は、真正細菌および古細菌を含む。一部の実施形態では、「真正細菌」は、古細菌以外の細菌の主要な下位分類を指す。大部分のグラム陽性菌、シアノバクテリア（ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、マイコプラズマ（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、腸内細菌、シュードモナス菌（pseudomonas）および葉緑体は、真正細菌である。真正細菌の細胞質膜は、エステル連結した脂質を含有する。細胞壁にペプチドグリカンが存在する（存在する場合）。イントロンは真正細菌には発見されない。一部の実施形態では、「古細菌」は、真正細菌以外の細菌の主要な下位分類を指す。古細菌には３つの主な目が存在する：高度好塩菌、メタン菌および硫黄依存性高度好熱菌である。古細菌は、リボソームの構造、イントロンの所有（一部の場合）および膜組成を含めた他の特徴の点で真正細菌とは異なる。
一部の実施形態では、本方法は、病原性細菌に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な病原性細菌は、結核（ＴＢ）を引き起こす、またはこれに関連する細菌、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍ．ｔｂ）、ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、例えばＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、食中毒、例えばＥ．ｃｏｌｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、破傷風、腸チフス、ジフテリア、梅毒およびハンセン病を含む。
一部の実施形態では、「真菌」とは、根、茎または葉を持たない不規則な塊で成長する真核生物であって、クロロフィルまたは光合成が可能な他の色素のない真核生物の分裂物を指す。各生物（葉状体）は単細胞から糸状であり、グルカンもしくはキチン、またはそれらの両方を含み、真の核を含有する細胞壁によって囲まれた分岐した体細胞構造（菌糸）を有する。
一部の実施形態では、本方法は、病原性真菌に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な病原性真菌には、カンジダ症の最も一般的な原因であるＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、および髄膜炎の重症な形態を引き起こす恐れがあるＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含む。
一部の実施形態では、本方法は、寄生生物に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的なヒト寄生生物には、マラリア、リーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、アメーバ症、シャーガス病、アフリカトリパノソーマ症、住血吸虫症、回虫症、エキノコックス症および嚢虫症を引き起こすか、またはこれらに関連する寄生生物を含む。
一部の実施形態では、本方法は、ナノ粒子の細胞膜を標的とする、またはこれに結合する毒素、サイトカイン、自己抗体またはケモカインに関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な毒素は、細菌毒素、真菌毒素、動物毒素または化学毒素とすることができる。例示的な化学毒素は、有機ホスフェートとすることができる。例示的な動物毒素は、動物毒中の毒素とすることができる。
一部の実施形態では、本方法は、細胞膜に挿入する毒素に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。特定の実施形態では、毒素は、毒の自然の病理的機構の一部として対象の標的細胞の細胞膜または原形質膜に挿入する。特定の実施形態では、本方法において使用されるナノ粒子の外側表面の細胞膜または原形質膜は、毒素を実質的に保持する。特定の実施形態では、本方法に使用されるナノ粒子の外側表面は、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む。
一部の実施形態では、本方法は、皮膚感染、敗血症、肺炎、自己免疫反応、例えば血液細胞または赤血球に対する自己免疫抗体などの自己免疫抗体の産生による自己免疫反応を処置または予防するために使用することができる。
一部の実施形態では、本方法は、必要とする対象に別の活性成分、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を投与するステップをさらに含むことができる。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、医薬送達システムまたはデバイスにより投与することができる。
一部の実施形態では、本方法は、感染、例えば、皮膚感染、敗血症、肺炎または自己免疫反応、例えば血液細胞または赤血球に対する自己免疫抗体などの自己免疫抗体の産生による自己免疫反応を処置または予防するために使用することができる。
ナノ粒子、またはナノ粒子を含む組成物、例えばナノ粒子を含む医薬組成物は、任意の好適な経路または手順により投与することができる。例えば、ナノ粒子、またはナノ粒子を含む組成物、例えば医薬組成物は、腸／胃腸管、経口、非経口、静脈内、直腸、鼻腔、局所、眼、吸入または気管内経路により投与することができる。
一部の実施形態では、ナノ粒子、またはナノ粒子を含む組成物、例えば医薬組成物は、気管内経路により投与することができる。例えば、処置または予防される疾患または状態は、感染、例えば、皮膚感染、敗血症または肺炎とすることができ、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物、例えば医薬組成物は、気管内経路により投与することができる。任意の好適な気管内投与が使用され得る。例えば、ナノ粒子、またはナノ粒子を含む組成物、例えば医薬組成物は、気管内注入または気管内吸入により投与することができる。
一部の実施形態では、新生物に特異的な免疫原性組成物またはワクチンは、腸／胃腸管、経口、非経口、静脈内、直腸、鼻腔、局所、眼、吸入または気管内経路により投与することができる。
一部の実施形態では、対象において疾患または状態に関連する部分に免疫応答を引き起こすための免疫原性組成物は、腸／胃腸管、経口、非経口、静脈内、直腸、鼻腔、局所、眼、吸入または気管内経路により投与することができる。
一部の実施形態では、本方法は、対象に第２の治療剤を投与するステップをさらに含む。任意の好適な第２の治療剤を使用することができる。例えば、第２の治療剤は、抗生物質、抗腫瘍剤または抗がん剤または免疫応答モジュレーター、例えば、免疫応答活性化因子または抑制因子とすることができる。
一部の実施形態では、本方法は、対象に第２の治療剤を投与するステップを含まない。
さらに別の態様では、本開示は、必要とする対象において疾患もしくは状態を処置または予防する医薬を製造するための、有効量の本発明のナノ粒子の使用を提供する。
Ｅ．免疫原性組成物およびその使用
さらに別の態様では、本開示は、有効量の本発明のナノ粒子を含み、免疫原性アジュバントまたは免疫増強物質を必要に応じてさらに含む、免疫原性組成物を提供する。
本発明の免疫原性組成物は、用途に対する任意に好適に使用するように構成され得る。一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、新生物に特異的な免疫原性組成物として構成され得、この場合、ナノ粒子の外側表面は、新生物細胞に由来する細胞膜を含む。
新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子の細胞膜は、任意の好適な新生物細胞に由来することができる。例えば、新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子の細胞膜は、対象の良性新生物細胞、潜在的に悪性の新生物細胞、がん細胞、がん細胞系またはがん細胞に由来することができる。
一部の実施形態では、新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子の外側表面における細胞膜は、新生物細胞に対する免疫応答を誘発するための構造的完全性を実質的に保持している。
他の実施形態では、新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）を支持しない。
一部の実施形態では、新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子は、別の活性成分、または放出可能なカーゴをさらに含むことができる。
新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子は、任意の好適なサイズを有することができる。例えば、ナノ粒子は、約１０ｎｍ～約１０μｍの直径を有することができる。ある特定の実施形態では、ナノ粒子の直径は、約１０ｎｍ、２０ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍおよび１０μｍ、または約１０ｎｍ～約１０μｍの範囲内の任意の部分範囲、例えば、上記のサイズのいずれか２つの間の任意の範囲である。
一部の実施形態では、新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子は、細胞膜が誘導される新生物細胞の構成物質を実質的に欠如している。例えば、ナノ粒子は、細胞膜が誘導される新生物細胞の構成物質を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％欠如し得る。
一部の実施形態では、新生物に特異的な免疫原性組成物中のナノ粒子は、細胞膜の天然の構造上の完全性もしくは活性、または細胞膜の構成物質を実質的に維持する。例えば、ナノ粒子は、天然の構造上の完全性を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％保持し得る。一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞膜の一次、二次、三次および／もしくは四次構造または細胞膜の構成物質を含めた、細胞膜の天然の構造上の完全性または細胞膜の構成物質を実質的に維持する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、細胞膜の結合活性、受容体活性および／もしくは酵素活性、または細胞膜の構成物質を含めた、細胞膜の活性または細胞膜の構成物質を実質的に維持する。
一部の実施形態では、新生物に特異的な本発明の免疫原性組成物は、免疫原性アジュバントまたは免疫増強物質をさらに含むことができる。
一部の実施形態では、新生物に特異的な本発明の免疫原性組成物中のナノ粒子の外側表面は、天然に存在する細胞膜を含み、合成膜をさらに含む。
新生物に特異的な本発明の免疫原性組成物を含むワクチンも提供される。
必要とする前記対象において新生物を処置または予防する方法であって、有効量の新生物に特異的な本発明の免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法も提供される。
本方法は、任意の好適な対象において、新生物を処置または予防するために使用することができる。例えば、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とすることができる。
本方法において使用されるナノ粒子は、任意の好適な細胞膜を含むことができる。例えば、ナノ粒子中の細胞膜は、対象と同じ種の細胞に由来することができるか、または対象の新生物細胞に由来する。
一部の実施形態では、本方法は、別の活性成分、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を、必要とする対象に投与するステップをさらに含むことができる。一部の実施形態では、本発明のナノ粒子は、医薬送達システムまたはデバイスにより投与することができる。
さらに別の態様では、本開示は、新生物から対象を処置または防御するワクチンの製造のための、有効量の、新生物に特異的な本発明の免疫原性組成物の使用を提供する。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ナノ粒子の細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するよう構成され得、この場合、ナノ粒子の外側表面がその部分を含む。例示的な部分は、薬剤、例えば化学剤、分子または生物とすることができる。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ナノ粒子の細胞膜を標的とする、またはこれに結合する生物に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な生物は、細菌、真菌または寄生生物とすることができる。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、毒素、サイトカイン、自己抗体またはケモカインに関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例示的な毒素は、細菌毒素、真菌毒素、動物毒素または化学毒素とすることができる。例示的な化学毒素は、有機ホスフェートとすることができる。例示的な動物毒素は、動物毒中の毒素とすることができる。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、細胞膜に挿入する毒素に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。特定の実施形態では、毒素は、毒の自然の病理的機構の一部として対象の標的細胞の細胞膜または原形質膜に挿入する。特定の実施形態では、ナノ粒子の外側表面における細胞膜または原形質膜は、毒素を実質的に保持する。
本発明の免疫原性組成物中のナノ粒子の外側表面における細胞膜は、任意の好適な細胞に由来することができる。一部の実施形態では、細胞膜は、細胞に由来する原形質膜である。一部の実施形態では、外側表面は、赤血球に由来した原形質膜を含む。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物中のナノ粒子の外側表面は、天然に存在する細胞膜を含むことができ、合成膜をさらに含むことができる。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物中のナノ粒子は、生体適合性、生分解性とすることができるか、または合成材料を含むことができる。
他の実施形態では、本発明の免疫原性組成物中のナノ粒子の内側コンパートメント（内部コア）は、ナノ粒子の外側表面（またはシェル）を支持しない。
一部の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、別の活性成分または免疫原性アジュバントまたは免疫増強物質をさらに含むことができる。
本発明の免疫原性組成物を含むワクチンも提供される。
対象において疾患または状態に関連する部分に免疫応答を誘発する方法であって、有効量の本発明の免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法も提供される。
対象において疾患または状態に関連する部分から前記対象を防御する方法であって、有効量の本発明のワクチンを前記対象に投与するステップを含む、方法も提供される。
本方法は、任意の好適な対象において、疾患もしくは状態を処置または予防するために使用することができる。例えば、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物とすることができる。
一部の実施形態では、本方法において使用されるナノ粒子の細胞膜または原形質膜は、対象と同じ種の細胞または対象の細胞に由来することができる。一部の実施形態では、原形質膜は、対象と同じ種の赤血球に由来し、赤血球は、対象と同じ血液型を有する。
一部の実施形態では、本方法は、前記対象に別の活性成分、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を投与するステップをさらに含むことができる。
本方法は、対象からの任意の好適なタイプの免疫応答を誘発するために使用することができる。一部の実施形態では、本方法は、対象に由来するＴ細胞媒介性免疫応答またはＢ細胞媒介性免疫応答を誘発するために使用することができる。
さらに別の態様では、本開示は、部分に関連する疾患または状態から対象を防御するワクチンを製造するための、有効量の本発明の免疫原性組成物の使用を提供する。
Ｆ．医薬組成物および投与経路
ナノ粒子を単独で、または本明細書に記載されている他の活性成分と組み合わせて含む医薬組成物は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤をさらに含むことができる。薬学的に許容される賦形剤は、対象に非毒性な、他には投与に生物学的に好適な物質である。このような賦形剤は、ナノ粒子の単独での投与、または本明細書に記載されている他の活性成分と組み合わせた投与を容易にし、それらの活性成分と適合性がある。薬学的に許容される賦形剤の例には、安定剤、滑沢剤、界面活性剤、希釈剤、抗酸化剤、結合剤、着色剤、充填剤、乳化剤または味感改変剤が含まれる。好ましい実施形態では、様々な実施形態による医薬組成物は、滅菌組成物である。医薬組成物は、公知の、または当業者に利用可能となったコンパウンディング技法を使用して調製することができる。
このような組成物を管理する国または地方の規制に準拠した組成物を含めた滅菌組成物は、本開示の範囲内にある。
本医薬組成物およびナノ粒子は、単独で、または本明細書に記載されている他の活性成分と組み合わせて、好適な医薬品用溶媒または担体中の溶液剤、乳剤、懸濁剤もしくは分散液剤として、または様々な剤形の調製のため当分野において公知の慣用的な方法に準拠して、固体担体と共に、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤、坐剤、サシェ剤、ドラジェ剤、顆粒剤、散剤、再構成用の散剤、またはカプセル剤として製剤化することができる。ナノ粒子は単独で、または本明細書に記載されている他の活性成分と組み合わせて、および好ましくは医薬組成物の形態で、経口、非経口、直腸、鼻腔、局所もしくは眼経路などの好適な送達経路によって、または吸入によって投与されてもよい。一部の実施形態では、本組成物は、静脈内投与または経口投与向けに製剤化されている。
経口投与の場合、ナノ粒子は単独で、または別の活性成分と組み合わせて、錠剤もしくはカプセル剤などの固体形態で、または溶液剤、乳剤もしくは懸濁剤として提供されてもよい。経口用組成物を調製するため、ナノ粒子は単独で、または他の活性成分と組み合わせて、例えば、毎日、約０．０１～約５０ｍｇ／ｋｇ、または毎日、約０．０５～約２０ｍｇ／ｋｇ、または毎日、約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇの投与量をもたらすように製剤化され得る。経口錠剤は、活性成分を、希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤などの適合可能な薬学的に許容される賦形剤と混合して含むことができる。好適な不活性充填剤としては、炭酸ナトリウムおよび炭酸カルシウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カルシウム、ラクトース、デンプン、糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。例示的な液体経口賦形剤には、エタノール、グリセロール、水などが含まれる。デンプン、ポリビニル－ピロリドン（ＰＶＰ）、デンプングリコール酸ナトリウム、マイクロクリスタリンセルロースおよびアルギン酸が、例となる崩壊剤である。結合剤としては、デンプンおよびゼラチンを挙げることができる。滑沢剤は、存在する場合、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクとすることができる。所望の場合、錠剤をモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの物質でコーティングし、消化管内での吸収を遅延させてもよく、または腸溶コーティング剤でコーティングされてもよい。
経口投与向けカプセル剤には、硬ゼラチンカプセル剤および軟ゼラチンカプセル剤が含まれる。硬ゼラチンカプセル剤を調製するために、活性成分は、固体、半固体または液体の希釈剤と混合されてもよい。軟ゼラチンチンカプセル剤は、活性成分を水、ピーナッツ油もしくはオリーブ油などの油、流動パラフィン、短鎖脂肪酸のモノグリセリドとジグリセリドとの混合物、ポリエチレングリコール４００またはプロピレングリコールと混合することによって調製され得る。
経口投与向けの液剤は、懸濁剤、溶液剤、乳剤もしくはシロップ剤の形態であってもよく、または凍結乾燥されてもよく、または使用前に水もしくは他の好適なビヒクルにより再構成するための乾燥製品として提供されてもよい。このような液体組成物は、必要に応じて以下：懸濁化剤（例えば、ソルビトール、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルなど）などの薬学的に許容される賦形剤；非水性ビヒクル、例えば、油（例えば、扁桃油または画分化ココナッツ油）、プロピレングリコール、エチルアルコールまたは水；保存剤（例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチルまたはｐ－ヒドロキシ安息香酸プロピルまたはソルビン酸）；レシチンなどの湿潤剤；および、所望の場合、着香剤または着色剤を含有してもよい。
本組成物は、直腸投与のために坐剤として製剤化されてもよい。静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻内または皮下経路を含む非経口用途の場合、ナノ粒子を単独で、または他の活性成分と組み合わせて、適切なｐＨおよび等張性に緩衝化された滅菌水溶液もしくは懸濁液、または非経口的に許容される油中で提供されてもよい。好適な水性ビヒクルは、リンゲル液および等張性塩化ナトリウムを含むことができる。このような形態は、アンプルまたは使い捨て注射デバイスなどの単位用量形態、適切な用量を抜き取ることができるバイアルなどの多回用量形態、または注射可能な製剤を調製するために使用することができる固体形態もしくは事前濃縮物で提供されてもよい。例示的な注入用量は、数分～数日の範囲の期間に医薬用担体と混合した薬剤が約１～１０００μｇ／ｋｇ／分の範囲となる。
鼻腔、吸入または経口投与の場合、単独の、または他の活性成分と組み合わせたナノ粒子が、例えば、好適な担体をやはり含有するスプレー製剤を使用して投与されてもよい。
局所施用に関すると、単独の、または他の活性成分と組み合わせたナノ粒子は、クリーム剤もしくは軟膏剤として、または局所投与に好適な類似のビヒクルとして好ましくは製剤化される。局所投与の場合、単独の、または他の活性成分と組み合わせたナノ粒子は、ビヒクルに対して約０．１％～約１０％の薬物の濃度で医薬用担体と混合されてもよい。単独の、または他の活性成分と組み合わせたナノ粒子を投与する別の様式は、経皮送達を行うためにパッチ製剤を利用してもよい。
ある特定の実施形態では、本開示は、ナノ粒子を単独で、または他の活性成分およびメチルセルロースと組み合わせて含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態では、メチルセルロースは、約０．１、０．２、０．３、０．４または０．５～約１％の懸濁液中で存在する。ある特定の実施形態では、メチルセルロースは、約０．１～約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１％の懸濁液中で存在する。ある特定の実施形態では、メチルセルロースは、約０．１～約１％の懸濁液中に存在する。ある特定の実施形態では、メチルセルロースは、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．８または１％の懸濁液中に存在する。ある特定の実施形態では、メチルセルロースは、約０．５％の懸濁液中に存在する。
本明細書で使用する場合、「予防的」処置は、疾患の発症、疾患の症状または医療状態の先送り、現れる可能性のある症状の抑制、あるいは疾患もしくは症状を発症または再発するリスクを低減することを示すことが意図されている。「治癒的」処置は、重症度の軽減、または既存の疾患、症状もしくは状態の悪化の抑制を含む。
当業者は、本明細書の教示の範囲内で製剤を改変し、特定の投与経路のための様々な製剤を提供することができる。特に、単独の、または他の活性成分と組み合わせたナノ粒子は、それらを水または他のビヒクルに一層可溶性にするように改変されてもよい。患者における有益な効果を最大化するため、本化合物の薬物動態を管理するため、投与経路、および特定のナノ粒子を単独で、または他の活性成分と組み合わせた投与レジメンを改変することは、当業者の範囲内にやはり十分にある。
本教示の態様は、本教示の範囲を決して限定しないものとして解釈されるべきではない、以下の実施例に照らし合わせてさらに理解することができる。
（実施例１）
コレステロール－富化ナノ粒子の製剤および特徴付け
実験詳細
細胞膜の誘導：細胞質含有物のないＲＢＣ膜を誘導するため、ＩＣＲマウス（６～８週、ＢｉｏＩＶＴから取得）のパックされたＲＢＣを、４℃において氷冷１Ｘ ＰＢＳ中、５分間、８００×ｇで遠心分離を繰り返して洗浄した。低張処理を行うため、次に、細胞を氷浴中の０．２５Ｘ ＰＢＳに２０分間、懸濁し、８００×ｇで５分間、遠心分離にかけた。ヘモグロビンを除去した一方、ピンク色のペレットを採集した。この過程を３回、繰り返した。膜タンパク質含有量は、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡアッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて定量した。哺乳動物細胞の膜を誘導するため（例えば、血小板、Ｊ７７４マウスマクロファージ、およびＨＬ－６０細胞から誘導した好中球様細胞）、細胞を沈降させて、ペレットを１×ＰＢＳにより３回、洗浄した。次に、１５ｍＬ １Ｘ ＰＢＳ、０．５ｍＭのエチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ；Ｓｉｇｍａ）および５０μＬのホスファターゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤のカクテル（１００Ｘ、Ｓｉｇｍａ）からなる単離緩衝溶液中に細胞ペレットを分散させた。この懸濁液をダウンス型ホモジナイザーにロードし、細胞を１５回通して破壊した。破壊後、この懸濁液を８００×ｇで５分間、沈降させて、大きな破片を取り除いた。上清を採集し、１０，０００×ｇで２５分間、再度、遠心分離にかけ、その後、ペレットを廃棄して、上清を１５０，０００×ｇで３５分間、遠心分離した。遠心分離後、上清を廃棄し、原形質膜をオフホワイト色ペレットとして採取した。次に、膜ペレットをＨ２Ｏ中の１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ；ＵＳＢ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により１度、洗浄し、後の実験のため穏やかな超音波処理により再懸濁させた。膜タンパク質含有量は、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡアッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて定量した。
コレステロール安定化膜ベシクルの製剤：コレステロールに富む細胞膜ベシクルを生成するために、クロロホルムに５０ｍｇ／ｍＬで溶解したコレステロール（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ）を様々な初期ローディングで膜ゴーストに添加し、次いで、３７℃で１０分間、穏やかに混合した。ベシクルを形成するため、この懸濁液をＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＳ３０Ｄ浴型超音波装置中で６分間、超音波処理するか、または懸濁液をＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓの小型押出成形器を使用して、１μｍ、４００ｎｍおよび２００ｎｍの細孔サイズのポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ）に逐次、通して押出成形した。組み込まれなかったコレステロールを除去するため、膜ベシクルの懸濁液をヘキサンに加え（約１：１の容量比）、この混合物を３０分間、室温に置いた。
コレステロールの定量：総コレステロール含有量は、Ａｍｐｌｅｘ（登録商標）Ｒｅｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、製造業者の指示書に基づいて定量した。
ＭＲＳＡ３００上清（ＭＳ）の調製：ＭＲＳＡ ＵＳＡ３００保存溶液（アメリカンタイプカルチャーコレクション、ＡＴＣＣ）をトリプシンソイブロス（ＴＳＢ）の寒天プレートに接種し、３７℃で３０時間、インキュベートした。次に、単一コロニーを寒天プレートから４ｍＬのＴＳＢブロスに移し、次いで、３７℃で１２時間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。次に、細菌培養物を２００ｍＬの新しいＴＳＢに移して、次いで、ＯＤ６００値が約７（ＯＤ６００＝１が、１×１０８ＣＦＵ／ｍＬ細菌に相当する）に到達するまで、約２４時間、３７℃で培養した。上清を採集するため、最初に細菌培養物を４，５００×ｇで３０分間、遠心分離にかけ、次に、上清を０．２μｍの膜フィルターに通した。次に、この上清を凍結乾燥し、その容量の１／１０（１０×の濃度に等しい）まで再構成した。後の実験のため、一定分量のＭＳを－８０℃で保管した。
コレステロールに富むＲＢＣ膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＲＢＣ－Ｖ）によるＭＲＳＡ上清（ＭＳ）の溶血活性の中和：ＭＳ溶血活性の中和を評価するため、４．５μＬのＭＳを最初に様々な濃度のＣｈｏ－ＲＢＣ－Ｖと混合し、１０ｗ／ｖ％スクロースおよび１０ｍＭ ＤＴＴ中、６０μＬの最終容量にした。この混合物を３７℃で３０分間、インキュベートし、次に、１００μＬの５ｖ／ｖ％ヒトＲＢＣ懸濁液に加え、次いで、３０分間、３７℃でインキュベートした。インキュベートの後、上清を採集し、放出したヘモグロビンをプレートリーダーで５４０ｎｍの吸光度を測定することによって定量した。実験はすべて、三連で行った。
コレステロールに富む血小板膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＰＬ－Ｖ）による抗血小板抗体の中和：組換えヒトＴＮＦ－α（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、最終濃度８．８２±０．８０ｎｇ ｍｌ－１）をＣｈｏ－Ｎｅｕ－Ｖと混合した（最終濃度６４、１２８、２５６、５１２および１０２４μｇ／ｍＬ）。この混合物を３７℃で２時間、インキュベートし、次に、１６，１００ｇで１０分間、遠心分離にかけて、ベシクルを取り除いた。上清中のサイトカイン濃度を、ヒトＴＮＦ－α酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって定量した。実験はすべて、三連で行った。
コレステロールに富むマクロファージ膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＭΦ－Ｖ）による内毒素の中和：Ｃｈｏ－ＭΦ－Ｖによるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）の中和を判定するため、Ｃｈｏ－ＭΦ－Ｖの試料（６４、１２８、２５６、５１２および１０２４μｇ／ｍＬ）をＬＰＳ（ＬＰＳ－ＥＫ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、５０マイクロｇ／ｍＬ）と混合し、Ｊ７７４マクロファージ（９６ウェル組織培養プレート中の２×１０４細胞／ウェル）に直ちに加えた。細胞を３７℃において５時間、培養した。培養期間後、培養培地中のＩＬ－６の濃度をマウスＩＬ－６酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって定量した。実験はすべて、三連で行った。
コレステロールに富む好中球膜ベシクル（Ｃｈｏ－Ｎｅｕ－Ｖ）による炎症性サイトカイン（ＴＮＦ－α）の中和：組換えヒトＴＮＦ－α（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、最終濃度８．８２±０．８０ｎｇ ｍｌ－１）をＣｈｏ－Ｎｅｕ－Ｖと混合した（最終濃度６４、１２８、２５６、５１２および１０２４μｇ／ｍＬ）。この混合物を３７℃で２時間、インキュベートし、次に、１３００ｋＤａ ＭＷのカットオフ遠心ろ過器（Ｎａｎｏｓｅｐ、Ｐａｌｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を使用して１６，０００ｇで５分間、ろ過し、未結合サイトカインとベシクル結合サイトカインとを分離した。ろ液中のサイトカイン濃度は、ヒトＴＮＦ－α酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって定量した。
図１～４は、コレステロールに富むＲＢＣ膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＲＢＣ－Ｖ）、コレステロールに富む血小板膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＰＬ－Ｖ）、コレステロールに富むマクロファージ膜ベシクル（Ｃｈｏ－ＭΦ－Ｖ）およびコレステロールに富む好中球性（neutrophhil）膜ベシクル（Ｃｈｏ－Ｎｅｕ－Ｖ）を含めた、いくつかのタイプのコレステロールに富む細胞膜ベシクルの製剤および特徴付けを例示している。
（実施例２）
組成物Ａの調製
実験設計および方法
材料およびデバイス
スフィンゴミエリンは、ＮＯＦから購入した。コレステロールは、Ｓｐｅｃｔｒｕｍから購入した。イソプロピルアルコールは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。滅菌ＰＢＳ（１Ｘ）は、Ｈｙｃｌｏｎｅから購入した。Ｍ－１１０ＥＨ－３０マイクロフルイダイザーは、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＫＭＰｉ ＴＦＦポンプシステムは、Ｒｅｐｌｉｇｅｎから購入した。酢酸セルロース（ＣＡ）カプセルフィルター（０．２μｍ）は、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓから購入した。ガラス製カプセル繊維（０．２μｍ）はＰＡＬＬから購入した。
ＷＯ２０１７／０８７８９７（Ａ１）に開示されている原理を使用し、タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）を用いてｈＲＢＣ膜を調製し、ヘモグロビンおよび他の不純物のレベルを低下させた。一般に、ＴＦＦを１回または複数回使用して、溶解したｈＲＢＣに希釈、濃縮およびダイアフィルトレーションを施し、ヘモグロビンおよび他の不純物を除去する。この過程の終了時に、１Ｘ ＰＢＳ緩衝液中のｈＲＢＣ膜を採集した。
試験方法：
ゼータサイザーナノシリーズモデル：ＺＥＮ３６００によりナノ粒子（またはナノスポンジ）サイズおよび分布指数（ＰＤＩ）を測定した。この試料を１×ＰＢＳに希釈し、０．２５ｍｇ／ｍｌとなる測定濃度にした。
手順
開始濃度に基づいて、個々の内容物の量を算出する。例えば、開始濃度２．５ｍｇ／ｍｌ、２，０００ｍｌの場合、以下の表１に示されている通りの各構成成分に関する算出結果であった。
Figure 2022510170000002
 ＳＭ／Ｃｈｏｌ ＩＰＡ溶液の調製
ＳＭおよびコレステロールを秤量して、ガラスビンに加えた。ＩＰＡをＳＭ／コレステロールのビンに加えた。完全に溶解するまでＳＭ／Ｃｈｏｌ ＩＰＡを加熱した。
超音波処理するための開始作業用混合物の調製
１ｘＰＢＳ中のｈＲＢＣ膜をＳＭおよびコレステロールＩＰＡ溶媒（ＳＭ：コレステロール：ｈＲＢＣ膜の重量比は、４：４：２に等しい）と混合した。この混合物をボルテックスまたは撹拌子により十分に混合した。ｈＲＢＣ膜、ＳＭおよびコレステロールの混合物を超音波処理浴によりホモジナイズした。
ナノ粒子（またはナノスポンジ）調製用のマイクロ流動化
超音波処理後のＲＢＣ膜／ＳＭ／コレステロール混合物を２０ｋｐｓｉでマイクロフルイダイザーに通した。ナノ粒子（またはナノスポンジ）を製品チラーによって冷却して採集した。
ナノスポンジの事前ろ過
殺菌するため、得られたナノスポンジ懸濁液を０．２μｍの酢酸セルロース滅菌フィルターと組み合わせた０．４５μｍのガラス繊維に通して事前ろ過し、より大きな粒子（＞２００μｍ）を除去した。次に、ＴＦＦ（３００ｋｄの中空繊維カラム）を使用してナノスポンジを濃縮し、ダイアフィルトレーションによりＩＰＡを除去（５，０００ｐｐｍ未満）した。
組成物Ａ（ロット５－２７０－０１－Ｓ－ＭＦ－最終平均）の例示的な調製物の粒子サイズ分布を図６に示す。
（実施例３）
メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＵＳＡ３００に感染した肺炎のマウスモデルにおける生存率に及ぼす組成物Ａの影響
要約
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓは、院内または市中感染する肺炎の主要な原因であり、致死率は最大で６０％である。感染の処置は、肺炎を有する患者からの分離物であるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの半分がメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）であるということにより阻まれている。バンコマイシンおよびリネゾリドは、現在のところ、ＭＲＳＡ肺炎に対する一次抗生物質治療法である。しかし、両方で処置された肺炎患者における致死率は依然として高く、耐性の発生および副作用の発生により、これらの抗生物質の有用性が制限されている。抗生物質耐性に対する一貫性のある進化により、ＭＲＳＡ肺炎の予防および処置の代替的方法の探索に至った。このような手法の１つは、肺炎症および上皮細胞崩壊を予防するため、ＭＲＳＡにより生じる細孔形成性毒素などの病原因子を標的とすることである。
この研究では、本発明者らは、ＭＲＳＡ ＵＳＡ３００によって引き起こされた肺感染のマウスモデルを開発し、このモデルを使用して、感染マウスの生存率改善に及ぼす、ｈＲＢＣナノスポンジのリード製剤である、組成物Ａの気管内投与の効果を評価した。この研究の結果は、組成物Ａの気管内投与により、ＭＲＳＡ ＵＳＡ３００に感染した肺炎マウスの致死率が一貫して低下したことを示している。生存率の改善は、ロット依存的ではないが、用量依存的である。２、６および１９ｍｇ／ｋｇにおいて、組成物Ａは、ビヒクルにより処置したマウス（２６％生存率）に比べると、マウスの生存率をそれぞれ、３８％、６６％および６８％とかなり改善した。さらに、組成物Ａの気管内投与により、ＭＲＳＡ ＵＳＡ３００に感染したマウスの肺における、細菌負荷が低下し、潜在的に組成物Ａの作用機序の根底にある。
材料および方法：
動物および飼育（ｈｕｓｂａｎｄｒｙ）
８週齢の雌または雄のＣＤ１マウス（２４～２８グラムの体重）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。マウスをステンレス鋼製ラックのソリッドボトムマイクロアイソレーターケージ（ｓｏｌｉｄ－ｂｏｔｔｏｍ ｍｉｃｒｏ－ｉｓｏｌａｔｏｒ ｃａｇｅ）に群収容し（５匹／ケージ）、放射線処理済みＴｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ２９１８げっ歯類用餌を与え、水を自由摂取させた。放射線処理済みＴｅｋｌａｄ １／８インチのトウモロコシ穂軸寝床７９０２の形態の寝床を設けた。
この環境は、７４°±５°Ｆの温度範囲および３０～７０％の湿度範囲に制御した。蛍光照明により１日あたり１２時間、明るくした。
研究の開始前に、マウスを最低２４時間、順化させた。この研究において、動物の一般的な健康および使用の受容性について観察した。この研究では、健常と思われた動物だけを含ませた。動物は、ＩＡＣＵＣ手順に準拠して取り扱い、動物使用プロトコル（ＡＵＰ）第Ｓ００２２７ｍ番に準拠した。
細菌、培養物および気管内注入
５％ヒツジ血液細胞を補給したトリプチケースソイ寒天プレートのＴｏｄｄ Ｈｅｗｉｔｔに、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で一晩、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ＵＳＡ３００（ＴＰＰＳ１０５６）細菌を成長させた。この培養物を無菌で拭き取り、一晩、成長させるため、Ｔｏｄｄ Ｈｅｗｉｔｔブロス中の液状培養物に移した。感染の当日、細菌を１：１０希釈で部分培養し、０．４のＯＤ６００ｎｍにおいて対数中期期まで成長させた。培養物を１Ｘリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）により数回、洗浄し、培養の間に細菌により放出された毒素を除去して希釈し、３０μＬの容量でマウスあたり１×１０７～８×１０９ＣＦＵの範囲で標的チャレンジ接種材料を得た。接種材料のカウント数は、光学密度によって接種前に推定し、接種後、希釈、プレート培養、２４時間のインキュベートおよびバックカウントによって確認した。次に、データを「接種材料」として記録する。
実験の当日に、ケタミンおよびキシラジン（それぞれ、腹腔内に９０ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）を用いてマウスに麻酔をかけ、麻酔のかかったマウスをオトスコープの先端部に保持し、マウスの声門および声帯をオトスコープ拡大鏡および光源を使用して可視化した。次に、細菌培養物３０μＬを長いプラスチック製ピペットにより気管に送り込んだ。
組成物の気管内投与
細菌注入直後（＜１分）のマウスが依然として麻酔にかけられている場合、組成物ＡまたはビヒクルとしてＰＢＳを３０μＬ、長いプラスチック製ピペットの先端部から気管内に投与した。マウスを麻酔から回復させて、ホームケージに戻した。動物あたりの用量は、使用した組成物Ａのロット濃度、および試験した群動物の平均体重に基づいて計算した。
エンドポイントとしての致死率
研究期間全体を通じて、死亡の兆候および差し迫った致死に関してマウスを入念に観察した。細菌チャレンジ／ナノスポンジ処理後、４日間（特に記載しない場合）、生存を追跡した。研究の終了時に生存しているマウスは、ＣＯ２過剰曝露により人道的に安楽死させた。
エンドポイントとしての肺の細菌数
細菌チャレンジ／ナノスポンジ処理後、肺の細菌数を割り出したマウスを２４時間または４８時間、生存させた。一方の時間点において、マウスを、ＣＯ２過剰曝露により人道的に安楽死させて、左肺または右肺を採集する。肺組織をホモジナイズし、９６ウェルプレートでプレート培養した。インキュベータ中、プレートを３０℃または３７℃のどちらかで一晩、インキュベートした。計数が最も容易な希釈度を計数し、希釈度およびカウント数を記録した。このデータから、ＣＦＵ／グラム組織を計算した。
統計解析
定量的データは、平均値±標準誤差として表した。生存データは、適宜、マントル－コックスログ－ランク検定またはゲーハン－ブレスロウ－ウイルコクソンの検定を使用して解析した（または、特に記載しない場合）。ＣＦＵデータは、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、次いで適宜、Ｄｕｎｎｅｔの検定またはスチューデントｔ検定を使用して解析した。統計解析はすべて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン７．０１を使用して行った。Ｐ値＜０．０５を統計学的に有意と見なした。
結果
組成物Ａの特定
最初のスクリーニング研究（００７）を行い、ＭＲＳＡ肺炎のマウスモデルにおけるリード製剤を特定した。この研究では、５×１０７のコロニー形成単位（ＣＦＵ）／マウスを含む３０μＬのＭＲＳＡ ＵＳＡ３００培養ブロスを気管内注入することによって肺炎を誘導した。細菌チャレンジの直後（１分以内）に、マウス（ｎ＝１０匹のマウス／群）に、組成物Ａまたはビヒクルとして５％ソルビトール／９５％リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）を気管内投与した。細菌チャレンジ／製剤処置後、マウスを４８時間、生存させた。４８時間以内の各処置群において死亡したマウスの数を計数し、生存率を解析した。４８時間の時間点では、残りの生存マウスを犠牲にして、肺を取得して、ＣＦＵ列挙のために処理した。生存データを以下の表２に要約し、図７Ａに示す。最初の４８時間では、ビヒクル処置マウスの５匹が死亡し、組成物Ａ処置マウスは死亡しなかった。生存率は、それぞれ、５０％および１００％であった。ビヒクルと組成物Ａ処置群との間の生存率の差異は、統計学的に有意であった。
Figure 2022510170000003
生存率の改善に及ぼす組成物Ａの再現性影響
上記の研究において、本発明者らは、組成物Ａのロット５－２５７－０６は、ＭＲＳＡ肺炎のマウスモデルにおいて、生存率を有意に改善し、肺の細菌負荷を軽減したことを実証した。効果の再現性を判定するために、本発明者らは、このモデルにおいて同様の濃度を有する組成物Ａの３種の異なるロットを試験した。図８Ａは、これらの試験の一例を示す。この研究（０１１）では、細菌注入後、マウスにＰＢＳ（ビヒクル）、ロット５－２５７－０６を１９ｍｇ／ｋｇまたはロット５－２５７－１６を２２ｍｇ／ｋｇを気管内投与し、処置後、９６時間、観察した。図８Ａに示されている通り、チャレンジ／処置後の９６時間点に、ビヒクル処置群の生存率は５５％であった。ロット５－２５７－０６および５－２５７－１６による処置によって、生存率は有意に改善された（それぞれ、８０％および９５％まで）。図８Ｂは、３種の異なる組成物Ａのロット（５－２５７－０６を１９ｍｇ／ｋｇ、５－２５７－１６を２２ｍｇ／ｋｇおよび５－２６０－０２を２５ｍｇ／ｋｇ）を用いた試験からの平均した生存率のデータをプロットしている。チャレンジ／処置後、１９時間～９６時間のすべての観察時間点において、処置後に生存率の有意な改善が観察された。
組成物Ａの用量－曲線研究
この研究では、組成物Ａのロット５－２６６－０１を、３種の濃度１９ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇで、４つの独立試験（０２２、０２３、０２４および０２６）で気管内投与した。総合的に、合計で４０匹のマウスにビヒクル、１９ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇを投与し、合計で３０匹のマウスに６ｍｇ／ｋｇを投与した。蓄積した生存データを図９に示した通りにプロットした。細菌チャレンジ／ナノスポンジ処置後の９６時間の時間点に、ビヒクル処置群の生存率は２６％であった。生存率は、それぞれ、１９ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇの用量において、６８％、６６％および３８％に向上した。３種の用量のすべての場合に、生存率の有意な改善が観察された。
肺細菌負荷の阻害
最初の研究（００７）で、本発明者らは、組成物Ａのロット５－２５７－０６は、ＭＲＳＡ感染後４８時間時の肺中の細菌負荷は顕著に低下したことを実証した（図７）。この研究（０１２）では、本発明者らは、肺における細菌負荷に及ぼす阻害効果は、組成物Ａの５－２５７－１６の様々なロットを用いると、再現可能であるかどうかを試験した。細菌注入直後に、５－２５７－１６を２２．５ｍｇ／ｋｇで気管内投与し、チャレンジ／処置後の２４時間時にマウスの肺を採取した。方法項目に記載されているＣＦＵカウント数で肺ホモジェネートをプレート培養した。図１０に示される通り、５－２５７－１６により、ＭＲＳＡ肺炎を有するマウスの肺において、細菌負荷が顕著に低下した。
（実施例４）
ナイーブマウスにおける蛍光トレーサーで標識した組成物Ａの肺曝露評価
要約
組成物Ａの蛍光型であるＤｉＲ－組成物Ａを使用して、気管内投与後のマウスの肺における、ＤｉＲ－組成物Ａの取り込み量、分布および保持を研究した。ＤｉＲ－組成物Ａの投与後の表示した時間点に、マウスを犠牲にして、蛍光画像化デバイスまたは蛍光マイクロプレートリーダーを使用してＤｉＲ－組成物Ａの蛍光強度のｅｘ ｖｉｖｏ測定を行うため肺を採取した。ＤｉＲ－組成物Ａは吸収されて、気管内投与後に肺に迅速に分布された。５分以内に、ＤｉＲ－組成物Ａはかなり一様な分布で中枢および末梢肺組織に広がった。ＤｉＲ－組成物Ａは、長時間、肺に留まった。肺中のＤｉＲ－組成物Ａの推定される保持半減期は７～１０日間であった。
材料および方法：
製剤および特徴付け
蛍光標識された組成物Ａを調製するため、スフィンゴミエリンおよびコレステロールの添加前に、１０μｌのＤＭＳＯに溶解したＤｉＲ色素０．１重量パーセントをヒトＲＢＣ膜に加えた。この溶液を４５℃で加熱し、１時間、撹拌し、次に、浴を１０分間、超音波処理し、ＤｉＲのすべてをＲＢＣ膜の脂質二重層に組み込んだ。これらの色素分子をステロールと同様の方法で、脂質二重層に直接挿入するべきである。ＲＢＣ膜の標識後、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを同じように加え、様々な有効性研究に使用する組成物Ａのロットを調製した。図１１～１４に使用したＤｉＲ－組成物Ａは、組成物Ａ（ロット５－２５７－１６）と同じプロトコルを使用して作製した。図１５では、回分５－２６５－０１のプロトコルを使用した。
動的光散乱法（Ｍａｌｖｅｒｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用してＤｉＲ－組成物Ａを特徴付け、サイズ、多分散性およびゼータ電位を評価し、非ＤｉＲ標識製剤との類似性を確認した。色素安定性試験を行い、ＤｉＲ－組成物Ａの蛍光安定性を評価した。放出研究に関すると、２０ｋＤａの透析用カップを大容量（１Ｌ）のＰＢＳに入れて、１５ｍｇ／ｍＬのＤｉＲ－組成物Ａを２００μｌ、各透析用カップ（ｎ＝３）内に加えた。試料に蓋をして、１週間かけて、３００ｒｐｍでゆっくりと撹拌した。１０μｌの試料を表示時間点に採取し、水中、１０×に希釈した。試料の蛍光強度を測定し、開始時点および内部対照と比較して、試料の安定性を評価した。
動物および飼育
２５～３０ｇの間の８週齢の雌ＣＤ１マウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから注文し、収容条件に順化させて、動物使用プロトコル第Ｓ００２２７ｍ番およびＩＡＣＵＣ手順に準拠して取り扱った。マウスをステンレス鋼製ラックの使い捨てプラスチック製ケージに群収容し（５匹／ケージ）、Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ２９１８げっ歯類用餌を与え、水を自由摂取させた。放射線処理済みＴｅｋｌａｄ１／８インチのトウモロコシ穂軸寝床７９０２の形態の寝床を設けた。この環境は、７４°±５°Ｆの温度範囲および３０～７０％の湿度範囲に制御した。蛍光照明により１日あたり１２時間、明るくした。
研究の開始前に、マウスを最低２４時間、順化させた。この研究において、動物の一般的な健康および使用への許容性について観察した。この研究では、健常と思われる動物だけを含ませた。
ナノスポンジ投与
ケタミンおよびキシラジン（それぞれ、腹腔内に９０ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）を用いてマウスに麻酔をかけ、次に、麻酔のかかったマウスをオトスコープの先端部に保持し、声門および声帯をオトスコープ拡大鏡および光源を使用して可視化した。ゲルローディング用の長いプラスチック製ピペットの先端部から、３０μｌの容量のＤｉＲ－組成物Ａを気管にピペット注入した。マウスを麻酔から回復させて、ホームケージに戻した。Ｎ＝３／試験群をこの研究に使用した。
研究期間全体を通じて、死亡のいかなる兆候および健康状態に関してマウスを入念に観察した。ＣＯ２過剰曝露および二次的に頸椎脱臼により、この研究に関して事前に決定した時間点でマウスを人道的に安楽死させた。肺を切除し、アルミニウムホイルで包んだ２ｍＬのプラスチック製のスクリュートップ管に保管した。
Ｉｎ ｖｉｖｏ画像化
マウスから切除した肺を光沢のない黒色背景で、群に応じて並べた。ＩＶＩＳ蛍光画像化デバイスおよびソフトウェアを使用して、肺の写真を撮り、その対応する蛍光カウント数を同時に撮影した肺の明視野画像と重ね合わせた。
肺のホモジナイズおよび蛍光定量
一部の研究では、石英を含む水中で肺組織をホモジナイズし、６０秒間、ビーズビーターホモジナイザーを使用して、ビーズ（１０～２０ビーズの間）を各管に加えた。試料を９６ウェルプレートでプレート培養し、７６０ｎｍの励起、８０５ｎｍの発光でプレートリーダーを使用して蛍光を測定した。ＤｉＲ－組成物Ａを投与しなかった肺からのバックグラウンドシグナルを最終結果から減算した。
結果
ＤｉＲ－組成物Ａの特徴付け
図１１は、ＤｉＲ－組成物Ａのサイズおよび安定性の分析を示す。以下の表３は、ＤｉＲ－組成物Ａの動的光散乱法データを示す。ＤｉＲ－組成物Ａの平均サイズは９８．６ｎｍであり、多分散指数は０．２であり、Ｄ（５０）は６７．２であった。これらのサイズおよびゼータ電位の測定により、非標識組成物Ａに非常に類似した製剤であることが示される。サイズデータは、３つの独立測定の平均値である。安定性データは、蛍光強度が１週間にわたり、透析後も同じ有効性を維持することを示しており、色素は脂質層から漏出していないこと、および本研究全体を通じて、粒子に埋包された状態にあることを示唆する。
Figure 2022510170000004
ＤｉＲ－組成物Ａの肺への取り込みおよび分布
図１２は、ＤｉＲ－組成物Ａの、気管内投与後の１２時間の経過にわたる取り込み量および分布を示している。気管内投与後の指定時間点において、マウスを犠牲にして肺を採取した。赤外蛍光フィルターを使用するＩＶＩＳのｉｎ ｖｉｖｏ画像化装置で、肺試料を画像化した。投与後の５分時に、ＤｉＲ－組成物Ａは、各時間点において肺組織全体に分布し、肺の大部分において、かなり均一な分布および留意すべきナノ粒子の蓄積を伴った。これらの結果は、ナノスポンジは、５分以内でさえも、肺全体に良好な潅流を有することを示している。これは、製剤が肺の末梢に到達するのにほとんど遅延がないことを示している。
気管内投与後のＤｉＲ－組成物Ａの肺での保持
図１３に示されている保持研究に関すると、マウス（ｎ＝３）にＤｉＲ－組成物Ａを気管内投与した。２時間、７日間、１４日間および２１日間という所定の時間点において、各群から３匹のマウスを犠牲にした。肺を切除し、９００μｌの水中でホモジナイズし、次に、プレートリーダー（励起７６０／発光８０５）により蛍光を読み取った。肺蛍光の定量により、３週間にわたり、肺中でＤｉＲ－組成物Ａの減衰があることが示され、推定半減期は７～１０日であった。マウス間のエラーバーは、標準誤差測定値（ＳＥＭ）としてプロットする。２時間の時間点で、シグナルが１００％となるように正規化し、肺組織自体のバックグラウンド蛍光に０を設定した。
肺送達に及ぼす高濃度ＤｉＲ－組成物Ａの効果
図１１～１４に示されている研究において、ナノスポンジは、１５ｍｇ／ｍＬで維持され、回分５－２５７－１６と同等であった。肺分布に及ぼすナノスポンジ濃度の効果を試験するため、本発明者らは、回分５－２６５－０１と同じ方法および濃度を反映する、４６ｍｇ／ｍＬの高濃度回分を生成した。次に、この回分を２３ｍｇ／ｍＬまで希釈して、以前の研究に類似した対照を生成した。４６ｍｇ／ｍＬまたは２３ｍｇ／ｍＬのナノスポンジ３０μｌのどちらかをマウスに投与した。投与して５分後にマウスを犠牲にし、ＩＶＩＳシステムを使用して肺を画像化した。
図１５は、各群におけるナノ粒子の分布を示している。肺内のナノスポンジの広がりを適性に評価する目的で、同じ容量中に半分のフルオロフォア数しか有していない場合を相殺するため、２０ｍｇ／ｍＬの群もまた、より長い蛍光曝露で画像化した。これらの群間の比較により、より高濃度の粒子が、より低い濃度のナノスポンジと正に同程度に均一かつ迅速に分布し、各群間で明確な差異は観察されないことが示される。
ある特定の参照文献：
Figure 2022510170000005

Claims (275)

  1. 内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供せず、
    ａ）前記内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性の液体を含み、かつ／または
    ｂ）前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含み、
    ただし、前記細胞膜が赤血球に由来する場合、前記内側コンパートメント（または内部コア）は細胞液または生理液と等張性である、
    ナノ粒子。
  2. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、細胞液と等張性の液体を含む、請求項１に記載のナノ粒子。
  3. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、細胞に含まれる細胞液と等張性の液体を含む、請求項２に記載のナノ粒子。
  4. 前記細胞が、原核細胞または真核細胞である、請求項３に記載のナノ粒子。
  5. 前記細胞が、単細胞生物の細胞である、請求項３に記載のナノ粒子。
  6. 前記単細胞生物が、細菌または真菌である、請求項５に記載のナノ粒子。
  7. 前記細胞が、多細胞生物の細胞である、請求項３に記載のナノ粒子。
  8. 前記多細胞生物が、植物、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトである、請求項７に記載のナノ粒子。
  9. 前記細胞が、動物細胞、例えば非ヒト哺乳動物細胞またはヒト細胞である、請求項７に記載のナノ粒子。
  10. 前記細胞が、結合組織、例えば、血液、骨、腱、靭帯、脂肪または疎性結合組織、線維性結合組織、骨格結合組織または流体結合組織の細胞である、請求項９に記載のナノ粒子。
  11. 前記細胞が、筋肉組織、例えば、内臓筋または平滑筋、筋骨格または心筋の細胞である、請求項９に記載のナノ粒子。
  12. 前記細胞が、神経組織の細胞、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）または末梢神経系（ＰＮＳ）における細胞である、請求項９に記載のナノ粒子。
  13. 前記細胞が、上皮組織、例えば、単層扁平上皮、層状扁平上皮、単層立方上皮、移行上皮、偽重層円柱上皮（繊毛円柱上皮としても公知である）、円柱上皮、腺上皮または繊毛円柱上皮の細胞である、請求項９に記載のナノ粒子。
  14. 前記細胞が、神経系、心血管系、循環系、脈管系、消化系、内分泌系、免疫系、外皮系、リンパ系、筋骨格系、生殖系、呼吸器系、呼吸器、換気系、泌尿器系または腎臓系または尿路の細胞である、請求項９に記載のナノ粒子。
  15. 前記細胞が、血液細胞、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞である、請求項９に記載のナノ粒子。
  16. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、生理液と等張性の液体を含む、請求項１に記載のナノ粒子。
  17. 前記生理液が、多細胞生物における生理液である、請求項１６に記載のナノ粒子。
  18. 前記多細胞生物が、植物、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトである、請求項１７に記載のナノ粒子。
  19. 前記生理液が、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトにおける生理液、例えば動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトにおける循環血液である、請求項１７に記載のナノ粒子。
  20. 前記生理液が、神経系、心血管系、循環系、脈管系、消化系、内分泌系、免疫系、外皮系、リンパ系、筋骨格系、生殖系、呼吸器系、呼吸器、換気系、泌尿器系または腎臓系または尿路の生理液である、請求項１９に記載のナノ粒子。
  21. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞液または生理液と等張性の液体を含む、請求項１から２０のいずれかに記載のナノ粒子。
  22. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞液または生理液と等張性の液体を含む、請求項１から２０のいずれかに記載のナノ粒子。
  23. 前記細胞膜が原形質膜を含む、請求項１から２２のいずれかに記載のナノ粒子。
  24. 前記細胞膜が細胞内膜を含む、請求項１から２２のいずれかに記載のナノ粒子。
  25. 前記細胞膜が原核細胞に由来する、請求項１から２４のいずれかに記載のナノ粒子。
  26. 前記細胞膜が、単細胞生物、例えば細菌または真菌の細胞に由来する、請求項１から２５のいずれかに記載のナノ粒子。
  27. 前記細胞膜が真核細胞に由来する、請求項１から２４および２６のいずれかに記載のナノ粒子。
  28. 前記細胞膜が、多細胞生物、例えば植物、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトの細胞に由来する、請求項１から２４および２７のいずれかに記載のナノ粒子。
  29. 前記細胞膜が、動物、脊椎動物、非ヒト哺乳動物またはヒトの細胞に由来する、請求項２８に記載のナノ粒子。
  30. 前記細胞が、結合組織、例えば、血液、骨、腱、靭帯、脂肪または疎性結合組織、線維性結合組織、骨格結合組織または流体結合組織の細胞である、請求項２９に記載のナノ粒子。
  31. 前記細胞が、筋肉組織、例えば、内臓筋または平滑筋、筋骨格または心筋の細胞である、請求項２９に記載のナノ粒子。
  32. 前記細胞が、神経組織の細胞、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）または末梢神経系（ＰＮＳ）における細胞である、請求項２９に記載のナノ粒子。
  33. 前記細胞が、上皮組織、例えば、単層扁平上皮、層状扁平上皮、単層立方上皮、移行上皮、偽重層円柱上皮（繊毛円柱上皮としても公知である）、円柱上皮、腺上皮または繊毛円柱上皮の細胞である、請求項２９に記載のナノ粒子。
  34. 前記細胞が、神経系、心血管系、循環系、脈管系、消化系、内分泌系、免疫系、外皮系、リンパ系、筋骨格系、生殖系、呼吸器系、呼吸器、換気系、泌尿器系または腎臓系または尿路の細胞である、請求項２９に記載のナノ粒子。
  35. 前記細胞が、血液細胞、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞である、請求項２９に記載のナノ粒子。
  36. 前記細胞膜が、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む、請求項２９に記載のナノ粒子。
  37. 前記ステロイドが、真菌ステロイド、動物ステロイド、植物ステロイドまたは原核生物のステロイドである、請求項１から３６のいずれかに記載のナノ粒子。
  38. 前記真菌ステロイドが、エルゴステロール、エルゴスタ－５，７，２２，２４（２８）－テトラエン－３β－オール、ザイモステロール、ラノステロールまたは５，６－ジヒドロエルゴステロールである、請求項３７に記載のナノ粒子。
  39. 前記動物ステロイドが、脊椎動物のステロイドまたは昆虫ステロイドである、請求項３７に記載のナノ粒子。
  40. 前記昆虫ステロイドが、エクジステロイド、例えば、２０－ヒドロキシエクジソン（エクジステロンまたは２０Ｅ）である、請求項３９に記載のナノ粒子。
  41. 前記脊椎動物のステロイドが、ステロイドホルモンまたはコレステロールである、請求項３９に記載のナノ粒子。
  42. 前記脊椎動物のステロイドが、コレステロールである、請求項４１に記載のナノ粒子。
  43. 前記ステロイドホルモンが、性ステロイド、例えばアンドロゲン、エストロゲン、またはプロゲストーゲン、コルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドまたはミネラロコルチコイド、またはタンパク同化ステロイド、例えばテストステロンまたはそれらのエステルである、請求項４１に記載のナノ粒子。
  44. 前記植物ステロイドが、アルカロイド、強心配糖体、フィトステロールまたはブラシノステロイドである、請求項３７に記載のナノ粒子。
  45. 前記原核生物のステロイドが、四環式ステロイドまたはトリテルペン、例えばホパンである、請求項３７に記載のナノ粒子。
  46. 前記ステロイドが、コレスタン、例えば、コレステロール、コラン、例えば、コール酸、プレグナン、例えば、プロゲステロン、アンドロスタン、例えば、テストステロンまたはエストラン、例えば、エストラジオールである、請求項１から３６のいずれかに記載のナノ粒子。
  47. 前記ステロイドが、ゴナン、テストステロン、コール酸、デキサメタゾン、ラノステロール、プロゲステロン、メドロゲストン、β－シトステロール、コレステロールおよび５α－コレスタンからなる群から選択される、請求項１から３６のいずれかに記載のナノ粒子。
  48. 前記外側表面（またはシェル）が、真菌細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した真菌ステロイドを含む、請求項１から４７のいずれかに記載のナノ粒子。
  49. 前記外側表面（またはシェル）が、植物細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した植物ステロイドを含む、請求項１から４７のいずれかに記載のナノ粒子。
  50. 前記外側表面（またはシェル）が、原核細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した原核生物のステロイドを含む、請求項１から４７のいずれかに記載のナノ粒子。
  51. 前記外側表面（またはシェル）が、動物細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した動物ステロイドを含む、請求項１から４７のいずれかに記載のナノ粒子。
  52. 前記外側表面（またはシェル）が、脊椎動物細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した脊椎動物のステロイドを含む、請求項５１に記載のナノ粒子。
  53. 前記外側表面（またはシェル）が、哺乳動物細胞、例えばヒト細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばヒトステロイドを含む、請求項５２に記載のナノ粒子。
  54. 前記外側表面（またはシェル）が、血液細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばコレステロールを含む、請求項５３に記載のナノ粒子。
  55. 前記外側表面（またはシェル）が、赤血球、白血球または血小板に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばコレステロールを含む、請求項５３または５４に記載のナノ粒子。
  56. 前記外側表面（またはシェル）が、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化した哺乳動物ステロイド、例えばコレステロールを含む、請求項５５に記載のナノ粒子。
  57. 前記外側表面（またはシェル）が、ヒト赤血球、ヒト白血球および／またはヒト血小板に由来する原形質膜を含み、前記細胞膜が、レベルの増強または富化したヒトステロイド、例えばコレステロールを含む、請求項５６に記載のナノ粒子。
  58. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜中の前記レベルの増強または富化したステロイドが、外から添加されたステロイドによるものである、請求項１から５７のいずれかに記載のナノ粒子。
  59. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜中の前記レベルの増強または富化したステロイドが、その膜中にレベルの増強または富化した前記ステロイドを含有するように改変された細胞に由来する細胞膜の使用によるものである、請求項１から５７のいずれかに記載のナノ粒子。
  60. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、前記細胞膜中の前記ステロイドの基底レベルより少なくとも０．１％高いレベルのステロイドを含む、請求項１から５９のいずれかに記載のナノ粒子。
  61. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、前記細胞膜の総膜タンパク質重量に比べて、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の外から添加されたステロイドを含み、必要に応じて前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の外から添加されたステロイドを含む、請求項１から６０のいずれかに記載のナノ粒子。
  62. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、血液細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜の総膜タンパク質重量に比べて、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の外から添加されたステロイド、例えばコレステロールを含み、必要に応じて前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が血液細胞に由来する細胞膜を含み、約０．１％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の外から添加されたステロイド、例えばコレステロールを含む、請求項６１に記載のナノ粒子。
  63. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、前記細胞膜の総膜タンパク質重量に比べて、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）の前記ステロイドを含み、必要に応じて前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）の前記ステロイドを含む、請求項１から６２のいずれかに記載のナノ粒子。
  64. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、血液細胞に由来する細胞膜を含み、前記細胞膜の総膜タンパク質重量に比べて、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）の前記ステロイド、例えばコレステロールを含み、必要に応じて前記外側表面（またはシェル）の細胞膜が血液細胞に由来する細胞膜を含み、約２０％（ｗ／ｗ）～約１００％（ｗ／ｗ）の前記ステロイド、例えばコレステロールを含む、請求項６３に記載のナノ粒子。
  65. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、約４～約１０、例えば約６～約９の範囲のｐＨを有する、請求項１から６４のいずれかに記載のナノ粒子。
  66. 放出可能なカーゴをさらに含む、請求項１から６５のいずれかに記載のナノ粒子。
  67. 前記放出可能なカーゴが、前記内側コンパートメント（内部コア）内もしくはその上、前記内側コンパートメント（内部コア）と前記外側表面（またはシェル）との間、または前記外側表面（またはシェル）内もしくはその上に位置する、請求項６６に記載のナノ粒子。
  68. 前記放出可能なカーゴの放出が、前記ナノ粒子と標的細胞、組織、臓器もしくは対象との間の接触によって、または前記ナノ粒子を取り囲む物理的パラメータの変化によって引き起こされる、請求項６６または６７に記載のナノ粒子。
  69. 前記放出可能なカーゴが、治療剤、予防剤、診断剤またはマーカー剤、予後剤またはそれらの組合せである、請求項６６から６８のいずれかに記載のナノ粒子。
  70. 前記放出可能なカーゴが、金属粒子、ポリマー粒子、デンドリマー粒子または無機粒子である、請求項６６から６９のいずれかに記載のナノ粒子。
  71. 放出可能なカーゴを含まない、請求項１から６５のいずれかに記載のナノ粒子。
  72. 前記ナノ粒子が、直径約１０ｎｍ～約１０μｍを有する、請求項１から７１のいずれかに記載のナノ粒子。
  73. 前記ナノ粒子が、前記細胞膜が誘導される前記細胞の構成物質を実質的に欠如している、請求項１から７２のいずれかに記載のナノ粒子。
  74. 前記細胞膜が、赤血球に由来する原形質膜を含み、前記ナノ粒子が、ヘモグロビンを実質的に欠如している、請求項７３に記載のナノ粒子。
  75. 前記ナノ粒子が、前記細胞膜の天然の構造上の完全性もしくは活性、または前記細胞膜の前記構成物質を実質的に維持する、請求項１から７４のいずれかに記載のナノ粒子。
  76. 前記内部コアが、塩、糖または糖アルコールを含む、請求項１から７５のいずれかに記載のナノ粒子。
  77. 前記糖が、単糖または二糖である、請求項７６に記載のナノ粒子。
  78. 前記単糖が、フルクトース、ガラクトースまたはグルコースである、請求項７７に記載のナノ粒子。
  79. 前記二糖が、ラクトース、マルトースまたはスクロースである、請求項７７に記載のナノ粒子。
  80. 前記糖アルコールが、エチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、アラビトール（またはアラビニトール）、キシリトール、リビトール（またはアドニトール）、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール（ダルシトール）、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトールおよびポリグリシトールからなる群から選択される、請求項７６に記載のナノ粒子。
  81. 糖アルコールが、ソルビトールである、請求項８０に記載のナノ粒子。
  82. 前記塩、糖または前記糖アルコールが、約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約２９５もしくは３００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度、または２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ～約１，０００ｍｍｏｌ／ｋｇの範囲の濃度を有する、請求項７６から８１のいずれかに記載のナノ粒子。
  83. 前記ナノ粒子が、生体適合性または生分解性である、請求項１から８２のいずれかに記載のナノ粒子。
  84. 前記ナノ粒子が、以下：
    ａ）細胞液または生理液に等張性である内側コンパートメント（または内部コア）、例えば細胞液または生理液に等張性の液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、または
    ｂ）細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）であって、前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含む、前記外側表面（またはシェル）
    を含む、請求項１から８３のいずれかに記載のナノ粒子。
  85. 前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイド、例えば、レベルの増強または富化したステロイドを含まない赤血球、白血球、血小板、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来する細胞膜を含まない、請求項８４に記載のナノ粒子。
  86. 前記ナノ粒子が、以下：
    ａ）細胞液または生理液に等張性である内側コンパートメント（または内部コア）、例えば細胞液または生理液に等張性の液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、および
    ｂ）細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）であって、前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含む、前記外側表面（またはシェル）
    を含む、請求項１から８３のいずれかに記載のナノ粒子。
  87. 前記細胞膜が、赤血球、白血球、細胞、血小板、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来する、請求項８６に記載のナノ粒子。
  88. 前記内側コンパートメント（または内部コア）が、糖または糖アルコール、例えば、ソルビトールを含み、前記外側表面（またはシェル）が、赤血球に由来する原形質膜を含む、請求項１に記載のナノ粒子。
  89. 前記ナノ粒子が、血液循環において、少なくとも約１分間のｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を有する、請求項１から８８のいずれかに記載のナノ粒子。
  90. 前記ナノ粒子が、前記細胞膜が誘導される種または対象への免疫原性を実質的に欠如している、請求項１から８９のいずれかに記載のナノ粒子。
  91. 前記外側表面（またはシェル）が、天然に存在する細胞膜を含み、合成膜をさらに含む、請求項１から９０のいずれかに記載のナノ粒子。
  92. 前記外側表面（またはシェル）が、スフィンゴ脂質をさらに含む、請求項１から９１のいずれかに記載のナノ粒子。
  93. 前記スフィンゴ脂質が、単純スフィンゴ脂質である、請求項９２に記載のナノ粒子。
  94. 前記スフィンゴ脂質が、複合スフィンゴ脂質、例えば、スフィンゴミエリン、糖スフィンゴ脂質またはイノシトール含有セラミドである、請求項９２に記載のナノ粒子。
  95. ナノ粒子を作製する方法であって、以下：
    ａ）細胞に由来する細胞膜にステロイドを接触させて、組合せ物を形成するステップ、ならびに
    ｂ）液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与えて、内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成するステップ
    を含む、方法。
  96. 前記ステップｂ）が、細胞液または生理液に等張性の液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成することを含む、請求項９５に記載の方法。
  97. ナノ粒子を作製する方法であって、
    ａ）細胞に由来する細胞膜にステロイドを接触させて、組合せ物を形成するステップ、ならびに
    ｂ）前記組合せ物に外因性エネルギーを与えて、内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ、ならびに
    ｃ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記ナノ粒子に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む前記内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む前記外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ
    を含む、方法。
  98. ナノ粒子を作製する方法であって、細胞液または生理液に等張性の液体中の赤血球に由来する細胞膜に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性である前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）および前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップを含む、方法。
  99. 以下のステップ：
    ａ）赤血球に由来する細胞膜にステロイドを接触させて、組合せ物を形成するステップ、ならびに
    ｂ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与えて、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ
    を含む、請求項９８に記載の方法。
  100. 以下のステップ：
    ａ）赤血球に由来する細胞膜にステロイドを接触させて、組合せ物を形成するステップ、
    ｂ）前記組合せ物に外因性エネルギーを与え、内部コア、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ、ならびに
    ｃ）細胞液または生理液に等張性の液体中の前記ナノ粒子に外因性エネルギーを与え、細胞液または生理液に等張性の前記液体を含む内側コンパートメント（または内部コア）、およびレベルの増強または富化した前記ステロイドを含む前記細胞膜を含む外側表面を含むナノ粒子を形成するステップ
    を含む、請求項９８に記載の方法。
  101. 細胞に由来する前記細胞膜が、細胞膜ゴーストの形態にある、請求項９５から１００のいずれかに記載の方法。
  102. 前記外因性エネルギーが、機械エネルギー、音響エネルギーまたは熱エネルギーである、請求項９５から１０１のいずれかに記載の方法。
  103. 前記細胞膜が、哺乳動物またはヒト血液細胞、例えば赤血球、白血球または血小板に由来する、請求項９５から１０２のいずれかに記載の方法。
  104. 前記ステロイドが、コレスタン、例えばコレステロールである、請求項１０３に記載の方法。
  105. ナノ粒子を作製する方法であって、
    ａ）細胞に由来する細胞膜に水混和性溶媒に溶解したステロイドおよびスフィンゴ脂質を接触させて、組合せ物を形成するステップ、ならびに
    ｂ）液体中の前記組合せ物に外因性エネルギーを与えて、内側コンパートメント（または内部コア）、ならびに前記細胞膜、前記ステロイドおよび前記スフィンゴ脂質を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子を形成するステップ
    を含む、方法。
  106. 前記細胞膜が、動物細胞、例えば非ヒト哺乳動物細胞またはヒト細胞に由来する、請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記細胞膜が、血液細胞、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、幹細胞、内皮細胞または上皮細胞に由来する、請求項１０５または１０６に記載の方法。
  108. 前記細胞膜が、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む、請求項１０５から１０７のいずれかに記載の方法。
  109. 前記細胞膜が水性液体に含まれている、請求項１０５から１０８のいずれかに記載の方法。
  110. 前記水性液体が、水、約５～約９の範囲のｐＨを有する緩衝液、例えばＰＢＳ、または等張性液体もしくは緩衝液である、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記ステロイドが、コレスタン、例えば、コレステロール、コラン、例えば、コール酸、プレグナン、例えば、プロゲステロン、アンドロスタン、例えば、テストステロンまたはエストラン、例えば、エストラジオールである、請求項１０５から１１０のいずれかに記載の方法。
  112. 前記ステロイドが、ゴナン、テストステロン、コール酸、デキサメタゾン、ラノステロール、プロゲステロン、メドロゲストン、β－シトステロール、コレステロールおよび５α－コレスタンからなる群から選択される、請求項１０５から１１０のいずれかに記載の方法。
  113. 前記スフィンゴ脂質が、単純スフィンゴ脂質である、請求項１０５から１１２のいずれかに記載の方法。
  114. 前記スフィンゴ脂質が、複合スフィンゴ脂質、例えば、スフィンゴミエリン、糖スフィンゴ脂質またはイノシトール含有セラミドである、請求項１０５から１１２のいずれかに記載の方法。
  115. 前記ステロイド、例えばコレステロール、および前記スフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンが、同じ水混和性溶媒に溶解される、請求項１０５から１１４のいずれかに記載の方法。
  116. 前記ステロイド、例えばコレステロール、および前記スフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンが、異なる水混和性溶媒に溶解される、請求項１０５から１１４のいずれかに記載の方法。
  117. 前記水混和性溶媒中の前記ステロイドおよび／または前記スフィンゴ脂質の溶解が、加熱および／または混合、例えば撹拌によって促進される、請求項１０５から１１６のいずれかに記載の方法。
  118. 前記加熱が、約３５℃～約６５℃の範囲の温度で行われる、請求項１１７に記載の方法。
  119. 前記水混和性溶媒が有機化合物または無機化合物である、請求項１０５から１１８のいずれかに記載の方法。
  120. 前記有機化合物が、アルコール、例えばＣ１～Ｃ５アルコールである、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記アルコールが、メタノール、エタノール、１－プロパノール、１，３－プロパンジオール、１，５－ペンタンジオールまたはイソプロピルアルコール（イソプロパノールまたはＩＰＡ）である、請求項１２０に記載の方法。
  122. 前記組合せ物中で、前記水混和性溶媒、例えばＩＰＡが、約５％（ｖ／ｖ）～約４０％（ｖ／ｖ）の範囲の濃度またはレベルを有する、請求項１０５から１２１のいずれかに記載の方法。
  123. 前記組合せ物が、約０．２５ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの範囲、例えば約２．５ｍｇ／ｍｌの質量濃度を有する、請求項１０５から１２２のいずれかに記載の方法。
  124. 前記組合せ物中で、前記ステロイド、例えばコレステロールが、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約４０％（ｗ／ｗ）の濃度またはレベルを有する、請求項１０５から１２３のいずれかに記載の方法。
  125. 前記組合せ物中で、前記スフィンゴ脂質、例えばスフィンゴミエリンが、約２０％（ｗ／ｗ）～約９０％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約４０％（ｗ／ｗ）の濃度またはレベルを有する、請求項１０５から１２４のいずれかに記載の方法。
  126. 前記組合せ物中で、前記細胞膜が、約５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の範囲、例えば約２０％（ｗ／ｗ）の濃度またはレベルを有する、請求項１０５から１２５のいずれかに記載の方法。
  127. 前記組合せ物に外因性エネルギーを与えるステップが、前記組合せ物に液体中で超音波処理を施すことを含む、請求項１０５から１２６のいずれかに記載の方法。
  128. 前記組合せ物に、約１５℃～約５０℃の範囲の温度で、超音波処理が施される、請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記組合せ物に、約２０キロヘルツ（ｋＨｚ）～約６０ｋＨｚの範囲の周波数の超音波処理が施される、請求項１２７または１２８に記載の方法。
  130. 前記組合せ物に、約５分間～約５０分間の範囲の時間、超音波処理が施される、請求項１２７から１２９のいずれかに記載の方法。
  131. 前記組合せ物に外因性エネルギーを与えるステップ、例えば前記組合せ物に超音波処理を施すステップが、前記組合せ物中の前記細胞膜、ステロイドおよびスフィンゴ脂質をホモジナイズするために行われる、請求項１０５から１３０のいずれかに記載の方法。
  132. その外側表面（またはシェル）が、融合細胞膜、ステロイドおよびスフィンゴ脂質を含む、ナノ粒子を生成する、請求項１０５から１３０のいずれかに記載の方法。
  133. 約０．２またはそれより高い粒子分布指数（ＰＤＩ）を有するナノ粒子を生成する、請求項１０５から１３２のいずれかに記載の方法。
  134. ステップｂ）の後に、前記ナノ粒子に、高せん断流体プロセッサーで高せん断処理（または高せん断力処理）が施されるステップをさらに含む、請求項１０５から１３３のいずれかに記載の方法。
  135. 前記高せん断流体プロセッサーが、マイクロフルイダイザー（または、マイクロフルイダイザープロセッサー）または高いせん断力を発生するホモジナイザーである、請求項１３４に記載の方法。
  136. 前記高せん断流体プロセッサーが、マイクロフルイダイザー（または、マイクロフルイダイザープロセッサー）である、請求項１３５に記載の方法。
  137. 前記マイクロフルイダイザーが、約１０，０００ｐｓｉ～約３０，０００ｐｓｉの実質的に一定の圧力を発生するように構成されている、請求項１３６に記載の方法。
  138. 前記マイクロフルイダイザーが、上流から下流にかけて、前記ナノ粒子を投入する入口、静圧を発生するためのインテンシファイアポンプ、前記ナノ粒子に高せん断圧を発生するための衝突式ジェットチャンバー、および前記ナノ粒子を取り出すための出口を備える、マイクロ流体反応技術（ＭＲＴ）構成を有する、請求項１３６または１３７に記載の方法。
  139. 前記マイクロフルイダイザーが、Ｚタイプの相互作用チャンバーを備える、請求項１３６から１３８のいずれかに記載の方法。
  140. 前記マイクロフルイダイザーが、Ｙタイプの相互作用チャンバーを備える、請求項１３６から１３８のいずれかに記載の方法。
  141. マイクロ流動化が、単一圧力または異なる圧力の組合せを使用して行われる、請求項１３６から１４０のいずれかに記載の方法。
  142. 前記マイクロ流動化が、単一通過数または複数の通過数を使用して行われる、請求項１３６から１４１のいずれかに記載の方法。
  143. 前記ナノ粒子を冷却するステップをさらに含む、請求項１３６から１４２のいずれかに記載の方法。
  144. 前記マイクロフルイダイザーのチャンバーを出た後のチャネル中の前記ナノ粒子が、クーラントを含む製品チラーによって冷却される、請求項１３６から１４３のいずれかに記載の方法。
  145. 前記製品チラー、または前記製品チラーにおける前記クーラントが、約４℃～約５５℃の範囲の温度に設定される、請求項１４４に記載の方法。
  146. 約０．０５～約０．２の範囲の粒子分布指数（ＰＤＩ）を有するナノ粒子を生成する、請求項１０５から１４５のいずれかに記載の方法。
  147. 約３０ｎｍ～約３００ｎｍの範囲のＺ平均値を有する粒子サイズを有するナノ粒子を生成する、請求項１０５から１４６のいずれかに記載の方法。
  148. 以下：
    １）約２００ｎｍもしくはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去もしくはそのレベルを低下させるステップ、
    ２）前記水混和性溶媒を除去もしくはそのレベルを低下させるステップ、
    ３）前記ナノ粒子を濃縮するステップ、
    ４）前記ナノ粒子を滅菌するステップ、および／または
    ５）前記ナノ粒子を個々の容器に充填するステップ
    のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項１０５から１４７のいずれかに記載の方法。
  149. 以下：
    １）約２００ｎｍもしくはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去もしくはそのレベルを低下させるステップ、
    ２）前記水混和性溶媒を除去もしくはそのレベルを低下させるステップ、
    ３）前記ナノ粒子を濃縮するステップ、
    ４）前記ナノ粒子を滅菌するステップ、および／または
    ５）前記ナノ粒子を個々の容器に充填するステップ
    のうちの２つ、３つ、４つまたは５つをさらに含む、請求項１０５から１４９のいずれかに記載の方法。
  150. ステップ１）が、前記ナノ粒子を含有する液体にろ過を施すステップを含む、請求項１４８または１４９に記載の方法。
  151. 前記ろ過が、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリ二フッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ガラス繊維、酢酸セルロースまたはそれらの組合せを含むフィルターを使用して行われる、請求項１５０に記載の方法。
  152. 前記フィルターが、約０．２μｍ～約１．２μｍの範囲の細孔サイズを有する、請求項１５０または１５１に記載の方法。
  153. 前記ろ過が、単一フィルターを使用して行われる、請求項１５０から１５２のいずれかに記載の方法。
  154. 前記ろ過が、異なる細孔サイズを有する複数のフィルターを使用して行われる、請求項１５０から１５３のいずれかに記載の方法。
  155. 前記ろ過が、約２００ｎｍまたはそれより大きな粒子サイズを有する粒子を除去するかまたはそのレベルを低下するため、および前記ナノ粒子を滅菌するために行われる、請求項１５０から１５４のいずれかに記載の方法。
  156. ステップ２）および／または３）が、前記ナノ粒子を含有する液体にタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）を施すステップを含む、請求項１５０から１５５のいずれかに記載の方法。
  157. 前記ＴＦＦが、フィードレザーバー、フィルターデバイスおよび収集デバイスを備えるＴＦＦシステムを使用して行われ、前記フィードレザーバーが、前記フィルターデバイスの入口を介して前記フィルターデバイスと流体連通しており、前記フィルターデバイスは、前記フィルターデバイスの透過液出口を介して前記収集デバイスと流体連通しており、前記フィルターデバイスは、前記フィルターデバイスの保持液出口を介して前記フィードレザーバーと流体連通している、請求項１５６に記載の方法。
  158. 前記フィルターデバイスが、カートリッジ、カセット、または中空繊維フィルターを含有するカラムの形態にある、請求項１５７に記載の方法。
  159. 前記フィルターデバイスが、約１００Ｋｄ～約３００Ｋｄの範囲、例えば３００Ｋｄの細孔サイズを有するろ過膜を備える、請求項１５８に記載の方法。
  160. 前記ＴＦＦが、ダイアフィルトレーション方法により行われる、請求項１５６から１５９のいずれかに記載の方法。
  161. 前記ダイアフィルトレーション方法が、連続式、断続式または逐次式ダイアフィルトレーション方法である、請求項１６０に記載の方法。
  162. 前記ＴＦＦが、単一サイクルまたは複数のサイクルのダイアフィルトレーション方法により、例えば、複数のサイクルの連続式ダイアフィルトレーション方法により行われる、請求項１６０または１６１に記載の方法。
  163. 前記ナノ粒子を採集するステップをさらに含む、請求項１５６から１６２のいずれかに記載の方法。
  164. 前記ナノ粒子が、前記フィルターデバイスの保持液出口から採集される、請求項１６３に記載の方法。
  165. 前記ＴＦＦが、前記ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体から前記水混和性溶媒の量またはレベルを低下させるために使用される、請求項１５６から１６４のいずれかに記載の方法。
  166. 前記ＴＦＦが、前記ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体から前記水混和性溶媒を除去するために使用される、請求項１５６から１６４のいずれかに記載の方法。
  167. 前記ＴＦＦが、前記組成物から前記水混和性溶媒の約５０％～約９９．９９９９％を除去するために使用される、請求項１６５または１６６に記載の方法。
  168. 前記水混和性溶媒がＩＰＡであり、前記ＴＦＦが、前記組成物中の前記ＩＰＡの濃度またはレベルを５，０００ｐｐｍ未満に低下させるために使用される、請求項１６５または１６６に記載の方法。
  169. 前記水混和性溶媒がＩＰＡであり、前記ＴＦＦが、前記組成物中の前記ＩＰＡの濃度またはレベルを１，０００ｐｐｍ未満に低下させるために使用される、請求項１６８に記載の方法。
  170. 前記ＴＦＦが、前記ナノ粒子を約１倍～約４００倍に濃縮するため、および／または富化させるために使用される、請求項１５６から１６９のいずれかに記載の方法。
  171. ステップ２）および３）が一緒にされて、前記ナノ粒子を含有する液体にタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）を施すステップを含む単一ステップにする、請求項１５６から１７０のいずれかに記載の方法。
  172. 前記ＴＦＦ処理の後に、前記ナノ粒子を含有する組成物、例えば液体に、前記ナノ粒子を含有する前記組成物を滅菌するステップが施される、請求項１５６から１７１のいずれかに記載の方法。
  173. 前記組成物を殺菌するステップが、前記組成物にろ過を施すステップを含む、請求項１７２に記載の方法。
  174. 前記ろ過が、約０．２μｍの細孔サイズを有するフィルターを使用して行われ、かつ／または前記ろ過が、ＰＥＳ、ＰＶＤＦ、ガラス繊維、酢酸セルロースまたはそれらの組合せを含むフィルターを使用して行われる、請求項１７３に記載の方法。
  175. 前記水混和性溶媒を除去または蒸発させて、前記ステロイドおよび前記スフィンゴ脂質を含む膜を形成するステップを含まない、請求項１０５から１７４のいずれかに記載の方法。
  176. 前記細胞膜が、原形質膜に由来する赤血球を含み、前記ステロイドがコレステロールであり、前記スフィンゴ脂質がスフィンゴミエリンであり、前記水混和性溶媒がＩＰＡである、請求項１０５から１７５のいずれかに記載の方法。
  177. 請求項９５から１７６のいずれかに記載の方法により調製される、ナノ粒子。
  178. 請求項１０５から１７６のいずれかに記載の方法により調製される、ナノ粒子。
  179. 前記ナノ粒子の前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供せず、かつ／または細胞液または生理液に等張性であり、例えば、内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性である液体を含む、請求項１７８に記載のナノ粒子。
  180. 前記外側表面（またはシェル）が、細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、請求項１７８または１７９に記載のナノ粒子。
  181. 前記外側表面（またはシェル）が、融合細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、請求項１８０に記載のナノ粒子。
  182. 前記外側表面（またはシェル）が、原形質膜に由来する赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、請求項１８０または１８１に記載のナノ粒子。
  183. 前記外側表面（またはシェル）が、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約２０％（ｗ／ｗ）～約８０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約１０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む、請求項１８２に記載のナノ粒子。
  184. 前記外側表面（またはシェル）が、約４０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約４０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約２０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む、請求項１８３に記載のナノ粒子。
  185. 内側コンパートメント（または内部コア）および外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であって、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）に固体支持体を提供せず、かつ／または細胞液または生理液に等張性である、例えば内側コンパートメント（または内部コア）が、細胞液または生理液に等張性の液体を含み、前記外側表面（またはシェル）が、細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、ナノ粒子。
  186. 前記外側表面（またはシェル）が、融合細胞膜に由来する細胞、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、請求項１８５に記載のナノ粒子。
  187. 前記外側表面（またはシェル）が、原形質膜に由来する赤血球、コレステロールおよびスフィンゴミエリンを含む、請求項１８５または１８６に記載のナノ粒子。
  188. 前記外側表面（またはシェル）が、約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約２０％（ｗ／ｗ）～約８０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約１０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む、請求項１８７に記載のナノ粒子。
  189. 前記外側表面（またはシェル）が、約４０％（ｗ／ｗ）のコレステロール、約４０％（ｗ／ｗ）のスフィンゴミエリン、および約２０％（ｗ／ｗ）の赤血球に由来する原形質膜を含む、請求項１８８に記載のナノ粒子。
  190. 前記レベルの増強または富化したステロイドを含まない同等のナノ粒子に比べて、一層良好な安定性を有する、請求項１から９４および１７７から１８９のいずれかに記載のナノ粒子。
  191. 前記ナノ粒子の前記細胞膜が誘導されるあるタイプの細胞に結合するように構成されている、請求項１から９４および１７７から１９０のいずれかに記載のナノ粒子。
  192. 前記ナノ粒子の前記細胞膜を標的とするまたはこれに結合する部分に結合するようまたはこの部分を中和するように構成されている、請求項１から９４および１７７から１９１のいずれかに記載のナノ粒子。
  193. 前記部分が、薬剤、例えば化学剤、分子または生物である、請求項１９２に記載のナノ粒子。
  194. 前記部分が、毒素、サイトカイン、自己抗体またはケモカインである、請求項１９３に記載のナノ粒子。
  195. 前記毒素が、細菌毒素、真菌毒素、動物毒素または化学毒素である、請求項１９４に記載のナノ粒子。
  196. 前記化学毒素が、有機ホスフェートである、請求項１９５に記載のナノ粒子。
  197. 前記動物毒素が、動物毒における毒素である、請求項１９５に記載のナノ粒子。
  198. 前記生物が、ウイルス、細菌、真菌または寄生生物である、請求項１９３に記載のナノ粒子。
  199. 前記レベルの増強または富化したステロイドを含まない同等のナノ粒子に比べて、前記ナノ粒子の前記細胞膜を標的とするまたはこれに結合する部分に結合するまたはこれを中和する一層良好な能力を有する、請求項１から９４および１７７から１９８のいずれかに記載のナノ粒子。
  200. 有効量の、請求項１から９４および１７７から１９９のいずれかに記載のナノ粒子を含む、医薬送達システムまたはデバイス。
  201. 別の活性成分、または医学的にまたは薬学的に許容される担体もしくは賦形剤をさらに含む、請求項２００に記載の医薬送達システムまたはデバイス。
  202. 有効量の、請求項１から９４および１７７から１９９のいずれかに記載のナノ粒子、ならびに薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
  203. 別の活性成分をさらに含む、請求項２０２に記載の医薬組成物。
  204. 前記ナノ粒子の前記細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するように構成されている、請求項２０２または２０３に記載の医薬組成物。
  205. 前記ナノ粒子の前記外側表面が、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む、請求項２０２から２０４のいずれかに記載の医薬組成物。
  206. 必要とする対象において疾患もしくは状態を処置または予防する方法であって、
    ａ）内側コンパートメント（または内部コア）、および細胞に由来する細胞膜を含む外側表面（またはシェル）を含むナノ粒子であり、前記内側コンパートメント（または内部コア）が、前記外側表面（またはシェル）中の前記細胞膜に固体支持体を提供しない、前記ナノ粒子、あるいは
    ｂ）請求項１から９４および１７７から１９９のいずれかに記載のナノ粒子、請求項２００から２０１のいずれかに記載の医薬送達システムもしくはデバイス、または請求項２０２から２０５のいずれかに記載の医薬組成物
    の有効量を前記対象に投与するステップを含む、方法。
  207. 前記対象がヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項２０６に記載の方法。
  208. 前記ナノ粒子中の前記細胞膜が、前記対象と同じ種の細胞に由来するか、または前記対象の細胞に由来する、請求項２０６または２０７に記載の方法。
  209. 前記ナノ粒子中の前記細胞膜が、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する、請求項２０８に記載の方法。
  210. 前記ナノ粒子中の前記細胞膜が、前記対象と同じ種の赤血球に由来し、前記赤血球が、前記対象と同じ血液型を有する、請求項２０９に記載の方法。
  211. 前記ナノ粒子の前記細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するために使用される、請求項２０６から２１０のいずれかに記載の方法。
  212. 前記部分が、薬剤、例えば化学剤、分子または生物である、請求項２１１に記載の方法。
  213. 前記生物が、細菌、真菌または寄生生物である、請求項２１２に記載の方法。
  214. 前記部分が、毒素、サイトカイン、自己抗体またはケモカインである、請求項２１２に記載の方法。
  215. 前記毒素が、細菌毒素、真菌毒素、動物毒素または化学毒素である、請求項２１４に記載の方法。
  216. 前記化学毒素が、有機ホスフェートである、請求項２１５に記載の方法。
  217. 前記動物毒素が、動物毒における毒素である、請求項２１５に記載の方法。
  218. 前記毒素が、細胞膜に挿入する毒素である、請求項２１５に記載の方法。
  219. 前記毒素が、前記毒の自然の病理的機構の一部として、前記対象の標的細胞の前記細胞膜または原形質膜に挿入する、請求項２１８に記載の方法。
  220. 前記ナノ粒子の前記外側表面における前記細胞膜または原形質膜が、前記毒素を実質的に保持する、請求項２１８または２１９に記載の方法。
  221. 前記ナノ粒子の前記外側表面が、血液細胞、例えば、赤血球、白血球および／または血小板に由来する原形質膜を含む、請求項２０６から２２０のいずれかに記載の方法。
  222. 別の活性成分、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を前記必要とする対象に投与するステップをさらに含み、または前記ナノ粒子が、医薬送達システムまたはデバイスにより投与される、請求項２０６から２２１のいずれかに記載の方法。
  223. 必要とする対象において疾患もしくは状態を処置または予防する医薬を製造するための、有効量の、請求項１から９４および１７７から１９９のいずれかに記載のナノ粒子の使用。
  224. 有効量の、請求項１から９４および１７７から１９９のいずれかに記載のナノ粒子を含む、免疫原性組成物。
  225. 新生物に特異的な免疫原性組成物として構成されており、前記ナノ粒子の前記外側表面が、新生物細胞に由来する細胞膜を含む、請求項２２４に記載の免疫原性組成物。
  226. 前記細胞膜が、対象の良性新生物細胞、潜在的に悪性の新生物細胞、がん細胞、がん細胞系またはがん細胞に由来する、請求項２２５に記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  227. 前記ナノ粒子の前記外側表面中の前記細胞膜が、前記新生物細胞に対する免疫応答を誘発するためのその構造的完全性を実質的に保持している、請求項２２５または２２６に記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  228. 免疫原性アジュバントをさらに含む、請求項２２５から２２７のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  229. 免疫増強物質をさらに含む、請求項２２５から２２８のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  230. 前記ナノ粒子が、別の活性成分または放出可能なカーゴをさらに含む、請求項２２５から２２９のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  231. 前記ナノ粒子が、約１０ｎｍ～約１０μｍの直径を有する、請求項２２５から２３０のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  232. 前記ナノ粒子が、前記細胞膜が誘導される前記新生物細胞の構成物質を実質的に欠如している、請求項２２５から２３１のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  233. 前記外側表面（またはシェル）の前記細胞膜が、レベルの増強または富化したステロイドを含まない、請求項２２５から２３１のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  234. 前記ナノ粒子の前記外側表面が、天然に存在する細胞膜を含み、合成膜をさらに含む、請求項２２５から２３３のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物。
  235. 請求項２２５から２３４のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物を含むワクチン。
  236. 必要とする対象において新生物を処置または予防する方法であって、請求項２２５から２３４のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物または請求項２３５に記載のワクチンの有効量を前記対象に投与するステップを含む、方法。
  237. 前記対象がヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項２３６に記載の方法。
  238. 前記細胞膜が、前記対象と同じ種の新生物細胞または前記対象の新生物細胞に由来する、請求項２３６または２３７に記載の方法。
  239. 前記対象に、別の活性成分、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を投与するステップをさらに含む、請求項２３６から２３８のいずれかに記載の方法。
  240. 新生物から対象を処置または防御するワクチンを製造するための、有効量の、請求項２２５から２３４のいずれかに記載の新生物に特異的な免疫原性組成物の使用。
  241. 前記ナノ粒子の前記細胞膜を標的とするもしくはこれに結合する部分に関連する疾患もしくは状態を処置または予防するよう構成されており、前記ナノ粒子の前記外側表面が前記部分を含む、請求項２２４に記載の免疫原性組成物。
  242. 前記部分が、薬剤、例えば化学剤、分子、生物またはそれらの抗原である、請求項２４１に記載の免疫原性組成物。
  243. 前記生物が、細菌、真菌または寄生生物である、請求項２４２に記載の免疫原性組成物。
  244. 前記部分が、毒素、サイトカイン、自己抗体またはケモカインである、請求項２４１に記載の免疫原性組成物。
  245. 前記毒素が、細菌毒素、真菌毒素、動物毒素または化学毒素である、請求項２４４に記載の免疫原性組成物。
  246. 前記化学毒素が、有機ホスフェートである、請求項２４５に記載の免疫原性組成物。
  247. 前記動物毒素が、動物毒における毒素である、請求項２４５に記載の免疫原性組成物。
  248. 前記毒素が、細胞膜に挿入する毒素である、請求項２４４に記載の免疫原性組成物。
  249. 前記毒素が、前記毒の自然の病理的機構の一部として前記対象の標的細胞の前記細胞膜または原形質膜に挿入する、請求項２４８に記載の免疫原性組成物。
  250. 前記ナノ粒子の前記外側表面中の前記細胞膜または原形質膜が、前記毒素を実質的に保持する、請求項２４８または２４９に記載の免疫原性組成物。
  251. 前記細胞膜が、細胞に由来する原形質膜である、請求項２４１から２５０のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  252. 前記ナノ粒子の前記外側表面が、天然に存在する細胞膜を含み、合成膜をさらに含む、請求項２４１から２５１のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  253. 前記ナノ粒子が、生体適合性、生分解性であるか、または合成材料を含む、請求項２４１から２５２のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  254. 前記内側コンパートメント（内部コア）が、前記外側表面を支持しない、請求項２４１から２５３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  255. 前記外側表面が、赤血球に由来する原形質膜を含む、請求項２４１から２５４のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  256. 別の活性成分をさらに含む、請求項２４１から２５５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  257. 免疫原性アジュバントまたは免疫増強物質をさらに含む、請求項２４１から２５６のいずれかに記載の免疫原性組成物。
  258. 請求項２４１から２５７のいずれかに記載の免疫原性組成物を含む、ワクチン。
  259. 対象において疾患または状態に関連する部分に免疫応答を誘発させる方法であって、有効量の、請求項２４１から２５７のいずれかに記載の免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
  260. 対象において疾患または状態に関連する部分から前記対象を防御する方法であって、有効量の、請求項２５８に記載のワクチンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
  261. 前記対象がヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項２６０に記載の方法。
  262. 前記細胞膜または原形質膜が、前記対象と同じ種の細胞または前記対象の細胞に由来する、請求項２６０または２６１に記載の方法。
  263. 前記原形質膜が対象と同じ種の赤血球に由来し、前記赤血球が前記対象と同じ血液型を有する、請求項２６２に記載の方法。
  264. 別の活性成分、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項２５９から２６３のいずれかに記載の方法。
  265. 前記免疫応答が、Ｔ細胞媒介性免疫応答またはＢ細胞媒介性免疫応答である、請求項２５９から２６４のいずれかに記載の方法。
  266. 前記部分に関連する疾患または状態から対象を防御するワクチンを製造するための、有効量の、請求項２４１から２５７のいずれかに記載の免疫原性組成物の使用。
  267. 疾患または状態が、感染、例えば、皮膚感染、敗血症、肺炎または自己免疫反応、例えば血液細胞または赤血球に対する自己免疫抗体などの自己免疫抗体の産生による自己免疫反応である、請求項２０６から２２２のいずれかに記載の方法。
  268. 前記ナノ粒子または前記医薬組成物が、腸／胃腸管、経口、非経口、静脈内、直腸、鼻腔、局所、眼、吸入または気管内経路により投与される、請求項２０６から２２２、および２６７のいずれかに記載の方法。
  269. 前記疾患または状態が、感染、例えば、皮膚感染、敗血症または肺炎であり、前記ナノ粒子または前記医薬組成物が、気管内経路により投与される、請求項２６７または２６８に記載の方法。
  270. 前記ナノ粒子または前記医薬組成物が、気管内注入または気管内吸入により投与される、請求項２６９に記載の方法。
  271. 前記新生物に特異的な免疫原性組成物またはワクチンが、腸／胃腸管、経口、非経口、静脈内、直腸、鼻腔、局所、眼、吸入または気管内経路により投与される、請求項２３６から２３９のいずれかに記載の方法。
  272. 前記免疫原性組成物が、腸／胃腸管、経口、非経口、静脈内、直腸、鼻腔、局所、眼、吸入または気管内経路により投与される、請求項２５９から２６５のいずれかに記載の方法。
  273. 前記対象に第２の治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項２０６から２２２、２３６から２３９、２５９から２６５および２６７から２７２のいずれかに記載の方法。
  274. 前記第２の治療剤が、抗生物質、抗腫瘍剤もしくは抗がん剤、または免疫応答モジュレーター、例えば、免疫応答活性化因子または抑制因子である、請求項２７３に記載の方法。
  275. 前記対象に第２の治療剤を投与するステップを含まない、請求項２０６から２２２、２３６から２３９、２５９から２６５および２６７から２７２のいずれかに記載の方法。
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