JP2022163080A - マイクロキャピラリーアレイを使用したスクリーニングのための方法およびシステム - Google Patents
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- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0893—Geometry, shape and general structure having a very large number of wells, microfabricated wells
Abstract
Description
本出願は、2016年12月12日に出願された米国仮特許出願第62/433,210号の利益を主張するものであり、それらの全ては参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、マイクロキャピラリーアレイを提供するステップ、ならびに
少なくとも1つの変異体タンパク質と少なくとも1つの固定化標的分子との会合を示す少なくとも1つのレポーターエレメントからのシグナルを測定して、少なくとも1つの目的のマイクロキャピラリーを同定するステップ。
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、アレイ。
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、マイクロキャピラリーアレイを提供するステップ、ならびに
少なくとも1つの変異体タンパク質と少なくとも1つの固定化標的分子との会合を示す少なくとも1つのレポーターエレメントからのシグナルを測定して、少なくとも1つの目的のマイクロキャピラリーを同定するステップ。
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、アレイ。
したがって、いくつかの態様において、本開示は、以下のステップを含む変異体タンパク質の集団をスクリーニングする方法を提供する:
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、マイクロキャピラリーアレイを提供するステップ、ならびに
少なくとも1つの変異体タンパク質と少なくとも1つの固定化標的分子との会合を示す少なくとも1つのレポーターエレメントからのシグナルを測定して、少なくとも1つの目的のマイクロキャピラリーを同定するステップ。
いくつかの実施形態において、孔径は1μm、5μm、10μm、50μm、100μm、250μm、350または500μmである。いくつかの実施形態において、孔径は5μm~500μmである。いくつかの実施形態において、孔径は10μm~450μmである。いくつかの実施形態において、孔径は50μm~500μmである。いくつかの実施形態において、孔径は100μm~500μmである。いくつかの実施形態において、孔径は250μm~500μmである。いくつかの実施形態において、孔径は350μm~500μmである。いくつかの実施形態において、孔径は100μm~450μmである。いくつかの実施形態において、孔径は250μm~450μmである。
いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約400、500、1000、2,000、3,000、4,000、5,000、6,000、7,000、8,000、9,000、10,000、20,000、50,000、100,000、200,000、300,000、400,000、500,000、600,000、700,000、または800,000個である。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約500~800,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約1000~700,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約2000~600,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約10,000~800,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約10,000~700,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約50,000~800,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約50,000~700,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約100,000~700,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約100,000~600,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約100,000~500,000個の間で変動する。いくつかの実施形態において、アレイ1平方cm当たりのマイクロキャピラリーの数は、約500,000~800,000個の間で変動する。
本発明の別の態様によれば、以下を含む変異体タンパク質の集団をスクリーニングするためのシステムが提供される:
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、アレイ。これらのスクリーニングデバイスの構成要素は上記に詳細に記載されており、それらのいずれもスクリーニングのためのシステムに組み込むことができる。
本出願は、以下のステップを含む変異体タンパク質の集団をスクリーニングする方法を提供する:
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、変異体タンパク質が特定の親和性で固定化標的分子と会合する、マイクロキャピラリーアレイを提供するステップ、ならびに
少なくとも1つの変異体タンパク質と少なくとも1つの固定化標的分子との会合を示す少なくとも1つのレポーターエレメントからのシグナルを測定して、少なくとも1つの目的のマイクロキャピラリーを同定するステップ。
図1A-図1Cは、固定化標的分子としての細胞表面タンパク質(例えば、上皮成長因子受容体(「EGFR」))と会合することができる可溶性タンパク質、この場合は固定化標的タンパク質の例示的なスクリーニング方法を示す。図1A(左側のパネル)は、その表面にEGFRを発現する標的細胞を示す。また、変異体タンパク質の集団を発現する「ライブラリー発現細胞」、およびマイクロキャピラリー溶液中の多数の「蛍光検出抗体」も示される。マイクロキャピラリーアレイの底面図が右側のパネルに示される。
1.目的の変異体タンパク質を分泌する細胞(「ライブラリー発現細胞」)。目的の変異体タンパク質は、変異体タンパク質の集団、すなわちタンパク質ライブラリーのメンバーであることが好ましい。
2.「標的細胞」の表面に固定化された標的タンパク質。この例では、標的タンパク質は天然の細胞表面受容体(すなわちEGFR)である。しかしながら、代替として、標的タンパク質は、ビーズ表面またはマイクロキャピラリー自体の表面等の別の表面に固定化されてもよい。
3.レポーターエレメント
a.この例では、レポーターエレメントは、分泌タンパク質に特異的な蛍光標識抗体(すなわち「蛍光検出抗体」)に対応する。抗体は、分泌タンパク質上のエピトープに特異的に局在するが、理想的には標的細胞上の標的タンパク質への分泌タンパク質の結合を妨害しない。
b.代替として、レポーターエレメントは、標的タンパク質を発現する細胞内のシグナル伝達経路であってもよい。分泌された変異体タンパク質が細胞表面上の標的タンパク質に結合し、標的細胞内のシグナル伝達経路を活性化する場合、結合相互作用は細胞内で蛍光シグナルを発生するであろう(図示せず)。
4.反応バッファー
a.ライブラリー発現細胞または標的細胞のための培地であり得る(例えば、そのような培地は、例えば、ThermoFIshcerから市販されているものを含むハイブリドーマ培地であり得る;thermofisher.com/order/catalog/product/11279023;CD Hybridoma Mediumのワールドワイドウェブを参照のこと)。
b.哺乳動物のイメージング溶液であり得る(例えば、そのようなイメージング溶液は、pH7.4のHEPESで緩衝された光学的に透明な生理溶液であり得る)。
ステップ1:全ての構成要素をマイクロキャピラリーに添加する(図1A参照)。
この方法を実証するために、ヒト癌細胞上のEGFRに結合するように設計されたタンパク質を発現する酵母ベクターライブラリーを作製した。このライブラリーにおいて、いくつかの酵母変異体はタンパク質を発現することができたが、他の変異体はタンパク質を発現することができなかった。酵母細胞、癌細胞、および発現タンパク質に対する蛍光抗体をマイクロキャピラリーに添加した。18時間後、マイクロキャピラリーアレイを画像化した。スクリーニングのさらなる詳細および結果は、後述の実施例3に提供される。
一般的な背景
タンパク質または他の標的分子間の結合相互作用をスクリーニングするための現在の方法は、典型的には「ディスプレイ」法、例えばファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物ディスプレイ、またはウイルスディスプレイの使用に依存している。ディスプレイ法において、タンパク質変異体をコードする遺伝子のライブラリーが細胞またはファージの表面に発現される。タンパク質変異体は、標的に結合することができるタンパク質変異体を同定するために、可溶性型の標的分子とともにインキュベートされる。ライブラリーは、パンニングまたは蛍光活性化細胞選別(「FACS」)によってスクリーニングすることができる。そのようなアッセイは、2つの主な制約を有する:1)人工タンパク質は典型的にはディスプレイプラットフォームにつながれる、および2)通常、可溶性形態の標的分子が存在することが有利である。したがって、多くの標的分子に結合する変異体タンパク質、特にGタンパク質共役受容体および他のそのような受容体等の膜タンパク質のための信頼できるアッセイを開発することは困難であり得る。
標的分子に特異的に結合する抗体変異体を同定するために、標的分子として高レベルのEGFRを発現した癌細胞株にハイブリドーマ(抗体変異体を分泌する)を添加した。分泌された抗体に特異的な標識抗体を次に添加した。
材料:
細胞:
マウスハイブリドーマ
A431標的細胞(高レベルのEGFRを発現するヒト癌細胞株)
検出抗体:
Alexa488(フルオロフォア)で標識された抗マウス二次抗体
細胞培養用培地
DMEM-10%ウシ胎仔血清
DMEM-10%ウマ血清
マウスハイブリドーマ細胞を完全培地(10%ウマ血清を含むダルベッコの改変イーグル培地)中で培養した。ハイブリドーマ細胞をPBSAで2回洗浄し、完全培地に600細胞/μLで懸濁した。A431細胞を完全培地(10%ウシ胎仔血清を含むダルベッコ改変イーグル培地)中で培養した。A431細胞をPBSAで2回洗浄し、LiveGreen蛍光シグナルで染色した。次いで、A431細胞を、ハイブリドーマを含む完全培地に1800細胞/μLの最終濃度で懸濁した。
2つの細胞型を混合した後、検出抗体を反応混合物に添加した:1:100希釈の二次(抗マウスAlexa488)。次いで、この反応混合物をエタノールで滅菌したコロナ処理マイクロキャピラリーアレイ(直径40μm、厚さ1mm)にロードした。蒸発の防止に役立つように、1%重量/容量のアガロースの2mmの厚板をアレイ上に置いた。各時間後、サンプルを蛍光顕微鏡および明視野顕微鏡下で画像化した。
図2A~2Cは、全ての細胞(図2A、明視野シグナル)、A431標的細胞(図2B、LiveGreenシグナル)、または蛍光抗マウス二次抗体で標識された細胞(図2C、Ab-a555シグナル)のいずれかを示すマイクロキャピラリーアレイの小区分の画像を示す。EGFRに特異的な抗体を発現するハイブリドーマ細胞を含むマイクロキャピラリーは、各画像において2本の矢印で示されている。
最良の分泌酵母プラスミドベクターを決定するために、癌細胞表面上のEGFRに結合するように設計された足場タンパク質を発現する酵母ベクターライブラリーを作製した。このライブラリーは、種々の可溶性発現レベルの足場タンパク質を有する酵母細胞を含んでいた。記載されたアッセイを使用して、所望の足場タンパク質を高発現するプラスミドベクターを回収するために変異体発現ライブラリーをスクリーニングした。この実験において、分泌された足場はc-Mycタグを有し、これは蛍光標識抗体で標識することができる。
材料:
細胞:
足場タンパク質の酵母分泌ライブラリー
A431細胞(高レベルのEGFRを発現するヒト癌細胞株)
検出抗体:
ニワトリ抗c-Myc
Alexa488で標識された抗ニワトリ二次抗体
細胞培養用培地:
DMEM-10%FBS
SD-CAA最小酵母培地
反応バッファー:
SD-CAA最小酵母培地
細胞株の増殖および調製
酵母ライブラリーをSD-CAA最小酵母培地(20gのブドウ糖、6.7gのDifco酵母窒素塩基、5gのBactoカザミノ酸、5.4gのNa2HPO4、8.56gのNaH2PO4H2O、脱イオン化H2Oに溶解して1リットルの体積とした)で増殖させた。増殖後、酵母細胞をPBSA(リン酸緩衝食塩水+1mg/ml BSA)で2回洗浄し、SD-CAAに2,400細胞/μLの最終濃度で懸濁した。
2つの細胞型を混合した後、2つの抗体を反応混合物に添加した:1:250希釈の未標識一次抗体(ニワトリ抗c-Myc)および1:200希釈の標識二次抗体(抗ニワトリAlexa488)。次いで、この反応混合物をエタノールで滅菌したコロナ処理マイクロキャピラリーアレイ(直径40μm、厚さ1mm)にロードした。蒸発の防止に役立つように、1%重量/容量のアガロースの2mmの厚板をアレイ上に置いた。18時間増殖させた後、サンプルを蛍光顕微鏡および明視野顕微鏡下で画像化した。
TritonUVレーザーを使用して所望のキャピラリーの内容物を抽出した。レーザーは18±2msで動作し(n=5回の測定)、約100μJの総エネルギーで2.5kHzの一連のパルスを送達する。マイクロキャピラリーの内容物をガラス製カバーガラス上に抽出し、次いでそれを酵母増殖培地(液体培地または寒天プレート)に入れて抽出した細胞を増殖させた。
図4Aおよび図4Bは、明視野イメージング(図4A)および蛍光イメージング(図4B)を使用して、発現細胞および非発現細胞を有するマイクロキャピラリーを特定するマイクロキャピラリーアレイの小区分の画像を示す図である。
図5A~5Gは、マイクロキャピラリーのアレイ内の6日間にわたる増殖培地中でのK562細胞(ヒト不死化骨髄性白血病細胞株)の増殖を示す。アレイの同じ部分の明視野画像を24時間ごとに撮影した。図5A:0日目、図5B:1日目、図5C:2日目、図5D:3日目、図5E:4日目、図5F:5日目、および図5G:6日目。各画像に40μmのスケールバーが示されている。
特定のシグナル伝達経路を活性化する抗体変異体を同定するために、異なる抗体変異体を分泌するハイブリドーマをレポーター細胞とともにマイクロキャピラリーアレイに添加した。例えば、レポーター細胞は、Qiagenから入手することができる(http://www.sabiosciences.com/reporter_assay_product/HTML/CCS-013L.htmlを参照)。
タンパク質変異体がレポーター細胞に結合してシグナル伝達経路を活性化すると、レポーター細胞が蛍光タンパク質を発現する。活性化された細胞のシグナル蛍光は、望ましいタンパク質変異体を含むマイクロキャピラリーにおいて観察され、それらのマイクロキャピラリーの内容物を単離するために用いられる。
研究目的:
標的タンパク質に特異的に結合するが類似の構造のタンパク質には結合しないハイブリドーマ分泌抗体を同定する。例えば、図9を参照のこと。この方法は、抗体ライブラリーのスクリーニングを可能にし、かつそれを継続的に可能にする。
ハイブリドーマライブラリー
プロトコル:
1.表面に標的タンパク質Aを提示した細胞を培養した。
2.製造上の指示に従って、タンパク質Dynabeads Biotin Binderを標的タンパク質Bで標識した。
3.ラットハイブリドーマライブラリーを培養した。
4.マイクロキャピラリー当たり平均1個のハイブリドーマ、標的タンパク質A細胞の約2個の細胞、および標的タンパク質Bで覆われた約10個のビーズが存在するように、細胞、ビーズ、およびハイブリドーマを希釈した。
5.調製した細胞サンプルに抗ラット二次抗体(レポーターエレメント)を添加した。
6.サンプルをアレイにロードした。
7.イメージングの1時間前にインキュベートした。
8.細胞を標的タンパク質Aと結合するが標的タンパク質Bとビーズを結合しない細胞を回収した。
適切に染色された細胞を有するが、染色されたビーズを有しなかったマイクロキャピラリーを同定した。マイクロキャピラリー内で染色された細胞の存在および染色されたビーズの非存在は、標的タンパク質には結合するが標的タンパク質類似体には結合しない抗体の存在を示した。
頻繁に使用されるレポーターエレメントは蛍光標識された二次抗体である。このアッセイ形式では、アッセイの開始時に二次抗体が添加され、経時的に、この抗体は標的タンパク質に結合した分泌抗体(変異体タンパク質)に結合した。
Claims (66)
- 以下のステップを含む、変異体タンパク質の集団をスクリーニングする方法であって、
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、前記変異体タンパク質が特定の親和性で前記固定化標的分子と会合する、マイクロキャピラリーアレイを提供するステップと、
少なくとも1つの変異体タンパク質と少なくとも1つの固定化標的分子との会合を示す少なくとも1つのレポーターエレメントからのシグナルを測定して、少なくとも1つの目的のマイクロキャピラリーを同定するステップと、を含む、方法。 - 前記変異体タンパク質は発現系によって発現される、請求項1に記載の方法。
- 前記発現系は無細胞発現系である、請求項2に記載の方法。
- 前記発現系は細胞発現系である、請求項2に記載の方法。
- 前記細胞発現系は、動物系、真菌系、細菌系、昆虫系、または植物系である、請求項4に記載の方法。
- 前記細胞発現系は酵母系である、請求項5に記載の方法。
- 前記変異体タンパク質は可溶性タンパク質である、請求項1に記載の方法。
- 前記標的分子は、標的タンパク質もしくはポリペプチド、標的核酸、標的炭水化物、またはそれぞれの組み合わせである、請求項1に記載の方法。
- 前記標的分子は表面に固定化される、請求項1に記載の方法。
- 前記表面は細胞の表面である、請求項9に記載の方法。
- 前記標的分子は天然タンパク質である、請求項9に記載の方法。
- 前記表面はビーズの表面である、請求項9に記載の方法。
- 前記表面はマイクロキャピラリー壁の表面である、請求項9に記載の方法。
- 前記表面は、重力沈降によって前記マイクロキャピラリー内に沈殿するように構成される表面である、請求項9に記載の方法。
- 前記レポーターエレメントは標識抗体または他の結合分子である、請求項1に記載の方法。
- 前記標識抗体または他の結合分子は蛍光標識抗体または他の結合分子である、請求項15に記載の方法。
- 前記標識抗体は一次抗体または二次抗体である、請求項15に記載の方法。
- 前記標識抗体または他の結合分子は酵素結合抗体または他の結合分子である、請求項15に記載の方法。
- 前記レポーターエレメントは細胞内で活性化され、前記標的分子は前記細胞の表面に固定化される、請求項1に記載の方法。
- 前記レポーターエレメントは緑色蛍光タンパク質または変異体を含む、請求項19に記載の方法。
- 前記シグナルは、蛍光シグナル、吸光度シグナル、明視野シグナル、または暗視野シグナルである、請求項1に記載の方法。
- 前記マイクロキャピラリーアレイ中の各マイクロキャピラリーは、前記変異体タンパク質の集団由来の0~5個の変異体タンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記マイクロキャピラリーアレイは、少なくとも100,000、少なくとも300,000、少なくとも1,000,000、少なくとも3,000,000、または少なくとも10,000,000個のマイクロキャピラリーを備える、請求項1に記載の方法。
- 各マイクロキャピラリーは、前記細胞発現系の生存率を改善するための薬剤をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤は、メチルセルロース、デキストランプルロニックF-68、ポリエチレングリコール、またはポリビニルアルコールである、請求項24に記載の方法。
- 前記薬剤は増殖培地である、請求項24に記載の方法。
- 前記シグナルは光検出器によって測定される、請求項1に記載の方法。
- 前記シグナルは顕微鏡によって測定される、請求項1に記載の方法。
- 前記目的のマイクロキャピラリーの内容物を単離するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記目的のマイクロキャピラリーの前記内容物は、前記目的のマイクロキャピラリーをレーザーによりパルス発振することによって単離される、請求項29に記載の方法。
- 前記レーザーはダイオード励起Qスイッチレーザーである、請求項30に記載の方法。
- 前記レーザーは、前記マイクロキャピラリー壁と前記マイクロキャピラリーに含まれるサンプルとの間の水-ガラス界面に向けられる、請求項30に記載の方法。
- 前記目的のマイクロキャピラリーの前記内容物は、2段式サンプル回収要素を使用して単離される、請求項29に記載の方法。
- 前記マイクロキャピラリーは、電磁放射線の透過を抑制することができる微粒子、磁性微粒子、磁性ビーズ、または電磁放射線吸収材料を含まない、請求項1に記載の方法。
- 変異体タンパク質の集団をスクリーニングするためのシステムであって、
複数のマイクロキャピラリーを備え、各マイクロキャピラリーが変異体タンパク質、固定化標的分子、およびレポーターエレメントを含み、前記変異体タンパク質が特定の親和性で前記固定化標的分子と会合する、アレイを備える、システム。 - 前記変異体タンパク質は発現系によって発現される、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記発現系は無細胞発現系である、請求項36に記載のスクリーニングシステム。
- 前記発現系は細胞発現系である、請求項36に記載のスクリーニングシステム。
- 前記細胞発現系は、動物系、真菌系、細菌系、昆虫系、または植物系である、請求項38に記載のスクリーニングシステム。
- 前記細胞発現系は酵母系である、請求項39に記載のスクリーニングシステム。
- 前記変異体タンパク質は可溶性タンパク質である、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記標的分子は、標的タンパク質もしくはポリペプチド、標的核酸、標的炭水化物、またはそれぞれの組み合わせである、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記標的分子は表面に固定化される、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記表面は細胞の表面である、請求項43に記載のスクリーニングシステム。
- 前記標的分子は天然タンパク質である、請求項44に記載のスクリーニングシステム。
- 前記表面はビーズの表面である、請求項43に記載のスクリーニングシステム。
- 前記表面はマイクロキャピラリー壁の表面である、請求項43に記載のスクリーニングシステム。
- 前記表面は、重力沈降によって前記マイクロキャピラリー内に沈殿するように構成される表面である、請求項43に記載のスクリーニングシステム。
- 前記レポーターエレメントは標識抗体または他の結合分子である、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記標識抗体または他の結合分子は蛍光標識抗体または他の結合分子である、請求項49に記載のスクリーニングシステム。
- 前記標識抗体は一次抗体または二次抗体である、請求項49に記載のスクリーニングシステム。
- 前記標識抗体または他の結合分子は酵素結合抗体または他の結合分子である、請求項49に記載のスクリーニングシステム。
- 前記レポーターエレメントは細胞内で活性化され、前記標的分子は前記細胞の表面に固定化される、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記レポーターエレメントは緑色蛍光タンパク質または変異体を含む、請求項53に記載のスクリーニングシステム。
- 前記シグナルは、蛍光シグナル、吸光度シグナル、明視野シグナル、または暗視野シグナルである、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記マイクロキャピラリーアレイ中の各マイクロキャピラリーは、前記変異体タンパク質の集団由来の0~5個の変異体タンパク質を含む、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記マイクロキャピラリーアレイは、少なくとも100,000、少なくとも300,000、少なくとも1,000,000、少なくとも3,000,000、または少なくとも10,000,000個のマイクロキャピラリーを備える、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 各マイクロキャピラリーは、前記細胞発現系の生存率を改善するための薬剤をさらに含む、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記薬剤は、メチルセルロース、デキストランプルロニックF-68、ポリエチレングリコール、またはポリビニルアルコールである、請求項58に記載のスクリーニングシステム。
- 前記薬剤は増殖培地である、請求項58に記載のスクリーニングシステム。
- 前記システムは光源および検出器をさらに備える、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記システムは顕微鏡をさらに備える、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記システムは抽出デバイスをさらに備える、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記抽出デバイスは、ダイオード励起Qスイッチレーザーを備える、請求項63に記載のスクリーニングシステム。
- 前記システムは、2段式サンプル回収要素をさらに備える、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
- 前記マイクロキャピラリーは、電磁放射線の透過を抑制することができる微粒子、磁性微粒子、磁性ビーズ、または電磁放射線吸収材料を含まない、請求項35に記載のスクリーニングシステム。
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