JP2021516765A - 心筋損傷の診断方法 - Google Patents
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Abstract
本発明は、患者から得られる試料中のＭＹＢＰＨ、ＭＹＢＰＨＬ、及びこれらのアイソフォームから選択されるバイオマーカーのレベルを測定することにより、前記患者の、心筋組織損傷を診断する方法、心筋組織損傷の程度を判定する方法、そして心房心筋損傷と心室心筋損傷とを区別する方法に関する。さらに本発明は、これらの方法で使用するためのキット及びマーカーパネルに関する。
Description
本発明は、患者の、心筋組織損傷を診断し、心筋組織損傷の程度を判定し、そして心房心筋損傷と心室心筋損傷とを区別する方法に関する。さらに本発明は、これらの方法で使用するためのキット及びマーカーパネルに関する。
心臓病、特に冠動脈疾患（ＣＡＤ）は、先進国における罹患率と死亡率の主要な原因である。人口統計に基づくと、先進国では毎年、１８歳以上の１０万人あたり約３１０例の心臓発作と、成人１０万人あたり約１５０の死亡例が予測されると計算することができる。心血管医学では、死にかけている心臓から放出される酵素や他のタンパク質がバイオマーカーとして同定されている。特にそれらは、例えば心臓発作後に血液中で高濃度で測定可能である。心筋損傷の最初のバイオマーカーは１９５０年代に記載された。それらの中でアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）と乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）が記載された。１９７０年代と１９８０年代に、追加のバイオマーカー、例えばクレアチンキナーゼ（ＣＫ）、そのアイソエンザイムであるクレアチンキナーゼ−心筋バンド（ＣＫ−ＭＢ）、ミオグロビンとトロポニン（トロポニンＴとトロポニンＩ）が発見された。トロポニンとＣＫＭＢは、心筋組織損傷を特定するためにいまだに臨床使用されている。血液中のこれらのバイオマーカーの濃度の増減により、心臓発作の発生又は開始、心臓発作の程度、及び心臓発作に対する治療の成功に関する結論を引き出すことができるため、血液中のこれらのバイオマーカーの濃度の測定は通常定期的に繰り返される。
これまでに引用されているすべてのバイオマーカーでは、心房心筋損傷（心房内）と心室心筋損傷（心室内）とを区別できないことが共通している。心房心筋損傷又は心室心筋損傷の特異的バイオマーカーは、これまでに発見されていない。このような特異的バイオマーカーは、特に術後ケアの点で心臓手術の分野で非常に重要であろう。
心不整脈である心房細動の患者では、心房細動を治療するための心房のアブレーションが心臓手術中に行われることが多い。心房を規則的なパターンで収縮するのではなく細動させる電気刺激の伝達を防ぐために、アブレーションラインは特定のスキームに従って心房に設定される。このアブレーションは、右心房と左心房を開いた後の心内冷凍アブレーションとして、又は付随する手技としての肺静脈の心外膜高周波アブレーションとして実行することができる。心内膜冷凍アブレーションと心外膜高周波アブレーションの両方が、心筋細胞に損傷を引き起こす。従って、心筋肉組織の一部のアブレーションによる心房細動の治療には、心房の心筋細胞の破壊が含まれ、それにより、血液中の非特異的バイオマーカー（ＣＫ−ＭＢ及びトロポニン）の術後増加が引き起こされる。これまでに使用されてきたバイオマーカーは、心房心筋の損傷と心室心筋の損傷とを区別できないため、バイオマーカーの増加が心房のアブレーションラインによって引き起こされた損傷によるものか、それとも心室の追加の心筋損傷よって引き起こされたものであるかを判断するための術後評価は不可能である。これらの理由により、患者は、例えば周術期の心臓発作を排除するために、しばしば追加の侵襲的な診断、心臓カテーテルによる冠動脈造影を受ける必要がある。この指摘に加えて、心房の損傷を反映するバイオマーカーは、例えば、介入によるカテーテルベースのアブレーション治療後の成功をモニターするためのパラメーターとして、非常に重要となり得る。
すなわち、心房損傷を特異的に検出するための心房バイオマーカーの実用が求められている。このような心房特異的バイオマーカーは、患者、特にアブレーションによる治療を受けた患者における不必要な侵襲的医学的検査を回避させるであろう。
本発明は、患者の心筋組織損傷、好ましくは心房心筋組織損傷を診断する方法に関し、この方法は、患者から得られた試料中の、ＭＹＢＰＨ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１３２０３、タンパク質配列配列番号７）、ＭＹＢＰＨＬ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ａ２ＲＵＨ７、タンパク質配列配列番号３又は配列番号６）、ＭＹＯＴ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＢＦ９、タンパク質配列配列番号９）、ＡＳＮＳＤ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＷＬ６、タンパク質配列配列番号１０）、ＣＨＦＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６ＥＰ１、タンパク質配列配列番号１１）、ＮＴＮ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ９５６３１、タンパク質配列配列番号１２）、ＲＦＣ５（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ３８２５１、タンパク質配列配列番号１３）、ＰＯＬＩ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＮＡ４、タンパク質配列配列番号１４）、ＣＯＭＰ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ４９７４７、タンパク質配列配列番号１５）、ＰＯＦ１Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＷＶＶ４、タンパク質配列配列番号１６）、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ１４５５５、タンパク質配列配列番号１７）、ＨＤＡＣ１０（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６９Ｓ８、タンパク質配列配列番号１８）、ＡＳＰＧ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８６Ｕ１０、タンパク質配列配列番号１９）、ＦＭＯＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ０６８２８、タンパク質配列配列番号２０）、ＣＡ１３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８Ｎ１Ｑ１、タンパク質配列配列番号２１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＹ４７、タンパク質配列配列番号２２）、ＧＮＬ３Ｌ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＹ４７、タンパク質配列配列番号２３）、ＣＯＬ２Ａ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０２４５８、タンパク質配列配列番号２４）、ＰＤＬＩＭ４（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ５０４７９、タンパク質配列配列番号２５）、ＬＥＰＲＥＬ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＩＶＬ５、タンパク質配列配列番号２６）、ＯＭＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９９９８３、タンパク質配列配列番号２７）、ＤＧＫＺ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９９９８３、タンパク質配列配列番号２８）、ＮＴ５ＤＣ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９Ｈ８５７、タンパク質配列配列番号２９）、ＩＴＬＮ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＷＷＡ０、タンパク質配列配列番号３０）、ＮＴＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９Ｐ１２１、タンパク質配列配列番号３１）、ＰＲＫＧ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１３２３７、タンパク質配列配列番号３２）、ＣＨＧＢ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０５０６０、タンパク質配列配列番号３３）、ＦＡＭ１７９Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６ＺＵＸ３、タンパク質配列配列番号３４）、ＣＫＭＴ１Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ１２５３２、タンパク質配列配列番号３５）、ＣＫＭＴ１Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｆ８ＷＣＮ３、タンパク質配列配列番号３６）、ＬＴＢＰ３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＳ１５、タンパク質配列配列番号３７）、ＭＥＴＴＬ７Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６ＵＸ５３、タンパク質配列配列番号３８）、ＬＴＢＰ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１４７６７、タンパク質配列配列番号３９）、ＯＧＤＨＬ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＬＤ０、タンパク質配列配列番号４０）、ＰＡＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ１９０２１、タンパク質配列配列番号４１）、ＳＢＫ３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０Ｃ２６４、タンパク質配列配列番号４２）、ＳＦＲＰ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８Ｎ４７４、タンパク質配列配列番号４３）、ＳＧＳｍ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＳ１５、タンパク質配列配列番号７０）、及び／又はこれらの（異なる）アイソフォームからなる群より選択される心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定し、そして前記患者で測定された心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを、対照個体で観察された心房心筋組織損傷の同じバイオマーカーのレベルと比較することを含み、ここで、もし前記患者で測定された心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルが、対照個体における心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと比較して増加している場合、前記患者は心筋組織損傷を有すると診断される。
本明細書に記載の方法の様々な実施態様において、ＭＹＢＰＨＬのアイソフォーム又はホモログは、ＭＹＢＰＨＬのタンパク質配列と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは全長にわたって、及び好ましくは配列番号３と６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の配列同一性を有するタンパク質配列を有する。例えば、ＭＹＢＰＨＬのアイソフォームは、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１（ＤＮＡ配列：配列番号１、コーディングＤＮＡ配列：配列番号２、タンパク質配列：配列番号３）及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２（ＤＮＡ配列：配列番号４、コーディングＤＮＡ配列：配列番号５、タンパク質配列：配列番号６）から成る群から選択される。一般に、本明細書で使用される「アイソフォーム」は、それぞれの参照タンパク質と、好ましくは全長にわたって、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の配列同一性を共有する機能的に同様のタンパク質を指す。また本明細書に明示的に開示されているすべてのアイソフォームのホモログ、特に、参照アイソフォームのタンパク質配列と、少なくとも７０％の配列同一性、すなわち、好ましくは全長にわたって、及び好ましくは配列番号３と６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の配列同一性を共有する、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１及び２も包含される。
本明細書に記載の方法の特定の実施態様において、方法は、前記患者から得られた試料中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと、対照個体における心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルとの比を決定することにより、前記患者における心房心筋組織損傷の程度を評価することを含む。
本明細書に記載の方法の様々な実施態様において、方法は、心筋組織損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定することをさらに含み、ここで方法は、心房筋組織損傷と心室筋組織損傷とを区別するのに適している。心筋組織損傷の追加のバイオマーカーは、上記の心房心筋組織損傷のバイオマーカーとは異なるバイオマーカーであり、ＣＫ−ＭＢ又はトロポニンからなる群より選択される心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーであり得る。代替的に又は追加的に、心筋組織損傷の追加のバイオマーカーは、例えば、心室心筋組織損傷に特異的なバイオマーカーであり、例えばＦＨＬ−２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１４１９２、タンパク質配列配列番号４４）、ＳＭＹＤ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＲＧ４、タンパク質配列配列番号４５）、ＦＡＳＴＫＤ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ５３Ｒ４１、タンパク質配列配列番号４６）、ＰＲＲ３３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ａ８ＭＺＦ０、タンパク質配列配列番号４７）、ＳＯＲＢＳ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ９４８７５、タンパク質配列配列番号４８）、ＣＲＩＳＰＬＤ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９Ｈ３３６、タンパク質配列配列番号４９）、ＮＰＨＰ４（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ７５１６１、タンパク質配列配列番号５０）、ＡＮＫＲＤ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＧＺＶ１、タンパク質配列配列番号５１）、ＴＭＥＭ１５９（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６Ｂ９６、タンパク質配列配列番号５２）、ＡＴＰ７Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ０４６５６、タンパク質配列配列番号５３）、Ｃ１２ＯＲＦ７３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６９ＹＵ５、タンパク質配列配列番号５４）、ＮＡＶ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＮＥＹ１、タンパク質配列配列番号８）、ＡＴＰ５Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０６５７６、タンパク質配列配列番号５５）、ＨＳＰＢ７（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＢＹ９、タンパク質配列配列番号５６）、ＴＭＥＭ８８（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６ＰＥＹ１、タンパク質配列配列番号５７）、ＷＤＲ６２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ４３３７９、タンパク質配列配列番号５８）、ＡＣＴＮ３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ０８０４３、タンパク質配列配列番号５９）、ＴＲＩＭ７２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６ＺＭＵ５、タンパク質配列配列番号６０）、ＥＧＦＬＡＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６３ＨＱ２、タンパク質配列配列番号６１）、ＬＲＲＣ３９（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６ＤＤ０、タンパク質配列配列番号６２）、ＤＰＹＳＬ４（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ１４５３１、タンパク質配列配列番号６３）、ＰＦＫＦＢ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ６０８２５、タンパク質配列配列番号６４）、ＡＢＣＢ６（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＰ５８、タンパク質配列配列番号６５）、ＭＥＴＴＬ２Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６Ｐ１Ｑ９、タンパク質配列配列番号６６）、ＭＥＴＴＬ２Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６ＩＺ６、タンパク質配列配列番号６７）、ＣＡＲＮＳ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ａ５ＹＭ７２、タンパク質配列配列番号６８）、ＳＰＴＢＮ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ０１０８２、タンパク質配列配列番号６９）、又はそのアイソフォームである。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施態様において、前記バイオマーカーのレベルを測定する工程は、前記患者から得られた試料に対して、すなわち好ましくはインビトロで行われる。試料は、体液、好ましくは全血、血清、又は血漿であり得る。
本明細書に記載の方法の特定の実施態様において、患者はヒトである。
本明細書に記載される方法の様々な実施態様において、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定すること及び／又は追加のバイオマーカーのレベルを測定することは、例えば、血液、血清、又は血漿試料などの患者から得られた試料中の、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのタンパク質濃度を測定すること及び／又は追加のバイオマーカーのタンパク質濃度を測定することを含む。
本明細書に記載の方法の様々な実施態様において、バイオマーカーのレベルを測定することは、バイオマーカーのタンパク質濃度を測定することを含み、ここでタンパク質濃度は、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、質量分析、クロマトグラフィー、ウエスタンブロット、又はゲル電気泳動、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定される。代替的に又は追加的に、循環している核酸、特にｍＲＮＡなどのＲＮＡが測定されてもよい。核酸検出のために、様々な核酸捕捉及び増幅法を使用することができる。検出は、例えば検出可能に標識された特定の検出プローブを使用することにより達成され得る。そのような技術は、当技術分野で広く知られており、当業者が一般的な知識に基づいて選択することができる。
別の態様において、本発明は本発明の方法で使用されるキットに関し、ここでキットは、試料中の、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬と、心筋損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬とを含む。特定の実施態様において、キットは、選択したバイオマーカーに特異的な捕捉抗体及び検出抗体などのＥＬＩＳＡアッセイ用の試薬を含む。
さらに、本発明は、心房心筋組織損傷の少なくとも１つのバイオマーカーと、本発明の方法で使用するための心筋損傷の少なくとも１つの追加のバイオマーカーとを含むマーカーパネルに関する。また、心房心筋組織損傷の少なくとも１つのバイオマーカーに特異的な少なくとも１つの検出試薬と、心筋損傷の少なくとも１つの追加のバイオマーカーの少なくとも１つの検出試薬とを含む、そのようなマーカーパネルの検出のためのキットも包含される。
「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、例えばモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を有する抗体、１本鎖抗体、多重特異性抗体、及び抗体の断片を含む。そのような抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及び合成抗体であり得る。本明細書で使用される抗体又は他の検出試薬は、好ましくは、それらの意図された標的に特異的な、すなわち標的と他の非標的成分との間の結合親和性を区別することができる。例えば結合親和性などの結合力の差は、少なくとも１０倍、好ましくは１００倍以上であり得る。検出試薬が特定のアイソフォームに特異的であると説明されている場合、これは、非標的アイソフォームと比較して１０倍以上高い親和性で標的アイソフォームに結合するという点で、他のアイソフォームと区別できることを意味する。
本明細書で特定されるポリペプチド及び抗体配列に関する「パーセント（％）配列同一性」又は「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」又は「相同性」は、配列の同一性の一部として保存的置換を考慮して配列を整列させた後、比較されるポリペプチドのアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的の整列は、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者の技術範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、整列を測定するための適切なパラメーターを決定することができる。様々な実施態様において、配列同一性に関するそれぞれの開示は、クエリー配列及び／又は参照配列、特に参照配列の全長に基づくパーセンテージに関する。これは、候補配列に対して９５％の配列同一性が与えられた場合、前記配列は参照の全長にわたって参照に対して９５％の配列を有することを意味する。
本発明は、ＭＹＢＰＨ、ＭＹＢＰＨＬ、ＭＹＯＴ、ＡＳＮＳＤ１、ＣＨＦＲ、ＮＴＮ１、ＲＦＣ５、ＰＯＬＩ、ＣＯＭＰ、ＰＯＦ１Ｂ、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ、ＨＤＡＣ１０、ＡＳＰＧ、ＦＭＯＤ、ＣＡ１３、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２、ＧＮＬ３Ｌ、ＣＯＬ２Ａ１、ＰＤＬＩＭ４、ＬＥＰＲＥＬ１、ＯＭＤ、ＤＧＫＺ、ＮＴ５ＤＣ２、ＩＴＬＮ１、ＮＴＭ、ＰＲＫＧ２、ＣＨＧＢ、ＦＡＭ１７９Ａ、ＣＫＭＴ１Ａ、ＣＫＭＴ１Ｂ、ＬＴＢＰ３、ＳＧＳＭ１、ＭＥＴＴＬ７Ｂ、ＬＴＢＰ２、ＯＧＤＨＬ、ＰＡＭ、ＳＢＫ３、ＳＦＲＰ１、及びこれらのアイソフォームからなる群より選択される、心筋組織損傷、好ましくは心房心筋組織損傷に特異的なバイオマーカーが、心筋組織損傷を有する患者の血液試料で検出可能であるが、これらの特異的バイオマーカーは、健常で良性の対照組織では検出されず、従って、心筋組織損傷の、好ましくは心房心筋組織損傷のマーカーとなり得るという、本発明者らの驚くべき発見に基づく。様々な実施態様において、マーカーは、ＭＹＢＰＨＬ及びそのアイソフォームから選択される。バイオマーカーのアイソフォームは、バイオマーカーのタンパク質配列と少なくとも７０％の配列同一性、すなわち、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、通常、機能の特定の側面を共有するか又は同一の機能を有する可能性のあるタンパク質配列を有する。様々な実施態様において、そのようなアイソフォームは長さが参照配列に対応し、すなわち全長の１０％を超えて異なることはなく、好ましくは全長の５％以下、さらにより好ましくは２％以下の差である。ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３及び６に示されている。配列同一性の割合を示すことによりアイソフォームが言及される場合、特に他に明記しない限り、配列番号３及び６のこれらの配列は参照として使用されるはずである。本明細書でタンパク質データベースのエントリーが参照される場合、前記参照は、前記エントリーの下にリストされているすべてのアイソフォームを含むことを意図していることがさらに理解される。同様に、本明細書で特定のアミノ酸配列が参照される場合、その参照は例示のみであることが理解され、アミノ酸配列が異なり、そして、例えば本明細書でデータベースエントリーの下にリストされ得る前記タンパク質の異なるアイソフォームは、また本発明の範囲に含まれることが意図される。
従って本発明は、患者の、（ａ）心筋組織損傷、好ましくは心房心筋組織損傷を診断するための、（ｂ）心筋組織損傷の程度を判定するための、及び／又は（ｃ）心房心筋損傷と心室心筋損傷とを区別するための、方法に関する。いくつかの実施態様において、それぞれの方法はまた、診断工程に続く医学的治療をカバーすることができる。例えば、患者が心筋組織損傷を有すると診断された場合、前記患者は、薬物の投与、さらなる医学的又は外科的介入によっても治療され得る。
本明細書に開示されるマーカーは、体液試料、例えば血液試料中で検出することができ、従って、心筋組織損傷の診断のための代替又は改良方法を提供する。そのような方法は高価な装置を必要としないため、心筋組織損傷、好ましくは心房心筋組織損傷の診断の費用を削減することができる。さらに、この新しい方法は訓練を受けた医療関係者であれば誰でも実行できるため、患者が特定のスクリーニングセンターに行く必要がない。これにより、より頻繁な医学的診断が可能になる。導入部で述べたように、この方法のさらなる利点は、例えばアブレーションによる心房細動の治療を受けた患者が、例えば周術期心臓発作を除外するために、現在使用されている侵襲的診断を受ける必要がないことであり、これは、本発明の方法の重要な利点である。
本発明の方法は、様々な実施態様において、患者から得られた試料に対してインビトロで実施される。前記試料は、上記したように、体液、例えば血液、又は血漿若しくは血清などの血液成分であってもよい。
第１の態様において、本発明は、患者又は患者から得られた試料中の心筋組織損傷、好ましくは心房心筋組織損傷を診断する方法に関し、この方法は、患者から得られた試料中の、ＭＹＢＰＨ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１３２０３）、ＭＹＢＰＨＬ（ミオシン結合タンパク質Ｈ様、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ａ２ＲＵＨ７）、ＭＹＯＴ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＢＦ９）、ＡＳＮＳＤ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＷＬ６）、ＣＨＦＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６ＥＰ１）、ＮＴＮ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｏ９５６３１）、ＲＦＣ５（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ４０９３７）、ＰＯＬＩ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＮＡ４）、ＣＯＭＰ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ４９７４７）、ＰＯＦ１Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＷＶＶ４）、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ１４５５５）、ＨＤＡＣ１０（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９６９Ｓ８）、ＡＳＰＧ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８６Ｕ１０）、ＦＭＯＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ０６８２８）、ＣＡ１３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８Ｎ１Ｑ１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＹ４７）、ＧＮＬ３Ｌ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＶＮ８）、ＣＯＬ２Ａ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０２４５８）、ＰＤＬＩＭ４（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ５０４７９）、ＬＥＰＲＥＬ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＩＶＬ５）、ＯＭＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９９９８３）、ＤＧＫＺ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１３５７４）、ＮＴ５ＤＣ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９Ｈ８５７）、ＩＴＬＮ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８ＷＷＡ０）、ＮＴＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９Ｐ１２１）、ＰＲＫＧ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１３２３７）、ＣＨＧＢ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０５０６０）、ＦＡＭ１７９Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６ＺＵＸ３）、ＣＫＭＴ１Ａ／ＣＫＭＴ１Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ１２５３２）、ＬＴＢＰ３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＮＳ１５）、ＳＧＳＭ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ２ＮＫＱ１）、ＭＥＴＴＬ７Ｂ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ６ＵＸ５３）、ＬＴＢＰ２（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ１４７６７）、ＯＧＤＨＬ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ９ＵＬＤ０）、ＰＡＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ１９０２１）、ＳＢＫ３（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｐ０Ｃ２６４）、ＳＦＲＰ１（Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースエントリー：Ｑ８Ｎ４７４）、及び／又はこれらのアイソフォーム、特に、特定の実施態様であるそれらのアミノ酸配列を参照して本明細書にリストされているアイソフォームとともに、特定のデータベースエントリーの下にリストされているアイソフォームから成る群から選択される、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定し、患者中の測定された心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを、対照個体中の観察された心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと比較することを含み、ここで、患者中の測定された心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルが、対照個体中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと比較して増加している場合、前記患者は、心筋組織損傷、例えば心房心筋組織損傷を有すると診断される。
本発明者らは、ミオシン結合タンパク質Ｈ様（ＭＢＰＨＬ＝ＭＹＢＰＨＬ）を、心筋組織損傷、例えば心房心筋組織損傷の特異的バイオマーカーとして同定した（実施例１及び図１を参照）。図１と図２に示すように、ＭＹＢＰＨＬ遺伝子は心房と心室の両方で発現している。しかし、心房中のＭＹＢＰＨＬの遺伝子発現は心室中の発現より明らかに高く、左心室と比較して、左心房では１５０倍、右心房では３５０倍高くなっている。つまりこれは、心筋組織損傷が発生すると、例えば患者の血漿中でＭＹＢＰＨＬのタンパク質レベルの増加が検出されるが、患者が心室心筋組織損傷に罹患している場合と比較して、患者が心房心筋組織損傷に罹患している場合は、ＭＹＢＰＨＬのタンパク質レベルが大幅に増加する。従って、ＭＹＢＰＨＬは心房心筋組織損傷の特異的バイオマーカーとして使用することができる。
様々な実施態様において、ＭＹＢＰＨＬ又はそのアイソフォームは、心房心筋組織損傷の第１のバイオマーカーとして使用される。上記したように、前記マーカーは、心房心筋組織損傷のための任意の他の１つ以上のバイオマーカーと組み合わせることができる。様々な実施態様において、これはＭＹＢＰＨ又はそのアイソフォームと組み合わせることができる。従って、本発明の様々な実施態様において、複数心房心筋組織損傷についての、１つ以上の、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上、例えば２０、３０、又は３７すべての上記バイオマーカーを使用することができる。上記に開示されたように、これらは、一般的な心筋損傷の追加のバイオマーカーの１つ以上と組み合わせることができる。
図８は、ＳＴ上昇型心筋梗塞を治療するための外科的介入の前後の、ＳＴ上昇型心筋梗塞に罹患している患者、例えば心室に明確な損傷がある患者群から採取された血漿試料中の、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の測定結果を示す。大きなＳＴ上昇型心筋梗塞は、心室と心房の複合損傷につながる。図８は、外科的介入前のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度が、心室損傷と心房損傷のために増加していることを示す。ＳＴ上昇型心筋梗塞を治療するための介入から７２時間後に、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度は低下する。従って、図８に示された実験の結果は、心筋組織損傷のバイオマーカーとしてのバイオマーカーＭＹＢＰＨＬの適切性を確認している。
さらに、本発明者らは、心房心筋組織損傷の診断に適した追加のバイオマーカーとして、ミオシン結合タンパク質Ｈ（ＭＢＰＨ＝ＭＹＢＰＨ）及びＭＹＢＰＨＬのアイソフォーム，例えばＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２を同定した。図２は、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１遺伝子が、試験した９つの左心房と試験した９つの左心室で発現しているが、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１遺伝子の発現は心室中より心房中で約２１０倍高いことを示す。ＭＹＢＰＨ遺伝子とＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２遺伝子は、ほとんどが左心房で発現している（ＭＹＢＰＨの場合は５つの左心房と２つの左心室、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の場合は７つの左心房と１つの左心室）。左心房及び左心室からのバイオマーカーＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の増幅産物の分離を示す図３は、この観察を確認している。従って、バイオマーカーＭＹＢＰＨ及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２は、心房心筋組織損傷に対する特異性の高いバイオマーカーである。図４は、非心臓組織におけるバイオマーカーＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の増幅産物の分離を示す。図４では、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２は、平滑筋細胞を含む動脈血管や骨格筋試料などの非心臓組織では観察されず、ＭＹＢＰＬＨアイソフォーム２の心筋、特に左心房に対する特異性を確認していることを示す。対照的に、ＭＹＢＰＨは骨格筋の豊富な発現を示した。
対照個体で観察される心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルは、正常な健常個体又は対照患者で測定されるバイオマーカーのレベルである。正常な健常個体とは、心臓に問題がないか又は軽微な問題のある人のことである。対照患者は、例えば冠状動脈バイパス移植術又は心臓弁手術のような手術を受けようとしている心疾患に罹患しており、心房、すなわち心房心筋肉組織傷害のアブレーションからなるメイズ（MAZE）手術が行われる患者であり得る。対照患者はまた、心不全に罹患しており、心肺装置によって隔離された大動脈弁置換術を受けていた患者であってもよい。なぜなら、そのような患者は通常、心房の変化を示さないからである。さらに対照患者は、心肺装置を使用せずに心臓弁のカテーテルベースの移植を受けた患者であってもよい。
患者のバイオマーカーのレベルの増加は、その濃度が対照個体と比較して増加していることを意味する。この用語は、正常な健常個体において、バイオマーカーが、経時的に安定な又はほぼ安定なまま維持される濃度で検出可能であるが、心筋組織損傷を有する患者のバイオマーカー濃度は変化し、正常な健常個体で測定されるバイオマーカー濃度よりも高いことを含む。また、患者のバイオマーカーレベルと対照個体のバイオマーカーレベルとの間の変化倍率とも呼ばれる比率を定義することも可能であり、比率が１．５〜４０の範囲、例えば少なくとも２、３、４、５、６、１０、１２、１５、２０、３０である場合、患者のバイオマーカーのレベルは対照個体のレベルと比較して増加していると定義される。様々な実施態様において、「増加したレベル」は、健常個体で観察されるレベルと比較して少なくとも１．５倍の増加、好ましくは少なくとも２倍の増加を指す。
対照／健常個体で観察されるレベルはまた、複数の対照／健常個体で測定されたレベルに基づいて計算された平均値であってもよい。健常／対照個体レベルは、前記患者が治療又は手術を受ける前、又は心筋損傷を引き起こす事象を経験する前の、患者のレベルであってもよい。「健常個体」及び「対照個体」という用語は、本明細書では同義で使用される。
本明細書に記載の方法の特定の実施態様において、方法は、患者から得られた試料中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと、患者及び健常／対照個体中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルとの比率（変化倍率とも呼ばれる）を決定することにより、患者の心筋組織損傷の程度を評価することを含む。
図５は、メイズ手術、心房のアブレーション、つまり心房心筋組織損傷を受けている患者の血液試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の推移を示す。図５に示すように、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度は、心房アブレーション後、つまり患者が集中治療室に到着した時点での最高ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度である。ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度は、例えばアブレーション後後２４時間以内に、心房心筋組織損傷がそれ以上発生していないため、時間の経過とともに減少する。また図６は、心内膜アブレーション又は心外膜アブレーションを受けている患者の血液試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の推移を示す。心内膜アブレーションは心外膜アブレーションと比較して、より積極的なアブレーションである。図６に示されるように、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度は、心外膜アブレーション患者よりも、心内膜アブレーション患者でより高い。従って図５及び図６に記載の実験 に示されように、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度従ってその変化倍率は、心房心筋組織損傷の程度に比例する。言い換えると心筋組織損傷が大きいほど、ＭＹＢＰＨＬレベルが高い。さらに、ＭＹＢＰＨＬレベルは心房アブレーションの２４時間後にも検出可能であるが、既知のバイオマーカーであるミオグロビンは２４時間後に患者の試料で検出されなくなるため、バイオマーカーＭＹＢＰＨＬは敏感なバイオマーカーであるという利点がある。
本明細書に記載の方法の様々な実施態様において、方法は、患者の試料において、心筋組織損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定することをさらに含み、ここで方法は、心房筋組織損傷と心室筋組織損傷とを区別するのに適している。
心房筋組織損傷と心室筋組織損傷との区別は、患者の試料中の心筋組織損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定することによって達成することができる。この方法はさらに、追加のバイオマーカーのレベルを心房心筋組織損傷に特異的なバイオマーカーのレベルと比較すること、及び／又は患者の試料中の追加のバイオマーカーのレベルを対照個体から得られた試料中の追加のバイオマーカーのレベルと比較して、変化倍率を得ることを含み得る。心筋組織損傷の追加のバイオマーカーは、ＣＫ−ＭＢ又はトロポニンからなる群より選択される心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーであり得る。また、心筋組織損傷の追加のバイオマーカーは、心室心筋組織損傷に特異的なバイオマーカーであり得る。図２に示すように、ＦＨＬ−２遺伝子の発現レベルは、左心房と比較して左心室でほぼ５０倍高いため、ＦＨＬ−２は心室心筋組織損傷に特異的なバイオマーカーである。
心筋組織損傷の追加のバイオマーカーが、好ましくはＣＫ−ＭＢ又はトロポニンからなる群より選択される心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーである場合、患者の試料中の一般的なバイオマーカーのタンパク質濃度と心房心筋組織損傷のバイオマーカーのタンパク質濃度との比率を計算することができる。代替的又は追加的に、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーのレベルは、定義された期間にわたる定期的な測定時点で、例えば２４時間又は７２時間にわたって、例えば２時間毎に測定することができる。心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーのレベルの両方が、定義された期間にわたって、例えば互いに比例して低下する場合、患者は心房心筋組織損傷を有すると診断される（実施例５、図９、及び図１０を参照）。心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーのレベルが安定しているか又は増加しているのに、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルが低下する場合、患者は心室筋組織損傷を有すると診断される。
心筋組織損傷の追加のバイオマーカーが心室心筋組織損傷に特異的なバイオマーカー、好ましくはＦＨＬ−２である場合、ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率は、定義された期間にわたる定期的な測定時点で、例えば２４時間又は７２時間にわたって、例えば２時間毎に測定して算出することができる。ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比が１．５を超える場合、例えば１．５〜４の範囲である場合、患者は心房心筋組織損傷を有すると診断される（実施例６、図１０を参照）。
また、心房筋組織損傷と心室筋組織損傷の区別は、患者の試料中のＭＹＢＰＨ又はＭＹＢＰＨＬｔ２からなる群より選択される心房心筋組織損傷に特異性の高いバイオマーカーのレベルを測定し、これらのレベルを、対照個体中のこれらの特異性の高いバイオマーカーのレベルと比較することによって達成することができる。患者の試料中の特異性の高いバイオマーカーのレベルと対照個体の試料中の特異性の高いバイオマーカーのレベルとの比率が１．５〜４０の範囲、例えば２、３、４、５、６、１０、１２、１５、２０、３０の場合、患者は心房心筋組織損傷を有すると診断される。
本発明の様々な実施態様において、試料は生物学的試料、例えば体液、細胞、又は組織試料である。体液は、特に限定されるものではないが、血液、血漿、血清、母乳、脳脊髄液、耳垢（耳垢）、内リンパ及び外リンパ液、胃液、粘液（鼻腔排液及び痰を含む）、腹腔液、胸膜液、唾液、皮脂（皮脂）、精液、汗、涙、膣分泌物、乳頭吸引液、嘔吐物、尿を含む。上記で詳述された方法の特定の実施態様において、体液は、血液、血清、血漿、尿、及び唾液からなる群より選択される。組織試料は心臓組織でもよく、細胞試料は心臓組織からの細胞を含み得る。様々な実施態様において、使用される試料は、バイオマーカーレベルの非常に単純かつ迅速なアッセイを可能にするため、血液試料である。
いくつかの実施態様において、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
一般に、本明細書で使用される「哺乳動物」という用語は、ヒト、サル、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、モルモット、ウサギ、マウス、ヒツジ、ヤギ、及びウマを含む。
本発明のマーカーの検出のために、特異的結合パートナーを使用することができる。いくつかの実施態様において、特異的結合パートナーは、試料中のマーカーの存在を検出するのに有用であり、ここでマーカーはタンパク質又はＲＮＡである。マーカーとその結合パートナーは分子の結合対を表し、例えばイオン結合、共有結合、疎水結合、ファンデルワールス結合、水素結合などを含む種々の分子力のいずれかを介して相互作用する。好ましくは、この結合は特異的である。「特異的結合」とは、結合対のメンバーが互いに優先的に結合すること、すなわち通常、非特異的結合パートナーよりも有意に高い親和性で結合することを意味する。従って、特異的結合パートナーに対する結合親和性は、通常、非特異的結合パートナーに対する結合親和性よりも少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも１００倍高い。
本発明のマーカーの例示的な結合パートナーは、抗体、抗体断片及び変異体、抗体様特性を有する分子、例えばリポカリンムテイン又はシュピーゲルマー又はアプタマーからなる群より選択される。抗体断片及び変異体には、Ｆｖ断片、線状１本鎖抗体などが含まれ、それらはすべて当業者に知られている。特に好ましいのは抗体である。
上記で詳述された方法の様々な実施態様において、心房心筋組織損傷に特異的なバイオマーカーのレベルを測定することは、試料中に存在するバイオマーカーのタンパク質の量を測定することを含む。他の実施態様において、マーカーのレベルを測定することは、例えばＲＮＡレベルで、心房心筋組織損傷のバイオマーカーの発現レベルを測定することを含む。一般に、バイオマーカーのレベルを測定することは、バイオマーカーのｍＲＮＡレベル及び／又はタンパク質レベルを測定することを含む。
従って、いくつかの実施態様において、少なくとも１つ以上のバイオマーカーのレベルは、ｍＲＮＡレベルで測定される。さらなる実施態様において、少なくとも１つ以上のバイオマーカーのレベルは、タンパク質レベルで決定される。様々な実施態様において、少なくとも１つ以上のマーカーはｍＲＮＡレベルで測定され、少なくとも１つ以上のマーカーはタンパク質レベルで測定される。
マーカーがｍＲＮＡレベルで測定される場合、ｍＲＮＡはｍＲＮＡ転写物、５’−及び／又は３’−末端切断型ｍＲＮＡ又はスプライスされたｍＲＮＡ形態であり得る。
マーカーがタンパク質レベルで測定される場合、タンパク質は完全長タンパク質又はその断片であり得る。タンパク質断片は末端切断型タンパク質、すなわち例えばＮ末端又はＣ末端又はその両方で１つ以上のアミノ酸を欠くものでもよい。これは、翻訳後プロセシングによるものか、又は細胞若しくは試料中に存在するプロテアーゼの作用によるものと考えられる。従って、本発明の方法で測定されるマーカーは、天然に存在する断片、好ましくは免疫原性断片も含む。また、タンパク質は翻訳後に修飾、例えばリン酸化、ヒドロキシル化、グリコシル化、Ｎ−グリコシル化、Ｏ−グリコシル化、ユビキチン化、アセチル化、メチル化、プレニル化、又は硫酸化されてもよい。そのような断片が測定される場合、与えられた配列同一性は、参照配列の対応する部分の全長に対する断片の全配列に関連すると理解される。
様々な実施態様において、方法は、タンパク質レベルのマーカー、すなわち特にＭＹＢＰＨＬ及びそのそれぞれのアイソフォームの測定を特徴とする。このような方法は、好ましくは患者から得られた血液又は血清試料に対して行われ得る。
本発明の方法の特定の実施態様において、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、又は１００以上のバイオマーカーのレベルが測定される。
本発明の方法の様々な実施態様において、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定することは、試料中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのタンパク質レベルを測定することを含む。
これらのいくつかの実施態様において、１つ以上のバイオマーカーのレベルは、タンパク質及び／又はｍＲＮＡレベルで測定される。従っていくつかの実施態様において、方法は、タンパク質レベルのみでのバイオマーカーのレベルの測定を含む。
少なくとも１つ以上のマーカーのレベルがタンパク質レベルで測定される上記で詳述された方法は、いくつかの実施態様において、イムノアッセイ、質量分析、クロマトグラフィー、ウエスタンブロット、又はゲル電気泳動によるタンパク質レベルの測定を含む。
いくつかの実施態様において、イムノアッセイは、特に限定されるものではないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、凝集試験、ビオチン／アビジン型アッセイ、ラジオイムノアッセイ、免疫電気泳動、及び免疫沈降であってよい。反応は一般に、蛍光標識、化学発光標識、放射性標識、酵素標識、又は色素分子などの顕在化標識物を含むか、又は抗原と抗体又はそれと反応する抗体との間の複合体の形成を検出する他の方法を含む。これら及びさらなるイムノアッセイは当該分野で公知である（David Wild (Ed.): The Immunoassay Handbook. 3rd ed. Elsevier Science Publishing Company, Amsterdam 2005）。
前述のアッセイは、抗原抗体複合体が結合している固相支持体からの、液相中の未結合タンパク質の分離を含み得る。本発明の実施において使用することができる固体支持体には、ニトロセルロース（例えば、膜又はマイクロタイターウェル形態）、ポリ塩化ビニル（例えば、シート又はマイクロタイターウェル）、ポリスチレンラテックス（例えば、ビーズ又はマイクロタイタープレート）、ポリフッ化ビニリデン、ジアゾ化紙、ナイロン膜、活性化ビーズ、磁気応答性ビーズなどの基質が含まれる。
より具体的には、ＥＬＩＳＡ法を使用することができ、ここでマイクロタイタープレートのウェルは、試験されるタンパク質に対する抗体でコーティングされる。次に、マーカーを含む又は含むと疑われる生物学的試料は、コーティングされたウェルに添加される。抗体−抗原複合体の形成を可能にするのに十分なインキュベーション時間の後、プレートを洗浄して未結合部分を除去し、検出可能に標識された２次結合分子を添加することができる。２次結合分子は、捕捉された試料マーカータンパク質と反応させられ、プレートが洗浄され、２次結合分子の存在が当技術分野で周知の方法を使用して検出される。
上記の詳細な方法の特定の実施態様において、測定が質量分析による場合、質量分析は、ＥＩ、ＣＩ、ＥＳＩ、ＡＰＬＩ、ＡＰＰＩ、及びＡＰＣＩを使用するＭＳ測定を含む群から選択することができる。
クロマトグラフィーを使用するタンパク質レベルのバイオマーカーの測定は、液体クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、スマートクロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、及びイオン交換クロマトグラフィーを含む群から選択され得る（Introduction to Modern Liquid Chromatography, Lloyd R. Snyder, 5 Wiley, 2009）。
様々な実施態様において、バイオマーカーがゲル電気泳動を介して検出される場合、ゲル電気泳動は、特に限定されるものではないが、アガロースゲル電気泳動、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、２Ｄ−ゲル電気泳動、ネイティブゲル電気泳動、及び定量的分取ネイティブ連続ポリアクリルアミドゲル１０電気泳動（ＱＰＮＣ−ＰＡＧＥ）を含む群から選択され得る。
もちろん本発明の方法の特定の実施態様において、少なくとも２つの決定方法を、その後の方法で互いに組合せてもよい。変形例では、ゲル電気泳動の後に質量分析が行われる場合がある。あるいは、ゲル電気泳動の後にウエスタンブロットが行われ、クロマトグラフィーの後に１５質量分析が行われ、クロマトグラフィーの後にイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡが行われてよい。
本発明の方法のさらなる実施態様において、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定することは、試料中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのｍＲＮＡレベルを測定することを含む。これらの実施態様の代替変形態様では、１つ以上の追加のバイオマーカーのレベルが測定される。これらの実施態様のいくつかでは、１つ以上のバイオマーカーのレベルは、タンパク質及び／又はｍＲＮＡレベルで測定される。従って、いくつかの実施態様において、方法は、ＲＮＡレベルのみでバイオマーカーのレベルを測定することを含む。
上記で詳述された方法において、バイオマーカーがｍＲＮＡレベルで測定される場合、ＲＮＡレベルは、ＰＣＲ、ゲル電気泳動、及び／又はノーザンブロットによって測定され得る。
バイオマーカーレベルがＲＮＡレベルで測定される場合、検出試薬は、オリゴヌクレオチドなどの核酸分子であり得る。オリゴヌクレオチドは、検出を可能にするために標識され得る核酸プローブであり得るか、又は標的分子の増幅を可能にするオリゴヌクレオチドプライマーであり得る。
さらなる態様において、本発明は、上記で詳述された方法で使用するためのキットに関し、キットは、試料中の、心房心筋組織損傷の１つ以上のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬と、心筋損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬とを含む。特定の実施態様において、試料中の、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベル及び心筋損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬は、抗体及び／又はオリゴヌクレオチドである。上記の実施態様のいくつかでは、キットは、試料中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬と、心筋損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬とを含む。１つの実施態様において、キットはさらに、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、又は１００個の追加のバイオマーカーの検出のための追加の試薬を含む。
さらに本発明は、本発明の方法で使用するための、本明細書に開示される心房心筋組織損傷の１つ以上のバイオマーカーと、本明細書に開示される心筋損傷の１つ以上の追加のバイオマーカーとを含む、バイオマーカーパネルを提供する。特定の実施態様において、パネルは、少なくとも１つ以上の追加のバイオマーカーを含む。１つの実施態様において、バイオマーカーパネルは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、又は１００個の追加のマーカーを含む。これらは、本明細書に開示されているものから選択することができる。また、バイオマーカーパネルに含まれるマーカーの検出試薬を含むキットも含まれる。前記検出試薬は、例えば、それぞれのマーカーに特異的な抗体であってよい。
上記のキットは、様々な実施態様において、ＭＹＢＰＨＬ及びそのアイソフォームを測定するための試薬、好ましくは、抗体などの血液試料中のタンパク質として、前記マーカーを測定することを可能にする試薬を含む。同様に、バイオマーカーパネルは、様々な実施態様において、ＭＹＢＰＨＬ及びそのアイソフォームを含む。
実施例１
心房心筋肉組織におけるＭＹＢＰＨＬ、ＭＹＢＰＨ、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１、及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２遺伝子発現の増加
例えば “Region and cell-type resolved quantitative proteomic map of the human heart” Doll S, DreBen M, Geyer PE, Itzhak DN, Braun C, Doppler SA, Meier F, Deutsch MA, Lahm H, Lange R, Krane M, Mann M. Nat Commun. 2017 Nov 13;8(1):1469. doi: 10.1038/s41467-017-01747-2. PMID: 29133944 に従って、ヒトの心臓のプロテオームの試験を行った。心臓手術を受けた患者から生検によって得られた心臓組織試料中のさまざまなバイオマーカーの発現を、ｑＰＣＲによって検証した。試験では、組織試料を以下の部位から採取した（組織試料の数はｎ＝３）：左心房（ＬＡ）、右心房（ＲＡ）、左心室（ＬＶ）、及び右心室（ＲＶ）。
心房心筋肉組織におけるＭＹＢＰＨＬ、ＭＹＢＰＨ、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１、及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２遺伝子発現の増加
例えば “Region and cell-type resolved quantitative proteomic map of the human heart” Doll S, DreBen M, Geyer PE, Itzhak DN, Braun C, Doppler SA, Meier F, Deutsch MA, Lahm H, Lange R, Krane M, Mann M. Nat Commun. 2017 Nov 13;8(1):1469. doi: 10.1038/s41467-017-01747-2. PMID: 29133944 に従って、ヒトの心臓のプロテオームの試験を行った。心臓手術を受けた患者から生検によって得られた心臓組織試料中のさまざまなバイオマーカーの発現を、ｑＰＣＲによって検証した。試験では、組織試料を以下の部位から採取した（組織試料の数はｎ＝３）：左心房（ＬＡ）、右心房（ＲＡ）、左心室（ＬＶ）、及び右心室（ＲＶ）。
図１は、バイオマーカーＭＹＢＰＨＬとバイオマーカーＦＨＬ２の遺伝子発現解析の結果を示し、ここで遺伝子発現解析はｑＰＣＲによって行われた。図１Ａは、左心室と比較して、左心房と右心房におけるＭＹＢＰＨＬの発現に大きな有意差があることを示す。それにより、右心房におけるＭＹＢＰＨＬの遺伝子発現は、左心室よりも３００倍高い。図１Ｂは、左心房及び右心房と比較して、左心室におけるＦＨＬ２の発現に有意差があることを示し、左心室におけるＦＨＬ２の遺伝子発現は、左心房における発現よりも２８倍高い。
図２は、患者の生検によって得られた９つの左心室筋肉組織と９つの左心房筋肉組織から採取された組織中の、バイオマーカーＭＹＢＰＨＬ、ＦＨＬ−２、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＢＰＨ、並びにＭＹＢＰＨＬアイソフォームであるＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１（ＭＹＢＰＨＬ ｔ１）及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２（ＭＹＢＰＨＬ ｔ２）の遺伝子発現解析の結果を示し、ここで遺伝子発現解析はｑＰＣＲによって行われた。それにより、ＭＹＢＰＨＬ、ＭＹＢＰＨ、及び２つのＭＹＢＰＨＬアイソフォームであるＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１とＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の遺伝子発現は左心房で高く、ＭＹＢＰＨの発現の差はＭＹＢＰＨＬの１つよりも明らかに低くなっている（ほぼ４２倍低い）。ＦＨＬ−２は左心室でより高いレベルで発現される遺伝子である。さらに、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２が９つの左心室試料のうち１つの左心室試料でのみ発現されるのに対して、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２が９つの左心房試料のうち７つの左心房試料で発現されるため、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２は左心房に対して高い特異性を示す。
図３は、バイオマーカーＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の遺伝子発現解析の結果を示し、ここで遺伝子発現解析はゲル電気泳動によって示されている。それにより、左心房に対するＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の高い特異性が確認され、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２は、いずれの左心室試料でも検出されなかったが、９つの左心房試料のうち７つの左心房試料で検出された。
図４は、左心房及び非心臓組織におけるＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の発現レベルを示す。図４は、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２が、平滑筋細胞と骨格筋試料を含む動脈血管で検出されなかったのに対し、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２は左心房で検出され、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２の高い心臓特異性を確認していることを示す。
実施例２
血漿中のバイオマーカーＭＹＢＰＨＬの検出
バイオマーカーＭＹＢＰＨＬが血漿中に検出されるかどうかを決定するための試験が行われた。冠状動脈バイパス移植術や心臓弁手術などの心臓手術以外に、心房細動の治療のためにアブレーション（修正メイズ手術）を受けた患者群が試験された。メイズ手術では、患者の心内膜心筋肉組織又は心外膜心筋肉組織のいずれかに、集中的な意図した特異的心筋損傷が行われた。以下の測定時点で２４時間にわたって、患者から血液試料が採取された：
１． Ｐｒｅ−ＯＰ 心臓手術の開始前
２． ０ｈ 集中治療室への患者の到着
３． ２ｈ 集中治療室への患者の到着の２時間後
４． ４ｈ 集中治療室への患者の到着の４時間後
５． ６ｈ 集中治療室への患者の到着の６時間後
６． ２４ｈ 集中治療室への患者の到着の２４時間後
血漿中のバイオマーカーＭＹＢＰＨＬの検出
バイオマーカーＭＹＢＰＨＬが血漿中に検出されるかどうかを決定するための試験が行われた。冠状動脈バイパス移植術や心臓弁手術などの心臓手術以外に、心房細動の治療のためにアブレーション（修正メイズ手術）を受けた患者群が試験された。メイズ手術では、患者の心内膜心筋肉組織又は心外膜心筋肉組織のいずれかに、集中的な意図した特異的心筋損傷が行われた。以下の測定時点で２４時間にわたって、患者から血液試料が採取された：
１． Ｐｒｅ−ＯＰ 心臓手術の開始前
２． ０ｈ 集中治療室への患者の到着
３． ２ｈ 集中治療室への患者の到着の２時間後
４． ４ｈ 集中治療室への患者の到着の４時間後
５． ６ｈ 集中治療室への患者の到着の６時間後
６． ２４ｈ 集中治療室への患者の到着の２４時間後
図５は、心内膜及び心外膜アブレーションを受けた１２人の患者（ｎ＝１２）の患者群から得られた血漿試料中の、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の測定結果を示す。血漿試料中のＭＹＢＰＨＬの濃度は、測定時点２ですでに明確かつ有意に増加した。測定時点２で、ＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は最大値に達した。時間の経過とともに、ＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は徐々に減少し、測定時点６、つまり集中治療室に患者が到着してから２４時間後のＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は、まだ術前の濃度レベルに達していない。データは、当技術分野で知られている非特異的バイオマーカーであるミオグロビンと比較してＭＹＢＰＨＬが、心筋損傷の発生から２４時間以上経過した後でも、血漿でのその発生の検出を可能にすることを示す。
実施例３
血漿中のバイオマーカーＭＹＢＰＨＬの濃度による損傷程度依存性
図６は、実施例２で説明したように、心内膜アブレーション（Ａ）又は心外膜アブレーション（Ｂ）を受けた患者中における、定義された期間にわたる、及び測定時点における血漿試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の測定結果を示す。この試験では、９人の患者の群（ｎ＝９）が心内膜アブレーションを受け（Ａ）、３人の患者の群（ｎ＝３）が心外膜アブレーションを受けた（Ｂ）。心内膜アブレーションは心外膜アブレーションより侵襲的なアブレーションであり、より強い心筋損傷を引き起こす。術後の値は、心内膜アブレーションと心外膜アブレーションの両方の患者群で、血漿中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の有意な増加するが、これは時間とともに減少することを示す。しかし、心外膜アブレーションを受けた患者では、血漿中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度は、心内膜アブレーションを受けた患者の血漿中のすべての術後測定時点のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度より高いレベルに到達することはなかった。これは、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度がより侵襲的な心内膜アブレーションを受けた患者の方が高いため、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度と現在の心房心筋損傷の感度と相関関係を示す。
血漿中のバイオマーカーＭＹＢＰＨＬの濃度による損傷程度依存性
図６は、実施例２で説明したように、心内膜アブレーション（Ａ）又は心外膜アブレーション（Ｂ）を受けた患者中における、定義された期間にわたる、及び測定時点における血漿試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の測定結果を示す。この試験では、９人の患者の群（ｎ＝９）が心内膜アブレーションを受け（Ａ）、３人の患者の群（ｎ＝３）が心外膜アブレーションを受けた（Ｂ）。心内膜アブレーションは心外膜アブレーションより侵襲的なアブレーションであり、より強い心筋損傷を引き起こす。術後の値は、心内膜アブレーションと心外膜アブレーションの両方の患者群で、血漿中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の有意な増加するが、これは時間とともに減少することを示す。しかし、心外膜アブレーションを受けた患者では、血漿中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度は、心内膜アブレーションを受けた患者の血漿中のすべての術後測定時点のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度より高いレベルに到達することはなかった。これは、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度がより侵襲的な心内膜アブレーションを受けた患者の方が高いため、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度と現在の心房心筋損傷の感度と相関関係を示す。
図７は、図６による血漿試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の変化倍率を示す。心内膜アブレーションの場合、術前のＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は任意に１に設定されている。心内膜アブレーションの場合、最大３倍のＭＹＢＰＨＬ濃度の増加が測定された。最大値は、患者が集中治療室に到着した測定時点に対応する。一方、心外膜アブレーションの場合、ＭＹＢＰＨＬ濃度の最大２０倍の増加が測定され、図５に示すように、心房心筋損傷の強度は低くなっている。
実施例４
急性ＳＴ上昇型心筋梗塞に罹患している患者のＭＹＢＰＨＬ血漿濃度
急性ＳＴ上昇型心筋梗塞を示した患者群で、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度を測定した。図８は、血漿試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の測定結果を示す。血液試料は、介入前と介入後７２時間の２つの測定時点で採取された。介入は心臓カテーテルによって行われた。急性ＳＴ上昇型心筋梗塞の病状により、この群の患者は、図８に示すように、心房の心臓損傷に加えて明確な心室損傷を患い、測定時点１、例えば介入の前に、最高のＭＹＢＰＨＬ血漿濃度が見られる。このＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は、心外膜メイズで治療された患者に見られるＭＹＢＰＨＬ血漿濃度と同様である。介入の７２時間後、ＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は、患者がメイズで治療される前（図５及び図６ａ）又は健常な被験者で、実施例３で得られたものと同様の値に減少した。この試験のデータは、ＭＹＢＰＨＬ血漿濃度が急性心筋損傷の場合に顕著に増加し、時間とともに減少して、病態がもはや存在しなくなると正常値に達することを示す。
急性ＳＴ上昇型心筋梗塞に罹患している患者のＭＹＢＰＨＬ血漿濃度
急性ＳＴ上昇型心筋梗塞を示した患者群で、ＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度を測定した。図８は、血漿試料中のＭＹＢＰＨＬタンパク質濃度の測定結果を示す。血液試料は、介入前と介入後７２時間の２つの測定時点で採取された。介入は心臓カテーテルによって行われた。急性ＳＴ上昇型心筋梗塞の病状により、この群の患者は、図８に示すように、心房の心臓損傷に加えて明確な心室損傷を患い、測定時点１、例えば介入の前に、最高のＭＹＢＰＨＬ血漿濃度が見られる。このＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は、心外膜メイズで治療された患者に見られるＭＹＢＰＨＬ血漿濃度と同様である。介入の７２時間後、ＭＹＢＰＨＬ血漿濃度は、患者がメイズで治療される前（図５及び図６ａ）又は健常な被験者で、実施例３で得られたものと同様の値に減少した。この試験のデータは、ＭＹＢＰＨＬ血漿濃度が急性心筋損傷の場合に顕著に増加し、時間とともに減少して、病態がもはや存在しなくなると正常値に達することを示す。
実施例５
心房心筋組織損傷における、特異的バイオマーカーＭＹＢＰＨＬのタンパク質濃度と既知の非特異的バイオマーカーＣＫ−ＭＢのタンパク質濃度の間の比例性
図９Ａは、実施例２と同じ患者群から得られた血清試料中のＣＫ−ＭＢタンパク質濃度の測定結果を示す。図９Ｂは、図９Ａによる血清試料中のＣＫ−ＭＢタンパク質濃度の変化倍率を示す。ＭＹＢＰＨＬと比較して、ＣＫ−ＭＢタンパク質濃度は測定時点２でも最大値に達した。この測定時点２において、ＣＫ−ＭＢタンパク質濃度は、アブレーション前のＣＫ−ＭＢタンパク質濃度の１５倍高い。
心房心筋組織損傷における、特異的バイオマーカーＭＹＢＰＨＬのタンパク質濃度と既知の非特異的バイオマーカーＣＫ−ＭＢのタンパク質濃度の間の比例性
図９Ａは、実施例２と同じ患者群から得られた血清試料中のＣＫ−ＭＢタンパク質濃度の測定結果を示す。図９Ｂは、図９Ａによる血清試料中のＣＫ−ＭＢタンパク質濃度の変化倍率を示す。ＭＹＢＰＨＬと比較して、ＣＫ−ＭＢタンパク質濃度は測定時点２でも最大値に達した。この測定時点２において、ＣＫ−ＭＢタンパク質濃度は、アブレーション前のＣＫ−ＭＢタンパク質濃度の１５倍高い。
図１０は、アブレーションを受けた１２人の患者の血漿試料中のＭＹＢＰＨＬ濃度値と、同じ測定時点における同じ患者の血清試料中のＣＫ−ＭＢ濃度値との相関を示す。ＣＫ−ＭＢは、心房筋損傷又は心室筋損傷に非特異的であるが、心筋損傷を検出するための確立されたバイオマーカーであり、その濃度は心筋損傷の程度と相関していることが知られている。図１０に示すように、ＭＹＢＰＨＬ濃度値とＣＫ−ＭＢ濃度値の間に１対１の相関関係が証明された。
実施例６
バイオマーカーＭＹＢＰＨＬの変化倍率とバイオマーカーＦＨＬ−２の変化倍率を使用した心房心筋組織損傷と心室心筋組織損傷の区別
図１１は、ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率を示す。表示の左側の２列には、ＳＴ上昇型心筋梗塞に罹患している患者の結果が示され、表示の右側の６列には、心房細動に罹患してアブレーションを受けている患者の結果が示されている。ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率は、心房アブレーションを受けた患者では２まで増加する。逆に、ＳＴ上昇型心筋梗塞、例えば心室心筋組織損傷に罹患している患者に対する介入の前後で、ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率は、約１で安定したままである。
バイオマーカーＭＹＢＰＨＬの変化倍率とバイオマーカーＦＨＬ−２の変化倍率を使用した心房心筋組織損傷と心室心筋組織損傷の区別
図１１は、ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率を示す。表示の左側の２列には、ＳＴ上昇型心筋梗塞に罹患している患者の結果が示され、表示の右側の６列には、心房細動に罹患してアブレーションを受けている患者の結果が示されている。ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率は、心房アブレーションを受けた患者では２まで増加する。逆に、ＳＴ上昇型心筋梗塞、例えば心室心筋組織損傷に罹患している患者に対する介入の前後で、ＭＹＢＰＨＬの変化倍率とＦＨＬ−２の変化倍率の比率は、約１で安定したままである。
本明細書で引用されるすべての文書は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書に例示的に記載された発明は、本明細書に具体的に開示されていない任意の１つ以上の要素、又は限定がなくても適切に実施することができる。従って「含む（comprising）」、「含む（including）」、「含む（containing）」などの用語は、限定的ではなく拡大的に読まれるべきである。さらに、ここで使用されている用語及び表現は、限定のためではなく説明の用語として使用されており、そのような用語及び表現の使用において、示され及び説明された機能又はその一部の同等物を除外する意図はなく、請求された本発明の範囲内で様々な修正が可能であることを認識されたい。すなわち、本発明は好ましい実施態様及び任意の特徴によって具体的に開示されているが、そこに具体化され本明細書に開示されたはめの修飾及び変更を当業者が使用し得ること、及びそのような修飾及び変更が本発明の範囲内であると見なされることを理解されたい。本明細書では、本発明を広義に一般的に説明されている。一般的な開示に含まれるより狭い分類及びやや一般的な分類のそれぞれも、本発明の一部を構成する。これは本発明の一般的な記載を含むが、切り取られた材料が本明細書に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、その属性から任意の主題を取り出すことは否定的に限定される。
Claims (14)
- 患者の心筋組織損傷、好ましくは心房心筋組織損傷を診断する方法であって、前記方法は、
（ａ）患者から得られた試料中の、ＭＹＢＰＨＬ及びそのアイソフォームからなる群より選択される心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定する工程；及び
（ｂ）工程ａ）で測定されたレベルを、対照個体で観察された心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと比較する工程を含み、
ここで、工程ａ）で測定されたレベルが、対照個体中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと比較して増加している場合、前記患者は心筋組織損傷を有すると診断される、上記方法。 - 前記ＭＹＢＰＨＬのアイソフォームが、ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
- 前記ＭＹＢＰＨＬアイソフォーム１及びＭＹＢＰＨＬアイソフォーム２が、配列番号３又は６に記載のアミノ酸配列、又は全長にわたってそのアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するそのホモログを有する、請求項２に記載の方法。
- 工程（ａ）において、心房心筋損傷の１つ以上の追加のバイオマーカーのレベルが測定され、そして、工程（ｂ）において、工程ａ）において測定された前記バイオマーカーのレベルが、対照個体におけるそれぞれのマーカーのレベルと比較される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法であって、
前記バイオマーカーが、ＭＹＢＰＨ、ＭＹＯＴ、ＡＳＮＳＤ１、ＣＨＦＲ、ＮＴＮ１、ＲＦＣ５、ＰＯＬＩ、ＣＯＭＰ、ＰＯＦ１Ｂ、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ、ＨＤＡＣ１０、ＡＳＰＧ、ＦＭＯＤ、ＣＡ１３、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２、ＧＮＬ３Ｌ、ＣＯＬ２Ａ１、ＰＤＬＩＭ４、ＬＥＰＲＥＬ１、ＯＭＤ、ＤＧＫＺ、ＮＴ５ＤＣ２、ＩＴＬＮ１、ＮＴＭ、ＰＲＫＧ２、ＣＨＧＢ、ＦＡＭ１７９Ａ、ＣＫＭＴ１Ａ、ＣＫＭＴ１Ｂ、ＬＴＢＰ３、ＳＧＳＭ１、ＭＥＴＴＬ７Ｂ、ＬＴＢＰ２、ＯＧＤＨＬ、ＰＡＭ、ＳＢＫ３、ＳＦＲＰ１、及びそれらのアイソフォームから選択される、上記方法。 - 前記方法が、前記患者における心筋組織損傷の程度を測定することをさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法であって、心筋損傷の程度は、前記患者から得られた試料中の心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルと、対照個体における心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルとの比率を決定することによって評価される、上記方法。
- 前記方法は、（ｃ）前記患者の試料において、心筋組織損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定することをさらに含み、前記方法は心房筋組織損傷と心室筋組織損傷とを区別するのに適している、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
- 請求項６に記載の方法であって、前記追加のバイオマーカーが、心室心筋組織損傷に特異的なバイオマーカー、好ましくはＦＨＬ−２、ＳＭＹＤ２、ＦＡＳＴＫＤ１、ＰＲＲ３３、ＳＯＲＢＳ２、ＣＲＩＳＰＬＤ１、ＮＰＨＰ４、ＡＮＫＲＤ２、ＴＭＥＭ１５９、ＡＴＰ７Ａ、Ｃ１２ＯＲＦ７３、ＮＡＶ１、ＡＴＰ５Ｂ、ＨＳＰＢ７、ＴＭＥＭ８８、ＷＤＲ６２、ＡＣＴＮ３、ＴＲＩＭ７２、ＥＧＦＬＡＭ、ＬＲＲＣ３９、ＤＰＹＳＬ４、ＰＦＫＦＢ２、ＡＢＣＢ６、ＭＥＴＴＬ２Ｂ、ＭＥＴＴＬ２Ａ、ＣＡＲＮＳ１、ＳＰＴＢＮ１、又はそのアイソフォームである、上記方法。
- 前記追加のバイオマーカーが、好ましくはＣＫ−ＭＢ又はトロポニンからなる群より選択される、心筋組織損傷の一般的なバイオマーカーである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記試料が血清又は血漿である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記患者がヒトである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記バイオマーカーのレベルを測定することが、バイオマーカーのタンパク質濃度を測定することを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
- 前記タンパク質濃度が、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、質量分析、クロマトグラフィー、ウエスタンブロット、又はゲル電気泳動によって測定される、請求項１１に記載の方法。
- 請求項６〜１２のいずれか１項に記載の方法で使用するためのキットであって、試料中の、心房心筋組織損傷のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬と、心筋損傷の追加のバイオマーカーのレベルを測定するための試薬とを含む、上記キット。
- 請求項６〜１２のいずれか１項に記載の方法で使用するための、心房心筋組織損傷のバイオマーカーと心筋損傷の追加のバイオマーカーとを含む、マーカーパネル。
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