JP2021512855A - ラクトバシラスを含む健康に有益な組成物及びその調製方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、イヌの胃腸及び尿管疾患を治療及び予防するための健康に有益な組成物に関する。本発明はさらに、健康促進組成物の製造方法、ドッグフード、及びイヌの胃腸及び尿管疾患を治療及び予防するための医薬製品又はドッグフード製品の製造のための健康に有益な調製物の使用にも関する。
【選択図】 なし

Description

本発明は、特にイヌにおける胃腸疾患を予防及び／又は治療するための、及び／又は胃腸を介して尿管微生物群を改変するための健康に有益な組成物に関する。さらに、本発明は、前記組成物の製造方法、前記組成物を含む製品、及びイヌのための医薬品及び可食性製品の製造のための前記組成物の使用に関する。
健康に有益な乳酸菌は、イヌなどの動物の胃腸管における有益な細菌と有害な細菌のバランスを強化するために幅広く使用されている。また、プロバイオティック乳酸菌を含むペットフードは、ネコ及び／又はイヌの胃腸管及び皮膚及び／又は外被系の健康を改善すること、及び老化の影響を緩和するか又は低減することが示唆されている。
胃腸管及び尿管の疾患は、イヌにおいて極めて一般的である。イヌの胃腸の問題の治療に対する従来のアプローチは、食餌の改善、抗生物質治療、及び特定の抗炎症及び免疫抑制薬に依存している。これらは、単独で又は組み合わせて使用される。イヌの胃腸管及び尿管疾患の多くは、たとえ診断が確実でないか、仮にあったとしても、抗生物質で治療される。この治療は、何回かの更新を伴なう数週間の抗生物質治療すら含む。抗生物質に対する抵抗性を有する微生物の問題が増大しているため、プロバイオティック細菌、特に乳酸菌を使用した治療を含む代替治療が、それらの健康に寄与する特性のために示唆されている。
プロバイオティック乳酸菌の不消化は、ＧＩ管の調節、病原性微生物に対する対抗作用、ＧＩ及び尿管の微生物群の調節、及び腸の粘膜バリアの維持などの多くの利点を有する。
Ｂｅａｓｌｅｙ Ｓ．ら，（Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃａｎｉｎｅ ｆａｅｃｅｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０１（２００６）１３１−１３８）は、健康なイヌの糞便からの乳酸菌の単離及び配列決定を開示する。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ，Ｌ．ｍｕｃｏｓａｅ，Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ，Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ及びＷｅｉｓｓｅｌｌａ ｃｏｎｆｕｓａの五つの菌株が、イヌの糞便におけるそれらの頻度及び量、増殖密度、酸耐性、及び抗微生物活性に基づいて、候補プロバイオティックとして選択された。
Ｂｅａｓｌｅｙらの研究は、Ｍａｎｎｉｎｅｎ Ｔ．ら（Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｎｉｎｅ Ｓｍａｌｌ−Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｌａｃｔｉｃ Ａｃｉｄ Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｂｙ Ｆｅｅｄｉｎｇ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，Ａｐｐｌｉｅｄ及びＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔ．２００６，ｐ．６５３９−６５４３）によって継続され、イヌの空腸キームスに対する上述の５種の候補乳酸菌のプロバイオティック菌株のインビトロ耐性が試験された。これらの菌株は、ドッグフードと混合されて、１日２回を７日間にわたって、永久的に瘻形成されたビーグル犬に供給された。これらの菌株は、供給中、生存しており、かつ空腸キームスの乳酸菌微生物群において優勢であり、腸微生物群を改変する能力を有することが見出された。
プロバイオティックの使用に加えて、イヌの胃腸の微生物群を改変するための他のアプローチも開示されている。イヌリンや様々なフルクトオリゴ糖などのオリゴ糖は、胃腸管におけるビフィズス菌及び乳酸菌の増殖に有用であり、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓなどの病原性細菌の増殖を減少させることが報告されている。ＥＰ０８５０５６９Ｂ１は、ペットフードとして有用なシリアル製品を開示する。このシリアル製品は、イヌリンの形のプレバイオティックオリゴ糖、及び所望によりプレバイオティックフルクトオリゴ糖を含むゼラチン化されたデンプンマトリックスを含む。このシリアル製品は、ペットの胃腸管において有益な効果を有するとされている。イヌに供給されると、味を改善し、ビフィズス菌の数を増大させ、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓの数を減少させ、糞便のｐＨ及び量を低下させることが報告されている。
他の潜在的に有益な物質と組み合わされたプロバイオティックも開示されている。ＷＯ２００７／０７６５３４は、所望により一種以上のプロバイオティック及びプレバイオティックと組み合わされた少なくとも一種の抗酸化剤（ビタミンＥ、ビタミンＣ及び／又はβ−カロチンなど）を含む組成物を開示する。好適なプロバイオティックとして、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓのいくつかの種が例示されており、好適なプレバイオティックとして、オリゴ糖、ガラクタン、及びβ−グルカンが例示されている。この組成物は、炎症性腸疾患の危険性を有する動物の胃腸管における有益な細菌と有害な細菌のバランスを強化するために有用であると述べられており、前記動物には、ヒト、並びにトリ、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ、ネズミ、ヒツジ、及びブタが含まれる。
ＵＳ２００５／０１７５５９８Ａ１は、哺乳動物（好ましくは、コンパニオンアニマルにおけるイヌ）の一部切除されて洗浄されたＧＩ管からの単離によって得られるプロバイオティックビフィズス菌の使用方法を開示する。この方法は、免疫系の治療、体重及び身体組成のコントロール、尿の健康、皮膚及び外被の疾患、及び老化の治療を含む。前記プロバイオティックは、経口的に、生きたままで、又は生きていない形態で投与されることができ、例えば、粗びきの穀物、及びウェットタイプの動物フードなどの通常の食餌摂取用の組成物へと調製されることができ、又はビスケット、チューイングスナック、トリーツ、粉末、懸濁液、カプセルなどのサプリメントとして使用されることができる。追加の成分として、組成物は、タンパク質、脂肪、炭水化物、プレバイオティック、長鎖脂肪酸、及び亜鉛を含むことができる。プレバイオティックの例は、オリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、及びデンプンのオリゴ誘導体を含む。
ＥＰ１２９０１３６Ｂ１は、以下の乳酸菌の六つのプロバイオティック菌株を開示する：ネコのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＮＣＣ２５８１，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＮＣＣ２５９２及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＮＣＣ２５８３、及びイヌのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＮＣＣ２６０３，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ ＮＣＣ２６１３、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＣＣ２６２８。また、ドッグフード又はキャットフード組成物中に選択された菌株を組み入れる追加の工程を含むドッグフード又はキャットフード組成物の調製方法も開示されている。好適な細菌種として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ，Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ，Ｌ．ａｎｉｍａｌｉｓ，Ｌ．ｒｕｍｉｎｉｓ，Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ，Ｌ．ｃａｓｅｉ，Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ，Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ，Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ，Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．が例示されている。このペットフードは、ネコ及び／又はイヌの胃腸管及び皮膚及び／又は外被系の健康を改善すること、及び老化の影響を緩和するか又は低減することが意図されている。このペットフードは、細菌種及び／又はその発酵培地に加えてデンプン源、タンパク質源、及び脂肪源、及びプレバイオティック炭水化物を乾燥ペットフードの重量の約２０％未満の量で、並びにペットフードを栄養学的に完全な製品にするためのサプリメントとしての長鎖脂肪酸、ミネラル、及びビタミンを含むことができる。
プロバイオティック製品は、通常、安定性が制限されている。そのため、所望の効果が、低減したり、失われたりすることすらある。
この技術分野における最近の発展にもかかわらず、改良されたイヌ特異的な健康に有益な組成物であって、幅広いスペクトルのイヌの胃腸及び尿管疾患、及びこれらの疾患から生じる二次的な症状を予防及び治療するために使用されることができ、抗生物質の使用が回避されることすらできる組成物に対する必要性がなおも存在することは明らかである。
本発明の目的は、特にイヌにおける胃腸疾患及び尿管感染を予防及び／又は治療するための組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、イヌの胃腸及び尿管の微生物群を健康で安定な微生物群へと調節するための組成物を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、前記組成物の製造方法を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、イヌのための医薬品及び可食性製品の製造のための前記組成物の使用を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、前記組成物を含むイヌのための医薬品及び可食性製品の製造方法を提供することである。
本発明の組成物の利点は、特に組成物の改善された安定性及び効力において見られることができる。これらは、慢性疾患の長期間治療において、他の治療法又は特別な食餌に対して反応しない疾患において、及び自然な免疫抑制状態を改善するときにイヌの健康を維持することにおいて特に有用である。
本発明の組成物、前記組成物の製造方法、イヌのための医薬品及び可食性製品、及び前記イヌのための医薬品及び可食性製品の製造における組成物の使用が、特許請求の範囲に開示されている。
本発明は、イヌの胃腸疾患及び尿管感染、及びそれらから生じる二次症状を防止して治療するために好適な組成物に向けられている。特に、本発明の組成物は、イヌの胃腸及び尿管の微生物群を健康で安定な微生物群へと調節するのに有用である。
前記組成物は、４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを含み、前記調製物Ａは、凍結乾燥された乳酸菌のイヌ特異的な菌株と少なくとも一種のカルシウム源を含み、前記菌株のうちの少なくとも二種は、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属し、前記カルシウム源は、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量であり、前記調製物Ｂは、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物（ａｒｏｎｉａ）のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキ（ｂｏｇ ｂｉｌｂｅｒｒｙ）のベリーの粉末、ガンコウラン（ｃｒｏｗｂｅｒｒｙ）のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーン（ｓｅａ ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）のベリーの粉末、ザイフリボク（ｓａｓｋａｔｏｏｎ）のベリーの粉末、クラウドベリー（ｃｌｏｕｄｂｅｒｒｙ）のベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物（ｓｏｒｂｕｓ）のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
本発明はまた、前記組成物の製造方法に向けられている。前記方法は、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌のイヌ特異的な少なくとも二種の菌株を別々に又は一緒に培養して、得られた培養物を凍結乾燥し、得られた培養物と、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量で存在するカルシウム源と、所望により追加の乳酸菌のイヌ特異的な菌株とを加工して、均質な調製物Ａとすることによって、調製物Ａを製造する工程、及び
４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを混合して、組成物を得る工程
を含み、前記調製物Ｂが、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
本発明の組成物は、イヌの胃腸疾患及び尿管感染を防止して治療するために使用されることができ、特に、イヌの胃腸及び尿管の微生物群を健康で安定な微生物群へと調節するために使用されることができ、乾燥粉末として、イヌ用の可食性製品中に混合されて、又は例えば経口投与のための医薬処方（例えば、顆粒、錠剤、チューイングスナック、及びイヌ用の発酵製品）中に処方されることができる。
図１は、実施例２のサンプル１〜５の結果を示す。 図２は、実施例３のサンプル１〜５の結果を示す。
以下、本発明は、詳細な記述及び実施例によって説明されるが、これらは本発明を限定するものではない。
有意に改善された安定性及び効力を有する組成物が本発明によって得られることができることが、驚くべきことに見出された。特に、凍結乾燥された乳酸菌の安定性は、有意に改善され、製品の貯蔵寿命が延長されることができる。ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含むベリー粉末の混合物が、高い量の抗細菌性ポリフェノール化合物を含むこと、特に、ビルベリー、クランベリー、及びシーバックソーンの組み合わせが、凍結乾燥された乳酸菌の特定の菌株の活性を減少させず又は保護することは、特に驚きであった。また、改善された安定性に加えて、プロバイオティック組成物の効力も改善される。
ベリー種の特定の組み合わせは、ポリフェノールの最適な組み合わせを与え、これらがそれぞれ異なる方法で細菌に結合して、それによって望ましくない細菌の細胞壁への付着を防止して阻害する。微生物は移動しやすいので、阻害された細菌を、健康を促進する細菌株（イヌ由来の乳酸菌など）で置換することが必須である、
ポリフェノールの特定の混合物は、いくつかの望ましくない細菌種（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ，Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ（コアグラーゼ陰性），Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ，グラム陰性桿菌、グラム陽性球菌）、並びに望ましくない微生物群に対する効果を保証する。ポリフェノール混合物は、ビルベリー、アロニア属の植物、クロスグリ、クロマメノキ、ガンコウラン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリーの高いアントシアニン含有量（好ましくは、ビルベリーであり、北欧のビルベリーは、典型的には少なくとも５００ｍｇ／１００ｇ（乾燥重量に基づいて）のアントシアニン含有量を有する）と、クランベリー、赤ブドウ（Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ（ヨーロッパブドウ））、コケモモ、ラズベリー、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリーの高いプロアントシアニジン含有量（好ましくは、クランベリーであり、北欧のクランベリーは、典型的には少なくとも３００ｍｇ／１００ｇ（乾燥重量に基づいて）のプロアントシアニジン含有量を有する）と、シーバックソーン、ザイフリボク、クラウドベリー、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）、ナナカマド属の植物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリーの高いプロアントシアニジン含有量（好ましくは、シーバックソーンであり、北欧のシーバックソーン種は、典型的には３００〜２５００ｍｇ／１００ｇ（乾燥重量に基づいて）のプロアントシアニジン含有量を有する）と、そこに含まれるフラボノイド及びカロチノイドを組み合わせる。シーバックソーンのベリーは、極めて特有の味及び香りを有し、イヌによって容易に拒絶される。従って、組成物中のシーバックソーンのベリーの量は、低くしてもよい。
組成物
本発明の組成物は、４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを含み、前記調製物Ａは、凍結乾燥された乳酸菌のイヌ特異的な菌株と少なくとも一種のカルシウム源を含み、前記菌株のうちの少なくとも二種は、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属し、前記カルシウム源は、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量であり、前記調製物Ｂは、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
好ましい実施形態において、組成物は、４５〜７５重量％の調製物Ａと２５〜５５重量％の調製物Ｂを含む。
別の好ましい実施形態において、組成物は、５０〜７０重量％の調製物Ａと３０〜５０重量％の調製物Ｂを含む。
好ましい実施形態において、調製物Ｂは、１０〜６０重量％のビルベリーのベリーの粉末、１０〜６０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１０〜３０重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含む。
所望により、組成物は、０．５〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％の緑茶粉末を含む。
本発明の組成物は、公知の及び未知の病因論の胃腸及び／又は尿管疾患の幅広いスペクトルに患っているイヌ、及びこれらの疾患から由来する二次的症状に患っているイヌに対して有用な効果を奏する。
乳酸菌のイヌ特異的な菌株の量は、健康に有益な効果のために必要な最小量、即ち、１×１０６ｃｆｕ／ｇ〜１×１０１３ｃｆｕ／ｇの範囲であることができる。好ましい実施形態では、効果と経済性の側面から、乳酸菌のイヌ特異的な菌株のそれぞれの量は、調製物Ａのグラム当たり１×１０７〜１×１０１０ｃｆｕ／ｇであり、好ましくは５×１０８〜２．５×１０９ｃｆｕ／ｇである。この濃度は、ＧＩ管に対して有益に作用するのに十分な量の前記菌株を構築する。乳酸菌のイヌ特異的な菌株は、調製物Ａ中に凍結乾燥培養物として組み込まれ、従って、発酵培地の残渣を調製物中に持ち込む。これらの残渣は、乳酸菌に対する保護剤として、及び消化後にＧＩ管において細菌に対する初期増殖材料として、それ自体で、又は他の腸内細菌群によって予め発酵されて、作用する。これらの残渣は通常、調製物Ａの乾燥重量の１５重量％まで、好ましくは５重量％までを占める。好ましくは乳酸菌のイヌ特異的な生きた菌株が使用される。しかし、代替的に、乳酸菌の生きていない、不活性な菌株も使用されることができる。
本明細書において、表現「乳酸菌のイヌ特異的な菌株」は、イヌの糞便、イヌの腸又は腸液から単離される乳酸生成細菌、又は、イヌの糞便、イヌの腸又は腸液から単離される乳酸生成細菌の菌株を意味する。有利には、これらの選択された菌株のうちの少なくとも一種が、抗生物質に対して耐性を有する。
乳酸菌のイヌ特異的な菌株は、健康なイヌの糞便から様々な乳酸菌のイヌ特異的な菌株を単離して、これらの単離された菌株から、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する少なくとも二種の菌株を選択することによって得ることができる。健康なイヌの糞便からの乳酸菌のイヌ特異的な菌株の単離は、Ｂｅａｓｌｅｙら（Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃａｎｉｎｅ ｆａｅｃｅｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０１（２００６）１３１−１３８）によって開示されたようにして行なわれることができる。選択基準は、低ｐＨ（ｐＨ１〜２）中での増殖能力、胆汁酸及び酸素に対する耐性、ある特定の抗生物質に対する抵抗性、又はある特定の病原菌（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ、又は日和見病原菌として認識されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉａの特定の種）に対する抗微生物活性を含むことができる。好ましくは、選択された細菌は、プロテアーゼ処理によって影響を受けない。このことは、プロテアーゼ抵抗性であるか、又は抗微生物物質が非タンパク質の性質を有することを示す。
ある実施形態では、組成物は、ラクトバシラス・フェルメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバシラス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシラス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバシラス・サリヴァリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、及びラクトバシラス・ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ）からなる群から選択される、ラクトバシラス属に属する乳酸菌のイヌ特異的な菌株を２種〜５種含む。
ある実施形態では、組成物は、ラクトバシラス・フェルメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバシラス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシラス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバシラス・サリヴァリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、及びラクトバシラス・ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ）からなる群から選択される、ラクトバシラス属に属する、イヌの糞便、イヌの腸又は腸液から単離される乳酸生成細菌の菌株を２種〜５種含む。
ある実施形態では、本発明の組成物は、４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを含み、前記調製物Ａは、イヌの糞便、イヌの腸又は腸液から単離される乳酸生成細菌の凍結乾燥された菌株と少なくとも一種のカルシウム源を含み、前記菌株のうちの少なくとも二種は、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属し、かつラクトバシラス・フェルメンタムＮＣＩＭＢ ４１６３６、ラクトバシラス・プランタルムＮＣＩＭＢ ４１６３８、及びラクトバシラス・ラムノサスＮＣＩＭＢ ４１６４０からなる群から選択され、前記カルシウム源は、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量であり、前記調製物Ｂは、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
好ましい実施形態では、組成物及び調製物Ａは、前記ラクトバシラス属に属する乳酸菌のイヌ特異的な菌株として、ラクトバシラス・フェルメンタムＮＣＩＭＢ ４１６３６及びラクトバシラス・プランタルムＮＣＩＭＢ ４１６３８を含む。
別の好ましい実施形態では、組成物及び調製物Ａは、前記ラクトバシラス属に属する乳酸菌のイヌ特異的な菌株として、ラクトバシラス・フェルメンタムＮＣＩＭＢ ４１６３６、ラクトバシラス・プランタルムＮＣＩＭＢ ４１６３８、及びラクトバシラス・ラムノサスＮＣＩＭＢ ４１６４０を含む。
これらの菌株は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ，Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ（ＮＣＩＭＢ）に２００９年６月３０日に寄託された。
所望により、組成物及び調製物Ａは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する以外の他の乳酸菌の追加のイヌ特異的な菌株も含むことができ、例えばＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌株（Ｐ．ａｃｉｄｏｌａｃｔｉｃｉなど）、又はＷｅｉｓｓｅｌｌａ属に属する菌株（Ｗ．ｃｏｎｆｕｓａ及びＷ．ｃｉｂａｒｉａなど）を含むことができる。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する以外の他の乳酸菌の追加のイヌ特異的な菌株の好ましい例は、Ｐ．ａｃｉｄｏｌａｃｔｉｃｉ ＮＣＩＭＢ ４１６３７及びＷ．ｃｏｎｆｕｓａ ＮＣＩＭＢ ４１６３９である。これらの菌株は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ，Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ（ＮＣＩＭＢ）に２００９年６月３０日に寄託された。
カルシウム源は、イヌ用の経口処方において使用するのに許容可能ないかなるカルシウム含有物質であることもできる。本発明において有用なカルシウム源の非限定的な例は、炭酸カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、アルギン酸カルシウム、カルシウムステアロイル−２−ラクチレート、ソルビン酸カルシウム、ギ酸カルシウム、酢酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、乳酸カルシウム、クエン酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、合成ケイ酸カルシウム、カルシウムテトラヒドロゲン−ジオルトホスフェート、カルシウムヒドロゲン−オルトホスフェート、水酸化カルシウム、酸化カルシウム、二リン酸ジカルシウム、グルコン酸カルシウム、亜硫酸カルシウム、カルシウムヒドロゲンスルファイト、カルシウムアルミニウムシリケート、ジグルコン酸カルシウム、グアニル酸カルシウム、イノシン酸カルシウム、カルシウム−５′−リボヌクレオチド、マレイン酸カルシウム、酒石酸カルシウム、カルシウムジナトリウムＥＤＴＡ、モノ及びジ−カルシウムジホスフェート、（ナトリウム）カルシウムポリホスフェート、塩化カルシウム、フェロシアンカルシウム、オルトリン酸カルシウム、又はこれらの組み合わせである。
好ましくは、カルシウム源は、その良く許容されている性質及び吸収性のために、炭酸カルシウムである。それに加えて、炭酸カルシウムは、等価のカルシウム源と比べて費用効果的である。
カルシウムの吸収は、特にプレバイオティックの存在下で、体の全ミネラル含有量の増大を改善する。カルシウム源の量は、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％、好ましくは４０〜９５重量％、さらに好ましくは６０〜９０重量％である。Ｃａとして計算すると、これらの重量範囲はそれぞれ、８〜４０重量％、１６〜３８重量％、及び２４〜３６重量％である。
調製物Ａは、所望により少なくとも一種の追加のプレバイオティックを含むことができる。本明細書では、「プレバイオティック（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ）」という表現は、腸の中の一種又は限定された数の細菌の増殖及び／又は活動を選択的に刺激することによって宿主に有益な影響を与え、それによって宿主の健康を改善する非消化性の食品／餌成分を意味する。プロバイオティック組成物において有用な好適なプレバイオティックは、ダイズ粉；オオバコ種子、イナゴマメのさや（ｃａｒｏｂ）、アラビアゴム、グアーゴム、カワラケツメイ属の植物（ｃａｓｓｉａ）、タマリンドの仁、カラヤゴム、トラガカントゴム、キサンタンゴム、ゲランゴム、タラゴム；ベータグルカン、及びその加水分解物；エンバクのオリゴ糖；タガロースなどの単糖、及びその誘導体；ラクトース、ラクツロース、トレハロース、メリビオース、セロビオース、ラフィノース、スタチオース、イソマルトース、イソマルツロースなどの二糖、及びそれらの誘導体；フラクトオリゴ糖、グルコオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ゲンチィオオリゴ糖、マルトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キトオリゴ糖、マンノオリゴ糖、及びそれらの誘導体；アラビノガラクタン、ガラクトマンナン、ペクチン、リグニン、ダイズのヘミセルロース、キシラン、プルラン、イヌリン、クズウコン（ａｒｒｏｗ ｒｏｏｔ）、カンゾウの根、テンサイのパルプ、タピオカ、トウモロコシ、オオムギ、エンバクの抵抗性デンプンなどの多糖及びオリゴ糖、及びそれらの誘導体；マルトデキストリン、シクロデキストリンなどのデキストリン、及びそれらの誘導体；加工されたユーケウマ海草（Ｅｕｃｈｅｕｍａ ｓｅａｗｅｅｄ）、トチャカ（Ｉｒｉｓｈ ｍｏｓｓ）；及びそれらのいかなる組み合わせを含む。好ましい実施形態では、炭水化物、好ましくはスクロース又はマルトデキストリンが調製物Ａ中で使用される。
プレバイオティックは、代謝、及びＧＩ管の中の乳酸菌の増殖を促進し、腸の既存の微生物群を好ましい微生物群に変化させる。プレバイオティックの量は、調製物Ａ中、０．５〜５０重量％、好ましくは０．５〜２０重量％である。
調製物Ｂは、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
好ましい実施形態では、調製物Ｂは、１０〜６０重量％のビルベリーのベリーの粉末、１０〜６０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１０〜３０重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含む。好ましくは、調製物Ｂは、３０〜５０重量％のビルベリーのベリーの粉末、３０〜５０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１５〜２５重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含む。
所望により、組成物は、０．５〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％の緑茶粉末を含む。
ビルベリーのベリーの粉末の平均粒子サイズは、９０重量％が２ｍｍ未満であり、好ましくは９０重量％が１．５ｍｍ未満であり、特に好ましくは、９０重量％が１ｍｍ未満である。
クランベリーのベリーの粉末の平均粒子サイズは、９０重量％が２ｍｍ未満であり、好ましくは９０重量％が１．５ｍｍ未満であり、特に好ましくは、９０重量％が１ｍｍ未満である。
シーバックソーンのベリーの粉末の平均粒子サイズは、９０重量％が２ｍｍ未満であり、好ましくは９０重量％が１．５ｍｍ未満であり、特に好ましくは、９０重量％が１ｍｍ未満である。
ビルベリーは、ヴァクシニウム・ミルティラス Ｌ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ Ｌ．）、ヴァクシニラム・ウリジノサム Ｌ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ Ｌ．）、ヴァクシニラム・カエスピトサム Ｍｉｃｈｘ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｍ Ｍｉｃｈｘ．）、ヴァクシニラム・デリシオサム Ｐｉｐｅｒ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｄｅｌｉｃｉｏｓｕｍ Ｐｉｐｅｒ）、ヴァクシニラム・メンブラナセウム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｍ）、及びヴァクシニラム・オヴァリフォリウム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｖａｌｉｆｏｌｉｕｍ）からなる群の種から選択されることができる。好ましくは、北欧のビルベリー（ヴァクシニウム・ミルティラス）がその高いプロアントシアニジン含有量のために使用される。
クランベリーは、ヴァクシニウム・エリスロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒｏｃａｒｐｕｍ）、ヴァクシニウム・マクロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、ヴァクシニウム・ミクロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｉｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、及びヴァクシニウム・オキシコッコス（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）からなる群の種から選択されることができる。好ましくは、北欧のクランベリー（ヴァクシニウム・オキシコッコス）がその高いアントシアニン含有量のために使用される。
シーバックソーンは、ヒッポファエ・ゴニオカルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｇｏｎｉｏｃａｒｐａ）、ヒッポファエ・ジャイアントセンシス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｇｙａｎｔｓｅｎｓｉｓ）、ヒッポファセ・リタンゲンシス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｌｉｔａｎｇｅｎｓｉｓ）、ヒッポファエ・ニューロカルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｎｅｕｒｏｃａｒｐａ），ヒッポファエ・ラムノイデス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）、ヒッポファエ・サリシフォリア（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉａ）、及びヒッポファエ・チベターナ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｔｉｂｅｔａｎａ）からなる群の種から選択されることができる。好ましくは、普通のシーバックソーン（ヒッポファエ・ラムノイデス）がその高いプロアントシアニジン含有量、及びそこに含まれるフラボノイド及びカロチノイドのために使用される。
調製物Ｂは、２〜１５重量％、好ましくは３〜１０重量％、特に好ましくは３〜８重量％の没食子酸として規定されたポリフェノール化合物を含む。
調製物Ｂは、追加的に繊維を、通常は２０〜６０重量％の量で含む。
調製物Ｂのベリー粉末は、プレバイオティックとしても作用する。そのため、調製物Ａの中に追加のプレバイオティックを添加することは任意である。
調製物Ｂは、乾燥されたビルベリーのベリーから粉砕によって得られたビルベリーのベリーの粉末と、乾燥されたクランベリーのベリーから粉砕によって得られたクランベリーのベリーの粉末と、乾燥されたシーバックソーンのベリーから粉砕によって得られたシーバックソーンのベリーの粉末とを混合することによって得られる。
追加的に、組成物は、少なくとも一種の賦形剤（例えば、二酸化ケイ素、コロイド状の二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、タルク、ナトリウムアルミニウムシリケート、カリウムアルミニウムシリケート、カルシウムアルミニウムシリケート、ベントナイト、ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、香料、又は着色剤）を含むことができる。好ましい実施形態では、二酸化ケイ素が改良された流動性を与えるために使用される。通常、賦形剤は、組成物の乾燥重量の０〜５重量％、好ましくは０．１〜３重量％、特に好ましくは０．５〜２重量％の量で存在する。
理論にしばられることは望まないが、本発明の組成物の利点は、乳酸菌のイヌ特異的な菌株と、カルシウムと、特定のベリーの粉末の特定の組み合わせに由来すると考えられる。ラクトバシラス属は、安全であり、腸にコロニー形成することができることが示されており、従って、長い洗い流し期間を有し、治療対象の患者の腸に既に存在する有益な細菌のコロニー形成に寄与することが示されている。高いＣａ含有量は、たぶん腸の上皮の間質に影響を与えることによって管腔の安定性に正の効果を生み出し、身体から腸への体液の漏出を減少させる。特定の選択されたベリーの粉末は、イヌの尿管への有害な細菌の付着を阻害して防止することに対して正の効果を有する。ベリー粉末に含まれる繊維は、健康に有益な腸内細菌群と共に、炎症性腸疾患、胃潰瘍、結腸ガンなどを防止するなどの胃腸の健康に対して影響を与えることがまた証明されている。ベリー粉末は、組成物中でプレバイオティックとして作用し、乳酸菌が摂取された後に腸にコロニー形成する能力にも寄与する。それらは、選択された腸内細菌群を変化させ、発酵によって尿管の細菌群も変化させ、有害な細菌を減少又は破壊させ、従ってプロバイオティックの効果を確実にする。それらはまた、カルシウム吸収の促進剤としても作用し、大便からの過剰の液体と結合する。
組成物の製造方法
本発明の組成物は、調製物Ａと、調製物Ｂと、任意選択的な成分とを組み合わせることによって製造されることができる。
前記方法は、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌のイヌ特異的な少なくとも二種の菌株を別々に又は一緒に培養して、得られた培養物を凍結乾燥し、得られた培養物と、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量で存在するカルシウム源と、所望により追加の乳酸菌のイヌ特異的な菌株とを加工して、均質な調製物Ａとすることによって、調製物Ａを製造する工程、及び
４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを混合して、組成物を得る工程
を含み、前記調製物Ｂは、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
好ましくは、１０〜６０重量％のビルベリーのベリーの粉末、１０〜６０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１０〜３０重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含む調製物Ｂが使用される。
所望により、追加的に０．５〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％の緑茶粉末が組成物中に混合される。
一つの実施形態では、前記方法は、イヌの糞便、イヌの腸又は腸液から単離される乳酸生成細菌の少なくとも二種の菌株であって、ラクトバシラス・フェルメンタムＮＣＩＭＢ ４１６３６、ラクトバシラス・プランタルムＮＣＩＭＢ ４１６３８、及びラクトバシラス・ラムノサスＮＣＩＭＢ ４１６４０からなる群から選択される菌株を別々に又は一緒に培養して、得られた培養物を凍結乾燥し、得られた培養物と、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量で存在するカルシウム源と、所望により追加の乳酸菌のイヌ特異的な菌株とを加工して、均質な調製物Ａとすることによって、調製物Ａを製造する工程、及び
４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを混合して、組成物を得る工程
を含み、前記調製物Ｂは、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含む。
前記方法は、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌のイヌ特異的な少なくとも二種の菌株を別々に又は一緒に培養して、得られた培養物を凍結乾燥し、得られた培養物と、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量で存在するカルシウム源とを、好適には混合によって加工して、均質な調製物Ａとすることによって、調製物Ａを製造する工程、及び４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを混合して、組成物を得る工程を含み、前記調製物Ｂは、１０〜６０重量％のビルベリーのベリーの粉末、１０〜６０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１０〜３０重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含む。
乳酸菌の菌株、カルシウム源及びそれらの量、ビルベリーのベリーの粉末、クランベリーのベリーの粉末、及びシーバックソーンのベリーの粉末、及びそれらの量は、上述のようにして選択される。
調製物Ｂは、乾燥されたビルベリーのベリー、アロニア属の植物のベリー、クロスグリのベリー、クロマメノキのベリー、ガンコウランのベリー、及びこれらの組み合わせから粉砕によって得られたベリーの粉末と、乾燥されたクランベリーのベリー、赤ブドウのベリーの、コケモモのベリー、ラズベリーのベリー、及びこれらの組み合わせから粉砕によって得られたベリーの粉末と、乾燥されたシーバックソーンのベリー、ザイフリボクのベリー、クラウドベリーのベリー、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリー、ナナカマド属の植物のベリー、及びこれらの組み合わせから粉砕によって得られたベリーの粉末とを混合することによって得られる。乾燥されたベリーは、新鮮なベリーから凍結乾燥などのいかなる好適な方法を使用して乾燥させることによって得られることができる。好適には、乾燥されたベリーは、９０重量％が２ｍｍ未満であり、好ましくは９０重量％が１．５ｍｍ未満であり、特に好ましくは、９０重量％が１ｍｍ未満である平均粒子サイズに粉砕される。乾燥されたベリーの粉砕は、微細粉末製品を与えることができるいかなる好適な粉砕装置を使用しても行なわれることができる。
調製物Ａの製造において、乳酸菌のイヌ特異的な菌株は、別々に又は一緒に、少なくとも炭素源及び窒素原を含む液体培地中で培養される。好適な炭素源の例は、グルコース、デキストロース、及びホエイであるが、これらに限定されない。これらは、単独で又は組み合わせて使用されることができる。好適な窒素源の例は、ダイズ粉、ペプトン、カゼインの加水分解物、肉抽出物、及び酵母抽出物、乾燥酵母、非特異的なタンパク質含有源（例えば、ファーマメディア（ｆａｒｍａｍｅｄｉａ））であるが、これらに限定されない。これらは、単独で又は組み合わせて使用されることができる。乳酸菌のイヌ特異的な菌株は、酸素の制限された存在下で、攪拌なしで又はおだやかな攪拌ありで、最大細胞密度に到達するまで培養される。それよりさらに培養を継続しても、細胞死の増大をもたらすだけである。培地のｐＨは、３．５〜７、好ましくは４〜６である。温度は２５℃〜３７℃、好ましくは３０℃±２℃であることができる。このようにして、少なくとも１×１０９ｃｆｕ／ｍｌの細胞密度が得られることができる。
培養された細胞は、遠心分離、濾過、又はデカンテーションを含むがこれらに限定されないいかなる方法によっても培地から分離される。発酵培地から分離された細胞は、所望により水、生理的食塩水（０．９％ ＮａＣｌ）又はいかなる好適な緩衝液によって洗浄される。得られた湿潤状態の細胞塊は、凍結乾燥によって乾燥される。水吸収を促進するため、プロバイオティックの安定性を改善しつつ乾燥において有用ないくつかの薬剤がある。それらの例は、スクロース、マルトデキストリン、デンプン、又は他の炭水化物であるが、これらに限定されない。
いくつかの補助的な物質が、発酵において使用されることができる。それらは、発酵による乳酸菌の増殖を促進するために添加されることができ、その微量の存在は、最終的な組成物にとっても有利である。可能な物質の例は、一連の消泡剤（例えば、オイルベースの薬剤、シリコーンベースの材料、ストルクトール（ｓｔｒｕｃｔｏｌ）、及びポリプロピレン又はポリエチレングリコール）であるが、これらに限定されない。
得られた培養物及びカルシウム源を均質な調製物へと加工することは、以下の作業をいかなる順序で含むこともできる：凍結乾燥、遠心分離、濾過、乾燥、混合、混錬、押出し、造粒、圧縮、カプセル化、フィルムコーティング、及び制御された放出性の処方中への埋め込み又は封入。
ある実施形態では、少なくとも一種のプレバイオティックの第一の量が、乳酸菌のイヌ特異的な菌株の培養培地中に組み込まれ、得られた培養物は、所望により組み合わされて、洗浄され、凍結乾燥される。それらは続いてカルシウム源、及び所望により少なくとも一種のプレバイオティックの第二の量と混合される。表現「第一の量」は、プレバイオティックの全量のうちの０〜１００重量％の範囲のいかなる部分をも意味する。「第一の量」は通常、０．００１〜３０重量％であり、好ましくは調製物の乾燥重量の１５重量％までである。表現「第二の量」は、前記第一の量として組み込まれなかったプレバイオティックの全量の残りの部分を意味する。プレバイオティックの第一の量を既に培養培地に組み込むことによって、その部分的に発酵された残渣は、選択された加工ステップに依存して調製物Ａの中に残り、従って菌株のコロニー形成を促進する容易に利用可能な材料を与える。
所望により、少なくとも一種の賦形剤が調製物Ａ及び調製物Ｂと混合される。賦形剤は、二酸化ケイ素、コロイド状の二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、タルク、ナトリウムアルミニウムシリケート、カリウムアルミニウムシリケート、カルシウムアルミニウムシリケート、ベントナイト、ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、香料、及び着色剤からなる群から選択される。少なくとも一種の賦形剤が調製物Ａ及び調製物Ｂの混合物に添加される。好ましい実施形態では、二酸化ケイ素が改良された流動性を与えるために使用される。通常、賦形剤は、組成物の乾燥重量の０〜５重量％、好ましくは０．１〜３重量％、特に好ましくは０．５〜２重量％の量で存在する。
本発明の方法は、組成物を、粉末、顆粒、丸薬、錠剤、カプセル、トローチ剤、水又は他の好適な担体による再構築のための乾燥製品、水性又は油性の溶液又は懸濁液、ゲル、ペースト、エマルション、又はシロップの形態の経口処方中に処方する工程をさらに含むことができる。処方することは、従来技術によって行なうことができ、例えば好適な公知の結合剤、希釈剤、錠剤化剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤、懸濁剤、乳化剤、非水性キャリア、保存剤、香料又は染料を賦形剤及びキャリアとして使用して、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ及びＰｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＷｉｌｋｉｎｓ Ｅｄ．，Ｄｅｃ．２０００に記載されているようにして行なうことができる。
ある実施形態では、組成物は、当該技術分野では周知の方法（混合、発酵など）を使用して、ドッグフード、特別なドッグフード製品、新鮮な食品、ソーセージ、冷凍食品、乾燥食品ペレット、粗びきの穀物（ｋｉｂｂｌｅｓ）、厚切り（ｃｈｕｎｋｓ）、缶詰め食品、シチュー、プレミックス、風味ソース、ビスケット、チューイングスナック、トリーツ（ｔｒｅａｔｓ）、子イヌ用ミルクの代替品、及び発酵製品からなる群から選択されるイヌ用の可食性製品の中に、従来の成分と共に処方されることができる。
本発明の組成物は、以下の例示的な範囲内の一日摂取量を与えるような用量で使用されることができる。
各プロバイオティック菌株：２×１０６〜２×１０１０ｃｆｕ／ｋｇ／日、好ましくは１×１０８〜５×１０８ｃｆｕ／ｋｇ／日。
カルシウム：４０〜１９８ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは８０〜１９０ｍｇ／ｋｇ／日（炭酸カルシウムとして表して）。
プレバイオティック：１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１〜４０ｍｇ／ｋｇ／日。
本発明の組成物は、１５ｋｇ未満の体重を有するイヌ（＜１５ｋｇのイヌの範囲、通常は小型犬品種）に対して、＜１５ｋｇのイヌ当たり０．５〜８ｇ、好ましくは４〜６ｇの一日用量として投与されることが好適である。前記用量は、調製物Ｂ（ベリーの粉末の混合物）の０．１５〜２．４ｇ、好ましくは１．２〜１．８ｇをそれぞれ与える。
本発明の組成物は、１５〜３０ｋｇの範囲の体重を有するイヌ（１５〜３０ｋｇのイヌの範囲、通常は中型犬品種）に対して、１５〜３０ｋｇのイヌ当たり８〜１５ｇ、好ましくは１２〜１４ｇの一日用量として投与されることが好適である。前記用量は、調製物Ｂ（ベリーの粉末の混合物）の２．４〜４．５ｇ、好ましくは３．６〜４．２ｇをそれぞれ与える。
本発明の組成物は、３０ｋｇより重い体重を有するイヌ（＞３０ｋｇのイヌの範囲、通常は大型犬品種）に対して、＞３０ｋｇのイヌ当たり１５〜３０ｇ、好ましくは１５〜２５ｇの一日用量として投与されることが好適である。前記用量は、調製物Ｂ（ベリーの粉末の混合物）の４．５〜９ｇ、好ましくは４．５〜７．５ｇをそれぞれ与える。
所望により、追加の乳酸菌のイヌ特異的な菌株、従来の賦形剤、及びキャリアが組成物中で使用されることができる。
本発明の組成物中の乳酸菌は、イヌに由来しており、しかも公知のベリーの粉末及び食品／飼料として許容可能なカルシウム源のみが組成物中で使用されているので、副作用は予測されない。通常、本発明の組成物は、５〜１０日間摂取される。しかし、イヌは、より長い期間（例えば３０日間）の摂取から利益を受けることができる。
その安全性のため、本発明の組成物は、慢性の胃腸及び／又は尿管疾患を治療する場合に特に有用である。慢性疾患では、プロバイオティック調製物は、実質的に長い期間、例えば数ヶ月にわたって連続的に、又は間欠的に投与されることができる。
好ましくは、本発明の組成物は、イヌの体重に基づいてイヌのために必要な量で、例えば計量スプーンを使用して容易に処方されることができる。好ましい形態の例は、乾燥粉末及び顆粒を含む。
本発明の組成物は、すぐに使用できるイヌ用の食品（例えば、新鮮なドッグフード、犬用ソーセージ、冷凍ドッグフード、缶詰めのドッグフード、乾燥食品ペレット、粗びきの穀物、厚切り、シチュー、トリーツ、又はプレミックス）中に組み込まれることもできる。この場合、イヌ用の食品中の調製物の量は、一回分の食事、又はその一部、又は食事の全てが、本発明の組成物を含むイヌ用の食品によって置換されるように調節される。
本発明の組成物は、別個の包装（例えば小袋）中に与えられることもできる。この別個の包装は、イヌ用の食品の包装に取り付けられて、摂取前にイヌ用の食品と混合される。本発明の組成物はまた、イヌ用の特別な製品（例えば、風味ソース、ビスケット、チューイングスナック、トリーツ、子イヌ用ミルクの代替品、カプセル、又は発酵製品）の中に組み込まれることもできる。
発酵製品の場合、製品は、水又はミルク、香料、発酵のための技術的な細菌菌株、顆粒、及び凝乳、サワーミルク、ヨーグルト、及び他の発酵製品中で使用される他の従来の成分を含むことができる。
子イヌ用ミルクの代替品の場合、本発明の組成物は、従来の子イヌ用ミルクの代替品の中にすぐに使用できる製品として組み込まれるか、又は本発明の組成物は、別個に、例えば小袋中に与えられて、使用する直前に子イヌ用ミルクの代替品と混合されるか、又は本発明の組成物は、乾燥された粉末の子イヌ用ミルクの代替品のプレミックス中に組み込まれて、使用前に水、ミルク、又は他の好適な液体で回復されることができる。
カプセルの場合、本発明の組成物は、例えば粉末又は懸濁液の形態で、従来のハード又はソフトカプセル（例えばゼラチンカプセル）中に充填されることができる。
イヌ用の風味ソース、ビスケット、チューイングスナック、又はトリーツの場合、本発明の組成物は、例えば混合又はコーティングによって、すぐに使用できる製品として、風味ソース、ビスケット、チューイングスナック、又はトリーツの中に組み込まれることができる。
本発明の組成物は、様々なイヌの胃腸疾患及び尿管感染を予防及び治療するために有用であり、特にイヌの胃腸及び尿管の微生物群を健康で安定な微生物群へと調節するために有用である。カルシウムとポリフェノールの組み合わせは、漏出腸症候群及び病原菌の付着を阻害する。カルシウムは、腸内の堅固な結合を増強し、腸からの細菌の漏出を阻害する。ポリフェノールは、細菌の付着を防止する。健康を促進する乳酸菌（ＬＡＢ）は、腸の微生物群を調節して、内在性ＬＡＢが増殖することを可能にする。
ある実施形態では、本発明の組成物は、イヌの胃腸疾患を予防及び治療するために使用される。
ある実施形態では、本発明の組成物は、イヌの尿管疾患を予防及び治療するために使用される。
本発明の組成物は、小腸及び尿管に関連する疾患を治療するのに特に有用である。かかる疾患の例は、ウイルス及び細菌感染、抗生物質応答性の腸疾患（ＡＲＥ）、刺激性腸症候群（ＩＢＳ）、及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。それに加えて、プロバイオティックＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓは、ＧＩ管中の病原体を片付けることが示されている。そのため、家族中での無症状の病原体キャリアとしてペットのイヌが作用する危険性が減少される。家族のメンバー（例えば小さな子供）は、ペットから病原体の感染を受けることがあることがよく知られている。本発明の組成物を使用してイヌにおける病原体を減少させることによって、この危険性が減少されることができる。
本発明の組成物は、他の治療に応答しない胃腸疾患を治療するのに特に有用である。
本発明の組成物は、未知のもしくは複数の原因によって生じる胃腸疾患、又は変化するもしくは複合的な徴候を有する胃腸疾患を治療するためにも有用である。それは、単独で、又は薬物療法と同時に、ある種の抗生物質と共に使用されることができる。本発明のプロバイオティック調製物を、胃腸の問題を生じることが知られている薬物療法と同時に使用することは、特に有益である。
好ましい実施形態の他の例は、ストレスの多い状況（例えば、交配シーズン、交尾、妊娠、分娩、授乳、乳離れ、及び新生児と母親の別離）の前及び最中における使用である。妊娠したメスは、特に免疫系の増強、ストレスに関連する徴候の予防、及び分娩後の感染の予防において、本発明の組成物から利益を得るだろう。
新生児及び子イヌは、本発明の組成物から特にＧＩ管における天然の微生物相互作用の増強、免疫系の増強、アレルギーの抑制、及び餌を固形食品に変更したときの子イヌの下痢の回避を通して利益を得るだろう。
成体のイヌは、本発明の組成物から、特に抗生物質に関連する下痢などの胃腸状態の治療及び予防、アレルギーの予防、耳、皮膚、生殖器、及び尿管の感染などの感染症の予防、口腔及び歯科衛生の維持、及びストレスに関連する徴候の予防を通して利益を得るだろう。
老齢のイヌは、本発明の組成物から特にＧＩ管における天然の微生物相互作用の増強、免疫系の増強、及び疾患に対する抵抗性の維持、ストレスに関連する徴候の予防、及び耳、皮膚、生殖器、及び尿管の感染などの感染症の予防を通して利益を得るだろう。
本発明の健康に有益な組成物はまた、自動車や電車や飛行機で旅行するとき、引越しのとき、食餌を変更するとき、動物病院を訪問するとき、及び外科手術のために入院する前／入院中、及び狩猟及びコンテストのとき、並びに暖かくて湿気のある季節、又は水泳をするイヌにとって、胃腸疾患を予防するためにも有用であることが見出されている。本発明の健康に有益な組成物は、過酷なトレーニング、コンテスト、及び休養期間中のイヌのＧＩ管の健康バランスを維持する。
本発明の組成物の使用から利益を得ることができる一次及び二次疾患の非限定的な例は、炎症性疾患、免疫不全、炎症性腸疾患、刺激性腸症候群、ガン（特に、胃腸及び免疫系のガン）、下痢を含む疾患、抗生物質に関連する下痢、虫垂炎、自己免疫疾患、多発性硬化症、アルツハイマー病、アミロイド症、関節リウマチ、リウマチ、関節の可動性、糖尿病、インスリン抵抗性、細菌、ウイルス及び真菌感染、歯周病、口腔の疾患、尿生殖器疾患、手術に関連する外傷、手術によって誘発される転移性の疾患、敗血症、体重減少、体重増加、過剰の脂肪組織の蓄積、食欲不振、発熱の制御、カヘキシー、傷の治癒、潰瘍、腸バリア感染、アレルギー、喘息、呼吸器疾患、循環器疾患、冠状心臓疾患、貧血、血液凝固系の疾患、腎臓の疾患、中枢神経系の疾患、肝臓の疾患、虚血、栄養障害、骨粗しょう症、内分泌腺の疾患、上皮の疾患、及びフルンケル症を含む。好ましいものは、胃腸管及び／又は尿管の治療であり、これは、下痢の治療又は予防、免疫系の制御（好ましくは、自己免疫疾患及び炎症の治療又は予防）、皮膚及び／又は外被系の健康の維持又は改善（好ましくは、皮膚のアトピー疾患の治療又は予防）、爪の健康の維持及び改善、老化の影響（精神の認識力及び活動レベルを含む）の緩和又は低減、及び感染中及び感染後の体重減少の予防を含む。
実施例１：組成物の製造
乳酸菌菌株の選択
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓは、Ｂｅａｓｌｅｙら、２００６年に記載されたようにして、健康なイヌの糞便から単離された。これらの菌株は、この論文ではそれぞれＬＡＢ８（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ），ＬＡＢ９（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ、以前はＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓとして同定されていた）及びＬＡＢ１１（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）として言及されている。ここでは、これらの菌株は、それらの受託番号ＮＣＩＭＢ ４１６３６，ＮＣＩＭＢ ４１６３８及びＮＣＩＭ ４１６４０によって言及される。これらの細菌は、低ｐＨ（ｐＨ１）で生存することができることが証明されており、イヌの空腸からの収集後に培養されることができる（Ｂｅａｓｌｅｙら ２００６；Ｍａｎｎｉｎｅｎら，２００６）。これらの菌株は、既に存在する腸の微生物群を変化させ、既に存在する宿主特異的な乳酸菌の生存を促進する。抗微生物活性と関連する腸の改変は、これらの菌株のプロバイオティックとしての性質を増強する。この特徴のため、これらの菌株は、セファロスポリンなどの抗生物質と同時に、抗生物質によって誘発される下痢を低減するために与えられることができる。
調製物Ａ
培養条件
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３６，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３８及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＮＣＩＭＢ ４１６４０は、新しく調製された寒天プレート培養物又は凍結された培養物のストックから、２０％のグリセロールを添加したＭＲＳ（Ｄｅ Ｍａｎ，Ｒｏｇｏｓａ ＆ Ｓｈａｒｐｅ）培地に別々に接種された。この培地は、１０ｇ／ｌのペプトン（Ｂａｃｔｏ Ｐｅｐｔｏｎｅ，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、８ｇ／ｌの肉抽出物（Ｏｒｇａｎｏｔｅｃｈｎｉｅ）、４ｇ／ｌの酵母抽出物（ＤＳＭ Ｆｏｏｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ）、２０ｇ／ｌのデキストロース、２．６ｇ／ｌのＫ２ＨＰＯ４×３Ｈ２Ｏ、５ｇ／ｌのＣＨ３ＣＯＯＮａ×３Ｈ２Ｏ、２ｇ／ｌのクエン酸トリアンモニウム、０．２ｇ／ｌのＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、及び０．０４ｇ／ｌのＭｎＳＯ４×１Ｈ２Ｏを含む。培養は、１６〜１８時間、３０℃で、攪拌なしで継続された。
得られた培養培地は、１％の移転率で５００Ｌの発酵培地に播種するために使用された。製造培地は、以下の表１に示される。
Figure 2021512855
消泡剤として、シリコーンベースの薬剤が使用された。発酵は、３０℃で通気なしで、かつ最小限の攪拌ありで１日間実行された。１０のＯＤ６００値（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３６，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３８及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＮＣＩＭＢ ４１６４０のそれぞれについて６．０×１０９、４．０×１０９及び４．０×１０９ｃｆｕ／ｍｌに相当する）に到達した後、細胞は、分離器（Ｓｅｉｔａｌ ＳＥ １２ Ｘ）によって回収された。５００Ｌの発酵培養から得られたそれぞれのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ菌株の湿潤している細胞塊は、マルトデキストリンを添加された水で洗浄され、３日間凍結乾燥された（Ｈｅｔｏｓｉｃｃ Ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｅｒ ＣＤ １５−１）。ｃｆｕ／ｍｇの値を考慮すると、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３６，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３８及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＮＣＩＭＢ ４１６４０のそれぞれについての凍結乾燥後の収率は、９０．１％、４７．１％、及び４５．６％であった。洗浄後の発酵培地の残渣は、少量のダイズ粉（例えば１〜５ｇ／ｌ）を含んでいたが、他の残渣は、培養培地中の十分に可溶性の成分であるとして見出されなかった。
ＣａＣＯ３及びプレバイオティック（マルトデキストリン）が、凍結乾燥されたプロバイオティック（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３６，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＮＣＩＭＢ ４１６３８及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＮＣＩＭＢ ４１６４０）に添加されて、調製物Ａが得られた。
調製物Ｂ
調製物Ｂ（Ｒｅｆｉｎｉｅ（登録商標））は、４０重量％のビルベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）のベリーの粉末、４０重量％のクランベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）のベリーの粉末、及び２０重量％のシーバックソーン（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）のベリーの粉末を混合することによって得られた。調製物Ｂは、４．１〜４．４重量％のポリフェノール化合物を含有していた。調製物Ａ、調製物Ｂ、及びＳｉＯ２が混合されて、組成物が得られた。組成物１〜３の例を、以下の表２に示す。
Figure 2021512855
実施例２：＋６℃の温度での組成物に対する安定性試験
以下の表３には、凍結乾燥されたＬＡＢ菌株混合物（サンプル１）の乳酸菌の安定性試験の結果、実施例１に開示された調製物Ａ（サンプル６）の乳酸菌の安定性試験の結果、凍結乾燥されたＬＡＢを含む、実施例１に開示された組成物１（サンプル５）の乳酸菌の安定性試験の結果、マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物（サンプル２）の乳酸菌の安定性試験の結果、実施例１に開示された調製物Ａであるが、マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物を含むもの（サンプル３）の乳酸菌の安定性試験の結果、及び実施例１に開示された組成物１であるが、マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物を含むもの（サンプル４）の乳酸菌の安定性試験の結果を示す。マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物は、凍結乾燥されていない、マイクロカプセル化された形態の乳酸菌を含む。試験は、＋６℃の温度で６ヶ月間、実行された。サンプル１〜５の結果は、図１でグラフとして表わされている。
Figure 2021512855
これらの結果から、調製物Ｂは、本発明の組成物における凍結乾燥された乳酸菌の安定性を＋６℃で有意に増大させたこと、及び安定性のこの増大は、マイクロカプセル化されたＬＡＢを含む組成物よりも有利に良好であったことがわかる。
実施例３：ＲＴでの組成物に対する安定性試験
以下の表４には、凍結乾燥されたＬＡＢ菌株混合物（サンプル１）の乳酸菌の安定性試験の結果、実施例１に開示された調製物Ａ（サンプル６）の乳酸菌の安定性試験の結果、凍結乾燥されたＬＡＢを含む、実施例１に開示された組成物１（サンプル５）の乳酸菌の安定性試験の結果、マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物（サンプル２）の乳酸菌の安定性試験の結果、実施例１に開示された調製物Ａであるが、マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物を含むもの（サンプル３）の乳酸菌の安定性試験の結果、及び実施例１に開示された組成物１であるが、マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物を含むもの（サンプル４）の乳酸菌の安定性試験の結果を示す。マイクロカプセル化されたＬＡＢ菌株の混合物は、凍結乾燥されていない、マイクロカプセル化された形態の乳酸菌を含む。試験は、ＲＴ（２０＋１℃）の温度で６ヶ月間、実行された。サンプル１〜５の結果は、図２でグラフとして表わされている。
Figure 2021512855
これらの結果から、調製物Ｂは、本発明の組成物における凍結乾燥された乳酸菌の安定性をＲＴで有意に増大させたこと、及び安定性のこの増大は、マイクロカプセル化されたＬＡＢを含む組成物よりも有利に良好であったことがわかる。

Claims (29)

  1. ４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを含む組成物であって、前記調製物Ａが、凍結乾燥された乳酸菌のイヌ特異的な菌株と少なくとも一種のカルシウム源を含み、前記菌株のうちの少なくとも二種が、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属し、前記カルシウム源が、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量であり、前記調製物Ｂが、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含むことを特徴とする組成物。
  2. 組成物が、４５〜７５重量％の調製物Ａと２５〜５５重量％の調製物Ｂを含むことを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
  3. 組成物が、５０〜７０重量％の調製物Ａと３０〜５０重量％の調製物Ｂを含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
  4. 調製物Ｂが、１０〜６０重量％のビルベリーのベリーの粉末、１０〜６０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１０〜３０重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
  5. 組成物が、０．５〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％の緑茶粉末を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
  6. 乳酸菌のイヌ特異的な菌株のそれぞれの量が、１×１０７〜１×１０１０ｃｆｕ／ｇであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
  7. 乳酸菌のイヌ特異的な菌株のそれぞれの量が、５×１０８〜２．５×１０９ｃｆｕ／ｇであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
  8. カルシウム源の量が、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の４０〜９５重量％であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
  9. 組成物が、組成物の乾燥重量の０．５〜５０重量％、好ましくは０．５〜２０重量％の量でプレバイオティックを含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
  10. 組成物が、ラクトバシラス・フェルメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバシラス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシラス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバシラス・サリヴァリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、及びラクトバシラス・ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ）からなる群から選択される、ラクトバシラス属に属する乳酸菌のイヌ特異的な菌株を２種〜５種含むことを特徴とする、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
  11. 前記ラクトバシラス属に属する乳酸菌のイヌ特異的な菌株が、ラクトバシラス・フェルメンタムＮＣＩＭＢ ４１６３６及びラクトバシラス・プランタルムＮＣＩＭＢ ４１６３８であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
  12. 前記ラクトバシラス属に属する乳酸菌のイヌ特異的な菌株が、ラクトバシラス・フェルメンタムＮＣＩＭＢ ４１６３６、ラクトバシラス・プランタルムＮＣＩＭＢ ４１６３８、及びラクトバシラス・ラムノサスＮＣＩＭＢ ４１６４０であることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物。
  13. カルシウム源が、炭酸カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、アルギン酸カルシウム、カルシウムステアロイル−２−ラクチレート、ソルビン酸カルシウム、ギ酸カルシウム、酢酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、乳酸カルシウム、クエン酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、合成ケイ酸カルシウム、カルシウムテトラヒドロゲン−ジオルトホスフェート、カルシウムヒドロゲン−オルトホスフェート、水酸化カルシウム、酸化カルシウム、二リン酸ジカルシウム、グルコン酸カルシウム、亜硫酸カルシウム、カルシウムヒドロゲンスルファイト、カルシウムアルミニウムシリケート、ジグルコン酸カルシウム、グアニル酸カルシウム、イノシン酸カルシウム、カルシウム−５′−リボヌクレオチド、マレイン酸カルシウム、酒石酸カルシウム、カルシウムジナトリウムＥＤＴＡ、モノ及びジ−カルシウムジホスフェート、（ナトリウム）カルシウムポリホスフェート、塩化カルシウム、フェロシアンカルシウム、オルトリン酸カルシウム、又はこれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
  14. ビルベリーが、ヴァクシニウム・ミルティラス Ｌ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ Ｌ．）、ヴァクシニラム・ウリジノサム Ｌ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ Ｌ．）、ヴァクシニラム・カエスピトサム Ｍｉｃｈｘ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｍ Ｍｉｃｈｘ．）、ヴァクシニラム・デリシオサム Ｐｉｐｅｒ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｄｅｌｉｃｉｏｓｕｍ Ｐｉｐｅｒ）、ヴァクシニラム・メンブラナセウム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｍ）、及びヴァクシニラム・オヴァリフォリウム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｖａｌｉｆｏｌｉｕｍ）からなる群の種から選択され、好ましくはヴァクシニウム・ミルティラスが使用されていることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
  15. クランベリーが、ヴァクシニウム・エリスロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒｏｃａｒｐｕｍ）、ヴァクシニウム・マクロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、ヴァクシニウム・ミクロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｉｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、及びヴァクシニウム・オキシコッコス（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）からなる群の種から選択され、好ましくは、ヴァクシニウム・オキシコッコスが使用されていることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
  16. シーバックソーンが、ヒッポファエ・ゴニオカルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｇｏｎｉｏｃａｒｐａ）、ヒッポファエ・ジャイアントセンシス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｇｙａｎｔｓｅｎｓｉｓ）、ヒッポファセ・リタンゲンシス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｌｉｔａｎｇｅｎｓｉｓ）、ヒッポファエ・ニューロカルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｎｅｕｒｏｃａｒｐａ），ヒッポファエ・ラムノイデス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）、ヒッポファエ・サリシフォリア（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉａ）、及びヒッポファエ・チベターナ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｔｉｂｅｔａｎａ）からなる群の種から選択され、好ましくはヒッポファエ・ラムノイデスが使用されていることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
  17. 前記少なくとも一種のプレバイオティックが、ダイズ粉；オオバコ種子、イナゴマメのさや、アラビアゴム、グアーゴム、カワラケツメイ属の植物、タマリンドの仁、カラヤゴム、トラガカントゴム、キサンタンゴム、ゲランゴム、タラゴム；ベータグルカン、及びその加水分解物；エンバクのオリゴ糖；タガロースなどの単糖、及びその誘導体；ラクトース、ラクツロース、トレハロース、メリビオース、セロビオース、ラフィノース、スタチオース、イソマルトース、イソマルツロースなどの二糖、及びそれらの誘導体；フラクトオリゴ糖、グルコオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ゲンチィオオリゴ糖、マルトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キトオリゴ糖、マンノオリゴ糖、及びそれらの誘導体；アラビノガラクタン、ガラクトマンナン、ペクチン、リグニン、ダイズのヘミセルロース、キシラン、プルラン、イヌリン、クズウコン、カンゾウの根、テンサイのパルプ、タピオカ、トウモロコシ、オオムギ、エンバクの抵抗性デンプンなどの多糖及びオリゴ糖、及びそれらの誘導体；マルトデキストリン、シクロデキストリンなどのデキストリン、及びそれらの誘導体；加工されたユーケウマ海草、トチャカ；及びそれらのいかなる組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
  18. 組成物が、少なくとも一種の賦形剤（好ましくは、二酸化ケイ素、コロイド状の二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、タルク、ナトリウムアルミニウムシリケート、カリウムアルミニウムシリケート、カルシウムアルミニウムシリケート、ベントナイト、ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム）、香料、又は着色剤を含むことを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
  19. 組成物が、乾燥粉末、顆粒、丸薬、錠剤、カプセル、トローチ剤、水又は他の好適な担体による再構築のための乾燥製品、水性又は油性の溶液又は懸濁液、ゲル、ペースト、エマルション、又はシロップの形態であることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
  20. イヌ用の可食性製品であって、前記製品が、請求項１〜１９のいずれかの組成物を含み、かつドッグフード、特別なドッグフード製品、新鮮な食品、ソーセージ、冷凍食品、乾燥食品ペレット、粗びきの穀物、厚切り、缶詰め食品、シチュー、プレミックス、風味ソース、ビスケット、チューイングスナック、トリーツ、子イヌ用ミルクの代替品、又は発酵製品の中に処方されることを特徴とする可食性製品。
  21. 請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、前記方法が、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌のイヌ特異的な少なくとも二種の菌株を別々に又は一緒に培養して、得られた培養物を凍結乾燥し、得られた培養物と、ＣａＣＯ３として表わすと調製物Ａの乾燥重量の２０〜９９重量％の量で存在するカルシウム源と、所望により追加の乳酸菌のイヌ特異的な菌株とを加工して、均質な調製物Ａとすることによって、調製物Ａを製造する工程、及び
    ４０〜８０重量％の調製物Ａと２０〜６０重量％の調製物Ｂを混合して、組成物を得る工程
    を含み、前記調製物Ｂが、ビルベリーのベリーの粉末、アロニア属の植物のベリーの粉末、クロスグリのベリーの粉末、クロマメノキのベリーの粉末、ガンコウランのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、クランベリーのベリーの粉末、赤ブドウのベリーの粉末、コケモモのベリーの粉末、ラズベリーのベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜６０重量％、シーバックソーンのベリーの粉末、ザイフリボクのベリーの粉末、クラウドベリーのベリーの粉末、ホッキョクキイチゴ（ａｒｃｔｉｃ ｂｒａｍｂｌｅ）のベリーの粉末、ナナカマド属の植物のベリーの粉末、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるベリー粉末を１０〜３０重量％含むことを特徴とする方法。
  22. 調製物Ｂが、１０〜６０重量％のビルベリーのベリーの粉末、１０〜６０重量％のクランベリーのベリーの粉末、及び１０〜３０重量％のシーバックソーンのベリーの粉末を含むことを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
  23. ０．５〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％の緑茶粉末が組成物中に混合されることを特徴とする、請求項２１又は２２に記載の方法。
  24. 調製物Ａと調製物Ｂが、少なくとも一種の賦形剤（好ましくは、二酸化ケイ素、コロイド状の二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、タルク、ナトリウムアルミニウムシリケート、カリウムアルミニウムシリケート、カルシウムアルミニウムシリケート、ベントナイト、ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム）、香料、又は着色剤と混合されることを特徴とする、請求項２１〜２３のいずれかに記載の方法。
  25. ビルベリーが、ヴァクシニウム・ミルティラス Ｌ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ Ｌ．）、ヴァクシニラム・ウリジノサム Ｌ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ Ｌ．）、ヴァクシニラム・カエスピトサム Ｍｉｃｈｘ．（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｍ Ｍｉｃｈｘ．）、ヴァクシニラム・デリシオサム Ｐｉｐｅｒ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｄｅｌｉｃｉｏｓｕｍ Ｐｉｐｅｒ）、ヴァクシニラム・メンブラナセウム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｍ）、及びヴァクシニラム・オヴァリフォリウム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｖａｌｉｆｏｌｉｕｍ）からなる群の種から選択され、好ましくはヴァクシニウム・ミルティラスが使用されていることを特徴とする、請求項２１〜２４のいずれかに記載の方法。
  26. クランベリーが、ヴァクシニウム・エリスロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒｏｃａｒｐｕｍ）、ヴァクシニウム・マクロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、ヴァクシニウム・ミクロカルパム（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｉｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、及びヴァクシニウム・オキシコッコス（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）からなる群の種から選択され、好ましくは、ヴァクシニウム・オキシコッコスが使用されていることを特徴とする、請求項２１〜２５のいずれかに記載の方法。
  27. シーバックソーンが、ヒッポファエ・ゴニオカルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｇｏｎｉｏｃａｒｐａ）、ヒッポファエ・ジャイアントセンシス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｇｙａｎｔｓｅｎｓｉｓ）、ヒッポファセ・リタンゲンシス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｌｉｔａｎｇｅｎｓｉｓ）、ヒッポファエ・ニューロカルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｎｅｕｒｏｃａｒｐａ），ヒッポファエ・ラムノイデス（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）、ヒッポファエ・サリシフォリア（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉａ）、及びヒッポファエ・チベターナ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｔｉｂｅｔａｎａ）からなる群の種から選択され、好ましくはヒッポファエ・ラムノイデスが使用されていることを特徴とする、請求項２１〜２６のいずれかに記載の方法。
  28. 組成物を、粉末、顆粒、丸薬、錠剤、カプセル、トローチ剤、水又は他の好適な担体による再構築のための乾燥製品、水性又は油性の溶液又は懸濁液、ゲル、ペースト、エマルション、又はシロップの形態の経口処方中に、又はドッグフード、特別なドッグフード製品、新鮮な食品、ソーセージ、冷凍食品、乾燥食品ペレット、粗びきの穀物、厚切り、缶詰め食品、シチュー、プレミックス、風味ソース、ビスケット、チューイングスナック、トリーツ、子イヌ用ミルクの代替品、及び発酵製品からなる群から選択されるイヌ用の可食性製品の中に処方する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１〜２７のいずれかに記載の方法。
  29. イヌの胃腸及び尿管疾患を予防又は治療するための医薬製品又はドッグフード製品を製造するための、請求項１〜１９のいずれかに記載の健康促進組成物の使用。
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