JP2021505667A - ざ瘡およびバイオフィルムに対するバクテリオファージ処置 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体として本明細書に組み込まれている配列表を含む。前記ASCIIコピーは、2018年11月27日に作成され、000110−0001−WO1_SL.txtと称され、816,247バイトのサイズである。
本出願は、バクテリオファージ組成物およびその治療的使用に関する。特定の態様では、本開示は、Propionibacterium acnes(P.acnes)細菌株を溶解することが可能である溶解性バクテリオファージに関する。ある特定の実施形態では、溶解性バクテリオファージは、一般的に、ざ瘡(例えば、尋常性ざ瘡、集簇性ざ瘡、電撃性ざ瘡、化膿性汗腺炎(Hidradenitis suppurative)(反対型ざ瘡(acne inverse))、頭皮ざ瘡、滑膜炎、ざ瘡、膿疱症、骨化過剰症、および骨炎に関連するざ瘡(SAPHO)症候群、進行性黄斑メラニン減少症(Progressive Macular Hypomelanosis)に関連するざ瘡ならびに外傷後の致死性細菌性肉芽腫(Fatal Bacterial Granuloma after Trauma)に関連するざ瘡)に関連すると考えられるP.acnes細菌株を溶解し、それによって、疾患を処置または予防することが可能である。ある特定の実施形態では、溶解性バクテリオファージは、バイオフィルムに関連するP.acnes細菌株を溶解し、それによって、バイオフィルムを処置または予防することが可能である。
バクテリオファージは、自然界において微生物の集団を制御する細菌ウイルスである。これらは、自然淘汰に基づく天然構造体であるため、生物圏において通常見られ、したがって、環境に害を与えない(Golkar et al., 2014)。これらは、その細菌宿主に対して特異的であり、敏感な細菌が存在する感染部位において増殖する。さらに、これらは、ほとんど副作用または毒性作用なく、安全かつ耐用性に優れることが証明されている(Jonczyk-Matysiak, E, et al. (2017))。
本出願は、バクテリオファージ組成物およびその治療的使用を提供する。具体的な実施形態では、本出願は、1種または複数のP.acnesの株、または亜株、例えば、P.acnes B9株(本明細書では、「B9」)またはP.acnes PA4株(本明細書では「PA4」)、もしくはP.acnes PA3株(本明細書では「PA3」)、もしくはP.acnes PA5株(本明細書では「PA5」)を溶解することが可能である溶解性バクテリオファージを提供し、これらはそれぞれ、一般的に、ざ瘡に関連すると考えられる。本開示は、皮膚上のざ瘡を処置もしくは予防する、皮膚およびインプラント上のP.acnesのバイオフィルムの発生を予防する、またはインプラント関連P.acnes感染症を予防するための方法を提供する。本開示は、本明細書に示される方法による処置に対して応答性である患者および本明細書において提供される方法により処置される患者を選択する方法も提供する。
−9,およびPAP−12;PA1−12、PA1−9,およびPS7−1;PA1−12、PA2−13,およびPAP−12;PA1−12、PA2−13,およびPS7−1;PA1−12、PA2−7,およびPAP−12;PA1−12、PA2−7,およびPS7−1;PA1−12、PAP−1,およびPAP−12;PA1−12、PAP−1,およびPS7−1;PA1−12、PAP−12,およびPAP−13;PA1−12、PAP−12,およびPAP−14;PA1−12、PAP−12,およびPAP−4;PA1−12、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PAP−13,およびPS7−1;PA1−12、PAP−14,およびPS7−1;PA1−12、PAP−4,およびPS7−1;PA1−13、PA1−14,およびPA1−4;PA1−13、PA1−14,およびPA1−9;PA1−13、PA1−14,およびPA2−13;PA1−13、PA1−14,およびPAP−12;PA1−13、PA1−14,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4,およびPA1−9;PA1−13、PA1−4,およびPA2−13;PA1−13、PA1−4,およびPA2−7;PA1−13、PA1−4,およびPAP−1;PA1−13、PA1−4,およびPAP−12;PA1−13、PA1−4,およびPAP−13;PA1−13、PA1−4,およびPAP−14;PA1−13、PA1−4,およびPAP−4;PA1−13、PA1−4,およびPS7−1;PA1−13、PA1−9,およびPA2−13;PA1−13、PA1−9,およびPA2−7;PA1−13、PA1−9,およびPAP−1;PA1−13、PA1−9,およびPAP−12;PA1−13、PA1−9,およびPAP−13;PA1−13、PA1−9,およびPAP−14;PA1−13、PA1−9,およびPAP−4;PA1−13、PA1−9,およびPS7−1;PA1−13、PA2−13,およびPA2−7;PA1−13、PA2−13,およびPAP−1;PA1−13、PA2−13,およびPAP−12;PA1−13、PA2−13,およびPAP−13;PA1−13、PA2−13,およびPAP−14;PA1−13、PA2−13,およびPAP−4;PA1−13、PA2−13,およびPS7−1;PA1−13、PA2−7,およびPAP−12;PA1−13、PA2−7,およびPS7−1;PA1−13、PAP−1,およびPAP−12;PA1−13、PAP−1,およびPS7−1;PA1−13、PAP−12,およびPAP−13;PA1−13、PAP−12,およびPAP−14;PA1−13、PAP−12,およびPAP−4;PA1−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PAP−13,およびPS7−1;PA1−13、PAP−14,およびPS7−1;PA1−13、PAP−4,およびPS7−1;PA1−14、PA1−4,およびPA1−9;PA1−14、PA1−4,およびPA2−13;PA1−14、PA1−4,およびPAP−12;PA1−14、PA1−4,およびPS7−1;PA1−14、PA1−9,およびPAP−12;PA1−14、PA1−9,およびPS7−1;PA1−14、PA2−13,およびPAP−12;PA1−14、PA2−13,およびPS7−1;PA1−14、PAP−12,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9,およびPA2−13;PA1−4、PA1−9,およびPA2−7;PA1−4、PA1−9,およびPAP−1;PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;PA1−4、PA1−9,およびPAP−13;PA1−4、PA1−9,およびPAP−14;PA1−4、PA1−9,およびPAP−4;PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;PA1−4、PA2−13,およびPA2−7;PA1−4、PA2−13,およびPAP−1;PA1−4、PA2−13,およびPAP−12;PA1−4、PA2−13,およびPAP−13;PA1−4、PA2−13,およびPAP−14;PA1−4、PA2−13,およびPAP−4;PA1−4、PA2−13,およびPS7−1;PA1−4、PA2−7,およびPAP−12;PA1−4、PA2−7,およびPS7−1;PA1−4、PAP−1,およびPAP−12;PA1−4、PAP−1,およびPS7−1;PA1−4、PAP−12,およびPAP−13;PA1−4、PAP−12,およびPAP−14;PA1−4、PAP−12,およびPAP−4;PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−4、PAP−13,およびPS7−1;PA1−4、PAP−14,およびPS7−1;PA1−4、PAP−4,およびPS7−1;PA1−9、PA2−13,およびPAP−12;PA1−9、PA2−13,およびPS7−1;PA1−9、PA2−7,およびPAP−12;PA1−9、PA2−7,およびPS7−1;PA1−9、PAP−1,およびPAP−12;PA1−9、PAP−1,およびPS7−1;PA1−9、PAP−12,およびPAP−13;PA1−9、PAP−12,およびPAP−14;PA1−9、PAP−12,およびPAP−4;PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−9、PAP−13,およびPS7−1;PA1−9、PAP−14,およびPS7−1;PA1−9、PAP−4,およびPS7−1;PA2−13、PA2−7,およびPAP−12;PA2−13、PA2−7,およびPS7−1;PA2−13、PAP−1,およびPAP−12;PA2−13、PAP−1,およびPS7−1;PA2−13、PAP−12,およびPAP−13;PA2−13、PAP−12,およびPAP−14;PA2−13、PAP−12,およびPAP−4;PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA2−13、PAP−13,およびPS7−1;PA2−13、PAP−14,およびPS7−1;PA2−13、PAP−4,およびPS7−1;PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PAP−1、PAP−12,およびPS7−1;PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;またはPAP−12、PAP−4,およびPS7−1を含む。
びPAP−12;NS19−1、PA1−14、PA2−13,およびPAP−12;NS19−1、PA1−14、PAP−12,およびPS7−1;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPA2−13;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPA2−7;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPAP−13;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPAP−14;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPAP−4;NS19−1、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;NS19−1、PA1−4、PA2−13,およびPA2−7;NS19−1、PA1−4、PA2−13,およびPAP−12;NS19−1、PA1−4、PA2−13,およびPAP−13;NS19−1、PA1−4、PA2−13,およびPAP−14;NS19−1、PA1−4、PA2−13,およびPAP−4;NS19−1、PA1−4、PA2−7,およびPS7−1;NS19−1、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;NS19−1、PA1−4、PAP−13,およびPS7−1;NS19−1、PA1−4、PAP−14,およびPS7−1;NS19−1、PA1−4、PAP−4,およびPS7−1;NS19−1、PA1−9、PA2−13,およびPAP−12;NS19−1、PA1−9、PA2−7,およびPAP−12;NS19−1、PA1−9、PAP−12,およびPAP−13;NS19−1、PA1−9、PAP−12,およびPAP−14;NS19−1、PA1−9、PAP−12,およびPAP−4;NS19−1、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;NS19−1、PA2−13、PA2−7,およびPAP−12;NS19−1、PA2−13、PAP−12,およびPAP−13;NS19−1、PA2−13、PAP−12,およびPAP−14;NS19−1、PA2−13、PAP−12,およびPAP−4;NS19−1、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;NS19−1、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;NS19−1、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;NS19−1、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1;NS7−1、PA1−11、PA1−13,およびPA1−4;NS7−1、PA1−11、PA1−13,およびPAP−12;NS7−1、PA1−11、PA1−4,およびPAP−12;NS7−1、PA1−11、PA1−4,およびPS7−1;NS7−1、PA1−11、PAP−12,およびPS7−1;NS7−1、PA1−12、PA1−13,およびPA1−4;NS7−1、PA1−12、PA1−13,およびPAP−12;NS7−1、PA1−12、PA1−4,およびPAP−12;NS7−1、PA1−12、PA1−4,およびPS7−1;NS7−1、PA1−12、PAP−12,およびPS7−1;NS7−1、PA1−13、PA1−4,およびPA1−9;NS7−1、PA1−13、PA1−4,およびPA2−13;NS7−1、PA1−13、PA1−4,およびPAP−12;NS7−1、PA1−13、PA1−4,およびPS7−1;NS7−1、PA1−13、PA1−9,およびPAP−12;NS7−1、PA1−13、PA2−13,およびPAP−12;NS7−1、PA1−13、PAP−12,およびPS7−1;NS7−1、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;NS7−1、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;NS7−1、PA1−4、PA2−13,およびPAP−12;NS7−1、PA1−4、PA2−13,およびPS7−1;NS7−1、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;NS7−1、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;NS7−1、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−12、PA1−13,およびPA1−4;PA1−11、PA1−12、PA1−13,およびPAP−12;PA1−11、PA1−12、PA1−4,およびPAP−12;PA1−11、PA1−12、PA1−4,およびPS7−1;PA1−11、PA1−12、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−13、PA1−14,およびPA1−4;PA1−11、PA1−13、PA1−14,およびPAP−12;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPA1−9;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPA2−13;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPA2−7;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPAP−12;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPAP−13;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPAP−14;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPAP−4;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPS7−1;PA1−11、PA1−13、PA1−4,およびPS7−1;PA1−11、PA1−13、PA1−9,およびPAP−12;PA1−11、PA1−13、PA2−13,およびPAP−12;PA1−11、PA1−13、PA2−7,およびPAP−12;PA1−11、PA1−13、PAP−12,およびPAP−13;PA1−11、PA1−13、PAP−12,およびPAP−14;PA1−11、PA1−13、PAP−12,およびPAP−4;PA1−11、PA1−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−14、PA1−4,およびPAP−12;PA1−11、PA1−14、PA1−4,およびPS7−1;PA1−11、PA1−14、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;PA1−11、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;PA1−11、PA1−4、PA2−13,およびPAP−12;PA1−11、PA1−4、PA2−13,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PA2−7,およびPAP−12;PA1−11、PA1−4、PA2−7,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PAP−12,およびPAP−13;PA1−11、PA1−4、PAP−12,およびPAP−14;PA1−11、PA1−4、PAP−12,およびPAP−4;PA1−11、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PAP−13,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PAP−14,およびPS7−1;PA1−11、PA1−4、PAP−4,およびPS7−1;PA1−11、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PA1−11、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PA1−11、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;PA1−11、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1;PA1−12、PA1−13、PA1−14,およびPA1−4;PA1−12、PA1−13、PA1−14,およびPAP−12;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPA1−9;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPA2−13;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPA2−7;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPAP−12;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPAP−13;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPAP−14;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPAP−4;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPS7−1;PA1−12、PA1−13、PA1−4,およびPS7−1;PA1−12、PA1−13、PA1−9,およびPAP−12;PA1−12、PA1−13、PA2−13,およびPAP−12;PA1−12、PA1−13、PA2−7,およびPAP−12;PA1−12、PA1−13、PAP−12,およびPAP−13;PA1−12、PA1−13、PAP−12,およびPAP−14;PA1−12、PA1−13、PAP−12,およびPAP−4;PA1−12、PA1−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PA1−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PA1−14、PA1−4,およびPAP−12;PA1−12、PA1−14、PA1−4,およびPS7−1;PA1−12、PA1−14、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;PA1−12、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PA2−13,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PA2−7,およびPAP−12;PA1−12、PA1−4、PA2−7,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PAP−12,およびPAP−13;PA1−12、PA1−4、PAP−12,およびPAP−14;PA1−12、PA1−4、PAP−12,およびPAP−4;PA1−12、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PAP−13,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PAP−14,およびPS7−1;PA1−12、PA1−4、PAP−4,およびPS7−1;PA1−12、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PA1−12、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PA1−12、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;PA1−12、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1;PA1−13、PA1−14、PA1−4,およびPA1−9;PA1−13、PA1−14、PA1−4,およびPA2−13;PA1−13、PA1−14、PA1−4,およびPAP−12;PA1−13、PA1−14、PA1−4,およびPS7−1;PA1−13、PA1−14、PA1−9,およびPAP−12;PA1−13、PA1−14、PA2−13,およびPAP−12;PA1−13、PA1−14、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPA2−13;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPA2−7;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPAP−13;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPAP−14;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPAP−4;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PA2−13,およびPA2−7;PA1−13、PA1−4、PA2−13,およびPAP−12;PA1−13、PA1−4、PA2−13,およびPAP−13;PA1−13、PA1−4、PA2−13,およびPAP−14;PA1−13、PA1−4、PA2−13,およびPAP−4;PA1−13、PA1−4、PA2−13,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PA2−7,およびPAP−12;PA1−13、PA1−4、PA2−7,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PAP−12,およびPAP−4;PA1−13、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PAP−13,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PAP−14,およびPS7−1;PA1−13、PA1−4、PAP−4,およびPS7−1;PA1−13、PA
1−9、PA2−13,およびPAP−12;PA1−13、PA1−9、PA2−7,およびPAP−12;PA1−13、PA1−9、PAP−12,およびPAP−13;PA1−13、PA1−9、PAP−12,およびPAP−14;PA1−13、PA1−9、PAP−12,およびPAP−4;PA1−13、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PA2−13、PA2−7,およびPAP−12;PA1−13、PA2−13、PAP−12,およびPAP−13;PA1−13、PA2−13、PAP−12,およびPAP−14;PA1−13、PA2−13、PAP−12,およびPAP−4;PA1−13、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PA1−13、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PA1−13、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;PA1−13、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1;PA1−14、PA1−4、PA1−9,およびPAP−12;PA1−14、PA1−4、PA1−9,およびPS7−1;PA1−14、PA1−4、PA2−13,およびPAP−12;PA1−14、PA1−4、PA2−13,およびPS7−1;PA1−14、PA1−4、PAP−12,およびPS7−1;PA1−14、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−14、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9、PA2−13,およびPAP−12;PA1−4、PA1−9、PA2−13,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9、PA2−7,およびPAP−12;PA1−4、PA1−9、PA2−7,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9、PAP−12,およびPAP−13;PA1−4、PA1−9、PAP−12,およびPAP−14;PA1−4、PA1−9、PAP−12,およびPAP−4;PA1−4、PA1−9、PAP−12,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9、PAP−13,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9、PAP−14,およびPS7−1;PA1−4、PA1−9、PAP−4,およびPS7−1;PA1−4、PA2−13、PA2−7,およびPAP−12;PA1−4、PA2−13、PA2−7,およびPS7−1;PA1−4、PA2−13、PAP−12,およびPAP−13;PA1−4、PA2−13、PAP−12,およびPAP−14;PA1−4、PA2−13、PAP−12,およびPAP−4;PA1−4、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−4、PA2−13、PAP−13,およびPS7−1;PA1−4、PA2−13、PAP−14,およびPS7−1;PA1−4、PA2−13、PAP−4,およびPS7−1;PA1−4、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PA1−4、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PA1−4、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;PA1−4、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1;PA1−9、PA2−13、PAP−12,およびPS7−1;PA1−9、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PA1−9、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PA1−9、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;PA1−9、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1;PA2−13、PA2−7、PAP−12,およびPS7−1;PA2−13、PAP−12、PAP−13,およびPS7−1;PA2−13、PAP−12、PAP−14,およびPS7−1;またはPA2−13、PAP−12、PAP−4,およびPS7−1を含む。
本明細書において別段に定義されていなければ、本出願において使用される科学および技術用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。一般的に、本明細書に記載の薬理学、細胞および組織培養、分子生物学、細胞およびがん生物学、神経生物学、神経化学、ウイルス学、免疫学、微生物学、遺伝子およびタンパク質および核酸化学に関連して使用される命名法、および技法は、当技術分野において周知かつ通常使用されるものである。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が支配することになる。
定義
バクテリオファージ
一部の実施形態では、本明細書において提供されるバクテリオファージによって溶解されるP.acnes細菌は、皮膚、眼または歯の中/上に存在する。一部の実施形態では、本明細書において提供されるバクテリオファージによって溶解されるP.acnes細菌は、皮膚、眼、歯の中/上の、またはインプラント上のバイオフィルム中に存在する。
本明細書に記載のバクテリオファージを含む化粧品組成物は、ざ瘡および/またはバイオフィルムをモジュレートするために使用することができる。1種または複数のバクテリオファージを、単独でまたは予防剤、治療剤、および/もしくは化粧品として許容される担体と組み合わせて含む化粧品組成物が提供される。ある特定の実施形態では、化粧品組成物は、本明細書に記載の2種のバクテリオファージを含む。他の実施形態では、化粧品組成物は、本明細書に記載の3種またはそれより多いバクテリオファージを含む。
本明細書に記載のバクテリオファージを含む医薬組成物は、ざ瘡および/またはバイオフィルムをモジュレートするために使用することができる。1種または複数のバクテリオファージを、単独でまたは予防剤、治療剤、および/もしくは薬学的に許容される担体と組み合わせて含む医薬組成物が提供される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の2種のバクテリオファージを含む。他の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の3種またはそれより多いバクテリオファージを含む。
バクテリオファージ、バクテリオファージ混合物、および/またはバクテリオファージもしくはバクテリオファージ混合物を含む組成物を使用して、哺乳動物におけるざ瘡を処置する方法が提供される。一部の実施形態では、ざ瘡を処置する方法は、本明細書に記載のP.acnesのバクテリオファージを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、ざ瘡を処置または予防する方法は、本明細書に記載のP.acnesのバクテリオファージを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、P.acnesの量を低減する方法は、本明細書に記載のP.acnesのバクテリオファージを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、皮膚、眼または歯の中/上のバイオフィルムの発生を処置または予防する方法は、本明細書に記載のP.acnesのバクテリオファージを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、インプラント上のバイオフィルムの発生を予防する方法は、本明細書に記載のP.acnesのバクテリオファージを対象に投与するステップを含む。
対象を処置することができるファージの混合物を選択する方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に示される方法によって対象を処置することができる、ファージの混合物を選択する方法は、(1)対象から、例えば、皮膚、眼、歯から生体試料を得るステップと、(2)生体試料から得られた細菌を培養するステップと、(3)培養された細菌に、本明細書に記載のバクテリオファージの混合物を接種するステップと、(4)混合物によって溶解される試料中のP.acnes細菌の量(パーセンテージ)を決定するステップとを含む。一部の実施形態では、試料中のP.acnes細菌の少なくとも50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%またはそれより高い割合の溶解は、ファージの混合物を使用して対象を処置することができることを示す。一部の実施形態では、溶解は、本明細書に記載されている液体培地アッセイおよび/または固体培地アッセイによって決定される。
バクテリオファージに関する試料の供給および処理
材料および方法
候補バクテリオファージは、汚水(下水)試料から単離する。異なる時間に異なる場所から得られた、それぞれ400mLの5〜6個の生の汚水試料を含む汚水のバッチを遠心分離し、上清をMerck(Merck KGaA、Darmstadt、Germany)のMilliporeガラスファイバープレフィルターAPFD、続いてプレフィルターAPFB、続いて真空濾過システムを使用するExpress plus PESの47mmディスク0.45μmフィルターに連続的に通して濾過する。プールした汚水試料混合物をMerck Millipore 100kDa PelliconXLフィルターシステム(2Lから20mL)(Merck KGaA、Darmstadt、Germany)を使用して濃縮する。次いで、濃縮した汚水試料を0.45μmフィルターに通して濾過し、4℃で保管する。よって、各最終汚水ファージ試料は、異なる地理的起源の5〜6個の試料由来のバクテリオファージを含む。
単離、生成および宿主範囲実験において使用されるP.acnes細菌宿主
材料および方法
以下のP.acnes株は、オーダーされるかまたは自社で単離される。培養採取物に由来する株を、それらの使用説明書によって生き返らせ、アリコートし、−80℃で保存する。PA4およびPAPは、実験室の単離株であり、3回連続のコロニーの単離によって精製され、16SサンガーシーケンシングによってP.acnesであることが確認される。さらに、市販のものと単離されたものの両方を含むすべての株をシーケンシングし、全ゲノムシーケンシングリードを、P.acnes KPA171202の参照ゲノムまたは利用可能であれば公開されたゲノムに対して整列させることによって、P.acnesとの同一性をチェックする。以下の表2は、P.acnes株の供給源を示す。
P.acnesを認識するファージに関する環境および臨床試料のスクリーニング
材料および方法
P.acnesファージに関する濃縮汚水試料のスクリーニングを、記載されているように、改変したスポット/液滴プラークアッセイ(Mazzocco A., et al. (2009))を使用して実施する。簡潔には、5g/Lの酵母抽出物(Acros Organics、Geel、Belgium)を補充したBrain Heart Infusionブロス(Becton, Dickinson and Company、Franklin Lakes、New Jersey)(「BHIS」)中で終夜成長させた後、株をBHIS中で1:3に希釈する。希釈の約5.5時間後に、株を遠心分離し(2000×g、5分、室温)、200μLのBHIS中に再懸濁させる。並行して、1ウェル当たり0.5mLの1.5%寒天BHIS(「底寒天」)を含有する48ウェルプレートを調製し、Don Whitley A35嫌気性チャンバー(Don Whitley Scientific、Shipley、UK)中で少なくとも2時間インキュベートし、微量な酸素を培地から除去する。0.4%寒天BHISのアリコート(「上部寒天」)を融解し、嫌気性ワークステーション内で55度のヒートブロック中に挿入する。100μLの体積の濃縮したP.acnes培養物をそれぞれ、4mLの上部寒天と混合し、この混合物75μLを適当なウェル内の底寒天上に分注する。プレートを室温に20分間おいて固体化させ、次いで、回収するために37℃で40分間インキュベートする。
全部で21種のファージを、上記の方法によって単離する。ファージPA1−4、PA1−9、PA1−11、PA1−12、PA1−13、PA1−14をPA1上で単離する。ファージNS19−1、NS13、NS7−1、PA2−4、PA2−7、PA2−13をPA2上で単離する。ファージPS7−1、PAP−1、PAP−4、PAP−7、PAP−8、PAP−11、PAP−12、PAP−13、PAP−14をPAP上で単離する。
単離したファージの宿主範囲の分析
材料および方法
PA1、PA2、およびPAP株上で単離されたファージに関する宿主範囲の分析を、12種のP.acnes株:PA1、PA2、PA3、PA4、PAP、PA5、PA6、PA7、PA8、PA9、PA10、およびPA11に関して実施する。各ファージを、液滴アッセイによって、48ウェルプレート中のP.acnes株の細菌叢に添加する(10μL)。プレートを嫌気的条件下で24時間(37℃)インキュベートし、その後、細菌叢上でプラークが視認可能となる。PA1、PA2、およびPAPの細菌叢と、それぞれのファージを含むプレートを陽性対照とする。1ウェル当たり104個のファージを含有する10μLを使用して、それぞれのファージについて宿主範囲の分析を行う。
+++が、プラークが多すぎて計数できないかまたは全体がクリアリング状態であることを示し、++が、10個を超える計数可能な数のプラークを示し、+が、1から10個のプラークを示し、−が、視認可能なプラークがないことを示す、図1に示されるように、ほとんどのP.acnes細菌は、大多数の新たに単離されたファージに対して非常に敏感である。
抗生物質耐性を示す臨床的P.acnes株に対する広いファージ宿主範囲の検証
臨床的P.acnes株の単離
鼻に適用されたHygiena Deepクレンジング鼻ストリップ(Beautycare E.G.、Bnei Darom、Israel)を使用することによって、健康なボランティアの皮膚試料から、ある範囲のP.acnes株(PAC1〜PAC6およびPAC12〜PAC14)が単離される。鼻に適用されたHygiena Deepクレンジング鼻ストリップを使用することによって、ざ瘡患者の皮膚試料から、ある範囲のP.acnes株(2001−1、2001−3、2001−5、2002−3、2002−7、2002−9、2003−2、2003−8、2003−10、2004−8_2、2004−8_3、2004−8_4、2004−8_5、2004−8_6、および2004−8_10)が単離される。鼻ストリップは、ボランティアの鼻に、製造業者の供給するユーザーガイドに従って適用する(湿った鼻の上に、10分)。次に、ストリップを鼻から注意深く取り除き、3mlの嫌気化されたBHISブロスを含むポリプロピレンチューブ中に挿入する。チューブを密閉し、15秒間パルスボルテックスし、次いで、嫌気的ワークステーション中に挿入する。滅菌ピンセットを使用して、鼻ストリップをチューブから取り除き、廃棄する。次いで、50μLの体積のBHISチューブの試料を、滅菌Drigalskiスパチュラを使用して、BHIS寒天ペトリ皿上に塗り付け、嫌気的ワークステーションインキュベーター中で37℃にて終夜インキュベートする。翌朝、滅菌ループを使用して(各コロニーに対して)、いくつかの別々のコロニーをピックアップし、新たなBHIS寒天プレート上に再度プレーティングする。このプレートを、嫌気的ワークステーションインキュベーター中で37℃にてインキュベートする。各単離株の分類について、16SシーケンシングによってP.acnesであることを確認する。20%のグリセロール中で静置培養物を凍結させることによって、各株に対して凍結ストックを調製し、−80℃で保管する。これらの株に関する宿主範囲の実験を、1ウェル当たり104個のファージを含有する10μLを使用して、上記のようにプラークアッセイによって実施する。以下の表3は、P.acnesの臨床的単離株のリストを示す。
PA1、PA2、およびPAP株上で単離されたファージに関する宿主範囲の分析を、臨床的P.acnes株のサブセットに関して実施する。図2を参照されたい。液滴アッセイによって、48ウェルプレート中のP.acnes株の細菌叢に、各ファージを添加する(10μL)。プレートを嫌気的条件下で終夜(37℃)インキュベートし、その後、細菌叢上でプラークが視認可能となる。1ウェル当たり104個のファージを含有する10μLを使用して、それぞれのファージについて宿主範囲の分析を行う。+++が、プラークが多すぎて計数できないかまたは全体がクリアリング状態であることを示し、++が、10個を超える計数可能な数のプラークを示し、+が、1から10個のプラークを示し、−が、視認可能なプラークがないことを示し、NTが、試験されていないことを示す、図2に見ることができるように、ほとんどの臨床的P.acnes細菌は、大多数の異なるファージ株に対して非常に敏感である。
以前に記載した通常のプラークアッセイによって、またはファージのストック5μLを試験される細菌叢上に滴下し、プレートを37℃で24時間嫌気的にインキュベートさせることによって、細菌株のファージ感受性を試験する。この株の抗生物質感受性を、5〜10μLの抗生物質を、新たに調製された細菌株の叢上に置き、37℃で終夜嫌気的にインキュベートすることによって測定する。使用される臨床上関連する抗生物質の濃度は、15μg/mLのトリメトプリム(Merck KGaA、Darmstadt、Germany)、20μg/mLのエリスロマイシン(Acros Organics、Geel、Belgium)、1%のクリンダマイシン(Selleck Chemicals、Houston、Texas)および10μg/mLのテトラサイクリン(Merck KGaA、Darmstadt、Germany)である。++が、プラークが全体的にクリアリング状態であることを示し、+が、部分的にクリアリング状態であることを示し、−が、クリアリングがないことを示し、NTが、試験されていないことを示す、図6を参照されたい。臨床的P.acnes株に関する宿主範囲の研究結果により、複数のP.acnes株の広い範囲の感染力が、個々のファージまたは重複する宿主感染力パターンを有する様々なファージを含むファージ混合物の適用によって達成され得ることが示唆される。
P.granulosum株PAC4の非感染力
材料および方法
他の細菌株に対する単離されたファージの特異性を調査するために、皮膚の微生物叢中にも見られるP.acnesの近縁であるP.granulosumに感染するそれらの能力を試験する。
結果
図3に見ることができるように、プレート/ウェルのいずれにおいてもプラークもクリアリングゾーンも観察されず、P.acnesファージが特異的な種であるという見解をさらに支持する。
ファージ耐性が発生したP.acnes突然変異体株に対するファージ活性
ファージ耐性突然変異体の発生
ファージ耐性突然変異体を発生させるために、PA3を、4mLのBHIS培養チューブ中で、37℃にて終夜、嫌気的に培養し、翌朝、1:10に希釈し、OD0.4〜0.8まで数時間成長させる。次いで、培養物をOD0.2までさらに希釈する。希釈した培養物を1ウェル当たり0.2mLで96ウェルプレート中に分注し、その後、106PFU/mLのファージPAP−1を10μL添加し、最終的に、これを40〜50μLの鉱油で覆う。滅菌SealPlateフィルム(Merck KGaA、Darmstadt、Germany)でプレートを密封した後、Tecan M200 Proプレートリーダー(Tecan Group、Mannedorf、Switzerland)中で、37℃にてプレートをインキュベートし、感染動態を追跡する。ファージによる溶解後に、ODが低下する。その後、耐性突然変異体の成長により、ODが増加し始める。次いで、新鮮なBHIS寒天プレートに、再成長を示すウェル中の100μLの培養物を接種し、37℃で48時間、嫌気的にインキュベートする。PAP−1ファージに対して耐性となったこの突然変異体PA3株をB9と称する。
B9のコロニーを使用して、4mLのBHISに接種し、PA3株よりもゆっくりと成長させるために48時間インキュベートする。次いで、これらをOD0.2まで希釈し、上記と同じ方法を使用して試験する。突然変異体の成長は、高力価のファージPAP−1の添加の有無にかかわらず同一であるが、野生型(WT)対照は、ファージによる溶解およびファージを含まないWT対照と比較したODの低下を示し、これらが、このファージに対して敏感である親株に由来するとしても、実際に、PAP−1に対して耐性であるP.acnes突然変異体であるという事実を支持する。
突然変異体を再試験するために使用される同じ培養物を2つにさらに分割し、およそ2mLを50%のグリセロールと1:1で混合し、−80℃で凍結させて、ストックを作成する。残りの培養物をスピンダウンさせ、グラム陽性細菌からDNAを単離するために、製造業者のプロトコールに従って、QIAGEN QIAamp DNAミニキット(Qiagen N.V.、Hilden、Germany)を使用して、ゲノムDNAを抽出する。Illumina MiSeqマシーン(Illumina、San Diego、California)を使用して、このDNAをシーケンシングする。シーケンシング結果の分析により、突然変異体が、実際に、ゲノムに沿って様々な改変を有するP.acnes株PAP3であることが示される。
様々なP.acnesファージに対するB9の耐性を試験するために、BHISの4mLのチューブにB9コロニーを接種し、37℃で3日にわたってインキュベートする。次いで、これらを、遠心分離(5分、2000×g、RT)によってスピンダウンさせ、0.2mLのBHIS中に再懸濁させる。次いで、この培養物を、以前に記載した方法を使用するプラークアッセイを基礎として使用する。
上記プラークアッセイを使用して、PA3と称される突然変異体B9の親株を試験する場合に、試験されたいくつかのファージは、106PFU/mLの力価で、ボーダーラインを示すか(1〜10個のプラーク、ファージNS19−1、PS7−1、PA2−13、PAP−7、PAP−11)または感染力を示さない(視認可能なプラークなし、ファージNS13、PA1−4、PA2−4、PAP−8)。興味深いことに、株PA3の感染力のボーダーラインを有するファージのいくつか、すなわち、ファージNS19−1およびPS7−1は、よりファージ耐性の突然変異体B9の感染力を示した。ファージNS19−1およびPS7−1は、89.5%を超えるゲノム類似性を有するが、B9に感染することができるが、親株のPA3には感染することができないファージNS13およびPA1−4はまた、91.5%を超えるゲノム類似性で密接に関連する。図10を参照されたい。
宿主感染におけるファージ間の非干渉
材料および方法
ファージPA1−4およびPAP−12によってのみ有効に感染する宿主株PA4を使用して、様々なP.acnesファージを一緒に混合する際にいずれかの負の作用が存在するかどうかを試験する。株PA4を、4mLのBHIS中で終夜成長させる。翌朝、これを、BHIS中で10分の1に希釈し、ODが約0.8となるまで成長させる。この培養物を、以前に記載した48ウェルプラークアッセイを行うための基礎として使用する。底および上部の両方の寒天を細菌とともに含有する48ウェルプレートを調製した後、PAP−12を含むファージのすべてを、106PFU/mLまで希釈する。次いで、これらの希釈したファージを、新鮮なBHIS培地と1:1の比でまたはPAP−12の106PFU/mLのストックと1:1で、混合する。ファージ+BHISの組合せまたはファージ+PAP−12の組合せ10μLを、プラークアッセイにおいて使用する。必要とされる終夜のインキュベーション後に、プラークを計数する。
図5において見ることができるように、追加のファージの存在は、PA4に関するPAP−12の作用と干渉せず、いくつかのファージを、いずれかの個々のファージの特異的機能を損なうことなく、混合物中で組み合わせることができることを示唆した。
in vivoでの、マウスの耳のP.acnesに誘導される膨張モデルにおけるファージの有効性
皮内研究
材料および方法
皮内研究は、3つの群のICR雌マウス(n=20)(ENVIGO CRS、Ness Ziona、Israel)からなった。すべての群を、1×1010CFU/mLの濃度のP.acnes懸濁液20μLを、右耳の背側へと単回皮内(ID)注射することによって、モデル誘導に供する。群2では、P.acnes注射の3時間後に、PAP−7ファージ懸濁液20μLを、同じ耳へと皮内注射する。群3では、P.acnes注射の3時間前に、ファージ懸濁液20μLを、同じ耳に皮内注射する。すべての群では、同一の実験条件下で、左耳を対照として機能させ、群1に1回または群2および3に2回、PBSを注射する。群1は、モデル誘導に関する対照群として機能する。
図7は、モデル誘導の24時間、48時間および72時間後に、P.acnes皮内感染モデルにおけるファージによる処置後に、耳の膨張の低減を示す。耳の厚みの増加がP.acnesの皮内注射によって誘導される場合、皮内ファージ投与により、マウスモデルにおける耳の膨張が妨げられる。この効果は、P.acnes誘導から24時間後に最も耳の厚みが増すことによって実証される。
材料および方法
局所的研究は、4群のn=6のICR雌マウス(ENVIGO CRS、Ness Ziona、Israel)からなる。すべての群を、0.2mlのチップで優しく引っ掻き(耳当たり10回)、単一の表面裂傷を生じさせることによって、モデル誘導に供する。裂傷は、皮膚に目に見える損傷をもたらし、出血は示さないが赤くなることによって特徴付けられる。裂傷の直後に、PS7−1、PAP−1、およびPAP−12(群2、3および4)またはPBS(群1)の1×1010CFU/mLのファージの組合せを10μL単回の局所適用により適用する。両耳を処置する。処置は、P.acnesによる感染後、30分および3時間においてである。群1および2はPBSを受け、群3は、1×108CFU/mLのファージ懸濁液を受け、群4は、1×1011CFU/mLのファージ懸濁液を受ける。すべての動物の両耳を、モデル誘導前およびモデル誘導の24時間後に、マイクロカリパス(Mitutoya、0.01mm)(Mitutoyo Europe GmbH、Neuss、Germany)を使用して測定する。
このモデルを使用して、細菌に誘導される耳膨張モデルにおいて、P.acnesの後に投与される場合に、P.acnesファージの局所投与の有効性が実証される。図8において見ることができるように、24時間の時点で、P.acnesのみで処置した耳(群2)と比較して、P.acnes+ファージで処置した耳(群3および4)では膨張が存在しない。予期される治療用量に近似するより低い力価のファージ(群3)の投与により、完全な作用がもたらされ、より高い力価は必要とされないことも見ることができる。
バイオフィルム上で単離されたファージの有効性
材料および方法
P.acnesのバイオフィルムに対して本発明者らのファージを試験するために、実験室内で産生されたバイオフィルムに関して、以下の実験を実施する。PA1の終夜培養物を、新鮮なBHISで1:1に希釈し、37℃で4時間インキュベートし、その後、培養物を今回は1%のグルコースを補充した嫌気化されたBHISで1:1にもう一度希釈する(最終濃度0.5%)。次に、96ウェルプレート(Thermo Fisher Scientific、Waltham、Massachusetts)に、1ウェル当たり200μLの希釈培養物を播種する。8ウェルのストリップキャップ(Thermo Fisher Scientific、Waltham、Massachusetts)を使用してウェルを密封する。これを3日間インキュベートし、バイオフィルムを形成させる。72時間後に、混合物1(PAP−12、PA1−9およびPA1−13)、混合物2(PA7−1、PA1−9およびPA1−13)、混合物3(PAP−12、PA1−9、PA1−13およびPS7−1)のいずれかを10μLまたは2μLのエリスロマイシンを、関連するウェルに添加する。混合物当たりに添加されるファージの量は、105の総PFUに相当するが、抗生物質であるエリスロマイシンに対しては、100μg/mLの最終濃度(バイオフィルム中にない場合、PA1の成長を阻害するのに十分な)が使用される。
結果
ファージの組合せの適用により突然変異体が出現するまでの時間が延長される
材料および方法
P.acnesに感染するファージの組合せの適用を、耐性突然変異体P.acnes株の出現までの時間を遅延させるその能力について試験する。単一のファージを感染させる場合、そのファージ受容体に突然変異を有する細菌が選択される傾向にある。ファージを様々な受容体または様々な受容体親和性と組み合わせることによって、突然変異までの時間(TTM、細菌突然変異体が培養物に取って代わるのにかかる時間)が延長され得る。組み合わされる2種のファージ、すなわち、PAP1とPA1−4は、それらが、宿主範囲に基づいて、遺伝的におよび機能的にの両方で異なるために選択される。PAP1は、機能的クラスター3bに属するが、PA1−4は、機能的クラスター5に属する。ファージは、別々に、および以前に記載されたように、15分ごとのOD600の測定値を使用して、PA3細菌上の混合物中で試験される。個々のファージおよびファージ混合物は、106PFU/mLの最終濃度で試験される。
ファージを含有するすべての培養物は、ファージの捕食により、ODにおいて初期の予測される低下を示す。耐性突然変異体細菌が出現するのにかかる時間を比較するために、OD600の閾値0.2を使用してTTMを測定する。図9において見ることができるように、PAP−1およびPA1−4のみの培養物は、42および40時間のTTMを示し、一方、2種のファージの1:1の混合物ミックスは、50時間のTTMを示す。両方のファージが同時に適用される場合に、耐性突然変異体の出現までの時間のシフトを実証するこれらの結果は、これら2種のファージが異なる機能的クラスターに属するという以前の観察を支持する。
ファージの遺伝子分析は、いくらかの小さな多様性を有するファージ間の高レベルの類似性を示す
ファージストックのシーケンシング
ファージDNAを、少なくとも109PFUを含有するストック200μLから抽出する。それぞれのライセート中に存在する細菌のDNAを、Ambion Turbo free DNAキット(Thermo Fisher Scientific、Waltham、Massachusetts)を用いて処置することによって除去し、その後、製造業者の使用説明書に従い、QIAGEN QIAamp DNAミニキット(Qiagen N.V.、Hilden、Germany)を使用して、ファージのgDNAを抽出する。スピンカラム上で3〜5分間インキュベートした30μLのAE緩衝液で2回溶出することによって、DNAの溶出を行い、Nanodrop 2000を使用してDNAを定量する。抽出後、Illuminaシーケンシングライブラリーを、Baymら(Baym et al., 2015)のプロトコールに従って作成し、MiSeqマシーンを使用してシーケンシングする。
SPAdes v3.10.1(Nurk et al., 2013)を使用してリードをアセンブルする。BLASTN(Altschul et al., 1997)を使用することによって、非重複アライメントセグメントをすべて組合せ(BLAST HSP)、それらの完全一致数を合計し、この合計をより長い配列の長さで除して、パーセント同一性を得ることによって、ファージゲノムを比較する。R−studioバージョン1.0.143(R Core Team (2017). R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria)におけるHclustアルゴリズムによって、パーセント同一性テーブルのクラスタリングを行う。結果を以下の表5および図10に示す。図10に示されるように、非常に高いゲノム類似性を有する2つの小さな群、すなわち、群1(PA1−13、PA2−13およびPA1−4)および群2(PAP−1およびPAP−12)が存在する。
臨床的P.acnes株に関する治療用カクテルの有効性
細菌の単離
プロトコールMBC−CL−01−2016(clinicaltrials.gov identifier NCT03009903)に従って、健康なボランティアおよびざ瘡を有する個体からP.acnesを単離した。両方のプロトコールおよびすべてのボランティアにサインされたインフォームドコンセントに対して、Helsinki IRBの承認を得た。皮膚からのP.acnesの採取および単離は、製造業者の使用説明書に従って適用した美容鼻ストリップ(Beautycare E.G.、Bnei Darom、Israel)を使用して鼻から、またはサンプリング緩衝液(0.1%のTriton+0.075Mのリン酸緩衝液)中で湿らせた滅菌乾燥スワブ(COPAN diagnostics)で、4cm2の面積を30秒間擦ることによって額から得た。
抗生物質耐性コロニーの単離のために、皮膚スワブ由来の4mlのうちの50μlを、プレート上に均一に広げ、それに抗生物質を以下のように添加した:0.5μg/mLのクリンダマイシン;BHIS+20μg/mLのフラゾリドン+0.5μg/mLのエリスロマイシン;BHIS+20μg/mLのフラゾリドン+5μg/mLのテトラサイクリン;BHIS+20μg/mLのフラゾリドン+5μg/mLのミノサイクリン。すべての抗生物質は、Sigma−Aldrich(Rehovot、Israel)から購入した。
ファージカクテル(PS7−1、PA1−13およびPAP−12)の感受性を試験するために、選択された単離細菌のコロニーを、嫌気的ワークステーション中で、37℃にて、4mLのBHIS中で終夜成長させた。翌朝、各細菌株の培養物を、約0.7の開始ODまでBHIS中で希釈し、嫌気的ワークステーション中で、37℃にてインキュベートした。
単離株のリボタイプを決定するために、プライマー27Fおよび1492Rを使用して16s遺伝子のPCR分析を実施し、サンガーシーケンシングによって分析し、CloneManageソフトウェアを用いてRT1リボタイプに対して整列させた。
3種のファージのカクテルは、95%を超える臨床的P.acnes株を標的とする(図11を参照されたい)。およそ130種のP.acnesの臨床系統を、上記のように、ざ瘡患者と健康な個体から単離した。4つの抗生物質のパネルに対して試験した場合、これらのうち、大多数が、1つまたは複数の抗生物質に対して抗生物質耐性を示した(図12)。5つの試料のみが、上記の原理に基づいて設計された3種のファージのカクテルに対して耐性であることが判明した。フラゾリドンに対して耐性であり、かつファージカクテルに対して耐性であることが判明した少数の単離株は、P.acnes単離株ではないとシーケンシングによって後に特定された(データは示さず)。P.acnes臨床系統のサブセットをリボタイピングに供した場合、ファージ感受性の臨床系統が、一般的に、ざ瘡に関連すると考えられる4つのリボタイプの株を含むことがさらに観察された。これらは、リボタイプRT4、RT5、RT8およびRT9である。これらの結果は、設計されたファージカクテルに対する、一般的に疾患関連リボタイプと考えられる臨床株の感受性を実証する。
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Claims (26)
- B9、PA4、PA3、およびPA5から選択される少なくとも1種のPropionibacterium acnes(P.acnes)株に感染しそれを溶解する第1のバクテリオファージ、
前記第1のバクテリオファージに感染せず、それによって溶解されない、B9、PA4、PA3、およびPA5から選択される少なくとも1種のP.acnes株に感染しそれを溶解する第2のバクテリオファージ、ならびに
薬学的にまたは化粧品として許容されるアジュバント、担体またはビヒクル
を含む組成物。 - 前記第1の選択されたファージが、P.acnes株B9に感染しそれを溶解し、
前記第2の選択されたファージが、P.acnes株PA4に感染しそれを溶解し、
前記2種の選択されたファージが、P.acnes株B9およびPA4に関して互いに異なる溶解特異性を有する、請求項1に記載の組成物。 - 前記第1の選択されたファージが、P.acnes株PA3に感染しそれを溶解し、
前記第2の選択されたファージが、P.acnes株B9に感染しそれを溶解し、
前記2種の選択されたファージが、P.acnes株PA3およびB9に関して互いに異なる溶解特異性を有する、請求項1に記載の組成物。 - 前記第1の選択されたファージが、P.acnes株PA3に感染しそれを溶解し、
前記第2の選択されたファージが、P.acnes株PA4に感染しそれを溶解し、
前記2種の選択されたファージが、P.acnes株PA3およびPA4に関して互いに異なる溶解特異性を有する、請求項1に記載の組成物。 - 前記第1の選択されたファージが、P.acnes株PA4に感染しそれを溶解し、
前記第2の選択されたファージが、P.acnes株PA5に感染しそれを溶解し、
前記2種の選択されたファージが、P.acnes株PA4およびPA5に関して互いに異なる溶解特異性を有する、請求項1に記載の組成物。 - PA1、PA2、PA6、PA7、PA8、PA9、PA10、PA11、およびPAPから選択される少なくとも1種のP.acnes株に感染しそれを溶解する少なくとも1種のファージを含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物中の前記ファージが、全体として、P.acnes株PA1、PA2、PA6、PA7、PA8、PA9、PA10、PA11、およびPAPのそれぞれに感染しそれを溶解する、請求項6に記載の組成物。
- a.B9、PA4、PA3、およびPA5から選択される少なくとも1種のP.acnes株に感染しそれを溶解する第1のバクテリオファージ、
b.B9、PA4、PA3、およびPA5から選択される少なくとも1種のP.acnes株に感染しそれを溶解する第2のバクテリオファージ、ならびに
c.B9、PA4、PA3、およびPA5から選択される少なくとも1種のP.acnes株に感染しそれを溶解する第3のバクテリオファージ
を含み、
前記第2のバクテリオファージに感染した少なくとも1種のP.acnes株が、前記第1のバクテリオファージおよび前記第3のバクテリオファージのうちの少なくとも1種に感染せず、それによって溶解されず、
前記第3のバクテリオファージに感染した少なくとも1種のP.acnes株が、前記第1のバクテリオファージおよび前記第2のバクテリオファージのうちの少なくとも1種に感染せず、それによって溶解されない、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記第1のバクテリオファージが、P.acnes株PA3に感染しそれを溶解し、
前記第2のバクテリオファージが、P.acnes株PA4に感染しそれを溶解し、
前記第3のバクテリオファージが、P.acnes株B9に感染しそれを溶解し、
3種のバクテリオファージのそれぞれが、P.acnes株PA3、PA4およびB9に関して互いに異なる溶解特異性を有する、請求項8に記載の組成物。 - PS7−1、PA1−11、PAP−12、PA1−9およびPA1−13から選択される少なくとも3種のバクテリオファージを含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の組成物。
- 哺乳動物の皮膚または哺乳動物の眼への送達のために製剤化された、請求項1から10のいずれか一項に記載の組成物。
- 局所適用のために製剤化された、請求項11に記載の組成物。
- ゲル、クリーム、軟膏、ローション、ペースト、液剤、マイクロエマルション、液体洗浄剤、スプレー、塗布スティック、化粧品、包帯剤、洗顔剤、石鹸、パウダー、スプレー、カプセル、点眼剤、眼軟膏、洗眼剤、固形剤、もしくは湿ったスポンジワイプの形態にあるか、または固体表面に結合している、請求項12に記載の組成物。
- それを必要とするかまたはそのリスクを有する哺乳動物対象のざ瘡を処置または予防するための方法であって、請求項1から13のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
- 抗生物質、抗面皰剤、バクテリオファージ以外の抗P.acnes剤、抗炎症剤、抗脂漏剤、および日焼け止め剤から選択される1つまたは複数の局所または経口剤を、前記対象に投与する追加のステップを含む、請求項14に記載の方法。
- 前記1つまたは複数の局所剤が、角質溶解剤および皮脂浸透エンハンサーのうちの1つまたは複数も含み得る、請求項15に記載の方法。
- 前記抗生剤が、抗生物質ゲル、抗生物質クリーム、抗生物質ローションまたは経口抗生物質であり、
前記抗面皰剤が、レチノイド、アゼライン酸およびイソトレチノインのうちの1つまたは複数を含み、
前記抗P.acnes剤が、過酸化ベンゾイル、ダプソン、アゼライン酸、エリスロマイシン、テトラサイクリンおよびクリンダマイシン、スルファセタミドナトリウム、アダパレン、ミノサイクリン、トリメトプリム、ナジフロキサシン、オフロキサシン、ドキシサイクリン、アンピシリン、セファレキシン、ゲンタマイシン、およびトリメトプリムスルファメトキサゾールのうちの1つまたは複数を含み、
前記抗炎症剤が、テトラサイクリン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、ニコチンアミド、ミノサイクリン、トリメトプリムおよびイソトレチノインのうちの1つまたは複数を含み、
前記抗脂漏剤が、スピロノラクトン、Dianette(商標)(酢酸シプロテロンおよびエチニルエストラジオール)およびイソトレチノインのうちの1つまたは複数を含む、請求項14から16のいずれか一項に記載の方法。 - 前記角質溶解剤が、グリコール酸、乳酸、マンデル酸、ヒドロキシカプリン酸、フィチン酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、サリチル酸、尿素、および硫黄のうちの1つまたは複数を含む、請求項16に記載の方法。
- 前記皮脂浸透エンハンサーが、ポリソルベート界面活性剤、非イオン性界面活性剤、不飽和脂肪酸、不飽和アルコール、脂肪族アルコール、トランスクトール、リン脂質、不飽和トリグリセリド、プロピレングリコール、およびジプロピレングリコールのうちの1つまたは複数を含む、請求項16に記載の方法。
- 前記組成物が、105から1013プラーク形成単位(PFU)の用量で、12または24時間ごとに投与される、請求項14から19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記組成物が、105から1013プラーク形成単位(PFU)の用量で、48または72時間ごとに投与される、請求項14から19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記組成物が、107から1011PFUの用量で、12または24時間ごとに投与される、請求項20に記載の方法。
- 前記組成物が、107から1011PFUの用量で、48または72時間ごとに投与される、請求項21に記載の方法。
- 前記組成物が、106から1011PFUの用量で投与される、請求項20または21に記載の方法。
- 前記組成物が、107から109PFUの用量で投与される、請求項20または21に記載の方法。
- 前記ざ瘡が、尋常性ざ瘡、集簇性ざ瘡、電撃性ざ瘡、化膿性汗腺炎、頭皮ざ瘡、進行性黄斑メラニン減少症に関連するざ瘡、SAPHO症候群に関連するざ瘡および外傷後の致死性細菌性肉芽腫に関連するざ瘡から選択される、請求項14から25のいずれか一項に記載の方法。
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