KR20200089649A - 인공적인 세균 집락형성을 사용하는 스타필로코커스 아우레우스의 예방을 위한 약학 조성물 및 방법 - Google Patents
인공적인 세균 집락형성을 사용하는 스타필로코커스 아우레우스의 예방을 위한 약학 조성물 및 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 약제로서 사용하기 위한, 특히 에스. 아우레우스 집락형성의 예방에 사용하기 위한, 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 스타필로코커스 파스테우리, 및 임의로 스타필로코커스 에피데르미디스를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 의한 세균 집락형성의 예방에 관한 것이다.
본 발명은 또한 적어도 하나의 코리네박테리움 종(Corynebacterium sp.) 및 스타필로코커스 종(Staphylococcus sp.)을 포함하는 조성물(예를 들어 약학 조성물) 및 관련 방법에 관한 것이며, 상기 조성물 및 방법은 특히 스타필로코커스 아우레우스에 의한 세균 집락형성의 예방과 관련된다.
스타필로코커스 아우레우스는 인간에서 감염의 주요 원인이다. 상기는 피부 및 연조직 감염, 심내막염, 및 패혈증을 포함한 광범위한 병리의 원인이다. 에스. 아우레우스는 피부, 점막 및 위장관에서 무증상적으로 집락을 형성할 수 있지만, 무증상 보균은, 특히 수술 및 투석 환자에서 내인성 에스. 아우레우스 감염의 증가된 위험과 관련된다. 무증상 보균자는 또한 에스. 아우레우스의 전염을 위한 병원보유체로서 작용하여, 지역사회 및 병원 환경 모두에서 감염의 위험성을 증가시킨다. 실제로, 언제든, 추정상 상기 집단의 30%는 에스. 아우레우스 집락형성의 주요 장소인 외비공(anterior nares) 중에 에스. 아우레우스를 갖고 있다.
특히 환자들에게 특별히 민감한 병원 환경에서, 에스. 아우레우스에 의한 전염 및 감염의 위험을 감소시키기 위해, 다수의 헬쓰케어 센터는 입원에 앞서, 에스. 아우레우스 코 보균의 제거(달리 "코 탈집락(decolonization)"으로서 공지됨)와 결합된, 통상적인 환자 선별을 권장한다. 따라서 적합한 코 탈집락 방법이 에스. 아우레우스 전염 및 감염 제한에 중요하다.
지금까지, 국소 항생제 및/또는 소독제의 적용, 전신 항생제의 사용, 및 비공(nares)의 인공적인 세균 집락형성을 포함한 다양한 방법이 코 탈집락에 사용되었다. 그러나, 국소 항생제 및 소독제 치료 방법은 효능이 낮으며 에스. 아우레우스 균주에서 소독제 및 항생제 내성의 빠른 발생을 도출하였다. 전신 항생제의 사용은 유사하게, 바람직하지 못한 부작용의 존재와 함께, 항생제 내성 균주의 빠른 출현을 도출하였다. 인공적인 세균 집락형성은 에스. 아우레우스와 경쟁하는 세균 종 및/또는 균주의 투여에 있다. 현저하게는, 1960년대에, 에스. 아우레우스 균주 502A에 의한 비공의 인공적인 집락형성을 사용하여, 집단발병 중 신생아 및 재발 감염 환자에서 보다 독성인 에스. 아우레우스 균주에 의한 집락형성을 예방하였다. 그러나, 상기 방법은 균주 502A 자체가 다수의 에스. 아우레우스 감염의 원인이고 심지어 사망과 관련되는 것으로 밝혀진 후에 버려졌다. 보다 최근에, 다수의 연구는 비공에서 에스. 아우레우스 집락형성에 대한 다른 세균 종의 효과를 평가하였으며, 다양하고 종종 모순되는 결과를 얻었다. 예를 들어, 우에하라 등(Uehara et al., 2000)은 에스. 에피데르미디스(S. epidermidis)가 비공에서 에스. 아우레우스를 제거할 수 없음을 입증하였다. 대조적으로, 이와세 등(Iwase et al., 2010)은 에스. 에피데르미디스가 실제로는 에스. 아우레우스 보균을 제거할 수 있음을 보고하였다. 유사하게, 우에하라 등(2000)은 코리네박테리움에 의한 인공적인 집락형성이 에스. 아우레우스 보균을 제거할 수 있음을 입증하였지만, 얀 등(Yan et al., 2013)은 보다 최근에 비공 중의 코리네박테리움 악콜렌스(Corynebacterium accolens)의 존재가 에스. 아우레우스의 보균과 관련있음을 입증하였다. 얀 등(2013)은 씨. 악콜렌스가 에스. 아우레우스의 증식을 촉진할 수 있음을 추가로 입증하였다.
국소 항생제 투여의 공지된 단점에도 불구하고, 코 탈집락은 현재 국소적으로 적용되는 항생제, 무피로신의 사용에 필수적으로 의존한다. 무피로신에 대한 에스. 아우레우스 내성의 발생을 늦추려는 노력으로, 치료는 중증 감염으로 제한되며, 이때 항생제는 매우 단기간 동안 투여된다(예를 들어, 소생 또는 수술 중 환자에서 5-일 치료 과정). 그러나, 환자 순응도의 획득은 무피로신을 반복적으로 적용해야 하므로 어려울 수 있다. 더욱 또한, 에스. 아우레우스 재집락형성이 치료후 빈발하며, 이는 무피로신이 장기간 치료 효과는 거의 없음을 암시한다. 실제로, 무피로신 효능은 유의미하지만, 치료시작 5주 후에 환자의 절반 정도로 많은 수에서 동일한 에스. 아우레우스 균주가 집락을 형성한 채로 남아 있는다. 더욱 또한, 에스. 아우레우스 집락형성이 면제된 개인의 무피로신 치료는 유해할 수 있으며 그를 보균자게 되게 할 수 있고, 이는 치료에 앞서 보균 선별을 필요하게 함이 보고되었다(Wertheim et al., 2005).
이러한 노력에도 불구하고, 현재 에스. 아우레우스 항생제-내성 균주가 재활치료 및 장기 요양원 환자의 최대 50% 에서 검출된다. 항생제-내성 균주 중에서, 메티실린-내성 에스. 아우레우스(MRSA)가 가장 일반적이지만, 무피로신-내성 MRSA의 사례도 보고되었다. 항생제-내성 에스. 아우레우스(예를 들어 MRSA)로 인한 감염은 메티실린-민감성 에스. 아우레우스(MSSA)로 인한 감염에 비해 증가된 사망률, 이환율, 입원기간의 길이 및 비용과 관련된다.
그 결과, 피부 및 점막상의 에스. 아우레우스 집락형성의 예방을 위한 신규의 제품 및 방법이 필요하다. 특히, 비공의 에스. 아우레우스 집락형성을 예방하는 신규의 제품 및 방법이 필요하다. 오랜 기간(예를 들어 수 주 또는 수 개월)에 걸쳐, 특히 사고 또는 수술 상처의 치유 기간 동안 투여될 수 있는 신규의 제품 및 방법이 추가로 필요하다. 이러한 필요는 에스. 아우레우스 집락형성 및/또는 감염이 빈번한 정형외과 및 심장외과의 상황에서, 이식된 장치를 갖는 환자에서, 및 재활치료 또는 장기 요양원에 거주하는 환자에서 특히 중요하다. 항생제 및 소독제 내성을 발생시키는 에스. 아우레우스의 경향을 고려하면, 이들 신규의 제품 및 방법은 항생제나 소독제의 사용에 기반해서는 안 되며, 특히 MRSA의 예방으로 기능해야 한다. 상기는 또한 부작용이 거의 없어야 하며 합리적인 비용으로 입수가능해야 한다.
본 발명은 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 적어도 하나의 스타필로코커스 종을 포함하는, 바람직하게는 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 적어도 하나의 에스. 파스테우리(S. pasteuri)를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 약학 조성물에 비해 하기에 기재하는 바람직한 특징 중 어느 하나를 포함할 수 있으며, 이는 그 자체가 조성물의 바람직한 실시태양이다. 특히, 조성물은 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 스타필로코커스 파스테우리를 포함하며, 여기에서 상기 적어도 하나의 코리네박테리움 종은 씨. 악콜렌스(C. accolens), 씨. 프로핀쿠움(C. propinquum), 씨. 슈도디프테리티쿰(C. pseudodiphtheriticum), 씨. 스트리아툼(C. striatum), 씨. 아미콜라툼(C. amycolatum), 씨. 글루타미쿰(C. glutamicum), 씨. 아우리무코숨(C. aurimucosum), 씨. 투베르쿨로스테아리쿰(C. tuberculostearicum) 및 씨. 아페르멘탄스(C. afermentans), 바람직하게는 씨. 악콜렌스 및/또는 씨. 프로핀쿠움 중에서 선택된다. 바람직하게, 조성물은 스타필로코커스 에피데르미디스를 추가로 포함한다. 바람직하게, 조성물은 용량당 적어도 103 CFU의 코리네박테리움 종, 적어도 103 CFU의 스타필로코커스 파스테우리, 및 임의로 적어도 103 CFU의 스타필로코커스 에피데르미디스를 포함한다. 바람직하게, 조성물은 용량당 적어도 총 103의 세균 CFU, 바람직하게는 용량당 적어도 1.2x103, 보다 바람직하게는 적어도 1.4x103, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 3x103의 세균 CFU를 포함한다. 바람직하게, 코리네박테리움 종 대 스타필로코커스 파스테우리 대 스타필로코커스 에피데르미디스의 비는 1:0.01:0.01 내지 1:1:1의 범위내에 포함된다. 바람직하게, 조성물은 적어도 하나의 부형제, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함한다. 바람직하게 상기 적어도 하나의 부형제는 적어도 하나의 동결보호제, 바람직하게는 펩톤, 글리세롤, 락토스, 젤라틴, 글루코스, 슈크로스, 트레할로스, 덱스트란, 말토덱스트린, 아도니톨, 및 나트륨 글루타메이트 중에서 선택된 동결보호제를 포함한다. 바람직하게, 조성물은 동결건조되거나 또는 동결-건조된다. 바람직하게, 조성물은 적어도 하나의 겔화제, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 겔화제를 추가로 포함한다.
바람직하게, 본 발명은 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 적어도 하나의 스타필로코커스 종을 포함하는, 바람직하게는 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 적어도 하나의 에스. 파스테우리를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 적어도 하나의 코리네박테리움 종은 바람직하게는 씨. 악콜렌스 및 씨. 프로핀쿠움 중에서 선택되거나, 또는 씨. 악콜렌스 및 씨. 프로핀쿠움을 모두 포함한다. 본 발명은 또한 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 에스. 파스테우리, 및 적어도 하나의 추가적인 스타필로코커스 종, 바람직하게는 에스. 에피데르미디스를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 따라서, 특정한 바람직한 실시태양에 따라, 본 발명은 또한 씨. 악콜렌스 및/또는 씨. 프로핀쿠움, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 특히, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방에서 약제로서 사용하기 위한 상기 조성물에 관한 것이다. 실제로, 발명자는 놀랍게도 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 에스. 파스테우리의 조합 또는 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스의 조합을 포함하는 조성물이 에스. 아우레우스 집락형성을 예방할 수 있음을 발견하였다.
이들 세균 종의 조합은, 발명자가 놀랍게도 3개의 세균 종, 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스가 개별적으로 에스. 아우레우스 집락형성을 억제하고, 이때 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리는 강한 상승작용 효과를 가지며, 에스. 아우레우스 증식을 95% 넘게 억제함을 입증하였으므로 특히 유리하다. 발명자는 또한 놀랍게도 다른 코리네박테리움 종, 예를 들어 씨. 프로핀쿠움이 에스. 아우레우스 집락형성을 유사하게 억제하고, 이때 씨. 프로핀쿠움 및 에스. 파스테우리가 특히 강한 상승작용 효과를 가지며, 에스. 아우레우스 증식을 98% 넘게 억제함을 입증하였다. 더욱이, 씨. 악콜렌스는 몇몇 조건에서 에스. 파스테우리의 부재하에 증식하지 않으므로, 씨. 악콜렌스의 증식은 에스. 파스테우리에 의해 강화된다. 에스. 파스테우리, 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재는 생물막의 확립을 가능하게 함으로써 코리네박테리움 종, 예를 들어 씨. 악콜렌스 또는 씨. 프로핀쿠움의 지속성을 개선시킨다. 더욱 또한, 씨. 악콜렌스 및 에스. 에피데르미디스의 조합은 길항작용적인 경향이 있어, 에스. 에피데르미디스 단독에 의해 나타난 에스. 아우레우스 증식에 대한 억제 효과를 감소시키지만, 3개의 세균 종 모두의 조합은 또한 놀랍게도 높은 항-에스. 아우레우스 활성을 가져, 에스. 아우레우스 증식을 95% 넘게 억제한다. 에스. 에피데르미디스는 코 세균총의 필수적인 집락균이므로, 상기는 바람직하게는 약제 조합 중에 포함된다. 에스. 에피데르미디스는 현저하게는 생체내에서 보호 세균층을 제공하여, 에스. 아우레우스 재-확립의 예방에 기여할 수 있다. 따라서, 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스를 포함하는 약학 조성물은 에스. 아우레우스 집락형성을 예방하며, 특별히 유리하다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 조성물이 항생제나 소독제의 투여에 기반하지 않고, 오히려 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 세균 종의 투여에 기반하여, 추가적인 에스. 아우레우스 내성의 출현 위험을 최소화하므로 유리하다. 유리하게, 상기 조성물을 현행 방법보다는 더 오랜 기간 동안 투여할 수 있다. 유리하게, 본 발명의 조성물은 환자에서 항생제 내성 에스. 아우레우스, 예를 들어 MRSA에 의한 집락형성을 예방할 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한, 선택된 세균 종 중 어느 것도 독성 특성을 갖지 않으므로 유리하다. 훨씬 더 유리하게, 모든 선택된 세균 종은 건강한 대상체의 코 세균총 및/또는 피부에서 통상적으로 검출된다.
본 발명의 약학 조성물을 통한 집락형성의 예방은, 집락형성이 내인성 감염 및 전염 모두의 증가된 위험과 관련되므로 특히 유리하다. 따라서, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방은 에스. 아우레우스 감염의 총 수를 감소시키는 가장 유효한 방법을 나타낸다. 더욱 또한, 에스. 아우레우스의 현행 치료 방법은 항생제 내성의 증가 가능성으로 인해 예방학적으로 권장되지 않는다. 대조적으로, 본 발명에 따른 약학 조성물을 대상체에게 예방학적으로 투여할 수 있다.
"환자" 또는 "대상체"란 용어는 본 명세서에서 나이에 관계 없이 임의의 인간 개인으로서 정의된다. 바람직한 실시태양에서, 대상체는 임의의 이유로 입원한다. 보다 바람직한 실시태양에서, 대상체는 심장 또는 정형외과에 입원하거나, 이식된 장치를 갖거나, 또는 재활치료 또는 장기 요양원에 거주한다. 대상체가 병원에 입원시 에스. 아우레우스에 의한 집락이 형성되지 않은 경우, 본 발명의 약학 조성물을 에스. 아우레우스에 의한 나중의 집락형성을 예방하기 위해 예방학적으로 사용할 수 있다.
대상체는 성인이거나 아동일 수 있다. 본 명세서에서 "성인"은 적어도 16세의 개인을 지칭한다. "아동"이란 용어는 0 내지 1세의 유아 및 1 내지 8세, 8 내지 12세, 및 12 내지 16세의 아동을 포함한다. "아동"이란 용어는 출생부터 생후 28일까지의 신생아 및 생후 28일 내지 364일의 유아를 추가로 포함한다. 조성물을 성인 또는 신생아를 포함한 아동에게 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은, 항생제를 사용하는 기존의 치료 방법이 원치않는 부작용으로 인해 아동에서 제한되기 때문에 특히 유리하다.
약학적으로 허용 가능한 조성물은 치료학적으로 유효한 충분량의 각각의 세균 균주를 포함한다. 비제한적인 예로서, 약학 조성물은 적어도 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 또는 1012 콜로니 형성 단위(CFU)의 각각의 세균 균주, 또는 모두 합쳐 적어도 총 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 또는 1012 CFU의 세균 균주를 포함할 수 있다. 각각의 세균 균주의 양은 동일할 필요는 없다. 각각의 세균 균주 대 다른 하나 이상의 균주의 양의 비는 또한 약학적으로 허용 가능한 조성물이 치료학적으로 유효하도록 하는 것이다. 비제한적인 예로서, 2개의 균주가 약학 조성물 중에 포함되는 경우, 하나의 균주 대 다른 균주의 비는 1:0.01 내지 1:2, 예를 들어 1:0.02, 1:0.04, 1:0.2, 1:0.4, 또는 1:1의 비의 범위일 수 있다. 비제한적인 예로서, 3개의 균주가 약학 조성물 중에 포함되는 경우, 하나의 균주 대 각각의 다른 균주의 비는 1:0.01:0.01 내지 1:1:1, 예를 들어 1:0.02:0.02, 1:0.1:0.1, 또는 1:0.2:0.2의 비의 범위일 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 약학 조성물은 용량당 103 내지 1012 CFU의 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 103 내지 1012 CFU의 에스. 파스테우리, 및 임의로 103 내지 1012 CFU의 에스. 에피데르미디스를 포함한다. 보다 바람직하게, 조성물은 용량당 104 내지 1010 CFU의 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 104 내지 1010 CFU의 에스. 파스테우리, 및 임의로 104 내지 1010 CFU의 에스. 에피데르미디스를 포함한다. 훨씬 더 바람직하게, 조성물은 용량당 105 내지 109 CFU의 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 105 내지 109 CFU의 에스. 파스테우리 및 임의로 105 내지 109 CFU의 에스. 에피데르미디스를 포함한다.
바람직하게, 본 발명의 조성물은 용량당 적어도 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 또는 1012 CFU, 바람직하게는 적어도 1.2, 1.4, 2 또는 3 x103 CFU, 적어도 5, 5.02, 5.04, 5.2, 또는 5.4 x103 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 1.5, 2 또는 3x104 CFU, 적어도 5, 5.02, 5.04, 5.2, 또는 5.4 x104 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 1.5, 2, 또는 3 x105 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2, 또는 3 x106 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2, 또는 3 x107 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2, 또는 3 x108 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2 또는 3 x109 CFU, 적어도 1010 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2 또는 3 x1010 CFU, 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2 또는 3 x1011 CFUs, 또는 적어도 1.02, 1.04, 1.2, 1.4, 2 또는 3 x1012 CFU의 총 세균 농도를 포함한다.
"용량"이란 용어는 본 명세서에서 주어진 시간에 투여되는 약학 조성물의 양으로서 정의된다. 바람직하게, 투여된 용량은 치료학적으로 유효하다. 용량을 본 명세서에서 약학 조성물의 중량, 부피 또는 CFU에 의해 나타낼 수 있다.
"콜로니 형성 단위" 또는 "CFU"란 용어는 본 명세서에서 샘플 중 생육성 세균의 수를 가리키는데 사용되는 단위로서 정의되며, 여기에서 1 콜로니 형성 단위는 하나의 생육성 세균 세포에 상응한다.
본 발명의 약학 조성물에서, 적어도 하나의 코리네박테리움 종 대 적어도 하나의 스타필로코커스 종의 CFU의 비(예를 들어, 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 바람직하게는 씨. 악콜렌스:에스. 파스테우리의 비)는 바람직하게는 1:0.01 내지 1:2, 보다 바람직하게는 1:0.01 내지 1:1의 범위에 포함된다. 본 발명의 약학 조성물에서, 적어도 하나의 코리네박테리움 종 대 에스. 파스테우리 대 에스. 에피데르미디스의 CFU의 비는 바람직하게는 1:0.01:0.01 내지 1:1:1의 범위에 포함된다. 유리하게, 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 바람직하게는 씨. 악콜렌스 대 에스. 파스테우리 대 에스. 에피데르미디스의 비는 1:0.02:0.02 내지 1:1:1, 바람직하게는 1:0.1:0.1 내지 1:1:1, 훨씬 더 바람직하게는 1:0.2:0.2 내지 1:1:1의 범위에 포함된다.
비제한적인 예로서, 적어도 하나의 코리네박테리움 종은 약학 조성물 중의 씨. 악콜렌스, 씨. 프로핀쿠움, 씨. 슈도디프테리티쿰, 씨. 스트리아툼, 씨. 아미콜라툼, 씨. 글루타미쿰, 씨. 아우리무코숨, 씨. 투베르쿨로스테아리쿰 또는 씨. 아페르멘탄스 중에서 선택될 수 있다. 상기 언급된 종은 현저하게는 모두 비공 및/또는 피부에서 단리되었다. 상이한 코리네박테리움 종의 유사한 효과들을 현저하게는 실시예에 예시한다. 일부의 경우에, 2개 이상의 코리네박테리움 종이 약학 조성물 중에 존재할 수 있다. 예를 들어, 씨. 악콜렌스를, 예를 들어 상기 나열된 것 중 하나 이상으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 코리네박테리움 종, 예를 들어 씨. 프로핀쿠움과 병용할 수 있다.
바람직한 실시태양에 따라, 적어도 하나의 코리네박테리움 종은 씨. 악콜렌스, 씨. 프로핀쿠움, 씨. 슈도디프테리티쿰, 씨. 스트리아툼, 씨. 아미콜라툼, 씨. 글루타미쿰, 씨. 아우리무코숨, 씨. 투베르쿨로스테아리쿰 및 씨. 아페르멘탄스 중에서 선택된다. 보다 바람직한 실시태양에 따라, 적어도 하나의 코리네박테리움 종은 본 명세서에 기재된 실시태양 중 어느 하나에 따른 씨. 악콜렌스 또는 씨. 프로핀쿠움, 또는 씨. 악콜렌스와 씨. 프로핀쿠움 둘다의 조합을 포함한다. 상이한 씨. 악콜렌스 균주의 유사한 효과들을 현저하게는 실시예에 예시한다.
약학 조성물과 관련하여, 에스. 에피데르미디스의 임의의 균주를 사용할 수 있다. 비제한적인 예로서, 에스. 에피데르미디스의 균주는 비공으로부터 단리된 균주 중에서 선택될 수 있다.
약학 조성물과 관련하여, 에스. 파스테우리 종의 임의의 균주를 사용할 수 있다. 상이한 에스. 파스테우리 균주의 유사한 효과를 현저하게는 실시예에 예시한다.
약학 조성물을 에스. 아우레우스의 검출의 부재하에, 바람직하게는 피부 및/또는 비공에, 보다 바람직하게는 외비공에 예방학적으로 투여할 수 있다. 한편으로, 약학 조성물을 피부상의 또는 비공 중의 에스. 아우레우스의 검출 및 제거에 이어서 투여할 수 있다. 한편으로, 약학 조성물을 시험의 부재하에서 투여할 수 있다.
조성물을 대상체에게 1일 1회 이상(예를 들어 1, 2, 3 또는 4회) 투여할 수 있으며 수 연속일(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10일 이상), 수주(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10주 이상), 또는 수 개월(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 이상) 동안 투여할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 조성물을 바람직하게는 심장 또는 정형외과에 입원한 대상체에서 8 내지 12일 동안 하루에 1 내지 3회 투여한다. 또 다른 바람직한 실시태양에서, 조성물을 이식된 장치를 갖거나 또는 재활치료 또는 장기 요양원에 거주하는 대상체에서 수주 또는 수 개월 동안, 또는 사고 또는 수술 상처의 치유 기간 동안 투여한다. 특히 바람직한 실시태양에서, 조성물을 이식된 장치를 갖거나, 재활치료 또는 장기 요양원에 거주하거나, 또는 사고 또는 수술 상처를 치유 중인 대상체에서 1 내지 4주 동안, 또는 1 내지 6개월 동안 하루에 1 내지 3회 투여한다. 훨씬 더 바람직한 실시태양에서, 조성물을 입원 기간 동안, 이식된 장치가 존재하는 동안, 재활치료 또는 장기 요양원에 거주하는 동안, 또는 사고 또는 수술 상처를 치유하는 동안, 바람직하게는 하루에 1 내지 3회 투여한다.
한편으로, 조성물을 대상체에게 간헐적으로(예를 들어 하루 걸러, 이틀마다, 또는 필요에 따라), 또는 주기적으로(예를 들어 수일 연속해서 투여한 다음, 수일간 투여의 부재, 또는 "철회", 주기의 끝에서 반복된다) 투여할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 조성물을 8 내지 12일간 투여한 다음 철회 기간이 존재한다.
한편으로, 조성물을 요구에 따라 언제든 투여할 수 있다.
투여에 이어서 보호 효과가 관찰되는 경우, 상기 보호 효과를 유지하기 위해서 투여를 적합한대로 반복할 수 있다. 에스. 아우레우스 집락형성이 조성물의 투여에 이어서 검출되는 경우, 투여 섭생을 반복할 수 있다.
조성물의 투여 지속기간 및 빈도를 숙련가에 의해 그의 일반적인 지식을 근거로 적합화할 수 있다. 특히, 이러한 매개변수의 적합화는 에스. 아우레우스 집락형성이 대상체의 비공 및/또는 피부상에 부재하기를 원하는 시간의 길이에 따라 변할 수 있다. 예를 들어, 에스. 아우레우스 집락형성이 입원 기간 동안 부재하기를 원할 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 약학 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한 부형제"란 용어는 본 명세서에서, 약학 조성물과 상용성이고, 환자에서 원치않는 부작용을 생성시키지 않으며, 일반적으로 무독성인 것으로 간주되는 성분 또는 성분들의 조합으로서 정의된다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 가장 통상적으로는 조성물의 투여를 용이하게 하거나, 제품 저장 수명 또는 효능을 증가시키거나, 또는 조성물의 용해도 또는 안정성을 개선시키는데 관련된다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 일반적으로 약물학적으로 불활성인 것으로 간주된다. 그러나, 일부의 경우에, 부형제 자체가 또한, 예를 들어 치료된 부위(즉 투여 부위)에 에스. 아우레우스가 집락을 형성하기 더 어렵게 만듦으로써 치료 효과를 가질 수도 있다.
약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체는 종래 기술에 주지되어 있으며 이를 조성물의 목적하는 갈레노스 제형에 근거하여 숙련가가 쉽게 적합화할 수 있다. 갈레노스 제형, 투여 방법, 및 투여량을 환자의 일반적인 건강, 연령, 체중, 치료 허용성 등을 포함하여 필요에 따라 환자 치료에 적합화하기 위해서, 광범위하게 허용되는 기준을 근거로 추가로 결정할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물을 상피(예를 들어 피부) 및/또는 점막에 국소적으로 투여할 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 약학 조성물을 비공, 부비강에, 또는 액와, 서혜부, 겨드랑이 및 직장주변 영역에, 또는 그 밖의 다른 어딘가의 피부 또는 점막상에 투여할 수 있다. 바람직한 실시태양에 따라, 조성물을 비공에 투여한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "비공"이란 용어는 외비공 또는 콧구멍 및 비강을 모두 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 약학 조성물을 외비공 또는 콧구멍에 투여한다.
에스. 아우레우스는 인체상의 다양한 부위에서 집락을 형성할 수 있지만, 그의 주요한 생태적 지위는 외비공이며, 이로부터 상기가 다른 조직이나 장기로 확산될 수 있는 것으로 인식되고 있다(Kluytmans et al., 1997). 피부(예를 들어 팔뚝 피부)처럼, 외비공은 털, 피지선 및 땀샘과 함께, 피부같은, 완전히 각질화된 편평 상피세포의 내층이 있다. 더욱이 유전자 연구는 상기 2개의 물리적으로 별개인 지위로부터의 미생물군집이 동일한 조성 패턴을 공유함을 입증하였다(Yan et al., 2013). 따라서, 에스. 아우레우스 집락형성은 피부 및 외비공에서 유사하며, 이때 피부는 더욱 또한 상기 2개의 지위 모두에 대한 탁월하고 용이하게 접근가능한 모델을 나타낸다.
유리하게, 본 발명의 조성물은 피부 및/또는 점막에 투여하기에 적합한 임의의 약학 제제, 예를 들어 패치, 겔, 크림, 로션, 연고, 필름 또는 납고를 포함한다. 유리하게, 조성물의 점도 또는 질감을 적용 또는 효능(예를 들어 접촉 시간)이 개선되도록 조절한다. 유리하게, 조성물은 코 상피에 부작용을 야기하지 않도록 되어 있다. 훨씬 더 유리하게, 조성물의 pH 및/또는 삼투압은 비공의 경우와 유사하다.
코 상피의 pH는 일반적으로 5.5 내지 7.5의 범위 이내이므로, 본 발명의 약학 조성물은 유리하게는 상기 범위의 pH를 갖는다.
본 발명의 조성물에 포함되는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제는 하나 이상의 산화방지제, 완충제, 증량 물질, 현탁제, 용해제, 동결보호제, 기질 형성 첨가제, 필름 형성제, 보습제, 희석제, 용매, 가소제, 유성/유화/수성 염기, 겔화제, 보존제, 긴장성 조절제, 비히클 및 안정제를 추가로 포함할 수 있다.
비제한적인 예로서, 본 발명의 조성물은 숙련가에게 주지된 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함할 수 있다. 상기 적어도 하나의 부형제는 수, 글리세린, 무기 오일(예를 들어 바셀린, 파라핀), 동물성 오일 또는 지방(예를 들어 밀랍 또는 양모지), 반-고체 탄화수소(유성), 또는 식물성 오일(예를 들어 코코넛 오일, 망고 버터, 팜유, 대두유, 올리브유, 시아 버터 및 코코아 버터), 글리세라이드, 잔탄검, 락토스, 덱스트란, 만니톨, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시에틸 셀룰로스, 나트륨 카복시 메틸셀룰로스, 카복시프로필 메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 히아루론산, 전분-계 생분해성 중합체, 트라가칸트, 펙틴, 키틴 및 키토산 유도체, 카라기난, 구아검, 아가, 알기네이트, 젤라틴, 피브린, 알부민, 포스페이트 완충된 염수, 폴리카보필, 수소화된 팜유, 글리세라이드, 카보머 934P, 마크로골, 메틸 파라벤, 글리세릴 폴리메트아크릴레이트, 시아노아크릴레이트, 트리에탄올아민, 소르브산, NaOH, 카르보폴(예를 들어 카르보폴 974P), 디아졸리디닐 우레아, 폴록사머 184, 디메티콘, 셀룰로스 검, 락트산, 메틸 파라벤, 프로필파라벤, 폴리비틸 피롤리돈, 폴리비닐 피롤리돈-비닐 아세테이트, 폴리비닐 알콜, 폴리아크릴산, 폴리아크릴아미드, 폴리알케닐 폴리에테르와 가교결합된 아크릴산의 단독- 및 공중합체, 수산화 나트륨, 염화 나트륨, 및 염화 칼륨 등으로부터 선택될 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 약학적으로 허용 가능한 조성물은 겔, 바람직하게는 생체접착성 또는 점막접착성 겔이다. "겔"이란 용어는 본 명세서에서 액체가 사이에 침투되어 반고체 물질을 생성시키는 입자의 분산액으로서 정의된다. "생체접착성 겔"이란 용어는 본 명세서에서 생물학적 표면(예를 들어 중층 편평 상피, 예를 들어 피부 또는 외비공)에 부착하는 겔로서 정의된다. "점막접착성 겔"이란 용어는 점액성 코트(예를 들어 점막)에 부착하는 겔로서 정의된다.
바람직한 실시태양에서, 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제는 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 하이드록시에틸 셀룰로스, 키토산 및 그의 유도체, 예를 들어 키틴, 카라기난 및 그의 유도체, 알기네이트 및 그의 유도체, 펙틴 및 그의 유도체, 폴리알케닐 폴리에테르와 가교결합된 아크릴산의 단독- 및 공중합체, 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 겔화제이다.
긴장성 조절제가 존재하는 경우, 상기 긴장성 조절제는 바람직하게는 염화 칼륨, 만니톨, 덱스트로스, 글리세린, 또는 염화 나트륨 중에서 선택된다.
바람직한 실시태양에서, 약학 조성물은 적어도 하나의 겔화제 및 적어도 하나의 긴장성 조절제를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 염화 나트륨은 약학 조성물 중에 등장성 농도로 존재한다.
비히클이 존재하는 경우, 상기 비히클은 바람직하게는 수, 수 혼화성 용매(예를 들어 글리세린), 또는 수 불혼화성 용매(예를 들어 식물성 오일) 중에서 선택된다.
보존제가 존재하는 경우, 상기 보존제는 바람직하게는 벤질 알콜, 크레졸, 벤조산, 페놀, 파라벤 및 소르브산 중에서 선택된다.
안정제가 존재하는 경우, 상기 안정제는 바람직하게는 계면활성제, 중합체, 폴리올, 폴록사머, 알부민, 젤라틴, 트레할로스, 단백질, 당, 폴리비닐피롤리돈, N-아세틸-트립토판("NAT"), 카프릴레이트(즉, 나트륨 카프릴레이트), 폴리소르베이트(즉 P80), 아미노산, 및 2가 금속 양이온, 예를 들어 아연 중에서 선택된다.
본 발명의 추가의 태양에 따라, 세균을 동결건조 또는 동결-건조시킨다. "동결건조"는 감압하에서 승화에 의해 동결된 세균 배양물로부터 수분을 제거하는, 숙련가에게 주지된 공정이다. 일반적인 방법은 문헌["Lyophilization: Introduction and Basic Principles" (Jennings, 1999)]에 기재되어 있다. 상기 공정은 하기의 단계를 포함한다: 생육성 세균을 포함하는 수성 제형을 제공하고, 동결시키고, 1차 건조시키고(승화), 2차 건조시킨다(탈착). 동결건조된 세균을 상기 공정으로부터 수득한다.
바람직한 방식에 따르면, 세균을 동결보호제의 존재하에서 동결건조시킨다. 동결보호제는 세포내 또는 세포외 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 바람직하게, 상기 동결보호제는 펩톤, 글리세롤, 락토스, 젤라틴, 글루코스, 슈크로스, 트레할로스, 덱스트란, 말토덱스트린, 아도니톨, 및 나트륨 글루타메이트 중에서 선택된다.
바람직한 방식에 따르면, 세균을 기질 형성 첨가제의 존재하에서 동결건조시킨다. 바람직하게, 상기 기질 형성 첨가제는 만니톨 또는 탈지 우유이다.
바람직하게, 동결건조된 세균을 냉장 온도에서(예를 들어 +3 내지 +6℃) 또는 실온에서(예를 들어 20 내지 25℃) 보관한다.
바람직하게, 각각의 세균 종을 별도로 동결건조시킨다. 첫 번째 바람직한 실시태양에 따라, 각각의 동결건조된 세균 종을 사용 직전에 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제로 별도로 환원(reconstitution)시킨다. 이어서 환원된 세균을 개별적으로 투여하거나 또는 투여에 앞서 혼합할 수 있다. 두 번째 바람직한 실시태양에 따라, 모든 세균 종을 동결건조에 이어서 함께 혼합한다. 상기 바람직한 실시태양에서, 동결건조된 세균을 사용 직전에 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 환원시킨다. 세 번째 바람직한 실시태양에 따라, 모든 세균 종을 동결건조에 앞서 함께 혼합한다. 상기 바람직한 실시태양에서, 혼합물을 사용 직전에 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제로 환원시킨다.
동결건조된 세균 조성물의 "환원"은 본 명세서에서 조성물을 특정량의 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제(예를 들어 액체 또는 겔)와 접촉시키는 것으로서 정의되며, 상기 부형제는 동결건조물을 수화시킨다. 바람직하게, 혼합물을 완전한 수화를 보장하기 위해 교반하거나 휘젓는다. 바람직하게, 환원을 17℃ 내지 37℃의 범위 이내에서, 보다 바람직하게는 실온(20℃ 내지 25℃) 이상에서, 훨씬 더 바람직하게는 실온에서 수행한다.
바람직하게, 조성물을 사용 직전에 환원시킨다. 환원된 조성물을 바로 투여하지 않는 경우, 환원 조성물을 사용시까지 냉장보관하는 것이 바람직하다. 환원된 조성물을 바로 투여하지 않고 냉장보관하지 않는 경우, 환원 조성물을 환원 당일에 투여하는 것이 바람직하다. 숙련가는 그의 일반적인 지식에 따라 적합한 환원 및 보관 조건을 쉽게 선택할 수 있다.
첫 번째 바람직한 실시태양에 따라, 별도로 환원된 세균을 차례로 하나씩 별도로 투여한다. 두 번째 바람직한 실시태양에 따라, 별도로 환원된 세균을 동시 적용을 위해 투여에 앞서 혼합한다. 세 번째 바람직한 실시태양에 따라, 함께 환원된 세균을 동시에 투여한다.
한편으로, 생육성 세균을 약 +4℃ 내지 +8℃에 포함된 온도에서(예를 들어 수일간), 약 -25℃ 내지 -40℃에 포함된 온도에서(예를 들어 수주간), 또는 약 -72℃ 내지 -85℃에 포함된 온도에서(예를 들어 수년간) 보관할 수 있다. 동결건조된 세균을 또한 환원에 이어서 수일간 +4℃ 내지 +8℃에 포함된 온도에서 보관할 수 있다. 이들 각각의 온도 범위에서 적합한 보관 조건은 당해 분야의 숙련가에게 주지되어 있다.
본 발명은 에스. 아우레우스 집락형성의 예방에 사용하기 위한 약학 조성물을 추가로 포함한다. 상기 에스. 아우레우스 집락형성의 예방에 사용하기 위한 약학 조성물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물의 모든 태양을 포함한다. 바람직하게, 본 발명은, 보다 바람직하게는 외비공에의 조성물의 투여를 포함하는, 에스. 아우레우스에 의한 코 집락형성(nasal colonization)의 예방에 사용하기 위한, 및/또는 에스. 아우레우스에 의한 피부 집락형성의 예방에 사용하기 위한 약학 조성물을 포함한다. 에스. 아우레우스에 의한 피부 집락형성은 유리하게는 상기 집락형성에 대해 증가된 감수성을 갖는 대상체, 예를 들어 습진, 예를 들어 아토피성 피부염을 갖거나 또는 당뇨병을 갖는 대상체에서 예방된다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명은 항생제-내성 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방에 사용하기 위한, 바람직하게는 메티실린-내성 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방에 사용하기 위한 약학 조성물을 포함한다. 보다 바람직하게, 약학 조성물을 메티실린-내성 에스. 아우레우스에 의한 코 집락형성의 예방에 사용한다. "메티실린-내성"이란 용어는 메티실린의 살균 효과에 대한 세균 균주의 감수성의 결여를 가리킨다. MRSA 균주는 추가적인 항생제(예를 들어 페니실린, 반코마이신, 무피로신, 퀴놀론 등)에 대한 내성을 포함할 수 있다. 한편으로, 본 발명의 약학 조성물을 메티실린-민감성 에스. 아우레우스에 의한 코 집락형성의 예방에 사용할 수 있다. 메티실린-민감성 균주는 메티실린의 살균 효과에는 감수성이지만 다른 항생제에 대한 내성을 포함할 수 있다.
"에스. 아우레우스에 의한 집락형성"이란 용어는 본 명세서에서 신체 표면상의 에스. 아우레우스의 적어도 하나의 균주의 존재로서 정의되지만, 검출 가능한 면역 반응을 유도하지 않고/않거나 조직을 침범하지 않거나 달리 조직 손상을 야기하지 않는다. 한편으로, 집락형성은 감염 부재하의 에스. 아우레우스의 존재로 간주될 수 있다. 집락형성은 일시적이거나, 간헐적이거나, 장기적이거나 또는 심지어 일부의 경우에 영구적일 수 있다. 특히, 에스. 아우레우스에 의한 집락형성은 비공, 부비동, 목구멍, 위장관에서, 또는 액와, 서혜부, 겨드랑이 및 직장주변 영역상에서, 상처상에서, 또는 그 밖의 다른 어딘가의 피부 또는 점막상에서 발생할 수 있다. 에스. 아우레우스 집락형성은 나중의 에스. 아우레우스 감염에 대한 위험 인자이다.
"에스. 아우레우스에 의한 감염"이란 용어는 본 명세서에서 검출 가능한 면역 반응을 유도하고/하거나 통제할 수 없는 세균 증식을 겪는 신체 표면상의 에스. 아우레우스의 적어도 하나의 균주의 존재로서 정의된다. 면역 반응은 특이적이거나 비-특이적(예를 들어 발열)일 수 있다. 에스. 아우레우스 감염은 피부 및 연조직 감염(SSTI), 예를 들어 농양(abscesses), 종기(furuncles), 부스럼(carbuncles), 종기(boils), 농가진(impetigo), 세균성 엉김(bacterial focculitis) 또는 봉와직염(cellulitis), 맥립종(stys), 발진(rash), 스타필로코커스 열상 피부 증후군(staphylococcal scalded skin syndrome), 괴사성 근막염(necrotizing fasciitis), 폐렴(pneumonia), 상처 감염, 심내막염(endocarditis), 괴저(gangrene), 골수염(osteomyelitis), 화농성 관절염(septic arthritis), 패혈증(septicemia) 등을 야기할 수 있다.
"에스. 아우레우스에 의한 코 집락형성"이란 용어는 본 명세서에서 보다 구체적으로 비공 중 에스. 아우레우스 세균의 존재로서 정의된다.
"코 탈집락"이란 용어는 본 명세서에서 비공으로부터 에스. 아우레우스의 감소 또는 근절 방법으로서 정의된다. 완전한 탈집락은 본 명세서에서 적어도 연속해서 2주 동안 비공 중 에스. 아우레우스의 검출 부재로서 정의된다. 부분 탈집락은 본 명세서에서 이전의 비공 중 에스. 아우레우스의 수준에 비해, 적어도 연속해서 2주 동안 비공 중 에스. 아우레우스의 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 및 훨씬 더 바람직하게는 적어도 99%까지의 감소로서 정의된다.
비공 중 에스. 아우레우스 세균의 존재는 외비공으로부터, 예를 들어 코 면봉채취를 통해 샘플을 수득하고 에스. 아우레우스를 검출함을 포함하는, 당해 분야에 주지된 방법에 의해 검출될 수 있다. 에스. 아우레우스를 종 및/또는 균주 수준에서 검출할 수 있다. 검출 방법은 예를 들어 배양-기반 방법(예를 들어 선택성 배지, 예를 들어 색원성 및/또는 혈액 한천상에 샘플 도말) 및 분자 진단 방법(예를 들어 PCR, 실시간 PCR, 리보타이핑, 펄스-장 겔 전기영동, 무작위 증폭 다형성 DNA 서열분석, BOX-A1R-기반 반복적 유전자 회귀성-PCR(BOX-PCR), 다중유전자좌 서열 타이핑, 전체 게놈 서열분석 등)을 포함한다.
또 다른 태양에 따라, 본 발명은 치료학적으로 유효한 용량의 본 발명에 따른 약학 조성물을 투여함을 포함하는, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방이 필요한 인간 대상체에서 상기 집락형성의 예방 방법을 포함한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 약학 조성물의 모든 태양이 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법에 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "예방"이란 용어는 배타적인 절대적 용어를 의미하지 않는다. 실제로, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "예방"이란 용어는 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 지연, 에스. 아우레우스 집락형성 수준의 감소, 또는 에스. 아우레우스 집락형성 빈도의 감소일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료학적으로 유효한 용량"이란 용어는 치료된 부위에서 에스. 아우레우스 집락형성을 적어도 부분적으로, 바람직하게는 완전히 예방하기에 충분한 약학 조성물의 양을 지칭한다. 에스. 아우레우스 집락형성의 예방과 관련하여, 상기 용어는 현저하게 에스. 아우레우스 집락형성을 지연시키거나 또는 에스. 아우레우스 집락형성의 빈도를 감소시키기에 충분한 양을 지칭한다. 치료학적으로 유효한 용량을 하나 이상의 투여로 투여할 수 있다. 일부의 경우에, 약학 조성물을 사용하여 단일 대상체내의 다수의 부위에서(예를 들어 피부 및 외비공 모두에) 에스. 아우레우스 집락형성을 예방할 수 있다. 이 경우에, 치료학적으로 유효한 용량을 각각의 부위에, 적합한 투여 스키마에 따라 투여한다.
상응하게, 본 발명은 본 명세서에 기재된 양상에 근거한 에스. 아우레우스에 의한 집락형성을 예방하기 위한 약학 조성물의 용도를 포함한다.
첫 번째 태양에 따라, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 코리네박테리움 종 대 에스. 파스테우리의 비가 1:0.1 내지 1:2의 범위에 포함되거나, 또는 코리네박테리움 종 대 에스. 파스테우리 대 에스. 에피데르미디스의 비가 1:0.01:0.01 내지 1:1:1의 범위에 포함되는 약학 조성물의 투여를 포함한다. 두 번째 태양에 따라, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 용량당 적어도 103 CFU의 코리네박테리움 종, 적어도 103 CFU의 에스. 파스테우리, 및 임의로 적어도 103 CFU의 에스. 에피데르미디스를 갖는 약학 조성물의 투여를 포함한다. 바람직하게, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 용량당 103 내지 1012 CFU의 코리네박테리움 종, 103 내지 1012 CFU의 에스. 파스테우리, 및 임의로 103 내지 1012 CFU의 에스. 에피데르미디스를 갖는 약학 조성물의 투여를 포함한다. 바람직한 태양에 따라, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 용량당 총 적어도 103, 바람직하게는 적어도 1.2, 1.4, 2 또는 3x103 CFU를 포함하는 약학 조성물의 투여를 포함한다. 바람직하게, 상기 약학 조성물을 동결건조 또는 동결-건조시킨다.
바람직하게, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함하는 약학 조성물의 투여를 포함한다. 첫 번째 태양에 따라, 상기 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제는, 바람직하게는 펩톤, 글리세롤, 락토스, 젤라틴, 글루코스, 슈크로스, 트레할로스, 덱스트란, 말토덱스트린, 아도니톨 및 나트륨 글루타메이트 중에서 선택된 동결보호제이다. 두 번째 태양에 따라, 상기 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제는 겔화제이다. 상기 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 상기 나열된 것들 중에서, 또는 당해 분야에 주지된 부형제 중에서 선택할 수 있다.
바람직하게, 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 약학 조성물의 외비공 및/또는 피부에의 투여를 포함한다.
바람직하게, 본 발명의 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 에스. 아우레우스 코 집락형성을 예방한다. 바람직하게, 본 발명의 에스. 아우레우스 집락형성의 예방 방법은 MRSA 또는 MSSA 코 또는 피부 집락형성을 예방한다.
본 발명의 추가의 목적은
a) 에스. 아우레우스가 비공 중에 또는 피부상에 존재하는 지의 여부를 측정하고;
b) 에스. 아우레우스가 검출되지 않는 경우 대상체에게 본 발명의 약학 조성물을 투여함
을 포함하는, 상기 대상체에서 에스. 아우레우스에 의한 코 또는 피부 집락형성을 예방하는 방법이다.
본 발명은 또한 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방을 위한 약제의 제조를 위한 본 발명에 따른 조성물의 용도를 포함한다.
본 발명은 또한, 바람직하게는 비공 중의 및/또는 피부상의 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방에서 본 명세서에 기재된 실시태양 중 어느 하나에 따른 조성물의 용도를 포함한다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 조성물을 투여함을 포함하는, 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방이 필요한 대상체에서, 바람직하게는 비공 중의 및/또는 피부상의 상기 집락형성의 예방 방법을 포함한다.
본 명세서에 제공된 방법 중 어느 하나의 대상체는 상기 조성물의 용도와 관련하여 앞서 식별된 임의의 대상체일 수 있다. 특히, 상기 대상체는 심장 또는 정형외과에 입원한 대상체, 이식된 장치를 갖는 대상체, 재활치료 또는 장기 요양원에 거주하는 대상체, 사고 또는 수술 상처를 갖는 대상체, 습진, 예를 들어 아토피성 피부염을 갖는 대상체, 또는 당뇨병을 갖는 대상체일 수 있다.
본 발명은 추가의 목적을 위해 본 명세서에 기재된 조성물, 바람직하게는 약학 조성물, 코 용도에 적합한 겔 및 코 투여를 위한 수단을 포함하는 키트(kit)를 갖는다.
바람직하게, 키트는
a) 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리, 및 임의로 에스. 에피데르미디스, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물(상기 조성물은 동결건조물 제형을 갖는다),
b) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 성분,
c) 상기 조성물의 코 투여를 위한 수단, 및
d) 임의로, 사용 안내문
을 포함한다.
바람직하게, b)의 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 성분은 상기 동결건조물 또는 겔화제의 환원을 위한 수용액이다. 보다 바람직하게, b)의 성분은 환원을 위한 수용액 및 약학적으로 허용 가능한 겔화제를 모두 포함한다.
코리네박테리움 종은 바람직하게는 키트 중의 씨. 악콜렌스, 씨. 슈도디프테리티쿰, 씨. 스트리아툼, 씨. 아미콜라툼, 씨. 글루타미쿰, 씨. 아우리무코숨, 씨. 투베르쿨로스테아리쿰, 씨. 아페르멘탄스, 및/또는 씨. 프로핀쿠움 중에서 선택될 수 있다. 씨. 악콜렌스를, 현저하게는 키트 중의 적어도 하나의 다른 코리네박테리움 종, 예를 들어 씨. 프로핀쿠움과 병용할 수 있다. 바람직한 실시태양에 따라, 씨. 악콜렌스를 키트 중의 씨. 프로핀쿠움으로 교체한다.
본 명세서는 약학 조성물이 상피 또는 점막에, 바람직하게는 비공에 적용되도록 상기 약학 조성물을 분배하기 위한 수단을 또한 제공한다. "수단"이란 용어는 본 명세서에서 국소 적용을 위한 임의의 장치로서 정의된다. 바람직하게, 약학 조성물의 분배 수단은 또한 동결건조된 세균(사용되는 경우)을 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합한다.
약학 조성물이 단일 수단 중에 수회 용량으로서 존재하는 경우에, 단일 용량을 측정하기 위한 특수 수단을 추가로 포함할 수 있다. 일례로서, 단일 용량은 디스펜서의 1 또는 2회 분배와 균등할 수 있다.
도 1: 에스. 파스테우리 또는 에스. 에피데르미디스와의 공-배양물에서 씨. 악콜렌스의 증식
씨. 악콜렌스 AF2345의 세균 증식을 실시예 2에 기재된 방법에 따라, (A) 에스. 파스테우리 AF2653 또는 (B) 에스. 에피데르미디스 AF2302와의 공-배양물에서 측정하였다. 씨. 악콜렌스 콜로니가 동일한 배율에서, 72시간(A) 또는 7일(B) 후에 관찰되었다. 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 스폿을 화살표로 나타낸다. 씨. 악콜렌스 콜로니가 에스. 파스테우리와의 공-배양물에서 육안으로 관찰되지만, 에스. 파스테우리 스폿으로부터의 거리가 증가함에 따라 작아진다. 대조적으로, 에스. 에피데르미디스와의 공-배양물에서 증식된 씨. 악콜렌스 콜로니는 심지어 도 1A의 에스. 파스테우리 스폿으로부터의 거리에서 관찰된 경우보다 훨씬 더 작고, 육안으로 볼 수 없다.
도 2: 씨. 악콜렌스와의 혼합 생물막
씨. 악콜렌스 AF2345 단독 또는 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스, 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하의 단일 또는 혼합 생물막의 부분으로서의 세균 증식을 실시예 8에 기재된 방법에 따라 평가하였다. 에스. 파스테우리 단독 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하에서 증식이 관찰되었다. 이들 2개 조건간에 유의미한 증식의 차이는 발생하지 않았다(p=0.0651)
도 3: 씨. 프로핀쿠움과의 혼합 생물막
씨. 프로핀쿠움 AF1882 단독 또는 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스, 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하의 단일 또는 혼합 생물막의 부분으로서의 세균 증식을 실시예 8 및 9에 기재된 방법에 따라 평가하였다. 모든 조건에서 증식이 관찰되었다. 에스. 파스테우리 단독 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하에서 씨. 프로핀쿠움의 유의미한 증식의 차이는 발생하지 않았다(p=0.0748).
도 4: 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 공-배양시 세포외 기질의 생성
세균을 TSB가 충전된 96-웰 플레이트의 웰에서 단독으로 또는 다양한 조합으로 증식시켰다. 37℃에서 48시간 배양 후에 용해된 크리스탈 바이올렛-염색된 세포외 기질의 광학 밀도를 595 ㎚에서 측정함으로써 생물막 형성을 추정하였다. 세포외 기질의 생성은 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 공-배양시 현저하게 증가하였다. 가장 큰 효과는 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합에 의해 관찰되었다(씨. 악콜렌스 단독에 대해 ∼7.6배 증가, 에스. 파스테우리 단독에 대해 12배 증가 및 에스. 에피데르미디스 단독에 대해 3.1배 증가).
도 5: 중층 편평 상피의 생체내 모델에서 에스. 아우레우스 집락형성의 예방
(A) 건강한 자원자의 팔뚝 피부상의 하이드로콜로이드 패치의 사진. 천공된 구멍(피부 웰에 상응한다)이 폴리우레탄 멸균 절개 필름으로 덮인, 시험하고자 하는 세균 현탁액을 수용하였다. (B) 각각 웰당 2x106 CFU의 용량으로 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스의 단독 또는 병행 접종시의 에스. 아우레우스 29213(피부 웰당 5x103 CFU)의 억제. 에스. 아우레우스를 단독으로 양성 대조용으로서 접종하였다. [(임계-CT)/임계] 비를 각각의 시험 조건에 대해 플롯팅한다.
씨. 악콜렌스 AF2345의 세균 증식을 실시예 2에 기재된 방법에 따라, (A) 에스. 파스테우리 AF2653 또는 (B) 에스. 에피데르미디스 AF2302와의 공-배양물에서 측정하였다. 씨. 악콜렌스 콜로니가 동일한 배율에서, 72시간(A) 또는 7일(B) 후에 관찰되었다. 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 스폿을 화살표로 나타낸다. 씨. 악콜렌스 콜로니가 에스. 파스테우리와의 공-배양물에서 육안으로 관찰되지만, 에스. 파스테우리 스폿으로부터의 거리가 증가함에 따라 작아진다. 대조적으로, 에스. 에피데르미디스와의 공-배양물에서 증식된 씨. 악콜렌스 콜로니는 심지어 도 1A의 에스. 파스테우리 스폿으로부터의 거리에서 관찰된 경우보다 훨씬 더 작고, 육안으로 볼 수 없다.
도 2: 씨. 악콜렌스와의 혼합 생물막
씨. 악콜렌스 AF2345 단독 또는 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스, 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하의 단일 또는 혼합 생물막의 부분으로서의 세균 증식을 실시예 8에 기재된 방법에 따라 평가하였다. 에스. 파스테우리 단독 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하에서 증식이 관찰되었다. 이들 2개 조건간에 유의미한 증식의 차이는 발생하지 않았다(p=0.0651)
도 3: 씨. 프로핀쿠움과의 혼합 생물막
씨. 프로핀쿠움 AF1882 단독 또는 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스, 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하의 단일 또는 혼합 생물막의 부분으로서의 세균 증식을 실시예 8 및 9에 기재된 방법에 따라 평가하였다. 모든 조건에서 증식이 관찰되었다. 에스. 파스테우리 단독 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다의 존재하에서 씨. 프로핀쿠움의 유의미한 증식의 차이는 발생하지 않았다(p=0.0748).
도 4: 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 공-배양시 세포외 기질의 생성
세균을 TSB가 충전된 96-웰 플레이트의 웰에서 단독으로 또는 다양한 조합으로 증식시켰다. 37℃에서 48시간 배양 후에 용해된 크리스탈 바이올렛-염색된 세포외 기질의 광학 밀도를 595 ㎚에서 측정함으로써 생물막 형성을 추정하였다. 세포외 기질의 생성은 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 공-배양시 현저하게 증가하였다. 가장 큰 효과는 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합에 의해 관찰되었다(씨. 악콜렌스 단독에 대해 ∼7.6배 증가, 에스. 파스테우리 단독에 대해 12배 증가 및 에스. 에피데르미디스 단독에 대해 3.1배 증가).
도 5: 중층 편평 상피의 생체내 모델에서 에스. 아우레우스 집락형성의 예방
(A) 건강한 자원자의 팔뚝 피부상의 하이드로콜로이드 패치의 사진. 천공된 구멍(피부 웰에 상응한다)이 폴리우레탄 멸균 절개 필름으로 덮인, 시험하고자 하는 세균 현탁액을 수용하였다. (B) 각각 웰당 2x106 CFU의 용량으로 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스의 단독 또는 병행 접종시의 에스. 아우레우스 29213(피부 웰당 5x103 CFU)의 억제. 에스. 아우레우스를 단독으로 양성 대조용으로서 접종하였다. [(임계-CT)/임계] 비를 각각의 시험 조건에 대해 플롯팅한다.
실시예
하기의 실시예를 본 발명의 바람직한 실시태양의 설명을 위해 포함시킨다. 하기의 실시예 및 첨부되는 도면에 제시되거나 도시된 모든 발명의 요지는 제한의 의미가 아닌 예시로서 해석되어야 한다. 하기의 실시예는 당해 분야의 숙련가에 의해 정해질 수 있는 임의의 대안, 균등물 및 변형을 포함한다.
이들 실시예에 사용되는 전형적인 세균 균주를 하기 표 I에 상세히 나타낸다. 실시예에 사용하기 위해 선택된 균주(표 1에 나열됨)는 주어진 종의 모든 균주의 전형적인 특징을 갖는 참조 균주를 포함한다.
[표 I] 사용된 균주.
실시예 1: 씨. 악콜렌스에 의한 에스. 아우레우스의 증식의 시험관내 억제
생체내 에스. 아우레우스 집락형성에 대한 씨. 악콜렌스의 모순되는 효과를 기술하는 종래 기술에 비추어, 에스. 아우레우스 증식에 대한 씨. 악콜렌스의 효과를 본 실시예에서 시험관내에서 처음으로 평가하였다.
물질 및 방법
35+/-2℃에서 콜럼비아(Columbia) 5% 양 혈액 한천상에서 48h-배양으로부터 제조된 씨. 악콜렌스의 1.0 McFarland 현탁액 250 ㎕를, 
5x104 CFU/㎠를 획득하기 위해 90-㎜ 직경 혈액 한천 플레이트상에 면봉으로 문질러 접종하였다. 250 ㎕의 염수를 음성 대조용으로서 접종하였다. 하나의 50 ㎜ 0.2 ㎛ 트랙-에치 필터를 씨. 악콜렌스 현탁액의 상부에 놓았다. 35+/-2℃에서 콜럼비아 -5% 양 혈액 한천상에서의 24h-배양으로부터 제조되고 10 ㎕ 중에 100 CFU, 10 CFU 또는 1 CFU의 표적 수를 함유하는 에스. 아우레우스 현탁액을 50-㎜ 직경 필터상에 스폿팅하였다.
35℃에서 48h 동안 배양 후에, 필터상의 에스. 아우레우스 콜로니를 수확하고 세균을 염수 중에 재현탁하였다(2.5 내지 10 ㎖). 이어서 각각의 콜로니 중에 존재하는 에스. 아우레우스 CFU의 수를 600 ㎚에서 광학 밀도(OD)를 측정함으로써 측정하였다. 씨. 악콜렌스의 존재하에서 에스. 아우레우스의 증식 억제를 정량분석하기 위해서, 씨. 악콜렌스의 존재 또는 부재하의 OD/콜로니를 측정하였다. 각 실험 세트를 적어도 2회 반복하였다.
결과
씨. 악콜렌스는 놀랍게도, 시험된 씨. 악콜렌스 및 에스. 아우레우스 균주에 따라 에스. 아우레우스 증식의 27.78% 내지 51.93%의 감소의 원인이었다(표 II를 참조하시오). 또한 놀랍게도, MRSA(에스. 아우레우스 USA300) 및 MSSA(에스. 아우레우스 AF3147 및 AF2419) 균주 모두의 증식이 현저하게 억제되었다. 증식 억제 퍼센트는, 동일한 씨. 악콜렌스 균주의 존재하에서 상이한 에스. 아우레우스 균주간에 증식 억제의 유의수준의 차이가 관찰되지 않았기 때문에, 사용된 씨. 악콜렌스 균주에 따라 변하는 것으로 보인다.
[표 II]
실시예 2: 에스. 파스테우리와의 공-배양물에서 씨. 악콜렌스의 증식 촉진
이어서 본 발명자들은 시험관내에서 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리의 상호작용을 연구하였다. 씨. 악콜렌스에 의한 증식에 대한 에스. 파스테우리의 효과를 플레이트 카운트 한천(PCA)을 사용하여 연구하였으며, 상기 PCA는 에스. 파스테우리의 증식은 허용하지만 씨. 악콜렌스의 증식은 허용하지 않는다. 에스. 에피데르미디스를 대조용 종으로서 사용하였다.
물질 및 방법
실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 씨. 악콜렌스(균주 AF2345)의 0.5 McFarland 현탁액의 10-2 희석액 500 ㎕를 PCA 배지상에 접종하였다. 완전히 건조 후에, 35+/-2℃에서 콜럼비아 -5% 양 혈액 한천상에서 24h-배양으로부터 제조된 에스. 파스테우리(균주 AF2653) 또는 에스. 에피데르미디스(균주 AF2302)의 1.0 McFarland 현탁액 10 ㎕를 플레이트의 중앙에 스폿팅하였다. 10 ㎕의 멸균 염수를 음성 대조용으로서 스폿팅하였다. 씨. 악콜렌스의 증식을 35℃에서 72시간의 배양 후에 측정하였다. 육안으로 볼 수 있는 콜로니의 존재에 의해 증식을 측정하였다.
결과
씨. 악콜렌스의 증식이 72시간의 배양 후에 에스. 파스테우리 스폿의 주변에서 검출된 반면(도 1A), 에스. 에피데르미디스 스폿(도 1B) 또는 대조용 스폿(도시 안 됨) 주변에서는 부전형 콜로니가 검출되었다. 에스. 파스테우리 스폿의 주변에서 검출된 씨. 악콜렌스 콜로니는 육안으로 검출될 수 있었지만, 에스. 에피데르미스 스폿 주변의 부전형 콜로니는 확대 없이는 검출될 수 없었다. 보다 오랜 기간 동안 에스. 에피데르미스와의 공-배양물에서 씨. 악콜렌스의 배양은, 심지어 플레이트를 총 7일까지 배양한 경우에조차 씨. 악콜렌스 증식을 추가로 개선시키지 않았다. 따라서, 에스. 에피데르미디스와 대조적으로, 에스. 파스테우리는 씨. 악콜렌스의 증식을 촉진한다.
실시예 3: 시험관내에서 에스. 파스테우리와 함께 씨. 악콜렌스에 의한 에스. 아우레우스의 증식의 상승작용적 억제
에스. 파스테우리가 씨. 악콜렌스 증식을 촉진하였으므로, 본 발명자들은 에스. 파스테우리 및 씨. 악콜렌스의 단독 또는 병행의 항-에스. 아우레우스 활성을 연구하였다. 에스. 에피데르미디스의 항-에스. 아우레우스 활성을 또한 단독으로 또는 씨. 악콜렌스와 함께 시험하였다.
물질 및 방법
각각의 균주 단독 또는 병용에 대해서, 35+/-2℃에서 콜럼비아 -5% 양 혈액 한천상의 배양물(씨. 악콜렌스: 48h 배양; 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스: 24h 배양)로부터 제조된 1.0 McFarland 현탁액 250 ㎕를, 90-㎜ 직경 혈액 한천 플레이트(
5x104 CFU/㎠)상에 면봉으로 문질러 접종하였다. 250 ㎕의 염수를 음성 대조용으로서 접종하였다. 하나의 50 ㎜ 0.2 ㎛ 트랙-에치 필터를 스폿의 상부에 놓았다. 10 ㎕ 중에 100 CFU, 10 CFU 또는 1 CFU의 표적 수를 함유하는 에스. 아우레우스 USA300 현탁액을 50-㎜ 직경 필터상에 스폿팅하였다. 달리 물질 및 방법은 실시예 1에 기재된 바와 같았다.
결과
표 III는 씨. 악콜렌스 AF2345, 에스. 파스테우리 AF2543 및 에스. 에피데르미디스 AF2302에 대해 획득된 결과를 나타낸다. 나타낸 바와 같이, 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리의 조합은 각각의 종 단독보다 현저하게 더 억제성이었으며 에스. 아우레우스 증식을 95%를 초과하여 억제하였다. 대조적으로, 씨. 악콜렌스 및 에스. 에피데르미디스의 조합은 상승작용적이지 않았으며 심지어 길항적인 경향이 있었다(에스. 에피데르미디스 AF2302 단독에 의한 79.28%에 대한 68.92%의 에스. 아우레우스 증식 억제를 의미한다, p=0.0133).
[표 III]
본 발명자들은 동일한 조건에서 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리 균주의 다른 조합을 시험하였다. 표 IV에 나타낸 바와 같이, 시험된 모든 조합은 에스. 아우레우스 억제를 95%를 초과하여 억제하였다.
[표 IV]
실시예 4: 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리의 조합의 용량-효과 관계
물질 및 방법
일련의 1/5 희석물을 각각의 균주의 1.0 McFarland 현탁액으로부터 제조하고 250 ㎕의 각각의 세균 현탁액을 90 ㎜ 직경 혈액 한천 플레이트상에 면봉으로 문질러 접종하여, 각각의 균주를 단독으로 또는 함께 
5x104, 
104, 
2x103, 
4x102, 및 
0.8x102 CFU/㎠의 도말 밀도로 수득하였다. 달리 물질 및 방법은 실시예 3에 기재된 바와 같았다.
결과
표 V에 나타낸 바와 같이, 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리의 조합은 놀랍게도 시험된 모든 세균 밀도에서 현저하게 상승작용적이었으며, 이때 가장 강한 상승작용 효과는 
0.8x102 CFU/㎠에서 획득되었다. 그러나, 오직 
2x103 CFU/㎠ 이상의 밀도(예를 들어, 
5x104 CFU/㎠, 
104 CFU/㎠, 및 
2x103 CFU/㎠)만이 세균 증식을 95% 초과하여 억제하는 항-에스. 아우레우스 활성을 나타내었다.
[표 V]
실시예 5: 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스의 조합의 항-에스. 아우레우스 활성
실시예 3에 나타낸 본 발명자들의 선행 결과에 비추어, 본 발명자들은 에스. 에피데르미디스의 첨가가 에스. 아우레우스에 대한 씨. 악콜렌스와 에스. 파스테우리의 조합의 억제 활성에 부정적인 영향을 미치는지의 여부를 평가하였다.
물질 및 방법
각각의 균주의 조합에 대해서, 35+/-2℃에서 콜럼비아 -5% 양 혈액 한천상의 배양물(씨. 악콜렌스: 48h 배양; 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스: 24h 배양)로부터 제조된 1.0 McFarland 현탁액 250 ㎕를, 90-㎜ 직경 혈액 한천 플레이트(
5x104 CFU/㎠)상에 면봉으로 문질러 접종하고; 250 ㎕의 염수를 음성 대조용으로서 접종하였다. 하나의 50 ㎜ 0.2 ㎛ 트랙-에치 필터를 스폿의 상부에 놓았다. 10 ㎕ 중에 100 CFU, 10 CFU 또는 1 CFU의 표적 수를 함유하는 에스. 아우레우스 USA300 현탁액을 50-㎜ 직경 필터상에 스폿팅하였다. 달리 물질 및 방법은 실시예 1에 기재된 바와 같았다.
결과
표 VI에 나타낸 바와 같이, 씨. 악콜렌스 AF2345/에스. 파스테우리 AF2653 조합 대 씨. 악콜렌스 AF2345/에스. 파스테우리 AF2653/에스. 에피데르미디스 AF2302 조합에 대해 동일한 수준의 에스. 아우레우스 증식 억제가 획득되었다.
[표 VI]
실시예 6: 씨. 프로핀쿠움은 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리 및 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합에서 씨. 악콜렌스를 대체할 수 있다
이어서 본 발명자들은 코리네박테리움의 다른 종, 예를 들어 씨. 프로핀쿠움이 또한 항-에스. 아우레우스 활성을 단독으로 및/또는 에스. 파스테우리와 함께 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스와 함께 가질 수 있는지의 여부를 연구하였다.
물질 및 방법
물질 및 방법은 씨. 프로핀쿠움 AF1882를 씨. 악콜렌스 AF2345 대신 사용함을 제외하고 실시예 3에 기재된 바와 같았다.
결과
표 VII에 나타낸 바와 같이 씨. 프로핀쿠움/에스. 파스테우리 및 씨. 프로핀쿠움/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합은 상승작용과, 에스. 아우레우스 증식을 95% 초과하여 억제하는 유의수준의 항-에스. 아우레우스 활성을 모두 가졌다.
[표 VII]
실시예 7: 다양한 코리네박테리움 종:스타필로코커스 종 비의 세균 조합의 항-에스. 아우레우스 활성
다양한 코리네박테리움 종:스타필로코커스 종 비의 항-에스. 아우레우스 활성을 또한 평가하였다. 특히, 본 발명자들은 다양한 비의 씨. 악콜렌스:에스. 파스테우리:에스. 에피데르미디스의 조합 또는 씨. 프로핀쿠움:에스. 파스테우리:에스. 에피데르미디스의 조합을 평가하였다.
물질 및 방법
씨. 악콜렌스 AF2345, 씨. 프로핀쿠움 AF1882, 에스. 파스테우리 AF2653 및 에스. 에피데르미디스 AF2302의 적합한 희석물을 각 균주의 2.0 McFarland 현탁액으로부터 제조하였으며 25 내지 250 ㎕의 각각의 세균 현탁액을 90 ㎜ 직경 혈액 한천 플레이트상에 면봉으로 문질러 동시-접종하였고, 이에 의해 하기의 비(코리네박테리움:에스. 파스테우리:에스. 에피데르미디스): 1:1:1, 1:0.2:0.2, 1:0.1:0.1, 1:0.02:0.02, 1:0.01:0.01로 에스. 파스테우리 AF2653 및 에스. 에피데르미디스 AF2302와 병용된 
105, 
5x104, 
104, 
5x103, 및 
103 CFU/㎠의 씨. 악콜렌스 AF2345 또는 씨. 프로핀쿠움 AF1882를 수득하였다. 달리 물질 및 방법은 실시예 3에 기재된 바와 같았다.
결과
표 VIII 및 IX는 각각 씨. 악콜렌스- 및 씨. 프로핀쿠움-기본 조합에 의해 획득된 결과를 나타낸다.
표 VIII에 나타낸 바와 같이, 씨. 악콜렌스:에스. 파스테우리:에스. 에피데르미디스의 조합은 놀랍게도, ≤104 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.01:0.01의 비, ≤5x103 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.02:0.02의 비, 및 103 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.1:0.1의 비를 제외하고, 시험된 모든 밀도 및 비에서 95%를 초과하는 항-에스. 아우레우스 활성을 갖는다. 그러나, 항-에스. 아우레우스 활성은 시험된 모든 농도 및 밀도에서 유의수준으로 남아있었다. 실제로, 시험된 가장 낮은 농도 및 밀도(예를 들어 103 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.01:0.01의 비)에서조차, 에스. 아우레우스 증식은 적어도 74%까지 억제된 채로 남아있었다. 비(예를 들어 1:0.02:0.02까지) 또는 밀도(예를 들어 5x103까지)의 증가는 항-에스. 아우레우스 활성을 증가시켰으며, 이는 에스. 아우레우스 증식을 각각 대략적으로 83% 및 85%까지 억제하였다.
[표 VIII] 다양한 비 및 밀도에서 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합
표 IX에 나타낸 바와 같이, 씨. 프로핀쿠움에 의해 획득된 결과는 씨. 악콜렌스에 의해 획득된 결과와 유사하였다. 실제로, 씨. 프로핀쿠움을 포함한 세균 조합에 대한 항-에스. 아우레우스 활성은 또한 놀랍게도, ≤5x103 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.01:0.01의 비, 및 103 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.1:0.1 및 1:0.2:0.2의 비를 제외하고, 시험된 모든 밀도 및 비에서 95%를 초과하였다. 씨. 악콜렌스와의 조합에 대해 나타난 바와 같이, 씨. 프로핀쿠움과의 조합의 항-에스. 아우레우스 활성은 시험된 모든 농도 및 밀도에서 유의수준으로 남아있었고, 사실상 씨. 악콜렌스에 대해 나타난 경우보다 일반적으로 더 컸다. 실제로, 시험된 가장 낮은 농도 및 밀도(예를 들어 103 CFU/㎠의 밀도에서 1:0.01:0.01의 비)에서 에스. 아우레우스 증식은 적어도 81%까지 억제되었다. 비(예를 들어 1:0.02:0.02까지) 또는 밀도(예를 들어 5x103까지)의 증가는 항-에스. 아우레우스 활성을 증가시켰으며, 에스. 아우레우스 증식을 각각 대략적으로 89% 및 93%까지 억제하였다.
[표 IX] 다양한 비 및 밀도에서 씨. 프로핀쿠움/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합
실시예 8: 씨. 악콜렌스는 에스. 파스테우리의 존재하에서 생물막을 형성한다
씨. 악콜렌스는 복합 배지를 요하며 트립신 대두 브로쓰(TSB)는 그의 증식을 지지하지 않는다. 여기에서 본 발명자들은 씨. 악콜렌스 및 에스. 파스테우리가 씨. 악콜렌스의 증식을, 통상적으로 증식이 가능하지 않은 조건에서 지지하는 혼합 생물막을 형성할 수 있음을 보인다.
물질 및 방법
McFarland 0.5의 혼탁도를 갖는 세균 현탁액을 실시예 3에 기재된 바와 같은 콜럼비아 -5% 양 혈액 한천 플레이트상의 배양물로부터 제조하였다. 50 ㎕의 씨. 악콜렌스 AF2345의 현탁액(대략 2x106 CFU)을 12개의 웰에 분배시키고(A 열); 50 ㎕의 1:100 희석물(대략 2x104 CFU)을 12개의 웰에 분배시키고(B 열); 50 ㎕의 에스. 에피데르미디스 AF2302의 현탁액(대략 2x106 CFU)을 컬럼 1, 2, 3, 7, 8 및 9에 분배시키고; 50 ㎕의 에스. 파스테우리 AF2653의 현탁액(대략 2x106 CFU)을 컬럼 4, 5, 6, 7, 8 및 9에 분배하였다. 컬럼 10, 11 및 12는 100 ㎕의 배양 배지에 현탁된 씨. 악콜렌스 AF2345를 함유한다.
플레이트를 원심분리시키고, 현탁액 염수를 제거하고 100 ㎕의 TSB를 각 웰에 가하였다. 24시간 배양 후에, 50 ㎕의 배지를 제거하고 신선한 TSB로 대체하였다. 플레이트를 증식에 대해 검사하였다. 48시간 후에 플레이트를 관찰하고, 배지를 제거하고 웰을 염수로 2회 부드럽게 세척하였다. 200 ㎕의 염수를 각 웰에 가하고 플레이트를 초음파 욕에 담가 생물막을 분산시키고 재현탁시켰다. 각각의 웰에 대해서, 5 ㎕(1/40)을 95 ㎕의 염수(1/800)로 옮겼다. 이어서 5 ㎕의 상기 현탁액을 95 ㎕의 염수(1/16000)를 함유하는 신선한 플레이트로 옮겼다. 이어서 10㎕의 각각의 현탁액을 뮬러 힌튼(Mueller Hinton) 2 한천 플레이트 및 무피로신(128 ㎍/㎖)을 함유하는 뮬러 힌튼 5% 혈액 NAD 농축된 피브린제거된 한천 플레이트에 적용하였다.
24h 후에 증식된 세균을 2.2 ㎖ 앰풀에 현탁시키고 McFarland 판독기를 사용하여 혼탁도를 측정하였다.
결과
씨. 악콜렌스의 고 및 저 접종물(A 열 및 B 열)에 대해 획득된 결과는 정성적으로 유사하다. 그러나, 보다 낮은 접종물과 24시간 배양 후에 획득된 세균 밀도는 McFarland 탁도계를 사용하여 정량분석하기에 너무 낮았다. 하기에 보고된 데이터는 시험된 보다 높은 접종물(A 열)로부터 획득된다.
예상되는 바와 같이, 씨. 악콜렌스는 TSB에서 증식하지 못하고 생물막을 형성하지 않는다. 대조적으로, 에스. 에피데르미디스 및 에스. 파스테우리는 모두 TSB에서 생물막을 형성한다(데이터 도시 안 됨). 놀랍게도, 씨. 악콜렌스는 에스. 파스테우리 생물막 또는 혼합된 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 생물막내에서 증식할 수 있지만, 에스. 에피데르미디스 단독의 생물막내에서는 증식하지 않는다(도 2를 참조하시오). 예상되는 바와 같이, TSB 중에 씨. 악콜렌스를 함유하는 대조용 웰에서는 증식이 관찰되지 않는데, 그 이유는 TSB가 씨. 악콜렌스의 증식을 지지하지 않는 것으로 공지되어 있기 때문이다. 에스. 파스테우리 생물막 및 에스. 에피데르미디스 생물막에서 씨. 악콜렌스의 증식 차이는 현저하다(p=0.0065). 에스. 파스테우리 생물막 및 혼합된 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 생물막에서 씨. 악콜렌스의 증식 차이는 통계학적 유의수준에 도달하지 않는다(p=0.0651).
실시예 9: 혼합 생물막에서 씨. 프로핀쿠움의 증식
실시예 8에 나타낸 동일한 실험을, 씨. 악콜렌스를 씨. 프로핀쿠움으로 교체하여 수행하였다.
물질 및 방법
실험을, 씨. 프로핀쿠움 AF1882를 씨. 악콜렌스 AF2345 대신에 시험함을 제외하고 실시예 8에 기재된 바와 같이 수행하였다.
결과
도 3에 도시된 바와 같이, 씨. 프로핀쿠움은 TSB에서 확고한 생물막을 형성할 수 있다. 또한, 상기는 에스. 에피데르미디스 및 에스. 파스테우리와 함께 혼합 생물막을 형성할 수 있다. 에스. 에피데르미디스내에서의 증식은 에스. 파스테우리를 함유하는 생물막에서의 증식보다 현저하게 더 낮다(p=0.019). 그러나, 씨. 악콜렌스에 대한 경우와 같이, 에스. 에피데르미디스의 존재는 씨. 악콜렌스 함유 생물막내에서의 증식에 불리한 영향을 미치지 않는다(에스. 파스테우리와의 씨. 프로핀쿠움 대 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스와의 씨. 프로핀쿠움, p=0.0748).
실시예 10: 생물막 형성에 대한 씨. 악콜렌스와 에스. 파스테우리 및/또는 에스. 에피데르미디스와의 병용의 상승작용적 효과
세균 증식의 정량분석(상기 실시예 8 및 9에 예시된 바와 같은) 외에, 단독 증식된, 또는 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스, 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 함께 증식된 씨. 악콜렌스의 생물막 형성을 여기에서, 세포외 기질을 크리스탈 바이올렛(시험관내에서 생물막 형성의 상대적인 정량분석을 허용한다)으로 염색하여 평가하였다.
물질 및 방법
씨. 악콜렌스 AF2345, 에스. 파스테우리 AF2653 및 에스. 에피데르미디스 AF2302의 1.0 McFarland 현탁액을 실시예 1에 기재된 바와 같이 트립신 대두 브로쓰(TSB)에서 제조하였다. 50 ㎕의 희석되지 않은 씨. 악콜렌스 현탁액 및 50 ㎕의 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 현탁액의 10-2 희석액을 96-웰 플레이트의 웰에 단독으로 또는 하기와 같이 조합하여 시딩하였다: 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리, 씨. 악콜렌스/에스. 에피데르미디스 및 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스. 부피를 웰당 200 ㎕까지 TBS로 완성시키고 플레이트를 37℃에서 배양하였다. 48시간 배양 후에, 웰을 증류수로 세정하고, 공기 건조시키고 생물막을 증류수 중에서 제조된 0.2% 크리스탈 바이올렛 용액 200 ㎕로 염색하였다. 이어서 웰을 증류수로 세정하고, 공기-건조시키고 고정된 크리스탈 바이올렛을 증류수 중에서 제조된 30% 아세트산 용액 200 ㎕에 용해시켰다. 100 ㎕의 용해된 크리스탈 바이올렛 용액을 새로운 96-웰 플레이트로 옮기고 595 ㎚에서 현탁액의 광학 밀도를 측정함으로써 생물막 세포외 기질을 정량분석하였다.
결과
도 4에 도시된 바와 같이, 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리, 에스. 에피데르미디스 또는 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 함께 증식시킬 때, 각각의 세균 종을 단독으로 증식시키는 경우보다 현저하게 더 많은 세포외 기질이 생성되었다. 세포외 기질 생성의 증대는 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합에 의해 가장 높았다.
더욱 또한, 병용된 세균에 의해 생성된 세포외 기질의 양은 각각의 종 단독에 의해 생성된 양에 비추어 예상된 부가 효과보다 더 컸다. 따라서, 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리 및/또는 에스. 에피데르미디스와 공-배양할 때 상승작용 효과가 관찰된다. 그 효과는 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 공-배양할 때 최대이다.
실시예 11: 환원된 동결건조된 세균은 에스. 아우레우스 집락형성을 예방한다
최종 제형은 세균을 동결-건조시킴을 포함할 수 있으므로, 본 발명자들은 상기 과정이 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스와 함께, 시험관내에서 에스. 아우레우스의 증식을 예방하는 씨. 악콜렌스의 능력을 손상시키지 않음을 확인하였다. 따라서, 본 발명자들은 "신선한" 대 환원된 동결-건조된 세균의 항-에스. 아우레우스 활성을 비교하였다.
물질 및 방법
씨. 악콜렌스 AF2345, 에스. 파스테우리 AF2652 및 에스. 에피데르미디스 AF2302의 세균 현탁액을 동결-건조 완충제 중에서 각각 1:1:1 또는 1:0.1:0.1 비로 병용하였다. 이들 현탁액(이후부터 "신선한 세균"이라 명명한다)의 한 부분을 사용하여, 300 ㎕의 현탁액을 한천 플레이트의 표면상에 면봉으로 문지름으로써 103 CFU/㎠, 102 CFU/㎠ 또는 101 CFU/㎠의 최종 밀도로 90 ㎜ 페트리 디쉬에 접종하였다. 300 ㎕의 멸균수를 음성 대조용으로서 접종하였다. 하나의 50 ㎜ 0.2 ㎛ 트랙-에치 필터를 접종된 표면의 상부에 놓고 10 ㎕ 중의 10 및 100 CFU의 표적 수를 함유하는 에스. 아우레우스 USA300 현탁액을 필터 표면상에 3회 중복하여 스폿팅하였다. 달리 물질 및 방법은 실시예 3에 기재된 바와 같았다. 제조된 현탁액의 다른 부분을 음압에서 2-단계 공정(1 단계 건조: 영하 온도; 2차 건조: 15℃)을 사용하여, 선반 동결 건조기에서 동결건조시켰다. 공정의 끝에서 바이알을 진공하에 밀봉하고 사용시까지 암실에서 4℃에서 보관하였다. 분석 당일에, 동결건조된 케이크를 400 ㎕의 멸균수에 재현탁시키고 환원된 현탁액을 신선한 세균 현탁액에 사용된 경우와 동일한 조건 및 희석에 따라 접종하였다.
결과
하기 표 X에 나타낸 바와 같이, 에스. 아우레우스 증식의 억제는 분석에서 시험된 세균 밀도 또는 비와 관계 없이, 신선한 또는 환원된 동결건조된 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스 조합을 사용하는 경우와 유사하다(유의미한 차이는 관찰되지 않는다).
[표 X] 다양한 밀도에서 신선한 또는 환원된 씨.
악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스
조합의 항-에스.
아우레우스
활성
따라서, 세균 조합(이 경우에 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스)의 동결-건조는 상기 세균 조합의 항-에스. 아우레우스 활성을 손상시키지 않는다. 따라서 에스. 아우레우스 집락형성은 여전히 성공적으로 예방될 수 있다.
실시예 12: 인간 피부 모델에서 생체내 에스. 아우레우스 집락형성의 예방에서 씨. 악콜렌스를 에스. 파스테우리 및/또는 에스. 에피데르미디스와 병용하는 상승작용 효과
본 발명자들은 실험 영역의 윤곽을 보여주는 주형으로서 천공된 하이드로콜로이드 멸균 패치(도 5A에 예시된 바와 같이)를 사용하여 건강한 개인의 팔뚝 피부상에서 에스. 아우레우스 증식을 억제하는, 단독으로 또는 다양한 조합으로 제형화된 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스의 동결-건조된 균주의 능력을 연구하였다. 실제로, 앞서 나타낸 바와 같이, 팔뚝 피부는 피부와 외비공 간의 구조 및 미생물 군집 조성물의 유사성에 비추어, 이들 부위 모두의 탁월한 모델이다.
물질 및 방법
동결건조된 씨. 악콜렌스 균주 AF2345, 에스. 파스테우리 균주 AF2652 및 에스. 에피데르미디스 균주 AF2302의 바이알을 실시예 11에 기재된 바와 같이 제조하였다. 9개의 균일하게 이격된 4.5 ㎜ 직경 구멍을 하이드로콜로이드 멸균 패치에 천공하였으며, 각각의 구멍은 30 ㎕의 피부-바닥 웰을 구성하였다. 분석 당일에, 2개의 패치를 사전 동의한 건강한 인간 자원자의 팔뚝의 내측면의 피부에 적용하였다. 동결건조된 세균 케이크를 멸균수에 재현탁하고 3x108 CFU/㎖의 농도로 희석하였다. 에스. 아우레우스 ATCC 29213을 혈액 한천상에서 계대배양하고 1 McFarland의 혼탁도를 갖는 염수 현탁액을 제조하고 희석하여 ∼108 CFU/㎖의 현탁액을 수득하였다.
씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스를 단독으로 또는 다양하게 조합하여 피부 웰에, 웰당 종당 2x106 CFU의 용량 및 웰당 5x103 CFU의 용량의 에스. 아우레우스를 가하였다. 이어서 하이드로콜로이드 패치 및 주위 피부를 멸균 폴리우레탄 접착성 수술용 절개 필름으로 덮었다(도 5A). 패치를 적소에 30시간 동안 두고, 그 후에 벗겨내고 각 웰에 상응하는 피부 부위를 가습된 면봉으로 샘플링하여 에스. 아우레우스를 정량분석하였다. 면봉의 머리를 멸균 수술용 가위를 사용하여 절단하고 멸균 용기에 수집하였다. DNA를 제조사의 프로토콜에 따라 Dneasy 블러드 앤드 티슈(Blood and Tissue) 키트(퀴아겐(Qiagen))를 사용하여 추출하였다. DNA 추출물을 Spa 유전자를 표적화하는 프라이머를 사용하여 CFX96 C1000 터치(Touch) 실시간 시스템(바이오래드(Biorad))상에서 정량적인 실시간 PCR(qPCR)에 의해 증폭시켰다. 반응 혼합물을 20 ㎕의 최종 부피로 1X Itaq 유니버셜 프로브스 슈퍼믹스(Universal Probes supermix)(바이오래드), 각각의 프라이머 500 nM, 250 mM 탐침 및 DNA 주형으로 제조하였다. qPCR을 위해서, 초기 변성 단계(95℃, 5분)에 이어서, 40주기의 95℃ 15s 및 60℃ 1분을 수행하였다. 40회의 증폭 주기를 수행하고 CT를 측정하였다. 결과를 [(임계-CT)/임계]비로서 나타내었다. 상기 비는 Spa DNA를 증폭 없이 검출할 수 있는 경우 1에 도달하고, 40-주기 증폭의 끝에서 Spa DNA가 검출되지 않는 경우 0에 도달한다.
결과
도 5B는 씨. 악콜렌스, 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스를 단독으로 및 다양한 조합으로 공-배양 후에 에스. 아우레우스 qPCR에 의해 획득된 [(임계-CT]/임계] 비를 도시한다. 단독으로 수행된 경우, 상기 종들 중 어느 것도 에스. 아우레우스 증식을 억제하지 못했다. 대조적으로, 에스. 아우레우스 증식의 상승작용적 억제가 본 발명에 따라, 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리 조합(에스. 아우레우스 단독의 증식에 비해 에스. 아우레우스 증식의 2.9배 감소) 또는 씨. 악콜렌스/에스. 파스테우리/에스. 에피데르미디스(12.6배 감소)에 대해 관찰되었다.
자원자의 피부의 자극, 홍반 또는 변경은 관찰되지 않았다.
결론
종합하면, 이들 실시예는 적어도 하나의 코리네박테리움 종, 예를 들어 씨. 악콜렌스 또는 씨. 프로핀쿠움을 에스. 파스테우리, 및 임의로 에스. 에피데르미디스와 병용하는 경우 발생하는 놀라운 상승작용적 항-에스. 아우레우스 활성을 예시한다. 더욱 또한, 이러한 결과는 에스. 파스테우리가 코리네박테리움 종, 예를 들어 씨. 악콜렌스의 증식을 특별히 촉진하며, 더욱 또한 세포외 기질의 정량분석에 의해 예시되는 바와 같이 공-배양시 씨. 악콜렌스의 생물막 형성을 상승작용적 방식으로 촉진함을 가리킨다. 생물막 형성은 코리네박테리움 종을 에스. 파스테우리 및 에스. 에피데르미디스 둘다와 배양했을 때 상승작용적 방식으로 유사하게 개선되었다. 유리하게, 상기 세균 종을 포함하는 조성물은 더욱 또한, 환원된 조성물이 신선한 세균과 동일한 수준으로 에스. 아우레우스 집락형성을 예방하므로, 효과의 상실 없이 성공적으로 동결건조되고 환원될 수 있다. 더욱 또한, 에스. 아우레우스의 가장 통상적인 생태적 지위(즉 피부 및 외비공)를 나타내는 인간 팔뚝 피부에의 조성물의 투여는 에스. 아우레우스에 의한 생체내 집락형성을 대단히 감소시킨다.
이들 실시예는 적어도 씨. 악콜렌스 또는 씨. 프로핀쿠움, 및 에스. 파스테우리 및 바람직하게는 또한 에스. 에피데르미디스를 포함하는 조성물이 MSSA 및 MRSA 에스. 아우레우스 집락형성 모두의 예방에 사용하기 위한 신규의, 뜻밖이고 매우 유리한 조성물을 나타낸다는 최초의 증거를 제공한다.
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Claims (17)
- 약제로서 사용하기 위한 적어도 하나의 코리네박테리움 종(Corynebacterium sp.) 및 스타필로코커스 파스테우리(Staphyloccocus pasteuri)를 포함하는 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
적어도 하나의 코리네박테리움 종이 씨. 악콜렌스(C. accolens), 씨. 프로핀쿠움(C. propinquum), 씨. 슈도디프테리티쿰(C. pseudodiphtheriticum), 씨. 스트리아툼(C. striatum), 씨. 아미콜라툼(C. amycolatum), 씨. 글루타미쿰(C. glutamicum), 씨. 아우리무코숨(C. aurimucosum), 씨. 투베르쿨로스테아리쿰(C. tuberculostearicum) 및 씨. 아페르멘탄스(C. afermentans), 바람직하게는 씨. 악콜렌스 및/또는 씨. 프로핀쿠움 중에서 선택되는 약학 조성물. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
스타필로코커스 에피데르미디스(Staphylococcus epidermidis)를 또한 포함하는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
용량당 적어도 103 CFU의 코리네박테리움 종, 적어도 103 CFU의 스타필로코커스 파스테우리, 및 임의로 적어도 103 CFU의 스타필로코커스 에피데르미디스를 포함하는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
용량당 적어도 총 103의 세균 CFU, 바람직하게는 용량당 적어도 1.2x103, 보다 바람직하게는 적어도 1.4x103, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 3x103의 세균 CFU를 포함하는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
코리네박테리움 종 대 스타필로코커스 파스테우리 대 스타필로코커스 에피데르미디스의 비가 1:0.01:0.01 내지 1:1:1의 범위내에 포함되는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 포함하는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제7항에 있어서,
약학적으로 허용 가능한 부형제가, 바람직하게는 펩톤, 글리세롤, 락토스, 젤라틴, 글루코스, 슈크로스, 트레할로스, 덱스트란, 말토덱스트린, 아도니톨, 및 나트륨 글루타메이트 중에서 선택된 적어도 하나의 동결보호제를 포함하는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
동결건조되거나 또는 동결-건조되는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 겔화제를 또한 포함하는, 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
스타필로코커스 아우레우스에 의한 코 집락형성(nasal colonization)의 예방에 사용하기 위한 약학 조성물. - 제11항에 있어서,
스타필로코커스 아우레우스가 메티실린-민감성 스타필로코커스 아우레우스 또는 메티실린-내성 스타필로코커스 아우레우스인 약학 조성물. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물, 코 사용에 적합한 겔 및 코 투여를 위한 수단을 포함하는 키트(kit).
- 적어도 하나의 코리네박테리움 종 및 스타필로코커스 파스테우리를 포함하고, 임의로 에스. 에피데르미디스를 또한 포함하는 조성물.
- 제14항에 있어서,
동결건조되거나 또는 동결-건조되는 조성물. - 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방에서의, 제14항 또는 제15항에 따른 조성물의 용도.
- 제14항 또는 제15항의 조성물을 투여함을 포함하는, 에스. 아우레우스에 의한 집락형성의 예방이 필요한 대상체에서, 바람직하게는 비공 및/또는 피부에서 상기 집락형성의 예방 방법.
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