CZ307642B6 - Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích - Google Patents
Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307642B6 CZ307642B6 CZ2016-417A CZ2016417A CZ307642B6 CZ 307642 B6 CZ307642 B6 CZ 307642B6 CZ 2016417 A CZ2016417 A CZ 2016417A CZ 307642 B6 CZ307642 B6 CZ 307642B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- pythium oligandrum
- preparation
- viable
- skin
- treatment
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 51
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 title claims abstract description 13
- 241000131360 Pythium oligandrum Species 0.000 title claims description 69
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 title description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 64
- 241001480043 Arthrodermataceae Species 0.000 claims abstract description 25
- 230000037304 dermatophytes Effects 0.000 claims abstract description 25
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002781 deodorant agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003906 humectant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims abstract 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims abstract 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 23
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 20
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 39
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 36
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 21
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 21
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 17
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 17
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 16
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 16
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 15
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 14
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 13
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 12
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 12
- 208000010195 Onychomycosis Diseases 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 10
- 201000005882 tinea unguium Diseases 0.000 description 10
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 7
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 6
- 206010012504 Dermatophytosis Diseases 0.000 description 5
- 241001460074 Microsporum distortum Species 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 241000893980 Microsporum canis Species 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 3
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 3
- 241000130764 Tinea Species 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 201000004647 tinea pedis Diseases 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 241001480036 Epidermophyton floccosum Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 2
- 239000005830 Pythium oligandrum M1 Substances 0.000 description 2
- 241001459572 Trichophyton interdigitale Species 0.000 description 2
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 2
- 239000007938 effervescent tablet Substances 0.000 description 2
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 2
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010005913 Body tinea Diseases 0.000 description 1
- 101150071146 COX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150086475 COXII gene Proteins 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 102100027456 Cytochrome c oxidase subunit 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 1
- 108050008072 Cytochrome c oxidase subunit IV Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 108010049047 Echinocandins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001480035 Epidermophyton Species 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101150021539 MT-CO2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001480037 Microsporum Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 240000008114 Panicum miliaceum Species 0.000 description 1
- 235000007199 Panicum miliaceum Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000233639 Pythium Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000122799 Scopulariopsis Species 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 206010043866 Tinea capitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010618 Tinea cruris Diseases 0.000 description 1
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 1
- 241000223229 Trichophyton rubrum Species 0.000 description 1
- 208000000558 Varicose Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007821 culture assay Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000668 oral spray Substances 0.000 description 1
- 230000000065 osmolyte Effects 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 230000005808 skin problem Effects 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 201000003875 tinea corporis Diseases 0.000 description 1
- 210000004906 toe nail Anatomy 0.000 description 1
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Přípravek s mykoparazitickým organismemkmene DV 74 - pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích, přitom přípravek ve formě vodné suspenze zahrnuje: suchou směs, obsahující 0,1 až 99,9 % hmotn. mykoparazitického mikroorganismua 0,1 až 99,9 % hmotn. pomocných látek, obsahujících nejméně jednu složku ze skupiny zahrnující adsorbent, pufr, zvlhčovač, deodorant a aroma, a dále vodu/fyziologický roztok v takovém množství, aby přípravek obsahoval 1 až 10 x 10, s výhodou 10 až 50 viabilních buněk mikroorganismuna 1 ml vodné suspenze, dle stanovení genetickým testem měřením hladiny exprese konstitutivního genu pro β-tubulin.
Description
Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích
Oblast techniky
Vynález se týká přípravku s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích. Přípravek je ve formě vodné suspenze, připravené ze suché směsi, obsahující 0,1 až 99,9 % hmotn. mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum a 0,1 až 99,9 % hmotn. pomocných látek, obsahujících nejméně jednu složku ze skupiny zahrnující adsorbent, pufir, zvlhčovač, deodorant a aroma.
Dosavadní stav techniky
Dermatolytosy jsou plísňové infekce způsobované dermatofyty, keratinofilními houbami napadajícími zejména kůži, nehty a vlasy a vyznačujícími se dlouhou inkubační dobou. Ta je umožněna zejména minimální reakcí imunitního systému hostitele v důsledku účinného maskování povrchů těchto keratinofilních hub před rozpoznáním imunitními molekulami. Keratinofilní houby užívají bílkovinu keratin vyskytující se v kůži na celém povrchu lidského těla jako svoji důležitou potravu, keratin jsou schopny účinně enzymaticky degradovat a natrávené štěpy metabolizovat. Tyto plísně jsou zastoupeny rody Trichophyton, Epidermophyton a Microsporum, přičemž molekulární povaha faktorů umožňujících těmto mikroorganizmům realizovat svůj životní styl je již dobře objasněná (6). Mykózy kůže a sliznic se vyznačují rozdílnou manifestací zahrnující zpravidla svědění, zčervenání, odlupující se šupinky nebo i rozsáhlejší plochy kůže, někdy je v oblastech se zvýšenou potivostí kůže bílá a macerovaná. Častými doprovodnými symptomy dále jsou zvýšená potivost a sociálně obtěžující pachové symptomy svědčící o pokročilé dysbiose.
Synonymem pro dermatofytosu je pojem tinea, kdy v závislosti na své anatomické lokalizaci jsou nejčastějšími formami dermatolytos tinea pedis (na nohách), tinea unguium (pod nehty), tinea corporis (plísňové infekce na těle, nejčastěji nevlasaté části trupu a proximální část dolních končetin), tinea cruris (v tříselné oblasti nejčastěji u mladých mužů v letních měsících a po zapaření v těsném oděvu), tinea capitis (okrouhlá ložiska krátce ulámaných vlasů ve kštici, zejména u dětí přicházejících do styku se zoofilními dermatolýty jako je Microsporum canis). Ačkoliv nepředstavují zpravidla dermatolytosy smrtelná onemocnění, jedná se o infekce velmi rozšířené postihující významné procento populace a svými symptomy znepříjemňují pracovní a společenské uplatnění postižených jedinců.
Oportunní mikrobiální kvasinkové infekce jsou poměrně rozšířenou chorobou moderního člověka, při níž se běžně neškodné komensální kvasinky žijící na kůži a sliznicích člověka v důsledku oslabení imunitního sytému při stresech, pracovním vypětí, virových infekcích nebo jiných zátěžových stavech aktivují a přecházejí do agresivní formy charakterizované odlišnou morfologií i metabolismem. Výzkum se převážně soustřeďuje na nejběžnější patogenní kvasinku Candida albicans a její příbuzné. Molekulární a genetický výzkum v poslední době přispěl k identifikaci jednotlivých faktorů odpovědných za toto neobvyklé chování patogenních kvasinek, které pak představují důležité cíle pro nově vyvíjené terapie (2).
Terapiím dnes dostupných pro léčbu dermatofytámích a kvasinkových infekcí vévodí chemické protiplísňové prostředky ze skupiny azolů, allylaminů a echinokandinů, které jsou však nechvalně proslulé jak svoji nízkou účinností, tak četnými vedlejšími účinky znevýhodňující široké skupiny uživatelů (starší osoby, osoby s cukrovkou nebo onemocněním jater, osoby s oslabenou imunitou). Terapie pomocí těchto prostředků jsou ovšem též velmi drahé a mají pouze dočasnou účinnost. V žádném případě si pak nejsou schopné poradit s dysbiosami (porušením
- 1 CZ 307642 B6 normální fyziologické mikroflory) spojenými s tímto typem onemocnění. Proto zůstává moderní dlouhodobě účinná léčba stabilizující normální mikroflóru velkou výzvou.
Použití přirozených biologických prostředků pro léčbu dermatofytos a kvasinkových infekcí bylo doposud rozpracováno pouze v minimální míře. Problematikou použití mikroorganizmu Pythium oligandrum pro ochranu kůže se zabývá užitný vzor CZ 9883U pracovníků firmy Biopreparáty spol. s r.o., původců Veselý a další, s prioritním datem 18. 11. 1999. Autoři používají suspenzi oospór v množství nepřesahujícím 2 x 105 na 1 g prostředku pro řešení některých kožních problémů u 9 skupin pacientů. V tomto případě se však nejedná, jak se autoři CZ 9883U mylně domnívali, o eliminaci původců dermatofýtos, neboť pro takové tvrzení chybí v dokumentu jakékoliv důkazy. Autoři předkládají laboratorní výsledky účinku mikroorganizmu Pythium oligandrum na mikroorganizmus Scopulariopsis breviacaulis, tento mikroorganizmus je však půdní saprofytický mikroorganizmus (nikoliv dermatofýt). U žádného z pacientů sledovaných v CZ UV9883 pak nebylo prováděno mikrobiologické vyšetření a tudíž není možné jejich faktickou afekci dermatofyty nijak prokázat. Pokud jde o deklarované léčebné účinky, není v dokumentu žádné zmínky o tom, že byli pacienti lékařsky sledování, v řadě případů se u popisovaných účinků jedná spíše o jejich subjektivní pocity (změna barvy nehtu, zmizení bolesti). Patent CZ 302297 přihlašovatele tohoto vynálezu použil poprvé po náročných toxikologických testech vyšší koncentraci oospór (více než 2 x 105 na 1 g prostředku), nezabývá se však podrobněji problematikou dermatofýtos ani kvasinkových infekcí u lidí. Naopak výhodou tohoto řešení je, že byla poprvé objasněna schopnost mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum působit i v jiném prostředí než v prostředí vodných suspenzí, jako je prostředí vytvořené v mastech, olejích a jiných aplikačních formách. Dále byla poprvé zdůrazněna významnost i jiných forem viabilních buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum než jsou dormantní oospory, zejména pak encystováných zoospór a viabilních fragmentů mycelia jako forem mikroorganizmu Pythium oligandrum nejvíce účinných při přímém mykoparazitismu. Užitný vzor CZ 28816 U přihlašovatele tohoto vynálezu řeší detailně problematiku oportunních mikrobiálních infekcí pomocí duálních mikrobiálních preparátů, tyto však jsou charakterizovány klasickým způsobem pomocí kolonie tvořících jednotek (KTJ), jejichž použití není v případě mikroorganizmu Pythium oligandrum bez úskalí.
Nevýhodou dosavadního stavu techniky a významným omezením na cestě k vývoji léčiva tedy zůstává ne zcela dostatečné pochopení povahy účinné látky Pythium oligandrum, jejíž množství v přípravcích není možno obvykle přesně určit. Tudíž, obtížně reprodukovatelné může být i definování síly a účinnosti takovýchto přípravků.
Podstata vynálezu
Uvedené nevýhody se odstraní nebo podstatně omezí přípravkem s mykoparazitickým organismem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích podle tohoto vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že přípravek ve formě vodné suspenze zahrnuje suchou směs obsahující 0,1 až 99,9 % hmotn. mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum a 0,1 až 99,9 % hmotn. pomocných látek, obsahujících nejméně jednu složku ze skupiny zahrnující adsorbent, pufr, zvlhčovač, deodorant a aroma, a dále vodu/fýziologický roztok v takovém množství, aby přípravek obsahoval 1 až 10 x 106, s výhodou 10 až 50 viabilních buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum na 1 ml aplikované vodné suspenze. Viabilní buňky mikroorganizmu Pythium oligandrum zahrnují dormantní oospory, encystované zoospory a viabilní coenocytické mycelium (viabilní bezpřihrádkové mycelium).
Viabilitou buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum v předkládaném vynálezu je míněna vzcházívost stanovená genetickým testem přípravku měřením hladiny exprese konstitutivního genu pro β-tubulin mikroorganizmu Pythium oligandrum (11), udržovaného v médiu bohatém na živiny, při 30 °C v běžné atmosféře.
-2CZ 307642 B6
Užití - aplikace přípravku podle tohoto vynálezu, zahrnuje následné kroky: a) příprava vodné suspenze mechanickou dispergací suché směsi v definovaném objemu vlažné vody nebo fyziologického roztoku pro získání obsahu 1 až 10 x 106 viabilních buněk, s výhodou 10 až 50 viabilních buněk, mykoparasitického mikroorganizmu Pythium oligandrum na 1 ml vodné suspenze b) aplikace takto získané vodné suspenze v závislosti na typu léčené diagnózy s použitím doporučeného množství viabilních buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum; kolonizace viabilních buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, dle léčené diagnózy; d) namnožení viabilních buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, dle léčené diagnózy pro eliminaci dermatofytů nebo kvasinek, a e) následná sporulace a současně eliminace přípravku, umožňující stabilizaci a rozvoj normální mikroflóry pro zajištění dlouhodobého léčebného účinku.
Aplikace přípravku podle vynálezu do mastí, olejů, gelů, sprejů, zvlhčených náplastí, zásypů se provádí známým způsobem odborníkovi v oboru s cílem kolonizovat postižená místa aplikace množstvím viabilních buněk, odpovídajícím požadavkům diagnóz.
Fyziologickým roztokem známým odborníkovi v oboru se rozumí např. nejběžnější roztok NaCl o koncentraci 9 g/1 litr, nebo fýziologický roztok pufirovaný např. fosfátem sodným v množství 10 mg/11 - tzv. PBS.
Kolonizaci a namnožení mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum na místě aplikace mohou zajistit jakékoliv životaschopné (viabilní) buňky. V přípravcích podle tohoto vynálezu jsou kvantitativně nejvíce zastoupené dormantní (spící) oospory schopné poskytnout viabilní buňky podle místních podmínek za 24 až 48 hodin po zvlhčení suché směsi. Přípravky podle tohoto vynálezu dále obsahují encystované zoospory a viabilní coenocytické mycelium, které jsou schopné poskytnout viabilní buňky obvykle již za 20 minut po zvlhčení suché směsi.
Kolonizace viabilních buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, na místě aplikace dle léčené diagnózy, probíhá způsobem známým odborníkovi v oboru. Podle našich zkušeností u přípravků podle předloženého vynálezu jsou všechny tyto procesy závislé na přítomnosti cílových mikroorganizmů, jako jsou dermatofýt nebo kvasinky na místě aplikace. Pokud jsou tyto cílové mikroorganizmy pro mykoparazitický mikroorganizmus Pythium oligandrum přítomné, dochází ke kolonizaci viabilních buněk během jedné až dvou hodin jejich přichycením na tyto cílové mikroorganizmy, tj. dermatofýty nebo kvasinky. Během jednoho až dvou dnů pak dochází k namnožení mikroorganizmu Pythium oligandrum s využitím živin poskytovaných cílovými mikroorganizmy. K vymizení viabilních buněk z místa aplikace dochází asi do dvou týdnů po eliminaci cílových mikroorganizmů. V době, kdy jsou již živiny pocházející z cílových mikroorganizmů vyčerpány, pozoruje se na místě aplikace přechod mikroorganizmu Pythium oligandrum do klidové formy, tedy sporulace. Takto vzniklé dormantní oospory na kůži a sliznicích dlouhodobě nepřežívají, neboť jsou průběžně odstraňovány dynamickými procesy na těchto aplikačních místech, tj. např., odlučováním odumřelých buněk z postiženého místa a uvolňováním sekretů na slizních. Empiricky bylo zjištěno, že mykoparazitický mikroorganizmus Pythium oligandrum odcházející z místa aplikace vytváří podmínky pro rozvoj a stabilizaci normální mikroflory.
Při aplikaci přípravku podle vynálezu, doporučené množství viabilních buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, bylo přihlašovatelem empiricky zjištěno, že při léčbě dermatofytos a tinea unguim je doporučené množství viabilních buněk v 1 ml vodné suspenze 50, zatímco při eliminaci kvasinek v nehojících se ranách 30, při eliminaci kvasinek v dutině ústní 10.
Pro léčbu dermatofytos ve formě tinea unguium podle tohoto vynálezu se aplikuje přípravek obsahující nejlépe 50 viabilních buněk na 1 ml přípravku ve vodné suspenze se aplikuje v množství 0.15 ml této suspenze na 1 cm2 postižené plochy ve formě vlhkého zábalu, nebo ve
-3CZ 307642 B6 formě krémů, mastí, vlhčených ubrousků, antimikrobiálních sprejů, zvlhčených náplastí, zásypů a posypů.
Pro léčbu kvasinkových infekcí v nehojících se ranách podle tohoto vynálezu se přípravek aplikuje formou prostředků vlhkého hojení pomocí vlhkých obkladů obsahujících nejlépe 30 viabilních buněk na 1 ml vodné suspenze ve fyziologickém roztoku a následně výměnou vlhkých obkladů obsahujících nejlépe 30 viabilních buněk na 1 ml vodné suspenze ve fyziologickém roztoku po 8 hodinách po dobu 4 dní. Forma vlhkého hojení může být aplikována v této koncentraci též ve formě krémů, mastí, vlhčených ubrousků, antimikrobiálních sprejů, zvlhčených náplastí, a následnou aplikací těchto prostředků vlhkého hojení po 8 hodinách po dobu 4 dní.
Pro léčbu kvasinkových infekcí v dutině ústní podle tohoto vynálezu se aplikace provádí výplachy přípravkem ve vodné suspenzi, obsahující nejlépe 10 viabilních buněk na 1 ml aplikační vodné suspenze, přičemž výplachy se provádí nejméně dvakrát denně po dobu 5 po sobě následujících dní. Viabilní buňky mikroorganizmu Pythium oligandrum mohou být použity též do zubních past, gelů, ústních sprejů, nebo zavést vodnou suspenzi na léčená místa pomocí injekční stříkačky a jehly. Všechny tyto aplikace se provádí nejméně dvakrát denně po dobu 5 po sobě následujících dní.
Hlavní výhodou tohoto vynálezu je ověřená viabilita buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, dosažení významného a dlouhodobého terapeutického efektu u sledovaných diagnóz, stabilita přípravku, který se v suchém stavu může tímto způsobem kontrolovat a skladovat delší dobu až 2 roky, a dále i možnost přesnějšího a kontrolovaného dávkování při aplikacích. Prokázaná schopnost mykoparazitického mikroorgnizmu Pythium oligandrum potlačovat a zabíjet patogenní kvasinku Candida albicans může být základem vývoje dalších přípravků proti jiným diagnózám, např. vaginálním mykózám (candidosám).
Další předností vynálezu je, že vzhledem k dosavadnímu stavu techniky a dosud uplatňovaných řešení fůngicidních biologických přípravků, přípravek podle tohoto vynálezu pro léčbu dermatofýtos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích obsahuje přesně definované množství účinné biologické látky na základě měření množství viabilních (vzcházivých) buněk mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, k čemuž byla použita přesná molekulární metodika jejich stanovení viabilních buněk, a též způsoby aplikace přípravku, které byly klinicky ověřené.
Vynález umožňuje vytvoření nové generace přípravků využívajících mikroorganizmu Pythium oligandrum se známou vzcházivostí (viabilitou) dormantních oospór, encystovaných zoospor a viabilního coenocytického mycelia při nízké hodnotě mikrobiální kontaminace. Nárokovaný přípravek je možno začlenit do receptur schválených a notifikovaných přípravků s novými a reprodukovatelnými léčebnými účinky popsanými v příkladech provedení na laboratorních a praktických testech. Je popisováno potlačení růstu dermatofýtů a patogenních kvasinek v laboratorním suspenzním testu stejně jako účinky při aplikaci na dermatofytosy zvířat, léčbu tinea unguium u lidí, a na potlačení rozvoje patogenních kvasinek u nehojících se ran diabetických i nediabetických pacientů a v dutině ústní.
Pro stanovení parametru vzcházivostí bylo u mikroorganizmu Pythium oligandrum v předcházejícím výzkumu přijato několik řešení a metodik, z nichž ovšem žádná není pro tento účel příliš vhodná. Tak jsou například metody založené na různých barvicích viabilních technikách dobře fungující pro jiné typy buněk známy u mikroorganizmu Pythium oligandrum svým složitým řešením a ne příliš spolehlivými výsledky. Předkladateli tohoto vynálezu je známá technika plazmolýzy ve vysokých koncentracích osmolytů, která poskytuje spolehlivé výsledky, ale je závislá na subjektivním hodnocení pozorovatelem v mikroskopu. Kromě toho poskytuje informace o intaktnosti (nepoškozenosti) oospory Pythium oligandrum, nikoliv o její vzcházivostí.
-4CZ 307642 B6
Další skupina široce používaných metodik je založena na výsevu přípravku obsahujícího viabilní buňky Pythium oligandrum na mikrobiologické plotny a následujícím sledováním počtu vytvořených kolonií. Bohužel, biologická povaha tohoto mikroorganizmu s jeho aktivním životním stylem a velkou rychlostí lineárního šíření bezpřihrádkového mycelia není příliš kompatibilní s těmito metodikami, které jsou jinak mikrobiologii běžným standardem. Často poslední možností pro stanovení viability v preparátech dormantních oospór mikroorganizmu Pythium oligandrum pak je přímé mikroskopické pozorování klíčících oospór, které je však naopak náročné jak časově tak z hlediska použité experimentální techniky (videozáznam).
Ve světle výše uvedených problémů byly velké naděje pro stanovení viability buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum vkládány do molekulárně genetických technik. V naší předcházející práci jsme se pokoušeli stanovovat viabilitu s použitím námi odzkoušeného molekulárního testu založeného na qPCR amplifikaci dvou nezávislých cílových genových sekvencí tohoto mikroorganizmu (4). Nicméně u řady přípravků obsahujících vysoký obsah rozpadlých buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum se tento přístup neukázal jako vhodný z důvodu velkého pozadí metody. Lepším řešením se v tomto ohledu ukázalo sledování některých transkriptů konstitutivně exprimovaných pouze živými buňkami mikroorganizmu Pythium oligandrum, z nichž byl nakonec zvolen transkript pro β-tubulin, hojně exprimovaný protein tohoto mikroorganizmu. Celý experiment probíhá týden a zahrnuje kultivaci dormantních oospór v médiu obsahujícím penicilín (pro potlačení růstu kontaminujících bakterií) po dobu 4 dní s odběrem vzorků po 24 hodinách a jejich analýzou metodou RT-PCR po transkripci reverzní transkriptasou. Extrapolací linearizované naměřené exponenciální křivky časové závislosti nárůstu do nulového bodu získáme hodnotu vzcházivosti.
Výhodou tohoto způsobu stanovení je přesné určení množství viabilních buněk v jakémkoliv přípravku mikroorganizmu Pythium oligandrum nezávislé na jeho stáří a metodě přípravy. Je třeba zdůraznit, že viabilita buněk přípravků s mikroorganizmem Pythium oligandrum závisí velmi výrazně na způsobu jeho přípravy a uchování, a proto není téměř možné na tento parametr usuzovat z celkového počtu dormantních oospór stanoveného v přípravku mikroskopicky (různá stanovení uvádějí množství viabilních buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum jako 0,01 až 30 % pozorovaného množství dormantních oospór, což je velmi nejistý údaj). Z výše uvedených důvodů je zřejmé, že dosavadní praxe vyjadřování biologické potence (účinné dávky) mikroorganizmu Pythium oligandrum na základě deklarovaného celkového počtu oospór bez stanovení jejich viability poskytuje špatně reprodukovatelné a v podstatě obtížně použitelné výsledky, z nichž není možné určit optimální aplikační dávku, a to ani po korekci na množství aplikované látky. Při použití nově zavedené metodiky byly výsledky laboratorních i praktických testů konzistentní a všechny ukazovaly na optimální aktivitu při různých praktických aplikacích u suspenzí obsahujících od 10 do 50 viabilních oospór na ml aplikační směsi.
Kromě optimálního nastavení aplikačního protokolu jsou přihlašovatelem prováděná a v předloženém vynálezu dále popsaná měření vzcházivosti (viability) dormantních oospór důležitá též pro stabilitní testy při sledování jednotlivých šarží přípravků. Naše praktické zkušenosti z testů účinnosti pak jednoznačně prokazují, že při poklesu množství dormantních oospór pod 330/g přípravku (10/ml aplikované směsi) dochází k poklesu účinnosti při eliminaci dermatofytů a kvasinek, zatímco při poklesu této hodnoty pod 33/g (1/ml aplikované směsi) již není možné pozitivní účinek zaručit. Naopak, vztah koncentrace a účinnosti u přípravků s velmi vysokým obsahem dormantních oospór nelze jednoznačně vyjádřit, závisí zejména na čistotě takového přípravku v závislosti na čistotě vstupních surovin a úzkostlivě dodržované technologii. Za podmínky výskytu kontaminujících látek je možné u přípravků obsahujících více než 33 000 dormantních oospór na 1 g směsi (1000/ml aplikované směsi) pozorovat jistý pokles účinnosti daný pravděpodobně interferujícím vlivem neznámých nečistot. Takový pokles účinnosti nebyl pozorován u vysoce přečištěných forem mykoparazitické řasovky Pythium oligandrum, i když s tímto typem přípravků jsou dosud velmi omezené zkušenosti.
-5CZ 307642 B6
Pro rychlé testy účinnosti mikroorganizmu Pythium oligandrum, zejména suspenzní testy prováděné s mikrokonidiemi dermatofytů nebo suspenzemi kvasinek je další nevýhodou pomalé vzcházení dormantních oospór trvajících nejméně 48 hodin. Proto se pro provedení těchto testů jeví jako výhodné nahradit dormantní oospory encystovánými zoosporami připravenými podle publikované metodiky. Experimentálně bylo námi při přímém srovnání zjištěno, že oba preparáty, tj. jak čerstvě připravené encystováné zoospóry tak dormantní oospory se stanovenou viabilitou projevují identické schopnosti potlačovat dermatofyty a patogenní kvasinky. V případě encysto váných zoospór se navíc jedná o skladovatelnou formu viabilních buněk mykoparasitického mikroorganizmu Pythium oligandrum, jejichž potenciál je předmětem dalšího intenzivního výzkumu.
Navržené metodiky jsou dobře kompatibilní s požadavky na testování živých mikrobiálních léčivých přípravků, u nichž se požadují důkazy pro kolonizaci a popis biologických, metabolických, morfologických a jiných aktivit na místě cílové aplikace. Metoda dle tohoto vynálezu byla v tomto ohledu již úspěšně aplikována při léčbě dermatofytos na zvířecím modelu, kde umožnila mj. objasnit úlohu mikroorganizmu Pythium oligandrum při eliminaci dysbiosy a nastolení normální fyziologické mikrobiální rovnováhy na kůži i na jiných místech aplikace, například na sliznicích (4, 9).
Objasnění výkresů
Technické řešení je dále podrobně popsáno na příkladných provedeních a blíže osvětleno na připojených schematických výkresech, v nichž je znázorněn na obr. 1 laboratorní test účinnosti potlačení dermatofytů a kvasinek v závislosti na množství přidaných viabilních encystovaných zoospór mikroorganizmu Pythium oligandrum, přičemž podrobněji se ukazuje na obr. ÍA a obr. ÍB test účinnosti s použitím dermatofyta Trichophyton interdigitale var. mentagrophytes sbírkového kmene DMF2374 po 24 a po 48 hodinách inkubace, obr. ÍC a obr. ID test účinnosti s použitím dermatofyta Microsporum canis sbírkového kmene CCM8353 po 24 a po 48 hodinách inkubace, obr. ÍE a obr. ÍF test účinnosti s použitím dermatofyta Epidermophyton floccosum sbírkového kmene PL231 po 24 a po 48 hodinách inkubace, obr. ÍG a obr. ÍH test účinnosti s použitím patogenní kvasinky Candida albicans sbírkového kmene CCF8261 po 24 a po 48 hodinách inkubace, obr. 2 klinické výsledky při léčbě experimentální dermatofytózy morčat s tím, že v horní části obrázku jsou uvedené výsledky pro morče léčené placebem a ve spodní části obrázku jsou uvedené výsledky pro morče léčené s použitím suspenze podle příkladu provedení 1 tohoto vynálezu, a podrobněji na obr. 2A fotografie hřbetu morčete v anestézii s aplikací placeba 16. den léčby s charakteristickým zarudnutím pokožky v infikovaných místech, obr. 2B, histologický řez kůže zvířete s aplikací placeba ukazující charakteristické zmnožení keratinocytů v horní vrstvě kůže v reakci na dráždění neléčeným dermatofytem, obr. 2C, klinický index dermatofytosy zvířete s aplikací placeba v jednotlivých dnech léčby vyznačený jako index zčervenání (světle šedé sloupce) a index poškození kůže (tmavě šedé sloupce),
-6CZ 307642 B6 obr. 2D, fotografie hřbetu morčete v anestézii s aplikací suspenze dle příkladu provedení 1 tohoto vynálezu 16. Den léčby s nižší úrovní zarudnutí pokožky v infikovaných místech, obr. 2E, histologický řez kůže zvířete s aplikací suspenze dle příkladu provedení 1 tohoto vynálezu ukazující významně nižší úroveň zmnožení keratinocytů úspěšně léčeného zvířete, obr. 2F, klinický index dermatolýtosy zvířete s aplikací suspenze dle příkladu provedení 1 tohoto vynálezu v jednotlivých dnech léčby vyznačený jako index zčervenání (světle šedé sloupce) a index poškození kůže (tmavě šedé sloupce).
Příklady uskutečnění vynálezu
Námi navrhované řešení je umožněno na základě dalších laboratorních analýz a praktických zkoušek přípravků pro humánní a veterinární medicínu podle tohoto vynálezu, vycházejících z CZ 302297, jejichž detailní formulace byla upřesněna s ohledem na použití při léčbě dermatofytos a tinea unguium, eliminaci kvasinek z nehojících se ran, a eliminaci kvasinek z dutiny ústní. Předložený vynález je dále podrobně popsán v následujících příkladných provedeních, avšak neměl by být na ně omezován. Tato příkladná provedení jsou uvedena, aby popis byl důkladný a úplný a plně zprostředkoval podstatu vynálezu v rozsahu patentových nároků.
Příklad 1
Příprava suchých směsí obsahujících mikroorganizmus Pythium oligandrum o známé vzcházivosti určené pro léčbu dermatofytóz morčat, tinea unguium, eliminaci kvasinek v nehojících se ranách a dutině ústní (Tab. 1, Tab. 2, Tab. 3)
a) Příprava mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum
Pythium oligandrum kmen Ml (kmen DV74, jehož sekvenční protokol je na následující straně) byl udržován na agaru a před kultivací propagován v kapalné kultuře. Kapalnou kulturou byla očkována sterilizovaná škrobová zrna prosa (Panicům miliaceum L.). Kultivace probíhala za sterilních podmínek po dobu cca 7 dní, vlhká biomasa byla poté šetrně vysušena a rozemleta na prášek obsahující částice o průměrné velikosti 35 až 50 pm. Množství oospór bylo zjištěno mikroskopicky a přípravek byl standardizován dle podmínek CZ 302297 na obsah 7 ± 1 x 106 oospór na 1 g.
Dále je uveden Sekvenční Protokol užitého Pythium oligandrum Ml:
Pythium oligandrum Ml_ITS4_rRNA testovaného kmene DV74
-7 CZ 307642 B6
ΑΡ'Ί K ň,c λ/?' }Π !b>?uUÍ ilírU Μ1 8 2 ''T'S '* Ύ acttgaggctgaacgaaggtgagtctgcgtctattttggatgcggatttgctgatgttattttaaa CACCTATTACTTAATACTGAACTATACTCCGAAŤACGAAAGTTTTTGGTTTTAACAATTAACAACT *Κ UCřCTGGATVACTTGG Ai GGA AU-WuA <,,TGCVJv \Υ3ΑΓ'Ί V M\ ' ‘'Ί GG/\GA 3 Γτ 7-705( ACG 2ATC' ΑΛΛ” 1’T'Í C Wu ’ 'U V' GG2 Γ i l· GG j”G ACCGGC YU Γ ATGCCTGTATCAGTGTCCGTACATCA7V\CrTGCCTTTCTrTTTTTGTGTAGTCAAAATTAGAGATG GCAGAVrGTGZxGGTGTCTCyjCGCTGTCTTTTTAAAGAlOGTTCGAGTCCCTTTAAATGTACGTTGA. TTCTTTCTTGTGTCTGCGAATTGCGATGCTATGCTCnTTGTGATCGGTTTAGATTGCTTTGCGCTG gtgggcgacttcggttaggacatAtggaagcaacctcaatiggcggtatgttcggctttgcctgac GTTAAGCTAAGCGAGTGTAGTTTTCTGTCTTTTCCTTGAGGTGTACCTGTCGTGTGTGAGGTTGAT TTAGGCTATATGGTTGCTTGGTTG^GTGGTTTAGCGTTTTCAGACGCCTGCTTCGGTAGGTAAAGG AGACAACACCAATTTGGGACTGAGAGTTTACT
Pythium oligandrum Ml, COXII mitochondrialní cytochrom oxidasa testovaného kmene DV74
G
S:i 1'21 181 2=11 3Ů1 '381 424 4'81 sil tlil úligaaigli llllllCgĚL si:Lqciao:aC: sltLiaifeas gatccaatts a = *. t< iia; g a a a acraixjis tiifcltlŮGi 1 Áá&aglqlag atgccaataq atliaOltV tiatllasii ggttgltaiS t.t.cjr.acatgg Leglageagt? WacilCaša: aatttgcaga laiuaítaalC lllgagfclui llslliCága· gLúiúaltia: ii-giťgaá-gC' aiolaatigt
Lialiaigail tagagtaarc >lgaaacl.át::i tiiaalfititt agliaCaggĚ IglailcTCt afca:ggiifc'a=fela< aat-aaoagct lijlligfei-qa OggfcčaalgC agltlcalla· a ta a ttagtaittt gtattatttg· gaalti:att=t gatttattat agtgaatggt atttttiSll gaáíAagasa t'čt'gae'gttt·' ggttgttitla· agtg&aat'.at gasggttttt . 1 3t 11 atgaaaaaaa' ggaeaaúa-at attcaatgga actqgagtva StLaeitgat aeugtattqi tieattgatt gt a al Slítli
J =t dc Slgttts.gSt tíitgai' tg 11 aaacccéiQ v-s tclagiatta tgaaattatt tgattSttit tiaigltist tgticta.aat ggtlatatii - 11. q ·;·='.·;
< t 1 <3 o.<3- C <i
b) Měření viability buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum ve 3 šaržích
Pro stanovení počtu viabilních buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum přihlašovatel předloženého vynálezu vyvinul speciální postup, který se provádí genetickým testem přípravku ve formě vodné suspenze podle tohoto vynálezu, měřením hladiny exprese konstitutivního genu pro β-tubulin mikroorganizmu Pythium oligandrum, udržovaného v médiu bohatém na živiny, při 30 °C v běžné atmosféře.
V analyzovaném materiálu bylo stanoveno množství viabilních buněk následujícím postupem: 1 g vysušené látky bylo odváženo a rozmixováno ve 100 ml vody v kuchyňském mixeru. 0,5 ml této suspenze bylo smícháno s 4.5 ml kultivačního média v šestijamkové kultivační destičce inkubované při 30 °C, přičemž byly po 48 h, 72 h a 96 h po zahájení inkubace odebírány 50 μΐ vzorky. Nukleové kyseliny byly extrahovány a extrakt naředěn 50 x vodou bez obsahu nukleas. Poté následovala reversní transkripce a PCR amplifikace podle standardního protokolu v reakční směsi obsahující 4 μΐ výše extraktu, 1 μΐ směsi primem pro amplifikaci β-tubulinu Pythium oligandrum (3) a 5 μΐ enzymového mixu. Získaná exponenciální křivka byla linearizována a extrapolována k počátečnímu nulovému času. Takto zjištěná viabilita činila v případě šarže mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum (A) 41700 / g látky, v případě šarže mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum (B) 12500 / g látky a v případě šarže mykoparazitckého mikroorganizmu Pythium oligandrum (C) 8300 / g látky.
V tomto i dalších provedeních jsou písmeny A, B, C v závorkách označeny jednotlivé šarže mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum.
c) Příprava a aplikace směsi pro léčbu dermatofytos a tinea unguium
Tabulka 1. Složení přípravku pro léčbu dermatofytos a tinea unguium.
| Složka suché | Použitá složka i Bm. % složky | lim. % složky funkce | ||
| směsí | CASNo. | 1 v sušině | ve vod.susp. | složky |
| Pyihhim, oligandrum (A) 1 | u f | < 42 | Xb.kopara/Uicka komponenta | |
| Kvs. citrónová | 77-92-9 | 1 23 | 0.67 | Pufr |
| Ihdroyenuhličitan sodný | 144-55-8 | | Í8 i | 0,52 | Pufr/ deodorant |
| Oxid křemičitý | 7631-86-9 | I8 | 0,23 | AdsUrbent: |
| i Pf.í i 6000 l | 25322-68-3 | i 7 | 0.09 | Zvlhovač |
| Uhličitan sodný | 497-19-8 | : ·) | 0,06 | Pufr |
| i Obsah vody ve vodné aplikační sus] | icnzí (100 mí) | do 100 % | Aplik. solvent | |
| ; Koncentrace viabilních buněk | ntykoparazi tichého | -·-·-· - - - -.......—.. .-J 50 viabilních | buněk / 1 mí | |
| mikroorganizmu Pythium oligandrum | přípravku ve vodné suspenzi |
d) Příprava a aplikace směsi pro eliminaci kvasinek v nekojících se ranách
Tabulka 2. Složení přípravku pro eliminaci kvasinek v nekojících se ranách
Složka suché
Použitá složka i llmotn. %
CAS No.
......................
i Pythtúm I
I ' t oligandruffí (B)
Osid křemičitý I 7b3l-86-9 směsi % aktiv látky funkce při aplikací !
: Mykopara/itická i ! komponenta i Adsórbcnt
Obsah fyziologického roztoku ve vodné aplikační do 100 % suspenzi (250 ml)
Koncentrace viabilních buněk mykoparazitického i 30 viabilních buněk / ml přípravku | mikroorganizmu Pvfhium oliganclrum | ve vodné suspenzí
e) Příprava a aplikace směsi pro eliminaci kvasinek v dutině ústní
-9CZ 307642 B6
Tabulka 3. Složení přípravku pro eliminaci kvasinek v dutině ústní
| Složka suché směsi | Použitá služka CASNo. | Hm. % složky v Mršině | Hra. % složky ve vodné susp. | Funkce složkv |
| Pythium | -- | 74 | 0.16 | Mykoparazitická |
| oligaudrum (C? | komponenta | |||
| kys citrónová | 77-92-9 | 31 | 0.90 | Pulračm látka |
| Hjdrogenuhbči-an | 144-55-8 | 27 | 0.79 | Pufracní látka. |
| sodný | deodorant | |||
| Sorbítol | 50-7-4 | 24 | 0.70 | Zvlhčení |
| ()\id kíemičité | 7631-86-9 | X | 0.23 | Adsorbent |
| PFG 6000 | 25322-68-3 | T | 0.09 | Zvlhčení |
| l'hličifan '•odiiš | 497-19-8 | 2 | 0.06 | Pufráční látká: |
| D-Limoneii | 5989-27-5 | 1 | 0.03 | Aroma |
| Obsah vody ve vodné aplikační suspenzi 1100 mb | do 100 % | |||
| Koncentrace Habilnich buněk mykoparazitíckého | 10 viabilnich | oóspór i ml | ||
| mikroorganíxmii Pythium oligandrum | přípravku ve vodné: suspenzi |
Příklad 2
Potlačení růstu a eliminace dermatofytů a kvasinek v laboratorním testu (Obr. 1)
Pro laboratorní testy účinnosti byla zvolena aplikace mikroorganizmu Pythium oligandrum ve formě encystovaných zoospór připravených podle publikovaného protokolu (5). Byl zvolen suspenzní způsob testování, který je preferovaný pro ověření antimikrobiálních aktivit jiných přípravků (1). Zoospóry byly encystovány vortexováním po dobu 2 min a udržovány v těchto podmínkách při 16 °C až do zahájení experimentu. Suspenze mikrokonidií z dermatolýtů Trichophyton interdigitale var. mentagrophytes DMF2374, Microsporum canis CCM8353 a Epidermophyton floccosum PL231 a suspenze kvasinek Candida albicans CCM8261 byly připraveny podle publikovaných metodik (7, 1). Suspenze zoospór a suspenze mikrokonidií nebo kvasinkových buněk byla naředěna na požadovanou koncentraci a buňky byly kultivovány v suspenzi v šesti jamkových plastových destičkách po dobu 48 hodin při 30 °C. Vzorky pro kultivační stanovení byly odebrány po 24 a 48 hodinách.
Výsledek experimentu je uveden na obr. 1 v příloze. Ukazuje se, že ve všech testovaných případech bylo množství encystovaných zoospór optimální pro potlačení růstu studovaných dermatolýtů a patogenní kvasinky Candida albicans mezi 10 a 50 viabilními buňkami na 1 ml vyšetřovaného roztoku s dermatolýtem nebo kvasinkou. Pokud bylo množství encystovaných zoospór menší, nebylo účinné potlačení růstu zaručeno. Překvapivě, ani větší množství zoospór však již nevedlo k lepším výsledkům při potlačení růstu cílových mikroorganizmů, tento růst byl buď identický, nebo byl vyšší.
- 10CZ 307642 B6
Příklad 3
Eliminace dermatofytů a nastolení fyziologické mikroflory u morčat infikovaných dermatofyty (Obr. 2)
Tento test byl proveden podle publikovaného protokolu (4,7) s infekcí ověřeným kmenem Microsporum canis CCM8353. Při aplikaci byla jako placebo použita identická směs jako v příkladu provedení tohoto vynálezu, v níž byla kultivační biomasa nahrazena vodou, jako experimentální látka pak fungicidní látka dle příkladu provedení lc tohoto vynálezu.
Výsledek tohoto testu je popsán ve výsledkové tabuli na obrázku 2. Celkový vzhled léčeného morčete ve spodní části obr. 2 stejně jako histologie kůže tohoto zvířete a hodnota klinických indexů dermatoiýtózy tohoto zvířete jasně prokazují významný klinický efekt při léčbě experimentální dermatofytózy ve srovnání se zvířetem léčeným pomocí placeba, u něhož byla aktivní látka Pythium oligandrum vynechána.
Příklad 4
Eliminace dermatofytů a zlepšení klinického stavu u pacientů trpících tinea unguium (Tab. 4)
V tabulce č. 4 na následující straně jsou uvedené výsledky studie pro 21 pacientu trpících tinea unguium v kombinaci s jinými dermatofytosami. Před aplikací přípravku podle tohoto vynálezu mělo všech 21 pacientů pozitivní nález na mikroskopii a u všech byl potvrzen kultivačně výskyt alespoň jednoho dermatofyta, v některých případech i dvou dermatoiýtů. Z doprovodné mikrobiologie byl výskyt patogenní kvasinky Candida albicans zdaleka nejčastější. Z doprovodných diagnos byl nejčastější diabetes, tinea pedis, tinea pedis var. interdigitale, v jednom případě byla pozorována plísňová onemocnění rukou. Postižení jednoho nebo více nehtů na noze byla v průměrném rozsahu 1.5 plochy nehtu.
- 11 CZ 307642 B6
Tabtiikn 4. Souhrn klinických dut 2í pacientu trpících linea ungiiinm.
Č.ínit.Vřk Před aplikací 3 měsíce po npltk. ‘hněsícá po aplik. Finální hodnocení Parlieipujíeí
Mikr Ktiit Nehet Jiné Mikr Kult Nehet Jiné Milíř Kult Nehet Jiné My kol Kliň dermatoíog
Použiti zkratky; Č, Cisto pacienta ve sludii. init, iniciály pacienta. Mtkr. nticroskopíe v K.OH, Kulí, průkaz kultivačně. Nehet, plocha postiženého nehtu, line, jiná lékařská pozorování. Mykol, hodnoceni finánli ntykologické léčby, Klín, finální klinické hodnocení lékaři na šestibodove škále, y. positivní výsledek, n. negativní výsledek, Ab. A>Íh!<><J‘'t>iw hcfjhtťiiw· i) b ιΊκ plmn uíbiwn f a í wdtdu i! hpalvi >noph\t<»l fl<j< · ·ημ (ir; :',·' tvni vyskyt fa) hoiny w kst (s) sporadický Výsku d’T diabetes nidlitus. Π. tinea interdigitaie, hm, mykesy rukou, tp, linea pedis.
U všech pacientů ve studii byla provedena aplikace přípravku podle příkladu provedení lc ve formě nočních zábalů po dvě po sobě následující noci s opakováním aplikace po 14 dnech a po měsíci.
Devět měsíců po ukončení aplikace, tedy 10 měsíců po zahájení studie bylo provedeno vyhodnocení účinnosti. Mikroskopicky byla většina pacientů negativní a kultivačně byl detekován u dvou pacientů residuální sporadický výskyt dermatofyta Trichophyton rubrum, u jednoho pacienta se tento dermatolyt vyskytl ve zvýšené míře, u jednoho pacienta se vyskytla sporadicky kvasinka Candida albicans. Celkově bylo tedy možno hodnotit úroveň mykologické léčby jako velmi uspokojivou s vyřešením mykologické zátěže u 95 % pacientů, klinická léčba byla průměrně hodnocena na úrovni 2.1 v šestistupňové škále (1 - kompletní léčba bez malformace nehtů, 6 - zhoršení stavu). Celkově byla tinea unguium vyléčena u 12 pacientů bez jakékoliv malformace nehtů (54,5 %), u 1 pacienta došlo k léčbě s residuální malformaci (4,5%), u 6 pacientů bylo patrné klinické zlepšení o více než 50 % (27,3 %), u jednoho pacienta bylo zlepšení nevýrazné do 50 % (4,5 %) a u dvou pacientů nedošlo ke změně klinického stavu ani po 9 měsících po skončení aplikace (9,2 %), zde se ovšem jednalo s vysokou pravděpodobností podle lékařské dokumentace o reinfekci. U žádného pacienta nedošlo ke zhoršení jeho klinického stavu.
Příklad 5
Potlačení a eliminace patogenních kvasinek v nehojících se ranách pacientů (Tab. 5)
V předběžné praktické studii byl sledován vliv aplikace přípravku podle tohoto vynálezu na skupinu 12 pacientů s nehojícími se ranami komplikovanými kvasinkovou infekcí patogenními kvasinkami Candida albicans. Jednalo se o 6 diabetických a 6 nediabetických pacientů. Průměrný věk pacientů v diabetické skupině byl 77,5 roků, v nediabetické skupině 57,2 roků. Zastoupeny jsou převážně ženy, u nichž je známá zvýšená náchylnost k výskytu bércových vředů a nehojících se ran. Z anamnézy pacientů dále vyplývá, že u nich nedošlo k žádnému pokroku v léčbě nehojících se ran po dobu minimálně 6 měsíců od zahájení léčby s použitím běžně používaných lékařských přípravků včetně antibiotik, u mnoha pacientů po ještě delší dobu (až 2 roky).
U pacientů probíhala vlhká léčba s použitím suspenze připravené pomocí přípravků dle příkladu provedení ld jako součást vlhkého hojení. Aplikační obvazy byly vyměňovány po 8 hodinách po celkovou dobu 4 dní. Popsaná aplikace poskytla velmi významné snížení mikrobiologické zátěže, kdy byl výskyt patogenní kvasinky snížen o 95,3 % v případě diabetických pacientů a o 75,3 % v případě nediabetických pacientů, za celou studii bylo tedy pozorováno snížení o 85,3 %. Ke zlepšení klinického obrazu infekce na základě hodnocení participujících lékařů hodnotících rozsah zánětlivého procesu, intenzitu výtoku hnisu apod. Došlo u diabetických pacientů o 78,3 % a u nediabetických o 72,8 %, celkově za celou studii se jednalo o zlepšení o 72,8 %. Byla zjištěna velmi významná korelace mezi snížením mikrobiální zátěže a zlepšením klinického obrazu mikrobiální infekce, což představuje v kontextu publikované lékařské literatury velmi významný poznatek.
- 13 CZ 307642 B6
Tabulka 5
Korelace zlepšení mikrobiologické zátěže a zlepšení klinické mikrobiologie u 12 pacientů s nebojícími se ranami postiženými kvasinkovou infekcí
| Iniciály, věk, pohlaví pacientu | Zlepšení (%) mikrobiáltitho obrazu pacientů | Zlepšení ť%) klinického obrazit pacientu | Korelační koeficient |
| Diabetičtí pacienti | |||
| L.S, 89, ž | 72 | 60 | |
| LS, 87, ž | 100 | 90 | |
| MM. 79, ž | 100 | 90 | |
| ZM.71.Ž | 100 | 90 | |
| MN, 70. in | 100 | 80 | |
| 13R, 69, tn | 100 | 60 | |
| Prutnčr - včk:77.5 | 95.3 | 78.3 | 0.98 |
| Ncdiabetičtí pacienti | |||
| LK, 75, ž | .32 | 28 | |
| BS. 6<>. 2 | 20 | 30 | |
| OK, 65, m | 100 | 90 | |
| OB. 54, ž | 100 | 90 | |
| 11,44. ž | 100 | 80 | |
| v j 1-, £ Průměr - věk:57.2 | 75.3 | 67.2 | 0.99 |
| Celkem za studii: | 85.3 | 72.8 | 0.98 |
Příklad 6
Potlačení a eliminace patogenních kvasinek v dutině ústní (Tab. 6)
Na pracovištích dentální hygieny byla pod odborným vedením stomatologů prováděna studie u 12 pacientů s přítomností patogenních kvasinek v dutině ústní.
Po mikrobiologických odběrech a vyjasnění povahy diagnosy byli pacienti poučeni a bylo pro ně poskytnuto jedno balení přípravku pro eliminaci patogenních kvasinek v dutině ústní, obsahující 5 ks šumivých tablet. Po večerní hygieně dutiny ústní si pacienti dutinu ústní pečlivě vypláchli a poté následovalo nejméně pětiminutové proplachování s přípravkem za podmínek, kdy tento obsahoval průměrně 10 viabilních oospór mikroorganizmu Pythium oligandrum po předchozí aktivaci ve vlažné vodě. Poté již nebyla dutina ústní vyplachována, aby v ní zůstal zbytek aplikačního roztoku přes noc. Ráno byla aplikace opakována a takto pacienti pokračovali po dobu 5 dní s použitím 5 šumivých tablet obsažených v přípravku.
Následné klinické sledování a vyhodnocení účinnosti probíhalo zhruba po 6 měsících po aplikaci. K eliminaci patogenní kvasinky z dutiny ústní došlo o 67,1 %, což bylo doprovázeno průměrným zlepšením klinického stavu takto postižených pacientů o 66,8 %. Pacienti trpěli zejména opakovanými záněty dutiny ústní a periodontální chorobou. Byla opět zjištěna korelace mezi snížením výskytu kvasinek v dutině ústní a zlepšením klinického stavu.
- 14CZ 307642 B6
Tabulka 6
Korelace zlepšení mikrobiologické zátěže a zlepšení klinického stavu u 10 pacientů s kvasinkovou infekcí v dutině ústní.
| Iniciály, věk, pohiuvi pacientů | Zlepšení (%) mikrobiálního obraz» pacientů obrazu | Zlepšení (%) klinického pacientu | Korelační koeficient |
| Cl, 40 | 75 | 50 | |
| UL.38 1 l | 75 | 66 | |
| KA. 26 | / J 50 | ti· /: 4:0 | |
| LI. 60 | 80 | 76 | |
| PP. 74 | 50 | 70 | |
| SM, 37 | 7 v 75 | 6$ 82 | |
| SS, 34 | 50 | 54 | |
| /k. 35 | 75 | 80 | |
| Průměr | 67.1 | 66.8 | 0,95 |
Průmyslová využitelnost
Přípravek pro léčbu dermatofýtos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích může být použit pro potlačování symptomů spojených s infekcí dermatolýty nebo kvasinkami na kůži a sliznicích jako jsou společensky obtížné pachové symptomy, nadměrná potivost nohou, svědění a pálení, k potlačení a eliminaci výskytu dermatolýtů a kvasinek u nehojících se ran, v dutině ústní, na kůži, na urogenitálních sliznicích, ve vlasech a na jiných místech napadených těmito mikroorganizmy.
Citovaná literatura
1. Barros MES. Santos DA. Hamdan JS (2006) Mycol Res 110, 1355-1360.
2. Calderona RA, Fonzi WA (2001) Trends Microbiol 9, 327-335.
3. Horner NR, Grenville-Briggs LJ, van West P (2012) Fungal Biol 116. 24-41.
4. Klimeš R, Suchánek M, Maštalková L a spol. (2016) Vet Dermatol. v tisku.
5. Madsen AM, Robinson HL, Deacon JW (1995) Mycol Res 99, 1417-1424.
6. Martinez DA, Oliver BG, Graser Y a spol. (2012) mBio 3, e00259-12.
7. Saunte DM, Simmel F, Frimodt-Moller N (2007) Antimicrob Agents Chemother 51. 33173321.
8. CZ 302297 (publ. 2011) Suchánek M, Klimeš R
9. CZ 28816 U (publ. 16. 11. 2015) Suchánek M, Klimeš R
10. CZ 9883 U (publ. 14.4.2000) Veselý D, Veselý L
11. Yacoub A, Berger H, Gerbore J a spol. (2016) Genome Announcements 4, e00215-16.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (2)
1. Přípravek s mykopa organismem Pythium oligandrum kmene DV 74 pro užití při léčbě dermatofýtos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích, přičemž přípravek ve formě vodné suspenze zahrnuje:
- 15 CZ 307642 B6 • suchou směs obsahující
0,1 až 99,9 % hmotn. mykoparazitického mikroorganizmu Pythium oligandrum a 0,1 až 99,9 % hmotn. pomocných látek, obsahujících nejméně jednu složku ze skupiny zahrnující adsorbent, pufr, zvlhčovač, deodorant a aroma,
5 a dále • vodu/fyziologický roztok v takovém množství, aby přípravek obsahoval počet 1 až 10 x 106 viabilních buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum na 1 ml vodné suspenze, přičemž viabilní buňky mikroorganizmu Pythium oligandrum, zahrnují dormantní oospory, encystované zoospory ío a viabilní coenocytické mycelium.
2. Přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje 10 až 50 viabilních buněk mikroorganizmu Pythium oligandrum na 1 ml přípravku ve vodné suspenzi.
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-417A CZ307642B6 (cs) | 2016-07-08 | 2016-07-08 | Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích |
| MX2019000269A MX2019000269A (es) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparacion con el microorganismo micoparasito pythium oligandrum viable para el tratamiento de dermafitosis y candidiasis en la piel y membranas mucosas, metodo para determinar la viabilidad de la celula del microorganismo pythium oligandrum y metodo de aplicacion de la preparacion. |
| EP16763432.8A EP3478302B1 (en) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparation with the viable mycoparasitic microorganism pythium oligandrum for the treatment of dermaphytoses and yeast infections on the skin and mucous membranes |
| EA201990200A EA201990200A1 (ru) | 2016-07-08 | 2016-08-22 | Препарат, содержащий жизнеспособный микопаразитический микроорганизм pythium oligandrum, предназначенный для лечения дерматофитоза и дрожжевых инфекций кожи и слизистых оболочек, способ определения жизнеспособности клеток микроорганизма pythium oligandrum и способ применения препарата |
| BR112018077463-4A BR112018077463B1 (pt) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparação contendo o micro-organismo micoparasítico pythium oligandrum cepa dv74 |
| JP2017504824A JP6667501B2 (ja) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | 生存菌類寄生微生物ピシウム・オリガンドラムを含む、皮膚および粘膜の皮膚糸状菌症および酵母感染症の処置用製剤、微生物ピシウム・オリガンドラムの細胞生存率を決定する方法ならびに該製剤の適用方法 |
| US16/314,108 US11331356B2 (en) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparation with the mycoparasitic microorganism pythium oligandrum for the treatment of dermaphytoses and yeast infections on the skin and mucouses, method of determing the cell's viability of the microorganism pythium oligandrum and method of applying the preparation |
| CA3029484A CA3029484A1 (en) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparation with the viable mycoparasitic microorganism pythium oligandrum for the treatment of dermaphytoses and yeast infections on the skin and mucous membranes, method of determining the cell's viability of the microorganism pythium oligandrum and method of applying the preparation |
| KR1020197003237A KR20190064563A (ko) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | 피부 및 점막 상에 피부진균증 및 효모 감염의 치료를 위해 생존가능한 마이코기생충 미생물 피티움 올리간드럼(Pythium oligandrum)을 갖는 제제, 미생물 피티움 올리간드럼의 세포 생존능을 결정하는 방법 및 상기 제제를 적용하는 방법 |
| CN201680088849.6A CN110225759B (zh) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | 用于治疗皮肤真菌病和酵母感染的寡雄腐霉制剂，施用方法和测定寡雄腐霉细胞活力的方法 |
| ES16763432T ES2957887T3 (es) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparación con el microorganismo microparásito viable pythium oligandrum para el tratamiento de dermafitosis e infecciones por levaduras en la piel y las membranas mucosas |
| PCT/CZ2016/000095 WO2018001392A1 (en) | 2016-07-01 | 2016-08-22 | Preparation with the viable mycoparasitic microorganism pythium oligandrum for the treatment of dermaphytoses and yeast infections on the skin and mucous membranes, method of determining the cell's viability of the microorganism pythium oligandrum and method of applying the preparation |
| JP2019184069A JP2020073475A (ja) | 2016-07-01 | 2019-10-04 | 生存菌類寄生微生物ピシウム・オリガンドラムを含む、皮膚および粘膜の皮膚糸状菌症および酵母感染症の処置用製剤、微生物ピシウム・オリガンドラムの細胞生存率を決定する方法ならびに該製剤の適用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-417A CZ307642B6 (cs) | 2016-07-08 | 2016-07-08 | Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2016417A3 CZ2016417A3 (cs) | 2018-01-24 |
| CZ307642B6 true CZ307642B6 (cs) | 2019-01-30 |
Family
ID=60987903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2016-417A CZ307642B6 (cs) | 2016-07-01 | 2016-07-08 | Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ307642B6 (cs) |
| EA (1) | EA201990200A1 (cs) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ9883U1 (cs) * | 1999-11-18 | 2000-04-14 | Dasa Doc Ing Drsc Vesely | Prostředek na ochranu pokožky využívající houbu Pythium oligandrum |
| CZ20377U1 (cs) * | 2009-11-04 | 2009-12-18 | Bio Agens Research And Development - Bard, S.R.O. | Protiplísňová směs s houbovým organismem Pythium oligandrum |
| CZ2009724A3 (cs) * | 2009-11-04 | 2011-02-09 | Bio Agens Research And Development - Bard, S.R.O. | Protiplísnová smes s houbovým organismem Pythium oligandrum |
-
2016
- 2016-07-08 CZ CZ2016-417A patent/CZ307642B6/cs unknown
- 2016-08-22 EA EA201990200A patent/EA201990200A1/ru unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ9883U1 (cs) * | 1999-11-18 | 2000-04-14 | Dasa Doc Ing Drsc Vesely | Prostředek na ochranu pokožky využívající houbu Pythium oligandrum |
| CZ20377U1 (cs) * | 2009-11-04 | 2009-12-18 | Bio Agens Research And Development - Bard, S.R.O. | Protiplísňová směs s houbovým organismem Pythium oligandrum |
| CZ2009724A3 (cs) * | 2009-11-04 | 2011-02-09 | Bio Agens Research And Development - Bard, S.R.O. | Protiplísnová smes s houbovým organismem Pythium oligandrum |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| A. Krýzová: "Pythium oligandrum v klinické praxi" Universita Pardubice, FCHT, 2014 http://dspace.upce.cz/bitstream/handle/10195/58253/KryzovaA_Pythi;jsessionid=9A05E408A339FF3FC57C3ECC7FDE7F31?sequence=2 * |
| M. Načeradská a kol: "Léčba dermatofytózy pomocí Pythium oligandrum - Kazuistika THERAPY OF DERMATOPHYTOSIS BY MEANS OF PYTHIUM OLIGANDRUM - A CASE REPORT" VETERINÁRNÍ LÉKAŘ 9 (1) 2011, 11-16 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2016417A3 (cs) | 2018-01-24 |
| EA201990200A1 (ru) | 2019-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5563822B2 (ja) | オキシドレダクターゼ酵素を含む抗微生物性および免疫賦活性の系 | |
| Vianna et al. | Efficacy of sodium hypochlorite combined with chlorhexidine against Enterococcus faecalis in vitro | |
| KR20140032413A (ko) | 신규 락트산 박테리아 및 그를 함유하는 조성물 | |
| US20100098645A1 (en) | Formulation and method for the treatment of fungal nail infections | |
| RU2536264C2 (ru) | Композиция для наружного применения на коже, содержащая соль и сахар в качестве активных ингредиентов, для предотвращения и лечения вагиноза, и ее применение | |
| JP2021505667A (ja) | ざ瘡およびバイオフィルムに対するバクテリオファージ処置 | |
| Nakagawa et al. | Tacrolimus has antifungal activities against Malassezia furfur isolated from healthy adults and patients with atopic dermatitis | |
| WO2001007643A1 (fr) | Methode de detection d'un micro-organisme pathogene et d'un agent antimicrobien, methode d'evaluation des effets medicamenteux de l'agent antimicrobien, et agent antimicrobien | |
| TWI383798B (zh) | 改善口腔內細菌群的發酵乳酸桿菌ＳＧ－Ａ９５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＳＧ－Ａ９５）及其保健組合物 | |
| Shurrab | Antimicrobial Efficiency of Some Antiseptic Products on Endodontic Micoflora Isolated from Gangrenous Pulp Tissue | |
| Tjin et al. | Exposure time of virgin coconut oil against oral Candida albicans | |
| EP3244902B1 (en) | Dual microbial preparation for long-term suppression or prevention of symptoms of opportunistic microbial infections | |
| JP2020073475A (ja) | 生存菌類寄生微生物ピシウム・オリガンドラムを含む、皮膚および粘膜の皮膚糸状菌症および酵母感染症の処置用製剤、微生物ピシウム・オリガンドラムの細胞生存率を決定する方法ならびに該製剤の適用方法 | |
| Nikolić et al. | ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF OZONE GAS AND COLLOIDAL SILVER AGAINST ORAL MICROORGANISMS. | |
| WO2017038872A1 (ja) | 抗真菌活性を有する組成物 | |
| JP4424643B2 (ja) | 抗真菌剤の製造方法 | |
| CZ307642B6 (cs) | Přípravek s mykoparazitickým mikroorganizmem Pythium oligandrum pro užití při léčbě dermatofytos a kvasinkových infekcí na kůži a sliznicích | |
| Ohnemus et al. | An ex‐vivo oral mucosa infection model for the evaluation of the topical activity of antifungal agents | |
| RU2841065C1 (ru) | Композиция на основе 2-((1S,2S,4S)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гепт-2-ил)сульфанилэтанола для лечения кандидоза полости рта и способ лечения кандидоза | |
| Zeeuwen et al. | The skin microbiota | |
| WO2021182377A1 (ja) | クロストリディオイデス ディフィシル菌増殖抑制剤 | |
| Al-Masaudi et al. | Antimicrobial activity of different types of honey on some multiresistant microorganisms. | |
| Sika et al. | d’Ivoire during covid-19 | |
| Corrêa et al. | Zein-Based Sponges Functionalized with Glucose and Loaded with Ellagic Acid for Wound Treatment | |
| Kędzia et al. | Activity of Dentosept on yeastlike fungi responsible for infections of oral cavity |