CZ9883U1

CZ9883U1 - Prostředek na ochranu pokožky využívající houbu Pythium oligandrum

Info

Publication number: CZ9883U1
Application number: CZ199910098U
Authority: CZ
Inventors: Dasa Doc Ing Drsc Vesely; Lukas Mudr Vesely
Original assignee: Dasa Doc Ing Drsc Vesely; Lukas Mudr Vesely
Priority date: 1999-11-18
Filing date: 1999-11-18
Publication date: 2000-04-14

Description

Prostředek na ochranu pokožky využívající houbu Pythium oligandrum

Oblast techniky

Technické řešení se týká biologického prostředku, obsahujícího houbový organismus Pythium oligandrum, pro léčení kožních onemocnění.

Dosavadní stav techniky

Kožní onemocnění nohou patří k velmi hojně se vyskytujícím civilizačním chorobám lidí. Podle údajů z literatury je jimi postižen každý třetí člověk. Situace je o to závažnější, že onemocnění je nakažlivé nejen přenosem z člověka na člověka přímým dotykem, ale také zejména prostřednictvím předmětů, které s infekčním zdrojem přišly do styku.

Nejčastějším onemocněním kůže jsou záněty - dermatózy. Jsou vyvolány sice infekcí patogenní mikroflóry ale pokožka lidí je disponována k onemocnění také chemickými látkami, které znečišťují naše životní prostředí a mohou i v malých dávkách vyvolat přecitlivělost - kožní alergii.

Problémem současné kožní medicíny je skutečnost, že léčebné metody jsou založené právě na chemoterapii, to znamená, že proti patogenním mikroorganismům se používají agresivní formy léčby - eradikace - chemickými terapeutiky, které však postihují nejen cílového patogena, ale bohužel také i chemikáliemi z prostředí již rozjitřelé tkáně lidí včetně pokožky. Také další agresivní formy léčby antibiotiky a hormony jsou častěji odmítány.

V současné konzervativní léčbě proti onemocnění kůže převažuje léčba již zmíněnými chemoterapeutiky. Nejde však jen o chemická léčiva. Také kosmetické prostředky a v daném případě deodoranty pro korekci lidských pachů jsou založeny na využití chemie. Jejich každodenní používání a občasné předávkování, však ve svých důsledcích, opakovaně přecitlivuje pokožku pro vstup infekčních patogenních agens.

Teprve nedávno se začalo ke kožním obtížím přistupovat diferencovaně a komplexně, neboť kožní obtíže vyžadují nejen lokální, ale i celkovou péči.

Módní vlnou je používání přírodní kosmetiky - bez chemie. Využívají se zde převážně látky získané macerací okvětních plátků různých rostlin, rostlinné silice např. z březové kůry, balzámy obsahující mentol, kafr, dále koupelové soli, kolagenní hydrolyzáty a kobylí mléko.

Tyto prostředky jsou dodávány jako oleje, zásypy, regenerační a hydratační krémy, opět s bylinnými přísadami. Jedná se však více o kosmetické přípravky než léčiva, která by řešila podstatu problémů - odstranění chorob.

V současné době, jako metoda první volby, se v případě kožního onemocnění prosazují citlivé přírodní metody.

Až dosud však nebyl navržen, podle dostupné vědecké, odborné i patentové literatury, výzkumně ani výrobně, prostředek proti kožním onemocnění nohou, která jsou vyvolána kolonizací meziprstních prostorů a chodidel patogenní mikroflórou, v němž by účinným agens byl rovněž mikroorganismus, který však patogenní mikroflóru eliminuje a ozdravuje tuto lokalitu lidských nohou.

Podstata technického řešení

Překvapivě bylo zjištěno, že půdní mikroskopický houbový organismus, Pythium oligandrum Drechsler, účinně zabraňuje rozvoji patogenní flóry na nohou lidí, odstraňuje nepříjemné pachy a prostředí nohou ozdravuje.

- 1 CZ 9883 Ul

Jedná se o prioritní poznatek o houbě Pythium oligandrum a o možnosti jejího využití v humánní, případně veterinární medicíně a ve výrobě kosmetických deodoračních prostředků, které korigují společensky nepřijatelné pachy nohou lidí.

Houba Pythium oligandrum byla popsána v roce 1930 v USA jako sekundární patogen hrachu (Drechsler C. 1930: Some new species of Pythium. - J.Wash.Acad.Sci.20, 398-418). Později, stejný autor (Drechsler C. 1943: Two species of Pythium occuring in southem States. Phytopatology 4:261-299) objevil, že tato houba parazituje na některých jiných houbách z třídy Oomycetes. Tato houba byla poprvé navržena k využití v rostlinolékařství a sice v biologické ochraně proti spále řepy cukrové (Veselý D. 1976: Prostředek stimulující při aplikaci na semena ío řepy cukrové růst vzcházejících rostlin a chránící je proti spále; AO 199906, dále Veselý D. a Hejdánek S.: Způsob výroby prostředku stimulujícího při aplikaci na semena řepy cukrové růst vzcházejících rostlin a chránícího je proti spále (AO 204208); dále Veselý D. a Hejdánek S.: Prostředek na ochranu řepy cukrové proti spále na bázi oospór mykoparazita, Pythium oligandrum (AO 213659).

Přestože tyto vynálezy významně posunuly stupeň poznání o houbovém organismu Pythium oligandrum, teprve Užitný vzor Veselý D. Prostředek pro podporu růstu rostlin a/nebo k jejich ochraně, číslo zápisu 393, dosáhl průmyslového měřítka.

Mikromycet Pythium oligandrum napadá a inhibuje překvapivě široký okruh hostitelských hub, podle literárních údajů zatím více než 50 druhů hub, převážně fytopatogenních.

P. oligandrum se vyznačuje větším množstvím způsobů účinku: nejznámějším je mykoparazitismus, tzn., že tento houbový organismus napadá své hostitele v bezprostřední blízkosti parazitickými hyfami, proniká do hyf hostitele, omotává je a výsledkem je naprosté zničení celé stélky hostitele. P. oligandrum je řazeno do skupiny tzv. nekrotrofních mykoparazitů: tzn., že nejprve svými metabolity usmrtí buňky hostitele a teprve potom je kolonizuje, (Veselý D. 1987:

Biological control od damping-off pathogens by treating sugar-beet seed with a powdery preparation of the mycoparasite Pythium oligandrum in large-scale field trials. Academia Prague, Elsevier Science Publishers, Amsterdam). Krátká J., Bergmannová E., Kůdelová A. 1994 prokázali, že P. oligandrum indukuje zejména v nadzemních částech rostlin několikanásobně vyšší obsah fytohormonu kyseliny indolyloctové a fosforu, přičemž tyto jevy jsou spojeny s růstovými efekty u rostlin. Benhamou N., P. Ray, M. Chérif, J. Hockenhull a Y. Tirilly 1997: Treatment with the Mycoparasite Pythium oligandrum Triggers Induction of Defense-Related Reactions in Tomato Roots When Challenged with Fusarium oxysporum f. sp. radicislycopersici. Phytopathology 87,1:108-122., podali vědecky přesvědčivý důkaz, že P. oligandrum, kromě toho, že je mykoparazitem, spouští /indukuje/ v rostlinách obranné reakce proti patogenům. Benhamou N., P. Rey, K. Picard a Y. Tirilly 1999: Ultrastructural and Cytochemical Aspects of the Interaction Between the Mycoparasite Pythium oligandrum and Soilbome Plant Pathogens. Phytopathology, 89,6:506-517 uvedli, že alespoň dva odlišné mechanismy jsou odpovědné za útok P. oligandrum proti houbám: kromě již známého mykoparazitismu se dá předpokládat působení hydrolytických enzymů a antibiózy, přičemž u ní by šlo zřejmě o produkci proteinu s nízkou hmotností molekuly.

Ukázalo se, že houbový organismus Pythium oligandrum v testech in vitro na agarových plotnách, parazituje na hlavních původcích dermatomykóz, kromě toho, že inhibuje také růst patogenních bakterií a kvasinek.

Tyto překvapivé vlastnosti byly zjištěny jen u některých kmenů Pythium oligandrum, které byly buď izolovány jako tzv. divoké kmeny z přírody, anebo byly zjištěny také u některých kmenů získaných parasexuální hybridizací s využitím tzv. sterolových kmenů, jejichž získání bylo popsáno v Užitném vzoru č. 393.

V prostředku, který je formulován jako dispergovatelný prášek, jsou přítomné kontaminující (doprovodné) mikroorganismy, s rozhodujícím podílem houbového organismu Pythium oligandrum, účinným agens. Spolu s nosičem účinného agens tvoří suchou směs. Nosičem

-2CZ 9883 Ul účinného agens je amorfní oxid křemičitý (70 až 80 % objemových); koncentrát oospór (vytrvalých výtrusů) houby Pythium oligandrum, rozptýlených v rozemletém substrátu ze zrnin, výhodně s jáhlami z prosa (Panicům miliaceum L.) a kukuřice (Zea mays L.) tvoří zbylých 30 až 20 % objemových. Celkový počet mikroorganismů v léčebném prostředku nepřesahuje horní limit počtu buněk podle Přílohy č.7 Nařízení vlády č. 174/1998 Sb., tj. 5 x 10 . g'¹. Pythium oligandrum z toho zaujímá počet 2 x 10⁵ oospór (vytrvalé výtrusy) v 1 gramu prostředku. Nosič účinného agens, oxid křemičitý /Siloxid/, slouží také jako vysoušedlo při koupelích nohou postižených dermatomykózami. Po opakovaných koupelích nohou, chodidel a nártů, alespoň třikrát po sobě, při nichž se dávka 1 gramu prostředku rozptýlí ve 3 litrech odstáté vody, se io zpravidla odstraní chorobné příznaky v krátké době.

Příklady provedení

A) Složení směsí

Inertním nosičem účinného agens, oospór P. oligandrum, který má velký měrný povrch, je amorfní oxid křemičitý (Siloxid) obsahující SiO₂ 85 % hmotnostních, s obsahem Fe přepočteným jako Fe₂O₃ menším než 0,05 % hmotnostních, obsahem Cu 0,0005 %, Mn 0,0005 %, Pb méně než 0,0001 %, pH 1% vodní suspenze 6,5 až 7,4; o střední velikosti částic 25 mikronů s měrným povrchem mezi 70 až 120 m². g'¹ a sypnou hmotností 130 až 200 kg. m³.

Příklad 1

P.oligandrum ve formě oospór 20 (kmen specificky selektovaný proti původcům dermatofytóz), nativní kmen, maximálně

Organický podíl získaný sušením kultivačního substrátu s nárůstem účinného agens

Inertní plnidlo tvoří zbývající podíl

Příklad 2

P.oligandrum ve formě oospór (kmen specificky selektovaný proti původcům dermatofytóz), hybridní kmen, maximálně

Inertní plnidlo 35 tvoří zbývající podíl

Příklad 3

P.oligandrum ve formě oospór (kmeny specificky selektované proti původcům dermatofytóz) směs nativních a hybridních kmenů, maximálně

Organický podíl získaný sušením kultivačního substrátu s nárůstem účinného agens . 10⁵ oospór v 1 g prostředku

0,2 až 0,3 g v 1 g prostředku v 1 g prostředku

2.10⁵ oospór v 1 g prostředku

0,2 až 0,3 g v 1 g prostředku v 1 g prostředku

2.10⁵ oospór v 1 g prostředku

0,2 až 0,3 g v 1 g prostředku

-3CZ 9883 Ul

Inertní plnidlo v 1 g prostředku tvoří zbývající podíl

Ve všech případech byl obsah vody kolem 5,0 až 7,5 % hmotnostních u finálního prostředku určeného ke skladování.

B) Způsob přípravy

Oospóry (vytrvalé výtrusy) houby Pythium oligandrum se získají následujícím postupem: do uzavřených kultivačních nádob se vloží kultivační substrát tvořený zrninami, výhodně loupanými obilkami (jáhlami) prosa (Panicům miliaceum L.) a kukuřice (Zea mays L.). Po sterilizaci v horkovzdušném autoklávu se tento substrát inokuluje specifickými kmeny mikromyceta P. oligandrum, selektovanými na účinnost proti dermatofytózám. Takto ošetřený substrát se kultivuje po dobu 8 dní ve fermentovně při teplotě 25 až 27 °C. Tímto procesem se získá vlhká biomasa koncentrátu oospór, která se po dobu 36 až 48 hodin při teplotě 28 až 30 °C suší v horkovzdušné sušárně. Po této době se vysušený produkt (koncentrát oospór) šetrně rozemele na práškovitou hmotu o průměrné velikosti rozemletých částic 35 až 50 mikrometrů. Potom se smísí s nosičem účinného agens, amorfním oxidem křemičitým v požadovaném poměru, v závislosti na počtu oospór v koncentrátu tak, aby výsledná koncentrace účinného agens (oospór P. oligandrum) v prostředku byla maximálně 2.10⁵ v 1 gramu.

Účinnost kmenů Pythium oligandrum proti původcům dermatofytóz se zjišťovala testováním v podvojných kulturách na agarovém médiu v Petriho miskách a účinnost prostředku byla testována na lidských pacientech jeho aplikací na postiženou pokožku.

Výsledky testů účinnosti:

I. Testování kmenů Pythium oligandrum, účinného agens prostředku. Podvojné kultury této antagonistické houby s původcem dermatofytózy: jako modelový patogenní mikroorganismus byla vybrána houba Scopulariopsis brevicaulis (Sace.) Bainier 1907, známý původce onychomykóz (plísňového onemocnění nehtů).

Po třech dnech kultivace obou mikromycetů, porost S. brevicaulis jevil zřetelné známky degenerace porostu. Mycelium bylo mokvavé a ustupovalo před porostem P. oligandrum. Mikroskopickým vyšetřením se ukázalo, že substrátová část mycelia kolonie houby S.brevicaulis v inhibiční zóně je prorostlá myceliem antagonisty P. oligandrum, které hojně fruktifikovalo, takže ve všech částech mycelia patogena S. brevicaulis se vyskytovalo značné množství oospór houby P. oligandrum, což je jednoznačným důkazem, že antagonista se vyživuje stélkou tohoto hostitele.

II. Testování účinnosti prostředku na lidských pacientech

	Příznaky	Ošetření nohou	Doba odeznění příznaků
Pacient č. 1 aktivní sportovec -fotbalista, lokalita: Albrechtice okres Bruntál	3 roky trvající vleklá plísňovitá choroba, drobné vodnaté pupínky na ploskách obou chodidel, svědivé, hnilobný zápach	Koupel nohou ve vodní suspenzi přípravku (1 g na 3 1 odražené vody), přípravkem byla ošetřena i obuv	28 dní, naprosté vymizení chorobných změn
Pacient č. 2 muž 40 let, kosmetické pracoviště	1 rok trvající plíseň na palcích obou chodidel, modrofialové	3 aplikace lázně v suspenzi přípravku, opakované po 14 dnech, třetí	za 60 dní nehet dorostl, pod nehtem není patrné žádné zabarvení

-4CZ 9883 Ul

	Praha 6-Petřiny	skvrny průměru 0,5 mm	po 30 dnech
5	Pacient č.3 žena 50 let, kosmetické pracoviště Praha 6-Petřiny	několik let trvající žluté zabarvení v rohu pod nehtem. Nehet tvrdý, bolestivé při stříhání nehtu a při nošení obuvi	1 x aplikace suspenze	po 14 dnech zůstaly sice pod nehtem příznaky signalizující přítomnost plísně, ale nehet byl měkčí a méně bolestivý
10	Pacient č.4 žena 25 let kosmetické pracoviště Praha 6-Petřiny	1 měsíc zažloutlý okraj nehtu palce	2 x aplikace suspenze přípravku v rozmezí 3 týdnů	za 21 dnů byl nehet bez plísně
15	Pacient č.5 muž 40 let, kosmetické pracoviště Praha 6-Petřiny	půl roku trvající výskyt žlutě zabarvené kvasinky na obou palcích	1 x aplikace suspenze přípravku	po 30 dnech zlepšení
20	Pacient č.6 žena 60 let, kosmetické pracoviště Praha 6-Petřiny	potivé nohy	1 x aplikace suspenze přípravku	po 30 dnech zmírnění obtíží
25	Pacient č.7 žena 30 let, kosmetické pracoviště Praha 6-Petřiny	2 roky nehet ztluštělý a bolestivý	3 x aplikace suspenze	bolestivost zmírněna
30	č. 8: skupina pacientů kosmetické pracoviště Praha 6-Petřiny	dlouholeté těžké stavy onemocnění kůže a nehtů nohou mykózami	standardní opakovaná aplikace	úplné vyléčení
35	č.9: skupina pacientů Studio vlasové	pach nohou, mykózy	standardní opakovaná aplikace	zamezení pachu nohou, příznivý antimykotický účinek

a lékařské kosmetiky40 nemocnice

Na Homolce, Praha 5

Průmyslová využitelnost

Prostředek pro biologickou regulaci výskytu mikrobiálních onemocnění chodidel nohou /dermatofytóz/, zejména nehtů, meziprstních prostorů a plosek chodidel je formulován tak, že je

-5CZ 9883 Ul možno jej vyrábět ve velkotonážních objemech a z organických i anorganických materiálů, které jsou cenově přístupné, jako jsou obilky zrnin a oxid křemičitý.

Použité médium je založeno na využití vedlejšího produktu při výrobě řepného cukru - melasy. Vlastní kultivace houbového organismu Pythium oligandrum je zpracována pro využití v rozsahu průmyslového měřítka.

Claims

NÁROKY NA OCHRANU

1. Biologický prostředek pro potírání původců dermatofytóz na kůži lidí, zejména meziprstních prostorů, nehtů, plosek chodidel nohou a pro korekci společensky nepřijatelných pachů, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku houbový organismus ío Pythium oligandrum ve formě oospór.
2. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje účinnou složku v kombinaci s anorganickým nosičem.
3. Prostředek podle nároků la 2, vyznačující se tím, že anorganickým nosičem účinné složky je amorfní oxid křemičitý.

15 4. Prostředek podle nároků l,2a3, vyznačující se tím, že celkový počet oospór houbového organismu Pythium oligandrum je maximálně 2 x 10⁵ v 1 g prostředku.