KR102510118B1 - 큐티박테리움 애크니스에 대한 사멸능을 갖는 박테리오파지 cap-1 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 큐티박테리움 애크니스에 대한 사멸능을 갖는 박테리오파지에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 피부에서 증식하여 염증을 유발시키는 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 사멸능을 갖는 박테리오파지 CAP-1에 관한 것이다.
본 발명에 따른 박테리오파지 CAP-1은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 우수한 감염 및 용해능을 갖고 있으므로, 큐티박테리움 애크니스가 주원인이 되는 여드름성 피부질환을 예방 및 치료하는데 광범위하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 박테리오파지 CAP-1은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 우수한 감염 및 용해능을 갖고 있으므로, 큐티박테리움 애크니스가 주원인이 되는 여드름성 피부질환을 예방 및 치료하는데 광범위하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 큐티박테리움 애크니스에 대한 사멸능을 갖는 박테리오파지에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 피부에서 증식하여 염증을 유발시키는 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 사멸능을 갖는 박테리오파지 CAP-1에 관한 것이다.
인체의 피부에는 다양한 유익균과 유해균의 생태계가 존재하게 되며 Staphylococcus 속, Corynebacterium 속, Cutibacteium 속, Pseudomonas 속, Lactic acid bacteria 등이 피부의 물리화학적인 환경에 기반하여 인체 여러 곳에 특징적으로 존재하는 것으로 알려져 있다.
여드름은 가장 잘 알려진 인체 피부에 발생되는 병변으로 피지분비가 많은 모공속에서 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)의 증식과 염증반응으로 일어나는 것으로 알려져 있다. 인체 피부에 다양한 미생물종이 생태계를 이루는 것을 피부 마이크로비옴(Microbiome)이라고 하며 보통 세균, 바이러스, 진균으로 구성된다. 이 미생물 생태계가 균형을 이루는 것이 피부 장벽유지에 매우 중요한 요인이 된다.
큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes) 균은 건강한 인체 피부 마이크로비옴의 약 90% 정도를 차지하는 것으로 알려져 있다. 여드름은 만성적 질환으로 긴 치료시간이 필요하며, Tetracycline, Erythromycin, Mupirocin 등의 항생제를 장기간의 치료에 이용하면서 일부 균에 대해서 항생제 저항성이 나타나게 할 수 있다.
이러한 여드름 균을 치료하기 위하여, 천연물 유래의 항균제를 개발하기 위한 많은 연구가 있었는데, 한국등록특허 제2350437호는 황련해독탕의 김치유산균 발효물을 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 개시하였고, 한국공개특허 제2022-0001590호는 황칠추출물을 포함하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 개시하였다.
한편, 박테리오파지는 지구상에 가장 많은 Biomass로 알려져 있으며 특정 세균을 감염시키고 사멸시킬 수 있는 바이러스이다. 일반적으로 박테리오파지는 비교적 좁은 범위의 숙주 감염능을 보이므로 다른 세균을 감염시키는 가능성이 줄어들게 되며, 숙주 세균을 감염이후에 박테리오파지는 증식할 수 있다. 먼저 박테리오파지가 숙주세균을 인식할 때 숙주 세균막 표면 수용체에 결합한 이후 박테리오파지가 가지고 있는 DNA를 숙주세포로 주입하여 자가 복제를 시작한다.
박테리오파지를 활용한 산업체에서 이용은 식품제조업, 농축산 제조업, 화장품, 사료 등 그 분야를 넓혀가고 있으며 특히 미국 FDA에서는 살모넬라, 리스테리아, 장출혈성대장균 등에 대한 박테리오파지에 대해서 GRAS(Generally Recognised As Safe)로 인증하면서 안전성을 확보하며 그 사용을 승인하고 있으며 대상 균종의 종류도 확대되고 있는 추세에 있다.
박테리오파지를 이용한 여드름 균 치료제에 대한 연구는 아직 초기 단계로서, 한국공개특허 제2019-0039473호는 박테리오파지-내성 P. 아크네스를 감염시킬 수 있는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes, P. 아크네스((P. Acnes)) 박테리오파지 돌연변이체(bacteriophage mutant)를 개시하였고, 한국등록특허 제1689033호는 여드름균(Propionibacterium acnes)에 대한 특이적 사멸능을 갖는 시포비리대 과(Siphoviridae)의 박테리오파지 Pacnes 2012-15를 개시하였으나, 더욱 많은 연구가 필요하다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점을 해결하기 위해 노력한 결과, 인간의 침(saliva) 시료에서 분리한 박테리오파지가 피부 유익균에 대해서는 항균활성이 없지만, 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 감염 및 용해능을 갖는다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 피부 유익균에는 영향을 미치지 않고, 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 감염 및 용해능을 갖는 박테리오파지를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 의해 유발되는 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 의해 유발되는 피부 트러블 개선용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 감염 및 용해능을 갖는 박테리오파지 CAP-1(기탁번호 KCTC 18995P)을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 박테리오파지는 서열번호 1로 표시되는 전장 유전체를 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한, 상기 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름, 염증, 면포 및 농포로 이루어진 군에서 선택된 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름, 염증, 면포 및 농포로 이루어진 군에서 선택된 피부 트러블 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 박테리오파지 CAP-1은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 우수한 감염 및 용해능을 갖고 있으므로, 큐티박테리움 애크니스가 주원인이 되는 여드름성 피부질환을 예방 및 치료하는데 광범위하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 분리된 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스에 대한 Spot assay 결과를 나타낸 사진이다.
도 2는 박테리오파지 CAP-1의 형태를 전자현미경으로 촬영한 사진이다.
도 3은 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스에 대한 용균력을 확인한 결과이다.
도 4는 박테리오파지 CAP-1을 포함하는 액상 젤의 큐티박테리움 애크니스에 대한 Spot assay 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스 바이오 필름 형성 억제능을 확인한 사진이다. (a: Cutibacterium acnes 접종 후 박테리오파지 CAP-1 처리하지 않음, b: Cutibacterium acnes 접종 후 박테리오파지 CAP-1 처리함, c: Cutibacterium acnes 접종하지 않고, 배지만 접종한 대조군, d: Cutibacterium acnes 접종하지 않고, 박테리오파지 CAP-1 처리함)
도 6은 박테리오파지 CAP-1의 여드름 피부염 환자에 대한 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 2는 박테리오파지 CAP-1의 형태를 전자현미경으로 촬영한 사진이다.
도 3은 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스에 대한 용균력을 확인한 결과이다.
도 4는 박테리오파지 CAP-1을 포함하는 액상 젤의 큐티박테리움 애크니스에 대한 Spot assay 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스 바이오 필름 형성 억제능을 확인한 사진이다. (a: Cutibacterium acnes 접종 후 박테리오파지 CAP-1 처리하지 않음, b: Cutibacterium acnes 접종 후 박테리오파지 CAP-1 처리함, c: Cutibacterium acnes 접종하지 않고, 배지만 접종한 대조군, d: Cutibacterium acnes 접종하지 않고, 박테리오파지 CAP-1 처리함)
도 6은 박테리오파지 CAP-1의 여드름 피부염 환자에 대한 치료 효과를 확인한 사진이다.
본 발명에서는 큐티박테리움 애크니스에 대하여 사멸능을 갖는 박테리오파지를 인간의 침(saliva) 시료에서 분리하고, 분리된 박테리오파지의 형태적 및 유전적 특성을 분석하여 공지된 박테리오파지와 유전자 서열이 상이하다는 것을 확인하였다. 또한, 분리된 박테리오파지는 피부 유익균인 포도상구균, 황색포도상구균, 대장균, 마이크로코커스속 균 및 피부 유익균인 유산균종에 대해서는 사멸능이 없다는 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 감염 및 용해능을 갖는 박테리오파지 CAP-1(기탁번호 KCTC 18995P)에 관한 것이다.
본 발명의 박테리오파지 CAP-1은 서열번호 1로 표시되는 전장 유전체를 가진다.
큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)는 피부, 결막, 외이(外耳), 인두부, 여성 비뇨기 등에 상재하는 균으로서, 일반적으로 여드름 및 이와 관련된 질환의 원인이 되는 것으로 알려졌다.
본 발명에서는 인간의 침(saliva) 시료로부터 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대한 사멸능을 갖는 박테리오파지를 선별하였고 이를 CAP-1로 명명하였다. 또한, 선별된 박테리오파지를 한국생명공학연구원 생물자원센터 (기탁번호 KCTC 18995P)에 기탁하였다.
본 발명은 선별된 박테리오파지 CAP-1 전장 유전체의 핵산 분자 서열을 제공한다 (서열번호 1).
본 발명에서 사용된 "핵산 분자"라는 용어는 DNA (gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 핵산 분자에서 기본 구성 단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드 뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)).
본 발명에 있어서, 박테리오파지 CAP-1은 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적인 사멸능을 갖는 것을 특징으로 한다.
한편, 박테리오파지 CAP-1은 피부 유익균으로 알려진 포도상구균, 황색포도상구균, 대장균, 마이크로코커스속 균, 락토바실러스 종, 락토코커스 종 등에 대해서는 항균활성을 갖지 않는 것을 특징으로 한다.
상기 락토바실러스 종으로는 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 액시디피시스(Lactobacillus acidipiscis), 락토바실러스 크러스토럼Lactobacillus crustorum) 등을 예시할 수 있고, 락토코커스 종은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 등을 예시할 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름, 염증, 면포 및 농포로 이루어진 군에서 선택된 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 사용된 '치료'라는 용어는 여드름균에 의해 유발된 질환의 예방, 여드름균에 의해 유발된 질환의 억제 및 여드름균에 의해 유발된 질환의 경감을 의미한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 박테리오파지 CAP-1 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염을 단독으로 함유하거나 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다.
본 발명의 박테리오파지 CAP-1은 그 자체 또는 염, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명에서 '약학적으로 허용 가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다.
경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다.
또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로 부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름, 염증, 면포 및 농포로 이루어진 군에서 선택된 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물은 비경구적인 투여방법으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.
바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물은 경피 투여될 수 있다. 상기에서 경피 투여란 본 발명의 약학적 조성물을 세포 또는 피부에 투여하여 본 발명 조성물에 함유된 활성성분이 피부 내로 전달되도록 하는 것을 말하다.
예컨대, 본 발명의 약학적 조성물을 주사형 제형으로 제조하여 이를 30 게이지의 가는 주사 바늘로 피부를 가볍게 단자(prick)하는 방법, 또는 피부에 직접적으로 도포하는 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같이 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 약학적 조성물은 1 × 103 내지 1 × 1011pfu/㎖의 박테리오파지를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 됨으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명은 또 다른 관점에서 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름, 염증, 면포 및 농포로 이루어진 군에서 선택된 피부 트러블 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 본 발명의 화장료 조성물은 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(액상 젤, 화장수, 크림, 에센스, 클렌징폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 박테리오파지 CAP-1을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 박테리오파지 CAP-1을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 박테리오파지 CAP-1의 함량은 이에 한정되지 않지만 1 × 103 내지 1 × 1011pfu/㎖의 박테리오파지를 포함하는 것이 바람직하다.
[실시예]
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: CAP-1 박테리오파지 분리 및 동정
조사대상 성인 남녀 50인으로부터 얻은 침 시료(1~5ml)를 원심분리(3000 X g, 15분, 4 ℃)하여 세균 및 침속 입자를 제거하였다. 상등액을 0.45 ㎛ 멤브레인 필터를 이용하여 균을 추가로 제거한 이후 2~8 ℃ 냉장고에 7일간 보관하여 불안정한 박테리오파지를 제외시켰다.
박테리오파지의 존재유무를 검사하기 위하여, 2X Brain Heart Infusion broth 45 w/CaCl2 20mM, L-cysteine 0.1g/L를 혼합한 후 배지 숙주세균인 큐티박테리움 애크니스 KCOM 1315을 200 ㎕ 접종하고, 혐기상태에서 35 ℃ 24시간 정치 배양하였다.
제균이 완료된 분리 시료 100 ㎕와 증균이 완료된 큐티박테리움 애크니스 KCOM 1315 500 ㎕를 Top soft agar (Brain Heart Infusion agar(0.5%), w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L)에 넣고 혼합한 후 Bottom agar(Brain Heart Infusion agar(0.5%), w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L) 위에 분주하여 굳힌 후 혐기상태에서 35 ℃ 24시간 정치 배양한 후 Plaque 형성 유무를 관찰하였다.
형성된 Plaque를 따로 선택하여 SM buffer (10 mM MgSO4, 100 mM NaCl, 0.01% gelatin, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5)에 현탁하여 단일파지 집락을 선택하였다. (도 1)
선택된 단일 박테리오파지를 생명공학연구원의 유전자은행(KCTC)에 기탁하고 (KCTC 18995P), "박테리오파지 CAP-1"으로 명명하였다.
실시예 2: 박테리오파지 CAP-1의 형태관찰 및 분류
박테리오파지 CAP-1의 형태관찰을 위해 박테리오파지를 PEG 정제를 하고, Plaque assay법을 이용하여 박테리오파지 농도를 측정하여 1.2×109pfu/ml의 농도로 농축액을 분리 정제하였다. 박테리오파지 용액을 Copper grid에 올리고 2% 우라닐 아세테이트(Uranyl acetate)로 염색하고 건조하였다. 염색된 시료를 80 KV의 전압으로 에너지 투과 전자현미경 (Hitachi, H-7600)을 이용하여 관찰하였다.
도 2에서 도시된 바와 같이, 박테리오파지를 형태적으로 분류하였을 때 Siphoviridae에 속하며 평균적으로 57 nm의 Head와 160 nm 정도의 tail을 보이고 있다.
실시예 3 : 박테리오파지 CAP-1의 유전학적 특성 확인
박테리오파지 CAP-1의 전체 유전자 염기서열 분석을 위해 DNeasy Blood Tissue kit (Qiagen)을 이용해서 전체 유전자를 추출하였다. 전체 염기서열을 분석하기 위해 (주)마크로젠에 의뢰하여 염기서열 결과를 얻었다 (NGS, illumine).
전체 염기서열은 29,216 base pair이며, GC ratio는 54.43 %이었고, 40개의 ORF로 구성되어 있었다.
전체 염기서열을 NCBI Blast 검색을 한 결과 CAP-1 파지의 유전체는 JX570702.1 Propionibacterium phage PHL111M01와 91% 상동성을 보였다.
| No | Start | Stop | Number of amino acids | Protein size(Kda) | Product |
| 1 | 37 | 429 | 130 | 13.8 | Hypothetical protein |
| 2 | 431 | 778 | 115 | 13.09 | Hypothetical protein |
| 3 | 785 | 1075 | 96 | 10.1 | Hypothetical protein |
| 4 | 1072 | 1443 | 123 | 13.7 | Hypothetical protein |
| 5 | 1495 | 2139 | 214 | 22.9 | structural protein |
| 6 | 2168 | 2464 | 98 | 10.7 | Hypothetical protein |
| 7 | 2563 | 2850 | 95 | 10.6 | Hypothetical protein |
| 8 | 2858 | 5623 | 921 | 93.8 | tail protein |
| 9 | 5638 | 6585 | 315 | 35 | Phage tail protein |
| 10 | 6593 | 7750 | 385 | 43.1 | Hypothetical protein |
| 11 | 7771 | 8589 | 272 | 29 | Hypothetical protein |
| 12 | 8646 | 8909 | 87 | 9.7 | Hypothetical protein |
| 13 | 8913 | 9692 | 259 | 25.6 | Collagen triple helix repeat |
| 14 | 9689 | 10609 | 306 | 33.3 | Peptidoglycan binding domain 1 |
| 15 | 10622 | 11023 | 133 | 13.8 | Hypothetical protein |
| 16 | 11105 | 11617 | 170 | 19.1 | Hypothetical protein |
| 17 | 11614 | 12021 | 135 | 15.2 | Hypothetical protein |
| 18 | 12025 | 12306 | 93 | 10.2 | Hypothetical protein |
| 19 | 12325 | 12645 | 106 | 12.3 | Hypothetical protein |
| 20 | 12656 | 13702 | 348 | 39.4 | Hypothetical protein |
| 21 | 13699 | 13896 | 65 | 7.3 | Hypothetical protein |
| 22 | 13880 | 14089 | 69 | 7.7 | Hypothetical protein |
| 23 | 14144 | 14701 | 185 | 22 | Hypothetical protein |
| 24 | 14748 | 15419 | 223 | 25.1 | Hypothetical protein |
| 25 | 15883 | 16836 | 317 | 35.6 | Hypothetical protein |
| 26 | 16883 | 17353 | 156 | 17.3 | Hypothetical protein |
| 27 | 17405 | 17809 | 134 | 14.8 | Hypothetical protein |
| 28 | 17806 | 18747 | 313 | 35.7 | Hypothetical protein |
| 29 | 18747 | 19100 | 117 | 13.2 | Hypothetical protein |
| 30 | 19206 | 19406 | 66 | 7.1 | Hypothetical protein |
| 31 | 19403 | 19630 | 75 | 8.3 | Hypothetical protein |
| 32 | 19653 | 20186 | 177 | 18.8 | Hypothetical protein |
| 33 | 20307 | 20618 | 103 | 11.8 | Hypothetical protein |
| 34 | 20650 | 20958 | 102 | 11.3 | Hypothetical protein |
| 35 | 23543 | 23914 | 123 | 14 | Hypothetical protein |
| 36 | 23914 | 25425 | 503 | 54 | Terminase |
| 37 | 25422 | 26741 | 439 | 47.6 | Phage portal protein SPP1 Gp6 like |
| 38 | 26747 | 27502 | 251 | 28 | Hypothetical protein |
| 39 | 27611 | 28162 | 183 | 20.1 | Hypothetical protein |
| 40 | 28169 | 29140 | 323 | 33.4 | Hypothetical protein |
실시예 4: 큐티박테리움 애크니스에 대한 용균력 확인
박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스에 대한 용균활성을 확인하였다. 큐티박테리움 애크니스 KCTC 1315균을 Brain Heart Infusion broth w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L 배지 10 ㎖에 접종한 후 혐기상태에서 35 ℃ 24시간 배양하여 Seed culture를 준비하였다.
테스트군(CAP-1, 5×105 PFU/㎖, 0.5㎖)과 대조군 검사를 위해 각각 40 ㎖의 Brain Heart Infusion broth w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L 배지를 준비한 후 Seed culture 2% 접종한 후 OD600 흡광도를 측정하였다. 18시간 배양 후 OD600 값이 0.4에 이르렀을 때 5×105 PFU/㎖ 농도의 박테리오파지 CAP-1을 0.5 ㎖ Infection을 하여 균의 성장을 관찰하였다. 도 3에 도시된 바와 같이, 박테리오파지 CAP-1 접종하고, 12시간 이후에 큐티박테리움 애크니스 균의 성장이 억제됨을 확인할 수 있었다.
실시예 5: 큐티박테리움 애크니스균 및 피부 상재 박테리아에 대한 박테리오파지 CAP-1의 항균활성 및 유산균 감수성 평가
다양한 종의 큐티박테리움 애크니스에 대한 박테리오파지 CAP-1의 항균활성을 조사하였다. 우선, 큐티박테리움 애크니스 균은 Brain Heart Infusion broth w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L에 접종한 후 35 ℃ 24시간 배양하여 Brain Heart Infusion Agar w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L에 접종하여 Lawn을 준비하였다.
다음으로, 포도상구균 및 황색포도상구균, 대장균, 마이크로코커스속 균은 Tryptic soy agar 배지에 접종하여 Lawn을 제조하였고, 피부 유익균으로 알려진 유산균인 Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidipiscis, Lactobacillus crustorum, Lactococcus lactis 균의 경우 MRS agar에 접종 도말하여 lawn을 준비하였다.
각각 준비된 배지에 CAP-1을 1×106 PFU/㎖의 농도로 준비한 용액 5 ㎕을 떨어뜨려 Plaque의 형성 유무를 관찰하고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
| 대상균주 | effect | 대상균주 | effect |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1315) |
+ | Staphylococcus aureus (ATCC 6538) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1861) |
+ | Staphylococcus epidermidis (MG-SE001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1812) |
+ | Staphylococcus haemolyticus (MG-SH001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 3063) |
+ | Staphylococcus hominis (MG-J001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1542) |
+ | Staphylococcus lugdunesis (MG-SL001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1543) |
+ | Staphylococcus xylosus (MGAJNZT01) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 2584) |
+ | Micrococcus luteus (KCCM 11211) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 2580) |
+ | Micrococcus yunnanensis (MG-MY001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 2578) |
+ | Escherichia coli (ATCC 8739) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1899) |
+ | Lactobacillus paracasei (MG-LP001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 1627) |
+ | Lactobacillus plantarum (MG-LP002) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCOM 5012) |
+ | Lactobacillus johnsonii (MG-LJ001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCTC 3314) |
+ | Lactobacillus reuteri (MG-LR001) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCTC 5933) |
+ | Lactobacillus acidipiscis (NBRC102163) |
- |
| Cutibacterium acnes (KCCM 41657) |
+ | Lactobacillus casei (MG-LC001) |
- |
| Cutibacterium acnes (wild type, Food process 분리균주) | + | Lactobacillus crustorum (MG-LC002) |
- |
| Lactococcus lactis (MG-LL001) |
- |
표 2에 나타난 바와 같이, 박테리오파지 CAP-1은 16종의 큐티박테리움 애크니스에 대하여 항균활성을 나타내었으며, 이외 나머지 포도상구균, 황색포도상구균, 대장균, 마이크로코커스속 균 및 피부 유익균인 유산균종 8종에 대해서는 항균활성을 나타내지 않았다.
실시예 6: 박테리오파지 CAP-1을 포함하는 액상 젤 조성물의 항균활성 평가
박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 조성물의 항균활성을 평가하기 위하여, 물에 잘 녹고, 투명하며, 농도에 따라 점도의 소재를 만들 수 있어, 다양한 화장품, 제약 등의 소재로 사용되는 NatrosolTM HEC (Hydroxyethylcellulose)와 박테리오파지 CAP-1을 표 3의 조성으로 혼합하여 액상젤을 제조하였다.
| 성분 | 함량 |
| 박테리오파지 CAP-1 (1 × 106pfu/㎖) |
99부피% |
| NatrosolTM HEC | 1부피% |
증균된 큐티박테리움 애크니스를 Brain Heart Infusion Agar w/CaCl2 10mM, L-cystein 0.05g/L에 접종하여 Lawn을 준비하였다. 제조된 액상젤 및 대조군인 NatrosolTM HEC 각각을 준비된 배지에 0.2 ㎖을 떨어뜨려 혐기상태에서 35 ℃ 24시간 정치 배양한 후 Plaque 형성 유무를 관찰하였다 (도 4 참조).
도 4에 나타난 바와 같이, 박테리오파지 CAP-1을 포함하는 액상 젤은 큐티박테리움 애크니스에 대하여 항균활성이 유지 및 발휘되는 것을 알 수 있었다.
실시예 7: 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스 바이오 필름 억제효능 평가
치료목적으로 항생제의 지속적인 사용은 항생제 저항 바이오 필름의 형성을 촉진하며 이 바이오 필름은 유해세균에 대한 인체 피부 방어기전을 억제할 수 있으며 피부 미생물 군체의 변화를 가져올 수 있는 것으로 알려져 있다.
따라서, 박테리오파지 CAP-1의 큐티박테리움 애크니스 바이오 필름 억제 효능을 평가하였다.
바이오필름을 형성시키기 위해, 약 4.4 × 108 cfu/ml 농도의 큐티박테리움 애크니스 (KCTC 1315) 균액 100 ㎕와 BHI(L-cysteine 0.5g/L, L-cystein 0.05g/L) 100 ㎕를 혼합 후 96 well plate에 넣고 3일간 혐기배양 하였다.
이후 1.2 × 109 pfu/㎖ 농도의 박테리오파지 CAP-1 용액 20 ㎕를 큐티박테리움 애크니스 바이오 필름이 형성된 96 well plate에 처리한 후 2일간 배양하였다.
다음으로, 96 well plate에서 배지를 제거하고 60 ℃ Dry oven에서 1시간 건조한 후 Crystal violet 50 ㎕를 Well에 넣고 20분간 바이오 필름을 염색하였다.
끝으로, 상등액을 제거한 후 Phosphate buffered saline을 이용하여 3~4회 세척하고, 바이오 필름의 존재를 관찰하였다(도 5 참조).
도 5로부터, 큐티박테리움 애크니스를 접종하고, 박테리오파지 CAP-1을 처리하지 않은 경우(5-a)에는 바이오 필름이 형성되었으나, 큐티박테리움 애크니스를 접종하고, 박테리오파지 CAP-1을 처리한 경우(5-b)에는 바이오 필름 형성이 억제되는 것을 알 수 있었다. 또한, 큐티박테리움 애크니스를 접종하지 않고, 배지만 접종한 경우(5-c) 및 큐티박테리움 애크니스를 접종하지 않고, 박테리오파지 CAP-1을 처리한 경우(5-d)에는 바이오 필름이 형성되지 않았다.
실시예 8: 박테리오파지 CAP-1 조성물의 여드름 피부염 환자에 대한 효과 검증
실시예 4 및 실시예 5에서 확인한 바와 같이, 박테리오파지 CAP-1은 큐티박테리움 애크니스에 대한 항균활성을 갖고 있으므로, 이는 여드름 환자에게 처리시 치료 효과가 있을 것으로 예측되었다.
따라서, 여드름 환자로 판정된 성인 남자 5명을 대상으로 박테리오파지 CAP-1을 포함하는 조성물을 제조하여 그 효과를 평가하였다.
조성물의 구성은 박테리오파지 CAP-1 106PFU/ml, CaCl2 10mM, 20mM Tris-Cl(pH7.5), 100mM NaCl, 60mM MgSO4·7H2O, 0.01% gelatin으로 구성하였다. 박테리오파지 CAP-1의 자체 효과를 검증하기 위하여, 피부 보습제, 방부제, 유연제 등의 화장품 기본 구성을 이루는 성분을 제외시키고, 기본 버퍼 조성을 제조하였다.
여드름이 발생한 부위에 박테리오파지 CAP-1 조성물을 오전 9시 및 저녁 9시 하루 2회 도포한 후 건조시켰으며, 해당 부위에는 기타 보습제, 화장로션 등을 처리하지 않았다.
치료 효과를 확인하기 위하여, 매일 결과를 확인하고, 그 결과를 도 6에 나타내었다.
평가 결과, 처리 3일 후에는 여드름 부위가 진정되었으며, 10일 후에는 염증부위가 가라앉으면서 서서히 병변 부위가 사라지는 것을 확인하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
SEQUENCE LISTING
<110> Microgiene Co., ltd
<120> Bacteriophage CAP-1 with growth inhibition activity against
Cutibacterium acnes
<130> P22091
<160> 1
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 29216
<212> DNA
<213> bacteriophage
<400> 1
cctttcgccg atattcctgc ggggaagctt gaggcgatga ttgccgatgt ggaggctgtg 60
gctgtcagtg tcgccccctg tatcgctaaa ccggatttca aatacaagga tgccgctaag 120
gctatattgc gcagggccct gttgcgctgg aatgataccg gggtttcggg tcaggtgcag 180
tatgagtctg cgggcccgtt tgctcagact acacggtcta atactcccac gaatttgcta 240
tggccgtcag agattgccgc gttgaagaag ctgtgtgagg gtgatggtgg ggctggtaaa 300
gcgttcacta tcacacccac tatcaatggt cgatatgcac attctgaggt gtgttccact 360
gtgtggggtg agggttgctc gtgcggatct gatattaacg gctacgctgg ccctttgtgg 420
gagatatgat atgaccagtt ttccttacgg tgaaacggtt gtgatgcttc agccgactat 480
tcgtgtcgat gatcttggcg acaaggttga ggattggtct aagcctgccg agactgtgtt 540
ccataacgtg gccatctatg cttccgtttc gcaggaggat gaggccgcgg ggcgtgactc 600
ggattatgag cattggtcga tgcttttcaa gcagcctgtc aagggtgccg gttatcgttg 660
ccggtggcgt attcggggtg ttgtgtggga ggctgacggg tctcctatcg tgtggcatca 720
ccccatgtcc ggttgggatg cgggcacgca gatcaatgtg aagcgtaaga agggctgatg 780
ggttgtggct caggatgtga atgtgaagct gaacttgccg ggtattcgtg aggtgttgaa 840
gtcccctggg gtgcagggca tgttggctga gcgtggcgag cgtgtcaagc gtgcagcctc 900
ggcgaatgtg ggcggtaacg ctttcgataa ggcccagtat cgtgcagggt tgtcgtcgga 960
ggtgcaggtt caccgtgttg aggctgtcgc caggattggc accacatata agggtgggaa 1020
gcgtattgag gcgaagcatg gcacgctggc ccggtcgatt ggggctgcgt cgtgatcgtt 1080
tacggtgatc cgcgtgtgtg ggctaaacgc gtgctcaagg atgatggctg gctgtctgat 1140
ataccgtgta ctgggacggt gcctgacgat ttcggcggtg atctgatttg gttggcgttg 1200
gatggtggcc cgcagttgca tgtgcgtgag cgtgtgtttt tgcgtgtgaa tgtgttttct 1260
gatatgccgg atcgtgctat gtcgttggcg cgtcgtgttg aggctgtgct ggctgatggt 1320
gtggacggtg acccggtggt gtactgtagg cgttctactg gccctgattt gctggttgat 1380
ggtgcacgtt ttgatgtgta ttcgcttttt gagcttatat gtaggcctgc ggagtctgaa 1440
taagcttatt gtttttgttt taatgtaatt gtttgatatt taatgggggt tatgatggct 1500
gcaacacgta aagcgtctaa tgttcgctct gctgttacgg gtgacgtcta tattggtaaa 1560
gctcatgccg gtgacactat tgatggtgtg gagccggttc cttccgggct tacagcttta 1620
gggtatctgt cggatgacgg gtttaagatt aagcctgagc gtaaaacgga tgatttgaag 1680
gcttggcaga atgcggatgt tgttcgcact gtggctacgg agtcgtctat cgagatttct 1740
ttccagctga tcgagtctaa gaaggaggtt atcgaactgt tttggcagtc gaaggttact 1800
gccggagccg attcgggttc gttcgatatt tctcctggtg ccacgacggg tgtgcacgct 1860
ttactgatgg atattgttga tggcgatcag gttattcgct actatttccc tgaggttgag 1920
ttgatcgatc gtgacgagat taagggtaag aatggcgaag tgtacgggta tggtgtgacg 1980
ttgaaggcgt atcctgccca gattaataag aagggtgatg cggtgtctgg tcgggggtgg 2040
atgacggctt taaaagctga tactcccccg gttccccctt ctccggcccc gaagcctcct 2100
aagcctgagc cggatccgaa tccgccgtct aataactgat acacatagtt tgagggattg 2160
ttgatagatg agtgacacag gttacacgtt gaagattggt gaccgtagct gggtgttggc 2220
ggatgcggag gagacggcgc aggctgttcc tgcccgcgtt ttccgtcgtg ccgctaagat 2280
tgcccagtct ggggagtctg ctgatttcgc ccaggttgag gtgatgtttt ctatgctaga 2340
agcggccgcc ccagaggatg ctgtggaggc tttggagggg cttcctatgg ttcgtgtggc 2400
cgagattttc cgccagtgga tggaatataa gcctgacggt aagggtgcct cgctggggga 2460
atagtttggc tccacggcct gattgatgat tatcgtgggg ccatcgaata cgatttccgc 2520
accaagtttg gtgtttctgt ttatagtgtt ggtggcccgc agatgtgttg gggtgaggct 2580
gtccggctgg ctggcgtgtt gtgtaccgat acgtctagcc agttggcggc ccacctgaat 2640
ggttggcagc gcccgtttga gtggtgcgag tgggctgtgc tggacatgtt ggatcattac 2700
aggtctgcta atagtgaggg gcagccggag cctgtggcga ggcctacgga tgagcgtagg 2760
gcccggttta cgtctgggca ggtggacgat attttggcgc gtgttcgtgc cggtggcggg 2820
gtgtctcgcg agattaatat tatggggtga atagtgtatg tctggtgaga ttgcttccgc 2880
atatgtgtcg ttgtatacga agatgcctgg ccttaaaagt gatgttggta aacagttgtc 2940
gggtgttatg cctgctgagg gtcagcgttc gggtagcttg tttgctaagg gcatgaagtt 3000
ggctcttggt ggtgccgcga tgatgggtgc catcaatgtg gccaagaagg gtctcaagtc 3060
tatctatgat gtgactattg gtggcggtat cgctagggcg atggctatcg atgaggctca 3120
ggctaaactg actggtttgg gtcacacgtc ttctgacacg tcttcgatta tgaattcggc 3180
tattgaggct gtgactggta cgtcgtatgc gttgggggat gcggcgtcta ctgcggctgc 3240
gttgtctgct tcgggtgtga agtctggcgg gcagatgacg gatgtgttga agactgtcgc 3300
cgatgtgtct tatatttctg gtaagtcgtt tcaggatacg ggcgctattt ttacgtctgt 3360
gatggctcgc ggtaagttgc agggcgatga catgttgcag cttacgatgg cgggtgttcc 3420
tgtgctgtct ttgcttgcca ggcagacggg taaaacgtct gctgaggtgt cgcagatggt 3480
gtcgaagggg cagattgatt ttaacacgtt tgcggctgcg atgaagcttg gcatgggtgg 3540
tgctgcgcag gcgtctggta agacgtttga gggcgctatg aagaatgtta agagcgccct 3600
gggctatctt ggtgctacgg ctatggcgcc gtttcttaac ggcctgaggc agatttttgt 3660
tgcgttgaat ccggttatca agtctatcac ggagtctgtg aagcccctgt ttgcgtcggt 3720
ggatcagggg attcagcgga tgatgccgtc tattttggcg tggattaacc gtatgccggg 3780
catgatcaca agaatgaatg cacagatgcg cgccaaggtt gagcagttga agggcatttt 3840
tgcgagactg catttgcctg ttcctaaagt gaatttggct gccatgtttg ctggcggcac 3900
cgcagtgttt ggtattgtgg ctgccggtgt ggggaagctt gttgcggggt ttgccccgtt 3960
ggcggtgtcg ttgaagaatt tgttgccgtc gtttggtgct ttgaagggtg ccgctggggg 4020
gcttggtggc gtgtttcgcg ccctgggtgg tcctgttggt attgtgatcg ggctgtttgc 4080
tgccatgttt gctacgaacg cccagttccg tgccgctgtt atgcagcttg tcggggttgt 4140
tggccaggct ttggggcaga ttatggccgc cttgcagcct gtgtttggtt tggttgctgg 4200
tttggtggca cggttggcgc cagtgtttgg ccagattatc ggtttggttg ccgggttagc 4260
ggcgcagctt atgcctgtga ttggtatgtt ggttgcccgg ctggttcctg tgatcacgca 4320
gattattggt gcggtgacgc aggttgctgc catgttgttg cctgcgttga tgccggtgtt 4380
gcaggctgtt gtggctgtga tacgtcaggt tgttggtgtg gtcatgcagt tggtgccggt 4440
gttgatgccg gtgattcagc agattttggg tgctgtcatg tctgttctgc caccgattat 4500
tggccttatc cgttcgttga tgcctgtgat tgcggcggtt atgcgtgtgg tggtgcaggt 4560
tgttgcggtt gtgatacagg tggtggcccg tattcttgct gttgtggctc cgatggtggc 4620
ggccgtggtc gggtttgttg cccgtattgt tggtgctgtc gtgtcggctg tggcccgtgt 4680
tattgccgct gttgcccgtg tcatctcgtg ggttgttgcc cattttgtgt ctggtttggc 4740
gcgtatgggt tcggtggttc aggctggctg gaatcatatt agggcgttta cgtctgcgtt 4800
tattaatggt ttcaagtcgg tgatttctgg cggtgtgaac gctgttgtgg ggttttttgc 4860
ccggctgggt tcttcggttg cctcccatgt gaggtctggg tttaacgcgg cccgtggcgc 4920
tgtttcttcc gccatgaacg ggatacgtag tgttgtgtct tcggtggcgt ctgctgttgg 4980
cgggtttttc agttcgatgg cttctcgggt tcgtggtgct gcctcgtccg ggtttaacgc 5040
tgcgaggggt gcggcttctt ctgctatgca tgctatgggc tcggctgtgt ctagcggggt 5100
gcatggtgtg ctgggttttt tcaggaatct tcccagtaat attaggggcg ccttgggtag 5160
tatggggtcc ctgttggtgt ctgctggccg tgatgtggtg tctggtttgg gtaatggtat 5220
ccggaatgct atgagtggcc tgttggatac ggtgcgtaat atgggttccc agattgcgaa 5280
tgctgcgaag tctgctctgg gtattcattc cccgtctcgg gtgtttcgtg acgaggttgg 5340
ccgtcaggtt gttgccggtt tggctgaggg gatcaccggg aatgctggtt tggcgttgga 5400
tgcgatgtcg ggtgttgctt cgcagcttcc ggatgctgtg gatgcccggt ttggtgtgcg 5460
atcgtctgtg ggctcgttta ccccgtacga ccggtatcag cgtatgaatg ataagagtgt 5520
tgtggtgaat gtgaatggac ctacgtatgg tgatcctgcc gagtttgcga agcggattga 5580
gcggcagcag cgtgacgctt tgaacgcgtt ggcttacatg tgagtaaagg ggtatgcatg 5640
tttattcctg acccgtctga tcgtgccggt ttgactgtgg attggactat gtttccgttg 5700
gttggtaatg ctccggagcg tgtgcttcat ttgacggatt atacgggtgc gtctcctgtc 5760
atgttgttga atgattcatt gcgcggtttg ggtgttcctg aggtggagca tttttctcaa 5820
acgcatgttg gggtgcacgg ttcggagtgg cgcgggttta atgtgaagcc tcgcgaggtg 5880
acgctgccgg tgttggtgtc gggtgttgac ccggatccgg tgggcgggtt tcgtaacggt 5940
tttttgaagg cctatgacga gttgtggtct gcttttcctc ctggcgaggt gggggagttg 6000
tctgtgaaga ctcctgccgg tcgtgagcgt gtgctgcggt gtcggtttga ttcggtggat 6060
gacacgttta cggttgatcc ggtgaatcgc ggctatgccc gctatctgtt gcatttgacg 6120
gcctatgacc cgttttggta tggggatgag cagaagtttc gttttagtaa cgcgaagttg 6180
caggattggc tgggtggcgg ccctgtcggc aaggatggca cggcgtttcc tgtggtgttg 6240
acaccgggtg tgggctcggg ttgggataat ctgtctaata agggtgatgt gcctgcgtgg 6300
cctgtgattc gtgttgaggg gcctttggag tcgtggtctg tgcagattga tggtttgcgt 6360
gtgtcttcgg attacccggt ggaggagtat gattggatca ctattgatac ggatcctcgc 6420
cagcagtctg cgttgttgaa tgggtttgag gatgtgatgg atcgtttgac agagtgggag 6480
tttgcgccta ttccgcctgg cggttctcgg agtgtgaata ttgagatggt tggtttgggt 6540
gccattgttg tgtcggtgca gtacaggttt ttgagggctt ggtgaatggt tgatggctgg 6600
tcttgttccg cagttaacat tgtttacacc ggattatcgt cgtgtggcgc ctatcaattt 6660
ttttgagtcg ttgaaactgt cgttgaagtg gaatggtttg tccactttgg agttggtggt 6720
gtcgggtgat cattctaggc ttgacgggtt gactaggccg ggtgcacggc tggttgttta 6780
ttatggtggt ggccagattt tttctgggcc tgtgcgtcgg gttcatggtg tgggtccttg 6840
gcgttcttcg cgggtgacta tcacgtgtga ggatgatatc cgcctgttgt ggcgtatgct 6900
gttgtggcct gtgccttatc gttccagcat cattgggatg gagtggcgtg cggaccgtga 6960
ttatgctcac tattcgggtg cggcggagtc ggttgctaag aaggcgttgc gggataatac 7020
ttggcgtttt ccgcctgata tatttatggt ggatgataag agtcgtggcc gctatattaa 7080
ggattttcag gcgcggtttc acgtgtttgc cgataagttg ttgccggtgt tgtcgtgggc 7140
tcggatgact gtcacggtga aacagtttga gaatgtgaag caggatcagc gtggtttact 7200
gtttgattgt gtgcctgctg tgacgcgtga gcatgtgttg actgccgagt ctgggtctat 7260
tgtgtcgtgg gagtatgtgc gtgacgcccc gaaggctacg gcggtggttg tgggtggccg 7320
cggcgaaggc aaagatcggc tgttttgtga ggattttgac gcgttggccg aggatgagtg 7380
gtttgatcgt gtcgaggtgt tcaaggatgc ccgtaacacg gattctgagc atgtgcatct 7440
cattgatgag gcggagcggg tgttgtccga gtcgggggcc acgtcggggt ttaagatcga 7500
gttggctgag tcggatgtgt tgcggtttgg gccaggcaat ctgatgccgg gtgatttgat 7560
ctatgtggat gtgggctcgg ggcctattgc ggagattgtt cggcagattg atgtggagtg 7620
tgtatcgcct ggtgacgggt ggacgaaggt gactcctatt gcgggggatt atgaggataa 7680
tccgtcggcc ctgttggctc gccgtgtggc tgatttggct gcgggtgtgc gggatttgca 7740
aaaattttag aaaagaattg ggggtttgtt gtgggtattg tgtgcaaggg ttttgatggt 7800
gtgttgaccg agtatgattg ggctcaaatg tctggtctga tgggtaatat gccgtccgtg 7860
aagggcccgg acgattttcg tgtgggcact actgttcagg gtgccacagt gttgtgtgag 7920
gttttgccgg ggcaggcttg ggctcacggg gtgatgtgca cgtcgaatag tgttgagacg 7980
gtgacagggc agcttccggg ccctggcgag acccgttatg actatgtggt gttgtctcgg 8040
gattgggagc agaacacagc caagttggag attgttcctg ggggccgtgc ggagcgtgcc 8100
cgtgacgtgt taagggctga gcctggcgtg taccatcagc agttgttggc tactttggtg 8160
ttgtcgtcta acgggttgca gcagcagttg gataggcgtg ctatagcggc tcgtgtggcg 8220
tttggcgagt ctgctgcgtg tgatcctacc cctgtggagg gtgaccgggt gatggttcct 8280
tctggggctg tgtgggctaa ccatgctaac gagtggatgc tactgtcccc caggatcgaa 8340
acgggttcga agcagatcca gtttggcggg tctgctgtgt atgcttacac gatcccgttt 8400
gagcgccagt ttatgtctcc gccggttgtg gtggcgtcta tgggtacggc ggctgggggt 8460
acgacacaga ttgatgtgaa agcctacaat gttactgcca aggattttca gttggcgttt 8520
atcactaatg atgggtctaa gccgaatggt gtgcctgcgg ttgctaactg gattgctgtc 8580
ggcgtgtaat gtacggcttg cgggtatgtg acgtgttgtg gttgttgtag tggtaggggg 8640
ctgtagtgtc atggcttaca cccacactcg tagcctctct ttgtaccgct atcgctactg 8700
ttcttggttc gattcaggcg gctacgtaca ggtcgaagaa gaggctgagg cagttgtctg 8760
cgcaggttga tgcgatggaa gaatacacgt ggaatattcg ccatactgtt caccgctata 8820
acgcgaatct gccggagaat gttgagccgg taaagatgcc tgatttgccc gagtttttga 8880
aggatactgt tgatggtggt ggggggtgaa ttgtgaggga gttggaggaa gagaagcggc 8940
agcgccgctc gtttgagaag gcttcactgg tgttgttgtt tttgtcgctt ttactgttgg 9000
cggtggttgc cgggggtgct ttgcggtatg ggtctgtggc ttcccagcgg gattcggagc 9060
aggctaaagc ccagtctaat ggtacagccg ctaaagggtt ggctagccgt gtgcggcagg 9120
tgtgtgcctc tggcgggcag gagtcggtgc ggcttcaccg gtctggtttg tgtgtggatg 9180
ctcagcgtgt tgagcgtagc gtgcagggtg tgcctggtcc tgctggtgtg cgcggcccgc 9240
aggggccggc tggtgttgat ggccgtaatg gtgttgatgg ttcgtctggg ctggttggcc 9300
ctgttggtcc gcagggttcc ccaggtttga atggtgtgaa aggtcctgac gggctgcccg 9360
gcgctaacgg caaggatggt gttgccggtg tgaacggggc tgacggccgg gatggcgtgc 9420
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tattctatga ttcgttgttg ttgatggttt cttcgagcat ctgatatagg tggaggcagg 11160
cgtagattgt ttcgttggcc tggtgcagaa catcctggcc gataacattt ttgtggttgt 11220
cgcggtggca gatgattgac tgcatgatat cgtcggcctc cgcttgcaat agtttggcct 11280
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tgagggcggt gtgggggata ttggttgtgt tgttcatggc tgttgttcca tccctgtgct 11640
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gtattataat ataatataag tattaaagct tataagttat aaaagtttta gaagagctaa 22560
ggggttaact tctttacttc tcttctctct ttggttcttt ctctcttctc ttcttttctt 22620
catcagggga gaagaggaac ctttaccatc agcgccgatg ggcttttcac cgtgtgactc 22680
gtgtaccacc ggtcgcacgc tcccggttgc acactcccca cactcttaca cccgtgtccc 22740
tttcaggctt agcgtgttcg gctgaaggcg tacggcgtgt cacgcttaaa cccttaacac 22800
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gctgagcctg tgtcctacac cgctaggcgc caagcgctaa gccttgaaac gcgaacacac 22920
acccaccccc catttttctt tcgcgtcctt cttcttttga cacagctggg gggcgatgtg 22980
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gtgcaagacc tcgtacggct tagtgaaata cctccctttt gtggatttgt ctgtttgtcg 23580
actttttgtg ttgggggtga gtgttgtgca gcctgagctt cctgggtctc gtgattggtg 23640
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ggtgtgatca gtcatccgcg tgccgattcg aggcgtgaca tgttggatat tgctgtgagg 25260
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aggcggcgtg aacggtctgg taggaagcgg gtgtctgtgg tatgaactcg gatgagttgg 25440
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ggccccgaag cctgatccta atcctccggc tggtaactga tataagataa gcgaatgtgt 29160
actatgtgca gggggtggtg ttgatgggta tcattttgaa gcctgaggat attgag 29216
Claims (4)
- 큐티박테리움 애크니스(Cutibacterium acnes)에 대하여 특이적으로 감염 및 용해능을 갖는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 박테리오파지 CAP-1(기탁번호 KCTC 18995P).
- 삭제
- 제1항의 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
- 제1항의 박테리오파지 CAP-1을 유효성분으로 포함하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
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|---|---|---|---|
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-
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-
2023
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Patent Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| The ISME Jpurnal, 2015, vol. 9, pp. 2078-2093.* * |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023243835A1 (ko) * | 2022-06-17 | 2023-12-21 | 주식회사 마이크로진 | 큐티박테리움 애크니스에 대한 사멸능을 갖는 박테리오파지 cap-1 |
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