JP2021504439A - クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するワクチン - Google Patents

クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するワクチン Download PDF

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Abstract

本発明は、クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、およびＯ８ Ｏ−多糖、並びにカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８ Ｏ−多糖に関連する一般式（Ｉ）の合成糖、並びに一般式（Ｉ）の合成糖の複合体に関する。前記合成糖、前記複合体、並びに前記合成糖を含む医薬組成物および前記複合体を含む医薬組成物は、クレブシエラ ニューモニエと関連する疾患の予防および／または治療に有用である。さらに、一般式（Ｉ）の合成糖は、クレブシエラ ニューモニエ細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析のマーカーとして有用である。

Description

発明の詳細な説明
［発明の分野］
本発明は、クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃおよびＯ８ Ｏ−多糖、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８ Ｏ−多糖、並びにそれらの複合体に関連する一般式（Ｉ）の合成糖に関する。前記合成糖、前記複合体、並びに前記合成糖を含む医薬組成物および前記複合体を含む医薬組成物は、クレブシエラ ニューモニエと関連する疾患の予防および／または治療に有用である。さらに、一般式（Ｉ）の合成糖は、クレブシエラ ニューモニエ細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析のマーカーとして有用である。
［発明の背景］
クレブシエラ ニューモニエは、大抵は気道および尿路にコロニー形成し、Ｋ．ニューモニエ感染症（ＫＰＩｓ）を引き起こすグラム陰性の、通性嫌気性桿菌である。ＫＰＩは、院内感染の主な原因になり、主に免疫障害を持つ患者に影響を及ぼす。過去１０年において、Ｋ．ニューモニエによって引き起こされる感染症は、ほとんど全ての利用可能な抗菌剤に耐性のある株の出現、およびそれらの世界規模での普及によって医療の場では重要な課題になっている。クレブシエラ ニューモニエによって引き起こされる感染症は、高い罹患率および高い死亡率の原因となる。したがって、Ｋ．ニューモニエによって引き起こされる感染症の予防は、高く望まれており、リスク群の予防接種は、最も費用効率が高く、および最も強力な手段である。
大抵の細菌と同様に、Ｋ．ニューモニエは、一般的に、細菌表面上に複合体多糖から構成される莢膜を発展させ、そのことは高い免疫原性および毒性となる。タンパク質と比較して、炭水化物は進化的により安定であり、一般的に採用される一連のワクチンにおいて利用されている。担体タンパク質に共有結合されると、オリゴ糖抗原は、長期にわたりＴ細胞依存的保護を引き起こすことができる。Ｋ．ニューモニエは、一般的に、リポ多糖（ＬＰＳ）および莢膜多糖（ＣＰＳ、Ｋ−抗原）の両方を発現し、Ｋ．ニューモニエ種の病原性に貢献する。ＬＰＳは、異なる数のオリゴ糖繰り返しユニット（ＲＵ）、コアオリゴ糖、および脂質Ａを含むＯ−特異的多糖（Ｏ−ＰＳ）で構成された主要な表面抗原である。Ｏ−ＰＳ構造（Ｏ−抗原）は、クレブシエラ株のＯ−血清型を定義する。Ｋ．ニューモニエ Ｏ−抗原の変動性は、９個の主要なＯ−血清型：Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３（Ｏ３ａおよびＯ３ｂを含む）、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、並びにいくつかのサブタイプ、例えば血清型Ｏ２におけるサブタイプＯ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、およびＯ２ａｆｇなどの血清型に現在制限される。クレブシエラ ニューモニエは、多数の莢膜（Ｋ）型に血清学的にも分類されている。したがって、異なるＫ抗原を有する様々なＫ．ニューモニエ株は、特異的なＯ−抗原血清型に属する。例えば、Ｏ１血清型に属しているクレブシエラ ニューモニエ株の多数のＫ−血清型が特定されている（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９８３，ｐ．５６−６１）。Ｏ１血清型に属しているクレブシエラ ニューモニエの最も一般的なＫ−血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９、およびＯ１：Ｋ７０である。
最近、カルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）が出現しており、世界的に広がっている。カルバペネム耐性Ｋ．ニューモニエ（ＣＲＫＰ）は、治療選択が非
常に制限されているために主要な健康問題である。このようなＣＲＫＰは、大抵のベータ−ラクタム型抗生物質を切断することができるカルバペネマーゼを一般的に有する。配列型（ＳＴ）２５８と呼ばれる特定の系統は、多数のＫＰＣ−生産クレブシエラ感染症の原因となることが知られている。ＣＲＫＰ ＳＴ２５８株は、異なる莢膜多糖（ＣＰＳ）を有することも知られている。
リポ多糖（ＬＰＳ）および莢膜多糖（ＣＰＳ）は、クレブシエラ ニューモニエの２つの表面成分であり、抗クレブシエラワクチンの候補物質として主に議論される。ＣＰＳは、高い免疫原性であることが証明されている。しかしながら、クレブシエラＣＰＳワクチンにおける深刻な不利な点は、多数のＫ型（８０を超える異なる抗原）である。クレブシエラワクチンにおけるＬＰＳ抗原の利用において、ＬＰＳの脂質Ａによって主に引き起こされる有害な中毒反応は、ＬＰＳ含有ワクチンを用いた活性免疫付与における重大な欠点を示す。タンパク質と比較して、炭水化物は進化的により安定である。担体タンパク質に共有結合されると、多糖またはオリゴ糖は、長期にわたりＴ細胞依存的保護を引き起こすことができる（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １９９５，５９１）。炭水化物ワクチンの最近の動向のレビューのために、Ｃｈｅｍ．＆Ｂｉｏｌ．２０１４，２１，３８−５０を参照する。自動炭水化物合成および炭水化物に基づくワクチンの開発における当該合成の適用のレビューのために、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．２００８，３４３，１８８９−１８９６を参照する。
ＷＯ２０１６／１５６３３８ Ａ１は、クレブシエラ ニューモニエ細菌によって引き起こされる疾患の治療のための、合成カルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエ糖および合成カルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエ糖の複合体を開示する。後に、同じグループは、調製された六糖類の部分構造が、天然のＣＲ−Ｋ．ニューモニエＣＰＳと交差反応するモノクローナル抗体１Ｃ８によって認識されないということをグリカンマイクロアレイ研究によって示した（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１７，５６，１３９７３− １３９７８）。
ワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅ）に関する論文１９８６，４，１５は、Ｋ２、Ｋ３、Ｋ１０、Ｋ２１、Ｋ３０およびＫ５５血清型に由来する莢膜多糖から構成される６価のクレブシエラワクチンについて報告する。試験されたワクチンは、致命的な実験的クレブシエラＫ２熱傷創感染に対して高い保護があることが明らかになったため、予防接種後に機能的抗体が引き起こされることを示す。
Ｏ−抗原は、ＣＰＳよりはるかに変化しないので、コアオリゴ糖および脂質Ａを有しないクレブシエラ ニューモニエＬＰＳ Ｏ−抗原は、予防的および治療的な両方の免疫療法にとって潜在的な標的抗原であることができる。
Ｏ−抗原、すなわち、Ｋ．ニューモニエのＯ−多糖の繰り返しユニットが解明された（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９９６，ｐ．５２０５−５２１４；Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２７７（２８)，ｐｐ．２５０７０−２５０８１）（図１および図２参照）。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃのＯ−多糖（ＯＰＳ）の共通構造は、二糖繰り返しユニット：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ１およびＯ８のＯ−多糖（ＯＰＳ）の共通構造は、二糖繰り返しユニット：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ１のＯ−多糖の繰り返しユニットは：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ２ａのＯ−多糖の繰り返しユニットは：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ２ａｃのＯ−多糖の繰り返しユニットは：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ２ａｅおよびＯ２ａｅｈのＯ−多糖の繰り返しユニットは：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ２ａｆｇおよびカルバペネム耐性Ｋ．ニューモニエ（ＣＲＫＰ）ＳＴ２５８株の繰り返しユニットは：
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ８のＯ−多糖の繰り返しユニットは、五糖：
からなる。
クレブシエラ ニューモニエＯ−多糖に関連し、および保護免疫原性Ｏ−抗原エピトープ、すなわち、クレブシエラ ニューモニエによって引き起こされる疾患に対して保護する抗体を引き起こすＯ−抗原エピトープを含む、一般式（Ｉ）のよく定義された合成糖を提供することが、本発明の目的である。前記糖は、クレブシエラ ニューモニエと関連する疾患の予防および／または治療に有用である複合体および複合体の医薬組成物を提供するために、免疫原性担体に結合することができる。さらに、一般式（Ｉ）の合成糖は、クレブシエラ ニューモニエ細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析のマーカーとして有用である。
本発明の目的は、独立請求項の教示によって解決される。本発明の更に有利な特徴、態様および詳細は、本出願の従属請求項、明細書、図および例から明らかである。
［発明の説明］
［定義］
本願に使用される用語「リンカー」は、糖の還元末端単糖を免疫原性担体または固体支持体と、任意に少なくとも一つの内部連結分子に結合することによって、連結することが可能な分子断片を包含する。したがって、リンカー自体の、または内部連結分子と共にリンカーの機能は、還元末端単糖と免疫原性担体と間に、または還元末端単糖と固体支持体との間に特有の距離を設立する、保持する、および／または橋渡しをすることである。糖と免疫原性担体との間に特定の距離を保持することによって、免疫原性担体の構造（例えば、担体タンパク質の二次構造など）による免疫原性糖エピトープの遮蔽を防ぐ。さらに、リンカーは、反応基における立体障害を減少させることによって糖とのより大きい結合効率を提供する（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３，８７，１５３−１７４）。より具体的に、リンカーの一端は、還元末端単糖のアノマー中心で環外の酸素に連結され、他の末端は、窒素原子を介して内部連結分子と、または免疫原性担体もしくは固体支持体と直接連結される。
当該技術において公知の糖複合体（例えば、糖−担体タンパク質複合体、抗体−薬物複合体など）のための任意のリンカーを、本発明内で使用することができる。使用されるリンカー、すなわち、リンカーの長さおよび結合型は、糖複合体の免疫原性に重大な影響を及ぼさないので（ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２０１７，１２（１２）：ｅ０１８９１００，Ｊ．
Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈ．１９９６，１９１，１−１０参照）、糖担体タンパク質に関する多くの出版物から、当業者は、本願において開示される糖および複合体のための適切なリンカーを容易に想定することができる（Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ．２０１８での「抗菌性複合糖質ワクチン（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ：タンパク質修飾のための古典的および近代的取り組みの概要（ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃ ａｎｄ ｍｏｄｅｒｎ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ
ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」，進展論文（Ａｄｖａｎｃｅ
Ａｒｔｉｃｌｅ），ＤＯＩ：１０．１０３９／Ｃ８ＣＳ００４９５Ａ；Ａｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ ２０１７，５０，１２７０−１２７９参照）。当該適切なリンカーは、無害（すなわち、非−毒性）および非−免疫原性（すなわち、複合体での免疫付与に対して非保護抗体の形成を導かない）であり、市販の二官能性ポリエチレングリコール（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１３，１７２，３８２−３８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈ．１９９６，１９１，１−１０）、グルタル酸誘導体（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５，７０（１８），７１２３−７１３２）、アジピン酸誘導体、スクアリン酸塩誘導体、アルキン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、例えば、市販のＭＦＣＯ−ＮＨＳ（モノフルオロ置換シクロオクチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、（Ａｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ ２０１７，５０，１２７０−１２７９に開示されるような）マレイミド、または親水性のアルキルホスフィン酸塩および（ＷＯ２０１４０８０２５１Ａ１に開示されるような）スルホニルを含むが、制限されない。
本願に使用される用語「内部連結分子」は、官能基Ｘおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、ここで、官能基Ｘは、リンカーＬにおける末端アミノ基と反応することができ、官能基Ｙは、免疫原性担体に、または固体支持体に存在する官能基と反応することができる。図３は、市販の内部連結分子の例を示すが、本願に示される実施例に対して本発明に従って使用されることができる内部連結分子を制限しない。
本願に使用される用語「アジュバント」は、免疫学的アジュバント、すなわちアジュバントに関連する抗原性を有さず、ワクチンに含まれる所与の抗原に対して免疫応答を高めることによって前記ワクチンの効果を修正するまたは増大させるワクチン組成物において使用される材料に関する。当業者にとって、古典的に認識されるアジュバントの例は：
−カルシウム塩およびアルミニウム塩（またはそれらの混合物）を含む、ミネラル含有組成物。カルシウム塩はリン酸カルシウムを含む。アルミニウム塩は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶質、非結晶質など）をとる塩と共に、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などを含む。これらの塩への吸着は好ましい。ミネラル含有組成物は、金属塩の粒子として形成されてもよい。水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントも使用されてもよい。本発明は、一般的にアジュバントとして使用される「水酸化物」または「リン酸塩」のいくつかを使用することができる。「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、一般的にオキシ水酸化アルミニウム塩であり、オキシ水酸化アルミニウム塩は、通常少なくとも部分的に結晶質である。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、一般的に水酸化リン酸アルミニウムであり、少量の硫酸塩（すなわち、水酸化リン酸硫酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｕｌｆａｔｅ））を含むことも多い。それらは沈殿によって得られてもよく、沈殿中の反応条件および濃度は、塩においてヒドロキシルへのリン酸塩の置換の程度に影響を与える。水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムとの混合物は、本発明に係る製剤化において用いられることができ；
−サポニン、サポニンは、広範囲の植物種における樹皮、葉、幹、根に、および花にさえ発見されるステロール配糖体およびトリテルペノイド配糖体の異種群である。キラヤ サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹皮、モリナ（Ｍｏｒｉｎａ）木からのサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。サポニンを、スミラックス
オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔｅ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ）
）、ジプソフィラ パニキュラタ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライド ヴェイル（ ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサポナリア オフィシナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｉｃｉａｎａｌｉｓ）（ソープ ルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から商業的に得ることもできる。サポニンアジュバント製剤は、ＱＳ２１のような精製製剤、およびＩＳＣＯＭｓのような脂質製剤を含む。サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されている。これらの技術を用いて特定の精製画分は同定されており、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む。サポニン製剤は、コレステロールのようなステロールを含んでもよい。サポニンおよびコレステロールの組み合わせは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭｓ）と呼ばれる特有の粒子を形成するために使用することができる。ＩＳＣＯＭｓは、例えばホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質を一般的に含む。いくつかの公知のサポニンをＩＳＣＯＭｓにおいて使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは一つ以上のＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ＆ＱＨＣ：
−生分解性および非毒性である材料から形成される微粒子（すなわち、直径１００ｎｍ〜１５０ｐｍ、より好ましくは、直径２００ｎｍ〜３０ｐｍ、または直径５００ｎｍ〜１０ｐｍの粒子）。このような非毒性および生分解性材料は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンを含むが、これらに制限されない；
−ＣＤ１ｄリガンド、例えば、α−グリコシルセラミド、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール］、ＣＲＯＮＹ−１０１、３’’−スルホ−ガラクトシル−セラミド；７ＤＷ８−５（フナコシ株式会社）など
−免疫刺激性オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧモチーフ含有オリゴヌクレオチド（リン酸結合によってグアノシン残基に連結される非メチル化シトシン残基を含むジヌクレオチド配列）、またはＣｐＩモチーフ含有オリゴヌクレオチド（イノシンに連結されるシトシンを含有するジヌクレオチド配列）、または二本鎖ＲＮＡ、または回文配列を含むオリゴヌクレオチド、またはポリ（ｄＧ）配列を含むオリゴヌクレオチド、など。免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾のようなヌクレオチド修飾体／類似体を含むことができ、二本鎖または（ＲＮＡを除いて）一本鎖であることができる；
−リン酸塩含有非環式骨格に連結される脂質含有化合物、例えば、ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４など；
−油乳剤（例えば、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバントなど）；
−隣接した単糖ユニットに正電荷および負電荷の両方を含む、両性イオン多糖（ＺＰＳｓ）；
外膜ベシクル（ＯＭＶｓ）、
を含む。
理論的に、免疫学的事象のカスケードにおいて特定の状況を好む、または増幅させることができ、より顕著な免疫学的応答に最終的につながる各分子または物質を、アジュバントとして定義することができる。
原理的には、ワクチン製剤においてアジュバントの使用を介して、
−ワクチンに適切な、または所望の免疫応答を指示する、および最適化することができ；−ワクチンの粘膜伝達、すなわち、ワクチンの、例えば頬部、または胃もしくは肺の上皮のような粘膜面、および関連するリンパ組織との接触をもたらす投与を可能にし；
−細胞媒介免疫応答を促進することができ；
−例えば、高純度抗原または組み換え抗原のような、より弱い免疫原の免疫原性を高めることができ；
−保護免疫を提供するために必要とされる抗原量または免疫付与の頻度を減らすことがで
き；および
−例えば、新生児、老人、および免疫障害を持つワクチン受容者などのような減少した、または弱い免疫応答を有する個人におけるワクチンの効果を改善することができる。
アジュバントの作用様式については、ほとんど知られていないが、アジュバントは、次の機構：
−抗原の生物学的または免疫学的半減期を増加すること；
−抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）への抗原伝達を改善すること、並びにＡＰＣｓによって、例えば、抗原−アジュバント複合体の摂取後にＡＰＣによって抗原が細胞質へとエンドソーム膜を通過することを可能にすることによって、抗原処理、および抗原提示を改善すること；
−ストレス細胞または損傷細胞からの危険誘導シグナルを模倣すること、そのことは免疫応答を開始するのに役立つ；
−免疫調節サイトカインの産生を誘導すること；
−免疫システムの特定の一部となるように免疫応答にバイアスをかけること；および−抗原チャレンジの急速な分散を遮断すること、
の一つによって免疫応答を増大させることが現在は信じられている。
糖は、両性イオンでない場合に、ＴＩ−２（Ｔ細胞非依存的−２）抗原および低い免疫抗原性として当業者に知られている。したがって、糖に基づくワクチンを生産するために、前糖は、免疫原性担体に結合され複合体を提供し、複合体は、糖と比較して増加した免疫原性を示す。この文脈において、用語「免疫原性担体」は、構造として定義され、免疫原性担体は、糖自体と比較して増加した免疫を示す複合体を形成するために、糖に結合される。したがって、糖の免疫原性担体への、好ましくはタンパク質担体への結合は、前記免疫原性担体に対する免疫応答を誘導することなく、前記糖に対する免疫応答を刺激する効果を有する。
したがって、本発明は、一般式（Ｉ）の糖、または一般式（Ｉ）の糖のアノマー、水和物、もしくは薬学的に許容できる塩に関し、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ３は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合、または
を表し；
Ｕ６は
を表し；
Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ＊、およびＲ＊’は、互いに独立して、−ＨまたはＵ６を表し、ここで、Ｒ１、およびＲ＊は、同時に−Ｕ６であることはできず、並びにＲ１’およびＲ＊’は、同時に−Ｕ６であることはできず、
Ｌは、リンカーを表し；
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，ＣＯ−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯ−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＯＨ，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
を表し；
ｎは、１〜２０の整数であり；
ｍは、０〜２０の整数であり；
ｋは、０〜２０から選択される整数であり；
ｘおよびｙは、互いに独立して、０または１の整数であり；
および
Ｕ１およびＵ２が単糖であり、ｎが１である場合、同じ時点でｍ、ｘ、およびｙは０ではない。
リンカーＬは、好ましくは２〜４０個の炭素原子（任意の側鎖の炭素原子を含む）、より好ましくは、２〜３０個、より好ましくは２〜２０個、より好ましくは、２〜１４個、より好ましくは、２〜１２個、および更により好ましくは２〜１０個の炭素原子を含む。
酸素原子（すなわち、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２の酸素）とＮＨ２基との間の最も短い原子鎖は、好ましくは２〜１４個の原子、より好ましくは２〜１２個の原子、より好ましくは２〜１０個の原子、より好ましくは２〜８個の原子から成る。最も短い鎖（最も短い鎖はアノマー中心での酸素とＮＨ２基との間の最も短い可能な連結である）が２〜６個原子からなる場合、原子は好ましくは炭素原子である。最も短い鎖が４〜８個の原子から成る場合、鎖は、Ｏ、Ｎ、およびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含んでもよい。最も短い鎖が９〜１４個の原子から成る場合、鎖は、Ｏ、Ｎ、およびＳから選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含んでもよい。
リンカー−Ｌ−または最も短い鎖は、完全に、または部分的にフッ素化されても好ましい。リンカー−Ｌ−は、３員環、４員環、５員環もしくは６員環の飽和炭素環、または５員環の部分的に不飽和（および非芳香族）炭素環、または４員環、５員環もしくは６員環の飽和酸素ヘテロ環、または４員環、５員環もしくは６員環の飽和窒素ヘテロ環、または６員環の芳香族炭素環を含んでもよい。
リンカー−Ｌ−は、アミド（−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−）および／または尿素（−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−）残基を含んでもよく、好ましくは一つのアミド残基または尿素残基を含んでもよい。リンカーは、置換基を含んでもよく、好ましくは例えば、Ｒ１０およびＲ１１などのような２つの置換基または例えば、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１５、およびＲ１４などのような４つの置換基を含んでもよく、置換基は、本願に定義される通りの意味を有し、好ましくは：−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＨ３，−Ｃ２Ｈ５，−Ｃ３Ｈ７，−Ｃ５Ｈ９，−Ｃ６Ｈ１３，−ＯＣＨ３，−ＯＣ２Ｈ５，−ＣＨ２Ｆ，−ＣＨＦ２，−ＣＦ３，−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２，−ＳＣＨ３，−ＳＣ２Ｈ５，−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３，−Ｎ（ＣＨ３）２，および−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択される。
リンカーＬがフッ素化される場合、２つ以上の置換基−Ｆが好ましい。
好ましくは、リンカーＬ−は：−ＣＨ２−，−（ＣＨ２）２−，−（ＣＨ２）３−，−（ＣＨ２）４−，−（ＣＨ２）５−，−（ＣＨ２）６−，−（ＣＨ２）７−，−（ＣＨ２）８−，−（ＣＨ２）９−，−（ＣＨ２）１０−，−ＣＦ２−，−（ＣＦ２）２−，−（ＣＦ２）３−，−（ＣＦ２）４−，−（ＣＦ２）５−，−（ＣＦ２）６−，−（ＣＦ２）７−，−（ＣＦ２）８−，−（ＣＦ２）９−，−（ＣＦ２）１０−，−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−，−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）３−，−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＨ２−，−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−，−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−，−（ＣＨ２）３−Ｏ−（ＣＨ２）２−，−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）３−，−（ＣＨ２）４−Ｏ−ＣＨ２−，−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）４−，−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｄ−Ｌｃ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され；
ここで、−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＦ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２−，−（ＣＲ１０Ｒ１１）Ｏ−，
から選択され；
−Ｌｂ−および−Ｌｃ−は、互いに独立して：−Ｏ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−，−ＮＲ９−，−ＮＲ１８−，−ＳＯ２−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，
から選択され；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＲ１２Ｒ１３）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−，
を表し；
−Ｌｅ−は：−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−，−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−，−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−Ｏ−（ＣＲ２１Ｒ２２）ｐ２−，
から選択され；
Ｒ９およびＲ１８は、互いに独立して：−ＣＨ３，−Ｃ２Ｈ５，−Ｃ３Ｈ７および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択され；
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、およびＲ２２は、互いに独立して：−Ｈ，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＨ３，−Ｃ２Ｈ５，−Ｃ３Ｈ７，−Ｃ５Ｈ９，−Ｃ６Ｈ１３，−ＯＣＨ３，−ＯＣ２Ｈ５，−ＣＨ２Ｆ，−ＣＨＦ２，−ＣＦ３，−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２，−ＳＣＨ３，−ＳＣ２Ｈ５，−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３，−Ｎ（ＣＨ３）２および−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択され；
ｏ，ｑ，ｐ１およびｐ２は、互いに独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数である。
より好ましくは、−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
−Ｅが−ＮＨ２である場合、Ｌが−Ｃ３Ｈ６−でないという条件で、ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
更により好ましくは、−Ｌ−Ｅは、−Ｌａ−Ｅ，−Ｌａ−Ｌｅ−Ｅ，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−Ｅ，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−Ｅを表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−
Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
−Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯＯＨ，−ＣＯＯＣＨ３，−ＣＯＯＣ２Ｈ５，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯ−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯ−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＯＨ，または−ＳＨを表し；
Ｒ’は、
を表し；
−Ｌ−Ｅが−Ｃ３Ｈ６−ＮＨ２でないという条件で、ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
更に最も好ましくは、一般式（Ｉ）の糖は：
からなる群から選択される残基−Ｏ−Ｌ−Ｅを有し、
式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
を表し；
Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡＣを表す。
より好ましい実施形態において、−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
からなる群から選択され、
式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，または−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表し；；
Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡＣを表す。
特に好ましくは、−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
からなる群から選択される。
本発明における糖のアノマーは、−Ｏ−Ｌ−Ｅ基が結合されるＣ−１位置でのα／β−アノマーを意味する。グリコシド結合の立体化学は、一般式（Ｉ）における糖断片Ｕ１、およびＵ２のアノマー中心に示される立体化学によって定義されることは、炭水化物化学
の当業者にとって明らかである。
本発明の糖は、吸湿性であるので、様々なオリゴ糖の水和物を構築することができる。好ましくは、糖に対する水分子のモル比は、１対２０、より好ましくは１対１０、最も好ましくは１対５〜１０の範囲である。
本発明における糖は、塩基性および／または酸性置換基を有し、有機酸もしくは有機塩基、または無機酸もしくは無機塩基と共に塩を形成してもよい。
このような酸付加塩形成のための適切な酸の例は、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ酸、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリ酒石酸、タルトロン酸、（ｏ，ｍ，ｐ−）トルエン酸、ナフチルアミンスルホン酸、および当業者によく知られた他の鉱酸、またはカルボン酸である。慣習的な手法で塩を生産するために、塩は、遊離塩基形を、十分な量の所望の酸と結合することによって調製される。
適切な無機塩基または有機塩基の例は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギ二ンなどである。塩は、当該技術分野においてよく知られた方法を用いて慣習的な方法で、例えば、一般式（Ｉ）の化合物の溶液を、上述の基から選択される塩基の溶液と処理することによって、調製されてもよい。
驚くべきことに、一般式（Ｉ）の糖は、免疫原性保護エピトープを含み、およびヒトおよび／または動物宿主においてＫ．ニューモニエ細菌または血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ８、およびカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８に対して保護免疫応答を誘導することができることを明らかにした。一般式（Ｉ）の糖は、抗体を引き起こし、抗体は、Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ８ Ｏ−多糖、およびカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８ Ｏ−多糖と交差反応し、さらに食細胞によって殺すためにＫ．ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ８、およびカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８をオプソニン化する。
本発明の糖は、生産の純度および容易さに関して、細菌源から生産される糖および細菌源から生産される糖の複合体と関連する全ての問題を克服する。実証された、および認められた方法はあるが、このアプローチには様々な欠点がある。第一に、天然の炭水化物の生成のために、大容量の対象の病原性種を培養し、続いて、採取し、炭水化物を精製する必要がある。対象の種のバイオセーフティーレベル、および培養の容易さに依存して、このステップは、新規の病原性種への技術の拡張に関して重大な障害を示し得る。さらに、病原性細菌の莢膜多糖からの定義された長さおよび構造の純粋な糖の単離および精製は、面倒であり、時々実現可能でない工程であるということはよく知られている。第一に、莢膜多糖の生産は、生育条件の最適化を必要とする。第二に、構成する単糖の構造的完全性が維持される脱重合条件が明らかにされる必要がある。最後に、定義された長さおよび構造の純粋な糖の単離を可能にする精製条件が決定される必要がある。通常の不純物、例えば細胞多糖、核酸、およびタンパク質などに加えて、脱重合工程によって得られた所望されない糖も、除去されなければならない。したがって、細菌源からの定義された構造および長さの純粋な糖の生産は、面倒で、ほとんど不可能な工程である。
好ましくは一般式（Ｉ）の合成糖、または一般式（Ｉ）の合成糖のアノマー、水和物、もしくは薬学的に許容できる塩であり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ３は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合、または
を表し；
Ｕ６は
を表し；
Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ＊、およびＲ＊’は、互いに独立して、−ＨまたはＵ６を表し、ここで、Ｒ１、およびＲ＊は、同時に−Ｕ６であることはできず、並びにＲ１’およびＲ＊’は、同時に−Ｕ６であることはできず、
Ｌは、リンカーを表し；
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯ−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯ−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＯＨ，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
を表し；
ｎは、１〜２０の整数であり；
ｍは、０〜２０の整数であり；
ｋは、０〜２０から選択される整数であり；
ｘおよびｙは、互いに独立して、０または１の整数であり；
および
Ｕ２−Ｕ１が
を表す場合、ｍは０であることはできず、Ｕ５−Ｕ４は、Ｕ２−Ｕ１であることはできず；
Ｕ１およびＵ２は単糖であり、ｎは１である場合、ｍ、ｘ、およびｙは、同じ時点で０ではない。
好ましくは一般式（Ｉ）の合成糖であり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は
を表し；
ｍは１〜１０から選択される整数を表し；
ｋは０であり；
ｎは１〜１０から選択される整数を表し、および
ｘ、ｙ、ＬおよびＥは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは一般式（Ｉ）の合成糖であり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ３は
を表し；
Ｕ５は共有結合を表し；
ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、ｙ、ＬおよびＥは本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは一般式（Ｉ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合、または
を表し；
ｍは０および１から選択される整数であり；
ｋは０であり；
ｎ、Ｕ３、ｘ、ｙ、ＬおよびＥは本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは一般式（Ｉ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合，
を表し；
ｍは０および１から選択される整数であり；
ｋは０であり；
ｎ、Ｕ３、ｘ、ｙ、ＬおよびＥは本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは一般式（Ｉ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合，または
を表し；
ｍは０および１から選択される整数であり；
ｋは０であり；
ｎ、Ｕ３、ｘ、ｙ、ＬおよびＥは請求項１に定義される通りの意味を有する。
好ましくは一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖、または一般式（Ｉ−Ａ）の糖のアノマー、水和物、もしくは薬学的に許容できる塩であり
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合，または
を表し；
Ｌ、Ｅ、ｍ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義される通りの意味を有する。
上記に定義されたように、Ｕ１およびＵ２は単糖であるので、ｎは１である場合、ｍ、ｘ、およびｙは、同じ時点で０ではない。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
ｍは０であり；
Ｌ、Ｅ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
ｍは０であり；
Ｌ、Ｅ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合，
を表し；
ｍは０および１から選択される整数であり；
Ｌ、Ｅ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合，または
を表し；
ｍは０および１から選択される整数であり；
Ｌ、Ｅ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
Ｕ４は
を表し；
Ｕ５は共有結合，または
を表し；
ｍは１〜１０から選択される整数であり；
Ｌ、Ｅ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
ｍ、ｘ、およびｙは０であり；
Ｌ、Ｅ、およびｎは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
ｍ、ｘ、およびｙは０であり；
Ｌ、Ｅ、およびｎは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の合成糖であり、式中、
Ｕ１およびＵ４は
を表し；
Ｕ２およびＵ５は
を表し；
ｍは、１〜１０の整数である。
Ｌ、Ｅ、ｎ、ｘ、およびｙは、本願に定義されるのと同じ意味を有する。
上記に定義されるように、Ｕ１およびＵ２は単糖であるので、ｎが１である場合、ｍ、ｘ、およびｙは、同じ時点で０ではない。
より好ましくは、一般式（Ｉ−Ａ）の糖であり、式中、ｎは１〜１０の整数である。
好ましくは、一般式（Ｉ−Ｂ）の合成糖でもあり、
式中、
Ｕ１は
を表し；
Ｕ２は
を表し；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、および９から選択される整数であり、
ｘおよびｙは、１であり、並びに
ＬおよびＥは、本願に定義される通りの意味を有する。
したがって、一般式（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの合成糖も本発明の範囲内に入る：
式中、Ｒ１が−Ｈ、ｎが２〜１０の整数、好ましくは、ｎが２〜１２の整数である場合、ｎ、Ｒ１、ｍ、ＬおよびＥは、上記に定義されるのと同じ意味を有し；
式中、Ｒ１、ｍ、ｎ、ｋ、ＬおよびＥは、上記に定義されるのと同じ意味を有し、ｎおよびｍは、独立して、１〜２０、好ましくは、１〜１０から選択される整数であり、およびｋは、０〜２０、好ましくは、０〜１０から選択される整数である。
好ましくは、リンカー−Ｌ−は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）において、
−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；式中
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、Ｅが−ＮＨ２である場合、Ｌは−Ｃ３Ｈ６−でないという条件で、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
更により好ましくは、−Ｌ−Ｅ−は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）において、
−Ｌａ−Ｅ，−Ｌａ−Ｌｅ−Ｅ，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−Ｅ，Ｅまたは−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ
−Ｅを表し；式中
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
−Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯＯＨ，−ＣＯＯＣＨ３，−ＣＯＯＣ２Ｈ５，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯ−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯ−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＯＨ，または−ＳＨを表し；
Ｒ’は、
を表し；
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、−Ｌ−Ｅが−Ｃ３Ｈ６−ＮＨ２でないという条件で、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
さらに最も好ましくは、一般式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）の糖は：
からなる群から選択される残基−Ｏ−Ｌ−Ｅを有する。
式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
を表し；
Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡｃを表す；
最も好ましくは、一般式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）の糖は：
からなる群から選択される残基−Ｏ−Ｌ−Ｅを有し、
式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
を表し；
Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡｃを表す。
最も好ましい実施形態において、−Ｌ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−を表し、ｏは、４、５、および６から選択される整数である。したがって、特に好ましい合成糖は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの糖であり、式中、−Ｌ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−を表し、およびｏは、４、５、および６から選択される整数である。
更により好ましい実施形態において、本発明に係る糖は：化合物Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１
〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００からなる群から選択される。
より好ましくは、本発明に係る糖は：化合物Ａ−０１〜Ａ−０７、Ａ−１１〜Ａ１７、Ａ−２１〜Ａ−２７, Ａ−３１〜Ａ−３７、Ａ−４１〜Ａ−４７、Ａ−５１〜Ａ−５７、Ａ−６１〜Ａ−６７、Ａ−７１〜Ａ−７７、Ａ−８１〜Ａ−８７、Ａ−９１〜Ａ−９７、Ａ−１０１〜Ａ−１０７、Ａ−１１１〜Ａ−１１７、Ａ−１２１〜Ａ−１２７、Ａ−１３１〜Ａ−１３７、Ｆ−０１、Ｆ−１９、Ｆ−２７、Ｆ−３１、Ｆ−３６、Ｆ−５４、Ｆ−６２、Ｆ−６６、Ｆ−７１、Ｆ−８９、Ｆ−９７、Ｆ−１０１、Ｆ−１０６、Ｆ−１２４、Ｆ−１３２、Ｆ−１３６、Ｆ−１４１、Ｆ−１５９、Ｆ−１６７、Ｆ−１７１、Ｆ−１７６、Ｆ−１９４、Ｆ−２０２、Ｆ−２０６、Ｆ−２１１、Ｆ−２２９、Ｆ−２３７、Ｆ−２４１、Ｆ−２４６、Ｆ−２６４、Ｆ−２９９、Ｆ−２８１、Ｆ−２７２、Ｆ−２７６、Ｆ−３０７、Ｆ−３１１、Ｆ−３１６、Ｆ−３３４、Ｆ−３４２、Ｆ−３４６、Ｆ−３５１、Ｆ−４１４、Ｆ−４１７、Ｆ−４２１、Ｆ−４２６、Ｆ−４４４、Ｆ−４５２、Ｆ−４５６、Ｆ−４６１、Ｆ−４７９、Ｆ−４８７、Ｆ−４９１、Ｆ−４９６、Ｆ−５１４、Ｆ−５２２、Ｆ−５２６、Ｋ−０１、Ｋ−０６、Ｋ−１１、Ｋ−２６、Ｋ−３１、Ｋ−３６、Ｋ−５１、Ｋ−５６、Ｋ−６１、Ｋ−７６、Ｋ−８１、Ｋ−８６、Ｋ−１０１、Ｋ−１０６、Ｋ−１１１、Ｋ−１２６、Ｋ−１３１、Ｋ−１３６、Ｋ−１５１、Ｋ−１５６、Ｋ−１６１、Ｋ−１７６、Ｋ−１８１、Ｋ−１８６、Ｋ−２０１、Ｋ−２０６、Ｋ−２１１、Ｋ−２２６、Ｋ−２３１、Ｋ−２３６、Ｋ−２５１、Ｋ−２５６、Ｋ−２６１、Ｋ−２７６、Ｋ−２８１、Ｋ−２８６、Ｋ−３０１、Ｋ−３０６、Ｋ−３１１、Ｋ−３２６、Ｋ−３３１、Ｋ−３３６、Ｏ−０１、Ｏ−０２、Ｏ−０３、Ｏ−０６、Ｏ−０７、Ｏ−０８、Ｏ−１１、Ｏ−１２、Ｏ−１３、Ｏ−１６、Ｏ−１７、Ｏ−１８、Ｏ−２１、Ｏ−２２、Ｏ−２３、Ｏ−２６、Ｏ−２７、Ｏ−２８、Ｏ−３１、Ｏ−３２、Ｏ−３３、Ｏ−３６、Ｏ−３７、Ｏ−３８、Ｏ−４１、Ｏ−４２、Ｏ−４３、Ｏ−４６、Ｏ−４７、Ｏ−４８、Ｏ−５１、Ｏ−５２、Ｏ−５３、Ｏ−５６、Ｏ−５７、Ｏ−５８、Ｏ−６１、Ｏ−６２、Ｏ−６３、Ｏ−６６、Ｏ−６７、Ｏ−８８、Ｐ−０１〜Ｐ−０３、Ｐ−０６〜Ｐ−０８、Ｐ−１１〜Ｐ−１３、Ｐ−１６〜Ｐ−１８、Ｐ−２１〜Ｐ−２３、Ｐ−２６〜Ｐ−２８、Ｐ−３１〜Ｐ−３３、Ｐ−３６〜Ｐ−３８、Ｐ−４１〜Ｐ−４３、Ｐ−４６〜Ｐ−４８、Ｐ−５１〜Ｐ−５３、Ｐ−５６〜Ｐ−５８、Ｐ−６１〜Ｐ−６３、Ｐ−６６〜Ｐ−６８、Ｑ−１、Ｑ−２６、Ｑ−１０１、Ｑ−１５１、Ｑ−２５１、Ｑ−３０１、Ｑ−３５１、Ｑ−３７６、Ｑ−４５１、Ｑ−５０１、Ｑ−５５１、Ｑ−６０１およびＱ−６５１からなる群から選択される。
表１
表２
表３
表４
表５
表６
表７
表８
表９
表１０
表１１
表１２
表１３
表１４
表１５
［化学合成］
本発明の他の態様は、一般式（Ｉ）の合成方法に関し：
Ａ１）二糖類Ｄ１を提供すること
式中、ＬＧ１は、脱離基であり、Ｒ１Ｐは、Ｐ４またはＵ５ｐであり；
Ｕ５ｐは、
である；
Ｂ１）Ｄ１を二糖類Ｄ２
と反応させ、糖Ｏ１ａ
式中、ｎは１である、
を得ること
ｎが２〜２０の整数である場合、
その後、次のステップＢ２）およびＢ３）をｎ−１回繰り返すこと
Ｂ２）糖Ｄ１と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ３を除去すること；
Ｂ３）糖Ｄ１をステップＢ２）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ１ａを得ること
式中、ｎは２〜１０の整数である；
Ｃ）糖Ｏ１ａの保護基Ｐ６を除去し、脱離基ＬＧ２を導入し、糖Ｏ１ｂを得ること
Ｄ１）糖Ｏ１ｂを反応物質ＨＯ−Ｌ−Ｅｐと結合し糖Ｏ１ｃを得ること；
または
Ｄ２）糖Ｏ１ｂを糖Ｍ１
と反応させ
糖Ｏ２ａを得ること；
任意に、
Ｅ１）糖（Ｏ１ｃ）の保護基Ｐ３を除去し、糖Ｏ１ｄを得ること、
糖Ｏ１ｄを糖Ｍ２
と反応させ、糖Ｏ３ａ
を得ること；
または
Ｅ２）糖（Ｏ２ａ）の保護基Ｐ３を除去し、糖Ｏ２ｂを得ること、
糖Ｏ２ｂを糖Ｍ２
を反応させ、糖Ｏ４ａ
を得ること；
および
Ｆ１）糖Ｏ１ｃ、Ｏ２ａ、Ｏ３ａ、またはＯ４ｂの全ての保護基を除去し、式（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）、または（Ｉ−４）の対応する糖を得ること、
式中、Ｅｐは、保護末端基であり、ＬＧ１〜ＬＧ３は、脱離基であり、
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、保護基を表し、Ｌ、Ｅ、Ｒ１、Ｒ１ｐは、本願に定義されるのと同じ意味を有する、
を含む。
好ましくは、Ｒ１ｐはＰ４である。
したがって、上述の合成方法にしたがって、ステップの次の組み合わせを本発明の合成糖を得るために行ってもよい：
ステップ：Ａ１）→Ｂ１）→Ｃ）→Ｄ１）→Ｆ１）、Ａ１）→Ｂ１）→Ｃ）→Ｄ２）→Ｆ１）、Ａ１）→Ｂ１）→Ｃ）→Ｄ１）→Ｅ１）→Ｆ１）、またはＡ１）→Ｂ１）→Ｃ）→
Ｄ２）→Ｅ２）→Ｆ１）。
代替的に、一般式（Ｉ）の糖の合成方法は：
Ａ２）二糖類Ｄ６を提供すること
式中、Ｒ１Ｐは、Ｐ４またはＵ５ｐであり；
Ｕ５ｐは、
である；
Ｂ１’）糖Ｄ６を糖Ｄ８
と反応させ、糖Ｏ２ｂを得ること
式中、ｎは１である；
ｎが２〜２０の整数である場合、
その後、次のステップＢ２’）およびＢ３’）をｎ−１回繰り返すこと
Ｂ２’）糖Ｄ６と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ８を除去すること；
Ｂ３’）糖Ｄ６をステップＢ２’）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ３ｂを得ること、
式中、ｎは２〜１０の整数である；
任意に、
Ｅ３）糖（Ｏ３ｂ）の保護基Ｐ８を除去し、糖Ｏ３ｃを得ること、
および
Ｅ４）糖Ｏ３ｃを糖Ｍ３
と反応させ、糖Ｏ４ｂを得ること；
または
Ｅ５）糖Ｏ３ｃを二糖類Ｄ４
と反応させ、糖Ｏ５ａを得ること、
式中、ｍは１であり、
ｍが２〜２０の整数である場合、
その後、次のステップｅ５）およびｅ６）をｍ−１回繰り返すこと
ｅ５）単糖Ｄ４と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ３’を除去すること；
ｅ６）糖Ｄ４をステップｅ５）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ５ａを得ること；
式中、ｍは２〜２０の整数であり
または
Ｅ６）糖Ｏ３ｃを二糖類Ｄ５
式中、ＬＧ７は脱離基を表し、
と反応させ、糖Ｏ５ｂを得ること、
式中、ｍは１であり、
ｍが１〜２０の整数である場合、
その後、次のステップｅ７）およびｅ８）をｍ−１回繰り返すこと
ｅ７）単糖Ｄ５と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ９’を除去すること；
ｅ８）糖Ｄ５をステップｅ７）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ５ｂを得ること；
式中、ｍは２〜２０の整数である
ｅ９）保護基ＰＮを除去し、結果的に生じる−ＮＨ２基を−ＮＨＡｃに変換し、糖Ｏ５ｃを得ること
Ｆ２）糖Ｏ３ｂ、Ｏ４ｂ、Ｏ５ａ、またはＯ５ｃの全ての保護基を除去し、式（Ｉ−５）、（Ｉ−６）、（Ｉ−７）、または（Ｉ−８）の対応する糖
を得ること、
式中、Ｅｐは、保護末端基であり；ＬＧ４〜ＬＧ７は、脱離基であり；ＰＮ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ２’、Ｐ３、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ６、Ｐ６’、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ９’、Ｐ１０、Ｐ１０’、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、保護基を表し、Ｌ、Ｅ、Ｒ１、Ｒ１ｐ、ｍ、およびｎは本願に定義されるのと同じ意味を有する、
を含む。
好ましくは、Ｒ１ｐはＰ４であり、Ｒ１はＨである。
したがって、上述の合成方法にしたがって、ステップの次の組み合わせを本発明の合成糖を得るために行ってもよい：
ステップ：Ａ２）→Ｂ１’）→Ｅ３）→Ｆ２）、Ａ２）→Ｂ１’）→Ｂ２’）→Ｂ３’）→Ｅ３）→Ｆ２）、Ａ２）→Ｂ１’）→Ｂ２’）→Ｂ３’）→Ｅ３）→Ｅ４→Ｆ２）、Ａ２）→Ｂ１’）→Ｂ２’）→Ｂ３’）→Ｅ３）→Ｅ５）→Ｆ２）、Ａ２）→Ｂ１’）→Ｂ２’）→Ｂ３’）→Ｅ３）→Ｅ５）→Ｆ２）。
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ２’、Ｐ３、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ９’、Ｐ１０、Ｐ１０’、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、保護基を表す。本願に使用される用語「保護基」は、有機合成において一般的
に使用される基に関し、好ましくは、ヒドロキシル基およびチオールを保護するために使用される。ＰＮは、アミン基を保護するために使用される保護基を表す。
より好ましくは、Ｐ１、Ｐ２’、Ｐ３、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ９’、Ｐ１０、Ｐ１０’、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、ヒドロキシル基のための適切な保護基、より好ましくは、脱保護反応の適切な順序によって次々に続けて除去されることが可能であるヒドロキシル基のための種々の適切な保護基である。ヒドロキシル基のための好ましい保護基は、アセチル、フェニル、ベンジル、イソプロピリデン、ベンジリデン、ナフチリデン、ベンゾイル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−ブロモベンジル、ｐ−メトキシベンジリデン、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ブロモベンジリデン、ｐ−ニトロフェニル、アリル、トリクロロアセチル、（２−ニトロフェニル）アセチル、イソプロピル、ｐ−ブロモベンジル、ジメトキシトリチル、トリチル、２−ナフチルメチル、ピバロイル、クロロアセチル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリエチルシリル、トリメチルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシメチル、メチルオキシメチル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシメチル、メトキシエチルオキシメチル、レブリノイルであり、およびＰＮは、２，２，２−トリクロロエチルカルボニル（Ｔｒｏｃ）または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を表す。
特に、保護基Ｐ１およびＰ６は、フェニルを表し、保護基Ｐ３およびＰ３’は、２−ナフチルメチルを表し、保護基Ｐ２、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５’、Ｐ１１、Ｐ１２、およびＰ１４は、ベンジル、ｐ−メトキシベンジルを表し、保護基Ｐ２’、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１０’、およびＰ１３は、ベンゾイルであり、保護基Ｐ６は、ブチルジメチルシリルを表す。任意に、ＯＰ４およびＯＰ５、ＯＰ４’およびＯＰ５’は、フェニルヘミアセタールを形成する。Ｐ９’はベンゾイルまたはレブリノイルである。ＰＮは、２，２，２−トリクロロエチルカルボニル（Ｔｒｏｃ）である。
本合成のための脱離基の例は、炭水化物化学の当業者によく知られており、ハロゲン化物、チオエーテル、イミダート、酢酸塩、およびリン酸塩を含む。
好ましくは、脱離基ＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、ＬＧ４、ＬＧ５、ＬＧ６、およびＬＧ７は、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｆ，Ｉ），−Ｏ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＣＣｌ３，−Ｏ−Ｃ（＝ＮＰｈ）−ＣＦ３，−ＯＡｃ，−ＳＲＬ，−ＳＯ−Ｐｈ，−Ｏ−（ＣＨ２）３−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｏ−Ｐ（ＯＲＬ）２，−Ｏ−ＰＯ（ＯＲＬ）２，−Ｏ−ＣＯ−ＯＲＬ，−Ｏ−ＣＯ−ＳＲＬ，−Ｏ−ＣＳ−ＳＲＬ，
−Ｏ−ＣＳ−ＯＲＬ，
から選択され、
式中、ＲＬは、いくつかのアルキルまたはアルキル基、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、フェニル、またはトルイルであってもよい。
好ましくは、脱離基ＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、ＬＧ４、ＬＧ５、ＬＧ６、およびＬＧ７は：
からなる脱離基の群から選択される。
述べたように、オキソカルベニウム中間体の提供は、適当な、または適切な活性化剤を用いてグリコシル化剤のアノマー位置に導入された脱離基の活性化に依存する。リン酸塩のための適切な活性化剤（すなわち、リン酸塩活性化剤）、およびイミダートのための適切な活性化剤（すなわち、イミダート活性化剤）は、例えば、シリルトリフラートまたは銀トリフラートなどのようなルイス酸であり、一方、チオエーテルのための適切な活性化剤、すなわち、チオエーテル活性化剤は：ＮＩＳ／ＴｆＯＨ，ＮＩＳ／ＴＭＳＯＴｆ，ＮＩＳ／ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ，ＮＩＳ／ＡｇＯＴｆ，ＤＭＴＳＴ／Ｔｆ２Ｏ，ＩＤＰＣ，ＢＳＰ／Ｔｆ２Ｏ，Ｐｈ２ＳＯ／Ｔｆ２Ｏを含むが、これらに制限されないことは当業者にとって常識である。シリルトリフラートの例は、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルトリフルオロメタンスルホネート、トリイソプロピルトリフルオロメタンスルホネートを含むが、これらに制限されない。
好ましくは、ＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、ＬＧ４、ＬＧ５、ＬＧ６、およびＬＧ７はチオエーテルであり（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．２０１５，１３−２２参照）、更により好ましくはＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、ＬＧ４、ＬＧ５、ＬＧ６、およびＬＧ７が：
からなる群から選択される場合である。
Ｅｐは、保護末端基を表す。Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＮＨＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；および
対応する保護末端基Ｅｐは、−Ｎ（ＰＮ１）（ＰＮ２），−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−Ｎ（ＰＮ１）（ＰＮ２），−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＮＨＮ（ＰＮ１）（ＰＮ２），−ＳＰ５，または−ＳＡｃを表し；
ＰＮ１およびＰＮ２は、アミンのための適切な保護基であり、保護すべきアミンと共にカルバミン酸またはアミドを形成する。カルバミン酸を形成する保護基の例は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルカルボニル、アリルカルボニル、トリクロロエチルカルボニル、およびベンジルオキシカルボニルを含む。アミドを形成する保護基の例は、アセチル、またはトリクロロアセチルを含む。好ましくは、保護基Ｐ１２は、ベンジルを表し、および保護基Ｐ１３は、ベンジルオキシカルボニルを表す。
Ｐｓは、チオールのための適切な保護基であり、フェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ニトロフェニル、およびアリルから選択される。
糖間の結合反応は、グリコシル化試薬の存在下で行われることができる。適切な試薬は：ＡｇＯＴｆ、ＢＦ３・ＯＥｔ２、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（ＴＭＳＯＴｆ）、トリフルオロメタンスルホン酸（ＴｆＯＨ）、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ２Ｏ、無水トリフリック）、ランタノイド（ＩＩＩ）トリフレート、ＮＩＳ／ＡｇＯＴｆ、ＮＩＳ／ＴｆＯＨ、またはジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフルオロメタンスルホネート（ＤＭＴＳＴ）を含むが、これらに制限されない。
ステップＢ１）、Ｂ１’）、Ｂ１’’）、Ｂ１’’’）、Ｂ３）、Ｂ３’）、Ｂ３’’）、Ｂ３’’’）、Ｂ５’’）、Ｂ５’’’）、Ｄ１）、Ｄ２）、Ｅ１）、Ｅ２）、Ｅ４）、Ｅ５）、Ｅ６）、ａ４）、ｅ６）、ｅ８）において糖間の結合反応は、非極性溶媒と極性非プロトン性溶媒との混合物中で、−８０℃〜−６０℃の温度で、ＮＩＳ／ＴｆＯＨまたはＴＢＳＯＴｆを用いて活性化することによって行われることが好ましい。更により好ましくは、前記反応は、トルエンとジエチルエーテルとの混合物中で、−７０℃で、ＴＢＳＯＴｆを用いて活性化することによって行われる。
好ましくは、ステップａ４）において単糖Ｍ５と糖Ｍ３との結合反応は、非極性溶媒中で、−１０℃〜＋１０℃の温度で、ＴＢＳＯＴｆを用いて活性化することによって行われる。
ステップＦ１）〜Ｆ３）で行われる保護基Ｐ１、Ｐ３、Ｐ５〜Ｐ１３の除去は：
−溶媒の混合物中で、過酸化水素の存在下で、塩基と処理することによって塩基不安定な保護基の第一の開裂、好ましくは、塩基はＮａＯＭｅ、またはＬｉＯＨであり；および
−溶媒の混合物中で、パラジウム触媒の存在下で、化合物を水素にさらすことによって水素化に敏感である保護基の第二の開裂
を含む。
本発明に係る更なる態様は、一般式（Ｉ）の糖を調製するための中間体化合物に関し、ここで、中間体化合物は、一般式（Ｏ１ｂ）、（Ｏ１ｃ）、（Ｏ１ｄ）、（Ｏ２ａ）、（Ｏ２ｂ）、（Ｏ３ａ）、（Ｏ３ｂ）、（Ｏ３ｃ）、（Ｏ４ａ）、（Ｏ４ｂ）、（Ｏ５ａ）、（Ｏ５ｂ）、および（Ｏ５ｃ）：
のいずれか一つを有し、
式中、ＬＧ２は脱離基を表し；Ｅｐは保護末端基であり、
ＰＮ、Ｐ２、Ｐ２’、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ９’、Ｐ１０、Ｐ１０’、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、保護基を表し、並びにＬ、Ｒ１ｐ、ｍ、およびｎは上記に定義されるのと同じ意味を有する
。
式（Ｏ１ｂ）、（Ｏ１ｃ）、（Ｏ１ｄ）、（Ｏ２ａ）、（Ｏ２ｂ）、（Ｏ３ａ）、（Ｏ３ｂ）、（Ｏ３ｃ）、（Ｏ４ａ）、（Ｏ４ｂ）、（Ｏ５ａ）、（Ｏ５ｂ）、および（Ｏ５ｃ）において、好ましくは、リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１，−または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
−Ｅが−ＮＨ２である場合、Ｌが−Ｃ３Ｈ６−でないという条件で、ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
特に好ましい中間体は、式（Ｏ１ｂ）、（Ｏ１ｃ）、（Ｏ１ｄ）、（Ｏ２ａ）、（Ｏ２ｂ）、（Ｏ３ａ）、（Ｏ３ｂ）、（Ｏ３ｃ）、（Ｏ４ａ）、（Ｏ４ｂ）、（Ｏ５ａ）、（Ｏ５ｂ）、および（Ｏ５ｃ）の中間体であり、−Ｌ−は、−（ＣＨ２）ｏ−を表し、およびｏは、４、５、および６から選択される整数である。
Ｐ２、Ｐ２’、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、ヒドロキシル基のための適切な保護基、より好ましくは、脱保護反応の適切な順序によって次々に続けて除去されることが可能である、ヒドロキシル基のための種々の適切な保護基である。ヒドロキシル基のための好ましい保護基は、アセチル、フェニル、ベンジル、イソプロピリデン、ベンジリデン、ナフチリデン、ベンゾイル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−ブロモベンジル、ｐ−メトキシベンジリデン、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ブロモベンジリデン、ｐ−ニトロフェニル、アリル、トリクロロアセチル、（２−ニトロフェニル）アセチル、イソプロピル、ｐ−ブロモベンジル、ジメトキシトリチル、トリチル、２−ナフチルメチル、ピバロイル、クロロアセチル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリエチルシリル、トリメチルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシメチル、メチルオキシメチル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシメチル、メトキシエチルオキシメチル、およびレブリノイルである。
ＰＮは、アミン基を保護するために使用される保護基、より好ましくは、２，２，２−トリクロロエチルカルボニル（Ｔｒｏｃ）またはフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を表す。
したがって、中間体（Ｏ１ｂ）、（Ｏ１ｃ）、（Ｏ１ｄ）、（Ｏ２ａ）、（Ｏ２ｂ）、（Ｏ３ａ）、（Ｏ３ｂ）、（Ｏ３ｃ）、（Ｏ４ａ）、（Ｏ４ｂ）、（Ｏ５ａ）、（Ｏ５ｂ）、および（Ｏ５ｃ）は：保護基Ｐ１およびＰ６は、フェニルを表し、保護基Ｐ３およびＰ３’は、２−ナフチルメチルを表し、保護基Ｐ２、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５’、Ｐ１１、Ｐ１２、およびＰ１４は、ベンジル、ｐ−メトキシベンジルを表し、保護基Ｐ２’、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１０’、およびＰ１３は、ベンゾイルであり、Ｐ９’は、ベンゾイルまたはレブリノイルであり、および保護Ｐ６は、ブチルジメチルシリルを表すと特に好ましい。ＰＮは、２，２，２−トリクロロエチルカルボニル（
Ｔｒｏｃ）である。任意に、ＯＰ４およびＯＰ５、ＯＰ４’およびＯＰ５’は、フェニルヘミアセタールを形成する。
本発明の更なる態様は、式（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）の化合物：
に関し、
式中、ｍ、ｎ、Ｌ、Ｅ、Ｒ１、Ｒ＊、Ｒ１’、およびＲ＊’は、本願に定義される通りの意味を有する。
［複合糖質］
本発明の他の態様は、本発明に係る糖を含む複合体に関する。驚くべきことに、前記複合体は、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患に対する免疫付与のためのワクチンとして効果的であることを証明した。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−型、並びにカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ（ガラクタン−ＩＩＩ）、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
糖は、免疫原性でない場合に、一般的にＴＩ−２（Ｔ細胞非依存的−２）抗原および低
い免疫抗原性として当業者に知られている。ＴＩ−２抗原は、表面露出された免疫グロブリン受容体のクロスリンクを介して成熟Ｂ細胞によってのみ認識される抗原である。Ｔ細胞の助けなしでは、免疫記憶は生じず、ＩｇＭサブクラスから他のＩｇＧサブクラスへのアイソタイプ変換もＢ細胞親和性成熟も起こらない。さらに、糖は、ヒト糖脂質およびヒト糖タンパク質に対する構造的相同性のために、ヒトにおいて低い免疫原であることが知られている。糖の低い免疫原性特性のために、糖は、強力なワクチンの生産に必須の特徴である、Ｂ細胞による抗体産生、および記憶細胞の形成の両方を生じさせる能力が低いことを示す。
したがって、強力な糖に基づくワクチンを生産するために、一般式（Ｉ）、（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）、および（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）の糖、好ましくは糖Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００、は、複合体を提供するために免疫原性担体に結合され、当該複合体は、糖と比較して上昇した免疫原性を示す。したがって、本願の範囲下では、一般式（ＩＩＩ）の複合体も包含する。
式中、
ｉは、２〜２５から選択される整数であり；好ましくは、２〜１８から選択される整数であり
−Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
を表し；
−Ｔ−は、
を表し；
ａは、１〜１０の整数を表し；
ｂは、１〜４の整数を表し；
ＣＰは、担体タンパク質であり；および
Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５、Ｌ、ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは、本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、Ｅ１は、共有結合，−ＮＨ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，または
である。
前記複合体は、少なくとも一つの一般式（Ｉ）の合成糖、および少なくとも一つの糖が共有結合される免疫原性担体、好ましくは担体タンパク質からなる。
驚くべきことに、免疫原性担体、好ましくは担体タンパク質に共有結合している一般式（Ｉ）の糖を含む複合体を用いた免疫付与は、一般式（Ｉ）の糖の炭水化物部分に特異的な高力価の抗体の生産をもたらすことを明らかにした。前記抗体は、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ８ Ｏ−多糖およびカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８ Ｏ−多糖と交差反応し、オプソニン化貪食作用および殺菌活性を示すので、クレブシエラ ニューモニエに対する保護を与える。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−型、並びにカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ（ガラクタン−ＩＩＩ）、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
本発明の少なくとも一つの複合体を含むワクチンは、クレブシエラ ニューモニエの莢膜多糖、またはクレブシエラ ニューモニエの莢膜多糖の複合体における非選択的開裂によって得られる糖の単離された（および合成されていない）混合物を含むワクチンと比較して、より少ない副作用、および／または非保護免疫応答をもたらす。さらに、本発明のワクチンは、非選択的開裂された莢膜多糖の単離された混合物を含むワクチンより、ＧＭＰ規則にしたがって、より容易に製造されることができ、より容易に特徴づけられることができ、そのことは、安定性および純度制御を容易にし、並びに不純物の種類および量の検出をする。
この文脈において用語「免疫原性担体」は、構造として定義され、糖自体と比較して増加した免疫原性を示す複合体を形成するために糖に結合される。したがって、複合体（ＩＩＩ）は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）の糖、好ましくは糖Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、およびＯ−０１〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００の免疫原性担体への結合によって得られ、前記免疫原性担体に対する免疫応答を誘導することなく、一般式（Ｉ）の糖に対して免疫応答を刺激する効果を有する。
最も好ましくは、複合体（ＩＩＩ）は：化合物Ａ−０１〜Ａ−０７、Ａ−１１〜Ａ１７
、Ａ−２１〜Ａ−２７、Ａ−３１〜Ａ−３７、Ａ−４１〜Ａ−４７、Ａ−５１〜Ａ−５７、Ａ−６１〜Ａ−６７、Ａ−７１〜Ａ−７７、Ａ−８１〜Ａ−８７、Ａ−９１〜Ａ−９７、Ａ−１０１〜Ａ−１０７、Ａ−１１１〜Ａ−１１７、Ａ−１２１〜Ａ−１２７、Ａ−１３１〜Ａ−１３７、Ｆ−０１、Ｆ−１９、Ｆ−２７、Ｆ−３１、Ｆ−３６、Ｆ−５４、Ｆ−６２、Ｆ−６６、Ｆ−７１、Ｆ−８９、Ｆ−９７、Ｆ−１０１、Ｆ−１０６、Ｆ−１２４、Ｆ−１３２、Ｆ−１３６、Ｆ−１４１、Ｆ−１５９、Ｆ−１６７、Ｆ−１７１、Ｆ−１７６、Ｆ−１９４、Ｆ−２０２、Ｆ−２０６、Ｆ−２１１、Ｆ−２２９、Ｆ−２３７、Ｆ−２４１、Ｆ−２４６、Ｆ−２６４、Ｆ−２９９、Ｆ−２８１、Ｆ−２７２、Ｆ−２７６、Ｆ−３０７、Ｆ−３１１、Ｆ−３１６、Ｆ−３３４、Ｆ−３４２、Ｆ−３４６、Ｆ−３５１、Ｆ−４１４、Ｆ−４１７、Ｆ−４２１、Ｆ−４２６、Ｆ−４４４、Ｆ−４５２、Ｆ−４５６、Ｆ−４６１、Ｆ−４７９、Ｆ−４８７、Ｆ−４９１、Ｆ−４９６、Ｆ−５１４、Ｆ−５２２、Ｆ−５２６、Ｋ−０１、Ｋ−０６、Ｋ−１１、Ｋ−２６、Ｋ−３１、Ｋ−３６、Ｋ−５１、Ｋ−５６、Ｋ−６１、Ｋ−７６、Ｋ−８１、Ｋ−８６、Ｋ−１０１、Ｋ−１０６、Ｋ−１１１、Ｋ−１２６、Ｋ−１３１、Ｋ−１３６、Ｋ−１５１、Ｋ−１５６、Ｋ−１６１、Ｋ−１７６、Ｋ−１８１、Ｋ−１８６、Ｋ−２０１、Ｋ−２０６、Ｋ−２１１、Ｋ−２２６、Ｋ−２３１、Ｋ−２３６、Ｋ−２５１、Ｋ−２５６、Ｋ−２６１、Ｋ−２７６、Ｋ−２８１、Ｋ−２８６、Ｋ−３０１、Ｋ−３０６、Ｋ−３１１、Ｋ−３２６、Ｋ−３３１、Ｋ−３３６、Ｏ−０１、Ｏ−０２、Ｏ−０３、Ｏ−０６、Ｏ−０７、Ｏ−０８、Ｏ−１１、Ｏ−１２、Ｏ−１３、Ｏ−１６、Ｏ−１７、Ｏ−１８、Ｏ−２１、Ｏ−２２、Ｏ−２３、Ｏ−２６、Ｏ−２７、Ｏ−２８、Ｏ−３１、Ｏ−３２、Ｏ−３３、Ｏ−３６、Ｏ−３７、Ｏ−３８、Ｏ−４１、Ｏ−４２、Ｏ−４３、Ｏ−４６、Ｏ−４７、Ｏ−４８、Ｏ−５１、Ｏ−５２、Ｏ−５３、Ｏ−５６、Ｏ−５７、Ｏ−５８、Ｏ−６１、Ｏ−６２、Ｏ−６３、Ｏ−６６、Ｏ−６７、Ｏ−８８、Ｐ−０１〜Ｐ−０３、Ｐ−０６〜Ｐ−０８、Ｐ−１１〜Ｐ−１３、Ｐ−１６〜Ｐ−１８、Ｐ−２１〜Ｐ−２３、Ｐ−２６〜Ｐ−２８、Ｐ−３１〜Ｐ−３３、Ｐ−３６〜Ｐ−３８、Ｐ−４１〜Ｐ−４３、Ｐ−４６〜Ｐ−４８、Ｐ−５１〜Ｐ−５３、Ｐ−５６〜Ｐ−５８、Ｐ−６１〜Ｐ−６３、Ｐ−６６〜Ｐ−６８、Ｑ−１、Ｑ−２６、Ｑ−１０１、Ｑ−１５１、Ｑ−２５１、Ｑ−３０１、Ｑ−３５１、Ｑ−３７６、Ｑ−４５１、Ｑ−５０１、Ｑ−５５１、Ｑ−６０１およびＱ−６５１からなる群から選択される。５３から含む。
好ましい免疫原性担体は、免疫調節特性を有する担体タンパク質（ＣＰ）またはグリコスフィンゴ脂質である。当業者にとって、担体タンパク質は：ジフテリアトキソイド、変異ジフテリアトキソイド、修飾ジフテリアトキソイド、変異および修飾ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、修飾破傷風トキソイド、変異破傷風トキソイド、外膜タンパク質（ＯＭＰ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、キーホール リンペット ヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎｅ）（ＫＬＨ））、シュードモナス エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の組み換え非毒性型、またはコレラトキソイド（ＣＴ）を含む群、または、からなる群から選択されるタンパク質である。本願に使用される用語「トキソイド」は、細菌毒素（一般的に外毒素）に関し、細菌毒素の毒性は、化学的（ホルマリン）または熱処理のいずれかによって不活性化または抑制されており、一方、他の特性、一般的に免疫原性は維持される。本願に使用される変異トキソイドは、組み換え細菌毒素であり、組み換え細菌毒素は、野生型アミノ酸配列を修正することによって、低い毒性、または非毒性にさえもなるように修正されている。このような変異は、一つ以上のアミノ酸の置換であり得る。このような変異トキソイドは、修飾トキソイドを提供するために相互連結分子の官能基Ｙと反応することができる官能性を当該表面に示す。前記官能性は、当業者に公知であり、還元剤の存在下で活性化エステル、イソシアネート基、またはアルデヒドと反応することができるリジン残基の第一級アミノ官能性、カルボジイミドによって活性化されることができるグルタミン酸塩残基またはアスパラギン酸塩残基のカルボキシレート官能性、またはシステイン残基のチオール官能性を含むが、これらに制限されない。
活性化エステルは、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ＳＩＡＢ）、スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、ジスクシンイミジルアジペート（ＤＳＡ）、２−ピリジルジチオール−テトラオキサテトラデカン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＰＥＧ−４−ＳＰＤＰ）、ビス−（４−ニトロフェニル）アジペート、およびビス−（４−ニトロフェニル）スクシネートを含む（図３参照）。好ましい活性化エステルは、ジスクシンイミジルアジペート（ＤＳＡ）、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、ビス−（４−ニトロフェニル）アジペート、およびビス−（４−ニトロフェニル）スクシネートである。
担体タンパク質におけるシステイン残基は、担体タンパク質の表面に相互連結分子の官能基Ｘを有する修飾担体タンパク質を提供するために、適切な相互連結分子と更に反応されることができる、対応するデヒドロアラニンに変換されることができる。
一般式Ｉの糖は、リジン残基の第一級アミノ官能性として示す担体タンパク質として非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に結合されることが特に好ましい。
ＣＲＭ１９７様野生型ジフテリア毒素は、グリシンへグルタミン酸の一つのアミノ酸置換を有するジスルフィド架橋によって結合される２つのサブユニットからなる５３５アミノ酸（５８ｋＤ）の単一ポリペプチド鎖である。プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ）のような、疾患のために多くの承認された複合体ワクチンにおける担体タンパク質として使用される。
したがって、本発明の好ましい実施形態において、担体タンパク質は、相互連結分子の前記官能基Ｘを担体タンパク質の表面に有する修飾担体タンパク質を提供するために、当該表面に相互連結分子の官能基Ｙと反応することができるリジン残基の第一級アミノ官能性を示し、修飾担体タンパク質は、一般式（Ｉ）の化合物におけるリンカーの末端アミノ基と反応することができる。
相互連結分子の前記官能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、アルデヒド、イミドエステル、カルボン酸、スルホン酸アルキル、塩化スルホニル、エポキシド、無水物、炭酸塩を含む、または、からなる群から選択される。
好ましくは、一般式（ＩＶ）の複合体であり
式中、
ｉは、２〜２５から選択される整数であり；好ましくは、２〜１８から選択される整数であり
−Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
を表し；
−Ｔ−は、
を表し；
ａは、１〜１０の整数を表し；
ｂは、１〜４の整数を表し；および
Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５、Ｌ、ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは、一般式（Ｉ）のように本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、一般式（ＩＶ）の複合体であり
式中、
ｉは、２〜２５から選択される整数であり；好ましくは、２〜１８から選択される整数であり
−Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
を表し；
−Ｔ−は、
を表し；
ａは、１〜１０の整数を表し；
ｂは、１〜４の整数を表し；および
Ｕ２−Ｕ１は
を表す場合、ｍは０でないことができ、およびＵ５−Ｕ４はＵ２−Ｕ１でないことができる。
Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５、Ｌ、ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは、一般式（Ｉ）のように本願に定義されるのと同じ意味を有する。
チェック１１５〜１２９
好ましくは、Ｅ１は、共有結合，−ＮＨ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，
である。
好ましくは、式（ＩＶ）の複合体、または式（ＩＶ）の複合体のアノマー、水和物もしくは薬学的に許容できる塩であり
式中
Ｕ１は、
を表し
Ｕ２は、
を表し
Ｕ５は、共有結合、または
を表し
ｋは０であり、Ｅ１、ｉ、ｍ、ｎ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、式（ＩＶ）の複合体でもあり
式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
ｍは０であり；
Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、一般式（ＩＶ）の合成糖であり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
Ｕ４は、
を表し；
Ｕ５は、共有結合、または
を表し；
ｍは０および１から選択される整数であり；
Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、式（ＩＶ）の複合体であり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
Ｕ４は、
を表し；
Ｕ５は、共有結合、または
を表し；
ｍは０または１の整数であり；
Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、式（ＩＶ）の複合体であり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
Ｕ４は、
を表し；
Ｕ５は、共有結合、または
を表し；
ｍは１〜１０の整数であり；
Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは式（Ｖ）の複合体でもあり
式中、
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
Ｕ４は、
を表し；
Ｕ５は、共有結合、または
を表し；
Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、式（Ｖ）の複合体でもあり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
ｍは０であり、Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、式（Ｖ）の複合体でもあり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
Ｕ４は、
を表し；
ｍは０であり、Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、式（Ｖ）の複合体でもあり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
ｍは０であり、Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、式（Ｖ）の複合体でもあり、式中
Ｕ１は、
を表し；
Ｕ２は、
を表し；
Ｕ４は、
を表し；
Ｕ５は、共有結合、または
を表し；
ｍは１〜１０の整数であり；
Ｌ、Ｅ１、ｉ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは本願に定義されるのと同じ意味を有する。
より好ましくは、式（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの複合体であり：
式中
Ｒ１およびＲ＊は、独立して−Ｈ，または
を表し；
ここで、Ｒ１およびＲ＊は、同時に
であることはできず；
並びに
Ｌ、Ｅ１、Ｔ、ｉ、ｍ、ｋ、およびｎは、上記に定義されるのと同じ意味を有し、ｎおよびｍは、１〜１０の整数である。
より好ましくは、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの複合体であり、式中、ｎは１〜１０の整数である。
より好ましくは、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの複合体であり、式中、ｉは４〜１０から選択される。
好ましくは、―Ｔ−は
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
したがって、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの複合体が特に好ましく、
式中、−Ｔ−は
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
好ましくはリンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
最も好ましい実施形態において、Ｅ１は、共有結合，−ＮＨ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，または
である。
他の実施形態において、前記免疫原性担体は、好ましくは、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質であり、より好ましくは、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールである。免疫調節特性を有する用語グリコースフィンゴ脂質は、本願に使用される通り、標的抗原に対して免疫システム応答を刺激することができるが、上記に定義される通りグリコスフィンゴ脂質自体では免疫性を与えない適切なグリコスフィンゴ脂質に関する。
本願に使用されるグリコスフィンゴ脂質は、スフィンゴ脂質にα−結合される炭水化物部分を含む化合物である。好ましくは、炭水化物部分は、ヘキソピラノースであり、最も好ましくは、α−Ｄ−ガラクトピラノースである。当業者にとって、スフィンゴ脂質は、アミド結合を介して脂肪酸に連結されるＣ１８アミノアルコールを含む脂質のクラスである。Ｃ１８アミノアルコールは、好ましくは、ヒドロキシル基とモノ−、ジ−、またはポリ置換される。特に好ましくは、Ｃ１８アミノアルコールは、フィトスフィンゴシンである。脂肪酸は、好ましくは、１６〜１８個の範囲の、およびより好ましくは、１８〜２６個の範囲の多数の炭素の飽和アルキル鎖を有するモノカルボン酸である。免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質は、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールを含むが、これに制限されず、ナチュラルキラー（ＮＫ）活性およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞によるサイトカイン産生を刺激することができ、インビボにおいて強力な抗腫瘍活性を示す（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，５６９０）。
免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質を有する一般式（Ｉ）の糖の複合体は、熱安定性があるという利点を有する。加えて、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質を有する一般式（Ｉ）の糖の複合体は、一般式（Ｉ）の糖、およびＣＲＫＰのＯ−多糖に対して、マウスにおいて、高力価のＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、およびＩｇＧ３抗体を生産することができる。複合体が安定であるために、免疫−調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質において、官能性が導入される。前記官能性は、一般式（Ｉ）の糖の複合体を提供するために一般式（Ｉ）の糖におけるリンカーの末端アミノ基と、または免疫調節特性を有する修飾グリコスフィンゴ脂質を提供するために相互連結分子の官能基Ｙと、反応する傾向がある。
好ましくは、前記官能性は、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質のガラクトース部分における炭素６に導入される。したがって、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質は、官能性を用いて官能基化され、糖の末端アミノ基と、または相互連結分子の官能基Ｙと、反応する傾向がある。アミノ基と反応する傾向がある官能性は、活性化エステル、イソシアネート基、アルデヒド、エポキシド、イミドエステル、カルボン酸、アルキルスルホネート、および塩化スルホニルを含むが、これらに制限されない。相互連結分子の官能基Ｘを示す免疫調節特性を有する修飾グリコスフィンゴ脂質を提供するために、相互連結分子の官能基Ｙと反応する傾向がある官能性は、アミン、アルコール、チオール、活性化エステル、イソシアネート基、アルデヒド、エポキシド、ビニル、イミドエステル、カルボン酸、アルキルスルホネート、塩化スルホニル、ビニル基、アルキニル基、およびアジド基を含むが、これらに制限されない。
好ましくは、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質の炭水化物部分におけるＣ６
に導入される官能性は、アミン、チオール、アルコール、カルボン酸、ビニル、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、および２−ピリジルジチオールを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、または含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）群から選択される。
相互連結分子の前記官能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、アルデヒド、カルボン酸、エポキシド、アルキルスルホネート、塩化スルホニル、無水物、および炭酸塩を含む、または、からなる群から選択される。
本願に使用される用語「相互連結分子」は、官能基Ｘおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、ここで、官能基Ｘは、リンカー−Ｌ−における末端アミノ基と反応することが可能であり、官能基Ｙは、免疫原性担体または固体支持体に存在する官能基と反応することが可能である。
一般式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの少なくとも一つの糖、好ましくは、Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００のいずれか一つの少なくとも一つの糖を含む複合体、および特に、一般式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの複合体は、ヒトおよび／または動物宿主において保護免疫応答を誘導するので、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患の予防および／または治療に有用であるということが明らかになった。クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患は、、肺炎、気管支炎、髄膜炎、尿路感染症、院内肺炎、腹腔内感染症、創傷感染症、血液の感染症、骨髄炎、菌血症、敗血症、および強直性脊椎炎を含む。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ（ガラクタン−ＩＩＩ）、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
［医薬組成物］
本発明の他の態様は、少なくとも一つの薬学的に許容できるアジュバントおよび／または賦形剤と共に、活性成分として、免疫原性担体に結合される一般式（Ｉ）の少なくとも一つの糖を含む少なくとも一つの複合体、および／または一般式（Ｉ）の少なくとも一つの糖を含む医薬組成物またはワクチンに関する。前記医薬組成物は、ヒトおよび／または動物宿主において保護免疫応答を高めるために使用されることができる。理論的に、医薬組成物はヒトにおける使用のために適切である。
特に、前記医薬組成物または前記ワクチンは、ヒトおよび／または動物宿主において保
護免疫応答を誘導するので、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患の予防および／または治療に有用である。したがって、前記医薬組成物または前記ワクチンは、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患の予防および／または疾患に有用である。クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患は、肺炎、気管支炎、髄膜炎、尿路感染症、院内肺炎、腹腔内感染症、創傷感染症、血液の感染症、骨髄炎、菌血症、敗血症、および強直性脊椎炎を含む。
好ましくは、前記医薬組成物または前記ワクチンは、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患の予防および／または治療に有用である。ここで、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ（ガラクタン−ＩＩＩ）、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
好ましくは、医薬組成物またはワクチンは、活性成分として一般式（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの少なくとも一つの糖、および／または一般式（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの少なくとも一つの糖を含む複合体の少なくとも一つを含む。
特に、医薬組成物またはワクチンは、一般式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの少なくとも一つの複合体を含み、より好ましくは、医薬組成物またはワクチンは、少なくとも一つの糖Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１〜Ｏ−７０、およびＰ−０１〜Ｐ−７０、並びに／または少なくとも一つの糖Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００を含む少なくとも一つの複合体を含む。
より好ましくは、医薬組成物またはワクチンは、少なくとも一つの糖Ａ−０１〜Ａ−０７、Ａ−１１〜Ａ１７、Ａ−２１〜Ａ−２７、Ａ−３１〜Ａ−３７、Ａ−４１〜Ａ−４７、Ａ−５１〜Ａ−５７、Ａ−６１〜Ａ−６７、Ａ−７１〜Ａ−７７、Ａ−８１〜Ａ−８７、Ａ−９１〜Ａ−９７、Ａ−１０１〜Ａ−１０７、Ａ−１１１〜Ａ−１１７、Ａ−１２１〜Ａ−１２７、Ａ−１３１〜Ａ−１３７、Ｆ−０１、Ｆ−１９、Ｆ−２７、Ｆ−３１、Ｆ−３６、Ｆ−５４、Ｆ−６２、Ｆ−６６、Ｆ−７１、Ｆ−８９、Ｆ−９７、Ｆ−１０１、Ｆ−１０６、Ｆ−１２４、Ｆ−１３２、Ｆ−１３６、Ｆ−１４１、Ｆ−１５９、Ｆ−１６７、Ｆ−１７１、Ｆ−１７６、Ｆ−１９４、Ｆ−２０２、Ｆ−２０６、Ｆ−２１１、Ｆ−２２９、Ｆ−２３７、Ｆ−２４１、Ｆ−２４６、Ｆ−２６４、Ｆ−２９９、Ｆ−２８１、Ｆ−２７２、Ｆ−２７６、Ｆ−３０７、Ｆ−３１１、Ｆ−３１６、Ｆ−３３４、Ｆ−３４２、Ｆ−３４６、Ｆ−３５１、Ｆ−４１４、Ｆ−４１７、Ｆ−４２１、Ｆ−４２６、Ｆ−
４４４、Ｆ−４５２、Ｆ−４５６、Ｆ−４６１、Ｆ−４７９、Ｆ−４８７、Ｆ−４９１、Ｆ−４９６、Ｆ−５１４、Ｆ−５２２、Ｆ−５２６、Ｋ−０１、Ｋ−０６、Ｋ−１１、Ｋ−２６、Ｋ−３１、Ｋ−３６、Ｋ−５１、Ｋ−５６、Ｋ−６１、Ｋ−７６、Ｋ−８１、Ｋ−８６、Ｋ−１０１、Ｋ−１０６、Ｋ−１１１、Ｋ−１２６、Ｋ−１３１、Ｋ−１３６、Ｋ−１５１、Ｋ−１５６、Ｋ−１６１、Ｋ−１７６、Ｋ−１８１、Ｋ−１８６、Ｋ−２０１、Ｋ−２０６、Ｋ−２１１、Ｋ−２２６、Ｋ−２３１、Ｋ−２３６、Ｋ−２５１、Ｋ−２５６、Ｋ−２６１、Ｋ−２７６、Ｋ−２８１、Ｋ−２８６、Ｋ−３０１、Ｋ−３０６、Ｋ−３１１、Ｋ−３２６、Ｋ−３３１、Ｋ−３３６、Ｏ−０１、Ｏ−０２、Ｏ−０３、Ｏ−０６、Ｏ−０７、Ｏ−０８、Ｏ−１１、Ｏ−１２、Ｏ−１３、Ｏ−１６、Ｏ−１７、Ｏ−１８、Ｏ−２１、Ｏ−２２、Ｏ−２３、Ｏ−２６、Ｏ−２７、Ｏ−２８、Ｏ−３１、Ｏ−３２、Ｏ−３３、Ｏ−３６、Ｏ−３７、Ｏ−３８、Ｏ−４１、Ｏ−４２、Ｏ−４３、Ｏ−４６、Ｏ−４７、Ｏ−４８、Ｏ−５１、Ｏ−５２、Ｏ−５３、Ｏ−５６、Ｏ−５７、Ｏ−５８、Ｏ−６１、Ｏ−６２、Ｏ−６３、Ｏ−６６、Ｏ−６７、Ｏ−８８、Ｐ−０１〜Ｐ−０３、Ｐ−０６〜Ｐ−０８、Ｐ−１１〜Ｐ−１３、Ｐ−１６〜Ｐ−１８、Ｐ−２１〜Ｐ−２３、Ｐ−２６〜Ｐ−２８、Ｐ−３１〜Ｐ−３３、Ｐ−３６〜Ｐ−３８、Ｐ−４１〜Ｐ−４３、Ｐ−４６〜Ｐ−４８、Ｐ−５１〜Ｐ−５３、Ｐ−５６〜Ｐ−５８、Ｐ−６１〜Ｐ−６３、Ｐ−６６〜Ｐ−６８、Ｑ−１、Ｑ−２６、Ｑ−１０１、Ｑ−１５１、Ｑ−２５１、Ｑ−３０１、Ｑ−３５１、Ｑ−３７６、Ｑ−４５１、Ｑ−５０１、Ｑ−５５１、Ｑ−６０１およびＱ−６５１を含む、並びに／または少なくとも一つの糖Ａ−０１〜Ａ−０７、Ａ−１１〜Ａ１７、Ａ−２１〜Ａ−２７、Ａ−３１〜Ａ−３７、Ａ−４１〜Ａ−４７、Ａ−５１〜Ａ−５７、Ａ−６１〜Ａ−６７、Ａ−７１〜Ａ−７７、Ａ−８１〜Ａ−８７、Ａ−９１〜Ａ−９７、Ａ−１０１〜Ａ−１０７、Ａ−１１１〜Ａ−１１７、Ａ−１２１〜Ａ−１２７、Ａ−１３１〜Ａ−１３７、Ｆ−０１、Ｆ−１９、Ｆ−２７、Ｆ−３１、Ｆ−３６、Ｆ−５４、Ｆ−６２、Ｆ−６６、Ｆ−７１、Ｆ−８９、Ｆ−９７、Ｆ−１０１、Ｆ−１０６、Ｆ−１２４、Ｆ−１３２、Ｆ−１３６、Ｆ−１４１、Ｆ−１５９、Ｆ−１６７、Ｆ−１７１、Ｆ−１７６、Ｆ−１９４、Ｆ−２０２、Ｆ−２０６、Ｆ−２１１、Ｆ−２２９、Ｆ−２３７、Ｆ−２４１、Ｆ−２４６、Ｆ−２６４、Ｆ−２９９、Ｆ−２８１、Ｆ−２７２、Ｆ−２７６、Ｆ−３０７、Ｆ−３１１、Ｆ−３１６、Ｆ−３３４、Ｆ−３４２、Ｆ−３４６、Ｆ−３５１、Ｆ−４１４、Ｆ−４１７、Ｆ−４２１、Ｆ−４２６、Ｆ−４４４、Ｆ−４５２、Ｆ−４５６、Ｆ−４６１、Ｆ−４７９、Ｆ−４８７、Ｆ−４９１、Ｆ−４９６、Ｆ−５１４、Ｆ−５２２、Ｆ−５２６、Ｋ−０１、Ｋ−０６、Ｋ−１１、Ｋ−２６、Ｋ−３１、Ｋ−３６、Ｋ−５１、Ｋ−５６、Ｋ−６１、Ｋ−７６、Ｋ−８１、Ｋ−８６、Ｋ−１０１、Ｋ−１０６、Ｋ−１１１、Ｋ−１２６、Ｋ−１３１、Ｋ−１３６、Ｋ−１５１、Ｋ−１５６、Ｋ−１６１、Ｋ−１７６、Ｋ−１８１、Ｋ−１８６、Ｋ−２０１、Ｋ−２０６、Ｋ−２１１、Ｋ−２２６、Ｋ−２３１、Ｋ−２３６、Ｋ−２５１、Ｋ−２５６、Ｋ−２６１、Ｋ−２７６、Ｋ−２８１、Ｋ−２８６、Ｋ−３０１、Ｋ−３０６、Ｋ−３１１、Ｋ−３２６、Ｋ−３３１、Ｋ−３３６、Ｏ−０１、Ｏ−０２、Ｏ−０３、Ｏ−０６、Ｏ−０７、Ｏ−０８、Ｏ−１１、Ｏ−１２、Ｏ−１３、Ｏ−１６、Ｏ−１７、Ｏ−１８、Ｏ−２１、Ｏ−２２、Ｏ−２３、Ｏ−２６、Ｏ−２７、Ｏ−２８、Ｏ−３１、Ｏ−３２、Ｏ−３３、Ｏ−３６、Ｏ−３７、Ｏ−３８、Ｏ−４１、Ｏ−４２、Ｏ−４３、Ｏ−４６、Ｏ−４７、Ｏ−４８、Ｏ−５１、Ｏ−５２、Ｏ−５３、Ｏ−５６、Ｏ−５７、Ｏ−５８、Ｏ−６１、Ｏ−６２、Ｏ−６３、Ｏ−６６、Ｏ−６７、Ｏ−８８、Ｐ−０１〜Ｐ−０３、Ｐ−０６〜Ｐ−０８、Ｐ−１１〜Ｐ−１３、Ｐ−１６〜Ｐ−１８、Ｐ−２１〜Ｐ−２３、Ｐ−２６〜Ｐ−２８、Ｐ−３１〜Ｐ−３３、Ｐ−３６〜Ｐ−３８、Ｐ−４１〜Ｐ−４３、Ｐ−４６〜Ｐ−４８、Ｐ−５１〜Ｐ−５３、Ｐ−５６〜Ｐ−５８、Ｐ−６１〜Ｐ−６３、Ｐ−６６〜Ｐ−６８、Ｑ−１、Ｑ−２６、Ｑ−１０１、Ｑ−１５１、Ｑ−２５１、Ｑ−３０１、Ｑ−３５１、Ｑ−３７６、Ｑ−４５１、Ｑ−５０１、Ｑ−５５１、Ｑ−６０１およびＱ−６５１を含む少なくとも一つの複合体を含む。
オリゴ糖の濃度
本発明の他の態様において、前記医薬組成物またはワクチンは、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８を含む、または、からなる群から選択されるクレブシエラ ニューモニエ細菌における、少なくとも一つの莢膜多糖、Ｏ−多糖、および、／または莢膜多糖断片、Ｏ−多糖断片、および／またはそれらのタンパク質複合体を更に含む。
本明細書に使用される用語「アジュバント」は、免疫学的アジュバント、すなわち、アジュバントに関連する抗原性はなく、ワクチンに含まれる所与の抗原への免疫応答を高めることによって、前記ワクチンの効果を修正する、または増加させるワクチン組成物において使用される材料に関する。当業者にとって、免疫学的アジュバントの古典的に認識される例は、油乳剤（例えば、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ） アジュバントなど）、サポニン、アルミニウム塩またはカルシウム塩（例えば、アルム（ａｌｕｍ）など）、非イオン性ブロック重合体界面活性剤、および他の物を含むが、これらに制限されない。
医薬組成物は、特に投与の時点で、好ましくは、水性形態であるが、非水性液体形態で、またはゼラチンカプセルのような乾燥形態で、または凍結乾燥品などで存在することができる。
医薬組成物は、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールなどのような、一つ以上の防腐剤を含んでもよい。水銀を使わない組成物は好ましく、および防腐剤を使わないワクチンを調製することができる。
医薬組成物は、等張性を制御するために、例えばナトリウム塩などのような、生理的塩を含んでもよい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）は、一般的であり、１〜２０ｍｇ／ｍｌで存在してもよい。存在し得る他の塩は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、無水リン酸二ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、などを含む。
医薬組成物は、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有することができる。
医薬組成物は、普通の水（例えば、注射用水（ｗ．ｆ．ｉ））中に化合物（不溶性の金属塩を有する、または有さない）を含んでもよいが、通常一つ以上の緩衝剤を含むであろう。一般的な緩衝剤は：リン酸塩緩衝剤；トリス緩衝剤；ホウ酸塩緩衝剤；コハク酸塩緩衝剤；ヒスチジン緩衝剤（特に、水酸化アルミニウムアジュバントを有する場合）；またはクエン酸塩緩衝剤を含んでもよい。緩衝塩は、一般的に、５〜２０ｍＭの範囲で含まれるだろう。
医薬組成物は、一般的にｐＨ５．０〜９．５、例えば、ｐＨ６．０〜８．０を有する。
医薬組成物は、好ましくは、無菌および無グルテンである。
医薬組成物は、動物（および、特にヒト）患者に投与するために適切であるので、ヒト用および動物用の両方を含む。医薬組成物は、患者における免疫応答を高める方法において使用されてもよく、患者へ組成物を投与するステップを含む。
本発明の医薬組成物は、患者がクレブシエラ ニューモニエにさらされる前、および／または患者がクレブシエラ ニューモニエにさらされる後に投与されてもよい。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択され
る。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
本発明の他の態様において、本発明は、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患の予防および／または治療のための前記医薬組成物もしくは前記ワクチンの製造のための、免疫原性担体に結合される一般式（Ｉ）の少なくとも一つの糖を含む少なくとも一つの複合体、および／または一般式（Ｉ）の少なくとも一つの糖の使用に関し、特にクレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患は、肺炎、気管支炎、髄膜炎、尿路感染症、院内感染症、腹腔内感染症、創傷感染症、血液の感染症、骨髄炎、菌血症、敗血症、および強直性脊椎炎を含む、または、からなる群から選択される。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
好ましくは、本発明は、前記医薬組成物または前記ワクチンの製造のための、一般式（Ｉ−１）〜（Ｉー７）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの少なくとも一つの糖、および／または一般式（Ｉ−１）〜（Ｉー７）、（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−１７）のいずれか一つの少なくとも一つの糖を含む少なくとも一つ複合体の使用に関する。
より好ましくは、本発明は、前記医薬組成物または前記ワクチンの製造のための、糖Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００の少なくとも一つ、並びに／または、糖Ａ−０１〜Ａ−１４０、Ｂ−０１〜Ｂ−１４０、Ｃ−０１〜Ｃ−７０、Ｄ−０１〜Ｄ−７０、Ｅ−０１〜Ｅ−７０、Ｆ−０１〜Ｆ−５３０、Ｇ−０１〜Ｇ−３５０、Ｈ−０１〜Ｈ−３５０、Ｊ−０１〜Ｊ−３５０、Ｋ−０１〜Ｋ−３５０、Ｍ−０１〜Ｍ７０、Ｎ−０１〜Ｎ−７０、Ｏ−０１〜Ｏ−７０、Ｐ−０１〜Ｐ−７０、およびＱ−１〜Ｑ−７００の少なくとも一つを含む少なくとも一つの複合体の使用に関する。
特に、本発明は、前記医薬組成物または前記ワクチンの製造のために、一般式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）のいずれか一つの少なくとも一つの複合体の使用に関する。
医薬組成物は、単位用量形態で調製されてもよい。好ましくは、本発明の複合体の用量は、０．１〜１０μｇ、好ましくは１〜１０μｇ、好ましくは０．２〜９μｇ、より好ましくは、０．５〜９μｇ、好ましくは１〜６μｇ、および最も好ましくは１〜５μｇで調製されてもよい。いくつかの実施形態において、単位用量は、０．１〜１０ｍＬ、例えば、約０．５ｍＬの量を有してもよい。
本発明は、例えば、単位用量を含む本発明の医薬組成物を含む送達装置（例えば、注射器、ネブライザー（ｎｅｂｕｌｉｓｅｒ）、噴霧器（ｓｐｒａｙｅｒ）、吸入器、皮膚パッチなど）も提供する。この装置は、脊椎動物の対象に組成物を投与するために使用することができる。
本発明は、本発明の医薬組成物を、例えば単位用量含む滅菌容器（例えば、バイアルなど）も提供する。
本発明は、本発明の医薬組成物の単位用量も提供する。
本発明は、本発明の医薬組成物を含む密閉容器も提供する。適切な容器は、例えば、バイアルを含む。
本発明の医薬組成物は、種々の形態で調製されてもよい。例えば、組成物は、液体溶液、または懸濁液のいずれかとして、注入物質として調製されてもよい。注射前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液のために適切な固体形態を調製することもできる（例えば、凍結乾燥組成物、またはスプレー凍結乾燥組成物）。組成物は、例えば、軟膏、クリーム、または粉末などの一般的な投与のために調製されてもよい。組成物は、例えば、錠剤またはカプセルとして、スプレーとして、またはシロップとして（任意に風味をつけて）、経口投与のために調製されてもよい。組成物は、例えば、吸入器などによって、微粉またはスプレーを用いて肺投与のために調製されてもよい。組成物は、座薬として調製されてもよい。組成物は、例えば、スプレーまたは点滴剤などとして、経鼻投与、耳投与、または眼投与のために調製されてもよい。筋肉内投与のための注射は一般的である。
医薬組成物は、アジュバントの効果的な量、すなわち、単回投与で、または系列の一部として、個々に投与される場合、同時投与されるクレブシエラ ニューモニエ抗原への免疫応答を高めるために効果的な量を含んでもよい。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
この量は、治療される個々の健康状態および体調、年齢、治療される個々の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成するための個々の免疫システムの能力、所望される保護の程度、ワクチンの形成、医学的状況における治療する医師の評価、並びに他の関連する要因に依存して変えることができる。量は、ルーチン試験によって決定されることができる比較的広範囲で低下するであろう。
本発明のワクチンの形成および投与のための技術は、「レミントンの医薬品化学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」マック パブリッシング社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．），イーストン（Ｅａｓｔｏｎ） ペンシルベニア（ＰＡ）において明らかにされ得る。
本発明に係る一つの複合体における、または一般式（Ｉ）の一つの糖における治療有効量は、疾患に対して少なくとも部分的な免疫付与をもたらす化合物の量に関する。このような化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的、薬理学的、および毒物学的手順によって決定されることができる。毒性と治療有効性との間の用量比は、治療指数である。投与される組成物の実際量は、治療される患者、患者の体重、疾患の重症度、投与方法、および処方医師の判断に依存するだろう。
本発明の他の態様は、ヒトおよび／または動物宿主においてクレブシエラ ニューモニエに対する免疫応答を誘導する方法に関し、前記方法は、前記ヒトおよび／または動物宿主に対して、一般式（Ｉ）の糖、および／または一般式（Ｉ）の糖の塩、および／または一般式（Ｉ）の糖の複合体もしくは一般式（Ｉ）の糖の医薬組成物を投与することを含む。ヒトおよび／または動物宿主において、本発明に係るクレブシエラ ニューモニエに起因する疾患を治療または予防する方法は、前記ヒトおよび／または動物宿主に対して、少なくとも一つの一般式（Ｉ）の糖、および／または一般式（Ｉ）の糖の塩、および／または一般式（Ｉ）の糖の複合体もしくは一般式（Ｉ）の糖の医薬組成物を投与することを含む。好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
［免疫学的分析］
本発明の更に他の態様は、Ｏ−多糖または莢膜多糖において次の糖断片：
の一つを含む細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析におけるマーカーとして使用のための一般式（Ｉ）のオリゴ糖に関する。
好ましくは、一般式（Ｉ）の糖は、クレブシエラ ニューモニエに対する抗体の検出のための免疫学的分析におけるマーカーとして有用である。
このような分析は、クレブシエラ ニューモニエに対する抗体の検出のために有用な、例えば、マイクロアレイおよびＥＬＩＳＡを含む。
本発明の糖は、クレブシエラ ニューモニエに対する抗体の検出のために有用な免疫学的分析を提供する固体支持体に容易に結合されることができる。
好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ細菌は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびこれらのサブタイプを含む、またはからなるＯ−血清型、並びにカルバペネム抵抗性クレブシエラ ニューモニエ（ＣＲＫＰ）から選択される。好ましくは、Ｏ−血清型Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、より好ましくはＯ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｂ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、ＣＲＫＰ株ＳＴ２５８、である。更により好ましくは、クレブシエラ ニューモニエ株血清型は、Ｏ１：Ｋ１、Ｏ１：Ｋ２、Ｏ１：Ｋ７、Ｏ１：Ｋ８、Ｏ１：Ｋ１０、Ｏ１：Ｋ１２、Ｏ１：Ｋ１６、Ｏ１：Ｋ１９、Ｏ１：Ｋ２１、Ｏ１：Ｋ２２、Ｏ１：Ｋ２７、Ｏ１：Ｋ３４、Ｏ１：Ｋ４２、Ｏ１：Ｋ４５、Ｏ１：Ｋ５５、Ｏ１：Ｋ５７、Ｏ１：Ｋ６２、Ｏ１：Ｋ６５、Ｏ１：Ｋ６６、Ｏ１：Ｋ６９およびＯ１：Ｋ７０、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、並びにＣＲＫＰ株ＳＴ２５８である。
前記固体支持体は、修飾固体支持体を提供するために、一般式（Ｉ）の糖のアミノ基と、または相互連結分子の官能基Ｙと反応する傾向がある官能性を、固体支持体表面に示し
、一般式（Ｉ）の糖のアミノ基と更に反応することができる相互連結分子の官能基Ｘを固体支持体の表面に示す。本発明に係る実施形態において、固体支持体は、マイクロアレイスライドであり、マイクロアレイスライドは、修飾マイクロアレイスライドを提供するために、相互連結分子の官能基Ｙと反応する傾向がある官能性をマイクロアレイスライド表面に示し、相互連結分子の官能基Ｘをマイクロアレイスライド表面に示す。このようなマイクロアレイスライドの例は、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（登録商標）エポキシド被覆スライド、またはコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（登録商標）ＧＡＰＳ（商標）ＩＩ被覆スライドを含むが、これらに制限されない。
好ましい実施形態において、固体支持体は、一般式（Ｉ）の糖のアミノ基と、およびより好ましくは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）活性化エステルと反応する傾向がある官能性を固体支持体の表面上に示すマイクロアレイスライドである。このようなマイクロアレイスライドは、例えば、コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）（登録商標）ＮＨＳスライドである。
［図面の説明］
クレブシエラ ニューモニエＯ−多糖の繰り返しユニットの化学構造を示す。 クレブシエラ ニューモニエＯ−多糖の繰り返しユニットの化学構造を示す。 本発明に係る相互連結分子の官能基Ｘの例を提供する。 本発明のオリゴ糖の複合体を概略的に示す。 ＣＲＭ１９７担体タンパク質に結合される本発明の糖のいくつかの例を記載する。 免疫付与実験において使用され、１０％ポリアクリルアミドゲルを用いて分析される複合糖質（２．５μｇ／ウェル）６１＊−ＣＲＭ１９７および１５８＊−ＣＲＭ１９７のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。 ＫＰＣ複合糖質６１＊−ＣＲＭ１９７および１５８＊−ＣＲＭ１９７のＳＥＣクロマトグラムを示す。 ６１＊−ＣＲＭ１９７製剤または１５８＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫性を与えられたマウス（ｎ＝６）からの０日および３５日のプール血清のＥＬＩＳＡ力価を示す。前記製剤における血清は、対応するＯ−抗原ＢＳＡ複合体６１＊−ＢＳＡまたは１５８＊−ＢＳＡに対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：１００、１：１０００および１：１０，０００に希釈された。希釈された血清（１００μＬ）を、０．５μｇの対応するＯ−抗原／ＢＳＡ複合体を用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−マウス二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 ６１＊−ＣＲＭ１９７製剤または１５８＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫付与されたマウス（ｎ＝６）からの０日および３５日のプール血清の交差反応性を示す。前記製剤における血清は、対応する株６１＊：ＬＰＳ（Ｏ１）および１５８＊：ＬＰＳ（Ｇａｌ−ＩＩＩ）からのＬＰＳに対して試験された。両方の場合において、血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：２００に希釈された。希釈された血清（１００μＬ）を、１．０μｇの対応するＬＰＳを用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−マウス二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 ６１＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫付与されたウサギ（ｎ＝４）からの０日、および３５日のプール血清の交差反応性を示す。６１＊−ＣＲＭ１９７製剤における血清は、異なるＫＰＣ株から単離されたＬＰＳに対して試験された。血清は、ＬＰＳ（Ｏ１）、商業用−ＬＰＳ（Ｏ２ａ，ｃ）、ＬＰＳ（Ｏ２ａ）、およびＬＰＳ（Ｇａｌ ＩＩＩ）に対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：２００に希釈され、１００μＬの希釈された血清を、１．０μｇの対応するＬＰＳを用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−ウサギ二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 １５８＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫付与されたウサギ（ｎ＝４）からの０日、７日、２１日、および３５日のプール血清のＥＬＩＳＡ力価を示す。血清１５８＊−ＣＲＭ１９７製剤は、対応するＯ−抗原／ＢＳＡ複合体１５８＊−ＢＳＡに対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：１０００および１：１０，０００に希釈された。希釈された血清（１００μＬ）を、０．５μｇの対応するＯ−抗原／ＢＳＡ複合体を用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−ウサギ二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 １５８＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫付与されたウサギ（ｎ＝４）からの０日および３５日のプール血清の交差反応性を示す。１５８＊−ＣＲＭ１９７製剤における血清は、異なるＫＰＣ株から単離されたＬＰＳに対して試験された。血清は、ＬＰＳ（Ｏ１）、商業用−ＬＰＳ（Ｏ２ａ，ｃ）、ＬＰＳ（Ｏ２ａ）、およびＬＰＳ（Ｇａｌ ＩＩＩ）に対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：２００に希釈され、および１００μＬの希釈された血清を、１．０μｇの対応するＬＰＳを用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−ウサギ二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 本発明のオリゴ糖で使用される更なるリンカーＬ’および出発材料を示す。
［実施例］
［化学合成］
一般情報：
商業用等級溶媒を、特に明記しない限り使用した。乾燥溶媒を、水乾燥溶媒システム（Ｗａｔｅｒｓ Ｄｒｙ Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ）から得た。クロマトグラフィーのための溶媒を、使用する前に蒸留した。敏感反応を、熱−乾燥ガラス製品中で、アルゴン雰囲気下で行った。分析的薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、０．２５ｍｍ厚のシリカゲルでプレコートされたキエセルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）６０ Ｆ２５４ガラスプレートで行った。スポットを、バニリン溶液（９５％ＥｔＯＨ中に、６％（ｗ／ｖ）バニリンおよび１０％（ｖ／ｖ）硫酸を有する）またはハネシアン（Ｈａｎｅｓｓｉａｎ’ｓ）染色（水中に、５％（ｗ／ｖ）モリブデン酸アンモニウム、１％（ｗ／ｖ）硫酸セリウム（ＩＩ）、および１０％（ｖ／ｖ）硫酸を有する）を用いて染色することによって可視化した。シリカカラムクロマトグラフィーをフルカ（Ｆｌｕｋａ） キエセルゲル６０（２３０〜４００メッシュ）で行った。
１Ｈ、１３Ｃ、および二次元ＮＭＲスペクトルを、２９６Ｋでバリアン（Ｖａｒｉａｎ）４００−ＭＲスペクトロメーターを用いて測定した。化学シフト（ｄ）は、各残留溶媒ピーク（ＣＤＣｌ３：１Ｈ ＮＭＲでｄ７．２６、および１３Ｃ ＮＭＲで７７．１６；ＣＤ３ＯＤ：１Ｈ ＮＭＲでｄ３．３１、および１３Ｃ ＮＭＲで４９．１５）に関連して１００万分の１（ｐｐｍ）で報告される。次の略語は、ピーク多重度を示すために使用
される：ｓ 一重項；ｄ 二重項；ｄｄ 二重項の二重項（ｄｏｕｂｌｅｔ ｏｆ ｄｏｕｂｌｅｔｓ）；ｔ 三重項；ｄｔ 三重項の二重項（ｄｏｕｂｌｅｔ ｏｆ ｔｒｉｐｌｅｔｓ）；ｑ 四重項；ｍ 多重項。カップリング定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）で報告される。旋光度（ＯＲ）測定を、シュミット＆ヘンシュ（Ｓｃｈｍｉｄｔ＆Ｈａｅｎｓｈ） ウニポル（ＵｎｉＰｏｌ）Ｌ１０００偏光計を用いてλ＝５８９ｎｍで、括弧に記述される溶媒中で、ｇ／１００ｍＬで表される濃度（ｃ）で行った。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）は、ベルリン自由大学の質量分析中核施設で、アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）６２１０ ＥＳＩ−ＴＯＦ質量分析計を用いて行われた。赤外線（ＩＲ）スペクトルは、出願人の施設でパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）１００ ＦＴＩＲ分光計を用いて測定された。
［略語］
ＡｃＯＨ 酢酸
Ａｌｌｏｃ アリルオキシカルボニル
ａｑ．水溶液
ＢＨ３ ボラン
ＢＢｒ３ 三臭化ホウ素
ＢｎＢｒ 臭化ベンジル
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｒ． ブロード
ＣＡＳ ＣＡＳ登録番号（ＣＡＳ＝ケミカル アブストラクツ サービス）
ＣＨＣｌ３ クロロホルム
ｃＨｅｘ シクロヘキサン
ｄ 二重項
ｄｄ 二重項の二重項
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＥＡＤ ジエチルアゾジカルボキシレート
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−エチルアミン
ＤＭＥ ジメトキシエタン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ ジフェニルホスホリルアジド
ＥＡ 酢酸エチル
ＥＤＣ・ＨＣｌ Ｎ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１，３−ジアミンヒドロクロリド
ＥＳ 電気スプレー
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ｈ 時間
ＨＣｌ 塩酸
Ｈ２Ｏ 水
ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ １Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−オール水和物Ｋ２ＣＯ３ 炭酸カリウム
ＬｉＡｌＨ４ 水素化アルミニウムリチウム
ｍ 多重項
ＡＣＮ アセトニトリル
ＭｅＯＨ メタノール
ＭｅＩ ヨウ化メチル
ＭｇＳＯ４ 硫酸マグネシウム
ｍｉｎ 分
ＭＳ 質量分析
Ｎａ２ＣＯ３ 炭酸ナトリウム
ＮａＣＮＢＨ３ シアノ水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＨＣＯ３ 炭酸水素ナトリウム
ＮａＨ 水素化ナトリウム
ＮａＯＨ 水酸化ナトリウム
Ｎａ２Ｓｏ４ 硫酸ナトリウム
ＮＣＳ Ｎ−クロロスクシンイミド
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
Ｐｄ／Ｃ パラジウム／炭素
ｑ 四重項
ＲＭ 反応混合物
ＲＢＦ 丸底フラスコ
ｒｔ 室温
ｓ 一重項
ｓａｔ． 飽和
ｓｅｐ 七重項
ＳＭ 出発材料
ｔ 三重項
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴｓＯＨ トシル酸
Ｗｔ 重量
［一般的方法］
［イミデート合成−一般的プロトコルＡ：］基質（１ｅｑ）を、ロータリーエバポレーターで、一晩、高真空下で、トルエンを用いて共沸して乾燥した。固体を、窒素雰囲気下で、ＤＣＭ中に入れ、それにＣｓ２ＣＯ３（４ｅｑ）を加え、１０分間攪拌した。（Ｅ）−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルクロリド（３ｅｑ）を、ＲＭニート（ｎｅａｔ）に加え、ＲＭを室温で３時間攪拌した。ＲＭをセライトに通してろ過し、ＤＣＭを用いて洗浄した。合わせたろ液を、真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。溶離液としてトリエチルアミンおよび酢酸エチル／シクロヘキサンを用いて処理されたシリカカラムで精製を行った。溶媒除去および真空下での乾燥により、淡黄色の固体として化合物を得た。
［イミデート合成−一般的プロトコルＢ：］基質（１ｅｑ）を、ロータリーエバポレーターで、一晩、高真空下で、トルエンを用いて共沸して乾燥した。固体を、窒素雰囲気下で、ＤＣＭ中に入れ、それにＣｓ２ＣＯ３（４ｅｑ）を加え、１０分間攪拌した。（Ｅ）−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルクロリド（３ｅｑ）を、ＲＭニート（ｎｅａｔ）に加え、ＲＭを室温で３時間攪拌した。ＲＭをセライトに通してろ過し、ＤＣＭを用いて洗浄した。合わせたろ液を、真空中で蒸発させ乾燥し、淡黄色生成物を得た。
［グルコシル化の方法−一般的プロトコルＡ：］受容体（１ｅｑ）および供与体（１ｅｑ〜１．５ｅｑ）の両方をＲＢＦ中に入れ、真空中で乾燥トルエンを用いて共沸して乾燥した。混合物を、トルエン−ジオキサン（３：１）中に室温で取り、それに４Åモレキュラーシーブを加え、室温で３０分間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。ＲＭを−２℃に氷水浴を用いて冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．２ｅｑ）をＲＭに加え、ＲＭを５℃で２０分間攪拌した。ＲＭをその後、室温に１時間以上かけてゆっくり温めさせた。ＴＬＣ分析は反応の終
了を観察するために行われた。ＲＭを、飽和ＮａＨＣＯ３を用いてクエンチし、１０分間攪拌し、ＥＡを用いて抽出した。合わせた有機物を、水、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。シリカにおけるカラム精製は、シリカカラムを用いたバイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）の、ＥＡ／シクロヘキサンを用いて行った。生成物を含む画分を蒸発させ、真空下で乾燥させ所望の生成物を得た。
［グルコシル化方法−一般的プロトコルＢ：］受容体（１ｅｑ）および供与体（１ｅｑ〜１．５ｅｑ）の両方をＲＢＦ中に入れ、真空中で乾燥トルエンを用いて共沸して乾燥した。混合物を、ＤＣＭ中に室温で取り、それに４Åモレキュラーシーブを加え、室温で３０分間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。ＲＭを−２℃に氷水浴を用いて冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．２ｅｑ）をＲＭに加え、ＲＭを５℃で２０分間攪拌した。ＲＭをその後、室温に１時間以上かけてゆっくり温めさせた。ＴＬＣ分析は反応の終了を観察するために行われた。ＲＭを、飽和ＮａＨＣＯ３（またはＴＥＡ）を用いてクエンチし、１０分間攪拌し、ＤＣＭを用いて抽出した。合わせた有機物を、水、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。シリカにおけるカラム精製は、シリカカラムを用いたバイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）の、ＥＡ／シクロヘキサンを用いて行った。生成物を含む画分を蒸発させ、真空下で乾燥させ所望の生成物を得た。
［Ｌｅｖ基脱保護−一般的プロトコルＡ：］Ｌｅｖ含有基質（１ｅｑ）をピリジン中に室温で入れ、それにヒドラジン酢酸塩（３ｅｑ）を加え、室温で１８時間攪拌した。反応をＴＬＣ分析によって観察した。ＲＭをその後、アセトン（１００ｅｑ）を用いてクエンチし、室温で４５分間攪拌した。ＲＭを真空中で乾燥させるために蒸発させた。シリカカラムのバイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて、溶離液としてＥＡ−シクロヘキサンを用いて残渣を精製し、糖活性スポットを得て、高真空中で蒸発および乾燥させて、所望の化合物を、無色粘着性の液体として得た。
［Ｎａｐ基脱保護−一般的プロトコルＡ：］ＮＡＰ含有基質（１ｅｑ）をＤＣＭ緩衝溶液（１−２）に室温で入れ、ＤＤＧ（３〜４ｅｑ）を２０分〜１時間以上かけて少しずつ加え、ＲＭは黒くなり、その後、赤茶色に変化した。ＲＭ２〜５時間攪拌した。反応を、ＴＬＣ分析によって反応の終了のために観察した。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液を用いてクエンチし、ＤＣＭを用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。シリカカラムのバイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）−溶離液としてＥＡ／シクロヘキサンを用いて粗生成物を精製し、生成物を得た。
［ＴＤＳ基脱保護−一般的プロトコルＡ：］基質（１ｅｑ）を、５０ｍＬファルコンチューブのピリジンに入れ、室温で５分間攪拌した。その後、それにＨＦ−Ｐｙ（１５ｅｑ）を加えた（注意：泡および発熱性）。ＲＭを１８時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、ＳＭが存在し、その上、極性スポットが形成されたことを示した。したがって、１０等量のＨＦ−Ｐｙをもう一度ＲＭに加え、ＲＭを、さらに３０時間室温で攪拌し、ＴＬＣ分析は、まだいくつかＳＭが存在し、その上、大きい極性スポットが存在することを示した。ＲＭを、水を用いてクエンチし、ＤＣＭを用いて希釈し、室温で攪拌しながら層を十分に混合し、層を分離した。水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３（いくつかの泡立ちに気を付ける）、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、白色の粘着性の液体を得た。シリカカラムを有するバイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）−溶離液としてＥＡ／ＣＨｘを用いて粗生成物を精製し、生成物を得た。
［ＴＤＳ基脱保護−一般的プロトコルＢ：］基質（１ｅｑ）を、５０ｍＬファルコンチューブのピリジンに入れ、室温で５分間攪拌した。その後、それにＨＦ−Ｐｙ（５０〜１
５０ｅｑ）を加えた（注意：泡および発熱性）。ＲＭを室温で１８時間攪拌した。反応をＴＬＣ分析によって観察した。ＲＭを、水を用いてクエンチし、ＤＣＭを用いて希釈し、室温で攪拌しながら層を十分に混合し、層を分離した。水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３洗浄（いくつかの泡立ちに気を付ける）、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、白色の粘着性の液体を得た。シリカカラムを有するバイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）−溶離液としてＥＡ／ＣＨｘを用いて粗生成物を精製し、生成物を得た。
［メタノリシス−一般的プロトコルＡ：］基質（１ｅｑ）をＴＨＦ−ＭｅＯＨ（１：１）に、室温で入れ、それにメタノール中に過剰な０．５ＭのＮａＯＭｅを有する溶液を加え、５５℃で１８時間攪拌を続けた。ＲＭを真空中で蒸発させた。ＥＡおよび水を用いて希釈した。中和ｐＨになるまでＡｃＯＨを用いて酸性化した。ＥＡを用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、淡黄色層として粗生成物を得た。
［メタノリシス−一般的プロトコルＢ：］基質（１ｅｑ）をＴＨＦ−ＭｅＯＨ（１：１）に、室温で入れ、それにメタノール中に過剰な０．５ＭのＮａＯＭｅを有する溶液を加え、５５℃で３日間攪拌を続けた。ＲＭを真空中で蒸発させた。ＥＡおよび水を用いて希釈した。中和ｐＨになるまでＡｃＯＨを用いて酸性化した。ＥＡを用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、淡黄色層として粗生成物を得た。
［水素化−一般的プロトコルＡ：］基質（１ｅｑ）をＤＣＭ：ｔＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏの混合物に入れ、それに、ブタノール（０．２ｍＬ）中にＰｄ／Ｃ（１ｅｑ，ｗ／ｗ）を有する懸濁液を加え、〜１０バールＨ２雰囲気下で１８〜２４時間水素化した。ＲＭをＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、メタノール、水中に５０％メタノールを有する溶液を用いて洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、粗生成物を得た。溶出液として水−アセトニトリルを用いて、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムを用いて粗生成物を精製した。生成物を含む分画を２４時間凍結乾燥させ、所望の生成物として白色のフワフワとした固体を得た。
［水素化−一般的プロトコルＢ：］基質（１ｅｑ）をＤＣＭ：ｔＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏの混合物に入れ、それに、ブタノール（０．２ｍＬ）中にＰｄ（ＯＨ）２（１ｅｑ，ｗ／ｗ）を有する懸濁液を加え、〜１０バールＨ２雰囲気下で１８〜２４時間水素化した。ＲＭをＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、メタノール、水中に５０％メタノールを有する溶液を用いて洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、粗生成物を得た。溶出液として水−アセトニトリルを用いて、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムを用いて粗生成物を精製した。生成物を含む分画を２４時間凍結乾燥させ、所望の生成物として白色のフワフワとした固体を得た。
［水素化−一般的プロトコルＣ：］基質（１ｅｑ）をＤＣＭ：ＩＰＡ：Ｈ２Ｏの混合物に入れ、それに、ＩＰＡ中にＰｄ／Ｃ（１ｅｑ，ｗ／ｗ）を有する懸濁液を加え、〜１０バールＨ２雰囲気下で１８〜２４時間水素化した。ＲＭをＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、メタノール、水中に５０％メタノールを有する溶液を用いて洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、粗生成物を得た。溶出液として水−アセトニトリルを用いて、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムを用いて粗生成物を精製した。生成物を含む分画を２４時間凍結乾燥させ、所望の生成物として白色のフワフワとした固体を得た。
［Ａ−１ 単糖構成要素の調製］
化合物１＊
化合物１＊を、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００７，７２（１７），ｐｐ６５１３−６５２０に記述される手順に従って調製した。
化合物２＊
化合物１＊（４０ｇ，８０ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ／ＤＭＦ９：１（３９０ｍＬ）中に溶解し、氷／水浴で０℃に冷却した。ＢｎＢｒ（２０．９ｇ，１２０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５分間０℃で攪拌した。その後、ＮａＨ（６．３９ｇ，１６０ｍｍｏｌ）を、５分割で、０℃で加えた。ＮａＨの添加の完了後、混合物をさらに５分間０℃で攪拌し、その後、氷浴を除去し、混合物を室温に温めた。混合物を室温で一晩攪拌した。氷／水浴による冷却下で、メタノールをゆっくり添加することによって反応をクエンチし、その後、ＥｔＯＡｃ／ブラインに注いだ。層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃを用いて２度抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、高真空下で乾燥させ、オレンジ色の固体を得た。固体を、メタノールを用いて洗浄し、ろ過した。溶媒を蒸発させ、白色固体として生成物（４７．１ｇ，１００％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３７Ｈ３４Ｏ５ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６１３．２０２５，実測値は６１３．２０２４であった。
化合物３＊
化合物２＊（４７．１ｇ，８０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（５００ｍＬ）中に溶解し、エタンチオール（３５．４ｍＬ，４７８ｍｍｏｌ）およびｐＴＳＯＨ（９．１ｇ，４７．８ｍｍｏｌ）を、連続して加えた。混合物を室温で０．５時間攪拌した。トリエチルアミン（５０ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、溶媒を蒸発させ、淡黄色の油として粗生成物
を得た。酢酸エチル／シクロヘキサンを用いてカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製し、溶媒の蒸発後、生成物を得た（３８．１８ｇ，９５％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３０Ｈ３０Ｏ５ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５２５．１７１２，実測値は５２５．１７０８であった。
化合物４＊
ジオール３＊（１５ｇ，２９．８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（３００ｍＬ）中に溶解し、氷／水浴を用いて０℃に冷却した。ｔＢｕ２Ｓｉ（ＯＴｆ）２（１９．７２ｇ，４４．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃で３０分間攪拌した。混合物を、Ｅｔ３Ｎ（９ｍＬ）を用いて中和し、さらに５分間攪拌した。混合物を、その後、水を用いて希釈し、酢酸エチルを用いて３回抽出した。合わせた有機分画を、ブラインを用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および真空中で濃縮した。粗化合物を、アイソリュート（ｉｓｏｌｕｔｅ）（登録商標）でチャージし、酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製システムを用いて精製し、生成物を得た（１８．１８ｇ，９５％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３８Ｈ４６Ｏ５ＳＳｉＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６６５．２７３３、実測値は６６５．２６８２であった。
化合物５＊
化合物５＊を、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，９６５８に記述される手順に従って調製した。
化合物６＊
化合物５＊（８．６ｇ，２０．６５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（８６ｍＬ）中に溶解し、並びにレブリン酸（３．６ｇ，３１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５．９４ｍｍｏｌ，３１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．５ｇ，２０．６５ｍｍｏｌ）を、連続して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。混合物を、ＤＣＭとブラインとの間に分配した。水層を、Ｄ
ＣＭを用いて２回抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物を得た（１２．２６ｇ，９９％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２７Ｈ３０Ｏ８ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５３７．１５５９、実測値は５３７．１５４４であった。
化合物７＊
化合物６＊（６．５９ｇ，１２．８１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／水１：１（２５０ｍＬ）中に溶解し、ｐＴｓＯＨ（２．９２ｇ，１５．３７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流下（〜８０℃）で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。１．５時間後、混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を用いて中和した。水層を、ＥｔＯＡｃを用いて３回抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、無色の油を得た（５．７６ｇ，９５％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２４Ｈ２６Ｏ８ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は４９７．１２４６，実測値は４９７．１２３０であった。
化合物８＊
ジオール７＊（４．５ｇ，９．４８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（４５ｍＬ）中に溶解し、氷／水浴を用いて０℃に冷却した。ピリジン（４．５ｇ，５６．９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１１６ｇ，０．９４８ｍｍｏｌ）を加え、その後ＢｚＣｌ（８ｇ，５６．９ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を、ゆっくり室温に温めながら攪拌した。一晩攪拌後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて反応をクエンチし、ＤＣＭを用いて２回抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、および減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムを用いて精製し、溶媒を蒸発させ、白色の泡として生成物を得た（５．７８ｇ，８９％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３８Ｈ３４Ｏ１０ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７０５．１７７０、実測値は７０５．１７７４であった。
化合物９＊
化合物９＊を、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２０１５，７１，３３，５３１５−５３２０に記述される手順に従って調製した。
化合物１０＊
化合物１０＊を、Ｊ．Ｃａｒｂ．Ｃｈｅｍ．２００１，２０，９，８５５−８６５に記述される手順に従って調製した。
化合物１１＊
化合物１１＊を、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１４，７９，１０２０３−１０２１７に記述される手順に従って調製した。
化合物１２＊
化合物１２＊を、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１４，７９，１０２０３−１０２１７に記述される手順に従って調製した。
化合物１３＊
アセトニトリル（１００ｍＬ）中に１−Ｏ−アリルガラクトース（１０ｇ，４５．４ｍｍｏｌ）、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１０．３７ｇ，６８．１ｍｍｏｌ）およびカンファースルホン酸（２９．５ｇ，１２７ｍｍｏｌ）を有する溶液を、３０分間室温で攪拌した。３０分後、ＴＬＣは、出発材料から生成物への変換の完了を示した。トリエチルアミンを用いて反応をクエンチし、その後、粘度が高いシロップへと濃縮した。シリカゲルを用いた、および溶出液としてジクロロメタン／メタノールを用いた自動精製（コンビフラッシュ（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）は、白色の固体として生成物を与えた（１２ｇ，８６％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１６Ｈ２０Ｏ６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３３１．１１５８、実測値は３３１．１０９８であった。
化合物１４＊
２５０ｍＬのＲＢＦ中において、Ｂｕ２ＳｎＯ（１４．５３ｇ，５８．４ｍｍｏｌ）を、トルエン４２３ｍＬ中にジオール１３＊（１２ｇ，３８．９ｍｍｏｌ）を有する透明溶液に室温で加えた。その後、反応混合物を、１３０℃で６時間、還流を維持し、溶媒を真空下で除去し、トルエン（３×１０ｍＬ）を用いて反応を共沸した。溶媒の完全な除去後、アセタールを真空下で０．５時間乾燥した。アセタールをアルゴンの存在下で真空から除去し、ＤＭＦ（４２３ｍＬ）に溶解した。この溶液に、２−（ブロモメチル）ナフタレート（１２．９１ｇ，５８．４ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＩ（２８．５ｇ，７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１１０℃で２０時間、攪拌を維持した。反応をＴＬＣ（ｎ−ヘキサン中に４０％ＥｔＯＡｃ）によって観察した。２０時間後、反応混合物を酢酸エチルおよび水を用いて希釈した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）を用いて洗浄した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、およびろ液を、ロータリーエバポレーターの３５℃浴温度で、３０分間真空下濃縮し、粗生成物を得た。溶出液としてシクロヘキサン中に酢酸エチルを有する溶液（グラジエント、０〜１００％）を用いて、自動フラッシュカラムクロマトグラフィーで粗生成物を精製した。真空中、３０℃〜３５℃の浴温度で、１００ｍＬのＲＢＦ中に不純物を含む試験管からの溶媒の濃縮は、結果的に無色の油を与えた。さらに、氷冷酢酸エチルを用いた洗浄は、純粋な生成物を与えた（１４．４９ｇ，８３％）。
化合物１５＊
化合物１４＊（１４．３０ｇ，３１．９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１３０ｍＬ）中に溶解し、氷／水浴を用いて０℃に冷却した。ピリジン（７．７４ｍＬ，９６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３９０ｇ，３．１９ｍｍｏｌ）を加え、その後ＢｚＣｌ（１０．１５ｍＬ，９６ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を、ゆっくり室温に温めながら攪拌した。一晩攪拌後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて反応をクエンチし、ＤＣＭを用いて２回抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製システムを用いて精製し、溶媒を蒸発させ、白色の泡として生成物を得た（１０．１ｇ，５７％）。
化合物１６＊
化合物１５＊（８．７ｇ，１５．７４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０２ｍＬ）中に溶解した。溶液を０℃に冷却し、トリエチルシラン（１７．７８ｍＬ，１１０ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ酢酸（８．４４ｍＬ，１１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１０分間攪拌し、その後、一晩室温で攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて反応をクエンチした。混合物を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層を、ブラインを用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製システムを用いて精製し、溶媒を蒸発させ、白色の泡として生成物を得た（５．８ｇ，６６．４％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３４Ｈ３４Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５７７．２２０２、実測値は５７７．２０７８であった。
化合物１７＊
化合物１６＊（５．８ｇ，１０．４６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／ＤＭＦ ９：１（４７ｍＬ／５ｍＬ）に溶解し０℃に冷却した。臭化ベンジル（２．５４ｍＬ，２０．９１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５分間０℃で攪拌した。その後、水素化ナトリウム（０．８３７ｇ，２０．９１ｍｍｏｌ）を、０℃で、少しずつ加えた。水素化ナトリウムの添加の完了後、混合物を、０℃でさらに５分間攪拌し、２時間かけて室温に温めた。冷却下、飽和塩化アンモニウム溶液をゆっくり添加することによって反応をクエンチし、その後、酢酸エチル／水中に注いた。層を分離し、水層を、酢酸エチルを用いて抽出し、合わせた有機層をＮａＨＣＯ３およびブラインを用いて洗浄した。ろ液を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、高真空下で乾燥させ、オレンジ色の固体を得た。固体を、メタノールを用いて洗浄し、ろ過し、および乾燥させ、白色の固体として生成物（５．８ｇ，８６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４１Ｈ４０Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６６７．２６７２，実測値は６６７．２５６７であった。
化合物１８＊
単糖化合物１７＊（０．９９５ｇ，１．５４３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ溶液（３４ｍＬ）に移し、５０ｍＬ ＲＦＢ ＤＤＱ（１．５７６ｇ，６．９４ｍｍｏｌ）中にリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４（１７ｍＬ）を有する溶液を、２．５時間の期間にわたってゆっくり加え、６時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）の添加よって反応をクエンチし、ＤＣＭを用いて抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、淡黄色のオイルとして粗生成物を得た。シクロヘキサン中に酢酸エチルを有する溶液を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製を行った。得られた化合物を、その後、ジクロロメタンに溶解し、真空下で蒸発を続け、無色透明な粘着性液体を結果的に得て、高真空下で乾燥させ、フワフワした白色の固体（０．５５ｇ，７１％）を形成した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３０Ｈ３２Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５２７．２０４６，実測値は５２７．１９７８であった。
化合物１９＊
化合物３＊（１０．９０ｇ，２１．７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（８９ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却した。ピリジン（５．２６ｍＬ，６５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．２６５ｇ，２．２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＢｚＣｌ（６．９０ｍＬ，６５ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を、室温に温めた。一晩攪拌後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて反応をクエンチし、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製システムを用いて精製し、溶媒を蒸発させ、白色の泡として生成物（１３．８５ｇ，９０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４４Ｈ３８Ｏ７ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７３３．２２３６，実測値は７３３．２１３４であった。
化合物２０＊
［１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−Ｉｒ（Ｉ）］ＰＦ６（０．７９ｇ，０．１５５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３０ｍＬ
）に溶解し、赤色触媒が溶解する間、窒素を、２分間室温で溶液に通して泡立てた。溶液を、その後、２分間水素を用いてパージし、その時間によって、赤色溶液は、無色に変換し、溶液を水素下で１５分間攪拌した。活性触媒の溶液を、その後、テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中に化合物１５＊（１ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）を有する溶液に、窒素下で、注射器を介して加え、２時間室温で攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）を用いてクエンチし、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、アリル異性化化合物を得た。ビニル基質を、その後、テトラヒドロフラン：水（２：１，４５ｍＬ）の混合物中に取り込み、ヨウ素（０．７８７ｇ，３．１０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０ｍＬ）を用いてクエンチする前に、褐色溶液を２時間攪拌した。水層を、酢酸エチル（３×１５ｍＬ）を用いて抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中に酢酸エチル３０％）は、黄色の固体として生成物（０．５５ｇ，５９％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３８Ｈ３６Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６２７．２３５９，実測値は６２７．２２６７であった。
化合物２１＊
化合物２０＊（０．５５ｇ，０．９１０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１１ｍＬ）に溶解した。Ｃｓ２ＣＯ３（０．５９３ｇ，０．９１０ｍｍｏｌ）、および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（０．５６６ｇ，２．７３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物をセライトパッド（２ｃｍ）に通してろ過し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を用いて洗浄し、およびろ液を濃縮し、淡黄色の油を得た。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル＋０．１％Ｅｔ３Ｎ）によって精製を行い、黄色の泡としてイミデート（０．６０８ｇ，８６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４６Ｈ４０Ｆ３ＮＯ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７９８．２６５５，実測値は７９８．２５５５であった。
化合物２２＊
化合物１１＊（３．６５ｇ，６．２４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４０ｍＬ）中に溶解し、並びにレブリン酸（１．０８７ｇ，９．３６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．７９５ｇ，９．３６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．７６３ｇ，９．３６ｍｍｏｌ）を、連続して加えた。反応混合物を室温で１７時間攪拌した。混合物を、ＤＣＭとＮａＨＣＯ３溶液との間に分配した。水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し
、および蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（３．８２ｇ，９０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３８Ｈ３４Ｏ１０ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７０５．１７６５、実測値は７０５．１７６３であった。
化合物２３＊
化合物２２＊（２．８ｇ，４．１０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ／水 ３：１（４０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２．１９ｇ，１２．３０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４５分間攪拌した。混合物を、ＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ３溶液との間に分配した。水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、０．１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物を、アイソリュート（登録商標）でチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（２．３０ｇ，９５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３２Ｈ３０Ｏ１１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６１３．１６８０、実測値は６１３．１６７８であった。
化合物２４＊
化合物２３＊（２ｇ，３．３９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（２．２０７ｇ，６．７７０ｍｍｏｌ）、および（Ｅ）−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（２．１０９ｇ，１０．１６ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。混合物をセライトでろ過し、ＤＣＭを用いて洗浄し、およびろ液を蒸発させ、無色の油として生成物（２．５ｇ，９７％）を得た。
化合物２５＊
化合物２５＊を、Ｎａｋａｓｈｉｍａ，Ｓ．；Ａｎｄｏ，Ｈ．；Ｉｍａｍｕｒａ，Ａ．；Ｙｕｋｉ，Ｎ．；Ｉｓｈｉｄａ，Ｈ．；Ｋｉｓｏ，Ｍ．Ｃｈｅｍ．−Ｅｕｒ．Ｊ．２０
１１，１７，５８８−５９７、に記述される手順にしたがって調製した。
化合物２６＊
化合物２４＊（２．５ｇ，３．２８ｍｍｏｌ）および化合物２５＊（１．４６ｇ，２．７４ｍｍｏｌ）を１００ｍＬＲＢＦ中に入れ、トルエン（４０ｍＬ）を加え、化合物を真空下で共沸した（２回）。高真空下で乾燥させた材料を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）に溶解し、乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、室温で１０分間攪拌し、その後−１０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（５０μＬ，０．２７４ｍｍｏｌを、反応混合物に加え、反応混合物を０℃で１．５時間にわたってゆっくり温めながら攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液の添加によって反応をクエンチした。層を分離し、水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（２．５１ｇ，８３％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５４Ｈ５０Ｃｌ３ＮＯ１６ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１２８．１８０８、実測値は１１２８．１９０４であった。
化合物２７＊
化合物２６＊（２．５ｇ，２．２６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／Ｈ２Ｏ １０：１（２７５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ヨードスクシンイミド（０．５０８ｇ，２．２６ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（０．１７３ｍＬ，２．２６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を０℃で２時間攪拌し、その後、ＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液との間で分配した。水層を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層を０．１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（１．０９ｇ，４７．４％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４８Ｈ４６Ｃｌ３ＮＯ１７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０３６．１７２４、実測値は１０３６．１８２８であった。
化合物２８＊
化合物２７＊（１．０５ｇ，１．０３４ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（０．６７４ｇ，２．０６８ｍｍｏｌ）、および（Ｅ）−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（０．６４４ｇ，３．１０ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。混合物をセライトでろ過し、ＤＣＭを用いて洗浄し、およびろ液を蒸発させ、無色の油として生成物（１．２ｇ，９８％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５６Ｈ５０Ｃｌ３Ｆ３Ｎ２Ｏ１７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１２０７．２０１９、実測値は１２０７．２０４３であった。
化合物２９＊
化合物２８＊（２００ｍｇ，０．１６９ｍｍｏｌ）および５−アジドペンタノール（４３．５ｍｇ，０．３３７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ ＲＢＦ中に入れ、化合物を真空下で蒸発させた（２回）。一晩乾燥後、ジクロロメタン（４ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、室温で１０分間攪拌し、その後−１０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（３μＬ，０．０１７ｍｍｏｌ）を、反応混合物に加え、反応混合物を０℃で１．５時間にわたってゆっくり温めながら攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液の添加によって反応をクエンチした。層を分離し、水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（６４．４ｍｇ，７４％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５３Ｈ５５Ｃｌ３ＮＯ１７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１４７．２５２、実測値は１１４７．２５５８であった。
化合物３０＊
化合物２９＊（８０ｍｇ，０．０７１ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン酢酸塩（１９．６ｍｇ，０．２１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、室温で１７時間攪拌した。アセトンの添加によって反応をクエンチし、蒸発させる前に４５分間攪拌した。粗生成物を、アイソリュートでチャージし、自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いて精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（７２．８ｍｇ，１００％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４８Ｈ４９Ｃｌ３Ｎ４Ｏ１５Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０４９．２１５２、実測値は１０４９．２１７６であった。
［Ａ−２ クレブシエラニューモニエガラクタン−Ｉ（Ｏ１）糖の調製］
［Ａ−２−１ クレブシエラニューモニエＯ１四糖類の調製］
化合物３２＊
５−アジドペンタノール（０．２２６ｇ，１．７４７ｍｍｏｌ）および化合物３５＊（０．９ｇ，１．３４４ｍｍｏｌ）の両方を、真空中でトルエンを用いて共沸乾燥させた。トルエン（６ｍＬ）および１，４ジオキサン（２ｍＬ）混合物に室温で再び溶解し、４Åモレキュラーシーブを加え、２０分間攪拌した。ＲＭを−５℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆを加え、ＲＭを−５℃で５分間攪拌し、１時間にわたって２℃にゆっくり温めた。ＲＭを、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）を用いて１０℃でクエンチし、層を分離し、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させた。自動精製システムバイオタージ（ＥＡ／ＣＨｘを用いたシリカカラムクロマトグラフィー）を用いる精製は、アノマーの混合物（ｆｒ１，３１４ｍｇ，アルファ産物）および（ｆｒ２，３００ｍｇ，ベータ産物）(７５％)としての産物を導いた。
化合物３３＊
化合物３２＊（３００ｍｇ，０．４９２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）および緩衝溶液（１０ｍＬ）に室温で入れ、ＤＤＱ（３３５ｍｇ，１．４７６ｍｍｏｌ）を少しずつ２０分にわたって加え、１．５時間攪拌した。ＲＭを、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮し、粗生成物を得た。バイオタージ（シリカカラム−溶出液としてＥＡ／ＣＨｘ）を用いた精製は、無色粘性の高い液体（２１０ｍｇ，９１％）としての産物を導いた。
化合物３４＊
化合物２２＊からの化合物２３＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物３４＊を化合物２＊から調製した。
化合物３５＊
化合物３４＊（１５．５ｇ，３１．１ｍｍｏｌ）を、ロータリーエバポレーターでトルエンを用いて共沸乾燥させた。固体を、窒素雰囲気下、ＤＣＭ（３００ｍＬ）に入れ、それにＣｓ２ＣＯ３（３０．４ｇ，９３ｍｍｏｌ）を加え、および１０分間攪拌した。（Ｅ）−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（１６．１３ｇ，７８ｍｍｏｌ）をＲＭニート（ｎｅａｔ）に加え、ＲＭを室温で３時間攪拌した。ＲＭをセライトに通してろ過し、ＤＣＭ（５０ｍＬ×４）を用いて洗浄した。合わせたろ液を真空で蒸発させ、粗生成物を得た。溶出液としてトリエチルアミンおよび酢酸エチル／シクロヘキサンを用いて処理されたシリカカラムで精製を行い、生成物を取り出し、蒸発させ、真空下で乾燥させると、淡黄色のフワフワとした固体（１８．５ｇ，８９％）が生成した。
化合物３６＊
ＤＣＭ：Ｈ２Ｏ（１：０．３，２６ｍＬ）に溶解されたチオグリコシド８＊（１．５８ｇ，２．３１ｍｍｏｌ）の溶液にＮＢＳ（１．２３ｇ，６．９４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応物を同じ温度で１時間攪拌した。ＴＬＣ（５０％酢酸エチル／シクロヘキサン）は、出発材料の完全な消費を示した。ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて反応物を希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させ、粗材料を得た。シリカゲル、および溶出液として酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製（コンビフラッシュ（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ））は、無色の油として生成物（１．１２ｇ，１．８９ｍｍｏｌ）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３２Ｈ３０Ｏ１１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値はｈ６１３．１６８６、実測あ値６１３．１６２８であった。
化合物３７＊
ラクトール３６＊（１８．５ｇ，３１．３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３００ｍＬ）に室温で入れ、イミダゾール（６．４０ｇ，９４ｍｍｏｌ）およびＴＤＳＣｌ（１１．２０ｇ，６２．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で５分間攪拌した。白色沈殿の形成を観察し、さらに１８時間攪拌を続けた。ＴＬＣ分析は、強い非極性スポット（多くのべータ、および少ないアルファ）の存在、および非常に少ないＳＭの存在を示した。ＲＭを、その後、水を用いてクエンチし、ＤＣＭ（１００ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（１００ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、無色の粘着性残渣を得た。ＥＡ−シクロヘキサンを用いたバイオタージシリカカラム（２２０ｍｇ）精製で、非極性スポットをｆｒ１（ベータアノマーのみ）およびｆｒ２（２つのアノマーの混合物、多くはアルファ）として集め、およびｆｒ３として極性スポットを集め、ｆｒ１（１６ｇ，純粋なベータ）およびｆｒ２（４．６ｇ，多くはアルファ）として無色の粘着性液体の所望の生成物を得た。したがって、反応の全収率は、９０％（２０．６ｇ）であった。
化合物３８＊
化合物３７＊（１５．９ｇ，２１．６９ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１００ｍＬ）に室温で入れ、ヒドラジン酢酸塩（５．９９ｇ，６５．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間攪拌した。ＴＬＣは、４０％ＥＡ／ヘキサン中でＳＭのＲｆ値に対してわずかに非極性な糖活性スポットの存在を示した。ＲＭを、その後、アセトンを用いてクエンチし、４５分間室温で攪拌した。ＲＭを、その後、真空中で乾燥のために蒸発させた。残渣を、溶出液としてＥＡ−シクロヘキサンを用いたバイオタージを用いて精製し、糖活性スポットを得て、高真空中で蒸発および乾燥させて、所望の化合物を、無色の粘着性液体として得た（１２．８ｇ，９３％）。
化合物３９＊
化合物３８＊（５．４０ｇ，８．５１ｍｍｏｌ）および化合物３５＊（７．４１ｇ，１１．０６ｍｍｏｌ）をＲＢＦ中に入れ、真空中で乾燥トルエンを用いて共沸乾燥させた。混合物を、トルエン（６０ｍＬ）およびジオキサン（２０ｍＬ）の混合物中に、室温で入れ、４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、室温で３０分間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。ＲＭを、氷水浴を用いて−２度に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．１８９ｇ，０．８５１ｍｍｏｌ）を、ＲＭに加え、ＲＭを５℃で２０分間攪拌した。ＴＬＣは、反応のほとんどの完了を示した。ＲＭを、その後、１時間にわたって室温にゆっくり温めた。ＴＬＣ分析は、反応の完了を示した。ＲＭを、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）を用いてクエンチし、１０分間攪拌した。ＥＡ（５０ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、水（１００ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。シリカでのカラム精製は、バイオタージでＥＡ／シクロヘキサンを用いて行った。したがって、反応の収率は、８．３５ｇ、８８％であった。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６６Ｈ７０Ｏ１４ＳｉＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１３７．４４３３、実測値は１１３７．４３３９であった。
化合物４０＊
化合物３９＊（１．１５ｇ，１．０３１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６ｍＬ）中に入れ、乾燥４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、室温で１５分間攪拌した。ＲＭにＢＨ３−ＴＨＦ（８．２５ｍＬ，８．２５ｍｍｏｌ）溶液を加え、ＴＭＳＯＴｆの添加前に５分間攪拌し、室温で１６時間攪拌した。ＲＭを、メタノール（１０ｍＬ）を用いてゆっくり（泡立ち注意）室温でクエンチし、４５分間攪拌し、その後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）およびＥＡ（１０ｍＬ）を用いて希釈した。ＲＭを２時間十分に攪拌した。層を分離した。水層を、ＥＡ（２５ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させ、無色の粘着性液体を得た。粗生成物を、ＥＡ／シクロヘキサンを用いてカラム精製し、生成物を２０〜３０％ＥＡ／シクロヘキサンを用いて溶出し、ロータリーエバポレーターでの生成物スポットを含む分画の蒸発により、無色の粘着性液体（０．７３ｇ，６３
．４％）を産出した。
化合物４１＊
化合物４０＊（１．０ｇ，０．８９５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中に室温で入れ、ピリジン（１．０８６ｍＬ，１３．４２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０２２ｇ，０．１７９ｍｍｏｌ）を加え、５分間攪拌した。その後、ＢｚＣｌ（０．５０３，３．５８ｍｍｏｌ）を加え、４８時間攪拌した。ＴＬＣ分析（２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、反応の完了を示した。ＲＭを、ＤＣＭ（２５ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）を用いて希釈し、層を分離した。有機層を、ブライン溶液（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させ、薄茶色残渣を得た。溶媒としてＥＡおよびＣＨｘを有するバイオタージ−シリカカラムを用いた精製は、純粋な生成物を与え、真空中で生成物を含む分画の蒸発で無色の粘着性液体を得た。乾燥トルエンを加え、ロータベイパー（ｒｏｔａｖａｐｏｕｒ）で二度、材料を共沸乾燥させ、その後、高真空下で乾燥し、無色の粘着性液体（９００ｍｇ，８２％）を得た。
化合物４２＊
化合物４１＊（１２５ｍｇ，０．１２０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３ｍＬ）および緩衝溶液（３ｍＬ）に室温で入れ、ＤＤＱ（６９．７ｍｇ，０．３０７ｍｍｏｌ）を２０分にわたって少しずつ加え、ＲＭは黒色になり、その後、赤茶色に変化した。ＲＭを２時間攪拌した。ＴＬＣ分析（２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、極性スポットの存在、およびわずかなＳＭの存在を示した。そこで、０．５時間さらに攪拌を続けた。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカカラム−溶出液としてＥＡ／Ｃｈｘを有するバイオタージを用いて精製し、生成物（８６ｍｇ，７８％）を取り出した。化合物４３＊
化合物４１＊（９４０ｍｇ，０．７７０ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬファルコンチューブのピリジンに入れ、室温で５分間攪拌した。その後、ＨＦ−Ｐｙ（１１４４ｍｇ，１１．５４ｍｍｏｌ）を加えた（注意：泡および発熱性）。ＲＭを室温で１８時間攪拌した。ＴＬＣ分析（２０％ＥＡ／Ｃｈｘ）は、ＳＭが存在し、さらに極性スポットが生じたことを示した。そこで、１０等量のＨＦ−ＰｙをＲＭにもう一度加え、ＲＭを室温で３０時間さらに攪拌し、ＴＬＣ分析（２０％ＥＡ／Ｃｈｘ）は、まだ幾つかのＳＭが存在し、多くの極性スポットもさらに存在していることを示した。ＲＭを、水（５０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を用いて希釈し、層を室温で攪拌しながら十分に混合し、層を分離した。水層を、ＤＣＭ（２５ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３洗浄（５０ｍＬ×２、多少の泡立ちに気を付ける）し、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、白色粘着性の液体を得た。粗生成物を、シリカカラム−溶離液としてＥＡ／ＣＨｘを有するバイオタージを用いて精製し、生成物を取り出した（６６１ｍｇ，８０％）。
化合物４４＊
ラクトール４３＊（６００ｍｇ，０．５５６ｍｍｏｌ）を、室温でＮ２雰囲気下で、ＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れ、Ｃｓ２ＣＯ３（７２５ｍｇ，２．２２４ｍｍｏｌ）を加え、５分間攪拌した。その後、イミドイルクロリド試薬（３４６ｍｇ，１．６６８ｍｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。ＴＬＣ分析は、反応が完了し、強い非極性スポットが存在し、ＳＭは存在しないことを示した。したがって、ＲＭを、固体を除去するためにろ過し、残渣を、ＤＣＭを用いて洗浄した。ろ液を真空中で濃縮した。粗生成物を、シリカカラム（カラムをロードする前にシクロヘキサン中にＴＥＡを有する溶液を用いて処理した）を用いて、溶出液としてＥＡ／ＣＨｘ＋１％ＴＥＡを用いて、精製し、生成物分画を取り出した。真空下で蒸発させて、乾燥させ、オフホワイトのフワフワとした固体を得た（６８２ｍｇ，９８％）。
化合物４５＊
化合物３３＊（８０ｍｇ，０．１７０ｍｍｏｌ）および化合物４４＊（２５６ｍｇ，０．２０４ｍｍｏｌ）の両方を、一緒に、真空中で、乾燥トルエンを用いて共沸乾燥させた。それらを、ＤＣＭ（５ｍＬ）中に入れ、４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、Ｎ２雰囲気下で、２０分間攪拌した。ＲＭを、氷−アセトン浴を用いて−５℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（６．１６μＬ，０．０３４ｍｍｏｌ）をＲＭに加え、ＲＭを−５℃で５分間攪拌し、１時間にわたって２℃にゆっくり温めた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘの後２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、反応が完了したことを示した。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬ）を用いて１０℃でクエンチし、層を分離した。水層を、ＤＣＭ（３ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させた。ＥＡ／ＣＨｘを用いてシリカカラムクロマトグラフィーでバイオタージによって精製し、生成物スポット含有分画を得て、真空下で蒸発させて無色粘着性の液体として所望の生成物（２３１ｍｇ，８９％）を産出した。
化合物４６＊
化合物４５＊（２２０ｍｇ，０．１４４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（６ｍＬ）および緩衝溶液（１２ｍＬ）に室温で入れ、ＤＤＱ（９８ｍｇ，０．４３１ｍｍｏｌ）を、２０分にわたって少しずつ加え、ＲＭは黒色になり、その後、赤茶色に変化した。ＲＭを１．５時間攪拌した。ＴＬＣ分析（２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、極性スポットの存在、およびわずかなＳＭの存在を示した。そこで、０．５時間さらに攪拌を続けた。ＲＭを、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬ）、ブライン溶液（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカカラム−溶出液としてＥＡ／Ｃｈｘを有するバイオタージを用いて精製し、無色粘着性の液体として生成物（１６０ｍｇ，８０％）を取り出した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７９Ｈ７９Ｏ２０Ｎ３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１４１２．５１５５、実測値は１４１２．５０４０であった。
化合物４７＊
化合物４６＊（２５ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）および化合物２１＊（２７．９ｍｇ，０．０３６ｍｍｏｌ）の両方を、一緒に、真空中で、乾燥トルエンを用いて共沸乾燥させた。それらを、ＤＣＭ（２ｍＬ）中に室温で入れ、４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）をそれに加え、Ｎ２雰囲気下で、２０分間攪拌した。ＲＭを、氷−アセトン浴を用いて−１０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．６５０μＬ，３．６０μｍｏｌ）をＲＭに加え、ＲＭを−１０℃で５分間攪拌し、時間にわたって２℃に１ゆっくり温めた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘ後２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、反応が完了し、強いスポットが存在していることを示した。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬ）を用いて１０℃でクエンチし、層を分離した。水層を、ＤＣＭ（３ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させた。ＥＡ／ＣＨｘを用いてシリカカラムクロマトグラフィーでバイオタージによって精製し、生成物スポット含有分画を得て、真空下で蒸発させて無色層として所望の生成物（６ｍｇ，１７％）を産出した。
化合物４８＊
化合物４７＊（６ｍｇ，３．０３μｍｏｌ）を、ＴＨＦ−ＭｅＯＨ（１：１，２ｍＬ）に、室温で入れ、メタノール中にＮａＯＭｅを有する溶液をそれに加え、１８時間攪拌を続けた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、ＳＭの非存在および極性スポットの存在を示した。したがって、ＲＭを真空中で蒸発させた。ＥＡ（３ｍＬ）および水（２ｍＬ）を用いて希釈した。ＡｃＯＨ（〜０．２ｍＬ）を用いて酸性化した。ＥＡ（２ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液（２ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲおよびＨＲＭＳは、粗生成物は所望の産物、さらに中間体産物を有し、ここで、一つのＢｚは、分子中にさらに存在している２つのＢｚ基であってもよい。したがって、ＲＭを、室温で再び反応条件に曝した。ＲＭを、ＥＡ（３ｍＬ）および水（２ｍＬ）を用いて希釈した。ＡｃＯＨ（〜０．１ｍＬ）を用いて酸性化した。ＥＡ（２ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機物を、水（２ｍＬ）、ブライン溶液（２ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥
させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させ、粗生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲおよびＨＲＭＳは、粗生成物が所望の産物、その上、わずかなモノＢｚ含有中間体を有することを示す。したがって、ＲＭを、５０℃で１８時間、再び反応条件に曝した。ＲＭを、室温に冷却し、その後、ＥＡ（３ｍＬ）および水（２ｍＬ）を用いて希釈した。ＡｃＯＨ（〜０．１ｍＬ）を用いて酸性化した。ＥＡ（２ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機物を、水（２ｍＬ）、ブライン溶液（２ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させ、粗生成物を得た（３ｍｇ，６８％）。
化合物４９＊
化合物４８＊（３ｍｇ，２．０６０ｍｍｏｌ）を、混合溶媒（ＤＣＭ−ｔＢｕＯＨ−２滴の水）に入れ、それにｔＢｕＯＨ（０．５ｍＬ）中にＰｄ／Ｃを有する溶液を加え、５バール圧のＨ２で、室温で２４時間水素化した。ＲＭをＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ）を用いて洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗生成物を得た。１Ｈ ｎｍｒ分析は、反応の完了および生成物の存在を示した。したがって、粗生成物を、水（３ｍＬ×２，ｆｒ１）、２０％ＡＣＮ−水（３ｍＬ×２，ｆｒ２）、およびＡＣＮ（３ｍＬ，ｆｒ３）を用いてＣ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムに通して精製した。全ての分画を２４時間、凍結および凍結乾燥させ、所望の生成物としてｆｒ１を得た（無色層、０．７１ｍｇ，４６％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２９Ｈ５４ＮＯ２１Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は７５３．３２２２、実測値は７５３．４６０８であった。
［Ａ−２−２ クレブシエラニューモニエＯ１六糖類の調製］
化合物５０＊
化合物４６＊（１２５ｍｇ，０．０９０ｍｍｏｌ）および化合物１０７＊（２２７ｍｇ，０．１３５ｍｍｏｌ）の両方を、一緒に、真空中で、乾燥トルエンを用いて共沸乾燥さ
せた。それらを、ＤＣＭ（５ｍＬ）中に室温で入れ、４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、および２０分間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。ＲＭを、氷−アセトン浴を用いて−１０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（３．２５μＬ，０．０１８ｍｍｏｌ）をＲＭに加え、ＲＭを−１０℃で５分間攪拌し、１時間にわたって２℃にゆっくり温めた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘの後２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、反応が完了し、強いスポットが存在していることを示した。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬ）を用いて１０℃でクエンチし、層を分離した。水層を、ＤＣＭ（３ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させた。ＥＡ／ＣＨｘを用いてシリカカラムクロマトグラフィーでバイオタージによって精製し、無色層として所望の生成物（１６０ｍｇ，６２％）を得た。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１７１Ｈ１６３Ｎ３Ｏ３９Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２９０６．０７９５、実測値は２９０６．０３２７であった。
化合物５１＊
化合物５０＊は、一般的プロトコルＡにしたがってメタノリシスを受けた：
白色粘着性の固体として得られた生成物（６５ｍｇ，９１％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１１５Ｈ１３１Ｎ３ＮａＯ３１ ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２０７２．８６６４、実測値２０７３．５４０。
化合物５２＊
化合物５１＊は、一般的プロトコルＡにしたがって水素化反応を受けた：
白色のフワフワした固体として得られた生成物（９ｍｇ，６９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４１Ｈ７４ＮＯ３１［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１０７６．４２４５、実測値１０７６．４２８２。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重水）δ５．２６（ｓ，１Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６６ （ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３７−４．０５（ｍ，１２Ｈ），４．０２−３．８９（ｍ，５Ｈ），３．８７−３．６３（ｍ，１９Ｈ），３．６２−３．５３（ｍ，１Ｈ），３．１１−２．９９（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．６４（ｍ，４Ｈ），１．５８−１．４４（ｍ，２Ｈ）。
化合物５２ａ−Ｉ＊
化合物５２ａ−Ｉ＊は、図１２に示されるように、化合物３５＊および対応するアルコールから、化合物５２＊と同様に調製した。
［Ａ−２−３ クレブシエラニューモニエＯ１八糖類の調製］
化合物５３＊
化合物４２＊（４０ｍｇ，０．０３７ｍｍｏｌ）および化合物４４＊（４４５ｍｇ，０．３５６ｍｍｏｌ）の両方を、分けて、真空中で、乾燥トルエンを用いて共沸乾燥させた。それらを、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中に室温で入れ、４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、および１０分間攪拌した。これに、ＤＣＭ中にイミデート供与体を有する溶液（１ｍＬ）を加え、室温で、３０分間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。ＲＭを、氷−ＡＣＮ浴を用いて−２０度に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（７．４０μＬ，１．３４μｍｏｌ）をＲＭに加え、ＲＭを−２０度で５分間攪拌し、１時間にわたって２度にゆっくり温めた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘ後２０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、反応が完了し、ＳＭ４２＊の非存在、およびわずかな極性スポットの存在を示した。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（２ｍＬ）を用いて１０度でクエンチし、層を分離し、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させた。ＥＡ／ＣＨｘを用いてシリカカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物含有分画を得て、真空下で蒸発させて、所望の生成物である無色層を産出
した（６３０ｍｇ，９１％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１２７Ｈ１２４Ｏ２９ＳｉＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２１６４．７９２９、実測値は２１６４．７７２７であった。化合物５４＊
化合物５３＊（３００ｍｇ，０．１４０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）および緩衝溶液（ｐＨ７．４，７ｍＬ）に室温で入れ、ＤＤＱ（９５ｍｇ，０．４２０ｍｍｏｌ）を、２０分にわたって少しずつ加え、ＲＭは黒色になり、その後、赤茶色に変化した。ＲＭを２時間攪拌した。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、極性スポットの存在、およびわずかなＳＭの存在を示した。そこで、０．５時間さらに攪拌を続けた。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカカラム−溶出液としてＥＡ／Ｃｈｘを有するバイオタージを用いて精製し、生成物（２１５ｍｇ，７６％）を取り出した。
化合物５５＊
化合物５３＊（１．０ｇｇ，０．４６７ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬファルコンチューブのピリジンに入れ、室温で５分間攪拌した。その後、ＨＦ−Ｐｙ（１．５ｍｌ，１６．３４ｍｍｏｌ）を加えた（注意：泡および発熱性）。ＲＭを室温で１８時間攪拌した。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／Ｃｈｘ）は、極性スポットが生じたことを示した。ＲＭを、水（５０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を用いて希釈し、層を室温で攪拌しながら十分に混合し、層を分離した。水層を、ＤＣＭ（２５ｍＬ×２）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３洗浄（５０ｍＬ×２、いくつかの泡立ちに気を付ける）、ブライン（３ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、白色粘着性の液体を得た。粗生成物を、シリカカラム−溶離液としてＥＡ／ＣＨｘを有するバイオタージを用いて精製し、生成物を取り出した（９３０ｍｇ，定量的）。
化合物５６＊
ラクトール５５＊（１．１ｇ，０．５５０ｍｍｏｌ）を、室温でＮ２雰囲気下で、ＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れ、Ｃｓ２ＣＯ３（７１７ｍｇ，２．２００ｍｍｏｌ）を加え、５分間攪拌した。その後、イミドイルクロリド試薬（０．２６１ｍＬ，１．６５ｍｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。ＴＬＣ分析は、反応が完了し、強い非極性スポットが存在し、ＳＭは存在しないことを示した。したがって、ＲＭを、固体を除去するためにろ過し、残渣を、ＤＣＭを用いて洗浄した。ろ液を真空中で濃縮した。真空下で蒸発させ、乾燥させ、オフホワイトのフワフワとした固体を得た（１．２ｇ，１００％）。
化合物５７＊
化合物５７＊は、一般的プロトコルＢにしたがって５−アジドペンタノールとグリコシル化反応することによって化合物５６＊から得られた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（２１８ｍｇ，９０％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１２４Ｈ１１６Ｎ３Ｏ２９ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値２１１０．７６９４、実測値２１１０．１６９。
化合物５８＊
化合物５８＊は、一般的手順ＡにしたがってＮａｐ保護基の除去を行うことによって、化合物５７＊から得られた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１０２ｍｇ，５１％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１１３Ｈ１０８Ｎ３Ｏ２９ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１９７０．７０６８、実測値１９６９．９０１。
化合物５９＊
化合物５９＊は、一般的手順Ｂにしたがってグリコシル化反応を行うことによって、化合物５８＊および化合物１１０＊から得られた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１２８ｍｇ，６３％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３２Ｈ２１６Ｎ３Ｏ５５ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３９２３．４１９７、実測値３９２３．２９３。
化合物６０＊
化合物５９＊は、一般的プロトコルＢにしたがってメタノリシスを受けた：
白色の固体層として得られた生成物（４４ｍｇ，定量的）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１３４Ｈ１６０Ｎ３Ｏ４１［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値２４６７．０５２７、実測値２４６６．３７７。
化合物６１＊
化合物６０＊は、一般的プロトコルＣにしたがって水素化反応を受けた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（２１ｍｇ，９５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５３Ｈ９４Ｎ３Ｏ４１［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１４００．５３０１、実測値１４００．５３７５。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重水）δ５．１９（ｓ，１Ｈ），５．１７（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝４．９，３．１Ｈｚ，２Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝１.６Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３１−４．１０（ｍ，１１Ｈ），４．０８−３．５３（ｍ，３８Ｈ），３．０２−２．９３（ｍ，２Ｈ），１．６６（ｄｐ，Ｊ＝１４．２，７．１，６．５Ｈｚ，４Ｈ），１.５２−１．３４（ｍ，２Ｈ）。
化合物６１ａ−Ｉ＊
化合物６１ａ−Ｉ＊は、化合物５６＊および図１２に示されるような対応するアルコールから化合物６１＊と同様に調製された。
［Ａ−２−４ クレブシエラニューモニエＯ１十五糖類の調製］
化合物６２＊
化合物６２＊は、一般的プロトコルＢにしたがって化合物５６＊および化合物４６＊のグリコシル化反応によって得られた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（２９３ｍｇ，８１％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１９８Ｈ１８４Ｎ３Ｏ４８ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３３７１．２０４９、実測値３３７２．１０９。
化合物６３＊
化合物６３＊は、一般的手順ＡにしたがってＮａｐ保護基の除去を行うことによって化合物６２＊から得られた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１５２ｍｇ，６３％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１８７Ｈ１７６Ｎ３Ｏ４８ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３２３１．１４２３、実測値３２３２．２９１。
化合物６４＊
化合物６４＊は、一般的手順Ｂにしたがってグルコシル化反応を行うことによって化合物６３＊および化合物１１５＊から得られた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（５２ｍｇ，３２％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ４１４Ｈ３８４Ｎ３Ｏ１００＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値６９９６．５０５５、実測値７００１．６８５。
化合物６５＊
化合物６４＊は、一般的プロトコルＢにしたがってメタノリシスを受けた：
白色固体として得られた生成物（２５ｍｇ，９７％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２４６Ｈ２８８Ｎ３Ｏ７６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値４４９９．８７６３、実測値４５００．１３２。
化合物６６＊
化合物６５＊は、一般的プロトコルＢＣにしたがって水素化反応を受けた。
化合物６６ａ−Ｉ＊
化合物６６ａ−Ｉ＊は、化合物３５＊および図１２に示されるような対応するアルコールから化合物６６＊と同様に調製される。
［Ａ−３ クレブシエラニューモニエＯ２（２ｃ）糖の調製］
［Ａ−３−１ クレブシエラニューモニエＯ２二糖類の調製］
化合物６７＊
化合物２９＊（１５ｍｇ，０．０１３ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、ＴＨＦに１Ｍ ＴＢＡＦ溶液を有する溶液（１３３μＬ，０．１３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、室温で１８時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチルと水との間に分けた。水層を、酢酸エチルを用いて２度抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、淡黄色の油として生成物（１３．２ｍｇ）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５０Ｈ５４Ｎ４Ｏ１５Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は９５１．３６５８、実測値は９５１．３６５０であった。
化合物６８＊
化合物６７＊（１３ｍｇ，０．０１４ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＲＢＦ中に入れ、無水トルエン（２ｍＬ）を加え、真空下で３０分間蒸発させて乾燥させ、この共沸乾燥工程を１回以上繰り返した。材料を高真空下で３０分間乾燥させた。材料を、無水ＤＣＭ（１ｍＬ）および無水酢酸（３．８８μＬ，０．０４１ｍｍｏｌ）の混合溶液中に溶解し、並びにトリエチルアミン（９．５３μＬ，０．０６８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１．５時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチルと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液との間に分けた。水層を、酢酸エチルを用いて２度抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残渣を５ｍＬのＲＢＦに入れ、無水トルエン（２ｍＬ）を加え、真空下で３０分間蒸発させて乾燥させ、この共沸乾燥工程を１回以上繰り返した。材料を高真空下で３０分間乾燥させた。材料を、無水ＴＨＦ／メタノール１：１（１ｍＬ）に溶解し、およびメタノール中に０．５Ｍ ナトリウムメトキシドを有する溶液（１．１０８ｍＬ，０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチルと水との間に分けた。水層を、酢酸エチルを用いて２度抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、淡黄色の油として生成物（５．４ｍｇ）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２６Ｈ３８Ｎ４Ｏ１１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６０５．２４３５、実測値は６０５．２５４８であった。
化合物６９＊
化合物６８＊（５ｍｇ，８．５８μｍｏｌ）は、一般的プロトコルＣにしたがって、水素化反応を受けた。混合物を、最初にＳＥＣクロマトグラフィー（Ｇ−２５，水）によって、その後、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラム（水／アセトニトリル）によって精製し、生成物（０．８１ｍｇ，５ステップにわたって１３．３％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１９Ｈ３６Ｎ２Ｏ１１Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は４６９．２３９２、実測値は４６９．２４１９であった。
［Ａ−３−２ クレブシエラニューモニエＯ２（２ｃ）六糖類の調製］
化合物７０＊
化合物２８＊（３８ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）および化合物３０＊（３０ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、無水トルエン（４ｍＬ）を加え、乾燥のために真空下で３０分間蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。材料を高真空下で１２時間乾燥した。無水ジクロロメタン（１ｍＬ）および、乾燥４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で１０分間攪拌し、その後−１０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（０．５３μＬ，２．９２μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、２時間の期間にわたって、０℃にゆっくり温めながら攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失、および新しいスポットの存在を示した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加によって反応をクエンチした。層を分離し、水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）によって精製し、溶媒を除去し、無色の油として生成物（４０．５ｍｇ，６８．５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９６Ｈ９３Ｃｌ６Ｎ５Ｏ３１Ｋ＋［Ｍ＋Ｋ］＋の計算値は２０６４．６０２３、実測値は２０６４．３６５７であった。
化合物７１＊
化合物７０＊（４０ｍｇ，０．０２０ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（１ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン酢酸塩（５．４６ｍｇ，０．０５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、室温で１７時間攪拌した。アセトンの添加によって反応をクエンチした。反応を４５分間攪拌し、その後、蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）によって精製し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（３２．９ｍｇ，８６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９１Ｈ８７Ｃｌ６Ｎ５Ｏ２９Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１９５０．３９２８、実測値は１９５０．３２５５であった。
化合物７２＊
化合物２８＊（２０．３ｍｇ，０．０１７ｍｍｏｌ）および化合物７１＊（３０ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、無水トルエン（４ｍＬ）を加え、乾燥のために真空下で３０分間蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。材料を高真空下で１２時間乾燥した。無水ジクロロメタン（１ｍＬ）および、乾燥４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で１０分間攪拌し、その後−１０℃に冷却した。ＴＭＳＯ−Ｔｆ（０．２８μＬ，１．５６μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、１．５時間の期間にわたって、０℃にゆっくり温めながら攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失、および新しいスポットの存在を示した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加によって反応をクエンチした。層を分離し、水層を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）によって精製し、溶媒を蒸発させ、白色の固体として生成物（１８．９ｍｇ，４１．５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１３９Ｈ１３１Ｃｌ９Ｎ６Ｏ４５Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２９４７．６１３２、実測値は２９４７．５１４７であった。
化合物７３＊
化合物７３＊を、化合物６７＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物７２＊から調製する。
化合物７４＊
化合物７４＊を、化合物６８＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物７３＊から調製する。
化合物７５＊
化合物７５＊を、化合物６９＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物７４＊から調製する。
［Ａ−４ クレブシエラニューモニエＯ２ａｃ糖の調製］
［Ａ−４−１ クレブシエラニューモニエＯ２ａｃ四糖類の調製］
化合物７６＊
Ｃｓ２ＣＯ３（２．２ｇ，６．７７ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルクロリド（２．１ｇ，３．３９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中にラクトール３６＊（２．０ｇ，３．３９ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応混合物を室温で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。２時間後、全ての出発材料は消費され、反応物をセライトに通してろ過し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。溶媒を蒸発させ、生成物を、シリカゲルおよび溶出液として酢酸エチル／シクロヘキサン＋１％Ｅｔ３Ｎを用いたカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＴＬＣによって生成物を含む試験管を混合し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（２．５８ｇ，１００％）を得た。
化合物７７＊
化合物７７＊を、一般的プロトコルＢにしたがって化合物７６＊と化合物３３＊との間でグルコシル化によって調製した：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（２４９ｍｇ，７５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５７Ｈ５９Ｎ３ＮａＯ１６［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値１０６４．３７９３、実測値１０６４．３８０１。
化合物７８＊
化合物７８＊を、Ｌｅｖ保護基の除去のために一般的プロトコルＡにしたがって化合物７７＊から調製した：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１７１ｍｇ，７９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５２Ｈ５３Ｎ３ＮａＯ１４［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値９６６．３４２５、実測値９６６．３４２２。
化合物７９＊
化合物７９＊を、一般的プロトコルＢにしたがって化合物７８＊と化合物２８＊との間でグルコシル化によって調製した調製した：
白色フワフワした固体として得られた生成物（４４ｍｇ，４６％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１００Ｈ９７Ｃｌ３Ｎ４ＮａＯ３０ ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値１９６１．５１５１、実測値１９６３．６８６。
化合物８０＊
化合物７９＊（１０ｍｇ，５．４８μｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、室温で、ＴＨＦに１Ｍ ＴＢＡＦ溶液を有する溶液（０．１１ｍＬ，０．１１ｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温で１８時間攪拌した。ＲＭを、水（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ＥＡ（５ｍＬ）を用いて希釈した。層を分離し、水層を、ＥＡ（５ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、粗アミン生成物を得た。この粗生成物を、ＤＣＭに入れ、ＴＥＡ（５０ｅｑ）およびＡｃ２Ｏ（４０ｅｑ）を加え、一晩攪拌した。反応混合物を、水（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（５ｍＬ）を用いて希釈した。層を分離し、水層を、ＤＣＭ（５ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、粗ＮＨＡｃ生成物を得た。この粗混合物を、その後、ＴＨＦ−ＭｅＯＨ（１：１ ｍＬ）に室温で入れ、メタノール中に０．５Ｍ ＮａＯＭｅを有する過剰な溶液を加え、５５℃で１８時間攪拌を続けた。ＲＭを真空中で蒸発させた。ＥＡおよび水を用いて希釈した。中性ｐＨになるまでＡｃＯＨを用いて酸性化した。ＥＡを用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、
淡黄色の層として粗生成物（５ｍｇ，８４％，３ステップにわたって）を得た。
化合物８１＊
化合物８０＊は、一般的プロトコルＣにしたがって水素化反応を受けた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３１Ｈ５７Ｎ２Ｏ２１［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値７９３．３４５４、実測値７９３．３４５５。
［Ａ−４−２ クレブシエラニューモニエＯ２ａ八糖類の調製］
化合物８２＊
化合物８２＊を、一般的プロトコルＢにしたがって化合物７６＊と化合物４６＊との間のグリコシル化反応によって調製した：
無色ガラス質の層として得られた生成物（１５５ｍｇ，７３％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１１１Ｈ１０８Ｎ３Ｏ３０ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１９６２．７０１８、実測値１９６３．４２６。
化合物８３＊
化合物８３＊を、Ｌｅｖ保護基の除去のために一般的プロトコルＡにしたがって化合物８２＊から調製した：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１４０ｍｇ，９８％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１０６Ｈ１０２Ｎ３Ｏ２８ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１８６４．６６５０、実測値１８６４．９７３。
化合物８４＊
化合物８４＊を、一般的プロトコルＢにしたがって化合物８３＊と化合物２８＊との間のグリコシル化反応によって調製した：
無色ガラス質の層として得られた生成物（８５ｍｇ，５５％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１５４Ｈ１４６Ｃｌ３Ｎ４Ｏ４４ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値２８５９．８３７６、実測値２８５９．８６８。
化合物８５＊
化合物８５＊を、Ｌｅｖ保護基の除去のために一般的プロトコルＡにしたがって化合物８４＊から調製した：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（７０ｍｇ，９１％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１４９Ｈ１４０Ｃｌ３Ｎ４Ｏ４２＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値２７６１．８００８、実測値２７６３．６４６。
化合物８６＊
化合物８６＊を、一般的プロトコルＢにしたがって化合物８５＊と化合物２８＊との間でグリコシル化反応によって調製した：
無色ガラス質の層として得られた生成物（３１ｍｇ，４６％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１９７Ｈ１８４Ｃｌ６Ｎ５Ｏ５８ ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３７５６．９７３３、実測値３７５９．２６６。
化合物８７＊
化合物８７＊を、化合物８０＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物８６＊から調製する。
化合物８８＊
化合物８７＊は、一般的プロトコルＣにしたがって水素化反応を受けた。
［Ａ−４−３ クレブシエラニューモニエＯ２ａｃ六糖類の調製］
化合物８８＊
化合物８９＊
化合物８９＊を、一般的プロトコルＢにしたがって化合物４６＊とのグリコシル化反応によって化合物８８＊から得た：
無色ガラス質の層として得られた生成物（９ｍｇ，１７％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１５４Ｈ１４５Ｃｌ３ＫＮ４Ｏ４４ ＋［Ｍ＋Ｋ］＋の計算値２８９７．７９３４、実測値２８９８．０１５。
化合物９０＊
化合物９０＊を、化合物８０＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物８９＊から調製する。
化合物９１＊
化合物９０＊は、一般的プロトコルＣにしたがって水素化反応を受けた。
［Ａ−５ クレブシエラニューモニエＯ２ａｅｈ糖の調製］
化合物９２＊
ＤＣＭ（２６ｍＬ）にチオグリコシド１＊（１ｇ，１．９９８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４Å ＭＳを加えた。ジメチルホルムアミド（０．９２８ｍＬ，１１．９９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（０．６７４ｇ，３．００ｍｍｏｌ）を加え、反応を０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．３９７ｍＬ，２．１９７ｍｍｏｌ）を加えた。反応を、２．５時間にわたって、室温に温めた。ＴＬＣ（５０％ 酢酸エチル／シクロヘキサン）は、出発材料の完全な消失を示した。反応を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させ、粗生成物を得た。シリカゲルおよび溶出液として酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製は、無色の油として生成物（３６０ｍｇ，３５％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２９Ｈ３３Ｎ３Ｏ６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値５４２．２２６７、実測値５４２．２２９３。
化合物９３＊
トルエン：ジオキサン（３：１，１３．５ｍＬ）に化合物９＊（６８７ｍｇ，１．０３９ｍｍｏｌ）および化合物９２＊（３６０ｍｇ，０．６９３ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４Å ＭＳを加え、混合物を室温で２時間攪拌させた。その後、ＮＩＳ（３１２ｇ，１．３８６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（０．０１３ｍＬ，０．０６９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１時間０℃で攪拌した。反応を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、ろ過し、およびＮａ２Ｓ２Ｏ３および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で蒸発させた。自動精製システム（シクロヘキサン中に酢酸エチル、０〜５０％）による精製は、いくつかの不純物と共に生成物（６８５ｍｇ，９２％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６３Ｈ６３Ｎ３Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値１０９２．４２９５、実測値１０９２．４３０６。
化合物９４＊
２５ｍＬのＲＦＢ中の、ＤＣＭ：リン酸緩衝液７．４（２：１，９ｍＬ）に化合物９３＊（２５０ｍｇ，０．２３４ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（８０ｍｇ，０．３５０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１．５時間攪拌した。反応物を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）を用いてクエンチした。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４（０．２ｇ）で乾燥させ、ろ過し、ろ液を減圧下で１５分間濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。真空中での生成物（ＴＬＣに基づく）を含む試験管からの溶媒の濃縮は、結果的に、無色の油（１７８ｍｇ，８２％）をもたらした。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５２Ｈ５５Ｎ３Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は９５２．３６３３、実測値は９５２．３６６５であった。
化合物９５＊
化合物９５＊を、次のように調製した：
ＤＣＭ：Ｈ２Ｏ（１：０．３，１４ｍＬ）に溶解されたチオグリコシド１０＊（１ｇ，１．４５ｍｍｏｌ）の溶液にＮＢＳ（０．７７５ｇ，４．３６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応物を同じ温度で１時間攪拌した。ＴＬＣ（５０％酢酸エチル／シクロヘキサン）は、出発材料の完全な消費を示した。反応物を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させ、粗材料を得た。シリカゲル、および溶出液として酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製（コンビフラッシュ（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ））は、無色の油としてラクトール生成物（０．８５ｇ，９８％）を与えた。Ｃｓ２ＣＯ３（１．３ｍｇ，４．０２ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルクロリド（０．５５７ｍｇ，２．６８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）中にラクトール（０．８ｇ，１．３４ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応混合物を室温で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。２時間後、全ての出発材料は消費され、反応物をセライトに通してろ過し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。溶媒を蒸発させ、生成物を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン＋１％Ｅｔ３Ｎ）を用いたカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＴＬＣによって生成物を含む試験管を混合し、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（８５０ｍｇ，８３％）を得た。
化合物９６＊
ＤＣＭ（３ｍＬ）に化合物９５＊（１９８ｍｇ，０．２５８ｍｍｏｌ）および化合物９４＊（１２０ｍｇ，０．１２９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４Å ＭＳを加え、混合物を室温で２０分間攪拌させた。その後、反応混合物を−５０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．００５ｍＬ，０．０２８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−５℃に２時間にわたって温めた。反応物をろ過し、溶媒を蒸発させた。自動精製システム（シクロヘキサン中に酢酸エチル）による精製は、生成物（１２０ｍｇ，６２％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ８６Ｈ８１Ｎ３Ｏ２２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１５３１．５２３４、実測値は１５３１．５３０４であった。
化合物９７＊
化合物９６＊（１２０ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解し、エタンチオール（０．０７１ｍＬ，０．９５５ｍｍｏｌ）およびｐＴＳＯＨ（１８ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌ）を、連続して加えた。混合物を室温で３０分間攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料の変換、および新しいより極性なスポットを示した。トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、溶媒を蒸発させ、淡黄色の油として粗生成物を得た。粗生成物を、シクロヘキサン／酢酸エチルを用いる自動カラムクロマトグラフィーによって精製し、油として生成物を得た（１１０ｍｇ，９７％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７９Ｈ７７Ｎ３Ｏ２２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１４４２．４８９６，実測値は１４４１．４９４８であった。
化合物９８＊
２５％ｗ／ｗメタノール中にナトリウムメトキシドを有する溶液（０．３１９ｍＬ，１．４７８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，１．５ｍＬ）の混合物中に化合物９７＊（１０５ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応物を同じ温度で２０時間攪拌した。ＡｃＯＨ（１ｍＬ）の添加によって反応物をクエンチし、溶媒を蒸発させた。粗材料をアイソリュートにロードした。溶出液として、１）シクロヘキサン、２）酢酸エチル、３）ＤＣＭ中にＭｅＯＨ ５％を順番で用いたシリカカラムクロマトグラフィーによる精製は、溶媒の蒸発後、白色の固体として生成物（２９ｍｇ，４９％）を与えた。
化合物９９＊
化合物９８＊（２９ｍｇ，０．０３６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ：ｔＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ（０．４：１．６：０．４，２．４ｍＬ）の混合物に溶解した。ＰｄＣ（２５ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、水素を用いてパージし（５回）、水素圧（５バール）下で、２２時間攪拌させた。その後、反応混合物を、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ（１：１）を用いてＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、有機溶媒を、ロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で蒸発させ、粗材料を凍結乾燥させた。粗材料を、ミリＱ（ｍｉｌｉＱ）Ｈ２Ｏを用いてセッパック（ＳｅｐＰａｋ）によって精製し、白色の固体として生成物を得た（１７．７ｍｇ，８２％）。Ｃ２３Ｈ４４ＮＯ１６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は５９０．２６６０、実測値は５９０．２６５６であった。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．２１（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１６−４．０５（ｍ，４Ｈ），４．０６−３．９０（ｍ，５Ｈ），３．８９−３．４９（ｍ，１１Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７３−１．６２（ｍ，４Ｈ），１．５１−１．４１（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１０８．９，９５．２，９５．１，８２．５，８１．８，７７．３，７５．１，７１．０，７０．７，７０．６，７０．０，６９．６，６９．４，６９．３，６８．２，６７．８，６２．７，６１．２，３９．４，２８．０，２６．５，２２．４。
［Ａ−６ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩ糖の調製］
［Ａ−６−１ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩ六糖類の調製］
化合物１００＊
化合物１９＊（８５ｍｇ，０．１１９ｍｍｏｌ）および化合物１８＊（５０ｍｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、無水トルエン（５ｍＬ）を加え、乾燥のために真空下で３０分間蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。材料を高真空下で１２時間乾燥した。その後、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）および乾燥４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した（等温線における氷−水混合物）。ＮＩＳ（３１ｍｇ，０．１３９ｍｍｏｌ）および
トリフリック酸（０．８μＬ，９．９１μｍｏｌ）を反応混合物に加え、１５分間攪拌した。その後、それを、０．５時間１０℃にゆっくり温め、その後、室温で１時間攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって反応を５℃でクエンチした。粗化合物をＤＣＭで抽出し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、およびブラインを用いて洗浄した。分離後、有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および濃縮した。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーシステムによって精製し、淡黄色の固体を得た（７０ｍｇ，６３％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６８Ｈ６４Ｏ１４Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１２７．４１９４、実測値は１１２７．４００９であった。
化合物１０１＊
二糖類１００＊（０．１４ｇ，０．１２７ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのＲＢＦ中にＤＣＭ（２．８ｍＬ）およびリン酸緩衝溶液ｐＨ７．４（１．４ｍＬ）を有する攪拌溶液に窒素雰囲気下で移した。ＤＤＱ（０．１２９ｇ，０．５７０ｍｍｏｌ）を、２．５時間の期間にわたってゆっくり加え、ＴＬＣ分析（４０％酢酸エチル／シクロヘキサン）は、２時間後でさえ多量の出発材料に対してわずかに極性の新しいスポットの存在を示したので、反応混合物をさらに４時間室温で攪拌した。ＴＬＣは、出発材料の非存在を示したが、かすかな極性スポットの生成物の存在も示した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）の添加によってクエンチし、ＤＣＭに抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および１００ｍＬのＲＢＦで、ロータリーエバポレーターで３０〜３５℃浴温度で、真空下で、１時間濃縮し、淡黄色の油として粗生成物を得た。シクロヘキサン中に酢酸エチルを有する溶液を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製を行った。ジクロロメタンを、その後加え、真空下で３０分間蒸発を続け、結果的に無色透明な粘着性液体をもたらし、無色透明な粘着性液体を高真空下で、１６〜１８時間乾燥し、フワフワとした白色の固体（８１ｍｇ，６６％）を形成した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５７Ｈ５６Ｏ１４Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は９８７．３５６９、実測値は９８７．３３８７であった。
化合物１０２＊
（１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−Ｉ
ｒ（Ｉ）］ＰＦ６（７．６５ｍｇ，９．０５μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解し、赤色触媒が溶解する間、窒素を、２分間室温で溶液に通して泡立てた。溶液を、その後、２分間水素を用いてパージし、その時間によって、赤色溶液は、無色に変換し、溶液を水素下で１５分間攪拌した。活性触媒の溶液を、その後、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）中に化合物１００＊（０．１ｇ，０．０９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、窒素下で、注射器を介して加え、２時間室温で攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ジクロロメタン（３×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、アリル異性化化合物（１Ｈ ＮＭＲによって確認された異性化）を得た。ビニル基質を、その後、テトラヒドロフラン：水（２：１，３ｍＬ）の混合物中に取り込み、およびヨウ素（４６ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。褐色溶液を、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチする前に、２時間攪拌した。水層を、酢酸エチル（３×５ｍＬ）を用いて抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中に酢酸エチル３０％）による精製は、黄色の固体として生成物（６０ｍｇ，６３％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６５Ｈ６０Ｏ１４Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０８７．３８８１，実測値は１０８７．３７６６であった。
化合物１０３＊
化合物１０２＊（６０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（０．７ｍＬ）に溶解した。Ｃｓ２ＣＯ３（３７ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（０．０３ｍＬ，０．１７ｍｍｏｌ）を、この溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料の完全な変換および新しいスポットを示した。反応混合物をセライトパッド（１ｃｍ）に通してろ過した。パッドを、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥さ、淡黄色の油を得た。精製は、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル＋０．１％Ｅｔ３Ｎ）によって行われ、黄色の泡（６０ｍｇ，８６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７３Ｈ６４Ｆ３ＮＯ１４Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１２５８．４１７７，実測値は１２５８．３９６９であった。
化合物１０４＊
化合物１０３＊（１３ｍｇ，０．０９７ｍｍｏｌ）および５−アジドペンタノール（６０ｍｇ，０．０４９ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（２０ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。材料を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（４ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（１．８μＬ，９．７μＬ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥させ、白色の泡として生成物（３５ｍｇ，６１％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７０Ｈ６９Ｏ１４Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１９８．４６７７、実測値は１１９８．４７９８であった。
化合物１０５＊
化合物２１＊（３５５ｍｇ，０．４５８ｍｍｏｌ）および化合物１０１＊（０．３４０ｍｇ，０．３５２ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（１０ｍＬ）を加えた２５ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出発材料（０．３５５ｇ，０．４５８ｍｍｏｌ）を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（７ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（１３μＬ，０．０７ｍｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥させ、白色の泡として生成物（０．３８０ｇ，７０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９５Ｈ９０Ｏ２０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１５７３．５９２３、実測値は１５７３．５６５７であった。
化合物１０６＊
１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−Ｉｒ（Ｉ）］ＰＦ６（１８ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍＬ）に溶解し、赤色触媒が溶解する間、窒素を、２分間室温で溶液に通して泡立てた。溶液を、その後、２分間水素を用いてパージし、その時間によって、赤色溶液は、無色に変換し、溶液を水素下で１５分間攪拌した。活性触媒の溶液を、その後、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中に化合物１０５＊（０．３３ｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、窒素下で、注射器を介して加え、２時間室温で攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ジクロロメタン（３×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、および蒸発させ、アリル異性化化合物（１Ｈ ＮＭＲによって確認された異性化）を得た。ビニル基質を、その後、テトラヒドロフラン：水（２：１，３ｍＬ）の混合物中に取り込み、およびヨウ素（０．１１ｇ，０．４３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。褐色溶液を、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチする前に、２時間攪拌した。水層を、酢酸エチル（３×５ｍＬ）を用いて抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中に酢酸エチル３０％）による精製は、黄色の固体として生成物（２４０ｍｇ，７５％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９２Ｈ８６Ｏ２０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１５３３．５６１０，実測値は１５３３．５３８７であった。
化合物１０７＊
化合物１０６＊（０．２４２ｇ，０．１６０ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解した。Ｃｓ２ＣＯ３（０．１０４ｇ，０．３２０ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（０．０８ｍＬ，０．４８０ｍｍｏｌ）を、溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料の完全な変換および新しいスポットを示した。反応物をセライトパッド（１ｃｍ）に通してろ過した。パッドを、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させ、淡黄色の油を得た。精製は、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル＋０．１％Ｅｔ３Ｎ）によって行われ、黄色の泡（２４０ｍｇ，８９％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１００Ｈ９０Ｆ３ＮＯ２０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１７０４．５９０６，実測値は１７０４．５６０３であった。
化合物１０８＊
化合物１０７＊（０．６６６ｇ，０．５３９ｍｍｏｌ）および化合物１０１＊（０．４ｇ，０．４１４ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（１０ｍＬ）を加えた２５ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出発材料を高真空下で１２時間乾燥した。その後、無水ジクロロメタン（８ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（１５μＬ，０．０１８ｍｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いるフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥し、白色の固体として生成物（０．６５０ｇ，７８％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１２２Ｈ１１４Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２０３３．７４４５、実測値は２０３３．７０７７であった。
化合物１０９＊
（１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−Ｉｒ（Ｉ）］ＰＦ６（６．３ｍｇ，７．４５μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）に溶解し、赤色触媒が溶解する間、窒素を、２分間室温で溶液に通して泡立てた。溶液を、その後、２分間水素を用いてパージし、その時間によって、赤色溶液は、無色に変換し、溶液を水素下で１５分間攪拌した。活性触媒の溶液を、その後、テトラヒドロフラン（０．８ｍＬ）中に化合物１０８＊（０．１５ｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）を有する溶液に、窒素下で、注射器を介して加え、２時間室温で攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ジクロロメタン（３×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、アリル異性化化合物（１Ｈ ＮＭＲによって確認された異性化）を得た。ビニル基質を、その後、テトラヒドロフラン：水（２：１，２．５ｍＬ）の混合物中に取り込み、およびヨウ素（３７．８ｍｇ，０．１４９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。褐色溶液を、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチする前に、２時
間攪拌した。水層を、酢酸エチル（３×５ｍＬ）を用いて抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、および溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中に酢酸エチル３０％）による精製は、黄色の固体として生成物（９４ｍｇ，６４％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１９Ｈ１１０Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１９９３．７１３２，実測値は１９９３．６８２２であった。
化合物１１０＊
化合物１０９＊（０．０９４ｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（０．６ｍＬ）に溶解した。Ｃｓ２ＣＯ３（３１ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（２３μＬ，０．１４３ｍｍｏｌ）を、溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料の完全な変換および新しいスポットを示した。
反応混合物をセライトパッド（１ｃｍ）に通してろ過した。パッドを、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させ、淡黄色の固体を得た。
精製は、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル＋０．１％Ｅｔ３Ｎ）によって行われ、黄色の泡（８５ｍｇ，８３％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１２７Ｈ１１４Ｆ３ＮＯ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２１６４．７４２８，実測値は２１６４．７０５６であった。
化合物１１１＊
化合物１０８＊（０．１００ｇ，０．０５０ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬＲＢＦ中に、ＤＣＭ（１．３ｍＬ）およびメタノール（０．３ｍＬ）を有する攪拌溶液に窒素雰囲気下で、攪拌子を装備して、４００ｒｐｍで攪拌しながら移した。ＤＤＱ（０．０５６ｇ，０．２４８ｍｍｏｌ）を加え、ＴＬＣ分析（４０％酢酸エチル／シクロヘキサン）は、２時間後でさえ多量の出発材料に対してわずかに極性の新しいスポットの存在を示したので、反応混合物をさらに４時間室温で攪拌した。ＴＬＣは、出発材料の非存在を示したが、かすかな極性スポットの生成物の存在も示した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）の添加によってクエンチし、ＤＣＭに抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶
液（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および１００ｍＬのＲＢＦで、ロータリーエバポレーターで３０〜３５℃浴温度で、真空下で、１時間濃縮し、淡黄色の油として粗生成物を得た。シクロヘキサン中に酢酸エチルを有する溶液を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製を行った。ジクロロメタンを、その後加え、真空下で３０分間蒸発を続け、結果的に無色透明な粘着性液体をもたらし、無色透明な粘着性液体を高真空下、１６〜１８時間乾燥させ、フワフワとした白色固体（４３ｍｇ，４６％）を形成した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１１Ｈ１０６Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１８９３．６８１９、実測値は１８９３．６４９８であった。
化合物１１２＊
化合物１０３＊（２９ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）および化合物１１１＊（３４ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出発材料を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（０．３ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（０．６μＬ，３．６３μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥させ、白色の固体として生成物（３５ｍｇ，６６％）を得た。Ｍａｌｄｉ Ｃ１７６Ｈ１６４Ｏ４０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２９４２．２、実測値は２９４２．３であった。
化合物１１３＊
化合物１１０＊（６４ｍｇ，０．０３０ｍｍｏｌ）および化合物１１１＊（４３ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出
発材料を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（０．５ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（０．８μＬ，４．５９μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥させ、白色のフワフワとした固体として生成物（６６ｍｇ，７５％）を得た。Ｍａｌｄｉ Ｃ２３０Ｈ２１４Ｏ５３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３８４９．２、実測値は３８４９．４であった。
化合物１１４＊
（１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−Ｉｒ（Ｉ）］ＰＦ６（８．１８ｍｇ，９．７μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１．９ｍＬ）に溶解し、赤色触媒が溶解する間、窒素を、２分間室温で溶液に通して泡立てた。溶液を、その後、２分間水素を用いてパージし、その時間によって、赤色溶液は、無色に変換し、溶液を水素下で１５分間攪拌した。活性触媒の溶液を、その後、テトラヒドロフラン（０．９ｍＬ）中に化合物１１３＊（０．３７０ｇ，０．０９７ｍｍｏｌ）を有する溶液に、窒素下で、注射器を介して加え、２時間室温で攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ジクロロメタン（３×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および蒸発させ、アリル異性化化合物（１Ｈ ＮＭＲによって確認された異性化）を得た。ビニル基質を、その後、テトラヒドロフラン：水（２：１，２．５ｍＬ）の混合物中に取り込み、およびヨウ素（４９ｍｇ，０．１９３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。褐色溶液を、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチする前に、２時間攪拌した。水層を、酢酸エチル（３×５ｍＬ）を用いて抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、および溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン中に酢酸エチル３０％）による精製は、黄色の固体として生成物（２７０ｍｇ，５７％）を与えた。Ｍａｌｄｉ Ｃ２２７Ｈ２１０Ｏ５３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３８０９．１，実測値は３８０９．０であった。
化合物１１５＊
化合物１１４＊（０．２１０ｇ，０．０５５ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（０．７ｍＬ）に溶解した。Ｃｓ２ＣＯ３（３６ｍｇ，０．１１１ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（２６μＬ，０．１６６ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料の完全な変換および新しいスポットを示した。
反応混合物をセライトパッド（１ｃｍ）に通してろ過した。パッドを、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させ、淡黄色の固体を得た。
精製は、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル＋０．１％Ｅｔ３Ｎ）によって行われ、黄色の泡（１８０ｍｇ，８２％）を得た。Ｍａｌｄｉ Ｃ２３５Ｈ２１４Ｏ５３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３９８０．２，実測値は３９８１．３であった。
化合物１１６＊
化合物１１０＊（０．０１３ｍｇ，０．１０３ｍｍｏｌ）および５−アジドペンタノール（０．１１０ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（２０ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。材料を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）を、窒素雰囲気下で、攪拌子を装備して３００ｒｐｍで攪拌しながら加え、〜１００ｍｇの乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（１．９μＬ，１０．２６μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥させ、白色のフワフワとした固体として生成物（０．０９１ｇ，８５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１２４Ｈ１１９Ｎ３Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２１０４．７９２９、実測値は２１０４．７９０５であった。
化合物１１７＊
化合物１１６＊（０．０９１ｇ，０．０４４ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのＲＢＦ中に、ＤＣＭ（０．８ｍＬ）およびリン酸緩衝液ｐＨ７．４（０．８ｍＬ）を有する攪拌溶液に、窒素雰囲気下で、攪拌子を装備して、４００ｒｐｍで攪拌しながら移した。ＤＤＱ（０．０２ｇ，０．０８７ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣ分析（４０％酢酸エチル／シクロヘキサン）は、２時間後でさえ多量の出発材料に対してわずかに極性の新しいスポットの存在を示したので、反応混合物をさらに４時間室温で攪拌した。ＴＬＣは、出発材料の非存在を示したが、かすかな極性スポットの生成物の存在も示した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液の添加によってクエンチし、ＤＣＭに抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および５０ｍＬのＲＢＦで、ロータリーエバポレーターで３０〜３５℃浴温度で、真空下で、１時間濃縮し、淡黄色の油として粗生成物を得た。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空中で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥し、白色のフワフワとした固体として生成物（０．０４１ｇ，４７％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１３Ｈ１１１Ｎ３Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１９６４．７３０３、実測値は１９６４．７３０９であった。
化合物１１８＊
化合物１０３＊（３３ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）および化合物１１７＊（４０ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出発材料を高真空下で１２時間乾燥した。その後、無水ジクロロメタン（０．４ｍＬ）、および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（０．７μＬ，４．１２μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥し、白色の固体として生成物（３７ｍｇ，６０％）を得た。Ｍａ
ｌｄｉ Ｃ１７８Ｈ１６９Ｎ３Ｏ４０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３０１３．３、実測値は３０１４．２であった。
化合物１１９＊
化合物１１８＊（２７ｍｇ，０．００９ｍｍｏｌ）を、攪拌子を装備して窒素雰囲気下でＴＨＦ（０．６ｍＬ）に入れた。ナトリウムメトキシドの０．５Ｍメタノール性溶液（１８μＬ，９．０３μｍｏｌ）を加えた。結果的に生じる溶液を５０℃で２５時間攪拌した。ＨＲＭＳおよびＴＬＣ［（シクロヘキサン中に５０％酢酸エチル）によって反応を観察した。反応混合物を、１５分間、真空中で最小量に蒸発させ、その後、酢酸エチルおよび水を用いて希釈した。反応混合物を、５０％ＡｃＯＨ溶液を用いて酸性化し、層を分離した。水層を、その後、酢酸エチル（５ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を水、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および１０ｍＬＲＢＦで、ロータリーエバポレーターで、３０〜３５℃の浴温度で、１時間、真空下で蒸発させ、黄色の固体を得た。その後、〜２％酢酸エチル／ヘキサン（〜５ｍＬ）を、ＲＢＦ中の固体に加え、ＲＢＦを水浴で４５℃に温め、粉末にし、室温に冷却し、ろ過した。温めた〜２％酢酸エチル／ヘキサンを用いて固体を２回以上洗浄し、高圧で乾燥させ、所望の生成物として淡黄色の固体を得た。全てのろ液を真空中で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥し、黄色の固体として生成物（１４ｍｇ，７６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１５Ｈ１１３Ｎ３Ｏ３１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２０７４．８８２１、実測値は２０７４．８５７４であった。
化合物１２０＊
化合物１１９＊を、２０ｍＬのウィートン（ｗｈｅａｔｏｎ）バイアル（１０分オーブン乾燥した）中に、窒素雰囲気下で、攪拌子を装備して、２５０ｒｐｍで攪拌しながら（ヘイドルフスターラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ ｓｔｉｒｒｅｒ））、室温で、ｉＰｒＯＨ、ＤＣＭ、およびＨ２Ｏの混合溶媒に入れた。１０％Ｐｄ／Ｃの懸濁液を加えた。反応混合物を、水素ガス下でパージし、続いて１０バールの圧力下で、２４時間、室温で、自家製水素化装置を用いて攪拌した。反応混合物を、その後、ＰＴＦＥ疎水性フィルター（０．４５μｍ）に通してろ過し、ろ液を、メタノール（３ｍＬ×５）、水−メタノール（６：４，３ｍＬ×５）を用いて完全に洗浄した。ろ液を、真空下、ロータリーエバポレーター
で、３０〜３５℃の浴温度で１時間、乾燥のために蒸発させ、粗生成物としてオフホワイトの固体を得た。粗生成物の１Ｈ ＮＭＲは、反応の完了を示したが、中間体の存在を示した。粗生成物を、その後、溶出液として水およびアセトニトリルを用いてＣ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムを用いて精製し、水分画（ｆｒ１）に所望の純粋な生成物を得た。副生成物を、５０％水−アセトン分画（ｆｒ２）に溶出し、不純物を、アセトニトリル洗浄（ｆｒ３）において溶出した。不純な水分画（ｆｒ１）を、溶出液として水を用いてＳＥＣカラムに通して、更に精製した。水分画の凍結乾燥は、白色の泡状固体として、所望の純粋な生成物（２ｍｇ，２８％）を産出した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１５Ｈ１１３Ｎ３Ｏ３１Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１０７６．４２４５、実測値は１０７６．４２５６であった。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．２０−５．１１（ｍ，３Ｈ），４．７０−４．６６（ｍ，２Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３０−４．１１（ｍ，９Ｈ），４．０７−３．９１（ｍ，６Ｈ），３．８７−３．６２（ｍ，２３Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．８１−１．５７（ｍ，４Ｈ），１．５０−１．４１（ｍ，２Ｈ）。
化合物１２０ａ−Ｉ＊
化合物１２０ａ−Ｉ＊を、化合物１１０＊および図１２に示されるような対応するアルコールから、化合物１２０＊と同様に調製した。
［Ａ−６−２ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩ八糖類の調製］
化合物１２１＊
化合物１１０＊（０．１７２ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）および化合物１１７＊（１２０ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出発材料を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（１．２ｍＬ）および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（２．２μＬ，１２μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および
新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾させ、白色のフワフワした固体として生成物（１２５ｍｇ，５２％）を得た。Ｍａｌｄｉ Ｃ２３０Ｈ２１４Ｏ５３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算は値３９２０．３、実測値は３９２１．１であった。
化合物１２２＊
化合物１２１＊（２４ｍｇ，６．２μｍｏｌ）を、攪拌子を装備して、窒素雰囲気下でＴＨＦ（０．６ｍＬ）に入れた。ナトリウムメトキシドの０．５Ｍメタノール性溶液（１２μＬ，６．２μｍｏｌ）を加えた。結果的に生じる溶液を５０℃で２５時間攪拌した。ＨＲＭＳおよびＴＬＣ（シクロヘキサン中に５０％酢酸エチル）によって反応を観察した。反応混合物を、１５分間、真空中で最小量に蒸発させ、その後、酢酸エチルおよび水を用いて希釈した。反応混合物を、５０％ＡｃＯＨ水溶液（１０ｍＬ）を用いて酸性化し、層を分離した。水層を、その後、酢酸エチル（５ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機層を水、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および５０ｍＬＲＢＦで、ロータリーエバポレーターで、３０〜３５℃の浴温度で、１時間、真空下で蒸発させ、黄色の固体を得た。その後、〜２％酢酸エチル／ヘキサン（〜５ｍＬ）を、ＲＢＦ中の固体に加え、ＲＢＦを水浴で４５℃に温め、粉末にし、室温に冷却し、ろ過した。固体を、温めた〜２％酢酸エチル／ヘキサンを用いて２回以上洗浄し、高圧で乾燥させ、所望の生成物として淡黄色の固体を得た。全てのろ液を真空中で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥させ、黄色の固体として生成物（１１ｍｇ，６６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１４８Ｈ１７１Ｎ３Ｏ４１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２６６９．１２８６、実測値は２６６９．１２３３であった。
化合物１２３＊
化合物１２２＊（１１ｍｇ，４．２μｍｏｌ）を、２０ｍＬのウィートン（ｗｈｅａｔｏｎ）バイアル（１０分オーブン乾燥した）中に、窒素雰囲気下で、攪拌子を装備して、２５０ｒｐｍで攪拌しながら（ヘイドルフスターラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ ｓｔｉｒｒｅｒ））、室温で、ｉＰｒＯＨ、ＤＣＭ、およびＨ２Ｏの混合溶媒に入れた。水素化反応を
、一般的プロトコルＣにしたがって行った。粗生成物の１Ｈ ＮＭＲは、反応の完了を示したが、中間体の存在を示した。粗生成物を、その後、溶出液として水およびアセトニトリルを用いてＣ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムを用いて精製し、水分画（ｆｒ１）に所望の純粋な生成物を得た。副生成物を、５０％水−アセトン分画（ｆｒ２）に溶出し、不純物を、アセトニトリル洗浄（ｆｒ３）において溶出した。不純な水分画（ｆｒ１）を、溶出液として水を用いてＳＥＣカラムに通して、更に精製した。水分画の凍結乾燥は、白色の泡状固体として、所望の純粋な生成物（２ｍｇ，３４％）を産出した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１５Ｈ１１３Ｎ３Ｏ３１Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１４００．５３０１、実測値は１４００．５３７６であった。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．２０−５．１６（ｍ，３Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７０−４．６６（ｍ，３Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．０９（ｍ，１２Ｈ），４．０７−３．８８（ｍ，５Ｈ），３．８８−３．５８（ｍ，３３Ｈ），３．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５０−１．４０（ｍ，４Ｈ），１．４２−１．２９（ｍ，２Ｈ）。
化合物１２３ａ−Ｉ＊
化合物１２３ａ−Ｉ＊を、化合物１１０＊および図１２に示されるような対応するアルコールから、化合物１２３＊と同様に調製した。
［Ａ−６−３ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩ十二糖類の調製］
化合物１２４＊
化合物１２１＊（０．１０５ｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのＲＢＦ中に、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）およびリン酸緩衝液ｐＨ７．４（０．５ｍＬ）を有する攪拌溶液に、窒素雰囲気下で、攪拌子を装備して、４００ｒｐｍで攪拌しながら移した。ＤＤＱ（０．０２８ｇ，０．１２１ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣ分析（４０％酢酸エチル／シクロヘキサン）は、２時間後でさえ多量の出発材料に対してわずかに極性の新しいスポットの存在を示したので、反応混合物をさらに４時間室温で攪拌した。ＴＬＣは、出発材料の非存在を示したが、かすかな極性スポットの生成物の存在も示した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液の添加によってクエンチし、ＤＣＭに抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥させ、ろ過し、および５０ｍＬのＲＢＦで、ロータリーエバポレーターで３０〜３５℃浴温度で、真空下で、１時間濃縮し、淡黄色の油として粗生成物を得た。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空中で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥し、白色のフワフワとした固体として生成物（０．０４４ｇ，４４％）を得た。ＭＡＬＤＩ Ｃ２２１Ｈ２２１Ｏ５３Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は３７５８．１、実測値は３７５８．４であった。
化合物１２５＊
化合物１１０＊（２６ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）および化合物１２４＊（４５ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３ｍＬ）を加えた１０ｍＬのＲＢＦ中に入れ、真空下で３０分間、乾燥のために蒸発させ、この共沸乾燥工程を２回以上繰り返した。出発材料を高真空下で１２時間乾燥させた。その後、無水ジクロロメタン（０．２ｍＬ）、および乾燥した４Åモレキュラーシーブ（ＭＳ）を窒素雰囲気下で加え、室温で４５分間攪拌し、その後０℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（０．２μＬ，２．４μｍｏｌ）を、反応混合物に加え、３０分間攪拌した。その後、反応混合物を１０℃に０．５時間、ゆっくり温め、その後１時間室温で攪拌した。ＴＬＣ分析は、供与体スポットの消失および新しいスポットの存在を示した。トリエチルアミンの添加によって５℃で反応をクエンチした。粗有機物を、シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエントシステムを用いたフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。集めた分画を、真空内で濃縮し、その後、高真空下で１６時間乾燥し、白色のフワフワとした固体として生成物（２２ｍｇ，３２％）を得た。Ｍａｌｄｉ Ｃ３４０Ｈ３１９Ｎ３Ｏ５３Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は５７１１．２、実測値は５７１５．６であった。
化合物１２６＊
化合物１２６＊を、化合物１１９＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物１２５＊から調製した。
化合物１２７＊
化合物１２７＊を、化合物１２０＊の合成に記述される手順にしたがって、化合物１２６＊から調製した。
［Ａ−７ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩＩ糖の調製］
［Ａ−７−１ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩＩ三糖類の調製］
化合物１２８＊
ＤＣＭ（１３ｍＬ）中に化合物４＊（４２０ｍｇ，０．６５３ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳ、Ｐｈ２ＳＯ（１７２ｍｇ，０．８４９ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリ−ｔｅｒｔ−ブチルピリミジン（４０４ｍｇ，１．６３３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間攪拌した。反応混合物を−７８℃に冷却した。Ｔｆ２Ｏ（２４０ｍｇ，０．８４９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、同じ温度で２０分間攪拌した。その後、５−アジドペンタノール（１６９ｍｇ，１．３０７ｍｍｏｌ）を滴下して、２ｍＬのＤＣＭに溶解した。反応混合物を、−４０℃で３時間にわたって温め、その後、トリエチルアミン（３ｍＬ）を用いてクエンチした。反応混合物を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、ブライン（３０ｍＬ）を用いて洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗混合物を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムを用いて精製した。生成物（ＴＬＣに基づく）を含む試験管からの真空中での溶媒の濃縮は、無色の油として生成物（３５０ｍｇ，８１％）を与えた。Ｃ３７Ｈ５１Ｎ３Ｏ６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６８４．３４４５、実測値は６８４．３３７１であった。
化合物１２９＊
ＴＨＦ（５ｍＬ）中に化合物１２８＊（３５０ｍｇ，０．５２９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＨＦ．ｐｙ（０．１１ｍＬ，４．２３ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で２時間攪拌させた。出発材料の完全な消費後（ＴＬＣ）、反応を、トリエチルアミン（０．５ｍＬ）を用いてクエンチし、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインを用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。粗反応混合物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによって精製し、無色の油として生成物（１９９ｍｇ，７２％）を得た。
化合物１３０＊
無水安息香酸（９９ｍｇ，０．４３７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２９５ｍｇ，２．９１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２ｍＬ）中にジオール１２９＊（１９０ｍｇ，０．３６４ｍｍｏｌ）を有する溶液に加え、反応を、室温で一晩攪拌させた。反応物を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。残渣を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システム（コンビフラッシュ（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ））を用いて精製した。生成物を含む試験管を合わせて、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（２２５ｍｇ，９９％）を得た。Ｃ３６Ｈ３９Ｎ３Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６４８．２６８６、実測値は６４８．２６２５であった。
化合物１３１＊
トルエン：ジオキサン（３：１，１．２ｍＬ）に化合物９＊（６５ｍｇ，０．１００ｍｍｏｌ）および化合物１３０＊（５５ｍｇ，０．０８８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４Å
ＭＳを加え、混合物を室温で１時間攪拌させた。その後、ＮＩＳ（２８ｍｇ，０．１２３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（１．６μＬ，８．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１．５時間、０℃で攪拌した。反応を、トリエチルアミン（０．１ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、並びに１０％Ｎａ２ＳＯ３および飽和ＮａＨＣＯ３を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後に、無色の油
として生成物（６０ｍｇ，５９％）を与えた。Ｃ７０Ｈ７１Ｎ３Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１８４．４８８５、実測値は１１８４．４７８３であった。
化合物１３２＊
１０ｍＬのＲＦＢ中に、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（４：１，２ｍＬ）に化合物１３１＊（６０ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを０℃で加えた。反応混合物を室温で２時間４０分攪拌した。ＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯＡｃ，２：１）によって反応を観察した。反応を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍｌ）を用いてクエンチした。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４（０．２ｇ）で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空下で１５分間濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物（ＴＬＣにく）を含む試験管からの真空中での溶媒の濃縮は、結果的に、無色の油（３５ｍｇ，６６％）をもたらした。Ｃ５９Ｈ６３Ｎ３Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０４４．４２５９、実測値は１０４４．４１５６であった。
化合物１３３＊
化合物１０＊（３３ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）および化合物１３２＊（３０ｍｇ，０．０４４ｍｍｏｌ）を、トルエンを用いて共沸させ、高真空下で２０分間乾燥した。ＤＣＭ（６ｍＬ）中に供与体および受容体を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を室温で３０分間攪拌した。その後、反応混合物を、−４０℃に冷却した。ＮＩＳ（１１ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）およびＡｇＯＴｆ（２ｍｇ，８．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、−２０℃に１時間にわたって温めた。反応を同じ温度で１時間攪拌した。トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、並びにＮａ２ＳＯ３および飽和ＮａＨＣＯ３を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。自動精製システム（酢酸エチル／シクロヘキサン）による精製は、溶媒の蒸発後に、無色の油として生成物（３４ｍｇ，６６％）を与えた。Ｃ９３Ｈ８９Ｎ３Ｏ２２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算
値は１６２３．５８６９、実測値は１６２３．５７１４であった。
化合物１３４＊
２５％ｗ／ｗメタノール中にナトリウムメトキシドを有する溶液（０．０２９ｍＬ，０．１２７ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，１．５ｍＬ）の混合物中に化合物１３３＊（１７ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応を同じ温度で２０時間攪拌した。反応をＡｃＯＨ（０．２ｍＬ）の添加によってクエンチ、溶媒を蒸発させた。溶出液としてＤＣＭ中に５％ＭｅＯＨを有する溶液を用いたシリカゲルクロマトグラフィーによる精製は、溶媒の蒸発後、白色の油として生成物（９ｍｇ，８７％）を与えた。
化合物１３５＊
化合物１３４＊（９ｍｇ，０．００９ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ（２：０．５：０．５，３ｍＬ）の混合物に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ，０．００９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、水素を用いてパージし（５回）、水素圧（１０バール）下で、６０時間攪拌させた。その後、反応混合物を、Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ（１：１）を用いてＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、有機溶媒を、ロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で蒸発させ、粗材料を凍結乾燥させた。粗生成物を、ミリＱ（ｍｉｌｉＱ）Ｈ２Ｏを用いてセッパック（ＳｅｐＰａｋ）によって精製し、白色の固体として生成物を得た（１ｍｇ，１８％）。Ｃ２３Ｈ４４ＮＯ１６Ｎａ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は５９０．２６６０、実測値は５９０．２５９３であった。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．２６（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３１−４．２１（ｍ，３Ｈ），４．１７−４．０４（ｍ，５Ｈ），４．０３−３．９４（ｍ，２Ｈ），３．９４−３．６７（ｍ，９Ｈ），３．６６−３．５７（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．８２−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．５９−１．４５（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１０９．０，１００．１，９８．３，８２．２，８０．９，７８．３，７６．８，７６．１，７１．６，７０．８，７０．５，６９．１，６８．９，６８．０，６７．９，６２．７，６０．７，６０．４，３９．４，２８．１，２６．５，２２．４。
［Ａ−７−２ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩＩ六糖類の調製］
化合物１３７＊
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中にイミデート供与体７６＊（２．６ｇ，３．４１ｍｍｏｌ）および４−メトキシフェノール（１．０６，８．５３ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を室温で３０分間攪拌させた。ＴＭＳＯＴｆ（０．０７６ｇ，０．３４１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応を、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を用いてクエンチし、ろ過し、溶媒をロータベーパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で蒸発させた。シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後に、泡として生成物（２．１４ｇ，９０％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３９Ｈ３６Ｏ１２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７１９．２１０４、実測値は７１９．２０３６であった。
化合物１３８＊
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中に化合物１３７＊（２．１４ｇ，３．０７ｍｍｏｌ）を有する溶液に、酢酸（２．４ｍＬ，４１．９ｍｍｏｌ）に溶解したヒドラジン水和物（０．３９４ｇ，１２．２９ｍｍｏｌ）の溶液およびピリジン（３．６ｍＬ，４４．５ｍｍｏｌ）を加えた。結果的に生じる混合物を、室温で２時間攪拌した。反応をアセトン（３ｍＬ）の添加によってクエンチし、溶媒を真空下で除去し、粗生成物を得た（いくつかのピリジンは残存した）。粗生成物を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いる自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含む試験管（ＴＬＣに基づく）からの真空中での溶媒の濃縮は、白色の泡として生成物（１．７９ｇ，９７％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３４Ｈ３０Ｏ１０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６２１．１７３７、実測値は６２１．１６７２であった。
化合物１３９＊
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中に化合物４＊（２．５ｇ，３．８９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳ、Ｐｈ２ＳＯ（１．１５ｇ．５．６８ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリ−ｔｅｒｔ−ブチルピリミジン（２．６ｇ，１０．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間攪拌した。反応混合物を−７８℃に冷却した。Ｔｆ２Ｏ（１．８ｇ，６．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、同じ温度で２０分間攪拌した。その後、化合物１３８＊を滴下して１０ｍＬのＤＣＭに溶解した。反応混合物を、−５０℃で３時間にわたって温め、その後、トリエチルアミン（３ｍＬ）を用いてクエンチした。反応混合物を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を用いて希釈し、ブライン（３０ｍＬ）を用いて洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗混合物を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製を用いて精製した。生成物（ＴＬＣに基づく）を含む試験管からの真空中での溶媒の濃縮は、無色の油として生成物（３．０５ｇ，９０％）を与えた。Ｃ６６Ｈ７０Ｏ１５Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１５３．４３９２、実測値は１１５３．４２６８であった。
化合物１４０＊
２×５０ｍＬファルコンチューブ（多量のため、溶液を２個のチューブに分けた）中のＴＨＦ（４０ｍＬ）に化合物１３９＊（３ｇ，２．６５ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＨＦ．ｐｙ（２１ｍＬ，２１ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で２時間攪拌させた。出発材料の完全な消費後（ＴＬＣ）、反応を、トリエチルアミン（５ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（３０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。油残渣を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システム（コンビフラッシュ（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ））を用いて精製した。生成物（ＴＬＣに基づく）を含む試験管からの真空中での溶媒の濃縮は、無色の油として生成物（２．４ｇ，９１％）を与えた。
化合物１４１＊
無水安息香酸（０．６６ｇ，２．９１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．９６ｇ，１９．３７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４８ｍＬ）中にジオール１４０＊（２．４ｇ，２．４２ｍｍｏｌ）を有する溶液に加え、反応を、室温で一晩攪拌させた。反応物を、ＤＣＭ（３０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。層を分離し、水層を、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。残渣を、シリ
カゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システム（コンビフラッシュ（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ））を用いて精製した。生成物を含む試験管を合わせて、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（２．４ｇ，９０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６５Ｈ５８Ｏ１６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１１７．３６２３、実測値は１１１７．３５１５であった。
化合物１４２＊
トルエン：ジオキサン（３：１，４０ｍＬ）に化合物９＊（２．２１６ｇ，３．２９ｍｍｏｌ）および化合物１４１＊（２．４ｇ，２．１９１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を室温で１時間攪拌させた。その後、ＮＩＳ（０．９８６ｇ，４．３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（０．０４９ｇ，０．２１９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１．５時間、０℃で攪拌した。反応を、トリエチルアミン（３ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（７０ｍＬ）を用いて希釈し、並びにＮａ２ＳＯ３および飽和ＮａＨＣＯ３を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いる自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後に、黄色がかった固体として生成物（３．２７ｇ，９１％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９９Ｈ９０Ｏ２２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１６５４．５８５５、実測値は１６５４．５６５８であった。
化合物１４３＊
硝酸セリウムアンモニウム（２４９ｍｇ，０．４５３ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（８：１，４．５ｍＬ）中に化合物１４２＊（３７０ｍｇ，０．２２７ｍｍｏｌ）を有する溶液に０℃で加えた。反応混合物を、２０分間、同じ温度で攪拌し、室温に温めた。４時間後、さらに一定分量（ａｌｉｑｕｏｔｅ）のＣＡＮ（１００ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）を、０℃で加え、反応混合物を、同じ温度で３０分間攪拌した。３０分後、反応物を、
ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒をロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）（水浴〜３５℃）で濃縮した。残渣を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムを用いて精製した。生成物を含む試験管を合わせて、溶媒を蒸発させ、黄色の油として生成物（２７５ｍｇ，７９％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９２Ｈ８４Ｏ２１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１５４８．５４３６、実測値は１５４８．５２７８であった。化合物１４４＊
Ｃｓ２ＣＯ３（１４１ｍｇ，０．４３３ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（１３５ｍｇ，０．６４９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中にラクトール１４３＊（３３０ｍｇ， ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応混合物を室温で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。２時間後、全ての出発材料は消費され、反応物をセライトに通してろ過し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。溶媒を蒸発させ、生成物を、シリカゲル（酢酸エチル／シクロヘキサン＋１％Ｅｔ３Ｎ）を用いたカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＴＬＣによって生成物を含む試験管を合わせて、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（３１０ｍｇ，８４％）を得た。
化合物１４５＊
ＤＣＭ（５ｍＬ）に化合物１４４＊（２５０ｍｇ，０．１４７ｍｍｏｌ）および化合物１３２＊（１３７ｍｇ，０．１３４ｍｍｏｌ）を有する溶液を、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。４ÅのＭＳを加え、３０分間攪拌した。反応混合物を、−３０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（６ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を−５℃に３時間にわたって温めた。トリエチルアミン（０．５ｍＬ）の添加によって反応をクエンチした。反応混合物をろ過し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３を用いて洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させ、油残渣を得た。粗反応混合物を、シリ
カ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによって精製した。ＴＬＣによって生成物を含む試験管を合わせ、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（２５９ｍｇ，７６％）を得た。
化合物１４６＊
１０ｍＬのＲＢＦ中に、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（４：１，２ｍＬ）に化合物１４５＊（２５５ｍｇ，０．１０１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを０℃で加えた。反応混合物を室温で２時間４０分攪拌した。ＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯＡｃ，２：１）によって反応を観察した。反応物を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍｌ）を用いてクエンチした。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４（０．２ｇ）で乾燥し、ろ過し、ろ液を真空下で１５分間濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物（ＴＬＣに基づく）を含む試験管からの真空中での溶媒の濃縮は、結果的に、無色の油（１２０ｍｇ，５０％）をもたらした。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１４０Ｈ１３７Ｎ３Ｏ３３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２４１１．９０６６、実測値は２４１１．８８４４であった。
化合物１４７＊
化合物９５＊（５４ｍｇ，０．０７０ｍｍｏｌ）および化合物１４６＊（８４ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ）を、トルエンを用いて共沸させ、真空下で一晩静置した。その後、混合物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。４ÅのＭＳを加え、３０分間攪拌した。反応混合物を、−５０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（６ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を−５℃に４時間にわたって温めた。トリエチルアミン（０．０３ｍＬ）の添加によって反
応をクエンチした。反応混合物をろ過し、溶媒を蒸発させ、油残渣を得た。粗反応混合物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによって精製し、無色の油として生成物（８０ｍｇ，７７％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１７４Ｈ１６３Ｎ３Ｏ４２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２４１１．９０６６、実測値は２４１１．８８４４であった。
化合物１４８＊
２５％ｗ／ｗメタノール中にナトリウムメトキシドを有する溶液（０．１２ｍＬ，０．５３９ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，３ｍＬ）の混合物中に六糖類１４７＊（８０ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応物を同じ温度で２０時間攪拌した。ＡｃＯＨ（０．２ｍＬ）の添加によって反応をクエンチ、溶媒を蒸発させた。粗材料を、アイソリュート（ｉｓｏｌｕｔｅ）にロードした。１）シクロヘキサン、２）酢酸エチル、および３）ＤＣＭ中にＭｅＯＨ ５％の溶出順番で用いるシリカゲルクロマトグラフィーによる精製は、溶媒の蒸発後、白色の油として生成物（４４ｍｇ，９０％）を与えた。Ｃ９７Ｈ１１９Ｎ３Ｏ３１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１８４５．７７５９、実測値は１８４５．７５５６であった。
化合物１４９＊
化合物１４８＊（４０ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ：ｔＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：０．８：０．２，２ｍＬ）の混合物に溶解した。ＰｄＣ（４０ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、水素を用いてパージし（５回）、反応を水素圧（５バール）下で、２２時間攪拌させた。その後、反応混合物を、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ（１：１）を用いてＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、有機溶媒を、ロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で蒸発させ、粗材料を凍結乾燥させた。粗生成物を、ミリＱ（ｍｉｌｉＱ）Ｈ２Ｏを
用いてセッパック（ＳｅｐＰａｋ）によって精製し、白色の固体として生成物を得た（１７ｍｇ，７２％）。Ｃ４１Ｈ７４ＮＯ３１［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１０７６．４２４５、実測値は１０７６．４１２３であった。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．０８−５．０４（ｍ，２Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８８−４．８１（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．４，２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１１−３．８４（ｍ，１３Ｈ），３．８３−３．３７（ｍ，２２Ｈ），２．８５（ｔ，Ｊ＝７．５４Ｈｚ １Ｈ），１．６２−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．３８−１．２３（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１０９．５，１０９．１，１００．３，１００．２，９８．４，８４．７，８２．３，８１．０，８０．５，７９．８，７８．３，７８．２，７６．９，７６．６，７６．１，７２．１，７１．９，７０．９，７０．７，７０．６，７０．１，６９．２，６９．２，６９．０，６８．７，６８．１，６７．９，６７．９，６２．９，６２．８，６０．６，６０．４，６０．０，３９．５，２８．２，２６．６，２２．５。
化合物１４９ａ−Ｉ＊
化合物１４９ａ−Ｉ＊を、化合物４＊および図１２に示されるような対応するアルコールから化合物１４９＊と同様に調製した。
［Ａ−７−３ クレブシエラニューモニエガラクタン−ＩＩ九糖類の調製］
化合物１５０＊
２５ｍＬのＲＢＦ中にＤＣＭ：ＭｅＯＨ（４：１，３．７５ｍＬ）に化合物１４２＊（５００ｍｇ，０．３０６ｍｍｏｌ）を有する溶液に、アルゴン雰囲気下で、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（３４８ｍｇ，１．５３２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。ＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯ
Ａｃ，２：１）によって反応を観察した。反応物を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍｌ）を用いてクエンチした。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４（０．２ｇ）で乾燥させ、ろ過し、ろ液を真空下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物（ＴＬＣに基づく）を含む試験管からの真空中での溶媒の濃縮は、結果的に、無色の油（３５０ｍｇ，７７％）をもたらした。Ｃ８８Ｈ８２Ｏ２２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１５１４．５２２９、実測値は１５１４．５２５６であった。
化合物１５１＊
２５ｍＬのＲＢＦ中に、三糖類１５０＊（３４０ｍｇ，０．２２８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、アルゴン雰囲気下でレブリン酸（１１９ｍｇ，１．０２６ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１９７ｍｇ，１．０２６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（８４ｍｇ，０．６８４ｍｍｏｌ）を加えた。結果的に生じる反応混合物を室温で攪拌した。ＴＬＣによって反応を観察した。５時間後、反応は完了しなかった。反応混合物を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて希釈し、ブライン（５ｍＬ）を用いて洗浄した。水層を、ＤＣＭ（１×５ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４（０．２ｇ）で乾燥させ、ろ過し、およびろ液を真空下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、溶出液としてシクロヘキサン中にＥｔＯＡｃを有する溶液を用いて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含む試験管（ＴＬＣに基づく）からの溶媒の濃縮は、結果的に白色の油（２６０ｍｇ，７２％）を生じさせた。
化合物１５２＊
硝酸セリウムアンモニウム（１７９ｍｇ，０．３２７ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（８：１，３．３ｍＬ）に化合物１５１＊（２６０ｍｇ，０．１６４ｍｍｏｌ）を有する溶液に０℃で加えた。反応混合物を、２０分間、同じ温度で攪拌し、室温に温めた。４時間
後、さらに一定分量（ａｌｉｑｕｏｔｅ）のＣＡＮ（１００ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）を、０℃で加え、反応混合物を、同じ温度で３０分間攪拌した。３０分後、反応物を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒をロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）（水浴〜３５℃）で濃縮した。残渣を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いる自動精製システムを用いて精製した。生成物を含む試験管を合わせて、溶媒を蒸発させ、黄色の油として生成物（２０９ｍｇ，８６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ８６Ｈ８２Ｏ２３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１５０５．５１４５、実測値は１５０５．５１８６であった。
化合物１５３＊
Ｃｓ２ＣＯ３（１１５ｍｇ，０．３５４ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニルアセトイミドイルクロリド（４９ｍｇ，０．２３６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中にラクトール１５２＊（１７５ｍｇ，０．１１８ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応混合物を室温で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。２時間後、全ての出発材料は消費され、反応物をセライトに通してろ過し、ＤＣＭ（２ｍＬ）を用いて洗浄した。溶媒を蒸発させ、生成物を、シリカゲルおよび溶出液として酢酸エチル／シクロヘキサン＋１％Ｅｔ３Ｎ）を用いたカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＴＬＣによって生成物を含む試験管を合わせて、溶媒を蒸発させ、無色の油として生成物（１８８ｍｇ，９６％）を得た。
化合物１５４＊
三糖類１５３＊（６９ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）および化合物１４６＊（５０ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）を、トルエンを用いて共沸させ、真空下で１時間静置した。その後
、混合物をＤＣＭ（１．５ｍＬ）に溶解し、４ÅのＭＳを加え、３０分間攪拌した。反応混合物を、−５０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（５μＬ，０．０２８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を−１０℃に４時間にわたって温めた。トリエチルアミン（０．０３ｍＬ）の添加によって反応をクエンチした。反応混合物をろ過し、溶媒を蒸発させ、油残渣を得た。粗反応混合物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによって精製し、無色の油として生成物（５０ｍｇ，６２％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２２６Ｈ２１７Ｎ３Ｏ５５Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３８７７．４２４０、実測値は３８７７．３９４７であった。
化合物１５５＊
ＤＣＭ（３ｍＬ）中に化合物１５４＊（１００ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）を有する溶液に、酢酸（０．０４ｍＬ）に溶解されたヒドラジン水和物（８．１４μＬ）の溶液およびピリジン（０．０６ｍＬ）を加えた。結果的に生じる混合物を、室温で２時間攪拌した。反応をアセトン（０．３ｍＬ）の添加によってクエンチし、溶媒を真空下で除去し、粗生成物を得た。粗生成物を、溶出液としてｎ−ヘキサン中にＥｔＯＡｃ（０〜８０％）を有する溶液を用いた自動自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含む試験管（ＴＬＣに基づく）からの真空中での溶媒の濃縮は、白色の油（９７ｍｇ，１００％）を生じさせた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２２１Ｈ２１１Ｎ３Ｏ５３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は３７７９．３８７３、実測値は３７７９．３７０８であった。
化合物１５６＊
化合物９５＊（２５ｍｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）および化合物１５５＊（５０ｍｇ，０
．０１３ｍｍｏｌ）を、トルエンを用いて共沸させ、真空下で３０分間静置した。その後、混合物をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、４ÅのＭＳを加え、３０分間攪拌した。反応混合物を、−５０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（５μＬ，０．０２８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を−５℃に２時間にわたって温めた。トリエチルアミン（０．０３ｍＬ）の添加によって反応をクエンチした。反応混合物をろ過し、溶媒を蒸発させ、油残渣を得た。粗反応混合物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによって精製し、無色の油として生成物（２７ｍｇ，４７％）を得た。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２５５Ｈ２３７Ｎ３Ｏ６２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は４３５８．５４８３、実測値は４３５８．５であった。
化合物１５７＊
２５％ｗ／ｗメタノール中にナトリウムメトキシドを有する溶液（０．０２５ｍＬ，０．１１５ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，１．５ｍＬ）の混合物中に化合物１５６＊（２５ｍｇ，５．７７μｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応物を同じ温度で６０時間攪拌した。反応をＡｃＯＨ（０．１ｍＬ）の添加によってクエンチ、溶媒を蒸発させた。粗材料を、アイソリュート（ｉｓｏｌｕｔｅ）にロードした。１）シクロヘキサン、２）酢酸エチル、および３）ＤＣＭ中にＭｅＯＨ ５％の溶出順番で用いたシリカゲルクロマトグラフィーによる精製は、溶媒の蒸発後、白色の油として生成物（１３ｍｇ，８４％）を与えた。
化合物１５８＊
九糖類１５７＊（１３ｍｇ，４．８７μｍｏｌ）を、ＤＣＭ：ｔＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ（１
：０．８：０．２，１．４ｍＬ）の混合物に溶解した。ＰｄＣ（１２ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、水素を用いてパージし（５回）、反応を水素圧（５バール）下で、２２時間攪拌させた。その後、反応混合物を、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ（１：１）を用いてＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、有機溶媒を、ロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で蒸発させ、粗材料を凍結乾燥させた。粗生成物を、ミリＱ（ｍｉｌｉＱ）Ｈ２Ｏを用いてセッパック（ＳｅｐＰａｋ）によって精製し、白色の固体として生成物を得た（５．６ｍｇ，７４％）。Ｃ５９Ｈ１０３ＮＯ４６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１５６１．５７５１、実測値は１５６２．５７２８であった。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．２３−５．１７（ｍ，３Ｈ），５．１０−５．０６（ｍ，２Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０２−４．９４（ｍ，３Ｈ），４．３７−４．２７（ｍ，４Ｈ），４．２６−４．１３（ｍ，８Ｈ），４．１２−３．９８（ｍ，１１Ｈ），３．９８−３．６２（ｍ，３２Ｈ），３．５９−３．５２（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７５−１．６１（ｍ，４Ｈ），１．５３−１．３８（ｍ，２Ｈ）。
化合物１５８ａ−Ｉ＊
化合物１５８ａ−Ｉ＊を、化合物４＊および図１２に示されるような対応するアルコールから化合物１５８＊と同様に調製した。
［Ａ−８ クレブシエラニューモニエＯ２ａ（ガラクタン−Ｉ）糖の調製］
化合物１５９＊
化合物４４＊（３５ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）を、真空中で、別々に、乾燥トルエンを用いて共沸乾燥させた。それを、室温でＤＣＭ（２ｍＬ）中に入れ、４Åモレキュラーシーブを加え、および１０分間攪拌した。５−Ｎ−カルボキシベンジル−Ｎ−ベンジルアミノペンタノール（１８．３３ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）を加え（ニート（ｎｅａｔ））、１０分間、Ｎ２雰囲気下で、室温で攪拌した。ＲＭを−２０℃に、ドライアイス−Ａ
ＣＮ浴を用いて冷却し、ＲＭにＴＭＳＯＴｆ（１．２ｍｇ，５．６０μｍｏｌ）を加え、ＲＭを、−２０℃で５分間攪拌し、２度に１時間にわたってゆっくり温めた。ＴＬＣ分析は、新しい強いスポットの存在および供与体材料の非存在を示した。したがって、ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬ）を用いてクエンチし、層を分離した。水層を、有機層を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空中で蒸発させ、粗生成物を得て、粗生成物を、溶出液としてＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを有するシリカカラムのバイオタージを用いて精製し、無色の層として生成物を得た（２１．４ｍｇ，５５％）。
化合物１６０＊
化合物１５９＊（２１ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ−ＭｅＯＨ（２ｍＬ）に、室温で入れ、メタノール中にＮａＯＭｅを有する溶液（０．６０５ｍＬ，０．０３０２ｍｍｏｌ）を加え、１８時間攪拌を続けた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、ＳＭの非存在および極性スポットの存在を示した。したがって、ＲＭを真空中で蒸発させた。ＥＡ（５ｍＬ）および水（５ｍＬ）を用いて希釈した。ＡｃＯＨ（〜０．３ｍＬ）を用いて中性ｐＨになるまで酸性化した。ＥＡ（５ｍＬ×３）を用いて抽出した。合わせた有機物を、ブライン溶液（５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させ、淡黄色の層として粗生成物（１１．７ｍｇ，８０％）を得た。
化合物１６１＊
化合物１６０＊（１１ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ：ｔＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：１：０．２，２．２ｍＬ）の混合物に入れ、ブタノール（０．２ｍＬ）中にＰｄ／Ｃ（１ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を有する懸濁液を加え、〜１０バールのＨ２雰囲気下で、２３時間水素化した。ＲＭを、ＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、メタノール（２ｍＬ×３）、水中の５０％メタノール（２ｍＬ×３）を用いて洗浄した。ろ液を、真空下で濃縮し、無色の層を得た。１Ｈ ｎｍｒは、依然として、分子中に一つのベンジル基があ
るようにみえたので、溶媒として水およびブタノール、および〜１０ｍｇのＰｄ／Ｃを用いて、材料を再度１４時間水素化した。ＲＭを、ＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、メタノール（２ｍＬ×３）、水中の５０％メタノール（２ｍＬ×３）を用いて洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、無色の層（２．７ｍｇ，５６％）を得た。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１７Ｈ３３ＮＯ１１Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は４２８．２１３２、実測値は４２８．２０３７であった。
化合物１６２＊
化合物５４＊（５００ｍｇ，０．２５０ｍｍｏｌ）および化合物５６＊（６５１ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）の両方を、ＲＢＦに共に入れ、真空中で乾燥トルエンを用いて共沸乾燥させた。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）に室温で入れ、４Åのモレキュラーシーブを加え、３０分間攪拌した。ＲＭを、−１０度に氷−アセトン浴を用いて冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（９．２０μＬ，０．０５ｍｍｏｌ）をＲＭに加え、ＲＭを−１０℃で５分間攪拌し、ゆっくり１時間にわたって５度に温めた。ＴＬＣ分析（３０％ＥＡ／ＣＨｘ）は、反応が完了し、受容体ＳＭの非存在およびわずかに極性のスポットの存在を示した。ＲＭを、ＮａＨＣＯ３溶液（２ｍＬ）を用いて１０度でクエンチし、層を分離し、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、および真空中で蒸発させた。ＥＡ／ＣＨｘを用いたシリカカラムクロマトグラフィーによる精製は、生成物を含む分画を与え、生成物を含む分画を真空下で蒸発させて、所望の生成物（８９０ｍｇ，８９％）を産出した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
Ｃ２３５Ｈ２２０ＮａＯ５７Ｓｉ［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は４００４．３９３８、実測値は４００７．７９５であった。
化合物１６３＊
化合物１６２＊は、一般的プロトコルＢにしたがって、ＴＤＳ除去反応を受けた：
得られた白色のフワフワとした固体として生成物１６３＊（６１７ｍｇ，９７％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２２７Ｈ２０２ＮａＯ５７ ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３８６２．２８０６、実測値３８６４．８８９。
化合物１６４＊
化合物１６３＊は、一般的プロトコルＢにしたがって、２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルの存在下でイミデート１６４＊に変換された。
得られた白色のフワフワとした固体として生成物（６２５ｍｇ，定量的）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３５Ｈ２０６Ｆ３ＮＮａＯ５７ ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値４０３３．３１０１、実測値４０３７．０４３。
化合物１６５＊
化合物１６５＊を、一般的プロトコルＢにしたがって、５−アジドペンタノールおよび化合物１６４＊から得た。
得られた白色の粘着性固体として生成物（３１０ｍｇ，７９％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３２Ｈ２１２Ｎ３Ｏ５７ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３９５１．３７８３、実測値３９５４．１７５。
化合物１６５Ｌ１〜Ｌ１０＊
化合物１６５Ｌ１〜Ｌ１０＊を、一般的プロトコルＢにしたがって、グリコシル化反応によって、化合物１６４＊および対応するアルコールから調製した：
Ｌ１：
白色の固体層、１６ｍｇ、６４％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３９Ｈ２２６ＮａＯ５８＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値４０４６．４６３３、実測値４０４６．４５８。
白色の固体層、２３．４ｍｇ、９５％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３５Ｈ２１８Ｎ３Ｏ６０＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値４０４１．４１００、実測値４０４１．３７８。
白色の固体層、２３．７ｍｇ、９６％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３４Ｈ２１４ＮａＯ５９＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３９９０．３６４３、実測値３９９０．３７９。
白色の固体層、２３．９ｍｇ、９８％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３３Ｈ２１２ＮａＯ５９＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３９７６．３４８６、実測値３９７９．１５５。
白色の固体層、２２ｍｇ、８５％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２４１Ｈ２２９Ｎ３ＮａＯ６３［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値４１９５．４７０５、実測値４１９５．４３５。
白色の固体層、２４ｍｇ、９９％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３２Ｈ２１２ＮａＯ５８＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３９４８．３５３７、実測値３９５０．６３９。
白色の固体層、１６．５ｍｇ、６７％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３１Ｈ２０９Ｎ３ＮａＯ５８＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３９７５．３３９５、実測値３９７７．９１６。
白色の固体層、２１．４ｍｇ、８６％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３７Ｈ２２１Ｎ３ＮａＯ５７＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値４０４３．４３８５、実測値４０４３．４３１。
白色の固体層、２０．３ｍｇ、８３％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３２Ｈ２１０ＮａＯ５７＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３９３０．３４３２、実測値３９３３．３４９。
Ｌ１０：
白色の固体層、２４ｍｇ、９８％
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２３１Ｈ２０９ＣｌＮａＯ５８＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３９６８．２９９１、実測値３９６９．０３２。
化合物１６６＊
化合物１６５＊は、一般的プロトコルＡにしたがってメタノリシスを受けた：
白色の粘着性固体として得られた生成物（４３ｍｇ，９９％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１２０Ｈ１４７ＫＮ３Ｏ４１ ＋［Ｍ＋Ｋ］＋の計算値２３２４．９１４７、実測値２３２７．８８８。
化合物１６７＊
化合物１６６＊は、一般的プロトコルＡにしたがって水素化反応を受けた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（８ｍｇ，６４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重水）δ５．０６（ｓ，３Ｈ），４．９３（ｓ，３Ｈ），
４．９０（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３２−４．２２（ｍ，３Ｈ），４．１５−４．０６（ｍ，４Ｈ），４．０４−３．４２（ｍ，４３Ｈ），２．９１−２．７８（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｄｐ，Ｊ＝１３．９，７．２，６．６Ｈｚ，４Ｈ），１．２９（ｐ，Ｊ＝７．７，７．１Ｈｚ，２Ｈ）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５３Ｈ９４ＮＯ４１ ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１４００．５３０１、実測値１４００．５３８１。
化合物１６８＊
化合物１６５＊は、一般的プロトコルＡにしたがってＮａｐ−脱保護反応を受けた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１５３ｍｇ，８８％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２２１Ｈ２０４Ｎ３Ｏ５７＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３８１１．３１５７、実測値３８１２．０１５。
化合物１６９＊
化合物１６９＊を、一般的プロトコルＢにしたがってグリコシル化反応によって、化合物１６８＊および化合物５６＊から得た：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（４３ｍｇ，７０％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ３４０Ｈ３０７ＫＮ３Ｏ８５＋［Ｍ＋Ｋ］＋の計算値５８２９．９４３０、実測値５８３４．４７４。
化合物１７０＊
化合物１７０＊を、一般的プロトコルＢにしたがってグリコシル化反応によって、化合物１６８＊および化合物１６４＊から得た：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（１０５ｍｇ，５８％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ４４８Ｈ４０３ＫＮ３Ｏ１１３＋［Ｍ＋Ｋ］＋の計算値７６７０．５５１８、実測値７６７０．３３８。
化合物１７１＊
化合物１７０＊は、一般的プロトコルＢにしたがってメタノリシスを受けた：
白色の粘着性固体として得られた生成物（２９ｍｇ，７９％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ２２４Ｈ２７６Ｎ３Ｏ８１＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値４３０３．７５７０、実測値４３０５．０７０。
化合物１７２＊
化合物１７１＊は、一般的プロトコルＡにしたがって水素化反応を受けた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（４．８ｍｇ，７７％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重水）δ５．２７−５．１７（ｍ，７Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１９．４Ｈｚ，９Ｈ），４．４３−４．３８（ｍ，７Ｈ），４．３０−４．００（ｍ，３１Ｈ），４．００−３．５５（ｍ，６０Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６６（ｄｐ，Ｊ＝１３．４，７．３，６．６Ｈｚ，４Ｈ），１．５０−１．３６（ｍ，２Ｈ）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ１０１Ｈ１７４ＮＮａＯ８１２＋［Ｍ＋Ｎａ＋Ｈ］２＋の計算
値１３５９．４８２７、実測値１３５９．４８２０。
化合物１７３＊
化合物１７０＊は、一般的プロトコルＡにしたがってＮａｐ−脱保護反応を受けた：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（７７ｍｇ，７８％）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ Ｃ４３７Ｈ３９５Ｎ３Ｏ１１３＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値７４９２．５３３３、実測値７４９６．２０４。
化合物１７４＊
化合物１７４＊を、一般的プロトコルＢにしたがってグリコシル化反応によって、化合物１７３＊および化合物１６４＊から得た：
白色のフワフワとした固体として得られた生成物（３９ｍｇ，５７％）。
ＭＡＬＤＩ Ｃ６６４Ｈ５９５ＫＮ３Ｏ１６９＋［Ｍ＋Ｋ］＋の計算値１１３５１．７６９４、実測値１１３５５．１７１。
化合物１７５＊
化合物１７４＊は、一般的プロトコルＢにしたがってメタノリシスを受けた。
化合物１７６＊
化合物１７５＊は、一般的プロトコルＡにしたがって水素化反応を受けた。
Ｂ 複合糖質の調製および特徴づけ
ＫＰＣ合成抗原５２＊、６１＊、６６＊、６９＊、７５＊、８１＊、８８＊、９１＊、９９＊、１２０＊、１２３＊、１４９＊および１５８＊は、下記の手順に従って、免疫付与実験のための担体タンパク質ＣＲＭ１９７（ＸＸ−ＣＲＭ１９７）に、およびＥＬＩＳＡ（実施例Ｃ参照）のための被覆抗原としてのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；（ＸＸ−ＢＳＡ）に結合される。
一般的な結合プロトコル
ステップ１：ＰＮＰ−エステル合成
化合物５２＊、６１＊、６６＊、６９＊、７５＊、８１＊、８８＊、９１＊、９９＊、１２０＊、１２３＊、１４９＊または１５８＊（１ｅｑ）を、ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ−ピリジン、またはＤＭＳＯ−Ｈ２Ｏに、室温で、８ｍＬバイアル中で溶解した。これに、活性化されたビス−（４−ニトロフェニル）アジペート（２０ｅｑ）を加え、５分間攪拌した。トリエチルアミン（５０ｅｑ）を加え、反応混合物を室温で３〜５時間攪拌させた。反応混合物を、液体窒素を用いて凍結し、その後乾燥状態へと１８時間凍結乾燥させ、淡黄色に着色された粗生成物を過剰の試薬と共に得た。粗生成物を、十分な量のＣＨＣｌ３、続いてＤＣＭを用いて完全に洗浄し、過剰の試薬を除去した。固体パラ−ニトロフェニル（ＰＮＰ）エステルを乾燥させ、次のステップのために用いた。
ステップ２：タンパク質への結合
結合手順：ＮａＰｉ緩衝液中に０．１５ＭのＮａＣｌを有する溶液の５０μＬ中に５２＊、６１＊、６６＊、６９＊、７５＊、８１＊、８８＊、９１＊、９９＊、１２０＊、１２３＊、１４９＊または１５８＊のＰＮＰエステルを有する溶液を、緩衝液（〜１５０μＬ）中にＣＲＭ１９７またはＢＳＡを含む反応バイアルに滴下した。バイアルを、５０μＬの緩衝液を用いて最終的にリンスし、反応バイアルに完全に移した。したがって、バイアル中の反応量は２００μＬ以下となる。反応混合物は、色が黄色になり、反応混合物を室温で２４時間攪拌した。複合溶液を、アミコン（登録商標）ウルトラ−０．５ｍＬ遠心ろ過機に移し、６分間、２〜８℃で遠心分離した。３００μＬの緩衝液を反応バイアルに加え、リンスし、フィルターに移し、再び遠心分離した。追加の洗浄を１×ＰＢＳ溶液を用いて行い、黄色の色が無くなり、複合体が透明溶液になるまで遠心分離した。最後の洗浄後、複合体を１×ＰＢＳ溶液中で２〜８℃で保存した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣクロマトグラフィー、およびＭＡＬＤＩ分析によって、複合体を分析した。異なる抗原が１〜１５であることが明らかになった。担体上の糖の負荷は、ＭＡＬＤＩ分析を用いて複合体化タンパク質と非複合体化タンパク質との間で質量を減算することによって、明確に計算された。タンパク質含有量を、製品のプロトコルにしたがってマイクロＢＣＡ方法を用いて推定した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析
試料を、マイクロチューブ（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ ｔｕｂｅ）中で混合し、サーモサイクラーで、５分間９５℃で加熱した。５分間室温に冷却後、試料を約２．５μｇで、１０％ポリアクリルアミドゲルの各ウェルに、１０μＬのマーカーと共にロードした。試料の泳動を１２０Ｖの定電圧で１時間行った。染色を、製品指示書のとおりにゲルコード（ＧｅｌＣｏｄｅ）（商標）ブルーセーフタンパク染料（Ｂｌｕｅ Ｓａｆｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｉｎ）を用いて行った。ゲルを、脱イオン化水を用いて一晩洗浄し、ゲルドキュメンテーションシステム（ｇｅｌ ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）を用いてスキャンした（図５参照）。
複合糖質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
免疫付与研究のために使用された複合糖質を、複合体化ＣＲＭタンパク質と非複合体化ＣＲＭタンパク質との間の質量の差を観察するためにＳＥＣによって分析した。５０ｍＭ
トリス（Ｔｒｉｓ）、２０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２で試料を希釈し、東ソー ＴＳＫ Ｇ２０００カラム（ＳＷｘｌ，７．８ｍｍ×３０ｃｍ，５μｍ）および東ソー ＴＳＫゲル（登録商標）ガード（Ｇｕａｒｄ）カラム（ＳＷｘｌ，６．０ｍｍ×４ｃｍ，７μｍ）を装着したアジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）１１００ＨＰＬＣシステムで分析を行った。流速を１ｍＬ／ｍｉｎに維持した（図６参照）。
複合糖質６１＊−ＣＲＭ１９７および１５８＊−ＣＲＭ１９７の特徴づけ
免疫付与研究のために使用されたＫＰＣ抗原複合糖質６１＊−ＣＲＭ１９７および１５８＊−ＣＲＭ１９７は、結合効率および抗原量のために分析された。複合糖質のＭＡＬＤＩ分析は、非常によい結合効率を明らかにした。複合体化ＣＲＭ１９７タンパク質と非複合体化ＣＲＭ１９７タンパク質との間の質量差は、異なる複合糖質のために３〜１０抗原／ＣＲＭ１９７分子の負荷を産出した。
複合糖質を、１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＳＥＣによっても分析し、非複合体化ＣＲＭ１９７タンパク質と比較して明確な質量変化を明らかにした（図５および図６）。
Ｃ 免疫付与研究
材料：
・ＥＬＩＳＡプレート（高結合、ＥＩＡ／ＲＩＡプレート、９６ウェル、低い蒸発蓋を有する平底、会社：コスター（Ｃｏｓｔａｒ）（登録商標）３３６１）
・検出抗体：ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼ複合体（シグマ（Ｓｉｇｍａ）社、＃Ａ４９１４）およびヤギ抗−マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ペルオキシダーゼ複合体（ディアノバ（Ｄｉａｎｏｖａ）社 コード：１１５−０３５−０６８）
・ブロッキング溶液：ＰＢＳ中に１％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）
・抗体希釈液：ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ（ｗ／ｖ）
・洗浄緩衝液：ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−Ｔ）
・現像溶液：１ステップ（Ｓｔｅｐ）（商標）ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ現像液（サーモサイエンティフィック（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）社、Ｃａｔ＃：３４０２８）
・停止溶液：２Ｍ硫酸（Ｈ２ＳＯ４）
・プレートリーダー：アントス（Ａｎｔｈｏｓ）ＨＴ２
・ソフトウェア：吸光度測定のためのウィンリード（ＷｉｎＲｅａｄ）２．３６およびデータプロッティングおよび分析のためのグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）７
・アルム：水酸化アルミニウムゲルアジュバント（アルヒドロゲル（登録商標）２％）、ブレンタグ（Ｂｒｅｎｎｔａｇ）社、バッチ＃：５４４７ 使用期限：２０２０年２月
・不完全フロイントアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＩＦＡ）．インビボジェン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）社；Ｃａｔ：ｖａｃ−ｉｆａ−１０、バッチ＃：ＩＦＡ−３９−０３；使用期限：２０１９年９月
・クアンチプロ（ＱｕａｎｔｉＰｒｏ）（商標）ＢＣＡ分析キット（ＳＩＧＭＡ）製品：ＱＰＢＣＡ−１ＫＴ；ロット＃：ＳＬＢＲ７４５１Ｖ；Ｐコード：１００２２９６４６４・ミニ−プロティアン（Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ）（登録商標）ＴＧＸ（商標）ゲル−１０％、１０ウェル（３０μＬ／ウェル）対照 Ｎｒ：６４１７５７０８
・プレシジョンプラスデュアルカラー（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｌｕｓ Ｄｕａｌ Ｃｏｌｏｒ）、Ｃａｔ：１６１０３７４；対照 Ｎｒ：６４１７９８８９９
・ゲルコード（ＧｅｌＣｏｄｅ）（商標）ブルーセーフタンパク染料（Ｂｌｕｅ Ｓａｆｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｉｎ）；サーモサイエンティフィック（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）社；Ｒｅｆ：１８６０９５７；ロット＃：ＴＡ２６０２６６
・クレブシエラ ニューモニエＬＰＳ．シグマ（ＳＩＧＭＡ）−Ｌ４２６８；ロット＃：１１６Ｍ ４０５７Ｖ
方法：
１．細菌株およびＬＰＳ
ＬＰＳ（Ｏ−抗原）において異なり、莢膜を有する／有さない、クレブシエラ ニューモニエ（ＫＰＣ）株は、対応するＬＰＳを単離、および精製するために使用された。精製されたＬＰＳを、酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）における被覆抗原として使用し
た。Ｏ２ａ，ｃＬＰＳを、シグマ−アルドリッチ社から調達した。
２．免疫付与のためのワクチン製剤
複合糖質を、マウス研究のために水酸化アルミニウム（アルム）アジュバントで、およびウサギにおける免疫付与のために不完全フロイントアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＩＦＡ）で製剤化した。
２．１ アルムにおける製剤
全ての製剤を、無菌条件下で調製した。複合糖質（ＤＳ）およびＰＢＳを、５０ｍＬファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）（商標）チューブ中で、必要とされるアルムの量（０．２５ｍｇ／ｍＬ）を除いて、最終製剤量に応じて事前に計算した適切な比率で混合した。これはＤＳ−ＰＢＳ混合物を形成した。動物当たりの抗原／ＤＳ投与量を、５μｇ／１００μＬ／動物に維持した。ＤＳ−ＰＢＳ混合物を、血清学的ピペットを用いて優しく混合した（５Ｘ）。ＤＳ−ＰＢＳ混合物に、対応する量の保存アルム（１０ｍｇ／ｍＬ）を加え、１；４０の最終アルム比率、または０．０２５０ｍｇ／ｍＬとした。混合物を、５ｍＬの血清学的ピペットを用いて優しくピペッティングすることによって（２０Ｘ）すぐに混合した。ファルコン（商標）チューブに蓋をして、パラフィルム（登録商標）を用いて覆い、振とう機で、２５０ｒｐｍで、２時間、室温（ＲＴ）で混合させた。２時間のインキュベート時間後、製剤をクリーンベンチ下に置き、等分し、更なる使用まで４℃で更に保存した。
２．２ ＩＦＡにおける製剤
インビボジェン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）からの不完全フロイントアジュバントを、ウサギ免疫付与研究のためのワクチンを製剤化するために使用した。プロトコルは、製品の通りに行われた。抗原：ＩＦＡ濃度を１：１に保持した。動物当たりの抗原投与量を、５μｇ／２００μＬ／動物（１００μＬの抗原＋１００μＬのＩＦＡ）に保持した。所望の算出された量（最終免疫付与用量の５０％）でＩＦＡを１５ｍＬの滅菌ファルコン（商標）チューブに取った。算出された量（最終免疫付与用量の５０％にＰＢＳで調節された量）の希釈抗原溶液を、２０Ｇの針を装着された３ｍＬ滅菌シリンジに取った。ＤＳ溶液を、ＩＦＡを含むファルコン（商標）チューブに加え、すぐに１５秒間（５Ｘ）ボルテックスした。製剤の色は、ボルテックスをすると淡黄色から乳白色に変化し、そのことは、安定なエマルションの形成を示す。結果的に生じるワクチン製剤を、軽くボルテックスし、所望の投与量で２ｍＬの滅菌チューブに等分した。免疫付与の前に、ワクチン製剤を含むチューブをボルテックスし、その後、動物に注射した。
３．３ アルム製剤の特徴付け
アルムで製剤化された複合糖質を、製剤における最終アルム濃度、およびｐＨを決定するために特徴付けした。
３．免疫付与スケジュール
マウスおよびウサギの免疫付与を、特定病原体未感染条件下で行い、食物および水を自由に提供した。マウス（ｎ＝６）およびウサギ（ｎ＝４）を、１００μＬ／マウス、および２００μＬ／ウサギの注射量でワクチン製剤（表２）を用いて皮下に免疫付与した。マウスのための抗原量は、５μｇ／動物に保持した。ウサギのための抗原量は、５μｇ／動物に保持した。マウスおよびウサギを、０、１４、および２８日に免疫付与した。抗体力価の決定のために、マウスでは−１、７、および２２日に、ウサギでは０、７、および２１日に、それぞれ血液を採取した。３５日目に、動物を犠牲にし、血液を集めた。
４．自家抗原被覆プレートを用いた血清の酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）：
抗原によるプレートの被覆：
複合体６１＊−ＢＳＡおよび１５８＊−ＢＳＡ、並びにＬＰＳ＃１〜＃４を、被覆抗原として使用した。ＬＰＳを、１０／２０μｇ／ｍＬの濃度でイソプロパノールに溶解した。１００μＬを、各ウェルを被覆するために使用し、結果的に１〜２μｇ／ウェルの被覆濃度にした。ＬＰＳ溶液を、ウェルにロードし、滅菌ベンチ内で、室温で一晩、蒸発に曝した。複合体６１＊−ＢＳＡおよび１５８＊−ＢＳＡのために、各複合体を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４に５μｇ／ｍＬの濃度で溶解した。１００μＬを各ウェルに被覆し、４℃で一晩インキュベートし、０．５μｇ／ウェルの抗原濃度を得た。
洗浄：
一晩、抗原の吸着後、プレートを、ＰＢＳ−Ｔを用いて１Ｘ洗浄し（２００μＬ／ウェル）、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
ブロッキング：
プレートを、２００μＬの商用のブロッキング溶液を用いてブロックし、２時間室温でインキュベートした。
洗浄：
ブロッキング後、プレートを、ＰＢＳ−Ｔを用いて３Ｘ洗浄し（２００μＬ／ウェル）、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
血清の希釈およびインキュベーション：
異なる実験群の異なる時点から集められた血清（ｎ＝４ウサギ／群、またはｎ＝６マウス／群）を、抗体希釈液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）で、集められた血清の各希釈液へと希釈した。異なる実験群における１００μＬの希釈血清試料を、対応するウェルへデュプリケートで加え、２５０ｒｐｍに設定された振とう機で２時間、室温でインキュベートした。１００μＬ／ウェルの抗体希釈液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）は実験的ブランクを形成した。血清を用いてインキュベート後、プレートをＰＢＳ−Ｔを用いて４Ｘ洗浄し（２００μＬ／ウェル）、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリー
ンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
インキュベーション（検出抗体）：
対応する検出抗体、抗−ウサギＩｇＧ ＨＲＰ複合体または抗−マウスＩｇＧ ＨＲＰ複合体を、抗体希釈液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）で１：１０，０００に希釈し、１００μＬ／ウェルを加え、振とう機で、２５０ｒｐｍで１時間、室温でインキュベートした。検出抗体を用いてインキュベートした後、プレートを、ＰＢＳ−Ｔを用いて５Ｘ洗浄し（２００μＬ／ウェル）、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
基質付加：
各ウェルに、１００μＬの（４℃から室温に標準に戻された）滅菌済みのＴＭＢ（３，３，’，５，５’−テトラメチルベンジジン）基質を加え、暗室で１５分間インキュベートした。酵素反応における青色を、２ＭのＨ２ＳＯ４溶液を５０μＬ／ウェルで加えることによって停止し、結果的に黄色溶液になった。黄色溶液の吸光度を、プレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定した。
結果：
吸光度値を、グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてグラフをプロットすることによって分析した。
結果
６１＊−ＣＲＭ１９７、１５８＊−ＣＲＭ１９７、１６７＊−ＣＲＭ１９７、または１７２＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたマウスからの血清は、対応する抗原を認識する（図７参照）。血清は、対応するＫ．ニューモニエＬＰＳと交差反応もする（図８Ａおよび図８Ｂ参照）。６１＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたウサギからの血清は、構造的に関連したＫ．ニューモニエＬＰＳ Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａ，ｃ、Ｏ２ａ、およびガラクタン−ＩＩＩを認識する（図９参照）。６１＊−ＣＲＭ１９７／１５８＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたウサギからの血清は、関連するＢＳＡ複合体６１＊−ＢＳＡおよび１５８＊−ＢＳＡにおける対応するＯ−抗原を、それぞれ認識する（図１０参照）。１５８＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたウサギからの血清は、対応するＫ．ニューモニエＬＰＳを選択的に認識する（図１１参照）。
本願において提供されたデータは、本発明における複合体を用いて免疫付与後に、本発明のオリゴ糖に対して、並びにＫ．ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、およびカルバペネム耐性ＳＴ２５８の天然Ｏ−多糖に対して機能的な抗体を、ウサギおよびマウスにおいて誘発することを示す。抗体は、Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ２ａｃ、およびカルバペネム耐性ＳＴ２５８の天然Ｏ−多糖（ＬＰＳ）と交差反応し、このことは、これらの抗体がＫ．ニューモニエ細菌に結合する、およびＫ．ニューモニエ感染症に対する保護を与える可能性を示す。
ＥＬＩＳＡデータは、本発明における複合体が免疫原性であり、高い抗体力価を誘導することを更に証明する。したがって、ＥＬＩＳＡ分析は、本発明の式（Ｉ）のオリゴ糖が、ウサギおよびマウスに対して免疫原性であり、交差反応性抗体を生成することを示す。

Claims (15)

  1. 一般式（Ｉ）の糖、または一般式（Ｉ）の糖のアノマー、水和物、もしくは薬学的に許容できる塩であって、−ＥはーＮＨ２である場合、Ｌは−Ｃ３Ｈ６−でないという条件で、
    式中、
    Ｕ１は
    を表し；
    Ｕ２は
    を表し；
    Ｕ３は
    を表し；
    Ｕ４は
    を表し；
    Ｕ５は共有結合、または
    を表し；
    Ｕ６は
    を表し；
    Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ＊、およびＲ＊’は、互いに独立して、−ＨまたはＵ６を表し、ここで、Ｒ１、およびＲ＊は、同時に−Ｕ６であることはできず、並びにＲ１’およびＲ＊’は、同時に−Ｕ６であることはできず、
    Ｌは、リンカーを表し；
    Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯ−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯ−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＯＨ，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
    Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
    を表し；
    ｎは、１〜２０の整数であり；
    ｍは、０〜２０の整数であり；
    ｋは、０〜１０から選択される整数であり；
    ｘおよびｙは、互いに独立して、０または１であり；
    並びにＵ１およびＵ２が単糖であり、ｎが１である場合、同じ時点でｍ、ｘ、およびｙは０ではない、
    一般式（Ｉ）の糖、または一般式（Ｉ）の糖のアノマー、水和物、もしくは薬学的に許容できる塩。
  2. 請求項１に記載の糖であって、式中、
    Ｕ１は
    を表し；
    Ｕ２は
    を表し；
    Ｕ３は
    を表し；
    Ｕ５は共有結合、または
    を表し；
    ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、ｙ、ＬおよびＥは、請求項１に定義される通りの意味を有する、糖。
  3. 請求項１に記載の糖であって、式中、
    Ｕ１は
    を表し；
    Ｕ２は
    を表し；
    Ｕ４は
    を表し；
    Ｕ５は共有結合、または
    を表し；
    ｍは１〜１０の整数であり、
    ｋは０であり、
    ｎ、Ｕ３、ｘ、ｙ、ＬおよびＥは、請求項１に定義される通りの意味を有する、糖。
  4. 請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の糖であって、Ｌは−Ｃ３Ｈ６−でないという条件で、
    式中、
    −Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
    −Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
    −Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
    −Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表
    し；
    −Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
    ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である、糖。
  5. 請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の糖であって、式中、−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
    からなる群から選択され、
    式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，
    を表し；
    Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡＣを表す、糖。
  6. 一般式（ＩＩＩ）の複合体であって、
    式中、ｉは、２〜２５、好ましくは、２〜１８から選択される整数であり；
    −Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
    を表し；
    −Ｔ−は、
    を表し；
    ａは、１〜１０の整数を表し；
    ｂは、１〜４の整数を表し；
    ＣＰは、担体タンパク質であり；並びに
    Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５、Ｌ、ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは、請求項１に定義されるのと同じ意味を有する、
    複合体。
  7. 請求項６に記載の複合体であって、前記複合体は、式（ＩＶ）
    を有し、
    式中、
    ｉは、２〜２５、好ましくは、２〜１８から選択される整数であり；
    −Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
    を表し；
    −Ｔ−は、
    を表し；
    ａは、１〜１０の整数を表し；
    ｂは、１〜４の整数を表し；並びに
    Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５、Ｌ、ｍ、ｎ、ｋ、ｘ、およびｙは、請求項１に定義されるのと同じ意味を有する、複合体。
  8. 請求項６または請求項７に記載の複合体であって、ここで、前記複合体は、式（Ｖ−１）〜（Ｖ−１４）：
    のいずれか一つを有し、
    式中、
    Ｒ１およびＲ’は、独立して、−Ｈ、または
    を表し；
    ここで、Ｒ１およびＲ＊は、同時に
    であることはできず；
    並びに
    Ｌ、Ｅ１、Ｔ、ｉ、ｍ、ｋ、およびｎは、請求項６に定義されるのと同じ意味を有する、複合体。
  9. 請求項６〜請求項８のいずれか１項に記載の複合体であって、式中、
    −Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
    −Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
    −Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
    −Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
    −Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；並びに
    ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である、複合体。
  10. 活性成分として、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の少なくとも一つの糖および／または請求項６〜請求項９のいずれか１項に記載の少なくとも一つの複合体を、少なくとも一つの薬学的に許容できるアジュバントおよび／または賦形剤と共に含む、医薬組成物。
  11. クレブシエラ ニューモニエと関連する疾患の予防、および／または治療において使用のための、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の糖、請求項６〜請求項９のいずれか１項に記載の複合体、または請求項１０に記載の医薬組成物であって、ここで、前記疾患は、髄膜炎、尿路感染症、院内肺炎、腹腔内感染症、傷口感染、血液の感染症、骨髄炎、菌血症、敗血症、または強直性脊椎炎である、糖、複合体、または医薬組成物。
  12. 請求項１１に記載の使用のための糖、複合体、または医薬組成物であって、前記クレブシエラ ニューモニエは、Ｏ１、Ｏ２ａ、Ｏ２ａｃ、Ｏ２ａｅｈ、Ｏ２ａｆｇ、Ｏ８、およびカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエ株ＳＴ２５８を含む、または、からな
    るＯ血清型から選択される、糖、複合体、または医薬組成物。
  13. クレブシエラ ニューモニエに対する抗体の検出のための免疫学的分析において、マーカーとして使用するための、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の糖。
  14. 一般式（Ｉ）の糖の合成方法であって：
    Ａ２）二糖類Ｄ６を提供すること
    式中、Ｒ１Ｐは、Ｐ４またはＵ５ｐであり；
    Ｕ５ｐは、
    であり；
    Ｂ１’）糖Ｄ６を糖Ｄ８と反応させ
    糖Ｏ２ｂを得ること、
    式中、ｎは１であり；
    ｎは２〜２０の整数であり、
    その後、次のステップＢ２’）およびＢ３’）をｎ−１回繰り返すこと
    Ｂ２’）糖Ｄ６と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ８を除去すること；
    Ｂ３’）糖Ｄ６をステップＢ２’）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ３ｂを得ること
    式中、ｎは２〜２０の整数であり、
    任意に、
    Ｅ３）糖Ｏ３ｂの保護基Ｐ８を除去し、糖Ｏ３ｃを得ること
    、および
    Ｅ４）糖Ｏ３ｃを糖Ｍ３と反応させ、
    糖Ｏ４ｂを得ること
    あるいは
    Ｅ５）糖Ｏ３ｃを二糖類Ｄ４と反応させ
    糖Ｏ５ａを得ること
    式中、ｍは１であり、
    ｍは２〜２０の整数でり、
    その後、次のステップｅ５）およびｅ６）をｍ−１回繰り返すこと
    ｅ５）単糖Ｄ４と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ３’を除去すること；
    ｅ６）糖Ｄ４をステップｅ５）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ５ａを得ること
    式中、ｍは２〜２０の整数であり；
    あるいは
    Ｅ６）糖Ｏ３ｃを二糖類Ｄ５と反応させ
    糖Ｏ５ｂを得ること
    式中、ｍは１であり、
    ｍは１〜２０の整数であり、
    その後、次のステップｅ７）およびｅ８）をｍ−１回繰り返すこと
    ｅ７）単糖Ｄ５と反応することによって得られた糖の保護基Ｐ９’を除去すること；
    ｅ８）糖Ｄ５をステップｅ７）後に得られた糖と反応させ、糖Ｏ５ｂを得ること
    式中、ｍは２〜２０の整数であり；
    ｅ９）保護基ＰＮを除去し、結果的に生じる−ＮＨ２基を−ＮＨＡｃに変換し、糖Ｏ５ｃを得ること
    Ｆ２）糖Ｏ３ｂ、Ｏ４ｂ、Ｏ５ａ、またはＯ５ｃの全ての保護基を除去し、式（Ｉ−２）、（Ｉ−３）、（Ｉ−４）、または（Ｉ−５）の対応する糖を得ること、
    式中、Ｅｐは保護末端基であり；ＬＧ４、ＬＧ５、ＬＧ６、およびＬＧ７は、脱離基であり；ＰＮ、Ｐ１、ＰＮ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ２’、Ｐ３、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ９’、Ｐ１０、Ｐ１０’、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、保護基を表し、並びにＬ、Ｅ、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ＊、Ｒ＊’、ｍおよびｎは請求項１に定義されるのと同じ意味を有する、
    を含む、方法。
  15. 一般式（Ｉ）の糖を調製するための中間体化合物であって、
    ここで、前記中間体化合物は、一般式（Ｏ１ｂ）、（Ｏ１ｃ）、（Ｏ１ｄ）、（Ｏ２ａ）、（Ｏ２ｂ）、（Ｏ３ａ）、（Ｏ３ｂ）、（Ｏ３ｃ）、（Ｏ４ａ）、（Ｏ４ｂ）、（Ｏ５ａ）、（Ｏ５ｂ）、および（Ｏ５ｃ）のいずれか一つを有し：
    式中、ＬＧ２は脱離基を表し；Ｅｐは保護末端基であり、
    ＰＮ、Ｐ２、Ｐ２ ’、Ｐ３’、Ｐ４、Ｐ４’、Ｐ５、Ｐ５’、Ｐ７、Ｐ７’、Ｐ８、Ｐ８’、Ｐ９、Ｐ９’、Ｐ１０、Ｐ１０’、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は、保護基を表し、並びにＬ、Ｒ１Ｐ、ｍおよびｎは請求項１４に定義されるのと同じ意味を有する、
    中間体化合物。
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