JP2021176335A - 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 - Google Patents
臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021176335A JP2021176335A JP2021128087A JP2021128087A JP2021176335A JP 2021176335 A JP2021176335 A JP 2021176335A JP 2021128087 A JP2021128087 A JP 2021128087A JP 2021128087 A JP2021128087 A JP 2021128087A JP 2021176335 A JP2021176335 A JP 2021176335A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- rpe
- cell
- retinal
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0621—Eye cells, e.g. cornea, iris pigmented cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/105—Insulin-like growth factors [IGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/15—Transforming growth factor beta (TGF-β)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/155—Bone morphogenic proteins [BMP]; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone inducing factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/16—Activin; Inhibin; Mullerian inhibiting substance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/415—Wnt; Frizzeled
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/45—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from artificially induced pluripotent stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/52—Fibronectin; Laminin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本発明は、本発明がなされた時点で有効であった共同研究契約の範囲内で行われた活動の結果としてなされたものである。該共同研究契約の当事者は、アメリカ合衆国政府、国立眼科研究所によって代表される米国保健福祉省、国立衛生研究所およびCellular Dynamics International,Incである。
1.分野
本開示は、一般に、幹細胞生物学の分野に関する。より具体的には、それは、細胞療法として使用するための幹細胞由来網膜色素上皮細胞集団の効率的な産生方法に関する。
網膜は、眼の内面を覆う光感受性組織層である。網膜における視細胞(桿体または錐体のいずれか)は光に直接感受性であり、化学的光シグナルを電気的事象に変換し、これが神経インパルスをトリガーする。網膜色素上皮(RPE)は、血液網膜関門を形成する色素細胞の層である。RPE細胞は、視覚機能の維持、ならびに網膜下腔から血液へのイオン、水および代謝最終産物の輸送において重要な役割を果たす(Straussら、2005)。さらに、RPE細胞は、免疫抑制因子を分泌することによって、眼の免疫特権を確立する。RPE細胞の障害または傷害は、網膜の変性、視覚機能の喪失および失明をもたらし得る。急性および加齢黄斑変性ならびにベスト病を含むいくつかの網膜障害は、RPEの変性を伴う;したがって、細胞補充療法は、視力の保存のための可能な治療選択肢である(Buchholzら、2009)。
残念ながら、胚様体自体の産生プロセスは再現可能ではなく、効率が変動するものであり、スケーラブル(これは、RPEの商業規模産生に必要である)ではないという事実により、iPSCまたはESCなどの多能性細胞からの、すなわち胚様体の出発集団からのルーチンかつ再現性があるRPE産生は困難である。網膜色素上皮(RPE)細胞集団を得るための方法であって、胚様体を使用する必要性を回避し、その代わりに、胚様体を使用するのではなく、多能性幹細胞の細胞懸濁物集団、好ましくは単一細胞懸濁物を用いる方法が開示される。ある特定の実施形態において、多能性幹細胞の出発細胞集団は、例えば、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞であり得る。
ヒト網膜色素上皮(RPE)細胞を産生するための方法であって、
a)本質的に単一細胞に解離するヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を含む出発集団を得る工程;
b)網膜誘導培地中で該iPSCを培養して、網膜系細胞への該細胞の分化を開始させる工程;
c)網膜分化培地中で該網膜系細胞をさらに培養して、該網膜系細胞をさらに分化させる工程;
d)網膜培地中で該細胞を培養して、分化RPE細胞を形成する工程;および
e)RPE成熟培地中で該RPE細胞を培養し、それにより、ヒトRPE細胞を産生する工程
を含み、
ここで、該方法が胚様体の形成を含まない、方法。
[本発明1002]
工程(b)の前記iPSCをマトリックス上で培養する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記マトリックスが少なくとも1つの組換え細胞接着タンパク質を含む、本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記少なくとも1つの細胞接着タンパク質がラミニン、ビトロネクチンまたはフィブロネクチンである、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記少なくとも1つの細胞接着タンパク質がヒトのものである、本発明1003または1004の方法。
[本発明1006]
前記網膜誘導培地が、WNT経路阻害剤、TGFβ経路阻害剤、BMP経路阻害剤およびインスリン成長因子1(IGF1)を含む、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記網膜分化培地が、WNT経路阻害剤、TGFβ経路阻害剤、BMP経路阻害剤、MEK阻害剤およびIGF1を含む、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
工程(e)に続いて前記RPE細胞を解離し、該RPE細胞を再播種し、MEK阻害剤を含む前記RPE成熟培地中で該RPE細胞を培養することをさらに含む、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
前記RPE細胞を解離し、該RPE細胞を前記RPE成熟培地中の分解性足場上に再播種することをさらに含む、本発明1008の方法。
[本発明1010]
少なくとも1つの一次繊毛インデューサーを含む前記RPE成熟培地中で前記RPE細胞を培養し、それにより、成熟RPE細胞を産生することをさらに含む、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
前記少なくとも1つの一次繊毛インデューサーがプロスタグランジンE2(PGE2)またはアフィジコリンである、本発明1010の方法。
[本発明1012]
N−(6−メチル−2−ベンゾチアゾリル)−2−[(3,4,6,7−テトラヒドロ−4−オキソ−3−フェニルチエノ[3,2−d]ピリミジン−2−イル)チオ]−アセトアミド(IWP2)および/または4−(1,3,3a,4,7,7a−ヘキサヒドロ−1,3−ジオキソ−4,7−メタノ−2H−イソインドール−2−イル)−N−8−キノリニル−ベンズアミド(endo−IWR1)を含む前記RPE成熟培地中で前記RPE細胞を培養することをさらに含む、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1013]
前記RPE細胞を凍結保存することをさらに含む、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
工程(a)のiPSCの前記出発集団が、単一細胞に解離したプレコンフルエント細胞である、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1015]
工程(b)の前記iPSCを、約5,000〜40,000個の細胞/cm2の初期細胞密度で培養する、本発明1001〜1014のいずれかの方法。
[本発明1016]
フィーダー層を用いずに前記iPSCを培養する、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
十分に定義された培養培地中で前記iPSCを培養する、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1018]
ゼノフリー培養培地中で前記iPSCを培養する、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1019]
前記WNT経路阻害剤が、N−(2−アミノエチル)−5−クロロイソキノリン−8−スルホンアミドジヒドロクロリド(CKI−7)、N−(6−メチル−2−ベンゾチアゾリル)−2−[(3,4,6,7−テトラヒドロ−4−オキソ−3−フェニルチエノ[3,2−d]ピリミジン−2−イル)チオ]−アセトアミド(IWP2)、N−(6−メチル−2−ベンゾチアゾリル)−2−[(3,4,6,7−テトラヒドロ−3−(2−メトキシフェニル)−4−オキソチエノ[3,2−d]ピリミジン−2−イル)チオ]−アセトアミド(IWP4)、2−フェノキシ安息香酸−[(5−メチル−2−フラニル)メチレン]ヒドラジド(PNU74654)2,4−ジアミノ−キナゾリン、ケルセチン、3,5,7,8−テトラヒドロ−2−[4−(トリフルオロメチル)フェニル]−4H−チオピラノ[4,3−d]ピリミジン−4−オン(XAV939)、2,5−ジクロロ−N−(2−メチル−4−ニトロフェニル)ベンゼンスルホンアミド(FH535)、N−[4−[2−エチル−4−(3−メチルフェニル)−5−チアゾリル]−2−ピリジニル]ベンズアミド(TAK715)、Dickkopf関連タンパク質1(DKK1)または分泌型Frizzled関連タンパク質(SFRP1)1である、本発明1006〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
前記TGFβ経路阻害剤が、4−[4−(1,3−ベンゾジオキソール−5−イル)−5−(2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−2−イル]ベンズアミド(SB431542)、6−[2−(1,1−ジメチルエチル)−5−(6−メチル−2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−4−イル]キノキサリン(SB525334)、2−(5−ベンゾ[1,3]ジオキソール−5−イル−2−イエリ−ブチル−3H−イミダゾール−4−イル)−6−メチルピリジン塩酸塩水和物(SB−505124)、4−(5−ベンゾール[1,3]ジオキソール−5−イル−4−ピリジン−2−イル−1H−イミダゾール−2−イル)−ベンズアミド水和物、4−[4−(1,3−ベンゾジオキソール−5−イル)−5−(2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−2−イル]−ベンズアミド水和物、左右決定因子(Lefty)、3−(6−メチル−2−ピリジニル)−N−フェニル−4−(4−キノリニル)−1H−ピラゾール−1−カルボチオアミド(A83−01)、4−[4−(2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾジオキシン−6−イル)−5−(2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−2−イル]ベンズアミド(D4476)、4−[4−[3−(2−ピリジニル)−1H−ピラゾール−4−イル]−2−ピリジニル]−N−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−ベンズアミド(GW788388)、4−[3−(2−ピリジニル)−1H−ピラゾール−4−イル]−キノリン(LY364847)、4−[2−フルオロ−5−[3−(6−メチル−2−ピリジニル)−1H−ピラゾール−4−イル]フェニル]−1H−ピラゾール−1−エタノール(R268712)または2−(3−(6−メチルピリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−1,5−ナフチリジン(RepSox)である、本発明1006〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記MEK阻害剤が、N−[(2R)−2,3−ジヒドロキシプロポキシ]−3,4−ジフルオロ−2−[(2−フルオロ−4−ヨードフェニル)アミノ]−ベンズアミド(PD0325901)、N−[3−[3−シクロプロピル−5−(2−フルオロ−4−ヨードアニリノ)−6,8−ジメチル−2,4,7−トリオキソピリド[4,3−d]ピリミジン−1−イル]フェニル]アセトアミド(GSK1120212)、6−(4−ブロモ−2−フルオロアニリノ)−7−フルオロ−N−(2−ヒドロキシエトキシ)−3−メチルベンゾイミダゾール−5−カルボキサミド(MEK162)、N−[3,4−ジフルオロ−2−(2−フルオロ−4−ヨードアニリノ)−6−メトキシフェニル]−1−(2,3−ジヒドロキシプロピル)シクロプロパン−1−スルホンアミド(RDEA119)または6−(4−ブロモ−2−クロロアニリノ)−7−フルオロ−N−(2−ヒドロキシエトキシ)−3−メチルベンゾイミダゾール−5−カルボキサミド(AZD6244)である、本発明1007〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
前記BMP経路阻害剤が、4−(6−(4−(ピペラジン−1−イル)フェニル)ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル)キノリンヒドロクロリド(LDN193189)、6−[4−[2−(1−ピペリジニル)エトキシ]フェニル]−3−(4−ピリジニル)−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジンジヒドロクロリド(ドルソモルフィン)、4−[6−[4−(1−メチルエトキシ)フェニル]ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]−キノリン(DMH1)、4−[6−[4−[2−(4−モルホリニル)エトキシ]フェニル]ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]キノリン(DMH−2)または5−[6−(4−メトキシフェニル)ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]キノリン(ML347)である、本発明1006〜1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
前記網膜誘導培地中の、前記BMP経路阻害剤がLDN193189である、本発明1006〜1021のいずれかの方法。
[本発明1024]
前記網膜分化培地中の、前記BMP経路阻害剤がLDN193189であり、前記MEK阻害剤がPD0325901である、本発明1007〜1023のいずれかの方法。
[本発明1025]
iPSCの前記出発集団が、それを必要とする被験体に対してMHCハプロタイプがマッチしている、本発明1001〜1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
iPSCの前記出発集団が、少なくとも1つのHLA対立遺伝子についてホモ接合性である、本発明1001〜1025のいずれかの方法。
[本発明1027]
前記少なくとも1つのHLA対立遺伝子がHLA−A、HLA−BまたはHLA−DRである、本発明1026の方法。
[本発明1028]
ヒト網膜色素上皮(RPE)細胞を産生するための方法であって、
a)十分に定義された培地中で本質的に単一細胞に解離するヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を含む出発集団を得る工程;
b)LDN193189、CKI−7およびSB431542を含む網膜誘導培地中のラミニン上で該iPSCを培養して、網膜系細胞への該細胞の分化を開始させる工程;
c)LDN193189、CKI−7、SB431542およびPD0325901を含む網膜分化培地中で該網膜系細胞をさらに培養して、該網膜系細胞をさらに分化させる工程;
d)ニコチンアミドおよびアクチビンAを含む網膜培地中で該細胞を培養して、分化RPE細胞を形成する工程;ならびに
e)RPE成熟培地中で該RPE細胞を培養し、それにより、ヒトRPE細胞を産生する工程
を含み、
ここで、該方法が胚様体の形成を含まない、方法。
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになる。しかしながら、この詳細な説明から、本発明の精神内および範囲内の様々な変更および改変が当業者に明らかになるという理由で、詳細な説明および具体的な例が、本発明の好ましい実施形態を示すが説明という目的でのみ与えられることが理解されるべきである。
本開示の特定の態様は、多能性幹細胞の出発細胞懸濁物、好ましくは、多能性幹細胞の本質的に単一細胞懸濁物からRPE細胞集団を産生するための方法を提供することによって、現状技術に関するいくつかの主要な問題を克服する。RPE細胞は、ES細胞およびiPSC細胞などの多能性幹細胞から誘導され得る;しかしながら、現在の方法は、胚様体の出発集団に依存する。いくつかの実施形態において、本開示は、胚様体を使用せずに、多能性幹細胞(PSC)を機能的成熟RPE細胞に分化させる高効率かつ再現性がある方法を提供する。さらなる実施形態および利点は、以下に記載されている。
I.定義
II.多能性幹細胞
A.胚性幹細胞
B.人工多能性幹細胞
1.MHCハプロタイプ一致
2.エピソームベクター
C.体細胞核移植
III.網膜色素上皮細胞
A.PSCの胚様体からのRPE細胞の誘導
B.実質的に単一細胞PSCからのRPE細胞の誘導
a.分化培地
網膜誘導培地
網膜分化培地
網膜培地
RPE成熟培地
b.RPE細胞の成熟
c.RPE細胞の凍結保存
d.阻害剤
WNT経路阻害剤
BMP経路阻害剤
TGFβ経路阻害剤
MEK阻害剤
bFGF阻害剤
IV.網膜色素上皮細胞の使用
A.試験化合物のスクリーニング
B.治療および移植
pana vitrectomy)を行い、続いて細胞を、網膜小開口部を介して網膜下腔に送達するか、または直接注射することによって行う。RPE細胞は、細胞懸濁物の形態で標的部位に導入され得るか、マトリックス、例えば細胞外マトリックス上に接着され得るか、または生分解性ポリマーなどの基材上に提供され得る。RPE細胞はまた、光受容体を有する網膜細胞などの他の細胞とともに移植され得る(共移植)。したがって、本明細書中に開示される方法によって得られるRPE細胞を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、これらのRPE細胞は、プロモーターおよびマーカーをコードする核酸に作動可能に連結されたチロシナーゼエンハンサーを含む。他の実施形態において、RPE細胞はまた、第2のマーカーをコードする核酸に作動可能に連結された第2の構成的プロモーターを含む。
C.商業目的、治療目的および研究目的のための配布
V.キット
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含められる。以下の実施例に開示される技法は、本発明の実施において十分に機能すると本発明者らによって発見された技法であり、ゆえに、それを実施するための好ましい形式を構成すると考えられ得ることは、当業者に認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に鑑みて、開示される特定の実施形態において多くの変更が行われ得、その変更によって、本発明の精神および範囲から逸脱することなくなおも同様または類似の結果を得ることができることを認識するべきである。
実施例1−出発多能性幹細胞集団の調製
実施例2−RPE細胞へのiPSCの分化
実施例3−RPE細胞の成熟
実施例4−RPE細胞の凍結保存
実施例5−混入非RPE細胞のMACS枯渇ならびにCD24、CD56および/またはCD90枯渇によるRPE細胞の出発集団の富化
実施例6−RPE富化細胞集団の特性評価のためのフローサイトメトリー純度アッセイ
実施例7−RPE細胞の分化のための代替方法
実施例8−RPE細胞の分化のための代替方法
実施例9−成熟RPE細胞の機能性
実施例10−RPE分化方法の再現性
参照文献
以下の参照文献は、例示的方法の詳細または本明細書に記載のものに補足する他の詳細を提供する範囲で、特に本明細書において参考として援用される。
Claims (28)
- ヒト網膜色素上皮(RPE)細胞を産生するための方法であって、
a)本質的に単一細胞に解離するヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を含む出発集団を得る工程;
b)網膜誘導培地中で該iPSCを培養して、網膜系細胞への該細胞の分化を開始させる工程;
c)網膜分化培地中で該網膜系細胞をさらに培養して、該網膜系細胞をさらに分化させる工程;
d)網膜培地中で該細胞を培養して、分化RPE細胞を形成する工程;および
e)RPE成熟培地中で該RPE細胞を培養し、それにより、ヒトRPE細胞を産生する工程
を含み、
ここで、該方法が胚様体の形成を含まない、方法。 - 工程(b)の前記iPSCをマトリックス上で培養する、請求項1に記載の方法。
- 前記マトリックスが少なくとも1つの組換え細胞接着タンパク質を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの細胞接着タンパク質がラミニン、ビトロネクチンまたはフィブロネクチンである、請求項3に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの細胞接着タンパク質がヒトのものである、請求項3または4に記載の方法。
- 前記網膜誘導培地が、WNT経路阻害剤、TGFβ経路阻害剤、BMP経路阻害剤およびインスリン成長因子1(IGF1)を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記網膜分化培地が、WNT経路阻害剤、TGFβ経路阻害剤、BMP経路阻害剤、MEK阻害剤およびIGF1を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(e)に続いて前記RPE細胞を解離し、該RPE細胞を再播種し、MEK阻害剤を含む前記RPE成熟培地中で該RPE細胞を培養することをさらに含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記RPE細胞を解離し、該RPE細胞を前記RPE成熟培地中の分解性足場上に再播種することをさらに含む、請求項8に記載の方法。
- 少なくとも1つの一次繊毛インデューサーを含む前記RPE成熟培地中で前記RPE細胞を培養し、それにより、成熟RPE細胞を産生することをさらに含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの一次繊毛インデューサーがプロスタグランジンE2(PGE2)またはアフィジコリンである、請求項10に記載の方法。
- N−(6−メチル−2−ベンゾチアゾリル)−2−[(3,4,6,7−テトラヒドロ−4−オキソ−3−フェニルチエノ[3,2−d]ピリミジン−2−イル)チオ]−アセトアミド(IWP2)および/または4−(1,3,3a,4,7,7a−ヘキサヒドロ−1,3−ジオキソ−4,7−メタノ−2H−イソインドール−2−イル)−N−8−キノリニル−ベンズアミド(endo−IWR1)を含む前記RPE成熟培地中で前記RPE細胞を培養することをさらに含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記RPE細胞を凍結保存することをさらに含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(a)のiPSCの前記出発集団が、単一細胞に解離したプレコンフルエント細胞である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(b)の前記iPSCを、約5,000〜40,000個の細胞/cm2の初期細胞密度で培養する、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- フィーダー層を用いずに前記iPSCを培養する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 十分に定義された培養培地中で前記iPSCを培養する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- ゼノフリー培養培地中で前記iPSCを培養する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記WNT経路阻害剤が、N−(2−アミノエチル)−5−クロロイソキノリン−8−スルホンアミドジヒドロクロリド(CKI−7)、N−(6−メチル−2−ベンゾチアゾリル)−2−[(3,4,6,7−テトラヒドロ−4−オキソ−3−フェニルチエノ[3,2−d]ピリミジン−2−イル)チオ]−アセトアミド(IWP2)、N−(6−メチル−2−ベンゾチアゾリル)−2−[(3,4,6,7−テトラヒドロ−3−(2−メトキシフェニル)−4−オキソチエノ[3,2−d]ピリミジン−2−イル)チオ]−アセトアミド(IWP4)、2−フェノキシ安息香酸−[(5−メチル−2−フラニル)メチレン]ヒドラジド(PNU74654)2,4−ジアミノ−キナゾリン、ケルセチン、3,5,7,8−テトラヒドロ−2−[4−(トリフルオロメチル)フェニル]−4H−チオピラノ[4,3−d]ピリミジン−4−オン(XAV939)、2,5−ジクロロ−N−(2−メチル−4−ニトロフェニル)ベンゼンスルホンアミド(FH535)、N−[4−[2−エチル−4−(3−メチルフェニル)−5−チアゾリル]−2−ピリジニル]ベンズアミド(TAK715)、Dickkopf関連タンパク質1(DKK1)または分泌型Frizzled関連タンパク質(SFRP1)1である、請求項6〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TGFβ経路阻害剤が、4−[4−(1,3−ベンゾジオキソール−5−イル)−5−(2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−2−イル]ベンズアミド(SB431542)、6−[2−(1,1−ジメチルエチル)−5−(6−メチル−2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−4−イル]キノキサリン(SB525334)、2−(5−ベンゾ[1,3]ジオキソール−5−イル−2−イエリ−ブチル−3H−イミダゾール−4−イル)−6−メチルピリジン塩酸塩水和物(SB−505124)、4−(5−ベンゾール[1,3]ジオキソール−5−イル−4−ピリジン−2−イル−1H−イミダゾール−2−イル)−ベンズアミド水和物、4−[4−(1,3−ベンゾジオキソール−5−イル)−5−(2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−2−イル]−ベンズアミド水和物、左右決定因子(Lefty)、3−(6−メチル−2−ピリジニル)−N−フェニル−4−(4−キノリニル)−1H−ピラゾール−1−カルボチオアミド(A83−01)、4−[4−(2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾジオキシン−6−イル)−5−(2−ピリジニル)−1H−イミダゾール−2−イル]ベンズアミド(D4476)、4−[4−[3−(2−ピリジニル)−1H−ピラゾール−4−イル]−2−ピリジニル]−N−(テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル)−ベンズアミド(GW788388)、4−[3−(2−ピリジニル)−1H−ピラゾール−4−イル]−キノリン(LY364847)、4−[2−フルオロ−5−[3−(6−メチル−2−ピリジニル)−1H−ピラゾール−4−イル]フェニル]−1H−ピラゾール−1−エタノール(R268712)または2−(3−(6−メチルピリジン−2−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−1,5−ナフチリジン(RepSox)である、請求項6〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記MEK阻害剤が、N−[(2R)−2,3−ジヒドロキシプロポキシ]−3,4−ジフルオロ−2−[(2−フルオロ−4−ヨードフェニル)アミノ]−ベンズアミド(PD0325901)、N−[3−[3−シクロプロピル−5−(2−フルオロ−4−ヨードアニリノ)−6,8−ジメチル−2,4,7−トリオキソピリド[4,3−d]ピリミジン−1−イル]フェニル]アセトアミド(GSK1120212)、6−(4−ブロモ−2−フルオロアニリノ)−7−フルオロ−N−(2−ヒドロキシエトキシ)−3−メチルベンゾイミダゾール−5−カルボキサミド(MEK162)、N−[3,4−ジフルオロ−2−(2−フルオロ−4−ヨードアニリノ)−6−メトキシフェニル]−1−(2,3−ジヒドロキシプロピル)シクロプロパン−1−スルホンアミド(RDEA119)または6−(4−ブロモ−2−クロロアニリノ)−7−フルオロ−N−(2−ヒドロキシエトキシ)−3−メチルベンゾイミダゾール−5−カルボキサミド(AZD6244)である、請求項7〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記BMP経路阻害剤が、4−(6−(4−(ピペラジン−1−イル)フェニル)ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル)キノリンヒドロクロリド(LDN193189)、6−[4−[2−(1−ピペリジニル)エトキシ]フェニル]−3−(4−ピリジニル)−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジンジヒドロクロリド(ドルソモルフィン)、4−[6−[4−(1−メチルエトキシ)フェニル]ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]−キノリン(DMH1)、4−[6−[4−[2−(4−モルホリニル)エトキシ]フェニル]ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]キノリン(DMH−2)または5−[6−(4−メトキシフェニル)ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン−3−イル]キノリン(ML347)である、請求項6〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記網膜誘導培地中の、前記BMP経路阻害剤がLDN193189である、請求項6〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記網膜分化培地中の、前記BMP経路阻害剤がLDN193189であり、前記MEK阻害剤がPD0325901である、請求項7〜23のいずれか一項に記載の方法。
- iPSCの前記出発集団が、それを必要とする被験体に対してMHCハプロタイプがマッチしている、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
- iPSCの前記出発集団が、少なくとも1つのHLA対立遺伝子についてホモ接合性である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのHLA対立遺伝子がHLA−A、HLA−BまたはHLA−DRである、請求項26に記載の方法。
- ヒト網膜色素上皮(RPE)細胞を産生するための方法であって、
a)十分に定義された培地中で本質的に単一細胞に解離するヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を含む出発集団を得る工程;
b)LDN193189、CKI−7およびSB431542を含む網膜誘導培地中のラミニン上で該iPSCを培養して、網膜系細胞への該細胞の分化を開始させる工程;
c)LDN193189、CKI−7、SB431542およびPD0325901を含む網膜分化培地中で該網膜系細胞をさらに培養して、該網膜系細胞をさらに分化させる工程;
d)ニコチンアミドおよびアクチビンAを含む網膜培地中で該細胞を培養して、分化RPE細胞を形成する工程;ならびに
e)RPE成熟培地中で該RPE細胞を培養し、それにより、ヒトRPE細胞を産生する工程
を含み、
ここで、該方法が胚様体の形成を含まない、方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023146145A JP2023162441A (ja) | 2015-09-08 | 2023-09-08 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562215579P | 2015-09-08 | 2015-09-08 | |
US62/215,579 | 2015-09-08 | ||
JP2018512373A JP6983762B2 (ja) | 2015-09-08 | 2016-09-07 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018512373A Division JP6983762B2 (ja) | 2015-09-08 | 2016-09-07 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023146145A Division JP2023162441A (ja) | 2015-09-08 | 2023-09-08 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021176335A true JP2021176335A (ja) | 2021-11-11 |
JP2021176335A5 JP2021176335A5 (ja) | 2022-06-03 |
Family
ID=56936541
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018512373A Active JP6983762B2 (ja) | 2015-09-08 | 2016-09-07 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
JP2021128087A Pending JP2021176335A (ja) | 2015-09-08 | 2021-08-04 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
JP2023146145A Pending JP2023162441A (ja) | 2015-09-08 | 2023-09-08 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018512373A Active JP6983762B2 (ja) | 2015-09-08 | 2016-09-07 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023146145A Pending JP2023162441A (ja) | 2015-09-08 | 2023-09-08 | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20190169569A1 (ja) |
EP (2) | EP3347456B1 (ja) |
JP (3) | JP6983762B2 (ja) |
KR (1) | KR20180042437A (ja) |
CN (2) | CN108473962B (ja) |
AU (2) | AU2016321170B2 (ja) |
CA (1) | CA2997952A1 (ja) |
DK (1) | DK3347456T3 (ja) |
WO (1) | WO2017044483A1 (ja) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2997763A1 (en) | 2015-09-08 | 2017-03-16 | Cellular Dynamics International, Inc. | Macs-based purification of stem cell-derived retinal pigment epithelium |
EP3347456B1 (en) * | 2015-09-08 | 2023-12-27 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Method for reproducible differentiation of clinical-grade retinal pigment epithelium cells |
JP6976939B2 (ja) | 2015-10-20 | 2021-12-08 | フジフィルム セルラー ダイナミクス,インコーポレイテッド | 遺伝的プログラミングによる多系統造血前駆細胞の作製 |
US11717298B2 (en) | 2016-11-09 | 2023-08-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Tissue clamp and implantation method |
US11458225B2 (en) | 2016-11-09 | 2022-10-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | 3D vascularized human ocular tissue for cell therapy and drug discovery |
KR20230126745A (ko) | 2016-12-07 | 2023-08-30 | 메이오 파운데이션 포 메디칼 에쥬케이션 앤드 리써치 | 망막 색소 상피 이식을 위해 피브린 지지체를 사용하는 방법 및 물질 |
MX2019014503A (es) * | 2017-06-05 | 2020-01-23 | Mayo Found Medical Education & Res | Metodos y materiales para cultivar, proliferar, y diferenciar celulas madre. |
PL236298B1 (pl) * | 2017-09-21 | 2020-12-28 | Univ Jagiellonski | Sposób otrzymywania upigmentowanych komórek in vitro poprzez różnicowanie ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych |
CN108531443A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-09-14 | 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 | 小分子诱导多能性干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的方法 |
WO2019204817A1 (en) * | 2018-04-20 | 2019-10-24 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Method for differentiation of ocular cells and use thereof |
SG11202104401RA (en) * | 2018-11-19 | 2021-05-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary | Biodegradable tissue replacement implant and its use |
US20220233602A1 (en) * | 2019-07-05 | 2022-07-28 | Novo Nordisk A/S | Generation of neural stem cell lines derived from human pluripotent stem cells |
CA3156678A1 (en) | 2019-10-09 | 2021-04-15 | Bluerock Therapeutics Lp | CELLS WITH SUSTAINED TRANSGENIC EXPRESSION |
KR102224115B1 (ko) | 2020-01-10 | 2021-03-09 | 경북대학교병원 | 3차원 바이오프린팅 기술을 이용한 망막 세포 배양용 구조체 및 이의 활용 |
EP4314249A1 (en) | 2021-03-25 | 2024-02-07 | Bluerock Therapeutics LP | Methods for obtaining induced pluripotent stem cells |
CN115261301A (zh) * | 2021-04-30 | 2022-11-01 | 深圳华大生命科学研究院 | 一种视网膜色素上皮细胞体外诱导及培养方法 |
WO2022251499A1 (en) * | 2021-05-28 | 2022-12-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods to generate macular, central and peripheral retinal pigment epithelial cells |
CN115873797A (zh) * | 2021-09-29 | 2023-03-31 | 北京干细胞与再生医学研究院 | 一种视网膜色素上皮细胞的扩增培养基及培养方法 |
WO2023196577A1 (en) * | 2022-04-08 | 2023-10-12 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | Methods for production of ipscs |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20130224156A1 (en) * | 2012-02-29 | 2013-08-29 | Riken | Method of producing human retinal pigment epithelial cells |
WO2014121077A2 (en) * | 2013-02-01 | 2014-08-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | METHOD FOR GENERATING RETINAL PIGMENT EPITHELIUM (RPE) CELLS FROM INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS (IPSCs) |
WO2015087231A1 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Pfizer Limited | Method for producing retinal pigment epithelial cells |
JP6983762B2 (ja) * | 2015-09-08 | 2021-12-17 | ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ, アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー, デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG49267A1 (en) | 1989-08-14 | 1998-05-18 | Photogenesis Inc | Surgical instrument and cell isolation and transplantation |
US6045791A (en) | 1992-03-06 | 2000-04-04 | Photogenesis, Inc. | Retinal pigment epithelium transplantation |
US6416998B1 (en) | 1992-09-02 | 2002-07-09 | Baylor College Of Medicine | Plasmid encoding a modified steroid hormone |
US5843780A (en) | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5763270A (en) | 1995-06-07 | 1998-06-09 | Genemedicine, Inc. | Plasmid for delivery of nucleic acids to cells and methods of use |
WO1998030679A1 (en) | 1997-01-10 | 1998-07-16 | Life Technologies, Inc. | Embryonic stem cell serum replacement |
US6458589B1 (en) * | 2000-04-27 | 2002-10-01 | Geron Corporation | Hepatocyte lineage cells derived from pluripotent stem cells |
WO2001088104A2 (en) | 2000-05-17 | 2001-11-22 | Geron Corporation | Neural progenitor cell populations |
US20030211603A1 (en) | 2001-08-14 | 2003-11-13 | Earp David J. | Reprogramming cells for enhanced differentiation capacity using pluripotent stem cells |
US7989425B2 (en) | 2002-09-27 | 2011-08-02 | Genexine Inc. | Vaccine enhancing the protective immunity to hepatitis c virus using plasmid DNA and recombinant adenovirus |
US7682828B2 (en) | 2003-11-26 | 2010-03-23 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for reprogramming somatic cells |
EP1781776A2 (en) * | 2004-07-29 | 2007-05-09 | Stem Cell Innovations, Inc. | Differentiation of stem cells |
US7442548B2 (en) | 2004-09-08 | 2008-10-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Culturing human embryonic stem cells in medium containing pipecholic acid and gamma amino butyric acid |
EP2186823A1 (en) | 2005-11-14 | 2010-05-19 | Merial Limited | Gene therapy for renal failure |
MX2008007654A (es) | 2005-12-13 | 2008-09-26 | Univ Kyoto | Factor de reprogramacion nuclear. |
US8278104B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-10-02 | Kyoto University | Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2 |
US8129187B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-03-06 | Kyoto University | Somatic cell reprogramming by retroviral vectors encoding Oct3/4. Klf4, c-Myc and Sox2 |
AU2008231020B2 (en) | 2007-03-23 | 2013-09-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Somatic cell reprogramming |
US9683232B2 (en) | 2007-12-10 | 2017-06-20 | Kyoto University | Efficient method for nuclear reprogramming |
CN101981446B (zh) | 2008-02-08 | 2016-03-09 | 医疗探索公司 | 用于使用支持向量机分析流式细胞术数据的方法和系统 |
ES2587395T3 (es) | 2008-06-04 | 2016-10-24 | Cellular Dynamics International, Inc. | Procedimientos para la producción de células IPS usando un enfoque no vírico |
EP3450545B1 (en) | 2008-10-24 | 2023-08-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Pluripotent stem cells obtained by non-viral reprogramming |
EP2548950B1 (en) | 2009-06-05 | 2017-10-25 | Cellular Dynamics International, Inc. | Reprogramming T cells and hematopoietic cells |
CA2770412C (en) | 2009-08-07 | 2018-09-11 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
US9359592B2 (en) * | 2009-10-06 | 2016-06-07 | Snu R&Db Foundation | Method for differentiation into retinal cells from stem cells |
US9005967B2 (en) | 2010-01-22 | 2015-04-14 | Kyoto University | Myc variants improve induced pluripotent stem cell generation efficiency |
US8278620B2 (en) | 2010-05-03 | 2012-10-02 | Thermo Finnigan Llc | Methods for calibration of usable fragmentation energy in mass spectrometry |
CN103003416B (zh) | 2010-06-15 | 2016-11-16 | 细胞动力学国际有限公司 | 从小体积的外周血产生诱导性多潜能干细胞 |
JP5896360B2 (ja) * | 2010-07-21 | 2016-04-13 | 国立大学法人京都大学 | ヒト多能性幹細胞から中間中胚葉細胞への分化誘導方法 |
EP2702135B1 (en) | 2011-04-29 | 2019-04-17 | University of Southern California | Method of cryopreservation of stem cell-derived retinal pigment epithelial cells on polymeric substrate |
WO2013151186A1 (ja) * | 2012-04-06 | 2013-10-10 | 国立大学法人京都大学 | エリスロポエチン産生細胞の誘導方法 |
CN105814192A (zh) * | 2013-10-09 | 2016-07-27 | 加利福尼亚大学董事会 | 哺乳动物视网膜干细胞产生方法和应用 |
AU2014345110B2 (en) * | 2013-11-11 | 2021-01-14 | Riken | Method for producing retinal pigment epithelial cells |
US20150159134A1 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-11 | Pfizer Limited | Method for producing retinal pigment epithelial cells |
-
2016
- 2016-09-07 EP EP16766444.0A patent/EP3347456B1/en active Active
- 2016-09-07 EP EP23214033.5A patent/EP4345160A2/en active Pending
- 2016-09-07 US US15/758,314 patent/US20190169569A1/en not_active Abandoned
- 2016-09-07 AU AU2016321170A patent/AU2016321170B2/en active Active
- 2016-09-07 CN CN201680060872.4A patent/CN108473962B/zh active Active
- 2016-09-07 CA CA2997952A patent/CA2997952A1/en active Pending
- 2016-09-07 WO PCT/US2016/050543 patent/WO2017044483A1/en active Application Filing
- 2016-09-07 KR KR1020187009942A patent/KR20180042437A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-09-07 DK DK16766444.0T patent/DK3347456T3/da active
- 2016-09-07 JP JP2018512373A patent/JP6983762B2/ja active Active
- 2016-09-07 CN CN202210484960.4A patent/CN114807035B/zh active Active
-
2020
- 2020-07-16 US US16/931,003 patent/US20210139847A1/en active Pending
-
2021
- 2021-08-04 JP JP2021128087A patent/JP2021176335A/ja active Pending
-
2022
- 2022-11-24 AU AU2022275469A patent/AU2022275469A1/en active Pending
-
2023
- 2023-09-08 JP JP2023146145A patent/JP2023162441A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20130224156A1 (en) * | 2012-02-29 | 2013-08-29 | Riken | Method of producing human retinal pigment epithelial cells |
WO2014121077A2 (en) * | 2013-02-01 | 2014-08-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | METHOD FOR GENERATING RETINAL PIGMENT EPITHELIUM (RPE) CELLS FROM INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS (IPSCs) |
WO2015087231A1 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Pfizer Limited | Method for producing retinal pigment epithelial cells |
JP6983762B2 (ja) * | 2015-09-08 | 2021-12-17 | ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ, アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー, デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20210139847A1 (en) | 2021-05-13 |
WO2017044483A1 (en) | 2017-03-16 |
AU2016321170A1 (en) | 2018-04-12 |
EP3347456B1 (en) | 2023-12-27 |
DK3347456T3 (da) | 2024-02-19 |
CN108473962A (zh) | 2018-08-31 |
CA2997952A1 (en) | 2017-03-16 |
EP4345160A2 (en) | 2024-04-03 |
AU2022275469A1 (en) | 2023-01-05 |
KR20180042437A (ko) | 2018-04-25 |
JP6983762B2 (ja) | 2021-12-17 |
CN114807035A (zh) | 2022-07-29 |
CN108473962B (zh) | 2022-04-26 |
AU2016321170B2 (en) | 2022-09-01 |
CN114807035B (zh) | 2024-02-02 |
JP2018526014A (ja) | 2018-09-13 |
EP3347456A1 (en) | 2018-07-18 |
JP2023162441A (ja) | 2023-11-08 |
US20190169569A1 (en) | 2019-06-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6983762B2 (ja) | 臨床グレードの網膜色素上皮細胞の再現性のある分化のための方法 | |
US20220033770A1 (en) | Macs-based purification of stem cell-derived retinal pigment epithelium | |
JP2021521792A (ja) | 眼球細胞の分化方法及びその使用 | |
US20230201267A1 (en) | Retinal pigmented epithelium and photoreceptor dual cell aggregates and methods of use thereof | |
WO2023196577A1 (en) | Methods for production of ipscs |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210902 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210902 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220526 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220818 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221117 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230216 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230511 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230911 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231002 |