JP2021114963A - 凍結保存用治具の固定具 - Google Patents
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V:空隙容量(ml/m2)
T:厚み(μm)
アルミを用いて金属切削加工により、図1及び図2に示す、1ヶ所のスリット部2及び上面に付設された四角柱形状の液面ゲージ部16を有する形態の実施例1の固定具を作製した。なお、基材20の大きさは縦×横×高さが50mm×50mm×70mmであり、スリット部2の幅T2は3.2mmであり、スリット部2の長さT1は基材20の側面部から30mmであり、スリット部2の深さT3は30mmである。上記基材20の上面(天面)に液面ゲージ部16が付設されており、液面ゲージ部16の大きさは15mm×15mm×15mmである。
アルミを用いて金属切削加工により、図3に示すスリット部2の両側面に長さT1に亘り凸型構造を凹凸構造部3として有する実施例2の固定具を作製した。凹凸構造部3はスリット部2の内部の側面からそれぞれ0.25mmの凸型構造とし、凸型の凹凸構造部3により狭まった部分の幅方向の長さは2.7mmである。実施例2の固定具は上記凹凸構造部を有する以外は実施例1と同様に作製した。
アルミを用いて金属切削加工により、図5に示すスリット部2にテーパー構造を有する実施例3の固定具を作製した。実施例3の固定具は、スリット部2の開口部4の幅T21を4mm、閉塞側の幅T22を3mmとした以外は、実施例1と同様に作製した。
ポリアミド樹脂を用いて3Dプリンター加工を行った以外は実施例3と同様にして、実施例4の固定具を作製した。
ポリアミド樹脂を用いて3Dプリンター加工により、図7の上面概略図に示す形状の、基材20の上面(天面)に凍結保存用治具を挿入する挿入部23と挿入部23の側面部にスリット開口部4を有し、さらに液面ゲージ部16を有する形態の実施例5の固定具を作製した。なお、基材20の大きさは縦×横×高さが50mm×50mm×70mmであり、挿入部23の大きさは縦×横×深さが20mm×20mm×30mmであり、スリット部2の幅T2は3.2mmであり、スリット部2の長さはスリット開口部4から20mmであり、スリット部2の深さT3は30mmである。なお、スリット部2はその両側面に長さ20mmに亘り凸型構造を凹凸構造部3として有する構造とした。実施例5の固定具の凹凸構造部3は、スリット部2の内部の側面からそれぞれ0.25mmの凸型構造とし、凸型の凹凸構造部3により狭まった部分の幅方向の長さは2.7mmである。また、実施例5の固定具は上記基材20の上面(天面)に液面ゲージ部16が付設されており、液面ゲージ部16の大きさは15mm×15mm×15mmである。
実施例1〜5の固定具について、凍結保存用治具の固定具合を評価するために、図18に図示されるような凍結保存用治具6を作製した。凍結保存用治具6は、短冊状(幅1.5mm、長さ20mm、厚み190μm)のポリエチレンテレフタレート樹脂フィルムをストリップ9とし、ABS樹脂の把持部と接着し本体部材7を作製した。キャップ部材8をABS樹脂で作製した。キャップ部材8の外形は3.1mmの四角柱であり、先端部近くに0.3mmの深さの凹部を有する構造である。上記凍結保存用治具を用いて、平衡化処理したマウス8細胞期胚を保存液0.1μLと共に、透過型顕微鏡下で滴下付着させた。なお、保存液は、シグマアルドリッチ社製 Medium199培地に、15容積%DMSO、15容積%エチレングリコール、17質量%スクロースが含まれる組成のものを用いた。次いで、透過型顕微鏡下で、載置部を含むストリップをキャップ部材に挿入し、その後、液体窒素に浸漬して凍結操作を行った。その後、液体窒素下で、上記凍結保存用治具のキャップ部材側をスリット部2に固定した。なお、液体窒素13の液面14が実施例1〜5の固定具が有する液面ゲージ部16を基準として、凍結容器15に液体窒素を充填し、図18に示す形態で液面ゲージ部16が液体窒素の液面よりもやや下に位置する状態で準備を行った。実施例1〜5の固定具のスリット部2に凍結保存用治具のキャップ部材側を挿入し、図18に示す形態で、固定・保持した際の様子を以下の基準で評価した。これらの結果を表1の「融解操作時の固定具合の評価」の項に示す。
△:固定ができたが、やや不安定であった。
上記の「凍結保存用治具の固定具合の評価」と同様の方法により、図18に示す形態で、実施例1〜5の固定具を用いて凍結保存用治具をそれぞれ固定・保持した。その後、図20に示す形態のように、凍結保存用治具の本体部材とキャップ部材を分離する際の作業性を評価したが、実施例1〜5の固定具はいずれも迅速な融解操作が可能であり、高い作業性を有することが示された。また実施例1〜5の固定具を用いた融解作業では、融解作業に先立って、固定具に凍結保存用治具を固定・保持した際に、細胞又は組織が液体窒素中に位置することを容易に確認でき、細胞10の凍結状態を確実に維持することが容易であった。また、融解作業時には細胞10が液体窒素13に接触することなく、融解することが可能であった。
2 スリット部
3 凹凸構造部
4 スリット開口部
5 空洞構造部
6 凍結保存用治具
7 本体部材
8 キャップ部材
9 ストリップ
10 細胞
11 保存液
12 接合部
13 液体窒素
14 液面
15 凍結容器
16 液面ゲージ部
17 上限マーキング部
18 下限マーキング部
19 融解液
20 基材
23 挿入部
Claims (1)
- 上面、側面及び底面を有する基材からなる凍結保存用治具の固定具であって、該固定具は凍結保存用治具を固定するために、基材の上面に少なくとも片端が基材の側面部に開口したスリット部を有するか、あるいは基材の上面に凍結保存用治具を挿入する挿入部と該挿入部の側面部に片端が開口したスリット部を有し、更に該基材の上面または側面に該基材の上面よりも上方に伸長した液面ゲージ部を有することを特徴とする、凍結保存用治具の固定具。
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