JP2021063108A - 放射性医薬錯体 - Google Patents
放射性医薬錯体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021063108A JP2021063108A JP2021000454A JP2021000454A JP2021063108A JP 2021063108 A JP2021063108 A JP 2021063108A JP 2021000454 A JP2021000454 A JP 2021000454A JP 2021000454 A JP2021000454 A JP 2021000454A JP 2021063108 A JP2021063108 A JP 2021063108A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue
- cancer
- moiety
- thorium
- targeting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1021—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against cytokines, e.g. growth factors, VEGF, TNF, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
- A61K51/103—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants against receptors for growth factors or receptors for growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1051—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from breast, e.g. the antibody being herceptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1069—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from blood cells, e.g. the cancer being a myeloma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1072—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from the reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes or prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Description
a)N位においてC1−C3アルキル基で置換された4つのヒドロキシピリジノン(HOPO)部分と、末端がカルボン酸基(または保護されたその等価物)のカップリング部分とを含むオクタデンテートキレート化剤を生成するステップと、
b)前記オクタデンテートキレート化剤を、少なくとも1つのアミドカップリング試薬により、少なくとも1つのアミン部分を含む少なくとも1つの組織標的化ペプチドまたはタンパク質とカップリングし、これにより、組織標的化キレート化剤を生成するステップと、
c)前記組織標的化キレート化剤を、少なくとも1つのα放出トリウム同位体のイオンを含む水溶液と接触させるステップと
を含む。
慢性リンパ性白血病/小リンパ球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫(Waldenstrom macroglobulinemiaなど)、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞腫瘍(例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着症、重鎖病)、節外性辺縁帯B細胞リンパ腫(MALTリンパ腫)、結節性辺縁帯B細胞リンパ腫(NMZL)、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、縦隔(胸腺)大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫およびバーキットリンパ腫/白血病。
「星形の」配置を以下の式(III)に示す:
N,N,N’,N’−テトラキス(2−アミノエチル)−2−(4−ニトロベンジル)プロパン−1,3−ジアミン
3−(ベンジルオキシ)−1−メチル−4−[(2−チオキソ−1,3−チアゾリジン−3−イル)カルボニル]ピリジン−2(1H)−オン
4−{[4−(3−[ビス(2−{[(3−ヒドロキシ−1−メチル−2−オキソ−1,2−ジヒドロピリジン−4−イル)カルボニル]アミノ}エチル)アミノ]−2−{[ビス(2−{[(3−ヒドロキシ−1−メチル−2−オキソ−1,2−ジヒドロピリジン−4−イル)カルボニル]アミノ}エチル)アミノ]メチル}プロピル)フェニル]アミノ}−4−オキソブタン酸
ジメチル2−(4−ニトロベンジル)マロナートの合成
500mLの酢酸エチル(EtOAc)および250mLのNH4Cl(飽和水溶液)を加えた後、溶液を濾過した。相を分離した。水性相を2×250mLのEtOAcで抽出した。有機相を合わせ、250mLの塩水で洗い、Na2SO4で乾燥して濾過し、溶媒を減圧下で除去した。
300mLのヘプタンおよび300mLのメチルtert−ブチルエーテル(MTBE)を残留物に加え、60℃まで加熱した。溶液を濾過した。濾液を冷凍庫に一晩入れ、濾過した。濾過ケークを200mLのヘプタンで洗い、減圧下で乾燥して、オフホワイト色の固体として表題化合物を得た。
収量:42.03g、157.3mmol、68%。
1H−NMR(400MHz,CDCl3):3.30(d,2H,7.8Hz),3.68(t,1H,7.8Hz),3.70(s,6H),7.36(d,2H,8.7Hz),8.13(d,2H,8.7Hz).
2−(4−ニトロベンジル)プロパン−1,3−ジオールの合成
20mLの水を反応混合物に0℃で滴加した。20mLのNaOH(水溶液、15%)を反応混合物に0℃で滴加し、続いて20mLの水を反応混合物に滴加した。混合物を0℃で20分間攪拌した後、約150gのMgSO4を添加した。混合物を室温で30分間攪拌した後、ブフナー漏斗で濾過した。濾過ケークを500mLのEtOAcで洗った。濾過ケークを取り出し、800mLのEtOAcおよび200mLのMeOHと共に約30分間攪拌した後、溶液を濾過した。濾液を合わせて減圧下で乾燥した。
ヘプタン中のEtOAcの勾配、続いてEtOAc中のMeOHの勾配を用いたシリカによるDFCにより、淡黄色の固体として表題化合物を得た。
収量:15.38g、72.8mmol、69%。
1H−NMR(400MHz,CDCl3):1.97−2.13(m,3H),2.79(d,2H,7.6Hz),3.60−3.73(m,2H),3.76−3.83(m,2H),7.36(d,2H,8.4Hz),8.14(d,2H,8.4Hz).
2−(4−ニトロベンジル)プロパン−1,3−ジイルジメタンスルホナートの合成
500mLのCH2Cl2を加え、混合物を2×250mLのNaHCO3(飽和水溶液)、125mLのHCl(水溶液、0.1M)および250mLの塩水で洗った。有機相をNa2SO4で乾燥して濾過し、減圧下で乾燥して、オレンジ色の固体として表題化合物を得た。
収量:25.80g、70.2mmol、97%。
1H−NMR(400MHz,CDCl3):2.44−2.58(m,1H),2.87(d,2H,7.7Hz),3.03(s,6H),4.17(dd,2H,10.3,6.0Hz),4.26(dd,2H,10.3,4.4Hz),7.38(d,2H,8.6Hz),8.19(d,2H,8.6Hz).
ジ−tert−ブチル(アザンジイルビス(エタン−2,1−ジイル))ジカルバマートの合成
残留物を250mLのトルエンに溶解し、ジエチレントリアミン(59.5mL、550mmol)を加えた。反応混合物を60℃で2時間攪拌した。
1LのCH2Cl2を加え、有機相を2×250mLの水で洗った。有機相をNa2SO4で乾燥して濾過し、減圧下で減量した。
トリエチルアミンを加えたCH2Cl2中のメタノール(MeOH)の勾配を用いたシリカによるDFCにより、無色の固体として表題化合物を得た。
収量:102g、336mmol、61%。
1H−NMR(400MHz,CDCl3):1.41(s,18H),1.58(bs,1H),2.66−2.77(m,4H),3.13−3.26(m,4H),4.96(bs,2H).
テトラ−tert−ブチル(((2−(4−ニトロベンジル)プロパン−1,3−ジイル)ビス(アザントリイル))テトラキス(エタン−2,1−ジイル))テトラカルバマートの合成
揮発物を減圧下で除去した。
ヘプタン中のEtOAcの勾配を用いたシリカによるDFCにより、淡黄色の固体の泡として表題(tile)化合物を得た。
収量:27.2g、34.8mmol、49%。
1H−NMR(400MHz,CDCl3):1.40(s,36H),1.91−2.17(m,3H),2.27−2.54(m,10H),2.61−2.89(m,2H),2.98−3.26(m,8H),5.26(bs,4H),7.34(d,2H,8.5Hz),8.11(d,2H,8.5Hz).
N1,N1’−(2−(4−ニトロベンジル)プロパン−1,3−ジイル)ビス(N1−(2−アミノエチル)エタン−1,2−ジアミン)、AGC0020の合成
揮発物を減圧下で除去し、残留物を250mLの水に溶解した。500mLのCH2Cl2を加え、続いて175mLのNaOH(水溶液、5M、NaClで飽和)を加えた。相を分離し、水性相を4×250mLのCH2Cl2で抽出した。有機相を合わせ、Na2SO4で乾燥して濾過し、減圧下で乾燥して、粘性のある茶褐色のオイルとして表題化合物を得た。
収量:11.20g、29.3mmol、79%。純度(HPLC図9):99.3%。
1H−NMR(300MHz,CDCl3):1.55(bs,8H),2.03(dt,1H,6.6,13.3Hz),2.15(dd,2H,12.7,6.6),2.34−2.47(m,10H),2.64−2.77(m,10H),7.32(d,2H,8.7Hz),8.10(d,2H,8.7Hz).
13C−NMR(75MHz,CDCl3):37.9,38.5,39.9,58.0,58.7,123.7,130.0,146.5,149.5
エチル5−ヒドロキシ−6−オキソ−1,2,3,6−テトラヒドロピリジン−4−カルボキシラートの合成
反応混合物の濃厚化のため、反応の最初の1時間に200mLのEtOHを分割して加えた。反応混合物を一晩攪拌し、室温まで冷却した。攪拌しながら210mLのHCl(5M、水溶液)をゆっくりと加えた。
200mLの塩水および200mLのトルエンを加え、相を分離した。
水性相を2×400mLのCHCl3で抽出した。合わせた有機相を乾燥(Na2SO4)して濾過し、真空中で減量した。残留物をEtOAcから再結晶させ、淡黄色の固体として表題化合物を得た。
収量:132.7g、0.72mol、72%。
エチル3−ヒドロキシ−2−オキソ−1,2−ジヒドロピリジン−4−カルボキシラートの合成
収量:19.63g、107.1mmol、86%。MS(ESI,pos):206.1[M+Na]+、389.1[2M+Na]+
エチル3−メトキシ−1−メチル−2−オキソ−1,2−ジヒドロピリジン−4−カルボキシラートの合成
反応混合物を室温でさらに2時間攪拌した後、MeI(162mL、2.6mol)を加えた。反応混合物を還流させながら一晩攪拌した。反応混合物を減圧下で減量し、2.5LのEtOAcを加えた。
混合物を濾過して減圧下で減量した。ヘプタン中のEtOAcの勾配を用いたSiO2によるドライフラッシュクロマトグラフィー(DFC)により精製して、表題化合物を得た。
収量:56.1g、210.1mmol、32%。MS(ESI,pos):234.1[M+Na]+、445.1[2M+Na]+
エチル3−(ベンジルオキシ)−1−メチル−2−オキソ−1,2−ジヒドロピリジン−4−カルボキシラートの合成
収量:5.21g、18.1mmol、65%。MS(ESI,pos):310.2[M+Na]+、597.4[2M+Na]+
3−(ベンジルオキシ)−1−メチル−2−オキソ−1,2−ジヒドロピリジン−4−カルボン酸の合成
3−(ベンジルオキシ)−1−メチル−4−(2−チオキソチアゾリジン−3−カルボニル)ピリジン−2(1H)−オン(AGC0021)の合成
AGC0023の合成
EtOAcとCH2Cl2の1:1混合物中のメタノールの勾配を用いたSiO2によるDFCにより、固体の泡としてAGC0023を得た。
平均収量:26.95g、20.0mmol、85%。
AGC0024の合成
CH2Cl2中のメタノールの勾配を用いたSiO2によるDFCにより、固体の泡としてAGC0024を得た。
収量18.64g、14.2mmol、71%。
AGC0025の合成
水中のアセトニトリル(ACN)の勾配を用いた非エンドキャップC18シリカによるDFCにより、わずかにオレンジ色のガラス状固体としてAGC0025を得た。
収量13.27g、13.9mmol、98%。
AGC0019の合成
固体をMeOH(62mL)および水(10.6mL)に40℃で溶解した。溶液を超音波処理下、EtOAc(750mL)に滴加した。沈殿物を濾過し、EtOAcで洗い、減圧下で乾燥して、緑色がかった色合いのオフホワイト色の固体としてAGC0019を得た。
収量:9.20g、8.7mmol、78%。H−NMR(400MHz、DMSO−d6)、13C−NMR(100MHz、DMSO−d6)。
純粋なトリウム−227の単離
トリウム−227は、アクチニウム−227ジェネレータから単離される。アクチニウム−227は、ラジウム−226の熱中性子照射、続いてラジウム−227(t1/2=42.2m)のアクチニウム−227への崩壊によって生成された。8M HNO3溶液中のアクチニウム−227崩壊混合物から陰イオン交換クロマトグラフィーによりトリウム−227を選択的に保持した。70mgのAG(登録商標)1−X8樹脂(200〜400メッシュ、硝酸塩型)を含む内径2mm、長さ30mmのカラムを使用した。アクチニウム−227、ラジウム−223および娘核種がカラムから溶出した後、トリウム−227を12M HClでカラムから抽出した。トリウム−227を含む溶出液を蒸発乾固し、標識ステップの前に残留物を0.01M HClに再懸濁させた。
Ramosに対する227Th−AGC1118の細胞毒性
実施例3a)
抗CD22モノクローナル抗体(AGC1100)の産生
エプラツズマブとも呼ばれ、本明細書においてAGC1100と表すモノクローナル抗体(mAb)hLL2の配列を、Leung、Goldenberg、Dion、Pellegrini、Shevitz、ShihおよびHansen:Molecular Immunology 32:1413−27,1995に記載されているように構築した。
本実施例で使用したmAbは、Immunomedics Inc(米国ニュージャージー州)で製造された。このmAbの産生は、例えば、軽鎖および重鎖をコードする遺伝子をコードするプラスミドを用いてトランスフェクトしたチャイニーズハムスター卵巣の浮遊(CHO−S)細胞で行うことができる。最初の安定したクローンが、標準的な手順を用いるために選択されるであろう。一回使用のバイオリアクターで約14日後、上清を濾過した後にモノクローナル抗体を回収してもよい。AGC1100は、プロテインAアフィニティークロマトグラフィー(MabSelect SuRe、Atoll、Weingarten/ドイツ)、続いてイオン交換ステップによりさらに精製されるであろう。静電気および疎水性に基づく第3の精製ステップを用いて、凝集物および潜在的に残存する不純物を除去することができる。AGC1100の同一性は、等電点電気泳動、SDS−PAGE分析、N末端配列決定およびLC/MS分析によって確認されるであろう。サンプル純度は、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によってさらに分析されるであろう。
キレート化剤AGC0019を1:1、DMA:0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。NHSおよびEDCを0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。
キレート化剤/N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)/1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)の1/1/3モル当量溶液を調製してキレート化剤を活性化した。抗体との複合化のために、モル比7.5/7.5/22.5/1(キレート化剤/NHS/EDC/mAb)の活性化したキレート化剤をmAbに加えた。20〜40分後、12%v/v 0.3Mクエン酸を用いて複合化反応を停止し、pHを5.5に調整した。
次いで、溶液を、一定体積のTangential Flow Filtrationにより、30mMクエン酸塩、70mM NaCl、2mM EDTA、0.5mg/ml pABA、pH 5.5(TFF緩衝液)へ緩衝液交換した。ダイアフィルトレーションの最後に、溶液を配合物容器に出した。生成物にTFF緩衝液(30mMクエン酸塩、70mM NaCl、2mM EDTA、0.5mg/ml pABA、pH5.5)および7%w/vポリソルベート80を配合して、30mMクエン酸塩、70mM NaCl、2mM EDTA、0.5mg/mL pABA 0.1%w/v PS80、pH5.5中の2.6mg/mL AGC1118を得た。最後に、溶液を0.2μmフィルターに通して滅菌瓶内に濾過した後、保存した。
227Th−AGC1118注入における線量の調製
バイアル1本分の20MBq塩化トリウム−227フィルムを2mlの8M HNO3溶液に溶解して15分間放置した後、陰イオン交換カラムにかけて、経時的に増加したラジウム−223を除去するために、溶液を取り出した。カラムを3mlの8M HNO3および1mlの水で洗った後、3mlの3M HClでトリウム−227を溶出した。トリウム−227の溶出活性を測定し、10MBqの線量を空の10mlのガラスバイアルに移した。次いで、真空ポンプを使用し、バイアルを加熱ブロック(120℃に設定)に30〜60分間入れて、酸を蒸発させた。室温に達した後、6mlのAGC1118複合体2.5mg/mlを放射標識のために加えた。バイアルを穏やかに混合し、室温で15分間放置した。次いで、溶液を滅菌バイアル内に滅菌濾過し、使用前にiTLC分析を行ってRCPを測定するためにサンプルを取り出した。
異なる全放射能および比放射能を有する227Th−AGC1118のRamosに対する細胞毒性
この試験では、4時間のインキュベーション時間で、全放射能および比放射能を変化させることによって227Th−AGC1118の線量を試験した。この試験は、10/50kBq/μgの比放射能ならびに5、10、20および40kBq/mlの全放射能で96ウェルプレートフォーマットで行った。
Ramos細胞を、10%FBSおよび1%ペニシリン(Pencillin)/ストレプトマイシン(Passage 22)を含むRPMI1640培地で培養した。細胞を遠心分離管に移して300Gで5分間遠心分離し、5mLの培地に懸濁させた後、Z2 Coulter Counterで計数した。細胞懸濁液を400.000細胞/mlの細胞濃度に培地で希釈し、96ウェルプレート(80.000細胞/ウェル)中の48ウェル(200μl/ウェル)に移した。CellTiter−Glo(登録商標)Luminescent Cell Viability Assay(Promega)を用いて細胞生存率を測定した。図4を参照されたい。
HL−60に対する227Th−AGC0718の細胞毒性
実施例4a)
抗CD33モノクローナル抗体(AGC0700)の産生。
本明細書においてAGC0700と表すモノクローナル抗体(mAb)HuM195/リンツズマブの配列を(1)および(2)に記載の文献から検索した。AGC0700の製造をCobraBiologics(Sodertalje、スウェーデン)の設備で実施した。簡潔には、Vector NTI(登録商標)ソフトウェア(Invitrogen/Life Technologies Ltd.、ペーズリー、英国)を使用して、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列をDNA配列に逆翻訳した。実施例2で概説したように、抗体に対する複合体の比(CAR)の正確な決定を容易にするために、C末端リシン(Lys)のコドンをIgG1重鎖遺伝子から除いた。生じたDNA配列を哺乳類細胞での発現のためにコドン最適化し、GeneArt(GeneArt/Life−Technologies Ltd.、ペーズリー、英国)により合成し、さらにCobraBiologics(Sodertalje、スウェーデン)により発現ベクターにクローニングした。チャイニーズハムスター卵巣の浮遊(CHO−S)細胞を、AGC0700のVH−およびVL−ドメインをコードするプラスミドを用いて安定にトランスフェクトし、ピューロマイシン(12.5mg/l;Sigma Aldrich)を追加した標準的なCD−CHO培地(Invitrogen/Life Technologies Ltd.、ペーズリー、英国)の存在下で増殖させた。AGC0700を発現させる安定したクローンを、25世代にわたる限界希釈により選択した。上清からタンパク質力価を測定することにより、クローンの安定性を評価した。最も安定したクローンの細胞バンクを確認し、凍結保存した。
250Lサイズの一回使用のバイオリアクターで、mAbの発現を37℃で約14日間行った。上清を濾過した後にモノクローナル抗体を回収した。AGC0700を、プロテインAアフィニティーカラム(MabSelect SuRe、Atoll、Weingarten/ドイツ)、続いて1つの陰イオン(QFF−Sepharose;GE Healthcare)−および1つの陽イオン(PorosXS;Invitrogen/Life Technologies Ltd.)−交換クロマトグラフィーによりさらに精製して、純度および最終的な収率を高めた。AGC0700の同一性を等電点電気泳動およびSDS−PAGE分析により確認した。精製したAGC0700の活性を、固定化CD33−Fc標的(Novoprotein)に対する結合ELISAで分析した。サンプル純度をサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)により分析した。
(1)Scheinberg DA.「Therapeutic uses of the hypervariable region of monoclonal antibody M195 and constructs thereof」米国特許出願第6007814号(1999年12月28日)。
(2)Co MSら;J Immunol.1992 Feb 15;148(4):1149−54。Chimeric and humanized antibodies with specificity for the CD33 antigen。
複合体AGC0718を与えるmAb AGC0700(リンツズマブ)とキレート化剤AGC0019(式(VIII)の化合物)とのカップリング
小さな例外はあるが、実施例3に記載されているように複合化を実施した。
複合化の前に、リン酸緩衝液(pH7.5)を抗体溶液(AGC0700)に加えて、溶液の緩衝能を高めた。容器内のAGC0700(mAb)の量を測定した。
キレート化剤AGC0019を1:1、DMA:0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。NHSおよびEDCを0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。
キレート化剤/NHS/EDCの1/1/3モル当量溶液を調製してキレート化剤を活性化した。抗体との複合化のために、モル比20/20/60/1(キレート化剤/NHS/EDC/mAb)の活性化したキレート化剤をmAbに加えた。40〜60分後、12%v/v 0.3Mクエン酸を用いて複合化反応を停止し、pHを5.5に調整した。
次いで、溶液を、一定体積のTangential Flow Filtrationにより、30mMクエン酸塩、154mM NaCl、2mM EDTA、2mg/ml pABA、pH5.5(TFF緩衝液)へ緩衝液交換した。ダイアフィルトレーションの最後に、溶液を配合物容器に出した。生成物にTFF緩衝液(30mMクエン酸塩、154mM NaCl、2mM EDTA、2mg/ml pABA、pH5.5)を配合して、30mMクエン酸塩、154mM NaCl、2mM EDTA、2mg/mL pABA、pH5.5中の2.5mg/mL AGC0718を得た。最後に、溶液を0.2μmフィルターに通して滅菌瓶内に濾過した後、保存した。
227Th−AGC0718注入における線量の調製
バイアル1本分の20MBq 塩化トリウム−227フィルムを2mlの8M HNO3溶液に溶解して15分間放置した後、陰イオン交換カラムにかけて、経時的に増加したラジウム−223を除去するために、溶液を取り出した。カラムを3mlの8M HNO3および1mlの水で洗った後、3mlの3M HClでトリウム−227を溶出した。トリウム−227の溶出活性を測定し、10MBqの線量を空の10mlのガラスバイアルに移した。次いで、真空ポンプを使用し、バイアルを加熱ブロック(120℃に設定)に30〜60分間入れて、酸を蒸発させた。室温に達した後、6mlのAGC0718複合体2.5mg/mlを放射標識のために加えた。バイアルを穏やかに混合し、室温で15分間放置した。次いで、溶液を滅菌バイアル内に滅菌濾過し、使用前にiTLC分析を行ってRCPを測定するためにサンプルを取り出した。
異なる全放射能を有する227Th−AGC0718のHL−60に対する細胞毒性
CD33+−細胞に結合した後の227Th−AGC0718の細胞毒性を示すために、インビトロ細胞毒性アッセイを実施した。この目的のために、ヒト骨髄性白血病HL−60細胞株ならびにCD33陰性B細胞株(Ramos)を227Th−AGC0718に曝露した。2および20kBq/mlの全放射能を44kBq/μgの比放射能で試験した。すべての実験手順はRD2013.093に記載されている。簡潔には、IMDM培地中に1ml当たり50,000個のヒトHL−60細胞を、10%FBSおよび1%ペニシリン/ストレプトマイシンを用いて調製し、24ウェルプレートに100.000細胞/ウェルの密度で播種した。細胞を、0〜20kBq/mlの227Th−AGC0718の放射能で、37℃で4時間インキュベートした。それぞれの227Th−アイソタイプ対照複合体サンプルならびにab非標識AGC0718サンプルをそれぞれの対照として並行して調製した。その後、細胞を新鮮な培地で洗い、新しい24ウェル培養プレートに播種した。
異なる時点で細胞を回収し、CellTiterGlo(登録商標)キット(Promega)を用いて生存率を測定した。陽性対照(未処理細胞)を100%に設定して、生存率を%で表した。図5を参照されたい。
SKOV−3に対する227Th−AGC0118の細胞毒性
実施例5a)
AGC0100(トラスツズマブ)の産生
トラスツズマブモノクローナル抗体(本明細書においてAGC0100と表す。)をRocheから購入し、PBS(Dulbecco BIOCHROM)に10mg/mlの濃度に溶解した。
複合体AGC0118を与えるmAb AGC0100(トラスツズマブ)とキレート化剤AGC0019(式(VIII)の化合物)とのカップリング
小さな変更はあるが、実施例3に記載されているように複合化を実施した。最終的な複合化mAbのTFF精製をゲル濾過カラムクロマトグラフィーに置き換えた。
PBS中のトラスツズマブに11%1Mリン酸緩衝液(pH7.4)を加えた。キレート化剤(AGC0019)NHSおよびEDCを、実施例3b)に記載されている同じ溶液に溶解した。活性化中のキレート化剤/NHS/EDCのモル比は1/1/3であった。キレート化剤/NHS/EDC/mAbに対応する8/8/25/1のモル比および30〜40分の複合化時間により、複合化AGC0118において、0.7〜0.9のCAR(抗体に対するキレート化剤の比)が得られた。最終pH5.5まで12%v/v 0.3Mクエン酸を加えることにより反応を停止した。
AKTAシステム(GE Healthcare)に接続したSuperdex 200(GE Healthcare)カラムによるゲル濾過により、AGC0118複合体の精製および30mMクエン酸塩(pH5.5)、154mM NaClへの緩衝液交換を実施した。Abs 280nmでのタンパク質濃度を測定した後、(30mMクエン酸塩中の2.5mg/mL AGC0118、154mM NaCl、2mM EDTA、2mg/mL pABA、pH5.5を得るために)生成物に緩衝液を配合した。最後に、溶液を0.2μmフィルターに通して滅菌瓶内に濾過した後、保存した。
227Th−AGC0118注入における線量の調製
標識を先述の通り実施した:
バイアル1本分の20MBq塩化トリウム−227フィルムを2mlの8M HNO3溶液に溶解して15分間放置した後、陰イオン交換カラムにかけて、経時的に増加したラジウム−223を除去するために、溶液を取り出した。カラムを3mlの8M HNO3および1mlの水で洗った後、3mlの3M HClでトリウム−227を溶出した。トリウム−227の溶出活性を測定し、10MBqの線量を空の10mlのガラスバイアルに移した。次いで、真空ポンプを使用し、バイアルを加熱ブロック(120℃に設定)に30〜60分間入れて、酸を蒸発させた。室温に達した後、6mlのAGC0118複合体2.5mg/mlを放射標識のために加えた。バイアルを穏やかに混合し、室温で15分間放置した。次いで、溶液を滅菌バイアル内に滅菌濾過し、使用前にiTLC分析を行ってRCPを測定するためにサンプルを取り出した。
異なる全放射能を有する227Th−AGC0118のSKOV−3に対する細胞毒性
4時間のインキュベーション時間中にウェルに加える全放射能を変化させることによって、さまざまな線量の227Th−AGC0118に対する細胞毒性を試験した。実験前日、96ウェルプレートに1ウェル当たり10000個のSKOV−3細胞を播種した。一連の全放射能5、10、20および40kBq/mlのキレート化227Th−AGC0118を比放射能20kBq/μgで細胞に1日目に加えた。インキュベーション期間の終了後、残存する非結合227Th−AGC0118をマルチアレイピペットにより除去し、その後、培地でもう1回洗い、続いて新鮮な培養培地で洗った。SKOV−3細胞を、10%FBSおよび1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むMc−Coy培地で培養した。227Th−AGC0118によるインキュベーション中に、血清を含まない培地で培養培地を置換した。4日目、CellTiter−Glo(登録商標)Luminescent Cell Viability Assay(Promega)を用いて細胞生存率を測定した。図6を参照されたい。
NCI−H716に対する227Th−AGC2518の細胞毒性
実施例6a)
FGFR2モノクローナル抗体(BAY1179470;AGC2500)の産生。
本明細書においてAGC2500とも呼ばれるモノクローナル抗体BAY 1179470の産生は、国際公開第2013/076186号パンフレットに詳細に記載されている。簡潔には、FGFR2抗原に対するバイオパニングにより抗体を回収した。生じたヒトIgG1抗体をCHO細胞内で発現させ、プロテインAアフィニティーカラム(MAb Select Sure)を用いて精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーにより単量体画分を単離した。抗体をPBS(pH7.4)に配合した。分析SECは、>99%の同質性を示した。
複合体AGC2518を与えるmAb AGC2500とキレート化剤AGC0019(式(VIII)の化合物)とのカップリング
抗体含有溶液をpH7.5に調整した。キレート化剤AGC0019を1:1、DMA:0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。NHSおよびEDCを0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。キレート化剤/NHS/EDCの1/1/3モル当量溶液を調製してキレート化剤を活性化した。抗体との複合化のために、モル比10/10/30/1(キレート化剤/NHS/EDC/mAb)の活性化したキレート化剤をmAbに加えた。30分後、12%v/v 0.3Mクエン酸を用いて複合化反応を停止し、pHを5.5に調整した。反応サンプルをさらにHiLoad 16/600 Superdex 200(prepグレード)カラムに負荷し、移動相として30mMクエン酸塩、70mM NaCl、pH5.5を用いて単量体画分を単離した。クロマトグラフィーの最後に、抗体複合体AGC2518を、30mMクエン酸塩、70mM NaCl、2mM EDTAおよび0.5mg/ml pABA中、2.5mg/mlまで濃縮した。すべての手順はRD.2014.092,Journal No.211/149,140619 AEFに記載されている。
227Th−AGC2518注入における線量の調製
バイアル1本分の20MBq塩化トリウム−227フィルムを2mlの8M HNO3溶液に溶解して15分間放置した後、陰イオン交換カラムにかけて、経時的に増加したラジウム−223を除去するために、溶液を取り出した。カラムを3mlの8M HNO3および1mlの水で洗った後、3mlの3M HClでトリウム−227を溶出した。トリウム−227の溶出活性を測定し、10MBqの線量を空の10mlのガラスバイアルに移した。次いで、真空ポンプを使用し、バイアルを加熱ブロック(120℃に設定)に30〜60分間入れて、酸を蒸発させた。室温に達した後、6mlのAGC2518複合体2.5mg/mlを放射標識のために加えた。バイアルを穏やかに混合し、室温で15分間放置した。次いで、溶液を滅菌バイアル内に滅菌濾過し、使用前にiTLC分析を行ってRCPを測定するためにサンプルを取り出した。
異なる全放射能を有する227Th−AGC2518のNCI−H716細胞に対する細胞毒性
FGFR2+−細胞に結合した後の227Th−AGC2518の細胞毒性を示すために、インビトロ細胞毒性アッセイを実施した。この目的のために、ヒト結腸直腸癌細胞株NCI−H716を227Th−AGC2518に曝露した。2、10、20および40kBq/mlの全放射能を2kBq/μgの比放射能で試験した。関連のないアイソタイプ対照を並行して同様に調製した。すべての実験手順はRD2014.138に記載されている。簡潔には、RPMI 1640培地中に1ml当たり400000個のヒトNCI−H716細胞を、10%FBSおよび1%ペニシリン/ストレプトマイシンを用いて調製し、96ウェルプレートに80.000細胞/ウェルの密度で播種した。細胞を、0〜40kBq/mlの227Th−AGC2518およびそれぞれの227Th−アイソタイプ対照複合体サンプルの放射能で、37℃で30分間インキュベートした。その後、細胞を新鮮な培地で洗い、新しい96ウェル培養プレートに播種した。5日後および7日後、細胞を回収し、CellTiterGlo(登録商標)キット(Promega)を用いて生存率を測定した。陽性対照(未処理細胞)を100%に設定して、生存率を%で表した。図7を参照されたい。
HT29細胞に対する227Th−AGC2418の細胞毒性
実施例7a)
メソテリンモノクローナル抗体(BAY 86−1903;AGC2400)の産生。
本明細書においてAGC2400とも呼ばれるモノクローナル抗体BAY 86−1903の産生は、国際公開第2009/068204号パンフレットに詳細に記載されている。簡潔には、メソテリン抗原に対するバイオパニングにより抗体を回収した。生じたヒトIgG1抗体をCHO細胞内で発現させ、プロテインAアフィニティーカラム(MAb Select Sure)を用いて精製し、続いてHICカラム(Toyopearl Butyl 600M)を用いて凝集物を除去した。抗体をPBS(pH7.5)に配合した。
複合体AGC2418を与えるmAb AGC2400とキレート化剤AGC0019(式(VIII)の化合物)とのカップリング
抗体含有溶液をpH7.5に調整した。キレート化剤AGC0019を1:1、DMA:0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。NHSおよびEDCを0.1M MES緩衝液(pH5.4)に溶解した。キレート化剤/NHS/EDCの1/1/3モル当量溶液を調製してキレート化剤を活性化した。抗体との複合化のために、モル比16.5/16.5/49.5/1(キレート化剤/NHS/EDC/mAb)の活性化したキレート化剤をmAbに加えた。30分後、12%v/v 0.3Mクエン酸を用いて複合化反応を停止し、pHを5.5に調整した。反応サンプルをさらにHiLoad 16/600 Superdex 200(prepグレード)カラムに負荷し、移動相として30mMクエン酸塩、70mM NaCl、pH5.5を用いて単量体画分を単離した。クロマトグラフィーの最後に、抗体複合体AGC2418を、30mMクエン酸塩、70mM NaCl、2mM EDTAおよび0.5mg/ml pABA中、2.5mg/mlまで濃縮した。すべての手順はRD.2014.111,Journal No.211/160,140814 AEFに記載されている。
227Th−AGC2418における線量の調製
バイアル1本分の20MBq塩化トリウム−227フィルムを2mlの8M HNO3溶液に溶解して15分間放置した後、陰イオン交換カラムにかけて、経時的に増加したラジウム−223を除去するために、溶液を取り出した。カラムを3mlの8M HNO3および1mlの水で洗った後、3mlの3M HClでトリウム−227を溶出した。トリウム−227の溶出活性を測定し、10MBqの線量を空の10mlのガラスバイアルに移した。次いで、真空ポンプを使用し、バイアルを加熱ブロック(120℃に設定)に30〜60分間入れて、酸を蒸発させた。室温に達した後、6mlのAGC2418複合体2.5mg/mlを放射標識のために加えた。バイアルを穏やかに混合し、室温で15分間放置した。次いで、溶液を滅菌バイアル内に滅菌濾過し、使用前にiTLC分析を行ってRCPを測定するためにサンプルを取り出した。
メソテリン抗原を過剰発現させるHT29細胞に対する、異なる全放射能を有する227Th−AGC2418の細胞毒性
メソテリン+−細胞に結合した後の227Th−AGC2418の細胞毒性を示すために、インビトロ細胞毒性アッセイを実施した。この目的のために、メソテリン抗原を用いてトランスフェクトしたヒト結腸直腸癌細胞株HT29を227Th−AGC2418に曝露した。全放射能を、5kBq/mlから出発し、10kBq/μgの比放射能で12点にわたって3倍希釈で滴定した。関連のないアイソタイプ対照を並行して同様に調製した。すべての実験手順はRD2014.154に記載されている。簡潔には、メソテリン抗原を用いてトランスフェクトした、RPMI 1640培地中に1ml当たり200000個のヒトHT29細胞を、10%FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、1%NaHCO3、600μg/mlハイグロマイシンBを用いて調製し、96ウェルプレートに40.000細胞/ウェルの密度で播種した。細胞を、0〜40kBq/mlの227Th−AGC2418およびそれぞれの227Th−アイソタイプ対照複合体サンプルの放射能で、37℃で6日間インキュベートした。6日目に、細胞を回収し、CellTiterGlo(登録商標)キット(Promega)を用いて生存率を測定した。陽性対照(未処理細胞)を100%に設定して、生存率を%で表した。
アミドおよびイソチオシアナート結合複合体の安定性の比較
AGC1118、およびイソチオシアナートカップリング部分(AGC1115)を有する対応する複合体を水溶液中、40℃で11日間保存した。サンプルを定期的に採取した。
実施例9a)
PSMAモノクローナル抗体(AGC1000)の産生
以下、AGC1000と呼ぶPSMAモノクローナル抗体をProgenics(米国)から購入した。
複合体AGC1018を与えるmAb AGC1000とキレート化剤AGC0019(式(VIII)の化合物)とのカップリング
抗体含有溶液をpH7.5に調整した。キレート化剤AGC0019を1:1、DMA:0.1M MES緩衝液(pH5.5)に溶解した。NHSおよびEDCを0.1M MES緩衝液(pH5.5)に溶解した。キレート化剤/NHS/EDCの1/1/2モル当量溶液を調製してキレート化剤を活性化した。抗体との複合化のために、モル比20/20/40/1(キレート化剤/NHS/EDC/mAb)の活性化したキレート化剤を4回に分けて、それぞれ10分間隔でmAbに加えた。50分後、12%v/v 1Mトリス(pH7.3)を用いて複合化反応を停止した。複合体を精製し、Tangential Flow Filtration(TFF)により緩衝液交換した。配合緩衝液は、30mMクエン酸塩、70mM NaCl、2mM EDTA、0,5mg/ml pABA、pH5.5であった。ダイアフィルトレーションの最後に、溶液をバルク容器に出し、濃度を2,7mg/mlに調整した。最後に、バルク溶液を0.2μm滅菌フィルターに通して濾過し、−20℃で保存するために滅菌バイアルに移した。
227Th−AGC1018注入における線量の調製
バイアル1本分の約50MBq Th−227塩化物フィルムを2mlの8M HNO3溶液に溶解して15分間放置した後、陰イオン交換カラムにかけて、経時的に増加したラジウム−223を除去するために、溶液を取り出した。カラムを3mlの8M HNO3および1mlの水で洗った後、3mlの3M HClでTh−227を溶出した。真空ポンプおよび100℃に設定した加熱ブロックを60〜90分間使用し、HCl溶出液を蒸発させた。乾燥したTh−227の放射能を線量校正装置で測定した。乾燥したTh−227を0.05M HClに溶解し、0.5MBq/μlの濃度を得た。放射標識のために200μl中、25μg mAbにするために、複合体AGC1018を配合緩衝液に希釈した。AGC1018溶液に、1MBq Th−227を混合し、厳密なTh−227の放射能をゲルマニウム検出器で測定した。室温で30〜60分間キレート化させた後、滅菌バイアル内で滅菌濾過した。使用前にiTLC分析を行ってRCPを測定するためにサンプルを取り出した。
LNCaP細胞を発現させるPSMAに対する227Th−AGC1018の細胞毒性
PSMA陽性細胞に結合した後の227Th−AGC1018の細胞毒性を示すために、インビトロ細胞毒性アッセイを実施した。この目的のために、ヒト前立腺癌細胞株LNCaPを227Th−AGC1018に曝露した。全放射能を、20kBq/mlから出発し、40kBq/μgの比放射能で12点にわたって3倍希釈で滴定した。関連のないアイソタイプ対照を並行して調製した。すべての実験手順はアーカイブRD.2015.101に記載されている。簡潔には、ヒトLNCaP細胞を、10%FBSおよび1%ペニシリン/ストレプトマイシンを追加したRPMI 1640培地で培養した。細胞を、96ウェルプレートに2500細胞/ウェルの密度で播種した。播種の24時間後(1日目)、細胞を227Th−AGC1018および227Th−アイソタイプ対照に0〜20kBq/mlの範囲の全放射能で、37℃で5日間曝露した。6日目に、細胞を回収し、CellTiterGlo(登録商標)キット(Promega)を用いて生存率を測定した。陽性対照(未処理細胞)を100%に設定して、生存率を%で表した。
Claims (27)
- a)N位においてC1−C3アルキル基で置換された4つのヒドロキシピリジノン(HOPO)部分と、末端がカルボン酸基のカップリング部分とを含むオクタデンテートキレート化剤を生成するステップと、
b)前記オクタデンテートキレート化剤を、少なくとも1つのアミドカップリング試薬により、少なくとも1つのアミン部分を含む少なくとも1つの組織標的化ペプチドまたはタンパク質とカップリングし、これにより、組織標的化キレート化剤を生成するステップと、
c)前記組織標的化キレート化剤を、少なくとも1つのα放出トリウム同位体のイオンを含む水溶液と接触させるステップと
を含む、組織標的化トリウム錯体を形成するための方法。 - ステップb)が水溶液中で実施される請求項1に記載の方法。
- 前記アミドカップリング試薬が水溶液中で機能する請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記アミドカップリング試薬が、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)、N,N’−ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)またはN,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)などのカルボジイミドカップリング試薬である請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- ステップb)が、pH4〜9の間の水溶液中で実施される請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- ステップb)が、15〜50℃の間で5〜120分間実施される請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- ステップc)が、15〜50℃の間で1〜60分間実施される請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記オクタデンテートキレート化剤が、4つの3,2−HOPO部分を含む請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記組織標的化部分が、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、抗体断片(Fab、F(ab’)2、Fab’またはscFvなど)あるいはこのような抗体および/または断片のコンストラクトである請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記組織標的化部分が、CD22受容体、FGFR2、メソテリン、HER−2、PSMAまたはCD33に対する結合親和性を有する請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1から11のいずれか一項に記載の方法によって形成される、または形成可能な組織標的化トリウム錯体。
- 4つの3,2−HOPO部分を含む請求項12に記載の組織標的化トリウム錯体。
- CD22受容体、FGFR2、メソテリン、HER−2、PSMAまたはCD33に対する結合親和性を有する請求項12または請求項13に記載の組織標的化トリウム錯体。
- 227Thなどのα放出トリウム放射性核種の4+イオンを含む請求項12から14のいずれか一項に記載の組織標的化トリウム錯体。
- モノクローナルまたはポリクローナル抗体、抗体断片(Fab、F(ab’)2、Fab’またはscFvなど)あるいはこのような抗体および/または断片のコンストラクトから選択される組織標的化部分を含む請求項12から16のいずれか一項に記載の組織標的化トリウム錯体。
- 請求項12から18のいずれか一項に記載の少なくとも1つの組織標的化トリウム錯体を含む医薬配合物。
- クエン酸塩緩衝液をさらに含む請求項19に記載の医薬配合物。
- p−アミノ酪酸(PABA)、ならびに任意選択でEDTAおよび/または少なくとも1つのポリソルベートをさらに含む請求項19または請求項20に記載の医薬配合物。
- 増殖性または腫瘍性疾患の治療のための医薬品の製造における請求項12から18のいずれか一項に記載の組織標的化トリウム錯体または請求項19から21のいずれか一項に記載の医薬配合物の使用。
- 前記疾患が、癌腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫もしくはB細胞新生物を含む混合型癌、乳癌、子宮内膜癌、胃癌、急性骨髄性白血病、前立腺癌または脳癌、中皮腫、卵巣癌、肺癌または膵臓癌である請求項22に記載の使用。
- 少なくとも1つの請求項12から18のいずれか一項に記載の組織標的化トリウム錯体または少なくとも1つの請求項19から21のいずれか一項に記載の医薬配合物を投与するステップを含む、ヒトまたは非ヒト動物(特に治療方法を必要とするもの)の治療方法。
- 癌腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫もしくはB細胞新生物を含む混合型癌、乳癌、子宮内膜癌、胃癌、急性骨髄性白血病、前立腺癌または脳癌、中皮腫、卵巣癌、肺癌または膵臓癌などの増殖性または腫瘍性疾患の治療のための請求項24に記載の方法。
- 癌腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫もしくはB細胞新生物を含む混合型癌、乳癌、子宮内膜癌、胃癌、急性骨髄性白血病、前立腺癌または脳癌、中皮腫、卵巣癌、肺癌または膵臓癌などの増殖性および/または腫瘍性疾患の治療における使用のための請求項12から18のいずれか一項に記載の組織標的化トリウム錯体または請求項19から21のいずれか一項に記載の医薬配合物。
- i)N位においてC1−C3アルキル基で置換された4つのヒドロキシピリジノン(HOPO)部分と、末端がカルボン酸基のカップリング部分とを含むオクタデンテートキレート化剤と、
ii)少なくとも1つのアミン部分を含む少なくとも1つの組織標的化ペプチドまたはタンパク質と、
iii)少なくとも1つのアミドカップリング試薬と、
iv)任意選択で好ましくは、227Thなどのα放出トリウム放射性核種と
を含む請求項1から11のいずれか一項に記載の方法における使用のためのキット。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB201422512 | 2014-12-17 | ||
GB1422512.2 | 2014-12-17 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017532833A Division JP6821569B2 (ja) | 2014-12-17 | 2015-12-15 | 放射性医薬錯体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021063108A true JP2021063108A (ja) | 2021-04-22 |
JP7160961B2 JP7160961B2 (ja) | 2022-10-25 |
Family
ID=54884033
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017532833A Active JP6821569B2 (ja) | 2014-12-17 | 2015-12-15 | 放射性医薬錯体 |
JP2021000454A Active JP7160961B2 (ja) | 2014-12-17 | 2021-01-05 | 放射性医薬錯体 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017532833A Active JP6821569B2 (ja) | 2014-12-17 | 2015-12-15 | 放射性医薬錯体 |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170340759A1 (ja) |
EP (1) | EP3233137A1 (ja) |
JP (2) | JP6821569B2 (ja) |
KR (1) | KR20170094223A (ja) |
CN (1) | CN107278155B (ja) |
AR (1) | AR103063A1 (ja) |
AU (2) | AU2015367722A1 (ja) |
BR (1) | BR112017012841A2 (ja) |
CA (1) | CA2970841A1 (ja) |
CL (1) | CL2017001592A1 (ja) |
CO (1) | CO2017005975A2 (ja) |
CR (1) | CR20170256A (ja) |
CU (1) | CU24493B1 (ja) |
DO (1) | DOP2017000143A (ja) |
EA (1) | EA201791350A9 (ja) |
EC (1) | ECSP17038089A (ja) |
IL (1) | IL252244B (ja) |
JO (1) | JOP20150319B1 (ja) |
MA (1) | MA41176A (ja) |
MX (1) | MX2017008093A (ja) |
MY (1) | MY194190A (ja) |
NI (1) | NI201700076A (ja) |
PE (2) | PE20171181A1 (ja) |
PH (1) | PH12017501125A1 (ja) |
SG (1) | SG11201704917XA (ja) |
TN (1) | TN2017000255A1 (ja) |
TW (1) | TWI654179B (ja) |
UA (1) | UA125369C2 (ja) |
UY (1) | UY36453A (ja) |
WO (1) | WO2016096843A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108778347A (zh) * | 2016-03-24 | 2018-11-09 | 拜耳制药股份公司 | 放射性药物配合物 |
BR112018075554A2 (pt) * | 2016-06-10 | 2019-10-01 | Bayer As | complexos radiofarmacêuticos |
WO2018153975A1 (en) | 2017-02-24 | 2018-08-30 | Bayer As | Combination therapy comprising a radiopharmaceutical and a dna-repair inhibitor |
JP2020515596A (ja) * | 2017-03-30 | 2020-05-28 | コーネル ユニバーシティー | α線放出放射線核種の大環状錯体およびがんの標的放射線療法におけるそれらの使用 |
CA3110754A1 (en) | 2018-08-28 | 2020-03-05 | Bayer As | Combination of pi3k-inhibitors and targeted thorium conjugates |
US20220125960A1 (en) | 2019-02-21 | 2022-04-28 | Bayer Aktiengesellschaft | Combination of pd-1/pd-l1 inhibitors and targeted thorium conjugates |
EP3927339A1 (en) | 2019-02-22 | 2021-12-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Combination of ar antagonists and targeted thorium conjugates |
AR119479A1 (es) | 2019-07-25 | 2021-12-22 | Bayer As | Radiofármacos dirigidos para diagnóstico y tratamiento de cáncer |
TW202216771A (zh) | 2020-06-26 | 2022-05-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 用於治療應用之ccr8抗體 |
CN116745323A (zh) | 2021-01-22 | 2023-09-12 | 拜耳股份有限公司 | Lrrc15抗体及其缀合物 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013519658A (ja) * | 2010-02-12 | 2013-05-30 | アルゲッタ エイエスエイ | アルファ放出複合体 |
WO2013167756A1 (en) * | 2012-05-11 | 2013-11-14 | Algeta Asa | Radio-pharmaceutical complexes |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008085064A2 (en) * | 2007-01-11 | 2008-07-17 | Ge Healthcare As | Hydroxypyridinone chelating agents, their metal complexes and their use as mri contrast agents |
-
2015
- 2015-12-14 MA MA041176A patent/MA41176A/fr unknown
- 2015-12-15 MX MX2017008093A patent/MX2017008093A/es unknown
- 2015-12-15 UA UAA201707516A patent/UA125369C2/uk unknown
- 2015-12-15 EP EP15813024.5A patent/EP3233137A1/en active Pending
- 2015-12-15 MY MYPI2017702228A patent/MY194190A/en unknown
- 2015-12-15 WO PCT/EP2015/079773 patent/WO2016096843A1/en active Application Filing
- 2015-12-15 EA EA201791350A patent/EA201791350A9/ru unknown
- 2015-12-15 TN TN2017000255A patent/TN2017000255A1/en unknown
- 2015-12-15 CU CU2017000082A patent/CU24493B1/es unknown
- 2015-12-15 CN CN201580069545.0A patent/CN107278155B/zh active Active
- 2015-12-15 AU AU2015367722A patent/AU2015367722A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-15 US US15/537,127 patent/US20170340759A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-15 PE PE2017001093A patent/PE20171181A1/es unknown
- 2015-12-15 KR KR1020177016311A patent/KR20170094223A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-12-15 CA CA2970841A patent/CA2970841A1/en active Pending
- 2015-12-15 PE PE2022002504A patent/PE20230829A1/es unknown
- 2015-12-15 BR BR112017012841A patent/BR112017012841A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-12-15 SG SG11201704917XA patent/SG11201704917XA/en unknown
- 2015-12-15 CR CR20170256A patent/CR20170256A/es unknown
- 2015-12-15 JP JP2017532833A patent/JP6821569B2/ja active Active
- 2015-12-16 JO JOP/2015/0319A patent/JOP20150319B1/ar active
- 2015-12-17 AR ARP150104130A patent/AR103063A1/es unknown
- 2015-12-17 UY UY0001036453A patent/UY36453A/es not_active Application Discontinuation
- 2015-12-17 TW TW104142567A patent/TWI654179B/zh active
-
2017
- 2017-05-11 IL IL252244A patent/IL252244B/en active IP Right Grant
- 2017-06-15 PH PH12017501125A patent/PH12017501125A1/en unknown
- 2017-06-16 CO CONC2017/0005975A patent/CO2017005975A2/es unknown
- 2017-06-16 NI NI201700076A patent/NI201700076A/es unknown
- 2017-06-16 DO DO2017000143A patent/DOP2017000143A/es unknown
- 2017-06-16 CL CL2017001592A patent/CL2017001592A1/es unknown
- 2017-06-19 EC ECIEPI201738089A patent/ECSP17038089A/es unknown
-
2021
- 2021-01-05 JP JP2021000454A patent/JP7160961B2/ja active Active
- 2021-01-15 US US17/150,811 patent/US20210322583A1/en not_active Abandoned
- 2021-04-29 AU AU2021202665A patent/AU2021202665B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013519658A (ja) * | 2010-02-12 | 2013-05-30 | アルゲッタ エイエスエイ | アルファ放出複合体 |
WO2013167756A1 (en) * | 2012-05-11 | 2013-11-14 | Algeta Asa | Radio-pharmaceutical complexes |
WO2013167755A1 (en) * | 2012-05-11 | 2013-11-14 | Algeta Asa | Radio-pharmaceutical complexes |
WO2013167754A1 (en) * | 2012-05-11 | 2013-11-14 | Algeta Asa | Radio-pharmaceutical complexes |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GREG T HERMANSON: "BIOCONJUGATE TECHNIQUES (3RD EDITION) - CHAPTER 3", BIOCONJUGATE TECHNIQUES,THIRD EDITION, JPN5017010455, November 2013 (2013-11-01), pages 229 - 240, ISSN: 0004670230 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7160961B2 (ja) | 放射性医薬錯体 | |
JP6211066B2 (ja) | 放射性医薬錯体 | |
JP6125599B2 (ja) | アルファ放出複合体 | |
JP2019517547A (ja) | 放射性医薬品錯体 | |
JP2022173214A (ja) | 放射性医薬錯体 | |
EA043221B1 (ru) | Радиофармацевтические комплексы |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210129 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211224 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220301 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220613 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220920 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221013 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7160961 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |