JP2020530271A - 安定化されたコピー数の機能性dna配列を有する微生物及び関連方法 - Google Patents
安定化されたコピー数の機能性dna配列を有する微生物及び関連方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020530271A JP2020530271A JP2019572198A JP2019572198A JP2020530271A JP 2020530271 A JP2020530271 A JP 2020530271A JP 2019572198 A JP2019572198 A JP 2019572198A JP 2019572198 A JP2019572198 A JP 2019572198A JP 2020530271 A JP2020530271 A JP 2020530271A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- spp
- microorganism
- gene
- dna sequence
- duplication
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 91
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 78
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 169
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 73
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 72
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 40
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 32
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 28
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 24
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 23
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 23
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 23
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 claims description 10
- 101150080712 PDR12 gene Proteins 0.000 claims description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 claims description 7
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 claims description 6
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 claims description 5
- 241000203069 Archaea Species 0.000 claims description 5
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 5
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 5
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims description 5
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims description 5
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 5
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 4
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 4
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 claims description 4
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims description 4
- 241000235017 Zygosaccharomyces Species 0.000 claims description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 4
- 230000009603 aerobic growth Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 37
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 31
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 abstract description 29
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 abstract description 13
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 12
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 45
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 39
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 24
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 20
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 20
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 19
- 230000004545 gene duplication Effects 0.000 description 19
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 18
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 101150085064 menC gene Proteins 0.000 description 16
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 15
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 12
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 11
- 101150080369 tpiA gene Proteins 0.000 description 11
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 10
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 10
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 9
- 101100054295 Arabidopsis thaliana ABCG37 gene Proteins 0.000 description 8
- 101100054308 Arabidopsis thaliana ABCG40 gene Proteins 0.000 description 8
- 101100107597 Oryza sativa subsp. japonica ABCG42 gene Proteins 0.000 description 8
- 101100519254 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PDR12 gene Proteins 0.000 description 8
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 8
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 8
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 7
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 7
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 7
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 7
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 7
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101150033985 TPI gene Proteins 0.000 description 6
- 101150032817 TPI1 gene Proteins 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 6
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 6
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 6
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 6
- HYPYXGZDOYTYDR-HAJWAVTHSA-N 2-methyl-3-[(2e,6e,10e,14e)-3,7,11,15,19-pentamethylicosa-2,6,10,14,18-pentaenyl]naphthalene-1,4-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 HYPYXGZDOYTYDR-HAJWAVTHSA-N 0.000 description 5
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 5
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 5
- 235000019143 vitamin K2 Nutrition 0.000 description 5
- 239000011728 vitamin K2 Substances 0.000 description 5
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100280051 Brucella abortus biovar 1 (strain 9-941) eryH gene Proteins 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- 101100235161 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) lerI gene Proteins 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- -1 carotinoids Chemical class 0.000 description 4
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 4
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 4
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 101150116440 pyrF gene Proteins 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 4
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100036669 Glycerol-3-phosphate dehydrogenase [NAD(+)], cytoplasmic Human genes 0.000 description 3
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 description 3
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 3
- 102100033598 Triosephosphate isomerase Human genes 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 3
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 3
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006151 minimal media Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 3
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010041921 Glycerolphosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 101000801742 Homo sapiens Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 230000009604 anaerobic growth Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 2
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 2
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N orotic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 101150079601 recA gene Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 101150025220 sacB gene Proteins 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N (2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N 0.000 description 1
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-M (R)-lactate Chemical compound C[C@@H](O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-M 0.000 description 1
- SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 5-fluoroorotic acid Chemical compound OC(=O)C=1NC(=O)NC(=O)C=1F SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 101100504216 Arabidopsis thaliana GLDP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100288313 Arabidopsis thaliana KTI4 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100351264 Candida albicans (strain SC5314 / ATCC MYA-2876) PDC11 gene Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150034590 DAR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091028710 DLEU2 Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108700039964 Duplicate Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 description 1
- 241001465328 Eremothecium gossypii Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101100264215 Gallus gallus XRCC6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 101000927810 Homo sapiens DNA ligase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001072574 Homo sapiens Glycerol-3-phosphate dehydrogenase [NAD(+)], cytoplasmic Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 101150059802 KU80 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050008554 Multidrug resistance protein MdtK Proteins 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100028920 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cfp gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050255 PDC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100393304 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GPD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100079811 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) NEJ1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000018368 Saccharomyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 101100373279 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) xlf1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101100309436 Streptococcus mutans serotype c (strain ATCC 700610 / UA159) ftf gene Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037116 Transcription elongation factor 1 homolog Human genes 0.000 description 1
- 102100036973 X-ray repair cross-complementing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036976 X-ray repair cross-complementing protein 6 Human genes 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235029 Zygosaccharomyces bailii Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 101150087371 gpd1 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940031154 kluyveromyces marxianus Drugs 0.000 description 1
- 101150085005 ku70 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010023497 kuru Diseases 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229960005010 orotic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091035233 repetitive DNA sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000053632 repetitive DNA sequence Human genes 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001577 simple distillation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 101150004004 tipA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
- C12N15/905—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/245—Escherichia (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
- C12P7/46—Dicarboxylic acids having four or less carbon atoms, e.g. fumaric acid, maleic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/04—Immortalised cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2017年6月30日出願の米国仮特許出願第62/527,442号、及び2017年11月10日出願の米国仮特許出願第62/584,270号の優先権を主張するものである。
該当なし。
該当なし。
本出願と関連する配列表は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルは、USPTO電子ファイリングシステム(EFS-Web)を通して電子的に提出した。
本発明の理解を容易にするために、命名法の説明を下記に示す。
本発明の理解を容易にするために、幾つかの用語は下記に定義し、その他の用語は本明細書の他の箇所で明らかにする。
センブリーによる制限酵素で生成させた断片の連結等の、当技術分野で公知の方法を用いる1つ又は複数の工程において構築されてもよい。
一実施形態において、本発明は、第1の設定条件下で、例えば嫌気性又は微好気性条件下で、株を代謝的に進化させる工程、次いで、第2の設定条件下で、例えば好気的に、得られた進化した株を成長させる工程、更に進化させるために、所望の発酵生成物の生産が改善された株について、第2の条件から分離された株をスクリーニングする工程を含む、所望の発酵生成物の力価を高める方法を提供する。
様々なKJ122保存株及びファージ耐性派生体のゲノム構造
Table 1(表1)に、幾つかのファージ耐性派生体を含む最初の大腸菌KJ122株に由来する様々な異なる保存株によって得られた、ゲノム構造及びコハク酸力価の概要を示す。Table 1(表1)中に記載した7株はすべて、Illumina社(San Diego、California、米国)からの技術を使用して全ゲノム配列決定を行い、ゲノムのデータは、Lasergene Genomic Suiteソフトウエアパッケージ(DNAStar社、Madison、WI)を使用して解析した。DNA配列データ分析から、「KJ122-F475」と名付けた(「KJ122-F」と称することもある)特定の保存株が、予想外に、その親株である大腸菌Crooksと比較して2つの多重遺伝子重複を獲得していたことが明らかとなった(図1)。これらの2つの多重遺伝子重複は、本明細書において、「A重複」及び「B重複」と称される。また、B重複を含む株は、本明細書において、「B+」である、とも称する。
コハク酸生産株におけるB重複のPCR識別
2つのプライマー(BY296及びBY297)を、B重複のPCR(ポリメラーゼ連鎖反応)識別のために設計した。これらの2つのプライマーは、図3に図示したように、それぞれ、B重複の接合部位のすぐ上流及び下流でハイブリダイズする。BY296は、B重複の3'末端付近の遺伝子である大腸菌C_1386遺伝子の3'末端(終止コドンから35bp上流)からプライミングする。BY297は、B重複の第2の遺伝子である大腸菌C_1277遺伝子の3'末端に配置される。
様々な細菌株に関する詳細
本発明において構築された様々な細菌株に関する詳細を、Table 2(表2)に示す。本発明において使用したプラスミドのリストを、Table 3(表3)に示す。プライマー及び遺伝子に関する配列情報を、Tables 4(表4)及びTables 5(表5)に示す。
安定化したB重複を含む株の構築
図5及び図6に、B重複が実施例1で記載したように安定化されている、様々な株の構築を示す。安定化された株はすべて、ラムダレッドリコンビナーゼシステムにより支援される線状DNAを用いる組込み型形質転換の既知の方法を使用し、次に相同組込みについて選択し、次に正確な組込みについて識別PCRを行うことによって、且つ/又は代謝的進化によって構築した(Jantama等、2008年a;Jantama等、2008年b)。
B重複の安定化
B重複及びB重複の接合部に取り込まれた選択マーカーcscBAKを含有する株XZ174の18個の個別のコロニー、並びに、B重複を含有するが、B重複の接合部に取り込まれた安定化選択マーカーを含有しない株XZ132の13個の個別のコロニーを、約50世代の間、炭素源としてショ糖を含有する液体培養液中で好気的に成長させた。次いで、プライマーBY296及びBY297を使用する識別PCRによって、反応開始部位の間にcscBAKオペロンを含む余分の4キロベースのDNAに対応するために68oCでの伸長時間を2分から6分に延ばしたこと以外は上述と同様に、各培養液をB重複の存在について試験した。安定化した株XZ174からの18個の培養物はすべて、B重複及び選択マーカーを保持して、5.8キロベースのPCR生成物をもたらしたのに対し、株XZ132については、B重複は安定化されておらず、13個の培養物のうちの2つがB重複を失っていた。このように、B重複の2つのコピー間の接合部における選択マーカーが、まさにB重複のコピー数を安定させていた。
様々な大腸菌株によるショ糖発酵
本特許出願に記載した3種の異なる大腸菌株を、最少培地の唯一の炭素源としてショ糖を使用して、7リットル発酵槽で成長させ、それらの発酵能をモニターした。これらの発酵のための発酵方法の詳細は、Table 1(表1)に示した詳細と同様に、米国特許第9,845,513号に既述されている。この発酵試験の結果を、Table 5(表5)に示す。示した数値は、独立した2つの発酵の平均である。B重複を含有する2つの株(XZ132及びXZ174)はいずれも、力価、収量、及び発酵時間に関して、B重複を含有しない対照株SD14より良好な性能を発揮した。
3つ以上のコピーをもたらす重複
場合によって、DNA配列の重複は、縦列するDNA配列の3つ以上のコピーをもたらすことがある(Fierro、Barredo等、1995年)。コピーの数は、幾つかの適切な方法のいずれかによって、例えば、生のIlluminaプラットフォームデータにおけるリード頻度の検討、生のPacBioデータの直接観察(重複が大きくない場合)、定量的PCR、制限消化及びアガロースゲル電気泳動、又は全染色体の電気泳動(重複が比較的大きい場合)によって、決定されうる。n個のコピーの重複がある場合、n個のコピーすべての安定化は、上記の実施例1で説明したように、重複の隣接するペア各々の間に選択マーカーを取り込むことによって達成されうる。重複のn個のコピーが、好ましくはn-1個の選択マーカーで安定化されうるように、重複の隣接するペア各々に対して、(以前に使用した他のどのマーカーとも無関係に選択されうるマーカーである)違う選択マーカーを使用することが好ましい。多様な必須遺伝子を条件的に必要となるようにさせうるため、多様な利用可能な選択マーカーがあり、よって、重複の多くのコピーが安定化されうる。例えば、pyrF遺伝子は、安定化されることが望まれる重複を含有する大腸菌株から、変異(好ましくは欠失)によって不活性化され得、これによって、株の成長はウラシル付加依存性となる。第2の工程において、株をウラシルの非存在下で成長させる場合、重複配列の隣接するペアの接合部での機能性pyrF遺伝子(天然又は異種のいずれかのホモログ)の取り込みは、次いで、重複の該ペアを安定させることとなる。したがって、例えば、重複が、大腸菌株において重複DNAの3つのコピーを含有するならば、tipA遺伝子を第1のペアに対する選択マーカーとして使用することができ、pyrF遺伝子を第2のペアに対して使用することができる。ほどんどの微生物に多数の生合成経路遺伝子があることを考慮すると、この概念を拡張し、繰り返すことによって、多数の重複したコピーを安定化することができる。同様に、TPI、URA3、及びその他の生合成酵母遺伝子を、酵母において同様の方法で使用することができる。理論上、単純な栄養要求性が見出されうる、又は構築されうる遺伝子はいずれも、このようにして利用されうる。
B重複の更なる増強
B重複に起因するスクシネート力価の上昇を説明する1つの考えられる機序は、B重複が、メナキノン生合成オペロンの最初の4つの遺伝子、menFDHBの第2のコピーをもたらすということ、及びこれらの遺伝子の発現が増加されたことによりメナキノンの濃度が上昇し、この結果、細胞の嫌気性又は微好気性条件下で成長する能力が高められるというものである。しかしながら、IS4エレメントがmenC遺伝子の中央に挿入したため、menオペロンの最後の2つの遺伝子menCEは、B重複中で重複されていない。したがって、menオペロンの完全な第2のコピーを与えるための、図4に線描したようなB重複の第1のコピーの3'末端におけるmenCEの無傷のコピーの挿入は、細胞のメナキノンを合成する能力を更に高めるはずである。このような挿入は、相同組換えにより線状DNA断片を染色体へ組み込む当技術分野で公知の方法、例えば、第1の工程において、B重複接合部のmenCとIS4との間の境界にcat,sacBカセットを組み込み、クロラムフェニコール耐性について選択し、次いで、第2の工程において、再構成されたmenCE遺伝子カセットを、ショ糖を含有するプレート上でのsacB遺伝子に対する対抗選択により組み込むことによって、容易に成し遂げられうる(Jantama等、2008年a;Jantama等、2008年b;(Zhu、Tan等、2014年);及び米国特許第8,691,539号)。再構成されたmenCEカセットは、適切な隣接相同、例えば、menC遺伝子の5'末端の上流の約500塩基対及びIS4の5'末端の約500塩基対を、含有することになる。
酵母における重複の安定化
クルイベロマイセス・マルキシアヌス(Kluyveromyces marxianus)のゲノム配列から、PDR12と注釈付けされた遺伝子が重複として存在することを見て取ることができる。サッカロマイセス・セレビシエにおける研究から、Pdr12pは、弱有機酸耐性のために必要な弱酸誘導性多剤排出トランスポーターであることが既知である。サッカロマイセス・セレビシエ株におけるPDR12の欠失によって、乳酸による阻害に対する感受性が増加した(Nygard、Mojzita等、2014年)。したがって、K.マルキシアヌスにおけるPDR12ホモログの重複は、低いpHでの有機酸に対するその並外れた耐性にとって重要でありえたと推論されうる(特許出願WO2014/043591)。PDR12重複の消失を防ぐために、酵母の発酵によって有機酸を産生するように操作されている株においてPDR12重複を安定化させることは、したがって、論理的である。これは、上記で示した実施例と同様に、PDR12遺伝子の第1のコピーの終止コドンから約380塩基対下流のPsiI制限部位に選択マーカーを挿入することによって行われうる。すべての工程において、識別PCRによって、正しい構造を確認する。第1の工程では、URA3コード配列を、株DMKU3等のPDR12重複を含有する祖先K.マルキシアヌス株から、線状の欠失カセット(配列番号11)で形質転換し、上記のような5-フルオロオロチン酸に対する耐性について選択することによって欠失させる。第2の工程では、K.マルキシアヌスTPI遺伝子のコピーを、以下のように、PRD12重複の重複接合部に挿入する。第2のカセット(例えば、配列番号12)は、以下のDNA配列を列記した順で連結させる。(1)PDR12遺伝子の5'コピーの終止コドンからPsiI制限部位までの380塩基対配列のコピーを含む、上流の隣接相同、(2)自身のプロモーター及びターミネーターを含む、TPI遺伝子のコピー、(3)重要ではない機能をコードし、宿主株のどの配列に対しても相同性がない、任意の300塩基対DNA配列のコピー(「配列X」)、(4)自身のプロモーター及びターミネーターを含む、サッカロマイセス・セレビシエURA3遺伝子のコピー、(5)配列Xの第2のパラレルなコピー、及び(6)上記の、PRD12遺伝子の5'コピーから、3'がちょうど下流のPsiI制限部位までである400塩基対配列のコピー。このカセットを、形質転換し、ウラシルを欠く最少グルコース培地で選択することによって組み込む。第3の工程では、得られた株を、1g/Lの5-フルオロオロチン酸及び1リットル当たり24mgのウラシルを含有するプレート当たり約108細胞で平板培養して、URA3遺伝子に対して対抗選択し、配列Xの2つのパラレルなコピーの間の組換えによって、それを削除する。第4の工程では、天然の座位にあるTPI遺伝子を以下のように欠失させる。カセットは、以下のDNA配列を列記した順で含んで構築する(配列番号13):(1)上記の第2の工程において使用したTPI1遺伝子と共に運ばれたプロモーターと全くオーバーラップしない、天然ではTPI1プロモーターのすぐ上流の500塩基対のコピー、(2)自身のプロモーター及びターミネーターを含む、サッカロマイセス・セレビシエURA3遺伝子のコピー、(3)上記の工程2において使用されたTPI1ターミネーターから、天然ではすぐ下流の500塩基対のコピー。次いで、このカセットを、ウラシルを欠く最少グルコース培地を含有するプレート上で選択することによって、第3の工程4からの該株へ組み込む。得られた株は、天然の座位からPDR12遺伝子の2つのコピー間の接合部に移植された、自身のプロモーター及びターミネーターを含むTPI1遺伝子を含有することとなる。TPI1遺伝子の天然のコピーは、サッカロマイセス・セレビシエURA3遺伝子で置換されているであろう。当業者であれば、上記の構築がPDR12重複を安定させる方法の一例にすぎないこと、及び多くのその他の機能的に等価の手法が可能であることを理解されよう。
本発明の概括
本明細書において開示した実施例では、宿主生物として大腸菌又はK.マルキシアヌス、及び所望の生成物としてコハク酸を使用したが、当業者は、相同組換え及び不等乗換えが、これについて調べられている微生物の事実上すべてにおいて公知の現象であることを理解されよう。したがって、本明細書において開示した方法及び原理は、多くの微生物及び多くのDNA配列に適用されうるものであり、唯一の制約は、ここでは、外来DNAを微生物へ導入する方法が、例えば、形質転換、形質導入、トランスフェクション、又は交配によるということである。例えば、ザイゴサッカロマイセス・バイリー(Zygosaccharomyces bailii)は、低いpHで有機酸に対して耐性であることがよく知られている酵母であるが、PDR12との相同性が高い遺伝子の3つのコピーを縦列して含有する。これらの3つの縦列重複遺伝子は、GenBank受託番号HG316458においてBN860_04456g、BN860_04478g、及びBN860_04500gと名付けられており、Z.バイリー株CLIB 213のゲノム配列のスキャホールド5を開示している。この3つのコピーは、本明細書に記載したように、各々ペアの間に選択マーカーを組み込むことによって安定化されうる。
Claims (19)
- 安定化されたコピー数の機能性DNA配列を有する天然には存在しない微生物であって、n個のコピーの機能性DNA配列、及び前記n個のコピーの機能性DNA配列の、少なくとも1つの隣接するペアの間に少なくとも1つの選択マーカーを含み、前記天然には存在しない微生物が祖先微生物の子孫であり、前記祖先微生物がn-1個未満のコピーの前記機能性DNA配列を含み、nが少なくとも2である、微生物。
- 前記微生物が、細菌、酵母、糸状菌、又は古細菌である、請求項1に記載の天然には存在しない微生物。
- 前記微生物が、エシェリキア属菌、クレブシエラ属菌、サッカロマイセス属菌、ペニシリウム属菌、バチルス属菌、イッサチェンキア属菌、ピキア属菌、カンジダ属菌、コリネバクテリウム属菌、ストレプトマイセス属菌、アクチノマイセス属菌、クロストリジウム属菌、アスペルギルス属菌、トリコデルマ属菌、リゾープス属菌、ムコール属菌、ラクトバチルス属菌、ザイゴサッカロマイセス属菌、及びクルイベロマイセス属菌からなる群から選択される、請求項1に記載の天然には存在しない微生物。
- 前記微生物が、大腸菌又はクルイベロマイセス・マルキシアヌスである、請求項1に記載の天然には存在しない微生物。
- 前記機能性DNA配列が、B重複、PDR12遺伝子、又はPDR12遺伝子のホモログにおいて重複された配列である、請求項4に記載の天然には存在しない微生物。
- 前記選択マーカーが、トリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子、又はショ糖を代謝するためのカセットである、請求項1に記載の天然には存在しない微生物。
- 前記微生物が、類似の培養条件下で、前記祖先微生物によって生じた所望の発酵生成物の力価より少なくとも10パーセント大きい前記所望の発酵生成物の力価を生じる、請求項1に記載の天然には存在しない微生物。
- 安定化されたコピー数の機能性DNA配列を有する天然には存在しない微生物を創出する方法であって、
(a) n個のコピーの機能性DNA配列を含む天然には存在しない微生物を用意する工程であって、前記天然には存在しない微生物が祖先微生物の子孫であり、前記祖先微生物がn-1個未満のコピーの前記機能性DNA配列を含み、nが少なくとも2である、工程、及び
(b)前記機能性DNA配列のコピー数を安定化させるために、少なくとも1つの選択マーカーを、前記天然には存在しない微生物に、前記n個のコピーの前記機能性DNA配列の、少なくとも1つの隣接するペアの間において挿入する工程
を含む方法。 - 前記微生物が、細菌、酵母、糸状菌、又は古細菌である、請求項8に記載の方法。
- 前記微生物が、エシェリキア属菌、クレブシエラ属菌、サッカロマイセス属菌、ペニシリウム属菌、バチルス属菌、イッサチェンキア属菌、ピキア属菌、カンジダ属菌、コリネバクテリウム属菌、ストレプトマイセス属菌、アクチノマイセス属菌、クロストリジウム属菌、アスペルギルス属菌、トリコデルマ属菌、リゾープス属菌、ムコール属菌、ラクトバチルス属菌、ザイゴサッカロマイセス属菌、及びクルイベロマイセス属菌からなる群から選択される、請求項9に記載の方法。
- 前記微生物が、大腸菌又はクルイベロマイセス・マルキシアヌスである、請求項8に記載の方法。
- 前記機能性DNA配列が、B重複、PDR12遺伝子、又はPDR12遺伝子のホモログにおいて重複された配列である、請求項11に記載の方法。
- 祖先微生物の機能性DNA配列の重複から得られた少なくとも1つの改善された発酵パラメーターを有する子孫微生物を同定する方法であって、
(a)少なくとも1つの子孫微生物を生成する第1の設定の発酵条件下で、前記祖先微生物を成長させる工程、
(b)第2の設定の発酵条件下で、前記少なくとも1つの子孫微生物を成長させる工程、
(c)少なくとも1つの、前記祖先微生物と比較して改善された発酵パラメーターを有する、少なくとも1つの子孫微生物を同定する工程、
(d)少なくとも1つの改善された発酵パラメーターを有する前記少なくとも1つの子孫微生物のDNA配列、及び前記祖先微生物のDNA配列を決定する工程、並びに
(e)前記子孫微生物における前記機能性DNA配列の重複を同定するために、少なくとも1つの改善された発酵パラメーターを有する前記少なくとも1つの子孫微生物の前記DNA配列を、前記祖先微生物のDNA配列と比較する工程
を含む方法。 - 前記第1の設定の発酵条件が嫌気的又は微好気的成長であり、前記第2の設定の発酵条件が好気的成長である、請求項13に記載の方法。
- 前記第1の設定の発酵条件が好気的成長であり、前記第2の設定の発酵条件が嫌気的又は微好気的成長である、請求項13に記載の方法。
- 前記祖先微生物が細菌、酵母、糸状菌、又は古細菌である、請求項13に記載の方法。
- 前記祖先微生物が、エシェリキア属菌、クレブシエラ属菌、サッカロマイセス属菌、ペニシリウム属菌、バチルス属菌、イッサチェンキア属菌、ピキア属菌、カンジダ属菌、コリネバクテリウム属菌、ストレプトマイセス属菌、アクチノマイセス属菌、クロストリジウム属菌、アスペルギルス属菌、トリコデルマ属菌、リゾープス属菌、ムコール属菌、ラクトバチルス属菌、ザイゴサッカロマイセス属菌、及びクルイベロマイセス属菌からなる群から選択される、請求項13に記載の方法。
- 前記微生物が、大腸菌又はクルイベロマイセス・マルキシアヌスである、請求項13に記載の方法。
- 前記機能性DNA配列が、B重複、PDR12遺伝子、又はPDR12遺伝子のホモログにおいて重複された配列である、請求項13に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762527442P | 2017-06-30 | 2017-06-30 | |
US62/527,442 | 2017-06-30 | ||
US201762584270P | 2017-11-10 | 2017-11-10 | |
US62/584,270 | 2017-11-10 | ||
PCT/US2018/040312 WO2019006312A1 (en) | 2017-06-30 | 2018-06-29 | MICROORGANISM HAVING A NUMBER OF STABILIZED COPIES OF A FUNCTIONAL DNA SEQUENCE AND ASSOCIATED METHODS |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020530271A true JP2020530271A (ja) | 2020-10-22 |
JPWO2019006312A5 JPWO2019006312A5 (ja) | 2022-07-11 |
Family
ID=63104006
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019572198A Pending JP2020530271A (ja) | 2017-06-30 | 2018-06-29 | 安定化されたコピー数の機能性dna配列を有する微生物及び関連方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20200131538A1 (ja) |
EP (1) | EP3645725A1 (ja) |
JP (1) | JP2020530271A (ja) |
KR (1) | KR20200023450A (ja) |
CN (1) | CN111094570A (ja) |
BR (1) | BR112019027919A2 (ja) |
CA (1) | CA3068459A1 (ja) |
WO (1) | WO2019006312A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113943690B (zh) * | 2021-10-27 | 2023-08-25 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 魏氏柠檬酸杆菌tpiA基因敲除突变株及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002524082A (ja) * | 1998-09-09 | 2002-08-06 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 形質転換した酵母細胞における異種ポリペプチドの産生方法 |
WO2010024905A1 (en) * | 2008-08-27 | 2010-03-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Genetically stabilized tandem gene duplication |
JP2016506743A (ja) * | 2013-02-11 | 2016-03-07 | エヴォルヴァ エスアー.Evolva Sa. | 組み換え宿主におけるステビオールグリコシドの効率的生産 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IE81016B1 (en) * | 1989-07-07 | 1999-09-22 | Unilever Plc | Process for preparing a protein by a fungus transformed by a multicopy integration of an expression vector |
IN191596B (ja) | 1996-05-06 | 2003-12-06 | Purdue Research Foundation | |
TR200200751T2 (tr) | 1999-09-21 | 2004-08-23 | Basf Aktiengesellschaft | Panto bileşiklerinin üretilmesi için yöntemler ve mikroorganizmalar. |
KR101631719B1 (ko) | 2007-03-20 | 2016-06-24 | 유니버시티 오브 플로리다 리서치 파운데이션, 인크. | 유효한 숙시네이트 및 말레이트 제조를 위한 물질 및 방법 |
WO2011037367A2 (ko) | 2009-09-22 | 2011-03-31 | 서울대학교병원 | 고효율 유도만능줄기세포 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 유도만능줄기세포 |
MY158175A (en) | 2009-11-18 | 2016-09-15 | Myriant Corp | Metabolic evolution of escherichia coli strains that produce organic acids |
BR112012011990A2 (pt) | 2009-11-18 | 2015-09-29 | Myriant Corp | microrganismo que não ocorre naturalmente e método para produzir ácido succínico |
SG191156A1 (en) | 2010-12-13 | 2013-07-31 | Myriant Corp | Method of producing succinic acid and other chemicals using sucrose-containing feedstock |
CN104812889B (zh) | 2012-09-14 | 2018-08-28 | 麦兰特公司 | 通过在低ph下发酵产生有机酸 |
WO2015013334A1 (en) | 2013-07-23 | 2015-01-29 | Myriant Corporation | Method of producing succinic acid and other chemicals using facilitated diffusion for sugar import |
JP6275847B2 (ja) * | 2014-02-28 | 2018-02-07 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | アルファ接合因子プロペプチドバリアント |
-
2018
- 2018-06-29 WO PCT/US2018/040312 patent/WO2019006312A1/en unknown
- 2018-06-29 CN CN201880055333.0A patent/CN111094570A/zh active Pending
- 2018-06-29 BR BR112019027919-9A patent/BR112019027919A2/pt unknown
- 2018-06-29 KR KR1020207002918A patent/KR20200023450A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-06-29 EP EP18749912.4A patent/EP3645725A1/en active Pending
- 2018-06-29 JP JP2019572198A patent/JP2020530271A/ja active Pending
- 2018-06-29 CA CA3068459A patent/CA3068459A1/en active Pending
- 2018-06-29 US US16/626,805 patent/US20200131538A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002524082A (ja) * | 1998-09-09 | 2002-08-06 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 形質転換した酵母細胞における異種ポリペプチドの産生方法 |
WO2010024905A1 (en) * | 2008-08-27 | 2010-03-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Genetically stabilized tandem gene duplication |
JP2016506743A (ja) * | 2013-02-11 | 2016-03-07 | エヴォルヴァ エスアー.Evolva Sa. | 組み換え宿主におけるステビオールグリコシドの効率的生産 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
THE EMBO JOURNAL, vol. 17, no. 15, JPN6022013001, 1998, pages 4257 - 4265, ISSN: 0005032532 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20200023450A (ko) | 2020-03-04 |
WO2019006312A1 (en) | 2019-01-03 |
CA3068459A1 (en) | 2019-01-03 |
EP3645725A1 (en) | 2020-05-06 |
CN111094570A (zh) | 2020-05-01 |
US20200131538A1 (en) | 2020-04-30 |
BR112019027919A2 (pt) | 2020-07-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Pérez-García et al. | Fermentative production of L‐pipecolic acid from glucose and alternative carbon sources | |
EP2468860B1 (en) | Transformant and process for production thereof, and process for production of lactic acid | |
US11104907B2 (en) | Engineering of acetyl-CoA metabolism in yeast | |
CN106715679B (zh) | 用于生产乙偶姻的方法 | |
JP2020043867A (ja) | 乳酸を生産する微生物及びそれを用いた乳酸の製造方法 | |
CN108350040A (zh) | 用于精细化学品的改进生产的重组微生物 | |
US11898173B2 (en) | Recombinant acid-resistant yeast having improved lactic-acid-producing ability | |
UA127433C2 (uk) | Спосіб одержання молочної кислоти та система з двох або більше біореакторів для виробництва молочної кислоти | |
JP2023156360A (ja) | キシリトールを生産するメチニコビア種 | |
JP2021058184A (ja) | 乳酸代謝及びアルコール生成の抑制された組み換え耐酸性酵母及びこれを用いた乳酸の製造方法 | |
Kuanyshev et al. | Domesticating a food spoilage yeast into an organic acid‐tolerant metabolic engineering host: Lactic acid production by engineered Zygosaccharomyces bailii | |
JP2020530271A (ja) | 安定化されたコピー数の機能性dna配列を有する微生物及び関連方法 | |
JP2014023528A (ja) | 改変微生物及び該改変微生物を利用した1,4−ブタンジオールの生産方法 | |
KR101781294B1 (ko) | 글리세롤을 탄소원으로 이용하는 고생장성 대장균 | |
WO2023004336A1 (en) | A genetically engineered yeast producing lactic acid | |
CN110997702A (zh) | 具有增加的琥珀酸产生的基因修饰的酵母 | |
CN107810269A (zh) | 新颖的启动子及其用途 | |
KR101902190B1 (ko) | 숙신산 생산능이 향상된 변이 미생물 및 이를 이용한 숙신산 생산방법 | |
JP5118899B2 (ja) | 高乳酸生産微生物及びその利用 | |
WO2019233853A1 (en) | Microorganisms and the production of fine chemicals | |
JP6778870B2 (ja) | 藍藻変異株及びそれを用いたコハク酸及びd−乳酸産生方法 | |
Sánchez et al. | Microbial Synthesis of Secondary Metabolites and Strain Improvement: Current Trends and Future Prospects | |
KR20150035657A (ko) | 2,3-부탄디올의 생성능이 증강된 재조합 미생물 및 이를 이용한 2,3-부탄디올의 생산 방법 | |
CN110869503A (zh) | 甲硫氨酸生产酵母 | |
CN114921435B (zh) | 鸟氨酸乙酰转移酶突变体、编码基因、质粒、基因工程菌及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210528 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220309 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220404 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20220701 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20221017 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230215 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20230215 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230221 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20230227 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20230414 |
|
C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20230424 |