JP2020528734A5 - - Google Patents

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Claims (15)

  1. 組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ビリオンであって、
    a)式I〜VIのいずれか1つの異種ペプチドの挿入を含み、対応する親AAVカプシドタンパク質を含む対照AAVビリオンによる網膜細胞の感染力と比較して、前記網膜細胞の感染力の増大を付与する、バリアントAAVカプシドタンパク質と、
    b)異種遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸と
    を含んでおり、
    式Iは、LA(L/N)(I/Q)(Q/E)(D/H)(S/V)(M/K)(R/N)A(配列番号136)であり、
    式IIは、TX 1 2 3 4 5 6 7 8 GLX 9 (配列番号137)であって、式中、X 1 が、G、V、またはSであり、X 2 が、V、E、P、G、D、M、A、またはSであり、X 3 が、M、V、Y、H、G、S、またはDであり、X 4 が、R、D、S、G、V、Y、T、H、またはMであり、X 5 が、S、L、G、T、Q、P、またはAであり、X 6 が、T、A、S、M、D、Q、またはHであり、X 7 が、N、G、S、L、M、P、G、またはAであり、X 8 が、S、G、D、N、A、I、P、またはTであり、X 9 が、SまたはNであり、
    式IIIは、TGX 1 2 3 4 5 6 7 GLS(配列番号138)であって、式中、X 1 が、V、E、P、G、D、M、A、またはSであり、X 2 が、M、V、Y、H、G、S、またはDであり、X 3 が、R、D、S、G、V、Y、T、H、またはMであり、X 4 が、S、L、G、T、Q、P、またはAであり、X 5 が、T、A、S、M、D、Q、またはHであり、X 6 が、N、G、S、L、M、P、G、またはAであり、X 7 が、S、G、D、N、A、I、P、またはTであり、
    式IVは、X 1 GX 2 3 4 5 6 7 8 GLSPX 9 TX 10 11 (配列番号139)であって、式中、X 1 が、TまたはNであり、X 2 が、L、S、A、またはGであり、X 3 が、DまたはVであり、X 4 が、A、G、またはPであり、X 5 が、TまたはDであり、X 6 が、RまたはYであり、X 7 が、D、T、またはGであり、X 8 が、H、R、またはTであり、X 9 が、VまたはAであり、X 10 が、GまたはWであり、X 11 が、TまたはAであり、
    式Vは、TGX 1 DX 2 TRX 3 4 GLSPVTGT(配列番号140)であって、式中、X 1 が、L、S、A、またはGであり、X 2 が、A、G、またはPであり、X 8 が、D、T、またはGであり、X 4 が、H、R、またはTであり、
    式VIは、LQX 1 2 3 RX 4 5 6 7 8 9 VNX 10 Q(配列番号141)であって、式中、X 1 が、KまたはRであり、X 2 が、N、G、またはAであり、X 3 が、A、V、N、またはDであり、X 4 が、P、I、またはQであり、X 5 が、A、P、またはVであり、X 6 が、S、T、またはGであり、X 7 が、TまたはVであり、X 8 が、E、L、A、またはVであり、X 9 が、S、E、D、またはVであり、X 10 が、F、G、T、またはCである、
    rAAVビリオン。
  2. 前記対応する親AAVカプシドタンパク質を含む対照AAVビリオンによる網膜細胞の感染力と比較して、少なくとも5倍の前記網膜細胞の感染力の増大を示す、請求項1に記載のrAAVビリオン。
  3. 前記異種ペプチドの挿入が、前記親AAVカプシドタンパク質の隣接したひと続きの5アミノ酸〜20アミノ酸を置き換える、請求項1に記載のrAAVビリオン。
  4. 挿入部位が、AAV2のVP1のアミノ酸570及びアミノ酸611に対応するアミノ酸の間であるか、または別のAAV血清型のカプシドタンパク質における対応する位置であり、任意で、挿入部位が、AAV2のVP1のアミノ酸587及びアミノ酸588に対応するアミノ酸の間であるか、もしくは別のAAV血清型のカプシドタンパク質における対応する位置である、または、挿入部位が、AAV2のVP1のアミノ酸585及びアミノ酸598に対応するアミノ酸の間であるか、もしくは別のAAV血清型のカプシドタンパク質における対応する位置である、請求項1に記載のrAAVビリオン。
  5. 前記異種遺伝子産物は、干渉RNA、アプタマー、またはポリペプチドである、請求項1〜のいずれか1項に記載のrAAVビリオン。
  6. 前記異種遺伝子産物は、a)II型CRISPR/Casポリペプチド、V型CRISPR/Casポリペプチド、及びVI型CRISPR/Casポリペプチドから選択されるRNAガイドエンドヌクレアーゼ、b)酵素的に不活性なII型CRISPR/Casポリペプチド、またはc)RNAガイドエンドヌクレアーゼ及びガイドRNAである、請求項1に記載のrAAVビリオン。
  7. 前記異種ペプチドは、
    a)(21)LALIQDSMRA(配列番号35)または(22)LANQEHVKNA(配列番号2)
    b)(1)TGVMRSTNSGLN(配列番号6)、(2)TGEVDLAGGGLS(配列番号7)、(3)TSPYSGSSDGLS(配列番号8)、(4)TGGHDSSLDGLS(配列番号9)、(5)TGDGGTTMNGLS(配列番号98)、(6)TGGHGSAPDGLS(配列番号99)、(7)TGMHVTMMAGLN(配列番号100)、(8)TGASYLDNSGLS(配列番号101)、(9)TVVSTQAGIGLS(配列番号20)、(10)TGVMHSQASGLS(配列番号21)、(11)TGDGSPAAPGLS(配列番号22)、または(12)TGSDMAHGTGLS(配列番号23)、
    c)(2)TGEVDLAGGGLS(配列番号7)、(4)TGGHDSSLDGLS(配列番号9)、(5)TGDGGTTMNGLS(配列番号98)、(6)TGGHGSAPDGLS(配列番号99)、(8)TGASYLDNSGLS(配列番号101)、(10)TGVMHSQASGLS(配列番号21)、(11)TGDGSPAAPGLS(配列番号22)、または(12)TGSDMAHGTGLS(配列番号23)、
    d)(13)TGLDATRDHGLSPVTGT(配列番号24)、(14)TGSDGTRDHGLSPVTWT(配列番号25)、(15)NGAVADYTRGLSPATGT(配列番号26)、または(16)TGGDPTRGTGLSPVTGA(配列番号27)、または
    e)(17)LQKNARPASTESVNFQ(配列番号28)、(18)LQRGVRIPSVLEVNGQ(配列番号29)、(19)LQRGNRPVTTADVNTQ(配列番号30)、または(20)LQKADRQPGVVVVNCQ(配列番号31)
    を含む、請求項1〜のいずれか1項に記載のrAAVビリオン。
  8. a)請求項1〜のいずれか1項に記載の組換えアデノ随伴ウイルスビリオンと、
    b)薬学的に許容される賦形剤と
    を含む、薬学的組成物。
  9. 個体内の網膜細胞に遺伝子産物を送達する方法での使用のための請求項1〜7のいずれか1項に記載の組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ビリオンまたは請求項8に記載の薬学的組成物であって、
    前記方法は、前記個体に、前記rAAVビリオンまたは前記薬学的組成物を投与することを含む、
    使用のためのrAAVビリオンまたは使用のための薬学的組成物。
  10. 前記遺伝子産物は、ポリペプチド、短鎖干渉RNAまたはアプタマーである、請求項9に記載の使用のためのrAAVビリオンまたは使用のための薬学的組成物。
  11. 前記ポリペプチドは、
    i)神経保護因子、抗血管新生ポリペプチド、抗アポトーシス因子、または網膜細胞の機能を強化するポリペプチド
    ii)グリア由来神経栄養因子、線維芽細胞成長因子2、ニュールツリン、毛様体神経栄養因子、神経成長因子、脳由来神経栄養因子、上皮成長因子、ロドプシン、X連鎖アポトーシス阻害物質、レチノスキシン、RPE65、網膜色素変性GTPアーゼ相互作用タンパク質1、ペリフェリン、ペリフェリン−2、ロドプシン、RdCVF、網膜色素変性GTPアーゼ制御物質(RPGR)、ソニックヘッジホッグ、または
    iii)RNAガイドエンドヌクレアーゼ
    である、請求項10に記載の使用のためのrAAVビリオンまたは使用のための薬学的組成物。
  12. 眼疾患を処置する方法での使用のための請求項1〜7のいずれか1項に記載の組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ビリオンまたは請求項8に記載の薬学的組成物であって、
    前記方法は、処置を必要とする個体に対して、前記rAAVビリオンまたは前記薬学的組成物を有効量で投与することを含む、
    使用のためのrAAVビリオンまたは使用のための薬学的組成物。
  13. バリアントアデノ随伴ウイルス(AAV)カプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、
    前記バリアントAAVカプシドタンパク質が、対応する親AAVカプシドタンパク質との対比で、カプシドタンパク質GHループ内の約5アミノ酸〜約20アミノ酸の挿入を含み、バリアントカプシドタンパク質が、AAVビリオン内に存在するときに、網膜細胞のAAVビリオンの感染力の増大をもたらし、アミノ酸の挿入が、ネイティブAAVカプシドのGHループ内であり、この挿入は、式I〜VIのいずれか1つのペプチドであり、
    式Iは、LA(L/N)(I/Q)(Q/E)(D/H)(S/V)(M/K)(R/N)A(配列番号136)であり、
    式IIは、TX 1 2 3 4 5 6 7 8 GLX 9 (配列番号137)であって、式中、X 1 が、G、V、またはSであり、X 2 が、V、E、P、G、D、M、A、またはSであり、X 3 が、M、V、Y、H、G、S、またはDであり、X 4 が、R、D、S、G、V、Y、T、H、またはMであり、X 5 が、S、L、G、T、Q、P、またはAであり、X 6 が、T、A、S、M、D、Q、またはHであり、X 7 が、N、G、S、L、M、P、G、またはAであり、X 8 が、S、G、D、N、A、I、P、またはTであり、X 9 が、SまたはNであり、
    式IIIは、TGX 1 2 3 4 5 6 7 GLS(配列番号138)であって、式中、X 1 が、V、E、P、G、D、M、A、またはSであり、X 2 が、M、V、Y、H、G、S、またはDであり、X 3 が、R、D、S、G、V、Y、T、H、またはMであり、X 4 が、S、L、G、T、Q、P、またはAであり、X 5 が、T、A、S、M、D、Q、またはHであり、X 6 が、N、G、S、L、M、P、G、またはAであり、X 7 が、S、G、D、N、A、I、P、またはTであり、
    式IVは、X 1 GX 2 3 4 5 6 7 8 GLSPX 9 TX 10 11 (配列番号139)であって、式中、X 1 が、TまたはNであり、X 2 が、L、S、A、またはGであり、X 3 が、DまたはVであり、X 4 が、A、G、またはPであり、X 5 が、TまたはDであり、X 6 が、RまたはYであり、X 7 が、D、T、またはGであり、X 8 が、H、R、またはTであり、X 9 が、VまたはAであり、X 10 が、GまたはWであり、X 11 が、TまたはAであり、
    式Vは、TGX 1 DX 2 TRX 3 4 GLSPVTGT(配列番号140)であって、式中、X 1 が、L、S、A、またはGであり、X 2 が、A、G、またはPであり、X 8 が、D、T、またはGであり、X 4 が、H、R、またはTであり、
    式VIは、LQX 1 2 3 RX 4 5 6 7 8 9 VNX 10 Q(配列番号141)であって、式中、X 1 が、KまたはRであり、X 2 が、N、G、またはAであり、X 3 が、A、V、N、またはDであり、X 4 が、P、I、またはQであり、X 5 が、A、P、またはVであり、X 6 が、S、T、またはGであり、X 7 が、TまたはVであり、X 8 が、E、L、A、またはVであり、X 9 が、S、E、D、またはVであり、X 10 が、F、G、T、またはCであり、
    任意で、挿入部位は、AAV2のアミノ酸587とアミノ酸588との間、AAV2のアミノ酸585とアミノ酸598との間、AAV1のアミノ酸590とアミノ酸591との間、AAV5のアミノ酸575とアミノ酸576との間、AAV6のアミノ酸590とアミノ酸591との間、AAV7のアミノ酸589とアミノ酸590との間、AAV8のアミノ酸590とアミノ酸591との間、AAV9のアミノ酸588とアミノ酸589との間、またはAAV10のアミノ酸588とアミノ酸589との間である、
    核酸。
  14. 請求項13に記載の核酸を含む、単離された遺伝子修飾宿主細胞。
  15. 約5アミノ酸〜約20アミノ酸の挿入を含むバリアントアデノ随伴ウイルス(AAV)カプシドタンパク質であって、
    アミノ酸の挿入が、ネイティブAAVカプシドのGHループ内であり、この挿入は、式I〜VIのいずれか1つのペプチドであり、
    式Iは、LA(L/N)(I/Q)(Q/E)(D/H)(S/V)(M/K)(R/N)A(配列番号136)であり、
    式IIは、TX 1 2 3 4 5 6 7 8 GLX 9 (配列番号137)であって、式中、X 1 が、G、V、またはSであり、X 2 が、V、E、P、G、D、M、A、またはSであり、X 3 が、M、V、Y、H、G、S、またはDであり、X 4 が、R、D、S、G、V、Y、T、H、またはMであり、X 5 が、S、L、G、T、Q、P、またはAであり、X 6 が、T、A、S、M、D、Q、またはHであり、X 7 が、N、G、S、L、M、P、G、またはAであり、X 8 が、S、G、D、N、A、I、P、またはTであり、X 9 が、SまたはNであり、
    式IIIは、TGX 1 2 3 4 5 6 7 GLS(配列番号138)であって、式中、X 1 が、V、E、P、G、D、M、A、またはSであり、X 2 が、M、V、Y、H、G、S、またはDであり、X 3 が、R、D、S、G、V、Y、T、H、またはMであり、X 4 が、S、L、G、T、Q、P、またはAであり、X 5 が、T、A、S、M、D、Q、またはHであり、X 6 が、N、G、S、L、M、P、G、またはAであり、X 7 が、S、G、D、N、A、I、P、またはTであり、
    式IVは、X 1 GX 2 3 4 5 6 7 8 GLSPX 9 TX 10 11 (配列番号139)であって、式中、X 1 が、TまたはNであり、X 2 が、L、S、A、またはGであり、X 3 が、DまたはVであり、X 4 が、A、G、またはPであり、X 5 が、TまたはDであり、X 6 が、RまたはYであり、X 7 が、D、T、またはGであり、X 8 が、H、R、またはTであり、X 9 が、VまたはAであり、X 10 が、GまたはWであり、X 11 が、TまたはAであり、
    式Vは、TGX 1 DX 2 TRX 3 4 GLSPVTGT(配列番号140)であって、式中、X 1 が、L、S、A、またはGであり、X 2 が、A、G、またはPであり、X 8 が、D、T、またはGであり、X 4 が、H、R、またはTであり、
    式VIは、LQX 1 2 3 RX 4 5 6 7 8 9 VNX 10 Q(配列番号141)であって、式中、X 1 が、KまたはRであり、X 2 が、N、G、またはAであり、X 3 が、A、V、N、またはDであり、X 4 が、P、I、またはQであり、X 5 が、A、P、またはVであり、X 6 が、S、T、またはGであり、X 7 が、TまたはVであり、X 8 が、E、L、A、またはVであり、X 9 が、S、E、D、またはVであり、X 10 が、F、G、T、またはCである、
    バリアントAAVカプシドタンパク質。
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