JP2020523004A - Ｂｅｔ ｖ １に対するヒト抗体およびその使用方法 - Google Patents

Ｂｅｔ ｖ １に対するヒト抗体およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

本明細書には、ブナ目のアレルゲン、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉、またはＢｅｔ ｖ １に結合する抗体、抗体を含む組成物、抗体をコードする核酸、および抗体を使用する方法が提供される。ある特定の実施形態によれば、抗体は、Ｂｅｔ ｖ １に結合する完全ヒトモノクローナル抗体である。抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＢｅｔ ｖ １への結合に有用であり、よって、マスト細胞または好塩基球の表面上に予め形成されたＩｇＥへのアレルゲンの結合を防止する。そうすることで、抗体は、マスト細胞および／または好塩基球からのヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を防止するように作用し、よって、感作個体におけるブナ目のアレルゲンに対する有害な応答を改善する。

Description

本発明は、カバノキ花粉アレルゲン、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体およびヒト抗体の抗原結合性断片、抗体を含む治療用組成物、ならびに抗体を使用する方法に関する。
配列表
配列表の公的なコピーは、ファイル名１０３０１ＷＯ０１＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５、作成日２０１８年５月３１日、および約１３７キロバイトのサイズのＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂによって、本明細書と同時に電子的に提出される。このＡＳＣＩＩフォーマットの文書に含まれる配列表は本明細書の一部であり、参照によりその全体として本明細書に組み込まれる。
カバノキは、米国のアレルギー患者の２３％および欧州のアレルギー患者の１４％において有力なトリガーであり（Datamonitor report on Allergic Rhinitis、２０１０年７月）、欧州、北米、ロシア、およびオーストラリアにわたって春の１型アレルギーの主な原因である（Breitenederら、EMBO J. １９８９年、８巻（７号）：１９３５〜８頁）。Ｂｅｔ ｖ １タンパク質は、Ｂｅｔｕｌａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（ヨーロッパシラカンバ、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａとも同義である）由来の花粉において同定された主要なカバノキアレルゲンであり、カバノキ花粉アレルギー患者の９５％より多くにおいて、ＩｇＥ結合に関与する（Breiteneder、上掲）。Ｂｅｔ ｖ １は、３つのαヘリックスと公知の結晶構造を有する小さな７本鎖アンチパラレルβシートである（Koflerら、２０１２年、４２２巻（１号）：１０９〜２３頁；Markovic-Housleyら、J Mol Biol. ２００３年、３２５巻（１号）：１２３〜３３頁；Spangfortら、J Immunol. ２００３年、１７１巻（６号）：３０８４〜９０頁）。ＷＯ９４／１０１９４は、ブナ目の木に由来するペプチドに関する。
カバノキ花粉アレルギー患者の６０パーセントがＢｅｔ ｖ １に対して排他的に反応する（Jarolimら、Int Arch Allergy Appl Immunol. １９８９年、８８巻（１〜２号）：１８０〜２頁）。１本のカバノキは、最大５００万個の花粉粒を生じ、これらは、空中を木から最大１００ヤード移動し得る。カバノキ花粉アレルギーの症状は、軽度の鼻炎および結膜炎から生命を脅かす喘息応答に及ぶ可能性がある。
免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、枯草熱、アレルギー性喘息、ハチ毒アレルギー、および食物アレルギーとして顕在化する１型過敏症に関与する。ＩｇＥは、血液中を循環し、好塩基球およびマスト細胞におけるＩｇＥに対する高親和性ＦｃεＲ１α受容体に結合する。大部分のアレルギー応答において、アレルゲンは、吸入、摂取によって、または皮膚を介して体内に侵入する。次いで、アレルゲンは、マスト細胞および好塩基球の表面上の高親和性受容体に既に結合した、予め形成されたＩｇＥに結合し、いくつかのＩｇＥ分子の架橋を生じ、種々のアレルギー症状を引き起こすヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を誘発する。
アレルギーに対する処置として、免疫活性を抑制するためのステロイドおよび喘息症状を緩和するための気管支拡張物質が挙げられる。重度のアレルギー患者には、脱感作療法も使用される。特定のアレルゲン、例えば、Ｂｅｔ ｖ １に対して、個体を脱感作するために、ペプチドワクチンの組合せが試験されてきた（Ｕ．Ｓ．９，０１７，６８９を参照のこと）。抗体は、アレルゲン分子の粘膜組織への侵入を遮断するか、またはマスト細胞もしくは好塩基球上の高親和性受容体に結合したＩｇＥに結合する機会を有する前にアレルゲンに結合し、したがって、これらの細胞からのヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を防止することができるため、アレルギーに対する処置として提案されてきた。
米国特許第５，６７０，６２６号には、アレルゲンの粘膜組織への結合を遮断することによる、ＩｇＥ媒介アレルギー疾患、例えば、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、およびアレルギー性結膜炎の処置のためのモノクローナル抗体の使用について記載されている。米国特許第６，８４９，２５９号には、アレルギーのｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおいてアレルギー性炎症を阻害する、アレルゲン特異的抗体の使用について記載されている。ミルクに基づくおよび卵に基づく抗体系が記載されている。例えば、ＵＳ２００３／０００３１３３Ａ１には、カバノキ花粉および他のアレルゲンに対する経口寛容を誘導するための、アレルゲンの担体としてのミルクの使用が開示される。マスト細胞に結合するアレルゲンの能力を阻害する分子の使用による、環境中のアレルゲンに対する動物におけるアレルギー応答を低下させるための組成物および方法が、ＷＯ１９９４／０２４１６４Ａ２に記載されている。Ｂｅｔ ｖ １に対する他の抗体は、Ｕ．Ｓ．２０１０／００３４８１２において言及されていた。
本発明は、上で議論した問題のうちの１つまたは複数を克服することを対象とする。
国際公開第１９９４／０１０１９４号 米国特許第９０１７６８９号明細書 米国特許第５６７０６２６号明細書 米国特許第６８４９２５９号明細書 米国特許出願公開第２００３／０００３１３３号明細書 国際公開第１９９４／０２４１６４号 米国特許出願公開第２０１０／００３４８１２号明細書
Breitenederら、EMBO J. １９８９年、８巻（７号）：１９３５〜８頁 Koflerら、２０１２年、４２２巻（１号）：１０９〜２３頁 Markovic-Housleyら、J Mol Biol. ２００３年、３２５巻（１号）：１２３〜３３頁 Spangfortら、J Immunol. ２００３年、１７１巻（６号）：３０８４〜９０頁 Jarolimら、IntArch Allergy Appl Immunol. １９８９年、８８巻（１〜２号）：１８０〜２頁
本明細書には、カバノキ花粉、例えば、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキ花粉抽出物（ＢＰＥ）、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する完全ヒトモノクローナル抗体およびその抗原結合性断片が提供される。抗体は、カバノキアレルゲンへと感作患者を曝露した後のｉｎ ｖｉｖｏにおけるＢｅｔ ｖ １アレルゲンへの結合に有用であり得、そのため、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキ花粉抽出物（ＢＰＥ）、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、もしくはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥのクリアランスを促進するか、またはマスト細胞もしくは好塩基球の表面における予め形成されたＩｇＥへのアレルゲンの結合を遮断するよう作用することができる。そうすることにより、本明細書に記載の抗体は、マスト細胞または好塩基球からのヒスタミンまたは他の炎症性メディエーターの放出を防止し、それによって、カバノキアレルゲンに対し感作された患者において観察される有害な効果を防止するか、または減弱化することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、くしゃみ、うっ血、鼻詰まり、咳嗽、喘鳴、気管支収縮、鼻炎、または結膜炎などの、カバノキアレルゲンまたはカバノキに関連するアレルゲンに対して感受性の患者における少なくとも１つの症状を低下、最小化、または防止することができる場合がある。一部の実施形態では、抗体は、喘息応答、アナフィラキシー、さらには死亡などの感作個体におけるカバノキ花粉アレルゲンへの曝露に関連するさらにより重篤なｉｎ ｖｉｖｏ合併症を防止することができる場合がある。
本明細書において提供される抗体は、全長、例えば、ＩｇＧ１もしくは、およびＩｇＧ４抗体であってもよく、または抗原結合ポーション、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片のみを含む場合もあり、機能性に影響を及ぼすよう、例えば、残存エフェクター機能を排除するよう修飾されていてもよい（Reddyら、２０００年、J. Immunol. １６４巻：１９２５〜１９３３頁）。
本発明の第１の態様は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキ花粉抽出物（ＢＰＥ）、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、および／またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥのアレルゲン特異的ＩｇＥへの結合を阻害する。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、１０−８Ｍに等しいかまたはそれより低いＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する。一実施形態では、ヒト抗体またはその抗原結合性断片は、約１０−８から約１０−１１Ｍの範囲のＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する。一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、２７．９ｎＭに等しいかまたはそれより低いＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する。一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、約０．６６ｎＭから約２７．９ｎＭの範囲の等しいＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する。
一実施形態では、単離されたヒト抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
一実施形態では、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ、Ｑｕｅ ａ １、Ａｐｉ ｇ ２、Ａｐｉ ｇ １、Ｄａｕ ｃ １、Ｍａｌ ｄ １、Ｏｓｔ ｃ １、Ｆａｇ ｓ １、およびＣａｓ ｓ １からなる群から選択される１つまたは複数のアレルゲンと交差反応する。このようなアレルゲンは、ＰＲ−１０タンパク質、またはいわゆる感染特異的（ＰＲ）タンパク質（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）とも称され得る。さらなるＰＲ−１０タンパク質（Ｂｅｔ ｖ １ファミリーのメンバー）として、Ａｃｔ ｃ ８およびＡｃｔ ｄ ８（キウイ）、Ａｒａ ｈ ８（落花生）、Ｐｒｕ ａｒ １（アンズ）、Ｐｒｕ ａｖ １（サクランボ）、Ｐｒｕ ｐ １（モモ）、Ｐｙｒ ｃ １（セイヨウナシ）、Ｇｌｙ ｍ ４（ダイズ）、Ｖｉｇ ｒ １（リョクトウ）、Ｓｏｌａ Ｉ ４（トマト）、Ｃｕｃ ｍ ３（メロン）、Ｒｕｂ ｉ １（ラズベリー）、およびＦｒａ ａ １（イチゴ）も挙げられる。これらのアレルゲンは、ブナ目に関連するアレルゲンとみなすこともできる。
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ａｌｎ ｇ １、Ｍａｌ ｄ １、Ａｐｉ ｇ １、Ｃａｒ ｂ １、およびＣｏｒ ａ １からなる群から選択される１つまたは複数のアレルゲンと交差反応する。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するための方法および技法は当技術分野で周知であり、本明細書に開示される、指定したＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を特定するために使用することができる例示的な慣例として、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般用語では、Ｋａｂａｔ定義は、配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔアプローチとＣｈｏｔｈｉａアプローチの折衷である。例えば、Kabat、「Sequences of Proteins ofImmunological Interest」、National Institutes of Health,Bethesda, Md.（１９９１年）；Al-Lazikaniら、（１９９７年）、J. Mol. Biol. ２７３巻：９２７〜９４８頁；およびMartinら、（１９８９年）、Proc. Natl. Acad. Sci. USA ８６巻：９２６８〜９２７２頁を参照のこと。抗体内のＣＤＲ配列を特定するために、公開データベースを利用することもできる。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１４、１４６、９８、および２９０からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１２２、１５４、１０６、および２９８からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１４、１４６、９８、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１２２、１５４、１０６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１１４、１４６、９８、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに（ｂ）配列番号１２２、１５４、１０６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２８４、および２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２８６、および２９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２８８、および２９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、および３００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、および３０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン、ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、および３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、２８２／２６６、および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１４／１２２、１４６／１５４、９８／１０６、および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１４６／１５４および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約４４位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、および配列番号３０６の約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約４４位から約７０位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約５７位から約６６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の約８１位から約８９位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、および３１１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する。配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、または３１１を含むエピトープは、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかにおいて、１から５個のアミノ酸、または５から１０個のアミノ酸によって伸長され得る。例えば、配列番号３１１のエピトープは、５から１０個のアミノ酸によって伸長される場合、配列番号１１５のエピトープを包含する。言い換えると、配列番号３１１を含むエピトープは、例えば、配列番号３１５のエピトープを含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０７と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０８と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０９と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１０と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１１と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１５と相互作用する。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、および３１５からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用し、配列番号１１４／１２２、１４６／１５４、９８／１０６、および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを含む。
一実施形態では、配列番号３０７と相互作用する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１４６の重鎖可変領域に含有される３つのＨＣＤＲおよび配列番号１５４の軽鎖可変領域に含有される３つのＬＣＤＲを含む。
一実施形態では、配列番号３１０と相互作用する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２９０の重鎖可変領域に含有される３つのＨＣＤＲおよび配列番号２９８の軽鎖可変領域に含有される３つのＬＣＤＲを含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １と結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１４８、１５０、および１５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１５６、１５８、および１６０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２９２、２９４、および２９６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号３００、３０２、および３０４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号４、６、および８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１２、１４、および１６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２０、２２、および２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２８、３０、および３２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３６、３８、および４０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号４４、４６、および４８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号５２、５４、および５６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号６０、６２、および６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号６８、７０、および７２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号７６、７８、および８０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号８４、８６、および８８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号９２、９４、および９６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１００、１０２、および１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１０８、１１０、および１１２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１１６、１１８、および１２０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１２４、１２６、および１２８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１３２、１３４、および１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１４０、１４２、および１４４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１６４、１６６、および１６８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１７２、１７４、および１７６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１８０、１８２、および１８４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号１８８、１９０、および１９２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１９６、１９８、および２００のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２０４、２０６、および２０８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２１２、２１４、および２１６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２２０、２２２、および２２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２２８、２３０、および２３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２３６、２３８、および２３４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２４４、２４６、および２４８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２５２、２５４、および２５６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２６０、２６２、および２６４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２６８、２７０、および２７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２７６、２７８、および２８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２６８、２７０、および２７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２８４、２８６、および２８８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに、それぞれ、配列番号２６８、２７０、および２７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本発明は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供し、抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＶＲを含む、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＶＲを含む、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２８８、および２９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、および３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２８４、および２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２８６、および２９４からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、および３００からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、および３０２からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む、（ｖ）１０−８と等しいかもしくはそれより低く、約１０−８から約１０−１１の範囲のＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する、（ｖｉ）アナフィラキシーもしくは炎症の少なくとも１つの動物モデルで有効性を示す、または（ｖｉｉ）天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥへの結合に関して、参照抗体と競合する。
一実施形態では、「参照抗体」として、例えば、２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、２８２／２６６、および２９０／２９８からなる群から選択される重鎖および軽鎖アミノ酸配列ペアの組合せを有する抗体が挙げられ得る。
本発明は、修飾されたグリコシル化パターンを有する抗体を包含する。一部の適用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための修飾、または例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増加させるためのフコース部分の除去が有用であり得る（Shieldら、２００２年、JBC ２７７巻：２６７３３頁を参照のこと）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために、ガラクトシル化の修飾がなされ得る。
第２の態様は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥへの特異的結合に関して、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥへの特異的結合に関して、配列番号１１４、１４６、９８、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに配列番号１２２、１５４、１０６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
関連する実施形態では、本発明は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥへの特異的結合に関して、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、２８２／２６６、および２９０／２９８からなる群から選択される重鎖および軽鎖配列ペア内に含有される重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
第３の態様は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同一のＢｅｔ ｖ １上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態は、配列番号１１４、１４６、９８、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに配列番号１２２、１５４、１０６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同一のＢｅｔ ｖ １上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
関連する実施形態では、本明細書には、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、２８２／２６６、および２９０／２９８からなる群から選択される重鎖および軽鎖配列ペア内に含有される重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同一のＢｅｔ ｖ １上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片が提供される。
第４の態様では、本発明は、Ｂｅｔ ｖ １抗体またはその断片をコードする核酸分子が提供される。このような核酸を保有する組換え発現ベクター、およびこのようなベクターが導入された宿主細胞も、抗体の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養し、産生された抗体を回収することによる、抗体を産生する方法として、本明細書において企図される。
一実施形態では、本明細書には、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸分子が提供される。
一実施形態では、本明細書には、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８１、および２８９からなる群から選択される核酸配列、またはその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によってコードされるＨＣＶＲを含む抗体またはその断片が提供される。
一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号１１３、１４５、２５７、および２８９からなる群から選択される核酸配列によってコードされる。
一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、および２９７からなる群から選択される核酸配列、またはその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一な配列によってコードされるＬＣＶＲをさらに含む。
一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１２１、１５３、２６５、および２９７からなる群から選択される核酸配列によってコードされる。
一実施形態では、本明細書には、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２８７、および２９５からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列によってコードされるＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、および３０３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列によってコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含む抗体または抗体の抗原結合性断片が提供される。
一実施形態では、本明細書には、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２８３、および２９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列によってコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２８５、および２９３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列によってコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、および２９９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列によってコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、および３０１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列によってコードされるＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む抗体またはその断片が提供される。
第５の態様は、治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのカバノキのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する１つまたは複数の単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を提供する。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する２つまたはそれより多い単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む。
一実施形態では、医薬組成物は、
ａ）配列番号１４６に示すアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号１５４に示すアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
ｂ）配列番号１１４、９８、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号１２２、１０６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
ｃ）１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、
ａ）配列番号２９０に示すアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号２９８に示すアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
ｂ）配列番号１１４、１４６、および９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号１２２、１５４、および１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
ｃ）１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、
ａ）配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
ｂ）配列番号２９０に示すアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号２９８に示すアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
ｃ）１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、
ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
ｂ）配列番号２９０のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２９８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
ｃ）配列番号１１４および９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲならびに配列番号１２２および１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合性断片、ならびに
ｄ）１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、
配列番号１４６／１５４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
配列番号１１４／１２２、９８／１０６、および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、
配列番号１４６／１５４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
配列番号２９０／２９８からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、および
１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、２８２／２６６、および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する２つまたはそれより多い単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、２８２／２６６、および２９０／２９８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する３つまたはそれより多い単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、配列番号１１４／１２２、１４６／１５４、９８／１０６、および２９０／２９８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １に結合する４つの単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合性断片、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、配列番号１４６／１５４のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１６９９２Ｐと称される抗体、配列番号２９０／２９８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２と称される抗体、および配列番号９８／１０６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１７０３８Ｐ２と称される抗体を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、配列番号１４６／１５４のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１６９９２Ｐと称される抗体、配列番号２９０／２９８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２と称される抗体、配列番号９８／１０６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１７０３８Ｐ２と称される抗体、および配列番号１１４／１２２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有するＨ４Ｈ１６９８７Ｐと称される抗体を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、第１の抗体またはその断片、およびＢｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０６の約４４位から約７０位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、第２の抗体またはその断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、第１の抗体またはその断片、およびＢｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、第２の抗体またはその断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０７のアミノ酸配列と相互作用する、第１の抗体またはその断片、およびＢｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０８、３０９、３１０、３１１または３１５のアミノ酸配列と相互作用する、第２の抗体またはその断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、およびＢｅｔ ｖ １に結合する１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含み、第１の抗体またはその断片は、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、および配列番号３０６の約８１位から８９位または約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体またはその断片は、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、および配列番号３０６の約８１位から８９位または約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用し、１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体のうちの少なくとも１つは、第１の単離されたヒトモノクローナル抗体と異なるアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、およびＢｅｔ ｖ １に結合する１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含み、第１の抗体またはその断片は、配列番号３０７のアミノ酸配列と相互作用し、１つまたは複数のさらなる抗体またはその断片は、配列番号３０８、３０９、３１０、３１１、および３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合する少なくとも２つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含み、少なくとも２つの抗体は、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して競合しない。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１４６／１５４および２９０／２９８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １抗体であるＨ４Ｈ１６９９２ＰおよびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２である。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合する少なくとも３つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含み、少なくとも３つの抗体は、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して競合しない。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、および９８／１０６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｂｅｔ ｖ １抗体であるＨ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７０３８Ｐ２である。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合する少なくとも４つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含み、少なくとも４つの抗体は、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して競合しない。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、および１１４／１２２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含むＢｅｔ ｖ １抗体であるＨ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、およびＨ４Ｈ１６９８７Ｐである。
一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含み、抗体またはその抗原結合性断片は、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ １、Ｑｕｅ ａ １、Ａｐｉ ｇ ２、Ａｐｉ ｇ １、Ｄａｕ ｃ １、Ｍａｌ ｄ １、Ｏｓｔ ｃ １、Ｆａｇ ｓ １、およびＣａｓ ｓ １からなる群から選択される１つまたは複数のアレルゲンと交差反応する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ａｌｎ ｇ １、Ｍａｌ ｄ １、Ａｐｉ ｇ １、Ｃａｒ ｂ １、およびＣｏｒ ａ １からなる群から選択される１つまたは複数のアレルゲンと交差反応する。
一実施形態では、本発明は、治療有効量の、本発明の１つまたは複数の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体またはその抗原結合性断片、および治療有効量の第２の治療剤の、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と併せた組合せである組成物を特色とする。
第２の治療剤は、小分子薬、タンパク質／ポリペプチド、抗体、核酸分子、例えば、アンチセンス分子、またはｓｉＲＮＡであってもよい。第２の治療剤は、合成由来であっても天然由来であってもよい。
第２の治療剤は、本発明の抗体またはその断片と有利に組み合わされる任意の薬剤であってもよく、例えば、マスト細胞または好塩基球上に存在するＩｇＥへのＢｅｔ ｖ １の結合を遮断することができる、本明細書に記載の抗体以外の第２の抗体であってもよい。第２の治療剤はまた、任意のアレルゲンに対するアレルギー応答の処置において標準治療として使用される任意の薬剤であってもよい。このような第２の治療剤は、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、コルチコステロイド、またはペプチドワクチンであってもよい。
ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片に伴う何らかの起こり得る副作用（複数可）が生じた場合、そのような副作用（複数可）の相殺または低下に役立つ薬剤であってもよい。
本発明の抗体および薬学的に許容される組成物は併用療法において用いることができ、すなわち、抗体および薬学的に許容される組成物は、１つまたは複数の他の所望の治療薬または医学的手順（例えば、抗体がアレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）の前またはその間に投与されるＳＩＴレジメンとの組合せを含む）と同時に、その前に、またはその次に投与することができることも十分に理解される。併用レジメンにおいて用いるための療法（治療薬または手順）の特定の組合せは、所望の治療薬および／または手順の適合性ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れる。用いられる療法が、同じ障害に対する所望の効果を達成することができるか（例えば、抗体は、同じ障害の処置に使用される別の薬剤と同時に投与することができる）、または異なる効果を達成することができる（例えば、あらゆる有害作用の制御）ことも十分に理解される。本明細書で使用する場合、特定の疾患、または状態を処置または防止するために通常投与される追加の治療剤は、処置される疾患、または状態に適切である。
関連技術分野において認識される通り、複数の治療薬が共投与される場合、それと相応に投薬量を調整することができる。
第６の態様は、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者を処置するための、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、もしくはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、もしくはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、もしくはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片のうちの１つもしくは複数の投与後に、または前記の抗体のうちのいずれか１つもしくは複数を含む組成物の投与後に、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、方法を提供する。
一部の実施形態では、カバノキ花粉抽出物は、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥからなる群から選択される。
一部の実施形態では、処置は、患者をブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に曝露した後に、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、またはアナフィラキシー応答の低下をもたらす。
一部の実施形態では、方法は、有効量の、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に対するアレルギー反応の減弱化に有用な第２の治療剤を投与することをさらに含む。第２の治療剤は、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｂｅｔ ｖ １に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンからなる群から選択され得る。
一部の実施形態では、方法は、抗体もしくはその断片または抗体を含む医薬組成物の直後またはそれと同時に、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）レジメンで患者を処置することをさらに含む。
一実施形態では、本発明は、１つもしくは複数のブナ目のアレルゲン、もしくはブナ目に関連するアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示すブナ目アレルギー患者を処置するための、あるいは１つもしくは複数のブナ目のアレルゲン、もしくはブナ目に関連するアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片のうちの１つもしくは複数の投与後に、または前記の抗体のうちのいずれか１つもしくは複数を含む組成物の投与後に、ブナ目のアレルゲン、もしくはブナ目に関連するアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のアレルゲン、もしくはブナ目に関連するアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはブナ目のアレルゲン、もしくはブナ目に関連するアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、方法を提供する。
一部の実施形態では、１つまたは複数のブナ目のアレルゲンは、Ｂｅｔ ｖ １、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ １、およびＱｕｅ ａ １からなる群から選択される。
一実施形態では、本発明は、ブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者の処置における使用のための、あるいはブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症の処置のための、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに結合する本明細書に記載の抗体のうちの１つまたは複数を含む医薬組成物であって、ブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、医薬組成物を提供する。
一実施形態では、本発明は、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者の処置における使用のための、あるいはカバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症の処置のための医薬の製造における、Ｂｅｔ ｖ １に結合する本発明の抗体のうちの１つまたは複数を含む医薬組成物の使用であって、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはカバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはカバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、使用を提供する。
一実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物の使用であって、組成物が、ブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に対するアレルギー反応を減弱化するのに有用な第２の治療剤と組み合わせて投与される、使用を提供する。一実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物の使用であって、第２の治療剤が、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｂｅｔ ｖ １に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンから選択される、使用を提供する。
ある特定の実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する本発明の抗体は、くしゃみ、うっ血、鼻詰まり、咳嗽、喘鳴、気管支収縮、鼻炎、または結膜炎などの、カバノキ花粉またはＢｅｔ ｖ １に対して感受性の患者における少なくとも１つの症状を低下、最小化、または防止することができる場合がある。
一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に結合する本発明の抗体、または本発明の１つまたは複数の抗体を含む組成物は、喘息応答、アナフィラキシーショック、さらにはアナフィラキシーに起因する死亡を含む、Ｂｅｔ ｖ １に対するアレルギーに関連する、より重篤なｉｎ ｖｉｖｏ合併症を防止するために使用されてもよい。
一実施形態では、医薬組成物は、第２の治療剤と組み合わせて患者に投与される。
別の実施形態では、第２の治療剤は、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、コルチコステロイド、Ｂｅｔ ｖ １に対する別の異なる抗体、ペプチドワクチンおよびアレルギー反応の重症度の低下またはアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状の改善に有用な任意の他の対症療法からなる群から選択される。
さらに別の実施形態では、医薬組成物は、例えば、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）レジメンの前またはそれと同時に投与されることを含め、１つまたは複数の他の所望の治療薬または医学的手順と同時に、その前に、またはその次に投与される。一部の態様では、本明細書において提供される抗体と併せたＳＩＴレジメンの使用は、相乗効果をもたらす。
一実施形態では、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）レジメンの有効性および／または安全性を増強するための方法であって、有効量の、本明細書において提供される１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または有効量の、１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を、ＳＩＴレジメンの直前またはそれと同時に、それを必要とする患者に投与することを含み、ＳＩＴレジメンに対するアレルギー反応の重症度が軽減される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＳＩＴレジメンは、増量投与期とその後の維持期を含む。一部の実施形態では、ＳＩＴレジメンは、急速ＳＩＴレジメンである。
追加の態様では、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはカバノキ花粉抽出物、またはＢｅｔ ｖ １感作に関連するマスト細胞脱顆粒を防止するもしくは低下させる方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法が提供される。
一部の実施形態では、ＢＰＥは、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥからなる群から選択される。
他の実施形態は、次の詳細な説明の概説から明らかになる。
図１は、Ｈ４Ｈ１６９９２ＰのＢｅｔ ｖ １との相互作用に関するＨ／Ｄ交換／ＭＳエピトープマッピングを提供する。
図２は、Ｈ４Ｈ１７０８２ＰのＢｅｔ ｖ １との相互作用に関するＨ／Ｄ交換／ＭＳエピトープマッピングを提供する。
図３は、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２のＢｅｔ ｖ １との相互作用に関するＨ／Ｄ交換／ＭＳエピトープマッピングを提供する。
図４は、Ｈ４Ｈ１６９８７ＰのＢｅｔ ｖ １との相互作用に関するＨ／Ｄ交換／ＭＳエピトープマッピングを提供する。
図５は、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１６９８７ＰのＢｅｔ ｖ １との相互作用に関するＨ／Ｄ交換／ＭＳエピトープマッピングを提供する。
図６は、ヒト化マウスＰＣＡモデルにおいて、Ｂｅｔ ｖ １によって誘導されたマスト細胞脱顆粒を遮断する際の抗体の組合せの有効性を決定するために使用されるプロトコールの図である。
図７は、３名のＢｅｔ ｖ １感受性ドナーから得られたＩｇＥ含有血清を使用するヒト化マウスＰＣＡモデルにおける、マスト細胞脱顆粒を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの能力を示す。 図７は、３名のＢｅｔ ｖ １感受性ドナーから得られたＩｇＥ含有血清を使用するヒト化マウスＰＣＡモデルにおける、マスト細胞脱顆粒を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの能力を示す。 図７は、３名のＢｅｔ ｖ １感受性ドナーから得られたＩｇＥ含有血清を使用するヒト化マウスＰＣＡモデルにおける、マスト細胞脱顆粒を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの能力を示す。
図８は、２つのグラフを示し、１つは、１名のカバノキアレルギーのドナーから得られたＰＢＭＣにおける好塩基球活性化を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せを示す代表的データを与える。棒グラフは、各抗体単独に対する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せによる、複数のドナーから得られたＰＢＭＣにおける好塩基球活性化の遮断パーセントを示すデータを与える。 図８は、２つのグラフを示し、１つは、１名のカバノキアレルギーのドナーから得られたＰＢＭＣにおける好塩基球活性化を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せを示す代表的データを与える。棒グラフは、各抗体単独に対する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せによる、複数のドナーから得られたＰＢＭＣにおける好塩基球活性化の遮断パーセントを示すデータを与える。
本発明の組成物および方法について説明する前に、記載される特定の組成物および方法、ならびに実験条件は変動し得るため、本発明が、このような方法、組成物、および条件に限定されないことを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることから、本明細書で使用される用語が、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、限定を意図しないことも理解されたい。
別段規定されていなければ、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、この発明が属する技術分野における当業者によって通常理解されているものと同じ意味を有する。本明細書で使用する場合、用語「約」は、特定の列挙された数値に関連して使用されている場合、値が、列挙された値から１％以下で変動し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用する場合、表現「約１００」は、９９および１０１ならびにその間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
本発明の実践または検査において、本明細書に記載の方法および材料と類似または同等のいかなる方法および材料を使用してもよいが、好ましい方法および材料をここで説明する。
定義
用語「Ｂｅｔ ｖ １」は、本明細書で使用する場合、天然／ネイティブ形態の、または組換えにより産生されたかのいずれかの少なくとも１つのＢｅｔ ｖ １タンパク質を指す。Ｂｅｔ ｖ １タンパク質は、配列番号３０６のアミノ酸配列および配列番号３０５の核酸配列を含む。天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質は、およそ１７ｋＤであり、７本鎖アンチパラレルβシート（β１〜β７）、β１とβ２に接続する２つの短いαヘリックス（α１およびα２）、長いＣ末端αヘリックス（α３）、およびβ２とβ３の間のグリシンリッチループモチーフとして存在する（Koflerら（２０１２年） J. Mol. Biol. ４２２巻（１号）：１０９〜１２３頁）。組換えにより産生された変異体Ｂｅｔ ｖ １である配列番号３１２は、Ｓ８５Ａ置換を有するＵｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４のＧ２−Ｎ１６０を含み、Ｍｙｃ−Ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを含有する。Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１５４９４由来のＢｅｔ ｖ １アミノ酸配列、すなわち、配列番号３１４は、Ｂｅｔ ｖ １とも称され得る。
「Ｂｅｔ ｖ １」は、配列番号３０６もしくは配列番号３１４のアミノ酸配列、またはその相同配列を含むか、あるいはそれからなるポリペプチドである。語句「配列番号３０６または配列番号３１４の相同配列」は、本明細書で使用する場合、配列番号３０６または配列番号３１４に対して、７０％よりも高い、好ましくは８０％よりも高い、より好ましくは９０％よりも高い、さらにより好ましくは９５％よりも高い同一性を有するポリペプチドを指す。
用語「Ｂｅｔ ｖ １断片」は、本明細書で使用する場合、Ｂｅｔ ｖ １の少なくとも１つの抗原性部位を含む、あるいはこれからなるポリペプチドを指す。一実施形態では、用語「Ｂｅｔ ｖ １断片」は、本明細書で使用する場合、Ｂｅｔ ｖ １の少なくとも２つの抗原性部位を含む、あるいはこれらからなるポリペプチドを指す。一実施形態では、抗原性部位は、共有結合されている。一実施形態では、抗原性部位は、少なくとも１つのペプチド結合によって連結されている。一実施形態では、２つの抗原性部位は、少なくとも１つのペプチド結合および抗原性部位間のスペーサーによって連結されている。一実施形態では、少なくとも２つの抗原性部位は、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４のアミノ酸配列２３〜４４および４４〜５６を含む。一実施形態では、少なくとも２つの抗原性部位は、配列番号３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、および３１５のいずれかにおけるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １断片のいずれも、天然に存在するＢｅｔ ｖ １、または組換えにより産生されたＢｅｔ ｖ １に特異的に結合する抗体のｉｎ ｖｉｖｏでの産生を誘導することができる。
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、特定の抗原（例えば、Ｂｅｔ ｖ １）に特異的に結合するかまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖である、４本のポリペプチド鎖からなる免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）と共に、その多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合性断片を指すことが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成されており、これらはアミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される。本発明のある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合性断片）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然にもしくは人為的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれより多いＣＤＲの並行（ｓｉｄｅ−ｂｙ−ｓｉｄｅ）解析に基づき定義することができる。
１つもしくは複数のＣＤＲ残基の置換または１つもしくは複数のＣＤＲの省略も可能である。１つまたは２つのＣＤＲを結合のために分配することができる抗体が、科学文献に記載されている。Padlanら（１９９５年、FASEB J. ９巻：１３３〜１３９頁）は、公開された結晶構造に基づき、抗体とそれらの抗原との間の接触領域を解析し、ＣＤＲ残基のほんの約５分の１から３分の１が、抗原と実際に接触すると結論付けた。Padlanは、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を有さない、多くの抗体も発見した（Vajdosら、２００２年、J Mol Biol ３２０巻：４１５〜４２８頁も参照のこと）。
抗原と接触していないＣＤＲ残基は、分子モデリングによっておよび／または経験的に、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外部に位置するＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から、以前の研究に基づき同定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２における残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、多くの場合必要とされない）。ＣＤＲまたはその残基（複数可）が省略される場合、これは、通常、別のヒト抗体配列またはこのような配列のコンセンサスにおける対応する位置を占めるアミノ酸で置換される。ＣＤＲ内の置換のための位置および置換するためのアミノ酸は、経験的に選択することもできる。経験的な置換は、保存的置換であっても非保存的置換であってもよい。
本明細書に開示されている、Ｂｅｔ ｖ １に特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むことができる。このような変異は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手できる生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示されているアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、およびその抗原結合性断片を含み、１つまたは複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸は、抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基（複数可）へと、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基（複数可）へと、または対応する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換へと変異される（このような配列変化は、本明細書において、「生殖系列変異」と総称される）。当業者は、本明細書に開示されている重鎖および軽鎖可変領域配列から始めて、１つまたは複数の個々の生殖系列変異またはその組合せを含む多数の抗体および抗原結合性断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のすべてが、抗体が由来する元の生殖系列配列に見出される残基へと戻り変異する。他の実施形態では、ある特定の残基のみが、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸内もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸内に見出される変異された残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内に見出される変異された残基のみが、元の生殖系列配列へと戻り変異する。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基（複数可）のうち１つまたは複数が、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基（複数可）へと変異される。
さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２つまたはそれより多い生殖系列変異の任意の組合せを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基へと変異されるが、一方、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基へと変異される。１つまたは複数の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合性断片を得たら、結合特異性の向上、結合親和性の増加、アンタゴニストまたはアゴニスト性の生物学的特性の向上または増強（場合次第で）、免疫原性の低下など、１つまたは複数の所望の特性に関して容易に検査することができる。このような一般的な様式で得られる抗体および抗原結合性断片は、本発明の範囲内に包含される。
本発明はまた、１つまたは複数の保存的置換を有する、本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む完全ヒトモノクローナル抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して、例えば、１０個またはそれより少ないか、８個またはそれより少ないか、６個またはそれより少ないか、４個またはそれより少ない、などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体を含む。
用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、天然に存在しないヒト抗体を含むことが意図される。この用語は、非ヒト哺乳動物、または非ヒト哺乳動物の細胞において、組換えにより産生される抗体を含む。この用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生じた抗体を含むことを意図しない。
本発明の抗体は、一部の実施形態では、組換えヒト抗体および／または天然に存在しないヒト抗体であってもよい。用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、組換え手段によって調製されたか、発現されたか、作製されたかまたは単離されたすべてのヒト抗体、例えば、宿主細胞へとトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下にさらに記載される）、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（以下にさらに記載される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Taylorら、１９９２年、Nucl. Acids Res. ２０巻：６２８７〜６２９５頁を参照のこと）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製されたか、発現されたか、作製されたかもしくは単離された抗体を含むことを意図する。ある特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体をｉｎ ｖｉｔｒｏ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関する動物トランスジェニックを使用する場合は、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）に供し、よって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に関するが、ｉｎ ｖｉｖｏのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない可能性のある配列である。
ヒト抗体は、ヒンジ不均一性（ｈｉｎｇｅ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ）に関連する２つの形態で存在することができる。１つの形態では、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合によって共に保持されている、およそ１５０〜１６０ｋＤａの安定な４つの鎖の構築物を含む。第２の形態では、二量体が鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合した軽鎖および重鎖で構成された約７５〜８０ｋＤａの分子（半分の抗体）が形成される。これらの形態は、アフィニティー精製の後でさえ、分離するのが極めて困難であった。
様々なインタクトＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、これらに限定されないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造の違いによる。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、第２の形態の出現（Angalら、１９９３年、Molecular Immunology ３０巻：１０５頁）を、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して、典型的に観察されるレベルに有意に低下させることができる。本発明は、例えば、産生において、所望の抗体形態の収量を改善するため、望ましい場合のある、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３領域中に１つまたは複数の変異を有する抗体を包含する。
本明細書で使用する場合、表現「抗原結合分子」は、単独で、または１つもしくは複数の追加のＣＤＲおよび／もしくはフレームワーク領域（ＦＲ）と組み合わせて、特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むか、またはこれからなるタンパク質、ポリペプチドまたは分子複合体を意味する。ある特定の実施形態では、抗原結合分子は、抗体または抗体の断片であり、これらの用語は、本明細書の他の箇所で定義されている通りである。
語句「特異的に結合する」または「〜に特異的に結合する」などは、抗体またはその抗原結合性断片が、生理的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍまたはそれより低い（例えば、より小さいＫＤはより密接な結合を示す）の平衡解離定数によって特徴付けることができる。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。本明細書に記載されるように、Ｂｅｔ ｖ １に特異的に結合する抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって同定されている。
語句「高親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定される、少なくとも１０−８Ｍ、好ましくは１０−９Ｍ、より好ましくは１０−１０Ｍ、さらにより好ましくは１０−１１Ｍ、さらにより好ましくは１０−１２Ｍの、ＫＤとして表現される、Ｂｅｔ ｖ １に対する結合親和性を有するこれらのモノクローナル抗体を指す。
用語「遅いオフレート」、「Ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」とは、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定される、１秒当たり１×１０−３またはそれより遅い、好ましくは１秒当たり１×１０−４またはそれより遅い速度定数で、Ｂｅｔ ｖ １から解離する抗体を意味する。
用語、抗体の「抗原結合ポーション」、抗体の「抗原結合性断片」などは、本明細書で使用する場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素により得ることができる、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。用語、抗体の「抗原結合ポーション」、または「抗体断片」は、本明細書で使用する場合、Ｂｅｔ ｖ １に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。
具体的な実施形態として、本発明の抗体または抗体断片は、コルチコステロイド、第２の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体、またはエピネフリン、ワクチン、またはＢｅｔ ｖ １に対するアレルギー応答の処置に有用な任意の他の治療部分などの治療部分にコンジュゲートすることができる（「イムノコンジュゲート」）。
本発明の抗体は、単離された抗体であってもよい。「単離された抗体」は、本明細書で使用する場合、その天然環境の少なくとも１つの成分から同定され、ならびに分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から、または抗体が天然に存在するかもしくは自然に産生される組織もしくは細胞から分離または除去された抗体は、本発明の目的の「単離された抗体」である。また、単離された抗体は、組換え細胞内のin situの抗体を含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離ステップに供された抗体である。ある特定の実施形態によれば、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。
ある特定の実施形態によれば、単離された抗体は、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない場合がある（例えば、Ｂｅｔ ｖ １に特異的に結合する単離された抗体、またはその断片は、ブナ目の抗原以外の抗原、または一部の態様では、Ｂｅｔ ｖ １以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
「遮断抗体」または「中和抗体」（または「Ｂｅｔ ｖ １活性を中和する抗体」）は、本明細書で使用する場合、それとＢｅｔ ｖ １との結合が、Ｂｅｔ ｖ １の少なくとも１種の生体活性の阻害をもたらす抗体、またはその抗原結合ポーションを指すことを意図する。例えば、本発明の抗体は、Ｂｅｔ ｖ １に対する一次アレルギー応答の防止に役立つことができる。あるいは、本発明の抗体は、Ｂｅｔ ｖ １に対する二次アレルギー応答、またはくしゃみ、咳嗽、喘息状態、またはＢｅｔ ｖ １が原因のアナフィラキシー応答を含む、Ｂｅｔ ｖ １に対するアレルギー応答の少なくとも１つの症状を防止する能力を示すことができる。Ｂｅｔ ｖ １の生体活性のこのような阻害は、いくつかの標準ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ ｖｉｖｏアッセイ（本明細書に記載される受身皮膚アナフィラキシーアッセイなど）または当技術分野において公知の他のｉｎ ｖｉｖｏアッセイ（例えば、本明細書に記載の抗体のうちの１つまたは複数の投与後に、Ｂｅｔ ｖ １による負荷からの保護を調べるための他の動物モデル）のうち１つまたは複数により、Ｂｅｔ ｖ １生体活性の１つまたは複数の指標を測定することによって評価することができる。
用語「表面プラズモン共鳴」は、本明細書で使用する場合、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用する、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出による、リアルタイム生体分子相互作用の解析を可能にする光学的現象を指す。
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用する場合、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図する。
用語「エピトープ」は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有してもよい。よって、異なる抗体は、抗原における異なる区域に結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する、抗原における部位を指す。これはまた、抗体が結合する抗原の領域を指す。エピトープは、直鎖状であっても立体構造状（conformational）であってもよい。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接するアミノ酸残基によって産生されるエピトープである。立体構造エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメント由来の空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面の基（surface grouping）である決定基を含むことができ、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造特徴、および／または特異的な電荷特徴を有することができる。エピトープは、構造的または機能的エピトープとして定義することもできる。機能的エピトープは、一般的に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。近接アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露において保持されるが、一方、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理において失われる。エピトープは、典型的には、特有の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも３つ、より一般的には、少なくとも５つまたは８〜１０個のアミノ酸を含む。
用語「実質的同一性」または「実質的に同一」は、核酸またはその断片について言及する場合、以下で議論するＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰなどの配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定して、適切なヌクレオチド挿入または欠失を用いて別の核酸（またはその相補ストランド）と最適にアライメントされた場合に、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％においてヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対し実質的同一性を有する核酸分子は、ある特定の事例において、参照核酸分子にコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
ポリペプチドに適用する場合、用語「実質的類似性」または「実質的に類似する」は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重量を使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴによるなど、最適にアライメントされた場合に、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換される置換である。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させない。２つまたはそれより多いアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なる場合、類似性のパーセントまたは度合は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整することができる。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。（例えば、Pearson、１９９４年、Methods Mol. Biol. ２４巻：３０７〜３３１頁を参照のこと）。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例として、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置き換えは、Gonnetら、（１９９２年 Science ２５６巻：１４４３〜４５頁）に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。「中程度に保存的」置き換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負ではない値を有する任意の変化である。
ポリペプチドの配列類似性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、デフォルトパラメータとともに使用して、異なる生物種由来の相同ポリペプチドなどの密接に関係したポリペプチド間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定することができるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照のこと。ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨されるパラメータを用いてＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリおよび検索配列間の最良の重複の領域のアライメントならびにパーセント配列同一性を提供する（Pearson、２０００年 上記）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである（例えば、Altschulら、１９９０年 J. Mol. Biol. ２１５巻：４０３〜４１０頁および１９９７年 Nucleic Acids Res. ２５巻：３３８９〜３４０２頁を参照のこと）。
語句「治療有効量」は、これを投与した目的である所望の効果を生じる量を意味する。正確な量は、処置の目的に依存し、当業者によって、公知の技法を使用して確認することができる（例えば、Lloyd（１９９９年）The Art, Science and Technologyof Pharmaceutical Compoundingを参照のこと）。
本発明の抗体を使用して、ブナ目アレルギー個体を「脱感作する」ことができる。用語「脱感作する」は、ブナ目のアレルゲン、例えば、カバノキ花粉、例えば、Ｂｅｔ ｖ １、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ １、Ｑｕｅ ａ １、Ａｐｉ ｇ ２、Ａｐｉ ｇ １、Ｄａｕ ｃ １、Ｍａｌ ｄ １、Ｏｓｔ ｃ １、Ｆａｇ ｓ １、および／またはＣａｓ ｓ １、またはブナ目に関連するアレルゲンへの曝露に対するブナ目アレルギー個体のアレルギー反応性を減少（ブナ目アレルギーの個体がこれを行わなければ経験するレベルよりも低いレベルまで）させることとして、本明細書で定義される。用語「脱感作する」は、Ａｃｔ ｃ ８およびＡｃｔ ｄ ８（キウイ）、Ａｒａ ｈ ８（落花生）、Ｐｒｕ ａｒ １（アンズ）、Ｐｒｕ ａｖ １（サクランボ）、Ｐｒｕ ｐ １（モモ）、Ｐｙｒ ｃ １（セイヨウナシ）、Ｇｌｙ ｍ ４（ダイズ）、Ｖｉｇ ｒ １（リョクトウ）、Ｓｏｌａ Ｉ ４（トマト）、Ｃｕｃ ｍ ３（メロン）、Ｒｕｂ ｉ １（ラズベリー）、およびＦｒａ ａ １（イチゴ）を含むＰＲ−１０タンパク質に対する個体のアレルギー反応性を減少させることとして、本明細書でさらに定義される。
一般的説明
ブナ目に属する樹木は、春のアレルギー症状の供給源であり、主要なカバノキアレルゲンであるＢｅｔ ｖ １は、９５％を上回るカバノキ花粉アレルギー患者でＩｇＥ結合の原因となっている（Breiteneder、EMBO J. １９８９年、８巻（７号）：１９３５〜８頁）。カバノキは、米国のアレルギー患者の２３％および欧州のアレルギー患者の１４％において有力なトリガーである。（DataMonitor report on Allergic Rhinitis、２０１０年７月）。カバノキ花粉に感受性を示す個体における症状の重症度は、比較的軽度の鼻炎および結膜炎から潜在的に生命を脅かす喘息状態に及ぶ。６０％を上回るカバノキ花粉に対するアレルギーである患者が、このＢｅｔ ｖ １に対するＩｇＥ抗体を有することが示されている（Jarolimら、Int Arch Allergy Appl Immunol. １９８９年、８８巻（１〜２号）：１８０〜２頁）。
ブナ目の樹木は異なる地理的分布を示し、カバノキおよびハンノキは欧州の北部および北アメリカに特有であり、一方、ハシバミ、シデおよびオークはより温暖な気候を好み、したがって、むしろこれらの大陸の南部に生息する。５つの種のすべての共生個体群は、温暖気候帯に見出されることが多い５。（Spieksma FTM. Regional European pollen calendars. D'Amato G、Spieksma FTM、Bonini S編 Allergenic pollen and pollinosis in Europe. Hoboken, NJ：Wiley-Blackwell；１９９１年 ４９〜６５頁）ハンノキ、ハシバミおよびシデを含むいくつかのカバノキ科の樹木は、高い交差反応性のＩｇＥ抗体の産生をもたらす感受性の個体において、Ｂｅｔ ｖ １様抗原に対する感作を開始する可能性を有する。（Hauserら、２０１１年、Clin Exp Allergy. ４１巻：１８０４〜１４頁）
ブナ目のアレルゲン（Ｆａｇａｌｅｓ ｏｒｄｅｒ ａｌｌｅｒｇｅｎ）、またはブナ目のアレルゲン（Ｆａｇａｌｅｓ ａｌｌｅｒｇｅｎ）として、本明細書で定義されるように、カバノキ花粉（Ｂｅｔ ｖ １）、ハンノキ花粉（Ａｌｎ ｇ １およびＡｌｎ ｇ ４）、ハシバミ花粉（Ｃｏｒ ａ １、Ｃｏｒ ａ ２、Ｃｏｒ ａ ８、Ｃｏｒ ａ ９、Ｃｏｒ ａ １０、Ｃｏｒ ａ １１、Ｃｏｒ ａ １２、Ｃｏｒ ａ １３、およびＣｏｒ ａ １４）、シデ花粉（Ｃａｒ ｂ １）、アサダ花粉（Ｏｓｔ ｃ １）、セイヨウトチノキ花粉（Ｃａｓ ｓ １、Ｃａｓ ｓ ５、Ｃａｓ ｓ ８、およびＣａｓ ｓ ９）、ブナ花粉（Ｆａｇ ｓ １）およびホワイトオーク花粉（Ｑｕｅ ａ １およびＱｕｅ ａ ２）が挙げられる。非カバノキ花粉である、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ １、Ｏｓｔ ｃ １、Ｃａｓ ｓ １、Ｆａｇ ｓ １、およびＱｕｅ ａ １は、Ｂｅｔ ｖ １に類似するかまたはそれに関連する、すなわち、ブナ目に関連するアレルゲンである。これらのアレルゲンは、ブナ目の樹木の木の実、およびバラ目に属する無関連の樹木の果実においても発現される。これらのアレルゲンの交差反応性は、花粉アレルギー患者の食物アレルギーの症状を促す場合がある。例示的交差反応性の食物アレルギーとして、リンゴ、サクランボ、アンズ、セイヨウナシ、ウマゴヤシ、エンドウ、ダイズ、トマト、セロリ、ニンジン、およびアスパラガスが挙げられる。（Allergens and Allergen Immunotherapy: Subcutaneous, Sublingual, andOral、第５版 Richard F. Lockey、DennisK. Ledford編 CRC Press, Taylor & Francis Group、London、NY、２０１４年 １１４、１１８〜１１９頁）。
本明細書で使用する場合、語句「ブナ目のアレルゲン」は、ブナ目に関連するアレルゲンを含む。一部の実施形態では、「ブナ目に関連するアレルゲン」は、Ｂｅｔ ｖ １と少なくとも約３５％の全体的な配列相同性、またはＢｅｔ ｖ １のエピトープ１と少なくとも約５０％の配列相同性、またはＢｅｔ ｖ １のエピトープ２と少なくとも約４０％の配列相同性、またはＢｅｔ ｖ １のエピトープ３と少なくとも約２５％の配列相同性、またはＢｅｔ ｖ １のエピトープ４と少なくとも約１５％の配列相同性を有するタンパク質として定義される。一部の実施形態では、「ブナ目に関連するアレルゲン」は、バラ目由来のアレルゲンを含む、それに抗Ｂｅｔ ｖ １抗体が交差反応するタンパク質として定義される。
免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、枯草熱、アレルギー性喘息、ハチ毒アレルギー、および食物アレルギーとして顕在化する１型過敏症の原因である。ＩｇＥは、血液中を循環し、好塩基球およびマスト細胞におけるＩｇＥに対する高親和性Ｆｃ受容体に結合する。大部分のアレルギー応答において、アレルゲンは、吸入、摂取によって、または皮膚を介して体内に侵入する。次いで、アレルゲンは、マスト細胞および好塩基球の表面上の高親和性受容体に既に結合した、予め形成されたＩｇＥに結合し、いくつかのＩｇＥ分子の架橋を生じ、種々のアレルギー症状を引き起こすヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を誘発する。
カバノキ花粉アレルギーの処置は、カバノキ花粉の粗抽出物またはＢｅｔ ｖ １に由来する短いペプチドのいずれかの漸増投薬量の反復的な注射を含む脱感作療法を含む。アレルゲン特異的免疫療法の不十分さは、患者のコンプライアンスの問題をもたらす長期の処置持続期間、および注射したタンパク質に対する頻度の高いアレルギー反応（最大３０％）を含む。脱感作療法は、処置が有効であるとみなされる前に数年かかる場合がある。処置の成功は、抽出物の組成および品質に依存し、処置は、重篤な喘息／食物アレルギーを有する患者では、ＩｇＥにより媒介される重篤な有害事象のリスクによって禁忌である。したがって、カバノキ花粉アレルギー処置の分野では、ブナ目のアレルゲン、特に、Ｂｅｔ ｖ １に対して感受性の患者を処置するための代替戦略に対する必要性が存在する。
抗体は、粘膜組織へのアレルゲン分子の侵入を遮断することができる可能性があるため、またはマスト細胞もしくは好塩基球上の高親和性受容体に結合したＩｇＥにアレルゲンが結合する機会を得る前にアレルゲンに結合し、これにより、これらの細胞からのヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を防止することができるため、アレルギーに対する一般的処置戦略として提案されてきた。米国特許第５，６７０，６２６号は、粘膜組織へのアレルゲンの結合を遮断することによる、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、およびアレルギー性結膜炎などのＩｇＥ媒介性アレルギー疾患の処置のためのモノクローナル抗体の使用について記載する。米国特許第６，８４９，２５９号は、アレルギーのｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおけるアレルギー性炎症を阻害するためのアレルゲン特異的抗体の使用について記載する。ミルクに基づくおよび卵に基づく抗体系が記載されている。例えば、ＵＳ２００３０００３１３３Ａ１は、カバノキ花粉および他のアレルゲンに対する経口寛容を誘導するための、アレルゲンの担体としてのミルクの使用を開示する。マスト細胞に結合するアレルゲンの能力を阻害する分子の使用による、環境中のアレルゲンに対する動物におけるアレルギー応答を低下させるための組成物および方法が、ＷＯ１９９４／０２４１６４Ａ２に記載された。Ｂｅｔ ｖ １に対する他の抗体が、Ｕ．Ｓ．２０１０／００３４８１２で言及された。
本明細書に記載の完全ヒト抗体は、Ｂｅｔ ｖ １に対する特異的な結合を示し、カバノキ花粉アレルギーを患う患者、特に、Ｂｅｔ ｖ １アレルゲンに対する感受性を示す患者の処置に有用となり得る。このような抗体の使用は、ブナ目の樹木の花粉に対するアレルギーを患う患者を処置する有効な手段となり得るか、または抗体は、二次曝露によるＢｅｔ ｖ １に対する応答の増大化の防止、もしくはアレルギーに関連する随伴症状の防止に使用することができるか、またはカバノキ花粉アレルゲンへの一次曝露もしくは二次曝露による症状の再発に関連するアレルギー応答の重症度および／もしくは持続時間の低減に使用することができる。抗体は、単独で、またはこれらに限定されないが、コルチコステロイドもしくはエピネフリンによる処置などの、このようなアレルギーを処置するための当技術分野において公知の他の治療部分もしくはモダリティーにとっての補助療法として使用することができる。抗体は、Ｂｅｔ ｖ １に特異的な第２または第３の異なる抗体と併せて使用することができる。抗体は、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）と共に使用することができる。一部の実施形態では、ＳＩＴとの組合せは相乗的に有効である。
脱感作療法と異なり、本明細書に記載の抗体による処置は、処置開始の約２週間以内に、または処置開始の約１０日もしくは約８日以内に有効な緩和をもたらすことができる。Ｂｅｔ ｖ １タンパク質もしくはペプチド、または１つもしくは複数の追加のブナ目のアレルゲンへの曝露と併せて、本明細書に記載の完全ヒト抗体による処置は、アレルギー反応を遮断することができるだけでなく、ブナ目の樹木由来の花粉に対するアレルギーを患う患者を、より有効にまたは相乗的に脱感作することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、商業的に購入し得るか（例えば、Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製、ＶＡ、番号ＮＡ−ＢＶ１−１）、または組換えにより産生してもよい天然Ｂｅｔ ｖ １などの一次免疫原で免疫されたマウスから得られる。Ｂｅｔ ｖ １の全長アミノ酸配列は、配列番号３０６として示される。全長Ｂｅｔ ｖ １アミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１５４９４由来の配列番号３１４にも見出し得る。
免疫原は、天然の、ネイティブの、もしくは組換えにより産生されたＢｅｔ ｖ １の生物学的に活性なおよび／もしくは免疫原性の断片、またはその活性な断片をコードするＤＮＡであってもよい。断片は、Ｂｅｔ ｖ １のＮ末端もしくはＣ末端のいずれか、またはＢｅｔ ｖ １アミノ酸配列内の任意の部位に由来してもよい。
抗体の抗原結合性断片
別段具体的に示されていなければ、用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）ならびにその抗原結合性断片を包含すると理解されたい。用語、抗体の「抗原結合ポーション」、抗体の「抗原結合性断片」などは、本明細書で使用する場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素により得ることができる、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。用語、抗体の「抗原結合ポーション」、または「抗体断片」は、本明細書で使用する場合、Ｂｅｔ ｖ １に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体断片として、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含有する断片、または単離されたＣＤＲを挙げることができる。抗体の抗原結合性断片は、例えば、完全抗体分子に由来し得、タンパク質分解による消化、または抗体可変および（必要に応じて）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子操作技法などの任意の好適な標準技法を使用する。このようなＤＮＡは、公知であるおよび／もしくは、例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手することができる、または合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的にまたは分子生物学的技法を使用することにより操作して、例えば、１つまたは複数の可変および／または定常ドメインを好適な構造（configuration）へと配置するか、またはコドンを導入する、システイン残基を作製する、アミノ酸を修飾、付加もしくは欠失させることなどができる。
抗原結合性断片の非限定例として、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬（ｓｍａｌｌ ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用する場合、表現「抗原結合性断片」内に包含される。
抗体の抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であってもよく、一般的に、１つまたは複数のフレームワーク配列に隣接した、またはこれとインフレームの少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片において、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の好適な配置で互いに対して位置することができる。例えば、可変領域は二量体となり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有することができる。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有することができる。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含有してもよい。本発明の抗体の抗原結合性断片内に見出すことができる可変および定常ドメインの非限定的な例示的構造として、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上に列挙する例示的構造のいずれかを含む、可変および定常ドメインのいずれの構造においても、可変および定常ドメインは、互いに直接連結されていても、完全または部分的ヒンジまたはリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個のまたはそれより多い）アミノ酸からなることができ、これにより、単一ポリペプチド分子における隣接する可変および／または定常ドメインの間に可撓性または半可撓性連結がもたらされる。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、互いにおよび／または１つまたは複数の単量体ＶＨまたはＶＬドメインと非共有結合的に会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）により）、上に列挙する可変および定常ドメイン構造のうちいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことができる。
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、当技術分野において公知である。本発明の文脈において、任意のこのような公知の方法を使用して、Ｂｅｔ ｖ １に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照のこと）またはモノクローナル抗体を生成するための任意の他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、Ｂｅｔ ｖ １に対する高親和性キメラ抗体が最初に単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結したヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を伴う。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結される。次いで、ＤＮＡは、完全ヒト抗体を発現することができる細胞において発現される。
一般的に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、目的の抗原を負荷し、抗体を発現するリンパ性細胞（Ｂ細胞など）をマウスから回収する。リンパ性細胞を骨髄腫細胞株と融合して、不死ハイブリドーマ細胞株を調製し、このようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定することができる。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ型定常領域に連結することができる。このような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞において産生することができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
最初に、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体が単離される。以下の実験セクションにおける通り、抗体は、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴に対して特徴付けされ、選択される。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置き換えて、本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型または修飾型ＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性の特徴は、可変領域に属する。
一般的に、本発明の抗体は、非常に高い親和性を保有し、典型的には、固相に固定されたかまたは溶液相における抗原への結合により測定された場合、約１０−１２から約１０−９ＭのＫＤを保有する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置き換えて、本発明の完全ヒト抗体を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性の特徴は、可変領域に属する。
生物学的同等物
本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体および抗体断片は、記載された抗体のアミノ酸配列から変動するが、Ｂｅｔ ｖ １に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較してアミノ酸の１つまたは複数の付加、欠失、または置換を含むが、記載された抗体の生体活性と本質的に同等な生体活性を示す。同様に、本発明の抗体コードＤＮＡ配列は、開示された配列と比較してヌクレオチドの１つまたは複数の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体断片と本質的に、生物学的に同等である抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。
２つの抗原結合タンパク質、または抗体が、例えば、同じモル用量（the samemolar dose）にて類似の実験条件下で、単回用量または複数回用量のいずれかで投与された場合に、その吸収の速度および程度が有意差を示さない薬学的同等物または薬学的代替物である場合、両者は生物学的に同等であるとみなされる。いくつかの抗体が、その吸収の程度において同等であるが、その吸収の速度においては同等ではない場合に、これらの抗体は、同等物または薬学的代替物であるとみなされ、そしてこのような吸収の速度における差が意図的であり、標識において反映され、例えば慢性使用における有効な体内薬物濃度の到達に必須ではなく、試験される特定の薬物製品にとって医学的に無意味であるとみなされるため、これらが生物学的に同等であると依然としてみなされ得る。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、その安全性、純度、および効力において臨床的に有意義な差がない場合、生物学的に同等である。
一実施形態では、切り替えを行わない継続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化、または有効性の減弱化を含む有害作用のリスクの増加が予想されることなく、患者に対して、参照産物および生体産物の間で切り替えを１回または複数回行うことができる場合、２つの抗原結合タンパク質は、生物学的に同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質が両者共に、使用条件（単数または複数）に対し共通の作用機序（単数または複数）によって、このような機序が公知の程度まで作用する場合、２つの抗原結合タンパク質は、生物学的に同等である。
生物学的同等性は、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ方法によって示すことができる。生物学的同等性の尺度は、例えば、（ａ）時間の関数として血液、血漿、血清、または他の生体液における抗体またはその代謝物の濃度を測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ検査；（ｂ）ヒトｉｎ ｖｉｖｏバイオアベイラビリティデータと相関され、これを合理的に予測するｉｎ ｖｉｔｒｏ検査；（ｃ）時間の関数として抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果を測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ検査；および（ｄ）抗体の安全性、有効性、またはバイオアベイラビリティまたは生物学的同等性を確立する十分に制御された治験における検査を含む。
本発明の抗体の生物学的に同等なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を行うことによりまたは生体活性に必要とされない末端もしくは内部残基もしくは配列を欠失させることにより、構築することができる。例えば、生体活性に必須ではないシステイン残基を欠失させるかまたは他のアミノ酸で置き換えて、復元における不要なまたは不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。他の文脈では、生物学的に同等な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む抗体バリアントを含んでもよい。
抗体の生物学的特徴
一般的に、本発明の抗体は、Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔ ｖ １の断片への、またはＢｅｔ ｖ １および１つまたは複数のブナ目のアレルゲンもしくはブナ目に関連するアレルゲンへの結合により機能することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｂｅｔ ｖ １タンパク質内に位置するエピトープもしくは断片、例えば、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基を包含するエピトープもしくは断片、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基を包含するエピトープもしくは断片、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基を包含するエピトープもしくは断片、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基を包含するエピトープもしくは断片、または配列番号３０６の約８１位から約８９位もしくは約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基を包含するエピトープもしくは断片に結合してもよい。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、および３１５からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列に結合してもよく、エピトープ配列は、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかにおいて、１から５個のアミノ酸、または約５から約１０個のアミノ酸によって伸長され得る。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｂｅｔ ｖ １アレルゲンに対して感受性の患者における、マスト細胞または好塩基球へのＩｇＥの結合を遮断または阻害することにより機能することができる。ある特定の実施形態では、本発明において提供される抗体は、アイソタイプ対照抗体と比較した場合、例えば、少なくとも約７０％まで、好塩基球活性化を阻害または遮断する。ある特定の実施形態では、抗体は、アイソタイプ対照抗体と比較した場合、例えば、少なくとも約７０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％まで、マスト細胞脱顆粒を阻害または遮断する。
一実施形態では、本発明は、Ｂｅｔ ｖ １に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供し、抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＶＲを含む、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＶＲを含む、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２８８、および２９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、および３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２８４、および２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２８６、および２９４からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、および３００からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、および３０２からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む、（ｖ）１０−８と等しいかもしくはそれより低いかまたは約１０−８から約１０−１１の範囲のＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する、（ｖｉ）アナフィラキシーもしくは炎症の少なくとも１つの動物モデルで有効性を示す、または（ｖｉｉ）Ｂｅｔ ｖ １への結合に関して、参照抗体と競合する。
一実施形態では、本発明は、組成物の調製のための、本発明の２つまたはそれより多い完全ヒト抗体、またはその断片の組合せの使用を提供し、抗体は、Ｂｅｔ ｖ １に結合し、組成物内に含有される各抗体またはその断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２８２、および２９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＶＲを含む、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＶＲを含む、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２８８、および２９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、および３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む、（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２８４、および２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２８６、および２９４からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、および３００からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、および３０２からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくは少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む、（ｖ）１０−８と等しいかもしくはそれより低いかまたは約１０−８から約１０−１１の範囲のＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する、（ｖｉ）アナフィラキシーもしくは炎症の少なくとも１つの動物モデルで有効性を示す、または（ｖｉｉ）Ｂｅｔ ｖ １への結合に関して、参照抗体と競合する。
ある特定の本発明のＢｅｔ ｖ １抗体は、単独で、または組み合わせて使用する場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイによって決定されるように、Ｂｅｔ ｖ １に結合し、その少なくとも１つの生物学的効果を中和することができる。Ｂｅｔ ｖ １に結合し、その活性を中和する本発明の抗体の能力は、本明細書に記載されるように、結合アッセイ、または活性の中和（例えば、アナフィラキシーからの保護）アッセイを含む、当業者に公知の任意の標準的方法を使用して測定することができる。
結合活性を測定するための、非限定的な、例示的ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、本明細書の実施例３に例証される。実施例３では、ヒト抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の結合親和性および動力学的定数は、表面プラズモン共鳴によって決定した。
Ｂｅｔ ｖ １タンパク質またはペプチドは、タグ付けするためのまたはＫＬＨなどの担体分子へのコンジュゲーションを目的とした、ある特定の残基の付加または置換を含むよう改変されてもよい。例えば、システインは、ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端のいずれかに付加されてもよく、またはリンカー配列が、例えば、免疫のために、ＫＬＨへのコンジュゲーションのためのペプチドを調製するために付加されてもよい。Ｂｅｔ ｖ １に特異的な抗体は、追加の標識も部分も含有しなくてもよく、またはこれらは、Ｎ末端もしくはＣ末端の標識または部分を含有してもよい。一実施形態では、標識または部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識の位置は（存在する場合）、ペプチドが結合する表面に対してペプチドの配向を決定し得る。例えば、表面がアビジンでコーティングされている場合、Ｎ末端にビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端ポーションが表面と遠位になるように配向される。
エピトープマッピングおよび関連する技術
用語「エピトープ」は、本明細書で使用する場合、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有し得る。よって、異なる抗体は、抗原における異なる区域に結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。エピトープは、立体構造状であっても直鎖状であってもよい。立体構造エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメント由来の空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接するアミノ酸残基によって産生されるエピトープである。ある特定の状況では、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
本明細書では、例えば、配列番号３０６に示すＢｅｔ ｖ １の任意の断片を含むＢｅｔ ｖ １分子内に、または組換えにより産生されたＢｅｔ ｖ １タンパク質の匹敵する領域内に見出される１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体が提供される。抗体が結合するエピトープは、Ｂｅｔ ｖ １分子内に位置する３つまたはそれより多い（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれより多い）アミノ酸の単一の連続配列からなってもよい。例示的な連続配列として、配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２３位から約３８位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２３位から約４１位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２６位から約４３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２９位から約４３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約４４位から約７０位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約４５位から約５６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５位から約１０位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約１１位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５７位から約６６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８４位から約９６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８５位から約９６位に及ぶアミノ酸残基；および配列番号３０６の約８１位から約８９位に及ぶアミノ酸残基が挙げられる。さらなる例示的な連続配列として、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、および３１５からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列が挙げられ、このような配列は、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかにおいて、約１から約５個のアミノ酸、または約５から約１０個のアミノ酸によって伸長され得る。あるいは、エピトープは、Ｂｅｔ ｖ １分子内に位置する複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなってもよい（例えば、立体構造エピトープ）。
当業者に公知の種々の技法を使用して、抗体が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定することができる。例示的な技法として、例えば、Antibodies、HarlowおよびLane（Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harb.、NY）に記載されるような慣用の交差遮断アッセイが挙げられる。他の方法として、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット分析（Reineke（２００４年） Methods Mol Biol ２４８巻：４４３〜６３頁）、ペプチド切断分析、結晶学的研究およびＮＭＲ解析が挙げられる。さらに、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出および化学的修飾などの方法を用いることができる（Tomer（２０００年） Protein Science ９巻：４８７〜４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析法により検出される水素／重水素交換である。大まかに述べれば、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素で標識し、続いて、抗体を重水素標識タンパク質に結合させることを伴う。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移すと、抗体複合体によって保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で、重水素から水素への、戻り交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体の界面の一部を形成するアミノ酸は重水素を保持することができ、したがって、界面に含まれないアミノ酸と比較して比較的高い質量を呈する。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断および質量分析に供し、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識された残基を明らかにする。例えば、Ehring（１９９９年） Analytical Biochemistry ２６７巻（２号）：２５２〜２５９頁；EngenおよびSmith（２００１年） Anal.Chem. ７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照のこと。抗原／抗体複合体のＸ線結晶学もまた、エピトープマッピングの目的のために使用してもよい。
抗原構造に基づく抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＡＳＡＰ）としても公知の修飾支援プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＭＡＰ）は、化学的または酵素的に修飾された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性によって、同一抗原に対して向けられた多数のモノクローナル抗体（モノクローナル抗体）を分類する方法である（ＵＳ２００４／０１０１９２０）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープと明確に異なるかまたは部分的に重複するかのいずれかで特有のエピトープを反映し得る。この技術は、遺伝学的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にするため、遺伝学的に別個の抗体に焦点を当てて特徴付けを行うことができる。ハイブリドーマスクリーニングに適用された場合、ＭＡＰは所望の特徴を有するモノクローナル抗体を産生する稀少なハイブリドーマクローンの同定を容易にし得る。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を、異なるエピトープに結合する抗体の群へと選別することができる。
ある特定の実施形態では、抗Ｂｅｔ ｖ １抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６または配列番号３１４（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１５４９４由来のＢｅｔ ｖ １アミノ酸配列）に例示される天然またはネイティブ形態の、もしくは組換えにより産生されるＢｅｔ ｖ １内のエピトープまたはその断片に結合する。ある特定の実施形態では、表１に示す本発明の抗体は、配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２３位から約３８位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２３位から約４１位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２６位から約４３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２９位から約４３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約４４位から約７０位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約４５位から約５６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５位から約１０位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約１１位から約１９位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約５７位から約６６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８４位から約９６位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３０６の約８５位から約９６位に及ぶアミノ酸残基；および配列番号３０６の約８１位から約８９位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する。これらの領域は、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１および３１５においてさらに例示される。
本発明は、本明細書の表１に記載されている具体的な例示的抗体のいずれか、または表１に記載されている例示的抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と同じエピトープ、またはこのエピトープの一部（portion）に結合する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体も含む。同様に、本発明は、本明細書の表１に記載されている具体的な例示的抗体のいずれかと、または表１に記載の例示的抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と、Ｂｅｔ ｖ １またはＢｅｔ ｖ １断片への結合に関して競合する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体も含む。
当技術分野において公知の慣用的な方法を使用することにより、抗体が、参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体と同じエピトープに結合するか、またはこれと結合に関して競合するかどうかを容易に決定することができる。例えば、検査抗体が、本発明の参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、飽和条件下で、参照抗体をＢｅｔ ｖ １タンパク質またはペプチドに結合させる。次に、Ｂｅｔ ｖ １分子に結合する検査抗体の能力を評価する。検査抗体が、参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体による飽和結合後のＢｅｔ ｖ １に結合することができる場合、検査抗体が、参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方では、検査抗体が、参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体による飽和結合後のＢｅｔ ｖ １分子に結合することができない場合、検査抗体は、本発明の参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合することができる。
抗体が、結合に関して参照抗Ｂｅｔ ｖ １抗体と競合するかどうかを決定するために、上記の結合方法論を２つの方向（orientation）で実施する。第１の方向において、参照抗体を飽和条件下でＢｅｔ ｖ １分子に結合させ、続いて、Ｂｅｔ ｖ １分子への検査抗体の結合を評価する。第２の方向において、検査抗体を飽和条件下でＢｅｔ ｖ １分子に結合させ、続いて、Ｂｅｔ ｖ １分子への参照抗体の結合を評価する。両方の方向において、第１の（飽和）抗体のみが、Ｂｅｔ ｖ １分子に結合することができる場合、検査抗体および参照抗体が、Ｂｅｔ ｖ １への結合に関して競合すると結論付けられる。当業者に十分に理解されるように、結合に関して参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と同一エピトープに必ずしも結合しないが、重複または隣接するエピトープに結合することにより参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。
２つの抗体は、それぞれが抗原への他方の結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍過剰な一方の抗体は、競合的結合アッセイで測定した場合、他方の結合を少なくとも５０％だが、好ましくは７５％、９０％またはさらには９９％阻害する（例えば、Junghansら、Cancer Res. １９９０年 ５０巻：１４９５〜１５０２頁を参照のこと）。あるいは、一方の抗体の結合を低下または排除する抗原における本質的にすべてのアミノ酸変異が、他方の結合を低下または排除する場合、２つの抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低下または排除するいくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を低下または排除する場合、２つの抗体は、重複するエピトープを有する。
次いで、追加の慣用的な実験（例えば、ペプチド変異および結合解析）を実行して、観察された検査抗体の結合の欠如が、実際に、参照抗体と同じエピトープへの結合によるものであるか、または立体的遮断（または別の現象）が、観察される結合の欠如の原因であるかを確認することができる。このような選別の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリーまたは当技術分野において利用できる任意の他の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを使用して実施することができる。
イムノコンジュゲート
本発明は、Ｂｅｔ ｖ １アレルゲンに対する、またはブナ目の樹木が存在する環境におけるＢｅｔ ｖ １アレルゲンに対するアレルギー応答の重症度を低下させることができる、あるいは鼻炎、結膜炎、もしくは呼吸困難を含む、カバノキ花粉もしくはＢｅｔ ｖ １アレルゲンへの曝露に関連する少なくとも１つの症状、またはその重症度を改善するための薬剤などの、治療部分にコンジュゲートされたヒト抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体（「イムノコンジュゲート」）を包含する。このような薬剤は、コルチコステロイド、Ｂｅｔ ｖ １に対する第２の異なる抗体、またはワクチンであってもよい。Ｂｅｔ ｖ １抗体にコンジュゲートすることができる治療部分の種類は、処置される状態および達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れる。あるいは、所望の治療効果が、Ｂｅｔ ｖ １アレルゲンへの曝露に関連する続発症もしくは症状、またはこのような曝露に起因する他のいずれかの状態、例えば、これらに限定されないが、鼻炎または結膜炎を処置することである場合、状態の続発症もしくは症状を処置するのに、または本発明の抗体の任意の副作用を緩和するのに適切な薬剤をコンジュゲートすることが有利となり得る。イムノコンジュゲートの形成に好適な薬剤の例は、当技術分野において公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照のこと。
治療的投与および製剤
本発明は、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体またはその抗原結合性断片を含む治療用組成物を提供する。本発明に従った治療用組成物の投与は、これらに限定されないが、静脈内、皮下、筋肉内、鼻腔内を含む好適な経路により、製剤に取り込まれて移入、送達、耐容性などの向上をもたらす好適な担体、賦形剤、および他の剤と共に投与される。多数の適切な製剤は、すべての薬剤師に公知の処方集に見出すことができる：Remington's Pharmaceutical Sciences、MackPublishing Company、Easton, PA。これらの製剤は、例えば、粉剤・散剤（powder）、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー剤、ワックス剤、油剤、脂質剤、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞剤（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート剤、無水吸収ペースト剤、水中油型および油中水型乳剤、エマルジョンカーボワックス剤（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル剤、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物を含む。Powellら、「Compendium of excipients forparenteral formulations」 PDA（１９９８年）J Pharm Sci Technol ５２巻：２３８〜３１１頁も参照のこと。
抗体の用量は、投与される患者の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変動し得る。本発明の抗体が、Ｂｅｔ ｖ １に対する感受性を有する個体におけるブナ目の樹木由来の花粉、もしくはカバノキ花粉、もしくはＢｅｔ ｖ １への曝露に関連する鼻炎もしくは結膜炎を処置するために、またはブナ目のアレルゲンに対するアナフィラキシー応答を防止するために、またはアレルギー応答の重症度を低減させるために使用される場合、通常、体重１ｋｇ当たり約０．０１から約３０ｍｇ、より好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．０２から約７、約０．０３から約５、または約０．０５から約３ｍｇの単回用量で、本発明の抗体を静脈内投与することが有利である。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも約０．１ｍｇから約８００ｍｇ、約１から約５００ｍｇ、約５から約３００ｍｇまたは約１０から約２００ｍｇ、約１００ｍｇまでまたは約５０ｍｇまでの初回用量として投与することができる。ある特定の実施形態では、初回用量に続いて、抗体またはその抗原結合性断片の第２のまたは複数のその後の用量を、初回用量とおよそ同じかまたはこれに満たないものであってよい量で投与することができ、その後の用量は、少なくとも１日から３日間；少なくとも１週間、少なくとも２週間；少なくとも３週間；少なくとも４週間；少なくとも５週間；少なくとも６週間；少なくとも７週間；少なくとも８週間；少なくとも９週間；少なくとも１０週間；少なくとも１２週間；または少なくとも１４週間離される。
種々の送達系が公知であり、本発明の医薬組成物の投与に使用することができ、例えば、リポソームへの封入、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが挙げられる（例えば、Wuら、１９８７年 J. Biol. Chem. ２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照のこと）。導入の方法として、これらに限定されないが、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられる。組成物は、任意の使いやすい経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜など）を介した吸収により投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与してもよい。投与は、全身性であっても局所性であってもよい。
医薬組成物は、小胞、特に、リポソームにおいて送達することもできる（例えば、Langer、１９９０年、Science ２４９巻：１５２７〜１５３３頁を参照のこと）。
ある特定の状況において、医薬組成物は、放出制御系において送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、放出制御系は、組成物の標的に近接して置くことができ、よって、全身性用量の一部分のみを必要とする。
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を含むことができる。これらの注射用調製物は、公的に知られた方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、注射のために従来から使用される無菌水性媒体または油性媒体において、上記の抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化することにより調製することができる。注射用の水性媒体として生理食塩水、グルコースを含有する等張性溶液および他の助剤などが存在し、それらは、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用することができる。油性媒体として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用することができる、ゴマ油、ダイズ油などが用いられる。このように調製された注射液は、好ましくは、適切なアンプル内に充填される。
本発明の医薬組成物は、標準的な針およびシリンジにより皮下にまたは静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の医薬組成物の送達において容易に適用される。このようなペン型送達デバイスは、再使用可能または使い捨てであってよい。再使用可能なペン型送達デバイスは、一般的に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物のすべてが投与され、カートリッジが空となったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスにおいて、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバーに保持された医薬組成物を予め充填した状態で届けられる。リザーバーから医薬組成物が空になったら、デバイス全体が廃棄される。
多数の再使用可能なペン型および自動注入送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達において適用される。例として、ほんの数例ではあるが、確かにこれらに限定されないが確かに、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達において適用される使い捨てペン型送達デバイスの例として、ほんの数例ではあるが、これらに限定されないが確かに、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入装置（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）が挙げられる。
有利には、上記の経口または非経口的使用のための医薬組成物は、有効成分の用量を適合させるのに適した単位用量の剤形へと調製される。単位用量のこのような剤形として、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射（アンプル）剤、坐剤などが挙げられる。含有される上記の抗体の量は、一般的に、単位用量の剤形当たり約５から約５００ｍｇである；特に、注射形態において、上記の抗体は、約５〜約１００ｍｇで、他の剤形では約１０から約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
抗体の治療的使用
本発明の抗体は、それ自体とＢｅｔ ｖ １との相互作用により、ブナ目のアレルゲン、カバノキ花粉への、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質を含有する環境への個体の曝露後の一次応答、または眼のかゆみ、結膜炎、鼻炎、喘鳴、呼吸困難などのアレルギー応答に関連する少なくとも１種の症状の処置に、あるいはより重篤なアナフィラキシー応答を含むＢｅｔ ｖ １アレルゲンに対する二次応答の防止に、あるいはブナ目のアレルゲンへの再曝露後の症状の重症度、持続時間、および／または頻度の低減に有用である。したがって、本発明の抗体を予防的にまたは治療的に使用できることが想定される。
本発明のまたさらなる実施形態では、本発明の抗体は、カバノキ花粉もしくはその抽出物および／またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に敏感な患者を処置するための医薬組成物の調製に使用される。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗体は、Ｂｅｔ ｖ １への一次曝露の重症度を低下させるための、またはＢｅｔ ｖ １に対するアレルギー応答の重症度、持続時間および／もしくは回数を低下させるための医薬組成物の調製に使用される。本発明のさらなる実施形態では、本発明の抗体は、コルチコステロイド、ワクチン、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）、または当業者に公知の任意の他の対症療法を含む、ブナ目のアレルゲンの処置に有用な任意の他の薬剤にとっての補助療法として使用される。
併用療法
併用療法は、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体および本発明の抗体、または本発明の抗体の生物学的に活性な断片と有利に組み合わせることができる任意の追加の治療剤を含むことができる。
例えば、コルチコステロイドなどの第２の治療剤は、ブナ目のアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １への曝露、あるいはブナ目の樹木が存在し、開花する環境への曝露後のアレルギー症状の低下に役立つよう用いることができる。抗体は、Ｂｅｔ ｖ １アレルゲンに特異的なワクチンなど、他の療法と併せて使用することもできる。治療的に活性な追加の成分（複数可）は、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の投与の前に、これと同時に、またはその後に投与することができる。本開示の目的のために、このような投与レジメンは、第２の治療的に活性な成分「と組み合わせた」抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の投与とみなされる。
アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）
本明細書で使用する場合、表現「アレルゲン特異的免疫療法」、「特異的免疫療法」、「ＳＩＴ」、「ＳＩＴレジメン」などは、アレルギーおよびアレルギー反応を処置もしくは防止するための手段としての、またはアレルギー応答を低下または排除するための、経時的な患者へのアレルゲンの繰り返し投与を指す。典型的なＳＩＴレジメンでは、少量のアレルゲンをアレルギー患者に最初に投与し、続いて、増加した量のアレルゲンを投与する。ある特定の事例では、ＳＩＴレジメンは、少なくとも２つの連続する期を含む：（１）増量投与期、および（２）維持期。増量投与期には、有効かつ安全な投与が確立されるまで、漸増用量のアレルゲンを投与する。次いで、増量投与期の終わりに達成される用量が、維持期の経過中にわたって、患者に投与される。増量投与期の持続期間は、数週間または数カ月であり得る。しかしながら、ある特定の実施形態では、増量投与期は、実質的により短い持続期間（例えば、１週間未満、６日未満、５日未満、４日未満、３日未満、または２日未満）である。５日未満の増量投与期を含むＳＩＴレジメンは、「急速」免疫療法または「急速ＳＩＴ」と称されることもある。ＳＩＴレジメンの維持期は、数週間、数カ月、数年、または無期限に持続し得る。
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態によると、１つまたは複数の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体（抗体の組合せ）の複数回用量は、定義された時間経過にわたって患者に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、抗体、抗体の組合せの複数回用量を患者に逐次的に投与することを含む。本明細書で使用する場合、「逐次的に投与する」は、抗体または抗体の組合せの各用量が、異なる時点において、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間または数カ月間）によって隔てられた異なる日に、患者に投与されることを意味する。本発明は、抗体または抗体の組合せの単一の初回用量と、それに続く、抗体の１または複数の二次用量と、必要に応じてそれに続く、抗体の１または複数の三次用量を患者に逐次的に投与することを含む方法を含む。
用語「初回用量」、「二次用量」、および「三次用量」は、本発明において提供される抗体または抗体の組合せの投与の時間的順序を指す。よって、「初回用量」は、処置レジメンの初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）；「二次用量」は、初回用量の後に投与される用量であり；「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初回、二次、および三次用量はすべて、同じ量の抗体または抗体の組合せを含有することができるが、一般的に、投与頻度の観点から互いに異なっていてもよい。しかしながら、ある特定の実施形態では、初回、二次および／または三次用量に含有されている抗体または抗体の組合せの量は、処置の過程において互いに変動する（例えば、適宜、上方または下方に調整される）。ある特定の実施形態では、処置レジメンの初めに「負荷用量」として２またはそれより多い（例えば、２、３、４、または５）用量が投与され、それに続いて、より少ない頻度で投与されるその後の用量（例えば、「維持用量」）が投与される。
本発明の例示的な一実施形態では、各二次および／または三次用量は、直前の用量から１から２６（例えば、１、１ １／２、２、２ １／２、３、３ １／２、４、４ １／２、５、５ １／２、６、６ １／２、７、７ １／２、８、８ １／２、９、９ １／２、１０、１０ １／２、１１、１１ １／２、１２、１２ １／２、１３、１３ １／２、１４、１４ １／２、１５、１５ １／２、１６、１６ １／２、１７、１７ １／２、１８、１８ １／２、１９、１９ １／２、２０、２０ １／２、２１、２１ １／２、２２、２２ １／２、２３、２３ １／２、２４、２４ １／２、２５、２５ １／２、２６、２６ １／２またはそれより長い）週間後に投与される。語句「直前の用量」は、本明細書で使用する場合、一連の複数の投与において、介在する用量が存在しない順番において丁度次の用量の投与の前に患者に投与される抗体または抗体の組合せの用量を意味する。
本発明のこの態様による方法は、抗体または抗体の組合せの任意の数の二次および／または三次用量を患者に投与することを含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、単一の二次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２またはそれより多い（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれより多い）二次用量が、患者に投与される。同様に、ある特定の実施形態では、単一の三次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２またはそれより多い（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれより多い）三次用量が、患者に投与される。
複数の二次用量を伴う実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各二次用量は、直前の用量の１から２週間後に患者に投与することができる。同様に、複数の三次用量を伴う実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量は、直前の用量の２から４週間後に患者に投与することができる。あるいは、二次および／または三次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの過程にわたって変動し得る。投与頻度は、医師によって、臨床検査後に個々の患者の必要に応じて処置の過程の間に調整することもできる。
抗体の診断的使用
本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体を使用して、例えば、診断目的で、試料におけるＢｅｔ ｖ １を検出および／または測定することもできる。Ｂｅｔ ｖ １が原因であると考えられるアレルギー応答の確認が、本発明の抗体のうちの任意の１つまたは複数の使用により、いずれかのＢｅｔ ｖ １の存在を測定することによってなされ得ることが想定される。Ｂｅｔ ｖ １の例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られた試料を本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体と接触させることを含むことができ、ここで、抗Ｂｅｔ ｖ １抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されているか、または患者試料からＢｅｔ ｖ １タンパク質を選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用される。あるいは、未標識の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体は、それ自体が検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせて診断適用において使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓもしくは１２５Ｉなどの放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンなどの蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であってもよい。試料におけるＢｅｔ ｖ １を検出または測定するのに使用することができる具体的な例示的アッセイとして、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
本発明によるＢｅｔ ｖ １診断アッセイで使用することができる試料は、正常または病態における、検出可能な量のＢｅｔ ｖ １タンパク質、またはその断片を含有する、患者から得ることができる任意の組織または流体試料を含む。一般的に、健康／非アレルギー患者（例えば、Ｂｅｔ ｖ １の存在に関連する感受性に苦しんでいない患者）から得られる特定の試料におけるＢｅｔ ｖ １のレベルを測定して、Ｂｅｔ ｖ １のベースライン、または標準レベルを最初に確立する。次いで、Ｂｅｔ ｖ １のこのベースラインレベルは、カバノキ花粉におけるＢｅｔ ｖ １に対する感受性またはこのような状態に関連する症状を有すると疑われる個体から得られる試料において測定されたＢｅｔ ｖ １のレベルに対して比較することができる。
本発明は、特に、いくつかの実施形態を参照して示され、説明されてきたが、形態および詳細における変更が、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、本明細書に開示された種々の実施形態に対してなされる場合があり、本明細書に開示された種々の実施形態は特許請求の範囲の範囲を限定するものとして働くことを意図するものではないことが、当業者に理解されよう。
次の実施例は、本発明の方法および組成物を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供できるように示されており、本発明者らが自身の発明としてみなすものの範囲を制限することを意図しない。使用された数（例えば、量、温度など）に対する正確度を確保するよう努力したが、一部の実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段示されていなければ、部は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧またはその近辺である。
（実施例１）
Ｂｅｔ ｖ １に対するヒト抗体の生成
次のうちいずれか１つを含む免疫原を使用して、Ｂｅｔ ｖ １に対する抗体を生成することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、市販のものを購入しても（例えば、Ｓｔａｌｌｅｒｇｅｎｅｓ Ｇｒｅｅｒ、Ｌｅｎｏｉｒ、ＮＣから、番号ＸＰ５２７Ｄ３Ａ２５）、もしくはカバノキ花粉（例えば、Butersら（２０１２年）、Atomospheric Environment ５５巻：４９６〜５０５頁を参照のこと）から単離してもよく、または組換えにより産生してもよい（Ｂｅｔ ｖ １の全長アミノ酸配列についてのＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ１５４９４を参照のこと）全長の天然Ｂｅｔ ｖ １（ｎＢｅｔ ｖ １）などの一次免疫原、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質の断片で免疫し、続いて二次免疫原で、または天然タンパク質の免疫原的に活性な断片で免疫したマウスから得られる。種々の構築物は、当業者に公知のＢｅｔ ｖ １タンパク質のポーションを使用して調製することができる。これらの構築物を単独で、または種々の組合せで使用して、ｉｎ ｖｉｖｏで抗体応答を誘発することができる。例えば、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、および３１５に例示される構築物などの組換えＢｅｔ ｖ １構築物、またはこれらの断片を免疫原として使用してもよい。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、天然Ｂｅｔ ｖ １の生物学的に活性なおよび／もしくは免疫原性の断片、またはその活性な断片をコードするＤＮＡなどの一次免疫原で免疫されたマウスから得られる。断片は、Ｂｅｔ ｖ １のＮ末端またはＣ末端ポーションに由来してもよい。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の試験で使用する組換えＢｅｔ ｖ １タンパク質構築物は、以下に示すようなＣ末端タグ（ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグ）を含んでもよい。他の実施形態では、組換えＢｅｔ ｖ １タンパク質構築物は、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４のアミノ酸Ｇ２からＮ１６０を含む。一部の実施形態では、構築物は、Ｓ８５Ａ置換を含む。タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現した。ＣＨＯ細胞における発現を促進するために使用した外因性シグナル配列は、配列表に含まれない。
ある特定の実施形態では、免疫原は、以下のうちのいずれか１つまたは複数を含むＢｅｔ ｖ １断片または融合タンパク質であってもよい：ｉ）Ｂｅｔ ｖ １のアミノ酸残基２３〜４３（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４および配列番号３０７も参照のこと）；ｉｉ）Ｂｅｔ ｖ １のアミノ酸残基４４〜５６（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４および配列番号３０８も参照のこと）；ｉｉｉ）Ｂｅｔ ｖ １のアミノ酸残基２〜１９（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４および配列番号３０９も参照のこと）；ｉｖ）Ｂｅｔ ｖ １のアミノ酸残基５７〜７０（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４および配列番号３１０も参照のこと）；ｖ）Ｂｅｔ ｖ １のアミノ酸残基８１〜８９（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４および配列番号３１１も参照のこと）およびｖｉ）Ｂｅｔ ｖ １のアミノ酸残基８１〜９６（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４および配列番号３１５も参照のこと）。
ある特定の実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １に特異的に結合する抗体は、上述の領域の断片、または本明細書に記載の領域のＮ末端もしくはＣ末端のいずれか一方もしくは両方から指定の領域を約５から約２０アミノ酸残基を超えて延長するペプチドを使用して調製することができる。ある特定の実施形態では、Ｂｅｔ ｖ １特異的抗体の調製において、上述の領域またはその断片の任意の組合せを使用してもよい。ある特定の実施形態では、単一特異的、二重特異的、または多重特異的抗体を調製するために、Ｂｅｔ ｖ １の上述の領域のうちのいずれか１つもしくは複数、またはその断片を使用することができる。
上に記す通り、免疫原として使用された全長タンパク質、またはその断片を、ヒト免疫グロブリン重およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、免疫応答を刺激するためのアジュバントと共に直接投与した。
抗Ｂｅｔ ｖ １抗体は、米国特許第７，５８２，２９８号に記載されるように、骨髄腫細胞への融合なしに、抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。この方法を使用して、いくつかの完全ヒト抗Ｂｅｔ ｖ １抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを保有する抗体）を得た；この様式で生成した例示的抗体を以下に示した：Ｈ４Ｈ１６９４３Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９４６Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９５０Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９６０Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９６７Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９７１Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９７９Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９８７Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９９１Ｐ、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７００１Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０１５Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０２７Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０２８Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３１Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３３Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０４５Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０６７Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２。
この実施例の方法に従って生成した例示的抗体の生物学的特性を、以下に示す実施例で詳細に説明する。
（実施例２）
重鎖および軽鎖アミノ酸配列
表１ａは、選択した抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の重鎖および軽鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を与える。表１ｂは、選択した抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の重鎖および軽鎖可変領域およびＣＤＲの核酸配列識別子を与える。
抗体は、典型的には、本明細書において次の命名法に従って参照される：Ｆｃ接頭語（例えば、「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ２Ｍ」など）、続いて数的識別子（例えば、表１に示す通り「１６９４３」、「１７００１」など）、続いて「Ｐ」または「Ｐ２」接尾語。本明細書で使用される抗体の名称におけるＨ４ＨおよびＨ２Ｍ接頭語は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。よって、この命名法に従って、「Ｈ４Ｈ」は、抗体がヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有することを示すので（すべての可変領域は、抗体の名称における最初の「Ｈ」で示すように完全ヒトである）、抗体は、本明細書において、例えば、「Ｈ４Ｈ１６９４３Ｐ」などとして参照され得る。当業者が十分に理解するように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができ（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することができる、など）、いずれの場合においても、表１に示す数的識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、同じままであり、抗原に対する結合特性は、Ｆｃドメインの性質に関わらず、同一であるかまたは実質的に類似することが予測される。
表１ｃは、選択した抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の全長重鎖および軽鎖のアミノ酸配列識別子を与える。
（実施例３）
表面プラズモン共鳴により決定されるＢｅｔ ｖ １への抗体結合
Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００機器においてリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサー（ＳＰＲ−Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用して、精製した抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体への天然Ｂｅｔ ｖ １の結合に関する平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。すべての結合試験は、２５℃および３７℃で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４の（ＨＢＳ−ＥＴ）ランニング緩衝液中で実施した。Ｂｉａｃｏｒｅ ＣＭ５センサー表面を、最初に、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、番号ＢＲ−１００８−３９）でアミンカップリングすることによって誘導体化して、次に、抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体を捕捉した。異なる濃度の、天然Ｂｅｔ ｖ １（Ｉｎｄｏｏｒ、カタログ番号ＮＡ−ＢＶ１−１）またはＣＨＯで産生された、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有しＳ８５Ａ変異を含有する組換えＢｅｔ ｖ １（（変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨ；配列番号３１２）試薬）を、ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中（１００ｎＭ〜１．２３ｎＭ；３倍連続希釈）で最初に調製し、抗ヒトＦｃ捕捉された抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体表面の上に、３０μＬ／分の流速で４分間注入し、一方、Ｂｅｔ ｖ １試薬に結合したモノクローナル抗体の解離を、ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中で１０分間モニタリングした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用して、マストランスポートリミテーションを有する１：１結合モデルへとリアルタイム結合センサーグラムを適合させることにより、会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。次の通り、動力学的速度定数から結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を計算した：
２５℃および３７℃での本発明の異なる抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体に対する天然Ｂｅｔ ｖ １および変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨの結合キネティクスパラメータを表２から表５に示す。
２５℃では、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のすべてが、表２に示すように、０．６６ｎＭから１３．５ｎＭの範囲のＫＤ値で、天然Ｂｅｔ ｖ １に結合した。３７℃では、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のすべてが、表３に示すように、１．５９ｎＭから２７．９ｎＭの範囲のＫＤ値で、天然Ｂｅｔ ｖ １に結合した。２５℃と３７℃の両方で、アイソタイプ対照抗体は、天然Ｂｅｔ ｖ １に対するいずれの測定可能な結合も示さなかった。
２５℃と３７℃の両方で、本発明の２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のうちの３つは、変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨに結合しなかった。２５℃では、２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のうちの１７個が、表４に示すように、３４８ｐＭから４３．８ｎＭの範囲のＫＤ値で、変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨに結合した。３７℃では、本発明の２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のうちの１７個が、表５に示すように、６５５ｐＭから１０６ｎＭの範囲のＫＤ値で、変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨに結合した。２５℃と３７℃の両方で、アイソタイプ対照抗体は、変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨに対するいずれの測定可能な結合も示さなかった。
（実施例４）
表面プラズモン共鳴により決定される関連するアレルゲンへの抗体結合
Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００機器においてリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサー（ＳＰＲ−Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用して、精製した抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体への異なる関連するアレルゲンの結合に関する平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。すべての結合試験は、２５℃で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４の（ＨＢＳ−ＥＴ）ランニング緩衝液中で実施した。Ｂｉａｃｏｒｅ ＣＭ５センサー表面を、最初に、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、番号ＢＲ−１００８−３９）でアミンカップリングすることによって誘導体化して、抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体を捕捉した。結合試験を以下の関連するアレルゲンに関して実施した：ハンノキ（Ａｌｎ ｇ １、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１０４１４８４）、リンゴ（Ｍａｌ ｄ １、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１２２４９１９）、ニンジン（Ｄａｕ ｃ １．２、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１２１２９２０）、セロリ（Ａｐｉ ｇ １、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１１７１３７６）、セロリ（Ａｐｉ ｇ ２、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１０４７８８０）、セイヨウシデ（Ｃａｒ ｂ １アイソフォーム１Ａおよび１Ｂ、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１２０００１８）、セイヨウシデ（Ｃａｒ ｂ １アイソフォーム２、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１０４３９４０）、ハシバミ（Ｃｏｒ Ａ １、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ５３０４６００）、およびホワイトオーク（Ｑｕｅ ａ １、ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ、カタログ番号ＭＢＳ１２５８８２２）。異なる濃度の関連するアレルゲンを、ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中（１００ｎＭ〜６．２５ｎＭ；４倍連続希釈）で調製し、次いで、抗ヒトＦｃ捕捉された抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体表面の上に、３０μＬ／分の流速で３分間注入し、一方、アレルゲンに結合したモノクローナル抗体の解離を、ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中で８分間モニタリングした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用して、マストランスポートリミテーションを有する１：１結合モデルへとリアルタイム結合センサーグラムを適合させることにより、会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。次の通り、動力学的速度定数から結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を計算した：
２５℃での本発明の異なる抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体に対する関連するアレルゲンの結合キネティクスパラメータを表６から表１１に示す。
表６に示すように、２５℃では、本発明の２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体のうちの９つが、１．０３ｎＭから１７５ｎＭの範囲のＫＤ値で、Ａｌｎ ｇ １への測定可能な結合を示した。他の１１個の抗体は、試験した条件下で、Ａｌｎ ｇ １へのいずれの測定可能な結合も示さなかった。
表７に示すように、２５℃では、本発明の２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体のうちの２つが、２９．８ｎＭおよび４９４ｎＭの範囲のＫＤ値で、Ｍａｌ ｄ １への測定可能な結合を示した。他の１８個の抗体は、試験した条件下で、Ｍａｌ ｄ １へのいずれの測定可能な結合も示さなかった。
表８に示すように、２５℃では、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体のうちの１つが、１６７ｎＭのＫＤ値で、Ａｐｉ ｇ １への測定可能な結合を示した。他の１９個の抗体は、試験した条件下で、Ａｐｉ ｇ １へのいずれの測定可能な結合も示さなかった。
表９に示すように、２５℃では、本発明の２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体のうちの８つが、１．２ｎＭから３８０ｎＭの範囲のＫＤ値で、Ｃａｒ ｂ １アイソフォーム１Ａおよび１Ｂへの測定可能な結合を示した。他の１２個の抗体は、試験した条件下で、Ｃａｒ ｂ １アイソフォーム１Ａおよび１Ｂへのいずれの測定可能な結合も示さなかった。
表１０に示すように、２５℃では、本発明の２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体のうちの１４個が、３３５ｐＭから５６４ｎＭの範囲のＫＤ値で、Ｃａｒ ｂ １アイソフォーム２への測定可能な結合を示した。他の６個の抗体は、試験した条件下で、Ｃａｒ ｂ １アイソフォーム２へのいずれの測定可能な結合も示さなかった。
表１１に示すように、２５℃では、本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の１つが、３９６ｎＭのＫＤ値で、Ｃｏｒ Ａ １への測定可能な結合を示した。他の１９個の抗体は、試験した条件下で、Ｃｏｒ Ａ １へのいずれの測定可能な結合も示さなかった。
本発明の抗体はいずれも、試験した条件下で、Ｄａｕ ｃ １．２、Ａｐｉ ｇ ２、またはＱｕｅ ａ １への測定可能な結合を示さなかった（データは示さず）。アイソタイプ対照抗体は、試験したアレルゲンのいずれに対してもいずれの測定可能な結合も示さなかった。
（実施例５）
抗Ｂｅｔ ｖ １ ＩｇＧ抗体によるアレルゲン特異的ＩｇＥへのＢｅｔ ｖ １の結合の遮断
本発明の単一の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体または本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの、アレルギーのヒトドナーの血漿／血清由来のプレートに捕捉させたＩｇＥへのＢｅｔ ｖ １の結合を遮断する能力を、ＥＬＩＳＡを使用して決定した。抗体は、単独またはポリクローナルミックスにおいて検査した。アッセイのために、マイクロタイタープレートを、４℃にて、Ｃ末端マウスＦｃタグを有するように産生したヒトＦｃεＲ１α（ＩｇＥに対する高親和性受容体）細胞外ドメインタンパク質（ｈＦｃεＲ１α−ｍＦｃ；配列番号３１３）で終夜コーティングした。次いで、プレートを、室温（ＲＴ）で１時間、０．５％のＢＳＡ（ｗ／ｖ）でブロッキングした。アレルギードナー由来の血漿を希釈し、次いで、総ＩｇＥを、受容体をコーティングした表面に対して捕捉した。一定量の０．１ｎＭのビオチン標識した天然Ｂｅｔ ｖ １（Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、番号ＮＡ−ＢＶ１−１）を、１μｇ／ｍＬの単一濃度の、または１０μｇ／ｍＬまたは１μｇ／ｍＬの各抗体から出発する連続希釈の、抗Ｂｅｔ ｖ １抗体と予備混合し、ＲＴで１時間インキュベートして、Ｂｅｔ ｖ １抗体と相互作用させて平衡に到達させた。次いで、抗体−Ｂｅｔ ｖ １混合物を、ＩｇＥをコーティングしたプレートに１時間添加した。次に、プレートを洗浄し、プレートに結合した天然Ｂｅｔ ｖ １の量を、１：１０，０００希釈の西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートさせたストレプトアビジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、番号Ｎ２００／ＱＪ２２３０９１）を使用して検出し、ＲＴで１時間インキュベートした。次いで、プレートを、上記のＥＬＩＳＡプロトコールの各ステップ間に、ＰＢＳ−Ｔで洗浄した。比色反応を生じるために、ＴＭＢ／Ｈ２Ｏ２基質（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｒｅａｇｅｎｔ Ａ 番号５１−２６０２ＫＣ＋試薬Ｂ、番号５１−２６０７ＫＣ）をプレートに添加し、ＲＴで２０分間インキュベートした。反応を、２Ｎの硫酸（Ｈ２ＳＯ４；ＶＷＲ、番号ＢＤＨ３５００−１）を使用して停止した。次に、吸光度を、４５０ｎｍの分光光度計（Ｖｉｃｔｏｒ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。パーセント遮断を、以下に記載した各アッセイで使用した最も高い抗体濃度を使用して計算した。
２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体を、記載したＥＬＩＳＡを使用して、アレルギーのヒトドナーの血漿由来のプレートに捕捉させたＩｇＥに対するＢｅｔ ｖ １の結合を遮断する抗体の能力に関して、単一の抗体として検査した。個々のモノクローナル抗体は、８．５〜６４％まで、Ｂｅｔ ｖ １に対するＩｇＥ結合を部分的に遮断することができた（ＩｇＥのポリクローナル性に下線を付す）。７つの抗体は、表１２に示すように、検査した最も高い抗体濃度（１０μｇ／ｍＬ）で３６〜６４％の範囲の遮断を示した。
４つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６９８７Ｐ、およびＨ４Ｈ１６９９２Ｐを、シングルポイント遮断アッセイで検査した。Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２およびＨ４Ｈ１６９９２Ｐの組合せは、１０名のＩｇＥドナーのうちの７名で、９０％を上回る遮断を示した。３つおよび４つのモノクローナル抗体の組合せは同様の結果を示し、表１３に示すように、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２およびＨ４Ｈ１６９９２Ｐの２つの抗体の組合せと比較して、さらなる遮断効果を少しも追加していないようであった。
次に、４つのモノクローナル抗体、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６９８７Ｐ、およびＨ４Ｈ１６９９２Ｐを、３名のドナーのＩｇＥ試料を用いる用量応答遮断アッセイにおいて、単一ならびに２、３、および４つのモノクローナル抗体の組合せとして検査した。結果は、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２およびＨ４Ｈ１６９９２Ｐの２つの抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の組合せが、表１４に示すように、９０％を上回って、アレルゲン特異的ＩｇＥに対するＢｅｔ ｖ １の結合を遮断し、３名のドナーのベースラインに近いことを示した。試験した３および４つの抗体の組合せは、遮断活性について同様の大きさと効力を示した。陽性対照として、精製したマウス抗Ｂｅｔ ｖ １ポリクローナルＩｇＧは、＞９０％の遮断を示した。
（実施例６）
水素重水素（Ｈ／Ｄ）交換によるＢｅｔ ｖ １に対する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体結合のエピトープマッピング
Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、およびＨ４Ｈ１６９８７Ｐが相互作用するＢｅｔ ｖ １のアミノ酸残基（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ１５４９４のアミノ酸Ｍ１−Ｎ１６０）を決定するために、質量分析試験によるＨ／Ｄ交換エピトープマッピングを実施した。Ｈ／Ｄ交換法の一般的説明は、例えば、Ehring（１９９９年） Analytical Biochemistry ２６７巻（２号）：２５２〜２５９頁；ならびにEngenおよびSmith（２００１年） Anal. Chem. ７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁に示される。
ＨＤＸ−ＭＳ実験を、重水素標識のためのＬｅａｐｔｅｃ ＨＤＸ ＰＡＬシステム、試料の消化およびローディングのためのＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｍ−Ｃｌａｓｓ（Ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｓｏｌｖｅｎｔ ｍａｎａｇｅｒ）、分析カラム勾配のためのＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｍ−Ｃｌａｓｓ（μＢｉｎａｒｙ ｓｏｌｖｅｎｔ ｍａｎａｇｅｒ）、および消化ペプチド質量測定のためのＳｙｎａｐｔ Ｇ２−Ｓｉ質量分析計からなる、統合Ｗａｔｅｒｓ ＨＤＸ／ＭＳプラットフォームで実施した。
標識溶液を、ｐＤ７．０（ｐＨ６．６と等しい）のＤ２Ｏ中１０ｍＭのＰＢＳ緩衝液中で調製した。重水素標識のために、３．８μＬの天然Ｂｅｔ ｖ １（Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ＮＡ−ＢＶ１−１、２８ｐｍｏｌ／μＬ）、各抗体と予備混合したＢｅｔ ｖ １、または４つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体すべての混合物を１：１のモル比で、５６．２μＬのＤ２Ｏ標識溶液と、種々の時点（例えば、重水素化されていない対照＝０秒、１分、５分、１０分および２０分間標識）にわたりインキュベートした。重水素化を、５０μＬの試料を予冷した１００ｍＭのリン酸緩衝液中の０．２ＭのＴＣＥＰ、６Ｍの塩化グアニジン（guanidine chloride）、ｐＨ２．５（クエンチ緩衝液）５０μＬに移すことによってクエンチし、混合した試料を１．０℃で２分間インキュベートした。次いで、クエンチした試料をオンラインペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化のためにＷａｔｅｒｓ ＨＤＸ Ｍａｎａｇｅｒ中に注入した。消化したペプチドを、０℃で、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ、２．１×５ｍｍ ＶａｎＧｕａｒｄプレカラム上にトラップし、分析カラムＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ、１．０×５０ｍｍに５％〜４０％Ｂの９分の勾配分離で溶出した（移動相Ａ：水中０．１％のギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％のギ酸）。質量分析計を、コーン電圧３７Ｖ、走査時間０．５秒、および質量／電荷範囲５０〜１７００Ｔｈに設定した。
Ｂｅｔ ｖ １由来のペプチドの同定のために、重水素化されていない試料由来のＬＣ−ＭＳＥデータを処理し、Ｗａｔｅｒｓ ＰｒｏｔｅｉｎＬｙｎｘ Ｇｌｏｂａｌ Ｓｅｒｖｅｒ（ＰＬＧＳ）ソフトウェアにより、Ｂｅｔ ｖ １とその無作為化された配列を含むデータベースに対して検索した。同定したペプチドをＤｙｎａｍＸソフトウェアにインポートし、２つの基準：１）アミノ酸当たりの最小産物：０．３、および２）反復ファイル閾値：３によってフィルタリングした。次いで、ＤｙｎａｍＸソフトウェアによって、各時間の３つの反復に関する複数時点にわたる保持時間と高い質量精度（＜１０ｐｐｍ）に基づき、各ペプチドの重水素取り込みを自動で決定した。
ＭＳＥデータ取得とカップリングしたオンラインペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラムを使用して、Ｂｅｔ ｖ １由来の全３６個のペプチドを、抗体の非存在下または存在下で、再現可能に同定し、９１．２％の配列カバー率を表した。Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６９８７Ｐおよび４つの抗体の組合せに結合させた場合に、重水素取り込みが有意に低下したペプチドを、図１から４および５にそれぞれ示す。記録したペプチドの質量は、抗Ｂｅｔ ｖ １抗体（複数可）との複合体におけるＢｅｔ ｖ １の３つの反復に由来する質量中心ＭＨ＋の質量の平均値に対応する。
図１に示すように、アミノ酸２３〜４３（ＦＩＬＤＧＤＮＬＦＰＫＶＡＰＱＡＩＳＳＶＥ、配列番号３０７）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐの存在下で、より遅い重水素化速度を有した。
図２に示すように、アミノ酸４４〜５６（ＮＩＥＧＮＧＧＰＧＴＩＫＫ、配列番号３０８）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐの存在下で、より遅い重水素化速度を有した。
図３に示すように、アミノ酸２〜１９（ＧＶＦＮＹＥＴＥＴＴＳＶＩＰＡＡＲＬ、配列番号３０９）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２の存在下で、より遅い重水素化速度を有した。
図４に示すように、アミノ酸５７〜７０（ＩＳＦＰＥＧＦＰＦＫＹＶＫＤ、配列番号３１０）および８１〜９６（ＫＹＮＹＳＶＩＥＧＧＰＩＧＤＴＬ、配列番号３１５）に対応するペプチドは、Ｈ４Ｈ１６９８７Ｐの存在下で、より遅い重水素化速度を有した。
図５に示すように、アミノ酸２３〜４３（ＦＩＬＤＧＤＮＬＦＰＫＶＡＰＱＡＩＳＳＶＥ、配列番号３０７）、アミノ酸４４〜５６（ＮＩＥＧＮＧＧＰＧＴＩＫＫ、配列番号３０８）、２〜１９（ＧＶＦＮＹＥＴＥＴＴＳＶＩＰＡＡＲＬ、配列番号３０９）、アミノ酸５７〜７０（ＩＳＦＰＥＧＦＰＦＫＹＶＫＤ、配列番号３１０）および８１〜９６（ＫＹＮＹＳＶＩＥＧＧＰＩＧＤＴＬ、配列番号３１５）に対応するペプチドは、４つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せ（Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１６９８７Ｐ）の存在下で、より遅い重水素化速度を有した。
さらに、中程度のレベルの保護を、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１６９８７Ｐの存在下で、ペプチド２３〜４３に関して観察し、この領域がこれらのモノクローナル抗体に対する第２のエピトープを表し得ることを確認した。
（実施例７）
受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおける抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の効果
アレルゲンに誘導されるマスト細胞脱顆粒を遮断するための本発明の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の有効性を決定するために、受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）のｉｎ ｖｉｖｏモデルを使用した。このモデルは、アレルゲン特異的抗血清の皮膚の局所区域への皮内注射と、それに続く、色素と共に抗原の静脈内注射を伴う。アレルギー反応は毛細血管拡張を引き起こし、感作部位の血管透過性を増加させ、この部位における色素の優先的蓄積をもたらす。色素を組織から抽出し、分光測定で定量することができる。次いで、検査抗血清で感作された組織への色素の血管外漏出を、関連しない抗血清で感作された組織への血管外漏出と比較することができる。
抗血清を、このアッセイで使用するために、０日目に、１倍リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、５μｇの天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質（Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、番号ＮＡ−ＢＶ１−１）でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫することによって生成した。１週間後（７日目）に、感作されたマウスを、１倍ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、５μｇの天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質で追加免疫した。追加免疫の２週間後の、２１、２４および２８日目に、マウスを、２０μＬのＰＢＳ中、０．５μｇの天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質による鼻腔内気道負荷に供した。次いで、３１日目にマウスを屠殺し、血清を採取した。単離された抗血清における総ＩｇＥ濃度を、ＯｐｔＥＩＡ（商標）ＥＬＩＳＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、番号５５５２４８）を使用し、製造業者の指示に従って決定した。Ｂｅｔ ｖ １抗血清の最終濃度は、ＰＢＳ中のＩｇＥが２６００ｎｇ／ｍＬとなるまで希釈した。
このアッセイにおいて陰性対照として使用した抗血清を、０日目に、ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、ネコの毛抽出物から精製された５μｇの天然Ｆｅｌ ｄ １タンパク質（Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、番号ＬＴＮ−ＦＤ１−１）でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫することによって生成した。１４日および２１日目に、マウスを、ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、５μｇのＦｅｌ ｄ １タンパク質で追加免疫した。最後の追加免疫の１週間後（２８日目）に、マウスを屠殺し、血清を採取した。単離された抗血清における総ＩｇＥ濃度を、ＯｐｔＥＩＡ（商標）ＥＬＩＳＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、番号５５５２４８）を使用し、製造業者の指示に従って決定した。抗血清の最終濃度は、ＰＢＳ中のＩｇＥが２５００ｎｇ／ｍＬとなるまで希釈した。
ＰＣＡアッセイでは、Ｂａｌｂ／ｃマウスの群（実験ごとにｎ≧５）に、最初に、アイソタイプ対照抗体、抗Ｂｅｔ ｖ １抗体、または抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せのいずれかを、１ｍｇ／ｋｇの用量（総抗体用量）で皮下注射した。抗体投与の３日後に、１．５ｎｇのＢｅｔ ｖ １抗血清または３ｎｇの陰性対照抗血清のいずれかを１０μＬ、各群のマウスの右および左耳に、それぞれ注射した。アレルゲン特異的抗血清の局所投与の２４時間後に、０．５％（ｗ／ｖ）のＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、番号Ｅ２１２９）を含有するＰＢＳに溶解した、天然Ｂｅｔ ｖ １溶液１μｇ／ｍＬを、静脈内注射（マウス当たり１００μＬ）によってマウスに負荷した。抗原負荷の１時間後に、マウスを屠殺し、それらの耳を切除し、１ｍＬのホルムアミド中に置き、次に、５０〜５６℃で３日間インキュベートして、Ｅｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅを抽出した。次いで、耳組織をホルムアミドから取り出し、ぬぐいとって過剰な液体を除去し、秤量した。各ホルムアミド抽出物の２００マイクロリットルのアリコートを、二連で９６ウェルプレートに移し、それらの吸光度を６２０ｎｍで測定した。測定した光学密度を、標準曲線を使用してＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅ濃度に変換し、組織１ｍｇ当たりのＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅ（ｎｇ）として表した。平均値（mean value）±標準偏差を、各群に関して表１５に示す。アイソタイプ対照と比較した平均差を、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰｒｉｓｍのＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較検定を使用して計算した。
表１５に示すように、第１の試験では、単一の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、アイソタイプ対照と比較して、色素の血管外漏出の有意な低下を示さなかった。対照的に試験２では、本発明の２つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せ（Ｈ４Ｈ１６９９２ＰおよびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２）ならびに本発明の４つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せ（Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２、およびＨ４Ｈ１６９８７Ｐ）が、アイソタイプ対照処置と比較して、色素の血管外漏出の有意な低下を示し、それぞれ、３５．２６および３６．４９ｎｇ／ｍｇ低下した。同様に、試験３では、本発明の２つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せ（Ｈ４Ｈ１６９９２ＰおよびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２）は、再度、アイソタイプ対照処置と比較して、色素の血管外漏出の有意な低下を示し、４１．０９ｎｇ／ｍｇ低下した。試験１で以前に示したように、試験３では、単一の抗Ｂｅｔ ｖ １抗体、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、アイソタイプ対照と比較して、色素の血管外漏出の有意な低下を示さなかった。しかしながら、別の単一の抗体、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐは、アイソタイプ対照と比較して、色素の血管外漏出の有意な低下を示し、２５．８６ｎｇ／ｍｇ低下した。行った試験から、単一の抗体Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２＋Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐの２つの抗体の組合せ、およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２＋Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ＋Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２＋Ｈ４Ｈ１６９８７Ｐの４つの抗体の組合せは、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの事後検定による二元配置ＡＮＯＶＡによって決定された場合、受身皮膚アナフィラキシーのｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて、アイソタイプ対照と比較して、色素の血管外漏出の有意な低下によって示されるように、マスト細胞脱顆粒を遮断することができた。Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２抗体単独では、行った試験のうちの２つにおいて、アイソタイプと比較して、色素の血管外漏出の増加によって示されるように、マスト細胞脱顆粒を遮断することができなかった。１群当たりに使用したマウスの数（ｎ）は、表の括弧内に示す。
（実施例８）
受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおける３つの異なるカバノキ花粉抽出物に対する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の効果
本発明において提供される抗Ｂｅｔ ｖ １抗体を、受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて、アレルゲンに誘導されるマスト細胞脱顆粒を遮断する有効性について検査した。アレルゲン特異的抗血清を皮膚の局所区域へと経皮的に注射し、その後、色素と共に抗原を静脈内注射する。アレルギー反応は毛細血管拡張を引き起こし、感作部位の血管透過性を増加させ、この部位における色素の優先的蓄積をもたらす。色素を組織から抽出し、分光測定で定量することができる。次いで、検査抗血清で感作された組織への色素の血管外漏出を、関連しない抗血清で感作された組織への血管外漏出と比較することができる。
天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａ（Ｂｅｔｕｌａ ｖｅｒｒｕｃｏｓａとしても公知）のカバノキ花粉抽出物（ＢＰＥ）、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥに対する抗血清を、このアッセイで使用するために、０日目に、１倍リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１ｍｇ／ｍｌミョウバン溶液における、５μｇの天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質（Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＮＡ−ＢＶ１−１ ロット３６１６４）または５μｇのＢＰＥ；ｐｅｎｄｕｌａ（Ｓｔａｌｌａｒｇｅｎｅｓ Ｇｒｅｅｒ、カタログ番号ＸＰ５２７Ｄ３Ａ２５、ロット番号２７７３２９）、ｎｉｇｒａ（Ｓｔａｌｌａｒｇｅｎｅｓ Ｇｒｅｅｒ カタログ番号ＸＰ７９Ｄ３Ａ２５、ロット番号２８５０７７）またはｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａ（Ｓｔａｌｌａｒｇｅｎｅｓ Ｇｒｅｅｒ カタログ番号ＸＰ８０Ｄ３Ａ２．５、ロット番号２７３６２２）でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫することによって生成した。１週間後（７日目）に、感作されたマウスを、１倍ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、５μｇの天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質または５μｇの各ＢＰＥ（ｐｅｎｄｕｌａ、ｎｉｇｒａ、またはｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａ）で追加免疫した。追加免疫の２週間後の、２１、２４および２８日目に、マウスを、２０μＬの１倍ＰＢＳ中、０．５μｇの天然Ｂｅｔ ｖ １タンパク質または０．５μｇの各カバノキ花粉抽出物による鼻腔内気道負荷に供した。次いで、３１日目にマウスを屠殺し、血清を採取した。単離された抗血清ロットにおける総ＩｇＥ濃度を、ＯｐｔＥＩＡ（商標）ＥＬＩＳＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、番号５５５２４８）を使用し、製造業者の指示に従って決定した。Ｂｅｔ ｖ １抗血清の最終濃度は、１倍ＰＢＳ中のＩｇＥが２５００ｎｇ／ｍＬとなるまで希釈し、カバノキ花粉抽出物の抗血清ロットの最終濃度は、ｐｅｎｄｕｌａでは３０００ｎｇ／ｍＬ、ｎｉｇｒａでは１９００ｎｇ／ｍＬおよびｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａでは３７００ｎｇ／ｍＬとなるまで希釈した。
このアッセイにおいて陰性対照として使用した抗血清を、１倍ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、ネコの毛抽出物から精製された５μｇの天然Ｆｅｌ ｄ １タンパク質（Ｉｎｄｏｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＬＴＮ−ＦＤ１−１、ロット番号３６０９９）でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫することによって生成した。１４日および２１日目に、マウスを、１倍ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン溶液における、５μｇのＦｅｌ ｄ １タンパク質で追加免疫した。最後の追加免疫の１週間後（２８日目）に、マウスを屠殺し、血清を採取した。単離された抗血清における総ＩｇＥ濃度を、ＯｐｔＥＩＡ（商標）ＥＬＩＳＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、番号５５５２４８）を使用し、製造業者の指示に従って決定した。抗血清の最終濃度は、ＰＢＳ中のＩｇＥが４８００ｎｇ／ｍＬとなるまで希釈した。
ＰＣＡアッセイでは、Ｂａｌｂ／ｃマウスの群（実験ごとにｎ≧４、３回繰り返し）に、最初に、アイソタイプ対照抗体または２つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せのいずれかを、１ｍｇ／ｋｇの用量（総抗体用量）で皮下注射した。抗体投与の３日後に、１ｎｇのＢｅｔ ｖ １抗血清、２５ｎｇのＢｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａの抗血清、２５ｎｇのＢｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａの抗血清、または２５ｎｇのＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａの抗血清のいずれかを１０μＬ、割り当てた群のマウスの右耳に注射した。左耳には、１ｎｇまたは２５ｎｇのＦｅｌ ｄ １（陰性対照）を投与し、対応する右耳の血清濃度に一致させた。アレルゲン特異的抗血清の局所投与の２４時間後に、０．５％（ｗ／ｖ）のＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、番号Ｅ２１２９）を含有する１倍ＰＢＳに溶解した、天然Ｂｅｔ ｖ １（カタログ番号ＮＡ−ＢＶ１−１、ロット３６１６４）溶液を１μｇ／ｍＬまたは各ＢＰＥ（Ｓｔａｌｌａｒｇｅｎｅｓ Ｇｒｅｅｒ、カタログ番号ＸＰ５２７Ｄ３Ａ２５、ロット番号２７７３２９、カタログ番号ＸＰ７９Ｄ３Ａ２５、ロット番号２８５０７７、およびカタログ番号ＸＰ８０Ｄ３Ａ２．５、ロット番号２７３６２２）溶液を１μｇ／ｍＬ、静脈内注射（マウス当たり１００μＬ）によってマウスに負荷した。抗原負荷の１時間後に、マウスを屠殺し、耳を切除し、１ｍＬのホルムアミド中に置き、次に、５０℃で３日間インキュベートして、Ｅｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅを抽出した。次いで、耳組織をホルムアミドから取り出し、ぬぐいとって過剰な液体を除去し、秤量した。各ホルムアミド抽出物の２００マイクロリットルのアリコートを、二連で９６ウェルプレートに移した。得られた上清の吸光度を６２０ｎｍで測定した。測定した光学密度を、標準曲線を使用してＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅ濃度に変換した、そして、耳組織１ｍｇ当たりのＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅ（ｎｇ）として表す。平均値±標準偏差を、各群に関して表１に示す。アイソタイプ対照と比較した平均差を、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰｒｉｓｍのＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較検定を使用して計算した。
表１６は、検査したすべての群のアイソタイプ対照と比較した場合に、色素の血管外漏出の有意な低下によって示される、２つの抗Ｂｅｔ ｖ １抗体Ｈ４Ｈ１６９９２ＰおよびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２の組合せの有効性を示す。示されるように、２つの抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の組合せＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２／Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐは、アイソタイプ対照と比較して、感作とその次の天然Ｂｅｔ ｖ １による負荷に対する受身皮膚ｉｎ ｖｉｖｏモデルにおけるマスト細胞脱顆粒を遮断し、８８．３４の色素の血管外漏出の有意な低下を示す。同様に、色素の血管外漏出の低下は、各アイソタイプ対照群と比較した場合、３つのカバノキ花粉抽出物すべてに関するＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２／Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ処置群でも観察され、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａでは６２．５２、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａでは７１．１９、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａでは９１．４７の統計的に有意な低下を有する。アイソタイプ対照と比較した平均差を、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの事後検定による二元配置ＡＮＯＶＡによって計算した。１群当たりに使用したマウスの数（ｎ）は、表の括弧内に示す。
（実施例９）
抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体間の交差競合
抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のパネル内の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸバイオセンサープラットフォーム（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．）のリアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイを使用して決定した。実験全体は、２５℃で、１０００ｒｐｍの速度でプレートを振とうさせながら、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、ｐＨ７．４の（ＨＢＳ−ＥＢＴ）緩衝液中で実施した。２つの抗体が、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有して発現した組換え変異体Ｂｅｔ ｖ １（変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨ；配列番号３１２）上のそれらの各エピトープへの結合について、互いに競合することができるかどうかを評価するために、最初に、変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨの５μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中、抗Ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ抗体をコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサーチップ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、番号１８−５１２２）を９０秒間浸すことによって、該バイオセンサーチップ上でおよそ約０．２１ｎｍの変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨを捕捉した。次いで、抗原を捕捉したバイオセンサーチップを、第１の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体（ｍＡｂ−１と称する）の５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に４分間浸漬することによって、ｍＡｂ−１で飽和させた。次いで、このバイオセンサーチップを、第２の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体（ｍＡｂ−２と称する）の５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に３分間浸漬した。バイオセンサーチップを実験のすべてのステップ間にＨＢＳ−ＥＢＴ緩衝液中で洗浄した。リアルタイム結合応答を、実験の全過程中モニタリングし、全てのステップの終わりにおける結合応答を記録した。ｍＡｂ−１と予め複合体形成した変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨへのｍＡｂ−２結合の応答を比較し、異なる抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の競合的／非競合的挙動を、表１７に示すように決定した。
２０個の抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のうちの３つは、変異体Ｂｅｔ ｖ １−ＭＭＨに結合せず、交差競合データが決定的でないことが判明した。
（実施例１０）
ヒト化マウスＰＣＡモデルにおけるＢｅｔ ｖ １によって誘導されたマスト細胞脱顆粒を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの能力
ヒトカバノキアレルギー個体にわたるアレルゲン特異的ＩｇＥ応答のポリクローナル性を調査するために、ヒト化ＦｃεＲ１αマウスモデルを利用し、ヒトＩｇＥのマウスマスト細胞の表面上のＦｃεＲ１αへの結合を促進させた。ヒトＩｇＥはマウスＦｃεＲ１αに結合することができないため、内因性マウスＦｃεＲ１αを対応するヒトＦｃεＲ１α配列で置き換えた、遺伝子修飾したマウスを作製し、ＦｃεＲ１αｈｕ／ｈｕとして表した。ヒトＦｃεＲ１αの表面発現および野生型マウスに匹敵する様式で受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）モデルにおけるアレルゲン：ＩｇＥ活性化に応答する能力を実証することによって、ＦｃεＲ１αｈｕ／ｈｕマウスをこのモデルにおける使用に関して検証した。このＰＣＡモデルは、アレルギーのヒト血清の皮膚の局部区域への皮内注射、それに続く、色素と共に関連する抗原の静脈内注射を伴う。アレルギー反応は毛細血管拡張を引き起こし、感作部位の血管透過性を増加させ、この部位における色素の優先的蓄積をもたらす。色素を組織から抽出し、分光測定で定量することができる。検査抗血清で感作された組織への色素の血管外漏出を、アレルギーではないヒト血清で感作された組織への血管外漏出と比較する。
方法
このモデルにおけるマスト細胞脱顆粒に関する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の効果を決定するために、ヒト化ＦｃεＲ１αマウスは、１日目にアイソタイプ対照抗体または抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの皮下注射を受けた。各ヒトドナーについて、２つの独立した実験を実施し、１群当たりｎ＝５のマウスのデータを組み合わせた。群は、モノクローナル抗体なしの陰性対照、アイソタイプ陰性対照、ＲＥＧＮ５７１３＋ＲＥＧＮ５７１５二重抗Ｂｅｔ ｖ １抗体処置群およびＲＥＧＮ５７１３＋ＲＥＧＮ５７１４＋ＲＥＧＮ５７１５三重抗Ｂｅｔ ｖ １抗体処置群からなる。総抗体濃度または組み合わせた抗体濃度は、１ｍｇ／ｋｇまたはＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（陰性アイソタイプ対照としての抗ＩＬ６Ｒα）であった。３日後に、カバノキアレルギー患者由来の血清またはカバノキアレルギーではない患者由来の血清（陰性対照）を、それぞれ、右および左耳へと皮内（ＩＤ）注射し、アレルゲン特異的ＩｇＥをマスト細胞上のＦｃεＲＩに結合させた。各ドナー由来の同量のアレルゲン特異的ＩｇＥがこの実験で使用されたことを確認するために、各抗血清注射を１０ＫＵａ／ＬのＢｅｔ ｖ １特異的ＩｇＥ ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ（登録商標）に対して正規化した。
アレルゲン特異的抗体の局所投与の２４時間後に、０．５％のＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅを含有するＰＢＳ中に希釈した１μｇのＢｅｔ ｖ １のＩＶ注射によってマウスに負荷した。アレルゲン負荷の１時間後に、マウスを屠殺した。Ｅｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅを耳組織から抽出し、標準曲線を使用して、分光測定で定量した（使用したプロトコールの図に関する図６を参照のこと）。Ｅｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅの血管外漏出の低下は、アイソタイプ対照抗体で処置した群、Ｂ（アイソタイプ、ａｖｇ）から、抗体処置群のカバノキアレルギーの血清を投与した耳に関するＥｖａｎ’ｓ ｂｌｕｅ ｄｙｅの濃度、Ｂ（ｍＡｂ、ｉ）（耳組織重量で正規化したもの）を減算することによる平均に関して計算した。次いで、この数をＢ（アイソタイプ、ａｖｇ）と抗体処置群の非アレルギーの血清を投与した耳に関する色素濃度［Ｎ（ｍＡｂ、ｉ）］の間の差で除し、１００を乗じて、色素の血管外漏出の全体的な平均パーセント低下（％低下）を得た。等式を以下に示す：
％低下（平均）＝１００×［Ｂ（アイソタイプ、ａｖｇ）−Ｂ（ｍＡｂ、ｉ）］／［Ｂ（アイソタイプ、ａｖｇ）−Ｎ（ｍＡｂ、ｉ）］
陰性アイソタイプ対照群と比較した抗Ｂｅｔ ｖ １抗体処置群の色素漏出のパーセント低下の増加は、マスト細胞脱顆粒の遮断におけるＢｅｔ ｖ １抗体または抗体の組合せの有効性の尺度である。
結果
このモデルでは、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ（ＲＥＧＮ５７１３とも称される）、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２（ＲＥＧＮ５７１４とも称される）およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２（ＲＥＧＮ５７１５とも称される）と呼ばれる抗Ｂｅｔ ｖ １抗体を組み合わせた使用によって、３名のカバノキアレルギードナーのうち３名に由来するＩｇＥ含有血清を使用する場合に、ＩｇＥによって媒介される応答の最大の遮断が実証された（図７を参照のこと）。カバノキアレルギードナー２５６０９由来の血清を使用した場合、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、組み合わせた場合、アイソタイプ対照と比較して、マスト細胞脱顆粒の９５％の遮断を示し（平均差−４２．０４＋／−６．９（ｐ＜０．０００１））、Ｈ４Ｈ１６９９２ＰおよびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２を組み合わせた使用は、アイソタイプ対照と比較して、マスト細胞脱顆粒の９３％の遮断を示した（平均差−４１．７４＋／−３．７（ｐ＜０．０００１））。カバノキアレルギードナー２３６５８由来の血清を使用した場合、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、組み合わせた場合、アイソタイプ対照と比較して、マスト細胞脱顆粒の９０％の遮断を示し（平均差−５３．６７＋／−７．１（ｐ＜０．０００１））、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２と組み合わせたＨ４Ｈ１６９９２Ｐは、アイソタイプ対照と比較して、マスト細胞脱顆粒の７４％の遮断を示した（平均差−４４．５８＋／−１１．４（ｐ＜０．０００１））。最後に、カバノキアレルギードナー２５４１４由来の血清を使用した場合、Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、組み合わせた場合、アイソタイプ対照と比較して、マスト細胞脱顆粒の９２％の遮断を示し（平均差−３９．７２＋／−７．５（ｐ＜０．０００１））、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２と組み合わせたＨ４Ｈ１６９９２Ｐは、アイソタイプ対照と比較して、マスト細胞脱顆粒の８０％の遮断を示した（平均差−３４．２７＋／−７．８（ｐ＜０．０００１））。
（実施例１１）
ホスホＥｒｋホスホフローアッセイにおいて好塩基球活性化を遮断する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体の組合せの能力
８名のカバノキアレルギー個体由来の試料を使用して、好塩基球活性化を阻害することに関する抗Ｂｅｔ ｖ １抗体Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ（ＲＥＧＮ５７１３とも称される）、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２（ＲＥＧＮ５７１４とも称される）およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２（ＲＥＧＮ５７１５とも称される）の種々の組合せの効果を検査することによって、ヒトＩｇＥ応答を調査した。より詳細には、ＦｃεＲの関与と活性化を評価するために、キナーゼＥＲＫのリン酸化、好塩基球活性化と脱顆粒の近位の読出し（proximal readout）を測定する機能的ホスホフローに基づくアッセイにおいて好塩基球を検査した（Liu, Y.ら（２００７年）、J Exp Med ２０４巻、９３〜１０３頁）。
方法
カバノキアレルギー患者（ｎ＝８）から採血し、Ｆｉｃｏｌｌ層の密度遠心分離によってＰＢＭＣを単離し、洗浄し、再懸濁して、９６ウェルフォーマットにおけるシングルポイントとしてプレーティングした。並行して、精製したＢｅｔ ｖ １の用量応答ならびに抗Ｂｅｔ ｖ １抗体および一定用量（最終濃度１００ｐＭ）の精製した天然Ｂｅｔ ｖ １と混合した抗体の組合せ（２．５６ｐＭ〜２００ｎＭ）の用量応答を含んだ２倍の刺激プレートを調製した。細胞を刺激し、次に、ｐＥｒｋ−Ａｌｅｘａ ４８８、ＣＤ１２３−ＢＵＶ３９５およびＨＬＡ−ＤＲ−ＡＰＣ抗体を含有する抗体カクテルで染色した。染色後、ＬＳＲ−Ｆｏｒｔｅｓｓａ機器を使用してデータを得て、好塩基球ゲート内のリン酸化Ｅｒｋ染色のＭＦＩを計算することによって解析した。パーセント最大阻害を：１００−（（１００×最大抗体応答）／アイソタイプ応答）として計算した。最大抗体応答は、用量応答曲線（曲線のプラトー）の上位３つの抗体用量におけるリン酸化Ｅｒｋの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）の平均からベースラインＭＦＩ（反復の非刺激試料の平均）を減算したものであり、アイソタイプ応答は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎにより産生されたアイソタイプ対照抗体（ＲＥＧＮ１９４５ 抗Ｆｅｌ ｄ １ ＩｇＧ４Ｐ）の用量応答におけるＭＦＩ値すべての平均からベースラインＭＦＩを減算したものである。
結果
カバノキ花粉アレルギー個体の８名全員に由来する好塩基球が様々な強度でＢｅｔ ｖ １刺激に応答した。図８を参照のこと。Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐ、Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２およびＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、８名のドナーのうち８名において、好塩基球活性化の少なくとも７０％を阻害したが、Ｈ４Ｈ１６９９２ＰのＨ４Ｈ１７０８２Ｐ２との組合せでは、８名のドナーのうち６名において、同程度の阻害を達成した。注目すべきことに、別々に検査した際に、個々の抗体は、ＩｇＥへのアレルゲンの結合に影響を及ぼす能力において高い程度の変動性を示した。Ｈ４Ｈ１６９９２Ｐは、８名のドナーのうち３名において≧７０％の遮断を達成し、Ｈ４Ｈ１７０８２Ｐ２は、８名のドナーのうち４名において好塩基球活性化の７０％の遮断を達成した。Ｈ４Ｈ１７０３８Ｐ２は、試験した８名のドナーのうち１名のみで、７０％の遮断を実証した。
（実施例１２）
３つの抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の天然Ｂｅｔ ｖ １への同時結合の決定
この実験を実施し、３つの選択したＢｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の結合エピトープが特有であり、モノクローナル抗体結合の順序に関わらず、３つの抗体の同時結合の際に立体的障害が示されていないことを確認した。３つのＢｅｔ ｖ １モノクローナル抗体間の順序に依存する競合についても評価した。
３つの抗Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の同一のＢｅｔ ｖ １への同時結合を、リアルタイム無標識表面プラズモン共鳴に基づくＢｉａｃｏｒｅ ３０００バイオセンサープラットフォーム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ．）を使用して決定した。実験全体は、２５℃で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４を含有するランニング緩衝液（ＨＢＳ−ＥＴ）中で実施した。ＥＤＣ／ＮＨＳ化学を使用してＣＭ５センサーの異なる表面に抗体を固定し、５０００〜１３，０００ＲＵの固定レベルを達成した。ＲＥＧＮ１９４５（Ｆｅｌ ｄ １モノクローナル抗体）も陰性対照として固定した。天然Ｂｅｔ ｖ １（ｎＢｅｔ ｖ １）、１０ｎＭまたは２０ｎＭを、異なるＢｅｔ ｖ １モノクローナル抗体を固定したセンサー表面に１０〜１２秒間かけて注入し、続いて、異なるＢｅｔ ｖ １モノクローナル抗体を、１５μＬ／分で６分間順次注入した。
異なるＢｅｔ ｖ １モノクローナル抗体の、モノクローナル抗体を固定したセンサー表面に結合したｎＢｅｔ ｖ １への結合を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃを使用して測定した。結果を表１８に示す。１ＲＵ（レゾナンスユニット）未満の結合シグナルは、Ｂｅｔ ｖ １モノクローナル抗体が注入された場合に結合が観察されなかったことを示すが、一方、より高い結合シグナル（２ＲＵを上回る）は、競合がないことを表す。この実施例に含まれる３つのＢｅｔ ｖ １モノクローナル抗体のすべては、ｎＢｅｔ ｖ １に同時に結合することができ、結合応答は、抗体が添加された順序によって影響を受けなかった。
まとめ
Ｂｅｔ ｖ １への抗体結合の順序に関わらず、３つの抗体すべての同時結合を妨げる競合は存在せず、このことは、ＲＥＧＮ５７１３、ＲＥＧＮ５７１４、およびＲＥＧＮ５７１５が、重複しない、別個のエピトープに結合することを示唆していた。

Claims (70)

  1. 天然Ｂｅｔ ｖ １またはカバノキ花粉抽出物（ＢＰＥ）に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、
    配列番号１４６、２９０、９８、１１４、２、１８、３４、５０、６６、８２、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、および２８２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、もしくは少なくとも９０％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列のうちのいずれか１つに含有される３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、または
    配列番号１５４、２９８、１０６、１２２、１０、２６、４２、５８、７４、９０、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および２６６からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列、もしくは少なくとも９０％の配列同一性を有する、その実質的に類似する配列のうちのいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）
    を含むモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  2. 以下の特徴：
    （ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である、
    （ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１０−８Ｍと等しいかもしくはそれより低いＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する、
    （ｃ）配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、および３１１からなる群から選択されるＢｅｔ ｖ １アミノ酸配列の断片に結合する、または
    （ｄ）天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、もしくはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥのアレルゲン特異的ＩｇＥへの結合を阻害する
    のうちの１つまたは複数をさらに呈する、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  3. 前記抗体が、配列番号１４６、２９０、９８、１１４、２、１８、３４、５０、６６、８２、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、および２８２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含有される前記３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１５４、２９８、１０６、１２２、１０、２６、４２、５８、７４、９０、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および２６６からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含有される前記３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項１または請求項２のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  4. 配列番号１４６、２９０、９８、１１４、２、１８、３４、５０、６６、８２、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、および２８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項１から３のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  5. 配列番号１５４、２９８、１０６、１２２、１０、２６、４２、５８、７４、９０、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および２６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１から４のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  6. （ａ）配列番号１４６、２９０、９８、１１４、２、１８、３４、５０、６６、８２、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、および２８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに（ｂ）配列番号１５４、２９８、１０６、１２２、１０、２６、４２、５８、７４、９０、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および２６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  7. 前記抗体が、
    （ａ）配列番号１４８、２９２、１００、１１６、４、２０、３６、５２、６８、８４、１３２、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、および２８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、
    （ｂ）配列番号１５０、２９４、１０２、１１８、６、２２、３８、５４、７０、８６、１３４、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、
    （ｃ）配列番号１５２、２９６、１０４、１２０、８、２４、４０、５６、７２、８８、１３６、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、および２８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、
    （ｄ）配列番号１５６、３００、１０８、１２４、１２、２８、４４、６０、７６、９２、１４０、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、および２６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、
    （ｅ）配列番号１５８、３０２、１１０、１２６、１４、３０、４６、６２、７８、９４、１４２、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、および２７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン、ならびに
    （ｆ）配列番号１６０、３０４、１１２、１２８、１６、３２、４８、６４、８０、９６、１４４、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、および２７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
    を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  8. 配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、１１４／１２２、２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、および２８２／２６６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合性断片。
  9. 配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約４４位から約６９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、および配列番号３０６の約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する、請求項１から８のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  10. 配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項９に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  11. 配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項１０に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  12. 配列番号３０６の約４４位から約７０位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項９に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  13. 配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項１２に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  14. 配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項９に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  15. 配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項９に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  16. 配列番号３０６の約５７位から約６６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項１５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  17. 配列番号３０６の約８１位から約９６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項９に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  18. 配列番号３０６の約８１位から約８９位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項１７に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  19. 配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、および３１１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する、請求項１から９のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  20. 前記抗体が、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、および１１４／１２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを有する、請求項９から１９のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  21. 天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、１１４／１２２、２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、および２８２／２６６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む参照抗体と競合する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  22. 配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、１１４／１２２、２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２６６、および２８２／２６６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む参照抗体と同一のＢｅｔ ｖ １上のエピトープに結合する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  23. 治療有効量の、請求項１から２２のいずれかに記載の１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物。
  24. ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
    ｂ）配列番号２９０、９８、および１１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２９８、１０６、および１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、１つまたは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片
    を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
    ｂ）配列番号２９０のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２９８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片
    を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  26. ａ）配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、
    ｂ）配列番号２９０のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２９８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
    ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片
    を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  27. ３つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記ヒト抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０、２９２／２９４／２９６／３００／３０２／３１４、および１００／１０２／１０４／１０８／１１０／１１２の各ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列の組合せを含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  28. ４つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記ヒト抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０、２９２／２９４／２９６／３００／３０２／３１４、１００／１０２／１０４／１０８／１１０／１１２、および１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８の各ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列の組合せを含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  29. ３つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記ヒト抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、および９８／１０６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  30. ４つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記ヒト抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、および１１４／１２２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  31. 治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０６の約２３位から約４４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、第１の抗体またはその断片、およびＢｅｔ ｖ １に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３０６の約４４位から約６９位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、第２の抗体またはその断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物。
  32. 前記第１の抗体またはその断片が、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基と相互作用し、前記第２の抗体またはその断片が、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、請求項３０に記載の医薬組成物。
  33. 前記第１の抗体またはその断片が、配列番号３０７のアミノ酸配列と相互作用する、請求項３０に記載の医薬組成物。
  34. 前記第２の抗体またはその断片が、配列番号３０８のアミノ酸配列と相互作用する、請求項３０に記載の医薬組成物。
  35. 治療有効量の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、Ｂｅｔ ｖ １に結合する１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物であって、前記第１の抗体またはその断片が、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、および配列番号３０６の約８１位から約８９位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用する、医薬組成物。
  36. 前記１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体またはその断片が、配列番号３０６の約２３位から約４３位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約４４位から約５６位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約２位から約１９位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３０６の約５７位から約７０位に及ぶアミノ酸残基、および配列番号３０６の約８１位から約８９位に及ぶアミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列と相互作用し、前記１つまたは複数のさらなる単離されたヒトモノクローナル抗体のうちの少なくとも１つが、前記第１の単離されたヒトモノクローナル抗体と異なるアミノ酸配列と相互作用する、請求項３５に記載の医薬組成物。
  37. 前記第１の抗体またはその断片が、配列番号３０７のアミノ酸配列と相互作用し、前記１つまたは複数のさらなる抗体またはその断片が、配列番号３０８、３０９、３１０、および３１１からなる群から選択されるアミノ酸配列と相互作用する、請求項３５に記載の医薬組成物。
  38. 請求項１から２０のいずれか一項に記載の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸分子。
  39. 請求項３８に記載の、Ｂｅｔ ｖ １に結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸分子を含む発現ベクター。
  40. 請求項３８に記載の発現ベクターを含有する宿主細胞。
  41. 天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥ感作に関連するマスト細胞脱顆粒を防止するもしくは低下させるかまたは好塩基球活性化を遮断する方法であって、請求項２３に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
  42. ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者を処置するための、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、有効量の、請求項１から２２のいずれかに記載の１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または有効量の、請求項２３から３７のいずれかに記載の１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、Ｂｅｔ ｖ １に結合する前記単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片のうちの１つもしくは複数の投与後に、または前記抗体のうちのいずれか１つもしくは複数を含む組成物の投与後に、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、方法。
  43. 前記カバノキ花粉抽出物（ＢＰＥ）が、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
  44. 有効量の、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に対するアレルギー反応を減弱化するのに有用な第２の治療剤を投与することをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
  45. 前記第２の治療剤が、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｂｅｔ ｖ １に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンからなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記抗体もしくはその断片または前記抗体を含む前記医薬組成物の直後またはそれと同時に、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）レジメンで前記患者を処置することをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
  47. 前記処置が、前記患者をブナ目のタンパク質、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に曝露した後に、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、またはアナフィラキシー応答の低下をもたらす、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者の処置における使用のための、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症の処置のための請求項２３から３７のいずれかに記載の医薬組成物であって、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、医薬組成物。
  49. 前記カバノキ花粉抽出物が、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥからなる群から選択される、請求項４８に記載の医薬組成物。
  50. ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者の処置における使用のための、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症の処置のための医薬の製造における請求項２３から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用であって、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善されるか、あるいはブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、もしくはＢｅｔ ｖ １タンパク質への前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、使用。
  51. 前記カバノキ花粉抽出物が、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥからなる群から選択される、請求項５０に記載の医薬組成物の使用。
  52. 前記組成物が、ブナ目のタンパク質、ブナ目に関連するアレルゲン、カバノキ花粉もしくはその抽出物、またはＢｅｔ ｖ １タンパク質に対するアレルギー反応を減弱化するのに有用な第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項２３から３７のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
  53. 前記カバノキ花粉抽出物が、天然Ｂｅｔ ｖ １、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａのＢＰＥ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａのＢＰＥ、およびＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａのＢＰＥからなる群から選択される、請求項５２に記載の医薬組成物の使用。
  54. 前記第２の治療剤が、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｂｅｔ ｖ １に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンから選択される、請求項５２に記載の医薬組成物の使用。
  55. １つもしくは複数のブナ目のアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応を示す患者を処置するための、あるいは１つもしくは複数のブナ目のアレルゲンへの感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、有効量の、請求項１から２２のいずれかに記載の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または有効量の、請求項２３から３７のいずれかに記載の、Ｂｅｔ ｖ １に結合する１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、Ｂｅｔ ｖ １に結合する前記単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片のうちの１つもしくは複数の投与後に、または前記抗体のうちのいずれか１つもしくは複数を含む組成物の投与後に、ブナ目のアレルゲンへの前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応が、防止されるか、または重症度および／もしくは持続時間が、低減される、あるいはブナ目のアレルゲンへの前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応に関連する少なくとも１つの症状または合併症が、防止されるか、または改善される、あるいはブナ目のアレルゲンへの前記感受性、またはそれに対するアレルギー反応の頻度および／もしくは持続時間、またはその重症度が低下する、方法。
  56. 前記１つまたは複数のブナ目のアレルゲンが、Ｂｅｔ ｖ １、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ １、およびＱｕｅ ａ １からなる群から選択される、請求項５５に記載の方法。
  57. Ｂｅｔ ｖ １に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、Ａｌｎ ｇ １、Ｃｏｒ ａ １、Ｃａｒ ｂ １、Ｑｕｅ ａ １、Ａｐｉ ｇ ２、Ａｐｉ ｇ １、Ｄａｕ ｃ １、Ｍａｌ ｄ １、Ｏｓｔ ｃ １、Ｆａｇ ｓ １、およびＣａｓ ｓ １からなる群から選択される１つまたは複数のアレルゲンと交差反応する、抗体またはその抗原結合性断片。
  58. Ａｌｎ ｇ １、Ｍａｌ ｄ １、Ａｐｉ ｇ １、Ｃａｒ ｂ １、およびＣｏｒ ａ １からなる群から選択される１つまたは複数のアレルゲンと交差反応する、請求項５７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  59. 表面プラズモン共鳴によって測定した場合、１０−８Ｍと等しいかまたはそれより低いＫＤでＢｅｔ ｖ １に結合する、請求項５７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  60. 治療有効量の、請求項５７から５９のいずれかに記載の１つまたは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物。
  61. アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）レジメンの有効性および／または安全性を増強するための方法であって、有効量の、請求項１から２２のいずれかに記載の１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または有効量の、請求項２３から３７のいずれかに記載の１つもしくは複数の単離されたヒトモノクローナル抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を、前記ＳＩＴレジメンの直前またはそれと同時に、それを必要とする患者に投与することを含み、前記ＳＩＴレジメンに対するアレルギー反応の重症度が軽減される、方法。
  62. 前記ＳＩＴレジメンが、増量投与期とその後の維持期を含む、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記ＳＩＴレジメンが、急速ＳＩＴレジメンである、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記ＢＰＥが、Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａ、Ｂｅｔｕｌａ ｎｉｇｒａ、またはＢｅｔｕｌａ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉａから得られる、請求項１または２１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
  65. 治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合する少なくとも２つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物であって、前記少なくとも２つの抗体が、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して競合しない、医薬組成物。
  66. 治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合する少なくとも３つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記少なくとも３つの抗体が、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して競合しない、請求項６５に記載の医薬組成物。
  67. 治療有効量の、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥに結合する少なくとも４つの単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記少なくとも４つの抗体が、天然Ｂｅｔ ｖ １またはＢＰＥへの結合に関して競合しない、請求項６５に記載の医薬組成物。
  68. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４６／１５４、および２９０／２９８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項６５に記載の医薬組成物。
  69. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、および９８／１０６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項６６に記載の医薬組成物。
  70. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１４６／１５４、２９０／２９８、９８／１０６、および１１４／１２２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項６７に記載の医薬組成物。
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