KR20210143327A - Bet v 1에 대한 인간 항체 및 이것의 사용 방법 - Google Patents

Bet v 1에 대한 인간 항체 및 이것의 사용 방법 Download PDF

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Abstract

본원에는 참나무 알레르겐, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루, 또는 Bet v 1에 결합하는 항체, 그 항체를 포함하는 조성물, 그 항체를 암호화하는 핵산, 및 그 항체를 사용하는 방법이 제공된다. 특정 구체예에 따르면, 항체는 Bet v 1에 결합하는 전체 인간 단클론성 항체이다. 항체는 생체내에서 Bet v 1에 대한 결합에 유용하며, 그로써 비만 세포 또는 호염기성 세포의 표면에서 사전 형성된 IGE에 대한 알레르겐의 결합을 방지한다. 이렇게 함으로써, 항체는 비만 세포 및/또는 호염기세포로부터 히스타민 및 다른 염증 매개체의 방출을 방지하는 작용을 하고, 그로써 감작된 개체에서 참나무 알레르겐에 대한 원치 않는 반응을 개선한다.

Description

Bet v 1에 대한 인간 항체 및 이것의 사용 방법{HUMAN ANTIBODIES TO BET V 1 AND METHODS OF USE THEREOF}
본 발명은 자작나무 꽃가루 알레르겐, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 및 인간 항체의 항원 결합 단편, 그 항체를 포함하는 치료 조성물, 및 그 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
서열 목록
서열 목록의 공식 사본이 명세서와 동시에, 2018년 5월 31일자로 생성되고, 약 137 킬로바이트 크기인, 10301WO01_SEQ_LIST_ST25의 파일명의 ASCII 포맷의 서열 목록으로서 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출된다. 이 ASCII 포맷 서류에 포함된 서열 목록은 명세서의 일부이고 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
자작나무는 미국의 알레르기 환자의 23% 및 유럽의 알레르기 환자의 14%에서 우세한 촉발요인이고 (알레르기 비염에 관한 데이터모니터 보고서, 2010년 7월), 봄철에 전 유럽, 북아메리카, 러시아, 및 오스트레일리아에서 제1형 알레르기의 주된 원인이다 (Breiteneder et al., EMBO J. 1989, 8(7):1935-8). Bet v 1 단백질은 백자작나무 (Betula verrucosa, 유럽 백자작나무, 또한 백자작나무와도 동의어임)로부터의 꽃가루에서 확인된 주된 자작나무 알레르겐이고, 자작나무 꽃가루 알레르기 환자의 95% 이상에서 IgE 결합의 원인이다 (Breiteneder, 상기 동일). BeT v 1은 3개의 α 나선 및 공지의 결정 구조를 가진 작은, 7개 가닥의 반-평행 β 시트이다 (Kofler et al., 2012, 422(1): 109-23; Markovic-Housley et al., J Mol Biol. 2003, 325(1): 123-33; Spangfort et al., J Immunol. 2003, 171(6): 3084-90). WO 94/10194는 참나무 목 (Fagales order)의 나무로부터 유래된 펩타이드에 관한 것이다.
자작나무 꽃가루 알레르기 환자의 60%는 Bet v 1에 배타적으로 반응한다 (Jarolim et al., Int Arch Allergy Appl Immunol. 1989, 88(1-2): 180-2). 한 그루의 자작나무는 나무로부터 최대 100 야드까지 공기를 타고 이동하는 최대 5백만개의 꽃가루 입자를 생성할 수 있다. 자작나무 꽃가루 알레르기의 증상은 가벼운 비염으로부터 생명을 위협하는 천식 반응까지 다양할 수 있다.
면역글로불린 E (IgE)는 그 자체로 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 건초열, 알레르기성 천식, 벌독 알레르기, 및 식품 알레르기를 나타내는, 제1형 과민성의 원인이다. IgE는 혈액에서 순환하며 호염기성세포 및 비만 세포 상의 IgE에 대한 고친화성 FceR1a 수용체에 결합한다. 대부분의 알레르기 반응에서, 알레르겐은 흡입, 섭취를 통해, 또는 피부를 통해 신체로 들어간다. 알레르겐은 그런 후 비만 세포 및 호염기성 세포의 표면에서 고친화성 수용체에 이미 결합되어 있는 사전형성된 IgE에 결합하여, 여러 IgE 분자의 가교 결합을 초래하고 다양한 알레르기 증상을 유발하는 히스타민 및 다른 염증 매개체의 방출을 촉발한다.
알레르기에 대한 치료는 면역 활성을 억압하기 위한 스테로이드류 및 천식 증상을 완화시키기 위한 기관지 확장제를 포함한다. 탈감작 요법은 또한 중증의 알레르기 환자에 대해 사용된다. 펩타이드 백신 조합은 특정 알레르겐, 예컨대 Bet v 1에 대해 개체를 탈감작시키기 위해 테스트되었다 (U.S. 9,017,689 참조). 항체는, 그것이 점막 조직으로의 알레르겐 분자의 유입을 차단할 수 있거나, 또는 그것이 비만 세포 또는 호염기성 세포 상에서 고 친화도 수용체에 결합된 IgE에 결합할 기회를 갖기 전에 알레르겐과 결합할 수 있음으로써, 이들 세포로부터 히스타민 또는 다른 염증 매개체의 방출을 방지할 수 있기 때문에, 알레르기에 대한 치료로서 제안되었다.
미국 특허 제 5,670,626호는 점막 조직에 대한 알레르겐의 결합을 차단함에 의해 알레르기성 비염, 알레르기성 천식, 및 알레르기성 결막염과 같은 IgE-매개 알레르기 질환의 치료를 위해 단클론성 항체의 사용을 기술한다. 미국 특허 제 6,849,259호는 알레르기의 생체내 마우스 모델에서 알레르기성 염증을 억제하기 위한 알레르겐-특이적 항체의 사용을 기술한다. 우유-기반 및 난(egg)-기반 항체 시스템이 기술되어 있다. 예를 들어, US2003/0003133A1은 자작나무 꽃가루 및 다른 알레르겐에 대한 구강 내성을 유도하기 위해 알레르겐에 대한 담체로서 우유를 사용하는 것을 개시한다. 비만 세포에 결합하는 환경 중의 알레르겐의 능력을 억제하는 분자의 사용을 통해 동물에서 알레르겐에 대한 알레르기 반응을 줄이기 위한 조성물 및 방법이 WO1994/024164A2에서 기술되었다. Bet v 1에 대한 다른 항체들은 U.S. 2010/0034812에서 언급되었다.
본 발명은 상기에서 논의된 문제점을 하나 이상 극복하는 것에 관련된다.
자작나무 꽃가루, 예컨대 천연 Bet v 1, 백자작나무 자작나무 꽃가루 추출물 (BPE), 흑자작나무(흑자작나무) BPE, 또는 흰자작나무(흰자작나무) BPE에 결합하는 전체 인간 단클론성 항체 및 이것의 항원 결합 단편이 본원에 제공된다. 항체는 자작나무 알레르겐에 민감화된 환자가 노출된 후에 생체내에서 Bet v 1 알레르겐에 결합하고, 그로써 천연 Bet v 1, 백자작나무 자작나무 꽃가루 추출물 (BPE), 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE의 소멸을 촉진하거나 비만 세포 또는 호염기성 세포의 표면에서 사전 형성된 IgE에 대한 알레르겐의 결합을 차단하는 작용을 할 수 있다. 그렇게 함으로써, 여기서 기술된 항체는 비만 세포 또는 호염기성 세포로부터 히스타민 또는 다른 염증 매개체의 방출을 방지할 수 있고, 그로써 자작나무 알레르겐에 대해 민감화된 환자에서 관찰된 부작용을 방지 또는 감소시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는 자작나무 알레르겐 또는 자작나무-관련 알레르겐에 민감한 환자에서 적어도 한 증상, 예컨대 재채기, 충혈, 코막힘, 기침, 천명, 기관지수축, 비염, 또는 결막염을 감소, 최소화, 또는 방지할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 민감화된 개체에서 자작나무 꽃가루 알레르겐에 대한 노출과 관련된 보다 더 중증의 생체내 합병증, 예컨대 천식 반응, 아나필락시스, 또는 심지어 사망을 방지할 수 있다.
본원에 제공된 항체는 전장, 예를 들어, IgG1 또는 및 IGG4 항체일 수 있고, 또는 항원 결합 부분, 예를 들어, Fab, F(ab')2, 또는 scFv 단편만을 포함할 수 있고, 기능성에 영향을 미치기 위하여, 예컨대 잔류 이펙터 기능을 제거하기 위해 변형될 수 있다 (Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164: 1925-1933).
발명의 제1 측면은 천연 Bet v 1, 백자작나무 자작나무 꽃가루 추출물 (BPE), 흑자작나무 BPE, 및/또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 알레르겐 특이적 IgE에 대한 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE 결합을 억제한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Bet v 1에 10-8 M 이하의 KD로 결합한다. 한 구체예에서, 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Bet v 1에 약 10-8 내지 약 10-11 M 범위의 KD로 결합한다. 한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Bet v 1에 27.9 nM 이하의 KD로 결합한다. 한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Bet v 1에 약 0.66 nM 내지 약 27.9 nM 범위의 KD로 결합한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체는 전체 인간 단클론성 항체이다.
한 구체예에서, 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Aln g1, Cor a1, Car b1, Que a1, Api g2, Api g1, Dau c1, Mal d1, Ost c1, Fag s1, 및 Cas s1로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알레르겐과 교차 반응한다. 이러한 알레르겐은 또한 PR-10 단백질, 또는 소위 병인 관련 (PR) 단백질로 명명될 수 있다. 부가적인 PR-10 단백질 (Bet v 1 패밀리 구성원)으로는 또한 Act c 8 및 Act d 8 (키위), Ara h 8 (땅콩), Pru ar 1 (살구), Pru av 1 (체리), Pru p 1 (복숭아), Pyr c 1 (배), Gly m 4 (대두), Vig r 1 (녹두), Sola I 4 (토마토), Cuc m 3 (멜론), Rub i 1 (라즈베리), 및 Fra a 1 (딸기)을 들 수 있다. 이들 알레르겐은 또한 참나무 관련 알레르겐으로 간주될 수 있다.
한 구체예에서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Aln g1, Mal d1, Api g1, Car b1, 및 Cor a1로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알레르겐과 교차 반응한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 내에서 CDR을 확인하기 위한 방법 및 기법은 기술분야에 잘 알려져 있고 본원에 개시된 명시된 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내에서 CDR을 확인하기 위해 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 관례로는, 예컨대, Kabat 정의, Chothia 정의, 및 AbM 정의를 들 수 있다. 일반적으로, Kabat 정의는 서열 가변성을 기반으로 하고, Chothia 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 하며, AbM 정의는 Kabat과 Chothia 접근법 사이의 절충안이다. 예컨대, Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., (1997), J. Mol. Biol. 273:927-948; 및 Martin et al., (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 참조. 공용 데이터베이스가 또한 항체 내의 CDR 서열을 확인하기 위해 이용될 수 있다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 114, 146, 98, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 122, 154, 106, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 114, 146, 98, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 122, 154, 106, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은: (a) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 (b) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은: (a) SEQ ID NO: 114, 146, 98, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 (b) SEQ ID NO: 122, 154, 106, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 284, 및 292로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인;
(b) SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 286, 및 294로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인;
(c) SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 288, 및 296으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인;
(d) SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 및 300으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인;
(e) SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 및 302로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인; 및
(f) SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 및 304로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 282/266, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
한 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 114/122, 146/154, 98/106, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 2 내지 약 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 57 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 96 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 66 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 89 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 및 311로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용한다. SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 또는 311을 포함하는 에피토프는 C-말단부 또는 N-말단부 상에서 1 내지 5개 아미노산, 또는 5 내지 10개 아미노산만큼 연장될 수 있다. 예를 들어, SEQ ID NO: 311의 에피토포는 5 내지 10개 아미노산만큼 연장될 때 SEQ ID NO: 115의 에피토프를 포함한다. 달리 표현하면, SEQ ID NO: 311을 포함하는 에피토프는, 예를 들어, SEQ ID NO: 315의 에피토프를 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 307과 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 308과 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 309와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 310과 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 311과 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 315와 상호작용한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 311, 및 315로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용하고 SEQ ID NO: 114/122, 146/154, 98/106, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함한다.
한 구체예에서, SEQ ID NO: 307과 상호작용하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146의 중쇄 가변 영역에 함유된 3개의 HCDR 및 SEQ ID NO: 154의 경쇄 가변 영역에 함유된 3개의 LCDR을 포함한다.
한 구체예에서, SEQ ID NO: 310과 상호작용하는 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 290의 중쇄 가변 영역에 함유된 3개의 HCDR 및 SEQ ID NO: 298의 경쇄 가변 영역에 함유된 3개의 LCDR을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 148, 150, 및 152의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 156, 158, 및 160의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 292, 294, 및 296의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 300, 302, 및 304의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 4, 6, 및 8의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 12, 14, 및 16의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 20, 22, 및 24의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 28, 30, 및 32의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 36, 38, 및 40의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 44, 46, 및 48의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 52, 54, 및 56의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 60, 62, 및 64의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 68, 70, 및 72의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 76, 78, 및 80의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 84, 86, 및 88의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 92, 94, 및 96의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 100, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 108, 110, 및 112의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 116, 118, 및 120의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 124, 126, 및 128의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 132, 134, 및 136의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 140, 142, 및 144의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 164, 166, 및 168의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 172, 174, 및 176의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 180, 182, 및 184의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 188, 190, 및 192의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 196, 198, 및 200의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 204, 206, 및 208의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 212, 214, 및 216의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 220, 222, 및 224의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 228, 230, 및 232의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 236, 238, 및 234의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 244, 246, 및 248의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 252, 254, 및 256의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 260, 262, 및 264의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 268, 270, 및 272의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 276, 278, 및 280의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 268, 270, 및 272의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 284, 286, 및 288의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 SEQ ID NO: 268, 270, 및 272의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, 발명은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 전체 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 이것의 단편은 다음 특징 중 하나 이상을 나타낸다: (i) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCVR, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (ii) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCVR, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (iii) SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 288, 및 296으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR3 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 및 SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 및 304로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR3 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (iv) SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 284, 및 292로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR1 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 286, 및 294로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR2 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 및 300으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR1 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 및 SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 및 302로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR2 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (v) Bet v 1에 10-8 이하의 및 약 10-8 내지 약 10-11의 범위의 KD로 결합하거나; (vi) 아나필락시스 또는 염증의 적어도 하나의 동물 모델에서 효능이 입증되거나; 또는 (vii) 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경합한다.
한 구체예에서, "참조 항체"는, 예를 들어, 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 282/266, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열 쌍의 조합을 가지는 항체를 포함할 수 있다.
발명은 변형된 글리코실화 패턴을 가지는 항체를 포함한다. 일부 적용에서, 바람직하지 못한 글리코실화 부위를 제거하기 위한 변형이 유용할 수 있고, 또는 예컨대 푸코오스 모이어티가 항체 의존성 세포의 세포독성 (ADCC) 기능을 증가시키기 위해 제거된다 (Shield et al., 2002, JBC 277: 26733 참조). 다른 적용에서, 갈락토실화의 변형이 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 변형시키기 위해 이루어질 수 있다.
제2 측면은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 대한 특이적 결합에 대해 항체 또는 항원 결합 단편과 경합하는, 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 상보성 결정 영역 (CDR), 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR을 포함하는 분리된 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 HCVR은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지고; LCVR은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가진다.
한 구체예는 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 대한 특이적 결합에 대해 항체 또는 항원 결합 단편과 경합하는, 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 상보성 결정 영역 (CDR), 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR을 포함하는 분리된 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 HCVR은 SEQ ID NO: 114, 146, 98, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지고; LCVR은 SEQ ID NO: 122, 154, 106, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가진다.
관련된 구체예에서, 발명은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 대한 특이적 결합에 대해 항체 또는 항원 결합 단편과 경합하는, SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 282/266, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 서열 쌍 내에 함유된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 분리된 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공한다.
제3 측면은 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 상보성 결정 영역 (CDR), 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편으로서 Bet v 1 상의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 HCVR은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지고; LCVR은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가진다.
한 구체예는 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 상보성 결정 영역 (CDR), 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편으로서 Bet v 1 상의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 HCVR은 SEQ ID NO: 114, 146, 98, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지고; LCVR은 SEQ ID NO: 122, 154, 106, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가진다.
관련된 구체예에서, 본원에는 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 282/266, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 서열 쌍 내에 함유된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편으로서 Bet v 1 상의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체 또는 이것의 항원 결합 단편이 제공된다.
제4 측면으로, 발명은 Bet v 1 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 이러한 핵산을 운반하는 재조합 발현 벡터, 이러한 벡터가 도입되는 숙주 세포가 또한 본원에서 고려되며, 숙주 세포를 항체의 생성을 허용하는 조건 하에서 배양하고, 생성된 항체를 회수함으로써 항체를 제조하는 방법 역시 고려된다.
한 구체예에서, 본원에는 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 핵산 분자가 제공된다.
한 구체예에서, 본원에는 SEQ ID NO: 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 241, 257, 273, 281, 및 289로 이루어지는 군으로부터 선택된 핵산 서열에 의해 암호화된 HCVR, 또는 이것의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는 실질적으로 동일한 서열을 포함하는 항체 또는 이것의 단편이 제공된다.
한 구체예에서, HCVR은 SEQ ID NO: 113, 145, 257, 및 289로 이루어지는 군으로부터 선택된 핵산 서열에 의해 암호화된다.
한 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217, 233, 249, 265, 및 297로 이루어지는 군으로부터 선택된 핵산 서열에 의해 암호화된 LCVR, 또는 이것의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는 실질적으로 동일한 서열을 추가로 포함한다.
한 구체예에서, LCVR은 SEQ ID NO: 121, 153, 265, 및 297로 이루어지는 군으로부터 선택된 핵산 서열에 의해 암호화된다.
한 구체예에서, 본원에는 SEQ ID NO: 7, 23, 39, 55, 71, 87, 103, 119, 135, 151, 167, 183, 199, 215, 231, 247, 263, 279, 287, 및 295로 이루어지는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열에 의해 암호화된 HCDR3 도메인; 및 SEQ ID NO: 15, 31, 47, 63, 79, 95, 111, 127, 143, 159, 175, 191, 207, 223, 239, 255, 271, 및 303으로 이루어지는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열에 의해 암호화된 LCDR3 도메인을 포함하는 항체 또는 항체의 항원 결합 단편이 제공된다.
한 구체예에서, 본원에는 SEQ ID NO: 3, 19, 35, 51, 67, 83, 99, 115, 131, 147, 163, 179, 195, 211, 227, 243, 259, 275, 283, 및 291로 이루어지는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열에 의해 암호화된 HCDR1 도메인; SEQ ID NO: 5, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 117, 133, 149, 165, 181, 197, 213, 229, 245, 261, 277, 285, 및 293으로 이루어지는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열에 의해 암호화된 HCDR2 도메인; SEQ ID NO: 11, 27, 43, 59, 75, 91, 107, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 및 299로 이루어지는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열에 의해 암호화된 LCDR1 도메인; 및 SEQ ID NO: 13, 29, 45, 61, 77, 93, 109, 125, 141, 157, 173, 189, 205, 221, 237, 253, 269, 및 301로 이루어지는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열에 의해 암호화된 LCDR2 도메인을 추가로 포함하는 항체 또는 이것의 단편이 제공된다.
제5 측면은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을, 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 둘 이상의 분리된 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은:
a) SEQ ID NO: 146에 제시된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 154에 제시된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
b) SEQ ID NO: 114, 98, 및 290으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 122, 106, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
c) 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은:
a) SEQ ID NO: 290에 제시된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 298에 제시된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
b) SEQ ID NO: 114, 146, 및 98로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 122, 154, 및 106으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
c) 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은:
a) SEQ ID NO: 146에 제시된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 154에 제시된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
b) SEQ ID NO: 290에 제시된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 298에 제시된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
c) 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은:
a) SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
b) SEQ ID NO: 290의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 298의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
c) SEQ ID NO: 114 및 98로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 및 SEQ ID NO: 122 및 106으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 항원 결합 단편; 및
d) 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은:
SEQ ID NO: 146/154로 이루어지는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
SEQ ID NO: 114/122, 98/106, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은:
SEQ ID NO: 146/154로 이루어지는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
SEQ ID NO: 290/298로 이루어지는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 282/266, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 둘 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 282/266, 및 290/298로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, Bet v 1에 결합하는 3개 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 4개의 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 이것의 항원 결합 단편; 및 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하고, 여기서 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 114/122, 146/154, 98/106, 및 290/298의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 SEQ ID NO: 146/154의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H16992P로 지정된 항체; SEQ ID NO: 290/298의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H17082P2로 지정된 항체; 및 SEQ ID NO: 98/106의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H17038P2로 지정된 항체를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 SEQ ID NO: 146/154의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H16992P로 지정된 항체; SEQ ID NO: 290/298의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H17082P2로 지정된 항체; SEQ ID NO: 98/106의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H17038P2로 지정된 항체; 및 SEQ ID NO: 114/122의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 가지는 H4H16987P로 지정된 항체를 포함한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하고, 제2 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하고, 제2 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열과 상호작용하고, 제2 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 308, 309, 310, 311 또는 315의 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 2 내지 약 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 57 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 89 또는 약 81 내지 약 96 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구체예에서, 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 2 내지 약 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 57 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 89 또는 약 81 내지 약 96 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용하며, 여기서 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체 중 적어도 하나는 제1 분리된 인간 단클론성 항체와 상이한 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열과 상호작용하고 하나 이상의 추가의 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 308, 309, 310, 311, 및 315로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 적어도 2개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 적어도 2개의 항체는 천연 Bet v 1 또는 BPE에 대한 결합에 대해 경합하지 않는다. 일부 측면으로, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 146/154 및 290/298의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 Bet v 1 항체 H4H16992P 및 H4H17082P2이다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 적어도 3개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 적어도 3개의 항체는 천연 Bet v 1 또는 BPE에 대한 결합에 대해 경합하지 않는다. 일부 측면으로, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 및 98/106의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 Bet v 1 항체 H4H16992P, H4H17082P2, 및 H4H17038P2이다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 제약학적 조성물은 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 적어도 4개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 적어도 4개의 항체는 천연 Bet v 1 또는 BPE에 대한 결합에 대해 경합하지 않는다. 일부 측면으로, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 각각 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 및 114/122의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 Bet v 1 항체 H4H16992P, H4H17082P2, H4H17038P2, 및 H4H16987P이다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 BeT v 1에 결합하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하며, 여기서 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Aln g1, Cor a1, Car b1, Que a1, Api g2, Api g1, Dau c1, Mal d1, Ost c1, Fag s1, 및 Cas s1로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알레르겐과 교차반응한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Aln g1, Mal d1, Api g1, Car b1, 및 Cor a1로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알레르겐과 교차반응한다.
한 구체예에서, 발명은 발명의 하나 이상의 항-Bet v 1 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량, 및 제2 치료제의 유효량과, 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제의 조합인 조성물을 특징으로 한다.
제2 치료제는 작은 분자 약물, 단백질/폴리펩타이드, 항체, 핵산 분자, 예컨대 항-센스 분자, 또는 siRNA일 수 있다. 제2 치료제는 합성 또는 천연적으로 유래될 수 있다.
제2 치료제는 발명의 항체 또는 이것의 단편과 유리하게 조합된 임의의 작용제, 예를 들어, 비만 세포 또는 호염기성 세포에 존재하는 IgE에 대한 Bet v 1의 결합을 차단할 수 있는, 본원에 기술된 것 이외의 제2 항체일 수 있다. 제2 치료제는 또한 임의의 알레르겐에 대한 알레르기성 반응을 치료하는 데 있어 치료의 표준으로서 사용되는 임의의 작용제일 수 있다. 이러한 제2 치료제는 항히스타민, 에피네프린, 충혈 제거제, 코르티코스테로이드, 또는 펩타이드 백신일 수 있다.
특정 구체예에서, 제2 치료제는 발명의 항체 또는 항체의 항원 결합 단편과 관련된 임의의 가능한 부작용(들)을, 만약 이러한 부작용(들)이 일어날 수 밖에 없다면, 대응하거나 감소시키는 것을 돕는 임의의 작용제일 수 있다.
또한 본 발명의 항체 및 제약학적으로 허용되는 조성물은 병용 요법에 사용될 수 있다는 것, 즉, 항체 및 제약학적으로 허용되는 조성물은, 예를 들어 항체가 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT) 전에 또는 중에 투여되는 SIT 양생법과 병용하는 것을 포함하여, 하나 이상의 다른 바람직한 치료제 또는 의학적 과정과 동시에, 전에, 또는 후속해서 투여될 수 있는 것이 인지될 것이다. 병용 양생법에 사용하기 위한 치료법 (치료제 또는 과정)의 특정 조합은 원하는 치료제 및/또는 과정의 상용성 및 달성될 원하는 치료 효과를 고려할 것이다. 또한 사용된 치료법은 동일한 장애에 대해 원하는 효과를 이룰 수 있거나 (예를 들어, 항체는 동일한 장애를 치료하기 위해 사용된 또 다른 작용제와 동시에 투여될 수 있음), 또는 상이한 효과를 이룰 수도 있는 것 (예컨대, 임의의 부작용의 제어)이 인지될 것이다. 본원에서 사용되는 바, 특정 질환, 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위해 정상적으로 투여되는 부가적인 치료제는 치료되는 질환, 또는 상태에 적절하다.
다수의 치료제가 동시 투여될 때, 투여량은 따라서, 관련된 기술분야에서 인지되는 바와 같이, 조정될 수 있다.
제6 측면은 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보이는 환자를 치료하기 위한, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 방법은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 유효량, 또는 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응은 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간이 축소되거나, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련-단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도가 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 투여 후에, 또는 임의의 하나 이상의 전술한 항체를 포함하는 조성물의 투여 후에 감소된다.
일부 구체예에서, 자작나무 꽃가루 추출물은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 치료는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 환자의 노출 후 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식, 또는 아나필락시스 반응의 감소를 초래한다.
일부 구체예에서, 방법은 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 알레르기 반응을 감소시키는 데 유용한 제2 치료제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 제2 치료제는 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민, 에피네프린, 충혈 제거제, Bet v 1에 대한 또 다른 상이한 항체 및 펩타이드 백신으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 구체예에서, 방법은 항체 또는 이것의 단편 또는 항체를 포함하는 제약학적 조성물과 동시에 또는 직후에 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT) 양생법으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함한다.
한 구체예에서, 발명은 하나 이상의 참나무 알레르겐, 또는 참나무 관련 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보인 참나무 알레르기 환자를 치료하기 위한, 또는 하나 이상의 참나무 알레르겐, 또는 참나무 관련 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 방법은 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 유효량, 또는 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 참나무 알레르겐, 또는 참나무 관련 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응은 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기잔이 축소되거나, 또는 참나무 알레르겐, 또는 참나무 관련 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 알레르겐, 또는 참나무 관련 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도가 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 투여 후에, 또는 전술한 항체 중 임의의 하나 이상을 포함하는 조성물의 투여 후에 감소된다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 참나무 알레르겐은 Bet v 1, Aln g1, Cor a1, Car b1, 및 Que a1로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
한 구체예에서, 발명은 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보이는 환자를 치료하는 데 사용하기 위한, 또는 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한, 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE에 결합하는 본원에 기술된 하나 이상의 항체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공하며, 여기서 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응은 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간이 축소되거나, 또는 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증은 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도는 감소된다.
한 구체예에서, 발명은 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물에 대한, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보이는 환자를 치료하는 데 사용하기 위한, 또는 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물에 대한, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 한 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의, Bet v 1에 결합하는 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 제약학적 조성물의 용도를 제공하며, 여기서 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물에 대한, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응은 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간이 축소되거나, 또는 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물에 대한, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 한 증상 또는 합병증은 방지디거나, 또는 개선되며, 또는 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물에 대한, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도는 감소된다.
한 구체예에서, 발명은 상기 기술된 제약학적 조성물의 용도를 제공하며, 여기서 조성물은 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 알레르기 반응을 감소시키는 데 유용한 제2 치료제와 함께 투여된다. 한 구체예에서, 발명은 상기 기술된 제약학적 조성물의 용도를 제공하며, 여기서 제2 치료제는 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민, 에피네프린, 충혈 제거제, Bet v 1에 대한 또 다른 상이한 항체 및 펩타이드 백신으로부터 선택된다.
특정 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 발명의 항체는 자작나무 꽃가루 또는 Bet v 1에 민감한 환자에서 적어도 한 증상, 예컨대 재채기, 충혈, 코막힘, 기침, 천명, 기관지수축, 비염, 또는 결막염을 감소, 최소화, 또는 예방할 수 있다.
한 구체예에서, Bet v 1에 결합하는 발명의 항체, 또는 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물은 천식 반응, 아나필락시스 반응, 또는 심지어 아나필락시스로부터 유발되는 사망을 포함하여, Bet v 1에 대한 알레르기와 관련된 보다 중증의 생체내 합병증을 예방하기 위해 사용될 수 있다.
한 구체예에서, 제약학적 조성물은 제2 치료제와 함께 환자에게 투여된다.
다른 구체예에서, 제2 치료제는 항히스타민, 에피네프린, 충혈 제거제, 코르티코스테로이드, Bet v 1에 대한 또 다른 상이한 항체, 펩타이드 백신 및 알레르기 반응의 중증도를 감소시키는 데 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 한 증상을 개선하는 데 유용한 임의의 다른 완화 요법으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예에서, 제약학적 조성물은 하나 이상의 다른 바람직한 치료제 또는 의학적 과정과 동시에, 전에, 또는 후속하여 투여되며, 이를테면 예를 들어, 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT) 양생법 전에 또는 그것과 동시에 투여된다. 일부 측면으로, 본원에 제공된 항체와 함께 SIT 양생법의 사용은 상승 효과를 제공한다.
한 구체예에서, 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT) 양생법의 효능 및/또는 안전성을 증강시키기 위한 방법이 제공되며, 방법은 본원에 제공된 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 유효량, 또는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을, 그것을 필요로 하는 환자에게 SIT 양생법 직전에 또는 그것과 동시에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 SIT 양생법에 대한 알레르기 반응의 중증도는 완화된다. 일부 구체예에서, SIT 양생법은 투여량 증가 단계와 이어서 유지 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, SIT 양생법은 급속 SIT 양생법이다.
추가의 측면으로, 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 자작나무 꽃가루 추출물과 관련된 비만 세포 탈과립화, 또는 Bet v 1 감작을 예방 또는 감소시키기 위한 방법이 제공되며, 방법은 본원에 기술된 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, BPE는 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
다른 구체예들은 다음의 상세한 설명의 검토로부터 드러날 것이다.
도 1은 H4H16992P와 Bet v 1과의 상호작용에 대한 H/D 교환/MS 에피토프 매핑을 도시한다.
도 2는 H4H17082P와 Bet v 1과의 상호작용에 대한 H/D 교환/MS 에피토프 매핑을 도시한다.
도 3은 H4H17038P2와 Bet v 1과의 상호작용에 대한 H/D 교환/MS 에피토프 매핑을 도시한다.
도 4는 H4H16987P와 Bet v 1과의 상호작용에 대한 H/D 교환/MS 에피토프 매핑을 도시한다.
도 5는 H4H16992P, H4H17082P, H4H17038P2 및 H4H16987P와 Bet v 1과의 상호작용에 대한 H/D 교환/MS 에피토프 매핑을 도시한다.
도 6은 인간화된 마우스 PCA 모델에서 Bet v 1에 의해 유도된 비만 세포 탈과립화를 차단하는 데에서 항체 조합의 유효성을 측정하기 위해 사용된 프로토콜의 도표를 도시한다.
도 7은 인간화된 마우스 PCA 모델에서 3개의 Bet v 1 민감성 도너로부터 얻어진 IgE 함유 혈청을 사용하여 비만 세포 탈과립화를 차단하는 항-Bet v 1 항체 조합의 능력을 도시한다.
도 8은 두 개의 그래프를 도시하는데, 제1 그래프는 한 자작나무 알레르기 도너로부터 얻어진 PBMC에서 호염기세포 활성화를 차단하는 항-Bet v 1 항체 조합을 입증하는 대표적인 데이터를 도시한다. 막대 그래프는 다수의 도너로부터 얻어진 PBMC에서의 호염기세포 활성화의, 각각의 항체 단독에 대한 항-Bet v 1 항체 조합에 의한 차단 퍼센트를 나타내는 데이터를 도시한다.
본 발명의 조성물 및 방법을 기술하기 전에, 본 발명이 기술된 특정 조성물 및 방법, 및 실험 조건이 달라질 수 있기 때문에, 그러한 방법, 조성물, 및 조건에 한정되지 않는 것이 인지되어야 한다. 또한 본 발명의 범주는 오직 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 본원에서 사용된 용어는 오직 특정 구체예를 기술할 목적을 위한 것이고, 제한하는 것으로 의도되지 않은 것이 인지되어야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "약"은, 특정의 인용된 수치와 관련하여 사용될 때, 그 값이 1% 이하로 그 인용된 값으로부터 달라질 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 바, "약 100"이라는 표현은 99 및 100 및 그 사이의 모든 값 (예컨대, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4, 등)을 포함한다.
비록 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 실험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 이제 기술된다.
정의
본원에서 사용되는 바 용어 "Bet v 1"은 자연적인/천연 형태의, 또는 재조합적으로 재조된 적어도 하나의 Bet v 1 단백질을 나타낸다. Bet v 1 단백질은 SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 305의 핵산 서열을 포함한다. 천연 Bet v 1 단백질은 대략 17 kD이고 7개 가닥의 역평행 β-시트(β1-β7), β1과 β2를 연결하는 2개의 짧은 α-나선 (α1 및 α2), 긴 C-말단 α-나선 (α3), 및 β2와 β3 사이의 글리신-풍부 루프 모티프로서 존재한다 (Kofler et al. (2012) J. Mol. Biol. 422(1): 109-123). 재조합으로 제조된 돌연변이 Bet v 1, SEQ ID NO: 312는 S85A 치환을 가진 Uniprot P15494의 G2-N160을 포함하고 Myc-Myc-헥사히스티딘 태그를 함유한다. Uniprot: P15494로부터의 Bet v 1 아미노산 서열, 즉 SEQ ID NO: 314 또한 Bet v 1을 나타낼 수 있다.
"Bet v 1"은 SEQ ID NO: 306 또는 SEQ ID NO: 314, 또는 이것의 상동성 서열을 포함하는, 또는 다르게는, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드이다. 구절 "SEQ ID NO: 306 또는 SEQ ID NO: 314의 상동성 서열"은, 본원에서 사용되는 바, 70%보다 큰, 바람직하게는 80%보다 큰, 보다 바람직하게는 90%보다 큰, 보다 더 바람직하게는 95%보다 큰 SEQ ID NO: 306 또는 SEQ ID NO: 314에 대한 동일성을 가지는 폴리펩타이드를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바 용어 "Bet v 1 단편"은 Bet v 1의 적어도 하나의 항원성 부위를 포함하는 또는 다르게는 그것으로 이루어진 폴리펩타이드를 나타낸다. 한 구체예에서, 본원에서 사용되는 바 용어 "Bet v 1 단편"은, Bet v 1의 적어도 2개의 항원성 부위를 포함하는 또는 다르게는 그것으로 이루어진 폴리펩타이드를 나타낸다. 한 구체예에서, 항원성 부위는 공유적으로 연결된다. 한 구체예에서, 항원성 부위는 적어도 하나의 펩타이드 결합에 의해 연결된다. 한 구체예에서, 2개의 항원성 부위는 적어도 하나의 펩타이드 결합 및 항원성 부위 사이의 스페이서에 의해 연결된다. 한 구체예에서, 적어도 2개의 항원성 부위는 Uniprot P15494의 아미노산 서열 23 내지 44 및 44 내지 56을 포함한다. 한 구체예에서, 적어도 2개의 항원성 부위는 SEQ ID NO: 306, 307, 308, 309, 310, 311, 및 315 중 임의의 것 내의 아미노산 서열을 포함한다. 한 구체예에서, 임의의 Bet v 1 단편은 자연적으로 발생하는 Bet v 1에, 또는 재조합으로 제조된 Bet v 1에 특이적으로 결합하는 항체의 생체내 생성을 유도할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "항체"는 특정 항원 (예컨대, Bet v 1)에 특이적으로 결합하는 또는 특이적으로 상호작용하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 임의의 항원 결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. 용어 "항체"는, 본원에서 사용되는 바, 4개의 폴리펩타이드 사슬, 이황화 결합에 의해 서로 연결되어 있는 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L) 로 구성된 면역글로불린 분자 (즉, "전체 항체 분자"), 뿐만 아니라 이것의 멀티머 (예컨대 IgM) 또는 이것의 항원 결합 단편을 나타내는 것으로 의도된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 ("HCVR" 또는 "VH") 및 중쇄 불변 영역 (도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 구성됨)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 ("LCVR 또는 "VL") 및 경쇄 불변 영역 (CL)으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 명명된, 보다 보존된 영역이 사이에 끼어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 초가변성 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 아미노-말단ㅇ,로부터 카르복시-말단으로 다음 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 발명의 특정 구체예에서, 항체 (또는 이것의 항원 결합 단편)의 FR은 인간 생식선 서열에 동일하거나, 또는 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 공통 서열은 둘 이상의 CDR의 병렬 분석을 기반으로 정의될 수 있다.
하나 이상의 CDR 잔기의 치환 또는 하나 이상의 CDR 잔기의 생략이 또한 가능하다. 하나 또는 2개의 CDR이 결합을 위해 생략될 수 있는 항체가 과학 문헌에 기술되어 있다. Padlan 등 (1995, FASEB J. 9:133-139)은 항체와 그것의 항원 사이의 접촉 영역을, 공개된 결정 구조를 기반으로 분석하였고, CDR의 단지 약 1/5 내지 1/3만이 실제로 항원과 접촉한다고 결론내렸다. Padlan은 또한 하나 또는 2개의 CDR이 항원과 접촉하는 아미노산을 갖지 않는 많은 항체를 발견하였다 (또한, Vajdos et al., 2002, J Mol Biol 320:415-428 참조).
항원과 접촉하지 않는 CDR 잔기는 이전 연구를 기반으로 (예를 들어 CDRH2의 잔기 H60-H65는 종종 불필요함), Chothia CDR 밖에 있는 Kabat CDR의 영역으로부터, 분자 모델화에 의해 및/또는 실험적으로 확인될 수 있다. 만약 CDR 또는 이것의 잔기(들)가 생략되면, 그것은 보통 또 다른 인간 항체 서열 또는 이러한 서열의 공통 서열에서 상응하는 위치를 차지하는 아미노산으로 치환된다. CDR 내에서 치환을 위한 위치 및 치환하기 위한 아미노산은 또한 실험적으로 선택될 수 있다. 실험적 치환은 보존성이거나 비보존성 치환일 수 있다.
본원에서 개시되는 바, Bet v 1에 특이적으로 결합하는 전체 인간 단클론성 항체는 상응하는 생식선 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 삭제를 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을, 예를 들어, 공공 항체 서열 데이터베이스로부터 입수할 수 있는 생식선 서열과 비교함으로써 쉽게 확인될 수 있다. 본 발명은 본원에 개시된 임의의 아미노산 서열로부터 유래된 항체, 및 이것의 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산은 그 항체가 유래된 생식선 서열의 상응하는 잔기(들)로, 또는 또 다른 인간 생식선 서열의 상응하는 잔기(들)로, 또는 상응하는 생식선 잔기(들)의 보존성 아미노산 치환으로 돌연변이된다 (이러한 서열 변화는 본원에서 종합적으로 "생식선 돌연변이"로서 언급된다). 기술분야의 통상적인 지식을 가진 사람은, 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 시작하여, 하나 이상의 개별 생식선 돌연변이 또는 이것의 조합을 포함하는 수많은 항체 및 항원 결합 단편을 쉽게 제조할 수 있다. 특정 구체예에서, V H 및/또는 V L 도메인 내에 있는 모든 프레임워크 및/또는 CDR 잔기는 그 항체가 유래된 원래의 생식선 서열에서 발견된 잔기로 복귀 돌연변이된다. 다른 구체예에서, 단지 특정 잔기만이, 예컨대, FRI의 처음 8개의 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내에서 발견된 돌연변이된 잔기만이, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기만이 원래의 생식선 서열로 복귀 돌연변이된다. 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들)가 상이한 생식선 서열 (즉, 그 항체가 원래 유래된 생식선 서열과 상이한 생식선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다.
나아가, 본 발명의 항체는, 예컨대, 특정 개별 잔기가 특정 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되는 한편 원래의 생식선 서열과 상이한 다른 특정 잔기가 유지되거나 상이한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되는 경우에, 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내에서 둘 이상의 생식선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있다. 일단 얻어진 후에는, 하나 이상의 생식선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원 결합 단편은 하나 이상의 원하는 특성, 예컨대, 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 개선된 또는 증강된 길항작용성 또는 작용성 생물학적 특성 (경우에 따라), 감소된 면역원성, 등에 대해 쉽게 테스트될 수 있다. 이런 일반적인 방식으로 얻어진 항체 및 항원 결합 단편은 본 발명 내에 포함된다.
본 발명은 또한 하나 이상의 보존성 치환을 가지는 본원에 개시된 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 전체 인간 단클론성 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 예컨대, 본원에 개시된 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열과 비교하여 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하, 등의 보존성 아미노산 치환을 가진 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 가지는 항체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "인간 항체"는 자연적으로 발생하지 않는 인간 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 용어는 비인간 포유류에서, 또는 비인간 포유류의 세포에서 재조합에 의해 제조된 항체를 포함한다. 용어는 인간 대상체로부터 분리된 또는 인간 대상체에서 생성된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
발명의 항체는, 일부 구체예에서, 재조합 및/또는 자연적으로 발생하지 않는 인간 항체일 수 있다. 용어 "재조합 인간 항체"는, 본원에서 사용되는 바, 재조합 수단에 의해 제조된, 발현된, 생성된 또는 분리된 모든 인간 항체, 예컨대 숙주 세포에 트랜스펙션된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체 (이하에서 추가로 기술됨), 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체 (이하에서 추가로 기술됨), 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자 도입된 동물 (예컨대 마우스)로부터 분리된 항체 (예컨대, Taylor et al., 1992, Nucl. Acids Res. 20:6287-6295), 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱을 포함하는 임의의 다른 수다에 의해 제조된, 발현된, 생성된 또는 분리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 특정 구체예에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이 (또는, 인간 Ig 서열에 대해 유전자도입된 동물이 사용될 때, 생체내 체세포성 돌연변이생성)의 대상이 되고 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식선 VH 및 VL 서열에 관련된 한편, 생체내에서 인간 항체 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 것일 수 있다.
인간 항체는 힌지 이질성과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 한 형태에서, 면역글로불린 분자는 다이머가 사슬간 중쇄 이황화 결합에 의해 함께 보유되어 있는, 대략 150 내지 160 kDa의 안정적인 4개 사슬 구성물을 포함한다. 두 번째 형태에서, 다이머는 사슬간 이황화 결합을 통해 연결되지 않으며 공유 결합된 경쇄 및 중쇄로 구성된 (절반-항체) 약 75 내지 80 kDa의 분자가 형성된다. 이들 형태는 심지어 친화성 정제 후에도 분리하기가 매우 어려웠다.
다양한 온전한 IgG 아이소타입에서 제2 형태의 출현 빈도는, 한정하는 것은 아니지만, 항체의 힌지 영역 아이소타입과 관련된 구조적 차이로 인한 것이다. 인간 IgG4 힌지의 힌지 영역에서의 단일 아미노산 치환은 제2 형태 (Angal et al., 1993, Molecular Immunology 30:105)의 출현을 인간 IgG1 힌지를 사용하여 전형적으로 관찰되는 수준으로 유의하게 감소시킬 수 있다. 본 발명은, 예를 들어, 제조시, 원하는 항체 형태의 수율을 개선하기 위해 바람직할 수 있는, 힌지, CH2 또는 CH3 영역에 하나 이상의 돌연변이를 가지는 항체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바, 표현 "항원 결합 분자"는 단독으로, 또는 하나 이상의 부가적인 CDR 및/또는 프레임워크 영역 (FR)과 함께, 특정 항원에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 또는 그것으로 이루어진 단백질, 폴리펩타이드 또는 분자 복합체를 의미한다. 특정 구체예에서, 항원 결합 분자는 본원의 다른 곳에서 정의된 용어처럼, 항체 또는 항체의 단편이다.
구절 "특이적으로 결합한다" 또는 "~에 특이적으로 결합한다" 등은 항체 또는 이것의 항원 결합 단편이 생리적인 조건 하에서 상대적으로 안정적인 항원과 복합체를 형성한다. 특이적 결합은 적어도 약 1x10-6 M 이하 (예컨대, 더 작은 KD는 더 단단한 결합을 나타냄)의 평형 해리 상수에 의해 특징지어질 수 있다. 두 분자가 특이적으로 결합하는지의 여부를 결정하기 위한 방법은 기술분야에 잘 알려져 있고, 예를 들어, 평형 투석, 표면 플라즈몬 공명, 등을 포함한다. 본원에서 기술된 것과 같이, 항체는 Bet v 1에 특이적으로 결합하는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대 BIACORETM에 의해 확인되었다.
구절 "고친화성" 항체는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대, BIACORETM 또는 용액-친화성 ELISA에 의해 측정되는 바, 적어도 10-8 M; 바람직하게는 10-9 M; 보다 바람직하게는 10-10M, 보다 더 바람직하게는 10-11 M, 보다 더 바람직하게는 10-12 M의, KD로서 표시된, Bet v 1에 대한 결합 친화성을 가지는 단클론성 항체를 나타낸다.
용어 "속도 저하", "Koff" 또는 "kd"는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대, BIACORETM에 의해 측정되는 바, Bet v 1로부터, 1 x 10-3 s-1 이하, 바람직하게는 1 x 10-4 s-1 이하의 속도 상수로 해리되는 항체를 의미한다.
본원에서 사용되는 바, 항체의 "항원 결합 부분", 항체의 "항원 결합 단편" 등의 용어는 복합체를 형성하기 위하여 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 자연적으로 발생하는, 효소적으로 얻을 수 있는, 합성의, 또는 유전자 조작된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 본원에서 사용되는 바, 항체의 "항원 결합 부분", 또는 "항체 단편"의 용어는 Bet v 1에 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 단편을 나타낸다.
특이적 구체예, 발명의 항체 또는 항체 단편은 치료 모이어티, 예컨대 코르티코스테로이드, 제2 항-Bet v 1 항체, 또는 에피네프린, 백신, 또는 Bet v 1에 대한 알레르기 반응을 치료하는 데 유용한 임의의 다른 치료 모이어티에 콘쥬게이트될 수 있다 ("면역콘쥬게이트").
발명의 항체는 분리된 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "분리된 항체"는 그것의 천연 환경의 적어도 한 구성요소로부터 확인되고 분리된 및/또는 회수된 항체를 의미한다. 예를 들어, 유기체의 적어도 한 구성요소로부터, 또는 항체가 자연적으로 존재하거나 자연적으로 생성되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체는 본 발명의 목적을 위한 "분리된 항체"이다. 분리된 항체는 또한 재조합 세포 내에서의 제자리 항체를 포함한다. 분리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 분리 단계가 수행된 항체이다. 특정 구체예에 따르면, 분리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
특정 구체예에 따르면, 분리된 항체는 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체 (Ab)가 실질적으로 없을 수 있고 (예컨대, Bet v 1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체, 또는 이것의 단편), 참나무 항원 이외의, 또는 일부 측면에서, Bet v 1 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 Ab가 실질적으로 없다.
본원에서 사용되는 바, "차단 항체" 또는 "중화 항체" (또는 "Bet v 1 활성을 중화시키는 항체")는 그것의 Bet v 1에 대한 결합이 Bet v 1의 적어도 하나의 생물학적 활성의 억제를 초래하는 항체, 또는 이거스이 항원 결합 부분을 나타내기 위한 것으로 의도된다. 예를 들어, 발명의 항체는 Bet v 1에 대한 1차 알레르기 반응을 방지하는 데 도움을 줄 수 있다. 대안적으로, 발명의 항체는 Bet v 1에 대한 2차 알레르기 반응, 또는 재채기, 기침, 천식 상태, 또는 Bet v 1에 의해 유발된 아나필락시스 반응을 포함하는, Bet v 1에 대한 알레르기 반응의 적어도 한 증상을 방지하는 능력을 입증할 수 있다. Bet v 1의 생물학적 활성의 이러한 억제는 하나 이상의 여러 표준 시험관내 또는 생체내 검정 (예컨대 본원에서 기술되는 바와 같은 수동 피부 아나필락시스 검정) 또는 기술분야에 알려져 있는 다른 생체내 검정 (예를 들어, 본원에 기술된 하나 이상의 항체의 투여 후에 Bet v 1로의 도전으로부터의 보호를 지켜보기 위한 다른 동물 모델)에 의해 Bet v 1 생물학적 활성의 하나 이상의 지표를 측정함으로써 평가될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "표면 플라즈몬 공명"은, 예를 들어 BIACORETM 시스템 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)을 사용하여 바이오센서 매트릭스 내에서의 단백질 농도의 변화의 감지에 의해 실시간 생체분자 상호작용의 분석을 허용하는 광학 현상을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "KD"는 특정 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 나타내기 위해 의도된다.
용어 "에피토프"는 파라토프로서 알려져 있는 항체 분자의 가변 영역에서 특이적 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원 결정기를 나타낸다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 그러므로, 상이한 항체는 항원 상의 상이한 구역에 결합할 수 있고 상이한 생물학적 효과를 나타낼 수 있다. 용어 "에피토프"는 또한 B 및/또는 T 세포가 반응하게 되는 항원 상의 부위를 나타낸다. 그것은 또한 항체에 의해 결합되는 항원의 영역을 나타낸다. 에피토프는 선형이거나 형태일 수 있다. 선형 에피토프는 폴리펩타이드 사슬에서 인접한 아미노산 잔기에 의해 생성된 것이다. 형태의 에피토프는 선형 폴리펩타이드 사슬의 상이한 분절로부터 공간적으로 나란히 놓인 아미노산에 의해 생성된다. 특정 구체예에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 기, 또는 설포닐 기와 같이 분자의 화학적으로 활성인 표면기화가 이루어진 결정기를 포함할 수 있고, 특정 구체예에서, 특이적 3차원 구조적 특징, 및/또는 특이적 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 또한 구조적 또는 기능적으로서 정의될 수 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조적 에피토프의 하위세트이며 상호작용의 친화성에 직접적으로 기여하는 그런 잔기를 가진다. 연속적인 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 노출될 때 보유되는 반면, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 변성 용매로의 처리시에 전형적으로 소실된다. 에피토프는 전형적으로 특유한 공간적 형태에 적어도 3개, 보다 통상적으로는 적어도 5개 또는 8 내지 10개 아미노산을 포함한다.
용어 "실질적 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"은, 핵산 또는 이것의 단편을 언급할 때, 다른 핵산 (또는 그것의 상보하는 가닥)과 적절한 뉴클레오타이드 삽입 또는 삭제로 최적으로 정렬될 때, 하기에서 논의되는 바와 같이, FASTA, BLAST 또는 GAP과 같은, 임의의 서열 동일성의 잘 알려져 있는 알고리즘에 의해 측정되는 바, 뉴클레오타이드 염기의 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%에서 뉴클레오타이드 서열 동일성이 있는 것을 가리킨다. 참조 핵산에 대해 실질적인 동일성을 가진 핵산 분자는, 특정 경우에, 참조 핵산 분자에 의해 암호화된 폴리펩타이드와 동일하거나 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩타이드를 암호화할 수 있다.
폴리펩타이드에 대해 적용되는 것과 같이, 용어 "실질적 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"은 두 펩타이드 서열이, 예컨대 디폴트 갭 중량을 사용하는 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해서와 같이 최적으로 정렬될 때, 적어도 90% 서열 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유하는 것을 의미한다. 바람직하게, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존성 아미노산 치환에 의해 상이하다. "보존성 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성 (예컨대, 전하 또는 소수성)을 가진 측쇄 (R 기)를 가진 다른 아미노산 잔기에 의해 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존성 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 둘 이상의 아미노산 서열이 보존성 치환에 의해 서로 상이한 경우에, 유사성의 퍼센트 또는 정도는 치환의 보존성 성질을 교정하기 위하여 상향 조정될 수 있다. 이런 조정을 이루기 위한 수단은 당업자들에게 잘 알려져 있다 (예컨대, Pearson, 1994, Methods Mol. Biol. 24: 307-331 참조). 유사한 화학적 특성을 가진 측쇄를 가지는 아미노산의 그룹의 예로는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 아이소류신; 2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌, 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파테이트 및 글루타메이트, 및 7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존성 아미노산 치환기는: 발린-류신-아이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파테이트, 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존성 대체는 Gonnet 등 (1992 Science 256: 1443-45)에서 개시된 PAM250 log-가능성 매트릭스에서 양성 값을 가지는 임의의 변화이다. "적당한 보존성" 대체는 PAM250 log-가능성 매트릭스에서 비음성 값을 가지는 임의의 변화이다.
폴리펩타이드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 보존성 아미노산 치환을 포함하여 다양한 치환, 삭제 및 다른 변형에 대해 배정된 유사성의 척도를 사용하여 유사한 서열을 매치시킨다. 예를 들어, GCG 소프트웨어는 밀접하게 관련된 폴리펩타이드 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성, 예컨대 유기체의 상이한 종으로부터 또는 야생형 단백질과 그것의 뮤테인 사이에서 상동성 폴리펩타이드를 결정하기 위하여 디폴트 파라미터와 함께 사용될 수 있는 GAP 및 BESTFIT와 같은 프로그램을 함유한다. 예컨대, GCG 버전 6.1 참조. 폴리펩타이드 서열은 또한 디폴트 또는 권장된 파라미터를 가진 FASTA: GCG 버전 6.1의 프로그램을 사용하여 비교될 수 있다. FASTA (예컨대, FASTA2 및 FASTA3)는 문제 서열과 탐색 서열 사이의 최상의 중첩된 영역의 정렬 및 퍼센트 서열 동일성을 제공한다 (Pearson, 2000 상기 동일). 발명의 서열을 상이한 유기체로부터의 대다수 서열을 함유한 데이터베이스와 비교할 때 또 다른 바람직한 알고리즘은 디폴트 파라미터를 사용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다 (예컨대, Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410 and 1997 Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 참조).
구절 "치료적 유효량"은 그것이 투여되어 원하는 효과를 생성하는 양을 의미한다. 정확한 양은 치료 목적에 따라 좌우될 것이고, 공지된 기법을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있을 것이다 (예를 들어, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding 참조).
발명의 항체는 참나무에 알레르기성인 개체를 "탈감작"시키기 위해 사용될 수 있다. 용어 "탈감작"은 본원에서 참나무에 알레르기성인 개체의 참나무 알레르겐, 예컨대 자작나무 꽃가루, 예컨대 Bet v 1, Aln g1, Cor a1, Car b1, Que a1, Api g2, Api g1, Dau c1, Mal d1, Ost c1, Fag s1, 및/또는 Cas s1에 대한, 또는 참나무 관련 알레르겐에 대한 노출에 대한 알레르기-반응성을 (그 참나무에 알레르기성인 개체가 그렇지 않으면 겪게 되는 수준 미만의 수준으로) 감소시키는 것으로서 정의된다. 용어 "탈감작"은 본원에서 Act c 8 및 Act d 8 (키위), Ara h 8 (땅콩), Pru ar 1 (살구), Pru av 1 (체리), Pru p 1 (복숭아), Pyr c 1 (배), Gly m 4 (대두), Vig r 1 (녹두), Sola I 4 (토마토), Cuc m 3 (멜론), Rub i 1 (라즈베리), 및 Fra a 1 (딸기)를 포함한 PR-10 단백질에 대한 개체의 알레르기 반응성을 감소시키기 위한 것으로서 추가로 정의된다.
일반적 설명
참나무 목에 속하는 나무들은 봄철 알레르기 증상의 근원이고, 주요 자작나무 알레르겐, Bet v 1은 자작나무 꽃가루 알레르기 환자의 95% 이상에서 IgE 결합의 원인이다 (Breiteneder, EMBO J. 1989, 8(7):1935-8). 자작나무는 미국 알레르기 환자의 23% 및 유럽 알레르기 환자의 14%에서 우세한 촉발요인이다 (DataMonitor report on Allergic Rhinitis, July, 2010). 자작나무 꽃가루에 대해 민감성을 보이는 개체에서 증상의 중증도는 상대적으로 경미한 비염 및 결막염으로부터 잠재적으로 생명에 위협적인 천식 상태까지 다양하다. 자작나무 꽃가루에 대해 알레르기성인 환자의 60% 이상이 이 Bet v 1에 대한 IgE 항체를 가진 것으로 밝혀졌다 (Jarolim et al., Int Arch Allergy Appl Immunol. 1989, 88(1-2):180-2).
참나무는 뚜렷한 지리적 분포를 보이는데 자작나무와 알더 나무가 유럽 북부 및 북아메리카에서 토착성인 한편, 개암나무, 서어나무 및 오크나무는 더 따뜻한 기후를 선호함으로써, 이들 대륙의 남부에 더 많이 서식하고 있다. 모두 5개 종의 o-집단은 온대 기후 지역 5에서 빈번하게 발견된다 (Spieksma FTM. Regional European pollen calendars. D'Amato G, Spieksma FTM, Bonini S, editors. Allergic pollen and pollinosis in Europe. Hoboken, NJ: Wiley-Blackwell; 1991. pp. 49-65). 알더나무, 개암나무 및 서어나무를 포함한 자작나무과의 여러 나무는 민감한 개체에서 Bet v 1-유사 알레르겐에 대한 민감화를 개시하여 고도로 교차 반응성인 IgE 항체의 생성을 초래할 잠재력을 가진다 (Hauser, et al., 2011, Clin Exp Allergy. 41: 1804-14).
본원에서 정의된 바, 참나무 목 알레르겐, 또는 참나무 알레르겐은 자작나무 꽃가루 (Bet v 1), 알더나무 꽃가루 (Aln g1 및 Aln g4), 개암나무 꽃가루 (Cor a1, Cor a2, Cor a8, Cor a9, Cor a10, Cor a11, Cor a12, Cor a13, 및 Cor a14), 서어나무 꽃가루 (Car b1), 새우나무 꽃가루 (Ost c1), 밤나무 꽃가루 (Cas s1, Cas s5, Cas s8, 및 Cas s9), 너도밤나무 꽃가루 (Fag s1) 및 떡갈나무 꽃가루 (Que a1 및 Que a2)를 포함한다. 비-자작나무 꽃가루 중에서, Aln g1, Cor a1, Car b1, Ost c1, Cas s1, Fag s1, 및 Que a1은 Bet v 1, 즉 참나무 관련 알레르겐과 유사하거나 관련이 있다. 이들 알레르겐은 또한 참나무의 견과에서, 장미목에 속하는 관련이 없는 나무의 과실에서도 발현된다. 이들 알레르겐의 교차 반응성은 꽃가루 알레르기 환자에서 식품 알레르기의 증상을 촉진할 수 있다. 예시적인 교차 반응성 식품 알레르기는 사과, 체리, 살구, 배, 메디카고(medicago), 완두콩, 대두, 토마토, 셀러리, 당근, 및 아스파라거스를 포함한다 (Allergens and Allergen Immunotherapy: Subcutaneous, Sublingual, and Oral, 5th Edition. Richard F. Lockey, Dennis K. Ledford, editors. CRC Press, Taylor & Francis Group, London, NY, 2014. pp. 114, 118-119).
본원에서 사용되는 바, 구절 "참나무 알레르겐"은 참나무 관련 알레르겐을 포함한다. 일부 구체예에서, "참나무 관련 알레르겐"은 적어도 약 35%의 Bet v 1과의 전체 서열 상동성, 또는 적어도 약 50%의 Bet v 1의 에피토프 1과의 서열 상동성, 또는 적어도 약 40%의 Bet v 1의 에피토프 2와의 서열 상동성, 또는 적어도 약 25%의 Bet v 1의 에피토프 3과의 서열 상동성, 또는 적어도 약 15%의 Bet v 1의 에피토프 4와의 서열 상동성을 가지는 단백질로서 정의된다. 일부 구체예에서, "참나무 관련 알레르겐"은 장미목으로부터의 알레르겐을 포함하여, 항-Bet v 1 항체와 교차 반응하는 단백질로서 정의된다.
면역글로불린 E (IgE)는 그 자체로 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 건초열, 알레르기성 천식, 벌독 알레르기, 및 식품 알레르기로 나타나는 제1형 과민성의 원인이다. IgE는 혈액에서 순환하고 호염기세포 및 비만 세포 상의 IgE에 대한 고친화성 Fc 수용체에 결합한다. 대부분의 알레르기 반응에서, 알레르겐은 흡입, 섭취를 통해, 또는 피부를 통해 신체로 들어간다. 그런 후 알레르겐은 비만 세포 및 호염기세포의 표면에서 고친화성 수용체에 이미 결합되어 있는 사전형성된 IgE에 결합하여, 여러 IgE 분자의 가교 결합을 초래하여 다양한 알레르기 증상을 유발하는 히스타민 및 다른 염증 매개체의 방출을 촉발시킨다.
자작나무 꽃가루 알레르기에 대한 치료는 탈감작 요법을 포함하며, 이것은 미정제 자작나무 꽃가루 추출물, 또는 Bet v 1로부터 유래된 짧은 펩타이드의 투여량을 증가시켜가는 반복된 주사를 포함한다. 알레르겐 특이적 면역요법의 불충분함은 환자 순응 문제, 및 주사된 단백질에 대한 빈번한 알레르기 반응 (최대 30%)을 초래하는 긴 치료 기간을 포함한다. 탈감작 요법은 치료가 효과적인 것으로 간주되기까지 수년이 걸릴 수 있다. 성공적인 치료는 추출물의 조성 및 품질에 좌우되고, 치료는 중증의 천식/식품 알레르기가 있는 환자에서는 IgE 매개 중증 부작용으로 인해 금기된다. 따라서, 자작나무 꽃가루 알레르기 치료 분야에는 참나무 알레르겐, 특히 Bet v 1에 민감한 환자를 치료하기 위한 대체 전략이 필요하다.
알레르기에 대한 일반적인 치료 전략으로서 항체가 제안되어왔는데, 그 이유는 항체가 알레르겐 분자의 점막 조직으로의 유입을 차단할 수 있거나, 또는 알레르겐이 비만 세포 또는 호염기성 세포 상의 고친화성 수용체에 결합된 IgE에 결합할 기회를 갖기 전에 알레르겐에 결합할 수 있음으로써, 이들 세포로부터 히스타민 및 다른 염증 매개체의 방출을 방지할 수 있기 때문이다. 미국 특허 제 5,670,626호는 점막 조직에 알레르겐의 결합을 차단함으로써 알레르기성 비염, 알레르기성 천식, 및 알레르기성 결막염과 같은 IgE-매개 알레르기 질환의 치료를 위한 단클론성 항체의 사용을 기술한다. 미국 특허 제 6,849,259호는 알레르기의 생체내 마우스 모델에서 알레르기 염증을 억제하기 위한 알레르겐-특이적 항체의 사용을 기술한다. 우유-기반 및 난-기반 항체 시스템이 기술되어 있다. 예를 들어, US20030003133A1은 자작나무 꽃가루 및 다른 알레르겐에 대한 경구 내성을 유도하기 위한 알레르겐에 대한 담체로서 우유를 사용하는 것을 개시한다. 비만 세포에 알레르겐이 결합하는 능력을 억제하는 분자의 사용을 통해 환경의 알레르겐에 대한 동물의 알레르기 반응을 감소시키기 위한 조성물 및 방법이 WO1994/024164A2에서 기술되었다. Bet v 1에 대한 다른 항체는 U.S. 2010/0034812에서 언급되었다.
본원에 기술된 전체 인간 항체는 Bet v 1에 대한 특이적 결합을 입증하며 자작나무 꽃가루 알레르기를 겪고 있는 환자, 특히 Bet v 1 알레르겐에 대해 민감성을 보이는 환자의 치료에 유용할 수 있다. 이러한 항체의 사용은 참나무로부터의 꽃가루에 대한 알레르기를 겪고 있는 환자를 치료하는 효과적인 수단일 수 있거나, 또는 이러한 항체는 2차 노출시 Bet v 1에 대한 강화된 반응, 또는 알레르기에 결부된 수반되는 증상을 예방하기 위해 사용되거나, 또는 자작나무 꽃가루 알레르겐에 대한 1차 노출과 또는 2차 노출시 증상의 재발과 관련된 알레르기 반응의 중증도 및/또는 기간을 축소시키기 위해 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 이러한 알레르기를 치료하기 위해 기술분야에 알려져 있는 다른 치료 모이어티 또는 모달리티, 예컨대, 한정하는 것은 아니지만, 코르티코스테로이드 또는 에피네프린으로의 치료와 함께 보조 요법으로서 사용될 수 있다. 항체는 BeT v 1에 특이적인 제2 또는 제3 상이한 항체와 함께 사용될 수 있다. 항체는 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT)과 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, SIT와의 조합 결과는 상승적으로 효과적이다.
탈감작 요법과 달리, 본원에 기술된 항체로의 치료는 치료를 시작한 지 약 2주 내에, 또는 치료를 시작하고 약 10일 또는 약 8일 내에 효과적인 완화를 제공할 수 있다. Bet v 1 단백질 또는 펩타이드, 또는 하나 이상의 부가적인 참나무 알레르겐에 대한 노출과 함께, 본원에 기술된 전체 인간 항체로의 치료는 알레르기 반응을 차단할 수 있을뿐만 아니라, 참나무로부터의 꽃가루에 대한 알레르기를 겪고 있는 환자를 보다 효과적으로 또는 상승적으로 탈감작시킬 수 있다.
특정 구체예에서, 발명의 항체는 상업적으로 구입할 수 있거나 (예컨대, 미국 버지니아주 소재의 Indoor Biotechnologies사로부터, # NA-BV1-1), 또는 재조합에 의해 제조될 수 있는 1차 면역원, 예컨대 천연 Bet v 1로 면역화된 마우스로부터 얻어진다. Bet v 1의 전장 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 306으로서 제시된다. Uniprot: P15494로부터의 전장 Bet v 1 아미노산 서열은 또한 SEQ ID NO: 314에서 찾아볼 수 있다.
면역원은 천연, 자연적인, 또는 재조합에 의해 제조된 BeT v 1의 생물학적으로 활성인 및/또는 면역원성인 단편, 또는 이것의 활성 단편을 암호화하는 DNA일 수 있다. 단편은 Bet v 1의 N-말단 또는 C-말단으로부터, 또는 Bet v 1 아미노산 서열 내의 임의의 부위로부터 유래될 수 있다.
항체의 항원 결합 단편
구체적으로 다르게 표시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 바, 용어 "항체"는 2개의 면역글로불린 중쇄 및 2개의 면역글로불린 경쇄를 포함하는 항체 분자 (즉, "전체 항체 분자")뿐만 아니라 이것의 항원 결합 단편을 포함하는 것으로 인지되어야 한다. 본원에서 사용되는 바, 항체의 "항원 결합 부분", 항체의 "항원 결합 단편", 등의 용어는 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 자연적으로 발생하는, 효소적으로 얻을 수 있는, 합성의, 또는 유전자 조작된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 본원에서 사용되는 바, 항체의 "항원 결합 부분", 또는 "항체 단편"이란 용어는 Bet v 1에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 나타낸다. 항체 단편은 Fab 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, dAb 단편, CDR을 함유한 단편, 또는 분리된 CDR을 포함할 수 있다. 항체의 항원 결합 단편은, 예컨대, 전체 항체 분자로부터 단백질 가수분해성 소화 또는 항체 가변 및 (선택적으로) 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 쟈조합 유전자 조작 기법과 같은 임의의 적합한 표준 기법을 사용하여 유래될 수 있다. 이러한 DNA는 알려져 있거나 및/또는, 예컨대 상업적 공급원, DNA 라이브러리 (이를테면 예컨대, 파지-항체 라이브러리)로부터 쉽게 입수할 수 있거나, 또는 합성될 수 있다. DNA는, 예를 들어, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 형태로 배열하기 위해, 또는 코돈을 도입하고, 시스테인 잔기를 생성하고, 아미노산을 변형, 첨가 또는 삭제하는 등을 하기 위해, 화학적으로 또는 분자 생물학 기법을 사용함으로써 서열분석되고 조작될 수 있다.
항원 결합 단편의 비제한적인 실례로는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일-사슬 Fv (scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위 (예컨대, CDR3 펩타이드와 같은 분리된 상보성 결정 영역 (CDR)), 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드를 들 수 있다.
다른 조작된 분자, 예컨대 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-삭제된 항체, 키메릭 항체, CDR-그라프팅된 항체, 디아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디 (예컨대 1가 나노바디, 2가 나노바디, 등), 작은 모듈형 면역 약제 (SMIP), 및 상어 가변 IgNAR 도메인이 또한 본원에서 사용되는 "항원 결합 단편"이란 표현 내에 포함된다.
항체의 항원 결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성의 것일 수 있고 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접한 또는 그것과 한 프레임으로 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 결부된 VH 도메인을 가지는 항원 결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 서로에 대해 임의의 적합한 배열로 놓여있을 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 다이머일 수 있고 VH - VH, VH - VL 또는 VL - VL 다이머를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원 결합 단편은 모노머 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
특정 구체예에서, 항체의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유적으로 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 내에서 찾아볼 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인, 예시적인 구성은: (i) VH -CH1; (ii) VH -CH2; (iii) VH -CH3; (iv) VH -CH1-CH2; (v) VH -CH1-CH2-CH3; (vi) VH -CH2-CH3; (vii) VH -CL; (viii) VL -CH1; (ix) VL -CH2; (x) VL -CH3; (xi) VL -CH1-CH2; (xii) VL -CH1-CH2-CH3; (xiii) VL -CH2-CH3; 및 (xiv) VL -CL을 포함한다. 상기 열거된 예시적인 구성 중 임의의 것을 포함하여, 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 가변 및 불변 도메인은 서로에게 직접적으로 결합되거나 또는 전체 또는 부분적인 힌지 또는 링커 영역에 의해 결합될 수 있다. 힌지 영역은 적어도 2개 (예컨대, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있고, 이것은 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성 또는 반가요성 결합을 초래한다. 게다가, 본 발명의 항체의 항원 결합 단편은 하나의 또 다른 및/또는 하나 이상의 모노머 VH 또는 VL 도메인과 (예컨대, 이황화 결합(들)에 의한) 비공유 회합으로 상기 열거된 가변 및 불변 도메인 구성 중 임의의 것의 단일다이머 또는 이종다이머 (또는 다른 멀티머)를 포함할 수 있다.
인간 항체의 제조
유전자도입 마우스에서 인간 항체를 생성하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 임의의 그러한 공지된 방법이 Bet v 1에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조하기 위한 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다.
VELOOCIMMUNETM 기술 (예를 들어, US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals, VE유전자좌MMUNE® 참조) 또는 단클론성 항체를 생성하기 위한 임의의 다른 공지된 방법을 사용하여, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 가진, Bet v 1에 대한 고친화성 키메릭 항체가 초기에 분리된다. VELOCIMMUNE® 기술은 마우스가 항원 자극에 대한 반응으로 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생성하도록 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동가능하게 연결된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 가지는 유전자도입 마우스의 생성을 포함한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 분리되고 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동가능하게 연결된다. 그런 후 DNA는 전체 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.
일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스는 관심의 항원으로 도전되고, 림프 세포 (예컨대 B-세포)가 항체를 발현하는 마우스로부터 회수된다. 림프 세포는 불멸의 하이브리도마 세포주를 제조하기 위하여 골수종 세포주와 융합될 수 있고, 이러한 하이브리도마 세포주는 관심의 항원에 특이적인 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주를 확인하기 위해 스크리닝되고 선택된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 분리되고 중쇄 및 경쇄의 바람직한 아이소타입 불변 영역에 결합된다. 이러한 항체 단백질은 세포, 예컨대 CHO 세포에서 제조될 수 있다. 대안적으로, 항원-특이적 키메릭 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA가 직접 항원-특이적 림프세포로부터 분리될 수 있다.
처음에, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 가지는 고친화성 키메릭 항체가 분리된다. 하기 실험 단원에서와 같이, 항체는 특성화되고 친화성, 선택성, 에피토프, 등을 포함한 바람직한 특징에 대해 선택된다. 마우스 불변 영역은 발명의 전체 인간 항체를 생성하기 위하여 원하는 인간 불변 영역, 예를 들어 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4로 대체된다. 선택된 불변 영역이 특정 용도에 따라 달라질 수 있는 한편, 고친화성 항원 결합 및 표적 특이성 특징은 가변 영역에 잔류한다.
일반적으로, 본 발명의 항체는 고체상에 고정되거나 용액상 중의 항원에 대한 결합에 의해 측정될 때, 매우 높은 친화성, 전형적으로 약 10-12 내지 약 10-9 M의 KD를 가진다. 마우스 불변 영역은 발명의 전체 인간 항체를 생성하기 위하여 원하는 인간 불변 영역으로 대체된다. 선택된 불변 영역이 특정 용도에 따라 달라질 수 있는 한편, 고친화성 항원 결합 및 표적 특이성 특징은 가변 영역에 잔류한다.
생물학적 동등물
본 발명의 항-Bet v 1 항체 및 항체 단편은 기술된 항체의 것과는 다른 아미노산 서열을 갖지만, Bet v 1에 결합하는 능력을 보유한 단백질을 포함한다. 이러한 변종 항체 및 항체 단편은 모(parent) 서열과 비교할 때 아미노산의 하나 이상의 첨가, 삭제, 또는 치환을 포함하지만, 기술된 항체의 생물학적 활성과 본질적으로 동등한 생물학적 활성을 나타낸다. 마찬가지로, 본 발명의 항체-암호화 DNA 서열은 개시된 서열과 비교할 때 뉴클레오타이드의 하나 이상의 첨가, 삭제, 또는 치환을 포함하지만, 발명의 항체 또는 항체 단편에 본직적으로 생물학적으로 동등한 항체 또는 항체 단편을 암호화한다.
2개의 항원 결합 단백질, 또는 항체는, 만약 예를 들어, 이것들이 이들의 흡수 속도 및 정도가 유사한 실험 조건, 단일 용량 또는 다중 용량 하에서, 동일한 몰 용량으로 투여될 때 유의미한 차이를 나타내지 않는 제약학적 동등물 또는 제약학적 대체물이라면 생물학적으로 동등한 것으로 간주된다. 일부 항체는 만약 이들이 그들의 흡수 속도에서가 아니라 흡수되는 정도에서 동등하다면 동등하거나 제약학적으로 대체물인 것으로 간주될 것이며 흡수 속도에서의 이러한 차이가 의도적이고 표지화를 반영하며, 에컨대 만성 사용시에 효과적인 신체 약물 농도의 달성에는 필수적인 것이 아니고, 연구된 특정 약물 제품에 대해서는 의학적으로 무의미한 것으로 여겨지기 때문에 아직은 생물학적으로 동등한 것으로 여겨질 수 있다.
한 구체예에서, 2개의 항원 결합 단백질은 만약 이것들이 그들의 안전성, 순도, 및 효능에서 임상적으로 의미있는 차이가 아니라면 생물학적으로 동등하다.
한 구체예에서, 2개의 항원 결합 단백질은 만약 환자가 참조 제품과 생물학적 제품 사이에서 전환 없이 계속된 치료법과 비교하여, 면역원성의 임상적으로 유의한 변화, 또는 감소된 유효성을 포함하여 예상되는 부작용의 증가 없이 한 번 이상 전환할 수 있다면 생물학적으로 동등하다.
한 구체예에서, 2개의 항원 결합 단백질은 만약 그것들이 둘 다 사용 조건 또는 사용 조건들에 대해 공통 메커니즘 또는 작용 메커니즘에 의해 작용하고, 그러한 메커니즘이 어느 정도 알려져 있다면 생물학적으로 동등하다.
생물학적 동등성은 생체내 및/또는 시험관내 방법에 의해 증명될 수 있다. 생물학적 동등성 척도로는, 예컨대, (a) 항체 또는 이것의 대사산물의 농도가 혈액, 혈장, 혈청, 또는 다른 생물학적 유체에서 시간의 함수로서 측정되는, 인간 또는 다른 포유류에서의 생체내 테스트; (b) 인간 생체내 생체이용성 데이터와 상관이 있고 타당하게 인간 생체내 생체이용성 데이터를 예측할 수 있는 시험관내 테스트; (c) 항체 (또는 이것의 표적)의 적절한 급성 약물학적 효과가 시간의 함수로서 측정되는 인간 또는 다른 포유류에서의 생체내 테스트; 및 (d) 항체의 안전성, 효능, 또는 생체이용성 또는 생물학적 동등성을 확립하는 잘 제어된 임상 실험을 포함한다.
발명의 항체의 생물학적으로 동등한 변이체는, 예를 들어, 잔기 또는 서열의 다양한 치환을 만들거나 또는 생물학적 활성에 필요하지 않은 말단 또는 내부 잔기 또는 서열을 삭제함으로써 구성될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기는 회복시 불필요한 또는 부정확한 분자내 이황화 가교의 형성을 방지하기 위하여 삭제되거나 다른 아미노산으로 대체될 수 있다. 다른 맥락으로, 생물학적으로 동등한 항체는 항체의 글리코실화 특징을 변형시키는 아미노산 변화, 예컨대, 글리코실화를 없애거사 제거하는 돌연변이를 포함하는 항체 변이체를 포함할 수 있다.
항체의 생물학적 특징
일반적으로, 본 발명의 항체는 Bet v 1, Bet v 1의 단편, 또는 Bet v 1과 하나 이상의 참나무 알레르겐 또는 참나무 관련 알레르겐에 결합함으로써 기능할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 항체는 Bet v 1 단백질 내에 위치한 에피토프 또는 단편, 예를 들어, SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프 또는 단편; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 56 범위의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프 또는 단편; SEQ ID NO: 306의 약 2 내지 약 19 범위의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프 또는 단편; SEQ ID NO: 306의 약 57 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프 또는 단편; 또는 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 89 또는 약 81 내지 약 96 범위의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프 또는 단편에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항체는 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 311, 및 315로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열에 결합할 수 있고, 여기서 에피토프 서열은 C-말단부 또는 N-말단부에서 1 내지 5개 아미노산, 또는 약 5 내지 약 10개 아미노산만큼 연장될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 항체는 Bet v 1 알레르겐에 민감한 환자에서 비만 세포 또는 호염기성 세포에 대한 IgE의 결합을 차단하거나 억제함으로써 기능할 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 아이소타입 대조군 항체와 비교할 때, 예를 들어, 적어도 약 70%만큼 호염기세포 활성화를 억제 또는 차단한다. 특정 구체예에서, 항체는 아이소타입 대조군 항체와 비교할 때, 예를 들어, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 85%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%만큼 비만 세포 탈과립화를 억제 또는 차단한다.
한 구체예에서, 발명은 Bet v 1에 결합하는 전체 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 이것의 단편은 다음의 특징 중 하나 이상을 나타낸다: (i) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCVR, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (ii) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCVR, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (iii) SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 288, 및 296으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR3 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 및 SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 및 304로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR3 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (iv) SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 284, 및 292로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR1 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 286, 및 294로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR2 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 및 300으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR1 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 및 SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 및 302로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR2 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (v) Bet v 1에 10-8 이하의 및 약 10-8 내지 약 10-11의 범위의 KD로 결합하거나; (vi) 아나필락시스 또는 염증의 적어도 하나의 동물 모델에서 효능이 입증되거나; 또는 (vii) Bet v 1에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경합한다.
한 구체예에서, 발명은 조성물의 제조를 위한, 발명의 둘 이상의 전체 인간 항체, 또는 이것의 단편의 조합의 용도를 제공하며, 여기서 조성물에 함유된 각 항체 또는 이것의 단편은 다음의 특징 중 하나 이상을 나타낸다: (i) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 282, 및 290로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCVR, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (ii) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 및 298로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCVR, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (iii) SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 288, 및 296으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR3 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 및 SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 및 304로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR3 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (iv) SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 284, 및 292로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR1 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 286, 및 294로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 HCDR2 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 및 300으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR1 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 및 SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 및 302로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산을 가지는 LCDR2 도메인, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하거나; (v) Bet v 1에 10-8 이하의 및 약 10-8 내지 약 10-11의 범위의 KD로 결합하거나; (vi) 아나필락시스 또는 염증의 적어도 하나의 동물 모델에서 효능이 입증되거나; 또는 (vii) Bet v 1에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경합한다.
본 발명의 특정 Bet v 1 항체는, 단독으로, 또는 조합되어 사용될 때, 시험관내 또는 생체내 검정에 의해 측정되는 바, Bet v 1에 결합하고 그것의 적어도 하나의 생물학적 영향을 중화할 수 있다. BeT v 1에 결합하고 그것의 활성을 중화하는 항체의 능력은 본원에서 기술되는 바 결합 검정, 또는 활성의 중화 (아나필락시스로부터의 보호) 검정을 포함하여 당업자들에게 알려져 있는 임의의 표준 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
결합 활성을 측정하기 위한 비제한적, 예시적인 시험관내 검정은 본원의 실시예 3에서 예시된다. 실시예 3에서, 인간 항-Bet v 1 항체의 결합 친화성 및 동역학 상수는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되었다.
Bet v 1 단백질 또는 펩타이드는 담체 분자, 예컨대 KLH에 대한 태깅을 위해 또는 콘쥬게이션 목적으로 특정 잔기의 첨가 또는 치환을 포함하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 시스테인이 펩타이드의 N 말단부 또는 C 말단부에 첨가될 수 있거나, 또는 링커 서열이 면역화를 위해, 예를 들어, KLH에 콘쥬게이션되기 위한 펩타이드를 제조하기 위해 첨가될 수 있다. Bet v 1에 특이적인 항체는 부가적인 표지 또는 모이어티를 함유하지 않을 수 있고, 또는 그것들은 N-말단 또는 C-말단 표지 또는 모이어티를 함유할 수 있다. 한 구체예에서, 표지 또는 모이어티는 비오틴이다. 결합 검정에서, 표지 (있다면)의 위치는 펩타이드가 결합될 때 표면에 대해 펩타이드의 방향을 결정할 수 있다. 예를 들어, 만약 표면이 아비딘으로 코팅되면, N-말단 비오틴을 함유한 펩타이드는 펩타이드의 C-말단 부분이 표면에서 멀어지도록 배향될 것이다.
에피토프 매핑 및 관련 기술
본원에서 사용되는 바, 용어 "에피토프"는 파라토프로서 알려져 있는 항체 분자의 가변 영역에서 특이적 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원 결정기를 나타낸다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 그러므로, 상이한 항체는 항원의 상이한 구역에 결합할 수 있고 상이한 생물학적 영향을 나타낼 수 있다. 에피토프는 형태적이거나 선형일 수 있다. 형태적인 에피토프는 선형 폴리펩타이드 사슬의 상이한 분절로부터 공간적으로 병치된 아미노산에 의해 생성된다. 선형 에피토프는 폴리펩타이드 사슬에서 인접한 아미노산 잔기에 의해 생성된 것이다. 특정 상황에서, 에피토프는 항원 상의 당 모이어티, 포스포릴기, 또는 설포닐 기를 포함할 수 있다.
본원에는 예컨대, SEQ ID NO: 306에 제시된 Bet v 1의 임의의 단편을 포함한, Bet v 1 분자 내에서, 또는 재조합으로 제조된 Bet v 1 단백질의 비슷한 영역 내에서 발견되는 하나 이상의 아미노산과 상호작용하는 항-Bet v 1 항체가 제공된다. 항체가 결합하는 에피토프는 Bet v 1 분자 내에 위치한 3개 이상 (예컨대, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상)의 아미노산의 단일 연속 서열로 이루어질 수 있다. 예시적인 연속 서열로 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 38 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 41 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 26 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 29 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 45 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 5 내지 약 위치 10 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 5 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 8 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 11 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 66 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 84 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 85 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 89 범위의 아미노산 잔기를 들 수 있다. 추가의 예시적인 연속 서열은 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 311, 및 315로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 이러한 서열은 C-말단부 또는 N-말단부에서 약 1 내지 약 5개 아미노산, 또는 약 5 내지 약 10개 아미노산만큼 연장될 수 있다. 대안적으로, 에피토프는 Bet v 1 분자 내에 위치한 다수의 비연속성 아미노산 (또는 아미노산 서열)로 이루어질 수 있다 (예컨대 형태적 에피토프).
기술분야에서 통상의 지식을 가진 사람에게 알려져 있는 다양한 기법이 항체가 폴리펩타이드 또는 단백질 내에서 "하나 이상의 아미노산과 상호작용하는"지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 기법으로는, 예를 들어, 기본적인 교차 차단 검정, 예컨대 Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)에 기술된 것을 들 수 있다. 다른 방법으로 알라닌 주사 돌연변이 분석, 펩타이드 블롯 분석 (Reineke (2004) Methods Mol Biol 248:443-63), 펩타이드 절단 분석 결정학 연구 및 NMR 분석을 들 수 있다. 더불어, 에피토프 절단, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형이 사용될 수 있다 (Tomer (2000) Protein Science 9: 487-496). 항체와 상호작용하는 폴리펩타이드 내의 아미노산을 확인하기 위해 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분광계에 의해 감지된 수소/중수소 교환이다. 일반적으로 말하면, 수소/중수소 교환 방법은 관심의 단백질을 중수소로 표지화하고, 이어서 항체를 중수소-표지된 단백질에 결합시키는 것을 포함한다. 다음에, 단백질/항체 복합체를 물로 옮기면 항체 복합체에 의해 보호된 아미노산 내의 교환 가능한 양자가 계면 부분이 아닌 아미노산 내의 교환 가능한 양자보더 더 느린 속도로 중수소-대-수소 복귀 교환을 진행한다. 그 결과로서, 단백질/항체 계면의 부분을 형성하지 않는 아미노산은 중수소를 보유할 수 있고 그러므로 계면에 포함되지 않은 아미노산과 비교하여 상대적으로 더 높은 질량을 나타낸다. 항체의 해리 후에, 표적 단백질은 프로테아제 절단 및 질량 분광 분석이 수행되고, 그로써 항체와 상호작용하는 특이적 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기가 드러난다. 예컨대, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A 참조. 항원/항체 복합체의 X-선 결정학은 또한 에피토프 매핑 목적에 사용될 수 있다.
항원 구조-기반 항체 프로파일링 (ASAP)으로도 알려져 있는 변형-보조된 프로파일링 (MAP)은 화학적으로 또는 효소적으로 변형된 항원 표면에 대한 각 항체의 결합 프로파일의 유사성에 따라 동일한 항원에 대해 지시된 다수의 단클론성 항체(단클론성 항체)를 범주화하는 방법이다 (US 2004/0101920). 각 범주는 또 다른 범주에 의해 표시되는 에피토프와 뚜렷하게 상이하거나 부분적으로 중복되는 독특한 에피토프를 반영할 수 있다. 이런 기술은 유전적으로 동일한 항체의 신속한 필터링을 허용하여서, 특성화는 유전적으로 구별되는 항체에 집중될 수 있다. 하이브리도마 스크리닝에 적용될 때, MAP은 원하는 특징을 가지는 단클론성 항체를 생성하는 희귀한 하이브리도마 클론의 확인을 용이하게 할 수 있다. MAP은 발명의 항체를 상이한 에피토프에 결합하는 항체의 그룹으로 분류하기 위해 사용될 수 있다.
특정 구체예에서, 항-Bet v 1 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 306 또는 SEQ ID NO: 314 (Uniprot: P15494로부터의 Bet v 1 아미노산 서열)에 예시된 천연 또는 자연 형태의, 또는 재조합에 의해 제조된, Bet v 1 내의 에피토프, 또는 이것의 단편에 결합한다. 특정 구체예에서, 표 1에 나타낸 것과 같은, 발명의 항체는 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 38 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 41 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 26 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 29 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 45 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 5 내지 약 위치 10 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 5 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 8 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 11 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 66 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 84 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 85 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 89 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용한다. 이들 영역은 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 311 및 315에서 추가로 예시된다.
본 발명은 또한 본원의 표 1에 기술된 특정 예시 항체 중 임의의 것으로서, 동일한 에피토프, 또는 에피토프의 일부에 결합하는 항-Bet v 1 항체, 또는 표 1에 기술된 예시 항체 중 임의의 항체의 CDR 서열을 가지는 항체를 포함한다. 마찬가지로, 본 발명은 또한 Bet v 1 또는 Bet v 1 단편에 대한 결합에 대해 본원에서 표 1에 기술된 특정 예시 항체 중 임의의 항체와 경합하는 항-Bet v 1 항체, 또는 표 1에 기술된 예시 항체 중 임의의 항체의 CDR 서열을 갖는 항체를 포함한다.
당업자는 기술분야에 공지되어 있는 기본적인 방법을 사용함으로써 항체가 참조 항-Bet v 1 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지, 또는 결합에 대해 그것과 경합하는지를 쉽게 결정할 수 있다. 예를 들어, 테스트 항체가 발명의 참조 항-Bet v 1 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 결정하기 위하여, 참조 항체는 포화 조건 하에서 Bet v 1 단백질 또는 펩타이드에 결합하는 것이 허용된다. 다음에, 테스트 항체가 Bet v 1 분자에 결합하는 능력이 평가된다. 만약 테스트 항체가 참조 항-Bet v 1 항체와 포화 결합한 후에 Bet v 1에 결합할 수 있다면, 테스트 항체는 참조 항-Bet v 1 항체와 상이한 에피토프에 결합한다고 결론내릴 수 있다. 다른 한편으로, 만약 테스트 항체가 참조 항-Bet v 1 항체와 포화 결합한 후에 Bet v 1 분자에 결합할 수 없다면, 테스트 항체는 발명의 참조 항-Bet v 1 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
항체가 참조 항-Bet v 1 항체와 결합에 대해 경합하는지를 결정하기 위하여, 상기 기술된 결합 방법론이 두 방향으로 수행된다: 제1 방향으로, 참조 항체가 포화 조건 하에서 Bet v 1 분자에 결합되도록 허용되고 이어서 테스트 항체의 Bet v 1 분자에의 결합이 평가된다. 제2 방향으로, 테스트 항체가 포화 조건 하에서 Bet v 1 분자에 결합되도록 허용되고 이어서 참조 항체의 Bet v 1 분자에의 결합이 평가된다. 만약, 두 방향에서 모두, 제1 (포화) 항체만이 Bet v 1 분자에 결합할 수 있다면, 테스트 항체 및 참조 항체는 Bet v 1에의 결합에 대해 경함하는 것으로 결론지어진다. 기술분야의 통상적인 지식을 가진 사람에 의해 인지되는 것과 같이, 참조 항체와 결합에 대해 경합하는 항체는 반드시 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합할 필요는 없지만, 중복되는 또는 인접한 에피토프에 결합함으로써 참조 항체의 결합을 입체적으로 차단할 수 있다.
두 항체는, 만약 각각이 경합적으로 항원에 대한 다른 것의 결합을 억제 (차단)한다면 동일하거나 중복되는 에피토프에 결합한다. 즉, 한 항체의 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100-배 과잉량은 경합 결합 검정으로 측정되는 바 다른 항체의 결합을 적어도 50%, 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%만큼 억제한다 (예컨대, Junghans et al., Cancer Res. 1990 50:1495-1502 참조). 대안적으로, 두 항체는, 만약 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 항원에서의 본질적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거한다면 동일한 에피토프를 가진다. 두 항체는, 만약 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거한다면 중복되는 에피토프를 가진다.
그런 후에 부가적인 기본 실험 (예컨대, 펩타이드 돌연변이 및 결합 분석)이 테스트 항체의 관찰된 결합의 결핍이 실제로 참조 항체와 동일한 에피토프에 대한 결합으로 인한 것인지 또는 입체적 차단 (또는 또 다른 현상)이 관찰된 결합의 결핍의 원인인지를 확인하기 위해 수행될 수 있다. 이런 종류의 실험은 ELISA, RIA, 표면 플라즈몬 공명, 유동 세포분석 또는 기술분야에서 이용할 수 있는 임의의 다른 정성적 또는 정량적 항체 결합 검정을 사용하여 수행될 수 있다.
면역콘쥬게이트
발명은 치료 모이어티, 예컨대 Bet v 1 알레르겐에 대한, 또는 참나무가 존재하는 환경에서 알레르기 반응의 중증도를 감소시킬 수 있는, 또는 자작나무 꽃가루 또는 Bet v 1 알레르겐에 대한 노출과 관련된 적어도 하나의 증상, 이를테면 비염, 결막염, 또는 호흡 곤란, 또는 이것들의 중증도를 개선하기 위한 작용제와 콘쥬게이션된 인간 -Bet v 1 단클론성 항체 ("면역콘쥬게이트")를 포함한다. 이러한 작용제는 코르티코스테로이드, Bet v 1에 대한 제2 상이한 항체, 또는 백신일 수 있다. Bet v 1 항체에 콘쥬게이트될 수 있는 치료 모이어티의 유형은 치료될 상태 및 이루어져야 하는 원하는 치료 효과를 고려할 것이다. 대안적으로, 만약 원하는 치료 효과가 Bet v 1 알레르겐에 대한 노출과 관련된 후유증 또는 증상, 또는 이러한 노출로부터 유발된 임의의 다른 상태, 예컨대, 한정하는 것은 아니지만 비염 또는 결막염을 치료하는 것이라면, 상태의 후유증 또는 증상을 치료하기 위하여, 또는 발명의 항체의 임의의 부작용을 경감시키기 위하여 적절하에 작용제를 콘쥬게이트하는 것이 유익할 수 있다. 면역콘쥬게이트를 형성하기에 적합한 작용제의 실례는 당업계에 알려져 있고, 예를 들어, WO 05/103081을 참조한다.
치료적 투여 및 제제
발명은 본 발명의 항-Bet v 1 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 포함하는 치료 조성물을 제공한다. 발명에 따른 치료 조성물의 투여는 한정하는 것은 아니지만, 정맥내, 피하, 근육내, 비강내를 포함한 적합한 경로를 통해, 적합한 담체, 부형제, 및 개선된 이송, 전달, 내성, 등을 제공하기 위하여 제제로 통합되는 다른 작용제들과 함께 투여될 것이다. 다수의 적절한 제제를 모든 제약사에게 공지되어 있는 처방집: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA에서 찾아볼 수 있다. 이런 제제로는, 예를 들어, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질 (양이온성 또는 음이온성) 함유 소포 (예컨대 LIPOFECTINTM), DNA 콘쥬게이트, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀션, 에멀션 카보왁스 (다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔, 및 카보왁스를 함유한 반고체 혼합물을 들 수 있다. 또한 Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311을 참조한다.
항체의 용량은 투여될 환자의 연령 및 크기, 표적 질환, 상태, 투여 경로, 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 항체가 Bet v 1에 대한 민감성을 가진 개체에서 참나무로부터의 꽃가루, 또는 자작나무 꽃가루, 또는 Bet v 1에 대한 노출과 관련된 비염 또는 결막염을 치료하기 위해, 또는 참나무 알레르겐에 대한 아나필락시스 반응을 방지하기 위해, 또는 알레르기 반응의 중증도를 축소하기 위해 사용될 때, 본 발명의 항체를 보통 약 0.01 내지 약 30 mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3 mg/kg 체중의 단일 용량으로 정맥내로 투여하는 것이 유익하다. 상태의 중증도에 따라, 치료 빈도 및 기간이 조정될 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 적어도 약 0.1 mg 내지 약 800 mg, 약 1 내지 약 500 mg, 약 5 내지 약 300 mg, 또는 약 10 내지 약 200 mg, 내지 약 100 mg, 또는 내지 약 50 mg의 초기 용량으로서 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 초기 용량에는 초기 용량의 양과 대략적으로 동일하거나 적은 양의 제2 또는 다수의 후속 용량의 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 투여가 이어질 수 있고, 여기서 후속 용량은 적어도 1일 내지 3일; 적어도 1주; 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주만큼 분리된다.
다양한 전달 시스템, 예컨대 리포솜에의 캡슐화, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 돌연변이 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 세포내 이입 이 공지되어 있고 발명의 제약학적 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다 (예컨대, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 참조). 도입 방법으로는, 한정하는 것은 아니지만, 피내, 경피, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외 및 구강 경로를 들 수 있다. 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 라이닝 (예컨대 구강 점막, 직장 및 장 점막, 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고 다른 생물학적으로 활성인 작용제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신적이거나 국소적일 수 있다.
제약학적 조성물은 또한 소낭, 특히 리포솜으로 전달될 수 있다 (예를 들어, Langer, 1990, Science 249: 1527-1533 참조).
특정 상황에서, 제약학적 조성물은 제어된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 한 구체예에서, 펌프가 사용될 수 있다. 다른 구체예에서, 중합체 물질이 사용될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 제어된 방출 시스템은 조성물의 표적 가까이에 배치될 수 있고, 그로써 전신성 용량의 부분만을 필요로 한다.
주사용 조제물은 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입, 등을 위한 투여 형태를 포함할 수 있다. 이들 주사용 조제물은 공공연하게 공지되어 있는 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사용 조제물은, 예컨대 상기 기술된 항체 또는 이것의 염을 전통적으로 주사용으로 사용된 멸균된 수성 매질 또는 유성 매질에 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조될 수 있다. 주사용 수성 매질로서는, 예를 들어, 생리 식염수, 글루코오스 및 다른 보조 작용제를 함유한 등장성 용액이 있고, 이것들은 알코올 (예컨대, 에탄올), 다가알코올 (예컨대, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제 [예컨대, 폴리소르베이트 80, HCO-50 (수소화된 피마자유의 폴리옥시에틸렌 (50 mol) 부가물)], 등과 같은 적절한 가용화제와 조합되어 사용될 수 있다. 유성 매질로서는, 예컨대 참깨 기름, 대두유, 등이 사용될 수 있고, 이것들은 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올, 등과 같은 가용화제와 조합되어 사용될 수 있다. 그렇게 제조된 주사액은 바람직하게는 적절한 앰풀에 채워진다.
본 발명의 제약학적 조성물은 표준 바늘 및 주사기로 피하로 또는 정맥내로 전달될 수 있다. 더불어, 피하 전달과 관련하여, 펜(pen) 전달 장치가 본 발명의 제약학적 조성물을 전달하는 데 쉽게 사용된다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용할 수 있거나 일회용일 수 있다. 재사용할 수 있는 펜 전달 장치는 일반적으로 제약학적 조성물을 함유한 교체형 카트리지를 활용한다. 일단 카트리지 내의 모든 제약학적 조성물이 투여되고 카트리지가 비워진 후에, 빈 카트리지는 쉽게 버려지고 제약학적 조성물을 함유한 새로운 카트리지로 교체될 수 있다. 그런 후 펜 전달 장치가 재사용될 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에서는, 교체형 카트리지가 없다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내 저장소에 보유된 제약학적 조성물로 사전에 채워진다. 저장소에서 제약학적 조성물이 비워지게 된 후에, 전체 장치가 버려진다.
수많은 재사용 가능한 펜 및 자동주사기 전달 장치가 본 발명의 제약학적 조성물의 피하 전달에서 사용된다. 실례로는, 특히 한정하는 것은 아니지만, 몇 가지 언급하자면, AUTOPENTM (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONICTM 펜 (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25TM 펜, HUMALOGTM 펜, HUMALIN 70/30TM 펜 (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPENTM I, II 및 III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIORTM (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BDTM 펜 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPENTM, OPTIPEN PROTM, OPTIPEN STARLETTM, 및 OPTICLIKTM (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)을 들 수 있다. 본 발명의 제약학적 조성물의 피하 전달에 사용될 수 있는 일회용 펜 전달의 실례로는, 특별히 한정하는 것은 아니지만, 몇 가지 언급하자면 SOLOSTARTM 펜 (sanofi-aventis), FLEXPENTM (Novo Nordisk), 및 KWIKPENTM (Eli Lilly), SURECLICKTM 자동주사기 (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLETTM (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) 및 HUMIRATM 펜 (Abbott Labs, Abbott Park, IL)을 들 수 있다.
유익하게, 상기 기술된 경구 또는 비경구 사용을 위한 제약학적 조성물은 활성 성분의 용량을 맞추기에 적합한 단위 용량의 투여 형태, 예를 들어, 정제, 환, 캡슐, 주사액 (앰풀), 좌제, 등으로 제조된다. 함유된 상기 항체의 양은 일반적으로 단위 용량의; 특히 주사 형태의 투여 형태당 약 5 내지 약 500 mg이고, 상기 항체는 약 5 내지 약 100 mg 및 다른 투여 형태의 경우 약 10 내지 약 250 mg으로 함유된다.
항체의 치료적 용도
Bet v 1과의 상호작용으로 인해, 본 항체는 참나무 알레르겐, 자작나무 꽃가루에, 또는 Bet v 1 단백질을 함유한 환경에 개체가 노출된 후의 1차 반응, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상, 예컨대 가려운 눈, 결막염, 비염, 천명, 호흡 곤란을 치료하는 데, 또는 보다 중증의 아나필락시스 반응을 포함하여, Bet v 1 알레르겐에 대한 2차 반응을 방지하는 데, 또는 참나무 알레르겐에 대한 재노출 후에 증상의 중증도, 기간, 및/또는 빈도를 축소시키는 데 유용하다. 따라서, 본 발명의 항체는 예방적으로 또는 치료적으로 사용될 수 있는 것으로 예상된다.
발명의 추가의 구체예에서 본 항체는 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물 및/또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성을 겪고 있는 환자를 치료하기 위한 제약학적 조성물의 제조를 위해 사용된다. 발명의 또 다른 구체예에서 본 항체는 Bet v 1에 대한 1차 노출의 중증도를 감소시키기 위한, 또는 Bet v 1에 대한 알레르기 반응의 중증도, 기간, 및/또는 반응 횟수를 감소시키기 위한 제약학적 조성물의 제조를 위해 사용된다. 발명의 추가의 구체예에서 본 항체는 코르티코스테로이드, 백신, 알레르겐 특이적 면역요법 (SIT), 또는 당업자들에게 알려져 있는 임의의 다른 완화 요법을 포함한, 참나무 알레르겐을 치료하기에 유용한 임의의 다른 작용제와 함께 보조 요법으로서 사용된다.
병용 요법
병용 요법은 발명의 항-Bet v 1 항체 및 발명의 항체와, 또는 발명의 항체의 생물학적으로 활성인 단편과 유익하게 조합될 수 있는 임의의 부가적인 치료제를 포함할 수 있다.
예를 들어, 제2 치료제, 예컨대 코르티코스테로이드는 참나무 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1에 대한 노출 후, 또는 참나무가 있어서 꽃을 피우는 환경에 대한 노출 후의 알레르기 증상을 감소시키는 데 보조하기 위해 사용될 수 있다. 항체는 또한 다른 치료제, 예컨대 Bet v 1 알레르겐에 특이적인 백신과 함께 사용될 수 있다. 부가적인 치료적으로 활성인 성분(들)은 본 발명의 항-Bet v 1 항체의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 본 개시의 목적에 대해, 이러한 투여 양생법은 제2 치료적으로 활성인 성분"과 함께" 항-Bet v 1 항체의 투여인 것으로 여겨진다.
알레르겐-특이적 면역요법 (SIT)
본원에서 사용되는 바, "알레르겐-특이적 면역요법", "특이적 면역요법", "SIT", "SIT 양생법" 등의 표현은 알레르기 및 알레르기 반응을 치료 또는 방지하기 위한, 또는 알레르기 반응을 감소 또는 제거하기 위한 수단으로서 시간 경과에 따라 환자에게 알레르겐을 반복적으로 투여하는 것을 나타낸다. 전형적인 SIT 양생법에서, 소량의 알레르겐이 처음에 알레르기 환자에게 투여된 후, 증가하는 양의 알레르겐이 투여된다. 특정 경우에, SIT 양생법은 적어도 2가지 연속적인 단계를 가진다: (1) 용량 증가 단계, 및 (2) 유지 단계. 용량 증가 단계에서는, 증가하는 용량의 알레르겐이 효과적이고 안전한 용량이 이루어질 때까지 투여된다. 용량 증가 단계가 끝날 때에 확립된 용량은 그런 후에 유지 단계의 전 과정을 통해 환자에게 투여된다. 용량 증가 단계의 기간은 수주 내지 수개월일 수 있다. 그러나, 특정 구체예에서, 용량 증가 단계는 실질적으로 더 짧은 기간이다 (예컨대, 1주일 미만, 6일 미만, 5일 미만, 4일 미만, 3일 미만, 또는 2일 미만). 5일 미만의 용량 증가 단계를 포함하는 SIT 양생법은 때때로 "급속" 면역요법 또는 "급속 SIT"로서 언급된다. SIT 양생법의 유지 단계는 수주, 수개월, 수년, 또는 무한정 계속될 수 있다.
투여 양생법
본 발명의 특정 구체예에 따르면, 다중 용량의 하나 이상의 항-Bet v 1 항체 (항체 조합)가 정해진 시간 과정에 걸쳐 환자에게 투여될 수 있다. 발명의 이런 측면에 따르는 방법은 환자에게 다중 용량의 항체, 항체 조합을 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 본원에서 사용되는 바, "순차적으로 투여하는 것"은 각 용량의 항체 또는 항체 조합이 환자에게 상이한 시점에, 예컨대, 예정된 간격 (예컨대, 시간, 일, 주 또는 개월)으로 떨어져 있는 다른 날에 투여되는 것을 의미한다. 본 발명은 단일 초기 용량의 항체 또는 항체 조합을 환자에게 투여한 후에 하나 이상의 2차 용량의 항체, 및 선택적으로 이어서 하나 이상의 3차 용량의 항체를 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 방법을 포함한다.
용어 "초기 용량", "제2 용량", 및 "제3 용량"은 본원에 제공된 항체 또는 항체 조합의 투여의 시간적인 순서를 나타낸다. 그러므로, "초기 용량"은 치료 양생법을 시작할 때 투여된 용량이고 (또한 "기준선 용량"으로서 언급되기도 함); "2차 용량"은 초기 용량 후에 투여된 용량이며; "3차 용량"은 2차 용량 후에 투여된 용량이다. 초기, 2차, 및 3차 용량은 모두 동일한 양의 항체 또는 항체 조합을 함유할 수 있지만 일반적으로 투여 빈도의 관점에서는 서로 다를 수 있다. 그러나, 특정 구체예에서, 초기, 2차 및/또는 3차 용량에 함유된 항체 또는 항체 조합의 양은 치료 과정 중에는 서로 다르다 (예컨대, 적절하게 상향 또는 하향 조정됨). 특정 구체예에서, 둘 이상 (예컨대, 2, 3, 4, 또는 5)의 용량이 치료 양생법을 시작하기 전에 "로딩 용량"으로서 투여되고 이어서 덜 빈번한 기준으로 후속 용량이 투여된다 (예컨대, "유지 용량").
본 발명의 한 예시적인 구체예에서, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 직전 용량 후 1 내지 26주 후에 (예컨대, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½ 주 후, 또는 그 이상 후에) 투여된다. 본원에서 사용되는 바, 구절 "직전 용량"은 다수의 투여의 순서에서, 순서 상 개재하는 용량 없이 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여된 항체 또는 항체 조합의 용량을 의미한다.
발명의 이 측면에 따르는 방법은 항체 또는 항체 조합의 임의의 수의 2차 및/또는 3차 용량을 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 단일 2차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구체예에서, 둘 이상 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 그 이상)의 2차 용량이 환자에게 투여된다. 마찬가지로, 특정 구체예에서, 단일 3차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구체예에서, 둘 이상 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 그 이상)의 3차 용량이 환자에게 투여된다.
다수의 2차 용량을 포함하는 구체예에서, 각각의 2차 용량은 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 2차 용량은 직전 용량 후 1 내지 2주 후에 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, 다수의 3차 용량을 포함하는 구체예에서, 각각의 3차 용량은 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 3차 용량은 직전 용량 후 2 내지 4주 후에 환자에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 환자에게 투여되는 2차 및/또는 3차 용량은 치료 양생법 과정에 걸쳐 다를 수 있다. 투여의 빈도는 또한 치료 과정 중에 임상 검사 후에 개별 환자의 필요에 따라 의사에 의해 조절될 수 있다.
항체의 진단 용도
본 발명의 항-Bet v 1 항체는 또한, 예컨대, 진단 목적으로, 샘플 중의 Bet v 1을 검출 및/또는 측정하기 위하여 사용될 수 있다. Bet v 1에 의해 유발되는 것으로 여겨지는 알레르기 반응의 확인은 발명의 임의의 하나 이상의 항체의 사용을 통하여 어느 하나의 Bet v 1의 존재를 측정함으로써 이루어질 수 있다. Bet v 1에 대한 예시적인 진단 검정으로, 예컨대, 환자로부터 얻어진 샘플을 발명의 항-Bet v 1 항체와 접촉시키는 것을 들 수 있고, 여기서 항-Bet v 1 항체는 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되거나 또는 환자 샘플로부터 Bet v 1 단백질을 선택적으로 분리하기 위한 포획 리간드로서 사용된다. 대안적으로, 미표지 항-Bet v 1 항체가, 자체가 검출 가능하게 표지되는 2차 항체와 함께 진단 적용에 사용될 수 있다. 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자는 방사성 동위원소, 예컨대 3H, 14C, 32P, 35S, 또는 125I; 형광 또는 화학발광 모이어티, 예컨대 플루오레세인 이소티오시아네이트, 또는 로다민; 또는 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 양고추냉이 과산화효소, 또는 루시페라제와 같은 효소일 수 있다. 샘플 중의 Bet v 1을 검출 또는 측정하기 위해 사용될 수 있는 특정 예시의 검정은 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA), 방사성면역검정 (RIA), 및 형광-활성화 세포 분류 (FACS)를 들 수 있다.
본 발명에 따라 Bet v 1 진단 검정에 사용될 수 있는 샘플은 환자로부터 얻어질 수 있는 임의의 조직 또는 유체 샘플을 포함하며, 정상적인 또는 병리적 조건 하에서 검출가능한 양의 Bet v 1 단백질, 또는 이것의 단편을 함유한다. 일반적으로, 건강한/비알레르기 환자 (예컨대, Bet v 1의 존재와 결부된 민감성으로 영향을 받지 않는 환자)로부터 얻어진 특정 샘플 중의 Bet v 1의 수준은 Bet v 1의 기준선, 또는 표준, 수준을 초기에 확립하기 위해 측정될 것이다. Bet v 1의 이 기준선 수준은 그런 후 자작나무 꽃가루의 Bet v 1에 대해 민감성, 또는 이러한 상태와 관련된 증상을 가진 것으로 의심되는 개체로부터 얻어진 샘플에서 측정된 Bet v 1의 수준과 비교될 수 있다.
발명이 다양한 구체예를 참조로 특별히 제시되고 기술되었지만, 당업자들에 의해 본원에 개시된 다양한 구체예에 대한 형태 및 상세한 내용에서의 변화가 발명의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 이루어질 수 있고 본원에 개시된 다양한 구체예가 청구범위의 범주에 대한 제한으로서 작용하도록 의도되지 않은 것이 인지될 것이다.
실시예
다음의 실시예는 발명의 방법 및 조성물을 제조 및 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 기술분야에 통상적인 지식을 가진 사람들에게 제공하기 위하여 제시되며, 본 발명자들이 그들의 발명으로서 간주한 것의 범주를 제한하려는 의도가 아니다. 사용된 숫자 (예컨대, 양, 온도, 등)와 관련하여 정확도를 보장하려는 노력이 기울여졌지만 일부 실험적 오차 및 편차가 있을 것이다. 다르게 표시되지 않는 한, 부는 중량에 의한 부이며, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이며, 압력은 대기압 또는 거의 대기압이다.
실시예 1: 인간 항체 to Bet v 1에 대한 인간 항체의 생성
다음 중 임의의 하나를 포함하는 면역원을 Bet v 1에 대한 항체를 생성하기 위해 사용할 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 항체를, 1차 면역원, 예컨대 상업적으로 구입할 수 있는 (예컨대, 미국 노스 캐롤라이나 르노어 소재의 Stallergenes Greer로부터, # XP527D3A25), 또는 자작나무 꽃가루로부터 분리된 (예를 들어, Buters, et al. (2012), Atomospheric Environment 55:496-505 참조), 또는 재조합으로 제조될 수 있는 (Bet v 1의 전장 아미노산 서열에 대해 GenBank accession number P 15494 참조) 전장 천연 Bet v 1 (nBet v 1), 또는 Bet v 1 단백질의 단편으로 면역화된 후, 2차 면역원으로 면역화된, 또는 천연 단백질의 면역원적으로 활성인 단편으로 면역화된 마우스로부터 얻는다. 다양한 구성물을, 당업자들에게 알려져 있는 Bet v 1 단백질의 부분들을 사용하여 제조할 수 있다. 이들 구성물은 생체내에서 항체 반응을 유도하기 위하여 단독으로, 또는 다양한 조합으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 재조합 Bet v 1 구성물, 예컨대 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 311, 및 315, 또는 이것들의 단편으로 예시된 것들이 면역원으로서 사용될 수 있다.
특정 구체예에서, 발명의 항체를 1차 면역원, 예컨대 천연 Bet v 1의 생물학적으로 활성인 및/또는 면역원성 단편, 또는 이것의 활성 단편을 암호화하는 DNA로 면역화된 마우스로부터 얻는다. 단편은 Bet v 1의 N-말단 또는 C-말단 부분으로부터 유래될 수 있다.
특정 구체예에서, 본원에서 기술된 연구에서 사용된 재조합 Bet v 1 단백질 구성물은 또한 하기에서 표시된 바와 같이 C-말단 태그 (myc-myc-헥사히스티딘 태그)를 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 재조합 Bet v 1 단백질 구성물은 Uniprot P15494의 아미노산 G2 내지 N160을 포함한다. 일부 구체예에서, 구성물은 S85A 치환을 포함한다. 단백질을 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 발현시켰다. CHO 세포에서 발현을 촉진시키기 위해 사용한 외인성 신호 서열은 서열 목록에 포함되지 않는다.
특정 구체예에서, 면역원은 다음 중 임의의 하나 이상을 포함하는 Bet v 1 단편 또는 융합 단백질일 수 있다: i) Bet v 1의 아미노산 잔기 23 내지 43 (Uniprot P15494 및 또한 SEQ ID NO: 307 참조); ii) Bet v 1의 아미노산 잔기 44 내지 56 (Uniprot P15494 및 또한 SEQ ID NO: 308 참조); iii) Bet v 1의 아미노산 잔기 2 내지 19 (Uniprot P15494 및 또한 SEQ ID NO: 309 참조); iv) Bet v 1의 아미노산 잔기 57 내지 70 (Uniprot P15494 및 또한 SEQ ID NO: 310 참조); v) Bet v 1의 아미노산 잔기 81 내지 89 (Uniprot P15494 및 또한 SEQ ID NO: 311 참조) 및 vi) Bet v 1의 아미노산 잔기 81 내지 96 (Uniprot P15494 및 또한 SEQ ID NO: 315 참조).
특정 구체예에서, Bet v 1에 특이적으로 결합하는 항체는 상기 주지된 영역의 단편, 또는 본원에 기술된 영역의 N 또는 C 말단부 중 어느 하나 또는 둘 다로부터 약 5 내지 약 20개 아미노산 잔기만큼 지정된 영역을 지나 연장된 펩타이드를 사용하여 제조할 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 주지된 영역 또는 그것의 단편의 임의의 조합을 Bet v 1 특이적 항체의 제조에 사용할 수 있다. 특정 구체예에서, Bet v 1의 임의의 하나 이상의 상기 주지된 영역, 또는 그것의 단편을 단일특이적, 이중특이적, 또는 다중특이적 항체를 제조하는 데 사용할 수 있다.
상기 주지된 바와 같이, 면역원으로서 사용된 전장 단백질, 또는 그것의 단편을 직접, 면역 반응을 자극하기 위한 보조제와 함께, 인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 VELOCIMMUNE® 마우스에 투여하였다.
항-Bet v 1 항체를 미국 특허 제 7,582,298호에 기술된 것과 같이, 골수종 세포에 대한 융합이 없는 항원-양성 B 세포로부터 직접 분리하였다. 이 방법을 사용하여, 여러 전체 인간 항-Bet v 1 항체 (즉, 인간 가변 도메인 및 인간 불변 도메인을 가진 항체)를 얻었다; 이 방식으로 생성된 예시의 항체를 다음과 같이 지정하였다: H4H16943P, H4H16946P, H4H16950P, H4H16960P, H4H16967P, H4H16971P, H4H16979P, H4H16987P, H4H16991P, H4H16992P, H4H17001P, H4H17015P, H4H17027P, H4H17028P, H4H17031P, H4H17033P, H4H17038P2, H4H17045P2, H4H17067P2, 및 H4H17082P2.
이 실시예의 방법에 따라 생성한 예시적인 항체의 생물학적 특성을 하기 제시하는 실시예에서 상세하게 기술한다.
실시예 2: 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열
표 1a는 선택된 항-Bet v 1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR의 아미노산 서열 식별자를 제공한다. 표 1b는 선택된 항-Bet v 1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR의 핵산서열 식별자를 제공한다.
Figure pat00001
Figure pat00002
Figure pat00003
항체를 본원에서 전형적으로 다음의 명명법에 따라 언급한다: Fc 접두사 (예컨대 "H4H," "H2M," 등), 이어서 숫자 식별자 (예컨대 표 1에 나타낸 것과 같이 "16943," "17001," 등), 이어서 "P" 또는 "P2" 접미사. 본원에서 사용된 항체 명칭에서 H4H 및 H2M 접두사는 항체의 특정 Fc 영역 아이소타입을 나타낸다. 그러므로, 이 명명법에 따르면, "H4H"가 항체가 인간 IgG4 Fc를 가지는 것을 표시하기 때문에, 항체는 본원에서, 예컨대, "H4H16943P", 등으로서 언급될 수 있다 (모든 가변 영역은 항체 명칭에서 첫 번째 'H'에 의해 지정되는 전체 인간임). 당업자에 의해 인지되는 것과 같이, 특정 Fc 아이소타입을 갖는 항체는 상이한 Fc 아이소타입을 가지는 항체로 전환될 수 있지만 (예컨대, 인간 IgG1 Fc를 가진 항체는 인간 IgG4를 가지는 항체로 전환될 수 있음, 등등), 임의의 경우에, 가변 도메인 (CDR을 포함함) - 표 1에 나타낸 숫자 식별자에 의해 표시됨 - 은 동일하게 유지될 것이고, 항원에 대한 결합 특성은 Fc 도메인의 성질과 무관하게 동일한 또는 실질적으로 유사한 것으로 예상된다.
표 1c는 선택된 항-Bet v 1 항체의 전장 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 식별자를 제공한다.
Figure pat00004
실시예 3: 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 Bet v 1에 대한 항체 결합
정제된 항-Bet v 1 단클론성 항체에 대한 천연 Bet v 1 결합에 대한 평형 해리 상수 (KD)를 Biacore 4000 기기에서 실시간 표면 플라즈몬 공명 바이오센서 (SPR-Biacore)를 사용하여 측정하였다. 모든 결합 연구를 25℃ 및 37℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH 7.4 (HBS-ET) 작동 완충액에서 수행하였다. Biacore CM5 센서 표면을, 후속적으로 항-Bet v 1 단클론성 항체를 포획하기 위하여 먼저 단클론성 마우스 항-인간 Fc 항체 (GE, # BR-1008-39)와의 아민 커플링에 의하여 유도체화하였다. 상이한 농도의 천연 Bet v 1 (Indoor, Cat# NA-BV1-1) 또는 C-말단 myc-myc 헥사히스티딘 태그 시약으로의 S85A 돌연변이를 함유한 CHO 제조된 재조합 Bet v 1 (돌연변이 Bet v 1-MMH; SEQ ID NO: 312)을 먼저 HBS-ET 작동 완충액 (100nM - 1.23nM; 연속적으로 3-배 희석됨)에서 제조하고 항-인간 Fc 포획된 항-Bet v 1 단클론성 항체 표면 위로 4분 동안 30μL/분의 유량으로 주입하는 한편, 단클론성 항체 결합된 Bet v 1 시약의 해리를 10분 동안 HBS-ET 작동 완충액에서 모니터링하였다. 회합 (k a ) 및 해리 (k d ) 속도 상수를 실시간 결합 센소그램을 Scrubber 2.0c 곡선-맞춤 소프트웨어를 사용하는 질량 이동 제한을 포함한 1:1 결합 모델에 맞춤으로써 측정하였다. 결합 해리 평형 상수 (KD) 및 해리성 반감기 (t½)를 다음과 같이 동역학적 속도 상수로부터 계산하였다:
KD =
Figure pat00005
, 및 t½ =
Figure pat00006
.
25℃ 및 37℃에서 발명의 상이한 항-Bet v 1 단클론성 항체에 대한 천연 Bet v 1 및 돌연변이 Bet v 1-MMH에 대한 결합 동역학 파라미터를 표 2 내지 표 5에 나타낸다.
25℃에서, 발명의 모든 항-Bet v 1 단클론성 항체는 표 2에 나타낸 것과 같이, 0.66 nM 내지 13.5 nM 범위의 KD 값으로 천연 Bet v 1에 결합하였다. 37℃에서, 발명의 모든 항-Bet v 1 단클론성 항체는 표 3에 나타낸 것과 같이, 1.59 nM 내지 27.9 nM 범위의 KD 값으로 천연 Bet v 1에 결합하였다. 25℃ 및 37℃ 두 온도에서 모두 아이소타입 대조군 항체는 천연 Bet v 1에 대해 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃ 및 37℃ 두 온도에서 모두, 발명의 20개의 항-Bet v 1 단클론성 항체 중 3개가 돌연변이 Bet v 1-MMH에 결합하지 못하였다. 25℃에서, 20개의 항-Bet v 1 단클론성 항체 중 17개가 표 4에서 나타낸 것과 같이, 348 pM 내지 43.8 nM 범위의 KD 값으로 돌연변이 Bet v 1-MMH에 결합하였다. 37℃에서, 20개의 항-Bet v 1 단클론성 항체 중 17개가 표 5에서 나타낸 것과 같이, 655 pM 내지 106 nM 범위의 KD 값으로 돌연변이 Bet v 1-MMH에 결합하였다. 25℃ 및 37℃ 두 온도에서 모두 아이소타입 대조군 항체는 돌연변이 Bet v 1-MMH에 대해 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 결합하는 천연 Bet v 1의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 천연 Bet v 1 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 346 ± 1.5 71 1.64E+05 2.30E-04 1.40E-09 50
H4H16946P 355 ± 1.8 74 2.05E+05 2.01E-04 9.82E-10 58
H4H16950P 357 ± 2.3 58 9.61E+04 5.03E-04 5.23E-09 23
H4H16960P 342 ± 2.2 57 4.22E+05 6.90E-04 1.64E-09 17
H4H16967P 332 ± 0.9 27 3.76E+04 1.49E-04 3.98E-09 77
H4H16971P 343 ± 0.5 57 2.40E+05 7.81E-04 3.26E-09 15
H4H16979P 295 ± 0.8 41 2.30E+05 2.78E-04 1.21E-09 42
H4H16987P 334 ± 0.5 61 4.10E+05 1.14E-03 2.77E-09 10
H4H16991P 313 ± 0.4 57 2.95E+05 3.12E-04 1.06E-09 37
H4H16992P 351 ± 0.7 64 3.73E+05 2.48E-04 6.65E-10 47
H4H17001P 352 ± 0.6 71 3.29E+05 3.29E-04 1.00E-09 35
H4H17015P 370 ± 0.7 68 1.84E+05 2.46E-04 1.34E-09 47
H4H17027P 340 ± 0.6 48 6.24E+04 2.70E-04 4.32E-09 43
H4H17028P 350 ± 0.7 63 2.81E+05 1.07E-03 3.79E-09 11
H4H17031P 335 ± 0.7 54 1.24E+05 1.68E-03 1.35E-08 6.8
H4H17033P 336 ± 0.4 61 3.94E+05 4.69E-04 1.19E-09 25
H4H17038P2 324 ± 0.9 64 2.77E+05 3.64E-04 1.32E-09 32
H4H17045P2 368 ± 0.9 69 1.22E+05 1.49E-04 1.22E-09 78
H4H17067P2 344 ± 0.5 58 1.13E+05 4.02E-04 3.56E-09 29
H4H17082P2 366 ± 0.6 72 5.45E+05 5.97E-04 1.09E-09 19
아이소타입 대조군 345 ± 0.5 1 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
37℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 결합하는 천연 Bet v 1의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 천연 Bet v 1 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 451 ± 2.7 88 2.60E+05 1.27E-03 4.89E-09 9.1
H4H16946P 469 ± 2.6 93 2.89E+05 6.01E-04 2.08E-09 19
H4H16950P 471 ± 2.1 76 1.41E+05 1.21E-03 8.57E-09 10
H4H16960P 422 ± 0.9 65 6.62E+05 1.68E-03 2.54E-09 6.8
H4H16967P 412 ± 1.9 45 5.04E+04 7.19E-04 1.43E-08 16
H4H16971P 433 ± 1.3 66 3.52E+05 2.44E-03 6.93E-09 4.7
H4H16979P 352 ± 1.3 52 3.42E+05 6.16E-04 1.80E-09 19
H4H16987P 436 ± 1.7 74 5.20E+05 4.77E-03 9.16E-09 2.4
H4H16991P 379 ± 1.0 66 5.00E+05 1.08E-03 2.16E-09 11
H4H16992P 436 ± 1.1 73 5.38E+05 8.53E-04 1.59E-09 14
H4H17001P 457 ± 0.8 87 4.85E+05 1.22E-03 2.52E-09 9.5
H4H17015P 464 ± 1.4 84 2.93E+05 7.92E-04 2.70E-09 15
H4H17027P 427 ± 0.9 67 9.81E+04 9.30E-04 9.48E-09 12
H4H17028P 435 ± 1.3 71 3.73E+05 2.90E-03 7.77E-09 3.9
H4H17031P 419 ± 1.8 63 4.85E+05 5.44E-03 2.79E-08 2.1
H4H17033P 417 ± 1.4 74 6.27E+05 1.19E-03 1.90E-09 10
H4H17038P2 406 ± 1.4 74 3.73E+05 1.62E-03 4.33E-09 7.1
H4H17045P2 465 ± 1.4 90 2.37E+05 4.41E-04 1.86E-09 26
H4H17067P2 440 ± 1.2 80 2.68E+05 1.47E-03 5.48E-09 7.9
H4H17082P2 453 ± 1.1 83 7.48E+05 1.82E-03 2.43E-09 6.3
아이소타입 대조군 426 ± 1 1 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 결합하는 돌연변이 Bet v 1-MMH의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 돌연변이 Bet v 1-MMH (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 344 ± 0.8 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16946P 354 ± 0.5 83 4.05E+05 1.41E-04 3.48E-10 82
H4H16950P 357 ± 0.6 70 1.51E+05 3.35E-04 2.21E-09 35
H4H16960P 343 ± 0.8 64 5.62E+05 4.43E-04 7.89E-10 26
H4H16967P 331 ± 0.3 0 NB NB NB NB
H4H16971P 343 ± 0.5 58 4.07E+05 3.86E-03 9.48E-09 3.0
H4H16979P 293 ± 1.0 46 2.86E+05 2.30E-04 8.04E-10 50
H4H16987P 334 ± 0.4 46 4.90E+05 2.15E-02 4.38E-08 0.5
H4H16991P 312 ± 0.5 61 3.90E+05 2.87E-04 7.35E-10 40
H4H16992P 350 ± 0.4 70 4.59E+05 2.76E-04 6.01E-10 42
H4H17001P 351 ± 0.7 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17015P 368 ± 0.8 76 2.72E+05 2.81E-04 1.03E-09 41
H4H17027P 340 ± 0.4 63 1.10E+05 3.19E-04 2.90E-09 36
H4H17028P 349 ± 0.5 71 8.11E+05 6.93E-04 8.54E-10 17
H4H17031P 333 ± 0.5 63 1.87E+05 1.05E-03 5.61E-09 11
H4H17033P 336 ± 0.5 67 5.40E+05 4.15E-04 7.68E-10 28
H4H17038P2 324 ± 1 63 6.42E+05 6.41E-03 9.98E-09 1.8
H4H17045P2 368 ± 1.1 60 8.00E+04 4.98E-04 6.23E-09 23
H4H17067P2 344 ± 0.3 55 1.00E+05 1.17E-03 1.17E-08 9.9
H4H17082P2 366 ± 0.5 78 5.30E+05 6.12E-04 1.16E-09 19
아이소타입 대조군 344 ± 0.8 1 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
37℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 결합하는 돌연변이 Bet v 1-MMH의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 돌연변이 Bet v 1-MMH (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 441 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16946P 459 ± 1.8 97 6.03E+05 3.95E-04 6.55E-10 29
H4H16950P 461 ± 1.2 83 2.15E+05 1.25E-03 5.81E-09 9.2
H4H16960P 417 ± 1.4 72 8.79E+05 1.77E-03 2.01E-09 6.5
H4H16967P 405 ± 0.8 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 427 ± 1.2 60 6.48E+05 1.20E-02 1.86E-08 1.0
H4H16979P 348 ± 0.7 56 4.62E+05 7.30E-04 1.58E-09 16
H4H16987P 429 ± 1.1 36 7.95E+05 8.47E-02 1.06E-07 0.14
H4H16991P 376 ± 0.7 67 7.17E+05 1.06E-03 1.48E-09 11
H4H16992P 432 ± 0.6 78 7.84E+05 8.85E-04 1.13E-09 13
H4H17001P 451 ± 0.8 2 NB* NB* NB* NB*
H4H17015P 458 ± 1.1 89 4.45E+05 8.99E-04 2.02E-09 13
H4H17027P 421 ± 0.8 78 1.71E+05 1.16E-03 6.80E-09 9.9
H4H17028P 430 ± 0.8 77 1.01E+06 2.35E-03 2.32E-09 4.9
H4H17031P 413 ± 1.4 71 2.78E+05 4.06E-03 1.46E-08 2.8
H4H17033P 414 ± 0.8 79 8.83E+05 1.18E-03 1.34E-09 9.8
H4H17038P2 399 ± 0.9 56 8.33E+05 2.96E-02 3.56E-08 0.39
H4H17045P2 458 ± 1.2 84 1.62E+05 2.32E-03 1.43E-08 5.0
H4H17067P2 435 ± 0.7 76 2.53E+05 4.28E-03 1.69E-08 2.7
H4H17082P2 448 ± 1 89 8.21E+05 1.90E-03 2.31E-09 6.1
아이소타입 대조군 421 ± 0.7 -2 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
실시예 4: 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 바 관련 알레르겐에 대한 항체 결합
정제된 항-Bet v 1 단클론성 항체에 대한 상이한 관련 알레르겐 결합에 대한 평형 해리 상수 (KD)를 Biacore 4000 기기에서 실시간 표면 플라즈몬 공명 바이오센서 (SPR-Biacore)를 사용하여 측정하였다. 모든 결합 연구를 25℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH 7.4 (HBS-ET) 작동 완충액에서 수행하였다. 항-Bet v 1 단클론성 항체를 포획하기 위하여 Biacore CM5 센서 표면을 먼저 단클론성 마우스 항-인간 Fc 항체 (GE, # BR-1008-39)와의 아민 커플링에 의하여 유도체화하였다. 결합 연구를 다음의 관련 알레르겐에 대해 수행하였다: 알더나무 (Aln g 1, MyBiosource, Cat# MBS1041484), 사과 (Mal d 1, MyBiosource, Cat# MBS1224919), 당근 (Dau c 1.2, MyBiosource, Cat# MBS1212920), 셀러리 (Api g 1, MyBiosource, Cat# MBS1171376), 셀러리 (Api g 2, MyBiosource, Cat# MBS1047880), 유럽 서어나무 (Car b 1 동형 1A & 1B, MyBiosource, Cat# MBS1200018), 유럽 서어나무 (Car b 1 동형 2, MyBiosource, Cat# MBS1043940), 개암나무 (Cor A 1, MyBiosource, Cat# MBS5304600), 및 떡갈나무 (Que a 1, MyBiosource, Cat# MBS1258822). 상이한 농도의 관련 알레르겐을 먼저 HBS-ET 작동 완충액 (100 nM - 6.25 nM; 연속적으로 4-배 희석됨)에서 제조한 후 항-인간 Fc 포획된 항-Bet v 1 단클론성 항체 표면 위로 3분 동안 30μL/분의 유량으로 주입하는 한편, 단클론성 항체 결합된 알레르겐의 해리를 8분 동안 HBS-ET 작동 완충액에서 모니터링하였다. 회합 (k a ) 및 해리 (k d ) 속도 상수를 실시간 결합 센소그램을 Scrubber 2.0c 곡선-맞춤 소프트웨어를 사용하는 질량 이동 제한을 포함한 1:1 결합 모델에 맞춤으로써 측정하였다. 결합 해리 평형 상수 (KD) 및 해리성 반감기 (t½)를 다음과 같이 동역학적 속도 상수로부터 계산하였다:
KD =
Figure pat00007
, 및 t½ =
Figure pat00008
.
25℃에서 발명의 상이한 항-Bet v 1 단클론성 항체에 대한 관련 알레르겐에 대한 결합 동역학 파라미터를 표 6 내지 표 11에 나타낸다.
25℃에서 표 6에서 나타낸 것과 같이, 발명의 20개의 항-Bet v 1 항체 중 9개가 1.03 nM 내지 175 nM 범위의 KD 값으로 Aln g 1에 대한 측정 가능한 결합을 나타냈다. 다른 11개 항체는 테스트된 조건 하에서 Aln g 1에 대한 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 표 7에서 나타낸 것과 같이, 발명의 20개의 항-Bet v 1 항체 중 2개가 29.8 nM 및 494 nM의 KD 값으로 Mal d 1에 대한 측정 가능한 결합을 나타냈다. 다른 18개 항체는 테스트된 조건 하에서 Mal d 1에 대한 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 표 8에서 나타낸 것과 같이, 발명의 항-Bet v 1 항체 중 1개가 167 nM의 KD 값으로 Api g 1에 대한 측정 가능한 결합을 나타냈다. 다른 19개의 항체는 테스트된 조건 하에서 Api g 1에 대한 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 표 9에서 나타낸 것과 같이, 발명의 20개의 항-Bet v 1 항체 중 8개가 1.2 nM 내지 380 nM 범위의 KD 값으로 Car b 1 동형 1A & 1B에 대한 측정 가능한 결합을 나타냈다. 다른 12개 항체는 테스트된 조건 하에서 Car b 1 동형 1A & 1B에 대한 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 표 10에서 나타낸 것과 같이, 발명의 20개의 항-Bet v 1 항체 중 14개가 335 pM 내지 564 nM 범위의 KD 값으로 Car b 1 동형 2에 대한 측정 가능한 결합을 나타냈다. 다른 6개 항체는 테스트된 조건 하에서 Car b 1 동형 2에 대한 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 표 11에서 나타낸 것과 같이, 발명의 항-Bet v 1 항체 중 1개가 396 nM의 KD 값으로 Cor A 1에 대한 측정 가능한 결합을 나타냈다. 다른 19개의 항체는 테스트된 조건 하에서 Cor A 1에 대한 어떠한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
발명의 항체 중 어느 것도 테스트된 조건 하에서 Dau c 1.2, Api g 2, 또는 Que a 1에 대한 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다 (데이터 미도시). 아이소타입 대조군 항체는 테스트된 알레르겐 중 어느 것에 대해서도 임의의 측정 가능한 결합을 나타내지 못하였다.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 대한 알더나무 (Aln g1)의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 분석물 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 675 ± 0.9 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16946P 668 ± 1.2 2 NB* NB* NB* NB*
H4H16950P 634 ± 1.7 15 9.12E+04 1.60E-02 1.75E-07 0.7
H4H16960P 681 ± 2.1 29 2.26E+05 3.32E-02 1.47E-07 0.3
H4H16967P 666 ± 3.1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 668 ± 2.1 41 9.30E+04 1.18E-02 1.26E-07 1.0
H4H16979P 545 ± 0.4 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16987P 667 ± 1.6 139 2.21E+05 8.70E-04 3.94E-09 13
H4H16991P 608 ± 0.4 3 NB* NB* NB* NB*
H4H16992P 653 ± 1.3 5 NB* NB* NB* NB*
H4H17001P 630 ± 1.6 49 2.64E+05 2.78E-02 1.05E-07 0.4
H4H17015P 745 ± 3 8 NB* NB* NB* NB*
H4H17027P 772 ± 0.4 9 9.29E+04 6.43E-03 6.92E-08 1.8
H4H17028P 708 ± 1.5 16 5.17E+04 1.90E-03 3.67E-08 6.1
H4H17031P 727 ± 1.3 59 5.29E+04 2.38E-03 4.50E-08 4.8
H4H17033P 649 ± 0.2 3 NB* NB* NB* NB*
H4H17038P2 660 ± 1.3 2 NB* NB* NB* NB*
H4H17045P2 746 ± 1.2 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17067P2 617 ± 2.2 2 NB* NB* NB* NB*
H4H17082P2 662 ± 3.6 132 3.12E+05 3.23E-04 1.03E-09 36
아이소타입 대조군 686 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.25℃.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 대한 사과 (Mal d 1)의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 분석물 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 676 ± 0.7 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16946P 668 ± 2.2 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16950P 635 ± 1.9 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16960P 690 ± 8.2 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16967P 671 ± 3.2 -2 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 667 ± 3.4 25 1.61E+05 7.95E-02 4.94E-07 0.2
H4H16979P 545 ± 0.5 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16987P 668 ± 0.8 2 NB* NB* NB* NB*
H4H16991P 608 ± 1.4 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16992P 652 ± 0.8 3 NB* NB* NB* NB*
H4H17001P 626 ± 0.8 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17015P 741 ± 2.6 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17027P 767 ± 1.4 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17028P 704 ± 2.3 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17031P 727 ± 1.6 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17033P 650 ± 1.6 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17038P2 658 ± 1.5 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H17045P2 747 ± 1.3 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H17067P2 616 ± 2 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H17082P2 662 ± 1.9 112 1.25E+06 3.74E-02 2.98E-08 0.3
아이소타입 대조군 686 ± 1.1 0 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
Table 8: Binding kinetics parameters of Celery (Api g 1) binding to Bet v 1 단클론성 항체 at 25℃.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 대한 사과 (Mal d 1)의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 분석물 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 674 ± 0.7 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16946P 666 ± 0.4 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16950P 632 ± 3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16960P 684 ± 3.6 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16967P 668 ± 4.2 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 666 ± 0.7 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16979P 546 ± 1.1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16987P 668 ± 0.8 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16991P 607 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16992P 651 ± 2.9 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17001P 625 ± 1.3 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H17015P 740 ± 1.5 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17027P 765 ± 1.1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17028P 705 ± 2.2 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17031P 727 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17033P 648 ± 0.3 39 4.75E+05 7.91E-02 1.67E-07 0.2
H4H17038P2 659 ± 0.6 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H17045P2 747 ± 0.5 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17067P2 613 ± 0.6 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17082P2 660 ± 3.1 0 NB* NB* NB* NB*
아이소타입 대조군 684 ± 3.1 -1 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 대한 유럽 서어나무 (Car b 1 동형 1A & 1B)의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 분석물 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 674 ± 1 26 1.52E+05 5.78E-02 3.80E-07 0.2
H4H16946P 667 ± 1.6 63 1.43E+05 2.40E-02 1.68E-07 0.5
H4H16950P 633 ± 1.6 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16960P 687 ± 0.8 4 NB* NB* NB* NB*
H4H16967P 666 ± 3.3 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 669 ± 4.6 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16979P 545 ± 0.4 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16987P 668 ± 0.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16991P 608 ± 1.8 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16992P 653 ± 0.6 161 2.81E+05 3.37E-04 1.20E-09 34
H4H17001P 626 ± 1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17015P 742 ± 1.8 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17027P 767 ± 0.3 41 3.14E+04 6.73E-03 2.14E-07 1.7
H4H17028P 705 ± 0.7 159 2.10E+05 5.11E-04 2.43E-09 23
H4H17031P 726 ± 3.2 126 8.04E+04 1.11E-03 1.38E-08 10
H4H17033P 650 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17038P2 659 ± 0.9 105 1.51E+05 6.23E-03 4.14E-08 1.9
H4H17045P2 748 ± 1 5 NB* NB* NB* NB*
H4H17067P2 616 ± 1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17082P2 664 ± 1.6 69 3.90E+05 3.53E-02 9.05E-08 0.3
아이소타입 대조군 686 ± 0.7 0 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 대한 유럽 서어나무 (Car b1 동형 2)의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 분석물 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 675 ± 1.6 183 1.11E+06 3.71E-04 3.35E-10 31
H4H16946P 666 ± 0.7 63 7.69E+04 1.38E-02 1.79E-07 0.8
H4H16950P 633 ± 3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16960P 682 ± 4.5 1 NB* NB* NB* NB*
H4H16967P 663 ± 5.4 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 668 ± 4.1 23 2.59E+05 1.46E-01 5.64E-07 0
H4H16979P 547 ± 1.1 114 9.71E+05 2.41E-03 2.48E-09 4.8
H4H16987P 667 ± 1.3 153 1.01E+06 5.61E-03 5.56E-09 2.1
H4H16991P 607 ± 3.4 93 1.07E+06 4.04E-02 3.78E-08 0.3
H4H16992P 652 ± 0.6 156 1.40E+06 8.61E-04 6.17E-10 13
H4H17001P 625 ± 1.1 157 2.03E+06 3.20E-03 1.58E-09 3.6
H4H17015P 741 ± 1.6 2 NB* NB* NB* NB*
H4H17027P 765 ± 1.8 42 5.84E+04 5.77E-03 9.89E-08 2.0
H4H17028P 703 ± 4.1 95 9.71E+04 4.37E-03 4.50E-08 2.6
H4H17031P 727 ± 1.2 160 3.95E+05 5.17E-03 1.31E-08 2.2
H4H17033P 650 ± 1.2 111 1.34E+06 4.47E-02 3.34E-08 0.3
H4H17038P2 660 ± 1.6 73 1.28E+05 6.48E-03 5.05E-08 1.8
H4H17045P2 747 ± 1.2 5 NB* NB* NB* NB*
H4H17067P2 616 ± 1 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17082P2 661 ± 2 166 2.18E+06 1.24E-03 5.67E-10 9.3
아이소타입 대조군 685 ± 1.2 0 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
25℃에서 Bet v 1 단클론성 항체에 대한 개암나무 (Cor A 1)의 결합 동역학 파라미터.
항체 mAb 포획 수준 (RU) 결합된 100 nM 분석물 (RU) k a
(1/Ms)
k d
(1/s)
K D
(M)

(분)
H4H16943P 673 ± 0.4 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16946P 665 ± 0.6 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H16950P 635 ± 3.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16960P 687 ± 7 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16967P 668 ± 1.7 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16971P 666 ± 5.8 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16979P 546 ± 1.1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16987P 668 ± 0.7 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16991P 607 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H16992P 652 ± 1.6 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17001P 626 ± 0.4 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17015P 740 ± 0.7 1 NB* NB* NB* NB*
H4H17027P 766 ± 2.8 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17028P 704 ± 1.3 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17031P 727 ± 1.2 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17033P 649 ± 1.5 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17038P2 659 ± 0.1 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17045P2 748 ± 0.8 0 NB* NB* NB* NB*
H4H17067P2 614 ± 0.7 -1 NB* NB* NB* NB*
H4H17082P2 661 ± 0.8 20 1.06E+05 4.18E-02 3.96E-07 0.3
아이소타입 대조군 685 ± 0.5 1 NB* NB* NB* NB*
*NB는 현재 실험 조건 하에서 결합이 관찰되지 않았음을 나타낸다.
실시예 5: 항-Bet v 1 IgG 항체에 의한 알레르겐 특이적 IgE에 대한 Bet v 1 결합의 차단
알레르기성 인간 도너 혈장/혈청으로부터의 플레이트-포획된 IgE에 대한 Bet v 1 결합을 차단하는 발명의 단일 항-Bet v 1 항체 또는 발명의 항-Bet v 1 항체의 조합의 능력을 ELISA를 사용하여 측정하였다. 항체를 단독으로 또는 다클론성 혼합물 중에서 테스트하였다. 검정을 위해, 미세역가 플레이트를 C-말단 마우스 Fc 태그 (hFcεR1α-mFc; SEQ ID NO: 313)로 제조된 인간 FcεR1α (IgE에 대한 고친화성 수용체) 세포외 도메인 단백질로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 그런 후 플레이트를 0.5% BSA (w/v)로 1시간 동안 실온 (RT)에서 차단하였다. 알레르기 도너로부터의 혈장을 희석하고 그런 후 총 IgE를 수용체-코팅된 표면 위에서 포획하였다. 일정한 양의 0.1 nM의 비오틴 표지된 천연 Bet v 1 (Indoor Biotechnologies, # NA-BV1-1)을 1 μg/mL의 단일 농도로 또는 각 항체의 10 μg/mL 또는 1 μg/mL에서 시작하여 연속적으로 희석시킨 항-Bet v 1 항체와 사전 혼합하고 1시간 동안 실온에서 Bet v 1-항체가 평형에 도달하도록 상호작용하도록 허용하였다. 그런 후 항체-Bet v 1 혼합물을 IgE-코팅된 플레이트에 1시간 동안 첨가하였다. 플레이트를 그 후에 세척하고 플레이트에 결합된 천연 Bet v 1의 양을 1:10,000 희석의 양고추냉이 과산화효소에 콘쥬게이트된 스트렙트아비딘 (Thermo Scientific, # N200/QJ223091)을 사용하여 검출하고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 그런 후 플레이트를 상기 기술된 ELISA 프로토콜의 각 단계 사이에서 PBS-T로 세척하였다. 비색 반응을 전개시키기 위하여, TMB/H2O2 기질 (BD Pharmingen Reagent A #51-2602KC + Reagent B, #51-2607KC)을 플레이트에 첨가하고 20분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 반응을 2 N 황산 (H2SO4; VWR, # BDH3500-1)을 사용하여 중단시켰다. 그 후에 흡광도를 분광계 (Victor, Perkin Elmer) 상에서 450 nm에서 측정하였다. 퍼센트 차단을 하기에서 기술하는 바와 같이 각 검정에서 사요오딘 최고 항체 농도를 사용하여 계산하였다.
퍼센트 차단 = (항체가 없는 A 450 ) - (최고 항체 농도에서의 A 450 ) x 100
(항체가 없는 A450)
20개의 항-Bet v 1 항체를 알레르기 인간 도너 혈장으로부터의 플레이트-포획된 IgE에 대한 Bet v 1 결합을 차단하는 능력에 대해 단일 항체로서 기술된 ELISA를 사용하여 테스트하였다. 개별적인 단클론성 항체는 Bet v 1에 대한 IgE 결합을 8.5 내지 64%만큼 부분적으로 차단할 수 있었고, 이것은 IgE의 다클론성을 분명히 보여준다. 7개의 항체가, 표 12에서 나타낸 것과 같이, 10 μg/mL의 테스트된 최고 항체 농도에서 36 내지 64% 범위의 차단을 보였다.
4개의 항-Bet v 1 항체, H4H17082P2, H4H17038P2, H4H16987P, 및 H4H16992P를 단일 지점 차단 검정으로 테스트하였다. H4H17082P2와 H4H16992P의 조합은 10개의 IgE 도너 중 7개에서 90%보다 큰 차단을 입증하였다. 3 및 4개의 단클론성 항체 조합은 유사한 결과를 입증하였고, 표 13에서 나타낸 것과 같이, H4H17082P2와 H4H16992P의 2-항체 조합과 비교하여 임의의 부가적인 차단 효과를 부가하는 것으로 나타나지 않았다.
4개의 단클론성 항체, H4H17082P2, H4H17038P2, H4H16987P, 및 H4H16992P를 그 후에 단일 및 2, 3 및 4개 단클론성 항체 조합으로서 3개의 도너 IgE 샘플을 사용하여 용량 반응 차단 검정으로 테스트하였다. 그 결과 H4H17082P2 및 H4H16992P의 항-Bet v 1 2개 단클론성 항체 조합이, 표 14에서 나타낸 것과 같이, 알레르겐 특이적 IgE에 대한 Bet v 1 결합을 90%보다 크게, 및 3개 도너에서의 기준선에 가깝게 차단하였음을 보여주었다. 테스트된 3- 및 4-개 항체 조합은 유사한 폭 및 효능의 차단 활성을 나타냈다. 양성 대조군으로서, 정제된 마우스 항-Bet v 1 다클론성 IgG는 90%보다 큰 차단을 입증하였다.
알레르겐 특이적 IgE에 대한 Bet v 1 결합을 차단하는 항-Bet v 1 항체
도너 ID: 23397-PB 24606-AB
항체 포획된 IgE에 대한 Bet v 1 결합의 % 차단
H4H17082P2 MAB2 56.6 60.3
H4H16971P 35.4 12.8
H4H17027P 23.0 28.4
H4H17028P 19.7 16.6
H4H16946P 27.6 22.8
H4H17038P2 MAB3 49.0 55.3
H4H16950P 32.3 20.7
H4H16987P MAB4 15.2 12.8
H4H17045P2 27.4 27.2
H4H17067P2 25.7 22.2
H4H16967P 21.8 23.5
H4H17015P 41.8 63.4
H4H16979P 33.6 12.9
H4H16991P 30.0 32.6
H4H17033P 51.8 49.0
H4H16992 MAB1 36.7 64.4
H4H16960P 8.5 17.6
H4H17031 16.7 20.5
H4H17001P 47.2 52.7
H4H16943P 47.7 52.5
알레르기 도너 혈장을 이들 검정의 경우 1:50으로 희석하였다.
알레르겐 특이적 IgE에 대한 Bet v 1 결합을 차단하는 단일 항체 및 항체 조합
도너 ID: 23658-MD 23939-MH 23035-BL 25414-CW 25340-RR 25299-RJ 25609-MS 26532-CC 29718-MW 22627-MN
항체 퍼센트 차단 (1 μg/mL 각 항체)
H4H17082P2
MAB2
62 79 52 38 81 66 51 74 49 61
H4H17038P2MAB3 24 17 36 23 28 24 17 23 14 23
H4H16987PMAB4 27 16 -46 -4 15 9 16 4 13 12
H4H16992PMAB1 44 53 43 53 67 70 89 80 82 62
H4H17082P2 + H4H17038P2 70 85 73 57 90 78 65 83 60 79
H4H17082P2 + H4H16987P 74 88 21 45 84 69 65 75 61 76
H4H17082P2 + H4H16992P 79 93 72 77 91 91 98 94 94 96
H4H17038P2 + H4H16987P 47 31 16 28 41 29 33 29 28 47
H4H17038P2 + H4H16992P 58 62 51 77 83 75 93 87 87 77
H4H16987P + H4H16992P 61 61 -6 63 75 69 94 81 89 64
H4H17082P2 + H4H17038P2 + H4H16987P 78 88 39 63 91 79 72 83 68 85
H4H17082P2 + H4H17038P2 + H4H16992P 83 92 65 91 96 89 98 94 94 90
H4H17082P2 + H4H16987P + H4H16992P 83 91 16 85 91 79 96 90 95 78
H4H17038P2 + H4H16987P + H4H16992P 71 69 3 82 88 71 95 86 93 76
H4H17082P2 + H4H17038P2 + H4H16987P + H4H16992P 86 93 44 89 95 84 98 94 97 87
비오티닐화된 Bet v 1 (항체 없음), 0.1 nM 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
아이소타입 대조군 -3 -2 -5 -4 -1 -4 -2 -4 -2 -3
이 검정의 경우 알레르기 도너 혈장을 1:20 (6개 도너), 1:10 (3개 도너) 또는 1:9 (1개 도너) Bet v 1 특이적 IgE 역가에 대해 표준화한 후 1:50으로 희석하였다.
알레르겐 특이적 IgE에 대한 Bet v 1 결합을 차단하는 항체 조합
도너 ID: 23939-MH 25340-RR 25609-MS
항체 퍼센트 차단 (1 μg/mL 각 항체)
H4H17082P2 82.9 82.7 56.4
H4H17038P2 20.2 23.2 22.8
H4H16987P 19.6 11.1 21.6
H4H16992P 63.3 70.2 86.9
H4H17082P2 + H4H16992P 94.8 93.8 96.5
H4H17082P2 + H4H17038P2 + H4H16992P 93.4 96.4 95.2
H4H17082P2 + H4H16987P + H4H16992P 91.5 93.1 94.2
H4H17082P2 + H4H17038P2 + H4H16987P + H4H16992P 92.6 95.4 95.7
아이소타입 대조군 16.8 10.6 8.8
정제된 항-Bet v 1 마우스 IgG, 333.3 nM 92.7 93.9 94.6
실시예 6: Bet v 1에 대한 항-Bet v 1 항체 결합의 수소 중수소 (H/D) 교환에 의한 에피토프 매핑H4H16992P2, H4H17082P2, H4H17038P2, 및 H4H16987P와 상호작용하는 Bet v 1의 아미노산 잔기 [(Uniprot P15494의 (아미노산 M1-N160]를 결정하기 위하여, 질량 분광학 연구를 포함하는 H/D 교환 에피토프 매핑을 수행하였다. H/D 교환 방법의 일반적인 설명은 예컨대, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; 및 Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A에서 제시된다.
HDX-MS 실험을 중수소 표지화를 위한 Leaptec HDX PAL 시스템, 샘플 소화 및 로딩을 위한 Waters Acquity M-Class (보조 용매 매니저), 분석용 칼럼 구배를 위한 Waters Acquity M-Class (μBinary 용매 매니저), 및 펩신 펩타이드 질량 측정을 위한 Synapt G2-Si 질량 분석계로 이루어진, 일체화된 Waters HDX/MS 플랫폼 상에서 수행하였다.
표지화 용액을 pD 7.0 (pH 6.6에 동등함)에서 D2O 중의 10 mM PBS 완충액에서 제조하였다. 중수소 표지화를 위해, 3.8 μL의 천연 Bet v 1 (Indoor Biotech, Catalog # NA-BV1-1, 28 pmol/μL), 각 항체와 사전 혼합된 Bet v 1, 또는 1:1 몰 비율의 전부 4개의 항-Bet v 1 항체의 혼합물을 56.2 μL의 D2O 표지화 용액과 다양한 시점 동안 인큐베이션하였다 (예컨대, 미중수소화 대조군 = 0초, 1분, 5분, 10분 및 20분 동안 표지화됨). 50 μL의 샘플을 100 mM 인산염 완충액, pH 2.5 (급속냉각 완충액) 중의 50 μL의 사전 냉각된 0.2 M TCEP, 6 M 염화 구아니딘으로 옮김으로써 중수소화를 중단하고 혼합된 샘플을 1.0℃에서 2분 동안 인큐베이션하였다. 중단된 샘플을 그런 후 온라인 펩신/프로테아제 XIII 소화를 위해 Waters HDX 매니저에 주입하였다. 소화된 펩타이드를 0℃에서 ACQUITY UPLC BEH C18 1.7-μm, 2.1 Х 5 mm VanGuard 예비 칼럼 위로 놓고 5% 내지 40% B (이동상 A: 물 중의 0.1% 포름산, 이동상 B: 아세토니트릴 중의 0.1% 포름산)의 9-분 구배 분리를 위해 분석 칼럼 ACQUITY UPLC BEH C18 1.7-μm, 1.0 Х 50 mm에 대해 용출하였다. 질량 분광계를 37 V의 콘 전압, 0.5초의 주사 시간, 및 50 내지 1700 Th의 질량/전하 범위로 설장하였다.
Bet v 1로부터의 펩타이드의 확인을 위해, 중수소화되지 않은 샘플로부터의 LC- MSE 데이터를 Waters ProteinLynx Global Server (PLGS) 소프트웨어를 통해 Bet v 1 및 그것의 랜덤화된 서열을 포함하는 데이터베이스에 대해 처리 및 탐색하였다. 확인된 펩타이드를 DynamX 소프트웨어로 보내고 2가지 기준으로 필터링하였다: 1) 아미노산 당 최소 생성물:0.3, 및 2) 복제 파일 한계값: 3. 그런 후 DynamX 소프트웨어는 자동적으로 각 시간에 3개의 복제물을 만들면서 다수의 시점에 걸쳐 보유 시간 및 높은 질량 정확도 (<10ppm)를 기반으로 각 펩타이드의 중수소 흡수를 측정하였다.
MSE 데이터 획득과 결합된 온라인 펩신/프로테아제 XIII 칼럼을 사용하여, Bet v 1로부터의 총 36개의 펩타이드를 항체의 부재 또는 존재 하에서 재생적으로 확인하였고, 이것은 91.2%의 서열 커버리지를 나타낸다. H4H16992P2, H4H17082P2, H4H17038P2, H4H16987P 및 4개 항체 조합에 결합되었을 때 유의하게 감소된 중수소 흡수를 보인 펩타이드를 각각 도 1 내지 4 및 5에 도시한다. 기록된 펩타이드 질량은 항-Bet v 1 항체 또는 항체들과 복합체를 이룬 Bet v 1의 3개의 복제물로부터의 중심 MH+ 질량의 평균 값에 상응한다.
도 1에서 나타낸 것과 같이, 아미노산 23 내지 43에 상응하는 펩타이드 (FILDGDNLFPKVAPQAISSVE, SEQ ID NO: 307)는 H4H16992P의 존재 하에 더 느린 중수소화 속도를 나타냈다.
도 2에서 나타낸 것과 같이, 아미노산 44 내지 56에 상응하는 펩타이드 (NIEGNGGPGTIKK, SEQ ID NO: 308)는 H4H17082P의 존재 하에 더 느린 중수소화 속도를 나타냈다.
도 3에서 나타낸 것과 같이, 아미노산 2 내지 19에 상응하는 펩타이드 (GVFNYETETTSVIPAARL, SEQ ID NO: 309)는 H4H17038P2의 존재 하에 더 느린 중수소화 속도를 나타냈다.
도 4에서 나타낸 것과 같이, 아미노산 57 내지 70에 상응하는 펩타이드 (ISFPEGFPFKYVKD, SEQ ID NO: 310) 및 81 내지 96에 상응하는 펩타이드 (KYNYSVIEGGPIGDTL, SEQ ID NO: 315)는 H4H16987P의 존재 하에 더 느린 중수소화 속도를 나타냈다.
도 4에서 나타낸 것과 같이, 아미노산 23 내지 43에 상응하는 펩타이드 (FILDGDNLFPKVAPQAISSVE, SEQ ID NO: 307), 아미노산 44 내지 56에 상응하는 펩타이드 (NIEGNGGPGTIKK, SEQ ID NO: 308), 아미노산 2 내지 19에 상응하는 펩타이드 (GVFNYETETTSVIPAARL, SEQ ID NO: 309), 아미노산 57 내지 70에 상응하는 펩타이드 (ISFPEGFPFKYVKD, SEQ ID NO: 310) 및 아미노산 81 내지 96에 상응하는 펩타이드 (KYNYSVIEGGPIGDTL, SEQ ID NO: 315)는 4개의 항-Bet v 1 항체 조합 (H4H16992P, H4H17082P, H4H17038P2 및 H4H16987P)의 존재 하에 더 느린 중수소화 속도를 나타냈다.
더불어, 보통 수준의 보호가 H4H17082P, H4H17038P2 및 H4H16987P의 존재 하에 펩타이드 23 내지 43에 대해 관찰되었고, 이것은 이 영역이 이들 단클론성 항체에 대해 2차 에피토프를 나타낼 수 있다는 것을 확인시켜주었다.
실시예 7: 생체내 모델에서 수동 피부 아나필락시스 (PCA)에서 항-Bet v 1 항체의 영향
알레르겐 유도된 비만 세포 탈과립화를 억제하는 데 있어 발명의 항-Bet v 1 항체의 효능을 결정하기 위하여, 수동 피부 아나필락시스 (PCA) 생체내 모델을 사용하였다. 이 모델은 알레르겐-특이적 항혈청의 피부의 국소 지역으로의 피내 주사와 이어서 염료와 함께 항원의 정맥내 주사를 포함한다. 알레르기 반응은 감작 부위에서 모세관 확장 및 증가된 혈관 투과성을 유발하여, 이 부위에서의 염료의 우선적인 축적을 초래한다. 염료는 조직으로부터 추출될 수 있고 분광광도계에 의해 정량화될 수 있다. 그런 후 테스트 항혈청으로 감작된 조직으로의 염료 유출이 관련이 없는 항혈청으로 감작된 조직으로의 유출과 비교될 수 있다.
1X 인산염 완충 식염수 (PBS) 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 5 μg의 천연 Bet v 1 단백질 (Indoor Biotechnologies, # NA-BV1-1)로 Balb/c 마우스를 제0일에 면역화함으로써 검정에서 사용하기 위해 항혈청을 형성하였다. 1주일 후 (제7일), 감작된 마우스를 1X PBS 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 5 μg의 천연 Bet v 1 단백질로 부스팅하였다. 부스팅 후 2주 후에, 마우스를 20μL PBS 중의 0.5 μg의 천연 Bet v 1 단백질로 제21일, 24일 및 28일에 비강내 기도 도전을 수행하였다. 그런 후 마우스를 제31일에 희생시키고 혈청을 수집하였다. 분리된 항혈청 중의 총 IgE 농도를 OptEIATM ELISA 키트 (BD Biosciences, #555248)를 제조사의 설명을 따라 사용하여 결정하였다. Bet v 1 항혈청의 최종 농도를 PBS로 2600 ng/mL의 IgE로 희석하였다.
검정에서 음성 대조군으로서 사용된 항혈청을, Balb/c 마우스를 PBS 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 고양이 털 추출물로부터 정제된 5 μg의 천연 Fel d 1 단백질 (Indoor Biotechnologies, # LTN-FD1-1)로 제0일에 면역화함으로써 생성하였다. 마우스를 제14일 및 21일에 PBS 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 5 μg의 Fel d 1 단백질로 부스팅하였다. 최종 부스팅 후 1주일 후에 (제28일), 마우스를 희생시키고 혈청을 수집하였다. 분리된 항혈청 중의 총 IgE 농도를 OptEIATM ELISA 키트 (BD Biosciences, #555248)를 제조사의 설명을 따라 사용하여 결정하였다. 항혈청의 최종 농도를 PBS로 2500 ng/mL의 IgE로 희석하였다.
PCA 검정을 위해, Balb/c 마우스의 그룹 (실험당 n≥5마리)을 먼저 1 mg/kg 용량 (총 항체 용량)의 아이소타입 대조군 항체, 항-Bet v 1 항체, 또는 항-Bet v 1 항체의 조합 중 어느 하나로 피하 주사하였다. 항체 투여 후 3일 후에, 10 μL의 1.5 ng Bet v 1 항혈청 또는 3 ng 음성 대조군 항-혈청을 각 그룹의 마우스의 우측 및 좌측 귀에 각각 주사하였다. 알레르겐-특이적 항혈청을 국소 투여한 후 24시간 후에, 마우스에게 0.5% (w/v) 에반스 블루 염료 (Sigma Aldrich, # E2129)를 함유한 PBS에 용해된 1 μg/mL의 천연 Bet v 1의 용액을 정맥내 주사함 (마우스당 100 μL)으로써 도전시켰다. 항원 도전 후 1시간 후에, 마우스를 희생시키고, 귀를 절단하여 1 mL의 포름아미드에 넣은 후, 계속해서 3일 동안 50 내지 56℃에서 인큐베이션하여 에반스 블루 염료를 추출하였다. 그런 후 귀 조직을 포름아미드로부터 제거하고, 과잉량의 액체를 제거하기 위해 블롯팅한 후 무게를 측정하였다. 각 포름아미드 추출물의 200 마이크로리터 부분표본을 이중의 96 웰 플레이트에 옮긴 후 그것들의 흡광도를 620 nm에서 측정하였다. 측정된 광학 밀도를 표준 곡선을 사용하여 에반스 블루 염료 농도로 전환시켰고 mg 조직당 ng의 에반스 블루 염료로서 표시하였다. 각 그룹에 대해 평균 값 ± 표준 편차를 표 15에 나타낸다. 아이소타입 대조군과 비교한 평균 차이를 GraphPad 프리즘에서의 본페로니 다중 비교 검사를 사용하여 계산하였다.
표 15에서 알 수 있는 것과 같이, 연구 1에서, 단일 항-Bet v 1 항체, H4H17082P2는 아이소타입 대조군과 비교하여 염료 유출의 유의한 감소를 입증하지 못하였다. 연구 2에서 대조적으로, 발명의 2개 항-Bet v 1 항체의 조합 (H4H16992P 및 H4H17082P2) 및 발명의 4개 항-Bet v 1 항체의 조합 (H4H16992P, H4H17082P2, H4H17038P2, 및 H4H16987P)은 아이소타입 대조군 처리와 비교하여 염료 유출의 유의한 감소를 입증하였는데, 각각 35.26 및 36.49 ng/mg의 감소가 있었다. 유사하게, 연구 3에서, 발명의 2개 항-Bet v 1 항체의 조합 (H4H16992P 및 H4H17082P2)은 다시 아이소타입 대조군 처리와 비교하여 염료 유출의 유의한 감소를 입증하였고, 41.09 ng/mg이 감소하였다. 앞서 연구 1에서 입증된 것과 같이, 연구 3에서 단일 항-Bet v 1 항체, H4H17082P2는 아이소타입 대조군에 비교하여 염료 유출의 유의한 감소를 입증하지 못하였다. 그러나, 또 다른 단일 항체, H4H16992P는 아이소타입 대조군에 비교하여, 25.86 ng/mg의 감소로, 염료 유출의 유의한 감소를 입증하였다. 수행된 연구로부터 단일 항체 H4H16992P, H4H17082P2 + H4H16992P의 두 항체의 조합, 뿐만 아니라 H4H17082P2 + H4H16992P + H4H17038P2 + H4H16987P의 네 항체의 조합이, 본페로니 후검사를 포함한 이원 변량 분석에 의해 결정되는 바 수동 피부 아나필락시스 생체내 모델에서 아이소타입 대조군과 비교한 염료 유출의 유의한 감소에 의해 나타난 것과 같이 비만 세포 탈과립화를 차단할 수 있었다. H4H17082P2 항체 단독은 수행된 두 가지 연구에서 아이소타입과 비교하여 염료 유출의 증가에 의해 나타난 것과 같이 비만 세포 탈과립화를 차단할 수 없었다. 그룹 당 사용한 마우스의 수 (n)를 표에서 괄호 안에 표시된다.
수동 피부 아나필락시스 생체내 모델에서 항-Bet v 1 항체의 영향.
치료 그룹 음성 대조군 알레르겐
(ng 에반스 블루/mg 조직 ± SD)
아이소타입 대조군에 비교한 평균 차이 Bet v 1
(ng 에반스 블루/mg 조직 ±SD)
아이소타입 대조군에 비교한 평균 차이
연구 1
H4H17082P2 (n=8) 2.1±0.9 -0.31 46.6 ±17.3 7.5
연구 2
H4H17082P2 + H4H16992P (n=10) 6.3±3.8 1.807 8.3±7.7 -35.26 (****)
H4H17082P2 + H4H16992P + H4H17038P2 + H4H16987P (n=10) 7.6±5.5 3.090 7.1±4.1 -36.49 (****)
연구 3
H4H17082P2 (n=5) 6.5±1.4 -0.311 89.4±28.3 27.37 (*)
H4H16992P (n=5) 6.4±2.1 -0.324 36.2±14 -25.86 (*)
H4H17082P2 + H4H16992P (n=5) 3.6±.31 -3.118 21±9.6 -41.09 (***)
모든 항체 치료 그룹에 대해 1 mg/kg 총 항체 농도를 사용하였다.*P≤.05, ***P≤.001, ****P≤.0001
n = 각 그룹의 마우스의 수
실시예 8: 수동 피부 아나필락시스 (PCA) 생체내 모델에서 3가지 상이한 자작나무 꽃가루 추출물에 대한 항-Bet v 1 항체의 영향
본원에서 제공된 항-Bet v 1 항체를 수동 피부 아나필락시스 (PCA) 생체내 모델에서 알레르겐 유도된 비만 세포 탈과립화를 차단하는 효능에 대해 테스트하였다. 알레르겐-특이적 항혈청을 피부의 국소 지역에 경피 주사한 후 염료와 함께 항원을 정맥내 주사하였다. 알레르기 반응은 감작 부위에서 모세관 확장 및 증가된 혈관 투과도를 유발하여, 이 부위에서 염료의 우선적인 축적을 초래한다. 염료는 조직으로부터 추출될 수 있고 분광광도계에 의해 정량화될 수 있다. 테스트 항혈청으로 감작된 조직으로의 염료 유출은 그런 후에 관련이 없는 항혈청으로 감작된 조직으로의 유출과 비교할 수 있다.
천연 Bet v 1, 백자작나무 (베툴라 베루코사(Betula verrucosa)로도 알려져 있음) 자작나무 꽃가루 추출물 (BPE), 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE에 대한 항혈청을 이 검정에서 사용하기 위하여, Balb/c 마우스를 1X 인산염 완충 식염수 (PBS) 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 5 μg의 천연 Bet v 1 단백질 (Indoor Biotechnologies, Catalog# NA-BV1-1 Lot 36164) 또는 5 μg의 BPE; 펜듈라(pendula)(Stallargenes Greer, Catalog# XP527D3A25 Lot #277329), 니그라(nigra)(Stallargenes Greer Catalog# XP79D3A25 Lot #285077) 또는 포풀리폴리아(populifolia)(Stallargenes Greer Catalog# XP80D3A2.5 Lot #273622)로 제0일에 면역화함으로써 생성하였다. 1주일 후에 (제7일), 감작된 마우스를 1X PBS 중의 1 mg/mL 알룸 용액 중의 5 μg의 천연 Bet v 1 단백질 또는 5 μg의 각각의 BPE (펜듈라, 니그라, 또는 포풀리폴리아)로 부스팅하였다. 부스팅 후 2주 후에, 마우스를 20 μL의 1X PBS 중의 0.5 μg의 천연 Bet v 1 단백질 또는 0.5 μg의 각각의 자작나무 꽃가루 추출물로 제21, 24 및 28일에 비강내 기도 도전을 수행하였다. 그런 후 마우스를 제31일에 희생시키고 혈청을 수집하였다. 분리된 항혈청 롯트의 총 IgE 농도를 OptEIATM ELISA 키트 (BD Biosciences, #555248)를 제조사의 설명을 따라 사용하여 결정하였다. Bet v 1 항혈청의 최종 농도를 1X PBS 중에 2500 ng/mL의 IgE로 희석하고 자작나무 꽃가루 추출물 항혈청 로트의 최종 농도를 펜듈라의 경우 3000 ng/mL로, 니그라의 경우 1900 ng/mL로 및 포풀리폴리아의 경우 3700 ng/mL로 희석하였다.
이 검정에서 음성 대조군으로서 사용된 항혈청을 Balb/c 마우스를 1X PBS 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 고양이 털 추출물로부터 정제된 5 μg의 천연 Fel d 1 단백질 (Indoor Biotechnologies, Catalog# LTN-FD1-1, Lot #36099)로 면역화함으로써 생성하였다. 마우스를 제14일 및 21일에 1X PBS 중의 1 mg/mL의 알룸 용액 중의 5 μg의 Fel d 1 단백질로 부스팅하였다. 최종 부스팅 후 1주일 후에 (제28일), 마우스를 희생시키고 혈청을 수집하였다. 분리된 항혈청의 총 IgE 농도를 OptEIATM ELISA 키트 (BD Biosciences, #555248)를 제조사의 설명을 따라 사용하여 결정하였다. 항혈청의 최종 농도를 PBS 중에 4800 ng/mL의 IgE로 희석하였다.
PCA 검정을 위해, Balb/c 마우스 그룹 (실험당 n≥4, 3회 반복)을 먼저 아이소타입 대조군 항체 또는 2개의 항-Bet v 1 항체의 조합을 1 mg/kg의 용량 (총 항체 용량)으로 피하 주사하였다. 항체 투여 후 3일 후에, 10 μL의 1 ng의 Bet v 1 항혈청, 25 ng의 백자작나무 항혈청, 25 ng의 흑자작나무 항혈청, 또는 25 ng의 흰자작나무 항혈청을 배정된 그룹의 마우스의 우측 귀에 주사하였다. 좌측 귀에는 상응하는 우측 귀의 항혈청 농도와 매치하기 위하여 1 ng 또는 25 ng의 Fel d 1 (음성 대조군)을 투여하였다. 알레르겐-특이적 항혈청의 국소 투여 후 24시간 후에, 마우스를 0.5% (w/v) 에반스 블루 염료 (Sigma Aldrich, #E2129)를 함유한 1X PBS에 용해된 1 μg/mL의 천연 Bet v 1 (Catalog# NA-BV1-1, Lot 36164) 또는 1 μg/mL의 각각의 BPE (Stallargenes Greer, Catalog# XP527D3A25 Lot #277329, Catalog# XP79D3A25 Lot #285077, 및 Catalog# XP80D3A2.5 Lot #273622) 용액으로 정맥내 주사 (마우스당 100 μL)에 의해 도전시켰다. 항원 도전 후 1시간 후에, 마우스를 희생시키고, 귀를 절단한 후, 1 mL의 포름아미드에 넣고 계속해서 3일 동안 50℃에서 인큐베이션하여 에반스 블루 염료를 추출하였다. 그런 후 귀 조직을 포름아미드로부터 제거하고, 과잉량의 액체를 제거하기 위하여 블롯팅하고 무게를 측정하였다. 각 포름아미드 추출물의 200 마이크로리터 부분표본을 이중의 96 웰 플레이트에 옮겼다. 결과적으로 얻어진 상층액의 흡광도를 620 nm에서 측정하였다. 측정된 광학 밀도를 표준 곡선을 사용하여 에반스 블루 염료 농도로 전환시켰고 mg 조직당 ng의 에반스 블루 염료로서 표시하였다. 각 그룹에 대해 평균 값 ± 표준 편차를 표 16에 나타낸다. 아이소타입 대조군과 비교한 평균 차이를 GraphPad 프리즘에서의 본페로니 다중 비교 검사를 사용하여 계산하였다.
표 16은 모든 테스트된 그룹에서 아이소타입 대조군과 비교할 때 염료 유출의 유의한 감소에 의해 표시된, 2개의 항-Bet v 1 항체, H4H16992P 및 H4H17082P2의 조합의 효능을 나타낸다. 나타난 바와 같이, H4H17082P2/H4H16992P의 2개의 항-Bet v 1 단클론성 항체 조합은 아이소타입 대조군과 비교하여 천연 Bet v 1로의 감작 및 후속된 도전에 대해 수동 피부 생체내 모델에서 88.34의 염료 추출의 유의한 감소를 입증하면서, 비만 세포 탈과립화를 차단한다. 유사하게, 염료 추출의 감소는 또한 각각의 아이소타입 대조군과 비교하여 모두 3개의 자작나무 꽃가루 추출물에 대해 H4H17082P2/H4H16992P 치료 그룹에서 관찰되는데, 이때 백자작나무의 경우 62.52, 흑자작나무의 경우 71.19, 및 흰자작나무의 경우 91.47의 통계적으로 유의한 감소를 보인다. 아이소타입 대조군과 비교한 평균 차이를 본페로니 후 검사를 포함한 이원변량 분석에 의해 계산하였다. 그룹당 사용한 마우스의 수 (n)를 표에서 괄호 안에 표시한다.
수동 피부 아나필락시스 (PCA) 생체내 모델에서 항-Bet v 1 항체의 영향
감작 및 치료 음성 대조군 알레르겐 (ng 에반스 블루/mg 조직 ±SD) 아이소타입 대조군에 비교한 평균 차이 Bet v 1 또는 BPE (ng 에반스 블루/mg 조직 ±SD) 아이소타입 대조군에 비교한 평균 차이
1ng nBet v 1
H4H17082P2+ H4H16992P (n≥4)
7.59 ± 3.03 0.7623 9.56 ± 3.53 -88.34 (****)
25ng 백자작나무
H4H17082P2+ H4H16992P (n≥4)
7.76 ± 3.38 0.7337 15.54 ± 8.21 -62.52 (****)
25ng 흑자작나무
H4H17082P2+ H4H16992P (n≥4)
8.16 ± 4.44 1.05 23.94 ± 18.32 -71.19 (****)
25ng 흰자작나무
H4H17082P2+ H4H16992P (n≥4)
7.11 ± 2.37 0.5416 10.09 ± 5.90 -91.47 (****)
모든 항체 치료 그룹에 대해 1 mg/kg 총 항체 농도를 사용하였다.*P≤.05, ***P≤.001, ****P≤.0001
n = 그룹당 마우스의 수
실시예 9: 항-Bet v 1 단클론성 항체 사이의 교차 경합
항-Bet v 1 단클론성 항체의 패널 내에서 결합 경합을 Octet HTX 바이오센서 플랫폼 (Pall ForteBio Corp.) 상에서 실시간, 비표지 생물층 간섭계 검정을 사용하여 측정하였다. 전체 실험을 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 1 mg/mL BSA, pH 7.4 (HBS-EBT) 완충액에서 25℃에서 1000 rpm의 속도로 플레이트를 흔들어주면서 수행하였다. 2개의 항체가 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그를 포함하여 발현된 재조합 돌연변이 Bet v 1 (돌연변이 Bet v 1-MMH; SEQ ID NO: 312) 상의 그들의 각각의 에피토프에의 결합에 대해 서로와 경합할 수 있었는지를 평가하기 위하여, 약 0.21 nm의 돌연변이 Bet v 1-MMH를 먼저, 바이오센서 팁을 90초 동안 돌연변이 Bet v 1-MMH의 5 μg/mL 용액을 함유하고 있는 웰에 침지함으로써 항-Penta-His 항체 코팅된 Octet 바이오센서 팁 (Fortebio Inc, # 18-5122) 위로 포획시켰다. 항원 포획된 바이오센서 팁을 그런 후 제1 항-Bet v 1 단클론성 항체 (mAb-1로서 언급함)의 50 μg/mL 용액을 함유하고 있는 웰에 4분 동안 침지함으로써 mAb-1으로 포화시켰다. 그런 후 바이오센서 팁을 제2 항-Bet v 1 단클론성 항체 (mAb-2로서 언급함)의 50 μg/mL 용액을 함유하고 있는 웰에 3분 동안 침지하였다. 바이오센서 팁을 실험의 매 단계 사이에 HBS-EBT 완충액으로 세척하였다. 실시간 결합 반응을 전 실험 과정 중에 모니터링하였고 매 단계가 끝날 때마다 결합 반응을 기록하였다. mAb-1과 사전에 복합체를 형성한 돌연변이 Bet v 1-MMH에 대한 mAb-2 결합의 반응을 비교하였고 상이한 항-Bet v 1 단클론성 항체의 경합/비경합 거동을 표 17에서 나타낸 것과 같이 측정하였다.
20개의 항-Bet v 1 단클론성 항체 중 3개가 돌연변이 Bet v 1-MMH에 결합하지 못하였고 교차 경합 데이터는 결정적이지 않은 것으로 나타났다.
항-Bet v 1 단클론성 항체 사이의 교차 경합
mAb-1 mAb-1와 경합하는 mAb-2
H4H17082P2 H4H16971P
H4H16971P H4H17082P2
H4H17027P
H4H17028P
H4H16946P
H4H17038P2
H4H17027P H4H16971P
H4H17028P
H4H16946P
H4H17038P2
H4H16950P
H4H17028P H4H16971P
H4H17027P
H4H16946P
H4H17038P2
H4H16950P
H4H16946P H4H16971P
H4H17027P
H4H17028P
H4H17038P2
H4H16950P
H4H17038P2 H4H16971P
H4H17027P
H4H17028P
H4H16946P
H4H16950P
H4H16979P
H4H16950P H4H17027P
H4H17028P
H4H16946P
H4H17038P2
H4H17015P
H4H16987P H4H17045P2
H4H17067P2
H4H16967P
H4H17045P2 H4H16987P
H4H17067P2
H4H16967P
H4H17015P
H4H17067P2 H4H16987P
H4H17045P2
H4H16967P
H4H17015P
H4H16967P H4H16987P
H4H17045P2
H4H17067P2
H4H17015P
H4H16992P
H4H17015P H4H16950P
H4H17045P2
H4H17067P2
H4H16967P
H4H16979P
H4H16991P
H4H17033P
H4H16992P
H4H16979P H4H17038P2
H4H17015P
H4H16991P
H4H17033P
H4H16992P
H4H16991P H4H17015P
H4H16979P
H4H17033P
H4H16992P
H4H17033P H4H17015P
H4H16979P
H4H16991P
H4H16992P
H4H16992P H4H16967P
H4H17015P
H4H16979P
H4H16991P
H4H17033P
H4H16960P
H4H17031P
H4H16960P H4H16992P
H4H17031P
H4H17031P H4H16992P
H4H16960P
H4H16943P IC*
H4H17001P IC*
*IC는 항-Bet v 1 단클론성 항체가 돌연변이 Bet v 1-MMH에 결합하지 못하였고 교차 경합 데이터는 결정적이지 않은 것으로 나타났다.
실시예 10. 인간화된 마우스 PCA 모델에서 Bet v 1에 의해 유도된 비만 세포 탈과립화를 차단하는 항-Bet v 1 항체 조합의 능력
인간 자작나무 알레르기 개체를 가로지르는 알레르겐-특이적 IgE 반응의 다클론성을 탐색하기 위하여, 인간화된 인간화된 FcεR1α 마우스 모델을 이용하여 마우스 비만 세포 표면에서 FcεR1α에 대한 인간 IgE의 결합을 용이하게 하였다. 인간 IgE는 마우스 FcεR1α에 결합할 수 없기 때문에, 내인성 마우스 FcεR1α가 상응하는 인간 인간 FcεR1α 서열로 교체되고 FcεR1α hu/hu 로 표시된, 유전적으로 변형된 마우스를 생성하였다. FcεR1α hu/hu 마우스는 인간 FcεR1α의 표면 발현 및 수동 피부 아나필락시스 (PCA) 모델에서 야생형 마우스와 비슷한 방식으로 알레르겐:IgE 활성화에 대해 반응하는 능력을 입증함으로써 이 모델에서 사용할 수 있는 것으로 확인하였다. 이 PCA 모델은 피부의 국소 영역으로의 알레르기성 인간 혈청의 피내 주사 및 이어서 염료와 함께 관련된 알레르겐의 정맥내 주사를 포함한다. 알레르기 반응은 감작 부위에서 모세관 확장 및 증가된 혈관 투과도를 유발하여, 이 부위에서 염료의 우선적인 축적을 초래한다. 염료는 조직으로부터 추출될 수 있고 분광광도계에 의해 정량화될 수 있다. 테스트 항혈청으로 감작된 조직으로의 염료 유출을 비알레르기성 인간 혈청으로 감작된 조직으로의 유출과 비교한다.
방법
이 모델에서 비만 세포 탈과립화에 미치는 항-Bet v 1 항체의 영향을 측정하기 위하여, 인간화된 FcεR1α 마우스에게 제1일에 아이소타입 대조군 항체 또는 항-Bet v 1 항체 조합을 피하 주사하였다. 각 인간 도너에 대해, 2개의 독립적인 실험을 수행하였고, 그룹당 5마리 마우스의 데이터를 조합하였다. 그룹은 단클론성 항체가 없는 음성 대조군, 아이소타입 음성 대조군, REGN5713+REGN5715 이중 항-Bet v 1 항체 치료 그룹 및 REGN5713+REGN5714+REGN5715 삼중 항-Bet v 1 항체 치료 그룹으로 구성되었다. 총 또는 조합된 항체 농도는 1 mg/kg 또는 IgG4 아이소타입 대조군 항체 (음성 아이소타입 대조군으로서 항-IL6Rα)였다. 3일 후에, 자작나무 알레르기 환자로부터의 혈청 또는 비자작나무 알레르기 환자로부터의 혈청 (음성 대조군)을 각각 우측 및 좌측 귀에 피내 주사하여 (ID), 비만 세포 상의 FcεRI에 알레르겐-특이적 IgE가 결합되도록 하였다. 각 도너로부터 동일한 양의 알레르겐 특이적 IgE가 실험에 사용되는 것을 확실하게 하기 위하여, 항혈청 주사를 10 KUa/L의 Bet v 1-특이적 IgE ImmunoCAP®에 대해 표준화하였다.
알레르겐-특이적 항체의 국소 투여 후 24시간 후에, 마우스를 0.5% 에반스 블루 염료를 함유한 PBS에 희석한 1 μg의 Bet v 1의 정맥내 주사에 의해 도전시켰다. 알레르겐 도전 후 1시간 후에, 마우스를 희생시켰다. 에반스 블루 염료를 귀 조직으로부터 추출하였고 표준 곡선을 사용하여 분광광도계에 의해 정량화하였다. (사용한 프로토콜의 다이아그램에 대해 도 6 참조). 에반스 블루 염료 유출의 감소를 아이소타입 대조군 항체로 치료된 그룹, B(아이소타입, 평균)으로부터, 항체-치료된 그룹의 자작나무 알레르기 혈청 투여된 귀에 대한 에반스 블루 염료의 농도 (귀 조직 무게에 의해 표준화됨), B(mAb, i)를 뺌으로써 계산하였다. 그런 후 이 숫자를 B(아이소타입, 평균)과 항체-치료된 그룹의 비알레르기성 혈청 투여된 귀에 대한 염료 농도 [N(mAb,i)] 사이의 차이로 나누고 100을 곱하여 염료 유출의 전체 평균 퍼센트 감소 (% 감소)를 얻었다. 그 식을 하기에 나타낸다:
% 감소 (평균) = 100*[B(아이소타입, 평균) - B(mAb,i)]/[B(아이소타입, 평균) - N(mAb,i)]
음성 아이소타입 대조군 그룹과 비교한 항-Bet v1 항체 치료 그룹에서의 염료 누출의 퍼센트 감소의 증가는 비만 세포 탈과립화의 차단에서 Bet v 1 항체 또는 항체 조합의 유효성의 척도이다.
결과
이 모델에서, H4H16992P (REGN5713으로도 언급됨), H4H17038P2 (REGN5714로도 언급됨) 및 H4H17082P2 (REGN5715로도 언급됨)로 지정된 항-Bet v 1 항체의 조합 사용은 3개의 자작나무 알레르기 도너 중 3개로부터의 IgE 함유 혈청을 사용할 때 IgE 매개된 반응의 최대 차단을 입증하였다 (도 7 참조). 자작나무 알레르기 도너 25609, H4H16992P, H4H17038P2 및 H4H17082P2로부터의 헐??을 사용하는 것은 이것들이 조합될 때 아이소타입 대조군과 비교하여 비만 세포 탈과립화의 95% 차단을 나타냈고 (평균 차이 -42.04 +/-6.9 (p<0.0001)), H4H16992P와 H4H17082P2의 조합 사용은 아이소타입 대조군과 비교하여 비만 세포 탈과립화의 93% 차단을 나타냈다 (평균 차이 -41.74 +/-3.7 (p<0.0001)). 자작나무 알레르기 도너 23658, H4H16992P, H4H17038P2 및 H4H17082P2를 사용하는 것은, 조합될 때 아이소타입 대조군과 비교하여 비만 세포 탈과립화의 90% 차단을 나타냈고 (평균 차이 -53.67 +/-7.1 (p<0.0001)) H4H17082P2와 조합된 H4H16992P는 아이소타입 대조군과 비교하여 비만 세포 탈과립화의 74% 차단을 나타냈다 (평균 차이 -44.58 +/-11.4 (p<0.0001)). 마지막으로, 자작나무 알레르기 도너 25414, H4H16992P, H4H17038P2 및 H4H17082P2를 사용하는 것은, 조합될 때 아이소타입 대조군과 비교하여 비만 세포 탈과립화의 92% 차단을 나타냈고 (평균 차이 -39.72 +/-7.5 (p<0.0001)) H4H17082P2와 조합된 H4H16992P는 아이소타입 대조군과 비교하여 비만 세포 탈과립화의 80% 차단을 나타냈다 (평균 차이 -34.27 +/-7.8 (p<0.0001)).
실시예 11. 포스포-Erk 포스포플로우 검정에서 호염기세포 활성화를 차단하는 항-Bet v 1 항체 조합의 능력
인간 IgE 반응을 8명의 자작나무 알레르기 개체로부터의 샘플을 사용하여 호염기세포 활성화를 억제하는 데 미치는 항- Bet v 1 항체 H4H16992P (REGN5713으로도 언급됨), H4H17038P2 (REGN5714로도 언급됨) 및 H4H17082P2 (REGN5715로도 언급됨)의 다양한 조합의 영향을 테스트함으로써 탐색하였다. 보다 구체적으로, FcεR 맞물림 및 활성화를 평가하기 위하여, 키나아제 ERK의 인산화, 호염기세포 활성화의 근위 판독 및 탈과립화를 측정하는 기능성 포스포를로우 기반 검정에서 호염기세포를 테스트하였다 (Liu, Y. et al. (2007), J Exp Med 204, 93-103).
방법
혈액을 자작나무 알레르기 환자 (n=8명)로부터 채혈하여 Ficoll 층에서의 밀도 원심분리에 의해 PBMC를 분리하고, 세척하고, 재현탁하고 96-웰 포맷으로 단일 지점으로서 플레이팅하였다. 이것과 나란히, 정제된 천연 Bet v 1의 일정한 용량 (최종 농도 100 pM)과 혼합된 항-Bet v 1 항체 및 항체 조합 (2.56 pM 내지 200 nM)의 용량 반응뿐만 아니라 정제된 Bet v 1의 용량 반응을 포함한 2X 자극 플레이트를 준비하였다. 세포를 자극하고 계속해서 pErk-Alexa 488, CD123-BUV395 및 HLA-DR-APC 항체를 함유한 항체 칵테일로 염색하였다. 염색 후에, 데이터를 LSR-Fortessa 기기를 사용하여 획득하고 호염기세포 게이트 내에서 인산화된 Erk 염색의 MFI를 계산함으로써 분석하였다. 퍼센트 최대 억제를: 100 - ((100 X 최대 항체 반응)/아이소타입 반응)으로서 계산하였다. 최대 항체 반응은 용량 반응 곡선에서 항체의 상부의 3개 용량 (곡선의 평평한 부분)의 인산화된 Erk의 평균 중앙 형광 세기 (MFI) - 기준선 MFI (복제 미자극 샘플의 평균)였고, 아이소타입 반응은 리제너론사 제조 아이소타입 대조군 항체 (REGN1945 항-Fel d 1 IgG4P)의 용량 반응의 모든 MFI 값의 평균 - 기준선 MFI이다.
결과
모두 8개의 자작나무 꽃가루-알레르기 개체로부터의 호염기세포는 다양한 세기로 Bet v 1 자극에 반응하였다. 도 8 참조. H4H16992P, H4H17038P2 및 H4H17082P2는 8개 도너 중 8개에서 호염기세포 활성화의 적어도 70%를 억제하였고, 한편 H4H16992P와 H4H17082P2의 조합은 8개 도너 중 6개에서 동일한 크기의 억제를 달성하였다. 특히, 개별 항체는 별도로 테스트하였을 때 IgE에 대한 알레르겐 결합에 영향을 주는 능력에서 고도의 가변성을 나타냈다. H4H16992P는 8개 도너 중 3개에서 70% 이상의 차단을 달성하였고 H4H17082P2는 8개 도너 중 4개에서 호염기세포 활성화의 70% 차단을 달성하였다. H4H17038P2는 테스트한 8개의 도너 중 오직 하나에서 70% 차단을 나타냈다.
실시예 12: 천연 Bet v 1에 대한 3개의 항-Bet v 1 단클론성 항체의 동시 결합의 측정
이 실험을, 3개의 선택된 Bet v 1 단클론성 항체의 결합 에피토프가 독특하고, 단클론성 항체 결합의 순서와 관계 없이, 3개 항체의 동시 결합 시에 어떠한 입체적 방해가 나타나지 않았음을 확실하게 하기 위해 수행하였다. 3개의 Bet v 1 단클론성 항체 사이의 순서 의존성 경합 또한 평가하였다.
동일한 Bet v 1에 대한 3개의 항-Bet v 1 단클론성 항체의 동시 결합을 실시간, 비표지 표면 플라즈몬 공명 기반 Biacore 3000 바이오센서 플랫폼 (GE Healthcare.)을 사용하여 측정하였다. 전체 실험을 25℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH 7.4 (HBS-ET)를 함유한 작동 완충액에서 수행하였다. 항체를 EDC/NHS 화학을 사용하여 CM5 센서 상의 상이한 표면에 고정시켜서 5000 내지 13,000 RU의 고정화 수준을 달성하였다. REGN1945 (Fel d 1 단클론성 항체)를 또한 음성 대조군으로서 고정시켰다. 10 nM 또는 20 nM의 천연 Bet v 1 (nBet v 1)을 상이한 Bet v 1 단클론성 항체 고정된 센서 표면에 10 내지 12초 동안 주입하고 이어서 상이한 Bet v 1 단클론성 항체를 6분 동안 15 μL/분으로 계속해서 주입하였다.
단클론성 항체 고정된 센서 표면에 결합된 nBet v 1에 대한 상이한 Bet v 1 단클론성 항체의 결합을 Scrubber 2.0c를 사용하여 측정하였다. 그 결과를 표 18에 나타낸다. 1 RU (공명 단위) 미만의 결합 신호는 Bet v 1 단클론성 항체가 주입되었을 때 어떠한 결합도 관찰되지 않았음을 나타내는 한편, 더 높은 결합 신호 (2 RU 이상)는 경합이 없음을 나타낸다. 이 실시예에 포함된 모두 3개의 Bet v 1 단클론성 항체는 nBet v 1에 동시에 결합할 수 있었고 결합 반응은 항체가 첨가된 순서에 영향을 받지 않았다.
Figure pat00009
데이터는 nBet v 1과 고정된 Bet v 1 단클론성 항체의 복합체에 대한 Bet v 1 단클론성 항체의 적어도 3회의 독립적인 주입의 평균을 나타낸다.
요약
Bet v 1에 대한 결합의 순서와 관계 없이, 모두 3개의 항체의 동시 결합을 방해하는 경합은 없었고, 이것은 REGN5713, REGN5714, 및 REGN5715가 중복되지 않는, 구별되는 에피토프에 결합하는 것을 시사한다.
SEQUENCE LISTING <110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Orengo, Jamie M. Murphy, Andrew J. Badithe, Ashok T. Kamat, Vishal Liu, Yashu <120> HUMAN ANTIBODIES TO BET V 1 AND METHODS OF USE THEREOF <130> 10301WO01 <140> TBD <141> 2018-05-31 <150> 62/513,872 <151> 2017-06-01 <150> 62/571,696 <151> 2017-10-12 <150> 62/662,165 <151> 2018-04-24 <160> 323 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 1 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cctctggatt catgtctagt atgtattgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtgtccaac ataaagcaag atggaactga gaaaaactat 180 gtggagtctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaataa acagcctgag aggcgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatctg 300 tatagcagtt cgtccggcta ctattactac ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 2 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Met 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Asn Lys Tyr His Thr Lys Gly Asp His Glu 115 120 125 Val Lys Ala Glu Gln Val Lys Ala Ser Lys Glu Met Gly Glu Thr Leu 130 135 140 Leu Arg Ala Val Glu Ser Tyr Leu Leu Ala His Ser Asp Ala Tyr Asn 145 150 155 160 <210> 315 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AA 81-96 of Bet v1 <400> 315 Lys Tyr Asn Tyr Ser Val Ile Glu Gly Gly Pro Ile Gly Asp Thr Leu 1 5 10 15 <210> 316 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H17038P2 HC <400> 316 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Phe Ile Ser Asp Ser Ser Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ala Ile Gly Ser Thr Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 317 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H17038P2 LC <400> 317 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 318 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H16987P HC <400> 318 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Phe Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg His Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Ser Asn Trp Asn Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 319 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H16987P LC <400> 319 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Phe Asp Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 320 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H16992P HC <400> 320 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Asn Tyr 20 25 30 Phe Trp Thr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Met Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 321 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H16992P LC <400> 321 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Lys Ser Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Pro Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Arg Asn Asn Trp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 322 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H17082P2 HC <400> 322 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr 20 25 30 Asn Ile Phe Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Asp Trp Met 35 40 45 Gly Trp Met Asn Pro Phe Arg Asn Asn Ala Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Trp Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Ser Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu His Gly Ser Ser Trp Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 323 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4H17082P2 LC <400> 323 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (70)

  1. 천연 Bet v 1 또는 자작나무 꽃가루 추출물 (BPE)에 결합하는 분리된 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편으로서, 항체 또는 이것의 단편이:
    SEQ ID NO: 146, 290, 98, 114, 2, 18, 34, 50, 66, 82, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 및 282로 이루어지는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열; 또는
    SEQ ID NO: 154, 298, 106, 122, 10, 26, 42, 58, 74, 90, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (HCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3); 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 가지는 이것의 실질적으로 유사한 서열
    을 포함하는, 분리된 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 다음의 특징 중 하나 이상을 추가로 나타내는 것을 특징으로 하는 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편:
    (a) 전체 인간 단클론성 항체이거나;
    (b) 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 바 10-8 M 이하의 KD로 Bet v 1에 결합하거나;
    (c) SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 및 311로 이루어지는 군으로부터 선택된 Bet v 1 아미노산 서열 단편에 결합하거나; 또는
    (d) 알레르겐 특이적 IgE에 대한 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE 결합을 억제한다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체는 SEQ ID NO: 146, 290, 98, 114, 2, 18, 34, 50, 66, 82, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 및 282로 이루어지는 군으로부터 선택된 임의의 한 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 154, 298, 106, 122, 10, 26, 42, 58, 74, 90, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 서열 중 임의의 한 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 146, 290, 98, 114, 2, 18, 34, 50, 66, 82, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 및 282로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 154, 298, 106, 122, 10, 26, 42, 58, 74, 90, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, (a) SEQ ID NO: 146, 290, 98, 114, 2, 18, 34, 50, 66, 82, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 및 282로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및 (b) SEQ ID NO: 154, 298, 106, 122, 10, 26, 42, 58, 74, 90, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 다음을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편:
    (a) SEQ ID NO: 148, 292, 100, 116, 4, 20, 36, 52, 68, 84, 132, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 및 284로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인;
    (b) SEQ ID NO: 150, 294, 102, 118, 6, 22, 38, 54, 70, 86, 134, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 286으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인;
    (c) SEQ ID NO: 152, 296, 104, 120, 8, 24, 40, 56, 72, 88, 136, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 및 288로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인;
    (d) SEQ ID NO: 156, 300, 108, 124, 12, 28, 44, 60, 76, 92, 140, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 및 268로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인;
    (e) SEQ ID NO: 158, 302, 110, 126, 14, 30, 46, 62, 78, 94, 142, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 및 270으로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인; 및
    (f) SEQ ID NO: 160, 304, 112, 128, 16, 32, 48, 64, 80, 96, 144, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 및 272로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 114/122, 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 및 282/266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 항원 결합 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 69 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 96 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  10. 제9항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  11. 제10항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  12. 제9항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  13. 제12항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  14. 제9항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  15. 제9항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 70 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  16. 제15항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 57 내지 약 위치 66 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  17. 제9항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 96 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  18. 제17항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 81 내지 약 위치 89 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  19. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 307, 308, 309, 310, 및 311로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  20. 제9항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 및 114/122로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 서열 쌍을 가지는 것을 특징으로 하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 천연 Bet v 1 또는 BPE에 대한 결합에 대해 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 114/122, 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 및 282/266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 참조 항체와 경합하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  22. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 114/122, 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/266, 및 282/266으로 이루어지는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 참조 항체와 동일한 Bet v 1 상의 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을, 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약학적 조성물.
  24. 제23항에 있어서,
    a) SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
    b) SEQ ID NO: 및 290, 98, 및 114로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 298, 106, 및 122로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편
    을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  25. 제23항에 있어서,
    a) SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
    b) SEQ ID NO: 290의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 298의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편
    을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  26. 제23항에 있어서,
    a) SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편;
    b) SEQ ID NO: 290의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 298의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편; 및
    c) SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편
    을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  27. 제23항에 있어서, 3개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 포함하며, 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 148/150/152/156/158/160, 292/294/296/300/302/314, 및 100/102/104/108/110/112의 각각의 HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 아미노산 서열 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  28. 제23항에 있어서, 4개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 포함하며, 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 148/150/152/156/158/160, 292/294/296/300/302/314, 100/102/104/108/110/112 및 116/118/120/124/126/128의 각각의 HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 아미노산 서열 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  29. 제23항에 있어서, 3개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 포함하며, 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 및 98/106의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  30. 제23항에 있어서, 4개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편을 포함하며, 인간 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 및 114/122의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  31. Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 제2 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약학적 조성물로서, 여기서 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 44 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하고, 제2 항체 또는 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 69 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것인, 제약학적 조성물.
  32. 제30항에 있어서, 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하고, 제2 항체 또는 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 위치 56 범위의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  33. 제30항에 있어서, 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  34. 제30항에 있어서, 제2 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 308의 아미노산 서열과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  35. Bet v 1에 결합하는 제1 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편, 및 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약학적 조성물로서, 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 57 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 89 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용하는 것인, 제약학적 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 306의 약 위치 23 내지 약 위치 43 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 44 내지 약 56 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 위치 2 내지 약 위치 19 범위의 아미노산 잔기; SEQ ID NO: 306의 약 57 내지 약 70 범위의 아미노산 잔기; 및 SEQ ID NO: 306의 약 81 내지 약 89 범위의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열과 상호작용하며, 하나 이상의 추가의 분리된 인간 단클론성 항체 중 적어도 하나는 제1 분리된 인간 단클론성 항체와 상이한 아미노산 서열과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  37. 제35항에 있어서, 제1 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열과 상호작용하고 하나 이상의 추가의 항체 또는 이것의 단편은 SEQ ID NO: 308, 309, 310, 및 311로 이루어지는 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  38. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따르는 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 핵산 분자.
  39. 제38항에 따르는 Bet v 1에 결합하는 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
  40. 제38항의 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포.
  41. 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 또는 흰자작나무 BPE 감작과 관련된 비만 세포 탈과립화를 방지 또는 감소시키거나 호염기세포 활성화를 차단하는 방법으로서, 제23항의 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  42. 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 나타내는 환자를 치료하기 위한, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 한 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법으로서, 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따르는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 유효량; 또는 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항에 따르는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응이 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간이 축소되거나, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도가 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 투여 후에, 또는 임의의 하나 이상의 전술한 항체를 포함하는 조성물의 투여 후에 감소되는 것인, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 자작나무 꽃가루 추출물 (BPE)은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제42항에 있어서, 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 알레르기 반응을 감소시키기에 유용한 제2 치료제의 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 제2 치료제는 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민, 에피네프린, 충혈 제거제, Bet v 1에 대한 또 다른 상이한 항체 및 펩타이드 백신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 제42항에 있어서, 환자를 항체 또는 이것의 단편 또는 항체를 포함하는 제약학적 조성물 직후에 또는 이것과 동시에 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT) 양생법으로 치료하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 치료는 참나무 단백질, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 환자의 노출 후에 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식, 또는 아나필락시스 반응의 감소를 초래하는 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보이는 환자를 치료하는 데 사용하기 위한, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 것이고, 여기서 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응은 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간은 축소되거나, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증은 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도는 감소되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  49. 제48항에 있어서, 자작나무 꽃가루 추출물은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  50. 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보이는 환자를 치료하는 데 사용하기 위한, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의, 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항의 제약학적 조성물의 용도로서, 여기서 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응은 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간은 축소되거나, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증은 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도는 감소되는 것인, 제약학적 조성물의 용도.
  51. 제50항에 있어서, 자작나무 꽃가루 추출물은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물의 용도.
  52. 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항의 제약학적 조성물의 용도로서, 조성물은 참나무 단백질, 참나무 관련 알레르겐, 자작나무 꽃가루 또는 이것의 추출물, 또는 Bet v 1 단백질에 대한 알레르기 반응을 감소시키는 데 유용한 제2 치료제와 함께 투여되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물의 용도.
  53. 제52항에 있어서, 자작나무 꽃가루 추출물은 천연 Bet v 1, 백자작나무 BPE, 흑자작나무 BPE, 및 흰자작나무 BPE로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물의 용도.
  54. 제52항에 있어서, 제2 치료제는 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 항히스타민, 에피네프린, 충혈 제거제, Bet v 1에 대한 또 다른 상이한 항체 및 펩타이드 백신으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물의 용도.
  55. 하나 이상의 참나무 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응을 보이는 환자를 치료하기 위한, 또는 하나 이상의 참나무 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법으로서, 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따르는, Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 유효량; 또는 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항에 따르는, Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 참나무 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응이 방지되거나, 또는 중증도 및/또는 기간이 축소되거나, 또는 참나무 알레르겐에 대한 민감성, 또는 알레르기 반응과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 방지되거나, 또는 개선되며, 또는 참나무 알레르겐에 대한 민감성 또는 알레르기 반응의 빈도 및/또는 기간, 또는 중증도가 Bet v 1에 결합하는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 투여 후에, 또는 임의의 하나 이상의 전술한 항체를 포함하는 조성물의 투여 후에 감소되는 것인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 하나 이상의 참나무 알레르겐은 Bet v 1, Aln g1, Cor a1, Car b1, 및 Que a1로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. Bet v 1에 결합하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편으로서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Aln g1, Cor a1, Car b1, Que a1, Api g2, Api g1, Dau c1, Mal d1, Ost c1, Fag s1, 및 Cas s1로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 알레르겐과 교차 반응하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  58. 제57항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 Aln g1, Mal d1, Api g1, Car b1, 및 Cor a1로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 알레르겐과 교차 반응하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  59. 제57항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 바 10-8 M 이하의 KD로 Bet v 1에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  60. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항의 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을, 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약학적 조성물.
  61. 알레르겐-특이적 면역요법 (SIT) 양생법의 효능 및/또는 안전성을 증강시키는 방법으로서, 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따르는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 유효량; 또는 제23항 내지 제37항 중 어느 한 항에 따르는 하나 이상의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 SIT 양생법 직전에 또는 그것과 동시에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 SIT 양생법에 대한 알레르기 반응의 중증도가 완화되는 것인, 방법.
  62. 제61항에 있어서, SIT 양생법은 용량 증가 단계와 이어서 유지 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 제62항에 있어서, SIT 양생법은 급속 SIT 양생법인 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 제1항 또는 제21항에 있어서, BPE는 백자작나무, 흑자작나무, 또는 흰자작나무로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편.
  65. 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 적어도 2개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을, 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약학적 조성물로서, 적어도 2개의 항체는 천연 Bet v 1 또는 BPE에의 결합에 대해 경합하지 않는 것인, 제약학적 조성물.
  66. 제65항에 있어서, 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 적어도 3개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 포함하며, 적어도 3개의 항체는 천연 Bet v 1 또는 BPE에의 결합에 대해 경합하지 않는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  67. 제65항에 있어서, 천연 Bet v 1 또는 BPE에 결합하는 적어도 4개의 분리된 인간 단클론성 항체 또는 이것의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 포함하며, 적어도 4개의 항체는 천연 Bet v 1 또는 BPE에의 결합에 대해 경합하지 않는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  68. 제65항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154 및 290/298의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  69. 제66항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 및 98/106의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  70. 제67항에 있어서, 항체 또는 이것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 146/154, 290/298, 98/106, 및 114/122의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240096746A (ko) * 2017-06-01 2024-06-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Bet v 1에 대한 인간 항체 및 이것의 사용 방법
JP2023531968A (ja) * 2020-07-01 2023-07-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗bet v 1抗体を使用してアレルギーを治療する方法
CN113041271B (zh) * 2021-04-14 2022-12-27 浙江养生堂天然药物研究所有限公司 具有预防和抗过敏功效的组合物
WO2024200854A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Alk-Abelló A/S Allergen binding antibodies suitable for treating tree pollen allergies

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007134350A2 (en) * 2006-05-18 2007-11-29 Biomay Ag Antibodies specific for bet v 1 and use thereof in the prevention and treatment of bet v 1-induced diseases

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994010194A2 (de) 1992-10-27 1994-05-11 Biomay Produktions- Und Handelsgesellschaft M.B.H. MOLEKÜLFRAGMENTE (PEPTIDE) DER HAUPTALLERGENE DER POLLEN VON BÄUMEN DER ORDNUNG $i(FAGALES)
WO1994014475A1 (en) 1992-12-21 1994-07-07 Tanox Biosystems, Inc. ALLERGEN-SPECIFIC IgA MONOCLONAL ANTIBODIES AND RELATED PRODUCTS FOR ALLERGY TREATMENT
EP0619323A1 (en) * 1993-04-09 1994-10-12 Schering-Plough Human monoclonal antibodies and processes and materials for making such antibodies
GB0002386D0 (en) 2000-02-02 2000-03-22 Novartis Nutrition Ag Therapeutic composition
US6849259B2 (en) 2000-06-16 2005-02-01 Symphogen A/S Polyclonal antibody composition for treating allergy
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
ITMI20052517A1 (it) * 2005-12-29 2007-06-30 Lofarma Spa Varianbtio ipoallergeniche dell'allergene maggiore bet v 1 di polline di betula verrucosa
PL2041177T3 (pl) 2006-06-02 2012-09-28 Regeneron Pharma Przeciwciała o wysokim powinowactwie przeciw ludzkiemu receptorowi IL 6
GB201002559D0 (en) 2010-02-15 2010-03-31 Circassia Ltd Birch peptides for vaccine
US10935554B2 (en) * 2013-08-23 2021-03-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Diagnostic tests and methods for assessing safety, efficacy or outcome of allergen-specific immunotherapy (SIT)
KR20240096746A (ko) 2017-06-01 2024-06-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Bet v 1에 대한 인간 항체 및 이것의 사용 방법
TWI838389B (zh) 2018-07-19 2024-04-11 美商再生元醫藥公司 雙特異性抗-BCMAx抗-CD3抗體及其用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007134350A2 (en) * 2006-05-18 2007-11-29 Biomay Ag Antibodies specific for bet v 1 and use thereof in the prevention and treatment of bet v 1-induced diseases

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