JP2020522996A - 薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法 - Google Patents
薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020522996A JP2020522996A JP2019554538A JP2019554538A JP2020522996A JP 2020522996 A JP2020522996 A JP 2020522996A JP 2019554538 A JP2019554538 A JP 2019554538A JP 2019554538 A JP2019554538 A JP 2019554538A JP 2020522996 A JP2020522996 A JP 2020522996A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mesenchymal stem
- stem cells
- exosomes
- atv
- stem cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 84
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 74
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 claims abstract 2
- XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N Atorvastatin Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N 0.000 claims description 62
- XUKUURHRXDUEBC-UHFFFAOYSA-N Atorvastatin Natural products C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 62
- 229960005370 atorvastatin Drugs 0.000 claims description 62
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 claims description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 9
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 claims description 7
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 30
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 25
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 15
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 12
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 12
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 11
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 11
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 10
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 108020005198 Long Noncoding RNA Proteins 0.000 description 4
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 2
- 101000836492 Dictyostelium discoideum ALG-2 interacting protein X Proteins 0.000 description 2
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001134621 Homo sapiens Programmed cell death 6-interacting protein Proteins 0.000 description 2
- 101000613251 Homo sapiens Tumor susceptibility gene 101 protein Proteins 0.000 description 2
- 102100033344 Programmed cell death 6-interacting protein Human genes 0.000 description 2
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100040879 Tumor susceptibility gene 101 protein Human genes 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000010595 endothelial cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000007822 cytometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 1
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/405—Cell cycle regulated proteins, e.g. cyclins, cyclin-dependant kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/48—Regulators of apoptosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本発明は、薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法を提供する。本発明の間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法は、スタチン系薬剤で間葉系幹細胞を前処理し、分泌されたエクソソームを収集するように処理された間葉系幹細胞を培養することを含む。また、本発明は、間葉系幹細胞の抗アポトーシス能及び／又はホーミング促進能を向上させる製剤の調製のためのスタチン系薬剤の使用、及び間葉系幹細胞による心筋梗塞微小環境改善作用及び／又は心筋修復能力を有するエクソソームの分泌を促進する製剤の調製のためのスタチン系薬剤の使用を提供する。【選択図】なし
Description
本発明は、薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法に関し、具体的には、スタチン系薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの効率的な調製方法に関する。
世界保健機関（ＷＨＯ）の統計データにより、心血管疾患は、世界中で２０１６年の死因の１位となり（凡そ１７６０万人、３２．２％を占める）、そのうちの９４８万人は、虚血性心疾患（１７．３％を占める）で死亡した（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｓ ＧＭ． Ｇｌｏｂａｌ， ｒｅｇｉｏｎａｌ， ａｎｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｕｎｄｅｒ−５ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ， ａｄｕｌｔ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ， ａｇｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ， ａｎｄ ｌｉｆｅ ｅｘｐｅｃｔａｎｃｙ， １９７０−２０１６： ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｔｕｄｙ ２０１６． Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ２０１７；３９０（１０１００）：１０８４−１１５０； Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｓ ＧＣＯＤ． Ｇｌｏｂａｌ， ｒｅｇｉｏｎａｌ， ａｎｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ａｇｅ−ｓｅｘ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｆｏｒ ２６４ ｃａｕｓｅｓ ｏｆ ｄｅａｔｈ， １９８０−２０１６： ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｔｕｄｙ ２０１６． Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ２０１７；３９０（１０１００）：１１５１−１２１０）。急性心筋梗塞（ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ、ＡＭＩ）では、多数の心筋が虚血によって壊死し、そして瘢痕組織に代替され、心不全、さらには死亡を誘発する。従来の治療手段では、心筋の再生及び修復に非効果的である。近年、ＡＭＩの治療には、幹細胞移植療法、特に例えば骨髄間葉系幹細胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ、ＢＭ−ＭＳＣｓ）のような間葉系幹細胞（ＭＳＣｓ、ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）の移植療法が強く期待されてきた（Ｏｒｌｉｃ Ｄ， Ｋａｊｓｔｕｒａ Ｊ， Ｃｈｉｍｅｎｔｉ Ｓ， Ｊａｋｏｎｉｕｋ Ｉ， Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＭ， Ｌｉ Ｂ， Ｐｉｃｋｅｌ Ｊ， ＭｃＫａｙ Ｒ， Ｎａｄａｌ−Ｇｉｎａｒｄ Ｂ， Ｂｏｄｉｎｅ ＤＭ ａｎｄ ｏｔｈｅｒｓ． Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｅｌｌｓ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｉｎｆａｒｃｔｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ． Ｎａｔｕｒｅ ２００１；４１０（６８２９）：７０１−７０５； Ｆｉｓｈｅｒ ＳＡ， Ｄｏｒｅｅ Ｃ， Ｍａｔｈｕｒ Ａ， Ｍａｒｔｉｎ−Ｒｅｎｄｏｎ Ｅ． Ｍｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１５；１１６（８）：１３６１−１３７７； Ａｆｚａｌ ＭＲ， Ｓａｍａｎｔａ Ａ， Ｓｈａｈ ＺＩ， Ｊｅｅｖａｎａｎｔｈａｍ Ｖ， Ａｂｄｅｌ−Ｌａｔｉｆ Ａ， Ｚｕｂａ−Ｓｕｒｍａ ＥＫ， Ｄａｗｎ Ｂ． Ａｄｕｌｔ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ： Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ Ｆｒｏｍ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｔｒｉａｌｓ． Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１５；１１７（６）：５５８−５７５）。しかしながら、臨床研究によれば、間葉系幹細胞はパラ分泌による保護効果に基づき梗塞後の心機能をある程度に改善するものの、その効果が著明ではない。更に研究した結果、間葉系幹細胞は、パラ分泌により保護効果を発生するマカニズムは主に細胞外小胞構造体であるエクソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）の分泌により達成されることが明らかとなった（Ｍａｋｒｉｄａｋｉｓ Ｍ， Ｒｏｕｂｅｌａｋｉｓ ＭＧ， Ｖｌａｈｏｕ Ａ． Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ： ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｍｅ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ ２０１３；１８３４（１１）：２３８０−２３８４；Ｈｕａｎｇ Ｐ， Ｔｉａｎ Ｘ， Ｌｉ Ｑ， Ｙａｎｇ Ｙ． Ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ Ｒｅｖ ２０１６；２１（６）：７３７−７５２；Ｌａｉ ＲＣ， Ａｒｓｌａｎ Ｆ， Ｌｅｅ ＭＭ， Ｓｚｅ ＮＳ， Ｃｈｏｏ Ａ， Ｃｈｅｎ ＴＳ， Ｓａｌｔｏ−Ｔｅｌｌｅｚ Ｍ， Ｔｉｍｍｅｒｓ Ｌ， Ｌｅｅ ＣＮ， Ｅｌ ＯＲ ａｎｄ ｏｔｈｅｒｓ． Ｅｘｏｓｏｍｅ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ ＭＳＣ ｒｅｄｕｃｅｓ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２０１０；４（３）：２１４−２２２）。エクソソームは、供給源の豊富さ、安定、免疫原性なしなどの利点を有し、またＢＭ−ＭＳＣｓ由来のエクソソーム （ＭＳＣ−Ｅｘｏ）は、心筋梗塞微小環境を改善することができるため、新世代の心筋修復製品として期待されている（Ｌａｍｉｃｈｈａｎｅ ＴＮ， Ｓｏｋｉｃ Ｓ， Ｓｃｈａｒｄｔ ＪＳ， Ｒａｉｋｅｒ ＲＳ， Ｌｉｎ ＪＷ， Ｊａｙ ＳＭ． Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｒｏｌｅｓ ｆｏｒ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｖｅｓｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｐａｒｔ Ｂ： Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１５；２１（１）：４５−５４）。
発明内容
本発明は、効率的な間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法を提供することを目的とするものである。
本発明は、効率的な間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法を提供することを目的とするものである。
本発明により、スタチン系薬剤、例えばアトルバスタチン（Ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ、 ＡＴＶ）で間葉系幹細胞を前処理することにより、間葉系幹細胞の抗アポトーシス能及びホーミング促進能を有意に向上させ、著明な心筋梗塞微小環境改善作用及び効率的な心筋修復能力を有する幹細胞由来エクソソームを調製することができることを発見した。
一方、本発明は、スタチン系薬剤で間葉系幹細胞を前処理し、分泌のエクソソームを収集するように処理された間葉系幹細胞を培養することを含む、間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法を提供する。
本発明の具体的実施態様によれば、本発明にかかる間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法は、
間葉系幹細胞の培地にスタチン系薬剤を加え、１２〜２４時間前処理した後、細胞の培地を無エクソソームの完全培地に変更して引き続き培養し、４８時間後に馴化培地を収集し、スタチン系薬剤で前処理した間葉系幹細胞から分泌されたエクソソームを超遠心により分離して得ることを含む。
間葉系幹細胞の培地にスタチン系薬剤を加え、１２〜２４時間前処理した後、細胞の培地を無エクソソームの完全培地に変更して引き続き培養し、４８時間後に馴化培地を収集し、スタチン系薬剤で前処理した間葉系幹細胞から分泌されたエクソソームを超遠心により分離して得ることを含む。
本発明の具体的実施態様によれば、本発明にかかる間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法において、前記超遠心は、
馴化培地を収集した後、遠心により細胞を除去する工程と、遠心により細胞破片を除去する工程と、高速遠心により大型小胞を除去する工程と、そして超遠心により沈殿を回収し、再懸濁後に再度超遠心し、エクソソームを得る工程とをこの順で含む。
馴化培地を収集した後、遠心により細胞を除去する工程と、遠心により細胞破片を除去する工程と、高速遠心により大型小胞を除去する工程と、そして超遠心により沈殿を回収し、再懸濁後に再度超遠心し、エクソソームを得る工程とをこの順で含む。
本発明の一つの好ましい具体的実施態様において、馴化培地を収集した後、３００ｇで１０分遠心することにより、細胞を除去する。２０００ｇで２０分遠心することにより、細胞破片を除去する。１６５００ｇで３０分高速遠心することにより、大型小胞を除去する。１２００００ｇで７０分超遠心することにより沈殿を回収し、再懸濁後に、再度１２００００ｇで７０分超遠心し、エクソソームを得る。
本発明の具体的実施態様によれば、本発明にかかる間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法において、前記スタチン系薬剤は、アトルバスタチンを含む。
本発明の具体的実施態様によれば、本発明にかかる間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法において、前記間葉系幹細胞は、骨髄間葉系幹細胞又は脂肪間葉系幹細胞を含む。
一方、本発明は、また、本発明に記載の方法により調製したエクソソームを提供する。
もう一方、本発明は、また、間葉系幹細胞の抗アポトーシス能及び／又はホーミング促進能を向上させる製剤の調製のためのスタチン系薬剤の使用を提供する。
もう一方、本発明は、また、間葉系幹細胞の心筋梗塞微小環境改善作用及び／又は心筋修復能力を有するエクソソームの分泌を促進する製剤の調製のためのスタチン系薬剤の使用を提供する。
本発明の具体的実施態様によれば、本発明において、前記スタチン系薬剤は、アトルバスタチンを含み、好ましくは、スタチン系薬剤１μＭで間葉系幹細胞を２４時間前処理する。
本発明の具体的実施態様によれば、本発明において、前記間葉系幹細胞は、骨髄間葉系幹細胞又は脂肪間葉系幹細胞を含む。
本発明の一つの具体的実施態様において、ＡＴＶ １μＭでＢＭ−ＭＳＣを２４時間前処理することにより、効率的な心筋修復及び内皮保護機能を有するエクソソームを取得することができる。
以下、具体的な実施例により本発明の特徴及び奏する技術効果についてさらに詳細に説明するが、本発明はそれらによって何ら限定されるものではない。実施例では、各々の出発試薬は、何れも市販されるものであり、具体的条件が記載されていない実験方法について、当分野で周知の一般的方法及び通常の条件、又は機器メーカーの推奨条件に従う。
実施例１
間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法
差次接着により初代ラット（ＳＤラット、６０〜８０ｇ）ＢＭ−ＭＳＣｓを単離し、３〜４代目に拡大継代して使用に備えた。ＢＭ−ＭＳＣｓ完全培地（ＩＭＤＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、アメリカ）にＡＴＶを加え、２４時間前処理した後、細胞の培地を無エクソソームの完全培地（１８時間の超遠心により得られた１０％ＦＢＳ含有ＩＭＤＭ）に変更して引き続き培養した。４８時間後、馴化培地を回収し、超遠心によりＡＴＶで前処理したＢＭ−ＭＳＣｓに分泌されたエクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ）を分離して得た。具体的な超遠心工程は、馴化培地を回収した後、３００ｇで１０分遠心することにより、細胞を除去する工程と、２０００ｇで２０分遠心することにより、細胞破片を除去する工程と、１６５００ｇで３０分高速遠心することにより、大型小胞を除去する工程と、１２００００ｇで７０分超遠心することにより沈殿を回収し、再懸濁後に、再度１２００００ｇで７０分超遠心し、エクソソームを得る工程とを含む。
間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法
差次接着により初代ラット（ＳＤラット、６０〜８０ｇ）ＢＭ−ＭＳＣｓを単離し、３〜４代目に拡大継代して使用に備えた。ＢＭ−ＭＳＣｓ完全培地（ＩＭＤＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、アメリカ）にＡＴＶを加え、２４時間前処理した後、細胞の培地を無エクソソームの完全培地（１８時間の超遠心により得られた１０％ＦＢＳ含有ＩＭＤＭ）に変更して引き続き培養した。４８時間後、馴化培地を回収し、超遠心によりＡＴＶで前処理したＢＭ−ＭＳＣｓに分泌されたエクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ）を分離して得た。具体的な超遠心工程は、馴化培地を回収した後、３００ｇで１０分遠心することにより、細胞を除去する工程と、２０００ｇで２０分遠心することにより、細胞破片を除去する工程と、１６５００ｇで３０分高速遠心することにより、大型小胞を除去する工程と、１２００００ｇで７０分超遠心することにより沈殿を回収し、再懸濁後に、再度１２００００ｇで７０分超遠心し、エクソソームを得る工程とを含む。
調製したＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏの同定
電子顕微鏡（ＨＩＴＡＣＨＩ、Ｈ−６００ＩＶ、日本）で、形態構造を解析観察すること、ＮＴＡ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＮａｎｏＳｉｇｈｔ、イギリス）で、エクソソームの粒径分布を分析すること、及びＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔでエクソソーム蛋白質マーカーを検出することを含む。
電子顕微鏡（ＨＩＴＡＣＨＩ、Ｈ−６００ＩＶ、日本）で、形態構造を解析観察すること、ＮＴＡ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＮａｎｏＳｉｇｈｔ、イギリス）で、エクソソームの粒径分布を分析すること、及びＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔでエクソソーム蛋白質マーカーを検出することを含む。
濃度の異なるＡＴＶでの前処理がＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏの機能への影響を比較して、最適なＡＴＶ前処理濃度を選定した。この最適なＡＴＶ濃度で前処理したＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏを利用して、血管内皮細胞の管形成、遊走及び抗アポトーシス作用への影響、心筋内注射によるラット心筋梗塞後心機能改善、梗塞面積減小効果を含む機能学的評価を行った。最後に、ＭＳＣＡＴＶ−ＥｘｏにおけるｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９発現レベルを測定する分子生物学的評価を行った。
評価指標（調査結果）
超遠心により分離して得たＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、電子顕微鏡下で球状若しくはディスク状を示し、１００ｎｍ程度の大きさを有する。ＮＴＡ分析により、その粒径分布は３０〜１５０ｎｍの範囲にあり、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔアッセイにより、ＭＳＣＡＴＶ−ＥｘｏはＴＳＧ１０１、Ａｌｉｘ、ＣＤ６３、ＣＤ８１などのエクソソーム蛋白質マーカーを高発現していることが明らかとなる。ＡＴＶで前処理されたＢＭ−ＭＳＣと前処理されていないＢＭ−ＭＳＣは、それぞれの分泌されたエクソソームが、形態、粒径分布及び蛋白質マーカーに有意な差が認められていない。具体的な結果として、図１Ａ〜図１Ｃに示した。なお、図１Ａは、間葉系幹細胞由来エクソソーム（ＭＳＣ−Ｅｘｏ）の形態構造が電子顕微鏡下で観察されたものであり、球状若しくはディスク状を示し、大きさが１００ｎｍ程度であり、スタチン系前処理した後、形態が変化しなっかた。図１Ｂでは、ＭＳＣ−Ｅｘｏの粒径分布がＮＴＡにより分析され、スタチン系前処理されたと処理されていないＭＳＣ−Ｅｘｏの粒径分布は、ともに３０〜１５０ｎｍの範囲にある。図１Ｃでは、エクソソームの蛋白質マーカー同定を示し、スタチン系処理したＭＳＣ−Ｅｘｏは、ＴＳＧ１０１、Ａｌｉｘ、ＣＤ６３、ＣＤ８１などのエクソソーム蛋白質マーカーを高発現している。
超遠心により分離して得たＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、電子顕微鏡下で球状若しくはディスク状を示し、１００ｎｍ程度の大きさを有する。ＮＴＡ分析により、その粒径分布は３０〜１５０ｎｍの範囲にあり、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔアッセイにより、ＭＳＣＡＴＶ−ＥｘｏはＴＳＧ１０１、Ａｌｉｘ、ＣＤ６３、ＣＤ８１などのエクソソーム蛋白質マーカーを高発現していることが明らかとなる。ＡＴＶで前処理されたＢＭ−ＭＳＣと前処理されていないＢＭ−ＭＳＣは、それぞれの分泌されたエクソソームが、形態、粒径分布及び蛋白質マーカーに有意な差が認められていない。具体的な結果として、図１Ａ〜図１Ｃに示した。なお、図１Ａは、間葉系幹細胞由来エクソソーム（ＭＳＣ−Ｅｘｏ）の形態構造が電子顕微鏡下で観察されたものであり、球状若しくはディスク状を示し、大きさが１００ｎｍ程度であり、スタチン系前処理した後、形態が変化しなっかた。図１Ｂでは、ＭＳＣ−Ｅｘｏの粒径分布がＮＴＡにより分析され、スタチン系前処理されたと処理されていないＭＳＣ−Ｅｘｏの粒径分布は、ともに３０〜１５０ｎｍの範囲にある。図１Ｃでは、エクソソームの蛋白質マーカー同定を示し、スタチン系処理したＭＳＣ−Ｅｘｏは、ＴＳＧ１０１、Ａｌｉｘ、ＣＤ６３、ＣＤ８１などのエクソソーム蛋白質マーカーを高発現している。
濃度の異なるＡＴＶ（０．０１、０．１、１、１０μＭ）で前処理されたＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏについて機能学的に分析した結果として、ＡＴＶ １μＭで前処理されたＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、最も強い内皮細胞の管形成及び遊走を促進する作用を示すことを発見した。具体的な結果を、図２Ａ〜図２Ｄに示した。なお、図２Ａ〜図２Ｂでは、濃度の異なるＡＴＶ（０．０１、０．１、１、１０μＭ）で前処理された間葉系幹細胞から抽出したエクソソームによる内皮細胞管形成への作用差を比較し、ＡＴＶ １μＭでの前処理した方が最適効果を示した（図２Ｂ）。図２Ｃ〜図２Ｄでは、濃度の異なるＡＴＶで前処理された間葉系幹細胞から後抽出したエクソソームによる内皮細胞遊走への作用差を比較し、ＡＴＶ １μＭでの前処理した方が最適効果を示した（図２Ｄ）。
ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、ＡＴＶで前処理されていないＭＳＣ−Ｅｘｏよりも血管内皮細胞の管形成及び遊走を有意に促進するとともに、低酸素・無血清条件下での内皮細胞の生存及び抗アポトーシス作用を促進することができる。具体的には、図３Ａ〜図３Ｈに示した。なお、図３Ａ 〜図３Ｂでは管形成試験により、ＡＴＶで前処理された間葉系幹細胞由来エクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ）は、コントロール群より血管内皮細胞管形成を有意に促進することが明らかとなった。図３Ｃ〜図３Ｄではスクラッチアッセイ（創傷治癒アッセイ）により、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、コントロール群よりも血管内皮細胞遊走を有意に促進することが明らかとなった。図３Ｅ〜図３Ｆではフローサイトメトリーアッセイにより、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、コントロール群より血管内皮細胞の低酸素・無血清条件下での生存を有意に促進することが明らかとなった。図３Ｇ〜図３ＨではＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２染色により、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏが、コントロール群より血管内皮細胞の低酸素・無血清条件下でのアポトーシスを有意に低減することが明らかとなった。
ＡＴＶで前処理されていないＭＳＣ−Ｅｘｏと比べ、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、心筋内注射された後にラット心筋梗塞後心機能を有意に改善し、梗塞面積を減小させることができる。具体的には、図４Ａ〜図４Ｆに示した。なお、図４Ａ〜図４Ｂでは、心筋梗塞ラットの心機能がＡＴＶで前処理された間葉系幹細胞由来エクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ）の移植によって有意に改善されることが明らかとなった。図４Ｃ〜図４Ｄでは、Ｍａｓｓｏｎ染色により、ラット心筋梗塞面積がＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ移植によって有意に減少されることが明らかとなった。図４Ｅ〜図４Ｆでは、シリウスレッド染色により、ラット心筋梗塞局所へのコラーゲン沈着がＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ移植によって有意に減少されることが明らかとなった。
ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏは、ＭＳＣ−Ｅｘｏよりも１０倍以上のｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９を高発現している。ＡＴＶで前処理されたＭＳＣにおいて、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）によりｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９発現レベルをノックダウンし、それにより分泌されたエクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ（Ｓｉ）−Ｅｘｏ）を抽出すると、上記保護作用がなくなることから、ｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９は、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏによる効率的な内皮細胞保護作用、心機能改善及び梗塞面積縮小作用に関与していることが明らかとなった。具体的には、図５Ａ〜図５Ｋに示した。なお、図５Ａ〜図５Ｂでは、ＡＴＶで前処理された間葉系幹細胞由来エクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏ）は、ｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９を高発現しており、ｓｉＲＮＡによりノックダウンされたエクソソーム（ＭＳＣＡＴＶ（Ｓｉ）−Ｅｘｏ）において、ｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９発現レベルは有意に低下することが明らかとなった。図５Ｃ〜図５Ｈでは、ＭＳＣＡＴＶ（Ｓｉ）−Ｅｘｏによる内皮保護作用は、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏよりも減少することが明らかとなった。図５Ｉ〜図５Ｋでは、ＭＳＣＡＴＶ（Ｓｉ）−Ｅｘｏによる梗塞後心機能改善作用、心筋修復作用は、ＭＳＣＡＴＶ−Ｅｘｏよりも減弱することが明らかとなった。
結論：ＡＴＶ １μＭでＢＭ−ＭＳＣ を２４時間前処理することにより、効率的な内皮保護及び心筋修復機能を有するエクソソームを取得することができ、そのマカニズムとしては、エクソソームにおけるｌｎｃＲＮＡＨ１９発現レベルの上昇と関係する。
Claims (10)
- スタチン系薬剤で間葉系幹細胞を前処理し、分泌されたエクソソームを採取するように処理された間葉系幹細胞を培養することを含む、間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法。
- 間葉系幹細胞の培地にスタチン系薬剤を加え、１２〜２４時間前処理した後、細胞の培地を無エクソソームの完全培地に変更して引き続き培養し、４８時間後に馴化培地を収集し、スタチン系薬剤で前処理した間葉系幹細胞から分泌されたエクソソームを超遠心により分離して得ることを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記超遠心は、
馴化培地を収集し、３００ｇで１０分遠心することにより、細胞を除去する工程と、
２０００ｇで２０分遠心することにより、細胞破片を除去する工程と、
１６５００ｇで３０分高速遠心することにより、大型小胞を除去する工程と、
１２００００ｇで７０分超遠心することにより沈殿を回収し、再懸濁後に、再度１２００００ｇで７０分超遠心し、エクソソームを得る工程とを含む、請求項１又は２に記載の方法。 - 前記スタチン系薬剤は、アトルバスタチンを含む、請求項１又は２に記載の方法。
- 前記間葉系幹細胞は、骨髄間葉系幹細胞又は脂肪間葉系幹細胞を含む、請求項１又は２に記載の方法。
- 請求項１〜５の何れか１項に記載の方法により調製したエクソソームである。
- 間葉系幹細胞の抗アポトーシス能及び／又はホーミング促進能を向上させる製剤の調製のためのスタチン系薬剤の使用。
- 間葉系幹細胞による心筋梗塞微小環境改善作用及び／又は心筋修復能力を有するエクソソームの分泌を促進する製剤の調製のためのスタチン系薬剤の使用。
- 前記スタチン系薬剤は、アトルバスタチンを含み、
好ましくは、スタチン系薬剤１μＭで間葉系幹細胞を２４時間前処理する、請求項７又は８に記載の使用。 - 前記間葉系幹細胞は、骨髄間葉系幹細胞又は脂肪間葉系幹細胞を含む、請求項７又は８に記載の使用。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CN2018/091843 WO2019241910A1 (zh) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | 基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020522996A true JP2020522996A (ja) | 2020-08-06 |
| JP6825182B2 JP6825182B2 (ja) | 2021-02-03 |
Family
ID=68982528
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019554538A Active JP6825182B2 (ja) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | 薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200224169A1 (ja) |
| EP (1) | EP3663394B1 (ja) |
| JP (1) | JP6825182B2 (ja) |
| KR (1) | KR102235141B1 (ja) |
| WO (1) | WO2019241910A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4252763A1 (en) | 2022-03-30 | 2023-10-04 | Yamada Bee Company, Inc. | Exosome secretion promoting agent |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111471650B (zh) * | 2020-04-14 | 2021-07-27 | 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 | 一种人脐带间充质干细胞来源的外泌体、鉴定方法及应用 |
| KR102184428B1 (ko) * | 2020-05-25 | 2020-11-30 | 주식회사 씨케이엑소젠 | 중배엽줄기세포 유래의 엑소좀 생산방법 및 이로부터 제조된 배양액 |
| CN111944747A (zh) * | 2020-08-14 | 2020-11-17 | 福建医科大学附属协和医院 | 一种用于治疗心肌梗死的人脂肪间充质干细胞外泌体及其用途 |
| CN111925983A (zh) * | 2020-08-14 | 2020-11-13 | 福建医科大学附属协和医院 | 一种用于治疗心肌梗死的高表达il-10的人脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法 |
| CN112359013A (zh) * | 2020-11-17 | 2021-02-12 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种间充质干细胞外泌体的制备方法和应用 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101129356A (zh) * | 2007-08-01 | 2008-02-27 | 中国医学科学院阜外心血管病医院 | 洛伐他汀在制备抑制骨髓间充质干细胞凋亡药物上的应用 |
| WO2013039000A1 (ja) * | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Ochiya Takahiro | アルツハイマー病の予防または治療のための医薬品 |
| JP2015531664A (ja) * | 2012-09-24 | 2015-11-05 | コーマトリックス カーディオバスキュラー， インコーポレイテッドＣｏｒＭａｔｒｉｘ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ， Ｉｎｃ． | 生体組織の治療のための方法及びシステム |
| WO2016076227A1 (ja) * | 2014-11-10 | 2016-05-19 | 正明 伊井 | 幹細胞機能増強用スタチン封入ナノ粒子製剤、並びにそれを含有する機能増強幹細胞及びその製造方法 |
| CN106282107A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-01-04 | 章毅 | 人胎盘间充质干细胞源分离外泌体的方法及其应用 |
| CN107137700A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-09-08 | 张国瑜 | 一种基于干细胞源外泌体的组合物及其在制备治疗心肌梗死的药物中的应用 |
| JP2017536096A (ja) * | 2014-10-09 | 2017-12-07 | アントフロゲネシス コーポレーション | 胎盤由来の接着細胞エクソソームおよびそれらの使用 |
| JP2018064550A (ja) * | 2016-07-11 | 2018-04-26 | ナショナル ヘルス リサーチ インスティテューツＮａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ | 幹細胞からエクソソームを生成する方法およびその使用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108728410B (zh) * | 2018-06-19 | 2020-04-21 | 中国医学科学院阜外医院 | 基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法 |
-
2018
- 2018-06-19 WO PCT/CN2018/091843 patent/WO2019241910A1/zh unknown
- 2018-06-19 EP EP18923225.9A patent/EP3663394B1/en active Active
- 2018-06-19 KR KR1020197033974A patent/KR102235141B1/ko active IP Right Grant
- 2018-06-19 JP JP2019554538A patent/JP6825182B2/ja active Active
-
2020
- 2020-03-27 US US16/833,405 patent/US20200224169A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101129356A (zh) * | 2007-08-01 | 2008-02-27 | 中国医学科学院阜外心血管病医院 | 洛伐他汀在制备抑制骨髓间充质干细胞凋亡药物上的应用 |
| WO2013039000A1 (ja) * | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Ochiya Takahiro | アルツハイマー病の予防または治療のための医薬品 |
| JP2015531664A (ja) * | 2012-09-24 | 2015-11-05 | コーマトリックス カーディオバスキュラー， インコーポレイテッドＣｏｒＭａｔｒｉｘ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ， Ｉｎｃ． | 生体組織の治療のための方法及びシステム |
| JP2017536096A (ja) * | 2014-10-09 | 2017-12-07 | アントフロゲネシス コーポレーション | 胎盤由来の接着細胞エクソソームおよびそれらの使用 |
| WO2016076227A1 (ja) * | 2014-11-10 | 2016-05-19 | 正明 伊井 | 幹細胞機能増強用スタチン封入ナノ粒子製剤、並びにそれを含有する機能増強幹細胞及びその製造方法 |
| JP2018064550A (ja) * | 2016-07-11 | 2018-04-26 | ナショナル ヘルス リサーチ インスティテューツＮａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ | 幹細胞からエクソソームを生成する方法およびその使用 |
| CN106282107A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-01-04 | 章毅 | 人胎盘间充质干细胞源分离外泌体的方法及其应用 |
| CN107137700A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-09-08 | 张国瑜 | 一种基于干细胞源外泌体的组合物及其在制备治疗心肌梗死的药物中的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| AM. J. TRANSL. RES., 2015, VOL.7, NO.6, PP.1058-1070, JPN6020047781, ISSN: 0004405689 * |
| JACC, 2018.03.20, VOL.71, ISSUE 11, P.83, JPN6020026332, ISSN: 0004309826 * |
| STEM CELLS INTERNATIONAL, 2015, VOL.2015, ARTICLE ID 659890 (PP.1-14), JPN6020047778, ISSN: 0004405688 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4252763A1 (en) | 2022-03-30 | 2023-10-04 | Yamada Bee Company, Inc. | Exosome secretion promoting agent |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3663394B1 (en) | 2022-10-05 |
| KR102235141B1 (ko) | 2021-04-05 |
| JP6825182B2 (ja) | 2021-02-03 |
| US20200224169A1 (en) | 2020-07-16 |
| EP3663394A1 (en) | 2020-06-10 |
| WO2019241910A1 (zh) | 2019-12-26 |
| KR20200002930A (ko) | 2020-01-08 |
| EP3663394A4 (en) | 2021-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2020522996A (ja) | 薬剤前処理による間葉系幹細胞由来エクソソームの調製方法 | |
| CN108728410B (zh) | 基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法 | |
| JP5371445B2 (ja) | 脂肪組織由来細胞を培養する方法及びその使用 | |
| KR102047768B1 (ko) | 중간엽줄기세포 유래 고순도, 고농도 엑소좀을 포함하는 배양액 및 이의 제조방법 | |
| Jackson et al. | Adult mesenchymal stem cells: differentiation potential and therapeutic applications | |
| JP6405304B2 (ja) | 脂肪由来幹細胞作製システムおよび方法 | |
| CN109234229B (zh) | 从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物 | |
| JP2015503918A (ja) | 同種異系細胞の医療用途の誘導のための方法及び組成物並びに治療的利用 | |
| Poomani et al. | Mesenchymal stem cell (MSCs) therapy for ischemic heart disease: a promising frontier | |
| US20220325247A1 (en) | METHOD FOR PROMOTING GROWTH OF PARIETAL DECIDUAL BASALIS-MESENCHYMAL STEM CELLS (PDB-MSCs) | |
| Huang et al. | Stem cell therapies and regenerative medicine in China | |
| EP1767617A1 (en) | Mesenchymal stem cells isolation and expansion method and uses thereof | |
| WO2023273428A1 (zh) | 基于通心络预处理的间充质干细胞来源外泌体及其制备方法 | |
| JP2003535586A (ja) | 筋組織由来の特徴づけされた細胞集団の獲得プロセス及びその利用 | |
| CN113564106A (zh) | 基于通心络预处理的间充质干细胞的制备方法 | |
| US20200289577A1 (en) | Protection of the vascular endothelium from immunologically mediated cytotoxic reactions with human cd34-negative progenitor cells | |
| WO2022218443A1 (zh) | 间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法和组合物 | |
| CN102559591A (zh) | 一种提取肺间充质干细胞的方法 | |
| CN106265739A (zh) | 一种利用关节镜冲洗液制备间充质干细胞制剂的方法 | |
| Smits et al. | Young at heart. An update on cardiac regeneration | |
| Ghodsizad et al. | Clinical labeling and imaging of transplanted CD133+/CD34+ stem cells in patients with ischemic heart disease | |
| Poomani et al. | Mesenchymal Stem Cell (MSCs) Therapy for Ischemic Heart Disease: A Promising Frontier | |
| de Sousa Costa | Advancing manufacturing of mesenchymal stem/stromal cell-derived extracellular vesicles towards the treatment of myocardial infarction | |
| Jiang et al. | Research hotspots and emerging trends of mesenchymal stem cells in cardiovascular diseases: a bibliometric-based visual analysis | |
| Ren et al. | Cardiac atrioventricular conduction improved by autologous transplantation of mesenchymal stem cells in canine atrioventricular block models |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200227 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190927 |
|
| A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20190927 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200522 |
|
| A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20200708 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200721 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201021 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201215 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20201221 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6825182 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |