JP2020522242A5

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Publication number: JP2020522242A5
Application number: JP2019565188A
Authority: JP
Filing date: 2018-05-25
Publication date: 2021-07-26
Anticipated expiration: 2038-05-25

Claims

第１及び第２のシアリダーゼを含む組成物であって、第１のシアリダーゼが、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むか、若しくは配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）前記配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；又は
（ｃ）前記配列番号２のアミノ酸配列の断片若しくは前記配列番号２のアミノ酸配列と８５％同一であるアミノ酸の断片であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号２のアミノ酸配列の断片若しくは前記配列番号２のアミノ酸配列と８５％同一であるアミノ酸の断片であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
から選択され；
任意で、前記第１のシアリダーゼが、Ｎ末端における追加のメチオニン及び／又はＣ末端におけるヒスチジンタグを含み、前記タグが、リンカーによってＣ末端に連結され得る；及び第２のシアリダーゼが、
（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むか、若しくは配列番号５のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｅ）前記配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；又は
（ｆ）前記配列番号５のアミノ酸配列の断片若しくは前記配列番号５のアミノ酸配列と８５％同一であるアミノ酸の断片であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号５のアミノ酸配列の断片若しくは前記配列番号５のアミノ酸配列と８５％同一であるアミノ酸の断片であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
から選択され；
任意で、前記第２のシアリダーゼが、Ｎ末端における追加のメチオニン及び／又はＣ末端におけるヒスチジンタグを含み、前記タグが、リンカーによってＣ末端に連結され得る、組成物。
糖タンパク質、好ましくはネイティブな非変性状態の糖タンパク質におけるシアル酸結合の９０％超を加水分解することができる、請求項１に記載の組成物。
好ましくは１：１比で、配列番号３のアミノ酸配列からなるシアリダーゼ及び配列番号６のアミノ酸配列からなるシアリダーゼを含む、請求項１または２に記載の組成物。
前記第１のシアリダーゼ及び／若しくは前記第２のシアリダーゼが、高度に精製又は単離された形態で存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
前記組成物中の２つ以下のポリペプチドが、アッカーマンシア・ムシニフィラから得られたシアリダーゼである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
任意で高度に精製又は単離された形態で存在する、Ｏ−グリコシダーゼ及び／又はＯ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼを更に含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
前記Ｏ−グリコシダーゼが、
ａ．配列番号９のアミノ酸配列を含むか、若しくは配列番号９のアミノ酸配列からなるポリペプチド；又は
ｂ．前記配列番号９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
ｃ．前記配列番号９の配列の断片若しくは前記配列番号９の配列と８５％同一である配列の断片であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号９の配列の断片若しくは前記配列番号９の配列と８５％同一である配列の断片であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；又は
ｄ．任意でＵｎｉｐｒｏｔエントリーＢ５ＵＢ７２バージョン２２のアミノ酸配列を有するポリペプチドである、大便連鎖球菌由来のＯ−グリコシダーゼ
から選択されるＯ−グリコシダーゼであり、
任意で、前記Ｏ−グリコシダーゼが、配列番号１０のアミノ酸配列からなる、請求項６に記載の組成物。
前記Ｏ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼが、
ａ．配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、若しくは配列番号１１のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
ｂ．前記配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；又は
ｃ．前記配列番号１１の配列の断片若しくは前記配列番号１１のアミノ酸配列と８５％同一である配列の断片であるアミノ酸配列を含むか、若しくは前記配列番号１１の配列の断片若しくは前記配列番号１１のアミノ酸配列と８５％同一である配列の断片であるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
から選択されるＯ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼであり
任意で、前記Ｏ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼが、配列番号１２のアミノ酸配列からなる、請求項６又は７に記載の組成物。
糖タンパク質を改変する方法であって、前記糖タンパク質を含有するサンプルを請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含み、任意で、得られた生成物を分析する、方法。
前記得られた生成物が、分析され、前記分析が、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＨＰＬＣ、レクチンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、又は質量分析を含む任意の好適な手段によって、前記生成物を分離及び／又は検出及び／又は単離することを含む、請求項９に記載の方法。
前記組成物が、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物であり、前記方法が、前記糖タンパク質を前記組成物と接触させる前又は後に、前記サンプルをＯ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼ又はＯ−グリコシダーゼと同時に接触させることを含む、請求項９又は１０に記載の方法。
前記組成物が、更にＯ−グリコシダーゼ及び／又はＯ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼを含み、前記Ｏ−グリコシダーゼが、任意で請求項７に記載のＯ−グリコシダーゼである、及び前記Ｏ−糖タンパク質特異的エンドプロテアーゼが、任意で請求項８に記載のエンドプロテアーゼである、請求項９に記載の方法。