JP2018194374A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018194374A5 JP2018194374A5 JP2017096857A JP2017096857A JP2018194374A5 JP 2018194374 A5 JP2018194374 A5 JP 2018194374A5 JP 2017096857 A JP2017096857 A JP 2017096857A JP 2017096857 A JP2017096857 A JP 2017096857A JP 2018194374 A5 JP2018194374 A5 JP 2018194374A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- app
- peptide
- terminal side
- peptides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 13
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 11
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 11
- 229920001276 Ammonium polyphosphate Polymers 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 101700044176 BACE Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 206010001897 Alzheimer's disease Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 1
- 101710010796 LYZ Proteins 0.000 description 1
- 101800000021 N-terminal protease Proteins 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
Images
Description
Ａβはアルツハイマー病のバイオマーカーとして注目されており、質量分析により生体試料中に含まれるＡβ量を定量する試みがいくつか報告されている。例えば、特許文献１では、Ａβに特異的に結合する抗Ａβ抗体（ＡβのＰｈｅ４−Ｇｌｙ９をエピトープとする６Ｅ１０、およびＡβのＬｅｕ１７−Ｖａｌ２４をエピトープとする４Ｇ８）を用いた免疫沈降（ＩＰ）と、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）とを組み合わせた分析方法により、微量のヒト血漿から２２種類のＡＰＰ切断ペプチドを検出した例が報告されている。特許文献１では、ＡＰＰのプロセッシングにより生成するペプチドとして、ＡＰＰ６６９−７１１（配列番号５）等の、βセレクターゼによる切断部位よりもＮ末端側で切断されたペプチドが検出されたことが報告されている。
しかしながら、非特許文献１に記載の手法では、Ａβの中間配列をサロゲートペプチドとして選択しているため、Ｃ末端の切断部位の異なるＡβ（例えば、Ａβ１−３８（配列番号２）、Ａβ１−４０（配列番号３）、Ａβ１−４２（配列番号４）や、Ｎ末端側がβセクレターゼ切断部位（ＡＰＰのＭｅｔ６７１とＡｓｐ６７２の間）以外で切断されたＡＰＰ切断ペプチド（例えば、前述のＡＰＰ６６９−７１１）を個別に定量することはできない。
Ａβ１−４０のＣ末端をエピトープとする抗体ｂによりＩＰを行った場合、図１に示す３種のペプチドの中で、Ａβ１−４０およびＡＰＰ６６９−７１１の２種が捕捉される。抗体ａを用いたＩＰによりＡβ１−４２を捕捉し、抗体ａに捕捉されずに流出した溶液（洗浄液を含む）に抗体ｂを用いたＩＰを実施して、Ａβ１−４０およびＡＰＰ６６９−７１１を捕捉してもよい。
抗体ｂを用いたＩＰにより捕捉されたペプチドをＬｙｓ−Ｃにより消化した試料からは、Ａβ１−４０の切断位置IIIのＮ末端側の配列「ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫ」を有するペプチド、およびＡＰＰ６６９−７１１の切断位置IIIのN末端側の配列（切断位置Iと切断位置IIIの間の配列）「ＭＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫ」を有するペプチドが生成する。これらのペプチドは分子量が異なるため、質量分析により判別可能である。
抗体ｂを用いたＩＰのみでは、Ｃ末端の配列が共通するＡβ１−４０とＡＰＰ６６９−７１１とを識別できないが、Ｃ末端側を抗体識別部位とするとするＩＰによりペプチドを分離し、ＩＰで捕捉回収されたペプチドのＮ末端側のプロテアーゼ消化断片をトランジションとして選択することにより、Ｎ末端側の配列の相違（生体内でのＡＰＰからの切断部位の相違）が識別可能となる。
本発明においては、上述のようにペプチドのＣ末端またはＮ末端のいずれか一方に特異的に結合する抗体を用いたＩＰによりペプチドを分離した後、抗体結合部位と反対側の末端のペプチド断片の分析が行われる。例えば、ＡβのＣ末端側に結合する抗体を用いたＩＰにより分離したペプチドは、プロテアーゼ処理後に、Ｎ末端側のプロテアーゼ消化断片が質量分析による検出対象として選択される。ＡβのＮ末端側に結合する抗体を用いたＩＰにより捕捉されたペプチドは、Ｃ末端側のプロテアーゼ消化断片の質量分析が行われる。図１に示す３種のペプチドは、Ｃ末端側のＩＰによりＡβ１−４２およびＡβ１−４０とＡＰＰ６６９−７１１とが分離され、Ｎ末端側のペプチド断片の質量分析により、Ａβ１−４２とＡβ１−４０とを識別できる。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017096857A JP6870468B2 (ja) | 2017-05-15 | 2017-05-15 | ペプチドの分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017096857A JP6870468B2 (ja) | 2017-05-15 | 2017-05-15 | ペプチドの分析方法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2018194374A JP2018194374A (ja) | 2018-12-06 |
| JP2018194374A5 true JP2018194374A5 (ja) | 2020-01-09 |
| JP6870468B2 JP6870468B2 (ja) | 2021-05-12 |
Family
ID=64571263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017096857A Active JP6870468B2 (ja) | 2017-05-15 | 2017-05-15 | ペプチドの分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6870468B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20220137071A1 (en) * | 2019-03-01 | 2022-05-05 | Shimadzu Corporation | Method and kit for measuring app669-711 |
| JP7478040B2 (ja) | 2020-06-25 | 2024-05-02 | シスメックス株式会社 | Ａβペプチドの測定方法及びその方法に用いられる試薬組成物 |
| CN112255061A (zh) * | 2020-10-13 | 2021-01-22 | 南开大学 | 一种通过免疫沉淀分离和检测蛋白质的方法 |
| WO2022239537A1 (ja) * | 2021-05-14 | 2022-11-17 | 株式会社島津製作所 | ニューログラニン関連ペプチドの分析方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2376905A4 (en) * | 2008-11-12 | 2012-10-03 | Univ Washington | SIMULTANEOUS IN VIVO METABOLISM OF ISOFORMS OF A BIOMOLECULE |
| WO2014160647A1 (en) * | 2013-03-24 | 2014-10-02 | The Washington University | Method for amyloid beta sample processing |
| JP6152908B2 (ja) * | 2016-04-07 | 2017-06-28 | 株式会社島津製作所 | ペプチド断片の調製方法および分析方法 |
-
2017
- 2017-05-15 JP JP2017096857A patent/JP6870468B2/ja active Active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2018194374A5 (ja) | ||
| Brinkmalm et al. | An online nano‐LC‐ESI‐FTICR‐MS method for comprehensive characterization of endogenous fragments from amyloid β and amyloid precursor protein in human and cat cerebrospinal fluid | |
| EA200700136A1 (ru) | Анти-cd154-антитела | |
| Heijs et al. | Comprehensive analysis of the mouse brain proteome sampled in mass spectrometry imaging | |
| ATE495447T1 (de) | Peptidantikörperdepletion und anwendung zur probenvorbereitung für massenspektrometrie | |
| MX2011008759A (es) | Medios y metodos para fabricar neurotoxina altamente pura. | |
| WO2006137931A3 (en) | Human monoclonal antibodies against hendra and nipah viruses | |
| WO2011063235A3 (en) | Peptides, devices, and methods for the detection of ehrlichia antibodies | |
| EP2567974A3 (en) | Monoclonal antibodies to progastrin | |
| EP2535351A3 (en) | Dual specificity antibody fusions | |
| JP2015212284A5 (ja) | ||
| WO2011063003A3 (en) | Peptides and methods for the detection of lyme disease antibodies | |
| WO2005087811A3 (en) | Estrogen receptors and methods of use | |
| WO2006086799A3 (en) | Prion-specific peptide reagents | |
| JP6870468B2 (ja) | ペプチドの分析方法 | |
| HK1110936A1 (en) | Method for detecting misfolded proteins and prions | |
| WO2015112558A3 (en) | Peptides, devices, and methods for the detection of anaplasma antibodies | |
| WO2007008071A3 (en) | Method for detecting peptides comprising a cross-beta structure | |
| SG127861A1 (en) | in situ biomarker identification | |
| ATE489623T1 (de) | Peptide zum nachweis von ehrlichia ewingii antikörper | |
| MX2010003762A (es) | Vacuna preventiva contra vih a base de anticuerpos especificos contra vih. | |
| JP2012528313A (ja) | 質量分析によるタンパク質の新規な定量方法 | |
| JP2019507341A5 (ja) | ||
| US8512963B2 (en) | Detection and quantitation of full-length thioredoxin (TRX) and truncated thioredoxin (TRX 80) in complex samples | |
| EA202191931A1 (ru) | Способ характеризации видимых и/или невидимых частиц в биологических препаратах |