JP2020501612A - 増大したhATファミリートランスポゾン媒介遺伝子導入ならびに関連する組成物、システムおよび方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[0016]本開示のなお別の態様は、本明細書に記載される融合トランスポザーゼをコードするポリヌクレオチドを提供する。
[0029]本明細書において言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あたかもそれぞれの個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的および個別に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれた用語が本明細書において定義された用語と矛盾するという限度において、本明細書が支配する。
[0048]DNAトランスポゾンは、非複製の「カットアンドペースト」機構を介して転位することができる。これは、その標的を切断し、結果として、そのドナー鋳型からDNAトランスポゾンを放出することができる触媒酵素、すなわちトランスポザーゼによる2つの末端逆位リピートの認識を必要とする。切除すると、続いて、DNAトランスポゾンは、同じトランスポザーゼによって切断されるアクセプターDNAに組み込まれ得る。それらの天然の立体配置のいくつかにおいて、DNAトランスポゾンは、2つの逆位リピートに隣接し、転位を触媒するトランスポザーゼをコードする遺伝子を含有し得る。
[0052]本開示の一態様は、突然変異型TcBusterトランスポザーゼを提供する。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、野生型TcBusterトランスポザーゼ(配列番号1)と比較して、1つ以上のアミノ酸置換を含み得る。
[0060]本開示の別の態様は、高活性突然変異型TcBusterトランスポザーゼを提供することである。本明細書で使用される「高活性」突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、配列番号1のアミノ酸配列を有する野生型TcBusterトランスポザーゼと比較して、転位効率が増加した任意の突然変異型TcBusterトランスポザーゼを指し得る。
[0064]1つの例示的な方法は、アミノ酸配列の正味電荷を増加させるためにTcBusterトランスポザーゼのアミノ酸を系統的に突然変異させるステップを含み得る。時として、本方法は、中性pHで負に帯電しているアスパラギン酸(D)またはグルタミン酸(E)をアラニン残基に突然変異させるために系統的なアラニンスキャニングを行うステップを含み得る。方法は、中性pHで正に帯電しているリジン(lysing)(K)またはアルギニン(R)残基に対して系統的な突然変異を行うステップを含み得る。
[0081]いくつかの場合、突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換V377T、E469K、およびD189Aを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換K573EおよびE578Lを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換I452Kを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換A358Kを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換V297Kを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換N85Sを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換N85S、V377T、E469K、およびD189Aを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換I452F、V377T、E469K、およびD189Aを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換A358K、V377T、E469K、およびD189Aを含み得る。突然変異型TcBusterトランスポザーゼは、アミノ酸置換V377T、E469K、D189A、K573EおよびE578Lを含み得る。
[0083]本発明の別の態様は、融合トランスポザーゼを提供する。融合トランスポザーゼは、TcBusterトランスポザーゼ配列およびDNA配列特異的結合ドメインを含み得る。
様々な長さの異なるZFPを生成することができ、可能性のある64の三重項サブサイトの中からほとんどいずれもの所望のDNA配列の認識を可能にし得る。
[00102]本開示の別の態様は、2つの逆位リピート間に配置されたカセットカーゴを含むTcBusterトランスポゾンを提供する。TcBusterトランスポゾンは、本明細書に記載されるTcBusterトランスポザーゼによって認識され得、例えば、TcBusterトランスポザーゼは、TcBusterトランスポゾンを認識し、DNA配列へのTcBusterトランスポゾンの転位を触媒することができる。
[00113]本開示の別の態様は、ゲノム編集システムを提供する。システムは、TcBusterトランスポザーゼおよびTcBusterトランスポゾンを含み得る。システムを用いて、宿主細胞のゲノムを編集し、宿主細胞の内因性ゲノム領域を破壊または修飾し、外因性遺伝子を宿主ゲノム内に挿入し、内因性ヌクレオチド配列を外因性ヌクレオチド配列またはそれらの任意の組み合わせで置換することができる。
[00130]本明細書で互換的に使用される「細胞株」および「不死化細胞株」という用語は、通常、無期限に増殖することはないが、突然変異のために正常な細胞老化を回避した可能性がある生物由来の細胞の集団を指し得、代わりに分裂を受け続けることができる。本明細書で提供される主題は、一般的な確立した細胞株の範囲における使用を見出すことができ、細胞には、例えば、限定されないが、ヒトBC−1細胞、ヒトBJAB細胞、ヒトIM−9細胞、ヒトJiyoye細胞、ヒトK−562細胞、ヒトLCL細胞、マウスMPC−11細胞、ヒトRaji細胞、ヒトRamos細胞、マウスRamos細胞、ヒトRPMI8226細胞、ヒトRS4−11細胞、ヒトSKW6.4細胞、ヒト樹状細胞、マウスP815細胞、マウスRBL−2H3細胞、ヒトHL−60細胞、ヒトNAMALWA細胞、ヒトマクロファージ細胞、マウスRAW 264.7細胞、ヒトKG−1細胞、マウスM1細胞、ヒトPBMC細胞、マウスBW5147(T200−A)5.2細胞、ヒトCCRF−CEM細胞、マウスEL4細胞、ヒトジャーカット細胞、ヒトSCID.adh細胞、ヒトU−937細胞、またはそれらの細胞の任意の組み合わせが含まれる。
特定の場合、細胞はT細胞であり得る。一部の態様では、細胞は初代T細胞であり得る。特定の場合、細胞は抗原提示細胞(APC)であり得る。一部の実施形態では、細胞は初代APCであり得る。本開示に関連するAPCは、樹状細胞、マクロファージ、B細胞、他の非専門APC、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
[00139]本明細書に提供される主題、例えば、組成物(例えば、突然変異型TcBusterトランスポザーゼ、融合トランスポザーゼ、TcBusterトランスポゾン)、システムおよび方法は、現代の生活の様々な態様において、ゲノム編集に関する広範囲の用途における使用を見出すことができる。
[00146]実施例1.材料および方法
[00147]この実施例は、例示的な突然変異型TcBusterトランスポザーゼの生成および評価に利用されるいくつかの方法を記載する。
[00149]推定される高活性TcBuster(TcB)トランスポザーゼ突然変異体は、hATおよびBusterサブファミリーのヌクレオチド配列およびアミノ酸アラインメントによって同定された。Q5部位特異的突然変異誘発キット(New England BioLabs)を全ての部位特異的突然変異誘発に使用した。PCR突然変異誘発後、PCR産物をGeneJET PCR精製キット(Thermo Fisher Scientific)で精製した。精製されたPCR産物の20μLの連結反応は、T4 DNAリガーゼ(New England BioLabs)を用いて行われた。5μLの連結反応は、DH10ベータ細胞における形質転換に使用された。Sequetechによる直接コロニーシークエンシングを使用して、所望の突然変異の存在を確認した。確認された突然変異のためのDNAは、ZymoPUREプラスミドミニプレップキット(Zymo Research)を用いて調製された。
[00151]トランスフェクションの1日前に、HEK−293T細胞を6ウェルプレートの1ウェルあたり300,000細胞で播種した。製造業者の説明書(Mirus Bio)に従って、TransIT X2試薬を用いて、mCherry−ピューロマイシンカセットを有する500ngのトランスポゾンおよび62.5ngのTcBトランスポザーゼを細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの2日後に、細胞は、DMEM完全培地中、3重にした6ウェルプレートのウェルあたり3,000細胞の密度でピューロマイシン(1μg/mL)とともに再播種されるか、またはピューロマイシン選択なしで再播種された。導入遺伝子の安定な組み込みは、ピューロマイシン処理された細胞(薬物選択を生き残った各細胞がコロニーを形成した)のコロニー計数またはフローサイトメトリーによって評価された。ピューロマイシン選択の2週間後のコロニー計数のために、DMEM完全+ピューロマイシン培地を除去した。細胞を1×PBSで洗浄し、細胞を1×クリスタルバイオレット溶液で10分間染色した。プレートをPBSで2回洗浄し、コロニーを計数した。
[00154]トランスフェクションの1日前に、HEK−293T細胞を24ウェルプレートの1ウェルあたり75,000細胞で播種した。製造業者の説明書(Mirus Bio)に従って、TransIT X2試薬を用いて、500ngのトランスポゾンおよび125ngのトランスポザーゼを細胞にトランスフェクトした。導入遺伝子の安定な組み込みは、mCherry蛍光の検出によって評価された。トランスフェクションの14日後に細胞を回収し、PBSで1回洗浄し、200μLのRDFII緩衝液に再懸濁した。細胞をノボサイト(Acea Biosciences)を用いて分析し、PE−テキサスレッドチャネルを用いてmCherry発現を評価した。
[00156]CD3+T細胞を濃縮し、白血球(StemCellTechnologies)から凍結保存した。CD3+T細胞を解凍し、ヒト血清ならびにIL−2、IL−15およびIL−7サイトカインを補足したX−Vivo−15培地中でCD3/CD28 Dynabeads(ThermoFisher)を用いて2日間活性化した。トランスフェクション前に、CD3/CD28ビーズを除去し、細胞を洗浄し、RNA形態でTcBusterトランスポゾン(TcBusterおよびSleeping beauty IR/DRおよびGFPカーゴを有するミニサークル)を含むNeonトランスフェクションシステム(ThermoFisher)およびRNA形態のTcBusterまたはSleeping Beautyトランスポザーゼを用いてエレクトロポレートした。生存率対照として、細胞をDNAまたはRNAなしで「パルス」エレクトロポレートした。エレクトロポレートされた細胞をトランスフェクション後の21日間増殖させ、GFPカーゴの生存率安定な組み込みをフローサイトメトリーによって評価した。生存率をSSC−A対FSC−Aによって測定し、パルスのみの対照に標準化し、GFP発現は、2、7、14および21日目にFITCチャンネルを用いて評価された。
[00158]この研究の目的は、異なる例示的なTcBusterトランスポゾン構築物の転位効率を調べることであった。本発明者らは、哺乳動物細胞におけるそれらの転位効率を試験するために、10個のTcBuster(TcB)トランスポゾン(Tn)立体配置(図1A)を比較した。これら10個のTcB Tnは、使用されたプロモーター(EFS対CMV)、IR/DR配列およびトランスポゾンカーゴの方向が異なっていた。トランスポゾンはそれぞれ、2Aによって薬剤耐性遺伝子であるピューロマイシンに連結されたmCherryをコードする同一のカセットを含有し、そのため、トランスフェクトされた細胞は、蛍光および/またはピューロマイシンによる選択によって同定され得た。HEK−293T細胞は、10個のTcB TnsおよびTcB野生型トランスポザーゼ(1トランスポゾン:1トランスポザーゼの比)のうちの1つでトランスフェクトした。導入遺伝子の安定な組み込みは、トランスフェクション後の10〜30日間、mCherry蛍光の検出によるフローサイトメトリーによって評価された(図1B)。
[00162]この研究の目的は、TcBusterトランスポザーゼ突然変異体を生成し、それらの転位効率を調べることであった。
[00169]この研究の目的は、融合TcBusterトランスポザーゼの転位効率を生成し、試験することであった。一例として、タンパク質タグ、GSTまたはPESTドメインをTcBusterトランスポザーゼのN末端に融合して、融合TcBusterトランスポザーゼを生成した。可撓性リンカーGGSGGSGGSGGSGTS(配列番号9)は、配列番号10によってコードされ、これを用いて、GSTドメイン/PESTドメインをTcBusterトランスポザーゼから分離した。この可撓性リンカーの存在は、融合タンパク質中の非特異的相互作用を最小化し、そのため、その活性を増加させ得る。例示的な融合トランスポザーゼは上記のようにTcB Tn−8でトランスフェクトされ、転位効率は、14日目にフローサイトメトリーによってmCherry発現によって測定された。転位効率は、GFPまたはPESTドメインのタグ化による影響を受けなかった(図9)。これは、トランスポザーゼDNA結合ドメインをTcBusterカーゴの直接組み込みに融合してセーフハーバー部位などのゲノム部位を選択することがTcBusterにとって実行可能な選択肢であり得、より安全な組み込みプロファイルを可能にすることを示唆する。
[00171]この研究の目的は、TALEドメインを含む融合TcBusterトランスポザーゼを生成し、融合トランスポザーゼの転位活性を調べることである。TALE配列(配列番号11)は、ヒトゲノムのヒトAAVS1(hAAVS1)部位を標的とするように設計される。このようにして、TALE配列を野生型TcBusterトランスポザーゼ(配列番号1)のN末端に融合させて、融合トランスポザーゼを生成する。可撓性リンカーGly4Ser2は、配列番号12によってコードされ、TALEドメインとTcBusterトランスポザーゼ配列を分離するために使用される。例示的な融合トランスポザーゼは、配列番号8のアミノ酸配列を有する。
[00174]この研究の目的は、初代CD3+T細胞を操作するためのTcBusterトランスポゾンシステムを開発することであった。この目的のために、本発明者らは、GFP導入遺伝子を保有する例示的なTcBusterトランスポゾンをミニサークルプラスミドに組み入れた。活性化CD3+T細胞は、TcBミニサークルトランスポゾン、およびWT TcBusterトランスポザーゼなどのRNAトランスポザーゼでエレクトロポレートされ、実施例2に記載されるように例示的な突然変異体を選択した。導入遺伝子発現は、フローサイトメトリーによってエレクトロポレーション後の21日間、モニターされた。
[00178]前述のTcB Tn−8構築物を含有するミニサークルプラスミドは、トランスポゾンの逆位リピート配列の間にキメラ抗原受容体(CAR)遺伝子を収容するように設計することができる。CARは、CD137(T細胞の共刺激受容体[4−1BB])およびCD3−ゼータ(T細胞抗原受容体のシグナル伝達成分)シグナル伝達ドメインでカップリングされた、B細胞抗原CD19に対する特異性を有するように設計することができる。
Claims (131)
- 全長の配列番号1に対して少なくとも70%同一であるアミノ酸配列を含み、配列番号1と比較して中性pHで正味電荷を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を有する突然変異型TcBusterトランスポザーゼであって、配列番号1のアミノ酸配列を有する野生型TcBusterトランスポザーゼと比較して増加した転位効率を有する突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 1つ以上のアミノ酸置換が、リジンまたはアルギニンへの置換を含む、請求項1に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 1つ以上のアミノ酸置換が、アスパラギン酸またはグルタミン酸から中性アミノ酸、リジンまたはアルギニンへの置換を含む、請求項1または2に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 表4からの1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 全長の配列番号1に対して少なくとも70%同一であるアミノ酸配列を含み、DNA結合およびオリゴマー化ドメイン;挿入ドメイン;Zn−BEDドメイン;またはそれらの組み合わせにおいて1つ以上のアミノ酸置換を有する突然変異型TcBusterトランスポザーゼであって、アミノ酸配列の配列番号1を有する野生型TcBusterトランスポザーゼと比較して増加した転位効率を有する突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 全長の配列番号1に対して少なくとも70%同一であるアミノ酸配列を含み、表1からの1つ以上のアミノ酸置換を有する突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1と比較して、触媒ドメイン内にまたはそれに近接して中性pHで正味電荷を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1と比較して中性pHで正味電荷を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を含み、1つ以上のアミノ酸が、配列番号1に従って番号付けした場合、D223、D289、またはE589に近接して位置する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 近接が、約80、75、70、60、50、40、30、20、10、または5アミノ酸の距離である、請求項7または8に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 近接が、約70〜80アミノ酸の距離である、請求項7または8に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 突然変異型TcBusterトランスポザーゼのアミノ酸配列が、全長の配列番号1に対して少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%同一である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 表2からの1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 表3からの1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換V377T、E469K、およびD189Aを含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換K573EおよびE578Lを含む、請求項1〜14のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換I452Kを含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換A358Kを含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換V297Kを含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換N85Sを含む、請求項1〜18のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換I452F、V377T、E469K、およびD189Aを含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換A358K、V377T、E469K、およびD189Aを含む、請求項1〜20のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換V377T、E469K、D189A、K573EおよびE578Lを含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- 転位効率が、突然変異型TcBusterトランスポザーゼおよびレポーターカーゴカセットを含有するTcBusterトランスポゾンを細胞の集団に導入すること、そして、細胞の集団のゲノムにおけるレポーターカーゴカセットの転位を検出することを含むアッセイによって測定される、請求項1〜22のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列およびDNA配列特異的結合ドメインを含む融合トランスポザーゼであって、TcBusterトランスポザーゼ配列が全長の配列番号1に対して少なくとも70%の同一性を有する融合トランスポザーゼ。
- DNA配列特異的結合ドメインが、TALEドメイン、ジンクフィンガードメイン、AAV Rep DNA結合ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項24に記載の融合トランスポザーゼ。
- DNA配列特異的結合ドメインがTALEドメインを含む、請求項24または25に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、全長の配列番号1に対して少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する、請求項24〜26のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1と比較して中性pHで正味電荷を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項24〜27のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- 1つ以上のアミノ酸置換が、リジンまたはアルギニンによる置換を含む、請求項28に記載の融合トランスポザーゼ。
- 1つ以上のアミノ酸置換が、アスパラギン酸またはグルタミン酸の、中性アミノ酸、リジンまたはアルギニンでの置換を含む、請求項28または29に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、DNA結合およびオリゴマー化ドメイン;挿入ドメイン;Zn−BEDドメイン;またはそれらの組み合わせにおいて1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項24〜30のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、表1からの1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項24〜31のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、アミノ酸配列の配列番号1を有する野生型TcBusterトランスポザーゼと比較して増加した転位効率を有する、請求項24〜32のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1と比較して、触媒ドメイン内にまたはそれに近接して中性pHで正味電荷を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項24〜33のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1と比較して中性pHで正味電荷を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を含み、1つ以上のアミノ酸置換が、配列番号1に従って番号付けした場合、D223、D289、またはE589に近接して位置する、請求項24〜34のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- 近接が、約80、75、70、60、50、40、30、20、10、または5アミノ酸の距離である、請求項34または35に記載の融合トランスポザーゼ。
- 近接が、約70〜80アミノ酸の距離である、請求項34または35に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、表2からの1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項24〜37のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、表3からの1つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項24〜38のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換V377T、E469K、およびD189Aを含む、請求項24〜39のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換K573EおよびE578Lを含む、請求項24〜40のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換I452Kを含む、請求項24〜41のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換A358Kを含む、請求項24〜42のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換V297Kを含む、請求項24〜43のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換N85Sを含む、請求項24〜44のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換I452F、V377T、E469K、およびD189Aを含む、請求項24〜45のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換A358K、V377T、E469K、およびD189Aを含む、請求項24〜46のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、配列番号1に従って番号付けした場合、アミノ酸置換V377T、E469K、D189A、K573EおよびE578Lを含む、請求項24〜47のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列が、全長の配列番号1に対して100%の同一性を有する、請求項24〜27のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- TcBusterトランスポザーゼ配列およびDNA配列特異的結合ドメインが、リンカーによって分離されている、請求項24〜48のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ。
- リンカーが、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個、少なくとも15個、少なくとも20個、または少なくとも50個のアミノ酸を含む、請求項50に記載の融合トランスポザーゼ。
- リンカーが配列番号9を含む、請求項50または51に記載の融合トランスポザーゼ。
- 請求項1〜22のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼをコードするポリヌクレオチド。
- 請求項24〜49のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼをコードするポリヌクレオチド。
- 突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするDNAを含む、請求項53または54に記載のポリヌクレオチド。
- 突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするメッセンジャーRNA(mRNA)を含む、請求項53〜55のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
- mRNAが化学的に修飾されている、請求項56に記載のポリヌクレオチド。
- 突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼによって認識可能なトランスポゾンをコードする核酸配列を含む、請求項53〜57のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
- DNAベクター中に存在する、請求項53〜58のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
- DNAベクターがミニサークルプラスミドを含む、請求項59に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項1〜49のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼを産生する細胞。
- 請求項53〜60のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含有する細胞。
- 請求項1〜22のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼ、および突然変異型TcBusterトランスポザーゼによって認識可能なトランスポゾンを細胞に導入する工程を含む方法。
- 請求項24〜49のいずれか一項に記載の融合トランスポザーゼ、および融合トランスポザーゼによって認識可能なトランスポゾンを細胞に導入する工程を含む方法。
- 導入する工程が、細胞を、突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、請求項63または64に記載の方法。
- ポリヌクレオチドが、突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするDNAを含む、請求項65に記載の方法。
- ポリヌクレオチドが、突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするメッセンジャーRNA(mRNA)を含む、請求項65に記載の方法。
- mRNAが化学的に修飾されている、請求項67に記載の方法。
- 導入する工程が、細胞を、トランスポゾンを含有するDNAベクターと接触させることを含む、請求項63〜68のいずれか一項に記載の方法。
- DNAベクターがミニサークルプラスミドを含む、請求項69に記載の方法。
- 導入する工程が、細胞を、トランスポゾンと、突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするポリヌクレオチドの両方を含有するプラスミドベクターと接触させることを含む、請求項65〜70のいずれか一項に記載の方法。
- 導入する工程が、細胞を、精製タンパク質としての突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼと接触させることを含む、請求項63〜71のいずれか一項に記載の方法。
- トランスポゾンが、2つの逆位リピート間に配置されたカーゴカセットを含む、請求項63〜72のいずれか一項に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが、配列番号3に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項73に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが配列番号3を含む、請求項73に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが、配列番号4に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項73〜75のいずれか一項に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが配列番号4を含む、請求項73〜75のいずれか一項に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが、配列番号5に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項73に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが配列番号5を含む、請求項73に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが、配列番号6に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項73、78、または79に記載の方法。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが配列番号6を含む、請求項73、78、または79に記載の方法。
- カーゴカセットが、CMV、EFS、MND、EF1α、CAGCs、PGK、UBC、U6、H1、およびCumateからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項73〜81のいずれか一項に記載の方法。
- カーゴカセットがCMVプロモーターを含む、請求項73〜82のいずれか一項に記載の方法。
- カーゴカセットがフォワード方向に存在する、請求項73〜83のいずれか一項に記載の方法。
- カーゴカセットがリバース方向に存在する、請求項73〜83のいずれか一項に記載の方法。
- 導入する工程が、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リン酸カルシウム沈殿、カチオン性ポリマー、デンドリマー、リポソーム、微粒子銃、フュージーン、直接音波負荷、細胞圧搾、光学的トランスフェクション、プロトプラスト融合、インペールフェクション、マグネトフェクション、ヌクレオフェクション、またはそれらの任意の組み合わせを利用して細胞をトランスフェクトするステップを含む、請求項63〜85のいずれか一項に記載の方法。
- 導入する工程が、細胞をエレクトロポレートするステップを含む、請求項63〜86のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が、対象から単離された初代細胞である、請求項63〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 対象がヒトである、請求項88に記載の方法。
- 対象が疾患を有する患者である、請求項88または89に記載の方法。
- 対象が癌または腫瘍と診断されている、請求項88〜90のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が対象の血液から単離される、請求項88〜91のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が初代免疫細胞を含む、請求項63〜92のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が初代白血球を含む、請求項63〜93のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が初代T細胞を含む、請求項63〜94のいずれか一項に記載の方法。
- 初代T細胞が、ガンマデルタT細胞、ヘルパーT細胞、メモリーT細胞、ナチュラルキラーT細胞、エフェクターT細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項95に記載の方法。
- 初代免疫細胞がCD3+細胞を含む、請求項93〜96のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が幹細胞を含む、請求項63〜97のいずれか一項に記載の方法。
- 幹細胞が、以下の細胞からなる群から選択される、請求項98に記載の方法:
胚性幹細胞、造血幹細胞、表皮幹細胞、上皮幹細胞、気管支肺胞幹細胞、乳腺幹細胞、間葉系幹細胞、腸管幹細胞、内皮幹細胞、神経幹細胞、嗅覚成体幹細胞、神経堤幹細胞、精巣細胞、およびそれらの任意の組み合わせ。 - 幹細胞が人工多能性幹細胞を含む、請求項98に記載の方法。
- カーゴカセットが導入遺伝子を含む、請求項73〜100のいずれか一項に記載の方法。
- 導入遺伝子が、以下のものからなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項101に記載の方法:
細胞受容体、免疫学的チェックポイントタンパク質、サイトカイン、およびそれらの任意の組み合わせ。 - 導入遺伝子が、以下のものからなる群から選択される細胞受容体をコードする、請求項101または102に記載の方法:
T細胞受容体(TCR)、B細胞受容体(BCR)、キメラ抗原受容体(CAR)、またはそれらの任意の組み合わせ。 - (a)トランスポゾン、およびトランスポゾンを認識する請求項1〜47のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼを細胞に導入し、それによって遺伝子修飾された細胞を生成すること;ならびに
(b)遺伝子修飾された細胞を、治療を必要とする患者に投与すること
を含む治療の方法。 - 遺伝子修飾された細胞が、トランスポゾンによって導入された導入遺伝子を含む、請求項104に記載の方法。
- 患者が癌または腫瘍と診断されている、請求項104または105に記載の方法。
- 投与するステップが、遺伝子修飾された細胞を患者の血管内に輸注するステップを含む、請求項104〜106のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜49のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼ、および突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼによって認識可能なトランスポゾンを含むゲノム編集システム。
- 請求項1〜49のいずれか一項に記載の突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするポリヌクレオチド、および突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼによって認識可能なトランスポゾンを含むゲノム編集システム。
- ポリヌクレオチドが、突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするDNAを含む、請求項109に記載のシステム。
- ポリヌクレオチドが、突然変異型TcBusterトランスポザーゼまたは融合トランスポザーゼをコードするメッセンジャーRNA(mRNA)を含む、請求項109または110に記載のシステム。
- mRNAが化学的に修飾されている、請求項111に記載のシステム。
- トランスポゾンがDNAベクター中に存在する、請求項108〜112のいずれか一項に記載のシステム。
- DNAベクターがミニサークルプラスミドを含む、請求項113に記載のシステム。
- ポリヌクレオチドおよびトランスポゾンが同じプラスミド中に存在する、請求項109〜114のいずれか一項に記載のシステム。
- トランスポゾンが、2つの逆位リピート間に配置されたカーゴカセットを含む、請求項108〜115のいずれか一項に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが、配列番号3に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも約98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項116に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが配列番号3を含む、請求項116に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが、配列番号4に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項116〜118のいずれか一項に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが配列番号4を含む、請求項116〜118のいずれか一項に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが、配列番号5に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、またはと少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項116に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの左側逆位リピートが配列番号5を含む、請求項116に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが、配列番号6に対して少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する配列を含む、請求項116、121、または122に記載のシステム。
- 2つの逆位リピートのうちの右側逆位リピートが配列番号6を含む、請求項116、121、または122に記載のシステム。
- カーゴカセットが、CMV、EFS、MND、EF1α、CAGCs、PGK、UBC、U6、H1、およびCumateからなる群から選択されるプロモーターを含む、請求項116〜124のいずれか一項に記載のシステム。
- カーゴカセットがCMVプロモーターを含む、請求項116〜116のいずれか一項に記載のシステム。
- カーゴカセットが導入遺伝子を含む、請求項116〜126のいずれか一項に記載のシステム。
- 導入遺伝子が、細胞受容体、免疫学的チェックポイントタンパク質、サイトカイン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項127に記載のシステム。
- 導入遺伝子が、T細胞受容体(TCR)、B細胞受容体(BCR)、キメラ抗原受容体(CAR)、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞受容体をコードする、請求項127または128に記載のシステム。
- カーゴカセットがフォワード方向に存在する、請求項116〜129のいずれか一項に記載のシステム。
- カーゴカセットがリバース方向に存在する、請求項116〜129のいずれか一項に記載のシステム。
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WO2019246486A2 (en) * | 2018-06-21 | 2019-12-26 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | ENHANCED hAT FAMILY TRANSPOSON-MEDIATED GENE TRANSFER AND ASSOCIATED COMPOSITIONS, SYSTEMS, AND METHODS |
IL297851A (en) * | 2020-05-04 | 2023-01-01 | Saliogen Therapeutics Inc | Transposition-based treatments |
EP4161950A1 (en) * | 2020-06-05 | 2023-04-12 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | Enhanced hat family member spin transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods |
CN111607661B (zh) * | 2020-06-29 | 2022-06-14 | 北部湾大学 | 基于油茶转录组hAT转座子的分子标记引物组及其应用 |
CN111607662B (zh) * | 2020-06-30 | 2022-06-10 | 北部湾大学 | 基于白骨壤转录组hAT转座子的分子标记引物组及其应用 |
WO2023282730A1 (ko) * | 2021-07-09 | 2023-01-12 | 주식회사 네오젠티씨 | 트랜스포존 시스템 및 이의 용도 |
WO2023004366A1 (en) | 2021-07-21 | 2023-01-26 | Aspen Neuroscience, Inc. | Transposon-based modulation of gba1 and related compositions and uses thereof |
WO2023172514A1 (en) | 2022-03-07 | 2023-09-14 | Catamaran Bio, Inc. | Engineered immune cell therapeutics targeted to her2 and methods of use thereof |
WO2023212691A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Immatics US, Inc. | DOMINANT NEGATIVE TGFβ RECEPTOR POLYPEPTIDES, CD8 POLYPEPTIDES, CELLS, COMPOSITIONS, AND METHODS OF USING THEREOF |
WO2023212655A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Immatics US, Inc. | Il-12 polypeptides, il-15 polypeptides, il-18 polypeptides, cd8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof |
WO2023212697A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Immatics US, Inc. | Membrane-bound il-15, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060252140A1 (en) * | 2005-04-29 | 2006-11-09 | Yant Stephen R | Development of a transposon system for site-specific DNA integration in mammalian cells |
Family Cites Families (59)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7067644B2 (en) | 2000-12-05 | 2006-06-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Double transposition methods for manipulating nucleic acids |
US7064246B2 (en) | 2001-05-01 | 2006-06-20 | Macrae Amy F | Use of transposable elements for altering gene expression |
US7262056B2 (en) | 2001-11-08 | 2007-08-28 | Mirus Bio Corporation | Enhancing intermolecular integration of nucleic acids using integrator complexes |
US7462758B2 (en) | 2001-12-20 | 2008-12-09 | Sungene Gmbh & Co. Kgaa | Methods for the transformation of vegetal plastids |
JP2006518204A (ja) | 2003-02-10 | 2006-08-10 | マックス−デルブルック−セントラム フユール モレクラーレ メディツィン(エムディーシー) | トランスポゾンに基づく標的化システム |
ATE498016T1 (de) | 2003-02-10 | 2011-02-15 | Max Delbrueck Centrum | Transposon-system zur gezielten integration |
US7985739B2 (en) * | 2003-06-04 | 2011-07-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced sleeping beauty transposon system and methods for using the same |
GB2403475B (en) | 2003-07-01 | 2008-02-06 | Oxitec Ltd | Stable integrands |
US8071364B2 (en) | 2003-12-24 | 2011-12-06 | Transgenrx, Inc. | Gene therapy using transposon-based vectors |
EP2392657B1 (en) | 2005-07-05 | 2013-09-25 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Modified transposon vector and its use |
US9228180B2 (en) | 2007-07-04 | 2016-01-05 | Max-Delbruck-Centrum Fur Molekulare Medizin | Polypeptide variants of sleeping beauty transposase |
US8524979B2 (en) | 2008-04-14 | 2013-09-03 | National Taiwan University | Termination of transgene expression via transposon-mediated break |
US20110239315A1 (en) | 2009-01-12 | 2011-09-29 | Ulla Bonas | Modular dna-binding domains and methods of use |
EP2401367B1 (en) * | 2009-02-26 | 2016-11-30 | Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. | Hyperactive piggybac transposases |
BRPI1010759B1 (pt) | 2009-06-11 | 2019-07-16 | Inter-University Research Institute Corporation Research Organization Of Information And Systems | Método para produzir uma proteína de interesse ou para obter uma suspensão de células de mamíferos capaz de produzir uma proteína de interesse, bem como vetor de expressão de proteína |
JP5947311B2 (ja) | 2010-12-09 | 2016-07-06 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | 癌を治療するためのキメラ抗原受容体改変t細胞の使用 |
US20130017978A1 (en) | 2011-07-11 | 2013-01-17 | Finnzymes Oy | Methods and transposon nucleic acids for generating a dna library |
US10421960B2 (en) | 2011-09-16 | 2019-09-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | RNA engineered T cells for the treatment of cancer |
US9738874B2 (en) * | 2011-12-16 | 2017-08-22 | Novozymes Inc. | Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same |
EP2825190B1 (en) | 2012-03-15 | 2016-11-30 | Cellectis | Repeat variable diresidues for targeting nucleotides |
CN102690354B (zh) * | 2012-05-14 | 2015-03-25 | 安源生物科技(上海)有限公司 | 重组二聚化抗凝血酶III-Fc融合蛋白及其哺乳动物细胞高效表达系统 |
EP2692865B1 (en) | 2012-07-30 | 2014-12-10 | NBE-Therapeutics LLC | Transposition-mediated identification of specific binding or functional proteins |
WO2014118619A2 (en) | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Selexis S.A. | Enhanced transgene expression and processing |
KR102238226B1 (ko) | 2013-05-14 | 2021-04-09 | 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 | 가공된 키메라 항원 수용체 (car) t-세포의 인간 적용 |
CN113354744A (zh) * | 2013-12-20 | 2021-09-07 | 弗雷德哈钦森癌症研究中心 | 带标签的嵌合效应分子及其受体 |
WO2015139093A1 (en) | 2014-03-21 | 2015-09-24 | The Sydney Children's Hospitals Network (Randwick And Westmead) (Incorporating The Royal Alexandra Hospital For Children) | Stable gene transfer to proliferating cells |
CN103981204B (zh) | 2014-03-24 | 2016-05-04 | 上海海洋大学 | 一种有活性的金鱼Tgf2转座子重组转座酶蛋白的表达方法 |
CA2944887A1 (en) | 2014-04-09 | 2015-10-15 | Jeremy Minshull | Enhanced polynucleotide constructs for eukaryotic gene expression |
JP2017518082A (ja) | 2014-06-17 | 2017-07-06 | ポセイダ セラピューティクス, インコーポレイテッド | ゲノム中の特異的遺伝子座にタンパク質を指向させるための方法およびその使用 |
WO2016054032A1 (en) | 2014-09-29 | 2016-04-07 | The Jackson Laboratory | High efficiency, high throughput generation of genetically modified mammals by electroporation |
EP3018200A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-11 | Fondazione Matilde Tettamanti e Menotti de Machi Onlus | Improved method for the generation of genetically modified cells |
JP2018513681A (ja) | 2015-03-31 | 2018-05-31 | エクセリゲン サイエンティフィック, インコーポレイテッドExeligen Scientific, Inc. | 細胞または生物のゲノムへのDNA配列の標的化組み込みのためのCas9レトロウイルスインテグラーゼおよびCas9レコンビナーゼ系 |
EP3283635B1 (en) | 2015-04-13 | 2022-07-06 | Maxcyte, Inc. | Methods and compositions for modifying genomic dna |
WO2016191618A1 (en) | 2015-05-27 | 2016-12-01 | Jianbiao Zheng | Methods of inserting molecular barcodes |
WO2016205554A1 (en) | 2015-06-17 | 2016-12-22 | Poseida Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for directing proteins to specific loci in the genome |
WO2017046259A1 (en) | 2015-09-16 | 2017-03-23 | Ethris Gmbh | Improved transposon system for gene delivery |
WO2017050884A1 (en) | 2015-09-22 | 2017-03-30 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | A method for high level and stable gene transfer in lymphocytes |
CN105154473B (zh) | 2015-09-30 | 2019-03-01 | 上海细胞治疗研究院 | 一种高效安全的转座子整合系统及其用途 |
CN108138171B (zh) | 2015-10-08 | 2022-05-13 | 国立大学法人名古屋大学 | 表达嵌合抗原受体的基因修饰t细胞的制备方法 |
JP6956416B2 (ja) * | 2015-12-14 | 2021-11-02 | ゲノムフロンティア セラピューティクス,インコーポレイテッド | トランスポゾン系、それを含むキット及びそれらの使用 |
EP3402883A4 (en) | 2016-01-12 | 2019-09-18 | Seqwell, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR NUCLEIC ACID SEQUENCING |
CA3014001A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | Cell Medica Switzerland Ag | Binding members to pd-l1 |
WO2017147538A1 (en) | 2016-02-26 | 2017-08-31 | Poseida Therapeutics, Inc. | Transposon system and methods of use |
EP3219800A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-20 | Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin | A transposon-based transfection system for primary cells |
JP2019509753A (ja) | 2016-03-31 | 2019-04-11 | ライオン ティーシーアール ピーティーイー.エルティーディー. | 外因性ウイルス特異的t細胞受容体(tcr)を発現する非活性化t細胞 |
EP3452082A1 (en) | 2016-05-04 | 2019-03-13 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Cell-based neoantigen vaccines and uses thereof |
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EP3497214B1 (en) | 2016-08-09 | 2023-06-28 | President and Fellows of Harvard College | Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
WO2018042776A1 (ja) | 2016-08-30 | 2018-03-08 | 国立大学法人九州大学 | Dna結合タンパク質の結合領域の近傍に所望のdna断片を挿入する方法 |
WO2018057779A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Jianbiao Zheng | Compositions of synthetic transposons and methods of use thereof |
JP2019528760A (ja) | 2016-09-30 | 2019-10-17 | ポセイダ セラピューティクス, インコーポレイテッド | 改変された幹細胞メモリーt細胞、その作製方法およびその使用方法 |
CA3045323A1 (en) | 2016-12-02 | 2018-06-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Engineered b cells and related compositions and methods |
CA3047313A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | Enhanced hat family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods |
IL267865B1 (en) | 2017-01-10 | 2024-03-01 | Intrexon Corp | Modulation of expression of polypeptides through a new system for changing gene expression |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060252140A1 (en) * | 2005-04-29 | 2006-11-09 | Yant Stephen R | Development of a transposon system for site-specific DNA integration in mammalian cells |
Non-Patent Citations (2)
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DATABASE GENBANK[ONLINE], JPN6021042784, 31 December 2007 (2007-12-31), ISSN: 0004947443 * |
XIANGHONG LI ET AL.: "A resurrected mammalian hAT transposable element and a closely related insect element are highly act", PNAS, vol. 110 (6), JPN6021042783, 2013, pages 478 - 487, ISSN: 0004947442 * |
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