JP2020195399A - Kv1.3結合免疫グロブリン - Google Patents
Kv1.3結合免疫グロブリン Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020195399A JP2020195399A JP2020144116A JP2020144116A JP2020195399A JP 2020195399 A JP2020195399 A JP 2020195399A JP 2020144116 A JP2020144116 A JP 2020144116A JP 2020144116 A JP2020144116 A JP 2020144116A JP 2020195399 A JP2020195399 A JP 2020195399A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- changed
- place
- amino acid
- cdr1
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims abstract description 557
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims abstract description 557
- 101000994669 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily A member 3 Proteins 0.000 title claims abstract description 361
- 102100034355 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 3 Human genes 0.000 title claims abstract description 321
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 title claims abstract description 114
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 260
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 663
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 651
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 643
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 117
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 89
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 68
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 47
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 39
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 24
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 claims abstract 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 272
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 158
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 97
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims description 91
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 91
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 57
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 47
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 38
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 36
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 claims description 34
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 claims description 34
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 28
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 102000046611 human KCNA3 Human genes 0.000 claims description 21
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 16
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 16
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 claims description 15
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 14
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 14
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 12
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 11
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 11
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 10
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 claims description 10
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 9
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims description 8
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 8
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 8
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 claims description 7
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 claims description 7
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 7
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 7
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 7
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 7
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 claims description 7
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 claims description 7
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 7
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 7
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 7
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 claims description 7
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 7
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 7
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 7
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 7
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 claims description 6
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 6
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 160
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 147
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 description 145
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 description 145
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 134
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 134
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 129
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 124
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 79
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 71
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 description 47
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 41
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 39
- 239000002773 nucleotide Chemical group 0.000 description 32
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 32
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 29
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 28
- 230000006870 function Effects 0.000 description 28
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 27
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 27
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 26
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 24
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 19
- -1 hERG Proteins 0.000 description 19
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 19
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 18
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 18
- 101000997261 Centruroides margaritatus Potassium channel toxin alpha-KTx 2.2 Proteins 0.000 description 16
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 16
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 16
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 15
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 14
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 14
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 14
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 11
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 11
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 11
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 11
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 11
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 10
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 10
- OVJBOPBBHWOWJI-FYNXUGHNSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(aS,1R,3aS,4S,10S,16S,19R,22S,25S,28S,34S,37S,40R,45R,48S,51S,57S,60S,63S,69S,72S,75S,78S,85R,88S,91R,94S)-40-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-25,48,78,88,94-pentakis(4-aminobutyl)-a-(2-amino-2-oxoethyl)-22,63,72-tris(3-amino-3-oxopropyl)-69-benzyl-37-[(1R)-1-hydroxyethyl]-34,60-bis(hydroxymethyl)-51,57,75-trimethyl-16-(2-methylpropyl)-3a-(2-methylsulfanylethyl)-2a,3,5a,9,15,18,21,24,27,33,36,39,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,87,90,93,96,99-nonacosaoxo-7a,8a,42,43,82,83-hexathia-1a,2,4a,8,14,17,20,23,26,32,35,38,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76,79,86,89,92,95,98-nonacosazahexacyclo[43.35.25.419,91.04,8.010,14.028,32]nonahectane-85-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc3ccccc3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]3CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC1=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N3)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC2=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O OVJBOPBBHWOWJI-FYNXUGHNSA-N 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 230000002999 depolarising effect Effects 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 9
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 9
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 9
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 9
- 101001026214 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily A member 5 Proteins 0.000 description 8
- 102100037445 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 5 Human genes 0.000 description 8
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(F)C([N+]([O-])=O)=C1 LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 7
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 6
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 6
- 102100037448 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 6 Human genes 0.000 description 6
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 208000002029 allergic contact dermatitis Diseases 0.000 description 6
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 6
- 229940125516 allosteric modulator Drugs 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000012552 review Methods 0.000 description 6
- 229910052701 rubidium Inorganic materials 0.000 description 6
- IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N rubidium atom Chemical compound [Rb] IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 5
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 5
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000002001 electrophysiology Methods 0.000 description 5
- 230000007831 electrophysiology Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000007896 negative regulation of T cell activation Effects 0.000 description 5
- 230000025020 negative regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 102100037441 Intermediate conductance calcium-activated potassium channel protein 4 Human genes 0.000 description 4
- 101710087467 Intermediate conductance calcium-activated potassium channel protein 4 Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 4
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 4
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 3
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- PNDZEEPOYCVIIY-UHFFFAOYSA-N indo-1 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C=2N=C3[CH]C(=CC=C3C=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 PNDZEEPOYCVIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 238000012402 patch clamp technique Methods 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 3
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 3
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 2
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 2
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 2
- 102000005702 Calcium-Activated Potassium Channels Human genes 0.000 description 2
- 108010045489 Calcium-Activated Potassium Channels Proteins 0.000 description 2
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 2
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100497384 Drosophila melanogaster CASK gene Proteins 0.000 description 2
- 206010014025 Ear swelling Diseases 0.000 description 2
- 240000000731 Fagus sylvatica Species 0.000 description 2
- 235000010099 Fagus sylvatica Nutrition 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 101000944277 Homo sapiens Inward rectifier potassium channel 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000994626 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily A member 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001135493 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily C member 4 Proteins 0.000 description 2
- 101000994667 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily KQT member 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000994663 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily KQT member 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000631760 Homo sapiens Sodium channel protein type 1 subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000684826 Homo sapiens Sodium channel protein type 2 subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000654381 Homo sapiens Sodium channel protein type 8 subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000867817 Homo sapiens Voltage-dependent L-type calcium channel subunit alpha-1D Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102100033114 Inward rectifier potassium channel 2 Human genes 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034368 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100034369 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100037449 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 4 Human genes 0.000 description 2
- 102100033165 Potassium voltage-gated channel subfamily C member 4 Human genes 0.000 description 2
- 102100033184 Potassium voltage-gated channel subfamily D member 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100034354 Potassium voltage-gated channel subfamily KQT member 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100034360 Potassium voltage-gated channel subfamily KQT member 3 Human genes 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 206010058141 Skin graft rejection Diseases 0.000 description 2
- 102100037446 Small conductance calcium-activated potassium channel protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710201182 Small conductance calcium-activated potassium channel protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100037442 Small conductance calcium-activated potassium channel protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 101710201179 Small conductance calcium-activated potassium channel protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100028910 Sodium channel protein type 1 subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100023150 Sodium channel protein type 2 subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100031371 Sodium channel protein type 8 subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 102100032575 Voltage-dependent L-type calcium channel subunit alpha-1D Human genes 0.000 description 2
- NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(C(=O)OCOC(C)=O)=CC=C2C21C1=CC(CCC(=O)OCOC(C)=O)=C(OCOC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CCC(=O)OCOC(=O)C)C(OCOC(C)=O)=C1 NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 108010082025 cyan fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- GORAHSAIYZMTHZ-LBFSFEBVSA-N dalazatide Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]2CSSCC3C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N4CCC[C@H]4C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=4N=CNC=4)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N3)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@](CCCNC(N)=N)(OCCOCCN)N(C(C)=O)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(OP(O)(O)=O)=CC=1)C(N)=O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 GORAHSAIYZMTHZ-LBFSFEBVSA-N 0.000 description 2
- 229950001360 dalazatide Drugs 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021843 fluorescent protein 583 Proteins 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001185 psoriatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- WKBPZYKAUNRMKP-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(2,4-dichlorophenyl)pentyl]1,2,4-triazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1C(CCC)CN1C=NC=N1 WKBPZYKAUNRMKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDFNWJDGWJVGGN-UHFFFAOYSA-N 2-(2,7-dichloro-3,6-dihydroxy-9h-xanthen-9-yl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1C2=CC(Cl)=C(O)C=C2OC2=CC(O)=C(Cl)C=C21 XDFNWJDGWJVGGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N 2-(3,6-diacetyloxy-2,7-dichloro-9h-xanthen-9-yl)benzoic acid Chemical compound C1=2C=C(Cl)C(OC(=O)C)=CC=2OC2=CC(OC(C)=O)=C(Cl)C=C2C1C1=CC=CC=C1C(O)=O PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUVJFMSQTCEAAB-UHFFFAOYSA-M 2-[3-[5,6-dichloro-1,3-bis[[4-(chloromethyl)phenyl]methyl]benzimidazol-2-ylidene]prop-1-enyl]-3-methyl-1,3-benzoxazol-3-ium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC=CC=C2[N+](C)=C1C=CC=C(N(C1=CC(Cl)=C(Cl)C=C11)CC=2C=CC(CCl)=CC=2)N1CC1=CC=C(CCl)C=C1 RUVJFMSQTCEAAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MJKVTPMWOKAVMS-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1-benzopyran-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C(O)=CC2=C1 MJKVTPMWOKAVMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGGVALXERJRIRO-UHFFFAOYSA-N 4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-2-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-1H-pyrazol-5-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)O MGGVALXERJRIRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPJDHSYCSQAODE-UHFFFAOYSA-N 5-chloromethylfluorescein diacetate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(CCl)=CC=C2C21C1=CC=C(OC(C)=O)C=C1OC1=CC(OC(=O)C)=CC=C21 IPJDHSYCSQAODE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DIJCILWNOLHJCG-UHFFFAOYSA-N 7-amino-2',7'-difluoro-3',6'-dihydroxy-6-(methylamino)spiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound C12=CC(F)=C(O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C2C21OC(=O)C1=C(N)C(NC)=CC=C21 DIJCILWNOLHJCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000242759 Actiniaria Species 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 239000012118 Alexa Fluor 750 Substances 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- 108010063290 Aquaporins Proteins 0.000 description 1
- 102000010637 Aquaporins Human genes 0.000 description 1
- 108091005950 Azurite Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100228196 Caenorhabditis elegans gly-4 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005944 Cerulean Proteins 0.000 description 1
- 102000034573 Channels Human genes 0.000 description 1
- 241000579895 Chlorostilbon Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- RURLVUZRUFHCJO-UHFFFAOYSA-N Chromomycin A3 Natural products COC(C1Cc2cc3cc(OC4CC(OC(=O)C)C(OC5CC(O)C(OC)C(C)O5)C(C)O4)c(C)c(O)c3c(O)c2C(=O)C1OC6CC(OC7CC(C)(O)C(OC(=O)C)C(C)O7)C(O)C(C)O6)C(=O)C(O)C(C)O RURLVUZRUFHCJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050001175 Connexin Proteins 0.000 description 1
- 102000010970 Connexin Human genes 0.000 description 1
- 108091005943 CyPet Proteins 0.000 description 1
- 102100039208 Cytochrome P450 3A5 Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091008102 DNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 235000017274 Diospyros sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- JMJKKMLLEHNELP-UHFFFAOYSA-N ER-Tracke Blue-White DPX dye Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CN=C(C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NCCNC(=O)C=2C(=C(F)C(F)=C(F)C=2F)F)O1 JMJKKMLLEHNELP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 102220566469 GDNF family receptor alpha-1_S65T_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566451 GDNF family receptor alpha-1_Y66H_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566455 GDNF family receptor alpha-1_Y66W_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010056740 Genital discharge Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000745710 Homo sapiens Cytochrome P450 3A5 Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000018706 Kv1.3 Potassium Channel Human genes 0.000 description 1
- 108010027296 Kv1.3 Potassium Channel Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000000470 PDZ domains Human genes 0.000 description 1
- 108050008994 PDZ domains Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 101710154111 Potassium voltage-gated channel subfamily A member 3 Proteins 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPXHITFUCHFTKR-UHFFFAOYSA-L To-Pro-1 Chemical compound [I-].[I-].S1C2=CC=CC=C2[N+](C)=C1C=C1C2=CC=CC=C2N(CCC[N+](C)(C)C)C=C1 DPXHITFUCHFTKR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MZZINWWGSYUHGU-UHFFFAOYSA-J ToTo-1 Chemical compound [I-].[I-].[I-].[I-].C12=CC=CC=C2C(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=CC=[N+]1CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C1=CC=CC=C11)=CC=C1C=C1N(C)C2=CC=CC=C2S1 MZZINWWGSYUHGU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 101000693967 Trachemys scripta 67 kDa serum albumin Proteins 0.000 description 1
- 102220615016 Transcription elongation regulator 1_S65C_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000545067 Venus Species 0.000 description 1
- GRRMZXFOOGQMFA-UHFFFAOYSA-J YoYo-1 Chemical compound [I-].[I-].[I-].[I-].C12=CC=CC=C2C(C=C2N(C3=CC=CC=C3O2)C)=CC=[N+]1CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C1=CC=CC=C11)=CC=C1C=C1N(C)C2=CC=CC=C2O1 GRRMZXFOOGQMFA-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 1
- APERIXFHHNDFQV-UHFFFAOYSA-N [2-[2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-4-[3,6-bis(dimethylamino)xanthen-9-ylidene]cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]-bis(carboxymethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C12=CC=C(N(C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C1=C(C=1)C=CC(=[N+](CC(O)=O)CC(O)=O)C=1OCCOC1=CC(C)=CC=C1N(CC(O)=O)CC(O)=O APERIXFHHNDFQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BEVHTVRRVVEMEF-UHFFFAOYSA-N [6'-acetyloxy-4-amino-2',7'-difluoro-5-(methylamino)-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3'-yl] acetate Chemical compound C12=CC(F)=C(OC(C)=O)C=C2OC2=CC(OC(C)=O)=C(F)C=C2C21OC(=O)C1=C(N)C(NC)=CC=C21 BEVHTVRRVVEMEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFYWPQMAWCYNGW-UHFFFAOYSA-M [6-(dimethylamino)-9-(2-methoxycarbonylphenyl)xanthen-3-ylidene]-dimethylazanium;perchlorate Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.COC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C21 PFYWPQMAWCYNGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MCEXQZRGUKALLT-VVEOGCPPSA-N acetyloxymethyl 2-[n-[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]-2-[2-[[6-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-2-[(e)-(5-oxo-2-sulfanylideneimidazolidin-4-ylidene)methyl]-1-benzofuran-5-yl]oxy]ethoxy]-4-methylanilino]acetate Chemical compound CC(=O)OCOC(=O)CN(CC(=O)OCOC(C)=O)C1=CC=C(C)C=C1OCCOC(C(=C1)N(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=CC2=C1OC(\C=C\1C(NC(=S)N/1)=O)=C2 MCEXQZRGUKALLT-VVEOGCPPSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- ZYVSOIYQKUDENJ-WKSBCEQHSA-N chromomycin A3 Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@@H]1OC(C)=O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1C)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)[C@@](C)(O)C3)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@@H]1C[C@@H](O)[C@@H](OC)[C@@H](C)O1 ZYVSOIYQKUDENJ-WKSBCEQHSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-UHFFFAOYSA-N deoliosyl-3C-alpha-L-digitoxosyl-MTM Natural products CC=1C(O)=C2C(O)=C3C(=O)C(OC4OC(C)C(O)C(OC5OC(C)C(O)C(OC6OC(C)C(O)C(C)(O)C6)C5)C4)C(C(OC)C(=O)C(O)C(C)O)CC3=CC2=CC=1OC(OC(C)C1O)CC1OC1CC(O)C(O)C(C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- XVLXYDXJEKLXHN-UHFFFAOYSA-M dioc6 Chemical compound [I-].O1C2=CC=CC=C2[N+](CCCCCC)=C1C=CC=C1N(CCCCCC)C2=CC=CC=C2O1 XVLXYDXJEKLXHN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000010976 emerald Substances 0.000 description 1
- 229910052876 emerald Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 229960000555 fenyramidol Drugs 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N fura-2 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=3OC(=CC=3C=2)C=2OC(=CN=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- RPKCZJYDUKVMGF-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow carbohydrazide dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(NC(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N RPKCZJYDUKVMGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N mithramycin Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@H]1O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1C)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O)[C@@](C)(O)C3)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@H]1C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N 0.000 description 1
- FZTMEYOUQQFBJR-UHFFFAOYSA-M mitoTracker Orange Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(CCl)C=C1 FZTMEYOUQQFBJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IKEOZQLIVHGQLJ-UHFFFAOYSA-M mitoTracker Red Chemical compound [Cl-].C1=CC(CCl)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 IKEOZQLIVHGQLJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 1
- OLAPPGSPBNVTRF-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic acid Chemical compound C1=CC(C(O)=O)=C2C(C(=O)O)=CC=C(C(O)=O)C2=C1C(O)=O OLAPPGSPBNVTRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008288 physiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229960003171 plicamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000036619 pore blockages Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004844 protein turnover Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000008060 renal absorption Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 102200089551 rs5030826 Human genes 0.000 description 1
- 102200089550 rs869025616 Human genes 0.000 description 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000013391 scatchard analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- DYPYMMHZGRPOCK-UHFFFAOYSA-N seminaphtharhodafluor Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C(C=CC=1C3=CC=C(O)C=1)=C3OC1=CC(N)=CC=C21 DYPYMMHZGRPOCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- NBAOBNBFGNQAEJ-UHFFFAOYSA-M tetramethylrhodamine ethyl ester perchlorate Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.CCOC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C21 NBAOBNBFGNQAEJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000011031 topaz Substances 0.000 description 1
- 229910052853 topaz Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000042565 transient receptor (TC 1.A.4) family Human genes 0.000 description 1
- 108091053409 transient receptor (TC 1.A.4) family Proteins 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- GWBUNZLLLLDXMD-UHFFFAOYSA-H tricopper;dicarbonate;dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[O-]C([O-])=O.[O-]C([O-])=O GWBUNZLLLLDXMD-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/626—Diabody or triabody
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
Abstract
Description
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、免疫グロブリンに関する。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、LもしくはRに変更されており、
−2位において、Lが、F、P、もしくはIに変更されており、
−3位において、Lが、PもしくはFに変更されており、
−4位において、Fが、S、LもしくはIに変更されており、
−5位において、Sが、IもしくはRに変更されており、
−6位において、Rが、C、A、P、V、もしくはLに変更されており、
−7位において、Nが、H、P、I、M、Y、T、もしくはDに変更されており、
−8位において、Sが、T、R、もしくはIに変更されており、
−9位において、Aが、VもしくはTに変更されており、及び/又は
−10位において、Gが、S、R、もしくはVに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Rが、GもしくはCに変更されており、
−2位において、Iが、V、T、S、もしくはLに変更されており、
−3位において、Rが、GもしくはLに変更されており、
−4位において、Mが、S、R、A、E、F、G、H、K、L、P、Q、V、W、Y、I、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、V、S、もしくはTに変更されており、
−7位において、Sが、G、C、D、もしくはEに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、T、M、もしくはRに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Wが、Gに変更されており、
−3位において、Eが、T、K、G、AもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、EもしくはDに変更されており、
−5位において、Fが、A、L、V、Y、T、もしくはSに変更されており、
−6位において、Yが、FもしくはDに変更されており、
−7位において、Eが、GもしくはKに変更されており、
−8位において、Yが、SもしくはHに変更されており、及び/又は
−9位において、Wが、S、G、もしくはCに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜185、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、2もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−6位において、Rが、AもしくはVに変更されており、及び/又は
−9位において、Aが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜271、541、及び549、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−2位において、Iが、Lに変更されており、
−4位において、Mが、S、Q、A、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、SもしくはTに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、Tに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜398、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−3位において、Eが、TもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、Eに変更されており、
−5位において、Fが、Aに変更されており、及び/又は
−8位において、Yが、Hに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は、
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、免疫グロブリンに関する。
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、R、A、V、S、もしくはKに変更されており、
−3位において、Tが、Nに変更されており、
−4位において、Fが、Lに変更されており、
−6位において、Nが、Sに変更されており、
−7位において、Fが、Yに変更されており、
−8位において、Gが、Aに変更されており、及び/又は
−9位において、Mが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Aが、Tに変更されており、
−2位において、Iが、Vに変更されており、
−5位において、Tが、SもしくはAに変更されており、
−6位において、Gが、NもしくはAに変更されており、
−7位において、Gが、SもしくはRに変更されており、
−8位において、Hが、RもしくはYに変更されており、
−9位において、Tが、IもしくはKに変更されており、及び/又は
−10位において、Yが、Fに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−4位において、Fが、YもしくはSに変更されており、
−5位において、Gが、Dに変更されており、
−6位において、Dが、Gに変更されており、
−7位において、Gが、Dに変更されており、
−8位において、Tが、Aに変更されており、
−9位において、Yが、Sに変更されており、
−10位において、Yが、Fに変更されており、
−12位において、Qが、Eに変更されており、
−14位において、Aが、N、T、I、もしくはRに変更されており、
−17位において、Dが、NもしくはGに変更されており、及び/又は
−18位において、Fが、Lに変更されている、
からなる群より選択される。
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:269であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:269であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:395であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:396であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:270であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:183であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:184であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:185であり、CDR2が配列番号:271であり、CDR3が配列番号:398であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:541であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:541であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:549であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:549であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:290であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:292であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:293であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:294であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:216であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:419であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:297であり、CDR3が配列番号:420であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:421であり;
−CDR1が配列番号:217であり、CDR2が配列番号:299であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:423であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:301であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:424であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:302であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:425であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:426であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:219であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:427であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:304であり、CDR3が配列番号:428であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:421であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:429であり;
−CDR1が配列番号:221であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:222であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:430であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:306であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:223であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:431であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:432であり;
−CDR1が配列番号:224であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:307であり、CDR3が配列番号:433であり;
−CDR1が配列番号:225であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:226であり、CDR2が配列番号:308であり、CDR3が配列番号:434であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:301であり、CDR3が配列番号:426であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:217であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:435であり;及び
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:309であり、CDR3が配列番号:418である、ポリペプチドからなる群より選択される。
a)適切なホスト又はホスト生物中において、又は、別の適切な発現系において、本発明の核酸もしくはヌクレオチド配列、又は、本発明の遺伝子構築物を発現させる工程と、場合により続けて、
b)このようにして得られた本発明の免疫グロブリン、ポリペプチド、化合物、及び/又は構築物を単離し、及び/又は、精製する工程とを含むことができる。
特に断りない限り、使用される全ての用語は、当業者に明らかであろう、当技術分野におけるその通常の意味を有する。例えば、標準的な参考書、例えば、Sambrook et al.(Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd.Ed.) Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)、F. Ausubel et al.(Current protocols in molecular biology, Green Publishing and Wiley Interscience, New York, 1987)、Lewin(Genes II, John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1985)、Old et al.(Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering (2nd edition) University of California Press, Berkeley, CA, 1981);Roitt et al.(Immunology (6th. Ed.) Mosby/Elsevier, Edinburgh, 2001)、Roitt et al.(Roitt’s Essential Immunology (10th Ed.) Blackwell Publishing, UK, 2001)、及びJaneway et al.(Immunobiology (6th Ed.) Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York, 2005)、ならびに、本明細書で引用された一般的な背景技術が参照される。
本発明は、Kv1.3、好ましくは、ヒトKv1.3に特異性を有し、及び/又は、これらに結合する、免疫グロブリン(本明細書において、「本発明の免疫グロブリン」とも呼ばれる)及び/又はポリペプチド(本明細書において、「本発明のポリペプチド」とも呼ばれる)を提供する。Kv1.3は、KCNA3、MK3、HGK5、HLK3、PCN3、HPCN3、又はHUKIIIとしても公知であり、ヒトにおいて、KCNA3遺伝子(アクセッションNo.P22001、ヒトKCNA3)によりコードされるタンパク質である。同遺伝子は、染色体1p13.3に位置している。このため、本発明の免疫グロブリン及び/又はポリペプチドは、好ましくは、ヒトKv1.3(配列番号:474)に結合する。
本発明は、Kv1.3のEL1細胞外ループに結合するのに特に適したアミノ酸残基のストレッチ(配列番号:181〜210、配列番号:268〜289、配列番号:541〜555、配列番号:393〜415、及び配列番号:211〜226、配列番号:290〜309、配列番号:416〜435;表A−2)を提供する。特に、本発明は、ヒトKv1.3のEL1細胞外ループに結合するアミノ酸残基のストレッチを提供し、ここで、前記ストレッチの前記EL1細胞外ループへの結合は、(上記されたように)Kv1.3の活性を阻害する。アミノ酸残基のこれらのストレッチは、特に、このストレッチが本発明のポリペプチドの抗原結合部位(の一部)を形成するような方法において、本発明のポリペプチド中に存在することができ、及び/又は、同ポリペプチド内に包含させることができる。アミノ酸残基のこれらのストレッチは、Kv1.3に対して生じた重鎖抗体又はVHH配列のCDR配列として生成されてきた。また、アミノ酸残基のこれらのストレッチは、本明細書において、「本発明のCDR配列」(すなわち、それぞれ「本発明のCDR1配列」、「本発明のCDR2配列」、及び「本発明のCDR3配列」)とも呼ばれる。
i)CDR1配列:
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
及び/又は
ii)CDR2配列:
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
及び/又は
iii)CDR3配列:
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、少なくとも1つのアミノ酸残基のストレッチを含むことができる。
i)CDR1配列:
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、LもしくはRに変更されており、
−2位において、Lが、F、P、もしくはIに変更されており、
−3位において、Lが、PもしくはFに変更されており、
−4位において、Fが、S、LもしくはIに変更されており、
−5位において、Sが、IもしくはRに変更されており、
−6位において、Rが、C、A、P、V、もしくはLに変更されており、
−7位において、Nが、H、P、I、M、Y、T、もしくはDに変更されており、
−8位において、Sが、T、R、もしくはIに変更されており、
−9位において、Aが、VもしくはTに変更されており、及び/又は
−10位において、Gが、S、R、もしくはVに変更されている、
及び/又は
ii)CDR2配列:
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Rが、GもしくはCに変更されており、
−2位において、Iが、V、T、S、もしくはLに変更されており、
−3位において、Rが、GもしくはLに変更されており、
−4位において、Mが、S、R、A、E、F、G、H、K、L、P、Q、V、W、Y、I、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、V、S、もしくはTに変更されており、
−7位において、Sが、G、C、D、もしくはEに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、T、M、もしくはRに変更されている
及び/又は
iii)CDR3配列:
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Wが、Gに変更されており、
−3位において、Eが、T、K、G、AもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、EもしくはDに変更されており、
−5位において、Fが、A、L、V、Y、T、もしくはSに変更されており、
−6位において、Yが、FもしくはDに変更されており、
−7位において、Eが、GもしくはKに変更されており、
−8位において、Yが、SもしくはHに変更されており、及び/又は
−9位において、Wが、S、G、もしくはCに変更されている、
からなる群より選択される、少なくとも1つのアミノ酸残基のストレッチを含むことができる。
i)CDR1配列:
a)配列番号:181〜185、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、2もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−6位において、Rが、AもしくはVに変更されており、及び/又は
−9位において、Aが、Vに変更されている、
及び/又は
ii)CDR2配列:
c)配列番号:268〜271、541、及び549、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−2位において、Iが、Lに変更されており、
−4位において、Mが、S、Q、A、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、SもしくはTに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、Tに変更されている、
及び/又は
iii)CDR3配列:
e)配列番号:393〜398、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−3位において、Eが、TもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、Eに変更されており、
−5位において、Fが、Aに変更されており、及び/又は
−8位において、Yが、Hに変更されている、
からなる群より選択される、少なくとも1つのアミノ酸残基のストレッチを含むことができる。
i)CDR1配列:
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
及び/又は、
ii)CDR2配列:
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
及び/又は
iii)CDR3配列:
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、少なくとも1つのアミノ酸残基のストレッチを含むことができる。
i)CDR1配列:
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、R、A、V、S、もしくはKに変更されており、
−3位において、Tが、Nに変更されており、
−4位において、Fが、Lに変更されており、
−6位において、Nが、Sに変更されており、
−7位において、Fが、Yに変更されており、
−8位において、Gが、Aに変更されており、及び/又は
−9位において、Mが、Vに変更されている、
及び/又は
ii)CDR2配列:
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Aが、Tに変更されており、
−2位において、Iが、Vに変更されており、
−5位において、Tが、SもしくはAに変更されており、
−6位において、Gが、NもしくはAに変更されており、
−7位において、Gが、SもしくはRに変更されており、
−8位において、Hが、RもしくはYに変更されており、
−9位において、Tが、IもしくはKに変更されており、及び/又は
−10位において、Yが、Fに変更されている、
及び/又は
iii)CDR3配列:
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−4位において、Fが、YもしくはSに変更されており、
−5位において、Gが、Dに変更されており、
−6位において、Dが、Gに変更されており、
−7位において、Gが、Dに変更されており、
−8位において、Tが、Aに変更されており、
−9位において、Yが、Sに変更されており、
−10位において、Yが、Fに変更されており、
−12位において、Qが、Eに変更されており、
−14位において、Aが、N、T、I、もしくはRに変更されており、
−17位において、Dが、NもしくはGに変更されており、及び/又は
−18位において、Fが、Lに変更されている、
からなる群より選択される、少なくとも1つのアミノ酸残基のストレッチを含むことができる。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、LもしくはRに変更されており、
−2位において、Lが、F、P、もしくはIに変更されており、
−3位において、Lが、PもしくはFに変更されており、
−4位において、Fが、S、LもしくはIに変更されており、
−5位において、Sが、IもしくはRに変更されており、
−6位において、Rが、C、A、P、V、もしくはLに変更されており、
−7位において、Nが、H、P、I、M、Y、T、もしくはDに変更されており、
−8位において、Sが、T、R、もしくはIに変更されており、
−9位において、Aが、VもしくはTに変更されており、及び/又は
−10位において、Gが、S、R、もしくはVに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Rが、GもしくはCに変更されており、
−2位において、Iが、V、T、S、もしくはLに変更されており、
−3位において、Rが、GもしくはLに変更されており、
−4位において、Mが、S、R、A、E、F、G、H、K、L、P、Q、V、W、Y、I、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、V、S、もしくはTに変更されており、
−7位において、Sが、G、C、D、もしくはEに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、T、M、もしくはRに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Wが、Gに変更されており、
−3位において、Eが、T、K、G、AもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、EもしくはDに変更されており、
−5位において、Fが、A、L、V、Y、T、もしくはSに変更されており、
−6位において、Yが、FもしくはDに変更されており、
−7位において、Eが、GもしくはKに変更されており、
−8位において、Yが、SもしくはHに変更されており、及び/又は
−9位において、Wが、S、G、もしくはCに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、LもしくはRに変更されており、
−2位において、Lが、F、P、もしくはIに変更されており、
−3位において、Lが、PもしくはFに変更されており、
−4位において、Fが、S、LもしくはIに変更されており、
−5位において、Sが、IもしくはRに変更されており、
−6位において、Rが、C、A、P、V、もしくはLに変更されており、
−7位において、Nが、H、P、I、M、Y、T、もしくはDに変更されており、
−8位において、Sが、T、R、もしくはIに変更されており、
−9位において、Aが、VもしくはTに変更されており、及び/又は
−10位において、Gが、S、R、もしくはVに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Rが、GもしくはCに変更されており、
−2位において、Iが、V、T、S、もしくはLに変更されており、
−3位において、Rが、GもしくはLに変更されており、
−4位において、Mが、S、R、A、E、F、G、H、K、L、P、Q、V、W、Y、I、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、V、S、もしくはTに変更されており、
−7位において、Sが、G、C、D、もしくはEに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、T、M、もしくはRに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Wが、Gに変更されており、
−3位において、Eが、T、K、G、AもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、EもしくはDに変更されており、
−5位において、Fが、A、L、V、Y、T、もしくはSに変更されており、
−6位において、Yが、FもしくはDに変更されており、
−7位において、Eが、GもしくはKに変更されており、
−8位において、Yが、SもしくはHに変更されており、及び/又は
−9位において、Wが、S、G、もしくはCに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜185、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、2もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−6位において、Rが、AもしくはVに変更されており、及び/又は
−9位において、Aが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜271、541、及び549、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−2位において、Iが、Lに変更されており、
−4位において、Mが、S、Q、A、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、SもしくはTに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、Tに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜398、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−3位において、Eが、TもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、Eに変更されており、
−5位において、Fが、Aに変更されており、及び/又は
−8位において、Yが、Hに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜185、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、2もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−6位において、Rが、AもしくはVに変更されており、及び/又は
−9位において、Aが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜271、541、及び549、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−2位において、Iが、Lに変更されており、
−4位において、Mが、S、Q、A、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、SもしくはTに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、Tに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜398、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−3位において、Eが、TもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、Eに変更されており、
−5位において、Fが、Aに変更されており、及び/又は
−8位において、Yが、Hに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は、
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、R、A、V、S、もしくはKに変更されており、
−3位において、Tが、Nに変更されており、
−4位において、Fが、Lに変更されており、
−6位において、Nが、Sに変更されており、
−7位において、Fが、Yに変更されており、
−8位において、Gが、Aに変更されており、及び/又は
−9位において、Mが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Aが、Tに変更されており、
−2位において、Iが、Vに変更されており、
−5位において、Tが、SもしくはAに変更されており、
−6位において、Gが、NもしくはAに変更されており、
−7位において、Gが、SもしくはRに変更されており、
−8位において、Hが、RもしくはYに変更されており、
−9位において、Tが、IもしくはKに変更されており、及び/又は
−10位において、Yが、Fに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−4位において、Fが、YもしくはSに変更されており、
−5位において、Gが、Dに変更されており、
−6位において、Dが、Gに変更されており、
−7位において、Gが、Dに変更されており、
−8位において、Tが、Aに変更されており、
−9位において、Yが、Sに変更されており、
−10位において、Yが、Fに変更されており、
−12位において、Qが、Eに変更されており、
−14位において、Aが、N、T、I、もしくはRに変更されており、
−17位において、Dが、NもしくはGに変更されており、及び/又は
−18位において、Fが、Lに変更されている、
からなる群より選択される。
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、R、A、V、S、もしくはKに変更されており、
−3位において、Tが、Nに変更されており、
−4位において、Fが、Lに変更されており、
−6位において、Nが、Sに変更されており、
−7位において、Fが、Yに変更されており、
−8位において、Gが、Aに変更されており、及び/又は
−9位において、Mが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Aが、Tに変更されており、
−2位において、Iが、Vに変更されており、
−5位において、Tが、SもしくはAに変更されており、
−6位において、Gが、NもしくはAに変更されており、
−7位において、Gが、SもしくはRに変更されており、
−8位において、Hが、RもしくはYに変更されており、
−9位において、Tが、IもしくはKに変更されており、及び/又は
−10位において、Yが、Fに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−4位において、Fが、YもしくはSに変更されており、
−5位において、Gが、Dに変更されており、
−6位において、Dが、Gに変更されており、
−7位において、Gが、Dに変更されており、
−8位において、Tが、Aに変更されており、
−9位において、Yが、Sに変更されており、
−10位において、Yが、Fに変更されており、
−12位において、Qが、Eに変更されており、
−14位において、Aが、N、T、I、もしくはRに変更されており、
−17位において、Dが、NもしくはGに変更されており、及び/又は
−18位において、Fが、Lに変更されている、
からなる群より選択される。
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:269であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:269であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:395であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:396であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:270であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:183であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:184であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:185であり、CDR2が配列番号:271であり、CDR3が配列番号:398であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:541であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:541であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:549であり、CDR3が配列番号:394であり;及び
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:549であり、CDR3が配列番号:397である、
アミノ酸配列からなる群より選択される。
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:290であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:292であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:293であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:294であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:216であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:419であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:297であり、CDR3が配列番号:420であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:421であり;
−CDR1が配列番号:217であり、CDR2が配列番号:299であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:423であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:301であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:424であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:302であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:425であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:426であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:219であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:427であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:304であり、CDR3が配列番号:428であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:421であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:429であり;
−CDR1が配列番号:221であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:222であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:430であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:306であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:223であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:431であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:432であり;
−CDR1が配列番号:224であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:307であり、CDR3が配列番号:433であり;
−CDR1が配列番号:225であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:226であり、CDR2が配列番号:308であり、CDR3が配列番号:434であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:301であり、CDR3が配列番号:426であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:217であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:435であり;及び
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:309であり、CDR3が配列番号:418である、アミノ酸配列からなる群より選択される。
i)配列番号:1〜123又は495(表A−1を参照のこと)のアミノ酸配列の内の少なくとも1つに対して、少なくとも80%のアミノ酸同一性を有し、ここで、アミノ酸同一性の度合いを決定する目的で、CDR配列を形成するアミノ酸残基は無視される。これに関して、表A−2も参照される。同表には、配列番号:1〜123又は495(表A−1を参照のこと)の免疫グロブリンシングル可変ドメインの、フレームワーク1配列(配列番号:124〜180)、フレームワーク2配列(配列番号:227〜267)、フレームワーク3配列(配列番号:310〜392)、及びフレームワーク4配列(配列番号:436〜450)が列記されている。又は
ii)表A−2で示されたフレームワーク配列の組み合わせ、
及びここで、
iii)好ましくは、Kabatナンバリングに従った11、37、44、45、47、83、84、103、104、及び108位における1つ以上のアミノ酸残基は、国際公開公報第08/020079号の表A−3〜表A−8で言及されたホールマーク残基から選択される。
i)配列番号:1〜123もしくは495の免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の1つの配列最適化変異体であり、及び/又は
ii)配列番号:1〜123もしくは495の免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つ、及び/又は、配列番号:498〜513もしくは523〜540(表A−9を参照のこと)の免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つに対して、少なくとも80%のアミノ酸同一性を有し[ここで、アミノ酸同一性の度合いを決定する目的で、CDR配列を形成するアミノ酸残基は無視される。これに関して、表A−2も参照される。同表には、配列番号:1〜123、495、498〜513、又は523〜540(表A−1及び表A−9を参照のこと)の免疫グロブリンシングル可変ドメインの、フレームワーク1配列(配列番号:124〜180ならびに配列番号:556及び559)、フレームワーク2配列(配列番号:227〜267)、フレームワーク3配列(配列番号:310〜392及び配列番号:557〜558)、及びフレームワーク4配列(配列番号:436〜450)が列記されている]、及び/又は
iii)表A−2で示されたフレームワーク配列の組み合わせを有する。
及びここで、
iv)好ましくは、Kabatナンバリングに従った11、37、44、45、47、83、84、103、104、及び108位における1つ以上のアミノ酸残基は、国際公開公報第08/020079号の表A−3〜表A−8で言及されたホールマーク残基から選択されるナノボディである。
−11位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、L、V、又はKから選択され(最も好ましくは、Vであり)、及び
−14位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、A又はPから適切に選択され、及び
−41位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、A又はPから適切に選択され、及び
−89位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、T、V、又はLから適切に選択され、及び
−108位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Q又はLから適切に選択され、及び
−110位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、T、K、又はQから適切に選択され、及び
−112位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、S、K又はQから適切に選択される。
さらに、本発明は、Kv1.3、好ましくはヒトKv1.3に対する少なくとも1つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン(又はその適切なフラグメント)と、1つの更なる免疫グロブリンシングル可変ドメインとを含むか、又は、これらから(本質的に)なる、多価ポリペプチド(本明細書において、「本発明の多価ポリペプチド」とも呼ばれる)に関する。
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、ならびに、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、ならびに、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、ならびに、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、ならびに、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:65〜123[ファミリー1]を有する免疫グロブリンシングル可変ドメインの内の少なくとも1つにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされ、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]により結合されるのと同じエピトープに結合し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]により結合されるのと同じエピトープに結合し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]により結合されるのと同じエピトープに結合し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]により結合されるのと同じエピトープに結合し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]により結合されるのと同じエピトープに結合し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540[ファミリー12]により結合されるのと同じエピトープに結合し、又は
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]により結合されるのと同じエピトープに結合し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123[ファミリー1]により結合されるのと同じエピトープに結合する。
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー12に属し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー1に属し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー1に属し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー12に属し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー1に属し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー1に属し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー12に属し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、ファミリー12に属し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、又は
−第1の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有し、第2の免疫グロブリンシングル可変ドメインは、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有する。
本発明の一価ポリペプチド及び本発明の多価ポリペプチドは、1つ以上の他の基、残基、部分、又は結合ユニットを更に含んでもよいし、又は、含まなくてもよい(これらの一価ポリペプチド及び多価ポリペプチドは全て(更なる基、残基、部分、又は結合ユニットの有無を問わず)、「本発明の化合物」、「本発明の構築物」、及び/又は「本発明のポリペプチド」と呼ばれる)。存在する場合、このような更なる基、残基、部分、又は結合ユニットは、更なる機能性を免疫グロブリンシングル可変ドメイン(及び/又は、免疫グロブリンシングル可変ドメインが存在しているポリペプチド)に提供してもよいし、又は、提供しなくてもよいし、免疫グロブリンシングル可変ドメインの特性を修飾してもよいし、又は、修飾しなくてもよい。
a)例えば、異種ホスト細胞又はホスト生物中での発現の結果として、N末端メチオニン残基を含むことができる。
b)(例えば、本発明のポリペプチドを発現させるのに使用されるホスト細胞に応じて、本発明のポリペプチドのプレフォーム、プロフォーム、又はプレプロフォームを提供するために)合成中にホスト細胞からポリペプチドを分泌させるシグナル配列又はリーダー配列を形成することができる。適切な分泌リーダーペプチドは、当業者に明らかであろうし、本明細書で更に記載された通りであることができる。通常、このようなリーダー配列は、ポリペプチドのN末端に連結しているであろう。ただし、本発明は、その最も広い意味において、これに限定されない。
c)例えば、前記配列又は残基に対する親和性技術を使用して、ポリペプチドの精製を可能にし、又は、容易にする「タグ」、例えば、アミノ酸配列又は残基を形成することができる。その後、前記配列又は残基は、ポリペプチドを提供するために(例えば、化学的又は酵素的開裂により)除去することができる(この目的で、このタグは、場合により、アミノ酸配列又はポリペプチド配列に、開裂性リンカー配列を介して連結していることができ、又は、開裂性モチーフを含有していることができる)。このような残基の一部の好ましく、非限定的な例は、複数のヒスチジン残基、グルタチオン残基、及びmyc−タグ、例えば、AAAEQKLISEEDLNGAA(配列番号:206)である。
d)官能化されている、及び/又は、官能基の付着のための部位として機能することができる1つ以上のアミノ酸残基であることができる。適切なアミノ酸残基及び官能基は、当業者に明らかであろうし、本発明のポリペプチドの誘導体について本明細書で言及されたアミノ酸残基及び官能基を含むが、これらに限定されない。
−適切なホスト細胞又はホスト生物(本明細書において、「本発明のホスト」とも呼ばれる)中、又は、別の適切な発現系における、前記本発明のポリペプチドをコードする核酸(本明細書において、「本発明の核酸」とも呼ばれる)の発現工程と、場合により続けて、
−このようにして得られた本発明のポリペプチドを単離し、及び/又は、精製する工程とを含むことができる。
−本発明のホストを、前記本発明のホストが少なくとも1つの本発明のポリペプチドを発現し、及び/又は、生成するような条件下において、培養し、及び/又は、維持する工程と、場合により続けて、
−このようにして得られた本発明のポリペプチドを単離し、及び/又は、精製する工程とを含むことができる。
a)少なくとも1つの本発明の核酸(この核酸は下記に操作可能に連結している)
b)1つ以上のレギュラトリーエレメント、
例えば、プロモーター、及び場合により、適切なターミネーター、及びまた場合により、
c)それ自体公知の遺伝子構築物の1つ以上の更なるエレメントを含む。ここで、「レギュラトリーエレメント」、「プロモーター」、「ターミネーター」、及び「操作可能に連結している」という用語は、(本明細書で更に記載された)当技術分野におけるその通常の意味を有する。ここで、遺伝子構築物に存在する前記「更なるエレメント」は、例えば、3’−又は5’−UTR配列、リーダー配列、選択マーカー、発現マーカー/レポーター遺伝子、及び/又は、トランスフォーメーションもしくは組み込みを容易にし、又は、これら(の効率)を向上させることができるエレメントであることができる。このような遺伝子構築物のためのこれら及び他の適切なエレメントは、当業者に明らかであろうし、例えば、使用される構築物の種類、意図したホスト細胞又はホスト生物、対象となる本発明のヌクレオチド配列を(例えば、構成的、一時的、又は誘導性発現により)発現させる方法、及び/又は、使用されるトランスフォーメーション技術により決めることができる。例えば、抗体及び抗体フラグメント((シングル)ドメイン抗体及びScFvフラグメントを含むが、これらに限定されない)の発現及び生成のためのそれ自体公知のレギュラトリー配列、プロモーター、及びターミネーターは、本質的に類似する方法において使用することができる。
−細菌株(グラム陰性株、例えば、Escherichia coli株;Proteus株、例えば、Proteus mirabilis株;Pseudomonas株、例えば、Pseudomonas fluorescens株;ならびに、グラム陽性株、例えば、Bacillus株、例えば、Bacillus subtilis株もしくはBacillus brevis株、Streptomyces株、例えば、Streptomyces lividans株;Staphylococcus株、例えば、Staphylococcus carnosus株;及びLactococcus株、例えば、Lactococcus lactis株を含むが、これらに限定されない);
−真菌細胞(Trichoderma種、例えば、Trichoderma reesei;Neurospora種、例えば、Neurospora crassa;Sordaria種、例えば、Sordaria macrospora;Aspergillus種、例えば、Aspergillus nigerもしくはAspergillus sojae;又は、他の糸状菌、からの細胞を含むが、これらに限定されない);
−酵母細胞(Saccharomyces種、例えば、Saccharomyces cerevisiae種;Schizosaccharomyces種、例えば、Schizosaccharomyces pombe種;Pichia種、例えば、Pichia pastoris種もしくはPichia methanolica種;Hansenula種、例えば、Hansenula polymorpha種;Kluyveromyces種、例えば、Kluyveromyces lactis種;Arxula種、例えば、Arxula adeninivorans種;Yarrowia種、例えば、Yarrowia lipolytica種、からの細胞を含むが、これらに限定されない);
−両生類細胞又は細胞株、例えば、Xenopus oocytes;
昆虫由来細胞又は細胞株、例えば、lepidopteraから得られた細胞/細胞株(Spodoptera SF9及びSf21細胞又はDrosophilaから得られた細胞/細胞株、例えば、Schneider及びKc細胞を含むが、これらに限定さない);
−植物又は植物細胞、例えば、tobacco植物;ならびに/又は
−哺乳類細胞又は細胞株、例えば、ヒトから得られた細胞又は細胞株、哺乳類からの細胞又は細胞株(CHO細胞(例えば、CHO−K1細胞)、BHK細胞、及びヒト細胞又は細胞株、例えば、HeLa、COS、Caki、及びHEK293H細胞を含むが、これらに限定されない);
ならびに、抗体及び抗体フラグメント((シングル)ドメイン抗体及びScFvフラグメントを含むが、これらに限定されない)の発現及び生成についてそれ自体公知の他のホスト細胞又は(非ヒト)ホストを含むことができる。これらは、当業者に明らかであろう。また、上記で引用された一般的な背景技術ならびに、例えば、国際公開公報第94/29457号、同第96/34103号、同第99/42077号、Frenken et al.(Res Immunol. 149: 589-99, 1998)、前記Riechmann and Muyldermans(1999)、van der Linden(J. Biotechnol. 80: 261-70, 2000)、Joosten et al.(Microb. Cell Fact. 2: 1, 2003)、Joosten et al.(Appl. Microbiol. Biotechnol. 66: 384-92, 2005)、ならびに本明細書で引用された更なる参考文献も参照される。
−E. coli中での発現について、lacプロモーター(及びその誘導体、例えば、lacUV5プロモーター)、アラビノースプロモーター、ファージラムダの左側(PL)及び右側(PR)プロモーター、trpオペロンのプロモーター、ハイブリッドlac/trpプロモーター(tac及びtrc)、T7プロモーター(より具体的には、T7ファージ遺伝子10のプロモーター)、及び他のTファージプロモーター、Tn10テトラサイクリン抵抗性遺伝子のプロモーター、外因性レギュラトリーオペレーター配列の1つ以上のコピーを含む上記プロモーターの操作変異;
−S. cerevisiae中での発現について、構成的:ADH1(アルコールデヒドロゲナーゼ1)、ENO(エノラーゼ)、CYC1(シトクロームc イソ−1)、GAPDH(グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ)、PGK1(ホスホグリセラートキナーゼ)、PYK1(ピルビン酸キナーゼ);レギュレーション的:GAL1,10,7(ガラクトース代謝酵素)、ADH2(アルコールデヒドロゲナーゼ2)、PHO5(酸ホスファターゼ)、CUP1(銅メタロチオネイン);異種性:CaMV(カリフラワーモザイクウイルス35Sプロモーター);
−Pichia pastoris中での発現について、AOX1プロモーター(アルコールオキシダーゼI);
哺乳類細胞中での発現について、ヒトサイトメガロウイルス(hCMV)最初期エンハンサー/プロモーター、プロモーターをTetリプレッサーによりレギュレーションすることができるような2つのテトラサイクリンオペレーター配列を含有するヒトサイトメガロウイルス(hCMV)最初期プロモーター変異、ヘルペス単純ウイルスチミジンキナーゼ(TK)プロモーター、ラウス肉腫ウイルスロングターミナルリピート(RSV LTR)エンハンサー/プロモーター、ヒト、チンパンジー、マウス、もしくはラットからの伸長因子1α(hEF−1α)プロモーター、SV40初期プロモーター、HIV−1ロングターミナルリピートプロモーター、β−アクチンプロモーター;
を含む。
−哺乳類細胞中での発現用ベクター:pMAMneo(Clontech)、pcDNA3(Invitrogen)、pMC1neo(Stratagene)、pSG5(Stratagene)、EBO-pSV2-neo(ATCC 37593)、pBPV-1(8-2)(ATCC 37110)、pdBPV-MMTneo(342-12)(ATCC 37224)、pRSVgpt(ATCC37199)、pRSVneo(ATCC37198)、pSV2-dhfr(ATCC 37146)、pUCTag(ATCC 37460)、及び1ZD35(ATCC 37565)、ならびにウイルス系発現系、例えば、アデノウイルスに基づくもの;
−細菌細胞中での発現用ベクター:pETベクター(Novagen)及びpQEベクター(Qiagen);
−酵母又は他の真菌細胞中での発現用ベクター:pYES2(Invitrogen)及びPichia発現ベクター(Invitrogen);
−昆虫細胞中での発現用ベクター:pBlueBacII(Invitrogen)又は他のバキュロウイルスベクター;
−植物又は植物細胞中での発現用ベクター:例えば、カリフラワーモザイクウイルス又はタバコモザイクウイルスに基づくベクター、Agrobacteriumの適切な株、又はTiプラスミド系ベクター
を含む。
−細菌細胞、例えば、E. coli中での使用について、PelB、Bla、OmpA、OmpC、OmpF、OmpT、StII、PhoA、PhoE、MalE、Lpp、LamB等;TATシグナルペプチド、ヘモキシリンC末端分泌シグナル;
−酵母中での使用について、α−接合因子プレプロ配列、ホスファターゼ(pho1)、インベルターゼ(Suc)等;
−哺乳類細胞中での使用について、ターゲットタンパク質が真核生物起源のものである場合は本来のシグナル、マウスIg κ鎖 V−J2−Cシグナルペプチド;等を含む。
一般的には、薬学的使用のために、本発明の免疫グロブリン、ポリペプチド、化合物、及び/又は構築物は、少なくとも1つの本発明の免疫グロブリン、ポリペプチド、化合物、及び/又は構築物と、少なくとも1つの薬学的に許容し得る担体、希釈剤、もしくは賦形剤及び/又は補助剤と、場合により、1つ以上の更なる薬学活性ポリペプチド及び/又は化合物とを含む、医薬調製物又は組成物として配合することができる。非限定的な例により、このような製剤は、経口投与、非経口投与(例えば、静脈内、筋肉内、もしくは皮下注射、又は静脈内注入による)、局所投与、吸入による投与、皮膚パッチによる、インプラントによる、坐剤による投与等に適した形態にあることができる。ここで、非経口投与が好ましい。このように適切な剤形−同剤形は、投与方法に応じて固体、半固体、又は液体であることができる。そして、それらの調製に使用するための方法及び担体は、当業者に明らかであろうし、本明細書で更に記載されている。このような医薬調製物又は組成物は、一般的には本明細書において、「医薬組成物」と呼ばれるであろう。非ヒト生物に使用するための医薬調製物又は組成物は、一般的には本明細書において、「獣医学的組成物」と呼ばれるであろう。
さらに、本発明は、本明細書で記載された免疫グロブリン、ポリペプチド、化合物、及び/又は構築物、核酸、ホスト細胞、ならびに組成物の用途及び使用、ならびに、Kv1.3関連疾患、障害、又は症状の予防及び/又は治療のための方法に関する。一部の好ましく、非限定的な用途及び使用は、本明細書における更なる記載から、明らかとなるであろう。
1.1 免疫化
倫理委員会(University Antwerp, Belgium)の承認後、3匹のラマ(llama glama)を、pVAX1−ヒトKv1.3プラスミドベクター(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)(2×150μg/投与)で、2週間毎の間隔での5/8両側性皮内in vivoエレクトロポレーションによる標準的なプロトコールに従って免疫化した。6回目(1匹のラマについては5回目)の注射後に、ヒトKv1.3を過剰発現しているHEK293H細胞(DSMZ, ACC 635)又はCaki細胞(Nguyen et al., Adv Immunol 79: 261-296, 2001)(2E07個/投与)の皮下注射を、ラマに1回受けさせた。細胞を、D−PBSに再懸濁させ、注射前に氷上に維持した。1匹の動物には、細胞ブースト後に、ヒトKv1.3発現VLP(Molecular Integral, INT-793A)も受けさせた。
各サブセットの最後の注射後に、重鎖抗体を生成するB細胞ソースとしての免疫組織を、免疫化させたラマから収集した。各サブセットの最後の注射後数日で収集した血液サンプルを、動物毎に収集した。血液サンプルから、末梢血リンパ球(PBL)を、Ficoll-Hypaqueを使用し、製造メーカーの説明書(Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA)に従って調製した。PBL及びリンパ節生検(LN)から、トータルRNAを抽出した。同トータルRNAを、RT−PCRのための開始材料として使用して、VHHコードDNAセグメントを増幅させた。各免疫化させたラマについて、ライブラリを、特定のサブセットの免疫化スケジュールから、すなわち、1種類の免疫化抗原後に得られたサンプルから単離したトータルRNAをプールすることにより構築した。
全てのラマから所得し、ファージライブラリとしてクローニングしたVHHレパートリーを、選択条件の多様性を加える種々の選択戦略に使用した。変数には、i)(種々の細胞バックグラウンド又はリポソーム/VLP上での)Kv1.3の提示形式、ii)抗原提示法(細胞を使用する場合は溶液中、又は、VLPを使用する場合は、プレート上にコーティング)、iii)抗原濃度、iv)使用したオルソログ(ヒト又はカニクイザル)、及びv)選択ラウンド回数が含まれる。全ての固体コート相選択を、Maxsorp96ウェルプレート(Nunc, Wiesbaden, Germany)において行った。
3.1 フローサイトメトリーアッセイ法におけるKv1.3結合ナノボディについてのスクリーニング
ペリプラズム抽出物を、自社製Kv1.3発現CHO−K1及び/又はHEK293H細胞において使用する、FACSアッセイ法における細胞発現Kv1.3結合についてスクリーニングした。2×105個 細胞を、1:5希釈したペリプラズム抽出物中において、4℃で30分間インキュベーションし、ついで、徹底的に洗浄した。次に、細胞を、1μg/mL モノクローナルANT-FLAG(登録商標)M2抗体(Sigma-Aldrich, cat# F1804)と共に、4℃で30分間インキュベーションし、再度洗浄し、ヤギ抗マウスPEラベル抗体(1:1000)と共に、4℃で30分間インキュベーションした。サンプルを洗浄し、5nM TOPRO3(Molecular Probes cat# T3605)を加えたFACSバッファー(GibcoからのD−PBS、Sigmaからの10% FBS及びMerckからの0.05% アジ化ナトリウムを含む)中に再懸濁させた。ついで、細胞懸濁液を、FACSアレイにおいて分析した。ゲーティングを、生きたインタクトな細胞に、前方/側方散乱及びTOPRO3チャネル蛍光パラメータを使用して設定した。ナノボディに結合する無関係な特異性を含む対照実験について得られた値より高い生きた細胞のPEチャネルは、クローンが細胞株に結合したことを示唆した。加えて、親細胞株に結合しないことを確認した。
ペリプラズム抽出物を、Kv1.3発現HEK293細胞を使用するIonFlux(商標)自動パッチクランプでの電位作動型カリウムチャネルKv1.3における阻害性効果について、電気生理学的にスクリーニングした。電気生理学的な記録による、ヒトKv1.3におけるペリプラズム抽出物のモデュレーション効果を評価するための完全な手順を、以下に提供する。
IonFlux(商標)(Molecular Devices)は、Well Plate Microfluidic(商標)技術、温度制御及び連続的なかん流及び電圧クランプと一体化された自動パッチクランプシステムである。IonFlux(商標)16は、16個の並列の増幅器を有し、Society for Biomolecular Sciencesに準拠した96ウェルのIonFluxプレートを使用する。このシステムにより、集団及び単独細胞のパッチクランプが可能となる。
細胞外溶液は、(mMで):132 NaCl、5.4 KCl、1.8 CaCl2、0.8 MgCl2、10 HEPES、5 グルコース(NaOHによりpH7.2及び285〜290mOsmolar)を含有した。細胞内溶液は、(mMで):40 KF、100 KCl、2 MgCl2、10 HEPES、5 EGTA(CsOHによりpH7.45及び300〜315mOsmolar)を含有した。これらの溶液を、新鮮に調製し、4℃で1か月以内の間ストックし、使用前にろ過した。ペリプラズム抽出物を、細胞外溶液中で1:5希釈し、V底ディープウェル正方形ウェルプレート(Westburg, #AB0932)に移した。
ヒトKv1.3チャネルを安定的に発現しているHEK293H細胞を、自社で生成した。細胞を、T−175細胞培養フラスコ(Greinerbio-one, #660160)中で、10% FBS(Sigma-Aldrich, #F7524)、1% ペニシリン+ストレプトマイシン(GIBCO, #15140-122)、1mg/mL G418(GIBCO, #10131-027)を含有する標準的な培養培地であるDMEM Glutamax(商標)(GIBCO, #31966)を使用して培養した。IonFlux(商標)16(Fluxion, Molecular Devices)に使用する前に、細胞を、25,000個/cm2又は12,000個/cm2の密度で、それぞれ2又は3日間播種した。収集前の最適な細胞コンフルエントを、80%を超えないようにした。細胞を、Ca2+及びMg2+を含まないd−PBS(Invitrogen, #14190)で2回洗浄し、トリプシン/EDTA0.25%(Invitrogen, Cat 25200-056) 3mL、37℃で5〜10分間により剥がした。10% FBSを含有するDMEM Glutamax(商標)を、トリプシンよりトリガーされた酵素反応を不活性化させるのに加えた。その後、細胞ペレットを、d−PBS+10% FBS 20mL中に再懸濁させ、200×gで、50mLのconical CELLSTAR(登録商標)チューブ(Greinerbio-one, #227-261)において、RTで10分間遠心分離した。細胞をカウントし(Casy TT, Roche)、100万個/mLで懸濁させ、新たな50mLのconical CELLSTAR(登録商標)チューブに移し、RTで約20分間穏やかに振とうした。100万個の細胞を、200×gで2分間遠心分離した。ペレットを、細胞外バッファー 5mL中に穏やかに再懸濁させ、200×gにおいて2回目、2分間遠心分離した。最後に、ペレットを、細胞外バッファー 2000μL中に再懸濁させ、IonFlux(商標)において直ちに試験した。
無菌の細胞培養グレード水 250μLを、IonFlux96ウェルプレートの出口ウェルを除く全てのウェルに、8チャネルマルチピペットを使用して分注した。プレートを洗浄する前に、プレートのリムに存在する過剰の水を拭き取った。指定したプレートを、IonFluxシステム内に挿入し、その後、標準的な水洗プロトコールに従って、4回洗浄した。洗浄後、プレートを空にした。ついで、入口ウェルに、細胞外バッファーを手作業で充填し、トラップウェルを細胞内バッファーで充填し、希釈したナノボディ又は選択的ペプチドを、化合物ウェルに配置した(250μL/ウェル)。その後、このプレートを、実際の実験前に、プレート特異的プロトコールに従ってプライミングした。集団プレート(Molecular Devices, #910-0098)について、1)トラップ及び化合物、5psiでt=0〜160秒、及び、2psiでt=160〜175秒、2)トラップ、化合物なし、2psiでt=175〜180秒、ならびに3)メインチャネル、1psiでt=0〜160秒及び0.3psiでt=162〜180秒。単独細胞プレート(Molecular Devices, # 910-0100)について、1)トラップ、化合物なし、11psiでt=0〜350秒及び1.5psiでt=625〜630秒、2)トラップ及び化合物、5psiでt=350〜600秒及び1.5psiでt=600〜625秒、ならびに3)メインチャネル、0.5psiでt=0〜350秒及び1psiでt=350〜600秒及び0.3psiでt=600〜627秒。プライミング後、出口及び入口ウェルを空にし、調製した細胞懸濁液 250μL(すなわち、約100万個の細胞)を、指定したプレートの入口ウェル内に配置した。細胞の導入後、プレートを再度プライミングした。1)トラップ及び化合物、5psiでt=0〜20秒及び2psiでt=25〜50秒、2)トラップ、化合物なし、2psiでt=50〜55秒、ならびに3)メインチャネル、1psiでt=0〜30秒及び0.4psiでt=30〜55秒。ついで、細胞を、メインチャネルに導入し、側面のトラップ部位において、トラッププロトコールによりトラップした。1)トラップ真空 8mmHg、t=0〜76秒、2)メインチャネル圧 0.2psi、t=0〜2秒、続けて、13回繰り返しの方形パルス 0〜0.2psi、ベースライン期間 4.5秒、及びパルス期間 0.8秒、続けて、0.2psiで2秒間。細胞全体のアクセスを、下記破壊プロトコールを使用して、孔の上方で膜のパッチを破壊することにより達成した。1)破壊真空 8mmHg、t=0〜15秒、続けて、パルス方形パルス 8〜16mmHg、パルス期間 10秒、及び続けて、5mmHgで10秒間、ならびに2)メインチャネル圧 0.15psi、t=0〜35秒。細胞全体を配置した後、実験の終了まで、真空圧を、5mmHgで維持し、メインチャネル圧を、0.1psiで維持した。まず、細胞を、240秒間透析し、その後、化合物を試験した。タイムコースプロトコールを、脱分極パルスプロトコールにより引き出されたカリウム電流における化合物の効果を評価するのに適用した。オフライン線形リークサブトラクションを行うのを可能にするために、細胞を、−80mVで10m秒間クランプし、ついで、−100mVに50m秒間過分極させ、−80mVに30m秒間再分極させた。その後、カリウム電流を、(図2Aで示されたように)30秒間隔での−80mVから+40mVへの250m秒間の脱分極工程により喚起した。安定化期間後に、細胞外バッファーを、ネガティブ対照として、連続的に120秒間かん流し、続けて、ペリプラズム抽出物、種々の濃度のナノボディ、又は選択的ペプチドを連続的にかん流した。複数の細胞添加間の間隔を、120秒とした。阻害性応答を、室温(21℃〜24℃)において、各化合物について最低n=2で記録した。
データ点を、以下の場合に許容した。
A)自動集団パッチ
1)個々の膜抵抗量及び安定性を、データ取得中に50MΩ超とした。
2)電流振幅量及び安定性を、ネガティブ対照後に+40mVで5nA超とした。
3)データ取得中に、上昇/降下 10%未満
4)予想範囲内の標準的なIC50値
B)自動単独細胞パッチ
1)個々の膜抵抗量及び安定性を、データ取得中に500MΩ超とした。
2)電流振幅量及び安定性を、ネガティブ対照後に+40mVで200pA超とした。
3)データ取得中に、上昇/降下 10%未満
4)予想範囲内の標準的なIC50値
ペリプラズム抽出物を、発現させたナノボディのブロック能を評価するために、放射性リガンド125I−マルガトキシン競合アッセイ法においてスクリーニングした。カニクイザルKv1.3を、Kv1.3を過剰発現しているCHO細胞上で提示させた。
フローサイトメトリースクリーニング、電気生理学アッセイ法、又は125I−マルガトキシン競合アッセイ法において正にスコアされたナノボディをスクリーニングした。対応するアミノ酸配列を、表A−1に示す。クローンを、その配列全体に基づいて、配列ファミリーにクラスターした。Kv1.3バインダーの2種類のB細胞系統に属する2つの区別できるファミリー(ファミリー1及び12)を特定した。対応するアライメントをそれぞれ、表A−4及び表A−5に提供する。
前記実施例3で記載されたスクリーニングから選択された結合/阻害性抗Kv1.3ナノボディを、更に精製し、特徴決定した。選択したナノボディを、3重のFlag、His6タグ付きタンパク質として、E. coli TG1中で発現させた。発現を、1mM IPTGの添加により誘導し、37℃で4時間継続させた。細胞培養物のスピン後、ペリプラズム抽出物を、ペレットを凍結解凍することにより調製した。これらの抽出物を、開始材料として使用した。ナノボディを、IMAC及びサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)により精製して、SDS−PAGEで評価した場合、純度95%であった。
ファミリー1及び12の2つの例示的な一価ナノボディのCHO細胞上に発現させたヒト、カニクイザル、及びラットKv1.3への結合を、FACSにおいて、実施例3.1で概説されたように評価した。1μMから開始して10pMまで低下させる抗Kv1.3ナノボディの希釈系列を、細胞にアプライした。対照として、親CHO細胞株を含ませた(図3A〜Fを参照のこと)。両ナノボディは、ヒト、カニクイザル、及びラットKv1.3に明確に結合したが、後者に対してわずかに低い活性で結合した。用量応答曲線から得られたEC50値を、表B−1に示す。
ナノボディによる放射性ラベルマルガトキシンに対するブロック能を、ヒト125I−MgTX競合アッセイ法において、ここでは、精製したナノボディ/トキシンの希釈系列をアプライした点以外は、実施例3.3で概説されたように評価した(図4A〜C)。MgTXのヒトKv1.3への相互作用のブロックにおける、ナノボディ/トキシン(ShK,Smartox, #08SHK001)についてのIC50値を、表B−2に示す。
IonFlux(商標)
選択したナノボディを、Kv1.3発現HEK293H細胞を使用するIonFlux(商標)自動パッチクランプにおいて、ヒトKv1.3について電気生理学的に特徴決定した。ヒトKv1.3についての精製したナノボディのモデュレーション効果を電気生理学的記録により評価するための手順を、前記実施例3.2に提供する。タイムコースプロトコールを、脱分極パルスプロトコールにより引き出されたカリウム電流におけるナノボディの活性(IC50)を評価するのに適用した(図2A)。安定化期後、細胞外バッファーを、ネガティブ対照として、120秒間連続的にかん流させ、続けて、種々の濃度のナノボディ又は選択的hKv1.3チャネル阻害剤であるStichodactyla helianthus(ShK-1aj, Smartox, #08SHK001)を連続的にかん流させた。化合物濃度の複数回の添加間の間隔を、120秒とした。最大半値阻害濃度(IC50)を、室温で、(特に断りない限り)7点の濃度応答曲線から、各濃度において最少n=2で算出した。
選択したナノボディを、Kv1.3発現チャイニーズハムスター肺(CHL)細胞を使用するIonWorks自動かん流パッチクランプにおいて、ヒトKv1.3について電気生理学的に特徴決定した。ヒトKv1.3についての精製したナノボディのモデュレーション効果を電気生理学的記録により評価するための手順を、以下に提供する。
IonWorks Quattro(Molecular Devices)を、膜電圧制御を提供し、化合物のスクリーニング及び特徴決定のための直接的な電気生理学的アッセイ法を提供する、第2の生成スクリーニング装置とする。この装置は、384ウェルPatchPlate(商標)基板を使用する、自動ハイスループット平面かん流パッチクランプである。
細胞外溶液は、(mMで):138 NaCl、2.7 KCl、0.9 CaCl2、0.5 MgCl2、8 Na2HPO4、及び1.5 KH2PO4(NaOHによりpH7.3及び285〜290mOsmolar)を含有した。細胞内溶液は、(mMで):100 K−グルコナート、40 KCl、3.2 EGTA、5 HEPES、及び3.2 MgCl2(KOHによりpH7.3及び300〜315mOsmolar)を含有した。これらの溶液を、新鮮に調製し、4℃で1か月以内の間ストックし、使用前にろ過した。選択したナノボディを、細胞外溶液中で直接希釈して、3μM サンプル溶液を得た。96ウェルマスタープレートを、3μM サンプル溶液 300μLを移すことにより準備した。プレート希釈を行った(1:3)。Kv1.3アッセイ法について、各サンプル 50μLを、384ウェルプレート(Costar polypropylene, # 3657)のカラムに移した。キニジン検量線を、媒体(low)及びキニジン(high:最終アッセイ濃度300μM)対照に沿って含ませた。
全長ヒトKv1.3チャネルを安定的に発現しているチャイニーズハムスター肺(CHL、Essen Bioscience)細胞株を、T−175細胞培養フラスコ(Greinerbio-one, #660160)中で、10% FBS(HyClone, # SH3007103)、1% 非必須アミノ酸(Invitrogen, #11140)、1% ピルビン酸ナトリウム(Invitrogen, #C11360)、1% ペニシリン+ストレプトマイシン(Invitrogen, #C10378)、200μg/mL G418(Invitrogen, #10131)、20mM HEPES(Invitrogen, #15630-114)、及び29mM KCl(Sigma, #P5405)を含有する標準的な培養培地であるDMEM(Invitrogen, #41965)を使用して培養した。IonWorks(Essen Bioscience)に使用する前に、細胞を、25,000個/cm2又は12,000個/cm2の密度で、それぞれ2又は3日間播種した。収集前の最適な細胞コンフルエントを、50〜80%とした。細胞を、Ca2+及びMg2+を含まないPBS(GibCo, # 14190-094) 20mLで洗浄し、トリプシン/EDTA0.25%(GibCo, #25200-056) 2mL、37℃で6分間により剥がした。細胞を、外側バッファー(GibCo, #14040) 10mLで希釈した。懸濁液を、15mLの遠沈管に移し、200×gで2分間遠心分離した。上清を除去し、ペレットを、細胞外バッファー 4.5mLで再懸濁させた。5mLのCorning Costar(登録商標)stripette(Sigma-Aldrich, #CLS4487)による約3回の滴定後に、更に70回の滴定を、200μLのピペットにより行った。細胞懸濁液(1mL当たりに300〜500万個の細胞密度)を、IonWorks内の細胞ボートに加えた。実験をした。
IonWorks自動パッチクランプ電気生理学の基本原理は、Schroeder et al.(J Biomol Screen 8(1):50-64, 2003)に記載されている。そこで概説された実験では、Finkel et al.(J Biomol Screen 11(5):488-96, 2006)に記載された集団パッチクランプ(PPC)構成が使用された。単独細胞モード(HT)または集団(PPC)モードのいずれかを、Kvイオンチャネルにより決まるアッセイ法に使用した。PPCモードにおいて、ウェル当たりに最大64個の細胞からの電流の集合平均を記録した。
データ点を、下記のウェル及びプレートの品質管理基準に合致した場合に許容した。
1)個々のシール抵抗、化合物リードの前後において、20MΩ超。
2)個々のピークKv1.x電流振幅 500pA超。
3)プレートZ’値 0.4超(測定された場合)。
4)プレート平均シール抵抗 30MΩ超。
5)プレート平均電流振幅 0.5nA超。
6)予想範囲内の標準的なIC50値
精製した抗Kv1.3ナノボディを、T細胞活性化アッセイ法において特徴決定した。まず、ヒトT細胞を、Buffy Coat blood(健康なボランティアから、Bloodbank Gent)から、RosetteSep(StemCell Technologies, #15061)を使用して収集し、続けて、Ficoll-Paque(商標)PLUS(GE Healthcare #17-1440-03)で濃縮した。CCR7−CD45RA− T細胞を、Dynabeads Biotin Binder(Invitrogen #110.47)に加えて、CD45RA(BD Bioscience #624008)及びCCR7(BD Bioscence #624009)に対するビオチン化抗体を使用するネガティブ選択により単離した。その後、集団の純度を、フローサイトメトリーアッセイ法において、抗CD3(eBioscience # 12-0037-73)、抗CD8(BD Bioscience #345775)、抗CD4(BD Bioscience #345771)、抗CD45RO(BD Bioscience #555493)、抗CD45RA(BD Bioscience # 550855)、抗ラットIgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories #112-116-143)、抗CD19(BD Bioscience #555413)、及び抗ヒトCCR7(R&D Systems #MAB197)ラベル抗体により確認した。
5.1 二価及び三価の単特異性及び二重特異性フォーマットの構築
活性及び/又は有効性を向上させるために、二価及び三価の分子を、遺伝子操作により構築した。2つ又は3つのナノボディを互いに、35GSリンカーにより、構築ブロック間において、遺伝的に連結させ、その後、標準的な条件に従って、Pichia中で発現させた。種々の多価構築物を、表A−6で列記されたように調製した。
二価及び三価の構築物のヒト、カニクイザル、及びラットKv1.3への結合を、実施例4.1で概説されたように行い、図12A〜12Dに表わす。データから、その一価カウンターパートと比較して、全てのターゲットについて、フォーマットした変異体の改善された結合が示される(図3を参照のこと)。用量応答曲線から得られたEC50値を、表B−6に示す。
カニクイザルKv1.3に対するマルガトキシン結合の阻害を、実施例3.3及び実施例4.2で記載された種々のフォーマットについて調査した(図13A〜13E)。抗Kv1.3ナノボディは、カニクイザルKv1.3に対する、150pM I125マルガトキシンの結合を、完全にブロックした。バックグラウンド(BG)は、I125マルガトキシンを加えなかった対照条件とする。明確に改善された活性が、その一価カウンターパートと比較して観察された(図4)。得られたIC50値の概観を、表B−7に示す。
IonFlux(商標)
選択したナノボディを、Kv1.3発現HEK293H細胞を使用するIonFlux(商標)自動パッチクランプにおいて、ヒトKv1.3について電気生理学的に特徴決定した。ヒトKv1.3についての精製したナノボディのモデュレーション効果を電気生理学的記録により評価するための完全な手順を、実施例3.2及び4.3に提供する。タイムコースプロトコールを、脱分極パルスプロトコールにより引き出されたカリウム電流におけるナノボディの活性(IC50)を評価するのに適用した(図2A)。「洗浄」実験において、単回の高用量ナノボディ(300nM)を、120秒の間にアプライし、続けて、洗浄中の電流回復速度を評価するために、細胞外バッファーの連続的なかん流を少なくとも5分間行った。これらの実験において、集団及び単独両方の細胞の自動パッチクランプを、電流振幅を記録するのに使用した。
選択したナノボディを、Kv1.3発現チャイニーズハムスター肺(CHL)細胞を使用するIonWorks自動かん流パッチクランプにおいて、ヒトKv1.3について電気生理学的に特徴決定した。ヒトKv1.3についての精製したナノボディのモデュレーション効果を電気生理学的記録により評価するための手順を、実施例4.3に提供する。繰り返しのゲーティング電圧コマンドプロトコールを、ナノボディ活性(IC50)を決定するのに利用した。Kv1.3電流を、1回目のゲーティングステップパルスP1における持続電流として測定した(図8を参照のこと)。
抗CD3による刺激後のCCR7−CD45RA− T細胞活性化の阻害を、二価及び三価の構築物について評価した。同一のアッセイ法設定を、上記されたように使用した(実施例4.4を参照のこと)。得られた結果を、表B−10及び図23A〜23Fにまとめる。フォーマットされた二価(A019400013)及び三価(A019400015)ナノボディは、ShKと比較して類似する活性により、IFNγ分泌及びCD25発現を阻害した。二重抗原結合性ナノボディ(A019400012及びA019400014)は、わずかに活性が低かった。
異なるB細胞系統に属するナノボディの結合エピトープを決定するために、抗Kv1.3ナノボディのHEK293H細胞上に発現させた変異Kv1.3構築物への結合を、フローサイトメトリーにおいて確認した。これらの変異体では、第1の細胞外ループ(EL1)が、無関係のアミノ酸ストレッチにより繰り返されていた。これらの構築物の発現を、蛍光ラベルアギトキシン(rAgitoxin-2-Cys-TAMRA(Alomone Labs #RTA-420-T))により、フローサイトメトリーにおいて評価した(図24を参照のこと)。実験を、WTヒトKv1.3に代えてKv1.3 EL1変異体を発現する細胞を使用したこと以外は、実施例4.1で概説したように行った。評価したサンプルからは、Kv1.3 EL1変異体に対して、検出可能な結合が示されなかった(データを示さず)。
トキシンであるShKとKv1.3に結合するナノボディとの間の競合を評価するために、FACS競合実験を、ヒトKv1.3を過剰発現しているHEK293H細胞及びバックグラウンド細胞株として親HEK293H細胞を使用して行った。検出試薬として、FAMラベルShKを使用した(6-FAM-AEEAc-Stichodactyla helianthus Neurotoxin(ShK)(Bachem, H-6088, 1046522, PRT00000366/01/01))。アッセイ法を設定するために、まず、ラベルされたShk−FAMの滴定系列を、結合についてのEC50値を決定するために、HEK293H Kv1.3細胞において行った。アロステリック競合を決定するために、飽和濃度で作用させるように、ラベルされたShK−FAMを、競合実験において、100×EC50濃度で使用した(70nM)。
ヒト血清アルブミンに結合するナノボディであるAlb11を、フォーマットされた分子(国際公開公報第06/122787号)のin vivo半減期を延長させるために、多価Kv1.3ナノボディに連結させた。種々の位置の異なる構成のナノボディを含む種々のフォーマットを調製した。調査したフォーマットの概観を、表A−3に示す。
実施例4.1で記載されたのと同様に、半減期延長抗Kv1.3ナノボディのCHO細胞上に発現させたカニクイザル及びラットKv1.3への結合を、フローサイトメトリーアッセイ法において調査した(図26A〜26B)。このアッセイ法において得られたEC50値を、表B−12に列記する。
半減期(HLE)延長ナノボディを、Kv1.3発現HEK293H細胞を使用するIonFlux(商標)自動パッチクランプにおいて、ヒトKv1.3について電気生理学的に特徴決定した。ヒトKv1.3についての精製したナノボディのモデュレーション効果を電気生理学的記録により評価するための完全な手順を、実施例4.3及び5.4に提供する。タイムコースプロトコールを、(図2Aで示されたように)脱分極パルスプロトコールにより引き出されたカリウム電流におけるナノボディの活性(IC50)を評価するのに適用した。「洗浄」実験において、単回の高用量を、120秒の間にアプライし、続けて、細胞外バッファーの連続的なかん流を少なくとも5分間行った。これは、洗浄中の電流回復速度を評価するためである。この実験において、単独細胞自動パッチクランプを、電流振幅を記録するのに使用した。
半減期延長ナノボディを、CHO細胞上に発現させたカニクイザル及びラットKv1.3に対する結合について、フローサイトメトリーアッセイ法において、実施例4.1で概説されたように評価した。加えて、HSAをAlb11に結合させるために、HSA(50μM、Sigma, Cat A8763)を、アッセイ法中に使用した全ての試薬及びバッファーに加えた(図26C〜26D)。EC50値を、表B−12に示す。
また、半減期延長ナノボディを、HSAの存在下における、CHO細胞上に発現させたカニクイザルKv1.3に対する125Iマルガトキシンの結合との競合についても、実施例4.2及び5.3で先に記載されたように評価した。まず、25μM HSA(Sigma, Cat A8763)の影響を、放射性ラベルI125マルガトキシンの結合について評価し、HSAがI125マルガトキシンの用量応答曲線に影響を及ぼさないことを確認した(データを示さず)。次に、比較のために、競合を、25μM HSA(Sigma, Cat A8763)の不存在下及び存在下において行った。図28に表わされたデータから、HSAは構築物の活性に影響を及ぼさないことが示される。IC50値を、表B−13に示す。
また、半減期延長ナノボディを、実施例5.5で概説されたように、T細胞アッセイ法において試験した。ナノボディを、10μM HSA(Sigma, Cat A8763)の不存在下及び存在下の両方において試験した(図29を参照のこと)。IFNγ及びCD25リードアウトの両方において得られたIC50値を、表B−14に示す。
半減期延長フォーマットのヒト及びラット血清アルブミン(SA)への結合を、BIAcore T100機器でのSPR(表面プラズモン共鳴)において評価した。比較のために、一価Alb11ナノボディも、ヒト及びラットSAに対する結合について試験した。
抗Kv1.3阻害性ナノボディを、プレートに結合した抗CD3/CD28刺激PBMCによるサイトカイン分泌におけるその効果について評価した。ShKを、参照化合物として含ませた(図30)。抗CD3及び抗CD28によるT細胞の同時刺激は、急性感染中に遭遇する強力な免疫刺激を反映している。抗CD3による単独刺激は、むしろ、自己免疫疾患等の間における状態を再構成する中程度の免疫刺激を模倣している。
Kv1.3 K+チャネルの電気生理学特性におけるHLEナノボディA019400029の効果を評価した。電流記録を、従来の平面パッチクランプ電気生理学により、過剰発現Kv1.3 CHL細胞を使用して行った。この手順を、詳細な電圧コマンドプロトコールと共に、以下に提供する。
細胞外溶液は、(mMで):140 NaCl、5 KCl、2 CaCl2、1 MgCl2、10 HEPES、10 グルコース(NaOHによりpH7.4及び310〜330mOsmolar)を含有した。細胞内溶液は、(mMで):140 KCl、1 MgCl2、20 HEPES、1 EGTA(KOHによりpH7.3及び295〜310mOsmolar)を含有した。これらの溶液をろ過し、4℃で6週間以内の間ストックした。1日毎の記録において、選択したナノボディのアリコートを、0.1% BSA(Sigma, #A4503)を含有する細胞外溶液希釈して、終濃度10nMを与えた。
全長ヒトKv1.3チャネルを安定的に発現しているチャイニーズハムスター肺(CHL、Essen Bioscience)細胞株を、T−175細胞培養フラスコ(Greinerbio-one, #660160)中で、10% FBS(HyClone, # SH3007103)、1% 非必須アミノ酸(Invitrogen, #11140)、1% ピルビン酸ナトリウム(Invitrogen, #C11360)、1% ペニシリン+ストレプトマイシン(Invitrogen, #C10378)、200μg/mL G418(Invitrogen, #10131)、20mM HEPES(Invitrogen, #15630-114)、及び29mM KCl(Sigma, #P5405)を含有する標準的な培養培地であるDMEM(Invitrogen, #41965)を使用して培養した。収集前の最適な細胞コンフルエントを、50〜80%とした。細胞を、Ca2+及びMg2+を含まないPBS(GibCo, # 14190-094) 20mLで洗浄し、トリプシン/EDTA0.25%(GibCo, #25200-056) 2mL、37℃で6分間により剥がした。細胞を、10% FBS、1% 非必須アミノ酸、1% ピルビン酸ナトリウム、1% ペニシリン+ストレプトマイシン、200μg/mL G418、20mM HEPES、及び29mM KClを含有する標準的な培養培地 10mLで希釈した。懸濁液を、15mLの遠沈管に移し、200×gで2分間遠心分離した。上清を除去し、ペレットを、上記されたのと同じ培地で再懸濁させた。細胞を、記録の1又は2日前に、25,000個/cm2又は12,000個/cm2の密度で、ポリ−D−リシンコートカバーガラス上に撒いた。
ポリ−D−リシンコートカバーガラス上で増殖させたKv1.3発現CHL細胞を、細胞外溶液でかん流されている記録チャンバに入れ、Nikon Eclipse倒立顕微鏡において可視化した。電流を、標準的な細胞全体電圧クランプ技術(Hamill et al., Pflugers Arch 391:85-100, 1981)を使用し、室温において、Axopatch 200B増幅器を使用して記録し、digidata 1440A analogue-to-digital converter(Molecular Devices)を使用して、デジタルシグナルに変換し、5kHzでローパスベッセルフィルタし、10kHzでデジタル化した。記録電極を、Sutter P-97水平ピペットプラーにおいてホウケイ酸ガラスピペットから引き出し、細胞内溶液で充填した時点で、2〜6Ωの抵抗を生じさせた。電圧クランプモードにおいて手動での吸引による密閉(1GΩ超)の形成後、−80mVへのコマンド電圧設定及びピペットキャパシタンスを補償した。細胞膜を破り、補償循環を、キャパシタンス遷移及び80〜85% 直列抵抗誤差を最少化するのに利用した(平均細胞全体キャパシタンス 15±3 pF及び直列抵抗 6.0±2.3MΩ;n=36)。リーク電流を、pClamp10ソフトウェアにより提供されたP/4プロトコールを使用して差し引いた。膜電位を、接合部電位について補正しなかった(Clampex 10ソフトウェアにより測定した場合、4.1mV)。ナノボディメカニズムの作用を説明する電圧プロトコールの説明を、図中の凡例に提供する。サンプルを、加圧ソレノイドコントローラー(ALA Scientific Instruments, ALA-VM8/BPS-8バルブコントロールシステム)に接続され、記録細胞の近くに(約200μm)配置したマイクロインジェクションニードルを使用してアプライした。正確な配置を、スイッチングに基づく細胞の小さな移動を観察することにより確認した。
活性化コンダクタンスプロットを、ボルツマン関数:gK/gK max=1/[1+exp(V1/2−V/k)](同関数中、gKは、最大コンダクタンス(gK max)に関して正規化されたコンダクタンスであり、V1/2は、チャネルの半分が活性化される膜電位であり、kは、曲線の傾斜である)を使用して当て嵌めた。不活性化曲線の構築を可能にするために、電流を、−80mVから+40mV(Imax)への脱分極により生じる(I)に対して正規化し、コンディショニングパルス電位に対してプロットした。不活性化曲線を、ボルツマン関数:I/Imax=1/[1+exp(V−V1/2)/k](同関数中、Vは、コンディショニングパルス電位であり、V1/2は、チャネルの半分が活性化される膜電位であり、kは、傾斜である)に従って当て嵌めた。電流振幅を、脱分極パルス中のピーク外向き膜電流又は電圧ステップの最後の5m秒の間に平均振幅として得られる持続電流のいずれかとして決定した。ナノボディ又は媒体対照の効果を、まず、インキュベーション期間の最後の処置の存在下におけるKv1.3電流振幅を、添加前の対照期の最後におけるKv1.3電流の振幅により割り、100を掛けて、% 対照電流値を生成することにより定量した。% 阻害を、% 対照電流値を100から差し引くことにより決定した。全てのデータ分析を、Axon pClamp10、Microsoft Excel v7.0及びGraphPad Prism v5.0を使用して行った。不活性化及び/又は阻害試験からの回復には、下記等式を利用する正規化された電流を使用した。
% 回復=(P2peak−P1sustained)/(P1peak−P1sustained)×100
[同等式中、P2peakは、試験パルスからの最大電流であり、P1sustainedは、コンディショニングパルスの最後における電流振幅であり、P1peakは、コンディショニングパルスからの最大電流である(図34を参照のこと)。]
活性化の電圧依存性における効果を、ナノボディのアプライ前及びA019400029の5分のインキュベーションでの電流電圧相関を決定することにより評価した。Kv電流を、30秒間隔での保持電位−80mVから10mVステップでの+50mVへの脱分極パルス500m秒により、10nM A019400029の不存在下(図31B)及び存在下(図31C)において喚起した。電圧プロトコールの模式図を、図31Aに提供する。分析に使用したデータ点は、図31Bに示されたピーク電流振幅(矢印)を表わす。ブロックの電圧依存性を決定するために、各試験電位におけるI−Vプロット及び僅かなブロックの算出を行った(データを示さず)。ボルツマン分析(G/V)を、活性化ゲーティングにおける効果を測定するのに行った。
電気生理学記録を、全長Kv1.3、Kv1.5、及びhERG K+チャネルを発現しているチャイニーズハムスター肺(CHL)細胞株、又は、Kv1.6 cDNAで一過性にトランスフェクションされたチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞(ChanTest EZcells(商標) TT, #CT7220)で行った。hERG及びKv1.6用の単独細胞(HT)又はKv1.3及びKv1.5用の集団(PPC)パッチクランプのいずれかを、かん流パッチクランプ構成において、IonWorks Quattro機器を使用して行った。より詳細な手順を、これらの実験で使用される細胞培養条件、細胞調製、細胞内及び細胞外溶液の粗製と共に、実施例4で説明する。ただし、凍結させたヒトKv1.6−CHO EZcells(商標) TTを、37℃の水浴中で、非常に素早く解凍し、50mLのコニカルチューブに移した。10% FBS(HyClone, # SH3007103)及び1% ペニシリン+ストレプトマイシン(Invitrogen, #C10378)を含有する増殖培地Ham’s/F12(GibCo, #31765-027) 10mL及び細胞を、250×gで5分間遠心分離した。ペレットを、新たな培地 20mLに新鮮に再懸濁させ、細胞クランプを分散させるように滴定した。細胞懸濁液(1mL当たりに300万〜500万個の密度)を、IonWorks内の細胞ボートに加えた。ついで、実験を開始した。
A)Kv1.3及びKv1.5
7)個々のシール抵抗、化合物添加前後のリードにおいて20MΩ超
8)個々のピークKv1.x電流振幅 500pA超
9)プレートZ’値 0.4超(測定された場合)
10)プレート平均シール抵抗 30MΩ超
11)プレート平均電流振幅 0.5nA超
12)予想範囲内の標準的なIC50値
B)hERG及びKv1.6
1)個々のシール抵抗、化合物添加前後のリードにおいて50MΩ超
2)個々のピークhERGテール電流振幅 150pA超、又は、ピークKv1.6外向き膜電流振幅 400pA超
3)プレート平均シール抵抗 100MΩ超
4)プレート平均電流振幅 0.3nA超
遅延型過敏(DTH)反応は、皮膚ホーミングエフェクターメモリーT細胞により主に媒介される、皮下感作及び反応性ハプテン、例えば、2,4−ジニトロフルオロベンゼン(DNFB)によるチャレンジに対する応答におけるT細胞媒介性免疫の表現である(Azam P et al., J Invest Dermatol 127(6):1419-29, 2007;Matheu MP et al., Immunity 29(4):602-14, 2008)。電位作動型カリウムチャネルKv1.3は、T細胞に発現しており、T細胞活性化(主に、エフェクターメモリーT細胞)を維持するのに重要である。
ウィンスターラットにおけるDNFB誘導性遅延型過敏についての抗Kv1.3ナノボディ(A019400029)のin vivoでの有効性を評価し、抗Kv1.3ペプチドトキシンであるShK(Stichodactyla toxin)と比較した。本試験を、同じDTHモデルにおけるナノボディ及びShKの先に得られた結果(実施例12を参照のこと)から得られた非劣性限度に基づいて、80%能力で、ShKに対するナノボディの非劣性を証明するのに設計した。ラットにおけるDTH応答を、下記のように引き出した(図37を参照のこと)。0日目(開始時)及び1日目に、4:1 アセトン/オリーブ油中で調製した、1%(wt/vol) DNFB 100μLを、感作のために、毛を剃った背中に塗布した。5日目に、動物を、動物の右耳介の両側に、4:1 アセトン/オリーブ油中で調製した、0.5%(wt/vol) DNFB 50μLでチャレンジした。動物(n=10匹のラット/群)に、媒体、ベンチマーク化合物であるShK、又は抗Kv1.3ナノボディのいずれかの、2回の皮下(s.c.)注射を、チャレンジ前12時間及び/又は1時間で受けさせた。ポジティブ対照として、動物を、デキサメタゾンで処置した(局所、チャレンジ後1時間及び6時間において、0.75mg)。DNFBチャレンジ前5日において、右耳介のベースライン厚みを測定した。正味の耳膨潤応答を、チャレンジ後24時間で、バネ負荷マイクロメーターにより測定した。
抗Kv1.3ナノボディA019400029の薬物動態を、ウィンスターラットにおけるDNFB誘導性遅延型過敏モデル(実施例12及び実施例13を参照のこと)において決定した。動物に、0.105、1.05、又は5.25mg/kg ナノボディを投与し、血漿を、DNFBによるチャレンジ後の複数の時点で単離した(n=4)。血漿中の合計ナノボディ濃度を、酵素結合免疫吸着アッセイ法(ELISA)を使用して測定した。簡潔に、96ウェルマイクロタイタープレート(Maxisorp, Nunc, Wiesbaden, Germany)を、50μL/ウェル 自社で精製した抗ナノボディナノボディ(0.5μg/mL)により、4℃で一晩コートした。次に、プレートを吸引し、PBS/1% カゼインにより、室温で1時間ブロックした。プレートをPBS/0.05% Tween20で3回洗浄した後、サンプルを、1/10希釈し、希釈サンプル 50μLを、600rpmで振とうしながら、プレート上で、室温(RT)において1時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、50μL/ウェル 自社製のビオチン化抗ナノボディナノボディ(PBS/0.1% カゼイン中の0.05μg/mL)を、振とうしながら、RTで1時間加えた。ビオチン化抗ナノボディナノボディを、600rpmで振とうしながら、50μL/ウェル 西洋ワサビペルオキシダーゼ−(HRP)ラベルストレプトアビジン(PBS/0.1% カゼイン中の1μg/mL)を、RTで0.5時間添加することにより検出した。最後の洗浄工程後に、溶解性向上HRP−基質である3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(esTMB, SDT, Brussels, Belgium) 50μLを加えた。アッセイ法の検出限界(LOD)を、9.77ng/mLとした。
15.1 配列最適化:配列分析
親野生型ナノボディ配列を変異させて、ヒトVH3−JH生殖系コンセンサス配列に、より同一なナノボディ配列を生成した。ナノボディとヒトVH3−JH生殖系コンセンサスとの間で異なるフレームワーク領域の特定のアミノ酸を、タンパク質の構造、活性、及び安定性がインタクトに維持されるような方法において、ヒトカウンターパートに変異させた。A0194009G09及びA0194020A06配列とVH3−23/JH5ヒト生殖系とのアライメントに基づいて、中でも、4つの下記変異体を生成した。A019400071、A019400072、A019400073、及びA019400074(それぞれ配列番号:514〜517)。これらの変異体は、7つの変異:L11V、A14P、G19R、T62S、A74S、K83R、及びV89L(Kabatに従ったナンバリング)を含む。これらの変異体において、53位におけるメチオニンが、グルタミン(A019400071及びA019400072)又はアラニン(A019400073及びA019400074)により更に置換されていた。加えて、変異体A019400071及びA019400073は、S94G変異を有する。変異体A019400072及びA019400074は、T97E変異を有する。対応するアミノ酸配列を、表A−3及び表A−9に示す。
クローニング、コピー数決定、及び発現分析
この実施例では、Pichia pastoris X33への、Invitrogen/RTCからの市販の系を使用する、ナノボディA019400071、A019400072、A019400073、及びA019400074のクローニング、そのコピー数決定、及び、振とうフラスコ中での生成及び供給されたバッチ発酵後の発現レベルを説明する。これらの三価ナノボディ中のサブユニットは、(GGGGS)nリンカーによりヘッド−to−テールで融合している。
種々の構築物を、複雑な培地を使用する2Lの発酵槽規模におけるその発現レベルについて、更に評価した。細胞のバイオマスを、第1のバッチ及びグリセロール供給バッチ期、続けて、MeOH誘導期の間に蓄積させた。その間に、ナノボディを、発酵培地中に分泌させた。5種類の構築物の推定された発現力価を、表B−16に示す。挿入された配列最適化変異のセットにより、推定された収量は明らかに増大した。
変異体A019400071、A019400072、A019400073、及びA019400074を、実施例4.4で記載されたT細胞活性化アッセイ法において、A019400031及びShKトキシンと比較した。導入された変異の影響を、抗CD3による刺激後のCCR7−CD45RA− T細胞のIFNγ生成を阻害する能力について評価した。このアッセイ法を、HSA(2.5μM)の存在下及び不存在下の両方において行った。IC50値を、表B−17に示す。特定の変異について明確な影響は、HSAの不存在下及び存在下の両方において見られなかった。
先に記載された明細書は、当業者が本発明を実施するのを可能にするのに十分であると考えられる。本発明は、提供された実施例による範囲に限定されない。実施例は、本発明の特定の態様及び実施態様の例示として意図したものであるためである。他の機能的に同等の実施態様は、本発明の範囲内にある。本明細書で示され、記載されたものに加えて、本発明の種々の修飾が、前述の説明から当業者に明らかとなるであろうし、添付の特許請求の範囲の範囲に入るであろう。本発明の利点及び目的は、本発明の各実施態様に必ずしも包含される必要はない。
Claims (71)
- カリウムチャネル3(Kv1.3)のEL1細胞外ループに特異的に結合する免疫グロブリンであり、免疫グロブリンは、パッチクランプアッセイ法で決定された場合に、T細胞からのカリウムイオンの流出を減少させ、又は更に、同流出を完全に阻害することにより、Kv1.3の活性をモデュレーションする、
免疫グロブリン。 - 免疫グロブリンが、10−7M以下、好ましくは10−8M以下、より好ましくは10−9M以下、又は更に10−10M以下のIC50値で、T細胞からのカリウムイオンの流出を減少させ、又は、阻害する、請求項1記載の免疫グロブリン。
- 免疫グロブリンが、Kv1.3の活性を、アロステリックにモデュレーションし、及び/又は、阻害する、請求項1又は2記載の免疫グロブリン。
- 免疫グロブリンが、Kv1.3の活性をモデュレーションし、及び/又は、阻害することについて、他の関連するKvイオンチャネルファミリーメンバーより、10倍超、100倍超、好ましくは1000倍超の選択性を有する、請求項1〜3のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 免疫グロブリンが、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、ここで、免疫グロブリンが、配列番号:1〜64、495、498〜513、及び523〜540のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有する、請求項1〜4のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 免疫グロブリンが、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、その配列内に同じ数のアミノ酸を有し、ここで、免疫グロブリンが、配列番号:65〜123のいずれか1つと比較して、89%以上の配列同一性を有する、8位〜106位(Kabatナンバリングに従った)のアミノ酸配列を有する、請求項1〜4のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 4つのフレームワーク領域(それぞれFR1〜FR4)と、3つの相補性決定領域(それぞれCDR1〜CDR3)とから本質的になり、ここで、
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載の免疫グロブリン。 - 4つのフレームワーク領域(それぞれFR1〜FR4)と、3つの相補性決定領域(それぞれCDR1〜CDR3)とから本質的になり、ここで、
i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、請求項7記載の免疫グロブリン。 - i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、LもしくはRに変更されており、
−2位において、Lが、F、P、もしくはIに変更されており、
−3位において、Lが、PもしくはFに変更されており、
−4位において、Fが、S、LもしくはIに変更されており、
−5位において、Sが、IもしくはRに変更されており、
−6位において、Rが、C、A、P、V、もしくはLに変更されており、
−7位において、Nが、H、P、I、M、Y、T、もしくはDに変更されており、
−8位において、Sが、T、R、もしくはIに変更されており、
−9位において、Aが、VもしくはTに変更されており、及び/又は
−10位において、Gが、S、R、もしくはVに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Rが、GもしくはCに変更されており、
−2位において、Iが、V、T、S、もしくはLに変更されており、
−3位において、Rが、GもしくはLに変更されており、
−4位において、Mが、S、R、A、E、F、G、H、K、L、P、Q、V、W、Y、I、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、V、S、もしくはTに変更されており、
−7位において、Sが、G、C、D、もしくはEに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、T、M、もしくはRに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Wが、Gに変更されており、
−3位において、Eが、T、K、G、AもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、EもしくはDに変更されており、
−5位において、Fが、A、L、V、Y、T、もしくはSに変更されており、
−6位において、Yが、FもしくはDに変更されており、
−7位において、Eが、GもしくはKに変更されており、
−8位において、Yが、SもしくはHに変更されており、及び/又は
−9位において、Wが、S、G、もしくはCに変更されている、
からなる群より選択される、請求項7又は8記載の免疫グロブリン。 - i)CDR1が、
a)配列番号:181〜210、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、LもしくはRに変更されており、
−2位において、Lが、F、P、もしくはIに変更されており、
−3位において、Lが、PもしくはFに変更されており、
−4位において、Fが、S、LもしくはIに変更されており、
−5位において、Sが、IもしくはRに変更されており、
−6位において、Rが、C、A、P、V、もしくはLに変更されており、
−7位において、Nが、H、P、I、M、Y、T、もしくはDに変更されており、
−8位において、Sが、T、R、もしくはIに変更されており、
−9位において、Aが、VもしくはTに変更されており、及び/又は
−10位において、Gが、S、R、もしくはVに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜289及び配列番号:541〜555、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Rが、GもしくはCに変更されており、
−2位において、Iが、V、T、S、もしくはLに変更されており、
−3位において、Rが、GもしくはLに変更されており、
−4位において、Mが、S、R、A、E、F、G、H、K、L、P、Q、V、W、Y、I、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、V、S、もしくはTに変更されており、
−7位において、Sが、G、C、D、もしくはEに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、T、M、もしくはRに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜415、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Wが、Gに変更されており、
−3位において、Eが、T、K、G、AもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、EもしくはDに変更されており、
−5位において、Fが、A、L、V、Y、T、もしくはSに変更されており、
−6位において、Yが、FもしくはDに変更されており、
−7位において、Eが、GもしくはKに変更されており、
−8位において、Yが、SもしくはHに変更されており、及び/又は
−9位において、Wが、S、G、もしくはCに変更されている、
からなる群より選択される、請求項9記載の免疫グロブリン。 - i)CDR1が、
a)配列番号:181〜185、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、2もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−6位において、Rが、AもしくはVに変更されており、及び/又は
−9位において、Aが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜271、541、及び549、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−2位において、Iが、Lに変更されており、
−4位において、Mが、S、Q、A、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、SもしくはTに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、Tに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜398、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−3位において、Eが、TもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、Eに変更されており、
−5位において、Fが、Aに変更されており、及び/又は
−8位において、Yが、Hに変更されている、
からなる群より選択される、請求項7〜10のいずれか一項記載の免疫グロブリン。 - i)CDR1が、
a)配列番号:181〜185、又は
b)配列番号:182のアミノ酸配列に対して、2もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−6位において、Rが、AもしくはVに変更されており、及び/又は
−9位において、Aが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:268〜271、541、及び549、又は
d)配列番号:269のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−2位において、Iが、Lに変更されており、
−4位において、Mが、S、Q、A、もしくはTに変更されており、
−5位において、Gが、SもしくはTに変更されており、及び/又は
−8位において、Iが、Tに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:393〜398、又は
f)配列番号:397のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−3位において、Eが、TもしくはIに変更されており、
−4位において、Gが、Eに変更されており、
−5位において、Fが、Aに変更されており、及び/又は
−8位において、Yが、Hに変更されている、
からなる群より選択される、請求項11記載の免疫グロブリン。 - 前記免疫グロブリンが、
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:269であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:269であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:395であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:396であり;
−CDR1が配列番号:181であり、CDR2が配列番号:270であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:183であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:184であり、CDR2が配列番号:268であり、CDR3が配列番号:393であり;
−CDR1が配列番号:185であり、CDR2が配列番号:271であり、CDR3が配列番号:398であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:541であり、CDR3が配列番号:394であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:541であり、CDR3が配列番号:397であり;
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:549であり、CDR3が配列番号:394であり;及び
−CDR1が配列番号:182であり、CDR2が配列番号:549であり、CDR3が配列番号:397である、ポリペプチドからなる群より選択される、請求項1〜4又は請求項7〜12のいずれか一項記載の免疫グロブリン。 - 4つのフレームワーク領域(それぞれFR1〜FR4)と、3つの相補性決定領域(それぞれCDR1〜CDR3)とから本質的になり、ここで、
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は、
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、請求項1記載の免疫グロブリン。 - 4つのフレームワーク領域(それぞれFR1〜FR4)と、3つの相補性決定領域(それぞれCDR1〜CDR3)とから本質的になり、ここで、
i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列
からなる群より選択される、請求項14記載の免疫グロブリン。 - i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、R、A、V、S、もしくはKに変更されており、
−3位において、Tが、Nに変更されており、
−4位において、Fが、Lに変更されており、
−6位において、Nが、Sに変更されており、
−7位において、Fが、Yに変更されており、
−8位において、Gが、Aに変更されており、及び/又は
−9位において、Mが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Aが、Tに変更されており、
−2位において、Iが、Vに変更されており、
−5位において、Tが、SもしくはAに変更されており、
−6位において、Gが、NもしくはAに変更されており、
−7位において、Gが、SもしくはRに変更されており、
−8位において、Hが、RもしくはYに変更されており、
−9位において、Tが、IもしくはKに変更されており、及び/又は
−10位において、Yが、Fに変更されている、
からなる群より選択され、
及び/又は
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−4位において、Fが、YもしくはSに変更されており、
−5位において、Gが、Dに変更されており、
−6位において、Dが、Gに変更されており、
−7位において、Gが、Dに変更されており、
−8位において、Tが、Aに変更されており、
−9位において、Yが、Sに変更されており、
−10位において、Yが、Fに変更されており、
−12位において、Qが、Eに変更されており、
−14位において、Aが、N、T、I、もしくはRに変更されており、
−17位において、Dが、NもしくはGに変更されており、及び/又は
−18位において、Fが、Lに変更されている、
からなる群より選択される、請求項14又は15記載の免疫グロブリン。 - i)CDR1が、
a)配列番号:211〜226、又は
b)配列番号:214のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Gが、R、A、V、S、もしくはKに変更されており、
−3位において、Tが、Nに変更されており、
−4位において、Fが、Lに変更されており、
−6位において、Nが、Sに変更されており、
−7位において、Fが、Yに変更されており、
−8位において、Gが、Aに変更されており、及び/又は
−9位において、Mが、Vに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
ii)CDR2が、
c)配列番号:290〜309、又は
d)配列番号:303のアミノ酸配列に対して、4、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−1位において、Aが、Tに変更されており、
−2位において、Iが、Vに変更されており、
−5位において、Tが、SもしくはAに変更されており、
−6位において、Gが、NもしくはAに変更されており、
−7位において、Gが、SもしくはRに変更されており、
−8位において、Hが、RもしくはYに変更されており、
−9位において、Tが、IもしくはKに変更されており、及び/又は
−10位において、Yが、Fに変更されている、
からなる群より選択され、
及び
iii)CDR3が、
e)配列番号:416〜435、又は
f)配列番号:422のアミノ酸配列に対して、3、2、もしくは1つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列、ここで、
−4位において、Fが、YもしくはSに変更されており、
−5位において、Gが、Dに変更されており、
−6位において、Dが、Gに変更されており、
−7位において、Gが、Dに変更されており、
−8位において、Tが、Aに変更されており、
−9位において、Yが、Sに変更されており、
−10位において、Yが、Fに変更されており、
−12位において、Qが、Eに変更されており、
−14位において、Aが、N、T、I、もしくはRに変更されており、
−17位において、Dが、NもしくはGに変更されており、及び/又は
−18位において、Fが、Lに変更されている、
からなる群より選択される、請求項16記載の免疫グロブリン。 - 前記免疫グロブリンが、
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:290であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:292であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:293であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:294であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:216であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:419であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:297であり、CDR3が配列番号:420であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:421であり;
−CDR1が配列番号:217であり、CDR2が配列番号:299であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:423であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:214であり、CDR2が配列番号:301であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:424であり;
−CDR1が配列番号:211であり、CDR2が配列番号:302であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:425であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:426であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:218であり、CDR2が配列番号:291であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:219であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:427であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:304であり、CDR3が配列番号:428であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:421であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:429であり;
−CDR1が配列番号:221であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:416であり;
−CDR1が配列番号:222であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:430であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:306であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:223であり、CDR2が配列番号:303であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:431であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:296であり、CDR3が配列番号:432であり;
−CDR1が配列番号:224であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:220であり、CDR2が配列番号:307であり、CDR3が配列番号:433であり;
−CDR1が配列番号:225であり、CDR2が配列番号:300であり、CDR3が配列番号:418であり;
−CDR1が配列番号:226であり、CDR2が配列番号:308であり、CDR3が配列番号:434であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:295であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:301であり、CDR3が配列番号:426であり;
−CDR1が配列番号:212であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:417であり;
−CDR1が配列番号:217であり、CDR2が配列番号:305であり、CDR3が配列番号:422であり;
−CDR1が配列番号:215であり、CDR2が配列番号:298であり、CDR3が配列番号:435であり;及び
−CDR1が配列番号:213であり、CDR2が配列番号:309であり、CDR3が配列番号:418である、ポリペプチドからなる群より選択される、請求項1又は請求項14〜17のいずれか一項記載の免疫グロブリン。 - 前記免疫グロブリンが、ドメイン抗体、ドメイン抗体として使用するのに適した免疫グロブリン、シングルドメイン抗体、シングルドメイン抗体として使用するのに適した免疫グロブリン、dAb、dAbとして使用するのに適した免疫グロブリン、ナノボディ、VHH配列、ヒト化VHH配列、ラクダ化VH配列、又は親和性成熟により得られたVHH配列から本質的になる、請求項1〜18のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンが、配列番号:1〜123、495、498〜513、及び523〜540を有する免疫グロブリン、又は、配列番号:1〜123、495、498〜513、及び523〜540に対して、80%超の配列同一性を有する免疫グロブリンからなる群より選択される、請求項1〜19のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンが、配列番号:1〜123、495、498〜513、及び523〜540からなる群より選択される、請求項1〜20のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 前記Kv1.3が、ヒトKv1.3である、請求項1〜21のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンが、配列番号:1〜123、495、498〜513、及び523〜540を有する少なくとも1つのポリペプチドのKv1.3への結合をクロスブロックし、及び/又は、配列番号:1〜123、495、498〜513、及び523〜540を有する少なくとも1つのポリペプチドにより、Kv1.3に結合するのをクロスブロックされる、請求項1〜22のいずれか一項記載の免疫グロブリン。
- 請求項1〜23のいずれか一項記載の1つ以上の免疫グロブリンを含むか、又は、同免疫グロブリンから本質的になる、
ポリペプチド。 - 請求項1〜23のいずれか一項記載の少なくとも2つの免疫グロブリンを含むか、又は、同免疫グロブリンから本質的になる、請求項24記載のポリペプチド。
- 前記少なくとも2つの免疫グロブリンが、同じか又は異なることができる、請求項25記載のポリペプチド。
- 前記少なくとも2つの免疫グロブリンが、互いに直接連結しているか、又は、リンカーを介して互いに連結している、請求項25又は26記載のポリペプチド。
- リンカーが、配列番号:479〜494を有するリンカーからなる群より選択される、請求項27記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、配列番号:451〜473、496〜497、及び514〜522を有するポリペプチド、又は、配列番号:451〜473、496〜497、及び514〜522に対して、80%超の配列同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項24〜28のいずれか一項記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、配列番号:451〜473、496〜497、及び514〜522からなる群より選択される、請求項24〜29のいずれか一項記載のポリペプチド。
- 請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチドを含むか、又は、これらから本質的になり、場合により、1つ以上のペプチドリンカーを介して連結している、1つ以上の他の基、残基、部分、又は結合ユニットを更に含む、
化合物又は構築物。 - 対応する請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド自体と比較して、延長した半減期を有する、請求項31記載の化合物又は構築物。
- 前記1つ以上の他の基、残基、部分、又は結合ユニットが、対応する請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチドと比較して、延長した半減期を有するポリペプチドを提供する、請求項32記載の化合物又は構築物。
- 延長した半減期を有する免疫グロブリン又はポリペプチドを提供する前記1つ以上の他の基、残基、部分、又は結合ユニットが、ポリエチレングリコール分子、血清タンパク質又はそのフラグメント、血清タンパク質に結合することができる結合ユニット、Fc部分、及び、血清タンパク質に結合することができる小型タンパク質又はペプチドからなる群より選択される、請求項33記載の化合物又は構築物。
- 延長した半減期を有する免疫グロブリン又はポリペプチドを提供する前記1つ以上の他の基、残基、部分、又は結合ユニットが、ヒト血清アルブミン又はそのフラグメントからなる群より選択される、請求項33又は34記載の化合物又は構築物。
- 延長した半減期を有するポリペプチドを提供する前記1つ以上の他の結合ユニットが、血清アルブミン(例えば、ヒト血清アルブミン)又は血清免疫グロブリン(例えば、IgG)に結合することができる結合ユニットからなる群より選択される、請求項33又は34記載の化合物又は構築物。
- 延長した半減期を有するポリペプチドを提供する前記1つ以上の他の結合ユニットが、血清アルブミン(例えば、ヒト血清アルブミン)又は血清免疫グロブリン(例えば、IgG)に結合することができる、ドメイン抗体、ドメイン抗体として使用するのに適したアミノ酸、シングルドメイン抗体、シングルドメイン抗体として使用するのに適したアミノ酸、「dAb」、dAbとして使用するのに適したアミノ酸、ナノボディ、VHH配列、ヒト化VHH配列、ラクダ化VH配列からなる群より選択される、請求項36記載の化合物又は構築物。
- 前記化合物又は構築物が、配列番号:461〜473、496〜497、及び514〜522を有する化合物もしくは構築物、又は、配列番号:461〜473、496〜497、及び514〜522に対して、80%超の配列同一性を有する化合物もしくは構築物からなる群より選択される、請求項37記載の化合物又は構築物。
- 前記化合物又は構築物が、配列番号:461〜473、496〜497、及び514〜522からなる群より選択される、請求項37〜39のいずれか一項記載の化合物又は構築物。
- 対応する請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド自体の半減期より、少なくとも1.5倍、好ましくは少なくとも2倍、例えば、少なくとも5倍、例えば、少なくとも10倍、又は20倍超の血清半減期を有する、請求項36〜39のいずれか一項記載の化合物又は構築物。
- 対応する請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド自体と比較して、1時間超、好ましくは2時間超、より好ましくは6時間超、例えば、12時間超、又は更に、24、48、もしくは72時間超延長した血清半減期を有する、請求項36〜40のいずれか一項記載の化合物又は構築物。
- 少なくとも約12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間、更により好ましくは少なくとも72時間以上、例えば、少なくとも5日(例えば、約5〜10日)、好ましくは少なくとも9日(例えば、約9〜14日)、より好ましくは少なくとも約10日(例えば、約10〜15日)、又は少なくとも約11日(例えば、約11〜16日)、より好ましくは少なくとも約12日(例えば、約12〜18日以上)、又は14日超(例えば、約14〜19日)のヒトにおける血清半減期を有する、請求項36〜41のいずれか一項記載の化合物又は構築物。
- 請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、又は請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物をコードする、
核酸。 - 請求項43記載の核酸を含む、
発現ベクター。 - 請求項43記載の核酸又は請求項44記載の発現ベクターを含む、
ホスト又はホスト細胞。 - 請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項43記載の核酸の内の少なくとも1つを含む、
組成物。 - 医薬組成物である、請求項46記載の組成物。
- 少なくとも1つの薬学的に許容し得る単体、希釈剤、もしくは賦形剤、及び/又は補助剤を更に含み、及び場合により、1つ以上の更なる薬学活性ポリペプチド及び/又は化合物を含む、請求項47記載の組成物。
- 医薬として使用するための、請求項46〜48のいずれか一項記載の組成物、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物又は構築物。
- T細胞からのカリウムイオンの流出を減少させ、及び/又は、阻害するのに使用するための、請求項49記載の組成物、免疫グロブリン、ポリペプチド、又は化合物もしくは構築物。
- T細胞の活性化及び/又は増殖を阻害する、及び/又は、ブロックするのに使用するための、請求項49記載の組成物、免疫グロブリン、ポリペプチド、又は化合物もしくは構築物。
- 活性化されたT細胞を阻害する、及び/又は、ブロックするのに使用するための、請求項49記載の組成物、免疫グロブリン、ポリペプチド、又は化合物もしくは構築物。
- T細胞媒介性疾患の予防及び/又は治療に使用するための、請求項49記載の組成物、免疫グロブリン、ポリペプチド、又は化合物もしくは構築物。
- 自己免疫疾患の予防及び/又は治療に使用するための、請求項49記載の組成物、免疫グロブリン、ポリペプチド、又は化合物もしくは構築物。
- Kv1.3関連疾患、障害、又は症状の治療又は予防に使用するための、請求項46〜48のいずれか一項記載の組成物、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、又は請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物。
- 前記疾患、障害、又は症状が、多発性硬化症、関節リウマチ、1型糖尿病、2型糖尿病、乾癬、炎症性腸疾患、接触媒介性皮膚炎、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー、再狭窄、全身性硬化症、線維症、強皮症、糸球体腎炎、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、炎症性骨吸収、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、肥満、移植片対宿主疾患、移植拒絶、血管炎、抗好中球細胞質抗体(ANCA)関連血管炎(AAV)、ブドウ膜炎、及び遅延型過敏から選択される、請求項55記載の組成物、免疫グロブリン、ポリペプチド、又は化合物もしくは構築物。
- 少なくとも下記、
a)適切なホスト細胞又はホスト生物中において、又は、別の適切な発現系において、請求項43記載の核酸配列を発現させる工程と、場合により続けて、
b)請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチドを単離し、及び/又は、精製する工程とを含む、
請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン又は請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチドを製造するための方法。 - T細胞からのカリウムイオンの流出を減少させ、及び/又は、阻害するための方法であって、薬学活性量の、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の内の少なくとも1つを投与することを含む、
方法。 - T細胞の活性化及び/又は増殖を阻害する、及び/又は、ブロックするための方法であって、薬学活性量の、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の内の少なくとも1つを投与することを含む、
方法。 - 活性化されたT細胞を阻害する、及び/又は、ブロックするための方法であって、薬学活性量の、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の内の少なくとも1つを投与することを含む、
方法。 - T細胞媒介性疾患の予防及び/又は治療のための方法であって、それを必要とする対象に、薬学活性量の、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の内の少なくとも1つを投与することを含む、
方法。 - 自己免疫疾患の予防及び/又は治療のための方法であって、それを必要とする対象に、薬学活性量の、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の内の少なくとも1つを投与することを含む、
方法。 - Kv1.3関連疾患、障害、又は症状の予防及び/又は治療のための方法であって、それを必要とする対象に、薬学活性量の、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の内の少なくとも1つを投与することを含む、
方法。 - 前記疾患、障害、又は症状が、多発性硬化症、関節リウマチ、1型糖尿病、2型糖尿病、乾癬、炎症性腸疾患、接触媒介性皮膚炎、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー、再狭窄、全身性硬化症、線維症、強皮症、糸球体腎炎、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、炎症性骨吸収、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、肥満、移植片対宿主疾患、移植拒絶、血管炎、抗好中球細胞質抗体(ANCA)関連血管炎(AAV)、ブドウ膜炎、及び遅延型過敏から選択される、請求項63記載の方法。
- T細胞からのカリウムイオンの流出を減少させ、及び/又は、阻害するための医薬組成物の製造における、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の使用。
- T細胞の活性化及び/又は増殖を阻害する、及び/又は、ブロックするための医薬組成物の製造における、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の使用。
- 活性化されたT細胞を阻害する、及び/又は、ブロックするための医薬組成物の製造における、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の使用。
- T細胞媒介性疾患の予防及び/又は治療のための医薬組成物の製造における、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の使用。
- 自己免疫疾患の予防及び/又は治療のための医薬組成物の製造における、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の使用。
- 少なくとも1つのKv1.3関連疾患、障害、もしくは症状の予防及び/又は治療のための医薬組成物の製造における、及び/又は、請求項57〜64のいずれか一項記載の1つ以上の方法に使用するための、請求項1〜23のいずれか一項記載の免疫グロブリン、請求項24〜30のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項31〜42のいずれか一項記載の化合物もしくは構築物、又は請求項46〜49のいずれか一項記載の組成物の使用。
- 前記疾患、障害、又は症状が、多発性硬化症、関節リウマチ、1型糖尿病、2型糖尿病、乾癬、炎症性腸疾患、接触媒介性皮膚炎、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー、再狭窄、全身性硬化症、線維症、強皮症、糸球体腎炎、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、炎症性骨吸収、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、肥満、移植片対宿主疾患、移植拒絶、血管炎、抗好中球細胞質抗体(ANCA)関連血管炎(AAV)、ブドウ膜炎、及び遅延型過敏から選択される、請求項70記載の免疫グロブリンの使用。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462014023P | 2014-06-18 | 2014-06-18 | |
US62/014,023 | 2014-06-18 | ||
NLNL2013661 | 2014-10-21 | ||
NL2013661A NL2013661B1 (en) | 2014-10-21 | 2014-10-21 | KV1.3 Binding immunoglobulins. |
US201562133624P | 2015-03-16 | 2015-03-16 | |
US62/133,624 | 2015-03-16 | ||
JP2016573861A JP6822848B2 (ja) | 2014-06-18 | 2015-06-18 | Kv1.3結合免疫グロブリン |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016573861A Division JP6822848B2 (ja) | 2014-06-18 | 2015-06-18 | Kv1.3結合免疫グロブリン |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020195399A true JP2020195399A (ja) | 2020-12-10 |
JP2020195399A5 JP2020195399A5 (ja) | 2021-04-22 |
JP7366865B2 JP7366865B2 (ja) | 2023-10-23 |
Family
ID=52350261
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016573861A Active JP6822848B2 (ja) | 2014-06-18 | 2015-06-18 | Kv1.3結合免疫グロブリン |
JP2020144116A Active JP7366865B2 (ja) | 2014-06-18 | 2020-08-28 | Kv1.3結合免疫グロブリン |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016573861A Active JP6822848B2 (ja) | 2014-06-18 | 2015-06-18 | Kv1.3結合免疫グロブリン |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11149086B2 (ja) |
EP (1) | EP3157955B1 (ja) |
JP (2) | JP6822848B2 (ja) |
CN (1) | CN106573982B (ja) |
AU (2) | AU2015276084B2 (ja) |
CA (1) | CA2951443A1 (ja) |
NL (1) | NL2013661B1 (ja) |
WO (1) | WO2015193452A1 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8903488B2 (en) | 2009-05-28 | 2014-12-02 | Angiodynamics, Inc. | System and method for synchronizing energy delivery to the cardiac rhythm |
US9895189B2 (en) | 2009-06-19 | 2018-02-20 | Angiodynamics, Inc. | Methods of sterilization and treating infection using irreversible electroporation |
WO2012051433A2 (en) | 2010-10-13 | 2012-04-19 | Angiodynamics, Inc. | System and method for electrically ablating tissue of a patient |
US9078665B2 (en) | 2011-09-28 | 2015-07-14 | Angiodynamics, Inc. | Multiple treatment zone ablation probe |
NL2013661B1 (en) * | 2014-10-21 | 2016-10-05 | Ablynx Nv | KV1.3 Binding immunoglobulins. |
US20160058493A1 (en) * | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Angiodynamics, Inc. | System and method for ablating a tissue site by electroporation with real-time pulse monitoring |
EP3452084A4 (en) * | 2016-05-02 | 2020-01-01 | Tetragenetics, Inc. | ANTI-KV 1.3 ANTIBODIES AND METHODS OF PRODUCING AND USING THE SAME |
US10905492B2 (en) | 2016-11-17 | 2021-02-02 | Angiodynamics, Inc. | Techniques for irreversible electroporation using a single-pole tine-style internal device communicating with an external surface electrode |
CN118184777A (zh) * | 2017-01-30 | 2024-06-14 | 亚力兄制药公司 | 单价抗备解素抗体及抗体片段 |
US20230331827A1 (en) * | 2017-07-12 | 2023-10-19 | Maxion Therapeutics Limited | Potassium channel inhibitors |
WO2024133935A1 (en) | 2022-12-23 | 2024-06-27 | Ablynx Nv | Protein-based conjugation carriers |
WO2024170756A1 (en) | 2023-02-17 | 2024-08-22 | Ablynx N.V. | Polypeptides binding to the neonatal fc receptor |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6822848B2 (ja) * | 2014-06-18 | 2021-01-27 | アブリンクス エン.ヴェー. | Kv1.3結合免疫グロブリン |
Family Cites Families (93)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB335768A (en) | 1929-10-24 | 1930-10-02 | Jacoviac Maurice | Improvements in protecting devices for gramophone disc records |
US4938949A (en) | 1988-09-12 | 1990-07-03 | University Of New York | Treatment of damaged bone marrow and dosage units therefor |
WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
SE509359C2 (sv) | 1989-08-01 | 1999-01-18 | Cemu Bioteknik Ab | Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
DE69229477T2 (de) | 1991-09-23 | 1999-12-09 | Cambridge Antibody Technology Ltd., Melbourn | Methoden zur Herstellung humanisierter Antikörper |
AU687010B2 (en) | 1992-07-17 | 1998-02-19 | Dana-Farber Cancer Institute | Method of intracellular binding of target molecules |
EP1621554B2 (en) | 1992-08-21 | 2012-08-29 | Vrije Universiteit Brussel | Immunoglobulins devoid of light chains |
US6838254B1 (en) | 1993-04-29 | 2005-01-04 | Conopco, Inc. | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae |
WO1994029457A2 (en) | 1993-06-09 | 1994-12-22 | Unilever N.V. | Process for producing fusion proteins comprising scfv fragments by a transformed mould |
FR2708622B1 (fr) | 1993-08-02 | 1997-04-18 | Raymond Hamers | Vecteur recombinant contenant une séquence d'un gène de lipoprotéine de structure pour l'expression de séquences de nucléotides. |
US6091639A (en) | 1993-08-27 | 2000-07-18 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Non-volatile semiconductor memory device and data programming method |
EP0759170B1 (en) | 1993-09-10 | 2008-07-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Uses of green fluorescent protein |
WO1995021191A1 (en) | 1994-02-04 | 1995-08-10 | William Ward | Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein |
EP0745134A1 (en) | 1994-02-22 | 1996-12-04 | Danafarber Cancer Institute | Nucleic acid delivery system, method of synthesis and uses thereof |
US5625048A (en) | 1994-11-10 | 1997-04-29 | The Regents Of The University Of California | Modified green fluorescent proteins |
EP0739981A1 (en) | 1995-04-25 | 1996-10-30 | Vrije Universiteit Brussel | Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes |
US5693492A (en) | 1995-05-05 | 1997-12-02 | Merck & Co., Inc. | DNA encoding glutamate gated chloride channels |
DK0851874T3 (da) | 1995-09-22 | 2000-03-06 | Bioimage A S | Hidtil ukendte varianter af grønt fluorescerende protein, GFP |
US6027881A (en) | 1996-05-08 | 2000-02-22 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Mutant Aequorea victoria fluorescent proteins having increased cellular fluorescence |
EP0937140B1 (en) | 1996-06-27 | 2007-09-26 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Antibody molecules which interact specifically with the active site or cleft of a target molecule |
US6124128A (en) | 1996-08-16 | 2000-09-26 | The Regents Of The University Of California | Long wavelength engineered fluorescent proteins |
WO1998021355A1 (en) | 1996-11-15 | 1998-05-22 | Life Technologies, Inc. | Mutants of green fluorescent protein |
WO1998022141A2 (en) | 1996-11-19 | 1998-05-28 | Sangstat Medical Corporation | Enhanced effects for hapten conjugated therapeutics |
US6329516B1 (en) | 1997-04-28 | 2001-12-11 | Fmc Corporation | Lepidopteran GABA-gated chloride channels |
EP1027439B1 (en) | 1997-10-27 | 2010-03-17 | Bac Ip B.V. | Multivalent antigen-binding proteins |
EP1051493A2 (en) | 1998-01-26 | 2000-11-15 | Unilever Plc | Method for producing antibody fragments |
ID26964A (id) | 1998-02-19 | 2001-02-22 | Xcyte Therapies Inc | Komposisi dan metode untuk pengaturan pengaktifan limfosit |
EP0967284A1 (en) | 1998-05-28 | 1999-12-29 | Pfizer Limited | Phosphodiesterases |
GB9824632D0 (en) | 1998-11-10 | 1999-01-06 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological compounds |
BR9916765A (pt) | 1999-01-05 | 2001-09-25 | Unilever Nv | Processo para produzir um material imunoadsorvente, uso de uma proteìna que é ligada por meio de uma ligação covalente a um fragmento de anticorpo, material imunadsorvente, uso de um material, e, kit de teste diagnóstico |
AU2291700A (en) | 1999-01-19 | 2000-08-07 | Unilever Plc | Method for producing antibody fragments |
NZ513356A (en) | 1999-02-05 | 2004-01-30 | Univ Leiden | Method of modulating metabolite biosynthesis in recombinant cells using an AP2-domain transcription factor that is involved in the response of a plant cell to a jasmonate |
ATE364696T1 (de) | 1999-03-15 | 2007-07-15 | Univ British Columbia | Abc1 polypeptide und verfahren und reagenzien zur modulation des cholesterolgehalts |
BR0009866A (pt) | 1999-04-22 | 2002-01-08 | Unilever Nv | Método de inibição de infecção viral, uso de uma proteìna de ligação de antìgeno monovalente, produto alimentìcio, composição farmacêutica ou cosmética, proteìna de ligação de antìgeno monovalente, sequência de nucleotìdeos, vetor de expressão, célula hospedeira, e, métodos de seleção e de indentificação de uma proteìna de ligação de antìgeno |
KR100476519B1 (ko) | 1999-06-18 | 2005-03-17 | 씨브이 쎄러퓨틱스, 인코포레이티드 | Atp 결합 카세트 트랜스포터 단백질 abc1을사용하여 콜레스테롤 유출을 증가시키고 hdl을상승시키기 위한 조성물 및 방법 |
WO2001009300A2 (en) | 1999-08-02 | 2001-02-08 | Keygene N.V. | Method for generating cgmmv resistant plants, genetic constructs, and obtained cgmmv-resistant plants |
GB9922124D0 (en) | 1999-09-17 | 1999-11-17 | Pfizer Ltd | Phosphodiesterase enzymes |
US6479280B1 (en) | 1999-09-24 | 2002-11-12 | Vlaams Interuniversitair Institutuut Voor Biotechnologie Vzw | Recombinant phages capable of entering host cells via specific interaction with an artificial receptor |
US6849425B1 (en) | 1999-10-14 | 2005-02-01 | Ixsys, Inc. | Methods of optimizing antibody variable region binding affinity |
DE19955408A1 (de) | 1999-11-18 | 2001-05-23 | Bayer Ag | GABA-B-Rezeptoren |
DE60042789D1 (de) | 1999-11-29 | 2009-10-01 | Bac Ip B V | Immobilisierte antigenbindende moleküle aus einer domäne |
DK1242460T3 (da) | 1999-11-29 | 2006-12-11 | Unilever Nv | Immobilisering af proteiner ved hjælp af et polypeptidsegment |
WO2001045746A2 (en) | 1999-12-24 | 2001-06-28 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds |
DE60138333D1 (de) | 2000-03-14 | 2009-05-28 | Unilever Nv | Variabele Domänen der schweren Kette eines Antikörpers gegen menschliche Ernährungslipasen und deren Verwendungen |
AU2001268855A1 (en) | 2000-05-26 | 2001-12-03 | National Research Council Of Canada | Single-domain antigen-binding antibody fragments derived from llama antibodies |
US6741957B1 (en) | 2000-07-21 | 2004-05-25 | Daimlerchrysler Corporation | Analytical tire model for vehicle durability and ride comfort analysis |
ES2368623T3 (es) | 2000-12-13 | 2011-11-18 | Bac Ip B.V. | Matrices de proteína de dominios variables de inmunoglobulina de cadena pesada de camilidae. |
US7054297B1 (en) | 2000-12-28 | 2006-05-30 | Cisco Technology, Inc. | Distribution of packets to high data rate communications devices using multicast protocols |
US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
RU2420537C2 (ru) | 2001-01-17 | 2011-06-10 | Трабьон Фармасьютикалз Инк. | Слитые белки связывающий домен-иммуноглобулин |
CA2440582A1 (en) | 2001-03-09 | 2002-10-03 | Dyax Corp. | Serum albumin binding moieties |
US20060073141A1 (en) | 2001-06-28 | 2006-04-06 | Domantis Limited | Compositions and methods for treating inflammatory disorders |
WO2003002609A2 (en) | 2001-06-28 | 2003-01-09 | Domantis Limited | Dual-specific ligand and its use |
EP1425694A2 (en) | 2001-08-03 | 2004-06-09 | Medical Research Council | Method of identifying a consensus sequence for intracellular antibodies |
EP1433793A4 (en) | 2001-09-13 | 2006-01-25 | Inst Antibodies Co Ltd | METHOD FOR CREATING A CAMEL ANTIBODY LIBRARY |
JP2005289809A (ja) | 2001-10-24 | 2005-10-20 | Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) | 突然変異重鎖抗体 |
KR100599789B1 (ko) | 2001-12-03 | 2006-07-12 | 삼성에스디아이 주식회사 | 방열효율이 향상된 플라즈마 디스플레이 장치 및 그 제조방법 |
US20050214857A1 (en) | 2001-12-11 | 2005-09-29 | Algonomics N.V. | Method for displaying loops from immunoglobulin domains in different contexts |
EP1456237A2 (en) | 2001-12-21 | 2004-09-15 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Method for cloning of variable domain sequences |
EP1461085A2 (en) | 2002-01-03 | 2004-09-29 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Immunoconjugates useful for treatment of tumours |
CN1678634A (zh) | 2002-06-28 | 2005-10-05 | 多曼蒂斯有限公司 | 免疫球蛋白单个变体抗原结合区及其特异性构建体 |
US7004940B2 (en) | 2002-10-10 | 2006-02-28 | Ethicon, Inc. | Devices for performing thermal ablation having movable ultrasound transducers |
JP2006512910A (ja) | 2002-10-23 | 2006-04-20 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ | A34およびa33様3dna、タンパク質、それらに対する抗体、ならびに同一物を使用した治療方法 |
CA2505326A1 (en) | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Ablynx N.V. | Camelidae antibodies against immunoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders |
EP1558645B1 (en) | 2002-11-08 | 2011-07-27 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies in pharmaceutical composition adapted for inhalation |
GB0230203D0 (en) | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Fc fusion |
EP1578842B1 (en) | 2002-12-31 | 2009-10-07 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Hydrolytically stable maleimide-terminated polymers |
MXPA05006043A (es) | 2003-01-10 | 2006-01-30 | Ablynx Nv | Polipeptidos terapeuticos, homologos de los mismos, fragmentos de los mismos y para uso al modular la agregacion mediada de plaquetas. |
US7461263B2 (en) | 2003-01-23 | 2008-12-02 | Unspam, Llc. | Method and apparatus for a non-revealing do-not-contact list system |
ES2315664T3 (es) | 2003-06-30 | 2009-04-01 | Domantis Limited | Anticuerpos de dominio unico (dab) pegilados. |
AU2003264053A1 (en) | 2003-08-12 | 2005-03-10 | William M. Yarbrough | Treatment for acne vulgaris and method of use |
ATE485307T1 (de) | 2003-11-07 | 2010-11-15 | Ablynx Nv | Camelidae schwere ketten antikörper vhhs gegen epidermalen wachstumfaktor rezeptor (egfr) und ihre verwendung |
US7207410B2 (en) | 2004-04-29 | 2007-04-24 | Daimlerchrysler Corporation | Apparatus and method for enhanced impact sensing |
US7180370B2 (en) | 2004-09-01 | 2007-02-20 | Micron Technology, Inc. | CMOS amplifiers with frequency compensating capacitors |
US7563443B2 (en) | 2004-09-17 | 2009-07-21 | Domantis Limited | Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof |
EP1814917A2 (en) | 2004-10-13 | 2007-08-08 | Ablynx N.V. | Single domain camelide anti-amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenerative neural diseases such as alzheimer's disease |
EP1844073A1 (en) | 2005-01-31 | 2007-10-17 | Ablynx N.V. | Method for generating variable domain sequences of heavy chain antibodies |
ATE537188T1 (de) | 2005-05-18 | 2011-12-15 | Ablynx Nv | Serumalbuminbindende proteine |
SI2444424T1 (sl) | 2005-05-20 | 2018-10-30 | Ablynx N.V. | Izboljšana protitelesa (TM) za zdravljenje z agregacijo posredovanih motenj |
JP2010500876A (ja) | 2006-08-18 | 2010-01-14 | アブリンクス エン.ヴェー. | Il−6媒介性シグナル伝達に関連する疾患及び障害の治療のための、il−6rに指向性を有するアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド |
CN101646689A (zh) | 2006-09-08 | 2010-02-10 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 具有长半衰期的血清清蛋白结合蛋白 |
US20100034194A1 (en) | 2006-10-11 | 2010-02-11 | Siemens Communications Inc. | Eliminating unreachable subscribers in voice-over-ip networks |
CA2666511A1 (en) | 2006-10-11 | 2008-04-17 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences that bind to serum proteins in a manner that is essentially independent of the ph, compounds comprising the same, and uses thereof |
US20080267949A1 (en) | 2006-12-05 | 2008-10-30 | Ablynx N.V. | Peptides capable of binding to serum proteins |
WO2008101985A2 (en) | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against vascular endothelial growth factor and polypeptides comprising the same for the treatment of conditions and diseases characterized by excessive and/or pathological angiogenesis or neovascularization |
KR20120125601A (ko) | 2007-05-24 | 2012-11-16 | 아블린쓰 엔.브이. | Rank-l에 대한 아미노산 서열, 및 이를 포함하는 골 질환 및 장애 치료용 폴리펩티드 |
AU2008328785A1 (en) | 2007-11-27 | 2009-06-04 | Ablynx N.V. | Method for obtaining polypeptide constructs comprising two or more single domain antibodies |
EP2417163B1 (en) | 2009-04-10 | 2019-02-27 | Ablynx N.V. | Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders |
CN102180950B (zh) * | 2011-02-24 | 2013-06-05 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种人源性电压门控钾通道1.3免疫原性肽段及其用途 |
MX350074B (es) | 2011-06-23 | 2017-08-25 | Ablynx Nv | Tecnicas para predecir, detectar, y reducir la interferencia de proteinas no especificas en ensayos que implican dominios variables individuales de inmunoglobulina. |
EP4218933A1 (en) | 2011-06-23 | 2023-08-02 | Ablynx NV | Serum albumin binding proteins |
-
2014
- 2014-10-21 NL NL2013661A patent/NL2013661B1/en active
-
2015
- 2015-06-18 EP EP15732186.0A patent/EP3157955B1/en active Active
- 2015-06-18 WO PCT/EP2015/063748 patent/WO2015193452A1/en active Application Filing
- 2015-06-18 JP JP2016573861A patent/JP6822848B2/ja active Active
- 2015-06-18 AU AU2015276084A patent/AU2015276084B2/en not_active Ceased
- 2015-06-18 CN CN201580044273.9A patent/CN106573982B/zh active Active
- 2015-06-18 US US15/319,737 patent/US11149086B2/en active Active
- 2015-06-18 CA CA2951443A patent/CA2951443A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-08-28 JP JP2020144116A patent/JP7366865B2/ja active Active
-
2021
- 2021-02-22 AU AU2021201150A patent/AU2021201150A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6822848B2 (ja) * | 2014-06-18 | 2021-01-27 | アブリンクス エン.ヴェー. | Kv1.3結合免疫グロブリン |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
BIOCHEMICAL JOURNAL, vol. 375, JPN6019016259, 2003, pages 769 - 775, ISSN: 0005051808 * |
DEVELOPMENTAL NEUROBIOLOGY, vol. 73, JPN6019016257, 2013, pages 841 - 855, ISSN: 0005051807 * |
JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY FOR MASS SPECTROMETRY, vol. 7, JPN6019016263, 1996, pages 1075 - 1080, ISSN: 0005051809 * |
PLOS ONE, vol. Vol.7, No.4,e36379, JPN6019016260, 2012, ISSN: 0005051810 * |
THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 290, no. 25, JPN6019016262, May 2015 (2015-05-01), pages 15487 - 15495, ISSN: 0005051811 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2015276084A1 (en) | 2016-12-15 |
CA2951443A1 (en) | 2015-12-23 |
CN106573982A (zh) | 2017-04-19 |
JP2017519503A (ja) | 2017-07-20 |
WO2015193452A1 (en) | 2015-12-23 |
EP3157955B1 (en) | 2022-03-16 |
AU2021201150A1 (en) | 2021-03-11 |
EP3157955A1 (en) | 2017-04-26 |
NL2013661B1 (en) | 2016-10-05 |
US20170137512A1 (en) | 2017-05-18 |
US11149086B2 (en) | 2021-10-19 |
JP6822848B2 (ja) | 2021-01-27 |
JP7366865B2 (ja) | 2023-10-23 |
CN106573982B (zh) | 2021-11-19 |
AU2015276084B2 (en) | 2021-03-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7366865B2 (ja) | Kv1.3結合免疫グロブリン | |
US11919966B2 (en) | Methods for inhibiting tumor growth or treating cancer by administering an immunoglobulin single variable domain that binds glucocorticoid-induced TNFR family-related receptor (GITR) | |
US20240199740A1 (en) | T cell recruiting polypeptides capable of binding cd123 and tcr alpha/beta | |
JP6159684B2 (ja) | Il−6r関連疾患及び障害の治療のためのil−6rに指向性を有する改善されたアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド | |
CN107098971B (zh) | 抗il-17a,il-17f和/或il17-a/f的氨基酸序列以及包含其的多肽 | |
CN108473561B (zh) | 抑制cd40l的多肽 | |
RU2775063C2 (ru) | Рекрутирующие т-клетки полипептиды, способные связывать cd123 и tcr альфа/бета | |
BR122024012205A2 (pt) | Polipeptídeos de recrutamento de células t capazes de se ligarem ao cd123 e tcr alfa/beta |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200924 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200924 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210312 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211005 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211221 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220224 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220404 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220726 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221011 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230912 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231011 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7366865 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |