JP2020090532A - 異所性脂肪蓄積治療用ａ３アデノシン受容体リガンド - Google Patents

Abstract

【課題】本開示は、特に脂肪肝における、異所性脂肪蓄積を低減するＡ３ＡＲリガンドに関する。また、本開示によれば、このような脂肪蓄積を低減する医薬組成物の製造用Ａ３ＡＲリガンドの使用、このリガンドを使用した脂肪蓄積に伴う症状を治療する方法、及び、異所性脂肪蓄積に関連する症状を治療するための、前記リガンドを含む医薬組成物と、当該医薬組成物の使用のための指示書、とを具えるキット、を提供する。【解決手段】一の実施例において、本開示は、脂肪肝、特に、非アルコール性脂肪性肝臓疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療用の、２−クロロ−Ｎ６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ、ＣＦ１０２）の使用を提供している。【選択図】なし

Description

本開示は、Ａ_３ＡＲリガンドの医学的な使用に関する。

本開示の主題に背景として関連すると考えられる文献は以下の通りである。
国際特許出願公開ＷＯ０９／０５０７０７
国際特許出願公開ＷＯ２０１３／１１１１３２

本明細書における上記文献の認識は、ここに開示された主題の特許性に関連することを意味するものではない。

［発明の背景］
Ｇｉタンパク質に関連する細胞表面Ａ_３アデノシン受容体（Ａ_３ＡＲ）は、癌細胞や炎症細胞、また、関節リウマチやクローン病などの様々な自己免疫炎症疾患を罹患している患者から取り出した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）中で過剰発現する。

Ａ_３ＡＲアゴニスト２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ）などの特異性の高いリガンドを用いたＧｉタンパク質に関連する細胞表面Ａ_３アデノシン受容体（Ａ_３ＡＲ）の活性化は、国際特許出願公開ＷＯ０９／０５０７０７に開示されているように、肝細胞増殖を誘発することが分かっている。

さらに、国際特許出願公開ＷＯ２０１３／１１１１３２は、肝細胞癌（ＨＣＣ）の治療および、慢性肝臓疾患を有する患者の肝臓機能の維持にＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡを使用することを記載している。

本開示は、第１の態様によれば、患者の組織内の異所性脂質蓄積低減用のＡ_３アデノシン受容体（Ａ_３ＡＲ）リガンドを提供している。

本開示は、第２の態様によれば、患者の細胞内の異所性脂質蓄積を低減する方法を提供しており、この方法は、ある量のＡ_３ＡＲリガンドを患者に投与するステップを具える。

本開示は、第３の態様によれば、異所性脂質蓄積を低減する医薬組成物の製造用のＡ_３ＡＲリガンドの使用を提供している。

さらに、本開示は第４の態様によれば、薬学的に受容可能なキャリアと、活性成分として患者の組織内の異所性脂質蓄積を低減するのに有効な量のＡ_３ＡＲリガンドを含む、医薬組成物を提供する。

最後に、本開示は第５の態様によれば、Ａ_３ＡＲリガンドを含む医薬組成物と、対象の組織中の異所性脂質蓄積を低減する医薬組成物の使用指示とを具える、キットを提供している。

いくつかの実施例では、Ａ_３ＡＲリガンドが、肝臓内の脂肪蓄積の低減に使用される。

更なるいくつかの実施例では、Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアゴニスト、好ましくは、対象の肝臓内の脂肪蓄積を治療に使用する、あるいは対象の肝臓内の脂肪蓄積に関する症状の治療に使用する、２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ、ここでＣＦ１０２ともいう）である。

本明細書に開示されている主題をより良く理解するために、また、この主題が実際どのように実行されるのかを例示するために、添付の図面を参照して、非限定的な例として、以下に実施例を説明する。
図１は、治療を行わなかったマウス（ビークル）と比較して、３週間毎日ＣＦ１０２を投与したマウスのＮＡＳＨ肝臓における肝臓対身体の体重比の低下を示す棒グラフである。 図２Ａと２Ｂは、治療を行わなかったマウス（ビークル）と比較して、３週間ＣＦ１０２を毎日投与したＮＡＳＨマウスにおける、血漿ＡＬＴレベル（図２Ａ）と、トリグリセリドレベル（図２Ｂ）の低下を示す棒グラフである。 図３Ａ乃至３Ｄは、ＣＦ１０２で治療した群から採取した組織学的肝臓部分であり、×５０及び×２００（それぞれ、図３Ａと３Ｂ）、及びビークル（ＤＭＳＯ）処理した群を示す（それぞれ、図３Ｃと３Ｄ）。 図４は、濃度２００μｇ／ｋｇのＣＦ１０２で治療した後のＮＡＦＬＤ活動性スコアの減少を示すグラフである。 図５は、ビークルに比較した炎症ＮＡＳスコアの低減における、２００μｇ／ｋｇの濃度におけるＣＦ１０２の効果を示す棒グラフである。

本開示は、２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ、ここでＣＦ１０２ともいう）であり、Ａ_３ＡＲに高い親和性と選択性をもつＡ_３アデノシン受容体（Ａ_３ＡＲ）アゴニストが、マウス実験モデルにおける非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の改善を誘導するとの発見に基づくものである。この予想されない改善は、とりわけ、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）における肝臓重量対体重の低減によって、終点と考えられるＮＡＦＬＤスコア（図４）によって、及び、コントロールビークルに比較したＮＡＳ炎症スコアの低減（図５）によって、示される。

これらの発見に基づいて、発明者らは、Ａ_３ＡＲアゴニスト又はＡ_３ＡＲアロステリック強化剤であるＡ_３ＡＲの活性化因子（図４）が、異所部位における脂肪／脂質の蓄積を低減する有効なツールであると、結論づけられている。

したがって、本発明の第１の態様によれば、本開示は、例えば、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、特に非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）といった、脂肪蓄積に関連する症状を有する対象の組織中の、異所性脂肪蓄積の低減に使用するＡ_３ＡＲリガンドを提供している。

以下の説明において、異所性脂質蓄積の低減に使用するＡ_３ＡＲリガンドに言及する場合は、Ａ_３ＡＲリガンドの投与による異所性脂質蓄積を低減する方法に；異所性脂質蓄積を低減する医薬組成物の製造に使用するＡ_３ＡＲリガンドの使用に；薬学的に許容可能なキャリアと、活性成分として異所性脂質蓄積を低減するのに有効な量のＡ_３ＡＲリガンドとに；また、この医薬組成物と、医薬組成物を異所性脂質蓄積の低減に使用する指示書とを具えるキットに；及ぶと解釈するべきである。

本開示のコンテキストにおいて、脂質蓄積に言及する場合は、脂肪蓄積と同じ意味であると解するべきである。本発明のコンテキストにおいて、異所性脂肪蓄積は、脂質、特に、脂肪組織以外の組織及び／又は臓器、すなわち、通常の（健康な）状態にある脂質（脂肪／脂肪細胞）のない細胞中のトリグリセリドの沈着又は蓄積を表すのに使用される。異所性脂肪沈着は、腹部の脂肪蓄積（皮下／周辺脂肪沈着とは反対に）と認識され、肝臓や、骨格筋、心臓、及び膵臓に生じる。異所性脂肪沈着は望ましくなく、インスリン抵抗などの健康合併症を引き起こすため、その予防又は低減が望まれている。

好ましい実施例では、Ａ_３ＡＲリガンドを肝臓の脂質蓄積の低減に用いている。

いくつかの実施例では、脂質蓄積の低減が、ＮＡＦＬＤ及び／又はＮＡＳＨを罹患していると診断された対象者の人数である。

ＮＡＦＬＤは、必ずしも炎症があるわけではなく、脂肪肝が炎症がないままであることもある。さらに、脂肪肝では、肝臓は正常に機能し、細胞内の脂肪の蓄積を除いて、顕微鏡では正常に見える。さらに、ＮＡＦＬＤ肝臓では、血液検査範囲通常正常であるか、肝臓で作られる二つの酵素、血清ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）及び／又は血清ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）に若干上昇がみられるだけである。

異所性脂肪蓄積状態の下に通常蓄積する脂肪は、限定するものではないが、グリセライド（モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド）を含み、コレステロールなどのステロールも含む。

一の実施例では、脂質沈着の低減は、少なくとも組織中のトリグリセリド（ＴＧ）のレベルの低減によって示される。このコンテキストでは、ＴＧレベルの低減は、医療パラメータの下で有意であるとして決めるべきである。これは、少なくとも一の前回の測定時点（一日またはそれ以上、１週間又はそれ以上、又は、１カ月またはそれ以上）のＴＧレベルに比べて、ＴＧレベルの少なくとも５％の低減を含む。

脂質が沈着した組織が肝臓である場合、脂質沈着の低減は、以下のうち一つによって表すことができる：
肝臓重量対体重比の低減
低減したアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル
炎症についてのＮＡＳスコアの低減。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲリガンドが非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）後の治療に使用される。

ＮＡＦＬＤは、アルコール依存歴のない患者の肝臓に脂肪が蓄積している状態である。ＮＡＦＬＤは、単純な脂肪変性と、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に分類される。ＮＡＳＨでは、脂肪変性のみならず小葉内炎症と肝細胞肥大が存在し、しばしば、進行性繊維症を伴う。本開示のコンテキストでは、上述の、すなわち、単純な脂肪変性、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、小葉内炎症、進行性繊維症のうちのいずれかの治療であり、各々が、本開示による独立した実施例を構成している。

長期にわたるＮＡＳＨは、肝硬変に進行することがあり、肝細胞がん（ＨＣＣ）になることがある。したがって、いくつかの実施例では、本開示はＮＡＦＬＤ、あるいは特にＮＡＳＨの治療による肝硬変や肝細胞癌（ＨＣＣ）などの肝臓疾患の予防を提供する。

したがって、一の実施例では、本開示は、肝臓疾患を発症しやすい体質の対象における肝臓疾患を予防するためのＡ_３ＡＲリガンドの使用を提供する。この肝臓疾患を発症する対象の体質は、肝臓内に蓄積された脂肪の存在又はＮＡＦＬＤの存在によって決まる。

本開示のコンテキストにおいて、「Ａ_３アデノシン受容体リガンド」又は「Ａ_３ＡＲリガンド」は、直接的（例えば、受容体結合部位を介して）又は間接的（例えば、アロステリック結合部位を介して）に、Ａ_３アデノシン受容体の活性を強化できる化合物を意味し、これには、Ａ_３アデノシン受容体の全体的活性化又は部分的活性化が含まれる。Ａ_３ＡＲリガンドは、このように、活性化が結合部位を介しているか、アロステリック結合部位を介しているかにかかわらず、Ａ_３ＡＲの活性の強化を介してプライム効果を発揮する分子である。これは、その投与量で投与されることを意味し、Ａ_３ＡＲのみに実質的に影響を与える。

一の実施例では、「Ａ_３アデノシン受容体リガンド」が、Ａ_３ＡＲアゴニストである。

別の実施例では、「Ａ_３アデノシン受容体リガンド」が、Ａ_３ＡＲアロステリック強化剤である。

「Ａ_３アデノシン受容体アゴニスト」又は「Ａ_３ＡＲアゴニスト」という場合、Ａ_３アデノシン受容体に特異的に結合できるリガンドを意味すると理解すべきである、これによって、完全にあるいは部分的に、アデノシン受容体を活性化する。Ａ_３ＡＲアゴニストは、したがってＡ_３ＡＲの結合又は活性化を介してプライム効果を発揮する分子である。このことは、その投与量で、実質的に、Ａ_３ＡＲのみに結合し、Ａ_３ＡＲのみを活性化することを意味する。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲアゴニストは、１００ｎＭより少ない、典型的には５０ｎＭより少ない、好ましくは２０ｎＭより少ない、より好ましくは１０ｎＭより少ない、理想的には５ｎＭより少ない範囲で、ヒトＡ_３ＡＲへの結合親和性（Ｋｉ）を有する。特に好ましくは、２ｎＭより少ない、望ましくは１ｎＭより少ない、ヒトＡ_３ＡＲへのＫｉを有するＡ_３ＡＲアゴニストである。

しかしながら、いくつかのＡ_３ＡＲアゴニストも、低い親和性（すなわち、より高いＫｉ）で、その他の受容体と相互作用し、その受容体を活性化させることができる。

分子は、そのＡ_３ＡＲに対する親和性が、その他のアデノシン受容体（すなわち、Ａ_１、Ａ_２ａ及びＡ_２ｂ）に対する親和性より、少なくとも３倍（すなわち、Ａ_３ＡＲに対するＫｉが少なくとも３倍低い）、好ましくは１０倍、望ましくは２０倍、最も好ましくは５０倍大きい場合は、本発明のコンテキストにおけるＡ_３ＡＲアゴニストと考えられるであろう（すなわち、Ａ_３ＡＲの結合又は活性化を介してプライム効果を発揮する分子）。

ヒトＡ_３ＡＲに対するＡ_３ＡＲの親和性、並びにその他のヒトアデノシン受容体に対する相対的な親和性は、結合アッセイなどのアッセイの数によって決まる。結合アッセイの例には、受容体を含むメンブレンを提供して、Ａ_３ＡＲアゴニストの結合した放射性アゴニストを置換する能力を測定するステップと；各ヒトアデノシン受容体を表示する細胞を利用して、機能性アッセイにおいて、そのケースがｃＡＭＰレベルの上昇又は下降を通じて測定したアデニル酸シクラーゼに対する効果などの、下流シグナル伝達事象である場合に、Ａ_３ＡＲアゴニストの活性化又は不活性化能力を測定するステップと；その他のステップを具える。Ａ_３ＡＲアゴニストの投与レベルが上がって、血液レベルがＡ_１、Ａ_２ａ、Ａ_２ｂアデノシン受容体のＫｉのものに近いレベルに達する場合、Ａ_３ＡＲの活性化に加えて、このような投与に続いてこれらの受容体の活性化が生じる。したがって、Ａ_３ＡＲアゴニストは、血液レベルが実質的にＡ_３ＡＲのみが活性化されるであろうというレベルである投与量で投与することが好ましい。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲアゴニストがプリン骨格を持つ分子である。いくつかの実施例では、化合物を含むプリンが、受け入れ可能な構造−機能活性アッセイに基づいてＡ_３ＡＲアゴニストとして測定できる。

いくつかのＡ_３ＡＲアゴニストとその製造方法の特徴は、とりわけ、ＵＳ５，６８８，７７４に詳細に述べられている。ＵＳ５，７７３，４２３、ＵＳ５，５７３，７７２、ＵＳ５，４４３，８３６、ＵＳ６，０４８，８６５、ＷＯ９５／０２６０４、ＷＯ９９／２０２８４、ＷＯ９９／０６０５３、ＷＯ９７／２７１７３及びＷＯ０１／１９３６０は、全て引用により本明細書に組み込まれている。

本開示のいくつかの実施例によると、Ａ_３ＡＲアゴニストが一般式（Ｉ）の範囲に入るプリン誘導体である：

ここで、Ｒ_１１は、アルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、又はシアノアルキル、又は以下の一般式（ＩＩ）の基を表す＊

ここで、
Ｙは、酸素、硫黄、又はＣＨ_２であり；
Ｘ_１１はＨ、アルキル、Ｒ^ｅＲ^ｆＮＣ（＝Ｏ）−、又はＨＯＲ^ｇ−であり、ここで、
Ｒ^ｅ及びＲ^ｆは、同じであっても異なっていてもよく、水素、アルキル、アミノ、ハロアルキル、アミノアルキル、ＢＯＣ−アミノアルキル、及びシクロアルキルからなる群から選択されるか、あるいは、互いに結合して、２乃至５の炭素原子を含む複素環を形成している；及び
Ｒ^ｇは、アルキル、アミノ、ハロアルキル、アミノアルキル、ＢＯＣ−アミノアルキル、及びシクロアルキルからなる群から選択される；
Ｘ_１２は、Ｈ、ヒドロキシル、アルキルアミノ、アルキルアミド、又はヒドロキアルキルであり；
Ｘ_１３とＸ_１４は、独立して、水素、ヒドロキシル、アミノ、アミド、アジド、ハロ、アルキル、アルコキシ、カルボキシ、ニトリロ、ニトロ、トリルオロ、アリール、アルカリル、チオ、チオエステル、チオエーテル、−ＯＣＯＰｈ、−ＯＣ（＝Ｓ）ＯＰｈ、またはＸ_１３とＸ_１４の両方が＞Ｃ＝Ｓに結合して５員環を形成する酸素である、又はＸ_１２とＸ_１３が式（ＩＩＩ）の環を形成している：

ここで、Ｒ’とＲ”は、独立してアルキル基を表す；
Ｒ_１２は、水素、ハロ、アルキルエーテル、アミノ、ヒドラジド、アルキルアミノ、アルコキシ、チオアルコキシ、ピリジルチオ、アルケニル、アルキニル、チオ、及びアルキルチオからなる群から選択され；
Ｒ_１３は、式 −ＮＲ_１５Ｒ_１６の基であり、
ここで、
Ｒ_１５は、水素原子または、アルキル、Ｏ、Ｓ、又は上述の意味を持つＲ^ｅを伴うＮＲ^aであるＺで置換されたらアルキル又はアリール−ＮＨ−Ｃ（Ｚ）−、から選択された基であり；ここで、Ｒ_１５が水素であるとき
Ｒ_１６は、Ｒ−とＳ−１−フェニルエチル、ベンジル、フェニルエチル、非置換の、又は、一またはそれ以上の位置で、アルキル、アミノ、ハロ、ハロアルキル、ニトロ、ヒロドキシル、アセトアミド、アルコキシ、又はスルホン酸又はその塩からなる群から選択された置換基で置換されたアニリド基からなる群から選択される、ベンゾジオキサンメチル、フルリル、Ｌ−プロピララニル−アミノベンジル、β−アラニルアミノ−ベンジル、Ｔ−ＢＯＣ−β−アラニルアミノベンジル、フェニルアミノ、カルバモイル、フェノキシ又はシクロアルキルである；又は
Ｒ_１６は、以下の式（ＶＩ）の基である

または、Ｒ_１５がアルキル又はアリール−ＮＨ−Ｃ（Ｚ）−であるとき、Ｒ_１６は、ヘテロアリール−ＮＲ^a―Ｃ（Ｚ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｚ）−、アルカリル−ＮＲ^a−Ｃ（Ｚ）−、アルカリル−Ｃ（Ｚ）−、アリール−ＮＲ−Ｃ（Ｚ）−、及びアリール−Ｃ（Ｚ）−からなる群から選択され；Ｚは、酸素、硫黄、又はアミンを表す。

例示的なＡ_３ＡＲアゴニスト（ＵＳ５，６８８，７７４、コラム４、６７行乃至コラム６、１６行；コラム５、４０乃至４５行；コラム６、２１乃至４２行；コラム７、１乃至１１行；コラム７、３４乃至３６行；及びコラム７、６０乃至６１行）は：
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチルアデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−ヒドロキシエチルアデニン；
Ｒ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アデニン；
Ｓ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジルアデニン−９−イル）酢酸；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−（３−シアノプロピル）アデニン；
２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチルアデニン；
２−アミノ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチルアデニン；
２−ヒドラジド−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチルアデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−２−メチルアミノ−９−メチルアデニン；
２−ジメチルアミノ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチルアデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチル−２−プロピルアミノアデニン；
２−ヘキシルアミノ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチルアデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−２−メトキシ−９−メチルアデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチル−２−メチルチオアデニン；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−メチル−２−（４−ピリジルチオ）アデニン；
（１Ｓ，２Ｒ、３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−アミノ−２−フェニルエチルアミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）シクロペンタン−１，２，３−トリオール；
（１Ｓ，２Ｒ、３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−アミノ−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）シクロペンタン−１，２，３−トリオール；
（±）−９−[２α、３α−ジヒドロキシ−４β−（Ｎ−メチルカルバモイル）シクロペント−１β−イル）]−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
２−クロロ−９−（２’−アミノ−２’，３’−ジデオキシ−β−Ｄ−５’−メチル−アラビノ−フロナミド）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）アデニン；
２−クロロ−９−（２’，３’−ジデオキシ−２’−フルオロ−β−Ｄ−５’−メチル−アラビノフロナミド）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）アデニン；
９−（２−アセチル−３−デオキシ−β−Ｄ−５−メチル−リボフロナミド）−２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
２−クロロ−９−（３−デオキシ−２−メタンスルホニル−β−Ｄ−５−メチル−リボフロナミド）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
２−クロロ−９−（３−デオキシ−β−Ｄ−５−メチル−リボフロナミド）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
２−クロロ−９−（３，５−１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキシル−β−Ｄ−５−リボフラノシル）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
２−クロロ−９−（２，３’−Ｏ−チオカルボニル−β−Ｄ−５−メチル−リボフロナミド）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
９−（２−フェノキシチオカルボニル−３−デオキシ−β−Ｄ−５−メチル−リボフロナミド）−２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
１−（６−ベンジルアミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−１−デオキシ−Ｎ，４−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシデュロナミド；
２−クロロ−９−（２，３−ジデオキシ−β−Ｄ−５−メチル−リボフロナミド）−Ｎ^６ベンジルアデニン；
２−クロロ−９−（２’−アジド−２’、３’−ジデオキシ−β−Ｄ−５’−メチル−アラビノ−フロナミド）−Ｎ^６ベンジルアデニン；
２−クロロ−９−（β−Ｄ−５−エリトロフラノシド）−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）アデニン；
Ｎ^６−（ベンゾジオキサンメチル）アデノシン；
１−（６−フルフリルアミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−１−デオキシ−Ｎ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシデュロナミド；
Ｎ^６−［３−（Ｌ−プロリルアミノ）ベンジル］アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド；
Ｎ^６−［３−（β−アラニルアミノ）ベンジル］アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド；
Ｎ^６−［３−（Ｎ−Ｔ−Ｂｏｃ−β−アラニルアミノ）ベンジル］アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド；
６−（Ｎ’−フェニルヒドラジニル）プリン−９−β−リボフラノシド−５’−Ｎ−メチルウロナミド；
６−（Ｏ−フェニルヒドロキシアミノ）プリン−９−β−リボフラノシド−Ｎ−メチルウロナミド；
９−（β−Ｄ−２’，３’−ジデオキシエリトロフラノシル）−Ｎ^６−［３−（β−アラニルアミノ）ベンジル］アデノシン；
９−（β−Ｄ−エリトロフラノシド）−２−メチルアミノ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデニン；
２−クロロ−Ｎ−（３−ヨードベンジル）−９−（２−テトラヒドロフリル）−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−クロロ−（２’−デオキシ−６’−チオ−Ｌ−アラビノシル）アデニン；及び
２−クロロ−（６’−チオ−Ｌ−アラビノシル）アデニン。

ＵＳ５，７７３，４２３に開示されているその他の例示的なＡ_３ＡＲアゴニストは、式（Ｖ）の化合物である：

ここで、
Ｘ_１は、Ｒ^ａＲ^ｂＮＣ（＝Ｏ）であり、Ｒ^ａとＲ^ｂは同じであるか異なっていてもよく、水素、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アミノ、Ｃ_１−Ｃ_１０ハロアルキル、Ｃ_１−Ｃ_１０アミノアルキル、及びＣ_３−Ｃ_１０シクロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ_２は、水素、ハロ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシ、アミノ、Ｃ_２−Ｃ_１０アルケニル、及びＣ_２−Ｃ_１０アルキニルからなる群から選択され；
Ｒ_５は、Ｒ−及びＳ−１−フェニルエチル、非置換ベンジル基、及び一またはそれ以上の位置で、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アミノ、ハロ、Ｃ_１−Ｃ_１０ハロアルキル、ニトロ、ヒドロキシ、アセトアミド，Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシ及びスルホからなる群から選択された置換基で置換されたベンジル基、である。

より特定の化合物には、上述の式のものがあり、ここで、Ｒ^ａとＲ^ｂは同じであるか異なっていてもよく、特に、Ｒ_２が水素又はハロ、特に水素である場合は、水素とＣ_１−Ｃ_１０アルキルからなる群から選択される。

さらに特定の化合物は、特に、Ｒ_５が非置換ベンジルである場合、Ｒ^ａが水素であり、Ｒ２は水素である。

さらに特定の化合物は、このような化合物であり、Ｒ^ｂがＣ_１−Ｃ_１０アルキル又はＣ_３−Ｃ_１０シクロアルキル、特に、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、より好ましくはメチルである。

特に好ましい化合物は、Ｒ^ａが水素、Ｒ^ｂがＣ１−Ｃ１０アルキル又はＣ３−Ｃ１０シクロアルキルであり、Ｒ_５がＲ−又はＳ−１−フェニルエチルか、一またはそれ以上の位置で、ハロ、アミノ、アセトアシド、Ｃ_１−Ｃ_１０ハロアルキル、及びスルホからなる群から選択された置換基で置換されたベンジルであり、ここで、スルホ誘導体は、トリエチルアンモニウム塩などの、化合物である。

ＵＳ５，７７３，４２３に開示されている、特に好ましい化合物の例は、Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−２−メチルアミノ−９―［５（メチルアミド）−β−Ｄ−リボフラノシル］−アデニンである。これは、また、Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド、あるいは、１−デオキシ−１−［６［［（３−ヨードベンジル）メチル］アミノ］−９Ｈ−プリン−９−イル−Ｎ−メチル−Ｄ−リボフラヌロンアミドとして知られており、又は略したＩＢ−ＭＥＣＡともいう。

さらにＲ_２が、式Ｒｄ−Ｃ＝Ｃ−，ここで、Ｒ^ｄがＣ_１−Ｃ_８アルキルである、Ｃ_２−Ｃ_１０アルケニレンであるこれらの化合物は、特別にＵＳ５，７７３，４２３にも記載されている。

また、特別なのは、Ｒ_２が水素以外である化合物であり、特に、Ｒ_２がハロ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルアミノ、又はＣ_１−Ｃ_１０アルキルチオであるものであり、特に好ましいのは、追加的に、Ｒ^ａが水素、Ｒ^ｂがＣ_１−Ｃ_１０アルキル、及び／又はＲ_５が置換ベンジルである化合物である。

米国特許ＵＳ５，７７３、４２３に開示されている更なる例示的Ａ_３ＡＲアゴニストは、式（ＶＩ）−を有するキサンチン−７−リボサイドで修飾されている。

ここで、
ＸはＯであり；
Ｒ_６は、Ｒ^ａＲ^ｂＮＣ（＝Ｏ）、ここで、Ｒ^ａとＲ^ｂは同じであるか異なっていてもよく、水素、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アミノ、Ｃ_１−Ｃ_１０ハロアルキル、Ｃ_１−Ｃ_１０アミノアルキル、及びＣ_３−Ｃ_１０シクロアルキルからなる群から選択される；
Ｒ_７とＲ_８は、同じであるか異なっていてもよく、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、Ｒ−及びＳ−１−フェニルエチル、非置換ベンジル基、及び一またはそれ以上の位置で、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アミノ、ハロ、Ｃ_１−Ｃ_１０ハロアルキル、ニトロ、ヒドロキシ、アセトアミド、Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシ、及びスルホからなる群から選択された置換基で置換されたベンジル基であり；
Ｒ_９は、ハロ、ベンジル、フェニル、及びＣ_３−Ｃ_１０シクロアルキルからなる群から選択される。

ＷＯ９９／０６０５３は、実施例に以下から選択された１９−３３の化合物を開示している：
Ｎ^６−（４−ビフェニル−カルボニルアミノ）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（２，４−ジクロロベンジル−カルボニルアミノ）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（４−メトキシフェニル−カルボニルアミノ）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド;
Ｎ^６−（４−クロロフェニル−カルボニルアミノ）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド;
Ｎ^６−（フェニル−カルボニルアミノ）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（ベンジルカルバモイルアミノ）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（４−スルホンアミド−フェニルカルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（４−アセチル−フェニルカルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（（Ｒ）−α−フェニルエチルカルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（（Ｓ）−α−フェニルエチルカルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド
Ｎ^６−（５−メチル−イソキサゾール−３−イル−カルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（（１，３，４−チアジアゾール−２−イル−カルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−（４−ｎ−プロポキシ−フェニルカルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；
Ｎ^６−ビス−（４−ニトロフェニルエチルカルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド；及び
Ｎ^６−ビス−（５−クロロ−ピリジン−２−イル−カルバモイル）−アデノシン−５’−Ｎ−エチルウロナミド。

特に開示されている化合物には：
２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−９−［５−（メチルアミド）−β−Ｄ−リボフラノジル］−アデニン、これは、２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド、略してＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡとも呼ばれる；
Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−２−メチルアミノ−９−［５−（メチルアミド）−β−Ｄ−リボフラノジル］−アデニン、これは、Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド、または、１−デオキシ−１−［６−［［（３−ヨードフェニル）メチル］アミノ］−９Ｈ−プリン−９−イル]−Ｎ−メチル−Ｄ−リボフランウロナミド、あるいは略してＩＢ−ＭＥＣＡとも呼ばれる；
Ｎ^６−２−（４−アミノフェニル）エチルアデノシン（ＡＰＮＥＡ）；
Ｎ^６−（４−アミノ−３−ヨードベンジル）アデノシン−５’−（Ｎ−メチルウロナミド）（ＡＢ−ＭＥＣＡ）；がある。

特定の一実施例では、本開示によるＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡが異所性脂質蓄積の低減に使用されている。

「Ａ３ＡＲアロステリック強化」という場合、その内因性リガンドまたはアゴニストの結合部位とは異なる、受容体のアロステリック部位におけるアロステリックエフェクタ分子の結合によって、受容体の活性化の正の制御、活性化、又は香料を意味するものと解するべきである。

一の実施例では、「強化」は、受容体のアロステリック部位へのエフェクタ化合物の結合、及び／又は、オルソステリック結合部位へのアデノシン又はＡ_３ＡＲの解離速度の低減による、Ａ_３アデノシン受容体の有効性における少なくとも１５％の上昇によってあらわされた受容体のエフェクタ化合物の効果を意味する。

一の実施例では、この強化は、「Ａ_３ＡＲアロステリックエンハンサー」又は、イミダゾキノリン誘導体である「Ａ_３ＡＲＡＥ」による。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲエンハンサー、又はイミダゾキノリン誘導体は、以下の一般式（ＶＩＩ）で表される：

ここで：
Ｒ_１は、芳香環において、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、ハロ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルカノール、ヒドロキシル、Ｃ_１−Ｃ_１０アシル、Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシル；Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシカルボニイ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシアルキル；Ｃ_１−Ｃ_１０チオアルコキシ；Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルエーテル、アミノ、ヒドラジド、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルアミノ、ピリジルチオ、Ｃ_２−Ｃ_１０アルケニル；Ｃ_２−Ｃ_１０アルキニル、チオ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルチオ、アセトアミド、スルホン酸からなる群から選択される１又はそれ以上の置換基で任意に置換されたアリール又はアルカリルを表し；又は、前記置換基は、前記アリールが非置換フェニル基でなければ、共にシクロアルキル又は前記アリールに融合したシクロアルケニルを形成でき、前記シクロアルキル又はシクロアルケニルは１又はそれ以上のヘテロ原子を含む。
Ｒ_２は、水素、又は、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１０アルケニル；Ｃ_２−Ｃ_１０アルキニル、Ｃ_４−Ｃ_１０シクロアルキル、Ｃ_４−Ｃ_１０シクロアルケニル、５ないし７員の複素環式芳香環、Ｃ_５−Ｃ_１５融合シクロアルキル、二環性芳香環又は複素環；Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルエーテル、アミノ、ヒドラジド、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルアミノ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシカルボニイ、Ｃ_１−Ｃ_１０アルカノール、Ｃ_１−Ｃ_１０アシル、Ｃ_１−Ｃ_１０チオアルコキシ、ピリジルチオ、チオ、及びＣ_１−Ｃ_１０アルキルチオ、アセトアミド及びスルホン酸；及びこれらの薬学的に許容可能な塩、からなる群から選択された置換基を表す。

いくつかの実施例によると、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_１置換基は、以下の一般式（ＶＩＩＩ）で表される：

ここで、ｎは０又は１−５から選択された整数であり；好ましくは、ｎは０、１、又は２である；及び
Ｘ_１とＸ_２は同じであっても異なっていてもよく、水素、ハロゲン、アルキル、アルカノール又はアルコキシ、インデニル、ｎが０で、Ｘ_１及びＸ_２が水素でない場合はピロリンから選択される。

さらなるいくつかの実施例では、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_１が、上述の式（ＶＩＩＩ）を有する置換基であり、ここで、同じであっても異なっていてもよく、水素、クロロ、メトキシ、メタノールから選択されるか、あるいは、式（ＶＩＩＩａ）又は（ＶＩＩＩｂ）を有する置換基である：

ここで、Ｙは、Ｎ又はＣＨから選択される。

更なるいくつかの実施例では、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_２が、Ｈ、Ｃ_１−_１０アルキル、Ｃ_４−_１０シクロアルキルから選択され、そのアルキル鎖は、直鎖又は分岐アルキルであってもよく、あるいは、４ないし７の員のシクロアルキル環を形成していてもよい。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_２が，５ないし７員の複素芳香環である。

いくつかの実施例では、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_２置換基が、Ｈ、ｎ−ペンチル、又は、以下の式（ＩＸ）を有する５員複素芳香環である：

ここで、Ｚは、Ｏ、Ｓ又はＮＨから選択され、好ましくはＯである。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_２が、一またはそれ以上の縮合環を具えており、特に、二環性の置換基を形成している。

本発明のコンテキストにおいて、この置換基を形成するのに使用できる二環性の化合物の非限定的な例は、ビシクロ［２．２．１］へプタン、ビシクロ［４．１．０］ヘプタン、ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−カルボキシル酸、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−カルボキシル酸、ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−２−カルボキシル酸、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−カルボキシル酸、及びビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシル酸である。

その他のいくつかの実施例によれば、Ａ_３ＡＲＡＥ中のＲ_２が２−シクロヘキサンと３−シクロヘキサンから選択される。

Ａ_３ＡＲのアロステリックエフェクタとして使用できる、特定のイミダゾキノリン誘導体は以下の通りである：
Ｎ−（４−メチル−フェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（４−メトキシ−フェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３、４−ジクロロ−フェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（４−クロロ−フェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３−メタノール−フェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（［３，４−ｃ］インダン）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（４−メトキシ−ベンジル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（１Ｈ−インドール−６−イル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（ベンジル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（フェニルエチル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−２−シクロヘプチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−２−フリル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−２−シクロブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−２−−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン
Ｎ−（３，４−ジクロロ−フェニル）−２−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン。

上述のイミダゾキノリン誘導体は、一方で、Ａ_１、Ａ_２Ａ、Ａ_２Ｂアデノシン受容体のオルソステリック結合部位に対して低い親和性と、またＡ_３アデノシン受容体のオルソステリック結合部位に対して低い親和性を示し、他方では、Ａ_３アデノシン受容体のアロステリック部位に対しては高い親和性を示している（引用によって組み込まれている国際特許出願第ＷＯ０７／０８９５０７号）ので、アロステリックエフェクタとみなされる。

本開示による、特に好ましいイミダゾキノリン誘導体は、アロステリックエンハンサーである、Ｎ−（３、４−ジクロロ−フェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（略してＬＵＦ６０００、あるいはＣＦ６０２ともいう）である。

本明細書に開示した一般式のコンテキストにおける様々な用語に関して以下の意味が考えられる。

用語「アルキル」は、本明細書では、１乃至１０の炭素原子、より好ましくは１乃至６の炭素原子を有する線形又は分岐炭化水素鎖を意味しており、限定するものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘプチル、オクチル、などを含む。

同様に、用語「アルケニル」と「アルキニル」は、それぞれ、２乃至１０又は３ないし１０の炭素原子、より好ましくは２ないし６又は３ないし６の炭素原子を有する線形又は分岐炭化水素鎖を意味しており、このアルケニルとアルキニルは、少なくとも一の不飽和結合を有する。

アルキル、アルケニル又はアルキニル置換基は、基を含むヘテロ原子で置換されていてもよい。したがって、明確に記載されていないが、アルキルチオ、アルコキシ、アルカノール、アルキルアミン、などの上記及び下記に定義したアルキルの変形は、アルケニルチオ、アルケニルオキシ、アルケノール、アルケニルアミン、あるいはそれぞれ、アルキニルチオ、アルキニルオキシ、アルキノール、 アルキニルアミンといった対応するアルケニル又はアルキニルの変形も含むと解するべきである。

用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）又は複数の縮合環（例えばナフチル又はアントリル）を有する炭素原子が５乃至１４の不飽和芳香カルボサイクリック族を意味する。

用語「アルカリル」は、アルキレン部分に好ましくは１乃至１０の炭素原子を有し、アリール部分に好ましくは６ないし１４の炭素原子を有する−アルキレン−アリール基を意味する。このようなアルカリル基の例には、ベンジル、フェネチル、などがある。

用語「置換アリール」は、１乃至３の上記に定義した置換基で置換された芳香部分を意味する。この分野の当業者には自明であるように、様々な置換基が考えられるが、いくつかの好ましい置換基には、限定するものではないが、ハロゲン、（置換）アミノ、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アシルオキシ又はアルカノール、スルホニル、スルフィニルがある。

用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨード、好ましくはクロロを意味する。

用語「アシル」は、基Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、並びに、アルキル−Ｃ（Ｏ）−を意味する。

用語「アルカノール」は、基−ＣＯＨ、並びに、ａｌｋ−ＯＨを意味し、「ａｌｋ」は、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン鎖を意味する。

用語「アルコキシ」は、本明細書では、−Ｏ−アルキルを意味しており、これは、限定するものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシなどを含む。

用語「アルキルチオ」は、本明細書では、−Ｓ−アルキルを意味しており、限定するものではないが、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、などを含む。

用語「アルコキシアルキル」は、本明細書では、−アルキル−Ｏ−アルキルを意味しており、限定するものではないが、メトキシメチル、エトキシメチル、ｎ−プロポキシメチル、イソプロポキシメチル、ｎ−ブトキシメチル、イソブトキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、などを含む。

用語「シクロアルキル」は、本明細書では、環状の炭化水素ラジカルを意味し、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、などを含む。

用語「アルコキシカルボニル」は、本明細書では、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキルを意味し、限定するものではないが、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、などを含む。

用語「融合シクロアルキル」は、本明細書では、単一元素（スピロ環部分を形成する）で、二つの相互に結合した原子で、あるいは一連の原子（橋頭）にわたって、結合されている少なくとも二つの脂肪族環を含む化合物又は置換基を意味する。この縮合環は、二環性、三環性、並びに多環性部分を含む。本開示のいくつかの実施例によれば、二環性の置換基が好ましい。

本開示は、また、上記に開示した化合物など、Ａ_３ＡＲリガンドの生理学的に受け入れ可能な塩を使用する。「生理学的に受け入れ可能な塩」とは、非毒性アルカリ金属、アルカリ土類金属、化学業界で通常使用されているアンモニウム塩を意味し、これはナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、バリウム、アンモニウム、及びプロタミン亜鉛塩を意味し、これらはこの分野で知られている方法で作成される。この用語はまた、非毒性酸付加塩も含んでおり、これは、通常リガンドを適切な有機酸又は無機酸と反応させて作成される。酸付加塩は、遊離塩基の生物学的効果と質的特性を維持しており、毒性がないか、さもなければ望ましくない。例としては、とりわけ、鉱酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタリン酸などがある。有機酸には、とりわけ、タルタル酸、酢酸、プロピオン酸、クエン酸、マレイン酸、マロン酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、グリコール酸、グルコン酸、ピルビン酸、コハク酸、サリチル酸及び、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸などのアリールスルホン酸がある。

Ａ_３ＡＲリガンドは、単回投与（１回の薬物治療）で、又は、数日、数週間、あるいは数カ月にわたる連続治療で投与することができる。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲリガンドが長期治療に使用される。本開示のコンテキストでは、長期治療は、少なくとも数日、数週間、又は数カ月に及ぶ治療窓にわたり、例えば、治療を開始する前に脂質の蓄積が検出された部分に医学的に優位なレベルの脂質が検出されなくなるまででと解するべきである。さらに、本開示のコンテキストにおいて、長期治療は、例えば、想定される治療終了時点のない長期の投与など、長期間処理に及ぶことがある。いくつかの実施例では、長期間治療は、時に、少なくとも１週間リガンドを毎日投与する、時に、少なくとも２、３、４、５、６、あるいは１２カ月リガンドを毎日投与することを含む。

Ａ_３ＡＲリガンドによる「治療」という場合、この分野の当業者に公知のパラメータによって決まる患者の状態に医学的に優位な改善をもたらす、所望の薬理学的及び生理学的効果を意味すると解するべきである。例えば、改善は、目的部位（脂肪が沈着した部位）におけるトリグリセリドのレベルが少なくとも５％低下することによって決めることができる。

追加の又は代替の一実施例では、改善は、目的部位対体重比（例えば、肝臓重量対体重比）の低下によって決めることができる。

更なるその他のあるいは追加の実施例では、改善は、目的の器官の機能性を表す一またはそれ以上のパラメータの変化によって決めることができる。例えば、目的部位が肝臓であれば、ＡＬＴレベルの低下によって改善がわかる。

さらに、その他の一実施例では、炎症のＮＡＳスコアの低減によって改善がわかる。ＮＡＳスコアは、ＮＡＦＬＤ活動スコア（ＮＡＳ）と線維化ステージと呼ばれる様々な要素によって決まる。これらは、とりわけ、脂肪変性スコア、小葉炎症スコア、肝細胞肥大化と線維化を含む。トータルＮＡＳスコアは、脂肪変性、小葉炎症、及び肥大化のスコアの合計を表しており、０−８の範囲である。ＮＡＳスコア０−２は、ＮＡＳＨと診断されず、５−８が ＮＡＳＨと診断される。

いくつかの実施例では、脂肪蓄積に関連する症状に罹患しているとされる患者の治療である。

Ａ_３ＡＲリガンドを毎日投与するか、あるいは一日又はそれ以上の投与間インターバルで投与することができる。一の実施例では、長期治療用にＡ_３ＡＲリガンドが毎日用いられている。

Ａ_３ＡＲリガンドは、全身にあるいは局所的に投与することができる。この結果、Ａ_３ＡＲリガンドを薬学的に許容できるキャリアと組み合わせて、特定モードの投与に適した、有効量のＡ_３ＡＲリガンドを含む医薬組成物を形成する。

用語「薬学的に許容可能なキャリア」は、Ａ_３ＡＲリガンドと反応せず、リガンドに加えてリガンドの対象への送達を促進する不活性の無毒物質である。

一の実施例では、キャリアは経口投与のユニット投与形態の製造に使用できる。

経口製剤は、ピル、カプセル、シロップ、乳剤、芳香性粉末、その他の様々な形態であってもよい。キャリアは、この製剤の所望の形態に基づいて選択される。また、キャリアは、目的の組織への活性成分の送達又は浸透を改善する、薬剤の安定性を改善する、除去速度を遅らせる、徐放特性を与える、望ましくない副作用を低減する、その他の効果を有するものであってもよい。キャリアは、また、食用芳香を伴う製剤を提供する、製剤を安定させる物質（例えば、保存剤）であってもよい。キャリアは、Ａ_３ＡＲリガンドと共に従来使用されているキャリアであってよく、溶解性とＡ_３ＡＲリガンドとの反応性の欠如などの化学的−物理的考察と、投与経路によってのみ制限される。キャリアは、添加剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存料、芳香剤、及び薬理学的に混合可能なキャリアを含んでいてもよい。さらに、キャリアは予測可能に活性成分の作用に影響を及ぼす物質と定義される、アジュバントであってもよい。

経口投与に適したキャリアの典型的な例は、（ａ）Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ４０などの、懸濁液又は適切な液状乳化剤、あるいは、メチルセルロース（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ａ４Ｍ プレミアム）；（ｂ）カプセル（例えば、界面活性剤、潤滑剤、及び不活性充填剤を含む、通常のハード又はソフトシェルゼラチンタイプ）、タブレット、薬用ドロップ（活性物質が、スクロースとアカシア又はトラガカントなどの風味である、あるいは活性物質がゼラチンとグリセリンなどの不活性基材である）、及びトローチであり、各々があらかじめ決められた量のトラガカンタを固形又は粒状で含む；（ｃ）パウダー；（ｄ）通常、可溶増進剤と組み合わせた場合の溶液；（ｅ）リポソーム剤形；およびその他である。

Ａ_３ＡＲリガンドは、脂肪蓄積の治療に有効な量、すなわち、通常（健康な状態）は脂肪細胞がない組織内の脂質沈着を低減する効果を示す量で使用され、この低減は、少なくとも一つがリガンド摂取後である、二つの時点間で比較される。「有効量」は、本開示によって、複数の試験対象に様々な量のＡ_３ＡＲリガンドを投与し、その反応（例えば、いくつかの有益な効果と組み合わせる）を投与量の機能としてプロットすることによって、容易に規定することができる。時には、使用する量は、投与形態、年齢、体重、体表面積、性別、健康状態、対象の遺伝的要因、その他の投与薬剤、その他など、様々な要因に依存し得る。

有効量のＡ_３ＡＲリガンドは、単位投与形態で規定することができる。用語「単位投与形態」とは、ヒト対象及びその他の哺乳類の単位投与として適切な物理的に不連続なユニットを意味し、各ユニットは所望の治療効果を生むように計算されたあらかじめ決められた量の活性物質を、適切な医薬賦形剤と共に含んでいる。

Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアゴニストである場合、有効量は、例えば、少なくとも約１０ｍｇ／日の量であり、これは、例えば、１日１回の治療計画では少なくとも１０ｍｇ、１日２回では、少なくとも約５ｍｇ、１日３回の場合は、少なくとも約３．３ｍｇ、その他である。

少なくとも約１０ｍｇ／日の投与は、少なくとも約１５ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約２５ｍｇ／日であってもよい。いくつかの実施例では、この投与量が、２５±５ｍｇ／日である。

患者に一日に与えられるＡ_３ＡＲリガンドの総量は、投与回数にかかわらず、本明細書では「一日当たりの治療投与量」を意味する。

一の実施例では、Ａ_３ＡＲリガンドが、少なくとも１０ｍｇ／日の、１日１回投与用のユニット投与形態で製剤されている。投与形態が、１日ｎ回の投与を含む治療計画で患者に投与するように意図されている場合、ユニット投与形態は、１日１回の投与量の１／ｎ分を含むことになる（例えば、意図された一日分の投与量が２０ｍｇであり、治療計画が１日２回である場合、各ユニット投与形態は１０ｍｇの投与量となり；あるいは、意図された一日分の投与量が２５ｍｇであり、治療計画が１日２回である場合、各ユニット投与形態は１２．５ｍｇの投与量となる）。

本明細書で使用されているように、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、コンテキストが明確に違うと述べていない限り、単数並びに複数を含む。例えば、用語「あるＡ_３ＡＲリガンド」は、Ａ_３ＡＲの活性に、直接的又は間接的に、全体的又は部分的に、特に影響する一またはそれ以上の化合物を含む。

さらに、本明細書で使用されているように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記載した活性成分、すなわち、Ａ_３ＡＲリガンドを含むが、生理学的に許容可能なキャリアや、賦形剤、並びにその他の活性成分など、その他の要素を排除するものではないことを意味する。用語「実質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、記載した要素を含むが、脂肪蓄積の治療に実質的に有意であるその他の要素を排除する組成物を規定するのに使用されている。用語「からなる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、したがって、微量元素以上のその他の要素を排除する意味である。これらの各転換表現によって規定される実施例は、本発明の範囲内にある。

さらに、例えば、活性成分としてＡ_３ＡＲリガンドを含む組成物を構成する要素の量又は範囲を意味する場合の全ての数値は、記載した値から最大でプラス又はマイナス２０％、時には最大１０％の近似値である。常に明示的に示されていなくとも、全ての数値的指定は用語「約」によって先行されると理解される。

本発明にしたがって行った実験の詳細をいかに例示する。これらの例は、限定ではなく、説明のためのものである。上述の教示を鑑みて、明らかに、これらの例の多くの変形例、変更例がありうる。したがって、特許請求の範囲内において、本発明は、以下に特に述べるもの以外に、多くの方法で実施することができる。

非限定的な例
例１−ＡＬＴとＴＧのレベルのＣＦ１０２の効果
マウス実験モデルとして雄のＣ５７ＢＬ／６マウスが用いられた。

Ａ_３ＡＲアゴニストである、２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ、本明細書では略してＣＦ１０２という）を、Ａｌｂａｎｙ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ，Ａｌｂａｎｙ，ＮＹ，ＵＳＡによるＣａｎ−Ｆｉｔｅ ＢｉｏＰｈａｒｍａで合成した。ＣＦ１０２は、液状で、ビークルとして用いたジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かして使用した。溶解したＣＦ１０２とＤＭＳＯビークルを同じ容量で投与した。

生後２日のオスのＣ５７ＢＬ／６マウスに、２００μｇのストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を単回皮下注射し、４週齢後に高脂肪食を与えた。６週齢で、マウスをビークルと、ＣＦ１０２を２００ｍｇ／ｋｇを１日三回経口投与した治療群とにランダム化した。６週齢から９週齢の間治療を行った。

研究終了後、肝臓重量を測定し、肝臓−体重重量比を計算した。

血漿ＡＬＴと肝臓トリグリセリドを測定して、以下について肝臓組織に組織学的分析を行った：ＮＡＦＬＤ活動性スコアの推定用のヘマトキシリンとエオシン染色、及び、繊維症領域推定用のシリウスレッド染色。

結果：
２００μｇ／ｋｇのＣＦ１０２が、ＮＡＳＨ肝臓（ｐ＝０．０５）において、肝臓−体重重量比を低減した（図１）。さらに、ＣＦ１０２は、ＡＬＴレベル（図２）と肝臓のトリグリセリドレベル（図２）も低下させた。

ビークル群からの肝臓部分は、毛細血管及び大血管の重篤な脂肪沈着、肝細胞肥大、及び炎症細胞浸潤を示した。ＣＦ１０２治療群は、ビークルと比較して脂肪変性、肥大、及び小葉炎症に有意な低減を示した（図３Ｃ、３Ｄ、４）。

例２−ＮＡＳスコアにおけるＣＦ１０２の効果
生後２日のオスのマウスに、２００μｇ／動物のＳＴＺを注射した。４週齢から、マウスに高脂肪食を与えた。６週齢で、マウスをビークルとＣＦ１０２ ２００μｇ／ｋｇでの治療群にランダム化した。経口で、１日３回治療を行った。９週齢で終了させた。

ヘマトキシリンとエオシン染色を用いて、ＮＡＦＬＤ活性を推定した。

結果：
ＣＦ１０２（２００μｇ／ｋｇ）は、ビークルに比較して、ＮＡＳ（ＮＡＦＬＤ活動スコア）スコアを低減させた。

Claims (46)

1. 対象の組織中の異所性脂質蓄積の低減に使用するＡ_３アデノシン受容体（Ａ_３ＡＲ）リガンド。
2. 肝臓組織における脂質蓄積を低減させる、請求項１に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
3. その量が前記組織中の少なくともトリグリセリドのレベルを低減させるのに有効であることを特徴とする請求項１又は２に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
4. 非アルコール性脂肪性肝臓疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療用の、請求項１乃至３のいずれかに記載のＡ_３ＡＲリガンド。
5. 前記治療が、前記対象への前記Ａ_３ＡＲリガンドの毎日の投与を含むことを特徴とする、請求項１乃至４に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
6. 前記治療が、前記Ａ_３ＡＲリガンドの長期投与を含むことを特徴とする、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
7. 前記投与が経口投与であることを特徴とする、請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
8. 前記投与が１日１回、あるいは２回であることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
9. 前記Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアゴニストであることを特徴とする、請求項１乃至８のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
10. 前記Ａ_３ＡＲアゴニストが、Ｎ^６−２−（４−アミノフェニル）エチルアデノシン（ＡＰＮＥＡ），Ｎ^６−２−（４−アミノ−３−ヨードベンジル）アデノシン−５’−（Ｎ−メチルウロナミド）（ＡＢ−ＭＥＣＡ），Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（ＩＢ−ＭＥＣＡ）、及び２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
11. 前記Ａ_３ＡＲアゴニストが、Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡであることを特徴とする、請求項１０に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
12. 前記Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアロステリック強化剤である。請求項１乃至８のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
13. 前記Ａ_３ＡＲアロステリック強化剤が、
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘプチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    からなる群から選択される、請求項１２に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
14. 前記アロステリック強化剤が、Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンであることを特徴とする、請求項１３に記載のＡ_３ＡＲリガンド。
15. 対象の異所性脂質蓄積を低減する医薬組成物の製造におけるＡ_３ＡＲリガンドの使用。
16. 肝臓組織の脂質蓄積を低減する、請求項１５に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
17. 前記組織の少なくともトリグリセリドレベルの低減に有効な量での、請求項１５又は１６に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
18. 非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療のための、請求項１５乃至１７のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
19. 対象への前記Ａ_３ＡＲリガンドの毎日の投与に適した投与形態の、請求項１５乃至１８のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
20. 前記対象の長期治療用の、請求項１５乃至１９のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
21. 経口投与に適した投与形態の、請求項１５乃至２０のいずれか１項に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
22. 一日１回又は２回の投与に適した投与形態の、請求項１５乃至２１に記載のＡ_３ＡＲリガンドの使用。
23. 前記Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアゴニストであることを特徴とする、請求項１５乃至２２のいずれか１項に記載のＡ３ＡＲリガンドの使用。
24. 前記Ａ_３ＡＲアゴニストが、Ｎ^６−２−（４−アミノフェニル）エチルアデノシン（ＡＰＮＥＡ）、Ｎ^６−（４−アミノ−３−ヨードベンジル）アデノシン−５’−（Ｎ−メチルウロナミド）（ＡＢ−ＭＥＣＡ）、Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（ＩＢ−ＭＥＣＡ）、及び２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２３に記載の使用。
25. 前記Ａ_３ＡＲアゴニストが、Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡであることを特徴とする、請求項２５に記載の使用。
26. 前記Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアロステリック強化剤である。請求項１５乃至２２のいずれか１項に記載の使用。
27. 前記Ａ_３ＡＲアロステリック強化剤が、
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘプチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２６に記載の使用。
28. 前記アロステリック強化剤が、Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンであることを特徴とする、請求項２７に記載の使用。
29. 薬学的に許容可能なキャリアと、活性成分としてのＡ_３ＡＲリガンドを、対象の組織における異所性脂質蓄積を低減する有効量を含むことを特徴とする医薬組成物。
30. 肝臓組織の脂質蓄積を低減する、請求項２９に記載の医薬組成物。
31. その量が前記組織中の少なくともトリグリセリドのレベルを低減させるのに有効であることを特徴とする請求項２９又は３０に記載の医薬組成物。
32. 前記量のＡ_３ＡＲリガンドが、前記組織の少なくともトリグリセリドレベルを低減させるのに有効であることを特徴とする、請求項２９乃至３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
33. 非アルコール性脂肪性肝臓疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療用の、請求項２９乃至３３のいずれかに記載の医薬組成物。
34. 前記対象への前記Ａ_３ＡＲリガンドの毎日の投与に適した投与形態にあることを特徴とする、請求項２９乃至３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
35. 前記Ａ_３ＡＲリガンドの長期投与用であることを特徴とする、請求項２９乃至３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
36. 前記Ａ_３ＡＲリガンドの経口投与に適した投与形態であることを特徴とする、請求項２９乃至３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
37. １日１回、あるいは２回の投与に適した投与形態であることを特徴とする、請求項２９乃至３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
38. 前記Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ_３ＡＲアゴニストであることを特徴とする、請求項２９乃至３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
39. 前記Ａ_３ＡＲアゴニストが、Ｎ^６−２−（４−アミノフェニル）エチルアデノシン（ＡＰＮＥＡ）、Ｎ^６−（４−アミノ−３−ヨードベンジル）アデノシン−５’−（Ｎ−メチルウロナミド）（ＡＢ−ＭＥＣＡ）、Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（ＩＢ−ＭＥＣＡ）、及び２−クロロ−Ｎ^６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロナミド（Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項３８に記載の医薬組成物。
40. 前記Ａ_３ＡＲアゴニストが、Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡであることを特徴とする、請求項３９に記載の医薬組成物。
41. 前記Ａ_３ＡＲリガンドが、Ａ３ＡＲアロステリック強化剤である。請求項２９乃至３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
42. 前記Ａ_３ＡＲアロステリック強化剤が、
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘプチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
    からなる群から選択される、請求項４１に記載の医薬組成物。
43. 前記アロステリック強化剤が、Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−２−シクロヘキシル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンであることを特徴とする、請求項４２に記載の医薬組成物。
44. 対象の組織中の異所性脂質蓄積を低減する方法において、前記対象に、ある量あるＡ_３ＡＲリガンドを投与するステップを具え、前記量が、前記組織の異所性脂質蓄積を低減するのに有効であることを特徴とする、方法。
45. 肝臓内の脂肪蓄積を低減する、請求項４４に記載の方法。
46. （ａ）請求項２９乃至４１に記載のＡ_３ＡＲリガンドを含む医薬組成物と；
    （ｂ）当該医薬組成物を、対象の組織内の脂質蓄積を低減するための使用に関する指示書と；
    を具えることを特徴とするキット。

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