JP2020073879A - 組織染色用染色剤、組織染色用染色剤の製造方法および組織染色用染色剤を含む組織染色用キット - Google Patents
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Abstract
Description
この色素樹脂粒子は、図1に示すように、樹脂粒子と蛍光色素とがイオン結合または共有結合したものである。前者の例は、樹脂粒子を構成する樹脂が有するアミノ基に対してプロトンが付加したアンモニウム基と、蛍光色素が有するスルホ基がイオン結合して、色素樹脂粒子を構成しているものである(図1の左側矩形内の破線参照)。一方、後者の例は、樹脂粒子を構成するモノマー由来の部分が有するアミノ基と、蛍光色素が有するスルホ基とが共有結合して、色素樹脂粒子を構成しているものである(図1の右側矩形内の破線参照)。
本発明に係る色素樹脂粒子を構成する熱硬化性樹脂は、蛍光色素を上述したイオン結合および/または共有結合により固定することができる熱硬化性樹脂を含むものであれば、特に限定されない。
本発明に係る変動係数15%以下、好ましくは15%未満の色素樹脂粒子は、例えば以下の各工程に沿って製造され、1種または2種以上のモノマーまたはオリゴマーを熱硬化させて色素樹脂粒子を製造する際に、界面活性剤が所定量存在した状態で重合反応を行うことにより製造することができる。樹脂原料に対し、10〜60重量%の範囲で乳化作用を有する界面活性剤を加える事で、任意の粒子径を得る事ができ、例えば、30〜300nmの粒子を作製できる。また、界面活性剤の割合を増やすと更に小さい粒子も作製可能で30nm以下とすることができる。あるいは、界面活性剤の割合を減らすと更に大きい粒子も作製可能で300nm以上の粒子も作製可能である。また、粒子作製時の界面活性剤は0.1から3.0重量%で任意に変更できる。好ましくは0.25から1.0重量%である。これら界面活性剤の割合と添加量は一例であり、任意の範囲で変更できる。
本発明者らは、製造される色素樹脂粒子の粒径の変動係数が、界面活性剤とモノマー(樹脂構成単位としてのモノマー)とのモル比や、界面活性剤の種類により変化することを見出している。このため、色素樹脂粒子の変動係数が15%以下となるように、界面活性剤の種類やモノマーとのモル比を調節して樹脂を重合させる必要がある。
熱硬化性樹脂と蛍光色素とをイオン結合させる場合、プラス電荷となる熱硬化性樹脂の置換基や蛍光色素の置換基にH+を積極的に供給してプラス電荷とするプロトン供給剤を用いる事もできる。例えば、ギ酸や酢酸、パラトルエンスルホン酸等、これらに類するものが挙げられる。色素に付いている置換基がカルボン酸やスルホン酸等の酸の場合、これがプロトン供給剤として機能する事もできる。逆に熱硬化樹脂のマイナス電荷となる置換基や蛍光色素の置換基からH+を積極的に抜き取るプロトン受容剤を用いる事もできる。例えば、水酸化ナトリウム等の塩基の場合、これがプロトン受容剤として機能する。
熱硬化性樹脂の反応促進剤として、例えば酸を用いる事ができる。メラミン樹脂や尿素樹脂、キシレン樹脂、フェノール樹脂は、いずれも酸触媒により反応が促進される事が知られている。酸としては、例えば、ギ酸、酢酸、硫酸、塩酸、硝酸、パラトルエンスルホン酸、ドデシルベンゼンスルホン酸、等が知られている。熱硬化性樹脂の反応は加温のみでも進行するが、反応促進剤を加えるとより低温で進行するので、反応や性能を制御できる範囲で添加することができる。
重合工程は、モノマーまたはオリゴマーを熱硬化、即ち重合させて色素樹脂粒子を形成する工程である。重合工程の反応条件(熱硬化温度、重合時間)は、重合させるモノマーまたはオリゴマーの組成から決定され、公知の方法に即して行うことができる。ここで、蛍光色素の性能が低下しない反応条件(蛍光色素の耐熱温度範囲内)とする必要がある。
洗浄工程は、得られた色素樹脂粒子の分散液から、余剰の樹脂原料や蛍光色素、乳化剤等の不純物を除く工程である。例えば、反応液から樹脂成分を遠心分離し、上澄み除去後、超純水を加えて超音波照射して再度分散させることで洗浄を行う。遠心分離、上澄み除去、超純水への再分散の一連の洗浄操作は、上澄みに樹脂や色素に由来する吸光・蛍光が見られなくなるまで、複数回繰り返し行うことが好ましい。
付加工程は、色素樹脂粒子に免疫染色用のリンカー等を付加する工程である。色素樹脂粒子に付加するリンカーの種類は、ストレプトアビジン−ビオチン等のリンカーを用いることができるが、これに限定されない。
(樹脂粒子の粒径と変動係数)
色素樹脂粒子の粒径は、製造した色素樹脂粒子を、走査型電子顕微鏡(SEM)を用いて電子顕微鏡写真を撮影し、色素樹脂粒子の断面積を計測し、その計測値を相当する円の面積としたときの直径(面積円相当径)として測定することができる。色素樹脂粒子の集団の粒子径の平均(平均粒径)および変動係数は、十分な数(たとえば300個)の色素樹脂粒子について、上記のように粒子径を測定した後、平均粒径はその算術平均として算出され、変動係数は式:100×粒径の標準偏差/平均粒径により算出される。
組織染色の方法としては、上記色素樹脂粒子を免疫染色用の蛍光標識体として検出対象の生体物質を染色する蛍光染色法が用いられる。たとえば、特定の抗原に対して免疫染色を行う際には、上記リンカーを介して色素樹脂粒子と1次抗体を直接結合した蛍光標識体(コンジュゲート)を作製し、抗原を染色する方法(1次抗体法)、色素樹脂粒子と2次抗体とを直接結合した蛍光標識体を作製し、抗原に1次抗体を結合したものを染色する方法(2次抗体法)、図1を参照して上述したように、色素樹脂粒子とビオチンを直接結合した蛍光標識体を作製し、抗原に1次抗体、及び、アビジンあるいはストレプトアビジン修飾した2次抗体を結合したものを用いて染色する方法、同様に色素樹脂粒子にアビジンあるいはストレプトアビジンを直接結合した蛍光標識体を作製し、抗原に1次抗体、及び、ビオチン修飾した2次抗体を結合したものを用いて染色する方法(ビオチン−アビジン法またはサンドイッチ法)、等を用いることができる。
上記工程により組織染色が施された病理切片に用いられている色素樹脂粒子の蛍光色素に応じた適切な波長を有する励起光を照射することで、蛍光色素が発する蛍光を観察する。このような工程により、その病理切片に存在する所定の生体分子を検出することができ、抗体医薬(たとえばHER2を標識とするハ―セプチン)の適用の要否を判断するための情報として利用することができる。励起光の照射には、一般的な蛍光観察と同様の照射手段を用いればよく、例えば、蛍光顕微鏡が備えるレーザ光源から、必要に応じて所定の波長を選択すればよい。
本発明に係る組織染色用キットは、上述した組織染色用染色剤を構成品として含む。他の構成品は免疫染色に関する抗体等の試薬等を含んでいてよい。
(1)色素樹脂粒子の粒径の変動係数が15%以下の場合、輝点の大きさが揃う結果、変動係数が15%を超えるものと異なり、蛍光観察を行った場合の各輝点の大きさが一様となる(図3(A)と(B)または図4(A)と(B)を対比して参照)。このため、蛍光観察で設定するダイナミックレンジに全ての輝点からの蛍光シグナルが収まるようになる。この結果、隣接する輝点同士がサチレーションにより融合する等の上記問題が解消され、輝点同士の判別が担保される。この結果、蛍光シグナルの判定精度が改善される。
[色素]
以下の実施例、比較例に用いた色素を表1に示す。
市販のスルホローダミン101(シグマアルドリッチ社)を使用した。
[化合物1−2]
AlEXA594に近い構造式を有する化合物1−2に係る蛍光色素を、既報の特開2010−18049に従って作製して使用した。
[化合物1−3]
前記化合物1−2をNHSエステル化した後、2-Aminoethanesulfonic Acid(東京化成工業社)とDFM中で90℃、1時間反応し、カラムクロマトグラフィーで精製後、使用した。
[化合物1−4]
市販のDisodium−1,3,5,7,8−pentamethylpyrromethene−2,6−disulfonate‐difluoroborate complex(Exiton社)を使用した。
[化合物1−5]
文献(J. Phys. Chem. A 2005, 109, 5571)に記載の方法に従い合成し、使用した。
[化合物1−6]
市販の8-Methoxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid trisodium salt(シグマアルドリッチ社)を使用した。
[化合物1−7,1−8,3−1,3−2,4−4]
既報のAngew. Chem. Int. Ed. 2004, 43, 1528に従って作製し、使用した。
[化合物2−1]
市販のローダミンB(和光純薬工業社)を使用した。
[化合物2−2]
市販のスルホローダミン101アシッドクロライド(同仁化学社)とエチルアミン(東京化成工業社)をDFM中で90℃、1時間反応し、カラムクロマトグラフィーで精製後、使用した。
[化合物4−1]
市販のテトラメチルローダミンエチルエステル過塩素酸塩(シグマアルドリッチ社)を使用した。
[化合物4−2]
市販の1,3,5,7,8-pentamethyl-2,6-diethylpyrromethene-difluoroborate complex(Exiton社)を使用した。
[化合物4−3]
市販の1,3-ビス[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-2,4-ジヒドロキシシクロブテンジイリウム二水酸化物, ビス(分子内塩)(シグマアルドリッチ社)を使用した。
[実施例1](化合物1−1内包ポリメラミン粒子)
蛍光色素として化合物1−1であるSulfoRhodamine101(シグマアルドリッチ社製)14.4mgを水22mLに加えて溶解した。その後、この溶液に乳化重合用乳化剤のエマルゲン(登録商標)430(ポリオキシエチレンオレイルエーテル、花王社製)の5%水溶液を2mL加えた。この溶液をホットスターラー上で撹拌しながら70℃まで昇温させた後、この溶液にメラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)を0.65g加えた。
一方、ストレプトアビジン(和光純薬工業社製)とN−スクシミジルSアセチルチオ酢酸(N−succinimidyl S−acetylthioacetate、略称:SATA)を用いて、ストレプトアビジンに対してチオール基の付加処理を行い、ゲル濾過を行って色素樹脂粒子に結合可能なストレプトアビジンを別途用意した。
上記色素樹脂粒子とストレプトアビジンを、2mMのEDTAを含有したPBS中で混合後、室温で1時間反応させて、両者を結合させる反応を行った。反応後、10mMメルカプトエタノールを添加して反応を停止させた。得られた溶液をφ=0.65μmの遠心フィルターで濃縮後、精製用ゲル濾過カラムを用いて未反応のストレプトアビジン等を除去し、ストレプトアビジンが結合した色素樹脂粒子を得た。
この色素樹脂粒子を含む組織染色用染色剤を用いて、ヒト乳房組織の免疫染色を行った。ここで組織染色用染色剤は、1%BSA含有PBS緩衝液等の緩衝液を用いた。染色切片は組織アレイスライド(コスモ・バイオ社製、品番CB−A712)を用いた。組織アレイスライドを脱パラフィン処理後、水に置換洗浄し、10mMクエン酸緩衝液(pH6.0)中で15分間オートクレーブ処理することで、抗原の賦活化処理を行った。抗原の賦活化処理後の組織アレイスライドを、PBS緩衝液を用いて洗浄後、1%BSA含有PBS緩衝液で0.05nMに稀釈した抗HER2ウサギモノクローナル抗体(4B5)を組織切片と2時間反応させた。PBSで洗浄後、1%BSA含有PBS緩衝液で稀釈したビオチン標識抗ウサギ抗体と、30分間反応させた。さらに、上記組織染色用染色剤を用いて、すなわち上記製造したストレプトアビジンを有する色素樹脂粒子と2時間反応させ、その後洗浄を行うことにより、免疫組織化学染色切片が得られた。得られた免疫組織化学染色切片を4%中性パラホルムアルデヒド水系緩衝液に10分間浸漬することにより、固定処理を行った。
上記固定処理をした各免疫組織化学染色切片に対してヘマトキシリン染色を行い、染色後の切片をエタノールに浸漬することにより脱水し、脱水切片をさらにキシレンに浸漬して透徹し、封入剤で封入して風乾させることにより、二重染色切片が得られた。ヘマトキシリン染色は、後述の評価において影響はなかった。また、形態染色を行わない場合はエタノール浸漬とキシレン浸漬による透徹のみ、あるいは形態染色としてエオシン染色を追加することもできた。
市販の蛍光顕微鏡を用いて色素内包樹脂粒子の蛍光組織画像を取得し、輝点計測への影響、組織像の色素にじみ、染色像の明るさについて評価した。
実施例1において、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)0.65gの代わりに、尿素樹脂原料0.80gを使用した以外は、実施例1と同様に色素樹脂粒子の製造等を行った。本尿素樹脂は、骨格自体にアミノ基を多く含有することで樹脂がプラス電荷となった。なお、尿素樹脂原料は既存の方法により作製した、メチロール化度が40〜70%の尿素であった。
実施例1において、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)の使用量を0.65gの代わりに、キシレン樹脂原料ニカラックY−50(フドー社製)0.80g、ブチルイソシアネート0.20g、および、ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)0.20gを使用した点以外は、実施例1と同様に色素樹脂粒子の製造等を行った。本ポリキシレン樹脂は、アミノ基を多く含有することで樹脂がプラス電荷となった。
実施例1において、蛍光色素を化合物1−1から化合物1−8に変更し、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業製)0.65gの代わりにフェノール樹脂原料ニカノールPR−1440M(フドー社製)0.80gとフェノール0.20gを用いた点、ドデシルベンゼンスルホン酸(関東化学社製)10%水溶液を1000μL添加した後の加熱撹拌(70℃で50分間加熱撹拌)を行わずに、90℃、20分間の加熱撹拌のみ行い、その後、オートクレーブにて125℃で5分間加熱した点以外は、実施例1と同様に色素樹脂粒子の製造等を行った。なお、樹脂粒子はフェノールを含むためマイナス電荷となった。
実施例1において、化合物1−1を化合物1−8に変更し、メラミン樹脂ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)0.65gの代わりに、キシレン樹脂原料ニカノールY−50(フドー社製)0.20g、フェノール樹脂原料ニカノールPR−1440M(フドー社製)0.20g、3−(4−Hydroxyphenil)propionic Acid 0.20g、を用いた点、ドデシルベンゼンスルホン酸(関東化学社製)10%水溶液を1000μL添加した後の加熱撹拌(70℃で50分間加熱撹拌)を行わずに、90℃、20分間の加熱撹拌のみ行い、その後、オートクレーブにて125℃、5分間加熱した点以外は実施例1と同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。なお、本樹脂粒子は、フェニル基とカルボキシル基を有するため、マイナス電荷となった。
実施例22において、化合物1−8を、化合物3−1(実施例32)、化合物3−2(実施例36)に変更した以外実施例は同様に色素樹脂粒子の作製等を行った。
蛍光色素と樹脂の電荷が逆であり、且つ、色素樹脂粒子の変動係数が15%以下であることから、蛍光観察時の蛍光色素の滲みがほとんどなく、輝度や輝点計測の結果がよいものとなった(実施例1〜37)。
[比較例1,2]
実施例1で製造した色素樹脂粒子の代わりに、市販のインビトロジェン社製の末端にアミノ基が付いたポリスチレン製の色素樹脂粒子(比較例1)、末端にアミノ基が付いた市販の半導体ナノ粒子「Q−dоt」(比較例2)を用いて実施例1と同様に免疫組織染色および形態染色を行った。
熱可塑性樹脂であるポリスチレン粒子に蛍光色素を固定した色素樹脂粒子であり、色素溶出が生じて組織像の評価3では色素が滲んで組織像が見えない結果となった(比較例1)。
[比較例3](化合物1−1内包ポリメラミン粒子)
蛍光色素として化合物1−1であるSulfоRhоdamine101(シグマアルドリッチ社製)2.5mgを水22.5mLに加え溶解した。その後、ホットスターラー上で70℃まで昇温させた後、メラミン樹脂ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)1.5gを加え、5分間加熱撹拌した。ギ酸100μLを加え、70℃で20分間、加熱撹拌した後、室温放冷した。冷却後、反応混合物を遠心用チューブに入れて遠心分離機に20000Gで20分間、遠心分離し、上澄み除去後、超純水を加えて超音波照射して再分散させた。遠心分離、上澄み除去および超純水への再分散による洗浄を5回繰り返した。得られたメラミン樹脂粒子は実施例1で作成した粒子と比べて、粒子の変動係数が大きい特徴を有していた。得られた色素樹脂粒子を用いて、実施例1と同様に免疫組織染色および形態染色を行った。
比較例3において、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)1.5gの代わりに、尿素樹脂原料1.6gを使用した点以外は、実施例1と同様に色素樹脂粒子を製造した。なお、尿素樹脂原料は既存の方法により作製した、メチロール化度が40〜70%の尿素である。
比較例3において、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)1.5gの代わりに、フェノール樹脂原料K−100(フドー社製)0.80gと3,5-Dimethylaniline0.20gを使用した以外は実施例1と同様に色素樹脂粒子の製造等を行った。本キシレン樹脂はアミノ基を多く含有する事で樹脂がプラス電荷となった。
比較例3において、化合物1−1を、化合物1−2(比較例6)、化合物1−3(比較例9)、化合物1−4(比較例12)、化合物1−5(比較例15)、化合物1−6(比較例18)、化合物1−7(比較例21)、化合物2−1(比較例26)、化合物2−2(比較例29)、化合物3−1(比較例32)、化合物3−2(比較例36)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
比較例4において、化合物1−1を、化合物1−2(比較例7)、化合物1−3(比較例10)、化合物1−4(比較例13)、化合物1−5(比較例16)、化合物1−6(比較例19)、化合物1−7(比較例22)、化合物1−8(比較例27)、化合物2−1(比較例30)、化合物2−2(比較例33)、化合物3−1(比較例37)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
比較例5において、化合物1−1を化合物1−2(比較例8)、化合物1−3(比較例11)、化合物1−4(比較例14)、化合物1−5(比較例17)、化合物1−6(比較例20)、化合物1−7(比較例23)、化合物2−1(比較例28)、化合物2−2(比較例31)、化合物3−1(比較例35)、化合物3−2(比較例39)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
比較例3において、化合物1−1を化合物1−8に変更し、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)1.5gの代わりに、フェノール樹脂原料ニカノールPR−1440M(フドー社製)0.80gおよびフェノール0.20gを用いた点、ドデシルベンゼンスルホン酸(関東化学社製)10%水溶液を1000μL添加した後の加熱撹拌(70℃で50分間加熱撹拌)を行わずに、90℃、20分間の加熱撹拌のみ行い、その後、オートクレーブにて125℃で5分間加熱した点以外は比較例3と同様に色素樹脂粒子の製造等を行った。なお、樹脂粒子はフェノールを含み、分子全体としてマイナス電荷となった。
比較例3において、化合物1−1を化合物1−8に変更し、メラミン樹脂原料ニカラックMX−035(日本カーバイド工業社製)1.5gの代わりに、フェノール樹脂原料ニカノールPR−1440(フドー社製)0.80gおよびフェノール0.20gを用いた点、ドデシルベンゼンスルホン酸(関東化学社製)10%水溶液を1000μL添加した後の加熱撹拌(70℃で50分間加熱撹拌)を行わずに、90℃、20分間の加熱撹拌のみ行い、その後、オートクレーブにて125℃5分間加熱した点以外は、比較例3と同様に色素樹脂粒子の製造等を行った。なお、樹脂粒子はフェノールとカルボキシル基を含み、分子全体としてマイナス電荷となった。
比較例24において、化合物1−8を、化合物3−1(比較例34)、化合物3−2(比較例38)に変更した以外は同様に色素樹脂粒子の製造、形態染色等を行った。
蛍光色素と樹脂の電荷が逆の電荷であっても、色素樹脂粒子の粒径サイズにバラツキがあり、変動係数15%を超える場合、輝点計測等が困難となった(比較例3〜39)。
[比較例40,43,46,49](化合物4-1〜4-4内包ポリメラミン粒子)
実施例1において、化合物1−1を、無電荷の化合物4−1(比較例40)、化合物4−2(比較例43)、化合物4−3(比較例46)、化合物4−4(比較例49)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
実施例2において、化合物1−1を、無電荷の化合物4−1(比較例41)、化合物4−2(比較例44)、化合物4−3(比較例47)、化合物4−4(比較例50)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
実施例3において、化合物1−1を、無電荷の化合物4−1(比較例42)、化合物4−2(比較例45)、化合物4−3(比較例48)、化合物4−4(比較例51)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
蛍光色素が電荷を有しておらず樹脂とイオン結合しない上に、共有結合もしないことから色素溶出量が大きく、染色後の蛍光観察時の色素にじみが多くなるため、輝点計測等が困難となった(比較例40〜51)。
[比較例52](化合物1-1内包ポリフェノール粒子)
実施例1において、使用したプラス電荷のポリメラミン樹脂の代わりに、蛍光色素(化合物1−1)の電荷と同じマイナス電荷を有するポリフェノール樹脂を用いた以外は同様に色素樹脂粒子の製造、ストレプトアビジンの調製および形態染色等を行った(表6参照)。
実施例1において、使用した樹脂をプラス電荷のポリメラミン樹脂の代わりにマイナス電荷のポリキシレン樹脂を用いた以外は同様に色素樹脂粒子の製造、ストレプトアビジンの調製および形態染色等を行った(表6参照)。
比較例52において、化合物1−1を、化合物1−2(比較例54)、化合物1−3(比較例56)、化合物1−4(比較例58)、化合物1−5(比較例60)、化合物1−6(比較例62)、化合物1−7(比較例64)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
比較例53において、化合物1−1を、化合物1−2(比較例55)、化合物1−3(比較例57)、化合物1−4(比較例59)、化合物1−5(比較例61)、化合物1−6(比較例63)、化合物1−7(比較例65)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
蛍光色素と樹脂の電荷が同一のマイナス電荷の場合、電気的に反発し合って、蛍光色素が樹脂にイオン結合で固定されず、また、共有結合もしていないので、染色後の蛍光観察において蛍光色素の滲みが生じて、輝度や輝点の計測が困難となった(比較例52〜65)。
[比較例66](化合物1-8内包ポリメラミン粒子)
実施例1において、マイナス電荷の蛍光色素(化合物1−1)の代わりに、樹脂と同じプラス電荷の蛍光色素(化合物1−8)を用いた以外は同様に色素樹脂粒子の製造、組織染色等を行った(表7参照)。
実施例2において、化合物1−1の代わりに化合物1−8を用いた以外は同様に色素樹脂粒子の製造、組織染色等を行った(表7参照)。
実施例3において、化合物1−1の代わりに化合物1−8を用いた以外は同様に色素樹脂粒子の製造、組織染色等を行った(表7参照)。
蛍光色素と樹脂の電荷が同一のプラス電荷の場合、電気的に反発し合って、蛍光色素が樹脂にイオン結合で固定されず、染色後の蛍光観察において蛍光色素の滲みが生じて、輝度や輝点の計測が困難となった(比較例66〜68)。
実施例1において、色素樹脂粒子の純水による洗浄の遠心分離の時間を15分から10分に短縮した。また、実施例1と同様に5回の遠心分離と上澄み除去と超純水への再分散の操作の後、新たに遠心分離を1分行ない、沈殿物を取り除いた。それ以外は実施例1と同様とした。
実施例38において、化合物1−1を、化合物1−2(実施例39)、化合物1−3(実施例40)、化合物1−4(実施例41)、化合物1−5(実施例42)、化合物1−6(実施例43)、化合物1−7(実施例44)、化合物2−1(実施例45)、化合物2−2(実施例46)、化合物3−1(実施例47)、化合物3−2(実施例48)に変更した以外は同様にして色素樹脂粒子の作製等を行った。
Claims (9)
- 共有結合を形成可能な反応基を2つ以上有する蛍光色素が、熱硬化性樹脂の樹脂粒子に固定されてなる組織染色用樹脂粒子であって、
前記色素樹脂粒子の粒径の変動係数が15%以下である、組織染色用樹脂粒子。 - 前記熱硬化性樹脂の樹脂粒子が、アミノ基またはフェノール性水酸基を有するものである、請求項1に記載の組織染色用樹脂粒子。
- 前記熱硬化性樹脂の樹脂粒子が、メラミン、尿素、グアナミン、フェノール、およびこれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも1つのモノマーから形成される構成単位を含む、請求項1または2に記載の組織染色用樹脂粒子。
- 前記共有結合を形成可能な反応基が、スルホ基又はNHS(N-Hydroxysuccinimide)エステル基である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組織染色用樹脂粒子。
- 前記蛍光色素が、ローダミン、BODIPY、スクアリリウムまたは芳香族炭化水素系色素分子である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組織染色用樹脂粒子。
- 前記熱硬化性の樹脂粒子がメラミンを用いて形成され、前記蛍光色素がローダミンまたは芳香族炭化水素系色素分子である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組織染色用樹脂粒子。
- 前記共有結合が、アミド結合、エステル結合、エーテル結合およびC−N結合のいずれかである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組織染色用樹脂粒子。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載の組織染色用樹脂粒子を含有する組織染色用染色剤であって、
前記組織染色用樹脂粒子が抗体と直接結合しているか、
前記組織染色用樹脂粒子がリンカーと結合しているか、
前記組織染色用樹脂粒子がリンカーと結合しており、さらに前記組織染色用樹脂粒子と抗体とが前記リンカーを介して結合していることを特徴とする、組織染色用染色剤。 - 請求項8に記載の組織染色用染色剤を構成品として含む、組織染色用キット。
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US20200088731A1 (en) * | 2016-12-22 | 2020-03-19 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Method for Detecting HER2-Positive Cancer Cells |
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Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4326008A (en) * | 1976-08-27 | 1982-04-20 | California Institute Of Technology | Protein specific fluorescent microspheres for labelling a protein |
US20050123935A1 (en) * | 2003-12-09 | 2005-06-09 | Richard Haugland | Pyrenyloxysulfonic acid fluorescent agents |
JP2007169440A (ja) * | 2005-12-21 | 2007-07-05 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 熱硬化性樹脂微粒子の製造方法 |
JP2008007688A (ja) * | 2006-06-30 | 2008-01-17 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 熱硬化性微粒子およびその製造方法 |
JP2009300667A (ja) * | 2008-06-12 | 2009-12-24 | Hitachi Chem Co Ltd | 液晶表示装置用スペーサの製造方法、スペーサ形成用インク、並びに液晶表示装置及びその製造方法 |
JP2010112957A (ja) * | 2005-12-27 | 2010-05-20 | Furukawa Electric Co Ltd:The | 蛍光ナノシリカ粒子、ナノ蛍光材料、それを用いたバイオチップ及びそのアッセイ法 |
WO2012029752A1 (ja) * | 2010-08-31 | 2012-03-08 | コニカミノルタエムジー株式会社 | 生体物質検出方法 |
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4326008A (en) * | 1976-08-27 | 1982-04-20 | California Institute Of Technology | Protein specific fluorescent microspheres for labelling a protein |
US20050123935A1 (en) * | 2003-12-09 | 2005-06-09 | Richard Haugland | Pyrenyloxysulfonic acid fluorescent agents |
JP2007169440A (ja) * | 2005-12-21 | 2007-07-05 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 熱硬化性樹脂微粒子の製造方法 |
JP2010112957A (ja) * | 2005-12-27 | 2010-05-20 | Furukawa Electric Co Ltd:The | 蛍光ナノシリカ粒子、ナノ蛍光材料、それを用いたバイオチップ及びそのアッセイ法 |
JP2008007688A (ja) * | 2006-06-30 | 2008-01-17 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 熱硬化性微粒子およびその製造方法 |
JP2009300667A (ja) * | 2008-06-12 | 2009-12-24 | Hitachi Chem Co Ltd | 液晶表示装置用スペーサの製造方法、スペーサ形成用インク、並びに液晶表示装置及びその製造方法 |
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THERMO FISHER SCIENTIFIC社: "Molecular Probes Handbook (online version) A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies", カタログ, vol. 11th Ed., Part I, Chapter 1, Section 1.6, JPN6021038256, 2010, pages 74 - 75, ISSN: 0004608184 * |
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