JP2019535306A - Ｃｄ１６０膜貫通型アイソフォームと結合するモノクローナル抗体 - Google Patents

Ｃｄ１６０膜貫通型アイソフォームと結合するモノクローナル抗体 Download PDF

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Abstract

本発明は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合するモノクローナル抗体に関する。本発明者らは、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合するが、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームともＣＤ１６０可溶型アイソフォームとも結合しない新たなモノクローナル抗体を開発した。本発明の抗体は特に、ＮＫ細胞の活性化、したがってＮＫ細胞の細胞傷害機能を増幅させるのに適している。【選択図】なし

Description

本発明は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合する抗体（好ましくはモノクローナル抗体）に関する。
ＣＤ１６０は最初、主として末梢血ＮＫ細胞に発現するＧＰＩアンカー型（ＣＤ１６０−ＧＰＩ）ＭＨＣクラスＩ活性化受容体として同定された。さらに、ＣＤ１６０遺伝子の選択的スプライシングにより生じたＣＤ１６０膜貫通型アイソフォーム（ＣＤ１６０−ＴＭ）の同定についても報告された。ＣＤ１６０−ＴＭの表面発現はＮＫ細胞に極めて限定的なものであり、活性化依存性であることが確認された（Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ Ｊら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９ Ｊａｎ １；１８２（１）：６３−７１）。実際、ＣＤ１６０−ＴＭは活性化ＮＫ細胞にのみ発現するのに対し、ＣＤ１６０−ＧＰＩはＮＫ細胞（活性化しているかどうかを問わない）および様々なＴ細胞サブセットに発現する。さらに、ＣＤ１６０−ＴＭは、その結合時に観察されるＮＫ細胞表面へのＣＤ１０７ａ動員の増大による評価で新規な活性化受容体であることを示す証拠が得られている（Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ Ｊら，２００９）。
したがって、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームともＣＤ１６０−ＧＰＩアイソフォームのタンパク質分解による切断によって生じ得るＣＤ１６０可溶型アイソフォームとも結合せずＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合する抗体は、例えば、ＮＫ細胞活性化、ひいてはＮＫ細胞のエフェクター機能（細胞傷害、サイトカイン分泌など）を増幅する、あるいはｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ１６０−ＴＭ発現細胞（特に活性化ＮＫ細胞）の枯渇を誘導するのに適するものであり得る。特に、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合することができるがＣＤ１６０−ＧＰＩアイソフォームとは結合することができない抗体を用いれば、サイトカインストームのリスクなどのあらゆる全身毒性が回避されよう。
国際公開第２００８／００９７１１号には、ＣＤ１６０−ＧＰＩと結合することが可能なＩｇＧ１である、抗体ＣＬ１−Ｒ２について記載されている。
Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ Ｊ．ら（Ｃｕｒｒ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１２ Ｆｅｂ；１２（２）：１８８−９８．）は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合するモノクローナル抗体について記載している。ただし、この抗体はＣＤ１６０の可溶型アイソフォームとも結合するものである。
国際公開第２００８／１５５３６３号には、ＣＤ１６０−ＴＭに対する抗体であるがＣＤ１６０−ＧＰＩアイソフォームとは結合しないポリクローナル抗体の産生について記載されている。これらの抗体は、ＣＤ１６０−ＴＭのアミノ酸１４４〜１５８を含むペプチド（ペプチド２）（ＫＱＲＱＨＬＥＦＳＨＮＮＥＧＴＬ、配列番号３２）でウサギを感作することによって得られたものである。
本発明では、本発明者らは、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合するが、ＣＤ１６０−ＧＰＩアイソフォームとも可溶型ＣＤ１６０アイソフォームとも結合しない新規な抗体を開発した。
本発明は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合するヒト抗体（好ましくはモノクローナル抗体）に関する。具体的には、本発明は請求項によって定められるものである。
具体的には、本発明は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインと結合するモノクローナル抗体であって、ＧＰＩアンカー型アイソフォームともＣＤ１６０可溶型アイソフォームとも結合せず、エピトープが配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む、モノクローナル抗体に関する。
一実施形態では、前記エピトープは、配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基をさらに含む。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３のうち少なくとも１つのものを含む軽鎖、ならびに／あるいは以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３のうち少なくとも１つのものを含む重鎖を含む。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含む。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＧＶＳ（配列番号２０）、ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）およびｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）を含む軽鎖を含み、Ａ１２抗体の重鎖は、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）、ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２９）およびｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）を含む。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＹＶＳ（配列番号２３）、ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）およびｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）を含む軽鎖を含み、Ａ１２抗体の重鎖は、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＮ（配列番号２７）、ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２：ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３０）およびｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）を含む。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、配列番号１２または配列番号１４と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖と、配列番号１３または配列番号１５と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖とを含む。一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、配列番号１２または配列番号１４と同一である重鎖と、配列番号１３または配列番号１５と同一である軽鎖とを含む。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して上記の抗体と交差競合する。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は細胞傷害性部分とコンジュゲートされている。
本発明はさらに、上記のモノクローナル抗体を含む融合タンパク質に関する。
本発明はさらに、上記の抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸分子に関する。一実施形態では、本発明の核酸分子は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９と７０％の同一性を有する核酸配列を含む。
本発明はさらに、上記の核酸によってトランスフェクト、感染または形質転換した宿主細胞に関する。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、抗体依存性細胞傷害、補体依存性細胞傷害または抗体依存性食作用を媒介する。
本発明はさらに、癌細胞がＣＤ１６０−ＴＭを発現する癌を治療する、好ましくは、ＮＫ白血病またはＮＫリンパ腫、例えば節外性および非節外性ＮＫ／Ｔリンパ腫；ＮＫ細胞由来の悪性腫瘍；ならびに急性ＮＫ白血病などを治療する方法に使用する、上記のモノクローナル抗体に関する。
本発明はさらに、必要とする対象のＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームを発現する細胞の集団、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームを発現する悪性ＮＫ細胞の集団またはＡ１２抗体もしくはＢ６抗体によって認識されるエピトープを発現する細胞の集団を枯渇させる方法であって、対象に治療有効量の上記のモノクローナル抗体を送達することを含む、方法に関する。
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、抗体依存性細胞傷害も補体依存性細胞傷害も抗体依存性食作用も媒介しない。
本発明はさらに、癌、感染症あるいは自己免疫疾患および／または炎症性疾患を治療する方法に使用する上記のモノクローナル抗体に関する。
本発明はさらに、必要とする対象のＮＫ細胞の活性を増強する方法であって、対象に治療有効量の上記の抗体を投与することを含む、方法に関する。
一実施形態では、対象は、癌、感染症あるいは自己免疫疾患および／または炎症性疾患に罹患している。
本発明はさらに、必要とする対象の抗体のＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強する方法であって、対象に抗体を本発明のモノクローナル抗体と組み合わせて投与することを含む、方法に関する。
本発明はさらに、ＣＤ１６０−ＴＭとそのリガンドとの結合を阻害する方法であって、ＣＤ１６０−ＴＭと上記のモノクローナル抗体とを接触させることを含む、方法に関する。
本発明はさらに、必要とする対象の発作性夜間ヘモグロビン尿症を治療する方法であって、対象に治療有効量の上記のモノクローナル抗体を投与することを含み、好ましくは前記抗体がＦａｂである、方法に関する。
本発明はさらに、上記の抗体と薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物に関する。
本発明では、以下の用語は以下の意味を有する。
本発明においては、一般的にみられる核酸塩基に対して以下の略号を使用する。「Ａ」はアデニンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアニンを指し、「Ｔ」はチミンを指し、「Ｕ」はウラシルを指す。
「ａ」および「ａｎ」という用語は、同冠詞の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つの）文法上の目的語を指す。例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」（要素）は１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
量、持続時間などの測定可能な数値に関する「約」という用語は、明記される数値から±２０％、場合によっては±１０％、場合によっては±５％、場合によっては±１％、または場合によっては±０．１％の変動を包含するものとし、したがって、変動は本開示の方法を実施するのに妥当なものである。
「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、ホスホジエステル結合によって共有結合したヌクレオチドの一本鎖または二本鎖形態のポリマー、例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）などを指す。特に限定されない限り、この用語には、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含み、標準核酸と類似した結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと類似した方法で代謝される核酸が包含される。別途明記されない限り、ある特定の核酸配列には、その保存的に改変された変異型（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰおよび相補的配列ならびに明記される配列も暗に包含される。具体的には、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択した（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作製することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１−９８（１９９４））。
「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基を含む化合物を指す。ポリペプチドは特定の長さのものに限定されない、すなわち、アミノ酸を少なくとも２つ含んでいなければならず、ポリペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドの定義にはペプチド、オリゴペプチドおよびタンパク質が含まれ、このような用語は本明細書では、特に明記されない限り互換的に使用され得る。同用語は、本明細書で使用される場合、当該技術分野で例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーと呼ばれることも多い短鎖と、当該技術分野で一般にタンパク質と呼ばれ多数のタイプが存在するこれより長い鎖の両方を指す。一実施形態では、本明細書で使用される「ペプチド」という用語は、アミノ酸がペプチド結合によって互いに連結し、好ましくは鎖長が約５０アミノ酸残基未満である直鎖状ポリマーを指し、「ポリペプチド」は、少なくとも５０のアミノ酸がペプチド結合によって互いに連結した直鎖状ポリマーを指し、タンパク質は特に、任意選択でグリコシル化された１つまたは複数のペプチドまたはポリペプチドと、任意選択で非ポリペプチドの補助因子とで形成される機能的実体を指す。この用語はまた、天然のもの、非天然のものを含め、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などならびに当該技術分野で公知のその他の修飾を除外する。ポリペプチドはタンパク質全体またはその部分配列であり得る。「ポリペプチド」には特に、例えば、ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、変異型ポリペプチド、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が含まれる。ポリペプチドは、天然のペプチド、組換えペプチドまたはその組合せを含む。本発明において目的とする特定のポリペプチドは、ＣＤＲを含み抗原と結合することができるアミノ酸配列である。
「対象」という用語は、温血動物、好ましくは哺乳動物（ヒト、飼育動物および家畜、動物園、競技またはペットのための動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む）、より好ましくはヒトを指す。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち、医療を受けるのを待っている、若しくは受けている、または過去／現在／将来の医療処置対象である、または疾患の発現を監視中である温血動物、より好ましくはヒトであり得る。一実施形態では、対象は成体（例えば、１８歳以上の対象）である。別の実施形態では、対象は子供（例えば、１８歳未満の対象）である。一実施形態では、対象は雄である。別の実施形態では、対象は雌である。
本発明の第一の目的は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームと結合するが、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームとは結合しない抗体に関するものである。
一実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、可溶型ＣＤ１６０アイソフォームとは結合しない。
したがって、一実施形態では、本発明は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインと結合するが、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームとも可溶型ＣＤ１６０アイソフォームとも結合しない抗体に言及する。
一実施形態では、前記抗体はモノクローナル抗体である。したがって、一実施形態では、本発明は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインと結合するが、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームとも可溶型ＣＤ１６０アイソフォームとも結合しないモノクローナル抗体に言及する。
別の実施形態では、前記抗体はポリクローナル抗体である。
本明細書で使用される「抗体」または「免疫グロブリン」という用語は同じ意味を有し、本発明では同じように使用される。本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原と免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。したがって、抗体という用語は、抗体分子全体のみならず、抗体フラグメントならびに抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖなど）の変異型（誘導体を含む）も包含する。天然の抗体では、２つの重鎖がジスルフィド結合によって互いに連結しており、各重鎖はジスルフィド結合によって軽鎖と連結している。軽鎖にはラムダ（ｌ）およびカッパ（ｋ）の２種類がある。重鎖には、抗体分子の機能的活性を決定する５種類の主要なクラス（またはアイソタイプ）、すなわち、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥがある。各鎖には異なる配列ドメインが含まれている。軽鎖には、可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）の２つのドメインが含まれている。重鎖には、１つの可変ドメイン（ＶＨ）および３つの定常ドメイン（ＣＨと総称されるＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）の４つのドメインが含まれている。軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）の可変領域はともに、抗原に対する結合認識および特異性を決定する。軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ）の定常領域ドメインは、重要な生物学的特性、例えば抗体の鎖の会合、分泌、経胎盤性の移動、補体結合およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）との結合などをもたらす。Ｆｖフラグメントは、免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端部分であり、１つの軽鎖および１つの重鎖の可変部分からなる。抗体の特異性は抗体結合部位と抗原決定基との間の構造的相補性にある。抗体結合部位は、主として超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基で構成されている。場合によっては、非超可変領域またはフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が抗体結合部位に加わるか、またはドメイン構造全体、ひいては結合部位に影響を及ぼすこともある。相補性決定領域またはＣＤＲは、一緒になって天然の免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性および特異性を決定するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの各軽鎖および重鎖には、それぞれＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、ＶＬ−ＣＤＲ３およびＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、ＶＨ−ＣＤＲ３と呼ばれる３つのＣＤＲがある。したがって、抗原結合部位には通常、重鎖および軽鎖それぞれのＶ領域のＣＤＲのセットを含む６つのＣＤＲが含まれる。フレームワーク領域（ＦＲ）はＣＤＲの間に介在するアミノ酸配列を指す。抗体可変ドメイン内の残基は、Ｋａｂａｔらが考案したシステムに従い従来通りに番号付けされる。このシステムについては、Ｋａｂａｔら（１９８７）のＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、米国保健福祉省、ＮＩＨ、米国（以下「Ｋａｂａｔら」）に記載されている。本明細書ではこの番号付けシステムを用いる。Ｋａｂａｔ残基表記は、配列番号の配列中のアミノ酸残基の直線的番号付けに必ずしも直接対応するとは限らない。実際の直線的アミノ酸配列には、基本的な可変ドメイン構造のフレームワークであるか相補性決定領域（ＣＤＲ）であるかを問わず、含まれるアミノ酸が厳格なＫａｂａｔ番号付けよりも少ない、または多い場合があり、それぞれ構造的構成要素の短縮または構造的構成要素への挿入に対応する。所与の抗体に関する残基の正確なＫａｂａｔ番号付けは、その抗体の配列内にある相同残基とＫａｂａｔ番号付けがされた「基準」となる配列とを比較することによって決定され得る。重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基３１〜３５Ｂ（ＶＨ−ＣＤＲ１）、残基５０〜６５（ＶＨ−ＣＤＲ２）および残基９５〜１０２（ＶＨ−ＣＤＲ３）に位置する。軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基２４〜３４（ＶＬ−ＣＤＲ１）、残基５０〜５６（ＶＬ−ＣＤＲ２）および残基８９〜９７（ＶＬ−ＣＤＲ３）に位置する。
「インタクトな」抗体とは、抗原結合部位ならびにＣＬおよび少なくとも重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む抗体のことである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異型であり得る。
「可変」という用語は、抗体間でＶドメインの特定のセグメントの配列が広範囲にわたって異なっていることを指す。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を決定する。ただし、この可変性は可変ドメインの全長１１０〜１３０アミノ酸にわたって一様に分布しているわけではない。Ｖ領域は代わりに、１５〜３０アミノ酸からなるフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的可変性に乏しい区間からなり、これらの区間は、長さがそれぞれ９〜１２アミノ酸であり極めて可変性に富む「超可変領域」と呼ばれるさらに短い領域によって隔てられている。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲを含み、これらのＦＲは大部分が３つの超可変領域によってつながったβシート立体配置を取り、この３つの超可変領域はβシート構造をつなぎ、場合によってはその一部を形成するループを形成している。各鎖の超可変領域は、ＦＲによって他方の鎖の超可変領域と極めて近接して結び付けられており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは抗体と抗原の結合に直接関与することはないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは「ＶＨ」と呼ばれることもある。軽鎖の可変ドメインは「ＶＬ」と呼ばれることもある。これらのドメインは一般に、抗体の最も可変性に富む部分であり、抗原結合部位を含む。
本明細書で使用される「超可変領域」という用語は、抗体のアミノ酸残基うち抗原結合を担うものを指す。超可変領域は一般に「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム；Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）による番号付けでＶＬの残基２４〜３４（Ｌ１）前後、５０〜５６（Ｌ２）前後および８９〜９７（Ｌ３）前後ならびにＶＨの３１〜３５（Ｈ１）前後、５０〜６５（Ｈ２）前後および９５〜１０２（Ｈ３）前後）を含む。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、全抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディからなる群より選択される抗体分子である。
別の実施形態では、前記抗体は、ユニボディ、ドメイン抗体およびナノボディからなる群より選択される抗体フラグメントである。
別の実施形態では、前記抗体は、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、バーサボディおよびデュオカリンからなる群より選択される抗体模倣物である。
「バーサボディ」は当該技術分野で周知であり、抗体模倣技術の１つを指す。バーサボディは、システインを１５％超含み、典型的なタンパク質が有する疎水性コアの代わりにジスルフィド密度の高い足場を形成する３〜５ｋＤａの小さなタンパク質である。
「ナノボディ」は当該技術分野で周知であり、天然に存在する重鎖抗体に固有の構造的特性および機能的特性を有する抗体由来の治療用タンパク質を指す。これらの重鎖抗体には、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）が含まれている。本明細書で使用される「由来する」という用語は、第一の分子と第二の分子との関係を示す。この用語は一般に、第一の分子と第二の分子との間の構造的類似性を指すものであり、第二の分子に由来する第一の分子に対する工程および入手源に関する限定を含意するものでも包含するものでもない。
「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間に対形成が生じることにより二価フラグメント、すなわち、抗原結合部位を２つ有するフラグメントが得られるようＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５〜１０残基）を用いてｓＦｖフラグメントを構築することによって調製される小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、異なるポリペプチド鎖に２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが存在する２つの「交差」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。ダイアボディについては、例えば、欧州特許第０４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）にさらに詳細に記載されている。
「アフィボディ」は当該技術分野で周知であり、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する５８アミノ酸残基のタンパク質ドメインをベースとする親和性タンパク質を指す。
「アンチカリン」は当該技術分野で周知であり、結合特異性がリポカリンに由来するものである、抗体模倣技術を指す。アンチカリンは、デュオカリンと呼ばれる二重標的タンパク質としてもフォーマットされ得る。
「アビマー」は当該技術分野で周知であり、抗体模倣技術の１つを指す。
「ドメイン抗体」は当該技術分野で周知であり、抗体の重鎖または軽鎖の可変領域に相当する、抗体の最小機能的結合単位を指す。
「ユニボディ」は当該技術分野で周知であり、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠く抗体フラグメントを指す。ヒンジ領域の欠損によって、大きさが実質的に従来のＩｇＧ４抗体の半分であり、ＩｇＧ４抗体の二価の結合領域ではなく一価の結合領域を有する分子が得られる。
ＤＡＲＰｉｎ（設計アンキリン反復タンパク質）は当該技術分野で周知であり、非抗体ポリペプチドの結合能を利用するために開発された抗体模倣ＤＲＰ（設計反復タンパク質）技術を指す。
「抗体フラグメント」という用語は、（例えば、結合、立体障害、安定化／脱安定化、空間分布によって）抗原のエピトープと特異的に相互作用する能力を保持している、インタクト抗体の少なくとも１つの部分、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を指す。抗体フラグメントの例としては、特に限定されないが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、一本鎖抗体分子、特にｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメインとＣＨＩドメインとからなるＦｄフラグメント、線状抗体、単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨ）など、ラクダＶＨＨドメイン、抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体、例えばヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントなどおよび抗体の単離ＣＤＲまたはその他のエピトープ結合フラグメントが挙げられる。単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲおよびビス−ｓｃＦｖに抗原結合フラグメントを組み込むこともできる（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照されたい）。フィブロネクチンＩＩＩ型などのポリペプチドをベースとする足場に抗原結合フラグメントを移植することもできる（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。抗体をパパインで消化すると、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントと、残りの「Ｆｃ」フラグメント（容易に結晶化することができることを表す名称）が生じる。
本明細書で使用される「抗体の機能的フラグメントまたは類似体」とは、完全長抗体と共通する定性的生物活性を有する化合物のことである。例えば、抗ＩｇＥ抗体の機能的フラグメントまたは類似体とは、ＩｇＥ免疫グロブリンが高親和性受容体ＦｃεＲＩとの結合能をもたないようにする、または高親和性受容体ＦｃεＲＩとの結合能を有する能力を実質的に低下させるようこのような分子と結合することができる機能的フラグメントまたは類似体のことである。
抗体の「Ｆｃ」フラグメントは、ジスルフィドにより結合した両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能はＦｃ領域の配列によって決まり、Ｆｃ領域は、特定のタイプの細胞にみられるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小限の抗体フラグメントのことである。このフラグメントは、堅く非共有結合性に会合した１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。この２つのドメインのフォールディングにより、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を与える６つの超可変ループ（それぞれＨ鎖およびＬ鎖由来する３つのループ）が生じる。ただし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＣＤＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、完全な部位全体より親和性が低いものの、抗原を認識して結合する能力を有する。
本発明の抗体のフラグメントおよび誘導体（別途明記されるか、文脈上明らかに矛盾しない限り、本願で使用される「抗体」という用語に包含されるもの）は、当該技術分野で公知の技術によって作製することができる。「フラグメント」は、インタクト抗体の一部分、一般には抗原結合部位または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；特に限定されないが（１）一本鎖Ｆｖ分子、（２）重鎖部分が付随せず、軽鎖可変ドメイン１つのみまたは軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むそのフラグメントを含む、一本鎖ポリペプチドおよび（３）軽鎖部分が付随せず、重鎖可変領域１つのみまたは重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むそのフラグメントを含む、一本鎖ポリペプチドを含めた、連続するアミノ酸残基の１つの中断されていない配列からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体フラグメント（本明細書では「一本鎖抗体フラグメント」または「一本鎖ポリペプチド」と呼ぶ）；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。本発明の抗体のフラグメントは、標準的な方法を用いて得ることができる。
例えば、ＦａｂフラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントは、従来の技術による単離抗体のプロテアーゼ消化によって作製し得る。既知の方法を用いて免疫反応性フラグメントを修飾して、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏのクリアランス速度を低下させ、より望ましい薬物動態プロファイルを得ることができることが理解されよう。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）でフラグメントを修飾し得る。Ｆａｂ’フラグメントへのＰＥＧのカップリングおよび部位特異的コンジュゲートの方法については、例えば、開示が参照により本明細書に組み込まれるＬｅｏｎｇら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ １６（３）：１０６−１１９（２００１）およびＤｅｌｇａｄｏら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５ ７３（２）：１７５−１８２（１９９６）に記載されている。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は単離されている。本明細書で使用される「単離抗体」とは、その天然環境の構成要素から分離および／または回収した抗体のことである。天然環境の汚染構成要素とは、抗体の診断または治療への使用に干渉し得る物質のことであり、酵素、ホルモンおよびその他のタンパク質性または非タンパク質性の構成要素がこれに含まれ得る。好ましい実施形態では、（１）抗体がローリー法による測定で９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超になるまで；（２）スピニングカップ配列決定装置の使用によりアミノ酸配列のＮ末端側もしくは内部の少なくとも１５残基が得られる程度まで；または（３）還元条件下もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、クーマシーブルー染色もしくは好ましくは銀染色を用いて均一性が示されるまで、抗体を精製する。単離抗体には、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しなくなることから、組換え細胞内にあるｉｎ ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかし、少なくとも１つの精製段階によって単離抗体を調製するのが通常である。
本明細書で使用される「ＣＤ１６０」という用語は、当該技術分野でのその一般的な意味を有し、ＣＤ１６０分子を指す。ＣＤ１６０遺伝子はヒト第１番染色体上に位置することが明らかにされており、それに対応するタンパク質は最初、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型細胞表面分子として特徴付けられた。ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォーム、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームおよび可溶型ＣＤ１６０アイソフォームの３種類のＣＤ１６０アイソフォームが存在する。ＣＤ１６０−ＧＰＩは、腸上皮内Ｔリンパ球ならびにＮＫ細胞、ＴＣＲγδおよび細胞傷害性エフェクターＣＤ８ｂｒｉｇｈｔＣＤ２８−Ｔリンパ球を含めた循環リンパ球のマイナーサブセットに発現する（ＡＮＵＭＡＮＴＨＡＮら，１９９８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ；１６１：２７８０−２７９０；ＭＡＩＺＡら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，ｖｏｌ．１７８，ｐ：１１２１−１１２６，１９９３）。ＣＤ１６０膜貫通型アイソフォーム（「ＣＤ１６０−ＴＭ」）については、Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ Ｊら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９ Ｊａｎ １；１８２（１）：６３−７１．）および国際公開第２００８１５５３６３号に記載されており、配列番号１で記載されるアミノ酸配列を特徴とする。ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインは、配列番号１の２６位のアミノ酸残基から１８９位のアミノ酸残基までの範囲のアミノ酸配列によって定義され得る。ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォーム（「ＣＤ１６０−ＧＰＩ」）については、Ｎｉｋｏｌｏｖａ Ｍ．ら（Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２ Ｍａｙ；１４（５）：４４５−５１．）および国際公開第２００６０１５８８６号に記載されており、Ｃ末端でＧＰＩアンカーと融合した配列番号２で記載されるアミノ酸配列を特徴とする。ＣＤ１６０可溶型アイソフォームについては、Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ Ｊ．ら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７ Ｆｅｂ １；１７８（３）：１２９３−３００）に記載されており、配列番号３で記載されるアミノ酸配列を特徴とする。配列番号１〜３では、アミノ酸１〜２５はシグナルペプチドに対応するものであり、したがって、発現したタンパク質に存在しなくてもよい。
配列番号１：ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォーム
ＭＬＬＥＰＧＲＧＣＣＡＬＡＩＬＬＡＩＶＤＩＱＳＧＧＣＩＮＩＴＳＳＡＳＱＥＧＴＲＬＮＬＩＣＴＶＷＨＫＫＥＥＡＥＧＦＶＶＦＬＣＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩＤＧＶＧＥＩＳＳＱＬＭＦＴＩＳＱＶＴＰＬＨＳＧＴＹＱＣＣＡＲＳＱＫＳＧＩＲＬＱＧＨＦＦＳＩＬＦＴＥＴＧＮＹＴＶＴＧＬＫＱＲＱＨＬＥＦＳＨＮＥＧＴＬＳＳＧＦＬＱＥＫＶＷＶＭＬＶＴＳＬＶＡＬＱＧＭＳＫＲＡＶＳＴＰＳＮＥＧＡＩＩＦＬＰＰＷＬＦＳＲＲＲＲＬＥＲＭＳＲＧＲＥＫＣＹＳＳＰＧＹＰＱＥＳＳＮＱＦＨ
配列番号２：ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォーム
ＭＬＬＥＰＧＲＧＣＣＡＬＡＩＬＬＡＩＶＤＩＱＳＧＧＣＩＮＩＴＳＳＡＳＱＥＧＴＲＬＮＬＩＣＴＶＷＨＫＫＥＥＡＥＧＦＶＶＦＬＣＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩＤＧＶＧＥＩＳＳＱＬＭＦＴＩＳＱＶＴＰＬＨＳＧＴＹＱＣＣＡＲＳＱＫＳＧＩＲＬＱＧＨＦＦＳＩＬＦＴＥＴＧＮＹＴＶＴＧＬＫＱＲＱＨＬＥＦＳＨＮＥＧＴＬＳＳ
配列番号３：ＣＤ１６０可溶型アイソフォーム
ＭＬＬＥＰＧＲＧＣＣＡＬＡＩＬＬＡＩＶＤＩＱＳＧＧＣＩＮＩＴＳＳＡＳＱＥＧＴＲＬＮＬＩＣＴＶＷＨＫＫＥＥＡＥＧＦＶＶＦＬＣＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩＤＧＶＧＥＩＳＳＱＬＭＦＴＩＳＱＶＴＰＬＨＳＧＴＹＱＣＣＡＲＳＱＫＳＧＩＲＬＱＧＨＦＦＳＩＬＦＴＥＴＧＮＹＴＶＴＧＬＫＱＲＱＨＬＥＦＳＨＮＥＧＴＬＳＳ
本明細書で使用される「結合」という用語は、例えば共有結合性相互作用、静電相互作用、疎水性相互作用およびイオン性相互作用ならびに／あるいは塩橋および水架橋などの相互作用を含めた水素結合性相互作用による、２分子間の直接会合を指す。特に、本明細書で抗体と所定の抗原またはエピトープとの結合に関連して使用される「結合」という用語は通常、約１０−７Ｍ以下、例えば約１０−８Ｍ以下など、例えば約１０−９Ｍ以下、約１０−１０Ｍ以下または約１０−１１Ｍもしくはさらにそれ以下などのＫＤに相当する親和性での結合のことである。抗体のＫＤを測定する方法は当該技術分野で周知であり、特に限定されないが、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器にリガンドとして可溶型の抗原、分析物として抗体を用いる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術が挙げられる。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）は、モノクローナル抗体のエピトープビンパネルに日常的に用いられる様々な表面プラズモン共鳴アッセイフォーマットの１つである。これ以外の従来の技術、例えばＳｃａｔｃｈａｒｄら（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ５１：６６０（１９４９））によって記載されている技術を用いても抗体の親和性を容易に求めることができる。抗体の抗原、細胞または組織に対する結合特性は一般に、例えば免疫組織化学（ＩＨＣ）および／または蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光ベースのアッセイを含めた免疫検出法を用いて求め評価し得る。抗体は通常、所定の抗原と同一でも近縁でもない非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）と結合する場合のＫＤより少なくとも１０倍小さいＫＤ、例えば少なくとも１００倍小さいＫＤなど、例えば少なくとも１，０００倍小さいＫＤ、例えば少なくとも１０，０００倍小さいＫＤなど、例えば少なくとも１００，０００倍小さいＫＤに相当する親和性で所定の抗原と結合する。抗体のＫＤが極めて小さい（つまり、抗体の親和性が高い）場合、それが抗原と結合するときのＫＤは通常、その非特異的抗原に対するＫＤより少なくとも１０，０００倍小さいものとなる。ある抗体と抗原またはエピトープとの結合が（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器にリガンドとして可溶型の抗原、分析物として抗体を用いるプラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を用いて）検出不可能なものであるか、その抗体および異なる化学構造またはアミノ酸配列を有する抗原またはエピトープよって検出される結合より１００倍、５００倍、１０００倍または１０００倍超少ない場合、その抗体は実質的にその抗原またはエピトープと結合しないと考えられる。
本明細書で使用される「特異性」という用語は、抗体がＣＤ１６０−ＴＭなどの抗原上に提示されるエピトープと結合することができるが、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームおよびＣＤ１６０可溶型アイソフォームなどの非ＣＤ１６０−ＴＭタンパク質との検出可能な反応性が相対的に小さいことを指す。特異性は、本明細書の他の箇所に記載されるように、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器を用いて、結合アッセイまたは競合結合アッセイにより相対的に求めることができる。特異性は、他の無関係な分子との非特異的結合（この場合、特異的抗原はＣＤ１６０−ＴＭポリペプチドである）と比較した特異的抗原との結合の親和性／結合活性が、例えば約１０：１、約２０：１、約５０：１、約１００：１、１０．０００：１またはそれ以上であることによって示され得る。本明細書で使用される「親和性」という用語は、抗体とエピトープとの結合の強さを意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］として定義される解離定数Ｋｄによって得られ、式中、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を求める好ましい方法は、Ｈａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎら編，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）にみることができ、上記の参考文献は全体が参照により本明細書に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を求める方法として当該技術分野において周知で好ましい標準的なものとして、Ｂｉａｃｏｒｅ機器の使用がある。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９または配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むエピトープと結合する。配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９は配列番号５（ＬＶＡＬＱＧＭＳＫＲＡＶＳＴＰ）の配列に対応する。
本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体が結合する１種または複数種のタンパク質上に位置する特定のアミノ酸配置を指す。エピトープは多くの場合、アミノ酸または糖側鎖などの分子からなる化学的に活性な表面集団からなり、特有の三次元構造的特性および特有の電荷特性を有する。エピトープは直鎖状であることも、あるいは立体構造を有する、すなわち、必ずしも隣接しているわけではない抗原の様々な領域にアミノ酸の配列を２つ以上含むこともある。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９または配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列のアミノ酸残基を１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個含むエピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５（ＬＶＡＬＱＧＭＳＫＲＡＶＳＴＰ）で記載されるアミノ酸配列または配列番号５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列を含むエピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５または配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むエピトープと結合する。配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５は配列番号４（ＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩ）の配列に対応する。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５または配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列のアミノ酸残基を１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個または２４個含むエピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４（ＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩ）で記載されるアミノ酸配列または配列番号４と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列を含むエピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は立体構造エピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、
配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９または配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列の少なくとも１つのアミノ酸残基と、
配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５または配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列の少なくとも１つのアミノ酸残基と
を含む、立体構造エピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、
配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９または配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列のアミノ酸残基を１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個と、
配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５または配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列のアミノ酸残基を１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個または２４個と
を含む、立体構造エピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、
配列番号５（ＬＶＡＬＱＧＭＳＫＲＡＶＳＴＰ）で記載されるアミノ酸配列または配列番号５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列と、
配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５または配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列のアミノ酸残基を１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個または２４個と
を含む、立体構造エピトープと結合する。
一実施形態では、本発明の抗体は、
配列番号５（ＬＶＡＬＱＧＭＳＫＲＡＶＳＴＰ）で記載されるアミノ酸配列または配列番号５と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列と、
配列番号４（ＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩ）で記載されるアミノ酸配列または配列番号４と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列と
を含むか、これよりなる立体構造エピトープと結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、配列番号４（ＫＤＲＳＧＤＣＳＰＥＴＳＬＫＱＬＲＬＫＲＤＰＧＩ）で記載されるアミノ酸配列および配列番号５（ＬＶＡＬＱＧＭＳＫＲＡＶＳＴＰ）で記載されるアミノ酸配列内のＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインと結合する。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」、「モノクローナルＡｂ」、「モノクローナル抗体組成物」、「ｍＡｂ」などの用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、含まれる個々の抗体が、小数存在する可能性のある天然の変異を除いて同一である集団から得られる。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５，１９７５）の方法を用いて作製し得る。本発明に有用なモノクローナル抗体を作製するには、マウスまたはその他の適切な宿主動物を適切な間隔で（例えば、週２回、週１回、月２回または月１回）適切な形態の抗原（すなわち、ＣＤ１６０−ＴＭポリペプチド）で免疫感作する。動物を屠殺する前１週間以内に抗原による最後の「追加免疫」を実施してもよい。多くの場合、免疫感作時に免疫アジュバントを使用するのが望ましい。適切な免疫アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ｒｉｂｉアジュバント、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ Ｔｉｔｅｒｍａｘ、ＱＳ２１もしくはＱｕｉｌＡなどのサポニンアジュバントまたはＣｐＧ含有免疫刺激オリゴヌクレオチドが挙げられる。これ以外にも適切なアジュバントが当該分野で周知である。動物は皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、鼻腔内またはその他の経路により免疫感作し得る。所与の動物を複数の経路により複数の形態の抗原で免疫感作してもよい。ただし、「モノクローナル」という修飾語は、何らかの特定の方法による抗体の作製を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）が記載したハイブリドーマ法で調製してもよく、あるいは細菌、真核動物または植物の細胞に組換えＤＮＡ法を用いて作製してもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。また、例えばＣｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから「モノクローナル抗体」を単離してもよい。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体はキメラ抗体、特にキメラマウス／ヒト抗体である。本明細書で使用される「キメラ抗体」という用語は、非ヒト抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインと、ヒト抗体のＣＨドメインおよびＣＬドメインとを含む抗体を指す。一実施形態では、「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なる、または変化したクラス、エフェクター機能および／または種の定常領域、あるいはキメラ抗体に新たな特性を与える全く異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、増殖因子、薬物などと連結するように定常領域（すなわち、重鎖および／または軽鎖）あるいはその一部分を変化させた、置換した、あるいは交換した抗体分子；あるいは（ｂ）可変領域またはその一部分を抗原特異性が異なる、または変化した可変領域で変化させた、置換した、または交換した抗体分子である。キメラ抗体としては、霊長類化抗体、特にヒト化抗体も挙げられる。さらに、キメラ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にもみられない残基を含むものであり得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに高めるために施すものである。さらなる詳細に関しては、Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体はヒト化抗体である。特に、前記ヒト化抗体では、可変ドメインがヒトアクセプターフレームワーク領域と、存在する場合は任意選択でヒト定常ドメインと、マウスＣＤＲなどの非ヒトドナーＣＤＲとを含む。本発明では、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト抗体の可変領域フレームワークおよび定常領域を有するが、それまでの非ヒト抗体のＣＤＲを保持している抗体を指す。一実施形態では、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む。ほとんどの場合、ヒト化抗体およびその抗体フラグメントは、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が所望の特異性、親和性および性能を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基に置き換わっているヒト免疫グロブリン（レシピエントの抗体または抗体フラグメント）であり得る。いくつかの場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基がそれに対応する非ヒト残基に置き換わっている。さらに、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レシピエント抗体にも移入するＣＤＲまたはフレームワーク配列にもみられない残基を含み得る。このような抗体は、結合領域を得た非ヒト抗体の結合特異性は維持されるが、非ヒト抗体に対する免疫反応は回避されるよう設計される。これらの修飾によってさらに、抗体または抗体フラグメントの性能を高め最適化することができる。ヒト化抗体またはその抗体フラグメントは一般に、ＣＤＲ領域の全体またはほぼ全体が非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全体または相当部分がヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインのほぼ全体を含むことになる。ヒト化抗体または抗体フラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常はヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含み得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体はヒトモノクローナル抗体である。本明細書で使用される「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列がコードしないアミノ酸残基を含み得る（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム変異誘発または部位特異的変異誘発またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）。ただし、一実施形態では、本明細書で使用される「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列に移植した抗体は含まないものとする。
一実施形態では、本発明の抗体は以下のＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹである、ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹ−Ｘ１１−Ｘ１２−ＶＳ（配列番号６）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：Ｘ３がＳまたはＹである、ＳＳ−Ｘ３−ＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号８）
のうち少なくとも１つまたは少なくとも２つのものを含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下のＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹである、ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹ−Ｘ１１−Ｘ１２−ＶＳ（配列番号６）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：Ｘ３がＳまたはＹである、ＳＳ−Ｘ３−ＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号８）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、ＶＬ−ＣＤＲ１は、ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＧＶＳ（配列番号２０）、ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＹＶＳ（配列番号２１）、ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＧＶＳ（配列番号２２）およびＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＹＶＳ（配列番号２３）から選択される配列を有する。
一実施形態では、ＶＬ−ＣＤＲ３は、ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）およびＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）から選択される。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＧＶＳ（配列番号２０）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＧＶＳ（配列番号２０）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＹＶＳ（配列番号２１）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＹＶＳ（配列番号２１）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＧＶＳ（配列番号２２）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＧＶＳ（配列番号２２）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＹＶＳ（配列番号２３）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＹＶＳ（配列番号２３）；
ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）；および
ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）
を含む、軽鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下のＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：Ｘ３がＳまたはＹである、ＮＹ−Ｘ３−ＭＮ（配列番号９）
ＶＨ−ＣＤＲ２：Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳである、Ｘ１−ＩＹＧＳＳＲＹＩ−Ｘ１０−ＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号１０）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
のうち少なくとも１つまたは少なくとも２つのものを含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下のＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：Ｘ３がＳまたはＹである、ＮＹ−Ｘ３−ＭＮ（配列番号９）
ＶＨ−ＣＤＲ２：Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳである、Ｘ１−ＩＹＧＳＳＲＹＩ−Ｘ１０−ＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号１０）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、ＶＨ−ＣＤＲ１は、ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）およびＮＹＹＭＮ（配列番号２７）から選択される配列を有する。
一実施形態では、ＶＨ−ＣＤＲ２は、ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２８）、ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２９）、ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３０）およびＧＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３１）から選択される配列を有する。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２８）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２９）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３０）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３１）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＮ（配列番号２７）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２８）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＮ（配列番号２７）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２９）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＮ（配列番号２７）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３０）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は以下の３つのＣＤＲ：
ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＮ（配列番号２７）；
ＶＨ−ＣＤＲ２：ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３１）；および
ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）
を含む、重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含む。
本発明では、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、対応する配列番号で挙げられる特定のＣＤＲまたはＣＤＲのセットと少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とするものであり得る。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ｉ）Ａ１２のＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）Ａ１２のＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）Ａ１２のＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、ｉ）Ａ１２のＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）Ａ１２のＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）Ａ１２のＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含む。
本発明では、Ａ１２抗体のＶＨ領域は配列番号１２の配列からなる。したがって、Ａ１２のＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１２の３１位のアミノ酸残基から３５位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ａ１２のＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号１２の５０位のアミノ酸残基から６６位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ａ１２のＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号１２の１０３位のアミノ酸残基から１０６位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。
配列番号１２：Ａ１２抗体のＶＨ領域ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＳＹＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＴＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＳＹＹＧＧＭＤＶＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
本発明では、Ａ１２抗体のＶＬ領域は配列番号１３の配列からなる。したがって、Ａ１２のＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号１３の２３位のアミノ酸残基から３６位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ａ１２のＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号１３の５２位のアミノ酸残基から５８位のアミノ酸残基の範囲の配列によって定義される。したがって、Ａ１２のＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号１３の９１位のアミノ酸残基から１００位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。
配列番号１３：Ａ１２抗体のＶＬ領域ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＧＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＹＤＳＹＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶＦＧＧＧＴＫＬＥＫ
一実施形態では、Ａ１２抗体の軽鎖は以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１：配列番号２０、ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２：配列番号７およびｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３：配列番号２４を含み、Ａ１２抗体の重鎖は以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１：配列番号２６、ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２：配列番号２９およびｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３：配列番号１１を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ｉ）Ｂ６のＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）Ｂ６のＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）Ｂ６のＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、ｉ）Ｂ６のＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）Ｂ６のＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）Ｂ６のＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含む。
本発明では、Ｂ６抗体のＶＨ領域は配列番号１４の配列からなる。したがって、Ｂ６のＶＨ−ＣＤＲ１は、配列番号１４の３１位のアミノ酸残基から３５位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ｂ６のＶＨ−ＣＤＲ２は、配列番号１４の５０位のアミノ酸残基から６６位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ｂ６のＶＨ−ＣＤＲ３は、配列番号１４の１０３位のアミノ酸残基から１０６位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。
配列番号１４：Ｂ６抗体のＶＨ領域ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＳＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＳＧＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＴＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＳＹＹＧＧＭＤＶＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
本発明では、Ｂ６抗体のＶＬ領域は配列番号１５の配列からなる。したがって、Ｂ６のＶＬ−ＣＤＲ１は、配列番号１５の２３位のアミノ酸残基から３６位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ｂ６のＶＬ−ＣＤＲ２は、配列番号１５の５２位のアミノ酸残基から５８位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。したがって、Ｂ６のＶＬ−ＣＤＲ３は、配列番号１５の９１位のアミノ酸残基から１００位のアミノ酸残基までの範囲の配列によって定義される。
配列番号１５：Ｂ６抗体のＶＬ領域ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＹＤＳＹＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶＦＧＧＧＴＫＬＥＫ
一実施形態では、Ｂ６抗体の軽鎖は以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１：配列番号２３、ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２：配列番号７およびｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３：配列番号２５を含み、Ｂ６抗体の重鎖は以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１：配列番号２７、ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２：配列番号３０およびｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３：配列番号１１を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１２または配列番号１４と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖を含む抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１３または配列番号１５と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖を含む抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１２または配列番号１４と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖と、配列番号１３または配列番号１５と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖とを含む、抗体である。
本発明では、第二のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有する第一のアミノ酸配列は、第一の配列が、第二のアミノ酸配列と７０％；７１％；７２％；７３％；７４％；７５％；７６％；７７％；７８％；７９％；８０％；８１％；８２％；８３％；８４％；８５％；８６％；８７％；８８％；８９％；９０％；９１％；９２％；９３％；９４％；９５％；９６％；９７％；９８％；９９％または１００％の同一性を有することを意味する。配列同一性は多くの場合、同一性（または類似性もしくは相同性）の割合として測定され；その割合が高いほど２つの配列の類似性が高い。比較のための配列のアライメントの方法は当該技術分野で周知である。様々なプログラムおよびアライメントアルゴリズムがＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，２：４８２，１９８１；ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３，１９７０；ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：２４４４，１９８８；ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ，Ｇｅｎｅ，７３：２３７−２４４，１９８８；ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ，５：１５１−１５３，１９８９；Ｃｏｒｐｅｔら，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１６：１０８８１−１０８９０，１９８８；Ｈｕａｎｇら，Ｃｏｍｐ．Ａｐｐｌｓ Ｂｉｏｓｃｉ．，８：１５５−１６５，１９９２；ならびにＰｅａｒｓｏｎら，Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２４：３０７−３１，１９９４）に記載されている。Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，６：１１９−１２９，１９９４には、配列アライメント法および相同性の算出に関する詳細な考慮事項が記載されている。例として、アライメントツールであるＡＬＩＧＮ（ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−１７，１９８９）またはＬＦＡＳＴＡ（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，１９８８）を用いて配列比較を実施し得る（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ Ｐｒｏｇｒａｍ（登録商標）１９９６，Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎおよびバージニア大学，ｆａｓｔａ２０ｕ６３ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０ｕ６３，１９９６年１２月に公開）。ＡＬＩＧＮでは配列全体を互いに比較し、ＬＦＡＳＴＡでは局所類似性の領域を比較する。これらのアライメントツールおよびそれぞれに指導書は、例えばインターネット上のＮＣＳＡウェブサイトで入手可能である。あるいは、約３０アミノ酸を超えるアミノ酸配列の比較には、デフォルトのパラメータ（ｇａｐ存在コスト１１、１残基当たりのギャップコスト１）に設定したデフォルトのＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを用いて、Ｂｌａｓｔ ２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ機能を用いることができる。短いペプチド（約３０アミノ酸より少ないもの）のアライメントを実施する際には、デフォルトのパラメータ（オープンギャップペナルティ９、伸長ギャップペナルティ１）に設定したＰＡＭ３０マトリックスを用い、Ｂｌａｓｔ ２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ機能を用いてアライメントを実施するべきである。ＢＬＡＳＴ配列比較システムは、例えばＮＣＢＩのウェブサイトから入手可能であり；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０，１９９０；ＧｉｓｈおよびＳｔａｔｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．，３：２６６−２７２，１９９３；Ｍａｄｄｅｎら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２６６：１３１−１４１，１９９６；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９−３４０２，１９９７；ならびにＺｈａｎｇおよびＭａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，７：６４９−６５６，１９９７も参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１２または配列番号１４と同一である重鎖を含む、抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１３または配列番号１５と同一である軽鎖を含む、抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１２または配列番号１４と同一である重鎖と、配列番号１３または配列番号１５と同一である軽鎖とを含む、抗体である。
一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１２と同一である重鎖と、配列番号１３と同一である軽鎖とを含む、抗体である。一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１２と同一である重鎖と、配列番号１５と同一である軽鎖とを含む、抗体である。一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１４と同一である重鎖と、配列番号１３と同一である軽鎖とを含む、抗体である。一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、配列番号１４と同一である重鎖と、配列番号１５と同一である軽鎖とを含む、抗体である。
一実施形態では、本発明の抗体の重鎖および／または軽鎖は、本明細書の上に明記した配列番号と比較して保存的配列改変、例えば、１〜１０個の保存的配列改変を含む。「保存的配列改変」という用語は、そのアミノ酸配列を含むタンパク質の生物学的機能に有意な影響も変化も与えることのないアミノ酸改変を指す。このような保存的改変としては、アミノ酸の置換、付加および欠失が挙げられる。改変は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲを介する変異誘発などの当該技術分野で公知の標準的技術によってタンパク質に導入することができる。「保存的置換」とは、あるアミノ酸をこれと類似した特性を有する別のアミノ酸に置き換える置換のことであり、したがって、ペプチド化学の当業者には、ポリペプチドの二次構造および疎水性親水性が実質的に変化しないことが予想されよう。したがって、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えばその疎水性、親水性、電荷、大きさなどに基づくものとなる。上記の様々な特性を考慮に入れた例示的置換は当業者に周知であり、アルギニンとリジン；グルタミン酸とアスパラギン酸；セリンとトレオニン；グルタミンとアスパラギン；およびバリンとロイシンとイソロイシンがこれに含まれる。アミノ酸置換はさらに、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいて施され得る。例えば、負荷電アミノ酸としては、アスパラギン酸とグルタミン酸が挙げられ；正荷電アミノ酸としては、リジンとアルギニンが挙げられ；親水性値の類似した非荷電極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシンとイソロイシンとバリン；グリシンとアラニン；アスパラギンとグルタミン；およびセリンとトレオニンとフェニルアラニンとチロシンが挙げられる。保存的変化を示し得るその他のアミノ酸のグループとしては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。類似した側鎖を有するその他のアミノ酸残基のファミリーが当該技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、本発明の抗体内の１つまたは複数のアミノ酸残基を同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸残基に置き換えてよく、その変化した抗体のＣＤ１６０−ＴＭとの結合を試験することができる。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’およびｓｃＦｖからなる群より選択される。本明細書で使用される「Ｆａｂ」という用語は、分子量が約５０，０００であり、抗原結合活性を有し、ＩｇＧをプロテアーゼのパパインで処理することによって得られるフラグメントのうちＨ鎖のＮ末端側の約半分とＬ鎖全体がジスルフィド結合を介して互いに結合している、抗体フラグメントを表す。「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、ＩｇＧをプロテアーゼのペプシンで処理することによって得られるフラグメントのうち、分子量が約１００，０００であり、抗原結合活性を有し、ヒンジ領域のジスルフィド結合を介して結合したＦａｂよりわずかに大きい抗体フラグメントを指す。「Ｆａｂ’」という用語は、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって得られ、分子量が約５０，０００であり、抗原結合活性を有する抗体フラグメントを指す。Ｆａｂ’−ＳＨとは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（１つまたは複数）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の名称である。一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドとは、ペプチドをコードするリンカーによって連結したＶＨをコードする遺伝子とＶＬをコードする遺伝子とを含む遺伝子融合体から通常発現する共有結合したＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体のことである。本発明のｓｃＦｖフラグメントは、好ましくは遺伝子組換え技術を用いることにより、適切な立体構造で保持されたＣＤＲを含む。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して、ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２（配列番号１０）およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含むモノクローナル抗体と交差競合する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して、上で定義したＡ１２のＣＤＲを含むモノクローナル抗体と交差競合する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して、上で定義したＢ６のＣＤＲを含むモノクローナル抗体と交差競合する。
「交差競合する」という用語は、抗原の特定の領域との結合能を共有するモノクローナル抗体を指す。本開示では、「交差競合する」モノクローナル抗体は、標準的な競合結合アッセイで別のモノクローナル抗体が抗原と結合するのを干渉する能力を有する。このようなモノクローナル抗体は、非限定的な理論によれば、それが競合する抗体と同じエピトープまたは近縁であるか近接する（例えば、構造的に類似している、または空間的に近接している）エピトープと結合し得る。抗体Ａが抗体Ｂの結合を前記抗体のいずれか一方を欠く陽性対照と比較して少なくとも６０％、具体的には少なくとも７０％、より具体的には少なくとも８０％減少させ、その逆も同様であれば、交差競合が存在する。当業者に理解されるように、競合は様々なアッセイの設定で評価し得る。適切なアッセイの１つでは、表面プラズモン共鳴技術を用いて相互作用の程度を測定することができる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ社、ウプサラ、スウェーデン）の使用による）Ｂｉａｃｏｒｅ技術を用いる。交差競合を測定するまた別のアッセイでは、ＥＬＩＳＡベースの方法を用いる。さらに、国際公開第２００３／４８７３１号には、「ビニング」抗体の交差競合に基づくハイスループット処理が記載されている。
本発明では、上記の交差競合する抗体は、ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含むモノクローナル抗体の活性を保持している。具体的には、交差競合する抗体はＡ１２抗体またはＢ６抗体の活性を保持している。交差競合する抗体が所望の活性を保持しているかどうかを確認するには、当該技術分野で周知のアッセイのいずれも適しているものと思われる。例えば、抗体の脱顆粒活性を増大させる能力を判定する実施例４に記載のアッセイは、抗体がＮＫ細胞の活性、特にＮＫ細胞の殺作用活性を増大させる能力を保持しているかどうかを判定するのに適しているものと思われる。
実施例１で示されるように、本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームとの結合に関してＣＬ１−Ｒ２抗体と交差競合することはない。逆に、ＣＬ１−Ｒ２抗体がＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して本発明のモノクローナル抗体と交差競合することはない。ＣＬ１−Ｒ２抗体は、２００４年４月２８日にブダペスト条約の条項に従ってＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ Ｃ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ（Ｃ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ ２５、ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ Ｒｏｕｘ Ｆ−７５７２４ Ｐａｒｉｓ Ｃｅｄｅｘ １５、Ｆｒａｎｃｅ）に寄託されたハイブリドーマにより得ることができる。寄託されているハイブリドーマはＣＮＣＭ寄託番号がＩ−３２０４である。
さらに、実施例１で示されるように、本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ１６０ ＧＰＩアンカー型アイソフォームとの結合に関してＢＹ５５抗体と交差競合することはない。逆に、ＢＹ５５抗体がＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して本発明のモノクローナル抗体と交差競合することはない。ＢＹ５５は、例えばＡｂｃａｍ社（参照番号ａｂ８１３８８）およびＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（参照番号１２−１６０９−４２）から入手し得る。
一実施形態では、本発明は、上記のＡ１２抗体またはＢ６抗体と実質的に同じエピトープと結合する抗体も提供する。本発明では、Ａ１２抗体またはＢ６抗体と実質的に同じエピトープと結合する抗体をそれぞれＡ１２様抗体またはＢ６様抗体と呼ぶ。
本発明の抗体は、当該技術分野で公知の任意の技術、例えば、特に限定されないが、単独の、または組み合わせた任意の化学的、生物学的、遺伝学的または酵素的技術などによって作製される。通常、当業者には、所望の配列のアミノ酸配列がわかっていれば標準的なポリペプチド作製技術により前記抗体を容易に作製することができる。例えば、好ましくは市販のペプチド合成装置（カリフォルニア州フォスターシティのＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社が製造する装置など）を製造業者の指示通りに使用し、周知の固相法を用いて抗体を合成することができる。あるいは、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術により本発明の抗体を合成することができる。例えば、抗体をコードするＤＮＡ配列を発現ベクター内に組込み、所望の抗体を発現し、のちに周知の技術を用いてそれを単離することができる適切な真核宿主または原核宿主にそのようなベクターを導入して、抗体をＤＮＡ発現産物として得ることができる。
したがって、本発明のさらなる目的は、本発明による抗体をコードする核酸分子に関する。より具体的には、核酸分子は本発明の抗体の重鎖または軽鎖をコードする。より具体的には、核酸分子は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９と７０％の同一性を有する核酸配列を含む。
配列番号１６重鎖：Ａ１２のＤＮＡ配列
ＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＡＧＴＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＴＣＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＡＴＡＴＡＴＡＡＧＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＣＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＴＣＣＴＡＴＴＡＴＧＧＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号１７軽鎖：Ａ１２のＤＮＡ配列
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＧＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＴＣＧＡＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＡＡＣＣＡＧＣＡＧＴＧＡＣＧＴＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＴＡＴＧＧＣＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＣＡＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＡＴＧＡＴＴＴＡＴＴＡＴＧＡＣＡＧＴＴＡＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＴＴＣＴＡＡＴＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＣＡＣＧＧＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＡＣＡＴＡＴＴＡＴＡＧＣＡＣＴＣＧＡＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＡＡＡ
配列番号１８重鎖：Ｂ６のＤＮＡ配列
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＴＴＡＴＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＡＴＡＴＡＴＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＣＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＴＣＣＡＧＴＧＧＣＴＡＴＧＧＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号１９軽鎖：Ｂ６のＤＮＡ配列
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＧＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＴＣＧＡＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＡＣＣＡＧＣＡＧＴＧＡＣＧＴＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＡＧＴＴＡＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＡＴＧＡＴＴＴＡＴＴＡＴＧＡＣＡＧＴＴＡＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＴＴＣＴＡＡＴＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＣＡＣＧＧＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＴＣＡＴＡＴＡＣＡＴＡＴＴＡＴＡＧＣＡＣＴＣＧＡＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
「コードする」という用語は、ポリヌクレオチドの特定のヌクレオチド配列、例えば遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡなどが、ヌクレオチド（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）の定められた配列またはアミノ酸の定められた配列を有する生物学的過程およびそれによって生じる生物学的特性において他のポリマーおよび高分子を合成するための鋳型としての役割を果たすという固有の特性を指す。したがって、ある遺伝子、ｃＤＮＡまたはＲＮＡについて、細胞またはその他の生体系でその遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳によりタンパク質が産生される場合、それはタンパク質をコードすることになる。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり通常配列表に記載されるコード鎖および遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳型として用いられる非コード鎖はともに、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質またはその他の産物をコードすると言える。特に明記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いの縮重型であり、同じアミノ酸配列をコードするあらゆるヌクレオチド配列が含まれる。「タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列」という語句には、そのタンパク質をコードする何らかの型のヌクレオチド配列がイントロン（１つまたは複数）を含む限り、イントロンも含まれ得る。
前記核酸は通常、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であり、それは適切なベクター、例えばプラスミド、コスミド、エピソーム、人工染色体、ファージまたはウイルスベクターなどに含まれ得る。本明細書で使用される「ベクター」、「クローニングベクター」および「発現ベクター」という用語は、宿主細胞にＤＮＡまたはＲＮＡ配列（例えば、外来遺伝子）を導入し、それにより宿主を形質転換し、導入した配列の発現（例えば、転写および翻訳）を促進することができる運搬体を意味する。したがって、本発明のさらなる目的は、本発明の核酸を含むベクターに関する。このようなベクターは、対象に投与したときに前記抗体の発現を引き起こす、または指令するプロモーター、エンハンサー、ターミネータなどの調節エレメントを含み得る。動物細胞の発現ベクターに使用されるプロモーターおよびエンハンサーの例としては、ＳＶ４０の初期プロモーターおよびエンハンサー、モロニーマウス白血病ウイルスのＬＴＲプロモーターおよびエンハンサー、免疫グロブリンＨ鎖のプロモーターおよびエンハンサーなどが挙げられる。ヒト抗体Ｃ領域をコードする遺伝子を挿入し発現させることができる限り、任意の動物細胞用発現ベクターを使用することができる。適切なベクターの例としては、ｐＡＧＥ１０７、ｐＡＧＥ１０３、ｐＨＳＧ２７４、ｐＫＣＲ、ｐＳＧ１ベータｄ２−４などが挙げられる。プラスミドのその他の例としては、複製起点を含む複製プラスミドまたは組込みプラスミド、例えばｐＵＣ、ｐｃＤＮＡ、ｐＢＲなどが挙げられる。ウイルスベクターのその他の例としては、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターおよびＡＡＶベクターが挙げられる。このような組換えウイルスは、当該技術分野で公知の技術により、例えば、パッケージング細胞のトランスフェクションまたはヘルパープラスミドもしくはヘルパーウイルスによる一過性トランスフェクションなどにより作製し得る。ウイルスパッケージング細胞の典型的な例としては、ＰＡ３１７細胞、ＰｓｉＣＲＩＰ細胞、ＧＰｅｎｖ＋細胞、２９３細胞などが挙げられる。このような複製欠損組換えウイルスを作製するための詳細なプロトコルについては、例えば国際公開第９５／１４７８５号、同第９６／２２３７８号、米国特許第５，８８２，８７７号、同第６，０１３，５１６号、同第４，８６１，７１９号、同第５，２７８，０５６号および国際公開第９４／１９４７８号にみることができる。
「プロモーター／制御配列」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するのに必要な細胞の合成機構または導入された合成機構によって認識され、それによりプロモーター／制御配列と作動可能に連結された遺伝子産物の発現を可能にする核酸配列（例えばＤＮＡ配列など）を指す。いくつかの場合には、この配列はコアプロモーター配列であり、また別の場合には、この配列は、遺伝子産物の発現に必要なエンハンサー配列およびその他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／制御配列は、例えば、組織特異的に遺伝子産物を発現させるものであり得る。
「作動可能に連結された」または「転写制御」という用語は、異種核酸配列の発現をもたらす制御配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指す。例えば、第一の核酸配列が第二の核酸配列と機能的関係にある場合、その第一の核酸配列と第二の核酸配列は作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、そのプロモーターとコード配列は作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、互いに隣接していてよく、例えば、必要に応じて２つのタンパク質コード領域を連結するため、同じリーディングフレーム内にある。
本発明のさらなる目的は、本発明による核酸および／またはベクターによってトランスフェクト、感染または形質転換した宿主細胞に関する。本明細書で使用される「形質転換」という用語は、宿主細胞が導入された遺伝子または配列を発現して所望の物質、通常、導入された遺伝子または配列がコードするタンパク質または酵素を産生するようその宿主細胞に「外来」（すなわち、外因性または細胞外）の遺伝子、ＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列を導入することを意味する。導入されるＤＮＡまたはＲＮＡを受け取り発現する宿主細胞は「形質転換」したものである。
本発明の核酸を用いて、適切な発現系で本発明の抗体を作製することができる。「発現系」という用語は、例えば、ベクターに運搬され宿主細胞に導入される外来ＤＮＡがコードするタンパク質を発現させるのに適した条件下にある宿主細胞および適合性のあるベクターを意味する。一般的な発現系は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞とプラスミドベクター、昆虫宿主細胞とバキュロウイルスベクターおよび哺乳動物宿主細胞とベクターを含む。宿主細胞のその他の例としては、特に限定されないが、原核細胞（細菌など）および真核細胞（例えば酵母細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞など）が挙げられる。具体例としては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、クリベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）またはサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）酵母、哺乳動物細胞系（例えば、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＨＯ細胞、３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞など）および初代哺乳動物細胞または樹立哺乳動物細胞培養物（例えば、リンパ芽球、線維芽細胞、胚細胞、上皮細胞、神経細胞、脂肪細胞などから作製したもの）が挙げられる。例としてほかにも、マウスＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８１）、マウスＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８０）、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子（以降、「ＤＨＦＲ遺伝子」と呼ぶ）が欠損したＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ Ｇら；１９８０）、ラットＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６６２、以降、「ＹＢ２／０細胞」と呼ぶ）などが挙げられる。本発明は、本発明による抗体を発現する組換え宿主細を作製する方法であって、（ｉ）上記の組換え核酸またはベクターをコンピテント宿主細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで導入する段階と、（ｉｉ）得られた組換え宿主細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで培養する段階と、（ｉｉｉ）任意選択で、前記抗体を発現および／または分泌する細胞を選択する段階とを含む、方法にも関する。このような組換え宿主細胞を本発明の抗体の作製に使用することができる。
ベクターの例としては、特に限定されないが、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸のプラスミドまたはリポソームに含まれたプラスミド）およびウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を含めた当該技術分野で公知のあらゆるベクターが挙げられる。
本発明の抗体は、従来の免疫グロブリン精製法、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィーなどにより培地から適切に分離される。
本発明はさらに、本発明の抗体、好ましくはＢ６様抗体またはＡ１２様抗体を含むか、これよりなるか、または実質的にこれよりなる組成物に関する。
本明細書で組成物に関して使用される「実質的にこれよりなる」は、組成物に関して、上記の少なくとも１つの本発明の抗体が前記組成物内の唯一の治療剤または生物学的活性を有する薬剤であることを意味する。
一実施形態では、本発明の組成物は、医薬組成物であり、薬学的に許容される担体をさらに含む。
本発明はさらに、本発明の抗体、好ましくＢ６様抗体またはＡ１２様抗体を含むか、これよりなるか、または実質的にこれよりなる薬剤に関する。
本発明の設計抗体には、例えば抗体の特性を改善するため、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に改変を施した抗体が含まれる。このようなフレームワーク改変は通常、抗体の免疫原性を低下させるために施される。例えば、１つの方法として、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に「復帰変異させる」というものがある。より具体的には、体細胞変異を経た抗体には、その抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基が含まれることがある。このような残基は、抗体フレームワーク配列と、その抗体が由来する生殖系列配列とを比較することによって特定することができる。フレームワーク領域配列をその生殖系列配置に戻すため、例えば部位特異的変異誘発またはＰＣＲを介する変異誘発によって体細胞変異を生殖系列配列に「復帰変異させる」ことができる。このような「復帰変異させた」抗体も本発明に包含されるものとする。また別のタイプのフレームワーク改変では、フレームワーク領域内、または場合によっては１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つまたは複数の残基を変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させる。この方法は「脱免疫原性化」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載されている。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を媒介するＦｃ領域を含む。本明細書で使用される「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、次いでその標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。いかなる特定の作用機序に限定されるのを望むわけではないが、ＡＤＣＣを媒介するこれらの細胞傷害性細胞は一般に、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する。
本明細書で使用される「Ｆｃ領域」は、抗体の１番目の定常領域免疫グロブリンドメインを除いた定常領域を含む、ポリペプチドを含む。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの残りの２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの残りの３つの定常領域免疫グロブリンドメインならびに上記ドメインのＮ末端側の柔軟なヒンジを指す。ＩｇＡおよびＩｇＭに関しては、ＦｃはＪ鎖を含み得る。ＩｇＧに関しては、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣガンマ２（Ｃγ２）の間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むものと定義され、ここでは、番号付けはＫａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，Ｖａ．）に記載されているＥＵインデックスに従ったものである。「Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックス」は、上記のＫａｂａｔらに記載されているヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。Ｆｃは、分離したこの領域、または抗体、抗体フラグメントもしくはＦｃ融合タンパク質におけるこの領域を指し得る。Ｆｃ変異型タンパク質は、抗体、Ｆｃ融合体、またはＦｃ領域を含む任意のタンパク質もしくはタンパク質ドメインであり得る。特に好ましいのは、Ｆｃ領域の非天然の変異型である変異型Ｆｃ領域を含むタンパク質である。非天然のＦｃ領域（本明細書では「変異型Ｆｃ領域」とも呼ぶ）のアミノ酸配列は、野生型のアミノ酸配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失を含む。挿入または置換の結果、変異型Ｆｃ領域の配列内に新たに出現した任意のアミノ酸残基を非天然アミノ酸残基と呼ぶこともある。注：特に限定されないが、Ｋａｂａｔ２７０、２７２、３１２、３１５、３５６および３５８を含めたＦｃのいくつかの位置に多型が観察されており、このため、提供される配列と先行技術の配列との間にわずかな差が存在し得る。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域と結合する受容体を表すのに使用される。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現については、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）にまとめられている。ある分子のＡＤＣＣ活性を評価するには、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＡＤＣＣアッセイ、例えば米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているアッセイなどを実施し得る。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。上記にものに代えて、またはこれに加えて、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているものなどの動物モデルを用いて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性をｉｎ ｖｉｖｏで評価してもよい。本明細書で使用される「エフェクター細胞」という用語は、１つまたは複数のＦｃＲを発現しエフェクター機能を発揮する白血球のことである。この細胞は、少なくともＦｃγＲＩ、ＦＣγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を遂行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は完全長抗体である。いくつかの実施形態では、完全長抗体はＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、完全長抗体はＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢおよびＦｃγＲＩＶに対する親和性が増大した変異型Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入または欠失を含み、前記少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入または欠失によりＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢおよびＦｃγＲＩＶに対する親和性が増大する、変異型Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入または欠失を含み、前記少なくとも１つのアミノ酸残基が、残基２３９、３３０および３３２からなる群より選択され、アミノ酸残基がＥＵインデックスに従って番号付けされたものである、変異型Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、少なくとも１つのアミノ酸の置換を含み、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換が、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｙおよび１３３２Ｅからなる群より選択され、アミノ酸残基がＥＵインデックスに従って番号付けされたものである、変異型Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体のグリコシル化を改変する。例えば、非グリコシル化抗体（すなわち、グリコシル化のない抗体）を作製することができる。グリコシル化を変化させて、例えば、抗体の抗原に対する親和性を増大させる、または抗体のＡＤＣＣ活性を変化させることができる。このような炭水化物改変は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化部位を変化させることにより実施することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位が除去される１つまたは複数のアミノ酸置換を施し、それによりその部位のグリコシル化を除去することができる。このような非グリコシル化によって抗体の抗原に対する親和性が増大し得る。このような方法については、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号（参照により本明細書に組み込まれる）にさらに詳細に記載されている。上記のものに加えて、またはこれに代えて、グリコシル化のタイプが変化した抗体、例えばフコシル残基の量が少ない、もしくはフコシル残基のない低フコシル化もしくは非フコシル化抗体、またはバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体などを作製してもよい。このようなフコシル化パターンの変化によって抗体のＡＤＣＣ能が増大することが明らかにされている。このような炭水化物改変は、例えば、グリコシル化機序の変化した宿主細胞に抗体を発現させるにより実施することができる。グリコシル化機序の変化した細胞は当該技術分野で既に記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによりグリコシル化の変化した抗体を作製する宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１１７６１９５号（参照により本明細書に組み込まれる）には、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊されており、そのため発現する抗体が低フコシル化を示すかフコシル残基を欠く細胞系が記載されている。したがって、いくつかの実施形態では、低フコシル化または非フコシル化パターンを示す細胞系、例えば、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子の発現が欠損した哺乳動物細胞系を用いる組換え発現により本発明のヒト抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を作製し得る。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第０３／０３５８３５号（参照により本明細書に組み込まれる）には、Ａｓｎ（２９７）結合炭水化物にフコースを付加する能力が低下していると同時に、それにより宿主細胞に発現する抗体が低フコシル化される変異型ＣＨＯ細胞系のＬｅｃｌ３細胞が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら，２００２ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０も参照されたい）。Ｕｍａｎａらよる国際公開第９９／５４３４２号（参照により本明細書に組み込まれる）には、糖タンパク質を改変するグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）−ＮアセチルグルコサミントランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現し、それにより発現する抗体がバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造の増大を示し、その結果、抗体のＡＤＣＣ活性が増大するよう操作した細胞系が記載されている（Ｕｍａｎａら，１９９９ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０も参照されたい）。さらに、Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社は、哺乳動物のグリコシル化パターンが変化してフコシル残基を欠く抗体を産生することが可能な遺伝子操作ＣＨＯ哺乳動物細胞を記載されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｕｒｅｋａｉｎｃ．ｃｏｍ／ａ＆ｂｏｕｔｕｓ／ｃｏｍｐａｎｙｏｖｅｒｖｉｅｗ．ｈｔｍｌ）。あるいは、哺乳動物様のグリコシル化パターンを示すよう操作され、フコースを欠くグリコシル化パターンの抗体を産生することが可能な酵母または糸状菌（例えば、欧州特許第１２９７１７２（Ｂ１）号を参照されたい）に本発明のヒト抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を産生させてもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、補体依存性細胞傷害を媒介するＦｃ領域を含む。「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、ある分子が補体の存在下で補体活性化を惹起し標的を溶解させる能力を指す。補体活性化経路は、コグネイト抗原と複合体を形成した分子（例えば、抗体）に補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するには、ＣＤＣアッセイ、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔａｒｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されているアッセイなどを実施し得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、抗体依存性食作用を媒介するＦｃ領域を含む。本明細書で使用される「抗体依存性食作用」または「オプソニン作用」という用語は、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、次いでその標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介性反応を指す。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体依存性食作用を誘導するＦｃ領域を含む。その結果、このような抗体を対象に投与すると、ＣＤ１６０−ＴＭを発現する細胞、例えばＣＤ１６０−ＴＭを発現する腫瘍細胞などの枯渇を引き起こし得る（例えば、ＣＤ１６０−ＴＭ＋ＮＫ細胞の数が１０％、２０％、５０％、６０％またはそれ以上除去される、または減少する）。
したがって、本発明のさらなる目的は、必要とする対象のＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームを発現する細胞の集団を枯渇させる方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を送達することを含む、方法に関する。一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体依存性食作用を誘導するＦｃ領域を含む。
本発明のさらなる目的は、必要とする対象のＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームを発現する悪性ＮＫ細胞の集団を枯渇させる方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を送達することを含む、方法に関する。一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体依存性食作用を誘導するＦｃ領域を含む。
本発明のさらなる目的は、必要とする対象のＡ１２抗体またはＢ６抗体によって認識されるエピトープを発現する細胞の集団を枯渇させる方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を送達することを含む、方法に関する。一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体依存性食作用を誘導するＦｃ領域を含む。
本明細書で細胞の集団に関して使用される「枯渇させる」という用語は、対象中の前記細胞の数の測定可能な減少を指す。減少は、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上であり得る。いくつかの実施形態では、この用語は、対象または試料中の細胞の数を検出可能限界未満の量まで減少させることを指す。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、抗体依存性細胞傷害、補体依存性細胞傷害および抗体依存性食作用を媒介する。
本発明のさらなる目的は、癌細胞がＣＤ１６０−ＴＭを発現する癌を治療する方法に関する。具体的には、癌細胞がＣＤ１６０−ＴＭを発現する癌の例として、特に限定されないが、ＮＫ白血病またはＮＫリンパ腫、例えば節外性および非節外性ＮＫ／Ｔリンパ腫；ＮＫ細胞由来の悪性腫瘍；ならびに急性ＮＫ白血病などが挙げられる。
したがって、本発明はさらに、癌細胞がＣＤ１６０−ＴＭを発現する癌の治療に使用する本発明の抗体、組成物、医薬組成物または薬剤に関する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を媒介するＦｃ領域を含まず、したがって、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導するＦｃ部分を含まない。一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＣＤＣまたは抗体依存性食作用を誘導するＦｃ領域を含まない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＣＤ１６０−ＴＭポリペプチドを発現するＮＫ細胞の枯渇を直接的にも間接的にも引き起こすことはない（例えば、ＣＤ１６０−ＴＭ＋ＮＫ細胞の数の１０％、２０％、５０％、６０％またはそれ以上の除去も減少も引き起こすことはない）。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）ポリペプチドと実質的に結合することができるＦｃドメインを含まない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、Ｆｃドメインがない（例えば、ＣＨ２ドメインおよび／またはＣＨ３ドメインがない）か、ＩｇＧ２アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、グリコシル化プロファイルが変化したＦｃドメイン（例えば、ＩｇＧ１のＦｃドメイン）を含み、そのため抗体のＡＤＣＣ活性がみられない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、一本鎖抗体フラグメントまたは複数の異なる抗体フラグメントを含む多重特異性抗体を含むか、これよりなるものである。いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は毒性部分と結合していない。いくつかの実施形態では、抗体のＣ２ｑ結合が変化し、かつ／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が低下または消失するように、アミノ酸残基から選択される１つまたは複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることができる。この方法については、ｌｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。
本発明のさらなる目的は、必要とする対象のＮＫ細胞の活性またはＮＫ細胞のエフェクター機能、特にＮＫ細胞の殺作用活性を増強する方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体を投与することを含み、ただし、抗体が抗体依存性細胞傷害も補体依存性細胞傷害も抗体依存性食作用も媒介しない、方法に関する。
本明細書で使用される「ＮＫ細胞」は、自然免疫または非通常型免疫に関与するリンパ球の亜集団を指す。ＮＫ細胞は、特定の特徴ならびに生物学的特性、例えばＣＤ５６および／またはＣＤ１６を含めたヒトＮＫ細胞に特異的な表面抗原の発現、細胞表面のアルファ／ベータＴＣＲ複合体またはガンマ／デルタＴＣＲ複合体の不在、「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現することができない細胞と結合し、固有の細胞溶解機序の活性化によりこれを死滅させる能力、ＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する腫瘍細胞またはその他の疾患細胞を死滅させる能力ならびに免疫応答を刺激または阻害しサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力（「ＮＫ細胞活性」）などにより同定することができる。ＮＫ細胞という用語にはＮＫ細胞の任意の亜集団も包含される。本発明においては、「活性な」ＮＫ細胞は、標的細胞を溶解する能力または他の細胞の免疫機能を増強する能力を有するＮＫ細胞を含めた生物学的に活性なＮＫ細胞を指す。例えば、「活性な」ＮＫ細胞は、活性化ＮＫ受容体のリガンドを発現し、かつ／またはＮＫ細胞上のＫＩＲによって認識されるＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現することができない細胞を死滅させることができる。
本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）がＮＫ細胞の活性、特にＮＫ細胞の殺作用活性を増強することができるかどうかは、当該技術分野で周知の任意のアッセイにより判定し得る。前記アッセイは通常、ＮＫ細胞と標的細胞（例えば、ＮＫ細胞によって認識され、かつ／または溶解される標的細胞）とを接触させるｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイである。例えば、ＮＫ細胞による特異的溶解を本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）と接触させたＮＫ細胞またはＮＫ細胞系により同じエフェクター：標的細胞比で得られる特異的溶解の約２０％超、好ましくは少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％またはそれ以上増大させることができる抗体を選択することができる。古典的細胞傷害性アッセイのプロトコルの例が、例えば、Ｐｅｓｓｉｎｏら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１９９８，１８８（５）：９５３−９６０；Ｓｉｖｏｒｉら，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９９．２９：１６５６−１６６６；Ｂｒａｎｄｏら，（２００５）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７８：３５９−３７１；Ｅｌ−Ｓｈｅｒｂｉｎｙら，（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６７（１８）：８４４４−９；およびＮｏｌｔｅ−’ｔ Ｈｏｅｎら，（２００７）Ｂｌｏｏｄ １０９：６７０−６７３に記載されている。ＮＫ細胞の細胞傷害性は通常、実施例に記載される任意のアッセイにより判定する。ＮＫ細胞の細胞傷害性は、古典的な細胞傷害性に関するｉｎ ｖｉｔｒｏクロム放出試験により測定し得る。エフェクター細胞は通常、健常ドナー由来の新鮮なＰＢ−ＮＫとする。標的細胞は通常、マウス肥満細胞腫Ｐ８１５細胞またはＥＢＶ感染Ｂ細胞系とする。したがって、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）が標的細胞（感染細胞、腫瘍細胞、炎症誘発性細胞など）に対するＮＫ細胞の反応性または細胞傷害性の増大、ＮＫ細胞の活性化、活性化マーカー（例えば、ＣＤ１０７発現）および／またはＩＦＮガンマ産生の増大ならびに／あるいはそのような活性化し、反応性であり、細胞傷害性であり、かつ／または活性化したＮＫ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの頻度の増大を引き起こす場合、それを選択する。
いくつかの実施形態では、対象は癌または感染症に罹患している。したがって、本発明のさらなる目的は、必要とする対象の癌または感染症を治療する方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体を投与することを含む、方法に関する。好ましくは、この実施形態では、本発明の抗体はＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まない。
したがって、本発明はさらに、癌、感染症、炎症性疾患および／または自己免疫疾患の治療に使用する本発明の抗体、組成物、医薬組成物または薬剤に関する。
本明細書で使用される「治療」または「治療すること」とは、臨床結果を含めた有益な結果または所望の結果を得る方法のことである。本発明の目的に関して、有益な臨床結果または所望の臨床結果としては、特に限定されないが、以下のうち１つまたは複数のものが挙げられる：疾患に起因する１つもしくは複数の症状の軽減、疾患の程度の軽減、疾患の安定（例えば、疾患の悪化の予防もしくは遅延）、疾患拡散（例えば、転移）の予防もしくは遅延、疾患再発の予防もしくは遅延、疾患進行の遅延もしくは緩徐化、疾患状態の改善、疾患の寛解（部分寛解または完全寛解）をもたらすこと、疾患の治療に必要な１つもしくは複数の他の薬剤の減量、疾患進行の遅延、生活の質の向上および／または生存期間の延長。「治療」には癌の病理学的帰結の軽減も包含される。本発明の方法は、上記の治療の態様のうち任意の１つまたは複数のものを企図する。一実施形態では、「治療すること」または「治療」という用語は治療処置および予防手段の両方を指し、その目的は標的とする疾患を予防または抑制（軽減）することである。したがって、一実施形態では、治療を必要とする者には、既に障害を有する者および障害を有する傾向がある者または障害を予防するべき者が含まれ得る。
本明細書で使用される「癌」という用語は、その当該技術分野での一般的な意味を有し、特に限定されないが、固形腫瘍および血液腫瘍がこれに含まれる。癌という用語には、皮膚、組織、器官、骨、軟骨、血液および血管の疾患が含まれる。「癌」という用語はさらに、原発性癌および転移性癌をともに包含する。本発明の方法および組成物によって治療し得る癌の例としては、特に限定されないが、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、胸、結腸、食道、胃腸管、歯茎、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌または子宮に由来する癌細胞が挙げられる。さらに、癌は、具体的には、特に限定されないが以下の組織学的タイプのものであり得る：悪性新生物；癌腫；未分化癌腫；巨細胞癌および紡錘細胞癌；小細胞癌；乳頭癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；石灰化上皮癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；悪性ガストリノーマ；胆管細胞癌；肝細胞癌；肝細胞癌と胆管細胞癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫様ポリープの腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；色素嫌性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；塩基好性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞状腺癌；乳頭状濾胞状腺癌；非被嚢性硬化性癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘液性類表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；乳房パジェット病；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生随伴腺癌；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性莢膜細胞腫；悪性顆粒膜細胞腫；悪性アンドロブラストーマ；セルトリ細胞腫；悪性ライディッヒ細胞腫；悪性脂質細胞腫；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；血管球血管肉腫；悪性メラノーマ；メラニン欠乏性黒色腫；表在拡大型黒色腫；巨大色素性母斑の悪性メラノーマ；類上皮細胞メラノーマ；悪性青色母斑；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質性肉腫；悪性混合腫瘍；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレンナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；未分化胚細胞腫；胎児性癌；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺腫；絨毛癌；悪性中腎腫；血管肉腫；悪性血管内皮腫；カポジ肉腫；悪性血管周皮腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽細胞腫；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル上皮歯牙肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル上皮線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫；上衣腫；星状細胞腫；原形質性星状細胞腫；原線維性星状細胞腫；星状芽細胞腫；膠芽腫；乏突起神経膠腫；乏突起膠芽腫；原始神経外胚葉性腫瘍；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽腫；網膜芽細胞腫；嗅神経腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫；悪性リンパ腫；ＮＫ白血病またはＮＫリンパ腫、例えば節外性および非節外性ＮＫ／Ｔリンパ腫；ＮＫ細胞由来の悪性腫瘍；ならびに急性ＮＫ白血病など；ホジキン病；ホジキンリンパ腫；側肉芽腫；小リンパ球性悪性リンパ腫；びまん性大細胞型悪性リンパ腫；悪性濾胞性リンパ腫；菌状息肉症；その他の特定されている非ホジキンリンパ腫；悪性組織球症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；ならびに有毛細胞白血病。
本明細書で使用される「感染症」という用語は、ウイルス、細菌、原生動物、カビまたは真菌を原因とする任意の感染症を含む。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、アレナウイルス科、アストロウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、シストウイルス科、フラビウイルス科、フレキシウイルス科、ヘペウイルス、レビウイルス科、ルテオウイルス科、モノネガウイルス目、モザイクウイルス類、ニドウイルス目、ノダウイルス科、オルトミクソウイルス科、ピコビルナウイルス、ピコルナウイルス科、ポティウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、セキウイルス科、テヌイウイルス、トガウイルス科、トンブスウイルス科、トティウイルス科、ティモウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘルペスウイルス科、パラミクソウイルス科またはパピローマウイルス科のウイルスからなる群より選択される１つまたは複数のウイルスによる感染症を含む。重要なＲＮＡウイルスの分類学的ファミリーとしては、特に限定されないが、アストロウイルス科、ビルナウイルス科、ブロモウイルス科、カリシウイルス科、クロステロウイルス科、コモウイルス科、シストウイルス科、フラビウイルス科、フレキシウイルス科、ヘペウイルス、レビウイルス科、ルテオウイルス科、モノネガウイルス目、モザイクウイルス類、ニドウイルス目、ノダウイルス科、オルトミクソウイルス科、ピコビルナウイルス、ピコルナウイルス科、ポティウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、セキウイルス科、テヌイウイルス、トガウイルス科、トンブスウイルス科、トティウイルス科およびティモウイルス科のウイルスが挙げられる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎、免疫不全ウイルス、ポリオ、麻疹、エボラ、コクサッキー、ライノ、西ナイル、痘瘡、脳炎、黄熱、デング熱、インフルエンザ（ヒト、トリおよびブタを含む）、ラッサ、リンパ球性脈絡髄膜炎、フニン、マチュポ、グアナリト、ハンタウイルス、リフトバレー熱、ラクロス、カリフォルニア脳炎、クリミア・コンゴ、マーブルク、日本脳炎、キャサヌール森林病、ベネズエラウマ脳炎、東部ウマ脳炎、西部ウマ脳炎、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、パラインフルエンザ、呼吸器多核体、プンタトロ、タカリベ、ピチンデウイルス、アデノウイルス、デング熱、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢ（ヒト、トリおよびブタを含む）、フニン、麻疹、パラインフルエンザ、ピチンデ、プンタトロ、呼吸器多核体、ライノウイルス、リフトバレー熱、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、タカリベ、ベネズエラウマ脳炎、西ナイルおよび黄熱病ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレー渓谷ウイルス、ポワッサンウイルス、ロシオウイルス、跳躍病ウイルス、バンジウイルス、イルヘウスウイルス、ココベラウイルス、クンジンウイルス、アルファイウイルス、ウシ下痢症ウイルスならびにキャサヌール森林病からなる群より選択される１つまたは複数のウイルスによる感染症を含む。本発明に従って治療することができる細菌感染としては、特に限定されないが、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）；化膿性連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）を含めた連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；エンテロコックル（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｌ）；炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）および乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）を含めた桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）；リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）；ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；Ｇ．バギナリス（Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）を含めたガードネレラ菌（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）；ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）；ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）；サーモアクチノミセス−・ブルガリス（Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）；トレポネルナ（Ｔｒｅｐｏｎｅｒｎａ）；カンプリオバクター（Ｃａｍｐｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、緑膿菌を含めたシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）；レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）；淋菌（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）およびＮ．メニンギティデス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）を含めたナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）；Ｆ．メニンゴセプティカム（Ｆ．ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）およびＦ．オドラツルン（Ｆ．ｏｄｏｒａｔｕｒｎ）を含めたフラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）；ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）；百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）およびＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含めたボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を含めたエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）；エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、セラチアマルセッセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）およびセラチア・リクファシエンス（Ｓ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）を含めたセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）；エドワードジエラ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）；プロテウス・ミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）およびＰ．ブルガリス（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）を含めたプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）；ストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）；Ｒ．フィケッツフィ（Ｒ．ｆｉｃｋｅｔｔｓｆｉ）を含めたリケッチア科（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ）、オウム病クラミジア（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）およびＣ．トラコルナティス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｒｎａｔｉｓ）を含めたクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）；結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．フォルイツルン（Ｍ．ｆｏｌｌｕｉｔｕｒｎ）、Ｍ．ラプラエ（Ｍ．ｌａｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・アフリカヌム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、カンサシ菌（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレおよびＭ．レプラエルヌリウム（Ｍ．ｌｅｐｒａｅｒｎｕｒｉｕｍ）を含めたマイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）；ならびにノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）を原因とする感染症が挙げられる。本発明に従って治療し得る原生動物感染症としては、特に限定されないが、リーシュマニア、コクジディオア（ｋｏｋｚｉｄｉｏａ）およびトリパノソーマを原因とする感染症が挙げられる。疾病管理センター（ＣＤＣ）の国立感染症センター（ＮＣＩＤ）のウェブサイト（ワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）のｃｄｃ．ｇｏｖ／ｎｃｉｄｏｄ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／）に感染症の完全なリストをみることができ、このリストは参照により本明細書に組み込まれる。前記疾患はいずれも、本発明による組成物を用いる治療の候補である。
炎症性疾患の例としては、特に限定されないが、関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎、若年性関節リウマチ、尿酸性関節炎、痛風、慢性多発性関節炎、肩関節周囲炎、頸部関節炎、腰仙部関節炎、腸炎性関節炎および強直性脊椎炎、喘息、皮膚炎、乾癬、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、線維症、嚢胞性線維症、肺線維症、肝硬変、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腎性線維症、ケロイド、強皮症、関節線維症、移植後の遅発性および慢性固形臓器拒絶反応、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、天疱瘡、尋常性天疱瘡、疱疹状天疱瘡、増殖性天疱瘡、ＩｇＡ天疱瘡、紅斑性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、妊娠性類天疱瘡、粘膜皮膚症、結節性類天疱瘡、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、水疱性扁平苔癬、後天性表皮水疱症、自己免疫性糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性血管症、眼炎症、ブドウ膜炎、鼻炎、虚血再灌流傷害、血管形成術後再狭窄、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、糸球体腎炎、グレーブス病、消化管アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、小動脈疾患、急性播種性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、全身性硬化症、抗リン脂質症候群、シェーグレン症候群、自己免疫性溶血性貧血、大腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、塞栓症、肺塞栓症、動脈塞栓症、静脈塞栓症、アレルギー性炎症、心血管疾患、移植関連疾患、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片移植拒絶、慢性拒絶および組織または細胞の同種移植または異種移植による障害、自己免疫疾患、外傷後変性症、脳卒中、移植拒絶反応、アレルギー病態および過敏症、例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性湿疹など、皮膚疾患、皮膚炎症性障害あるいはその任意の組合せが挙げられる。
自己免疫疾患の例としては、特に限定されないが、狼瘡（例えば、エリテマトーデス、ループス腎炎）、橋本甲状腺炎、ウェゲナー病；原発性粘液水腫、グレーブス病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アジソン病、糖尿病（例えば、インスリン依存性糖尿病、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病）、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、腸炎症病態、例えばクローン病および潰瘍性大腸炎など；交感性眼炎、自己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動性肝炎、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、関節炎病態、例えば関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎および若年性特発性関節炎など；多発性筋炎、強皮症、乾癬、原発性硬化性胆管炎；喘息、移植拒絶反応（宿主対移植片病）；移植片対宿主病ならびに混合性結合組織病が挙げられる。
本発明は、本発明の抗体を例えば癌治療のための少なくとも１つのさらなる治療剤と併用する治療応用も提供する。このような投与は、同時投与、個別投与または連続投与であり得る。同時投与では、薬剤を必要に応じて１つの組成物として、または別個の組成物として投与し得る。さらなる治療剤は通常、治療する障害に適したものである。例示的治療剤としては、他の抗癌抗体、細胞毒性薬、化学療法剤、抗血管新生剤、抗癌免疫原、細胞周期制御／アポトーシス調節剤、ホルモン調節剤および下に記載するその他の薬剤が挙げられる。
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、ＮＫ細胞活性化の天然のリガンドまたはＣＤ１６０−ＴＭ以外のＮＫ細胞活性化受容体と結合して活性化させる抗体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、標的細胞（例えば、感染細胞または腫瘍細胞）表面のＮＫ細胞活性化受容体の天然のリガンドの存在量を増大させる薬剤である。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、（ｉ）ＮＫ細胞活性化の天然のリガンドもしくはＣＤ１６０−ＴＭ以外のＮＫ細胞活性化受容体と結合して活性化させる抗体であり、かつ／または（ｉｉ）標的細胞表面のＮＫ細胞活性化受容体の天然のリガンドの存在量を増大させる、第二の薬剤と併用する。ＮＫ細胞活性化受容体としては、例えば、ＮＫＧ２Ｄまたは活性化ＫＩＲ受容体（ＫＩＲ２ＤＳ受容体、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ４）が挙げられる。本明細書で使用される「活性化ＮＫ受容体」という用語は、ＮＫ細胞の表面にあり、刺激を受けると、ＮＫ活性と関連があることが当該技術分野で知られている任意の特性または活性、例えばサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α）産生、細胞内遊離カルシウムレベルの増大、例えば本明細書の他の箇所に記載されるリダイレクト殺作用アッセイで細胞を標的とする能力またはＮＫ細胞増殖を刺激する能力などの測定可能な増大を引き起こす任意の分子を指す。「活性化ＮＫ受容体」という用語は、活性化型またはＫＩＲタンパク質（例えば、ＫＩＲ２ＤＳタンパク質）、ＮＫＧ２Ｄ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１８ＲおよびＩＬ−２１Ｒを含む。活性化受容体に対してアゴニストとして作用するリガンドの例としては、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１ポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、第二の抗体はＣＤ１３７に特異的なものである。本明細書で使用される「ＣＤ１３７」という用語は、その当該技術分野での一般的な意味を有し、Ｌｙ６３、ＩＬＡまたは４−１ＢＢと呼ばれることもある。ＣＤ１３７は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーである。この受容体ファミリーのメンバーおよびその構造的に関連のあるリガンドは、多種多様な生理学的過程の重要な調節因子であり、免疫応答の調節に重要な役割を果たす。ＣＤ１３７は、活性化されたＮＫ細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および単球／マクロファージに発現する。その遺伝子は、細胞外ドメイン内にある３つのシステインリッチモチーフ（この受容体ファミリーの特徴）、膜貫通領域および潜在的なリン酸化部位を含む短いＮ末端側細胞質内部分を有する、２５５アミノ酸のタンパク質をコードする。初代細胞での発現は完全に活性化依存性である。この受容体のリガンドはＴＮＦＳＦ９である。ヒトＣＤ１３７はそのリガンドとのみ結合することが報告されている。アゴニストとしては、天然のリガンド（ＴＮＦＳＦ９）、アプタマー（ＭｃＮａｍａｒａら（２００８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１ １８：３７６−３８６を参照されたい）および抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を第二の抗体と併用し、この抗体は、それが結合する抗原を発現する細胞の細胞死をＡＤＣＣを介して誘導するものである。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、第二の抗体が結合する抗原を発現する細胞の細胞死をＡＤＣＣを介して誘導する第二の薬剤と併用する。一実施形態では、本発明の抗体を第二の抗体とコンジュゲートし、この抗体は、それが結合する抗原を発現する細胞の細胞死をＡＤＣＣを介して誘導するものである。ＮＫ細胞はＡＤＣＣの誘導に重要な役割を果たし、上記の第二の薬剤の使用によりＮＫ細胞の反応性の増大を標的細胞に向けることができる。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、細胞表面抗原、例えば膜抗原に特異的な抗体である。いくつかの実施形態では、第二の抗体は、本明細書に記載される腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞に特異的に発現する分子）、例えばＣＤ２０、ＣＤ５２、ＥｒｂＢ２（またはＨＥＲ２／Ｎｅｕ）、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＭＵＣ−１、ＣＥＡ、ＫＤＲ、αＶβ３など、特にリンパ腫抗原（例えば、ＣＤ２０）に特異的なものである。したがって、本発明は、腫瘍抗原（１つまたは複数）に対するモノクローナル抗体の抗腫瘍効果を増強する方法も提供する。本発明の方法では、１つまたは複数の腫瘍抗原に対する抗体および本発明の抗体の連続投与によってＡＤＣＣ機能を特異的に増強し、それにより標的細胞殺作用を増強する。
したがって、さらなる目的は、必要とする対象において抗体のＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強する方法であって、対象に抗体を投与することと、対象に本発明の抗体を投与することとを含み、好ましくは、本発明の抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まない、方法に関する。
本発明のさらなる目的は、必要とする対象の癌を治療する方法であって、対象に癌細胞抗原に対して選択的な第一の抗体を投与することと、対象に本発明の抗体を投与することとを含み、好ましくは、本発明の抗体が、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まない、方法に関する。
現在癌治療に臨床使用されている抗体は多数あり、それ以外にも臨床開発の様々な段階にある抗体がある。本発明の方法で目的とする抗体は、ＡＤＣＣを介して作用し、通常腫瘍細胞に対して選択的なものであるが、当業者には、一部の臨床的に有用な抗体が実際に非腫瘍細胞、例えばＣＤ２０に作用することが認識されよう。Ｂ細胞悪性腫瘍の治療には抗原およびそれに対応するモノクローナル抗体が多数存在する。よく知られた標的抗原の１つに、Ｂ細胞悪性腫瘍にみられるＣＤ２０がある。リツキシマブはＣＤ２０抗原に対するキメラ非コンジュゲートモノクローナル抗体である。ＣＤ２０はＢ細胞の活性化、増殖および分化に重要な機能的役割を果たす。ＣＤ５２抗原は、慢性リンパ球性白血病の治療に適応されるモノクローナル抗体、アレムツズマブが標的とするものである。ＣＤ２２は多数の抗体が標的とするものであり、最近、毒素と組み合わせると化学療法抵抗性の有毛細胞白血病に有効であることが示されている。ＣＤ２０を標的とするモノクローナル抗体としては、トシツモマブおよびイブリツモマブも挙げられる。固形腫瘍に使用されており、本発明の方法に有用なモノクローナル抗体としては、特に限定されないが、エドレコロマブおよびトラスツズマブ（ハーセプチン）が挙げられる。エドレコロマブは、結腸直腸癌にみられる１７−１Ａ抗原を標的とするものであり、ヨーロッパではそれらを適応症に承認されている。その抗腫瘍効果は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび抗イディオタイプネットワークの誘導を介するものである。トラスツズマブはＨＥＲ−２／ｎｅｕ抗原を標的とするものである。この抗原は乳癌の２５％〜３５％にみられる。トラスツズマブは様々な方法、すなわち、ＨＥＲ−２受容体発現の下方制御、ＨＥＲ−２タンパク質を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖阻害、ＨＥＲ−２タンパク質を過剰発現する腫瘍細胞に対する免疫動員およびＡＤＣＣの増強ならびに血管新生因子の下方制御に作用すると考えられている。アレムツズマブ（キャンパス）は慢性リンパ球性白血病；結腸癌および肺癌の治療に用いられ；ゲムツズマブ（マイロターグ）は急性骨髄性白血病の治療に用いられ；イブリツモマブ（ゼバリン）は非ホジキンリンパ腫の治療に用いられ；パニツムマブ（ベクティビックス）は結腸癌の治療に用いられている。セツキシマブ（アービタックス）も本発明の方法での使用が目的とされる。この抗体は、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）と結合し、結腸癌および頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含めた固形腫瘍の治療に使用されている。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）と併用する。様々な腫瘍が免疫系による攻撃から自身を保護する分子因子を発現することができ、このため、免疫系の監視制御を逃れることに成功する。この「腫瘍免疫逃避」は主として、免疫細胞リガンドが標的とする受容体および結合部位の拮抗的遮断によるものである。免疫チェックポイント阻害剤とは、腫瘍細胞が発達させたこの種の阻害機序を特に標的とする分子のことである。ＩＣＩの例としては、特に限定されないが、ＣＴＬＡ−４の阻害剤（例えば、イピルマブ（ｉｐｉｌｕｍａｂ）およびトレメリムマブなど）、ＰＤ−１の阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ニボルマブおよびＡＭＰ−２２４など）、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブおよびＢＭＳ−９３６５５９など）、ＬＡＧ３の阻害剤（例えば、ＩＭＰ３２１など）およびＢ７−Ｈ３の阻害剤（例えば、ＭＧＡ２７１など）が挙げられる。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）と併用する。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＣＤ１６０−ＴＭがそのリガンドの１つ、例えばＭＨＣクラスＩ分子と結合するのを阻害する。本明細書で使用される「リガンド」という用語は、リガンド／受容体の対のうちの一方のメンバーを指し、その対の他方のメンバーと結合する。このため、ＣＤ１６０−ＴＭがそのリガンドの１つと結合するのを阻害すると、ＣＤ１６０−ＴＭを発現するＮＫ細胞の機能性が阻害され得る。
このような阻害は、発作性夜間ヘモグロビン尿症あるいは炎症性疾患および／または自己免疫疾患の治療に有用であり得る。炎症性疾患および／または自己免疫疾患の例については上に列挙した。
したがって、本発明のさらなる目的は、必要とする対象の発作性夜間ヘモグロビン尿症を治療する方法であって、対象に治療有効量の本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を投与することを含む、方法に関する。本明細書で使用される「発作性夜間ヘモグロビン尿症」または「ＰＮＨ」という用語は、その当該技術分野での一般的な意味を有し、血球溶血性貧血、骨髄不全および高頻度の血栓事象を特徴とする後天性クローン性造血幹細胞障害を指す。いくつかの実施形態では、対象はＰＩＧＡ遺伝子（ホスファチジルイノシトールグリカンアンカー生合成クラスＡ、遺伝子ＩＤ：５２７７）に変異がみられない。
したがって、本発明はさらに、ＰＮＨの治療に使用する抗体、組成物、医薬組成物または薬剤に関する。
一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＰＮＨの治療に使用する場合、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まない。一実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＰＮＨの治療に使用する場合、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、一本鎖抗体フラグメントまたは複数の異なる抗体フラグメントを含む多重特異性抗体からなるか、これを含むものである。好ましくは、この実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）はＦａｂである。
本発明はさらに、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を含む融合タンパク質に関する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を治療部分、すなわち薬物とコンジュゲートする。治療部分は、例えば、細胞毒素、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、免疫賦活剤、溶解ペプチドまたは放射性同位元素であり得る。このようなコンジュゲートを本明細書では、「抗体・薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」と呼ぶ。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、治療部分とコンジュゲートする。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を細胞毒性部分とコンジュゲートする。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、細胞毒性部分とコンジュゲートする。細胞毒性部分は、例えば、タキソール；サイトカラシンＢ；グラミシジンＤ；臭化エチジウム；エメチン；マイトマイシン；エトポシド；テノポシド；ビンクリスチン；ビンブラスチン；コルヒチン；ドキソルビシン；ダウノルビシン；ジヒドロキシアントラシンジオン；マイタンシンまたはその類似体もしくは誘導体などのチューブリン阻害剤；モノメチルアウリスタチンＥもしくはＦまたはその類似体もしくは誘導体などの抗有糸分裂剤；ドラスタチン１０もしくは１５またはその類似体；イリノテカンまたはその類似体；ミトキサントロン；ミトラマイシン；アクチノマイシンＤ；１−デヒドロテストステロン；グルココルチコイド；プロカイン；テトラカイン；リドカイン；プロプラノロール；ピューロマイシン；カリケアマイシンまたはその類似体もしくは誘導体；代謝拮抗剤、例えばメトトレキサート、６メルカプトプリン、６チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５フルオロウラシル、デカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビンまたはクラドリビンなど；アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣなど；シスプラチンまたはカルボプラチンなどの白金誘導体；デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）またはその類似体もしくは誘導体；抗生物質、例えばダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）など；ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）；ジフテリア毒素ならびにジフテリアＡ鎖およびその活性フラグメントなどの関連分子ならびにハイブリッド分子、リシンＡまたは脱グリコシル化リシンＡ鎖毒素などのリシン毒素、コレラ毒素、志賀様毒素、例えばＳＬＴ Ｉ、ＳＬＴ ＩＩ、ＳＬＴ ＩＩＶなど、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、大豆バウマン・バークプロテアーゼ阻害剤、シュードモナスエキソトキシン、アロリン、サポリン、モデッシン、ゲラニン、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質、例えばＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓなど、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシンおよびエノマイシン毒素；リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）；ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ；アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質；ジフテリン毒素；ならびにシュードモナスエンドトキシンからなる群より選択され得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）をアウリスタチンまたはそのペプチド類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、アウリスタチンまたはそのペプチド類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。アウリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解ならびに核および細胞の分裂に干渉し（Ｗｏｙｋｅら（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗癌活性（米国特許第５６６３１４９号）および抗真菌活性がある（Ｐｅｔｔｉｔら（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５）ことが明らかにされている。例えば、アウリスタチンＥをパラ−アセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応させて、それぞれＡＥＢおよびＡＥＶＢを作製することができる。その他の典型的なアウリスタチン誘導体としては、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）およびＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）が挙げられる。適切なアウリスタチンならびにアウリスタチンの類似体、誘導体およびプロドラッグならびにアウリスタチンとＡｂとのコンジュゲーションに適したリンカーについては、例えば、米国特許第５，６３５，４８３号、同第５，７８０，５８８号および同第６，２１４，３４５号ならびに国際公開第０２０８８１７２号、同第２００４０１０９５７号号、同第２００５０８１７１１号、同第２００５０８４３９０号、同第２００６１３２６７０号、同第０３０２６５７７号、同第２００７００８６０号、同第２０７０１１９６８号および同第２０５０８２０２３号に記載されている。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）をピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）またはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、ＰＤＢまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。適切なＰＤＢおよびＰＤＢ誘導体ならびにその関連技術については、例えば、Ｈａｒｔｌｅｙ Ｊ．Ａ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１０；７０（１７）：６８４９−６８５８；Ａｎｔｏｎｏｗ Ｄ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ ２００８；１４（３）：１５４−１６９；Ｈｏｗａｒｄ Ｐ．Ｗ．ら，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ２００９；１９：６４６３−６４６６およびＳａｇｎｏｕら，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ２０００；１０（１８）：２０８３−２０８６に記載されている。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）をアントラサイクリン、マイタンシン、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）、ドラスタチン１０、ドラスタチン１５、イリノテカン、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、ＰＤＢまたはそのいずれかの類似体、誘導体もしくはプロドラッグからなる群より選択される細胞毒性部分とコンジュゲートする。一実施形態では、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは抗体誘導性食作用を媒介するＦｃ領域を含まず、アントラサイクリン、マイタンシン、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）、ドラスタチン１０、ドラスタチン１５、イリノテカン、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、ＰＤＢまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグからなる群より選択される細胞毒性部分とコンジュゲートする。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）をアントラサイクリンまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をマイタンシンまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をカリケアマイシンまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をデュオカルマイシンまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）またはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をドラスタチン１０またはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をドラスタチン１５またはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をモノメチルアウリスタチンＥまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をモノメチルアウリスタチンＦまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピンまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。いくつかの実施形態では、抗体をイリノテカンまたはその類似体、誘導体もしくはプロドラッグとコンジュゲートする。
分子と抗体とをコンジュゲートする技術は当該技術分野で周知である（例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ社，１９８５）のＡｒｎｏｎら，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｉｋｅｒ社，第２版，１９８７）のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐｉｎｃｈｅｒａら編，１９８５）のＴｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｂａｌｄｗｉｎら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ社，１９８５）の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏｒｐｅら，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８を参照されたい。また、例えば国際公開第８９／１２６２４号も参照されたい。）。通常、核酸分子と抗体上のリジンまたはシステインとをそれぞれＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルまたはマレイミド官能基を介して共有結合させる。操作したシステインまたは非天然アミノ酸の組込みを用いるコンジュゲーション法によりコンジュゲートの均一性が改善されることが報告されている（Ａｘｕｐ，Ｊ．Ｙ．，Ｂａｊｊｕｒｉ，Ｋ．Ｍ．，Ｒｉｔｌａｎｄ，Ｍ．，Ｈｕｔｃｈｉｎｓ，Ｂ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｃ．Ｈ．，Ｋａｚａｎｅ，Ｓ．Ａ．，Ｈａｌｄｅｒ，Ｒ．，Ｆｏｒｓｙｔｈ，Ｊ．Ｓ．，Ｓａｎｔｉｄｒｉａｎ，Ａ．Ｆ．，Ｓｔａｆｉｎ，Ｋ．ら（２０１２）．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｕｓｉｎｇ ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９，１６１０１−１６１０６．；Ｊｕｎｕｔｕｌａ，Ｊ．Ｒ．，Ｆｌａｇｅｌｌａ，Ｋ．Ｍ．，Ｇｒａｈａｍ，Ｒ．Ａ．，Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｋ．Ｌ．，Ｈａ，Ｅ．，Ｒａａｂ，Ｈ．，Ｂｈａｋｔａ，Ｓ．，Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔ．，Ｄｕｇｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｌｉ，Ｇ．ら（２０１０）．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｔｈｉｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｄｅｘ ｔｏ ｔａｒｇｅｔ ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２−ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６，４７６９−４７７８．）。Ｊｕｎｕｔｕｌａら（２００８）は「ＴＨＩＯＭＡＢ」（ＴＤＣ）と呼ばれるシステインベースの部位特異的コンジュゲーションを開発しており、従来のコンジュゲーション法と比較して治療指数の改善がみられると主張している。ＡＤＣについて、抗体に組み込まれた非天然アミノ酸とのコンジュゲーションも検討されているが、この方法の普遍性は未だ確立されていない（Ａｘｕｐら，２０１２）。当業者には特に、アシル供与体グルタミン含有タグ（例えば、Ｇｉｎ含有ペプチドタグまたはＱタグ）またはポリペプチド操作（例えば、アミノ酸の欠失、挿入、置換またはポリペプチドの変異によるもの）によって反応性にした内在性グルタミンで操作したＦｃ含有ポリペプチドが考えられよう。次いで、トランスグルタミナーゼがアミン供与剤（例えば、反応性アミンを含むか、これと結合した小分子）と共有結合により架橋して、アミン供与剤がアシル供与体グルタミン含有タグまたは接触可能な／露出した／反応性の内在性グルタミンを介してＦｃ含有ポリペプチドと部位特異的にコンジュゲートした操作Ｆｃ含有ポリペプチドコンジュゲートの安定で均一な集団を形成し得る（国際公開第２０１２０５９８８２号）。
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、所望の治療結果を得るのに有効な量を必要な用量および期間で表したものを指す。したがって、「治療有効量」という用語は、標的に大きな負の副作用も有害な副作用も引き起こさずに、（１）標的疾患の発症の遅延もしくは予防；（２）標的疾患の１つもしくは複数の症状の進行、増悪もしくは悪化の抑制もしくは停止；（３）標的疾患の症状の改善をもたらすこと；（４）標的疾患の重症度もしくは発症頻度の減少；または（５）標的疾患の治癒を目的とする抗体のレベルまたは量を意味し得る。予防処置として治療有効量を標的疾患の発症前に投与し得る。これに代えて、または加えて、治療処置として治療有効量を標的疾患の発症前に投与してもよい。
本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重ならびに本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）が個体に所望の応答を誘発する能力などの因子によって異なり得る。治療有効量は、治療上有益な効果が抗体または抗体部分のあらゆる毒性作用または有害作用を上回る量でもある。本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）に効率的な用量および投与レジメンは、治療する疾患または病態に左右され、当業者によって決定され得る。当該分野における通常の技術を有する医師であれば、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し処方し得る。例えば、医師は、医薬組成物に用いる本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）の用量を所望の治療効果を得るのに必要なレベルより低いレベルで開始し、所望の効果が得られるまで徐々に用量を増大させることができる。本発明の組成物の適切な用量は一般に、特定の投与レジメンに従って治療効果を得るのに有効な最低用量である化合物の量となる。このような有効量は一般に、上記の諸因子に左右される。例えば、治療に使用する際の治療有効量は、それが疾患の進行を安定化させる能力によって測定し得る。通常、ある化合物が癌を抑制する能力は、例えば、ヒト腫瘍での効果を予測できる動物モデル系で評価し得る。あるいは、化合物が細胞傷害を誘導する能力を当業者に公知のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで検討することにより、ある組成物のこの特性を評価し得る。治療有効量の治療用化合物により、腫瘍の大きさが減少する、または別の方法で対象の症状が改善し得る。当業者であれば、対象の大きさ、対象の症状の重症度および選択する具体的な組成物または投与経路などの因子に基づいてそのような量を決定することが可能であろう。本発明の抗体の治療有効量の例示的で非限定的な範囲として、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．５ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約８ｍｇ／ｋｇなどがある。本発明の抗体の治療有効量の例示的で非限定的な範囲として、０．０２〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２〜３０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇまたは０．１〜３ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．５〜２ｍｇ／ｋｇがある。投与は、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下であり得、例えば、標的部位に近接して投与し得る。最適な所望の応答（例えば、治療応答）が得られるよう上記の治療方法および使用方法での投与レジメンを調整する。例えば、単回ボーラス投与を実施しても、複数の分割用量を経時的に投与しても、あるいは用量を治療状況の要求に応じて比例的に減少または増加させてもよい。いくつかの実施形態では、治療中、例えば所定の時点で治療の効果をモニターする。いくつかの実施形態では、疾患領域の可視化により、あるいは本明細書でさらに記載するその他の診断方法により、例えば、１回または複数回のＰＥＴ−ＣＴスキャンを例えば本発明の標識抗体、本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）に由来するフラグメントまたはミニ抗体を用いて実施することにより効果をモニターし得る。必要に応じて、有効１日量の医薬組成物を、任意選択で単位投与剤形の形で、１日を通して適切な間隔で別個に投与する２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれ以上の下位用量として投与し得る。いくつかの実施形態では、任意の望ましくない副作用を最小限に抑えるため、本発明のヒト抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を緩徐持続注入により長時間かけて、例えば２４時間より長い時間をかけて投与する。週１回、２週間に１回または３週間に１回の投与期間を用いて有効量の本発明の抗体を投与してもよい。投与期間は、例えば、８週間、１２週間または臨床的進行が確認されるまでに限定し得る。非限定的な例として、治療開始後第１日、第２日、第３日、第４日、第５日、第６日、第７日、第８日、第９日、第１０日、第１１日、第１２日、第１３日、第１４日、第１５日、第１６日、第１７日、第１８日、第１９日、第２０日、第２１日、第２２日、第２３日、第２４日、第２５日、第２６日、第２７日、第２８日、第２９日、第３０日、第３１日、第３２日、第３３日、第３４日、第３５日、第３６日、第３７日、第３８日、第３９日または第４０日のうち少なくとも１つの日に、あるいは第１週、第２週、第３週、第４週、第５週、第６週、第７週、第８週、第９週、第１０週、第１１週、第１２週、第１３週、第１４週、第１５週、第１６週、第１７週、第１８週、第１９週もしく第２０週のうち少なくとも１つの週に、あるいはそれらを任意に組み合わせて、本発明による治療を１日当たり約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇなどの量の本発明の抗体の１日量として、２４時間毎、１２時間毎、８時間毎、６時間毎、４時間毎または２時間毎に、あるいはそれらを任意に組み合わせ、単回用量あるいは分割用量を用いて提供し得る。
本発明の抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は通常、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の形態で対象に投与する。
「薬学的に許容される担体」という用語は、動物、好ましくはヒトに投与したとき、有害反応もアレルギー反応もその他の望ましくない反応も引き起こさない補形剤を指す。これにはあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などが含まれる。ヒト投与には、製剤は、規制当局、例えばＦＤＡ当局またはＥＭＡなどが要求する無菌性、発熱原性、一般的安全性および純度の基準を満たすものであるべきである。
これらの組成物に使用し得る薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリラート、ロウ、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。患者への投与に使用するには、患者への投与用に組成物を製剤化する。本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、直腸内に、経鼻的に、頬側的に、経膣的に、または埋込みリザーバーから投与し得る。本明細書で用いられるものとしては、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内への注射または注入技術が挙げられる。無菌注射用形態の本発明の組成物は、水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、当該技術分野で公知の技術により製剤化し得る。無菌注射用製剤は、無毒性で非経口的に許容される希釈剤または溶媒を用いた無菌注射溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液であってもよい。使用し得る許容される賦形剤および溶媒には、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、従来の方法では無菌不揮発性油を溶媒または懸濁媒として用いる。この目的には、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含めた任意の無菌不揮発性油を用い得る。注射剤の調製にはオレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体が有用であり、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油、特にポリオキシエチル化型のものも同じく有用である。これらの油性の液剤または懸濁剤は、カルボキシメチルセルロースなどの長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤、または乳剤および懸濁剤を含めた薬学的に許容される剤形の製剤化によく用いられるこれと同様の分散剤も含有し得る。製剤化という目的にはこれ以外に、よく用いられる界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓおよびその他の乳化剤など、または薬学的に許容される固体剤形、液体剤形もしくはその他の剤形の製造によく用いられるバイオアベイラビリティエンハンサーも使用し得る。本発明の組成物は、特に限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含めた任意の経口的に許容される剤形で経口的に投与し得る。経口使用する錠剤の場合、よく用いられる担体としては、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。通常、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も添加する。カプセル形態での経口投与には、有用な希釈剤として、例えばラクトースが挙げられる。経口使用に水性懸濁剤が必要とされる場合、有効成分を乳化剤および懸濁化剤と組み合わせる。必要に応じて、特定の甘味剤、香味剤または着色剤も添加し得る。あるいは、本発明の組成物を直腸投与用の坐剤の形態で投与してもよい。これらは、薬剤と、室温では固体であるが直腸内温度では液体であるため、直腸内で融解して薬物を放出する適切な非刺激性補形剤とを混合することにより調製することができる。このような材料としては、カカオ脂、ミツロウおよびポリエチレングリコールが挙げられる。特に、眼球、皮膚または下部腸管の疾患を含め治療の標的に局所適用によるアクセスが容易な領域または器官が含まれる場合、本発明の組成物を局所的に投与してもよい。これらの領域または器官それぞれに適した局所製剤は容易に調製される。局所適用には、組成物を、１つまたは複数の担体に懸濁または溶解させた活性成分を含有する適切な軟膏に製剤化し得る。本発明の化合物を局所投与するための担体としては、特に限定されないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ロウおよび水が挙げられる。あるいは、組成物を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解させた活性成分を含有する適切なローションまたはクリームに製剤化することができる。適切な担体としては、特に限定されないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。下部腸管への局所適用は、直腸内坐剤製剤（上を参照されたい）または適切な浣腸製剤の形で実施することができる。貼付剤を使用することもできる。本発明の組成物を経鼻エアロゾルまたは吸入により投与してもよい。このような組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術により調製され、ベンジルアルコールもしくはその他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを増強する吸収促進剤、フッ化炭素および／またはその他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用いて生理食塩水溶液として製剤化され得る。例えば、本発明の医薬組成物中に存在する抗体を１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）の使い捨てバイアルに入れ１０ｍｇ／ｍＬの濃度で提供することができる。製品は、９．０ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０および無菌注射用水を用いてＩＶ投与用に製剤化する。ｐＨは６．５に調整する。本発明の医薬組成物中の抗体の適切な例示的用量範囲は、約１ｍｇ／ｍ２〜５００ｍｇ／ｍ２であり得る。ただし、これらのスケジュールは例示的なものであって、最適なスケジュールおよびレジメンは、医薬組成物中の特定の抗体について臨床試験で決定しなければならない親和性および耐容性を考慮に入れて調整し得ることが理解されよう。注射（例えば、筋肉内注射、ｉ．ｖ．注射）用の本発明の医薬組成物は、無菌緩衝水（例えば、筋肉内注射には１ｍｌ）および約１ｎｇ〜約１００ｍｇ、例えば、約５０ｎｇ〜約３０ｍｇまたはより好ましくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明の抗ＣＤ１６０−ＴＭ抗体を含有するよう調製することが可能である。
本発明のまた別の目的は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで試料中、好ましくは生体試料中のＣＤ１６０−ＴＭを検出するのに少なくとも１つの本発明の抗体を使用することである。本発明のまた別の目的は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで試料中、好ましくは生体試料中の活性化ＮＫ細胞を検出するのに少なくとも１つの本発明の抗体を使用することである。
本発明の抗体を使用し得るアッセイの例としては、特に限定されないが、ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＦＡＣＳ、組織免疫組織化学、ウエスタンブロットおよび免疫沈降が挙げられる。
本発明のまた別の目的は、試料中のＣＤ１６０−ＴＭを検出する方法であって、試料と本発明の抗体とを接触させ、ＣＤ１６０−ＴＭと結合した抗体を検出し、それにより試料中のＣＤ１６０−ＴＭの存在を示すことを含む、方法である。本発明のまた別の目的は、試料中の活性化ＮＫ細胞を検出する方法であって、試料と本発明の抗体とを接触させ、ＣＤ１６０−ＴＭと結合した抗体を検出し、それにより試料中の活性化ＮＫ細胞の存在を示すことを含む、方法である。
本発明の一実施形態では、試料は生体試料である。生体試料の例としては、特に限定されないが、患部組織から調製した組織溶解物および抽出物、体液、好ましくは血液、より好ましくは血清、血漿、滑液、気管支肺胞洗浄液、痰、リンパ液、腹水、尿、羊水、腹腔水、脳脊髄液、胸水、心膜液および肺胞マクロファージが挙げられる。
本発明の一実施形態では、「試料」という用語は、任意の解析の前に個体から採取した試料を意味するものとする。
本発明の一実施形態では、本発明の抗体を検出可能な標識で直接標識し、直接検出され得る。別の実施形態では、本発明の抗体は標識されておらず（かつ第一／一次抗体と呼ばれる）、抗ＣＤ１６０−ＴＭ抗体と結合することができる二次抗体またはその他の分子を標識する。当該技術分野で周知のように、二次抗体は、特定の種およびクラスの一次抗体と特異的に結合することができるよう選択する。
試料中の抗ＣＤ１６０−ＴＭ抗体／ＣＤ１６０複合体の存在は、標識した二次抗体の存在を検出することによって検出および測定することができる。例えば、一次抗体／抗原複合体を含むウェルまたは同複合体を含む膜（ニトロセルロース膜またはナイロン膜など）から未結合の二次抗体を洗い流した後、例えば標識の化学発光に基づき、結合した二次抗体を発色させ検出することができる。
抗ＣＤ１６０−ＴＭ抗体または二次抗体の標識としては、特に限定されないが、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、磁性剤および放射性物質が挙げられる。上記の酵素の例としては、特に限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β‐ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；補欠分子族の例としては、特に限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；蛍光物質の例としては、特に限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシン（ｄａｎｓｙｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）またはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例としては、特に限定されないがルミナールが挙げられ；磁性剤の例としては、ガドリニウムが挙げられ；適切な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
本発明のまた別の目的は、（例えば、活性化ＮＫ細胞由来の）ＣＤ１６０−ＴＭ発現細胞から細胞試料または細胞集団を枯渇させるｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、細胞試料と本発明の抗体とを接触させることを含む、方法である。
本発明のまた別の目的は、細胞試料または細胞集団から（例えば、活性化ＮＫ細胞由来の）ＣＤ１６０−ＴＭ発現細胞を単離するｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、細胞試料と本発明の抗体とを接触させることを含む、方法である。
本発明のまた別の目的は、ＮＫ細胞を活性化させるｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、ＮＫ細胞と本発明の抗体とを接触させることを含む、方法である。
本発明のまた別の目的は、少なくとも１つの本発明の抗ＣＤ１６０−ＴＭ抗体、好ましくはモノクローナル抗ＣＤ１６０−ＴＭ抗体を含む、キットである。
「キット」は、ＣＤ１６０−ＴＭの発現を特異的に検出する試薬、好ましくは抗体を少なくとも１つ含む、任意の製品（例えば、包装または容器）を意図するものである。
キットは、本発明の方法を実施する１つの単位として宣伝、配布または販売され得る。さらに、キットのいずれかまたはすべての試薬を、外部環境からそれを保護する容器、例えば密閉容器などに入れて提供し得る。
キットは、キットおよびその使用方法について記載した添付文書も含み得る。
以下の図面および実施例により本発明をさらに説明する。ただし、これらの実施例および図面は、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
Ａ１２抗体およびＢ６抗体のＣＤ１６０−ＧＰＩ発現細胞とＣＤ１６０ＴＭ発現細胞に対する結合特異性を示す図である。ＣＤ１６０−ＧＰＩアイソフォームまたはＣＤ１６０ＴＭアイソフォームをそれぞれ発現するようにしたＣＨＯ細胞またはＨＥＫ細胞をＣＬ１−Ｒ２モノクローナル抗体もしくはＢＹ５５抗体（ともにＣＤ１６０−ＧＰＩに特異的）またはＡ１２抗体もしくはＢ６抗体（白色のヒストグラム）で標識した。マウスまたはヒトのアイソタイプ対照Ｉｇを陰性対照（黒色のヒストグラム）として用いた。適切なＰＥコンジュゲート二次試薬で結合抗体を明らかにした。 ＩＬ２で処理したヒトＰＢＭＣに対するＡ１２の結合特異性を示す図である。ＰＢＭＣを処理せずにおく（第０日）か、ＩＬ２とインキュベートした。図示される時点でアイソタイプ対照ＩｇＧ（黒色のヒストグラム）またはＡ１２抗体（灰色のヒストグラム）とＰＥ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体を用いて免疫標識を実施した。ＣＤ８−ＦＩＴＣ ｍＡｂ、ＣＤ５６−ＰＣ５ ｍＡｂ、ＣＤ３−ＡＰＣ ｍＡｂおよびＣＤ４−ＰＣ７ ｍＡｂの混合物の添加によりリンパ球サブセットをさらに同定した。ゲートをかけたリンパ球集団それぞれで得られた標識が示されている。 免疫沈降によるＡ１２特異性の評価を示す図である。ＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞から核除去後溶解物を調製し、マウス（ｍｕ ＩｇＧ）もしくはヒト（ｈｕ Ｉｇ）アイソタイプ対照ＩｇＧ、キメラマウスＡ１２（ｍｕ Ａ１２）または完全ヒトＡ１２（ｈｕ Ａ１２）抗体で免疫沈降させた。免疫沈降したタンパク質を非還元条件下でＳＤＳ−１０％ＰＡＧＥにより分離し、ニトロセルロースに移し、抗Ｆｌａｇ ｍＡｂを用いたウエスタンブロットにより明らかにした。矢印はＣＤ１６０ＴＭ関連シグナルを示している。 ｓＣＤ１６０が抗体ＣＬ１−Ｒ２、Ｒ＆Ｄ ６７００およびＲＢ３１２によって認識されるが、抗体Ａ１２には認識されないことを示す図である。９６ウェルｍａｘｉｓｏｒｂプレートに１ウェル当たり１ｕｇの抗体を一晩コートした。ＰＢＳ−５％ＢＳＡで飽和した後、各ウェルに組換え可溶性ＣＤ１６０−Ｈｉｓ Ｔａｇを１０ｎｇ加え、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、抗Ｈｉｓ−ＨＲＰ、次いでＴＭＢ基質で顕色させた。諸実験条件を３連で実施し、それぞれのＯＤ Ｉｇ対照を減算した後（ＯＤ＝捕捉抗体のＯＤ−それぞれのＩｇ対照のＯＤ）、各抗体について示される結果を得た。 Ａ１２抗体およびＢ６抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列のアライメントを示す図である。 立体構造エピトープが２つのペプチドからなるＡ１２抗体およびＢ６抗体を認識したことを示す図である。ペプチドは太字で示され下線が施されている。ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの異なるドメインも示されている。 Ａ１２がＮＫ細胞の脱顆粒および活性化を誘導することを示す図である。ＮＫ９２細胞系をアイソタイプ対照ｍｕＩｇＧまたはキメラＦｃマウス型ヒトＡ１２抗体（ｍｕＡ１２）およびウサギ抗マウスＩｇＧ抗体とプレインキュベートした。次いで、エフェクター細胞を図示されるＥ／Ｔ比でのＮＫ感知標的細胞（Ｋ５６２細胞系）の存在下でインキュベートした。膜結合型のＣＤ１０７ａ（Ａ）およびＣＤ１３７（Ｂ）の検出によりＮＫ細胞系ＮＫ９２細胞の脱顆粒および活性化をそれぞれモニターした。ｍｕＩｇＧ対照（丸）またはｍｕＡ１２（四角）で前処理した陽性細胞の割合が示されている。
実施例１：Ａ１２抗体の特徴付け
材料および方法
細胞
ＣＤ１６０−ＧＰＩ ｃＤＮＡまたはＦｌａｇタグ化ＣＤ１６０−ＴＭ ｃＤＮＡを含む真核発現ベクターをそれぞれＣＨＯ細胞またはＨＥＫ細胞にトランスフェクトした。適切な抗生物質を用いた選択により安定なトランスフェクタントを得た後、ＣＨＯ−ＣＤ１６０−ＧＰＩおよびＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭと命名した。抗ＣＤ１６０−ＧＰＩ特異的ｍＡｂ ＣＬ１Ｒ２または抗Ｆｌａｇ ｍＡｂとＰＥ結合ヤギ抗マウスＩｇＧを用いたフローサイトメトリーにより、ＣＤ１６０アイソフォームの適切な発現を評価した。
密度勾配により健常被験者の静脈血からＰＢＭＣを採取した。組換えヒトＩＬ２（１００Ｕ／ｍｌ）の添加により活性化させた。
Ａ１２完全ヒト抗体の選択
ＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞でのファージディスプレイにより完全ヒト非グリコシル化抗ＣＤ１６０ＴＭ抗体を選択した。得られた抗体のうちＡ１２が、フローサイトメトリーによりＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞に対して最も優れた認識プロファイルを示す抗体として同定された。ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分をマウスＩｇＧ２ａのＦｃフラグメントに交換したマウスキメラ型Ａ１２抗体も作製した。
フローサイトメトリー
トランスフェクトしたＣＨＯ細胞およびＨＥＫ細胞を抗ＣＤ１６０−ＧＰＩ ｍＡｂのＣＬ１−Ｒ２もしくはＢＹ５５、完全ヒトＡ１２抗体もしくはＢ６抗体またはそれに対応するアイソタイプ対照ＩｇＧで標識した。さらに、ＰＥ結合ヤギ抗マウスＩｇＧまたは抗ヒトＩｇＧの添加により結合抗体を明らかにした。ＣｙｔｏＦｌｅｘサイトメーターで細胞を取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで結果を解析した。
ＰＢＭＣについては、ＣＤ１６０標識を上記の通りに実施した。洗浄し正常マウス血清を加えた後、細胞をＣＤ８−ＦＩＴＣ ｍＡｂ、ＣＤ５６−ＰＣ５ ｍＡｂ、ＣＤ３−ＡＰＣ ｍＡｂおよびＣＤ４−ＰＣ７ ｍＡｂの混合物をインキュベートした。細胞取得後、解析を実施して、リンパ球集団のうちＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔリンパ球、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔリンパ球およびＣＤ３−ＣＤ５６＋ＮＫ細胞を識別した。
免疫沈降およびウエスタンブロット
Ｆｌａｇタグ化型ＣＤ１６０ＴＭアイソフォームを発現するＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞を１％ＮＰ４０溶解緩衝液で溶解させた。核除去後溶解物を調製し、完全ヒトＡ１２抗体またはマウスキメラＡ１２で免疫沈降させた。陰性対照にはそれぞれヒトＩｇＧおよびマウスＩｇＧを用いた。さらに、プロテインＧセファロースビーズで免疫複合体を収集した。洗浄後、（還元剤を含まない）非還元試料緩衝液を加え、最終的に試料を熱変性させた。ＳＤＳ−１０％ＰＡＧＥによってタンパク質を分離し、ニトロセルロース膜に電気的に写し、抗Ｆｌａｇ ｍＡｂとＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧによる免疫ブロットを実施した。増強化学発光により顕色を実施し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ装置で画像を取得した。
結果
ＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞を選択した後、最初に、ＣＤ１６０ＴＭアイソフォームに対するＡ１２およびＢ６の特異性をフローサイトメトリーによりＣＤ１６０−ＧＰＩ発現トランスフェクタントおよびＣＤ１６０ＴＭ発現トランスフェクタントの両方で検証した。図１に示されるように、ＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞ではＡ１２抗体およびＢ６抗体で陽性標識が得られたが、ＣＨＯ−ＣＤ１６０−ＧＰＩ細胞では陽性標識は得られなかった。これとは逆に、抗ＣＤ１６０−ＧＰＩ ｍＡｂのＣＬ１−Ｒ２またはＢＹ５５はＣＤ１６０−ＧＰＩ発現細胞でのみ陽性標識が得られ、Ａ１２陰性およびＢ６陰性が、ＣＨＯトランスフェクタントにＣＤ１６０−ＧＰＩが発現しないことと関係があるという可能性が排除された。
ＣＤ１６０ＴＭアイソフォームに対するＡ１２の特異性をさらに裏付けるため、ヒトＰＢＭＣで免疫標識を実施した。ＣＤ１６０ＴＭの主な特徴が、活性化されたＮＫ細胞に特有に発現することであるため、未処理細胞またはＩＬ２活性化細胞でフローサイトメトリー解析を実施した。その対応する結果から、最も遅い活性化の時点でもＡ１２によってＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が認識されることはないことがわかった（図２）。これとは対照的に、活性化開始から２日後、ＮＫ細胞集団の一部に陽性シグナルが検出され、最大１５日後まで見ることができる状態であった。したがって、Ａ１２抗体は特異的ＣＤ１６０ＴＭ抗体であるための特徴を満たすものであった。
さらに、免疫沈降実験を実施することにより、Ａ１２抗体がＣＤ１６０ＴＭを認識することができるかどうかを試験した。この目的には、Ｆｌａｇタグ化ＣＤ１６０ＴＭ受容体を発現するＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞を溶解させ、完全ヒトＡ１２抗体またはそのキメラマウス対応物で免疫沈降させた。ヒトＩｇＧまたはマウスＩｇＧを陰性対照として用いた。免疫複合体を非還元性条件下でゲル電気泳動により分離し、その多量体化状態によってＣＤ１６０ＴＭを検出した。抗Ｆｌａｇ ｍＡｂを用いたウエスタンブロットによるタンパク質顕色では、完全ヒトＡ１２を用いた免疫沈降で対照ヒトＩｇＧと比較して特異的シグナルは見られず、この抗体は一部が変性するとＣＤ１６０ＴＭを認識することができないことが示唆された（図３）。これとは対照的に、マウスキメラＡ１２抗体を用いた場合、見かけの分子量が３４〜３８ｋＤａ、５６ｋＤａおよび１００ｋＤａであり、それぞれ単量体型、二量体型および四量体型の受容体に対応することがほぼ確実であるタンパク質のバンドが検出された。
最後に、Ａ１２が、最も近い先行技術の抗体、すなわち、Ｇｉｕｓｔｉｎｉａｎｉ Ｊ．ら（Ｃｕｒｒ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１２ Ｆｅｂ；１２（２）：１８８−９８、図４を参照されたい）に記載されているＲＢ３１２とは対照的にＣＤ１６０可溶型アイソフォームを認識しないことを示す。Ｂ６抗体でも同じ結果が得られた（データ不掲載）。
実施例２：Ｂ６抗体の特徴付け
Ｂ６抗体も実施例１に記載したファージディスプレイ選択で得られたものである。Ｂ６は、フローサイトメトリーによりＨＥＫ−ＣＤ１６０ＴＭ細胞に対して極めて優れた認識プロファイルを示すものとして同定された。ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分をマウスＩｇＧ２ａのＦｃフラグメントに交換したマウスキメラ型Ｂ６抗体も作製した。図５はＡ１２抗体およびＢ６抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列のアライメントを示しており、Ｂ６がＡ１２と極めて類似しているという結論が導かれる。
実施例３：Ａ１２およびＢ６によって認識されるエピトープの特徴付け
公開されているプロトコル（Ｓｌｏｏｓｔｒａら，Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．（１９９６）、Ｔｉｍｍｅｒｍａｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２０ ５Ｊ：２８３−２９９（２００７））に従い、Ａ１２およびＢ６のエピトープマッピングを実施した。簡潔に述べれば、抗体と各ペプチドとの結合をＰＥＰＳＣＡＮベースのＥＬＩＳＡで試験した。驚くべきことに、Ａ１２抗体およびＢ６抗体によって認識されるエピトープが、２つのペプチド、すなわち、配列番号４および配列番号５からなる立体構造エピトープであることがわかった。１つ目のペプチドはＣＤ１６０−ＧＰＩとＣＤ１６０ＴＭに共通するものであるが、２つ目のペプチドはＣＤ１６０ＴＭに特有のものであり、Ｂ６抗体およびＡ１２抗体がともにＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームに対して特異的であることの説明がつく。
実施例４：ＮＫ細胞活性化およびＣＤ１０７ａ解析
方法：
血液由来ヒト慢性骨髄性白血病細胞系Ｋ５６２（標的細胞）およびＮＫ細胞リンパ腫由来ＮＫ９２細胞系（エフェクター細胞）を完全ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＣＳ、２％グルタミン、１％抗生物質）で増殖させ、ＮＫ９２細胞系についてはＩＬ−２（２００ＵＩ／ｍｌ）を添加した。
エフェクター細胞を２０μｇ／ｍｌに希釈したアイソタイプ対照ｍｕＩｇＧまたはキメラＡ１２（ｍｕＡ１２）およびウサギ抗マウスＩｇＧ（３μ／試験）と３０分間インキュベートした後、標的細胞と様々な比（Ｅ／Ｔ：１０／１、５／１、２．５／１、１／１）で共培養した。５時間共培養した後、細胞をＰＢＳで洗浄し、次いでＣＤ３−ＦＩＴＣ、ＣＤ１３７−ＰＥ、ＣＤ１０７−ＡＰＣおよびＣＤ５６−ＰＣ７で染色した。ゲートをかけたＣＤ３−ＣＤ５６＋細胞でＣＤ１３７およびＣＤ１０７ａの発現を解析した。
結果：
ＣＤ１６０−ＴＭと本発明の抗体（ｍｕＡ１２抗体）が結合すると、ＣＤ１３７の発現および細胞のＫ６５２細胞に対する細胞傷害性（ＣＤ１０７ａの発現）が増強される（図７）。Ｅ／Ｔ比が小さい（１／１および２．５／１）ときに最も良い結果が得られる。ｍｕＢ６抗体でも同様の結果が得られた（データ不掲載）。

Claims (26)

  1. ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームの細胞外ドメインと結合するモノクローナル抗体であって、ＧＰＩアンカー型アイソフォームともＣＤ１６０可溶型アイソフォームとも結合せず、エピトープが配列番号１のアミノ酸残基１７５〜１８９のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む、モノクローナル抗体。
  2. 前記エピトープが、配列番号１のアミノ酸残基６２〜８５のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基をさらに含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
  3. キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１または２に記載のモノクローナル抗体。
  4. 以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３のうち少なくとも１つのものを含む軽鎖、ならびに／または以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３のうち少なくとも１つのものを含む重鎖を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  5. 以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号６で記載され、Ｘ１１がＹまたはＳであり、Ｘ１２がＧまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７で記載されるＶＬ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号８で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖と、以下のＣＤＲ：ｉ）配列番号９で記載され、Ｘ３がＳまたはＹであるＶＨ−ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０で記載され、Ｘ１がＹまたはＧであり、Ｘ１０がＮまたはＳであるＶＨ−ＣＤＲ２およびｉｉｉ）配列番号１１で記載されるＶＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖とを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  6. 前記抗体が、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＹＧＶＳ（配列番号２０）、ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）およびｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＳＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２４）を含む軽鎖を含み、Ａ１２抗体の重鎖が、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＳＭＮ（配列番号２６）、ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＧＳＳＲＹＩＳＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号２９）およびｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  7. 前記抗体が、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＬ−ＣＤＲ１：ＡＧＴＳＳＤＶＧＧＹＳＹＶＳ（配列番号２３）、ｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ２：ＹＤＳＹＲＰＳ（配列番号７）およびｉｉｉ）ＶＬ−ＣＤＲ３：ＳＳＹＴＹＹＳＴＲＶ（配列番号２５）を含む軽鎖を含み、前記Ａ１２抗体の重鎖が、以下のＣＤＲ：ｉ）ＶＨ−ＣＤＲ１：ＮＹＹＭＮ（配列番号２７）、ｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ２：ＧＩＹＧＳＳＲＹＩＮＹＡＤＦＶＫＧ（配列番号３０）およびｉｉｉ）ＶＨ−ＣＤＲ３：ＧＭＤＶ（配列番号１１）を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  8. 配列番号１２または配列番号１４と少なくとも７０％の同一性を有する重鎖と、配列番号１３または配列番号１５と少なくとも７０％の同一性を有する軽鎖とを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  9. 配列番号１２または配列番号１４と同一である重鎖と、配列番号１３または配列番号１５と同一である軽鎖とを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  10. 前記ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームとの結合に関して、請求項５〜９のいずれか１項に記載の抗体と交差競合する、請求項１〜９のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  11. 細胞傷害性部分とコンジュゲートされている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  12. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体を含む、融合タンパク質。
  13. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードする、核酸分子。
  14. 配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９と７０％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項１３に記載の核酸分子。
  15. 請求項１３または１４に記載の核酸によってトランスフェクト、感染または形質転換した、宿主細胞。
  16. 抗体依存性細胞傷害、補体依存性細胞傷害または抗体依存性食作用を媒介する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  17. 癌細胞がＣＤ１６０−ＴＭを発現する癌を治療する、好ましくは、ＮＫ白血病またはＮＫリンパ腫、例えば節外性および非節外性ＮＫ／Ｔリンパ腫；ＮＫ細胞由来の悪性腫瘍；ならびに急性ＮＫ白血病などを治療する方法に使用する、請求項１６に記載のモノクローナル抗体。
  18. それを必要とする対象のＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームを発現する細胞の集団、前記ＣＤ１６０−ＴＭアイソフォームを発現する悪性ＮＫ細胞の集団または前記Ａ１２抗体もしくはＢ６抗体によって認識される前記エピトープを発現する細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記対象に治療有効量の請求項１６に記載のモノクローナル抗体を送達することを含む、方法。
  19. 抗体依存性細胞傷害も補体依存性細胞傷害も抗体依存性食作用も媒介しない、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
  20. 癌、感染症あるいは自己免疫疾患および／または炎症性疾患を治療する方法に使用する、請求項１９に記載のモノクローナル抗体。
  21. それを必要とする対象のＮＫ細胞の活性を増強する方法であって、前記対象に治療有効量の請求項１９に記載の抗体を投与することを含む、方法。
  22. 前記対象が、癌、感染症あるいは自己免疫疾患および／または炎症性疾患に罹患している、請求項２０に記載の方法。
  23. それを必要とする対象の抗体のＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強する方法であって、前記対象に前記抗体を請求項２０に記載のモノクローナル抗体と組み合わせて投与することを含む、方法。
  24. ＣＤ１６０−ＴＭとそのリガンドとの結合を阻害する方法であって、ＣＤ１６０−ＴＭと請求項１〜１１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体とを接触させることを含む、方法。
  25. それを必要とする対象の発作性夜間ヘモグロビン尿症を治療する方法であって、前記対象に治療有効量の請求項２０に記載のモノクローナル抗体を投与することを含み、好ましくは前記抗体がＦａｂである、方法。
  26. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
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