JP2019532012A5 - - Google Patents
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Claims (20)
- Ra及びRbがそれぞれ水素である、請求項3に記載のコンジュゲート。
- Qが酸素である、請求項3又は4に記載のコンジュゲート。
- Ra及びRbがそれぞれ水素であり、Qが酸素であり;eが2から10の範囲である、請求項3に記載のコンジュゲート。
- 生物学的試料中の第1の標的を検出する方法であって、
(i)生物学的試料を第1の標的に特異的な第1の検出プローブと接触させ、第1の検出プローブ−標的複合体を形成すること;
(ii)生物学的試料を、第1の検出プローブ−標的複合体が第1の酵素で標識されることになるように第1の酵素を含む、第1の検出プローブに特異的な第1の標識化コンジュゲートと接触させること;
(iii)生物学的試料を、請求項1から6の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第1の対の第1のメンバーと接触させることであって、第1の酵素が、クリックコンジュゲートの第1の対の第1のメンバーを、第1の標的に近位又はその直上の生物学的試料と共有結合して第1の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体を形成する第1の反応中間体に変換する、生物学的試料を組織反応性部分を含むクリックコンジュゲートの第1の対の第1のメンバーと接触させること;
(iv)生物学的試料を、第1の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体とクリックコンジュゲートの第1の対の第2のメンバーとの間に共有結合が形成されて第1の組織−クリックコンジュゲート付加物が形成されるように第1の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体の第1の反応性部分と反応することができる請求項7から9の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第1の対の第2のメンバーと接触させること;及び
(v)第1の組織−クリックコンジュゲート付加物の第1のレポーター部分からシグナルを検出すること
を含む、方法。 - クリックコンジュゲートの第1の対の第2のメンバーが、少なくとも一の発色団を含む、請求項10に記載の方法。
- クリックコンジュゲートの第1の対の第1のメンバーが、キノンメチド前駆体部分を含み、且つクリックコンジュゲートの第1の対の第2のメンバーが発色団を含む、又は
クリックコンジュゲートの第1の対の第1のメンバーが、チラミド部分を含み、且つクリックコンジュゲートの第1の対の第2のメンバーが発色団を含む、
請求項10に記載の方法。 - 第1の検出プローブが一次抗体であり、且つ第1の標識化コンジュゲートが抗−抗体抗体を含む、請求項10から12のいずれか一項に記載の方法。
- 第1の酵素が、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、アミダーゼ、プロテアーゼ、ニトロレダクターゼ、ウレアーゼ、スルファターゼ、チトクロムP450、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ラクタマーゼ、アルファ−グルコロニダーゼ、ベータ−グルコロニダーゼ、アルファ−5−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ノイラミニダーゼ、アルファ−ラクターゼ及びベータ−ラクターゼからなる群より選択される、請求項10から13のいずれか一項に記載の方法。
- 生物学的試料中の第2の標的を検出することをさらに含み、第2の標的が以下:
(i)生物学的試料を第2の標的に特異的な第2の検出プローブと接触させ、第2の検出プローブ−標的複合体を形成すること;
(ii)生物学的試料を、第2の検出プローブ−標的複合体が第2の酵素で標識されることになるように第2の酵素を含む、第2の検出プローブに特異的な第2の標識化コンジュゲートと接触させること;
(iii)生物学的試料を、請求項1から6の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第2の対の第1のメンバーと接触させることであって、第2の酵素が、クリックコンジュゲートの第2の対の第1のメンバーを、第2の標的に近位又はその直上の生物学的試料と共有結合して第2の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体を形成する第2の反応中間体に変換する、生物学的試料を組織反応性部分を含むクリックコンジュゲートの第2の対の第1のメンバーと接触させること;
(iv)生物学的試料を、第2の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体とクリックコンジュゲートの第2の対の第2のメンバーとの間に共有結合が形成されるように第2の固定化組織−クリックコンジュゲート複合体の第1の反応性部分と反応することができる請求項7から9の何れか一項に記載のコンジュゲートを含むクリックコンジュゲートの第2の対の第2のメンバーと接触させること;及び
(v)第2の組織−クリックコンジュゲート付加物の、第1のレポーター部分とは異なる第2のレポーター部分からシグナルを検出すること
により検出される、請求項10から14のいずれか一項に記載の方法。 - クリックコンジュゲートの第2の対の第2のメンバーが、少なくとも一の発色団を含む、請求項15に記載の方法。
- クリックコンジュゲートの第2の対の第1のメンバーが、キノンメチド前駆体部分を含み、且つクリックコンジュゲートの第2の対の第2のメンバーが発色団を含む、又は、
クリックコンジュゲートの第2の対の第1のメンバーが、チラミド部分を含み;且つクリックコンジュゲートの第2の対の第2のメンバーが発色団を含む、
請求項15に記載の方法。 - 第2の検出プローブが一次抗体であり、且つ第2の第1の標識化コンジュゲートが抗−抗体抗体を含む、請求項15から17のいずれか一項に記載の方法。
- 第2の酵素が、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、アミダーゼ、プロテアーゼ、ニトロレダクターゼ、ウレアーゼ、スルファターゼ、チトクロムP450、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ラクタマーゼ、アルファ−グルコロニダーゼ、ベータ−グルコロニダーゼ、アルファ−5−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ノイラミニダーゼ、アルファ−ラクターゼ及びベータ−ラクターゼからなる群より選択される、請求項15から18のいずれか一項に記載の方法。
- 工程の一又は複数が自動化システムによって実施される、請求項10から19のいずれか一項に記載の方法。
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