JP2019513236A5 - - Google Patents

Claims (15)

1. フローサイトメトリーシステムにおいて細胞を選別する方法であって、
   高周波によって互いにシフトされた少なくとも２つの光周波数を有する光学的放射線ビームで細胞を照射して前記細胞から蛍光放射線を誘発することと、
   前記蛍光放射線を検出して時間蛍光データを生成することと、
   前記時間蛍光データを処理して前記細胞に関する選別決定に達することと
   を有する方法。
2. 前記処理するステップは、
   蛍光データを操作して前記細胞の特性の推定値を得ることと、前記推定値に基づいて前記選別決定を行うこととを含み、
   前記選別決定は、前記蛍光データに基づいて蛍光画像を生成することなく行われる
   請求項１に記載の方法。
3. 前記処理するステップは、前記時間蛍光データ内の高周波に関連する少なくとも１つのうなり周波数を分析して、前記細胞の特性の推定値を得ることを含む、請求項２に記載の方法。
4. 前記細胞の特性は、前記細胞の寸法サイズ、２つの異なる次元に沿った前記細胞のサイズの比、前記細胞に関連する２つ以上のマーカーによって放射される蛍光放射線の共局在化、前記細胞の細胞質及び核のサイズの比、前記細胞から放射された蛍光放射線の尖度、前記蛍光放射線の空間分布の尺度、前記細胞の位置または方向の尺度、前記細胞の離心率の尺度、基準細胞に対する前記細胞の類似性の尺度、前記細胞の１つ以上の空間フーリエ成分の組み合わせ、前記細胞が照射放射線の焦点内に存在する程度の尺度のうちのいずれかを含む、請求項１に記載の方法。
5. 前記処理するステップは、選別決定に到達することに関連する潜時が約１００マイクロ秒未満となるように、十分に高速である、請求項１に記載の方法。
6. 前記光学的放射線ビームは、前記細胞内の複数の空間位置の各々が照射される光周波数が、高周波シフトされた光周波数のうちの異なる周波数に相当するように構成される、請求項１に記載の方法。
7. 前記細胞が、少なくとも２つの蛍光マーカーで染色されており、前記光学的放射線ビームが、前記蛍光マーカーから蛍光放射線を誘発するように構成されている、請求項１に記載の方法。
8. 前記蛍光マーカーの１つにそれぞれが対応する時間蛍光波形を生成するために、前記蛍光マーカーから発せられた蛍光放射線を収集してデジタル化することをさらに有する、請求項７に記載の方法。
9. 前記処理するステップは、蛍光波形を操作して蛍光マーカーに相当する蛍光シグナルの共局在化の尺度を得ること、及び、共局在化の尺度に基づいて選別決定を行うことを含む、請求項８に記載の方法。
10. 前記蛍光波形を操作するステップは、
    ハイパスフィルタまたはバンドパスフィルタを前記蛍光波形の少なくとも１つに適用して、少なくとも１つのフィルタリングされた波形を生成すること、その後、前記蛍光波形を点ごとの乗算により結果の乗算波形を生成することと、フィルタリングされた波形を積分して積分値を得ることと、積分値を所定の閾値と比較して、前記共局在化の尺度を得ること、または、
    ハイパスフィルタまたはバンドパスフィルタを前記蛍光波形の少なくとも１つに適用して、少なくとも１つのフィルタリングされた波形を生成すること、その後、前記蛍光波形の点ごとの乗算により結果の乗算波形を生成することと、前記乗算波形を積分して積分値を得ることと、前記積分値からバックグラウンド値を減算し、結果値を強度でスケーリングして最終値を生成することと、前記最終値を所定の閾値と比較して前記共局在化の尺度を得ること
    を含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記処理するステップは、前記時間蛍光データを操作して、
    前記細胞のサイズの推定値を得て、推定された細胞のサイズに基づいて選別決定を行うこと、または、
    ２つの異なる次元に沿った細胞サイズの比を得ること、及び、この比を利用して選別決定を行うこと
    を含む、請求項１に記載の方法。
12. 前記時間蛍光データのフーリエ変換を得ることと、高周波と異なるフーリエ変換の周波数を決定することと、異なる周波数でのフーリエ変換値の合計を得ることと、この合計を所定の閾値と比較して選別決定を行うこととをさらに有する、請求項１に記載の方法。
13. 粒子を選別するためのシステムであって、
    高周波変調された光学的放射線で粒子を照射するための照射システムと、
    照射に応答して前記粒子から発せられる蛍光放射線を検出して時間蛍光データを生成するための検出システムと、
    前記時間蛍光データを受信し、このデータを処理して前記粒子に関する選別決定に到達するために前記検出システムと通信する分析モジュールと、
    前記粒子をその流路から分別して選別決定に基づいて容器を分離し得るアクチュエータと
    を備えるシステム。
14. 前記分析モジュールは、前記時間蛍光データに基づいて前記粒子の画像を形成することなく、選別決定に到達する、請求項１３に記載のシステム。
15. 前記分析モジュールは、選別決定に到達することに関連する潜時が約１００マイクロ秒未満となるように、十分に高速に前記データを処理するように構成されている、請求項１３に記載のシステム。